Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурная организация транскрипционно-активного и неактивного хроматина соматического ядра BURSARIA TRUNCATELIA на разных стадиях жизненного цикла

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мартынкина, Лариса Павловна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

I.I. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ХРОМАТИНА.

1.1.1. Основные компоненты эукариотического хроматина.

1.1.2. Нуклеосомная организация хроматина.

1.1.3. Нуклеомерный, или супербидный уровень организации хроматина.

1.1.4. Высшие уровни организации хроматина.

1.1.5. Структура транскрипционно-активного хроматина.

1.2. СТРУКТУРА ТРАНСКРИПЦИОННЫХ КОМПЛЕКСОВ АКТИВНЫХ ГЕНОВ ЭУКАРИОТ.

1.2.1. Строение транскрипционных комплексов рибосом-ных и нерибосомных генов эукариот.

1.2.2. Структура боковых РНП-фибрилл.

1.2.3. Регуляция активности„синтеза в рибосомных генах эукариот .*. -I''. •

1.3. СТРУКТУРА ХРОМАТИНА ПРОСТЕЙШИХ.

1.4. БИОЛОГИЯ ИНФУЗОРИИ BURSARIA TRUNCATELLA.

1.5. ДАННЫЕ О СТРУКТУРЕ ХРОМАТИНА Ш{РОНУКЛЕУСА ИНФУЗОРИИ BURSARIA TRUNCATELLA

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава III ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ХРОМАТИНА В ПРОЦЕССЕ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ И РОСТА ИНФУЗОРИИ ПОСЛЕ ДЕЛЕНИЯ 3.1. Структурная организация хроматина макронуклеуса

Bursaria truncatella в разные сроки после деления.48 3.2. Особенности строения транскрипционных комплексов не-рибосомных генов и необычных транскрипционных комплексов.

Глава 1У СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ГЛЫБОК НЕАКТИВНОГО ХРОМАТИНА МАКРОНУКЛЕУСА BURSARIA ТШШСАТЕЬЬА

Глава У СТРУКТУРА ХРОМАТИНА МАКРОНУКЛЕУСА В ЦИСТАХ ПОКОЯ И

В ПРОЦЕССЕ ЭКСЦИСТИРОВАНИЯ.

5.1. Организация хроматина макронуклеуса цист покоя.

5.2. Структурные изменения хроматина макронуклеуса Bursaria truncatella при эксцистировании.

ВЬЮОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структурная организация транскрипционно-активного и неактивного хроматина соматического ядра BURSARIA TRUNCATELIA на разных стадиях жизненного цикла"

Строение, организация и функционирование хромосомного аппарата эукариот является одной из наиболее актуальных проблем молекулярной биологии. Основная структура наследственного аппарата клетки - хромосома - представляет собой сложный нуклеопротеидный комплекс, в котором ДНК взаимодействует со специальными белками, обеспечивающими её компактиза-цию. Высокая степень компактизации ДНК вызвана необходимостью хранения большого количества генетической информации, часть которой в данный момент в клетке может не реализоваться. Одним из основных направлений, в изучении организации и функционирования хроматина, привлекающих внимание многих исследователей, является выяснение способов хранения генетической информации и изучение пространственной и структурной организации генетического материала. Тем не менее остаётся невыясненным ряд вопросов, касающихся механизмов перехода хроматина от неактивного компактного к активному диспергированному состоянию.

Изучение структуры хроматина на высших уровнях организации в различных функциональных состояниях является весьма сложной экспериментальной задачей, в решении которой немаловажную роль играет выбор объекта. Bursaria truncatella как объект для таких исследований имеет ряд важных преимуществ. Во-первых, её соматическое ядро - макронуклеус - имеет большие размеры /до 2 мм в длину/ и содержит достаточное количество материала для обеспечения оптимальной концентрации хроматина на электронномикроскопическом препарате, приготовленном по методу Миллера, что позволяет изучать структуру хроматина выделенного из одиночного ядра. Во-вторых, изменения, которые претерпевает макронуклеус бурсарии в процессе жизнедеятельности клетки достаточно растянуты во времени, что даёт возможность выделить и исследовать ядро на любой стадии жизненного цикла. Изучение индивидуальных ядер позволяет избежать проблем, связанных с синхронизацией ядерного материала. Благодаря этому, удаётся выявить характерные структурные особенности хроматина макронуклеуса бурсарии для каждой стадии и оценить соотношение тех или иных структур на разных стадиях жизненного цикла.

Одна из задач настоящей работы состояла в изучении структурных изменений хроматина в процессе жизнедеятельности клеток. Для этой цели электронномикроскопическими и авторадиографическими методами изучали структурную организацию хроматина макронуклеуса В. truncatella в разные сроки после деления, на стадии цисты покоя и при эксцистировании. Все эти чётко идентифицируемые стадии характеризуются различными соотношениями диспергированного транскрипционно-активного и компактного неактивного хроматина.

Большое внимание уделено изучению структуры транскрипционно-активного хроматина, а именно изучению транскрипционных комплексов работающих генов разных типов на разных этапах роста и дифференцировки инфузорий после деления и в процессе эксцистирования.

Важная задача настоящей работы состояла в выяснении принципа упаковки нуклеосомной и наднуклеосомной фибрилл хроматина в компактные структуры более высокого порядка. Проведённые исследования позволили установить, что хромати-новые глыбки неактивного хроматина макронуклеуса цист покоя и инфузорий, закончивших рост и дифференцировку, имеют петельную организацию, обеспечивающую возможность избирательной декомпактизации отдельных участков генома при его функционировании .

Важное место в проводившихся исследованиях занимало решение методических задач, таких как разработка методов выделения индивидуального ядра, выявление внутренней структуры хроматиновых глыбок методом негативного контрастирования и разработка приёмов диспергирования генетического материала для приготовления препаратов по методу Миллера. Разработанные при выполнении настоящей работы методические подходы могут быть использованы в исследованиях структурной организации хроматина.

Список сокращении, используемых в диссертации

Ма - макронуклеус

Ми - микронуклеус

ТК - транскрипционный комплекс

НТК - необычный транскрипционный комплекс

НГБ - негистоновые белки

НМС-белки - белки группы высокой подвижности

ДНП - дезоксирибонуклеопротеид

РНП - рибонуклеопротеид

РНП-фибриллы - рибонуклеопротеидные фибриллы

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Мартынкина, Лариса Павловна

выводы

1. Электронномикроскопически и авторадиографически изучены структурные изменения хроматина макронуклеуса инфузории Bursaria truncatella в разные сроки после деления. Показано, что основная часть хроматина Ма в период интенсивного роста и дифференцировки находится в декомпактизованном состоянии и содержит большое количество ТК активно работающих генов. По мере завершения роста и дифференцировки количество транскрипционно-активного хроматина снижается, и увеличивается доля неактивного хроматина, организованного в компактные хроматиновые глыбки.

2. Подробно изучена морфология ТК нерибосомных генов разных типов.

3. Обнаружены и изучены необычные транскрипционные комплексы, представленные в Ма в большом числе копий. Они характеризуются небольшой длиной /менее I мкм/, высокой плотностью расположения боковых РНП-фибрилл /60-80 шт/мкм/ и отсутствием отчётливого градиента длин РНП-фибрилл вдоль транскрибируемого участка.

4. Выявлена политенная организация некоторых участков генома Ма.

5. Установлено, что неактивный хроматин Ма бурсарий, закончивших рост и дифференцировку, организован в компактные хроматиновые глыбки диаметром 120-180 нм, связанные одной или несколькими хроматиновыми фибриллами. Показано, что в растворе с низкой ионной силой происходит постепенная деком-пактизация хроматиновой глыбки с образованием петель хроматиновых фибрилл. Длительная инкубация в растворе с низкой ионной силой приводит к полному разворачиванию хроматиновой глыбки в нуклеосомные нити.

6. Изучена структурная организация хроматина Ма цисты покоя. Установлено, что на этой стадии практически весь хроматин Ма организован в хроматиновые глыбки размером 100-300 нм. Показано, что хроматиновые глыбки Ма цист и хроматиновые глыбки Ма инфузорий, закончивших рост и дифференцировку, имеют одинаковую структурную организацию. Негативным контрастированием разрешена внутренняя структура хроматиновой глыбки и показано, что она состоит из субъединиц, соответствующих по размеру нуклеосомам.

7. Показано, что при эксцистировании, т.е. в процессе выхода клеток из состояния покоя, происходит естественная декомпактизация хроматиновой глыбки с образованием петель фибрилл хроматина, на которых в ряде случаев наблюдаются ТК генов, имеющие малую длину транскрибируемого участка /0,21,3 мкм/ и высокую плотность расположения РЖ-полимераз /более 20 шт/мкм/. Предполагается, что такие гены отвечают за синтез белков, участвующих в регуляции процесса эксцистирования.

8. Выявлена петельная организация хроматиновых глыбок, обеспечивающая возможность дискретной декомпактизации отдельных участков генома при его функционировании.

В заключение приношу свою искреннюю благодарность Анне Сергеевне Тихоненко за руководство, постоянную помощь и поддержку, высокую требовательность и повседневное внимание к моей работе.

Считаю своим приятным долгом выразить сердечную благодарность Ираиде Андреевне Беспаловой за повседневную помощь, доброжелательное и чуткое отношение, душевную доброту.

Хочу поблагодарить Ю.Ю.Венгерова, В.И.Попенко, Н.Е.Черни за помощь в экспериментальной работе и обсуждение результатов.

Благодарю Г.И.Сергееву за постоянный интерес к работе, ценные советы и консультации.

Благодарю А.А.Кашлюнову, Г.В.Сердюкова, А.И.Паршина за большую техническую помощь.

Благодарю всех сотрудников Лаборатории электронной микроскопии ИМБ АН СССР за интерес к работе и постоянную поддержку.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мартынкина, Лариса Павловна, Москва

1. Бакаев В.В. Исследование структурно-функциональных отношении в хроматине эукариот. В кн.: Структурная организация и функция генома эукариот. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1982, т.16,серия Биологическая химия, с.128-170.

2. Борхсениус С«И. Структура и репликация генома одноклеточного организма Теtrahymeпа pyriformis : Автореф. Дис. . докт.биол.наук. Ленинград, 1981. - 44с.

3. Борхсениус С.Н., Сергеева Г.И. Характеристика ДНК вегетативных особей инфузории Bursaria truncatella . Цитология, 1979, т.21, № 3, с.327-333.

4. Босток К., Самнер Э. Хромосома эукариотической клетки. -М.: Мир, 1981. 598с.

5. Венгеров Ю.Ю., Попенко В.И., Тихоненко А.С. Структурнаяоорганизация нитей хроматина толщиной 100-200 А. Докл. АН СССР, 1977, т.232, Jf-6, с.1442-1444.

6. Георгиев Г.П., Бакаев В.В. Три уровня структурной организации хромосом эукариот. Молекулярная биология, 1978, т.12, № 6, с.1205-1230.

7. Георгиев Г.П., Ильин Ю.В., Тихоненко А.С., Добберт Н.Н., Ананьева Л.Н. Получение и свойства хромосомных дезоксирибо-нуклеопротеидных комплексов. Молекулярная биология, IS67, т.1, № 6, с.815-828.

8. Герасимова 3.II., Сергеева Г.И., Серавин Л.Н. Организация ресничных и фибриллярных структур инфузории Bursaria truncatella и её систематическое положение. Acta protozoologica , 1979, т.18, В 3, с.355-370.

9. Догель В.А. Общая протистология. М.: Сов. наука, 1951. -604с.

10. Догель В.А. Зоология беспозвоночных. М.: Высшая школа, 1981. - 606с.

11. Догель В.А., Полянский Ю.й., Хейсин Е.М. Общая протозоология. М-Л.: Изд-во АН СССР, 1962. - 592с.

12. Жизнь животных / Под ред. Л.А. Зенкевича. М.: Просвещение, 1968, т.1, с.143-145.

13. Зацепина О.В., Поляков В.Ю., Ченцов Ю.С. Электронномикро-скопическое изучение хромонемы и хромомеров в митотических и интерфазных хромосомах. Цитология, 1983, т.25, 2,с.123-129.

14. Кирьянов Г.И., Поляков В. 10., Манамшьян Т.А., Смирнова Т.А., Ченцов Ю.С. Уровни организации и функциональная гетерогенность хроматина. В кн.: Структура и функции клеточного ядра: Тез. докл. У1 Всесоюзн. Симп. Алма-Ата, 1977, с.II.

15. Кирьянов Г.И., Смирнова Т.А., Поляков В.Ю. Нуклеомерная организация хроматина. Биохимия, 1981, т.46, J£ II, с.1923-1937.

16. Осипов Д.В. Проблемы гетероморфизма ядер у одноклеточных организмов. Л.: Наука, 1981. - 167с.

17. Поляков В.Ю,, Зацепина О.В., Ченцов Ю.С. Ультраструктура хромосом. Тез. докл. XII Всесоюзн. Конф. по электронной микроскопии. Сумы. М.: Наука, 1982, с.221.

18. Попенко В.И., Венгеров 10.10., Тихоненко А.С. Электронномик-роскопическое исследование транскрипции рибосомных генов ооцитов вьюна. Молекулярная биология, 1981, т.15, № 2, с.430-437.

19. Райков И.Б. Ядро простейших. Морфология и эволюция. -Л.: Наука, 1978. 328с.

20. Сергеева Г.И. 0 функционировании макронуклеуса Bursaria truncatella во время конъюгации. В кн.: Кариология и генетика простейших. М.-Л.: Наука, 1976, с.159-168.

21. Сергеева Г.И. 0 структуре хроматина макронуклеуса инфузории Bursaria truncatella. Цитология, 1977, т. 19, № 10, C.II46-II54.

22. Соловьёва Л.М. Изменение чувствительности к некоторым внешним факторам на разных стадиях конъюгации Bursaria truncatella . Зоол. журнал, 1946, т.25, с.3-14.

23. Уотсон Д.Д. Молекулярная биология гена. -М.: Мир,1979. -720с.

24. Ченцов Ю.С., Поляков В.Ю. Ультраструктура клеточного ядра.-М.: Наука, 1974» 174с.

25. Arnabis J.M., TTair К.К. Ultrastructure of gene transcription in spermatocytes of Trichosia pubescens. Z. Naturforsch,1976, v.31, p.186-189

26. Bak A.L., Zeuthen J., Crick F.H.C. Higher order structure of human mitotic chromosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1977, v.74, p.1595-1599.

27. Bak P., Bak A., Zeuthen J. Characterization of human chromosomal unit fibres. Chromosoma, 1979* v.73, p.301-315»

28. Bakayev V.V., Bakayeva T.G., Schmatchenko V.V., Georgiev G.P. Non-histone proteins in mononucleosomes and subnucleo-somes. Eur.J.Biochem., 1978, v.91, p.291-303.

29. Bakayev V.V., Bakayeva I.G., Varshavsky A.J. Nucleosomes and subnucleosomes: heterogeneity and composition. Cell, 1977, v.11, p.619-625.

30. Bakayeva T.G., Bakayev V.V. Separation of nucleosomes containing histones H1 and H5. Mol. Biol. Rep., 1978, v.4, p.185-189.35» Beermann V/. Riesenchromosomen. Protoplasmatologia. Handbuch der Protoplasma Porschung. 1962, Wien, B.6, s.161-162.

31. Beermann V/. ChromoEieres and genes. In: Results and problems in cell differentiation. Berlin, 1972, v.4, p.1-33.

32. Beers C. Excystment in the ciliate Bursaria truncatella. -Biol. Bull., 1948, v.94, p.86-98.

33. Belyavsky A.V., Bavykin S.G., Goguadze E.G., Mirzabekov A.D. Primary organization of nucleosomes containing all five histones and DNA 175 ana 165 base-pairs long. J. Mol. Biol.j 1980, v.139, p.519-556.

34. Benyajati C., Worcel A. Isolation, characterization and structure of the folded interphase genome of Drosophila melanogaster. Cell, 1976, v.9, p.393-407.

35. Berger S., Zellmer D.H., Kloppstech K., Richter G. Alternating polarity in RITA genes. Cell. Biol. Intern. Rep., 197S, v.2, N.1, p.41-50.

36. Beyer A.L., Miller 0.L.,Jr., McKnight S.L. Ribоnucle©protein structure in nascent hnRNA is nonrandom and sequence-dependent. Cell, 1980, v. 20, p.75-84.

37. Birnbaum L.S., Kaplan S. Localization of a portion of the ribosomal SNA genes in Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1971, v.68, p.925-929.

38. Blamire J., Cryer D.R., Finkelstein D.S., Malmur J. Sedimentation properties of yeast nuclear and mitochondrial DNA. J. Mol. Biol., 1972,Лбб7, p.11-24.

39. Borkhardt В., Nielsen 0.1?. An electron microscopic analysis of transcription of nucleolar chromatin isolated from Tetrahymena pyriformis. Chromosoma, 1981, v.84, p.151-143.

40. Britten R.J., Kohne D.E. Repeated sequences in BNA. -• Science, 19&8, v.161, p.529-541.

41. Busby S., Bakken A.H. Transcription in developing sea urchins: electron microscopic analysis of ceavage, gastrula and prism stages. Chromosoma, 1980, v.79> p.85-104.

42. Bussers J.C.Structure et composition du kyste de resistance de 4 protozoaires ciliis. Protistologica, 1976, v.12, part 1, p.87-100.

43. Chooi W.J. SNA transcription and ribosomal protein assembly in D.melanogaster. In: Handbook of genetics. N.Y.,

44. Acad. Press, 1975, v.5, s.209-264.

45. Chooi W.Y., Swift H.H., Stoffler G. "In vitro" assembly of ribosomal proteins in D.melanogaster. J. Cell Biol.,1975, v.67, p.68a.

46. Comings D.E. Mechanisms of chromosome banding and impli-. cation for chromosome structure. Ann. Rev. Genet., 1978, v.12, p.25-46.

47. Du Praw E.J. Evidence for a "folded-fibre" organization in human chromosomes. Nature, 1966, v.209, p.577-581.

48. Elgin S.C.R., Weintraub H. Chromosomal proteins and chromatin structure. Ann. Rev. Biochem., 1975» v.44, p.725-774-.

49. Felsenfeld G. Chromatin. Nature, 1978, v.271, p.115-122.

50. Foe V.E., Wilkinson L.E., Laird C.D. Comparative organization of active transcription units in Oncopeltus fasciatus.-Cell, 1976, v.9, p.131-146.

51. Forte M.A., Fangman W.L. Naturally occuring cross-links in yeast chromosomal DNA. Cell, 1976, v.8, p.425-431.

52. Franke W.W., Scheer U., Spring H., Trendelenburg M., Krohne G. Morphology of transcriptional units of rDNA.-Exp. Cell. Res., 1976, v.100, p.233-244.

53. Franke V/.?/., Scheer U., Spring H., Trendelenburg M.F., Zentgraf H. Organization of nucleolar chromatin.

54. The cell nucleus, 1979, v.7, p.4-9-95.

55. Eranke Y/.Y7., Scheer U., Trendelenburg M.E., Spring H., Zentgraf H. Absence of nucleosomes in transcriptionally active chromatin. Cytobiologie, 1976, v.13, p.401-434.

56. Eranke Y/.Y/., Scheer U., Trendelenburg M.E., Zentgraf H., Spring H. Morphology of transcriptionally active chromatin. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1978, v.42, P.755-772.

57. Garel A., Zolan M., Axel R. Genes transcribed at diverse rates have a similar conformation in chromatin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v.74, p.4867-4871.

58. Georgiev G.P., Neaospasov S.A., Bakayev V.V. Supranucleo-somal levels of chromatin organization. The cell nucleus, 1978, v.6, p.3-34.

59. Goldknopf I.L., Busch H. Modification of nuclear proteins: the ubiquitin-histone 2A conjugate. The cell nucleus, 1978, v.6, p.149-181.

60. Goodwin G.H., Sanders C., Johns E.W. A new group of chroma-tin-assotiated proteins with a high content of acidicand basic aminoacids. Eur. J. Biochem., 1973, v.38, p.14-19.

61. Gorovsky M.A., Glover C., Joiinmaim C.A., Keevert J.В.,

62. Grimes G.V/. Differentiation during encystment and excyst-ment in Oxytrichia fallax. J. Protozool., 1973» v.20, N.1, p.92-104.

63. Grouse L., Chilton M.D., McCarthy B.J. Hybridization of ribonucleic acid with, unique sequences of mouse deoxyribonucleic acid. Biochemistry, 1972, v.11, p.798-805.

64. Hadlaczky G., Sumner А.Т., Ross A. Protein-depleted chromosome s.1 .Structure of isolated protein-depleted chromosomes. Chromosoma, 1981, v.81, p.537-555.

65. Hadlaczky G., Sumner А.Т., Ross A. Protein-depleted chromosomes. II. Experiments concerning the reality of chromosome scaffolds.-Chromosoma, 1981, v.81, p. 557-567.

66. Harper F., Puvion-Dutilleul P. Non-nucleolar transcription complexes of rat liver as revealed by spreading isolated nuclei. J.Cell Sci., 1979, v.40,p.181-192.

67. Hewish D.R., Burgoyne L.A. Chromatin substructure: the digestion of chromatin DNA at regularly spaced sites by a nuclear deoxyribonuclease. Biochem. Biophys. Res. Com., 1973, v.52, p.504-510.

68. Hill R.S. A quantitative electron microscope analysis of chromatin from Xenopus laevis lampbrush chromosomes. -J.Cell Sci., 1979, v.40, p.145-169.

69. Hoerz 17., Zachau H.G. Deoxyribonuclease II as a probe for chromatin structure. Location of cleavage sites. J. Mol. Biol., 1980, v.144, p.305-327.

70. Hohmann P. In: Subcellular Biochemistry / Edit. Roodyn D.B. New York, 1978, v.5, p.87-127.

71. Hough B.R., Smith M.G., Britten E.G., Davidson E.M. Sequence complexity of heterogenous nuclear RNA in sea urchin embryos. Cell, 1975, v.5, p.291-299.

72. Hozier J., Benz M., Nehls P. 'The chromosome fibre: evidence for an ordered superstructure of nucleosomes. Chromoso-ma, 1977, v.62, p.301-317.

73. Huberman J.A. Structure of chromosome fibres and chromosomes. Ann. Rev. Biochem., 1973, v.42, p.355-378.

74. Ide Т., Nakane M., Anzai K., Andoh T. Supercoiled DNA folded by non-histone proteins in cultured mammalian cells. Nature, 1975, v.258, p.445-447.

75. Igo-Kemenes Т., Horz 17., Zachau H.G. Chromatin. Ann. Rev. Biochem., 1982, v.51, p.89-121.

76. Igo-Kemenes Т., Zachau H.G. Domains in chromatin structure.-Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1978, v.42, p.109-118

77. Isenberg J. Histones. Ann Rev. Biochem., 1979, v.48, p.159-191.

78. Jarorich Ы., Miller O.L. , Jr. Transcription of tandemly repeated genes in embryonal and larval tissues of Calli-phora erythrocephala. Chromosoma, 1982, v.87,p.561-570.

79. Jeppsen P.G.N., Bankier A.T. A partial characterization of DNA fragments protected from nuclease degradation in histone depleted metaphase chromosomes of the Chinese hamster. Hucl.Acids Res., 1979, v.7, p.49-67.

80. Kiryanov G.I., IJanamshyan Т.A., Polyakov V.Y., Pais D.,

81. Chentsov Y.S. Levels of granular organization of chromatin fibers. PEBS Lett., 1976, v.67, p.323-327.99» Kornberg R.D. Structure of chromatin. Ann. Rev. Biochem., 1977, v.46, p.931-932.

82. Kornberg R.D., Klug A. The nucleosome. Sci. Amer., 1981, v.224, N.2, p.48-60.

83. Laemmli U.K., Cheng S.H., Adolf K.W., Paulson J.R., Brown J.A., Bamibach \7.R. Metaphase chromosome structure: the role of nonhistone proteins. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1978, v.42, p.351-360.

84. Laird C.D., V/ilkinson L.E., Рое V.E., Chooi \7.E. Analysis of chrornatin-associated fiber arrays. Chromosoma, 1976, v.58, p.169-192.

85. Lamb M.M., Daneholt B. Characterization of active transcription units in Balbiani rings of Chironomus tentants.-Cell, 1979, v.17, p.835-848.

86. Langmore J.P., V/ooley J.C. Chromatin structure: investigation of a subunit of chromatin by dark field electron microscopy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v.72,p.2691-2695.

87. Levy В., Connor W., Dixon G.H. A subset of trout testies nucleosomes enriched in transcribed DNA sequences contains high mobility group proteins as ma^or structural components. J. Biol. Chem., 1979, v.254, p.609-620.

88. Lilley D.M., Jacob M.P., Houghton M. The nature of the interaction of nucleosomes with a eucaryotic RNA polymerase II. Nucl. Acids Res., 1979, v.7, p.377-399.

89. Lima-de-Faria A. The relation between chromomeres, re-plicons, operons, transcription "units, genes, viruses and palindromes. Hereditas, 1975, v.81, p.249-284.

90. Lipps H.J., Hantke K.G. Studies on the histones of the ciliate Stylonychia mytilus. Chromosoma, 1975» v.49, 509-520.

91. Lipps H.J., Morris N.R. Chromatin structure in the nuclei of the ciliate Stylonychia mytilus. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, v.74, p.230-234.

92. Lipps H.J., Hock A., Riewe M., Steinbruck G. Chromatin structure in the macronucleus of the ciliate Stylonychia mytilus. Nucl. Acids Res., 1978, v.5, N.12, p.4699-4709.

93. Lipps H.J., S apra G.R., Атшегтапп D. The histones of the ciliated protozoan Stylonychia mytilus. Chromosoma, 1974, v.45, p.273-280.

94. Littau V.C., Allfrey V.G., Frenster J.H., Mirsky A.E. Active ana inactive regions of nuclear chromatin as revealed by electron microscope autoradiography» Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1964, v.52, p.93-97.

95. Lund E.J. Reversibility of morphogenetic process in Bursaria. J. Exp. Zool., 1917, v.24, p.1-33.

96. Mace M.L., Daskal J., Busch H., Y/ray V.P., Wray V.r. Isolated metaphase chromosomes: scanning electron microscopic appearance of salt-extracted chromosomes. Cyto-bios, 1978, v.19, p.27-40.

97. Malcolm D.B., Somaerville J. The structure of nuclear ribonucleoprotein of amphibian oocytes. J. Cell Sci., 1977, v.24, p.143-165.

98. Marks D.B., Keller B.J. The use of proteolytic enzymesto determine the location of histones in chromosomal substructures. Arch. Biochem. Biophys., 1976, v.175, p.598-603.

99. Marsden M.P.F., Laemmli U.K. Metaphase chromosome structure: evidence for a radial loop model. Cell, 1979, v.17,p.849-858.

100. McKnight S.L., M.Bustin, Miller O.L., Jr. Electron microscopic analysis of chromosome metabolism in the Drosophila melanogaster embryo. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol.1978, v.42, p.741-754.

101. McKnight S.L., Martin K.A., Beyer A.L., Miller O.L.,Jr. Visualization of transcriptionally active chromatin. -The cell nucleus, 1979, v.7, p.97-122.

102. McKnight 3.L., Miller O.L.,Jr. Ultrastructural patterns of RNA synthesis during early embryogenesis of Drosophila melanogaster. Cell, 1976, v.8, p.305-319.

103. McKnight S.L., Miller O.L.,Jr. Electron microscopic analysis of chromatin replication in the cellular blastoderm Drosophila melanogaster embryo. Cell, 1977, v.12, p.795-804.

104. McKnight S.L., Miller O.L.,Jr. Post-replicative nonriboso-mal transcription units in D.melanogaster embryos. Cell,1979, v.17, p.551-563.

105. McKnight S.L., Sullivan N.L., Miller O.L.,Jr. Visualization of the silk fibroin transcription unit and nascent silk fibroin molecules on polyribosomes of Bombyx mori. -Progr. Uucl. Acids Res. and Mol. Biol., 1976, v.19,p.313-518.

106. McTavish C., Sommerville J. Macronuclear ША organization and transcription in Paramecium primaurelia. Chromosoma, 1980, v.78, p.147-164.

107. Meyer G.F., Hennig W. The nucleolus in primary spermatocytes of Drosophila hydei. Chromosoma, 1974, v.46,p.121-144.

108. Miller O.L.,Jr., Bakken A.H. Morphological studies of transcription. Acta Endocr. Suppl., 1972, v.168, p.155-177.

109. Miller O.L.,Jr., Beatty B.R. Visualization of nucleolar genes. Science, 1969, v.164, p.955-957.

110. Miller O.L., Beatty B.R., Hamkalo B.A., Thomas C.A. Electron microscopic visualization of transcription.-Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1970, v.35, p.505-509.

111. Miller O.L., Hamkalo B.A. Visualization of ЮТА synthesis on chromosomes. Int. Rev. Cytol., 1972, v.33, p.1-25.

112. Nasedkina T.V., Slesinger S.I. The structure of partly decondensed metaphase chromosomes. Chromosoma, 1982, v.86, p.239-249.

113. Nelson D.A., Perry W.M., Chalkley R. Sensitivity of regions of chromatin containing hyperacetylated histones to DNAseI.Biol. Bioph. Res. Commun., 1978, v.82, p.356-363.

114. Noll M., Thomas J.O., Korhberg R.D. Preparation of native chromatin and damage caused by shearing. Science, 1975,v.187, p.1203-1206.

115. Okada T.A., Comings D.E. Higher order structure of chromosomes. Chromosoma, 1979, v.72, p.1-14.

116. Okada T.A., Comings D.E. A search for protein cores in chromosomes: is the scaffold an artifact? Am. J. Hum. Genet., 1980, v.32, p.814-832.

117. Olins A.L., Olins D.E. Spheroidal chromatin units (nu-bo-dies). Science, 1974, v.183, p.330-332.

118. Oudet P., Gross-Bellard M., Chambon P. Electron microscopic ana biochemical evidence that chromatin structure is-a re -peating unit. Cell, 1975, v.4, p.281-300.

119. Pardon J.F., Cotter R.I., Lilley D.M.J., Worcester D.L., Campbell A.M., Yfooley J.C., Richards B.M. Scattering studies of chromatin subunits. Cold Spring Harb. Syrnp. Quant. Biol., 1978, v.42, p.11-22.

120. Pederson Т. Chromatin structure and gene transcription: nucleosome structure permit a new synthesis. Int. Rev. Cytol., 197S, v.55, p.1-22.

121. Pfeiffer V/., Zachau H.G. Accessibility of expressed and nonexpressed genes to a restriction nuclease. ITucl. Acids Res., 19S0, v.8, p.4621-4638.

122. Polj'ansky G.I. Geschlechtprocesse bei Bursaria truncatella 0.P.M. Arch. Protistenk., 1934, v.81, p.420-436.

123. Popenko 7.1., Vengerov Yu.Xu. The effect of various conditions of chromatin isolation on the nucleosomal structure of the isolated chromatin. Mol. Biol. Rep., 1978, v.4,p.45-50.

124. Prescott D.M., Murti E.G. Chromosome structure in ciliated protozoans. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1974, v.38, p.609-618.

125. Prowazek S. Protozoenstudien von Bursaria truncatella und ihre conjugation. Arb. Zool. Inst, \vien, 1899, v.2, p.195-224.

126. Puvion-Dutilleul P., Bachellerie J.P., Zalta J.P., Bern-hard \7. Morphology of ribosomal transcriptional units in isolated subnuclear fractions of mammalian cells. Biol. Cellulaire, 1977, v.30, p.183-19^.

127. Puvion-Dutilleul P., Bernadac A., Puvion D., Bernhard V;". Visualization of two different types of nuclear tran-scroptional complexes in rat liver cells. J. liltr. Res., 1977, v.58, p.108-117*

128. Rail S.C., Cole R.D. Amino acid sequence and sequence variability of the amino-terminal regions of lysine-rich histones. J.Biol. Chem., 1971, v.246, p.7175-7187

129. Rao Li.V.N., Prescott D.M. Micrinuclear RNA synthesis in Paramecium caudatum. J.Cell. Biol., 1967, v.33, p.281-286.

130. Renz M., Nehls P., Hozier J. Involvement of histone H1 in the organization of the chromosome fibre. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v.4, p.1879-1883.

131. Ris H. Levels of chromosome organization. In: Ann.

132. VI Europ. Congr. of electron microscopy. Jerusalem, 1976, p.21-25.

133. Ruthmann A. Autoradiographische und mikrophotometrische untersuchungen zur DNS-synthese im macronucleus von Bursaria truncatella. Arch. Protistenk., 1964, v.107,p.117-130.

134. Ruthmann A., Heckmann K. Pormwechsel una struktur des macronucleus von Bursaria truncatella. Arch. Protistenk., 1961, v.105, p.313-340.

135. Salpeter M.M., Bachmann L. Autoradiography with electron microscope. J.Cell Biol., 1964, v.22, p.469-477.

136. Samuel Ch., Mackie J., Sommerville J. Macronuclear chromatin organization in Paramecium primaurelia. Chromoso-ma, 1981, v.83, p.481-492.

137. Scheer U. Changes of nucleosome frequency in nucleolar and non-nucleolar chromatin as a function of transcriptions an electron microscopic study. Cell, 1978, v.13, p.535-549.

138. Scheer U. Structural organization of spacer chromatin between transcribed ribosomal RNA genes in amphibian oocytes. Eur. J. Cell Biol., 1980, v.23, p.189-196.

139. Scheer U. Identification of a novel class of tandemly repeated genes transcribed on lampbrush chromosomes of Pleurodeles waltlii. J. Cell Biol., 1981, v.88, p.599-603.

140. Scheer U., Sommerville J., Bustin M. Injected histone antibodies interfere with transcription of lampbrush chromosome loops in oocytes of Pleurodeles. J. Cell Sci.,1979,v,40, p. 1-20.

141. Scheer U., Sommerville J., Muller U. DNA is assembled into globular supranucleosomal chromatin structure by nuclear contents of amphibian oocytes. Exp. Cell Hes.,1980, v.129, p.115-126.

142. Scheer U., Spring II., Trendelenburg M.E. Organization of transcriptionally active chromatin in lampbrush chromosome loops. The cell nucleus, 1979> v.7, p.3-47.

143. Scheer U., Trendelenburg M.E., Erahke YM7. Transcription of ribosomal RITA cistrons. Exp. Cell Res., 1973, v.80, p.175-190.

144. Scheer U., Trendelenburg M.E., Eranke YJ.V/. Effects of actinomycin D on the association of newly formed ribo-nucleoproteins with the cistrons of ribosomal RITA in Triturus oocytes. J. Cell Biol., 1975, v.65, p.163-179.

145. Scheer U., Trendelenburg M.I?., France W.I7. Regulation of transcription of genes of ribosomal RITA during amphibian oogenesis. J. Cell Biol., 1976, v.69, p.465-489.

146. Scheer U., Trendelenburg M.F., Krohne G., Franke Y/.W. Length and patterns of transcriptional units in the amplified nucleoli of oocytes of Xenopus laevis.Chromosoma, 1977, v.60, p.147-167.

147. Scheer U., Zentgraf H. ITucleosomal and supranucleosomal organization of transcriptionally inactive rDNA circles in Dytiscus oocytes. Chromosoma, 1978, v.69, p.245-254.

148. Schmahl 0. Die Neubilaung des Peristoms bei der Teilung von Bursaria truncatella. Arch. Protistehk., 1926, v.54, N.3, p.365-403.

149. Serra J,A. Contribution to a physiological interpretation of mitosis and meiosis. II. The prophasic appearing of the spiralization. Portugaliae Acta Biol., 1947, v.2, p.45-90.

150. Shick V.V., Belyavsky A.V., Bavykin S.G., Mirzabekov A.D. Primary organization of the nucleosome core particles. Sequential arrangement of histones along DNA. J.Mol. Biol.1980, v.139, p.491-518.

151. Silverman L., Glick D. The reactivity and staining of tissu proteins with phosphotungstic acid. J. Cell Biol.,1969, v.40, p.761-767.

152. Simpson R. Structure of chromatin containing extensively acetylated H3 and H4. Cell, 1978, v.13, p.691-700.

153. Tata J.R., Hamilton M.R., Cole R.D. Membrane phospholipids associated with nuclei and chromatin: melting profile, template activity and stability of chromatin. J. Mol. Biol., 1972, v.67, p.231-242.

154. Todd R.D., Garrard W.T. Two-dimensional electrophoretic analysis of polynucleosomes. J.Biol. Chem., 1977, v.252, p.4729-4738.

155. Trendelenburg M.F., Gurdon J.B. Transcription of cloned Xenopus ribosomal genes visualized after injection into oocyte nuclei. Nature, 1978, v.276, p.292-294.

156. Trendelenburg M.F., Scheer U., Zentgraf H., Franke \v.w. Heterogeneity of spacer length in circles of amplified ribosomal DNA of two insect species: Dytiscus marginalis ana Acheta domesticus. J.Mol. Biol., 1976, v.108, p.453-470.

157. Trendelenburg M.F., Spring H., Scheer U., Franke W.YT. Morphology of nucleolar cistrons in a plant cell Aceta-bularia med:terranea. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, v.71> p.3626-3630.

158. Tsanev R., Petrov P. The substructure of chromatin and variation as revealed by electron microscopy. J. Micr. Biol. Cell, 1976, v.22, p.11-18.

159. Van Holde K.E., Saharasrabuddhe C.G., Shaw B.R. A model for particulate structure in chromatin. Nucl. Acids Res., 1974, v.11, p.1579-1586.

160. Varshavsky A.J., Nedospasov S.A., Schmatchenko V.7., Bakayev V.V., Chumakov P.IT., Georgiev G.P. Compact form of SV-40 viral minichromosome is resistant to nuclease: possible implications for chromatin structure. Nucl. Acids Pes., 1977, v.p.3303-3325.

161. Vengerov Yu.Yu., Popenko V.I. Changes in chromatin structure induced by EDTA treatment and partial removal of histone H1. Nucl. Acids Pes., 1977, v.p.3017-3027.

162. Vidali G., Boffa L.C., Allfrey V.G. Selective release of chromosomal proteins during limited DNAsel digestion of avian erythrocyte chromatin. Cell, 1977, v.12, p.409-415.

163. Weintraub H., Groudine M. Chromosomal subunits in active genes have an altered conformation. Science, 1976, v.193, p.848-856.

164. Weisbrod 8., Groudine II., Weintraub H. Interaction of HMG 14 and 17 with actively transcribed genes. Cell, 1980, v.19, p.289-301.

165. Wilson 3.B. The cell. / McMillan. N.Y.,1925. p.3^8.

166. Wolfe J. Structural aspects of amitosis: a light and electron microscope study of the isolated macronuclei of Paramecium aurelia and Tetrahymena pyriformis. Chrотоsoma, 1967, B.23, s.59-79.

167. Woodcock C.L.F., Safer J.R., Stanchfield J.E. Structural repeating units in chromatin. Exp. Cell Pes., 1976, v.97, p.101-110.195» Worcel A. Molecular architecture of the chromatin fiber. -Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1978, v.42, p.313-324.

168. ZayetzV.M., Bavykin S.G., Karpov V.L., Mirzabekov A.D. Stability of the primary organization of nucleosome core particles upon some conformational transitions. Nucl. Acids Res., 1981, v.9, p.1053-1068.

169. Zentgraf H., Muller U., Eranke v/.v,r. Supranucleosomal organization of sea urchin sperm chromatin in regularly arranged 40 to 50 nm large granular subunits. Eur. J. Cell Biol., 1980, v.20, p.254-264.

170. Zentgraf H., Muller U., Prahke W.W. Reversible in vitro packing of nucleosomal filaments into globular supranucleosomal units in chromatin of whole chick erythrocyte nuclei. Eur. J. Cell Biol., 1980, v.23, p.171-188.