Структурно-функциональная организация белков крови и некоторых других внеклеточных жидкостей рыб

Андреева, Алла Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Структурно-функциональная организация белков крови и некоторых других внеклеточных жидкостей рыб
ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональная организация белков крови и некоторых других внеклеточных жидкостей рыб"

На правах рукописи

003 165215

Андреева Алла Михайловна

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛКОВ КРОВИ И НЕКОТОРЫХ ДРУГИХ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ

ЖИДКОСТЕЙ РЫБ

03 00.10 - ихтиология 03 00 04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва-2008 1 3 И4Р2Р08

003165215

Работа выполнена в Институте биологии внутренних вод им И Д Папанина РАН

Официальные оппоненты :

доктор биологических наук, профессор, чл - корр РАН

Немова Нина Николаевна

доктор биологических наук, профессор

Микодина Екатерина Викторовна

доктор биологических наук

Бурлаков Александр Борисович

Ведущая организация: Институт проблем экологии и эволюции им А H Северцова РАН

Защита состоится «4» апреля 2008 года в 15 часов 30 минут на заседании диссертационного совета Д 501 001 53 при Московском государственном университете имени M В Ломоносова по адресу 119991, Москва, ГСП-1, Ленинские горы, д 1, стр 12, биологический факультет, ауд 557

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ имени М.В Ломоносова

Автореферат разослан «2Ь ». _2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета к б н

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Эволюция рыб охватывает несколько геологических эпох Пережив глобальные изменения климата Земли, рыбы заняли господствующую позицию в Мировом океане, превзойдя по числу видов все другие группы позвоночных (Берг, 1938, Никольский, 1963, Расс, 1977) Эволюционный и экологический успех рыб обеспечен, прежде всего, эффективными механизмами стабилизации внутренней жидкой среды организма, включающей плазму крови, интерстициапьную и некоторые другие внеклеточные жидкости (Gamble, 1954, Строганов, 1962, Thorson et al, 1967, lutz, Robertson, 1971, Шмидт-Ниельсен, 1982; Немова, 1992; Новиков, 2000, Озернюк, 2003)

Основной функцией внутренней жидкой среды организма является поддержание оптимальных осмотических отношений внутри организма и с внешней средой Роль осмотически активных компонентов крови рыб выполняют соли, мочевина и триметиламиноксид (Строганов, 1962, Хлебович, 1974; Наточин, 1979, Шмидт-Ниельсен, 1982, Hegar, Hanke, 1982, Aas-Hansen et al, 2005, Veillette et al, 2005) Белки плазмы крови обеспечивают распределение внеклеточной жидкости организма между внутри- и внесосудистым компартментами и, помимо специфических функций, участвуют в пластическом обмене и транспорте ряда соединений (Строганов, 1962, Share, Claybaugh, 1972, Уайт и др, 1981, Wells et al, 2003)

Современные представления о белках плазмы крови и их транскапиллярном обмене у высших позвоночных основаны на модели крупных белков-мономеров (Klotz et al, 1975, Шульц, Ширмер, 1982), способных проникать в интерстициальное пространство в некоторых отделах микроциркуляционного русла ввиду функциональной разнокачественности капилляров в отношении белков (Pappenheimer, 1953, Landis, Pappenheimer, 1963, Zweifach, Intaglietta, 1968, Peterson et al, 1972, Поленов, Дворецкий, 1976, Осборн, 1978)

Зорин и др, 1994, Mestel, 1996), сведения об участии белков в стабилизации водного обмена немногочисленны (Строганов, 1962, Чихачев, Цветненко 1979, Цветненко, 1986, 1989, 1990, Чалов, Лукьяненко, 1989), а систематических исследований способов организации и интеграции белков крови на рыбах не проводилось Между тем, выявленные особенности организации геномов высших позвоночных и рыб (Volff, 2005) косвенно позволяют предположить существенные различия их белков, так как организация белковых систем отражает характер генома (Патрушев, 2004)

Изучение структурно-функциональных особенностей белков крови и других внеклеточных жидкостей рыб дополнит имеющиеся представления о способах организации и интеграции белков крови, а также их участии в стабилизации водного и пластического обмена как у рыб, так и у позвоночных в целом

Дель и задачи исследования

Цель работы состояла в исследовании структурно-функциональной организации и механизмов интеграции белков крови и других внеклеточных жидкостей организма у рыб из разных таксономических и экологических групп

В работе решались следующие задачи

1 Оценить структурно-функциональное разнообразие белков крови и других внеклеточных жидкостей организма на разных этапах онтогенеза, в разных таксономических и экологических группах рыб

2. Выявить механизмы формирования структурно-функционального разнообразия белков крови у рыб с разным таксономическим и экологическим статусом

3. Рассмотреть факторы внешней и внутренней среды, влияющие на организацию белков (мономеры/олигомеры) и уровень их специализации.

4 Исследовать механизмы интеграции белков внутренней жидкой среды организма на примере костистых рыб

5. Оценить значение появления в эволюции Pisces у костистых рыб мобильных белковых систем крови, состоящих из белков, способных к межмолекулярным взаимодействиям с образованием комплексов, диссоциирующих на полипептидные цепи в ходе транскапиллярного обмена при адаптациях к солености

Основные положения работы, выносимые на защиту 1. В период раннего развития до появления кровеносной системы и интраваскулярных белков внеклеточный белок липовителлин может участвовать в формировании внутренней жидкой среды зародыша как пластический и регуляторный белок

2 Структурно-функциональная организация интраваскулярных белков у рыб из разных таксономических групп имеет множественный характер Способ организации белковых систем крови обусловлен такими факторами внешней и внутренней среды как уровень минерализации водной среды обитания и особенности молекулярной организации гемоглобина соответственно

3 Стабилизация водного обмена у костистых рыб достигается при участии белковых комплексов плазмы крови, способных к диссоциации на составляющие их полипептидные цепи в ходе транскапиллярного обмена, а также за счет других механизмов, в том числе, избирательной проницаемости стенок капилляров для разных белков плазмы крови

Теоретическое значение и научная новизна работы Обоснована концепция о существенных структурно-функциональных отличиях белков крови высших позвоночных и рыб, а также высоком уровне структурно-функционального разнообразия белков крови у Pisces • у рыб из первичных таксонов белки представлены специализированными мономерами, у костистых рыб - полифункциональными мономерами и олигомерами, способными к межмолекулярным взаимодействиям и проникающими с помощью механизма избирательной проницаемости через стенку капилляра в интерстициальное пространство, претерпевая при этом структурные преобразования Выявлен универсальный алгоритм структурных трансформаций альбуминового комплекса при адаптациях у костистых рыб

Установлено, что внешним фактором, способствующим появлению белков-олигомеров в крови пресноводных костистых рыб, может быть колебание уровня минерализации воды, внутренним фактором, определяющим снижение специализации белков, - неустойчивость структуры гемоглобина к дестабилизирующим факторам

Аргументируется подход к белку желтка липовителлину не только как внеклеточному резервному и пластическому белку, но и как регулятору раннего развития, оказывающему влияние на характер проявления зародышевых генов

Обоснована концепция стабилизации водного обмена у пресноводных костистых рыб за счет трех основных механизмов 1 поддержания функциональной однородности капилляров разного типа, формирующих тканевые жидкости по типу фильтратов плазмы, 2. избирательной проницаемости стенок капилляров для разных белков с учетом физиологических условий и специфики метаболизма клеток тканей in situ, и 3 структурных преобразований белкового олигомерного комплекса,

названного нами «челнок», по типу диссоциации в ходе транскапиллярного обмена.

Предложена модель стабилизации водного обмена у рыб, предусматривающая первоначальное существование у предковых форм во внеклеточной жидкой среде организма отдельных полипептидных цепей, которые в ходе освоения рыбами пресных вод объединялись в белковые комплексы.

Практическое значение работы

Результаты и выводы работы могут быть использованы для развития фундаментальных исследований водного обмена у позвоночных, а также для работ в сфере рационального природопользования, в практике рыборазведения и при разработке систем контроля и мониторинга Экспресс-метод определения устойчивости гемоглобина к дегидратации можно использовать в качестве критерия принадлежности хрящевых ганоидов к проходным и туводным формам, метод выявления структурных преобразований комплекса сывороточных альбуминов - в качестве теста на подготовленность производителей к нересту и контроля условий содержания рыб, анализ режима кроветворения - для разработки оптимальных условий содержания рыб Материалы о структурно-функциональном разнообразии белков рыб и механизмах стабилизации их водного обмена могут использоваться в курсах лекций для студентов

Апробация работы. Основные положения работы докладывались и обсуждались на VI Всесоюзной Конференции по экологической физиологии и биохимии рыб (Вильнюс, 1985), Всероссийской Конференции «Возрастная и экологическая физиология рыб» (Борок, 1998), IX Всесоюзном Совещании по эволюционной физиологии (Ленинград, 1986), I Симпозиуме по экологической биохимии рыб (Ярославль-Ростов, 1987), IX Международном Европейском Конгрессе Ихтиологов (Триест, 1997), X Международном Европейском Конгрессе Ихтиологов (Прага, 2001), Всероссийской Конференции «Современные проблемы водной токсикологии» (Борок, 2002), Всероссийской научно-практической Конференции «Экологические проблемы уникальных природных и антропогенных ландшафтов» (Ярославль, 2006), 2-ой научной Конференции Стран СНГ «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2007)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 работы, из них 8 статей в рецензируемых научных журналах, утвержденных ВАК 1 статья по коэффициенту цитирования вошла в БД CSA

Личный вклад автора. Все диссертационные материалы получены непосредственно автором или под руководством автора Оригинальные

подходы к интерпретации данных, обобщение и систематизация результатов выполнены автором полностью. Работа выполнена на базе ЦКП «Молекулярные технологии» ИБВВ РАН

Считаю своим долгом выразить признательность д.б н , проф В И Лукьяненко за предложенную тему исследований по идентификации белков крови рыб и к б н Ю В Слынько за организацию работ по получению отдаленных гибридов рыб, а также искреннюю благодарность за проявленное внимание к работе и поддержку д б н, проф

д б н , проф. Н Д. Озернюку, Н.Б Гусеву и чл - корр РАН

Г.Г Новикову,

д б н , проф В Н Яковлеву, д о н , проф

Л И Корочкину

Структура и объем работы. Работа состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, списка литературы Диссертация изложена на 271 страницах и включает 90 рисунков и Ш таблиц Список литературы содержит 342 источников, из них 142 на английском языке

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ГЛАВА 1. Материалы и методы исследований.

Видовой состав рыб В качестве объектов исследования использовали 27 видов рыб, представителей 2 классов Pisces - Хрящевых (Chondroichthyes) и Костных (Osteichthyes) рыб, 2 подклассов -Пластиножаберных (Elasmobranchu) и Лучеперых (Actinopterygu), 9 отрядов, 14 семейств, 18 родов, число исследованных экземпляров указано в скобках Хрящевые рыбы - катран Squalus acantinas L (10), скаты морская лисица Raja clavata L (3), морской кот Dasyatis pastinaca L (2), Костные рыбы - хрящевые ганоиды стерлядь Acipenser ruthenus L (50), севрюга A stellatus Pall (50), русский осетр A gueldenstaedtn В (50), белуга Huso huso L (50), костистые рыбы щука обыкновенная Esox lucius L (15), лещ Abramis brama L (более 2000), синец Abramis ballerus L (более 300), уклейка Albiimus alburnus L (5), густера Bhcca bjoerkna L (20), карась серебряный Carassius auratus L (156), карась золотой Carassius carassius L (5), карп обыкновенный Cyprinus carpió L (5), язь Leuciscus idus L (10), чехонь Pelecus cultratus L (5), плотва Rutilus rutilus L (свыше 2000), судак обыкновенный Stizostedion lucioperca L (50), берш St volgense G (5), пелядь Coregonus peled G (3), зубатка полосатая Anarhichas lupus L (1), керчак Myoxocephalus scorpius L (3), камбала полярная Liopsetta glacialis P (1), треска Gadus morhua L (6), тюлька черноморско-каспийская Clupeonella cultriventris N (25), бычок-цуцик Proterorhinus marmoratus P. (4) - всего свыше 4500 экземпляров

Возрастной состав рыб В работе использовали зародышей, молодь и половозрелых рыб Зародыши получали в виде потомства Fj от индивидуальных внутривидовых и межродовых реципрокных скрещиваний леща, плотвы и синца в период 1999-2007 гг, всего было поставлено 31 серий скрещиваний, в том числе 20 внутривидовых и 11 межродовых (Лещ х Плотва, Плотва х Лещ, Плотва х Синец, Синец х Плотва) (Слынько, 2000, Андреева и др , 2000, Лапушкина, 2002, Андреева, 2005, 2007). Зародышей для анализа белков отбирали на стадиях 1 образования перивителлинового пространства и бластодиска, 2 дробления, 3 бластулы, 4 гаструляции, 5 начала сегментации туловища (3-5 сегментов), 6 сегментации туловища (18-23 сегментов), 7 окончания сегментации и установления кровообращения, 8 массового выклева, 9. этапе «свободного эмбриона», 10 смешанного питания, 11 рассасывания желточного мешка и перехода на внешнее питание, 12 малька (Крыжановский 1949, Васнецов, 1953, Ланге, Дмитриева 1981)

Белки Анализировали альбумины, трансферрины, гаптоглобины, пероксидазы, у-глобулины, гемоглобины и другие белки и белковые фракции крови, липовителлин и водорастворимые ферменты зародыша 6-фосфоглюконатдегидрогеназу 6-PGD (К Ф 11 1.44), малатдегидрогеназу-НАДФ-зависимую (маликэнзим) МЕ (К Ф 1 1 1 40), лактатдегидрогеназу LDH (К Ф 1 1 1 27), аспартатаминотрансферазу ААТ (КФ2 6 1 1), изоцитратдегидрогеназу IDH (К Ф 1 1 1 42), ß-эстеразу ß-EST (КФ 3 1 1.1, 3 1 1.2), ацетил- АНЕ (К Ф 3 1 1 7) и бутирилхолинэстеразу ВиНЕ (К Ф.З 1 1 8)

ДНК ДНК из крови рыб выделяли по прописи (Mathew, 1984)

Структурно-функциональные показатели белков Изучали способ организации (мономер/олигомер) белков крови, особенности их поверхностной структуры (по наличию ковалентно связанных с белком углеводов, прочности связи сиаловых кислот с белком, влиянию на белки 8М мочевины) и уровень их специализации (по связыванию красителей и продуктов деструкции гемоглобина) Для этого определяли электрофоретическую подвижность, молекулярную массу нативных молекул и субъединиц, ковалентно и нековалентно связанные с белком углеводы, устойчивость гликопротеидов к действию нейраминидазы, поверхностные SH-группы, ^макс комплексов белков с альбуминспецифичным красителем бромкрезоловым пурпурным, связывание белков с бромфеноловым синим и синим Эванса, связывание белков с гемоглобином, гемином и Fe3+ , прочность связи гем-глобин и связей между субъединицами гемоглобина, форму и размеры кристаллов гемоглобина; устойчивость гемоглобина, ДНК и липопротеидов к

дестабилизирующим факторам; прочность связи сиаловых кислот с белками

Отбор биологических жидкостей Кровь у крупных рыб (белуга, севрюга, русский осетр) отбирали из жаберных, у остальных рыб - из хвостовых сосудов Водорастворимые ферменты получали при криогенном лизисе клеток зародыша и желточного мешка (Андреева, 2005, 2007) В качестве аналога интерстициальной использовали тканевые жидкости белых мышц, печени, почки, мозга, верхней трети желудочно-кишечного тракта и перитонеальную жидкость (Андреева и др , 2007)

Электрофоретический анализ белков Использовали диск- (Davis 1964, Ornstem 1964) и SDS-электрофорез (Laemmli, 1970), электрофорез в градиенте концентраций (5-40%) ПААГ (Kopperschlander et al. 1969) и в ПААГ с градиентом мочевины (0-8М), двухмерные системы (фингерпринты), препаративный электрофорез, злектроэлюцию (Андреева, 1997), электрофорез ДНК в агарозе (Маниатис и др , 1984)

Хроматографические методы Белки крови фракционировали на колонках с сефадексом G-100 и G-200 (Детерман, 1970; Мешкова, Северин, 1979)

Определение величин молекулярных масс белков Молекулярные массы белков определяли в SDS- и градиенте концентраций ПААГ, на колонках с сефадексом G-100 и G-200, с использованием как минимум пяти маркеров с известной молекулярной массой, в том числе полимерные формы сывороточного альбумина быка или человека (ММ мономера 67 kDa), овальбумин (45 kDa), трипсин (23 kDa), тропонины Т, I, С (38; 24; 18,5 kDa), цитохром С (12 kDa), ферритин (440 kDa)

Определение функциональных групп белков SH-группы альбуминов определяли колориметрическим методом с помощью ДТНБ (5,5' - дитиобис (2-нитробензойной кислоты)) (Ellman, 1959, Веревкина и др , 1977)

Основные статистические методы обработки Результаты обрабатывались статистически с помощью пакета прикладных программ для персонального компьютера Exel, "STATISTICA for Windows", R 5 0-A (1995), программного модуля "Basic Statistics" и программных пакетов OneDscan и Scion-95

Выделение и очистка сывороточных белков. В работе использовали неочищенные белки в составе сыворотки и плазмы крови, а также очищенные фракции и белки Фракцию у-глобулинов получали спиртовым осаждением (Андреева, 2001) Очищенные альбумины стерляди, севрюги, белуги, леща получали с помощью электроэлюции или препаративного электрофореза (Андреева, 1997, 1999), очищенные трансферрины - с помощью риванолового метода и колоночной хроматографии на сефадексе

G-200 (Palmour, Sutton, 1971) Трансферрин стерляди получен в виде микрокристаллов розового цвета Очищенные трансферрины стерляди и леща прошли электрофоретический, спектрофотометрический (Андреева, 1987, 1997) и иммунологический (стерлядь) (Субботкин, Субботкина, 2003) контроли Получены кристаллы гемоглобинов катрана, стерляди, севрюги, белуги, русского осетра, леща (Андреева, 1987, 2006)

Список используемых сокращений ММ - молекулярная масса Rf - электрофоретическая подвижность

НМБ, НМФ — низкомолекулярный белок, низкомолекулярная фракция ВМА - высокомолекулярный агрегат

БКП, БФС - красители бромкрезоловый пурпурный, бромфеноловый синий Hb, Hp, Tf - белки гемоглобин, гаптоглобин и трансферрин JIB, Vtg - белки липовителлин и вителлогенин

ЧСА, БСА, OA - сывороточные альбумины человека и быка, овальбумин ПК, СК, ИЖ - плазма крови, сыворотка крови, интерстициальная жидкость СА - сульфат аммония

Результаты и обсуждение ГЛАВА 2. Внеклеточные белки в раннем развитии рыб.

Внеклеточные белки зародыша до появления белков плазмы крови представлены на 90% и выше липовителлином (Naoshi et al, 2002), выполняющим функции резервного и пластического белка (Нейфах, Тимофеева, 1977, 1978) Первичные системы транспорта питательных соединений в зародыше обеспечены токами цитоплазмы, пронизывающими желток (Oppenheimer, 1947, Светлов и др, 1975, Баранов др, 1977) и «транзитом» молекул из желтка через перибласт и бластоцель к клеткам (Tuft, 1965, Зотин, 1961, Kostellow, Morril, 1968, Slack et al, 1973, Альберте и др, 1987), позднее - мышечной моторикой зародыша (Дислер, 1957, Смирнов, 1975) Мы рассматривали липовителлин в качестве возможного участника транспортной системы и активного компонента внутренней среды зародыша на этапе, предшествующем формированию кровеносной системы

Идентификация липовителлина. ЛВ обнаружен нами в составе глыбок желтка, что характеризует его как осмотически неактивный белок При анализе водорастворимой фракции, полученной путем криогенного лизиса клеток и желточного мешка зародыша в 20%-ной сахарозе, на электрофореграмме выявлен компонент, на долю которого приходилось до 95% общего белка Компонент имел видоспецифичные значения Rf 0,093 у плотвы и 0,08 у леща и синца, у межродовых реципрокных гибридов

значения подчинялись «материнскому эффекту», что идентифицирует компонент как ЛВ (Рис.1) (Андреева, Карабанов, 2003). В качестве контроля использовали неоплодотворенные икринки текучих самок, содержащие ЛВ (Апс1гсеуа, 81упко, 2001), сыворотку крови самок производителей, содержащей «половую фракцию» и ЛВ, описанные у разных видов

рыб (Новиков, Решетников, 1969; Воропаев, Новиков, 1970; Новиков, 1970, I 1999; Шатуновский, Новиков, 1971; Новиков, Шатуновский, 1976; Уао, Спт, 1996; Андреева, 2001) и белые мышцы производителей, не 1 содержащие ЛВ (Рис.1).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19

Рис.1. Диск-электрофорез водорастворимых белков из мышц леща (1-4) и плотвы (5-8); неоплодотворен ной икры леща (9-11) и плотвы (12-16); зародышей плотвы (17), синца (18) и леща (19) на стадии бластулы.

ЛВ зародыша был представлен двумя компонентами с ММ 200 и 335 kDa (Рис.2), в SDS-ПААГ одним компонентом с ММ 180 kDa (Andreeva, Slynko, 2001), что совпадает с данными других авторов, в том числе и для карповых рыб (Wang et al., 2000), и также идентифицирует белок как ЛВ.

Рис.2. Определение величины ММ липовителлина у зародышей леща (1) и гибридов Лещ х Плотва (2) на стадии бластулы в градиенте концентраций ПААГ (5-40%). М - ЧСА.

Участие липовителлина в пластическом обмене. Относительное содержание ЛВ падало по мере рассасывания желтка, а низкомолекулярных белков - росло, что можно объяснить действием на ЛВ желточных протеаз

(Нейфах, Давидов, 1964; Немова, 1982, 1992, 1994) (Рис.3). Исчезновение JIB совпадало с полным рассасыванием желтка.

Рис.3. Динамика

относительного содержания С (в %) липовителлина (темная линия) и низкомолекулярных белков (светлая линия) у зародышей плотвы на стадиях развития от бластулы (1) до этапа смешанного питания (7) по данным обработки

электрофореграмм с помощью ппогпаммного пакета Ясюп-95.

Параллельно нарастанию содержания молекул с меньшей, чем у JIB, ММ, происходило изменение качественного состава образующихся молекул, вероятно, по причине последовательной деградации продуктов протеолиза ЛВ на более мелкие фрагменты (Табл.1).

Таблица 1. Значения ММ (кЭа) водорастворимых белков зародышей плотвы на стадиях развития от 2 бластомеров (2 бл.) до 12-108 часов после

выклева.

Стадия 26 л. Бласт. Начало крово- обращ. Выклев 12 ч. 36 ч. 60 ч. 108 ч,

330 335 300 305 301 300 301 280

260 279 235 248 239 235 237 209

200 202 159 166 153 151 156 158

ММ 78 123 118 112 111 116

95 90 84 83 70

76 73 72 70 59

53 38

Регуляторная функция липовителлина. Анализ связи динамики деградации JIB с характером проявления зародышевых генов с разным временем активации у межродовых реципрокных гибридов F, леща, плотвы и синца позволил предположить регуляторные свойства J1B (Andreeva, I Slynko, 2001). Мы анализировали связь между временем и характером проявления зародышевых генов на стадиях, «богатых» ЛВ, и стадиях с I частично или полностью исчерпанными запасами ЛВ. Активацию I зародышевых генов регистрировали по времени первого проявления I отцовских аллелей у зародышей гибридов (Корочкин, 1976; Чадов, 2002; J Rubidge, Taylor, 2004; Simonsen et al„ 2004; Hänfling et al., 2005).

I LDH. При одинаковом сочетании родительских генотипов по LDH-B у гибридов выявлено отставание проявления отцовских аллелей (Рис.4).

I I I I I

I I

I (

Рис.4. Формирование изоферментных спектров LDH в потомстве от скрещиваний леща и плотвы. Плотва и Плотва ' - родители плотвы гомозиготной по быстрому (В) и медленному (.ВJ) аллелям локуса Ldh-B. н/о — неоплодотворенная икра, 1-11 - стадии развития от бластодиска (1) до полного рассасывания желточного мешка (11).

Варианты скрещиваний

9 о

1. Лещ х Лещ

2 Плотва х Плотва

3. Плотва х Плотва'

Изофермекты родителей

? в

Изоферменты потомства F,

4. Лещ х Плотва'

5. Плотва' х Лещ

н/о 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Стадии развития

Так, при сочетании родительских генотипов Ldh-B х Ldh-B ', имевшем место при внутривидовом скрещивании плотвы (Рис 4, вар 3) и межродовом скрещивании леща и плотвы (Рис 4, вар.4), в потомстве гибридов время первого проявления отцовских аллелей приходилось на стадию «предличинки», а у «чистой» плотвы на стадию дробления Отставание имело место и у реципрокных гибридов Плотва х Лещ (Рис 4, вар 5) Раннее проявление Ldh-B у «чистых» видов позволяет отнести LDH к ферментам с ранней активацией Торможение появления у гибридов отцовских В-субъединиц по сравнению с материнскими характеризует проявление Ldh-B у гибридов как асинхронное по материнскому типу (Андреева, 2005)

МЕ. У зародышей во всех экспериментальных группах проявление Ме-1 и Ме-2 имело место на стадии «предличинки» (Ме-2) и у сеголетков {Ме-1) Характер проявления Ме-1 был синхронный, для Ме-2 его установить не удалось по причине совпадения изоферментов у леща и плотвы

6-PGD. У зародышей леща первое проявление зародышевых генов б-Pgd приходилось на гаструляцию, у плотвы - на начало сегментации, у гибридов Плотва х Лещ в виде продукции материнских аллелей - на начало сегментации (отцовские аллели проявлялись после выклева), у гибридов Лещ х Плотва в виде продукции материнских аллелей

- на гаструляцию (отцовские аллели проявлялись после рассасывания желтка) Таким образом, 6-PGD является ферментом с ранней активацией. Характер проявления б-Pgd у гибридов асинхронный по материнскому типу

ß-EST Первое проявление зародышевых генов ß-Est -1,2, 3 у плотвы и леща приходилось на стадию установления кровообращения и выклева соответственно У синца и гибридов Синец х Плотва имело место раннее проявление ß-Est-1 (гаструляция) Полные изоферментные спектры ß-EST у всех зародышей формировались на этапе массового вылупления Принимая во внимание раннюю экспрессию ß-EST-1 синца и более позднюю у плотвы и леща, можно с большой долей уверенности предположить, что на стадии гаструляции у гибридов Синец х Плотва проявляется ß-Est-1 синца В этом случае характер проявления ß-Est-1 у гибридов считали асинхронным по материнскому типу, переходящим в синхронный на этапе вылупления

ААТ. У зародышей синца и Синец х Плотва первое проявление Aat-l приходилось на гаструляцию, у плотвы, Плотва х Синец, Плотва х Лещ

- на окончание сегментации, у леща и Лещ х Плотва - на вылупление Это позволило считать ААТ синца и гибридов Синец х Плотва ферментом с ранней, а в других группах зародышей - с поздней активацией. При

раннем проявлении Aat-1 имела место асинхронная активация родительских аллелей Aat-1 по материнскому типу, при позднем -синхронная

Таким образом, у гибридов при ранней активации локусов родительские аллели проявлялись асинхронно по материнскому типу, при поздней активации — синхронно Характер связи сохранялся при разной температуре инкубации зародышей (Андреева, 2007) и коррелировал с динамикой деградации JIB: асинхронное проявление зародышевых генов приходилось на стадии, «богатые» ЛВ, синхронное проявление генов - на стадии с частично или полностью исчерпанными запасами J1B. Вероятно, на ранних стадиях развития JIB и загруженные на его поверхность оогенетические ферменты принимали участие в формировании внутренней среды, способствующей преимущественной активации материнских по происхождению аллелей зародышевых генов, что проявлялось в их асинхронной экспрессии На более поздних этапах материнские белки были в той или иной степени исчерпаны и не играли ключевую роль в формировании внутренней среды, и родительские аллели с поздним проявлением экспрессировались в ней одновременно. Проведенный анализ динамики деградации JIB и характера проявления зародышевых генов у гибридов позволяет рассматривать JIB в качестве участника транспортной системы зародыша на этапе, предшествующем появлению кровеносной системы, а также как активный компонент внутренней среды зародыша, возможный регулятор раннего развития

ГЛАВА 3. Принципы структурно-функциональной организации белков крови хрящевых и костных рыб.

Истинные белки внутренней среды организма - белки плазмы крови появляются в сформированной внутренней среде зародыша, разделенной на сосудистый и внесосудистый компартменты (Уайт и др, 1981), помимо специфических, они выполняют функции осмотически активных, пластических и транспортных молекул.

Структурно-функциональная организация альбуминов.

Универсальный тип организации сывороточных альбуминов высших позвоночных предполагает их мономерную (из одной полипептидной цепи) структуру с ММ 67 kDa, отсутствие углеводов, ковалентно связанных с белком, наличие свободной поверхностной SH-группы и выполнение функций осмотически активных, транспортных и пластических молекул (Klotz et al, 1975, Уайт и др., 1981) У хрящевых рыб альбумины отсутствуют (Irisava et al., 1954; Woods et al, 1958, Dnlhon et al, 1959; Drilhon, 1960), хотя не все данные согласуются с

этой точкой зрения (Cordier et al., 1957; Saito, 1957; Ипатов, Лукьяненко, 1979; Андреева, 1997); у костистых рыб сывороточные альбумины отличаются по структуре от альбуминов высших позвоночных (Строганов, 1962; Кирпичников, 1987). Мы изучали особенности организации альбуминов в разных таксономических и экологических группах рыб.

Альбуминоподобные белки хрящевых рыб. Обнаружена обширная фракция НМБ в сыворотке крови катрана. Самая подвижная в диск-электрофорезе фракция в градиенте ПААГ разделялась на 11-12 компонентов, из них три имели ММ 58-60 kDa, пять - 64-70 kDa, остальные - около 134 kDa (Рис.5).

■ • ■

/ - \

" 1 ч

I • • 1 ш

■ ч

■* ■1

Рис.5. Фингерпринт (схема) сывороточных белков катрана в градиенте ПААГ(5-20%). Стрелка на схеме указывает на взятые в маленькую рамку НМБ, горизонтальная стрелка указывает направление диск- вертикальная -градиентного электрофореза. М - полимерные формы БСА.

В Б08-ПААГ НМБ были представлены одним компонентом (48 кОа), содержащим ковалентно связанный с белком углевод. НМБ катрана связывали гемин, синий Эванса и БКП. У скатов НМБ не обнаружены (Андреева, 1986, 1999).

Альбумины хрящевых ганоидов. Альбумины стерляди, белуги, русского осетра и севрюги были представлены мономерными белками с ММ 67 кЭа (Рис. 6). Альбумины исследованных видов не содержали ковалентно связанный с белком углевод, имели одну поверхностную свободную БН-группу, специфически связывали альбуминспецифичный

краситель БКП, синий Эванса и БФС; не связывали гемин, гемоглобин и Ре^+, окрашивались на липо- (кроме альбумина стерляди) и гликопротеиды (Андреева, 1985, 1986, 1997, 1999).

а б

Рис.6. Фингерпринты сывороточных белков стерляди (а) и севрюги (6) в БОЗ-ПААГ. Горизонтальная стрелка указывает направление диск-, вертикальная - вОБ-электрофореза, маленькие стрелки указывают дорожку альбумина. М - БСА (1), ОА (2), трипсин (3), цитохром С (4).

Альбумины костистых рыб. Роль генетических и негенетических факторов в создании структурного разнообразия белков. Альбумины пресноводных рыб включают белки низкомолекулярной фракции НМФ и белковый комплекс "челнок" (Андреева, 1999) (Рис.7 а).

1 2 3 4 5 6 7 8

«челнок»

^ НМФ Г АЛЬБ.

АЛЬБ.

Рис.7. Диск-электрофорез сывороточных белков леща (1, 2, 5-8) и судака (3, 4) в летний период (а) и перед нерестом (б). Пояснения в тексте.

Анализ изменчивости и подвижности белков НМФ у леща позволил предположить их ген-детерминацию тремя независимыми локусами А, В и С. Продукты локуса А часто замаскированы «челноком», продукты локуса С чаще инвариантны, а продукты локуса В различаются по подвижности. По характеру изменчивости продукции локуса В предложена двухаллельная гипотеза ген-детерминации, стандартная проверка гипотезы по соответствию распределению Харди-Вайнберга подтвердила ее справедливость (Андреева, 1999). Количество и характер окрашивания полос у вероятных гетерозигот по локусу В свидетельствуют в пользу мономерной структуры белка, кодируемого локусом В. Сопоставление величин ММ неденатурированных и денатурированных молекул альбумина не противоречит представлениям о мономерной структуре белка: в денатурирующих условиях ММ белков В и С составила около 50 Юа, в неденатурирующих условиях 67 кГЗа и выше. Высокие показатели ММ неденатурированных молекул могут поддерживаться за счет транспортируемых белком углеводов и липидов, выявляемых окрашиванием реактивом Шиффа и Суданом черным Б. Кроме того, в структуре альбуминов выявлены ковалентно связанные с белком углеводы. При связывании красителя БКП сдвиг Хшкс отличался от специфического.

«Челнок» представлен на электрофореграмме в виде пятна, часто принимаемого за артефакт (Кирпичников, 1987). Он связывал красители, Ре^+, гемин, НЬ, окрашивался на глико- и липопротеиды. В ПААГ с 8М мочевиной и в ЭВБ-ПААГ в восстанавливающих условиях он распадался на 10-13 субъединиц (Рис.8).

а б в

Рис.8. Фингерпринты белков сыворотки крови леща в неденатурирующих (а) и денатурирующих условиях 8М мочевины (б) и БОЭ-ПААГ (е). Горизонтальная стрелка указывает направление диск-, вертикальная - градиентного (а), с мочевиной (б) и ЭЭЭ (в) электрофорезов, маленькие вертикальные стрелки - дорожку «челнока».

Данное обстоятельство характеризует «челнок» как олигомерный комплекс и позволяет предположить, что полипептидные цепи в его составе стабилизированы нековалентными взаимодействиями. В ЗБв-ПААГ ММ субъединиц «челнока» составили от 18,5 до 73 кГ)а, в их числе выявлен макрокомпонент с ММ 67 Ша, имеющий в структуре ковалентно связанный с белком углевод Анализ организации альбуминов у пресноводных костистых рыб позволил условно разделить их на две группы. I - альбумины по типу леща (карповые рыбы) и II - альбумины по типу судака (судак, берш, щука). В первой группе количество компонентов НМФ не превышало шести и имелся один компонент «челнока», для альбуминов второй группы число компонентов НМФ было выше шести и имелось 1-2 компонента «челнока».

НМФ сыворотки крови морских костистых рыб были также гетерогенны по заряду и величине ММ, но не содержали белковых комплексов- выявлено до 10 белков в НМФ у полярной камбалы и семь белков в НМФ сыворотки керчака с ММ в диапазоне от 30 до 90 Ша, 4-5 белков у полярной трески с ММ от 45 до 80 Ша У солоноватоводных видов бычка-цуцика в плазме не обнаружено белков с ММ ниже 67 Ша (в неденатурирующих условиях), а у тюльки выявлены 2 низкомолекулярных белка с ММ ниже 67 Ша.

Универсальный алгоритм структурных трансформаций комплекса сывороточных альбуминов. Для альбуминов пресноводных костистых рыб характерны выраженные структурные перестройки, коррелирующие с уровнем обменных процессов. Алгоритм таких перестроек заключается в резком изменении величин ММ (с 130-160 до 90 Ша) и Кг (с 0,55 до 0,7) комплекса «челнок» и появлении на электрофореграмме нового белка с высокими значениями подвижности (11*0,83), бегущего перед «челноком» (РисЛ б) Такие перестройки альбуминового комплекса выявлены не только у половозрелых рыб (лещ, плотва, синец, чехонь, уклейка, густера, щука, судак, берш) накануне нереста (Андреева, 1999), но и у экспериментальной плотвы 1+, содержавшейся при высокой температуре (22,5°) в зимнее время В их основе лежат, вероятно, задаваемые температурой изменения уровня обменных процессов, приводящие к деградации альбуминов, в ходе которой формируется пул аминокислот для последующего биосинтеза белков (Кирсипуу, Лаугасте, 1979) Поэтому два структурных типа альбуминов мы обозначили как базовый (Рис 7 а) и пластический (Рис 7 б) Дискретный характер структурных преобразований «челнока» обусловлен и облегчен его олигомерной структурой, включающей несколько полипептидных цепей, стабилизированных нековалентными связями, что наглядно демонстрирует динамика

деструкции комплекса под действием возрастающих концентраций мочевины (Рис.9).

Рис.9. Электрофорез комплекса «челнок» из плазмы крови плотвы 1 . Вертикальная стрелка показывает направление

▼электрофореза, горизонтальные -

направление градиента

концентраций ПААГ (11-15%) (1) и мочевины (0-8 М) (2).

Сравнительный анализ альбуминов хрящевых и костных рыб.

Выявляемое структурное разнообразие альбуминов обеспечено не только механизмами генетической детерминации, но и негенетическими механизмами, в частности, сложной поверхностной структурой белков и перестройками. Наличие в структуре альбуминов костистых рыб ковалентно связанных с белком углеводов, вероятно, обеспечивает регуляцию времени жизни и утилизации клетками молекул альбумина, а также является способом «наращивания» размеров молекул (Уайт и др., 1981; Шульц, Ширмер, 1982). Специализированные альбумины-мономеры выявлены у хрящевых ганоидов, слабоспециализированные альбуминовые комплексы из белков-мономеров и олигомеров - у костистых рыб. Низкий уровень специализации альбуминов костистых рыб обусловлен связыванием ими гемина, железа и гемоглобина. Полученные данные согласуются с информацией о слабой антигенной идентичности альбуминов рыб из разных таксономических групп (Зорин и др., 1994), что может свидетельствовать об отсутствии гомологии между ними или о ее потере в процессе эволюции (Чихачев, 1982).

Структурно-функциональное разнообразие глобулинов.

у-глобулины. К фракции у-глобулинов относятся некоторые сывороточные белки, в том числе, иммуноглобулины - структурно родственные белки (Н2Ь2)П , где Н и Ь - соответственно тяжелые и легкие цепи, связанные Б-Б связями, п - уровень структурной организации молекулы (Гауровиц, 1969; Баранов, 1982). Мы оценивали структурное разнообразие у-глобулинов. О наличии \g судили по обнаружению на БОБ-ПААГ компонентов с ММ около 20 Ша.

Хрящевые ганоиды. Нативные у-глобулины костных рыб были представлены широким спектром форм (Рис.10).

* С

■

■ 950

я я 885-900

■ а 585-600

200

шш

12 71 : а2

DHE

■ я

Ш » 950-980

I 705-715

510-513

Я 320-325

| 280-288

I 180-200

Уг Yi

Рис. 10. Глобулины стерляди (а) и леща (б). Горизонтальная стрелка указывает направление диск-, вертикальная - градиентного электрофореза. Цифры указывают величину ММ белков в Юа; пунктирные линии разделяют электрофореграмму на области у2 -, у\ - и а2 - глобулинов.

У самок накануне нереста среди у-глобулинов обнаружен вителлогенин с ММ около 500 кВа (Рис. 11).

— i- vtg

} »

— •*- а2

Рис. 11. Схема диск-электрофореграммы фракции у-глобулинов самки стерляди (IV стадия зрелости гонад): у2, у, и а2 - фракции сыворотки крови, - вителлогенин.

у-глобулины окрашивались на липо- (кроме стерляди) и гликопротеиды, в градиенте ПААГ они были дифференцированы на белки с ММ от 200 до 950 kDa и выше (Рис.10), в SDS-ПААГ - на субъединицы с ММ около 20, 56, 60, 65 и 70 kDa.

Костистые рыбы. С колонки с сефадексом у-глобулины выходили в 2 пиках соответственно yt- и у2-глобулинов (Рис.12). В первом пике в свободном объеме выходили высокомолекулярные агрегаты с ММ выше 1000 kDa, образованные у ^глобулинами с ММ около 180, 280 и 320 kDa, во втором пике - у2-глобулины с ММ 200 kDa, которые в градиенте ПААГ выявляли в виде агрегатов с ММ 510, 710 и 950 kDa (Рис.10).

»288

0,6

0,4

0,2

Рис.12. Профиль элюции 4-кратно переосажденной в спирте фракции у-глобулинов леща с колонки с сефадексом С-200, 0,1М трис-НС1, рН 8,9. V - объем выхода в мл, Э28о - поглощение при 280 нм.

20 У.мл

Анализ данных колоночной хроматографии на сефадексе 0-200 и фингерпринтов в градиенте концентраций ПААГ позволили предположить, что структурное разнообразие у-глобулинов обусловлено агрегацией различных молекул со сходными показателями ММ от 180 до 200 Ша, а также углеводами и липидами, входящими в состав глико- и липопротеидов у-глобулиновой фракции.

Среди у-глобулинов обнаружен гемин-связывающий белок. у2-глобулины многих костистых рыб нековалентно связывали НЬ и проявляли пероксидазную активность, связывание носило случайный характер (Андреева, 2001); в БОЗ-ПААГ выявлены цепи с ММ около 20 Ша, 50, 65, 75, 80 кЭа и выше (Рис.13).

Рис.13. у2-глобулины леща в БОБ-ПААГ (/). Вертикальная стрелка указывает направление электрофореза, горизонтальные - на компоненты с ММ 75 кБа и 20 кЭа. 2-5 - маркеры: РНК-аза (2), тропонины Т, 1 и С (5), ОА (4) и БСА (5).

1 2 3 4 5

Роль небелковых соединений в создании структурного разнообразия сывороточных белков.

Липиды и углеводы У катрана выявлен 1 липопротеидный комплекс (ЛПК) в зоне подвижности альбуминоподобного белка, у хрящевых ганоидов 1-2 ЛПК (Р-глобулин у стерляди, а2-макроглобулин («желтый пигмент») у осетра, р-глобулин и альбумин у севрюги, а2-макроглобулин и альбумин у белуги), у костистых 5 ЛПК летом (ух—, а)-, а2-глобулины, «челнок», альбумины) и 1-2 зимой (а2-глобулины, альбумины). Разные ЛПК отличались прочностью двукратное замораживание выдерживали ЛПК только у проходных белуги и севрюги.

Гликопротеидами у хрящевых рыб являются два белка (а2-глобулины, альбумины), у хрящевых ганоидов - три (стерлядь), пять (осетр, белуга) и семь (севрюга) компонентов, а у костистых рыб - все сывороточные белки

У костистых рыб комплекс «челнок» является липо- и гликопротеидом Колебания его относительного содержания в 4-5 раз в течение года (Андреева, 1997), сопровождаются изменениями ММ и Rf, а также степенью загруженности липидами и углеводами, что указывает на его участие в обменных процессах Примером участия липидов и углеводов в создании структурного разнообразия белков являются альбумины катрана, электрофоретическая множественность которых (12 компонентов) устраняется в денатурирующих условиях.

Роль сиаловых кислот в создании структурного разнообразия белков Гетерогенность р-глобулину трансферрину свыше трех компонентов в электрофорезе придают сиаловые кислоты (Кирпичников, 1987). Только у катрана выявлен один компонент Tf, у костных рыб в неденатурирующих условиях от двух и выше, в основном до четырех компонентов Полученные препараты очищенного трансферрина стерляди и леща (Андреева, 1987, 1997), содержащие по 4 компонента трансферрина, использовали для определения в них сиаловых кислот. У стерляди их содержание не превышало 6,73 М на 1М белка (Андреева, 1987). При обработке нейраминидазой удалось устранить гетерогенность Tf стерляди. а2-нейроаминогликопротеин (около 200 kDa) из сыворотки стерляди после обработки нейраминидазой исчезал с электрофореграммы ввиду существенного снижения ММ. У костистых рыб белки оказались устойчивыми к действию нейраминидазы

Сравнительный анализ структурно-функциональной организации белков крови Pisces Белки хрящевых и костных рыб. По степени дифференциации белков по заряду и ММ хрящевые ганоиды уступали костистым и превосходили

хрящевых рыб. На фингерпринтах неденатурированных белков стерляди, севрюги и белуги выявлялось до 28 компонентов; количество субъединиц составило около 41, у катрана на 20 белков приходилось 14 субъединиц. У большинства костистых рыб степень дифференциации денатурированных белков превышала 40 компонентов, достигая 96, что мы связываем, прежде всего, с наличием в крови костистых рыб белков-олигомеров. Особенностью белков крови рыб является наличие ковалентно связанных с ними углеводов. Различия в поверхностной структуре белков хрящевых ганоидов и костистых рыб выявляются в дифференцированном действии на них нейраминидазы, а также 6-8М мочевины, последняя вызывает диссоциацию олигомерных комплексов в крови костистых рыб, а у стерляди способствует агрегации НМФ и диссоциации агрегированных у-глобулинов.

Белки диплоидных и полиплоидных видов. При анализе степени дифференциации белков костистых рыб по заряду и ММ учитывали полиплоидное происхождение карпа, серебряного карася и пеляди (Васильев, 1985), проявляющееся на фингерпринтах их белков. У тетраплоидной пеляди в градиенте и ЗОв-ПААГ выявлены характерные

«дуплексы» (Рис. 14) в отличие от диплоидных рыб. -►

а б

Рис.14. Схема фингерпринтов белков плазмы крови тетраплоидной пеляди: а - в градиенте концентраций ПААГ, б - в 808-НААГ. Горизонтальная стрелка показывает направление диск-, вертикальная — ЗОБ-электрофореза.

В целом, по степени дифференциации белков полиплоидные виды были сопоставимы с диплоидными, не превосходя последних по количеству компонентов на фингерпринтах как денатурированных, так и неденатурированных белков.

Белки пресноводных и морских костистых рыб. По количеству

субъединиц пресноводные виды превосходили морские: у первых

максимальное число субъединиц достигало 96, у вторых - 43 (для диплоидных видов) (Рис.15).

а б

Рис.15. Схема фингерпринтов белков сыворотки крови керчака (а) и леща (б) в БОБ-ПААГ. Горизонтальная стрелка показывает направление диск-, вертикальная - БОЗ-электрофореза.

У большинства пресноводных костистых рыб на один белок приходилось от 1,4-2 до 4 полипептидных цепей, у морских костистых не более двух. Таким образом, наиболее сложно организованными оказались белки пресноводных рыб. Приведенные выше данные объясняют это усложнение не вкладом полиплоидных видов, а наличием в крови пресноводных костистых рыб белковых комплексов.

ГЛАВА 4. Структурно-функциональная организация гемоглобина.

Адаптации гемоглобина НЬ к изменениям среды предполагают, прежде всего, сохранение его структурной целостности. Между тем, изменения солености воды у морских хрящевых рыб вызывают компенсаторные изменения концентрации мочевины в полостных жидкостях организма, у осетровых - мочевины и солей, способные дестабилизировать НЬ (Андреева, 2006). В наибольшей степени действию дестабилизирующих факторов подвержены НЬ проходных форм (Никольский, 1963). Мы изучали устойчивость гемоглобина к дегидратации, замораживанию и 6-8М мочевине, действующих на систему слабых связей (Александров, 1985) у рыб из разных таксономических и экологических групп. Экологические последствия устойчивости НЬ к дестабилизирующим факторам

рассмотрены в гл. 5. При изучении влияния дегидратации на НЬ значение концентрации сульфата аммония, при котором белок начинал выпадать в осадок, считали критической концентрацией преципитации (ККП) (Андреева, 2006). Устойчивым считали НЬ с высокой ККП, способный после действия фактора образовывать правильные кристаллы и оставаться в окси-форме.

Влияние дестабилизирующих факторов на гемоглобин рыб.

Хрящевые рыбы (туводные морские). Степень дифференциации в диск-электрофорезе для НЬ катрана и морской лисицы составила 6-8, морского кота - 12 компонентов. НЬ катрана был представлен мономерами, димерами, тетрамерами и не содержащим гем ВМА. У скатов агрегированных форм НЬ не выявлено. В отсутствие мочевины тетрамерный НЬ катрана, в отличие от НЬ скатов, распадался на димеры. Замораживание нарушало кристаллообразование.

Дегидратация гемоглобина происходила при всех концентрациях СА (Андреева, 2006). Кристаллы НЬ - короткие гексагональные призмы с углами основания, повторяющимися через два, с О около 100 мкм (Рис.16).

-«—О

Рис.16. Кристаллы гемоглобина в сульфате аммония : а - катрана (схема), в, с - стерляди (фото). В - диаметр основания кристалла. Увеличение Х800.

Хрящевые ганоиды. НЬ представлены тетрамерами, кристаллы - тетра-и гексагональными призмами: у стерляди и осетра - мелкими, короткими с диаметром основания около 100 мкм (Рис.16), часто с дефектами структуры в виде скошенных призм, двойников прорастания и других форм; у севрюги и белуги - крупными, правильной формы с ¿>=1200 мкм. У НЬ стерляди и осетра ККП составила 20-25%, у севрюги и белуги 35-40% (Рис.17). У белуги и севрюги при всех значениях насыщения сульфата аммония преобладали окси- и дезокси-НЬ, а у стерляди и осетра мет-НЬ. Экспресс-тест на устойчивость НЬ к дегидратации (75% насыщения СА) выдерживали НЬ только проходных рыб.

% насыщения сульфата аммония 1 2

Рис.17. Кривые высаливания гемоглобинов рыб сульфатом аммония: 1 - севрюги, 2 - стерляди. ABS - поглощение гемоглобина в условных единицах.

После замораживания правильные кристаллы формировали только НЬ севрюги и белуги. Деструкция НЬ проходила по типу распада тетрамера на димеры и мономеры.

Костистые рыбы. НЬ представлены исключительно тетрамерами, способными in vitro к полимеризации в октамеры. Кристаллы — мелкие тетра- и гексагональные призмы, часто неправильной и усеченной формы с 0=100 мкм. Замораживание приводило к нарушению кристаллообразования. По устойчивости к дегидратации у НЬ имела место значительная вариабельность: от низкой устойчивости (ККП=5%) у морских видов полярной камбалы и полярной трески, до ККП=20%-35% у большинства пресноводных видов и тюльки и высокой устойчивости у щуки (ККП выше 50%). Деструкция НЬ пресноводных видов происходила по связи гем-глобин.

Действие длительного голодания на устойчивость структурно-функциональных показателей НЬ серебряных карасей. Голодание для рыб не является экстремальным фактором, так как значительные периоды в своем жизненном цикле рыбы голодают (Солдатов, 2005), но, когда голодание накладывается на сезонную динамику летне-осеннего периода с высоким уровнем обменных процессов, задаваемых температурой, фактор голодания выступает как экстремальный дестабилизирующий (Андреева и др., 2006).

При добавлении к крови голодающих в течение 3 летних месяцев рыб раствора ЭДТА (10:1) был зарегистрирован случай спонтанного гемолиза эритроцитов, НЬ при этом находился в мет-форме. У питающихся и остальных голодающих рыб добавление ЭДТА не провоцировало гемолиз

эритроцитов, НЬ находился в окси- и дезоксиформе. На мазках цельной крови голодных рыб одноразмерные зрелые эритроциты составили около 98.3+0,39% от общего количества клеток эритроидного ряда, у питающихся рыб были выявлены клетки всех стадий эритроидного ряда: 10.3+1,16% составили незрелые формы, 3.8+0,82% - делящиеся формы и 85.9+1,23 % -зрелые эритроциты.

Электрофоретический анализ тотальной ДНК из крови голодного карася, чьи эритроциты гемолизировали, выявил апоптотические спектры деградации ДНК. У других рыб ДНК была без следов фрагментации (Рис.18).

Рис.18. Горизонтальный электрофорез в агарозе ДНК из крови 1 - голодающего серебряного карася; 2 - серебряного карася из природного водоема. 3 - маркер молекулярной массы Lambda DNA/Pstl Marker. Вертикальная стрелка указывает направление электрофореза.

Характерные признаки программируемой гибели могли быть следствием переустановки организменного гомеостаза у рыб с режима перманентного эритропоэза к режиму дискретного эритропоэза и апоптоза в условиях экстремального сочетания факторов (Андреева и др., 2006). Способы «утилизации» образующихся продуктов деструкции гемоглобина в виде мет-гемоглобина, глобина, гема и FeJ+ рассмотрены в гл. 5.

Роль экологической дифференциации видов в формировании структурно-функциональной разнокачественности гемоглобинов. Дифференциация НЬ по устойчивости к дестабилизирующим факторам не совпадала с дифференциацией рыб по таксономическому признаку. Выявленные различия можно объяснить особенностями внутренней среды и условий обитания видов. Поскольку колебания солености среды морскими хрящевыми рыбами выдерживаются за счет компенсаторных колебаний концентрации мочевины внутренней среды, достигающей в крови 0,3-0,4М (Шилов, 1985), то можно предположить, что и НЬ хрящевых рыб также должен выдерживать значительные колебания концентрации мочевины и быть устойчивым к ним, что мы и наблюдали у катрана. При действии высоких концентраций мочевины на НЬ хрящевых ганоидов имело место разрушение тетрамера на димеры. Деструкцию НЬ в этом случае можно также объяснить особенностями внутренней среды организма, содержащей

мочевину в концентрациях, в 10-50 раз меньших, чем у хрящевых морских видов, и поэтому более чувствительной к ней. Концентрация солей в крови костистых и ряда осетровых рыб в отличие от акул, колеблется (Шилов, 1985, Мартемьянов, 2001) Различия в устойчивости НЬ к дегидратации у пресноводных костистых можно объяснить их принадлежностью к разным экологическим группам морским и пресноводным, хищным и бентофагам и др Дифференцированное действие дестабилизирующих факторов на НЬ наглядно демонстрируют осетровые рыбы, включающие проходные и туводные формы Только у проходных севрюги и белуги НЬ был устойчив к дегидратации и замораживанию Таким образом, структурная устойчивость НЬ определяется особенностями образа жизни рыб и носит адаптивный характер

ГЛАВА 5. Функциональная организация белков плазмы крови рыб. Сывороточные пероксидазы.

Среди пресноводных костистых рыб у видов, имеющих быстро деградирующий гемоглобин и склонные к внутрисосудистому гемолизу эритроциты, выстроена система оперативного связывания как НЬ, так и продуктов его деградации, не только специализированными белками гаптоглобином, гемопексином и трансферрином, но и всеми белками плазмы (Андреева, 1997, 1999, 2001) Эта система связывания достаточно емкая, так как выдерживает нагрузку в виде массированного выброса мет-НЬ из спонтанно гемолизирующих в результате апоптоза эритроцитов (Андреева, 2006) Связывание железосодержащих лигандов белками приводит к появлению у них пероксидазной активности У катрана пероксидазную активность проявляли трансферрин и комплекс гемин-гемопексин, у стерляди - трансферрин и агглобулин, у пресноводных костистых рыб - практически все сывороточные белки комплексы иммуноглобулин-НЬ, гаптоглобин-НЬ, гемопексин-гемин, «челнок»-гемин, «челнок»-НЬ, «челнок»-Ре3+ и НМФ-гемин (Андреева, 2001) Связывание НЬ и продуктов его деструкции с большинством белков, кроме специализированных, носило случайный характер Неустойчивость НЬ и склонность эритроцитов к внутрисосудистому гемолизу у пресноводных костистых рыб, вероятно, стали причиной появления в этой группе рыб специализированного белка гаптоглобина, связывающего НЬ (Андреева, 1997, 2001) Особое место среди белков крови занимает комплекс «челнок», «дублирующий» функции специализированных белков трансферрина, гемопексина и гаптоглобина Рост числа белков, связывающих НЬ и продукты его деструкции, вероятно, обусловлен физиологической

стратегией организма на предотвращение потерь железа, что и определило низкий уровень специализации белков пресноводных костистых рыб

ГЛАВА 6. Особенности интеграции белков крови рыб в единую

систему.

Современные представления о транскапиллярном обмене белков плазмы крови базируются на фильтрационно-реабсорбционной гипотезе Старлинга (Starling, 1895), однако, в отличие от нее, допускают возможность проникновения белков плазмы в интерстициальное пространство (Landis, Pappenheimer, 1963) В распределении белков крови во внеклеточной жидкости организма важная роль отводится структуре белков (Андреева и др, 2007) и свойствам мембран эндотелия (Болдырев и др , 2006) Фильтрация белков плазмы в тканевое пространство в некоторых отделах капиллярного русла объясняется разной проницаемостью капилляров для белков (Zweifach, Intaglietta, 1968). Мы анализировали фракционный состав и организацию белков крови и тканевой жидкости у леща, плотвы, карпа, серебряного карася и тюльки при адаптациях к разным условиям (голодания и разной солености).

Сравнение фракционного состава белков сыворотки крови и интерстнциальной жидкости у лещей при адаптациях к солености. У лещей из пресной и соленой (8 и 10%о) воды степень дифференциации белков CK в ГТААГ была одинакова. Изменения относительного содержания выявлены в CK для комплекса «челнок» при солености выше 10%о. В ИЖ снижение относительного содержания при 11,5%о отмечено для белков с ММ 60-70 kDa и комплекса «челнок», относительное содержание НМФ росло за счет трех белков с ММ 20-40 kDa, в том числе белка с ММ 34-37 kDa, встречающихся только в ИЖ (Рис.19) Аналогичные изменения выявлены у плотвы, карпа и карася, у полиплоидных видов НМФ в ИЖ включала до 6 компонентов.

Отношение концентраций компонентов А2/А1 в ПК и ИЖ менялось при адаптациях к солености и разному режиму питания, при голодании увеличивалось в ПК, а в ИЖ белых мышц поддерживалось на относительно стабильном уровне При адаптациях к солености отношение А2/А1 в ИЖ падало до 0 за счет исчезновения компонента А2, кроме ИЖ белых мышц, в которой отношение А2/А1 возрастало почти в 6 раз (Табл.2) У -польки распределение компонентов AI и А2 было прямо противоположным наблюдаемому у леща Вероятно, характер перераспределения альбуминов между плазмой крови и интерстнциальной жидкостью отражает специфику формирования капиллярами тканевой жидкости in situ и обусловлен приоритетами как осморегуляции, так и транспорта

1234 1234 1234

НМФ Белки с ММ Комплекс

60-70 кЭа «челнок»

ОТНОСИТЕЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ФРАКЦИЙ, % ->■ 1>0 СО Д 01 о о о о о о 1 1 Ш ИНТЕРСТИЦИАЛЬЬ 1А> I Ж1 3 1 1ДКОСТ ь

1234 1234 1 234 1234 НМФ Белки с ММ Белок с ММ Комплекс 60-70 кЭа 34 ГОа «челнок»

Рис.19. Относительное содержание белкового комплекса «челнок» и белков из низкомолекулярных фракций НМФ (с ММ 60-70 и 34 Юа) в сыворотке крови (а) и интерстициальной жидкости мышц (б) лещей 2* при адаптациях к солености: 1 - пресная вода, 2 - 8%о, 3 - Ю%0 , 4 -11,5%0 - Разной заливкой выделены НМФ, белки с ММ 60-70 кОа, белок с ММ 34 Юа и комплекс «челнок».

Таблица 2. Соотношение концентраций альбуминов А2/А1 в интерстициальной жидкости леща и серебряного карася в разных экспериментальных условиях

Тип тканевой жидкости лещ карась

пресная вода соленая 11,5%0 питание голод

Плазма крови 0,46 0/12=0 0,56 1,2

ИЖ мозга 0,39 0/15=0

ИЖ белых мыши 1,25 7,67 0,64 0,66

Перитонеальная 0,50 0,075

ИЖ печени 0,45 0/14=0

ИЖ кишечника 0,58 0,075

Кроме того, в отсутствие экзогенных источников пищи сами альбумины могут использоваться как пластическое сырье (Morgan, 1966, 1969; Mouridsen, 1969).

Избирательная проницаемость стенок капилляров для белков плазмы крови. Все исследованные образцы ИЖ являлись фильтратами ПК-их фракционный состав совпадал с ПК Отличия касались относительного содержания отдельных фракций, в том числе, транспортных липо- и гликопротеидов (Андреева, 1997), наиболее выраженных в ИЖ белых мышц (Рис 20). Для белков ПК карпа рассчитаны коэффициенты пропускания г через стенку капилляра и средний для белков ПК коэффициент пропускания г (Рис.20). Анализ коэффициентов г и величин ММ белков не выявил связи между ними компоненты 11 (62,3 kDa) и 16 (119 kDa) были практически равновесно распределены между ПК и ИЖ мышц, самый подвижный компонент 9 (25,4 kDa) имел г=2,88, стартовый у2-глобулин 27 имел г=0,61, что сопоставимо с величиной г для НМБ 13 (72,5 kDa) (Рис 20)

Таким образом, стенки капилляров мышечного типа свойство молекулярного сита не проявляют Проведенный сравнительный анализ величин г (г) белков половозрелого карпа и сеголетков выявил их различия у сеголетков значение г=1,34, у половозрелых г=0,805 (Андреева и др, 2007)

-Л:

г=0.8

1-8 9 1011-14 15-1718 19 20-26 27 ^поненты

ИЖ карпа

■

Я Компоненты

9 10 11'-13 '14 15-1718 19 -24 25 26 27 плазмы

Рис.20. Коэффициенты пропускания гиг белков плазмы крови капиллярами мышечного типа у половозрелого карпа. 9 - 27 - нумерация белков интерстициальной жидкости ИЖ на оси абсцисс и белков плазмы крови на электрофореграмме в градиенте ПААГ. 1-8 - НМБ из ИЖ. Стрелка показывает направление электрофореза.

Обнаружение избирательной проницаемости капилляров для разных белков плазмы крови характеризует транскапиллярный обмен белков как активный транспорт. Различия параметров гиг для белков взрослых рыб и сеголетков отражают динамичный характер водного и в силу эффекта Гиббса-Доннана солевого обмена. У хрящевых ганоидов формирующие интерстициальную жидкость капилляры обладали одинаковой проницаемостью для всех белков плазмы (Цветненко, 1986).

Структурные трансформации комплекса «челнок» как источник формирования пула низкомолекулярных белков в интерстициальной жидкости. Анализ перестроек компонентов низкомолекулярных фракций в ходе адаптации к солености у представителей карповых и тюльки позволил выявить противоположные особенности в распределении белков

альбуминового комплекса по обе стороны стенки капилляра мышечного типа. Распределение белков альбуминового комплекса у солоноватоводной тюльки является универсальным для пресной и соленой в условиях эксперимента воды. Его особенностью является отсутствие в ИЖ комплекса «челнок» (Рис.21).

ЛЕЩ

«челнок»

А2 А1

НМБ

Пресная вода

Соленая вода 11,5%0

ТЮЛЬКА

«челнок»

А2 А1

НМБ

Пресная вода Соленая вода 20,0%0

Рис. 21. Электрофорез в градиенте ПААГ альбуминов (А1, А2, «челнок») плазмы крови (ПК) и интерстициальной жидкости белых мышц (ИЖМ) у леща 3 и тюльки, содержавшихся в пресной и соленой (экспериментальной: 11,5 и 20%о) воде. НМБ - низкомолекулярный белок, К - стенка капилляра.

У пресноводных карповых рыб распределение альбуминов резко различается для пресной и соленой в условиях эксперимента воды. Отсутствие в интерстициальной жидкости комплекса «челнок» наблюдается только при солености выше Ю%0. Кроме того, распределение альбуминов А1 и А2 в ИЖ мышц карповых рыб прямо противоположно таковому у

тюльки: и в пресной и в соленой воде для интерстициальной жидкости карповых характерно преобладание компонента А2 (Рис.21). Поскольку современные пресноводные костистые рыбы в своей истории прошли длительную фазу жизни в море (Ромер, Парсонс, 1992), тип распределения белков крови тюльки кажется более универсальным. Исходя из него можно предположить, что формирование белковых олигомерных комплексов, подобных «челноку», было вторичным, такие комплексы могли формироваться из отдельных полипептидных цепей в связи с опреснением среды обитания, как средство для уменьшения онкотического давления внутренних жидкостей организма.

Перестройки альбуминового комплекса как источник формирования пула низкомолекулярных белков в ИЖ. Происхождение характерного для интерстициальной жидкости белка с ММ около 34 Ша определяли по фингерпринтам в градиенте ПААГ', показавшим его локализацию на дорожке «челнока» (Рис. 22).

Рис.22. Фингерпринт белков ИЖ белых мышц в градиенте концентраций ПААГ у плотвы при солености 20%о. Горизонтальная стрелка указывает направление диск, вертикальная - градиентного электрофореза, маленькие стрелки - на локализацию комплекса «челнок» и низкомолекулярный белок НМБ с ММ 34кОа.

Таким образом, анализ распределения белков крови во внеклеточной I жидкости организма рыб показал, что интеграция белков в ходе транскапиллярного обмена достигается за счет функциональной однородности разных отделов капилляров, формирующих тканевые жидкости по типу фильтратов плазмы; появления у стенок капилляров пресноводных костистых рыб избирательной проницаемости для белков; и структурных преобразований альбуминов, в ходе которых может происходить диссоциация олигомерного комплекса «челнок» на полипептидные цепи, имеющих особенности в разных экологических группах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сравнение особенностей организации и интеграции белков плазмы крови у рыб и высших позвоночных выявило их существенные различия У млекопитающих низкомолекулярная фракция плазмы крови представлена крупными специализированными белками, состоящими из 1 полипептидной цепи - мономерами, которые фильтруются через стенку капилляра в определенных отделах капиллярного русла У рыб организация белков крови и их распределение по внеклеточным жидким компартментам формировались в соответствии с особенностями их внутренней среды и среды обитания Для водных животных одним из основных лимитирующих факторов является соленость (Одум, 1975) Поэтому белковые системы крови рыб организованы в соответствии, прежде всего, с уровнем минерализации внешней водной среды и солевым составом внутренней жидкой среды (Хлебович, 1974). У хрящевых рыб и хрящевых ганоидов сформировались высокодифференцированные белковые системы крови, состоящие из специализированных белков, их низкомолекулярные фракции представлены исключительно мономерными белками У пресноводных костистых рыб белковые системы крови сформированы из полифункциональных мономерных и олигомерных белков, состоящих из 10 и более полипептидных цепей, белки способны проникать через стенку капилляра с помощью механизма избирательной проницаемости в тканевые жидкости, в которых олигомеры могут диссоциировать на полипептидные цепи при адаптациях к пограничным для пресноводных рыб показателям солености Поскольку белкам пресноводных рыб в силу гипертоничности внутренних биологических жидкостей в пресных водах не угрожает дегидратация, а наоборот, организм постоянно откачивает лишнюю воду, то образование белковых комплексов регулирует распределение внеклеточной жидкости организма, что способствует быстрой стабилизации водного обмена В крови морских костистых рыб белковых комплексов не обнаружено Морским видам в условиях гипертоничной внешней среды для удержания воды в организме, возможно, «выгоднее» иметь в крови больше небольших белков-мономеров, так как образование белковых агрегатов снизило бы онкотическое давление крови

дальнейшим освоением пресных вод (Ромер, Парсонс, 1992), а также предположение о формировании первичных биохимических систем при солености выше 5-8%0, но близкой к ней (Хлебович, 1974), более вероятно принять в качестве исходной модели существование во внеклеточной жидкой среде рыб отдельных полипептидных цепей, которые в ходе освоения рыбами пресных вод объединялись в белковые комплексы Данная точка зрения подкрепляется обнаружением универсального типа распределения белков крови у тюльки, заключающегося в отсутствии белковых комплексов в интерстициальной жидкости и их сохранении в плазме крови.

Среди Pisces костистые рыбы занимают особое положение, которое определяется их биологическими особенностями, такими как высокая плодовитость и приспособляемость, многообразие экологических ниш Эти особенности требуют высокого уровня генетической изменчивости, свободной рекомбинации генов, возможной при их слабом сцеплении (Кирпичников, 1987) Обнаруженная нами у белков костистых рыб способность к межмолекулярным взаимодействиям и структурным перестройкам, а также низкий уровень специализации белков, не исключают преобразований во взаимных отношениях структурных генов в сторону ослабления их сцепления. Данное предположение косвенно подтверждают сведения о наличии в геномах костистых рыб множественных семейств транспозонов, индуцирующих генетические перестройки (Volff, 2005), определяющих динамичный характер геномов костистых рыб Поскольку организация белков так или иначе отражает характер генома (Патрушев, 2004), то динамичные белковые системы костистых рыб вполне могут быть следствием динамичной организации их геномов Однако, фундаментальные проблемы взаимосвязи характера генома и организации белковых систем требуют специального рассмотрения Тем не менее, благодаря динамичным и способным перестраиваться белковым системам крови, костистые рыбы максимально оптимизировали свой водно-солевой и пластический обмен, что не могло не увеличить шансы этой группы рыб на освоение новых ниш и в целом определить их экологический и эволюционный успех

ВЫВОДЫ

1 Выявлена множественность типов структурно-функциональной организации белковых систем крови у рыб белковые системы у хрящевых рыб и хрящевых ганоидов высокодифференцированы, и состоят из специализированных мономерных белков, у костистых рыб -

высокодифференцированы и состоят из слабоспециализированных белков с мономерной и олигомерной организацией.

2 Наиболее сложно организованы белковые системы крови у пресноводных костистых рыб Они состоят из полифункциональных белков-мономеров и олигомеров со сложной поверхностной структурой, способных к межмолекулярным взаимодействиям с образованием комплексов и перестройкам при адаптациях in situ, что характеризует их как динамичные системы

3 Внешним фактором, способствующим появлению в крови пресноводных костистых рыб белков-олигомеров, является колебание уровня солености воды Внутренним фактором, определяющим снижение специализации белков, являются особенности молекулярной организации гемоглобина

4 Основным внеклеточным белком зародыша до появления кровеносной системы является липовителлин, который участвует в формировании внутренней среды зародыша как резервный, питательный и регуляторный белок

5 Транскапиллярный обмен белков плазмы крови у пресноводных костистых рыб обеспечен особенностями стенок капилляров, которые не обладают свойством молекулярного сита, но проявляют избирательную проницаемость для различных белков плазмы

6 В стабилизации водного обмена у пресноводных костистых рыб принимают участие белковые комплексы плазмы крови, способные к перестройкам в ходе транскапиллярного обмена

7 Выявлен универсальный алгоритм структурных трансформаций олигомерного комплекса крови в ходе транскапиллярного обмена при подготовке карповых рыб к нересту и адаптациях к солености, заключающийся в процессах диссоциации комплекса на составляющие его полипептидные цепи

8. Организацию альбуминовой фракции интерстициальной жидкости тюльки в виде отдельных полипептидных цепей - мономеров, объединенных во внутрисосудистом пространстве в белковые комплексы, можно рассматривать в качестве исходной модели организации внеклеточных белков у костистых рыб

Список основных публикаций по теме диссертации: 1 Андреева А.М Идентификация сывороточного альбумина и изучение некоторых его физико-химических свойств у представителей семейств Acipenseridae и Cyprimdae II Инф Бюлл. ИБВВ АН СССР. 1986 № 69 С 36-39

2 Андреева A.M. Физико-химические свойства сывороточных белков хрящевых рыб на примере катрана // Тезисы сообщ IX Всесозн совещ по эвол физиологии JI Наука 1986 С 13-14

3 Андреева А.М О структуре гемоглобина некоторых видов семейства Acipenseridae И Инф Бюлл ИБВВ АН СССР 1987 № 75 С 33-36

4 Андреева A.M. Устойчивость гемоглобина осетровых рыб к дегидратирующему действию сульфата аммония // Инф Бюлл ИБВВ АН СССР 1987 № 76 С 56-59

5 Андреева А.М Идентификация сывороточных трансферринов леща и стерляди // Материалы I Симп по экол биох рыб Ярославль 1987 С 8-10

6 Андреева А.М О роли сиаловых кислот в создании гетерогенности трансферринов стерляди и леща // Материалы I Симп по экол биох рыб Ярославль 1987 С 10-11.

7 Андреева А.М Физико-химические свойства сывороточного альбумина крови осетрообразных и карпообразных рыб на примере стерляди и леща//Физиология и биохимия гидробионтов Ярославль 1987 С 108-114

8 Andreeva А.М Ecological diversity of physico-chemical properties of proteins blood of fishes// 9th Intern Congress of European Ichth "Fish Biodiversity" Trieste 1997 P 7-8

9 Андреева A.M Структурно-функциональная организация альбуминовой системы крови рыб // Вопр ихтиологии 1999 Т 39 № 6 С 825-832

10 Andreeva A.M., Slynko Y.V Role of vitelline in initiation of nuclear genome // Book of Abstracts X European congress of ichthyology Prague. 2001 P. 142.

11 Андреева А.М Сывороточные пероксидазы рыб Вопр ихтиологии. 2001 Т 41 №1 С 113-121

12 Андреева А.М Сывороточные у-глобулины рыб Вопр ихтилогии 2001 Т 41 №4 С 550-556

13 Андреева А.М Изменения белковой системы крови леща накануне нереста // Экологические проблемы онтогенеза рыб физиолого-биохимические аспекты М МГУ 2001 С 35-46

14. Андреева А.М Особенности проявления генов лактатдегидрогеназы в раннем развитии леща Abramis brama (L), плотвы Rutilus rutilus (L ) и их реципрокных гибридов Fi // Вопр ихтиологии 2005 Т 45 №3 С 411-417

15 Андреева А.М Особенности формирования изоферментных спектров лактатдегидрогеназы в раннем развитии плотвы Rutilus rutilus (L ) //Вопр. ихтиологии 2005 Т.45 №2 С 277-282

16 Андреева А.М Особенности проявления генов аспартатаминотрансферазы в раннем развитии леща Abramis brama (L) плотвы Rutilus rutilus (L ), синца (A balltrus (L.) и их межродовых гибридов Fi // Онтогенез 2007 Т38 № 1 С 1-8

17 Андреева А.М Влияние дестабилизирующих факторов на структурно-функциональные показатели гемоглобина туводных и проходных рыб // Журн эвол биохимии и физиологии 2006 Т 42 № 6. С 537-543

18 Андреева А.М. Оценка устойчивости структурно-функциональной организации некоторых белков крови рыб к действию дестабилизирующих факторов, моделирующих средовые воздействия // Мат. Всерос. науч -практ. конф «Экол пробл уник прир и антроп ландшафтов» Ярославль ЯрГУ. 2006 С 121-125

19 Андреева A.M., Юркова М.С., Рябцева И.П., Лукьяненко В.В., Шарапова O.A., Кузьмина В.А Поддержание организменного гомеостаза серебряного карася Carassius auratus gibellio (Bloch) в условиях неблагоприятного сочетания некоторых факторов // Актуальные проблемы гидроэкологии Казань Отечество. 2006 С 215-220

20 Андреева А.М., Юркова М.С., Рябцева И.П., Лукьяненко В.В., Шарапова O.A., Кузьмина В.А. Оценка влияния обеспеченности пищей на регуляцию кроветворения у серебряного карася Carassius auratus gibellio (Bloch) // Мат. Всерос науч.-практ конф «Экол пробл уникальных прир. и антроп ландшафтов» Ярославль ЯрГУ 2006 С 125-130

21. Андреева A.M., Чалов Ю.П., Рябцева И.П Особенности распределения белков плазмы между специализированными компартментами внутренней среды на примере карпа Cyprinus carpió (L ) II Журн эвол биох и физиол 2007 Т 43 №6 С 501-504.

Лицензия ПД 00661 от 30 06 2002 г Печ л 2 Заказ 185 Тираж 100 Отпечатано в типографии Ярославского государственного технического университета г Ярославль, ул Советская, 14 а, тел 30-56-63

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Андреева, Алла Михайловна

Введение.

Глава 1. Материалы и методы исследований.

1.1 .Материалы. Объекты исследования.

1.1.1.Рыб ы.

1.1.2. Белки.>.

1.2. Методы исследований.

1.2.1. Постановка внутривидовых и межродовых скрещиваний леща, плотвы и синца.

1.2.2. Морфологический анализ потомства от индивидуальных скрещиваний рыб.

1.2.3. Отбор проб крови и интерстициальной жидкости.

1.2.4. Электрофоретические методы анализа белков и нуклеиновых кислот.

1.2.5. Хроматографические методы анализа белков.

1.2.6. Разные методы.

1.2.7. Выделение и очистка белков.

Глава 2. Внеклеточные белки в раннем развитии рыб.

2.1. Литературный обзор.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Идентификация белка липовителлина.

2.2.2. Липовителлин как резервный, структурный и пластический белок.

2.2.3. Определение времени проявления зародышевых генов.

2.2.4. Липовителлин как регулятор раннего развития.

2.2.4.1. Характер проявления родительских аллелей зародышевых генов с разным временем экспрессии в раннем развитии гибридов Б] леща, плотвы и синца.

2.2.4.2. Динамика распределения субстратспецифической активности между изоферментами в ходе развития зародышей рыб.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-функциональная организация белков крови и некоторых других внеклеточных жидкостей рыб"

Актуальность проблемы

Эволюция рыб охватывает несколько геологических эпох. Пережив глобальные изменения климата Земли, рыбы заняли господствующую позицию в Мировом океане, превзойдя по числу видов все другие группы позвоночных (Берг, 1938; Никольский, 1963; Расс, 1977). Эволюционный и экологический успех рыб обеспечен, прежде всего, эффективными механизмами стабилизации внутренней жидкой среды организма, включающей плазму крови, интерстициальную и некоторые другие внеклеточные жидкости (Gamble, 1954; Строганов, 1962; Thorson et al., 1967; lutz, Robertson, 1971; Шмидт-Ниельсен, 1982; Немова, 1992; Новиков, 2000; Озернюк, 2003).

Основной функцией внутренней жидкой среды организма является поддержание оптимальных осмотических отношений внутри организма и с внешней средой. Роль осмотически активных компонентов крови рыб выполняют соли, мочевина и триметиламиноксид (Строганов, 1962; Хлебович, 1974; Наточин, 1979; Шмидт-Ниельсен, 1982; Hegar, Hanke, 1982; Aas-Hansen et al., 2005; Veillette et al., 2005). Белки плазмы крови обеспечивают распределение внеклеточной жидкости организма между внутри- и внесосудистым компартментами и, помимо специфических функций, участвуют в пластическом обмене и транспорте ряда соединений (Строганов, 1962; Share, Claybaugh, 1972; Уайт и др., 1981; Wells et al., 2003).

Современные представления о белках плазмы крови и их транскапиллярном обмене у высших позвоночных основаны на модели крупных белков-мономеров (Klotz et al., 1975; Шульц, Ширмер, 1982), способных проникать в интерстициальное пространство в некоторых отделах микроциркуляционного русла ввиду функциональной разнокачественности капилляров в отношении белков (Pappenheimer, 1953; Landis, Pappenheimer, 1963; Zweifach, Intaglietta, 1968; Peterson et al., 1972; Поленов, Дворецкий, 1976; Осборн, 1978).

Белки крови рыб поставлены в условия постоянного осмотического взаимодействия с жидкостями организма и внешней среды, уровень минерализации которой, особенно в случае пресных вод, может существенно колебаться (Шилов, 1985). Поэтому способ организации белков крови и их распределение во внеклеточной жидкости организма подчинены цели быстрой стабилизации водного обмена in situ. Несмотря на то, что исследования физико-химических свойств отдельных белков крови охватывают представителей разных отрядов рыб (Herschberger, 1970; Valenta et al., 1976, 1977; Купер, 1980; Чихачев, 1982; Кирпичников, 1987; Зорин и др., 1994; Mestel, 1996), сведения об участии белков в стабилизации водного обмена немногочисленны (Строганов, 1962; Чихачев, Цветненко 1979; Цветненко, 1986, 1989, 1990; Чалов, Лукьяненко, 1989), а систематических исследований способов организации и интеграции белков крови на рыбах не проводилось. Между тем, выявленные особенности организации геномов высших позвоночных и рыб (Volff, 2005) косвенно позволяют предположить существенные различия их белков, так как организация белковых систем отражает характер генома (Патрушев, 2004).

Цель и задачи исследования

В работе решались следующие задачи:

1. Оценить структурно-функциональное разнообразие белков крови и других внеклеточных жидкостей организма на разных этапах онтогенеза, в разных таксономических и экологических группах рыб.

2. Выявить механизмы формирования структурно-функционального разнообразия белков крови у рыб с разным таксономическим и экологическим статусом.

4. Исследовать механизмы интеграции белков внутренней жидкой среды организма на примере костистых рыб.

Основные положения работы, выносимые на защиту

1. В период раннего развития до появления кровеносной системы и интраваскулярных белков внеклеточный белок липовителлин может участвовать в формировании внутренней жидкой среды зародыша как пластический и регуляторный белок.

2. Структурно-функциональная организация интраваскулярных белков у рыб из разных таксономических групп имеет множественный характер. Способ организации белковых систем крови обусловлен такими факторами внешней и внутренней среды как уровень минерализации водной среды обитания и особенности молекулярной организации гемоглобина соответственно.

3. Стабилизация водного обмена у костистых рыб достигается при участии белковых комплексов плазмы крови, способных к диссоциации на составляющие их полипептидные цепи в ходе транскапиллярного обмена, а также за счет других механизмов, в том числе, избирательной проницаемости стенок капилляров для разных белков плазмы крови.

Теоретическое значение и научная новизна работы

Обоснована концепция о существенных структурно-функциональных отличиях белков крови высших позвоночных и рыб, а также высоком уровне структурно-функционального разнообразия белков крови у Pisces : у рыб из первичных таксонов белки представлены специализированными мономерами; у костистых рыб - полифункциональными мономерами и олигомерами, способными к межмолекулярным взаимодействиям и проникающими с помощью механизма избирательной проницаемости через стенку капилляра в интерстициальное пространство, претерпевая при этом структурные преобразования. Выявлен универсальный алгоритм структурных трансформаций альбуминового комплекса при адаптациях у костистых рыб.

Установлено, что внешним фактором, способствующим появлению белков-олигомеров в крови пресноводных костистых рыб, может быть колебание уровня минерализации воды; внутренним фактором, определяющим снижение специализации белков, - неустойчивость структуры гемоглобина к дестабилизирующим факторам.

Обоснована концепция стабилизации водного обмена у пресноводных костистых рыб за счет трех основных механизмов: 1. поддержания функциональной однородности капилляров разного типа, формирующих тканевые жидкости по типу фильтратов плазмы, 2. избирательной проницаемости стенок капилляров для разных белков с учетом физиологических условий и специфики метаболизма клеток тканей in situ, и 3. структурных преобразований белкового олигомерного комплекса, названного нами «челнок», по типу диссоциации в ходе транскапиллярного обмена.

Практическое значение работы

Результаты и выводы работы могут быть использованы для развития фундаментальных исследований водного обмена у позвоночных, а также для работ в сфере рационального природопользования, в практике рыборазведения и при разработке систем контроля и мониторинга. Экспресс-метод определения устойчивости гемоглобина к дегидратации можно использовать в качестве критерия принадлежности хрящевых ганоидов к проходным и туводным формам, метод выявления структурных преобразований комплекса сывороточных альбуминов - в качестве теста на подготовленность производителей к нересту и контроля условий содержания рыб, анализ режима кроветворения - для разработки оптимальных условий содержания рыб. Материалы о структурно-функциональном разнообразии белков рыб и механизмах стабилизации их водного обмена могут использоваться в курсах лекций для студентов.

Апробация работы. Основные положения работы докладывались и обсуждались на VI Всесоюзной Конференции по экологической физиологии и биохимии рыб (Вильнюс, 1985), Всероссийской Конференции «Возрастная и экологическая физиология рыб» (Борок, 1998), IX Всесоюзном Совещании по эволюционной физиологии (Ленинград, 1986), I Симпозиуме по экологической биохимии рыб (Ярославль-Ростов, 1987), IX Международном Европейском Конгрессе Ихтиологов (Триест, 1997), X Международном Европейском Конгрессе Ихтиологов (Прага, 2001), Всероссийской Конференции «Современные проблемы водной токсикологии» (Борок, 2002), Всероссийской научно-практической Конференции «Экологические проблемы уникальных природных и антропогенных ландшафтов» (Ярославль, 2006), 2ой научной Конференции Стран СНГ «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 работы, из них 8 статей в рецензируемых научных журналах, утвержденных ВАК. 1 статья по коэффициенту цитирования вошла в БД CSA.

Личный вклад автора. Все диссертационные материалы получены непосредственно автором или под руководством автора. Оригинальные подходы к интерпретации данных, обобщение и систематизация результатов выполнены автором полностью. Работа выполнена на базе ЦКП «Молекулярные технологии» ИБВВ РАН.

Считаю своим долгом выразить признательность д.б.н., проф. В.И. Лукьяненко за предложенную тему исследований по идентификации белков крови рыб и к.б.н. Ю.В.Слынько за организацию работ по получению отдаленных гибридов рыб, а также искреннюю благодарность за проявленное д.б.н., проф. внимание к работе и поддержку д.б.н., проф.

Г.Г. Новикову

Н.Д. Озернюку, д.б.н., проф. В.Н. Яковлеву, д.б.н., проф. Н.Б. Гусеву и чл.корр. РАН Л.И. Корочкину.

Структура и объем работы. Работа состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, списка литературы. Диссертация изложена на 271 страницах и включает 90 рисунков и К) таблиц. Список литературы содержит 342 источников, из них 142 на английском языке.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Андреева, Алла Михайловна

ВЫВОДЫ

1. Выявлена множественность типов структурно-функциональной организации белковых систем крови у рыб: белковые системы у хрящевых рыб и хрящевых ганоидов высокодифференцированы, и состоят из специализированных мономерных белков, у костистых рыб -высокодифференцированы и состоят из слабоспециализированных белков с мономерной и олигомерной организацией.

2. Наиболее сложно организованы белковые системы крови у пресноводных костистых рыб. Они состоят из полифункциональных белков-мономеров и олигомеров со сложной поверхностной структурой, способных к межмолекулярным взаимодействиям с образованием комплексов и перестройкам при адаптациях in situ, что характеризует их как динамичные системы.

3. Внешним фактором, способствующим появлению в крови пресноводных костистых рыб белков-олигомеров, является колебание уровня солености воды. Внутренним фактором, определяющим снижение специализации белков, являются особенности молекулярной организации гемоглобина.

4. Основным внеклеточным белком зародыша до появления кровеносной системы является липовителлин, который участвует в формировании внутренней среды зародыша как резервный, питательный и регуляторный белок.

5. Транскапиллярный обмен белков плазмы крови у пресноводных костистых рыб обеспечен особенностями стенок капилляров, которые не обладают свойством молекулярного сита, но проявляют избирательную проницаемость для различных белков плазмы.

6. В стабилизации водного обмена у пресноводных костистых рыб принимают участие белковые комплексы плазмы крови, способные к перестройкам в ходе транскапиллярного обмена.

7. Выявлен универсальный алгоритм структурных трансформаций олигомерного комплекса крови в ходе транскапиллярного обмена при подготовке карповых рыб к нересту и адаптациях к солености, заключающийся в процессах диссоциации комплекса на составляющие его полипептидные цепи.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сравнение особенностей организации и интеграции белков плазмы крови у рыб и высших позвоночных выявило их существенные различия. У млекопитающих низкомолекулярная фракция плазмы крови представлена крупными специализированными белками, состоящими из 1 полипептидной цепи - мономерами, которые фильтруются через стенку капилляра в определенных отделах капиллярного русла. У рыб организация белков крови и их распределение по внеклеточным жидким компартментам формировались в соответствии с особенностями их внутренней среды и среды обитания. Для водных животных одним из основных лимитирующих факторов является соленость (Одум, 1975). Поэтому белковые системы крови рыб организованы в соответствии, прежде всего, с уровнем минерализации внешней водной среды и солевым составом внутренней жидкой среды (Хлебович, 1974). У хрящевых рыб и хрящевых ганоидов сформировались высокодифференцированные белковые системы крови, состоящие из специализированных белков, их низкомолекулярные фракции представлены исключительно мономерными белками. У пресноводных костистых рыб белковые системы крови сформированы из полифункциональных мономерных и олигомерных белков, состоящих из 10 и более полипептидных цепей; белки способны проникать через стенку капилляра с помощью механизма избирательной проницаемости в тканевые жидкости, в которых олигомеры могут диссоциировать на полипептидные цепи при адаптациях к пограничным для пресноводных рыб показателям солености. Поскольку белкам пресноводных рыб в силу гипертоничности внутренних биологических жидкостей в пресных водах не угрожает дегидратация, а наоборот, организм постоянно откачивает лишнюю воду, то образование белковых комплексов регулирует распределение внеклеточной жидкости организма, что способствует быстрой стабилизации водного обмена. В крови морских костистых рыб белковых комплексов не обнаружено. Морским видам в условиях гипертоничной внешней среды для удержания воды в организме, возможно, «выгоднее» иметь в крови больше небольших белков-мономеров, так как образование белковых агрегатов снизило бы онкотическое давление крови.

Приобретение пресноводными костистыми рыбами механизма быстрой «подгонки» онкотического давления внеклеточных жидкостей организма до оптимальных in situ показателей за счет диссоциации олигомерных комплексов, несомненно, не могло не способствовать высокой приспособляемости этой группы рыб и освоению ими новых экологических ниш. С другой стороны, учитывая историческое прошлое костистых рыб, предположительно связанное с длительной фазой жизни в море и дальнейшим освоением пресных вод (Ромер, Парсонс, 1992), а также предположение о формировании первичных биохимических систем при солености выше 5-8%0, но близкой к ней (Хлебович, 1974), более вероятно принять в качестве исходной модели существование во внеклеточной жидкой среде рыб отдельных полипептидных цепей, которые в ходе освоения рыбами пресных вод объединялись в белковые комплексы. Данная точка зрения подкрепляется обнаружением универсального типа распределения белков крови у тюльки, заключающегося в отсутствии белковых комплексов в интерстициальной жидкости и их сохранении в плазме крови.

Среди Pisces костистые рыбы занимают особое положение, которое определяется их биологическими особенностями, такими как высокая плодовитость и приспособляемость, многообразие экологических ниш. Эти особенности требуют высокого уровня генетической изменчивости, свободной рекомбинации генов, возможной при их слабом сцеплении (Кирпичников, 1987). Обнаруженная нами у белков костистых рыб способность к межмолекулярным взаимодействиям и структурным перестройкам, а также низкий уровень специализации белков, не исключают преобразований во взаимных отношениях структурных генов в сторону ослабления их сцепления. Данное предположение косвенно подтверждают сведения о наличии в геномах костистых рыб множественных семейств транспозонов, индуцирующих генетические перестройки (Volff, 2005), определяющих динамичный характер геномов костистых рыб. Поскольку организация белков так или иначе отражает характер генома (Патрушев, 2004), то динамичные белковые системы костистых рыб вполне могут быть следствием динамичной организации их геномов. Однако, фундаментальные проблемы взаимосвязи характера генома и организации белковых систем требуют специального рассмотрения. Тем не менее, благодаря динамичным и способным перестраиваться белковым системам крови, костистые рыбы максимально оптимизировали свой водно-солевой и пластический обмен, что не могло не увеличить шансы этой группы рыб на освоение новых ниш и в целом определить их экологический и эволюционный успех.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Андреева, Алла Михайловна, Борок

1. Аббасов Р.Ю., Гаджиев Р.В., Крючков В.И. Исследование изменений сывороточного белка и гемоглобина у самок куриинского лосося {Salmo trutta caspius Kessq.) при выдерживании в заводских условиях // Известия АН АзССР. 1988. №5. С.111-116.

2. Абелев Г.И. Основы иммунитета // Соросов. Образоват. Журн. 1996. №5. С.4-11.

3. Адамова Л.Г., Новиков Г.Г. Исследование белкового состава сыворотки крови растительноядных рыб // Биол.науки.1973. №5.С.44-49.

4. Алахов Ю.Б. Двумерный электрофорез белков в полиакриламидном геле // Электрофоретические методы анализа белков. Новосибирск: Наука. 1981. С. 57-63.

5. Александров В.Я. Реактивность клеток и белки. Л.: Наука. 1985. 318с.

6. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. В 5-ти томах. М.: Мир. 1986.

7. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Наука. 1983. 278с.

8. Андреева A.M. Сходство и различие в связывании бромкрезолового пурпурного сывороточными альбуминами осетровых и костистых рыб // Тезисы докладов VI Всесоюзн. Конф. по экологической физиологии и биохимии рыб. Вильнюс. 1985. С.6.

9. Андреева A.M. Идентификация сывороточного альбумина и изучение некоторых его физико-химических свойств у представителей семейств Acipenseridae и Cyprinidae // Инф. Бюлл. ИБВВ АН СССР. 1986а. №69. С.36-39.

10. Андреева A.M. Физико-химические свойства сывороточных белков хрящевых рыб на примере катрана // Тезисы сообщений IX Всесозн. Совещ. по эволюционной физиологии. Л.: Наука. 19866. СЛ 3-14.

11. Андреева A.M. О структуре гемоглобина некоторых видов семейства Acipenseridae // Инф. Бюлл. ИБВВ АН СССР. 1987а. №75. С.33-36.

12. Андреева A.M. Устойчивость гемоглобина осетровых рыб к дегидратирующему действию сульфата аммония // Инф. Бюлл. ИБВВ АН СССР. 19875. №76. С.56-59.

13. Андреева A.M. Идентификация сывороточных трансферринов леща и стерляди // Материалы I Симп. по экол. биохимии рыб. Ярославль. 1987в. С.8-10.

14. Андреева A.M. О роли сиаловых кислот в создании гетерогенности трансферринов стерляди и леща // Материалы I Симп. по экол. биохимии рыб. Ярославль. 1987г. С.10-11.

15. Андреева A.M. Физико-химические свойства сывороточного альбумина крови осетрообразных и карпообразных рыб на примере стерляди и леща // Физиология и биохимия гидробионтов. 1987d. С.108-114.

16. Андреева A.M. Физико-химические свойства основных групп белков крови у различных по экологии и таксономическому положению представителей хрящевых, хрящевых ганоидов и костистых рыб: Автореф. дис. . канд.биол.наук. Борок, 1997. 24с.

17. Андреева A.M. Структурно-функциональная организация альбуминовой системы крови рыб // Вопр. ихтиологии. 1999. Т. 39. №6. С. 825-832.

18. Андреева A.M., Басова Е.Е., Слынъко Ю.В. Особенности экспрессии LDH в развитии плотвы, леща, синца и их гибридов Fj // Тезисы докладов XIV Всерос. мол. научной конф. «Актуальные проблемы биологии и экологии». Сыктывкар: СГУ. 2000а. Т.2. С.12-13.

19. Андреева A.M. Сывороточные пероксидазы рыб // Вопр. ихтиологии. 2001а. Т. 41. №1. С. 113-121.

20. Андреева A.M. Сывороточные у-глобулины рыб // Вопр. ихтилогии. 20015. Т. 41. №4. С. 550-556.

21. Андреева A.M. Изменения белковой системы крови леща накануне нереста // Экол. проблемы онтогенеза рыб: физиолого-биохимические аспекты. М.: МГУ. 2001в. С. 35-46.

22. Андреева A.M., Карабанов Д.П. Биохимические маркеры раннего развития реципрокных гибридов первого поколения леща и плотвы // Тезисы докл. 14 Всерос. мол. науч. конф. «Актуальные проблемы биологии и экологии». Сыктывкар: СГУ. 2003. С.2-3.

23. Андреева A.M. Особенности проявления генов лактатдегидрогеназы в раннем развитии леща Abramis brama (L.), плотвы Rutilus rutilus (L.) и их реципрокных гибридов Fi // Вопр. ихтиологии. 2005а. Т.45.№З.С.411-417.

24. Андреева A.M. Особенности формирования изоферментных спектров лактатдегидрогеназы в раннем развитии плотвы Rutilus rutilus (L.) // Вопр. ихтиологии. 20056. Т.45. №2. С.277-282.

25. Андреева A.M. Особенности проявления генов аспартатаминотрансферазы в раннем развитии леща Abramis brama (L). плотвы Rutilus rutilus (L.), синца (A.balltrus (L.) и их межродовых гибридов Fi// Онтогенез. 2007. Т.38. №1.С.1-8.

26. Андреева A.M. Влияние дестабилизирующих факторов на структурно-функциональные показатели гемоглобина туводных и проходных рыб // Журн. эвол. биох и физиол. 2006а.Т.42. №6. С.537-543.

27. Андреева A.M., Чалов Ю.П., Рябцева И.П. Особенности распределения белков плазмы между специализированными компартментами внутренней среды на примере карпа Cyprinus carpió (L.) // Журн. эвол. биох и физиол. В печ.

28. Андреева A.M., Рябцева И.П., Большаков В.В. Анализ проницаемости капилляров разных отделов микроциркуляторной системы для белков плазмы у некоторых представителей костистых рыб // Журн. эвол. биох и физиол. В печ.

29. Астауров Б.Л. Проблемы общей биологии и генетики. М.: Наука. 1979. 293с.

30. Аттер Ф.М., Эберсолд П., Уингнс Г. Интерпретация генетической изменчивости, выявляемой методом электрофореза // Популяционная генетика и управление рыбным хозяйством. М.: ВО «Агропромиздат». 1991. 353с.

31. Байер Е.М. Некоторые данные о применении метода Лоури в зависимости от различных условий определения белка // Лаб.дело. 1976. №10. С.590.

32. Балахнин И.А., Галаган Н.П., Лукъяненко В.К, Попов A.B. О генетиченском полиморфизме некоторых компонентов крови у рыб (на примере осетровых и карповых) // Докл.АН СССР. 1972. .204. №5. С. 12501251.

33. Баранов O.K. Иммунохимический анализ эволюции белков // Успехи совр.биол. 1982. Т.74. Вып. 3(6). С.420-438.

34. Башунова Н.И. Биология и рыбохозяйственное значение жереха, акклиматизированного в озере Балхаш: Автореф.дис. . .канд.биол.наук. Л., 1974. 17 с.

35. Безруков В.Ф. Изоферменты эстераз белого амура и их изменчивость // Цитол.и генетика. 1987.Т.21. №4. С.293-297.

36. Берг Л.С. 1938. Древнейшие пресноводные рыбы // «Природа». №7-8.

37. Берг Л.С. Рыбы пресных вод СССР и сопредельных стран. М.;Л.: Изд-во АН СССР. 1948. 4.1. 469с.

38. Берстон М. Гистохимия ферментов. М.: Мир, 1965. 464 с.

39. Богданов Л.В., Коваль Е.З., Черноиванов В.А. Рекомендации по использованию электрофоретических данных при межпопуляционных и межвидовых сравнениях. 1980. Владивосток. 68 с.

40. Васильев В.П. Эволюционная кариология рыб. М.:Наука, 1985. 297с.

41. Васнецов В.В. Этапы развития костистых рыб // Очерки по общим вопросам ихтиологии. М.-Л.: Изд-во АН СССР. 1953. С.207-217.

42. Веревкина И.В. , Точилкин АИ, Попова НА. Колориметрическийметод определения SH-групп и S-S-связей в белках при помощи 5,5 -дитиобис(2-нитробензойной) кислоты // Совр.методы в биохимии. Под ред.ОреховичаВ.Н. М.: Медицина, 1977. 223-231с.

43. Гаалъ Э., Медъеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982. 448 с.

44. Галактионов В.Г. Иммунология. М.: МГУ, 1998. 480с.

45. Гауровиц Ф. Иммунохимия и биосинтез антител. М.: Мир, 1969. 416с.

46. Гераскин П.П., Мишин Э.А. Изменение фракционного состава гемоглобина крови севрюги при смене среды обитания // I Симп. По экол.биох.рыб. Ярославль. 1987. С. 46-47.

47. Гинатулин A.A. Структура, организация и эволюция генома позвоночных. М. 1984. 290с.

48. Голованенко Л.Ф. Типы гемоглобина у мальков осетровых // Докл. АН СССР. 1963. Т. 151. №5. С.1236-1237.

49. Голованенко Л.Ф., Шуватова Т.В. Некоторые физиолого-биохимические показатели самок донского леща в период нерестовой миграции//Совр.вопр.экол.физиол.рыб. М.: Наука, 1979. С. 145-149.

50. Глушанкова М.А., Коробцова Н.С., Кусакина A.A. Использование теплоустойчивости белка при исследовании проявления генов альдолазы у гибридных зародышей рыб // Биохимическая генетика рыб. JL: Наука, 1973. С.76-84.

51. Детерман Г. Гель-хроматография. М.: Мир, 1970.

52. Джорджеску Д Пэунеску Е. Биохимические методы диагноза и исследования. Бухарест: Медицина, 1963. 499с.

53. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. Т. 1-3. М.: Мир, 1982.

54. Дислер H.H., Резниченко П.Н., Соин С.Г. Теория экологических групп рыб // в кн. Теоретические основы рыбоводства. М.: Наука, 1965. С.119-128.

55. Жукинский В.Н., Гош Р.И. Исследование жизнеспособности эмбрионов тарани и леща в зависимости от интенсивности энергообмена овулировавшей икры с целью разработки критериев оценки ее качества // Совр.вопр.экол.физиологии рыб. М.: Наука, 1979. С.124-137.

56. Жученко A.A., Каролъ А.Б. Рекомбинация в эволюции и селекции. М.: Наука, 1985. 400 с.

57. Игнатьева Г.М. Ранний эмбриогенез рыб и амфибий. М.: Наука, 1979. 175 с.

58. Зорин Н.А, Жабин С.Г., Лыкова О.Ф., Зорина В.Н., Белогорлова Т.Н., Чирикова Т.С. Сравнительное изучение физико-химических и антигенных свойств альбуминов человека и животных // Журн.сравн.биохимии и физиол. 1994. Т.30. №4. С. 505-511.

59. Зотин А.И. Физиология водного обмена у зародышей рыб и круглоротых. М.: АН СССР, 1961.

60. Иванова Н.Т. Атлас крови рыб (сравнительная морфология и классификация форменных элементов крови рыб). М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982.184 с.

61. Игнатьева Г.М. Ранний эмбриогенез рыб и амфибий. М.: Наука, 1979. 175 с.

62. Ипатов В.В., Лукьяненко В.И. Сывороточные белки рыб: гетерогенность, структура и функции // Успехи совр.биол. 1979. Т.88. Вып. 1(4). С.108-124.

63. Иржак Л.И. Гемоглобины и их свойства. М.Наука, 1975. 240с.

64. Кавсан В.М., Золотухин С.Б. Структура генов глобинов человека //Мол. Биол. 1982. Т. 16. №1. С.5-27.

65. Камшилин И.Н., Лукьяненко В.И., Мишин Э.А., Попов A.B. Биохимический полиморфизм северо-каспийской севрюги // Осетровое хозяйство внутренних водоемов СССР. 1979. Астрахань. С.96-97.

66. Кангур А.К. Физиолого-биохимическая характеристика гонад леща // Совр. вопр. экол. физиол. рыб. М.: Наука, 1979. С. 168-174.

67. Карнаухов Г. И. Гаптогллобины у некоторых рыб Дальневосточного комплекса//Инф. Бюлл. ИБВВ АН СССР. №76. С.53-55.

68. Кузьмин Е.В. Альбуминовая система сыворотки крови осетрообразных в речной период жизни // Вопросы ихтиологии. 1996. Т.36. №1. С.101-108.

69. Кимура М. Молекулярная эволюция: теория нейтральности. М.: Мир, 1985. 394с.

70. Кирпичников B.C. Генетика и селекция рыб. Д.: Наука, 1987. 520с.

71. Кирсипуу А., Лаугасте К. О сезонных изменениях белкового обмена у леща// Совр. вопр. экол. физиол. рыб. М.: Наука, 1979. С.174-179.

72. Клячко О.С., Озернюк Н.Д. Изменение функциональных и структурных особенностей изоферментов лактатдегидрогеназы на разных стадиях онтогенеза Danio rerio II Онтогененз. 2001. Т. 32. №5. С. 374-376.

73. Кондратьева Т.П. Содержание общего белка в тканях хрящевых и костистых черноморских рыб в различные периоды годового цикла // Вопр. Эвол. Физиол. Тез. докл. IXBcec. совещ. Л.: Наука, 1986. С. 134.

74. Конюхов Б.В. Генетика развития позвоночных. М.: Наука, 1980. 291 с.

75. Коржуев П.А. О биохимических аспектах обмена веществ у рыб // Совр. вопр. экол. физиол. рыб. М.Наука, 1979. С.11-19.

76. Корочкин Л.И. Взаимодействие генов в развитии. М.: Наука, 1976а. 276с.

77. Корочкин Л.И. Генетика изоферментов и развитие // Онтогенез. 19765. Т.7. №1. С.3-17.

78. Корочкин Л.И. Гипотеза о временном принципе организации генных систем, регулирующих индивидуальное развитие // Исследования по генетике. Л.: ЛГУ, 1979. Т.8. С.150-160.

79. Корочкин Л.И. Некоторые аспекты генов-регуляторов в генетике развития // Онтогенез. 1982. Т. 13. №3. С. 211-221.

80. Корочкин Л.И. Некоторые молекулярные аспекты регуляции экспрессии генов у рыб и других эукариот // Биологические основы рыбоводства: генетика и селекция. Д.: Наука, 1983. С. 34-51.

81. Корочкин Л.И., Серов О.Л., Манченко Г.П. Понятие об изоферментах. Номенклатура изоферментов и соответствующих им генов. Молекулярные механизмы возникновения множественных форм ферментов //Генетика изоферментов. М.: Наука, 1977. С. 5-18.

82. Корочкин Л.И. Введение в генетику развития. М.:Наука, 1999. 253 с.

83. Крыжановский С.Г. Эколого-морфологические закономерности развития карповых, вьюновых и сомовых рыб // Тр.Ин-та морфол.живот. АН СССР. 1949. №1. С. 3-332.

84. Крыжановский С.Г. Закономерности развития гибридов рыб различных систематических категорий. М.: Наука, 220 с.Мартемъянов В.И. 1989. Влияние солености на пресноводных рыб // Зоологический журнал. 1968. Т. LXVIII. Вып.5. С.72-82.

85. Купер Э. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 1980. 422с.

86. Кушманов О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии.М.: Медицина, 1983. 272с.

87. Ланге И.О., Дмитриева E.H. Методика эколого-морфологических исследований развития молоди рыб // Исследования размножения и развития рыб. М.: Наука, 1981. С. 67-88.

88. Ландау М.А. Молекулярные механизмы действия физиологически активных соединений. М.: Наука, 1981. 234с.

89. Лебедев В.Д., Спановская В.Д., Савваитова К.А., Соколов Л.И., Цепкин Е.А. Рыбы СССР. М.: Мысль. 1969. 447с.

90. Лекявичус Э. Элементы общей теории адаптации. Вильнюс: «Мокслас», 1986. 273с.

91. Ленинджер А. Биохимия. М.: Мир, 1976. 956с.

92. Лопатина Н.И. Характеристика кривых высаливания гемоглобина в различные возрастные периоды и при некоторых заболенваниеях крови // Тр. Ленингр. Педиатр. Мед. Ин-та. 1975. Т.68. С.112-115.

93. Лукъяненко В.И., Попов A.B., Мишин Э.А. Гетерогенность и полиморфизм сывороточных альбуминов у рыб // Докл. АН СССР. 1971. Т.201. №3. С.737-740.

94. Лукъяненко В.И., Попов A.B. Гаптоглобины рыб // Физиол. И биох. низших позвоночных. Л.: Наука, 1974. С.З.

95. Малькольм Р.Л. Химическая биология рыб. М.: Мир, 1976. 262с.

96. Мартемъянов В.И. Диапазоны регуляции концентрации натрия, калия, кальция, магния в плазме, эритроцитах и мышечной ткани плотвы Rutilus rutilus в природных условиях // Ж. эвол. биох. и физиол. 2001. Т.37. №2. С.107-112.

97. Макеева А.П. 1992. Эмбриология рыб М.: Изд-во МГУ.

98. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.:Мир, 1984. 480с.

99. Маурер Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971. 62 с.

100. Методическое пособие методы исследования. Белки, ферментыи стерины базидиальных грибов // АН СССР, Ботанический ин-тим.Комарова В.Л. Л.: Наука, 1979. 72с.

101. Методы биологии развития // Серия «Проблемы биологии развития» под ред Астаурова Б.Л. М.: Наука, 1974. 620с.

102. Мешкова Н.П., Северин С.Е. Практикум по биохимии. М.: МГУ, 1979. 430с.

103. Мироновский А.Н. Особенности изменчивости и популяционной структуры карповых Волго-Каспийского и сопредельных районов. Сообгц.1. Популяционная подразделейность // Вопр.ихтиологии. 1991.

104. Мироновский А.Н. Особенности изменчивости и популяционной структуры карповых Волго-Каспийского и сопредельных районов. Сообщ.2. Анализ изменчивости признаков // Вопр.ихтиологии. 1991.

105. Мироновский А.Н., Кожара A.B., Яковлев В.Н. Закономерности формирования популяционной структуры карповых рыб Волго-Каспийского района // Экология. 1989. №1. С.21-27.

106. Наточин Ю.В. Особенности ионорегулирующей функции почек морских, пресноводных и проходных рыб // Совр. Вопр. Экол. Физиол. рыб. М.: Наука, 1979. С.75-82.

107. Нейфах A.A. Функция ядер в раннем развитии отдаленных гибридов рыб // Онтогенез. 1974. №5. С. 614-623.

108. Нейфах A.A., Тимофеева М.Я. Молекулярная биология процессов развития. М.: Наука, 1977.310 с.

109. Нейфах A.A., Тимофеева М.Я. Проблемы регуляции в молекулярной биологии развития. М.: Наука, 1978. 307 с.

110. Нейфах A.A., Абрамова Н.Б. Регуляция активности ферментов в развитии животных // Биохимическая и популяционная генетика рыб. Л.: Ленуприздат, 1979. С. 18-23.

111. Нейфах A.A., Давидов Е.Р. Отсутствие ядерного контроля над увеличением активности катепсина в раннем эмбриональном развитии // Биохимия. 1964. Т.29. С.273-282.

112. Немова H.H. Катепсины лососевых рыб в процессах онтогенеза и эмбриогенеза: Автореф.дис.канд.биол.наук. Харьков. 1982. 23с.

113. Немова H.H. Внутриклеточные протеиназы в эколого-биохимических адаптациях у рыб: Автореф.дис. .д-ра биол.наук. М., 1992. 42с.

114. Немова H.H. Внутриклеточные протеиназы животных // Теоретические аспекты экологической биохимии. Петрозаводск: Карел, науч. центр РАН, 1994, С. 91-116.

115. Немова H.H. Внутриклеточные протеолитические ферменты у рыб. Петрозаводсмк: Карел, науч. центр РАН, 1996. 104с.

116. Немова H.H., Высоцкая Р.У. Биохимическая индикация состояния рыб. М.: Наука, 2004. 215с.

117. Нефедов ГН. Сывороточные гаптоглобины морских окуней рода Sebastes//Вестник Моск. Ун-та. 1961. №1. С.104-108.

118. Никольский Г.В. Экология рыб. М.: «Высшая школа». 1963. 368с.

119. Николюкин Н.И. Межвидовая гибридизация рыб. Саратов: Саратовское гос. Изд., 1952. 312 с.

120. Николюкин Н.И. Отдаленная гибридизация рыб. М.: Пищевая промышленность, 1972. 335 с.

121. Новиков Г.Г. Изменчивость белкового состава сыворотки крови некоторых видов лососевых рыб в связи с их биологическим состоянием и видовой принадлежностью: Дисс. . канд.биол.наук.1970, 150с.

122. Новиков Г.Г. Рост и энергетика развития костистых рыб в раннем онтогенезе. М.: Эдиториал УРСС, 2000. 279 с.

123. Новиков Г.Г., Решетников Ю. С. Исследование белкового состава сыворотки крови лососевых рыб // Вопр.ихтиол. 1969. Т.9. Вып. I. С. 163-171.

124. Новиков Г.Г., Шатуновский М.И. Особенности фракционного состава липидов мышц и крови севанской форели и кумжи // Вопр.ихтиол. 1976. Т.16. Вып.15. С.946-949.

125. Одум Ю. Основы экологии. М.: Мир, 1975. 740с.

126. Озернюк Н.Д. Энергетический обмен в раннем онтогенезе рыб. М.: Наука, 1985. 175с.

127. Озернюк Н.Д. Механизмы адаптаций. М.: Наука, 1992. 272с.

128. Озернюк Н.Д. Биоэнергетика онтогенеза М.: Изд-во МГУ, 2000. 264 с.

129. Озернюк Н.Д. Температурные адаптации метаболизма в онтогенезе рыб // Экологические проблемы онтогенеза рыб: физиолого-биохимические аспекты. М.: Изд-во МГУ, 2001. С. 6-12.

130. Озернюк Н.Д. Феноменология и механизмы адаптационных процессов. М.: МГУ, 2003. 215с.

131. Оно С. Генетические механизмы прогрессивной эволюции. М.: Мир, 1973. 227с.

132. Осборн H.H. Микрохимический анализ нервной ткани. М.: Медицина, 1978. 264с.

133. Остроумова И.Н. Показатели крови и кроветворение в онтогенезе рыб // Известия ВНИИОРХ. T.XLIII. Ленинград. 1957. Вып.З. 63с.

134. Остроумов, И.Н. Белковый состав сыворотки крови лососевых рыб //Всесоюзн.совещ. по экологич.физиол.рыб. М.1966.

135. Остроумова И.Н. Белковый состав сыворотки крови лососевых рыб // Обмен веществ и биохимия рыб. М.: Наука, 1967.

136. Остроумова И.Н. Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови радужной форели // Известия ГосНИИОРХ. 1969. т.68.

137. Патрушев Л.И Искусственные генетические системы. Т.1. Генная и белковая инженерия. М.: Наука. 525с.

138. Поленов С.А., Дворецкий Д.П. Измерение транскапиллярного обмена жидкости // Методы исследования кровообращения. Л.:Наука, 1976. С. 163-184.

139. Поляковский В.И., Панковская A.A., Богданов JI.B. Биохимический полиморфизм серебряного карася, Carassius auratus gibelio В1., обитающего в озере Судобле (БССР) // Биохимическая генетика рыб. Л. 1973. С. 161-166.

140. Попов А.П. Половой диморфизм сывороточных белков карпа и сазана // Совр.вопр.экол.физиол.рыб. М.: Наука, 1979. С.152-155.

141. Проссер Л. Сравнительная физиология животных в 3 томах. М Мир, 1978.

142. Расе Т.С. Глубоководные рыбы // Итоги науки. Достижения океанологии. Изд-во АНСССР, 1959. №1.

143. Ратнер В. А., Жарких A.A., Колчанов H.A. Проблемы молекулярной эволюции. Новосибирск: Наука, 1985. 259 с.

144. Решетников Ю.С. Аннотированный каталог круглоротых и рыб континентальных вод России. М.: Наука, 1998. 220с.; 152 а. Решетников Ю.С. Атлас пресноводных рыб России. В 2-х т. М.: Наука, 2002.

145. Ромер А., Парсонс Т. Анатомия позвоночных. В 2-х томах. М.: Мир, 1992.

146. Руднева-Титова И.И. Формирование защитной антиоксидантной системы в раннем онтогенезе некоторых видов рыб Черного моря // I Конгр. Ихт. России. Астрахань. 1997. С.236.

147. Русанов В.М., Скобелев Л.И. Фракционирование белков плазмы в производстве препаратов крови. М.: Медицина, 1983.224 с.

148. Рэфф Р., Кофмен Т. Эмбрионы, гены и эволюция. М.: Мир, 1986. 404 с.

149. Рябов И.Н. Гибридизация представителей различных подсемейств семейства Cyprinidae II Вопр.ихтиологии. 1979. Т. 19. № 6. С. 1025-1042.

150. Рябов И. Н. Методы гибридизации рыб на примере семейства карповых // Исследование размножения и развития рыб. М.: Наука, 1981. С. 195-215.

151. Салменкова Е.А. Генетика изоферментов рыб // Успехи совр.биологии. 1973. Т.75. №2.С.217-235.

152. Самсонова М.В., Лаптева Т.И., Филлипович Ю.Б. Аминотрансферазы в раннем развитии лососевых // Онтогенез. 2005.Т.36. №2. С.96-101.

153. Сапрыкин В.Г. Изучение системы трансферрина у карпа Cyprinus carpió L. II. Связь с некоторыми компонентами жизнеспособности // Сб. научн. тр. Гос. НИИ оз. Иречн. Хоз-ва. 1986. №254. 125. С.51-68.

154. Сапрыкин В.Г. О наследственной природе полиморфизма карпов Урала по системе трансферрина // Сб.науч.тр.Перм.отд-ния ГосНИОРХ "Рыбохозяйственные исследования водоемов Урала". JL, 1979. Вып.2. С.79-84.

155. Серое О.Л. Генетика изоферментов животных и человека // Генетика изоферментов. М.: Наука, 1977. С.80-149.

156. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир. 1985.358с.

157. Слынъко Ю.В. Коэффициенты инбридинга и структура вида Abramis brama L. Информ. Бюл. Билогия внутренних вод. Д.: Наука. №75, 1987. С. 39-43.

158. Слынъко Ю.В., Мироновский А.Н. Популяционно-генетические дополнения к вопросу о роли фактора солености в микроэволюции пресноводных рыб // Экология. 1993. №11. С.82-87.

159. Слынъко Ю.В., Андреева A.M., Басова Е.Е. Особенности формирования гетерозиготного спектра лактатдегидрогеназы у триплоидных гибридов плотвы и леща //Тез. докл. VI Молодежи, науч. конф. Сыктывкар: Изд-во СГУ, 1999. С. 225-226.

160. Смирнова Л.И. Возможная длительность жизни эритроцитов налима в связи с голоданием // Обмен веществ и биохимия рыб. М., 1967.С.176-178.

161. Смирнов А.И. Биология, размножение и развитие тихоокеанских лососей. М.: МГУ, 1975. 333с.

162. Солдатое A.A. Особенности организации и функционирования системы красной крови рыб // Журнал эвол .биохимии и физиол. 2005. Т.41. №3. С.217-224.

163. Субботкин М.Ф., Субботкина Т. А. Сравнительный иммунохимический анализ антигенов сывороточных белков большого амударьинского лопатоноса Pseudoscaphirhynchus Kaufmanni (Acipenseridae) //Вопросы ихтиологии. 2003. Т.43. №2. С.254-261.

164. Строганов Н.С. Экологическая физиология рыб. М.: МГУ, 1962. Т. 1.443 с.

165. Терских В.В., Васильев A.B. Апоптоз и дифференциация эпидермальных кератиноцитов // Онтогенез. 2005. Т.36. №2. С.85-89.

166. Тора С., Хамет П., Орлов С.Н. Na/K-Hacoc и внутриклеточные моновалентные катионы: новый механизм сопряжения возбуждения с транскрипцией, участвующий в подавлении апоптоза // Мол. биол. 2003. Т.37. №3. С.371-381.

167. Торчинский Ю.М. Сульфгидрильные и дисульфидные, группы белков . М.: Наука, 1971. 230с.

168. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии. В 3-х томах. М.: Мир, 1981.

169. Филлипович Ю.Б., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии. 1975.318с.

170. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия. М.: Мир, 1980. 579с.

171. Хлебович В.В. Критическая соленость биологических процессов. Л.: Наука, 1974. 236с.

172. Хочачка П., Сомеро Дж. Стратегия биохимической адаптации. М.: Мир, 1977.398 с.

173. Чадов Б.Ф. «Образ» регуляторного гена в опытах на дрозофиле // Генетика. 2002. Т. 38. №7. С.869-881.

174. Чалов Ю.П. Изобр. № «Устройство и способ взятия проб интерстициальной жидкости у рыб»). 1986.

175. Чалов Ю.П., Лукъяненко В.И. Особенности фракционного состава белков интерстициальной жидкости и плазмы крови у некоторых видов карповых рыб // Матер. VII Всесоюзн. конфер. по экол. физиол. и биох. рыб. Ярославль. 1989. С.214-215.

176. Чегер СИ. Трансапортная функция сывороточного альбумина. Бухарест. 1975.

177. Чутаева А.И., Домбровский В.К., Гузюк С.Н., Лазовский A.A. Полиморфизм изобелинского карпа по некоторым белковым системам // Основы биопродуктивности внутренних вод Прибалтики. Вильнюс. 1975. С.311-313.

178. Шатуновский М.И. Эколого-физиологические подходы к периодизации онтогенеза рыб // Экологические проблемы онтогенеза рыб: физиолого-биохимические аспекты. М.: Изд-во МГУ, 2001. С. 13-19.

179. Шатуновский М.И:, Новиков Г.Г. Изменение некоторых биохимических показателей мышц и крови кумжи в ходе созревания половых продуктов.// Закономерности роста и созревания рыб. М.: Наука, 1971. С.78-79.

180. Шварц С.С. Экологические закономерности эволюции. М.: Мир, 1980. 277с.

181. Шилов И.А. Физиологическая экология животных. М.: Высшая школа, 1985. 328 с.

182. Шмидт-Ниельсен К. Физиология животных. Приспособление и среда. В 2-х кн. М.:Мир, 1982.

183. Шульман Г.Е. Физиолого-биохимические особенности годовых циклов рыб. М.: Пищевая пром., 1972. 366с.

184. Шулъц Г.,Ширмер Р. Принципы структурной организации белков. М.: Мир, 1982. 354 с.

185. Юдкин И.И. Ихтиология. М: «Пищевая промышленность», 1970. 380с.

186. Яковлев В.Н., Слынъко Ю.В. Гаметическая сегрегация геномов у межродовых гибридов карповых рыб // ДАН. 1998. Т.358. №5. С. 716-719.

187. Яковлев В.Н., Слынъко Ю.В., Гречанов И.Г., Крысанов Е.Ю. Проблемы отдаленной гибридизации у рыб // Вопр. Ихтиологии. 2000. Т.40. №3. С. 312-326.

188. Andreeva A.M. Ecological diversity of physico-chemical properties of proteins blood of fishes // 9th Intern.Congress of European Ichth."Fish Biodiversity".Trieste. 1997. P. 7-8.

189. Andreeva A.M., Slynko Y.V. Role of vitelline in initiation of nuclear genome // Book of Abstracts X European congress of ichthyology. Prague. 2001. P. 142.

190. Andrews P. Estimation of the molecular weights of proteins sephadex gel filtration // Biochem.J. 1964. Vol.91. P.222-227.

191. Argos P., Rossman M.G. Structural comparisons of heme binding proteins//Biochemistry. 1979. V. 18. №22. P. 4951-4959.

192. Augros R., Stanciu G. Systematic differentiation. A new evolutionary synthesis // Biol.Forum. 1987. №80. V.4. P. 551-556.

193. Bede M. The proteins and lipids of plasma of some species of Australian fish and water salt fish // J.Cell.Physiol. 1959. 54. №3. P.221-230.

194. Black J.A., Dixon G.H. Amino-acid sequence of alpha chains of human haptoglobins //Nature. 1968. 218. P.736.

195. Blake C.C.F. Exons and the structure, function and evolution of hemoglobin//Nature. 1981. Vol.291. №5817. P. 598-616.

196. Blakesly R.W., Boezi J.A. A new staining technique for proteins in polyacrilamide gels Coomassie Brilliant Blue G-250 // Anal.Biochem. 1977.82. P. 580-582.

197. Blundell T., Dodson G., Hodgkin D., Mercold D. Insulin: The structure in the crystal and its reflection in chemistry and biology// Adv.Prot.Chem. 1972. 26, 279.

198. Bonaventura J., Bonaventura C., Sullivan B. Urea tolerance as a molecular adaptation of Elasmobranch hemoglobins // Science. 1974. Vol. 186. №4158. P. 57-59.

199. Brix O., Clements K.D., Wells R.M.G. Haemoglobin components and oxygen transport in relation to habitat distribution in triplefm fishes (:Tripterygiidae) // J.Comp.Physiol. B. 1999. Vol. 169. P.329-334.

200. Buhler D.R., Shanks W.E. Multiple Hemoglobins in fishs // Science. 1959. Vol.129. №3353. P. 899-900.

201. Bundschah G. Uber ein vereinfachter verfohun zu quacitetiven haptoglobin bestimmuoqaus measchlihen und ticrischen seren // Doch Pesanoth. Wesa. 1960. H.43. Bd.15. S.2103.

202. Champion M.J., Whitt G.S. Synchronous allelic expression at the glucosephosphate isomerase A and B loci in interspecific sunfish hybrids // Biochem.Genet. 1976. Vol.14. №9-10. P.723-738.

203. Chao Zi-Pen , Einstein E.R. Estimation of the molecular weight of flexible disordered proteins by exclusion chromatography // J.Chromatogra. 1969.42. №4. 485-492.

204. Clegg J.C.S., Kennedy S.I.T. Initiation of synthesis of the structural proteins of semliki forest virus //J.Mol.Biol. 1975. 97, 401.

205. Coates M.G. Hemoglobin function in the vertebrates. An evolutionary model // J.Mol.Evol. 1975. Vol. 6. №4. P.285-307.

206. Cordier D., BarnoudR., Branndonn A.M. Etude sur la proteinemie de la Roussette (Scyllium canicula L.). Influence du jeune //C.R.Soc.Biol. Paris, 1957. 151. P.1912-1915.

207. Creyssel R., Silberzahn P., Richard G., Manuel Y. Etude du serum de Carpe (Cyprinus carpio) par electrophorese en gel d amidon // Bull.Soc.Chim.Biol. 1964. 46. P.149-159.

208. Davis B.J. Disk-electrophoresis. II. Method and application to human serum proteins // Ann.N.Y.Acad.Sci. 1964. Vol.121. P.404-427.

209. Deutsch M.F., McShan W.F. Biological Studies of blood plasma protein XII. Electrophoretic studies of the blood serum proteins of some lower animals//J.Biol.Chem. 1949. 180. P. 219-234.

210. Drilhon A., Fine Jean-M. Les proteins du serum sanguine chez les Elasmobranches (Scyllium catulus et Scyllorhinus canicula) // C.R. Acad.Sci.,Paris. 1959. 248. P. 2418-2420.

211. Drilhon A. L/apport de 1/electrophorese en gel d/amidon // Bull.de 1/Inst.oceanographique. Monaco. 1960. №1168. P. 3-30.

212. Edelstein S.J. Cooperativ interactions of hemoglobins // Annu.Rev.Biochem. 1975. 44. P. 209-232.

213. Ellman J.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch.Biochem. 1959. Vol.82. P. 70-77.

214. Fahy E., Martin S., Mulrooney M. Interaction of roach and bream in a Irish reservoir// Arch.Hydrobiol. 1988. №114. P.291-309.

215. Folin O., Ciocalteau V. Tyrosine and tryptophan determination in proteins //J.Biol. Chem. 1927. 73. P: 627-650.

216. Foutdevila A. The unstable genome: an evolutionary approach // Genet.Iber. 1987. №39. Vol. 3/4. P. 315-343.

217. Franglen G. The role of plasma albumin and its relation to its structure//Proc.Roy.Soc.Med. 1967. Vol.60. №1.P. 1072-1074.

218. Frankel J.S., Hart N.H. Lactate dehydrogenase ontogeny in the genus Brachydanio (Cyprinidae) //J. Hered. 1977. Vol. 68. №2. P. 81-86.

219. Frommel D., Litman G. W., Terry W.D., Good R.A., Rosenberg A. Conformational differences of immunoglobulin G subclasses // Biochim. et Biophys. Acta. 1970. 221. №2. P. 399-402.

220. Fyhn Unni E.H., Sullivan Boiling. Elasmobranch hemoglobins; dimerization and polymerization in various species // Comp.Biochem. and Physiol. B. 1975. V. 50. №1. P. 119-129.

221. Gamble J.L. Chemical Anatomy, Physiology and Extracellular Fluid.th6 ed. Harvard University Press. Cambridge. Mass. 1954.

222. Gauer O.H., Henry J.P., Behn C. The regulation of Extracellular Fluid volume //Annu. Rev.Physiol. 1970. Vol. 32. P. 547-595.

223. Ghaffari S.H., Lobb C. J. Structure and genomic organization of a second class of immunoglobulin light chain genes in the channel catfich // J. Immunol. 1997. V.159. №1. P.250-258.

224. Go M. Correlation of DNA exonic regions with protein structural units in haemoglobins//Nature. 1981. Vol.291. №5810. P. 90-92.

225. Graik C.S., Buchman S.R., Beucko K.S. Characterization of globin domains: heme binding to the central exon product // Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 1980. Vol.77. №3. P.1384-1388

226. Guyton A.C., Granger H.J., Taylor A.E. Interstitial Fluid Pressure // Physiological Reviews. 1971. Vol.51. №3. P.527-563.

227. Hartling R.C., Kunkel J.G. Proteolytic cleavage of yolk protein during flounder (Pleuronectes americanus) development: characterization of lipovitellin from eggs and embyos// Mol.Biol.Cell. 1995. V. 6. P. 321 a.

228. Hegar S. Abo, Hanke W. Electrolyte changes and volume regulatory processes in the carp (Cyprinus carpio) during osmotic stress // Comp.Biochem.Physiol. 1982. Vol. 71A. №2. 157-164.

229. Herschberger W.K. Some physicochemical properties of transferrins in brook trout // Trans.Amer.Fish.Soc.1970. Vol.99. №1. P.207-218.

230. Hofman A.F., Small D.M., Detergent Properties of Bile Salts: Correlation with Physiological Function // Annu.Rev.Med. 1967. 18. P.333-376.

231. Huber R., Deisenhofer J., Colman P.M., Matsuhima M., Palm W. Crystallographic structure studies of an IgG molecule and an Fc fragment. // Nature. 1976. 264,415.

232. Irisava H., Irisawa AF. Blood serum proteins of the marine Elasmobranchii//Science. 1954. 120. №3125. P. 849-851.

233. Itzhaki R.F., Gill D.M. A micro- biuret method for estimating protein //Anal.Biochem. 1964. Vol.9. P.401-410.

234. Joshi PC. Seasonal changes in the blood parameters of a hill strem teleost, Channa gachua // Compar.Physiol. and Ecol. 1989. 14. №2. P. 71-73.

235. Jakobson M., Baltimore D. Polypeptide cleavages in the formation of poliovirus proteins // Proc.Nat. Acad. Sei. USA. 1968. 61, 77.

236. Kirsipuu A. Seasonal cycle of changes in the blood serum protein fractions in bream // ENSV Tead.Akad.toimetised, Biologia. Изв.АН Эст.ССРб Биология. 1971.20. №2. P.133-140.

237. Klotz I.M., Darnall D.W., Langerman N.R. Quaternary structure of proteins // The Proteins (H. Neurath, Ed.), 3rd., 1975. Vol., I, Academic Press, New York. P.293-411.

238. Klotz J.M. Hemerithrin // Subunits in Biological Systems. Inc., New York. 1971. Vol.5, P.55-103.

239. Koehn K. Serum haptoglobins in some American Catostomid fishes // Comp.Biochem.Physiol. 1966. Vol.17. №1. P.349-352.

240. Kobayashi К, Нага A., Takano K, Hirai H. Studies on subunit components of immunoglobin M from a bony fish, the chum salmon, Oncorhynchus keta//Mol. Immun. 1982. Vol. 19. №1. P. 95-103.

241. Koch H. J.A., Wilkins N.P., Bergstrom E., Evans J.C. Futher studies of the multiple components of the haemoglobins of Salmo salar L. // Med.ed.Koninlijke Vlaamse Acad. 1967. Vol.29. №7. P. 1-16.

242. Kopiejewska W., Terlecki J., Chybowski L. Attainment of sexual maturity by hybrids of rudd, Scardinius erithrophthalmus (L.) and carp bream Abramis brama (L.) under experimental conditions // Acta ichthyol. pise. 2004. V.34. №1. P.43-50.

243. Kopperschlander G., Dicrel W., Bierwagen B., Hofman E. Some kinetic acid molecular properties of yeast phosphofructokinase. FEBS Lett., 1968. 1. P.137-141.

244. Kopperschlander G., Dicrel W., Bierwagen E., Hofman E. Molecular weiths bestium yongen durch polyacrylamid gel electrophorese unter verwendurg lines linearen gel gradienter // FEBS Lett. 1969. Vol.5. P. 221-227.

245. Koshland D.E. The evolution of function in enzymes // Fed.Proc. 1976. Vol.35. P.2104.

246. Kostellow A., Morril G. Intercellular sodium ion concentration changes in the early amphibian embryo and influence of nuclear metabolism // Exptl.Cell Res. 1968. 50. P.639-644.

247. Kulow H. Die Serumproteine der Fishe // Dtsch.Fisch.Z. 1966. Bd. 13. P.379-384.

248. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage // Nature (Gr.Brit.). 1970. 4. Vol.227. №5259. P. 680685.

249. Landis E.M., Pappenheimer J.R. Exchange of substances through the capillary walls // Handbook of Physiology. Circulation. Washington D.C.: Am.Physiol.Soc. 1963. Sect.2. Vol.IL P. 961-1034.

250. Lecal J. Influence of salinity factor on the serum proteins of Blennus pavo // C.r.Seanc.Soc.Biol. 152. 4. P.1492-1512.

251. Litman G.W., Frommel D., Chartrand S.L., Finstad L., Good R.A. Significance of heavy chain mass and antigenic relationship in immunoglobulin evolution// Immunochem. 1971. Vol. 8. P. 345-348.

252. Lowry. O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J.Biol.Chem.1951. 193. P.265-275.

253. Lutz P.L., Robertson J.D. Osmotic constituents of the coelacanth Latimeria chalumnae Smith. //Biol.Bull. 1971. 141. P. 553-560.

254. Manwell C., Baker C.M. A molecular biology and the origin of species//. Heterosis, protein polymorphism and animal breeding. London, 1979. 394p.

255. Marchalonis John J., Schonfeld Steven A. Polypeptide chain structure of sting ray immunoglobulin // Biochim. et Biophys. Acta. 1970. 221. №3. P.603-611

256. Margoliash E. Primary structure and evolution of cytochrom c // Proc.Natl., Acad.Sci. 1963. 50. P. 672-679.

257. Markert C. L. Lactate Dehydrogenase Isozymes: Dissociation and Recombination of Subunits // Science. 1963. №140. P. 1329-1330.

258. Martinez-Ilvarez R.M., Hidalgo M.C., Domezain A., Morales A.E., Garcia-Gallego M., Sanz A. Physiological changes of Sturgeon Acipenser naccarii caused byincreasing environmental salinity // J.Exp.Biol.2002.Vol.205. №23. P.3699-3706.

259. Mathew C.G.P. The isolation of high molecular weight eukaryotic DNA // Methods in Molecular Biology/ Ed.Walker J.M.N.J.: Humana Press, Totowa. 1984. Vol.2. P.31-34.

260. Mestel Rosie. Sharks mark a great divide in the evolution of immunity: before them, not a trace of antibodies or other pivotal immune proteins;after them, all elements are in place // Natur.Hist. 1996. Vol. 105. №9. P.40-44, 46.

261. Monod J., Wyman J., Changeux J.-P. On the nature of allosteric transitions: a plausible midel // J.Mol.Biol. 1965. Vol. 12.№ 88.

262. Moore C.K.Iron metabolism and nutrition. Harvey Lect. 1960. 55. P. 67-101.

263. Morgan E.H. Transferrin and albumin distribution and turnover in the rat//Amer.J.Physiol. 1966. Vol.211.№6.P. 1486-1494.

264. Mouridsen H.T. The retention of different plasma proteins in wound tissue II Scand,J.Clin.and Lab.Invest.1969. Vol.23. №3. P. 235-240.

265. Mouridsen H.T., Wallevik K. Metabolic and gel-electrophoretic properties of albumin isolated from wound tissue // Scand,J.Clin.and Lab.Invest.1968. Vol.22. №4. P. 322-327.

266. Mutt Donald, Atha Donald H., Riggs Anstein The hemoglobin of the common stiny ray, Dasyatis salina: structural and functional properties // Comp. Biochem. and Physiol. B. 1978. Vol. 60. №2. P. 189-193.

267. Naoshi Akihiko et al.,. Identification and characterization of proteases involved in specific proteolysis of vitellogenin and yolk proteins in salmonids // J.Exp.Zool. 2002. Vol.292. №1. P.ll-25.

268. Nash A.R., Tompson E.O.P. Haemoglobins of the shark, Heterodontus portusjacksoni II Austral. J. Biol. Sci. 1974. Vol. 27. № 6. P. 607-615.

269. Neyfakh A.A., Glushankova M.A., Kusakina A.A. Time of function of genes controlling aldolase activity in loach embrio development // Devel. Biol. 1976. Vol. 50, №2. P.502-510.

270. Ohno S. The preferential activation of maternally derived alleles in development of interspecific hybrids // Heterospecific genome interaction. Philadelphia. 1969. P.137-150.

271. Ornstein L. Disc-electrophoresis. I. Background and theory // Ann.N.Y.Acad.Sci. 1964. №121. P.321-349.

272. Palmour R.M., Sutton H.E. Vertebrate transferrins molecular weight, clinical composition and iron Binding Studies // Biochem. 1971. Vol.10. P.4026-4032.

273. Pappenheimer J.R. Passage of Molecules through Capillary Walls // Physiol.Rev. 1953. 33. P.387-423.

274. Perutz M.F. Stereochemistry of Cooperative Effects in Haemoglobin //Nature. 1970. 228. P.726-739.

275. Peterson G.L.Review of the Folin phenol protein quantitation method of Lowry, Rosenbrough, Farr and Randall // Annal.Biochem. 1979. 100. P.201-220.

276. Petit C., Bretagnolle F., Felber F. Evolutionary consequences of diploid-polyploid hybrid zones in wild species // Trends in Ecology and Evolution. 1999. №14. Vol. 8. P. 306-311.

277. Pinnel A.E., Northam B.E. New automated dye- binding method for serum albumin determination with bromcresol purple // Clin.Chem.1978. №24. P.80-86.

278. Pontier P.J., Hart N.H. Isozyme expression in interspecific hybrids between two teleosts, Brachydanio albolineatus and Brachydanio rerio // Isoz. Bull. 1978.Vol. 11. P. 55.

279. Pontier P.J., Hart N.H. Creatine kinase gene expression during thedevelopment of Brachydanio // J. Exp. Zool. 1979.Vol. 209. №2. P. 283-296.

280. Potts B.M., Reid J.B. Hybridization as a dispersal mechanism // Evolution (USA). 1988. №42. Vol.6. P. 1245-1255.

281. Reisner AH, Nemes P., Bucholtz C. The use of Coomassie brilliant blue G-250 Perchloric acid solution for staining in electrophoresis and isoelectric focusing on polyacrylamide gels // Anal.Biochem. 1975. 64. P. 509-516.

282. Ridgway G.J., Klonts G.W., Matsumoto C. Intraspecific differences in serum antigen of red salmon demonstrated by immuno-chemical method // Bull.Int.North.Pacific.Comm.1962. Vol.8. P. 1-13.

283. Rossmann M.G., Liljas A., Branden C.-I., Banaszar L.J. Evolutionary and structural relationships among dehydrogenases // The Enzymes. 1975. 11,61.

284. Saito K. Etude biochimique du sang des Poissons // Bull.Jap.Soc.Sci.Fish. 1957. 22. P.752-759.

285. Sargent M.G. Fifty fold amplification of the Lowry protein assay 11 Anal.Biochem. 1987. 163. №2. P.476-481.

286. Scholander P.F., Hargens A.R., Miller S.L. Negative pressure in the interstitial fluid of animals // Science. 1968. Vol.161. №3839. P. 9-14.

287. Shaklee J.B., Whitt G.S. Patterns of enzyme ontogeny in developing sunfish // Differentiation. 1977. Vol.9. №1. P. 85-95.

288. Share L., Claybaugh J.R. Regulation of body fluids // Annu.Rev.Physiol. 1972, Vol.34. P. 235-260.

289. Sharp G.D. An electrophoretic study of hemoglobins of some scombroid fishes and related forms // Comp.Biochem. Physiol. 1973. Vol. 44B. №2. P.381-388.

290. Simonsen V., Hansen M.M., Sarder R.L, Alam S. High level of hybridization in three species of Indian major carps // Naga. 2004. V.27. №1-2. P.65-69.

291. Sick K. Haemoglobin polymorphism in fishes // Nature. 1961. Vol. 192., №4805. P.894-896.

292. Slack Ch., Warner A., Warren R. The distribution of sodium and potassium in amphibian embryos during early development // J.Physiol. 1973. 232. P.297-313.

293. Spector T. Refinement of the Coomassie blue method of protein quantitation//Anal.Biochem. 1978. 86. P. 142-146.

294. Starling E.H. On the absorption of fluids from the connective tissue spaces // J.Physiol. (London). 1895. Vol. 19. P. 312-326.

295. Takahashi H., Nagai T., Goto A. Hybrid male sterility between the fresh- and brackish-water types of ninespine stickleback Pungitius pungitius (Pisces, Gasterosteidae) // Zool. Sci. 2005. Vol.22. №1. P.35-40.

296. Thorson T.B., Cowan C.M., Watson D.E. Potamotrygon spp.\ Elasmobranchs with low urea content // Science. 1967. 158. P. 375-377.

297. Tsuyuki H., Ronald A.P. Molecular basis for multiplicity of Pacific salmon hemoglobins: evidence for in vivo existence of molecular species with up to four different polypeptides // Comp.Biochem.Physiol. 1971. Vol.39B. №3. P.503-522.

298. Tsuyuki H., Roberts E., Vanston W.E. Comparative zone electrophoregrams of muscle myogens and blood hemoglobins of marin and freshwater vertebrates and theirapplication to biochemical systematics //J.Fish.Res.Board.Can.1965. Vol.22. №1. P.203-213.

299. Tuft P. The state and movement of water in living organisms. XIX Sympos.Soc.Exptl.Biol.Cambridge, Univ.Press, 1965. P.385-402.

300. Valenta M., Stratil A., Slechtova V., Kalal L. Polymorphism of transferring in carp (Cyprinus carpio L.) genetic determination, isolation and partial characterization // Biochem.Genet. 1976. Vol.14. №1-2. P. 27-45.

301. Valenta M., Stratil A., Kalal L . Polymorphism and heterogeneity of transferrins in some species of the fish family Cyprinidae Anim.Blood Groups // Biochem.Genet. 1977. Vol.8. №1. P. 93-109.

302. Van Berkel Theo J. C., Dekker Cees J., Kruijt J.Kar, Van Eijk Henk G. The interaction in vivo of transferring and asialotransferrin with liver cell // Biochem.J.1987. 243. №3. P. 715-722.

303. Van Holde K.E., Van Bruggen E.F.J. The Hemocyanins, in S.N.Timasheff and G.D.Fasman, eds., Subunits in Biological Systems. 1971.v.5, pp 1-55, pt.A, Marcel, Deccer, Inc., New York,

304. Veillette Phillip A., White Ronald J., Specker Jennifer L., Young Graham . Osmoregulatory physiology of pyloric ceca: Regulated and adaptive changes in chinok salmon // J.Exp.Zool. 2005. Vol. 303A. №7. P.608-613.

305. Verspoor E., Hammar J. Introgressive hybridization in fishes: the biochemical evidence // J.Fish Biol. 1991. V.39 (Supl.). P.309-334.

306. Volff J.-N. Genome evolution and biodiversity in teleost fish // Heredity. 2005. V.94. №3. P.280-294.

307. Walawski K. Relationship between transferring polymorphism and the growth rate of carp (Cyprinus carpio L.) // Pol.arch.hydrobiol.1987. 34. №2. P.255-265.

308. Wang H., Yan T., Tan J.T.T., Gong Z. A zebrafish vitellin gene (vg3) encodes a novel vitellogenin without a phosvitin domain and may represent a primitive vertebrate vitellogenin gene // Gene. 2000. Vol. 256. P. 303-310.

309. Weber K.„ Osborn M. The reability of molecular weight-determination by DS-polyacrylamide gel electrophoreses. // J.Biol.Chem. 1969. Vol.244. P. 4406-4412.

310. Weber K., Pringle S.R., Osborn M. The measurement of molecular weight by electrophoreses on SDS-acrylamide gel // Methods in enzimology. 1972. Vol.26. P. 3-8.

311. Whitaker J.R. Determination of molecular weights of proteins by gel filtration on sephadex // Anal.Chem. 1963. 35. P.1950-1953.

312. Wilkins N.P. Biochemical genetics of Atlantic salmon Salmo salar L. 2. The significance of recent studies and their application in population identification // J.Fish. Biol. 1972. Vol.4. №4. P.505-517.

313. Winzler R.J. Glycoproteins. In Handbook of Biochemistry // Publ. Chemical Rubber Co., Cleveland, Ochio. 1970. P. 42-49.

314. Wolvekamp H.P. The evolution of oxiden transport in RJ MacFarland and AHT. Robb-Smith, eds., Functions of the Blood, Academic Press, Inc., New York, 1961.

315. Wood A.B., Jordan D.R. Fertility of roach x bream hybrids, Rutilus rutilus (L.) x Abramis brama (L.), and their identification // J.Fish Biol. 1987. №30. P.249-261.

316. Woods K.R., Paulsen E.C., Engle R.L., Pert J.H. Starch gel electrophoresis of some invertebrate sera // Science. 1958. 127. №3297. P. 519520.

317. Xue Changhu, Yu Guangli, Hirata Takashi, Sakaguchi Morihiko, Terao Junji. Antioxidative activity of carp blood plasma on lipid peroxidation // Biosci., Biotechnol. And Biochem. 1998. 62. №2. P.201-205.

318. Yamashita H. Haematological stady of a species of> rockfish, Sebastiscus marmoratus I. The effect of chlorinity on the moisture content and specific gravity of blood, serum protein and eritrocyte counts // Bull.Jap.Soc.Scient.Fish. 1967. 33. P. 81-90.

319. Zapolski E.J., Princiotto J.V. Binding of iron from nitrilotriacetat analogues by human transferring // Biochemistry. 1980. 19. №15. P. 3599-3603.

320. Zweifach B.W., Intaglietta M. Mechanics of fluid movement across single capillaries in the rabbit // Microvasc.Res. 1968.1: P. 83-101.

Информация о работе

Андреева, Алла Михайловна
доктора биологических наук
Борок, 2008
ВАК 03.00.10

Диссертация

Структурно-функциональная организация белков крови и некоторых других внеклеточных жидкостей рыб - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы