Структурно-функциональная характеристика миокарда и органов иммунной системы при развивающемся краш-синдроме в эксперименте

Артищева, Маргарита Юриковна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Структурно-функциональная характеристика миокарда и органов иммунной системы при развивающемся краш-синдроме в эксперименте
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональная характеристика миокарда и органов иммунной системы при развивающемся краш-синдроме в эксперименте"

На правах рукописи

Артишсва Маргарита Юриковна

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИОКАРДА И ОРГАНОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ РАЗВИВАЮЩЕМСЯ КРАШ-СИНДРОМЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

03.00.25. - "гистология, цитология, клеточная биология"

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва -2005

Работа выполнена на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Ереванского Государственного медицинского Университета им. М. Гераци

Научные консультанты:

Член-корреспондент АМН РФ, доктор медицинских наук, профессор Кузнецов Сергей Львович Академик АМН РА, доктор медицинских наук, профессор Азнаурян Арташес Вартанович

Официальные оппоненты:

Член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор Шахламов Владимир Аркадьевич

Доктор медицинских наук, профессор Медведев Дмитрий Иванович Доктор медицинских наук, профессор Дубовая Татьяна Клеониковна

Ведущая организация

ГОУ ВПО Московский медико-стоматологический университет

Защита диссертации состоится 2005г. в.....часов на заседании

Диссертационного совета (Д.208.040.01) при Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова по адресу:! 19992, Москва, М. Трубецкая ул., д.8

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, Нахимовский просп., д.

Автореферат разослан « ^ »

2005г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

В.А. Варшавский

it^mo

JL^^fooZy

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Синдром длительного раздавливания, синдром длительного сдавления, краш-синдром (КС)- это далеко не полный перечень терминов, применяемых для названия тяжелой патологии, развивающейся при различных катаклизмах и несчастных случаях - землетрясениях, войнах, обвалах шахт и рудников, земляных, взрывных, лесоповапочных работах, террористических актах. Вероятность стихийных бедствий и катастроф по-прежнему сохраняется на высоком уровне, и поэтому проблема изучения КС не только не потеряла своей актуальности, но в последние годы выдвигается в число приоритетных. Разрушительное Спитакское землетрясение 1988 года, повлекшее за собой многочисленные человеческие жертвы, сделало эту проблему особенно актуальной для Республики Армения.

КС представляет собой наиболее сложную категорию травм, вызванных механическим фактором. Смертность при данном виде поражения является одной из самых высоких в хирургии (М.П. Павловский и соавт., 1990); так, например, по данным Мусселиуса С.Г. и соавт. (1998), этот показатель составляет 9,1%. КС с трудом поддается лечению и в настоящее время, несмотря на значительные успехи, достигнутые в его изучении (Э.А. Нечаев и соавт., 1993).

Работы, посвященные экспериментальному моделированию КС с последующим изучением динамики микроскопических и ультраструктурных изменений различных органов, на сегодняшний день немногочисленны. Ограничено число исследований, касающихся роли иммунного звена в патогенезе КС, в то время как бурное развитие иммунологии ставит задачу определения роли иммуноцитокинов в развитии данного патологического процесса (В.А. Шекоян с соавт., 1996; M.J. Boyle et al., 1992; P.Y. Gueugniaud et al., 1996). В научной литературе практически отсутствуют сведения о введении в условиях эксперимента животным с КС препаратов - корректоров.

Ранее в исследованиях, выполненных на кафедре гистологии ЕрГМУ им. М.Гераци (М.Ю. Артищева, 1995; Н.Р. Петросян, 1997), было показано, что деструктивные процессы в органах - миокарде, печени, почках, лимфатических узлах, селезенке, скелетной мышие обнаруживаются сразу после декомпрессии и персистируют через сутки после экспозиции, затрагивая элементы как паренхимы, так и стромы органов, включая сосуды микроциркуляторного русла. Более поздние сроки в тех экспериментах не изучались. В связи с вышесказанным экспериментальное изучение в динамике патогенеза и ультраструктурной латоморфологии КС с уточнением и детализацией отдельных звеньев его развития, а также поиск новых (в том числе фармакологических) способов коррекции данной патологии, представляется необходимым и актуальным как с теоретической, так и с практической точки зрения.

Цель исследования: установить морфофункционапьные проявления экспериментально вызванного краш-синдрома в миокарде, органах иммунной защиты и в скелетной мышце в динамике до конца первого месяца после декомпрессии и изучить влияние на развитие краш-синдрома некоторых препаратов-корректоров.

Цель и задачи исследования

РОС. НДНИОН WtbHA* 3

БИЬЛИОТЬКА CJiiiepuit*'

Для выполнения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

• изучить микроскопические и ультраструктурные изменения в миокарде левого желудочка, лимфатических узлах, тимусе и скелетной мышце через 6 и 30 суток после декомпрессии;

• изучить токсичность сыворотки крови и экстрактов некоторых органов животных с экспериментальным краш-синдромом через 6 и 30 суток после декомпрессии и определить возможность влияния на эти показатели иммунокорректоров;

• изучить содержание ряда цитокинов в сыворотке крови и экстрактах некоторых органов экспериментальных животных при краш-синдроме, обе) дить их роль в развитии повреждений органов и тканей и оценить их возможный вклад в развитие полиорганной недостаточности;

■ изучить субмикроскопическую организацию миокарда, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы в промежуточном периоде КС в условиях пробной фармакологической коррекции протектором перекисного окисления липидов - а-токоферолом и иммунокорректором и стимулятором регенераторных процессов - нуклеинатом натрия.

Научная новизна

Впервые на одной и той же воспроизводимой модели экспериментального КС у крыс проведено комплексное исследование ряда патогенетических аспектов данной патологии с использованием морфологических, биохимических методов и метода работы с клеточными культурами. Работа затрагивает промежуточный и поздний периоды КС и является продолжением и развитием предыдущих исследований, выполненных на той же модели и посвященных раннему периоду заболевания; таким образом, результаты обоих исследований являются сравнимыми.

Впервые в одном эксперименте в результате изучения комплекса ультраструктурных изменений в миокарде, скелетной мышце и в иммунокомпетентных органах (тимусе и лимфатических узлах) через неделю и месяц после декомпрессии (в промежуточный и поздний периоды КС) установлено, что деструктивные процессы в паренхиматозных и стромальных компонентах органов развиваются на фоне слабого проявления процессов внутриклеточной регенерации и долго персистируют.

Впервые в процессе изучения КС в условиях одной экспериментальной модели выявлена корреляция тяжести ультраструктурных изменений в органах и объективных параметров токсичности сыворотки и органных экстрактов.

Впервые показано, что токсичность сыворотки крови и субмикроскопические проявления деструктивных процессов в органах в условиях экспериментального КС уменьшаются к концу первого месяца после декомпрессии, но не достигают контрольных показателей.

Впервые продемонстрировано раннее вовлечение в развитие экспериментального КС цитокинового звена, что проявляется в разнонаправленных сдвигах интерлейкинов - 1, -2, -6 и у-интерферона в сыворотке крови и органных экстрактах сразу и через неделю после декомпрессии.

Впервые на культуре ткани показана возможность положительного воздействия введения экспериментальным животным гормона тимуса тимапина на показатели токсичности сыворотки и органных экстрактов.

Впервые в условиях экспериментального КС выявлены некоторые ультраструктурные проявления корригирующего влияния на развитие процесса в органах антиоксиданта а-токоферола и иммуномодулятора и стимулятора регенерации нуклеината натрия

Научно-практическая значимость

Практическую значимость могут представлять экспериментальные данные, свидетельствующие, что субмикроскопические проявления деструктивных процессов в органах при КС, постепенно уменьшаясь, долго не исчезают совсем -по крайней мере, до 1-го месяца после экспозиции по данным настоящего эксперимента.

Важным в практическом аспекте представляется установленный факт токсичности сыворотки и органных экстрактов (из сердца и почек) в течение всего промежуточного и значительной части позднего периодов заболевания, что может иметь значение для выработки и обоснования схем лечения.

Выявленные признаки корригирующего воздействия введения экспериментальным животным с КС тималина на показатели токсичности и а-токоферола и нуклеината натрия на проявления ультраструктурной патологии в органах могут быть полезными для дальнейших исследований в этом направлении.

Основные положения, выносимые на защиту

I Выявленные на уровне ультраструктур деструктивные изменения в миокарде, органах иммунной системы и скелетной мышце экспериментальных животных на 7-ые сутки после декомпрессии сочетаются с признаками повышения сосудистой проницаемости (в частности, гематотимусного барьера) и, как правило, сильнее выражены в непосредственной близости от капиллярной стенки, что подтверждает значение фактора токсемии в развитии клеточной патологии при экспериментальном краш-синдроме. Токсичность на данном сроке эксперимента сыворотки крови и тканевых экстрактов коррелирует с тяжестью ультраструктурных изменений в органах. Субмикроскопическая организация исследованных органов на данном сроке свидетельствует о слабой выраженности внутриклеточных регенераторных процессов.

2. Ультраструктура брыжеечных лимфатических узлов экспериментальных животных на 7-е сутки после декомпрессии наряду с проявлениями дистрофических процессов отличается признаками, которые можно рассматривать как проявление функционального напряжения в органе в виде усиления плазматизации лимфоцитов.

3. Ультраструктурные изменения, обусловливающие морфологический субстрат полиорганной недостаточности (на примере миокарда, лимфатических узлов и тимуса), персистируют в промежуточном периоде и не исчезают полностью в позднем, сохраняясь, по меньшей мере, до 30-х суток после декомпрессии на фоне морфологических проявлений внутриклеточных репаративных процессов.

4. Введение экспериментальным животным тималина приводит к снижению показателей токсичности сыворотки и органных экстрактов. Ультраструктура исследованных органов на 7-е сутки после декомпрессии в условиях пробной

коррекции с помощью а-токоферола и нуклеината натрия характеризуется менее выраженными изменениями, чем у животных без воздействия препаратами, что дает основания предполагать возможную перспективность дальнейших исследований этих соединений в условиях краш-синдрома в свете проявления ими протекторных (а-токоферол) и иммуномодулируюших и стимулирующих репаративную регенерацию (нуклеинат натрия) свойств

Внедрения.

Результаты проведенного исследования используются в лекционных курсах на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии и на кафедре патологической анатомии Ереванского государственного медицинского университета им. Мхитара Гераци при изложении материала, посвященного проблемам реактивных изменений клеток и тканей, клеточной патологии и патоморфологии КС.

Апробация диссертационного материала.

Материалы диссертационной работы были представлены на I международном конгрессе, организованны Армянским обществом электронной микроскопии (Ереван 1998), 1-ой Закавказской конференции морфологов (Тбилиси 1999), V международном конгрессе " Иммунореабилитация и реабилитация в медицине" (Тенерифе, Испания 1999), II конференции Ассоциации морфологов Армении (Ереван, 2000), V научной сессии " Биологически активные вещества в медицине" ( Ереван, 2001), XIII Международном Конгрессе по иммунореабилитации "Аллергия, иммунология и глобальная сеть" (Ереван, 2003.); на расширенном заседании кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии при участии кафедр нормальной анатомии, патологической анатомии и биологии (Ереван, 2004).

В настоящей диссертационной работе обобщены материалы собственных исследований автора, проводившихся с 1996 года на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии, в ЦНИИЛ ЕрГМУ, им. М. Гераци, в Лаборатории электронной микроскопии Ростовского мед. университета, в Лаборатории иммунологии института кардиологии МЗ РА также в НИИ морфологии человека РАМН (Москва, 2003, 2004).

Публикации

Материалы диссертационного исследования отражены в 29-и научных работах, 13 из которых представлены в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 162-х страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы " Материалы и методы исследования "главы " Результаты собственных исследований и их обсуждение", состоящей из 4-х разделов, заключения, выводов и указателя литературы. Работа иллюстрирована 94-я микрофото, 3-я таблицами 3-я диаграммами. Список использованной литературы включает 170 источников, 121 -на русском и 49 на иностранных языках.

Содержание работы.

Материал и методы исследования.

Динамика субмикроскопической организации миокарда, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы в первый месяц после декомпрессии.

Эксперимент был выполнен на аутбредных половозрелых крысах-самцах массой 130- 150г. КС создавали путем сдавления одной тазовой конечности на специальной установке (Г.А. Абгарян и соавт., рацпредложение №158, выданное ЕрМИ, 1990). Данное устройство представляло собой камеру, состоящую из двух отсеков. К внутренней поверхности стенки одного отсека крепились животные экспериментальных групп, к стенке другого отсека - контрольные животные. Во время опыта двери камеры закрывали с целью приближения экспериментальных условий к ситуации катастрофы. Плошадь сдавления внутренней поверхности бедра равнялась 3,14 смг. Время экспозиции составляло 1 час. Материал для исследования брали на 7-ые и 30-ые сутки после декомпрессии, т.е в промежуточный и поздний периоды КС. По-видимому, степень тяжести вызываемого таким способом КС можно рассматривать как легкую, так как мы не наблюдали летальности животных даже через месяц после декомпрессии. Соответствующие (на той же модели с той же продолжительностью компрессии) исследования ранней стадии (сразу после декомпрессии и через сутки) были изучены нами прежде (М.Ю. Артищева, 1995). В настоящем исследовании было использовано 4 группы животных по 6 особей в каждой.

1. Первая контрольная (на 7-е сутки после экспозиции на стенде без сдавления).

2. Первая экспериментальная (7-е сутки после декомпрессии).

3 Вторая контрольная (на 30-е сутки после экспозиции на стенде без сдавления).

4. Вгорая экспериментальная (30-е сутки после декомпрессии).

Взятие материала осуществляли прижизненно в условиях эфирного наркоза. Для исследования брали образцы ткани из миокарда левого желудочка, тимуса, брыжеечных лимфатических узлов и скелетной мышцы из зоны сдавления и неповрежденного участка (на той же конечности, но проксимальнее).

Для светооптического исследования материал фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Для электронно-микроскопического исследования фрагменты органов толщиной не более 1 мм фиксировали в 2% растворе глютарового альдегида на 0,2М какодилатном буфере (рН 7,4) при температуре 4°С в течение 2-х часов, после чего образцы промывали 0,15М какодилатным буфером (рН 7,4) с добавлением сахарозы (3 порции в течение получаса) и подвергали постфиксации в 1% растворе четырехокиси осмия на 0,2М какодилатном буфере (рН 7,4). Дегидратацию материала проводили в ацетонах возрастающей концентрации; при этом на уровне 70% ацетона отбракованный (в виде мелких кусочков) материал контрастировали в течение ночи в 0,5% растворе уранилацетата. Заливку осуществляли в смесь эпона и аралдита. Полутонкие и ультратонкие срезы готовили на ультратоме LKB (III тип, Швеция). Полутонкие срезы окрашивали пиронином и толуидиновым синим и

просматривали под световым микроскопом. Ультратонкие срезы контрастировали цитратом свинца по Рейнольдсу и изучали с помощью электронных микроскопов JEM-100В и JEM-100CX-2*.

'Приносим глубокую благодарность заведующему Лабораторией электронной микроскопии Ростовского медицинского университета доктору мед. наук профессору С.И. Куцеву и заведующему Лабораторией экспериментальной патологии клетки НИИ морфологии человека РАМН члену-корр. РАМН, доктору мед. наук, профессору, засл. деят. науки РФ В.А. Шахламову за предоставление возможности проведения электрониомикроскопи чес кого изучения образцов.

Динамика токсических свойств сыворотки крови и экстрактов некоторых органов (сердца и почек) в течение месяца после декомпрессии и возможность коррекции данного показателя.

Тест торможения миграции лейкоцитов. Лимфоциты получали из брыжеечных лимфатических узлов интактных крыс линии Вистар (количество животных указано в таблицах). Лимфоузлы размельчали, и клетки суспензировали в среде 199 (Sigma), содержащей 1% 1М раствора HEPES (Serva), 40МЕ/ш1 гентамицина и 10% бычьей сыворотки. Клетки промывали и обрабатывали гемолитическим раствором - 0,85% NH4C1/0,01 М трис-ХЦИ (9:1) в 0,15М NaCl (рН 7,2). После двукратного отмывания клетки помещали в пластиковые чашки Петри и культивировали 2 часа при 370С в атмосфере с 5% С02 (для удаления макрофагов). Затем неприлипающие клетки собирали и доводили их концентрацию до 106 кл/мл в среде PPMlml640, содержащей гентамицин, HEPES, 5x105 М В-меркаггтоэтанола и 10% бычьей сыворотки.

Для определения жизнеспособности лимфоцитов использовали методику и рекомендации Д.В. Стефани и Ю.Е. Вельтишева (1977) С этой целью к 4-м каплям клеточной взвеси прибавляли по одной капле 2% раствора трнпанового синего и 20% нормальной сыворотки телят. Спустя 30 минут экспозиции при комнатной температуре подсчитывали в камере Горяева число клеток, окрашенных в синий цвет, и число неокрашенных лимфоцитов. При этом жизнеспособные клетки составляли 80 - 90% всего клеточного состава (неокрашенные клетки).

Жизнеспособность лимфоцитов (тест торможения миграции лейкоцитов) определяли в исходной клеточной взвеси и через 18 часов после инкубации культуры лимфоцитов с сывороткой крови и экстрактами тканей (из сердца и почек) интактных и подопытных (с экспериментальным КС) животных

Кардиотоксичность. Исследование проводили на культуре ткани сокращающихся эксплантатов миокарда куриных эмбрионов. Для ее получения фрагменты (размером 1-2 мм) сердец 6-8-и дневных куриных эмбрионов культивировали в камерах из плексиглаза в форме шайбы объемом 3,1 см3 на покровном стекле в среде Игла (1 мл) при 37°С. Через 1 час в камеры добавляли испытуемые сыворотки и экстракты тканей, полученные у животных с КС. Регистрацию параметров сокращения эксплантатов проводили на установке с фотоэлектрическим принципом регистрации, при котором использовали электрокардиограф (М.В. Львов, 1971). Спустя 30 мин от начала культивирования эксплантаты начинали ритмично сокращаться с частотой 90-120 сокращений в

минуту. Испытуемые вещества вносили в камеры в объеме 0,1 мл и следили за изменениями амплитуды, частоты и ритмичности сокращений в течение 10 минут.

КС у крыс-самцов линии Вистар воспроизводился на специальной экспериментальной установке путем сдавления внутренней поверхности бедра тазовой конечности животных Продолжительность экспозиции составила 1 час. Кровь, сердце и почки брали через 7 и 30 суток после декомпрессии

С целью изучения корригирующего влияния иммуномодуляторов на жизнеспособность лимфоцитов и сократительную способность культивированных эмбриональных кардиомиоцитов в условиях экспериментального КС части подопытных животных в день нанесения травмы и через 3 дня после декомпрессии внутримышечно вводили тималин в количестве 0,1 г сухого вещества, растворенного в 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Раствор готовили непосредственно перед инъекцией.

Таким образом, были изучены 5 групп животных по 15-30 шт. в каждой.

1. Контрольная - интактные животные.

2. 1-я экспериментальная - через 7 суток после декомпрессии.

3. Н-я экспериментальная - через 7 суток после декомпрессии с иммунокоррекиией.

4. Ш-я экспериментальная - через 30 суток после декомпрессии.

5. IV-я экспериментальная - через 30 суток после декомпрессии с иммунокоррекиией.

Весь цифровой материал, полученный в ходе иммунологических исследований, статистически обработан с использованием критерия Стьюдента или критерия Фишера (В.Ю. Урбах, 1964)»

*Исследование выполнено в Лаборатории иммунологии Института кардиологии РА, за что приносим глубокую благодарность заведующему Лабораторией доктору мед. наук, профессору В.А. Мкртчяну.

Иммуноцитокины в развитии краш-синдрома.

Опыты проведены на 42-х белых половозрелых мышах-самцах массой 25 - 30 г. Изучены 3 группы животных (по 14 шт. в каждой).

1. Контрольная - интактные особи.

2. 1-я опытная - животные через сутки после декомпрессии**.

3. 11-я опытная - животные через 7 суток после декомпрессии.

**Этот срок относится к ранней стадии КС и был использован потому, что в наших предыдущих исследованиях, посвященных ранней стадии данного страдания, исследование профиля цитокннов не проводилось.

Животные опытных групп подвергались локальному сдавливанию конечности в течение I -го часа. Поражение площадью 0,7смг занимало внутреннюю поверхность бедра.

Методом иммуноферментного анализа (ELISA) в сыворотке крови и супернатантах, приготовленных из гомогенизированных тканей сердца и тимуса, определяли содержание цитокинов - у-интерферона, интерлейкинов -1, -2, -6 и гормона пролактина. Ткани сердца и тимуса предварительно подвергались кислотной реакции в IM CHjCOOH« (по 2 мл на пробу) в течение 15-и мин. на холоде (4°С с последующей гомогенизацией пробки). Гомогенаты

центрифугировали при 15000 g в течение 15-и минут при 6°С. Супернатанты из сыворотки крови до определения иммуноцитокинов хранились при —40°С Анализ цитокинов осуществляли при помощи соответствующих кит-наборов производства фирмы DRG-Iinternational (USA-Germany), а пролактнна - с применением реагентов фирмы Microwell (USA) на автоматическом спектрофотометре Stat-Fax 303 Plus (USA) в диапазоне спектра поглощения 420-450 нм. Содержание иммуноцитокинов выражалось в pg/ml. Статистический анализ проводили с использованием критериев Стьюдента.**

**Исследоввиня были выполнены в ЦНИЛ ЕрГМУ, за что приносим глубокую благодарность докт. мед. наук, профессору А. В. Знльфяну.

Гистоструктура миокарда, лимфатических узлов, тимуса н скелетной мышцы при коррекции краш-синдрома a-токоферолом и нуклеинвтом натрия.

Экспериментальными животными служили крысы-самцы линии Вистар, которым в течение часа проводили сдавливание внутренней поверхности бедра. С целью изучения возможности фармакологической коррекции повреждений, развивающихся при КС, части животных, начиная со 2-х суток после декомпрессии, ежедневно в течение 5-и дней внутрибрюшинно вводили раствор а-токоферола, а другой части животных - раствор нуклеината натрия. Были исследованы 3 группы животных (по 6 шт. в каждой).

1. Контрольная - на 7-ые сутки после декомпрессии.

2. 1-ая экспериментальная - на 7-ые сутки после декомпрессии (терапия а-токоферолом).

3. Н-ая экспериментальная - на 7-ые сутки после декомпрессии (терапия нуклеинатом натрия).

Образцы ткани из миокарда левого желудочка, брыжеечных лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы (из зоны сдавления и проксимального по отношению к зоне повреждения участка) для светооптического и электронно-микроскопического исследования брали прижизненно в условиях эфирного наркоза и обрабатывали согласно описанным выше методам.

'Результаты собственных исследований и их обсуждение

Особенности субмикроскопической организации миокарда, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы в течение месяца после декомпрессии

Промежуточный период краш-синдрома (7-ые сутки после декомпрессии)

Миокард. При микроскопическом исследовании миокарда обращает на себя внимание мозаичный характер повреждения сократительных кардиомиоцитов (Км). Наряду с сохранными клетками встречаются Км с отсутствием поперечной исчерченности и гомогенизированной саркоплазмой. Мышечные волокна в отдельных участках разрушены, разъединены, располагаются отдельными фрагментами, некротизированы. Ядра сердечных миоцитов обнаруживают признаки обеднения хроматиновым веществом, пузырьковидные. Сосуды микроциркуляторного русла полнокровны, в капиллярах выявляется стаз эритроцитов.

При электронно-микроскопическом исследовании через 6 суток после декомпрессии обращают на себя внимание признаки внутриклеточного отека Км, особенно отчетливо проявляющегося в околоядерной области. Ядра большинства Км имеют фестончатые очертания; перинуклеарная цистерна иногда расширена, хроматин преимущественно диффузный. В крупных ядрышках преобладает гранулярный компонент. Органеллы отличаются неоднородностью строения. Большинство миофибрилл в Км расположены параллельно друг другу и характеризуются саркомерной организацией. Однако для многих из них характерно разрежение миофиламентов, легкая степень разнонаправленное™ их внутри саркомера, а также исчезновение четких А-, I- дисков и М-линий. Встречаются локальные контрактуры миофибрилл, очаги деструкции саркомеров, размытость Ъ-линий, повреждение и исчезновение миофиламентов. Митохондрии полиморфны Они нередко увеличены в размерах, характеризуется гомогенизированным строением или повреждением крист и просветлением матрикса. Цистерны саркоплазматического ретикулума нередко расширены. В области извитых вставочных дисков встречаются локальные расширения между их мембранами и отрывы миофибрилл. Наряду с этим отмечается появление гипертрофированных форм сократительных органелл, что отражает развитие внутриклеточных регенераторных процессов. Встречаются двуядерные Км; при этом может иметь место одновременное присутствие в одной клетке ядер, находящихся в различном состоянии - обычном и гидратированном.

Интерстиций миокарда на 7-ые сутки после декомпрессии отечен, особенно в перикапиллярных пространствах, где обнаруживаются клетки крови - в основном, эритроциты и нейтрофильные лейкоциты. Обращает внимание, что именно вблизи капилляров в Км особенно отчетливо проявляются дистрофические изменения -очаговые контрактуры миофибрилл, деструкция и лизис миофиламентов, набухание митохондрий. Последнее, являясь общим признаком для большинства типов повреждений, приводит к разобщению окислительного фосфорилирования. Эти наблюдения представляют интерес в связи с известным фактом токсичности сыворотки крови при КС и подтверждают значительную роль токсического фактора в повреждении миокарда при КС.

Стенка кровеносных капилляров нередко истончена; в ней обнаруживаются дефекты в виде расхождения соединений между эндотелиоцитами. Базальная мембрана эндотелия прерывистая. Цитоплазма ядросодержащей части эндотелиальных клеток представлена тонким бесструктурным электронно-плотным ободком, содержащим относительно крупные вакуоли. В некоторых эндотелиальных клетках встречаются кариопикноз и кариорексис. Характерными для данного срока являются эвагинации истонченных участков эндотелиоцитов в пернкапнллярные пространства. Вышеперечисленные признаки свидетельствуют о повышении в исследованных условиях проницаемости гематотканевого барьера в миокарде, что приводит к межклеточному отеку и, как следствие, к внутриклеточному отеку и дистрофии Км.

Таким образом, на 7-ые сутки после декомпрессии в миокарде экспериментальных животных, как и в ранний период КС (М.Ю. Артищева, 1995), обнаруживаются деструктивные признаки со стороны практически - всех компонентов миокарда, что согласуется с данными других исследователей. Так, К.А. Адильбеков (1969) в эксперименте на собаках гистологическими методами продемонстрировал дистрофические и некробиотические изменения, стаз,

кровоизлияния в сердце в раннем и промежуточном периодах КС, подтвержденные данными о снижении уровней миоглобина и цитохромоксидазы Приближение к исходным показателям, по данным автора, происходит примерно к месяцу после декомпрессии.

Д.С. Мхитарян (2000) рассматривает 7-8-е сутки промежуточного этапа КС как критический срок начальных проявлений ремоделирования левого желудочка с нарушением фазы диастолического расслабления. При этом автор отмечает, что при наличии базисных изменений миокарда (склероз и дистрофия) к 15-ым суткам процесс ремоделирования левого желудочка протекает с нарушением сократимости миокарда и в фазе систолы, что в позднем периоде заболевания приводит к декомпенсационной перегрузке сердца по типу дилатации.

Таким образом, субмикроскопическое исследование миокарда на 7-е сутки после декомпрессии выявило разнообразные проявления патологии клетки на уровне ультраструктур; при этом обнаруженные изменения затрагивали как Км, так и элементы интерстиция и, прежде всего, эндотелий стенки кровеносных капилляров. Обращает на себя внимание слабая выраженность на данном сроке исследования морфологических проявлений внутриклеточных регенераторных процессов.

Лимфатические узлы. Через 6 суток после декомпрессии характерна частая встречаемость лимфоцитов на стадии плазматизации. Плазматические клетки отличаются полиморфизмом. Встречаются лимфоидные клетки с расширениями перинуклеарной цистерны и измененными митохондриями. В ретикулярных клетках отмечаются признаки дистрофических изменений - снижение числа рибосом на мембранах гранулярного эндоплазматического ретикулума, набухание митохондрий, просветление их матрикса и редукция крист, гомогенизация содержимого, расширения перинуклеарной цистерны, включения липофусцина в цитоплазме, редко - миелиноподобные структуры Часто встречаются тучные клетки, иногда в контакте с лимфоцитами. В их цитоплазме содержатся крупные округлые электронноплотные гранулы, окруженные мембраной, комплекс Гольджи. Возрастание содержания базофилов способствует увеличению сосудистой проницаемости.

Ультраструктура кровеносных капилляров лимфатических узлов представляется неоднородной. Наряду с гемокапиллярами, имеющими широкий просвет и сохранную структуру энлотелиоцитов и базальной мембраны, встречаются сосуды с узким просветом и истонченным прерывистым эндотелием, то есть с ультраструктурными признаками, свидетельствующими о повышении проницаемости их стенки. В интерстициальных пространствах обнаруживаются элементы детрита.

Тимус. Через 6 суток после декомпрессии корковое вещество долек тимуса представлено плотно прилегающими друг к другу лимфоцитами с круглыми ядрами, содержащими крупные глыбки гетерохроматина, и тонким ободком малодифференцированной цитоплазмы с единичными митохондриями Иногда среди них обнаруживаются плазматические клетки. В норме в тимусе плазмошггы не встречаются, и выявленный признак свидетельствует о нарушении проницаемости в исследованных условиях гематотимусного барьера.

Ультраструктура ретикулоэпителиальных клеток характеризуется удлиненными ядрами с фестончатыми контурами, умеренно развитыми комплексом Гольджи и эндоплазматическим ретикулумом. Однако, особенно в мозговом веществе долек

тимуса, обнаруживаются эпителиоциты с хорошо развитым комплексом Гольджи, расширенными цистернами гранулярного эндоплазматического ретикулума с хлопьевидным содержимым в просвете и специфическими гроздьевидными вакуолями, характерными для секреторных эпителиоретикулоцитов. В таких клетках с помощью моноклонапьных антител были обнаружены гормоноподобные факторы - тимозин, тимопоэтин и тимулин (Л.П. Бобова и соавт., 2003).

Гемокапилляры отличаются полиморфизмом; их эндотелий нередко изменен. Поверхность эндотелиоцитов, обращенная в просвет капилляра, содержала многочисленные выросты и инвагинации, обнаруживаются участки истончения, скудное содержание органелл, снижение электронной плотности базальной мембраны Эти ультраструктурные признаки предполагают повышение проницаемости гематотимусного барьера.

Причины и характер изменений в иммунокомпетентных органах в условиях КС многогранны. Ряд изменений, по всей вероятности, обусловлен апьтеративным воздействием факторов КС (стресс, гипоксия, токсемия и др.) на паренхиматозные и стромальные элементы. Другие обусловлены напряжением функционирования, а соответственно и более интенсивным изнашиванием иммунокомпетентных клеток и компонентов стромы органов в связи с появлением при КС в организме значительного количества веществ, обладающих антигенными и аутоантигенными свойствами.

Скелетная мышца в зоне сдавления. В зоне повреждения на 7-ые сутки после декомпрессии обнаруживаются участки мышечных волокон (МВ) с признаками некроза. Наиболее характерными изменениями ядер миосимпласта являются их набухание с очаговой гиперконденсацией хроматина, деструкция наружной ядерной мембраны, локальные повреждения внутренней мембраны ядерной оболочки, сопровождающиеся выходом хлопьевидного поврежденного хроматина в саркоплазму. В этих участках выявляется тотальная деструкция сократительного аппарата, характеризующаяся исчезновением миофиламентов. На фоне отечной саркоплазмы обращают на себя внимание набухание и вакуолизация митохондрий, частая встречаемость лизосом и аутофагосом. В периферических, прилегающих к деструктивно измененной саркоплазме участках МВ обнаруживаются признаки фрагментации миосимпласта. Закономерными при этом представляются локальные повреждения периферической саркоплазмы в виде резкой конденсации или, наоборот, вакуолизации митохондрий, дилатации цистерн саркоплазматической сети, дезорганизации миофибрилл. Несмотря на наличие дегенерирующих участков, многие фрагменты МВ производят впечатление вполне жизнеспособных. Для зоны повреждения характерны разнообразные изменения сократительного аппарата, отличающиеся определенной мозаичностью. Встречаются МВ, в которых сохраняется поперечная исчерченность и саркомерный принцип организации миофибрилл, но при этом имеют место очаги деструкции с разрывом миофиламентов, их разрежением и разнонаправленностью. В других МВ обнаруживаются истонченные и фрагментированные миофибриллы, иногда с нечеткими 2-линиями, отсутствием А- и 1-дисков, разрежением и лизисом миофиламентов. В отдельных случаях выявляется глубокая дезорганизация сократительного аппарата, выражающаяся в полном разрушении саркомеров и, как следствие, - в исчезновении поперечной и продольной исчерченности. В этом случае в саркоплазме остаются лишь дезинтегрированные пучки миофиламентов

В эндомизии выражен отек. Стенка кровеносных капилляров характеризуется как реактивными, так и деструктивными изменениями; иногда она выглядит прерывистой за счет расширения межэндотелиальных контактов. Встречаются пикноз и рексис ядер эндотелиоцитов. Гладкие миоциты сосудов микроциркуляторного русла также обнаруживают признаки дистрофических изменений. Ультраструктура фибробластов свидетельствует об их биосинтетической активности, так как в их цитоплазме отмечается гиперплазия гранулярной эндоплазматической сети.

Скелетная мышца из проксимального по отношению к зоне сдавления участка. Некрозы в мышечных волокнах не встречаются. Их строение характеризуется умеренно выраженными дистрофическими изменениями, главным образом, в виде неравномерных отека саркоплазмы, набухания митохондрий, разволокнения, разрывов и лизиса миофиламентов миофибрилл.

Изменения MB в проксимальных по отношению к зоне повреждения участках обнаруживались и в раннем периоде КС (М.Ю. Артищева, 1995) и рассматриваются нами как результат воздействия общих для всех органов факторов КС (ишемического, токсического и др.).

Согласно мнению JI.M. Непомнящих с соавт. (1998), соматическая мышечная ткань отличается высокой чувствительностью к повреждающим воздействиям; при этом контрактурные повреждения миофибрилл и внутриклеточный миоцитолиз рассматриваются авторами как -первичные универсальные реакции поперечнополосатой мышечной ткани. Структурные изменения в скелетной мышце при миопатии у крыс авторы рассматривают как отражение баланса апьтеративных и компенсаторно-приспособительных процессов на всех уровнях структурной организации.

Исследуя строение органов экспериментальных животных при КС, С М. Секамова (1987) выявила сходные с приведенными выше изменения в скелетной мышце (контрактуры, изменения митохондрий, миолиз в виде лизиса 1-дисков, Z-линий, фрагментацию сарколеммы, полнокровие и др.) и пришла к заключению, что при недлительной компрессии (1,5 ч) регенераторные процессы в мышечной ткани травмированной конечности (регенерация внутриклеточная и за счет миосателлитов) начинают развиваться примерно к 4-м суткам после декомпрессии Ультраструктурными критериями нежизнеспособности MB, по мнению данного автора, являются мелкие хлопьевидные включения в матриксе митохондрий, свидетельствующие об ишемическом повреждении волокон, линейные внутрикристные включения в митохондриях, характерные для катехоламинового повреждения волокон, плотные отложения фосфата кальция в матриксе митохондрий, являющиеся маркером необратимого реперфузионного повреждения волокон.

Таким образом, к концу первой недели после декомпрессии ни один из исследованных органов не восстановил свою структуру. По-видимому, это присуще и другим органам. Так, например, в условиях такого же эксперимента (те же модель и сроки после декомпрессии) были установлены существенные изменения строения бронхолегочной ткани как следствие активации катаболических процессов, что структурно проявлялось выраженными альтерационными изменениями в конечных бронхиолах, структурных компонентах ацинуса, расстройствами в системе микрогемоциркуляции легких (A.B. Азнаурян с соавт., 2001).

Поздний период краш-синдрома (30-ые сутки после декомпрессии)

Миокард. Через месяц после декомпрессии нормализация субмикроскопической картины миокарда не наступает. Во многих Км отмечаются явления внутриклеточного отека, их ядра гипертрофированы, содержат крупное ядрышко. Хроматин хлопьевидный, нуклеоплазма просветлена; в саркоплазме видны очаги деструкции миофибрилл, митохондрии набухшие, с поврежденными кристами. Встречаются Км с явными признаками вакуольной дистрофии. Ядра в таких клетках подвергаются пикнозу и рексису, набухшие митохондрии сливаются с образованием вакуолей, миофибриллы теряют саркомерную организацию. Миофиламенты ряда миофибрилл гомогенизированы с образованием плотных войлокообразных масс. Изменения сократительного аппарата многообразны - от контрактурных повреждений до распада миофибрилл на отдельные саркомеры с очагами полной деструкции миофиламентов. Цистерны саркоплазматического ретикулума не дилатированы, включения гликогена немногочисленны. Морфологическая картина неоднородна. Наряду с Км, находящимися в состоянии дистрофии и некробиоза, обнаружены сердечные мышечные клетки с признаками компенсаторной внутриклеточной регенерации. В них отмечается гипертрофия миофибрилл и митохондрий, активные ядра с диффузным хроматином и крупным ядрышком с преобладанием гранулярного компонента.

Межуточный отек, деформации и дистрофические изменения тканевых элементов микроциркуляторного русла сохраняются. В артериолах наблюдаются локальные истончения безъядерных участков эндотелиоцитов, выбухание в просвет ядросодержащих частей. Ядра эндотелиоцитов пикнотичны, цитоплазма гомогенизирована. Тонкая стенка капилляров на слабых увеличениях микроскопа представлена бесструктурным электронноплотным слоем, образовавшимся в результате уплотнения цитоплазмы эндотелиоцитов; встречаются разрывы капиллярной стенки. В отдельных случаях имеет место повреждение сарколеммы и выход органелл в интерстициальное пространство. Встречаются капилляры с узким просветом. Ядра эндотелиальных клеток в них пикнотичны; перинуклеарная цистерна локально расширена, в тонких безъядерных участках цитоплазмы видны многочисленные микропиноцитозные пузырьки. Вокруг таких спазмированных капилляров, тесно прилегая к ним, лежат Км с признаками деструкции. Указанные изменения свидетельствуют о сохранении и даже усугублении повышенной сосудистой проницаемости, что, вероятно, способствует пролонгированию дистрофических изменений в мышечной ткани и строме сердца за счет, в частности, возможного поступления из плазмы токсических субстанций. Выявленные изменения коррелируют с установленным нами в ходе комплексного исследования патогенетических аспектов КС фактом выраженной цитотоксичности через неделю и через месяц после декомпрессии сыворотки крови животных с экспериментальным КС и экстрактов из сердечной мышцы (см. след. раздел). Таким образом, в течение первого месяца КС имеют место деструктивные, а иногда и некротические изменения Км, которые могут составлять субстрат слабости сердечной мышцы.

Следует отметить, что выявленное нами длительное (в течение месяца после декомпрессии) персистирование деструктивных изменений Км в условиях экспериментального КС вполне согласуется с данными клиницистов о

значительном периоде времени, необходимом для выздоровления (3 месяца и больше) при развитии КС, если летальный исход не наступил в ранние сроки (Rubinstein I., 1997).

Развитие КС сопровождается образованием порочных кругов, осложняющих течение заболевания. Так, гипоксия органов и тканей, наступающая вследствие повышения концентрации в крови катехоламинов, усугубляется снижением сократительной способности деструктивно измененных Км. Токсемия усиливается за счет снижения выделительной функции почек и детоксикационной функции печени. Подобные примеры могут быть продолжены.

Лимфатические узлы. Через месяц после декомпрессии в паренхиме лимфатических узлов визуально отмечается увеличение содержания плазмоцитов в корковом веществе. Активная плазматизация лимфоцитов в данных условиях связана, вероятно, с наличием в организме при КС большого количества антигенов Сосуды микроциркуляторного русла выглядят спазмнрованными; клетки, образующие их стенку, обнаруживают признаки дистрофических изменений Просвет артериол представляется резко суженным, ядра некоторых эндотелиоцитов пикнотичны; цитоплазма отдельных гладкомышечных клеток вакуолизирована. В кровеносных капиллярах также отмечается вакуольная дистрофия эндотелиоцитов, иногда пикноз ядер, деструкция базальной мембраны

Тимус. Через месяц после декомпрессии корковое вещество долек тимуса представлено скоплениями лимфоцитов в петлях, образованных ретикулоэпителиальной стромой. В некоторых лимфоцитах обнаруживаются изменения в виде расширения перинуклеарных цистерн и признаков апоптоза.

Ультраструктура ретикулоэпителиальных клеток отличается полиморфизмом. Встречаются «светлые» и «темные» клетки, обнаруживаются эпителиоииты с признаками деструкции и апоптоза. Ядро в таких клетках превращается в крупную осмиофильную глыбку, цитоплазма уплотнена и практически не содержит органелл. Наряду с этим многие ретикулоэпителиоциты тимуса характеризуется наличием хорошо развитой гранулярной эндоплазматической сети в цитоплазме и крупным ядром с гранулированным ядрышком. На этом сроке эксперимента в тимусе отмечается разрастание соединительной ткани.

Изменения субмикроскопической организации сосудов похожи на те, что были выявлены в условиях данного эксперимента в других органах. Стенка капилляров истончена и образует выпячивания. Ультраструктурные изменения, свидетельствующие об увеличении проницаемости стенки гемокапилляров, персистируют; перикапиллярные пространства отечны; в них часто встречаются лейкоциты, тучные клетки. Эндотелий капилляров нередко представлен узкими бесструктурными участками цитоплазмы. Встречаются спазмированные капилляры с умеренными явлениями дистрофии эндотелиоцитов и деструкции базальной мембраны. Расположенные рядом с такими капиллярами ретикулоэпителиальные клетки проявляют признаки вакуолизации. Складывается впечатление, что в тимусе, как и в других изученных в условиях данной патологии органах деструктивные изменения сильнее всего выражены в паренхиматозных и стромальных элементах органа, располагающихся в непосредственной близости к стенке кровеносных капилляров, что является, по-видимому, проявлением прямого цитотоксического повреждающего эффекта.

Эти данные в отношении тимуса коррелируют с результатами исследований А.Н. Папантонопуло с соавт. (1999). установивших, что при экспериментальном КС у крыс к 14-м суткам после декомпрессии в тимусе имеет место увеличение объема соединительнотканной капсулы и перегородок, обнаруживаются скопления тучных клеток, уменьшается площадь поперечного сечения тимуса и площадь коркового вещества его долек, т.е. имеют место изменения, по сути отражающие акцидентальную инволюцию тимуса в условиях стресса, являющегося обязательным компонентом возникновения и развития данной патологии.

Полученные результаты подтверждают участие иммунной системы в развитии КС. Можно предполагать, что существует несколько вариантов ее вовлечения в процесс, а именно - первичные альтеративные изменения в органах иммунной защиты полиэтиологической природы, усугубляющие течение основного процесса и участвующие в формировании порочных кругов и реакция напряжения за счет формирования аутоиммунного процесса, антитоксического иммунитета, антибактериального иммунитета (при сопутствующем инфекционном процессе).

Полученные данные не расходятся с имеющимися в литературе сведениями о существовании при КС иммунодефицита, о падении в ранний период заболевания в крови абсолютного и относительного количества лимфоцитов (К.А. Адильбеков, 1989); они не противоречат выявленному факту увеличения титра антител в первые сутки после декомпрессии (Д.И. Вознюк, 1978), возникающему, по-видимому, в ответ на образование (прежде всего в зоне раздавливания) комплексов, обладающих свойствами аутоантигенов. Они подтверждают обнаруженное В.В. Козловым с соавт. (1998) усиление плазматизации лимфатических узлов через бласттрансформацию, достигающее максимума к 7-ым суткам после декомпрессии.

Обнаруженное нами разрастание соединительной ткани и появление тучных клеток в тимусе согласуется с результатами А.Н. Папантонопуло с соавт. (1999), полученными на светооптическом уровне. Морфологические проявления повышенной проницаемости стенки гемокапилляров вписываются в современные представления о патогенезе КС (Э.А. Нечаев с соавт., 1993). Вовлечение в развитие КС иммунокомпетентных органов диктует необходимость рациональной коррекции в этих условиях иммунного статуса организма.

Скелетная мышца в зоне сдавлсния. На 30-е сутки после декомпрессии в зоне повреждения продолжают обнаруживаться морфологические признаки, которые можно рассматривать как проявления фрагментации мышечных волокон. Подлежащие "секвестрации" ядерно-саркоплазматические территории характеризуются явными признаками вакуольной дистрофии. Ядра в них находятся в состоянии пикноза и рексиса, в результате чего они превращаются в бесструктурные осмиофильные глыбки. Миофибриллы в этих участках выглядят полностью гомогенизированными, митохондрии обнаруживают признаки набухания и содержат единичные дезориентированные кристы, цистерны саркоплазматического ретикулума практически не определяются. В интерстиции вокруг таких участков обнаруживаются мощные пучки коллагеновых волокон. И напротив, терминальные участки МВ, от которых отщеплялись ядерно-саркоплазматические территории, имеют вполне сохранное строение и даже проявляют признаки внутриклеточной регенерации, прежде всего в виде гипертрофии миофибрилл.

Изменения сосудов микроциркуляторного русла скелетной мышцы через месяц после декомпрессии отличаются мозаичностыо с преобладанием, тем не менее, дистрофических изменений клеточных элементов сосудистой стенки. Встречаются кровеносные капилляры с гипертрофированными эндотелиоцитами, выбухающими в просвет микрососуда. В таких клетках выявляется хорошо развитый комплекс Гольджи, преобладающим компонентом которого являются везикулы Вся цитоплазма таких эндотелиоцитов занята узкими цистернами гранулярной эндоплазматической сети и свободными рибосомами. Встречаются центриоли О функциональном напряжении этих клеток свидетельствует также наличие микроворсинок и их клазматоз на люминальной поверхности клетки. В цитоплазме встречаются крупные эндоцитозные пузырьки - проявление макропиноцитоза. Однако на противоположной стороне этих же капилляров могут быть обнаружены истонченные, деформированные, дистрофически измененные эндотелиоциты, характеризующиеся электронно-плотной, практически бесструктурной цитоплазмой, содержащей множество зачастую сливающихся пузырьков, что может привести к их вакуольной дистрофии. Ядра таких эндотелиальных клеток пикнотичны. Базальная мембрана в стенке кровеносных капилляров нередко "отечная", утолщенная, отличается сниженной электронной плотностью, местами исчезает. Часто встречаются резко спазмированные капилляры, с просветом не более 0,2 мкм; их эндотелиапьные клетки характеризуются признаками вакуольной дистрофии. В таких капиллярах имеет место расхождение межэндотелиальных контактов, что приводит к отеку окружающей соединительной ткани. Базальная мембрана в них нередко разрушена. Похожие изменения наблюдаются и в более крупных сосудах микроциркуляторного русла. В них, в частности, обращает на себя внимание деформация гладких миоцитов средней оболочки, характеризующаяся гомогенизацией цитоплазмы и наличием большого количества сублеммальных пузырьков, что свидетельствует об их гиперфункции.

Таким образом, сдавление и последующая декомпрессия мышц вызывают в скелетной мышечной ткани первичные альтеративные повреждения и повышение сосудистой проницаемости, усугубляющиеся в дальнейшем всеми факторами развивающегося КС (гипоксией, токсемией, электролитными расстройствами и др.). Несмотря на активацию регенераторных процессов, в течение месяца ультраструктура скелетной мышечной ткани в зоне повреждения полностью не восстанавливается.

Скелетная мышца из участка, проксимального по отношению к зоне сдавления. Характеризуется умеренными признаками компенсаторной гипертрофии. Утолщенные миофибриллы расположены параллельно друг другу вдоль длинной оси волокна, занимая практически всю саркоплазму. В них четко выявляются электронноплотные г-линии, а также А-, /-диски и М-линии

На уровне 2-линий определяются Т-трубочки и цистерны агранулярного саркоплазматического ретикулума. Между миофибриллами расположены скопления гликогена. Митохондрии гипертрофированы, содержат большое количество крист. Ядра таких волокон характеризуются деконденсированным хроматином и гранулированным ядрышком.

Воздействие сыворотки крови и экстрактов органов животных с экспериментальным КС вызывает резкое снижение процента жизнеспособных лимфоцитов по сравнению с интактным контролем. Лимфотоксическая активность сыворотки и экстрактов достигает максимума к 7-му дню эксперимента (разница по сравнению с контрольными показателями статистически достоверна). К 30-му дню опыта их токсическая активность значительно снижается, но остается на достаточно высоком уровне (рис. 1).

70 60 50 40 30 20 10 0

И Воздействие сыворотки 3 Воздействие экстракта сердца Ц) Воздействие экстракта почек 28.4

7 суток после декомпрессии (п»30) 30 суток после декомпрессии (п=27)

Через неделю после декомпрессии наиболее токсична сыворотка крови, менее токсичен экстракт почек и еще менее - экстракт сердца. Через месяц после декомпрессии эти различия несколько сглаживаются, т.е. сыворотка крови за один и тот же отрезок времени теряет токсичность в большей степени, чем органы. По всей вероятности, это является результатом развивающихся в органах дистрофических и некротических изменений.

Сыворотка крови и экстракты органов, полученные от экспериментальных животных, которым после декомпрессии вводили в качестве иммунокорректора тималин, обладают меньшей токсичностью, что выражается в повышении в данных условиях процента жизнеспособных лимфоцитов в культуре на обоих сроках эксперимента. Эффект сильнее выражен на 7-ые сутки после декомпрессии и для сыворотки крови и экстракта почек в большей степени, чем для экстракта сердца (рис. 2).

40 • 30

7 суток после декомпрессии (п=18) 30 суток после декомпрессии (п=16)

Исходя из результатов проведенных исследований по изучению токсического действия сыворотки и экстрактов органов животных с экспериментальным КС на жизнеспособность Т-лимфоцитов, можно полагать, что возможной причиной развития иммунодефицитного синдрома, особенно на 7-ые сутки после декомпрессии, является массовая гибель клеток в лимфоидных органах. Данное обстоятельство создает неблагоприятные условия для восстановительных процессов и разрешения патологических изменений в органах и тканях животных, перенесших стресс и травму.

Сыворотка крови, экстракты сердца и почек, животных с КС на 7-ые сутки после декомпрессии проявляют высокую кардиотоксическую активность. Они резко снижают частоту сокращений эксплантатов эмбрионального миокарда и нередко через несколько минут после совместной инкубации вызывают прекращение их сокращений. Наиболее агрессивно в этом отношении проявляют себя сыворотка крови и экстракт почек, в меньшей степени - экстракт сердца. Воздействие тим&пина достоверно уменьшает эффект кардиодепрессии. Через месяц после декомпрессии кардиотоксическая активность применяемых субстратов значительно снижается, однако не исчезает полностью. На 30-ые сутки после декомпрессии сыворотка крови и экстракты органов от животных, получавших иммунокорректор, менее токсичны в отношении сократительной способности эмбриональных кардиомиоцитов (рис. 3).

29.4

21.4 21

Сыворотка Экстракт Экстракт крови сердца почек

В Краш-синдром (п=15)

51,6

Сыворотка Экстракт Экстракт крови сердца почек В Краш-синдром (п= 14)

В Краш-синдром+иммунотерапия (п=16) И Краш-синдром+иммунотерапия (п= 14)

Таким образом, использованная в эксперименте модель создания КС с продолжительностью сдавления 1 час позволила воспроизвести одно из самых опасных звеньев данной патологии - токсемию.

Полученные результаты вполне коррелируют с данными морфологического исследования, выполненного на животных с точно таким же характером воздействия (см. пред. раздел). Действительно, на 7-ые сутки после декомпрессии в исследованных органах были выявлены дистрофические изменения, наиболее выраженные в области контакта клеток со стенкой кровеносных капилляров. Через месяц после краш-воздействия деструктивные изменения в органах полностью не исчезают Выраженная и продолжительная токсемия в условиях данной патологии, по-видимому, является одним из существенных факторов, осложняющих развитие в тканях репаративных процессов.

Положительное действие тималина в отношении токсичности сыворотки и экстрактов органов животных с КС представляется убедительным и вполне объяснимым, так как КС характеризуется иммунодефицитом, а лечебный эффект гормонов тимуса и их фрагментов при ряде иммунодефицитных состояний (особенно при вторичных иммунодефицитах) хорошо известен.

Полученные результаты хорошо согласуются с данными Д.И. Вознюка (1989), согласно которым применение тималина в комплексном лечении экспериментального КС в одних случаях стимулирует иммунореактивность организма и предупреждает развитие инфекционных осложнений, а в других -позволяет выявить группу животных, у которых при соответствующей динамике иммунореактивности достаточно высока степень риска развития инфекционных осложнений.

Иммуиоцитокииы в развитии кряш-сиидромя.

Определение уровня иммуноцитокинов в организме при экспериментальном КС выявило существенные сдвиги в содержании ИЛ-1. ИЛ-2, ИЛ-6 и у-ИФН. В ранний период КС содержание ИЛ-1, ИЛ-6 и у-ИФН в сердце резко понижается. Так, через 24 ч после декомпрессии показатель ИЛ-1 снижается почти в три раза по сравнению с контрольным, а на 7-е сутки эксперимента его содержание продолжает уменьшаться. Аналогичная закономерность выявляется и в отношении тимуса, содержание ИЛ-1 в котором снижается в четыре и восемь раз соответственно. Количество ИЛ-1 в сыворотке в исследованные сроки достоверно не изменялось. Причиной снижения уровня ИЛ-1 в экстрактах органов, возможно, является повреждение клеток-продуцентов данного цитокина, а резкое снижение его уровня не может не отразиться отрицательно на ряде биологических процессов, одним из регуляторов которых является ИЛ-1, а именно, стимуляции Т- и В-лимфоцитов, индукции синтеза цитокинов, стимуляции пролиферации стволовых клеток костного мозга и др. (С.А. Кетлинский с соавт., 1995).

Показатель ИЛ-6 в сердце животных через сутки и 7 суток после декомпрессии ниже, чем в контроле соответственно в 5 и 12 раз. Наиболее низкие показатели ИЛ-6 в тимусе мышей выявлены через 24 ч после декомпрессии (в 12 раз ниже контрольного показателя). В дальнейшем, несмотря на намечающуюся тенденцию в сторону возрастания данного параметра, на 7 сутки после декомпрессии он продолжает оставаться низким (в 2.3 раза меньше контрольного). Содержание данного цитокина в сыворотке крови животных с КС представлялось более высоким, чем в контроле, но различия эти недостоверны. Существенное снижение (особенно в ранней стадии КС) уровня ИЛ-6 должно вызвать сбои в реализации находящихся под его влиянием функций - продукции ИЛ-2, синтеза кортикотропина и др. (С.А. Кетлинский с соавт, 1995).

Противоположная картина наблюдается при определении содержания в сердце и сыворотке крови ИЛ-2. Его уровень на протяжении всего эксперимента неуклонно повышается. Так, в сердце через 24 ч после декомпрессии содержание ИЛ-2 повышается в два раза, а на 7 сутки оно в 3,2 раза выше контрольного. В сыворотке крови количество указанного лимфокина повышается по сравнению с контрольной цифрой в 2 и 4 раза соответственно. Тимус, напротив, характеризуется весьма низкими показателями ИЛ-2.

При иммуноферментном анализе в Сыворотке, сердце и тимусе экспериментальных животных выявлены невысокие цифры у-ИФН. При этом, несмотря на наблюдающуюся для сыворотки крови и тимуса тенденцию к восстановлению со временем исходных показателей, на 7 сутки после декомпрессии уровни у-ИФН продолжают оставаться существенно ниже контрольных показателей. В сердце содержание у-ИФН понижается неуклонно: через сутки после декомпрессии оно ниже исходного в 1,5 раза, а на 7 сутки - в 2,3 раза. Низкий уровень у-ИФН в сердце свидетельствует, по-видимому, об активации местных катаболических процессов, т.к. известно, что именно у-интерферону принадлежит ведущая роль в процессах опосредованной активации гуморальных реакций.

Анализ результатов проведенных исследований дает основания утверждать, что в начале развития КС серьезно страдает медиаторное звено иммуногенеза, что

проявляется разнонаправленным характером содержания ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-б и у-ИФН в сердце.

Низкий уровень ИЛ-1 и ИЛ-6 как в сердце, так и в тимусе свидетельствует о том, что указанные иммуноцнтокины в начале развития КС не вовлекаются в процесс "ремоделирования" миокарда

Следует особо отметить, что на фоне ингибирования синтеза ИЛ-1, ИЛ-6 и у-ИФН в сердце подопытных животных отмечалось неуклонное нарастание уровня ИЛ-2. Подобная тенденция имела место и в отношении сыворотки крови в обеих опытных группах. ИЛ-2 играет центральную роль в развитии эффективного иммунного ответа (Смит К. А., 1990). Он вызывает размножение антигенспецифичных лимфоцитов (Т и В), что усиливает иммунную защиту организма. Весьма низкий уровень ИЛ-2 в тимусе в сочетании с выявленными ранее гистологическими признаками акцидентапьной инволюции через сутки и 7 суток после декомпрессии коркового слоя долек органа (A.B. Азнаурян с соавт., 2001) позволяет не рассматривать тимус в качестве возможного источника ИЛ-2. По всей вероятности, указанный цитокин синтезируется иммунокомпетентными клетками (Т-хелперами) периферических органов иммуногенеза, так как известно, что Т-лимфоциты с фенотипом Т-хелперов являются основными клетками-продуцентами ИЛ-2 (A.C. Симбирцев, 1998). В качестве возможного источника ИЛ-2 следует рассматривать и НК-клетки (естественные киллеры), активность которых не зависит от антигенной специфичности. В пользу данного предположения свидетельствуют результаты определения пролактина.

Увеличение содержания ИЛ-2 при КС в сыворотке и экстракте сердца представляется вполне естественным в свете активации защитных сил организма, так как установлено, что клетками-мишенями для действия ИЛ-2 служат Т- и В-лимфоциты, НК-клетки, моноциты и тканевые макрофагоподобные клетки. В Т-лимфоцитах он стимулирует продукцию самого ИЛ-2, в B-лимфоцитах активирует синтез антител, в моноцитах - продукцию провоспапительных цитокинов, фагоцитоз и бактерицидность (цит. по A.C. Симбирцеву, 1998).

Содержание пролактина в сердце в обеих опытных группах повышалось по сравнению с контрольным уровнем в 2,4 и 2,6 раза соответственно. При этом уровень пролактина резко (в 6 раз) понижался по сравнению с контролем в сыворотке на 7 сутки. Полученные данные свидетельствуют о том, что подавление процесса синтеза ИЛ-1 и ИЛ-6 в тимусе в известной степени может быть объяснено низким уровнем пролактина в крови, поскольку известно, что пролактин, являющийся сигнальной молекулой иммунной системы (И.Г. Акмаев, 1997), стимулирует секреторный процесс в тимусе благодаря направленной активности именно вышеуказанных цитокинов. С другой стороны, высокие концентрации пролактина в сердце могут рассматриваться в качестве фактора, стимулирующего выработку ИЛ-2. Более того, установлено, что пролактин синтезируется кардиомиоцитами и лимфоцитами (миокардиапьный и лимфоцитарный пролактин). Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что уже на первой неделе КС (24 ч и 7 суток после декомпрессии) в эндокринном звене происходит формирование адаптогенных реакций, направленных в сторону "ремоделирования" миокарда, поскольку в указанном процессе пролактину, как "фактору роста" отводится ведущая роль.

Таким образом, на основании результатов проведенного иммуноферментного анализа установлена направленная роль иммуноцитокинов в процессах активации

катаболических реакций в миокарде. Заслуживает внимания также выявленное высокое содержание в исследованных условиях в сердце пролактина, что свидетельствует о его повышенном поступлении в миокард (или о его синтезе кардиомиоцитами) в свете известной роли пролактина в формировании местных и общих адаптивных реакций.

ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6 стимулируют продукцию пролактина, тогда как у-интерферон ее подавляет. Пролактин регулирует репродукцию, осморегуляцию, уменьшает потребление глюкозы тканями и имеет мощные иммуностимулирующие эффекты Он противодействует эффектам кортикостероидов.

Известно, что содержание ИЛ-6 значительно увеличивается в сердце при гипоксии. Данные литературы говорят о наличии взаимодействующих связей между иммунной и сердечно-сосудистой системами, которые направлены на обеспечение нормальной деятельности кардиомиоцитов. Активированные стрессом цитокины увеличивают регионарный кровоток в миокарде, повышают резистентность сердца к аритмиям. Они играют важную роль также в ремоделировании сердца, стимуляции пролиферативного роста фибробластов и эндотелиапьных клеток, неоваскуляризации. Учитывая наличие тесной связи между состоянием сердечной мышцы и цитокинами позволяет полагать, что последние могут играть роль маркеров определенных сердечно-сосудистых расстройств.

Выявленную разнонаправленность в содержании различных цитокинов в сыворотке и экстрактах органов при КС можно, с известной долей вероятности, объяснить с позиций избирательных активации и/или ингмбирования в условиях данного эксперимента взаимосвязанных и взаимообусловленных нейроэндокринных и иммунопатологических процессов.

Коррекция некоторых звеньев патогенеза экспериментального краш-синдрома (активации перекисного окисления липидов, иммунодепрессни, низкого уровня регенераторных процессов).

Коррекция о-токоферолом

Миокард. На ультраструктурном уровне в миокарде экспериментальных животных, которым после декомпрессии в течение 6-и суток вводили внутрибрюшинно раствор а-токоферола, клеточный отек практически не встречается. Лишь иногда в периферических отделах Км обнаруживаются небольшие участки отечной саркоплазмы. Поверхность ядер Км варьирует от складчатой до ровной; перинуклеарные цистерны, как правило, не изменены; их умеренное локальное расширение встречается редко. Митохондрии в околоядерной зоне, между миофибриллами и под сарколеммой плотно прилежат друг к другу. Они в значительной степени сохранны, характеризуются неповрежденными оболочками и плотно упакованными кристами. Между миофибриллами митохондрии в основном располагаются в 1-4 ряда; однако встречаются участки внутриклеточной гиперплазии этих органелл. Иногда обнаруживаются слившиеся (протяженностью до 4-х саркомеров) формы митохондрий с редкими участками деструкции крист. Отдельные профили митохондрий можно трактовать как их деление. Миелиноподобные структуры в саркоплазме единичны. Цистерны

агранулярного саркоплазматического ретикулума несколько расширены. Миофибриллы иногда гипертрофированы; их ультраструктура представляется близкой к нормальной, характеризуется неярко выраженным полиморфизмом В них отчетливо видны все элементы поперечной исчерченности; разрывы миофиламентов, их лизис нехарактерны. Встречаются контрактурно измененные участки миофибрнлл.

Межклеточный отек не выражен. В интерстициальных пространствах обнаруживаются редкие остатки клеточных органелл и свободно лежащие эритроциты. Емкость кровеносных капилляров визуально увеличена Их эндотелий тонкий, просвет - широкий. Капилляры близко прилежат к поверхности Км, формируя сохранные гистогематические барьеры. В прилежащих к барьерной зоне участках саркоплазмы отмечаются умеренные изменения органелл в виде набухания части митохондрий, сверхсокращения миофибрилл.

Лимфатический узел. Электронно-микроскопическое исследование лимфатических узлов в условиях коррекции а-токоферолом показало отсутствие выраженных признаков деструкции как в паренхиматозных, так и в стромальных элементах с сохранением морфологических проявлений межклеточных взаимодействий между лимфоцитами и ретикулярными клетками; в цитоплазме ретикулярных клеток много рибосом.

Встречаются картины митозов клеток лимфоидного ряда. Плазмоциты содержат расширенные цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума с содержимым умеренной электронной плотности. В их цитоплазме встречаются единичные миелиноподобные фигуры, образующиеся, в основном, из мембран митохондрий. Стенки сосудов микроциркуляторного русла представляются сохранными Кровеносные капилляры проявляют реактивные свойства, их эндотелий образует выросты на люминальной поверхности и характеризуется активной цитоплазмой - в ней много рибосом, микропиноцитозных везикул, сохранные митохондрии.

Тимус. В корковом веществе долек тимуса обнаруживается плотное расположение лимфоцитов. В их ядрах хорошо выражены ядрышки; иногда обнаруживаются локальные расширения перннукпеарной цистерны. Цитоплазма Т-лимфоцитов характеризуется значительной электронной плотностью и скудным содержимым; из внутрицитоплазматических структур преобладают свободные рибосомы. Встречаются фигуры митозов лимфоидных клеток. Среди лимфоцитов обнаруживаются активные плазматические клетки с характерным расположением хроматина в нуклеоплазме, хорошо развитыми цистернами гранулярного эндоплазматического ретикулума и лишенным цистерн «двориком» в околоядерной зоне. Выявленный феномен некоторой «плазматизации» тимуса является, по-видимому, отражением повышения проницаемости гематотимусного барьера, так как в норме плазматические клетки в тимусе отсутствуют. В большей части ретикулоэпителиальных клеток не обнаруживаются ультраструкгурные признаки грубой деструкции. В ряде клеток имеют место умеренные локальные расширения перинуклеарной цистерны, иногда встречается пикноз ядер. Наблюдаются картины чередования светлых и темных эндотелиальных клеток в стенке кровеносных капилляров. Ультраструктура гемокапилляров и гематотимусного барьера в целом представляется сохранной.

Скелетная мышечная ткань в области повреждения. На субмикроскопическом уровне строение скелетной мышцы отличается неоднородностью. Наряду с

относительно сохранными мышечными волокнами встречаются деструктивно измененные волокна, в которых миофибриллы фрагментированы, а саркоплазма проявляет признаки локального отека

В интерстиции обнаруживаются разрастания соединительной ткани. Ультраструктура стенки кровеносных капилляров соответствует норме, барьерные отношения сохранны.

Скелетная мышца из участка, проксимального по отношению к зоне сдавления. На ультраструктурном уровне ядра миосимпласта характеризуются нормальным распределением хроматина, перинуклеарная цистерна не расширена, наблюдается саркомерная организация миофибрилл, диски и линии располагаются преимущественно в регистре, содержание гликогена в саркоплазме представляется нормальным. Митохондрий мало, цистерны гладкого саркоплазматического ретикулума умеренно расширены. Встречаются отдельные участки мышечных волокон, со смещением линий и дисков поперечной исчерченности смежных миофибрилл друг относительно друга. Сосуды микроциркуляторного русла в основном не проявляют признаков деструкции; их эндотелий характеризуется значительным количеством рибосом в цитоплазме, ядра без изменений. Интерстиций содержит фибробласты, ультраструктурная организация которых свидетельствует об их высокой синтетической активности .

Полученные результаты позволяют с известной долей осторожности полагать, что антиоксидант а-токоферол обладает определенными протекторными свойствами в отношении развития экспериментального КС, так как введение его животным в первые дни после декомпрессии способствует большей сохранности субмикроскопической организации клеток и неклеточных структур и, прежде всего их мембранных компонентов, что осуществляется путем снижения токсического воздействия, стабилизации клеточных мембран и активизации белоксинтезируюших процессов.

Коррекция иуклеинатом натрия.

Миокард. Ультраструктура миокарда левого желудочка экспериментальных животных, которым после декомпрессии в течение 6-и суток вводили внутрибрюшинно раствор нуклеината натрия и отличается от таковой без коррекции. Км выглядят довольно сохранными. Они не обнаруживают признаков тотального внутриклеточного отека; встречается только локальный. Отек нуклеоплазмы наблюдается очень редко; расширения перинуклеарной цистерны ядер Км единичны и незначительны. Митохондрий много; они плотно прилежат друг к другу, характеризуются нормальной ультраструктурой; их кристы плотно упакованы, оболочки сохранны Располагаются митохондрии большими компактными группами. Встречаются слившиеся (до 2-х митохондрий) формы, обнаруживаются делящиеся органеллы. Миелиновые фигуры не встречаются, липидные капли единичны. Рисунок миофибрилл на поперечных срезах представляется нормальным, эндоплазматический ретикулум не расширен.

В интерстиции практически не встречаются детрит и свободно лежащие клетки крови. Но обнаруживаются активные большие фибробласты в окружении коллагеновых фибрилл. Ультраструктура стенки кровеносных капилляров не обнаруживает дистрофических изменений. Капилляры характеризуются большим диаметром; открытые соединения в их стенке отсутствуют. В гипертрофированном

эндотелии хорошо развиты цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума, обнаруживается большое количество рибосом, встречаются центриоли Люминальная поверхность эндотелиальных клеток образует цитоплазматические выросты; в отдельных участках эндотелий сильно истончен, иногда на значительном протяжении. В цитоплазме эндотелиоцитов встречается умеренное количество микропиноцитозных везикул, единичные миелиноподобные фигуры.

В целом изучение ультраструктуры миокарда левого желудочка после воздействия нуклеината натрия на животное с КС выявило морфологические признаки внутриклеточных регенераторных процессов, как в саркоплазме Км, так и в стенке кровеносных капилляров.

Лимфатический узел. Имеет место некоторая неоднородность картины с определенными индивидуальными особенностями. Так, у некоторых особей в лимфоузлах на ультраструктурном уровне признаки клеточной патологии практически не обнаруживаются. Клеточные элементы - лимфоциты, ретикулярные клетки, плазмоциты и др. выглядят неизмененными. Кровеносные капилляры в таких лимфатических узлах без особенностей, интерстициальный отек отсутствует У других животных паренхиматозные элементы представляются более сохранными, чем стромальные. Так, при отсутствии каких-либо ультраструктурных особенностей в строении лимфоцитов, в ретикулярных клетках наблюдаются расширения перинуклеарной цистерны (локальные или по всей периферии ядра). В цитоплазме ретикулоцитов отмечается также расширение цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, умеренное набухание митохондрий; значительное количество рибосом; иногда встречаются миелиновые фигуры в цитоплазме. У лимфоцитов иногда также имеют место расширения перинуклеарной цистерны. Отека в органе нет - ни тканевого, ни клеточного Явления апоптоза единичны. Плазмоциты отличаются полиморфизмом. Наряду с клетками, в цитоплазме которых преобладают широкие цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума с содержимым умеренной электронной плотности, встречается довольно много плазмоцитов с плотно упакованными узкими профилями гранулярного эндоплазматического ретикулума (вероятно, молодые формы). Иммунокомпетентные клетки образуют контакты друг с другом, например, лимфоциты и эозинофилы.

Кровеносные капилляры без особенностей; в них не выявляются ни деструктивные изменения, ни морфологические признаки, свидетельствующие о значительном повышении проницаемости барьера. В целом электронно-микроскопическое изучение лимфатических узлов при КС в условиях пробной коррекции нуклеинатом натрия, несмотря на наличие полиморфизма, выявило относительно сохранную гистоструктуру органа.

Тимус. Ультраструктура органа отличается неоднородностью. Встречаются плазматические клетки Отдельные лимфоциты характеризуются пикнозом ядер и некробиотическими изменениями цитоплазмы, но преобладает сохранная паренхима органа. Встречаются митозы клеток лимфоидного ряда; в цитоплазме Т-лимфоцитов много рибосом. Ретикулоэпителиальные клетки вакуолизированы; иногда в их цитоплазме встречаются миелиноподобные фигуры.

Ультраструктура стенки кровеносных капилляров близка к нормальной.

Можно предположить, что деструктивные изменения ретикулоэпителиальных клеток обусловлены их напряжением и более интенсивным изнашиванием в условиях иммуномодулируюшего воздействия нуклеината натрия.

Скелетная мышца в области сдавления. Электронно-микроскопическое исследование выявило определенный полиморфизм. Часть мышечных волокон отличается относительной сохранностью ядер, мембранных и немембранных компонентов саркоплазмы. Миофибриллы таких волокон нередко гипертрофированы, характеризуются саркомерной организацией, саркоплазма не отечна и не вакуолизирована. Цитогранулы обнаруживаются в умеренном количестве. Митохондрий немного, они не проявляют признаков серьезной ультраструктурной патологии, Т-трубочки не расширены. В отдельных мышечных волокнах выявляются изменения миофибрилл, проявляющиеся в виде разрушения и лизиса преимущественно 1-дисков и 2-пол ос миофибрилл. Эндотелий кровеносных капилляров содержит большое количество рибосом. В интерстиции обнаруживаются фибробласты с хорошо развитым белоксинтезируюшим аппаратом.

Скелетная мышца из участка, проксимального по отношению к зоне сдавления. Ультраструктура скелетной мышечной ткани из отдаленной зоны представляется соответствующей известной норме. Миофибриллы мышечных волокон характеризуются саркомерной организацией, диски и линии смежных миофибрилл находятся в регистре; митохондрии не изменены, цистерны зндоплазмазматического ретикулума и Т-трубочки не расширены. Интерстиций без особенностей.

Положительное воздействие нуклеинатом натрия на ультраструктуру изученных органов в условиях промежуточной стадии КС в условиях данного эксперимента можно объяснить, его, по меньшей мере, двойным действием: а) активизирующим влиянием на репаративные процессы; б) иммуномодулируюшим эффектом.

Таким образом, попытки провести в эксперименте фармакологическую коррекцию некоторых патогенетических звеньев ранней и начала промежуточной стадий КС с помощью веществ, обладающих антиоксидантными и иммуномодулируюшими и стимулирующими репаративные процессы свойствами дали результаты, которые можно рассматривать как обнадеживающие.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование патогенетических механизмов и морфологических проявлений краш-синдрома остается актуальным. Постоянно существует вероятность возникновения ситуаций, которые могут привести к данной патологии; само поражение носит, как правило, массовый характер, а развивающийся при этом краш-синдром представляет собой один из самых тяжелых видов приобретенных заболеваний.

Использованная в эксперименте модель позволила вызвать нетяжелую (можно, по-видимому, назвать ее легкой) форму КС, которая дала возможность достичь:

а) выживания животных до конца эксперимента, т.е. 1-го месяца после декомпрессии.

б) получения состоятельной модели КС, что подтверждено:

морфологическими изменениями скелетной мышцы, почек, печени, миокарда, органов иммунной защиты;

токсичностью сыворотки и экстрактов из органов в отношении подвижности лимфоцитов и сократительной способности эмбриональных кардиомиоцитов;

существенными изменениями содержания цитокинов в сыворотке и органах экспериментальных животных.

Из звеньев, составляющих патогенез КС, одним из наиболее существенных является токсемия; при этом в кровь поступает большое число разнообразных агентов, обладающих токсическими свойствами. С помощью тестов на жизнеспособность лимфоцитов и на сократительную активность эмбриональных кардиомиоцитов в культуре ткани нами установлено, что при экспериментальном КС в условиях использованной экспериментальной модели через неделю и месяц после декомпрессии сыворотка крови, а также экстракты сердца и почек экспериментальных животных проявляют выраженную токсичность При этом сыворотка оказалась токсичнее тканевых экстрактов, а экстракт почек токсичнее экстракта сердца; степень токсичности исследованных образцов к концу первого месяца после декомпрессии снижалась, не достигая исходного показателя

Принимая во внимание данные, полученные нами ранее на той же экспериментальной модели при исследовании образцов в ранний период КС, можно сказать, что ультраструктурные проявления патологии клетки на примере различных органов (скелетная мышца, миокард, лимфатические узлы, тимус) имеют место на всех стадиях развивающегося КС - от первых минут до месяца после декомпрессии. Они затрагивают как мембранные (плазмолемма, митохондрии, ядерная оболочка и др.), так и немембранные (хроматин, миофибриллы) компоненты клеток и неклеточных структур, развиваясь как в паренхиматозных, так и в стромальных компонентах органов.

Эти изменения отличаются некоторыми общими признаками. Они рано наступают, после чего персистируют и не исчезают, по меньшей мере, в течение месяца после декомпрессии. Значительные изменения претерпевают при этом митохондриальный аппарат, ядра, а в структурно-функциональных единицах мышечной ткани - миофибриллы. Изменения носят характер альтеративных и проявляются признаками деструкции, иногда с переходом в некроз; наиболее выражены они в области барьера "кровь-ткань". Ультраструктурная характеристика стенки кровеносных капилляров при этом свидетельствует о повышенной

проницаемости гематотканевого барьера. Обращает на себя внимание слабая выраженность и медленная динамика внутриклеточных регенераторных процессов.

Несмотря на многообразие возможных причинных моментов для развития патологических процессов в клетках различных органов (гипоксия, ацидоз, микроциркуляторные расстройства, активизация перекисного окисления липидов и др.), отчетливая корреляция между продолжительностью и степенью выраженности токсемии в настоящем эксперименте, с одной стороны, и ультраструктурными проявлениями клеточной патологии - с другой, позволяет предполагать, что развитие последних в значительной степени обусловлено цитопатогенным воздействием токсического фактора.

Система органов иммунной защиты вовлекается в развитие КС. Наряду с проявлениями ультраструктурной патологии в них обнаруживаются признаки активации, направленные на развитие реакций клеточного и гуморального иммунитета.

Впервые выполненное исследование уровня ряда цитокинов (интерлейкины -I,-2,-6, у-интерферон) в сыворотке крови и экстрактах из органов животных с экспериментальным КС выявило существенные, носящие разнонаправленный характер сдвиги данных показателей, свидетельствующие о раннем (сразу после декомпрессии) вовлечении в развитие патологии медиаторного звена иммуногенеза и других реактивных процессов.

Результаты проведенного исследования продемонстрировали возможность влиять в условиях настоящего эксперимента на отдельные проявления патологического процесса при КС с помощью веществ-корректоров. Так, токсичность сыворотки и тканевых экстрактов в отношении жизнеспособности лимфоцитов и сократительной способности эмбриональных кардиомиоцитов уменьшалась в условиях введения экспериментальным животным гормона тимуса - тималина. Инъекции в раннем периоде Кс антиоксиданта а-токоферола способствовали определенной сохранности внутриклеточных структур, а введение в этот же период раствора нуклеината натрия - развитию в органах регенераторных процессов. Полученные данные, не претендуя на законченность, дают основания полагать, что дальнейшие исследования в этом направлении могут оказаться полезными.

Таким образом, краш-синдром в экспериментальном воспроизведении, развиваясь даже в легкой форме, характеризуется значительной токсичностью сыворотки крови и тканевых экстрактов (из сердца, почек), выраженными проявлениями ультраструктурной патологии в различных органах с их персистированием, по крайней мере, до первого месяца после декомпрессии, морфологическими признаками повышения проницаемости гематотканевых барьеров, вовлечением в патогенез иммунного звена и цитокинов, слабым развитием регенераторных процессов. Введение экспериментальным животным в раннем периоде веществ, обладающих иммуномодулируюшими, антиок-сидантными и стимулирующими регенераторные процессы свойствами дает возможность в определенной степени снизить тяжесть развития патологического процесса.

Выводы.

1 Использованная модель сдавления конечности экспериментальных животных (крыс) воспроизводима и приводит к развитию краш-синдрома легкой степени, характеризующегося проявлениями основных патогенетических звеньев данного заболевания (токсемия, полиорганная недостаточность, нарушения иммунного статуса).

2. Ультраструктура миокарда левого желудочка экспериментальных животных на 7-е сутки после декомпрессии (т.е. в промежуточный период краш-синдрома) характеризуется изменениями кардиомиоцигов и сосудистого эндотелия, носящими деструктивный характер, и морфологическими признаками повышения проницаемости стенки гемокапилляров С этим обстоятельством коррелирую^ выраженная токсичность тканевого экстракта из сердечной мышцы животных и значительное снижение в миокарде уровня некоторых иммуноцитоцитокинов -интерлейкина-1, интерлейкина-б и у-интерферона.

3. Ультраструктура брыжеечных лимфатических узлов экспериментальных животных на 7-е сутки после декомпрессии наряду с проявлениями дистрофических процессов отличается признаками, которые можно рассматривать как проявление функционального напряжения в органе в виде усиления плазматизации лимфоцитов, что согласуется с обнаруженным высоким содержанием уровня интерлейкина-2 в сыворотке на данном сроке эксперимента

4 Ультраструктура лимфоцитов тимуса и ретикулоэпителиальных клеток на 7-ые сутки после декомпрессии не характеризуется грубой патологией, и наиболее заметным изменением является наличие в паренхиме органа плазмоцитов как следствие нарушения проницаемости гематотимусного барьера.

5. Ультраструктура скелетной мышцы в зоне сдавления отличается выраженными дистрофическими, иногда переходящими в некротические изменениями миосимпласта, глубокими и разнообразными повреждениями миофибриллярного аппарата, фрагментацией мышечных волокон, проявлениями деструкции во всех компонентах стенки сосудов микроциркуляторного русла, морфологическими признаками повышения проницаемости капиллярной стенки.

6. Ультраструктурные признаки повреждения клеточных и тканевых структур сильнее выражены в области контактов со стенкой кровеносных капилляров, что подтверждает значение фактора токсемии в развитии клеточной патологии при экспериментальном краш-синдроме.

7. Субмикроскопическая организация исследованных органов на 7-ые сутки после декомпрессии свидетельствует о слабой выраженности в этих условиях внутриклеточных регенераторных процессов.

8. Ультраструктурные изменения, обусловливающие морфологический субстрат полиорганной недостаточности (на примере миокарда, лимфатических узлов и тимуса), персистируют в промежуточном периоде и не исчезают полностью в позднем, сохраняясь, по меньшей мере, до 30-х суток после декомпрессии на фоне морфологических проявлений внутриклеточных репаративных процессов.

9. Существует корреляция между показателями токсичности сыворотки и экстрактов органов, определенными с помощью двух тестов (жизнеспособность лимфоцитов и сократительная способность эмбриональных кардиомиоцитов) б культуре ткани, и тяжестью ультраструктурных изменений в органах;

иммунокоррекция краш-синдрома тималином приводит к снижению токсичности сыворотки крови и экстрактов органов.

10. Развитие краш-синдрома характеризуется значительными сдвигами уровней важнейших цитокинов - интерлейкинов I-, 2-, 6- и у-интерферона в сыворотке и тканевых экстрактах.

11. Расстройства системы иммунорегуляции играют важную роль в развитии краш-синдрома, проявлениями чего являются нарушения секреции лимфокинов и возможность корректирования с помощью одного из гормонов тимуса уровня токсемии - одного из ведущих звеньев патогенеза краш-синдрома.

12. Ультраструктура миокарда левого желудочка, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы экспериментальных животных на 7-ые сутки после декомпрессии в условиях пробной коррекции с помощью а-токоферола и нуклеината натрия характеризуется менее выраженными изменениями, чем у животных без воздействия препаратами, что дает основания полагать, что данные соединения могут оказаться полезными при краш-синдроме в свете проявления ими протекторных (а-токоферол) и иммуномодулирующих и стимулирующих репаративную регенерацию (нуклеинат натрия) свойств.

Список работ опубликованных по теме диссертации.

1. A.V. Aznaurian, V. A. Shakhlamov, Т.А. Belousova, M.Y. Artishcheva, N К. Petrosian. Early stage of experimental Crush- syndrome in the light of ultrastructural pathology// World of microstructure. Proc. V. An Meet, -1996-p.22.

2. Артищева М.Ю., Азнаурян A.B., Белоусова Т.А., Азнаурян A.C., Саркисян Дж.Р. Морфологические проявления краш-синдрома на примере скелетной мышцы и миокарда в эксперименте // Ж. "Морфология". - 1996., N2 - С 28.

3. Артищева М.Ю., Азнаурян А В., Белоусова Т.А. Морфологические особенности органных повреждений в условиях развивающегося краш-синдрома в эксперименте // Сб. "Морфология и морфогенез клеток, тканей, органов" Ереван, 1997.

4. Азнаурян A.B., Артищева М.Ю Патогенетические аспекты ранней стадии краш-синдрома в свете гистологического и ультраструктурного анализа // Материалы 70-ой научной конференции ЕрГМУ. - Ереван,1997.

5. Артищева М.Ю., Азнаурян A.B., Белоусова Т.А. Ультраструктура скелетной мышцы при синдроме длительного раздавливания (СДР) в эксперименте // Медицинские аспекты последствий землетрясения в Армении. Ереван, 1998. - С 280-281

6. Артищева М.Ю. Ультраструктурные проявления реактивных изменений лимфатических узлов при развевающемся краш-синдроме в эксперименте // Медицинские аспекты последствий землетрясения в Армении. Ереван, 1998. - С. 281-282

7. Артищева М.Ю. Динамика ультраструктурных изменений при синдроме длительного раздавливания (СДР) в эксперименте // Ж. «Морфология». - 1998. -Т.113 , N3, С. 18.

8. Азнаурян A.B., Артищева М.Ю., Белоусова Т.А., Петросян Н.Р. Ранняя стадия экспериментального краш-синдрома в свете ультраструктурной патологии // Кутаиси Самедицино журнали. - 1998. - N1. - С.12-13

9 Азнаурян A.B., Артищева М.Ю., Белоусова Т.А., Мелтонян Г.Л. Гистологическая характеристика изменений миокарда при краш-синдроме в эксперименте // Сборник научных материалов I международного конгресса. Ереван, 1998. - С46.

10 Артищева М.Ю. Характеристика сердечной мышцы при экспериментальном краш-синдроме в свете ультраструктурных проявлений патологии клетки // Экспериментальная и клиническая медицина. - Тбилиси, 1999. - N2. - С. 29-30

11. Азнаурян A.B., Артищева М.Ю.Ультраструктурные изменения кровеносных капилляров при краш-синдроме и их медикаментозная коррекция в эксперименте // Тезисы V международного конгресса "Иммунореабилитация и реабилитация в медицине", Тенерифе, Испания,1999. - С.

12. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B., Мкртчян Г.Л., Мкртчян В.А. Кардиотоксическая активность экстракта тканей сыворотки крови при экспериментальном синдроме длительного раздавливания (СДР) // Вестник хирургии Армении. - 1999.-N1 -2.-С. 134-137

13. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B., Мкртчян Г.Л., Мкртчян В.А. О токсическом действии сыворотки крови и экстракта органов подопытных животных на жизнеспособность Т-лимфоцитов при синдроме длительного раздавливания // Вопросы теоретической и клинической медицины. - Ереван, 1999. - Т.2, N 3. - С. 10- .

14. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B. Морфология и патогенез краш-синдрома // «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии». Мат. II конференции Ассоциации морфологов Армении. - Ереван, 2000. - С. 38-39.

15. Артищева М.Ю. Ультраструктурные проявления повреждения скелетной мышцы в промежуточный и поздний периоды экспериментального синдрома длительного раздавливания // «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии». Мат. II конференции Ассоциации морфологов Армении. - Ереван, 2000. - С. 5.

16. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B. Токсический фактор и ультраструктурная патология в динамике экспериментального краш-синдрома // Материалы VI Всероссийской конференции по патологии клетки. Москва, 2000. - С. 84.

17. Артищева М.Ю Патология клеточных структур в развитии экспериментального краш-синдрома // Материалы VI Всероссийской конференции по патологии клетки. Москва, 2000. - С. 88.

18. Артищева М.Ю, Мкртчян Г.Л. Роль токсического фактора в нарушении сократительной функции кардиомиоцитов при экспериментальном краш-синдроме // «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии». Мат II конференции Ассоциации морфологов Армении. Ереван, 2000. - С. 2.

19. Артищева М.Ю, Азнаурян AB Мкртчян Г.Л. Иммунокоррекция некоторых показателей клеточного иммунитета и сократительной способности эмбриомиокарда при экспериментальном синдроме длительного раздавливания // Российские морфологические ведомости. - 2001. - N1-2. - С. 22 -24 .

20. Артищева М.Ю. Основные тенденции органных изменений при Краш-синдроме в свете ультраструктурного анализа. Российские морфологические ведомости. - 2001. - N1 -2. - С. 179-181.

21. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B. Мкртчян Г. Л. Иммунная система при экспериментальном краш-синдроме и ее иммунокоррекция в свете

иммуноморфологического и ультраструктурного анализа // Материалы V научной сессии " Биологически активные вещества в медицине". Ереван, 200 t. - С.

22. Артищева М.Ю. Морфологические проявления некоторых звеньев патогенеза синдрома длительного сдавления с позиции возможности их фармакологической коррекции в эксперименте // «Актуальные вопросы теоретической и клинической медицины». Сборник научных трудов ассоциации терапевтов Армении. Ереван, 2002. - NIV. - С. 51-54

23. Артищева М.Ю., Азнаурян A.B., Мкртчян Г. Л. Иммунокоррекция некоторых показателей клеточного иммунитета и сократительной способности эмбриомиокарда при синдроме длительного раздавливания // International Juurnal on immunoreabilitation. - 2002. - V.4, № 1. - P. 139. Материалы XIII международного конгресса по иммунореабилитации "Аллергия, иммунология и глобальная сеть.

24. Артищева М.Ю, Торгомян АЛ., Мкртчян ГЛ. Реакция агрегации макрофагов при экспериментальном синдроме длительного раздавливания. // Вестник хирургии Армении. - 2002. - N1. - С. 81-84 .

25. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B. Мкртчян Г. Л. Структурные и ультраструктурные изменения капилляров лимфатических узлов при синдроме длительного раздавливания // Ж. «Морфология». - 2002. - Т. 121, N2-3. - С.

26. Артищева М.Ю., Зильфян A.B., Азнаурян A.B., Иммуноферментный анализ сердца на ранней и промежуточной стадиях экспериментального краш-синдрома. // Вестник хирургии Армении. - 2002. - N3. - С. 93-96

27. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B., Саркисян Дж. А.. Татоян М. Р., Артенян Н.С. Морфофункциональная характеристика очага повреждения скелетной мышцы при экспериментальном синдроме длительного воздействия и его фармакологическая коррекция // Вестник хирургии Армении. - 2003. - N3 - С. 5 -.

28. Артищева М.Ю, Азнаурян A.B. Саркисян Дж. А., Татоян М.Р., Артенян Н.С. Сравнительная морфофункциональная характеристика кровеносных капилляров сердечной и скелетной мышечной ткани при синдроме длительного раздавливания в эксперименте // Вестник хирургии Армении - 2003. - N3. - С. 5.

29. Артищева М.Ю, Мкртчян Г.Л Мелтонян ГЛ. Гистологическая и ультраструктурная характеристика периферических органов иммуногенеза при Синдроме длительного раздавливания в эксперименте. // Ж. «Морфология». -2004.N4 С.6

ММЛ им. H. М. Сеченов« Подписано в печать 2005 I

Тираж 100 экземпляров

РНБ Русский фонд

2005-4 45890

f 'i.

If - ь

- л

4 Í

4* ч t id

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Артищева, Маргарита Юриковна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Историческая справка.

1.2. Классификации и терминология.

1.3. Моделирование краш-синдрома в эксперименте.

1.4. Патогенез и морфологические проявления краш-синдрома.

1.5. Органы иммунной защиты в развитии краш-синдрома.

1.6. Цитокины в свете их возможного участия в развитии краш-синдрома.

1.7. Возможности коррекции краш-синдрома в клинике и в эксперименте и их теоретическое обоснование.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ДАННЫХ И ОБСУЖДЕНИЕ 3.1. Особенности субмикроскопической организации миокарда, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы в течение месяца после декомпрессии.

3.1.1. Промежуточный период краш-синдрома (7 сутки после декомпрессии).

3.1.2. Поздний период краш-синдрома (30 сутки после декомпрессии).

3.2. Динамика токсичности сыворотки крови и экстрактов некоторых органов (сердца и почек) в течение месяца после декомпрессии и возможность коррекции данного показателя.

3.3. Иммуноцитокины в развитии краш-синдрома.

3.4. Коррекция некоторых звеньев патогенеза экспериментального краш-синдрома (активации перекисного окисления липидов, иммунодепрессии, низкого уровня регенераторных процессов).

3.4.1. Коррекция а-токоферолом.

3.4.2. Коррекция нуклеинатом натрия.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурно-функциональная характеристика миокарда и органов иммунной системы при развивающемся краш-синдроме в эксперименте"

Синдром длительного раздавливания (СДР), синдром длительного сдавления (СДС), краш-синдром (КС) - это далеко не полный перечень терминов, применяемых для названия тяжелой патологии, возникающей при различных катаклизмах и несчастных случаях — землетрясениях, войнах, обвалах шахт и рудников, земляных, взрывных, лесоповалочных работах, террористических актах. Вероятность стихийных бедствий и катастроф по-прежнему сохраняется на высоком уровне, и поэтому проблема изучения КС не только не потеряла своей актуальности, но в последние годы выдвигается в число приоритетных в связи с высокой сейсмической активностью на Земле и повышением роли антропогенных факторов. Разрушительное Спитакское землетрясение 1988 года, повлекшее за собой многочисленные человеческие жертвы, сделало эту проблему особенно актуальной для Республики Армения, в связи с чем изучение механизмов и ультраструктурных основ поражения внутренних органов при КС является сегодня одной из наиболее важных задач теоретической и практической медицины Армении.

В повседневной жизни КС может развиться при длительном сне в одном положении (например, на боку при условии, что одна рука сдавлена весом тела). Обычно это происходит при алкогольном опьянении, при приеме значительных количеств седативных средств. КС может возникнуть в результате сжатия мягких тканей отечной жидкостью, гематомой (Smith P.N. et al., 1997), а также как следствие длительного наложения манжетки аппарата для измерения давления (YamadaM. et al., 1997).

КС представляет собой наиболее сложную категорию травм, вызванных механическим фактором. Смертность при данном виде поражения является одной из самых высоких в хирургии (М.П. Павловский с соавт., 1990); по данным Мусселиуса С.Г. с соавт. (1998), этот показатель составляет 9, 1%. КС с трудом поддается лечению и в настоящее время, несмотря на значительные успехи, достигнутые в его изучении (Э.А. Нечаев с соавт., 1993).

Ограничено число исследований, касающихся роли иммунного звена в патогенезе КС; при этом бурное развитие иммунологии ставит задачу определить роль иммуноцитокинов в развитии данного патологического процесса (В.А. Шекоян с соавт., 1996; M.J. Boyle et al., 1992; P.Y. Gueugniaud et al., 1996). В научной литературе практически отсутствуют сведения о введении в условиях эксперимента животным с КС препаратов-корректоров.

В связи с тяжелой клиникой данного заболевания, нередко имеющего летальный исход, представляются необходимыми исследования по уточнению морфологических проявлений КС в различных органах и тканях и по совершенствованию способов его коррекции.

Ранее морфологическими (в том числе электронно-микроскопическим) методами нами было показано, что проявления деструктивных процессов в органах (были изучены миокард, печень, почки, лимфатические узлы, селезенка, скелетная мышца из зоны сдавления и отдаленных, проксимальных по отношению к очагу повреждения участков) появляются рано (сразу после декомпрессии) и затрагивают элементы как паренхимы, так и стромы органов, включая сосуды микроциркуляторного русла (М.Ю. Артищева, 1995; Н.Р. Петросян, 1997).

Несмотря на то, что опыт лечения пострадавших с КС на сегодняшний день насчитывает более полувека, единая концепция тактики ведения таких пациентов отсутствует. Землетрясения в Армении и Таджикистане еще раз показали, сколь актуальна далеко еще не решенная проблема эффективного лечения этой тяжелой травмы (А.Л. Кричевский, 1991). В связи с вышесказанным поиск новых способов коррекции КС, в том числе фармакологических, и в настоящее время представляется необходимым как с теоретической, так и с практической точки зрения.

Цель исследования: установить морфофункциональные проявления экспериментально вызванного краш-синдрома в миокарде, органах иммунной защиты и в скелетной мышце в динамике до конца первого месяца после декомпрессии и изучить влияние на развитие краш-синдрома некоторых препаратов-корректоров.

Для выполнения поставленной цели были сформулированы следующие задачи исследования: изучить микроскопические и ультраструктурные изменения в миокарде левого желудочка, лимфатических узлах, тимусе и скелетной мышце через 6 и 30 суток после декомпрессии; изучить токсичность сыворотки крови и экстрактов некоторых органов животных с экспериментальным краш-синдромом через 6 и 30 суток после декомпрессии и определить возможность влияния на эти показатели иммунокорректоров; изучить содержание ряда цитокинов в сыворотке крови и экстрактах некоторых органов экспериментальных животных при краш-синдроме, обсудить их роль в развитии повреждений органов и тканей и оценить их возможный вклад в развитие полиорганной недостаточности; изучить субмикроскопическую организацию миокарда, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы в промежуточном периоде КС в условиях пробной фармакологической коррекции протектором перекисного окисления липидов - а-токоферолом и иммунокорректором и стимулятором регенераторных процессов - нуклеинатом натрия.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Артищева, Маргарита Юриковна

выводы

1. Использованная модель сдавлення конечности экспериментальных животных (крыс) воспроизводима и приводит к развитию краш-синдрома легкой степени, характеризующегося проявлениями основных патогенетических звеньев данного заболевания (токсемия, полиорганная недостаточность, нарушения иммунного статуса).

2. Ультраструктура миокарда левого желудочка экспериментальных животных на 7 сутки после декомпрессии (т.е. в промежуточный период краш-синдрома) характеризуется изменениями кардиомиоцитов и сосудистого эндотелия, носящими деструктивный характер, и морфологическими признаками повышения проницаемости стенки гемокапилляров. С этим обстоятельством коррелируют выраженная токсичность тканевого экстракта из сердечной мышцы животных и значительное снижение в миокарде уровня некоторых иммуноцитокинов - интерлейкина-1, интерлейкина-6 и у-интерферона.

3. Ультраструктура брыжеечных лимфатических узлов экспериментальных животных на 7 сутки после декомпрессии наряду с проявлениями дистрофических процессов отличается признаками, которые можно рассматривать как проявление функционального напряжения в органе в виде усиления плазматизации лимфоцитов, что согласуется с обнаруженным высоким содержанием уровня интерлейкина-2 в сыворотке на данном сроке эксперимента.

4. Ультраструктура лимфоцитов тимуса и ретикулоэпителиальных клеток на 7 сутки после декомпрессии не характеризуется грубой патологией, и наиболее заметным изменением является наличие в паренхиме органа плазмоцитов как следствие нарушения проницаемости гематотимусного барьера.

7. Субмикроскопическая организация исследованных органов на 7 сутки после декомпрессии свидетельствует о слабой выраженности в этих условиях внутриклеточных регенераторных процессов.

9. Существует корреляция между показателями токсичности сыворотки и экстрактов органов, определенными с помощью двух тестов (жизнеспоспособность лимфоцитов и сократительная способность эмбриональных кардиомиоцитов) в культуре ткани, и тяжестью ультраструктурных изменений в органах; иммунокоррекция краш-синдрома тималином приводит к снижению токсичности сыворотки крови и экстрактов органов.

10. Развитие краш-синдрома характеризуется значительными сдвигами уровней важнейших цитокинов: интерлейкинов -1,-2,-6- и у-интерферона в сыворотке и тканевых экстрактах.

12. Ультраструктура миокарда левого желудочка, лимфатических узлов, тимуса и скелетной мышцы экспериментальных животных на 7 сутки после декомпрессии в условиях пробной коррекции с помощью а-токоферола и нуклеината натрия характеризуется менее выраженными изменениями, чем у животных без воздействия препаратами, что дает основания полагать, что данные соединения могут оказаться полезными при краш-синдроме в свете проявления ими протекторных (а-токоферол) и иммуномодулирующих и стимулирующих репаративную регенерацию свойств (нуклеинат натрия).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использованная в эксперименте модель позволила вызвать нетяжелую (можно, по-видимому, назвать ее легкой) форму КС, которая дала возможность достичь: а) выживания животных до конца эксперимента, т.е. 1-го месяца после декомпрессии. б) получения состоятельной модели КС, что подтверждено: морфологическими изменениями скелетной мышцы, почек, печени, миокарда, органов иммунной защиты; токсичностью сыворотки и экстрактов из органов в отношении подвижности лимфоцитов и сократительной способности эмбриональных кардиомиоцитов; существенными изменениями содержания цитокинов в сыворотке и органах экспериментальных животных.

Из звеньев, составляющих патогенез КС, одним из наиболее существенных является токсемия; при этом в кровь поступает большое число разнообразных агентов, обладающих токсическими свойствами. С помощью тестов на жизнеспособность лимфоцитов и на сократительную активность эмбриональных кардиомиоцитов в культуре ткани нами установлено, что при экспериментальном КС в условиях использованной экспериментальной модели через неделю и месяц после декомпрессии сыворотка крови, а также экстракты сердца и почек экспериментальных животных проявляют выраженную токсичность. При этом сыворотка оказалась токсичнее тканевых экстрактов, а экстракт почек токсичнее экстракта сердца; степень токсичности исследованных образцов к концу первого месяца после декомпрессии снижалась, не достигая исходного показателя.

Принимая во внимание данные, полученные нами ранее на той же экспериментальной модели при исследовании образцов в ранний период КС, можно сказать, что ультраструктурные проявления патологии клетки на примере различных органов (скелетная мышца, миокард, лимфатические узлы, тимус) имеют место на всех стадиях развивающегося КС - от первых минут до месяца после декомпрессии. Они затрагивают как мембранные (плазмолемма, митохондрии, ядерная оболочка и др.), так и немембраниые (хроматин, миофибриллы) компоненты клеток и неклеточных структур, развиваясь как в паренхиматозных, так и в стромальных компонентах органов.

Система органов иммунной защиты вовлекается в развитие краш-синдрома. Наряду с проявлениями ультраструктурной патологии в них обнаруживаются признаки активации, направленные на развитие реакций клеточного и гуморального иммунитета.

Впервые выполненное исследование уровня ряда цитокинов (интерлейкины -1,-2,-6, у-интерферон) в сыворотке крови и экстрактах из органов животных с экспериментальным Кс выявило существенные, носящие разнонаправленный характер сдвиги данных показателей, свидетельствующие о раннем (сразу после декомпрессии) вовлечении в развитие патологии медиаторного звена иммуногенеза и других реактивных процессов.

Результаты проведенного исследования продемонстрировали возможность влиять в условиях настоящего эксперимента на отдельные проявления патологического процесса при Кс с помощью веществ-корректоров. Так, токсичность сыворотки и тканевых экстрактов в отношении жизнеспособности лимфоцитов и сократительной способности эмбриональных кардиомиоцитов уменьшалась в условиях введения экспериментальным животным гормона тимуса - тималина. Инъекции в раннем периоде Кс антиоксиданта а-токоферола способствовали определенной сохранности внутриклеточных структур, а введение в этот же период раствора нуклеината натрия - развитию в органах регенераторных процессов. Полученные данные, не претендуя на законченность, дают основания полагать, что дальнейшие исследования в этом направлении могут оказаться полезными.

Таким образом, краш-синдром в экспериментальном воспроизведении, развиваясь даже в легкой форме, характеризуется значительной токсичностью сыворотки крови и тканевых экстрактов (из сердца, почек), выраженными проявлениями ультраструктурной патологии в различных органах с их персистированием, по крайней мере, до первого месяца после декомпрессии, морфологическими признаками повышения проницаемости гематотканевых барьеров, вовлечением в патогенез иммунного звена и цитокинов, слабым развитием регенераторных процессов. Введение экспериментальным животным в раннем периоде веществ, обладающих иммуномодулирующими, антиок-сидантными и стимулирующими свойствами дает возможность, в определенной степени снизить тяжесть развития патологического процесса.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Артищева, Маргарита Юриковна, Москва

1. Абгарян Г.А., Зильфян A.B., Оганесян О.В. Установка для воспроизведения и изучения в эксперименте патогенеза и терапии синдрома длительного раздавливания.// Рац. предложение, выданное ЕрГМУ, № 158, 1990.

2. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки.//М.: Медицина, 1979.-316 с.

3. Адильбеков К. А. Материалы к изучению патогенеза длительного раздавливания мягких тканей конечностей.// Автореф.дисс.канд.мед.наук-Алма-Ата, 1969.-19 с.

4. Адильбеков К.А. Морфологические изменения в мышце сердца и почках при синдроме длительного раздавливания.// Тез. докл. 42-й итоговой научн. конф. (Алма-Ат. Мед. ин-т)-Алма-Ата, 1970.-С. 208-210.

5. Адильбеков К.А. Комплексная детоксикация и иммунокоррекция при тяжелой механической травме с раздавливанием мягких тканей// Автореф.дисс.докт.мед. наук. М., 1989.-34 с.

6. Азнаурян A.B., Саакян К.Т. Морфофункциональная характеристика легких при синдроме длительного раздавливания// Рос.морф.вед.-2001.-№1-2.-С. 175-178.

7. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринология: факты и гипотезы.// Иммунология.-1997.-С. 3-8.

8. Алексеев П.П. О нерешенных вопросах ранних постишемических расстройств микроциркуляции// Тр. Смол. мед. института 1979.-Т. 60.-С. 3-8.

9. Арион В.Я. Иммунобиология гормонов тимуса (под ред. Ю.А. Гриневича и др.)-Киев, 1989.-С. 103-25.

10. Байниязов А.И., Чуваков К.Ч. Способ измерения силы давления в эксперименте.// В Матер. Республ. научно-практ. конф. хирургов совместно с Каз. Филиалом ин-та питания АМН СССР. Алма-Ата, 1977.-С. 196-197.

11. Бардахчьян Э.А., Кардашьян Г.Х., Бочков Н.И. Ультраструктурные изменения в нефроне, вызванные длительным раздавливанием тканей// Ж. эксп. и клин. мед. 1979.-Т. 19, № З.-С. 48-55.

12. Харламова Н.Г., Ломов К.М . Ультраструктурные основы полиорганной недостаточности в патогенезе эндотоксинового тока. Журнал патофизиологии и экспериментальной терапии. 31999.

13. Барышников Н.Г.// Мат. Научн. Конф. Лен. НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе. Л., 1970.-С. 171-173.

14. Барышников Н.Г., Малинкин Э.Д. Об экспериментальной модели синдрома длительного раздавливания// В кн. "Гигиена труда, профессионального травматизма, профессиональных заболеваний, лечение травм и ортопедических болезней".-Горький, 1974.-С. 134-135.

15. Биленко М.В., Артюхин В.Г. Башарина О.В. Рязанцева Л.Т. Определение супероксиддисмутазной активности аскорбиновой кислоты методом хемилюминисценции. Матер. Третьей международной конференции. Ставрополь Сев Кав ГТУ, 2001.

16. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов М. Мидицины 1989.

17. Биленко М.В., Владимиров Ю.А., Перекисное окисление липидов в биомемдранах. М. Наука 1972.

18. Бобова Л.П., Кузнецов С.Л., Сапрыкин В.П. Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза. М.: "Новая Волна", 2003. - с.

19. Витер В.И., Останин В.Я. Некоторые особенности патогенеза синдрома позиционного сдавления// В кн. "Клинические аспекты травматологии и ортопедии". Ижевск, 1979.-С. 167-169.

20. Вознюк Д.И. Информативное и прогностическое значение аутоиммунных реакций в раннем периоде синдрома длительного раздавливания// В сб. "Направленное лечение тяжелой травматической ишемии конечностей".-Кемерово, 1978.-С. 34-37.

21. Вознюк Д.И. Прогнозирование течения и исходов синдрома длительного раздавливания: (экспериментальное исследование)// Автореф. дисс. канд. мед. наук Томск, 1989. - 24 с.

22. Вольф сон С. Д. нарушения транспортных свойств микрососудов брыжейки крыс в раннем периоде постишемического синдрома (экспериментально-физиологическое исследование)// Автореф.дисс.канд.мед.наук М., 1989. -24 с.

23. Воскресенский О.Н., Туманов В.А. Ангиопротекторы,- М., 1982.-С. 47.

24. Выренков Ю.Е., Гансин А.Г., Мироненко В.Т. Лимфооггок при синдроме длительного раздавливания тканей конечностей (экспериментальное исследование)// Ортопедическая травматология. 1976. - №1.-С. 57-60.

25. Григович И.Н. Плазмопотеря при синдроме длительного сдавления// В сб. "Турникетный шок и синдром длительного сдавления". Ученые записки Петрозаводского гос. Ун-та им. О.В. Куусинена. -Петрозаводск, 1975.-Т. 21, №2-С. 17-18.

26. Григович И.Н. Ноксемия при синдроме длительного сдавления// В сб. "Турникетный шок и синдром длительного сдавления". Ученые записки Петрозаводского гос. Ун-та им. О.В. Куусинена. -Петрозаводск, 1975.-Т. 21, №2.-С. 19-25.

27. Григович И.Н. Иммуногенез синдрома длительного раздавливания// В сб. "Турникетный шок и синдром длительного сдавления". Ученые записки Петрозаводского гос. Ун-та им. О.В. Куусинена. -Петрозаводск, 1975.-Т. 21, №2-С. 26-29.

28. Гунин А.Г. Методика получения экспериментального синдрома длительного раздавливания// В кн. "Развитие медицинской службы Новосибирского научного центра. Новосибирск, 1971.-С. 266-267.

29. Дейнега В.Г. Обоснование к применению иммунотерапии при синдроме длительного раздавливания в эксперименте// Автореф.дисс.канд.мед.наук,-Донецк, 1964.- 21с.

30. Дубицкий А.Е., Семенов И.А., Чепкий Л.П. Синдром длительного раздавливания тканей// Медицина катастроф,- 1993.-С. 292-303.

31. Еланский H.H. О травматическом токсикозе при массивных закрытых повреждениях мягких тканей// Хирургия.- 1950, №1.-С. 3-7.

32. Еланский H.H. Токсикоз при массивных ушибах и сдавлении мягких тканей. Травматический токсикоз// В кн. Военно-полевая хирургия.- 1950. Изд. 5-ое.-С. 24-26.

33. Ефремов A.B., Белкина О.М., Зыков А.Л. Активность антиоксидантов в сыворотке крови у животных с экспериментальным синдромом длительного сдавливания// БЭБиМ.- 1992.-Т. 113, № 6.-С. 598-599.

34. Зимин Ю.И. Иммунитет и стресс// Итоги науки и техники. Иммунология.-1979-Т. 8-С. 173-195.

35. Зимин Ю.И. Стресс: Иммунологические аспекты.// Итоги науки и техники. Иммунология.- 1983.-Т. 12.-С.41-61.

36. Зимина Л.Н., Звездина М.В., Мусселиус С.Г., Васина Т.А. Патологическая анатомия миоренального синдрома// Архив пат.-1995.-Т. 57, № 2.-С. 2935.

37. Зимина Л.Н. Патологическая анатомия миоренального синдрома.// Дисс. в виде научного доклада на соиск. уч. степени докт.мед.наук. М., 1995.-49 с.

38. Иванов Д.Е., Пучинян Д.М. Нарушения функции печени при травматическом стрессе// Успехи физиол. науки-1998.-Т. 29, № 1.-С. 5871.

39. Калиниченко A.B. Системные нарушения метаболизма при синдроме длительного сдавления (экспериментальное исследование)// Автореф. дисс. докт. мед. наук-Новосибирск, 1998. 44 с.

40. Капустин Е.Б. О компрессионном периоде синдрома длительного сдавления// В сб. "Турникета, шок и синдром длительного сдавления".-Петрозаводск, 1975.-С.

41. Капустин Е.Б. Травма от длительного сдавления мягких тканей// В сб. "Турникетный шок и синдром длительного сдавления". -Петрозаводск, 1975-С. 10-13.

42. Капустин Е.Б. Неспецифическая лекарственная терапия ноксемии при синдроме длительного сдавления// В сб. "Турникетный шок и синдром длительного сдавления".-Петрозаводск, 1975.-С. 129-132.

43. Земсков A.B. Земсков В.М. Комбинированная иммунокоррекция -М, 1994. 260 стр.

44. Касаткин В.Н. с соавт. Эндотоксемия при краш-синдроме// Хирургия, 1995. №4.-С. 43-44.

45. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета// Иммунология-1995. № 3-С. 30-48.

46. Кириллов М.М., Яковлев В.Б. и др. Организация специализированной терапевтической помощи пострадавшим при землетрясении в Армении// Воен.мед. журн.- 1990.- № З.-С. 25-31.

47. Клиническая иммунология (под редакцией A.B. Караулова).- М.: Мед. информ. агентство, 1999.52. КовановВ.В., 1975.53. (Коен С., Уорд П.А., Мак-Класки Р.Т. Механизмы иммунопатологий (пер. с англ.). М., 1983.

48. Козлов В.В. Лимфатические узлы контрлатеральной конечности при синдроме длительного сдавления в эксперименте// Автореф.дисс.канд.мед.наук,-Новосибирск, 1998.-17 с.

49. Кричевский A.JI. Тяжелая компрессионная травма конечности и ее эфферентная терапия.- Томск: Изд-во Томского университета, 1991. 150с.

50. Крук И.Н. Ортопед.травматол. М.-1967. №8.-С. 26-28.

51. Кузин М.И. Клиника, патогенез и лечение синдрома длительного раздавливания.- М., 1959.-136 с.

52. Кузин М.И. Синдром длительного раздавливания (клинико-экспериментальное исследование). Автореф.дисс.докт.мед. наук.- М., 1958.

53. Кузин М.И., Максимов Ю.М. Кургузов О.П. Современные взгляды на патогенез синдрома длительного раздавливания// Хирургия.- 1968. №2.-С. 71-78.

54. Кулагин В.К. Патологическая физиология травмы и шока// Д., 1978. 296 с.

55. Кулиева A.A. Электронно-микроскопическое изучение миокарда при синдроме длительного раздавливания и воздействии ионола// Азерб. Мед. ж-1990. № 12.-С. 18-22.

56. Кургузов О.М., Максимов Ю.П. Синдром длительного раздавливания (научный обзор). / Ред. Кузин М.И.- М., 1969. 240 с.

57. Левитес Э.П. Газообмен при синдроме длительного сдавления// Сб. "Турникетный шок и синдром длительного сдавления". Уч. Записки Петрозаводского гос. ун-та им. О.В. Куусинена.- 1975.-Т. 21, вып. 2.-С. 3037.

58. Левитес Э.П. Синдром длительного сдавления в различных климатических условиях// Сб.- "Турникетный шок и синдром длительного сдавления .-Уч.

59. Записки Петрозаводского гос. ун-та им. О.В. Куусинена.- 1975.-Т. 21, вып. 2.-С. 48-54.

60. Лукьянова Е.С. Патоморфологические изменения в печени при синдроме длительного сдавления и его лечении лизосомотропным препаратом (декстраном). //Автореф.дисс.канд.мед.наук.- Новосибирск, 1995.-22 с.

61. Львов М.В. Изыскание новых противоаритмических средств и изучение механизма их действия// Автореф.дисс.канд.мед.наук Ереван, 1971.

62. Максимов Ю.М., Максимова Л.П. О нарушениях сердечной деятельности при синдроме длительного раздавливания// Сб. Клиника, диагностика и лечение неотложных состояний.- М., 1971. С. 11-14.

63. Машковский М.Д. Лекарственные средства (пособие для врачей). 4.II.// М.: Медицина, 1993. С. 34-36 и 197-198.

64. Межлумян Р.Г. Состояние агрегатных свойств клеток крови у больных синдромом длительного сдавления// Автореф.дисс.канд.мед.наук.- Ереван, 1998.-20 с.

65. Микаэлян Н.П. Роль изменений инсулинсвязывающей активности и энергетического обмена в патогенезе экспериментального краш-синдрома// Ж. Патол. физиол. и экспер. терапия.- 1992.-№1-С. 19-21.

66. Микаэлян Н.П. Метаболический статус и инсулинсвязывающая активность клеток крови и печени при экстремальных состояниях (экспер.-клинич. исследование)// Автореф.дисс.докт.мед.наук М., 1992. -36 с.

67. Микаэлян Н.П., Князев Ю.А. Основные стороны патогенеза гипергликемического синдрома при экстремальных состояниях (ожоговой травме и краш-синдроме)// БЭБиМ.-1994.-Т.117, №1.-С. 22-25.

68. Михайлов A.A., Дворецкий Л.И., Кузнецова О.Р. и др. Интенсивная терапия ДВС синдрома у пациентов с острой почечной недостаточностью, вызванной синдромом длительного раздавливания// Клин, мед.-1991.-Т. 69, № 5-С. 80-84.

69. Мкртчян Г.Л. Морфо-функциональные изменения органов иммунной системы при синдроме длительного раздавливания в эксперименте// Автореф.дисс.канд.мед.наук.- Ереван, 2001.-20 с.

70. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Иммунобиология гормонов тимуса (под ред. Ю.А. Гриневича и др.). Киев, 1989.-С. 125-142.

71. Мусселиус С.Г., Ермолов A.C. Полиорганная недостаточность при деструкции мягких тканей// Хирургия. 1998. - N° 10.-С. 41-45.

72. Мхитарян Д.С. Нарушение функции и метаболизма сердца при синдроме длительного раздавливания// Автореф.дисс.канд.мед.наук Ереван, 2000-21 с.

73. Насонкин О.С., Криворучко. Краш-синдром. Этиология и патогенез// Патол., физиол., экспер. терапия.-1991.-№2.-С. 3-9.

74. Насонов E.JL, Самсонов М.Ю., Наумов В.Г., Беленков Ю.Н. Иммунопатология застойной сердечной недостаточности: роль цитокинов// Российский кардиологический научно-производительный комплекс.

75. Небольсина JI.M. Цитологический анализ реактивных изменений печени после механического повреждения скелетных мышц.- Тбилиси: Мецниереба, 1996.-106 с.

76. Непомнящих Л.М., Бакарев М.А., Циммерман В.Г. Общепатологические процессы в соматических мышцах при генетически детерминированной метаболической миопатии у крыс линии W/SSM// БЭБиМ.-1998. №8.-С. 228-233.

77. Нечаев Э.А., Раевский А.К. Савицкий Г.Г. Синдром длительного сдавления (руководство для врачей)//М., Медицина, 1993.

78. Нигуляну В.И., Ельский В.Н., Криворучко Б.И., Зорькин A.A. Синдром длительного раздавливания// Кишинев: Штиинца, 1984.-222 с.

79. Павлиашвили Н.С., Сохадзе Е.Т., Петриашвили Т.Г. Состояние микроциркуляции и интерсивность регионарного кровообращения при краш-синдроме//Мед. новости Грузии-1999, № З.-С. 20-21.

80. Павловский М.П., Оборин А.Н., Чуклин И.Л. с соавт. Содержание простагландинов групп А и Е в крови и тканях почек в ранней фазе экспериментальной острой недостаточности, вызванной краш-синдромом// Анест. и реан-1990, № 5.-С. 54-57.

81. Папантонопуло А.Н., Головнев В.А., Голубева И.А., Особенности морфофункциональных преобразований в лимфатических узлах и в тимусе при синдроме длительного сдавления в эксперименте// Сб. ст. "Морфология и хирургия".-Новосибирск, 1999-С. 149-151.

82. Петренко В.М., Петренко E.B. Компенсаторные реакции в лимфатических узлах после пренатального воздействия индометацина// Морфология — 2001.-Т. 119, № 1.-С. 37-40.

83. Петросян Н.Р. Морфологичесая характеристика реактивных изменений в почках, печени, селезенки в ранней стадии синдрома длительного раздавливания в эксперименте//- автореф. Дисс.канд.мед.наук.-Ереван,-1997.-21

84. Пирогов Н.И. Начала общей военно-полевой хирургии. Часть I (1940), часть II // М.: Медгиз, 1941.

85. Пытель А.Я Синдром травматического сжатия конечностей. Его лечение и профилактика// Хирургия. -1951. -№10.-С. 3-10.

86. Пытель А.Я. О синдроме размозжения и травматического сжатия конечности//Клин. Мед. -1945-№9-С. 3-14.

87. Рыбин С.А., Осадчий A.C., Леонов М.А. и др. Нарушения микроциркуляции в раннем периоде синдрома длительного раздавливания// Мат. итогов, конф. Воен.науч. общества. -Л., 1975.-С. 158-159.

88. Рычнев В.Е., Фролов В.М., Желтухин П.А. и др. Нуклеиновые кислоты и пиримидиновые производные в комплексной терапии вирусного гепатита// Мат. конф. Фарм. регуляция регенераторных процессов- Йошкар-Ола,1979.-С. 181-182.

89. Сапин М.Р. Иммунная система и иммунодефицит// Клин мед. -1999. -Т. 77, №1.-С. 5-11.

90. Сапин М.Р., Коплик Е.В., Никитюк Д.Б. Брыжеечные лимфатические узлы крыс при действии эмоционального стресса// Морология, 2001.-Т. 119, №1.-С. 48-51.

91. Секамова С.М., Копьева Т.Н., Тройняков Н.К. Динамика некротических изменений скелетных мышц при синдроме длительного раздавливания// Арх. пат.-1976.-Т. 38, № 7.-С. 25-32.

92. Секамова С.М. Морфология и патогенез синдрома длительного раздавливания//Автореф.дисс.докт.мед.наук.-М., 1987-41 с.

93. Секамова С.М. Морфология и патогенетические аспекты краш-синдрома// Арх. пат. -1987.-Т.49, №2-С. 3-12.

94. Серняк П.С., Коваленко Н.В., Логвиненко Л.В., Денисов В.К., Олещенко Н.Д. Основные принципы лечения больных с синдромом длительного сдавления мягких тканей// Воен.-мед. журн.-1978.-№ 5,-С. 28-32.

95. Симбирцев A.C. Интерлейкин-2 и рецепторный комплекс интерлейкина-2 в регуляции иммунитета// Иммунология.-1998.-№ 6.-С. 3-7.

96. Смит К.А. Интерлейкин-2// В мире науки.-1990.-№ 5.-С.16-24.

97. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е. Клиническая иммунология детского возраста//М., 1977.-251 с.

98. Ткачук М.Г. Изменения тимуса и селезенки в условиях реадаптации после физических нагрузок// Рос. морф вед. 2001. №1-2.-С. 92-94.

99. Урбах В.Ю. Биометрические методы М., 1964, 231 с.

100. Утешев Б.С., Коростелев С.А. Взаимодействие нейроэндокринной и иммунной систем и роль опиоидных пептидов в регуляции иммунного гомеостаза//Фармакол. и токсикол.-1990.-Т. 53, № 1.-С. 10-16.

101. Фрейдлин И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной сети.//Иммунология.-1995.-№ З.-С. 44-48.

102. Хадифах Шаоки. Структурно-метаболические реакции лимфатических узлов при экспериментальном синдроме длительного сдавления// Автореф.дисс.канд.мед. наук. Новосибирск, 1999.-19 с.

103. Цыбуляк Г.Н., Краш-синдром. I. Этиология, патогенез и клиника// Терапевт. Архив.-1990.-Т. 62, № 10.-С. 11-16.

104. Цыбуляк Т.Н., Краш-синдром. II. Лечение, осложнения, исход// Тер. архив, 1990.-Т. 62, № 10.-С. 16-21.

105. Чухриенко Д.П., Герцберг Л.Л., Филиппов Ю.А., Фоменко Л.П. Структурные изменения микроциркуляторного русла при экспериментальном синдроме длительного раздавливания// Мат. конф. врачей Днепропетровской области.-Киев, 1977.-С. 89-92.

106. Шекоян В.А., Товмасян B.C., Оганесян М.С., Манукян Н.Р. и др// Мед. наука Армении, 1996.-Т. XXXVI-C. 3.

107. Шкурупий В.А., Лукьянова Е.С., Ефремов A.B. Влияние инфузий декстрана на деструктивные процессы в паренхиме печени при синдроме длительного раздавливания// БЭБиМ.- 1998.-Т. 125, № 5.-С. 592-595.

108. Щепеткин И.А., Чердынцева Н.В., Васильев Н.В. Регуляция функциональной активности нейтрофилов цитокинами// Иммунология.-1994, № 1.-С. 4-6.

109. Abassi Z.A., Hoffman A., Better O.S. Acute renal failure complicated muscle crush injury// Semin Nephrol.-1998.-V. 18, № 5.-P. 558-565.

110. Adachi K., Kawata M., Araki S., Matsumoto A., Mukai T., Ikoma T. A case of Crush syndrome with giant negative T waves and reversible left ventricular dysfunction// Jpn. Circ. J., 1996.-V. 60, №10. P. 809-814.

111. Adachi J., Morita S., Yasuda H., Miwa A., Ueno Y., Asano M., Tatsuno Y. Elevated plasma nitrate in patients with crush syndrome caused by the Kobe earthquake// Clin. Chim. Acta.-1998.-V. 269, № 2.-P. 137-145.

112. Barcley A.E., Daniel P.M., Franclin K.L., Prichard M.M. Studies of the renal circulation// Oxford, 1947.

113. Better O.S. Traumatic rhabdomyolysis ("crush-syndrome') update 1989// Isr. J. Med. Sci.-1989.-V. 225, №2.-P. 69-72.

114. Better O.S. History of the crush syndrome from the earthquakes of Messina, Siciily 1909 to Spitak, Armenia 1988// Am. J. Nephrol.-1997.-V.17, № 3-4.-P. 392-394.

115. Better O.S. Rescue and salvage of casualties suffering from the crush syndrome after mass disasters// Mil. Med.-1999.-V. 164, № 5.-P. 366-369.

116. Better O.S., Abassi Z., Rubinstein I. et al. The mechanism of muscle injury in the crush-syndrome ischemic pressure stretch myopathy// Minerva Electrol. Metab.-1990.-V.16, № 4.-P. 181-184.

117. Better O.S., Rubinstein I. Management of shock and acute renal failure in causalties suffering from the crush syndrome// Ren. fail.-1997.-V. 19, № 5-P. 647-653.

118. Bouachour G., Cronier P., Gouello J.P., Toulemonde J.L., N'Talha A., Alquier P. Hyperbaric oxygen therapy in the management of crush ibjuries: a randomizzed double-blind placebo-controlled clinical trial// J. Trauma-1996-V.41,№2.-P. 333-339.

119. Boyle M.J., Sewell W.A., Cooper D.A., Penny R// Infections and cytokines, 1992.-V.21.-P. 12-14.

120. Bywaters E.G.L. Crushing Injury// Brit. Med. J.-1942.-V. 2, № 4273.-P. 643646.

121. Bywaters E.G.L. Ishemic Muscle Necrosis Crushing Injury, Traumatic Oedema, the Crush Syndrome, Traumatic anuria, Compression Syndrome: a Type ofinjury seen in Air Raid Casualties Following Burial beneath Debris// J.A.M.A.-1944.-V. 124.-P. 1103-1110.

122. Coget J.M. The compartment syndrome// Phlebologie. 1989.-V. 42, №2.-P. 259-269.

123. Colmers F. Uber die durch das Erdleben in Messina am 28 Dec. 1908 verursachten Verletzungen. Bericht über die arztl. Thadigkeit in Rothen-Kreiz-Lasareth der Deutschen Hilfsexpedition zu Syracus.// Arch. F. Klin. Chirurgie.-1909.-B. 90.-S. 701-748.

124. Duncan G.W., Blalock A. Shock produced by crush injury. Effects of the aadministration of plasma and the local application of cold// Arch. Surg.-1942—V. 45, № 2.-P. 183-194.

125. Duve C. Tocopherol, oxygen and biomembranes-Amsterdam, 1987.

126. Hackart A. Uber acute todliche vasomotorische nephrosen nach verschiittung-Munchen, 1917.

127. Hara I., Nakano Y., Okada H., Arakawa S., Kamidono S. Treatment of crush syndrome patients following the great Hanshin earthquake// Int. J. Urol-1997-V. 4, № 2.-C. 202-205.

128. Heyman S.N., Greenbaum R., Shina A., Rosen S., Brezis M. Myoglobiinuric acute renal failure in the rat: a role for acidosis?// Exp. Nephrol.-1997.-V. 5, № 3.-P. 210-216.

129. Huber F.X., Eckstein H.H., Allenberg J.R. Bilateral tibial compartment syndrome with crush symptoms after cannabis abuse// Chirurg., 1997.-V. 68, №8.-P. 829-831.

130. IeFsky V.M., Zavedeia T.L., Bohatyr'ova O.V. et al. Effects of ionol, alpha-tocopherol and lipin on the processes of peroxidation in the syndrome of prolonged crush// Fiziol. Zh., 2000.-V. 46, № 6.-P. 22-27.

131. Gueugniaud P.Y., Fabreguette A., Perrin C. et al. Hemodynamic profile and serum cytokines in crush syndrome. Analogy with severe burns// Press Med., 1996.-16:25 (9).-P. 449-451.

132. Hue V., Martinot A., Fourier C., Cremer R., Leteurtre S., Leclerc F. Acute rhabdomyolysiis in the child// Arch Pediatr.-1998.-V. 5, № 8.-P. 887-895.

133. Kevorkian G.A., Marukhyan G.L., Arakelyan L.N. et al. Influence of hypothalamic proline-rich peptide on the level of 14C. glucose utilization during crush syndrome//Neurochem. Res.-2001.-V. 26, № 7 p. 829-832.

134. Kikta M.J., Meyer J.P., Bishara R.A., Goodson S.F. et al. Crush syndrome due to limb compression//Arch. Surg., 1987.-V. 122,№9.-P. 1078-1081.

135. Mann D.L. Stress activated cytokines and the heart// Cytokine and Growth Factor. 1996.-V. 7, №4.-P. 341-354.

136. Mitchell C.A., McGeachie J.K., Grounds M.D. Cellular differences in the regeneration of murine skeletal muscle: a quantitative histological study in SJL/J and BALB/c mice// Cell Tissue Res.-1992.-V. 269, № l.-P. 159-166.

137. Miwa A., Adachi J., Mizuno K., Tattsuno Y. Very long-chain fatty acid pattern in crush syndrom patients in the Kobe earthquake// Clin. Chim. Acta.-1997.-V. 258, № 2.-P. 125-135.151. Mollenhauer (1964).

138. Nakanishi K., Shimamoto S., Kishi M., Yoshiiokia T., Ishida T., Tomoda K., Nakamura H. CT, MR imaging and muscle biopsy in severe crush injury// Acta Radiol.-1997.-V. 38, № 5.-P. 903-906.

139. Oda Y., Shindon M., Yukioka H. et al. Crush-syndrome sustained in the 1995 Kobe, Japan, earthquake, treatment and outcome// Japan. Ann. Emerg. Med-1997.-V.30, №4, P. 507-512.

140. Odeh M. The role of reperfusion-induced injury in the pathogenesis of the crush syndrome//N.Engl. J. Med.-1991.-V. 324, № 20.-P. 1417-1422.

141. Oken D.E. Lancet, 1975.-V. 1, № 7920.-P. 1319-1322.

142. Quenu E. De la toxemie traumatique choc a syndrome depressie dans les blessures guerre.//Rev. Chir. -1918.V37, W9-12,-P204-340.

143. Quenu E. Du choc traumatique envisage au point de vue clinique. Londres, 1923.

144. Rubinstein I. Management of shock and acute renal failure in casualities suffering from the crush syndrome// Ren Fail.-1997.-V. 19, №5.-P. 647-653.

145. Schwartz J.T.Jr., Brumbaack R.J., Lakatos R., Poka A., Bathon G.H., Burgess A.R// Acute compartment syndrome of the thigh. A spectrum of injury// J. Bone Joint Surg.-1989.-V. 71, № 3.-P. 392-400.

146. Shigemoto T., Rinka H., Matsuo Y., Kaji A., Tsukioka K., Ukai T., Shimaoka H. Blood purification for crush-syndrome// Ren fail.-1997-V.19, № 5.-P. 711719.

147. Smith P.N., Rampersaud R., Rorabeck C.H. Incipient compartment syndrome of the thigh following total knee arthroplasty// J. Arthroplasty.-1997.-V.12, № 7.-P. 835-838.

148. Silberstern P. Bemerkungen uber die Lebenserhaltung Vershuttete// Wien klin. Wschr1909 -B.8 -S. 273-274.

149. Storgaard M., Rasmussen K., Ebswkov B. Traumatic rhabdomyolisis. Physiopathology and treatment// Ugeskr Laeger.-1998.-V. 160, №7.-P. 987990.

150. Trueta J.A., Barcley A.E., Daniel P.M. et al. Studies of the renal circulation// Oxford, 1947.

151. Szumilak D., Sulowiicz W., Walatek B. Rhabdomyolysis: clinical features, causes, complications and treatment// Przegl Lek.-1998.-V.55, № 5.-P. 274279.

152. Von Schroeder H.P., Botte M.J. Crush syndrome of the upper extremity// Hand Clin. 1998. - V. 14, № 3. - P. 451 - 456.

153. Waisman D., Shupak A., Weisz G., Melamed Y. Hyperbaric oxygen therapy in the pediatric patient: the experience of the Israel Naval Medical Institute// Pediatrics.-1998.-V. 102, № 5.-P. 53.

154. Yamada M., Tsuda K., Nagai S., Tadoroko M., Ishibe Y. A case of crush syndromeresulting from continuous compression of the upper arm by automatically cycled bloodpressure cuff// Masui.-1997.-V. 46, № l.-P. 119-123.

Информация о работе

Артищева, Маргарита Юриковна
доктора медицинских наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.25

Диссертация

Структурно-функциональная характеристика миокарда и органов иммунной системы при развивающемся краш-синдроме в эксперименте - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Структурно-функциональная характеристика миокарда и органов иммунной системы при развивающемся краш-синдроме в эксперименте - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы