Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Стресс - индуцированные изменения метаболизма липидного компонента мембранных структур

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Стресс - индуцированные изменения метаболизма липидного компонента мембранных структур"

ереванский государственный университет

РГБ ОД

.. 9 (унт 'ОНг; На правах рукописи

ШАЛДЖЯН АЛЛА ЛЕВОНОВНА

СТРЕСС - ИНДУЦИРОВАННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МЕТАБОЛИЗМА ЛИПИДНОГО КОМПОНЕНТА МЕМБРАННЫХ СТРУКТУР

03.00.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ереван - 1995

Работа выполнена на кафедре биохимии Ереванского медицинского университета им. Мхитара Гераци.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Агаджанов М. И. •кандидат биологических наук Мкртчян С. Л.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

действительный член НАН, профессор Карагезян К. Г. доктор биологических наук, профессор Баджинян С. А.

Ведущая организация: Ереванская Сельскохозяйственная Академия.

Защита диссертации состоится /¿/.-¿^с/У/у" 1995г. в ча-

сов на заседании специализированного совета £(.055.01.08 Ереванского государственного университета по адресу: Ереван-375025, ул. Алека Манукяна 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ереванского государственного университета (375025, ул. А. Манукяна 1).

Автореферат разослан // "- ¿¿-¿¿''л¿у)1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

/

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В многообразных клеточно-молекулярных механизмах повреждения мембранных структур при различных патологических :остояниях все большая роль придается расстройствам метабо-лизма их фос-{юлипидного компоненета, рассматриваемым в качестве существенного звена и доке пускового фактора в инициации молекулярной дезорганизации биомемб-)ан, сопровождающейся изменениями их конформационных и динамических яойств.

Среди мультиформных форм расстройств метаболизма фосфолипидно-о бислоя мембран, значительная роль принадлежит их перекисному окисле-ию (Bidlack & al. ,1973; Е. Бурлакова и соавт., 1974, 1982; М. Агаджа-ов.1976; Dinis & al. , 1993; Miller & al. , 1993; Fujita & al. , 1993).

Согласно современным представлениям, процессы свободноради-ального окисления липидов при их выраженной активации, являются универ-1льным механизмом повреждения клетки на уровне мембранных структур (Е. урлакова и соавт., 1982,1990; К. Карагедян и соавт., 1989; Ф. Меерсон и ивт. , 1988; Sakaki & al. ,1988; Misic & al., 1992; M. Агаджанов,1993; sterbauer, 1993; Iguchi & al. ,1993; Van-Acker & al. ,1933). Наряду с из-йточной липопероксидацией, при ряде патологических процессов существен ->е значение придается продуктам метаболической деградации фосфолипидов, »разующимся под влиянием фосфолипаз А(ФЛ А), особенно водораствори-JM лизофосфолипидам, оказывающим мембранолитическое действие (Jacson al. ,1984), при этом существенно, что ингибирование ФЛ А2 значительно

едупреждает процесс деградации мембранных структур (Zalewski & al. >88). 4

При инкубировании фосфолипидных липосом с ФЛ А£ обнаруживае-I корреляция между степенью перекисного окисления липидов (ПОЛ) и ин-гсивностью деацилирования фосфолипидов, что объясняется облегчением фе-ентной атаки фосфолипидов при нарушении структурной стабильности мемб-j в условиях повышенной липопероксидации (Sevanian & al., 1988). Ре*у-•аты многочисленных исследований при различных экстремальных состояли-в том числе и стресс-реакциях, свидетельствуют об интенсивном высвобо-ении из фосфолипидов свободньк жирных кислот (СЖК), (М. Агаджа-:, 1978; Hershok & al. 1989; Magnoni & al.,1988; Umemura et al.,1992; M. лконян, 1993; Alessio, 1993), обладающих различными свойствами, вклю-способность ингибировать Fe2+- зависимое ПОЛ в микросомах печени isubramanian & al. ,1989), предупреждать деструктивные изменения в пла-тических и митохондриальньк мембранах (Hulssman & al. , 1990),

ингибировать Са2+-кальмодулин зависимую протеинкиназу II (С. Луценко, С. Северин, 1989). Интенсификация процессов ПОЛ и деацилирования фос-фолипидов затрагивают вязкость и упорядоченность фосфолипидного бислоя в целом, изменяя липидное микроокружение мембраносвязанных ферментов. Наиболее отчетливо проявляется роль бислоя в отношении Na+-K+- и Са2+-АТ-Фаз (А. Болдырев, 1979; Naupert, 1988; Cooke, Burden, 1990), хотя установлено значение фосфолипидов и в формировании каталитически активного кон-формационного центра микросомальной эпоксигидролазы (И. Рукавишников и соавт. ,1990); известно также о влиянии состава фосфолипидного матрикса на активность цитохрома Р-450 (П. Дубовский и соавт. ,1990).

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение индуцированных иммобилизационным стрессом (ИМО) изменений метаболизма липидного компонента мембранных структур, их взаимосвязь с пе-рекисным окислением липидов, а также коррекция этих изменений с помощьк антиоксиданта.

В соответствии с поставленной целью, основные задачи исследовани были сформулированы следующим образом:

1) При остром и повторяемом ИМО исследовать в крови динамик; ПОЛ и содержание витамина Е, а также активность антиоксидантной систе мы. Исследовать липидный состав эритроцитарных мембран и в связи с эти; активность ион-транспортных АТР-аз.

2) При остром ИМО и под воздействием экзогенной фосфолипаз] Aj (ФЛ А2) определить уровень ПОЛ, а также количественное содержали и фракционный состав свободных жирных кислот в биомембранах печен крыс.

3) В различных субклеточных фракциях исследовать зависимое ПОЛ от состояния структурированности ненасыщенных жирных кисл<

(НЖК).

4)' Используя синтетический антиоксидант фенозан К(ФК) из; чить взаимосвязь между липидной пероксидацией и ФЛ Aj.

5) Изучить адреналин-зависимую модификацию ферментативного ги ролиза фосфолипидов (ФЛ) и ее взаимосвязь с ПОЛ в различных субклет чных фракциях печени. Научная новизна работы.

I. Выявлены и охарактеризованы особенности стресс-индуцированнс липолиза в плазматических мембранах и субклеточных фракциях (митохо! рии, микросомы) печени. Получены данные относительно гетерогенности п| дставительства ФЛ А и различной степени их активирования в исследованн структурах при ИМО;

2. Установлено отчетливо воспроизводимое, доза-зависимое ингибиру-эщее действие свободных ненасыщенных жирных кислот на процессы пере-исного окисления липидов в митохондриях и микросомах печени. Обнаруже-о, что при предварительной инкубации с индукторами перекисного окисления, олее выраженный ингибирующий эффект в отношении микросомальной фрак-,ии оказывает линолевая, а митохондриальной - арахидоновая кислоты.

3. Обнаружено, что экзогенные ненасыщенные жирные кислоты в юдельной системе, воспроизводящей активирование ацилтрансферазной реак-ии, значительно усиливают ПОЛ, что указывает на большую подвержен-ость к переокислению НЖК, входящих в состав фосфолипидов биомембран о сравнению с их свободными аналогами.

4. Доказано, что экзогенная ФЛ А^ выраженно ингибирует процессы ипоперюксидации, причем в микросомах эффект зависит от концентрации фе-мента, тогда как в митохондриях наблюдается полное подавление ПОЛ.

5. Выявлена взаимосвязь между интенсивностью ПОЛ и активное-ью ФЛ Ау Показано, что в биологических системах синтетический антиок-вдант ФК доза-зависимо ингибирует активность ФЛ А^ а в модельных -ктивирует.

6. Установлена адреналин-зависимая модификация ферментативного 1Дролиза ФЛ печени, свидетельствующая, о значительном повышении актив-ости ФЛ А в микросомах, плазматических мембранах и невыраженном понижении активности фосфолипаз в митохондриальной фракции.

7. Совокупность данных, полученных в условиях экспериментального ^мобилизационного стресса и анализ результатов модельных опытов, и их нтегральная оценка позволили выдвинуть представление о наличии метаболи-:ской кооперации между стресс-лимитированной адренергической индукцией роцессов фосфолиполиза и перекисным окислением липидов.

Научно-практическая ценность работы. Совокупность полученных 1нных, сформулированных положениий и выводов, вытекающих непосредст-гнно из фактического материала, позволила определить практическую значи-ость работы. Последняя заключается в выдвижении нового подхода в борьбе активацией ПОЛ, сущность которого заключается во включении в комп-:кс средств антиоксидантной защиты клетки в качестве ингибиторов повы-енной липоксигенации НЖК, что в комбинации с известными антиоксидан-1ми, ловушками свободных радикалов, ингибиторами гидроперекисей, блокадами катализаторов свободнорадикального окисления и активаторами ферме-гов антирадикальной защиты клетки (СОД, каталаза, глутатионпероксидаза), эжет повысить эффективность антиоксидантной терапии при различных патетических состояниях.

Апробация работы.Основные результаты работы доложены и обсу ждены на XVI-ой республиканской научной конференции молодых медико] ► Грузии, Бакуриани (1987); IV-ой республиканской молодежной конференцш

по физико-химической биологии (1987); на итоговых научных сессиях Ереван ского медицинского института Ереван (1987, 1988); на XXII симпозиум! FEBS, Швеция, Стокгольм (1993).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 119 страница: машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материала ] методов исследований, результатов собственных исследований и их обсужде ния, заключения, выводов и литературного указателя. Работа иллюстрированн 33 рисунками. Указатель литературы содержит 174 источника, из которых 5 отечественные, 123 зарубежные.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для разработки и решения поставленных задач был подобран ряд экс периментальных методов,"позволяющих наиболее полно изучить функциональ ное состояние липидного бислоя различных мембранных фракций в норме, пр стрессе, а также в некоторых модельных системах и установить взаимосвязь

ПОЛ.

1. Эритроцитарные мембраны получали по методу Limber et а].(1970] основанному на отделении эритроцитов от плазмы центрифугированием с пос ледующим промыванием эритроцитарной массы.

Митохондриальные и микросомальные мембраны получали методо дифференциального центрифугирования в 0,15М растворе KCl по Schneider (1948) и И. Карузиной и А. Арчакову (1977).

Плазматические мембраны получали согласно модифицированному ме тоду Невилла и А. В. Поспелова (1977) в градиенте плотности сахарозы. < < степени их чистоты судили по активности 5х- нуклеотидазы, являющейся ма{ керным ферментом для плазматических мембран (Chern et al. ,1983).

2. СЖК выделяли по методу К. Hinton, М. Dobrota (1970) посi инкубации в течение 1 часа в среде, содержащей ионы Са2\ Количественнь: и качественный состав СЖК определяли на газожидкостном хроматограф "Chrom-5" на стеклянных колонках с использованием в качестве неподвижнс фазы полиэтиленгликольсукцината. Активность фосфолипаз А определяли г разнице СЖК в контрольных и опытных образцах.

3. Уровень ПОЛ определяли по методу Ю. А. Владимирова и А. 1 Арчакова (1972) по цветной реакции малонового диальдегида (МДА) с 2-ti обарбитуровой кислотой (ТБК); оптическую плотность окрашенного раство| измеряли при 535 нм и выражали в нмоль МДА/мг белка.

- 5 -

4. Белок измеряли по Lowry et а].(1951).

5. Фоновые липидные перекиси определяли по Yoshioka, Kawada 1985). Метод основан на определении ТБК-окрашенных продуктов в бутано-1ЬНОй фазе, т. е. промежуточных или вторичных продуктов переокисления ли-идов. Колориметрировали при 535 нм, а концентрацию выражали в нмоль ЛДА/мг белка тканей.

6. Определение диеновых конъюгатов (ДК) проводили по методу, ¡писанному ЮА.Владимировым и А.ИАрчаковым (1972). Сущ-ность в ом, что в молекулах НЖК при образовании гидроперекисей появляется сис-ема сопряженных двойных связей, определяемая при 233 нм (СФ-ЛОМО-. !б). Содержание ДК выражали в мкмоль/г ткани.

7. Витамин Е определяли по Duggan (1954) флуорометрически при гаксимуме возбуждения 295 нм и максимуме флуоресценции 330 нм на флуо-есцентном спектрофотометр» Hitachi (модель МРГ-2А). Количество витами-а Е выражали в мкмоль/мг белка.

8. Супероксиддисмутазу определяли по Nishikimi et al.(1972) по ин-ибированию генерации супероксидных анионов в модельной системе феназин-етосульфат-ЫАОН-нитротетразолий синий при длине волны 530 нм.

9. Определение активности глкжозо-6-фосфат-дегидрогеназы (ГДГ) роводили спектрофотометрически по Glock and Мс. Lean по изменению <орости восстановления NADPH в присутствии тканевого экстракта при 340 м.

10. Активность ион-транстпортных АТФ-аз определяли по методу Ци-ьмер и Тарве (1975). Активность фермента выражали в мкмоль неорганичес-эго фосфора на мг белка. Содержание фосфора определяли по Piske and

ubbarow (1925).

11. Определение общего холестерина (ОХ) проводили по методу, опи-мному Н. А. Сентябовой (1977). Метод основан на цветной реакции Злат-ша-Зака после экстрагирования холестерина изопропиловым спиртом. Свобо-4ый холестерин (СХ) осаждали дигитонином и определяли по той же реак-т. Эстерифицированный холестерин (ЭХ) определяли по разнице между X и СХ. Интенсивность цветной реакции определяли колориметрически при >0 нм. Содержание холестерина выражали в мкг/мг белка.

12. Определение суммарной пероксидазной активности (СПА) проводи-I по методу, описанному Покровским А. А.(1969). В основе метода лежит юсобность гемопротеинов в присутствии перекиси водорода катализировать ;исление бензидина с образованием окрашенных продуктов. Величину опти-ской плотности определяли при 600 нм а выражали в единицах оптической отности на 1 мл плазмы крови.

13. Экстракцию липидов проводили по Folch et al.(1957) с последующим фракционированием их методом тонкослойной хроматографии на силика-геле.

14. Содержание отдельных фракций фосфолипидов исследовали методов одномерной восходящей хроматографии на бумаге (FN-11-ГДР), пропитание» кремневой кислотой по Marinetti, Stotz (1956), в дополнении А. А. Смирно» и сотр.(1961) и К. Г. Карагезяна (1969).

Всего в исследованиях использовано 505 белых беспородных крыс И МО вызывали у животных 150 минутной фиксацией головы и конечности на специальных станках. Разовая И МО считалась острым стрессом, а повто ряемая ежедневно ИМО от 2 до 7 раз - поворяемым или хроническим.

Полученный материал подвергнут статистической обработке с оценко! статистической достоверности по критерию Стьюдента.

В (заботе использовали адреналин, маргариновую, линолевую и арахи доновую кислоты, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, сфингомиелт монофосфоинозитфосфатид производства "Sigma" (США); 1-ацил-2-[,4С] олеил-фосфатидилхолин фирмы "Amersham" (Англия); силикагель (Chemapo ЧССР), бумага хроматографическая (Filtrak FN-11-ГДР). В остальном испс льзованы препараты фирмы Reanal (ВНР) и отечественного производства.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Активность фосфолипаз А в субклеточных фракциях печени при иммобя лвзационном стрессе

Согласно современным представлениям, субпопуляции ФЛ А локал1 зованы во всех субклеточных фракциях (X. Брокерхоф, Р. Дженсен,1978), i соотношение подвержено значительному варьированию, хотя общеприняты является доминирование в микросомах ФЛ А,. Указанное обстоятельство го лучило свое подтверждение данными настоящего исследования, согласно кот« рым прирост СЖК у контрольных животных при деацилировании мембраннь фосфолипидов печени реализуется в основном за счет насыщенных кислот, п( одновременном уменьшении в контроле индекса ненасыщенности (ИН). До таточно высока активность ФЛ А2 в митохондриальных мембранах, о чем св: детельствует факт высвобождения СЖК из митохондриальных фосфолипид не только за счет пальмитиновой кислоты, но и за счет НЖК, в том числе арахидоновой, относительное содержание которой возрастает с 3,6 до 9,1е (рис.1). Хотя о представительстве субпопуляций ФЛ А в плазматическ мембранах имеются достаточно разноречивые сведения, согласно полученнь нами данным ФЛ А, и А2 функционируют в плазматических мембранах в ра

ной степени.

Установлено, что при ИМО происходит значительная активация провесов деацилирования мембранных фосфолипидов, наблюдаемая, особенно ыраженно, в микросомальной и митохондриальной фракциях печени, характе-язукмцихся, по сравнению с плазматическими мембранами, более высоким эовнем ПОЛ. Существенно, что ИМО присущи также высокие исходные «чения фонового содержания СЖК, свидетельствующие об изначальном етивировании процессов липолиза.

Особую важность приобретает, выявленное при ИМО, преимущест-:нное повышение в субклеточных фракциях печени активности ФЛ А,.

Рис.1а

•ис.1 Содержание СЖК в митохондриях (а) и микросомах (б) печени крыс при ИМО (в

нм/мг белка).

означения: КО, СО - контрольные пробы инкубированные с хлороформом; К1, С1 - пробы, где хлороформ добавлялся после инкубации; К - контроль; С - животные, перенесшие стресс; + - р>0,5.

Рис.1б

Подтверждением тому является увеличение индекса ненасыщенности при акти вированном Са2+ выходе СЖК в микросомах и митохондриях, и особенно, во зрастание удельной доли арахидоновой кислоты (практически отсутствующей : микросомах печени) в общей сумме СЖК. Полагают, что активация ФЛ А при интенсификации ПОЛ является защитной реакцией, поскольку активност одного из основных ферментов антирадикальной защиты - глютатионперокси дазы (ГПО) находится в прямой зависимости от ФЛ А2, которая, деацили руя гидроперекиси полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), делает и более доступными для их восстановления ГПО (Беуашап & а1. ,1983] (Рис.1)

Обращает на себя внимание многообразие количественных сдвигов с стороны содержания Са2+-индуцированного высвобождения СЖК из фосфс липидов плазматических мембран и субклеточных фракций при ИМО. Та1 если при деацилировании эндогенных фосфолипидов содержание СЖК^. 0 микросомах возрастает в 3 раза, то в митохондриях двухкратно.

При ИМО неоднозначны также изменения содержания С18.., жирных кислот в мембранных структурах печени. В частности, уровень последних в микросомах увеличивется двукратно, в митохондриах более чем в 5 раз, а в плазматических мембранах в 3 раза.

Относительно инертными при стрессе оказались жирные кислоты С18.,, количество которых лишь несколько возрастает в плазматических и ми-гохондриальных мембранах, хотя в микросома^ их уровень повышается приме-эно в 2,5 раза. В отношении арахидоновой кислоты наиболее существенные изменения наблюдались в микросомальной фракции печени крыс. При анали-je полученных данных, отмечается достаточная вариабильность ИН различных нембран при ИМО. Так, если при исследовании микросом ИН повышается три стрессе от 51,4 до 77,0, то в митохондриях и плазматических мембранах иблюдается его снижение. Заслуживает внимания достаточно выраженное увеличение суммарного содержания СЖК во всех исследованных фракциях гечени в условиях ИМО. В частности, количество последних в микросомах, :оставляя в контроле 13,4 нм/мг белка, достигает до 36,7 нм/мг при ИМО, I митохондриях уровень СЖК увеличивается с 37,7 до 85,2 нм/мг, а в плаз-«тических мембранах с 315,5 до 618,1 нм/мг белка. На основании получен-гых данных можно констатировать, что усиление ферментативного гидролиза DA при ИМО с преимущественным активированием ФЛ Aj тесно связано с величением наблюдаемой при ИМО липидной пероксидацией. влияние ненасыщенных жирных кислот на ПОЛ в печени.

Процессы ПОЛ, усиливающиеся при различных патологических сос-ояниях, в том числе при стрессе (Э. Микаелян,1978; С. Мкртчян и соавт. , 987; А. Шалджян и соавт. , 1987), сопровождаются увеличением активности 0Л А, что приводит к выбросу НЖК. Последние, при наличии комфортных словий, могут подвергаться переокислению, что достаточно четко было про-емонстрировано в модельных системах (В. Мхитарян и соавт. ,1966), и, воз-южно, будут служить инициаторами переокисления уже эстерифицированных ¿плов ФЛ плазматической и субклеточных мембран. В то же время, по дан-ым некоторых исследователей (Hong et al. ,1984; Sevanian et al. , 1983), ФЛ ij оказывает ингибирующее действие на ПОЛ, и, следовательно, вопрос о эли метаболитов деградации фосфолипидов под действием ФЛ Aj (НЖК) процессах липидной пероксидации продолжает оставаться недостаточно изу-:нным. Исследовано влияние линолевой и арахидоновой кислот на ПОЛ в ^бклеточных фракциях печени в условиях in vitro. Опыты проведены с микромами и митохондриями, т. е. с инфраструктурами клеток, где наиболее ин-исивно протекают процессы ПОЛ. Одновременно, для сравнительного ана

лиза, ■ исследовано влияние НЖК на липидную пероксидацию в гомогенат печени. Изучение воздействия линолевой и арахидоновой кислот на интен сивность ПОЛ при их инкубации с индукторами перекисного окисления (Ре2 + НАДФН2) выявило общую направленность изменений уровня МДА в суб клетоных фракциях и гомогенате печени, выражающуюся в уменьшении накоп ления МДА при действии НЖК в концентрации Ю-4 М. Наиболее отчетлив-эти изменения проявляются при воздействии НЖК на гомогенат, причем ара хи доновая кислота практически не влияет на ПОЛ, в то время как линолева снижает интенсивность ПОЛ почти в 3 раза. В концентрации КИМ линоле вая кислота лишь в первые 30 мин уменьшала накопление МДА в гомогенат печени, причем к концу 60 мин, эти изменения регулировались. Сходная кар тина наблюдается и при изучении микросом, однако, в этом случае отчетлива тенденция к уменьшению активности ПОЛ проявляется и со стороны арахи доновой кислоты в концентрации 10'4М. При однонаправленности действи исследуемых НЖК на интенсивность ПОЛ, более выраженное понижающе действие на уровень МДА в микросомах печени оказывает линолевая кислота при этом четко определяется доза-зависимость в концентрациях последней о 10'4 до 10"6М. В митохондриях печени наиболее выраженное ингибирующе действие на интенсивность ПОЛ оказывала арахидоновая кислота (10"4М] Существенно, что несмотря на несколько парадоксальный всплеск ПОЛ к 30 ой мин, при действии линолевой кислоты (10'4М), общая скорость переокис ления при этом также была ниже контрольных значений (на 62,2%), (рис.2).

Таким образом, выявлен отчетливый доза-зависимый ингибирующи эффект НЖК на ПОЛ, при этом, если в микросомах большую активност проявляла линолевая кислота, то в митохондриях - арахидоновая, что по-види мому, обусловлено различными скоростями окисления указанных жирных кис лот в различных органеллах клетки. Исследовалось влияние НЖК, предвари тельно инкубированных в течение 15 мин с митохондриями и микросомами пе чени, с последующим добавлением в среду инкубации инициаторов ПОЛ через 30 мин определялось содержание МДА, что свидетельствовало об инги бирующем воздействии НЖК на ПОЛ, причем в данном случае существеннс что угнетающее влияние. арахидоновой и линолевой кислот на интенсивное! ПОЛ носит доза-зависимый характер. Более того, интересным является почт полный параллелизм в действии обеих кислот в микросомах и митохондрия; Следовательно, на основании полученных данных, следует считать устаноЕ ленным факт подавления скорости окисления липидов свободными НЖК. Пс лученные результаты находятся в соответствии с даннными №еЬаи! Башиеквоп (1968) и ЬокевЬ & а1.(1980), показавшими, что свободная арахк доновая кислота является Неподходящим субстратом для переокисления.

6

'ис.2 Влияние НЖК в митохондриях (а) и микросомах (б) печени крыс при одновременном инкубировании жирных кислот и индукторов переокисления.

Обозначения: 1 - контроль, 2 - линолевая кислота 10"4М; 3 - линолевая кислота КИМ; 4 - арахидоновая кислота 10'4М; 5 - арахидоновая кислота 10'6М; * - достоверные данные.

Для выяснения значения структурированности НЖК в их эффектах на □Л, арахидоновую и линолевую кислоты предварительно в течение 60 мин

кубировали в среде, содержащей КоА, М82+ и АТФ, т. е. в системе, зсобствующей активированию ацилтрансферазной реакции, и тем самым граиванию экзогенных жирных кислот в фосфолипиды. Установлено, что «убация микросом и митохондрий в этих условиях способствует увеличению ДА почти вдвое по сравнению с инкубацией в трис-буфере. Добавление КК несколько потенцировало данный эффект, причем меньшие дозы делали | эффективнее. Эти данные, свидетельствуют о большей подверженности гслению НЖК, находящихся в составе ФЛ мембран, по сравнению с их бодными аналогами, что укладывается в рамки существующих представле-I. Так, Тог^ & а1. , (1983) показали способность КоА-производных паль--иновой и олеиновой кислот резко усиливать, а свободных НЖК ингибиро-' ь процессы ПОЛ, что, по их мнению, обусловлено детергентоподобным ствием КоА-производных и их связыванием с мембранами, что способству-« большей подверженности пероксидации (рис.3).

М|ГГОЧОПД|>ИН

Рнс.З Уровень МДА (в нм/мг белка) при предварительной инкубации митохондрий и микро-

сом в течение 1 часа с НЖК в среде, способствующей встраиванию НЖК в фосфолипиды. 1 - среда 1 (трис-НС1 буфер), 2 - среда 2 (КоА, Mg2\ АТФ); 3 - среда 1 + Л.К. 10"4М; 4 - среда 1 + А.К, 10'4М; 5 - среда 2 + Л.К. 10"6М; 6 - среда 2 + Л.К. 10"4М; 7 - среда 2 + А.К. 10-6М; 8 - среда 2 + А.К. 10"4М; Л. К. - линолевая кислота; А. К. - арахидоновая кислота; * - р<0,05 по отношению к графе 1; + - р<0,05 по отношению к графе 2.

Не исключается также, что инициация образования более богатых НЖК фосфолипидов может ускорить ПОЛ, поскольку "разжижение" структуры мембран этими фосфолипидами является фактором, интенсифицирующим процесс переокисления (Е. БурЛакова и соавт, 1985). Не исключена также пространственная разобщенность свободных НЖК и индукторов ПОЛ, которые, иницируя переокисление в гидрофобной фазе клеточных мембран, образуют гидроперекисные радикалы, не способные диффундировать в цитоплазму, и процесс окисления ограничивается лишь в пределах структурированного фос-фолипидного бислоя мембраны.

Эффекты фосфолиназы А? на процессы ПОЛ в печени.

Полученные данные об одновременном усилении ПОЛ и активировании ФЛ А при иммобилизационном стрессе и публикации относительно ин-

ирующего действия ФЛ А2 на липидную пероксидацию (Hong & al. , 14; Sevanian & al. ,1983), явились предпосылками для изучения непосредс-нного действия влияния ФЛ А2 на ПОЛ в модельной системе. Как и сле-яло ожидать, количество СЖК под влиянием ФЛ Aj в микросомах и ми-ондриях печени резко возрастает, в основном за счет НЖК. Существен-л является то обстоятельство, что. если содержание основного компонента ыщенной фракции - пальмитиновой кислоты практически не изменяется, то вень НЖК, особенно арахидоновой кислоты резко возрастает (22,5 раз в охондриях и 16,2 раза в микросомах). Согласно Брокерхофу и со-(1978), ФЛ А2 обнаруживает большую активность в митохондриях, не-1И в микросомах, что, возможно обусловлено большей ненасыщенностью охондриальных ФЛ по сравнению с микросомальными.

Проведенные исследования показали, что ФЛ Aj при инкубации с охондриями высвобождает намного больше НЖК, чем из ФЛ микросом. л этом наблюдается и качественное различие; в то время как рост ИН сос-1яет в митохондриях 147%, в микросомах - лишь 45% (рис.4).

4 Влияние ФЛ А2,на суммарное содержание СЖК (I) (в нм/мг белка) и ИН (II) в су-леточных фракциях печени. KMX - контроль митохондрий (без воздействия фермента); X - после 30 мин инкубации митохондрий с ФЛ А2 KMC - контроль микросом (без воздействия фермента); ФМС - после 30 мин инкубации микросом с ФЛ А2

и изучении ингибирующего действия ФЛ А2 на процессы липопероксида-установлено, что инкубация фермента с микросомами печени приводит к [влению ПОЛ в зависимости от его концентрации в инкубационной среде, ду тем как в митохондриальной фракции обнаружено полное подавление ¡нации ПОЛ при всех использованных концентрациях ФЛ (рис.5).

л

А

.6

Рис.5 Ингибирование накопления МДА в митохондриях (а) и микросомах (б) печени крыс при воздействии различных концентраций ФЛ А2 Концентрации фермента: I - 10 мкг/мл, II - 5 мкг/мл, III - 1 мкг/мл,

Следует обратить внимание на то обстоятельство, что подавление ПОЛ со стороны ФЛ А некоторыми исследователями (Hong & al. ,1984) рассматривается в качестве одного из звеньев антиоксидантного ферментативного процесса, осуществляемого в клетке системой глутатионредуктаза-глута-тионпероксидаза. Поскольку последние локализуются в цитоплазме и их доступ в гидрофобную зону мембран, где происходит цепной процесс переокисления, достаточно ограничен, происходит активирование ФЛ А2, отщепляющей уже окисленные жирнокислотные остатки, которые, диффундируя в цитоплазму, подвергаются восстановлению этой системой и уже не могут служить источниками радикалообразования для дальнейшего продолжения ПОЛ. Влияние антиоксиданта на активность фосфолипазы А2 и уровень ПОЛ

в печени.

Как уже указывалось, мнения различных авторов о роли ФЛ А^ в процессах ПОЛ не совпадают. Некоторые из них склоняются к гипотезе о защитной роли ФЛ А2 при повышенной ПОЛ, другие считают, что ФЛ А2 участвует в деацклировании ФЛ с высвобождением НЖК, которые могут вовлекаться в ПОЛ легче, чем эстерифицированные ацилы. С целью внесения некоторой ясности в этот вопрос мы решили изучить влияние синтетического антиоксиданта фенозана К (ФК) на процессы ПОЛ в изолированных митохо-ндриальных и микросомальных фракциях. Как и ожидалось, в присутствии ФК значительно уменьшается уровень МДА в исследуемых фракциях.

Для дифференцирования активностей ФЛ А, и ФЛ А2 использовали -ацил-2 [14С ]-олеилфосфатидилхолин, который инкубировали одновременно с убклеточными фракциями (биологическая система) или с чистой ФЛ А2 из да змеи Naja Naja (модельная система). По скорости высвобождения [14С]-леиновой кислоты судили об активности ФЛ А2, а по выходу 2 [14С]-лизо-юсфатидилхолина(ЛФХ) - об активности ФЛ А,. Активность ФЛ А^ в рисутствии ФК в концентрации 10'4 М значительно подавлена в митохондри-льной фракции печени крыс. Примечательно, что аналогичная картина наблю-ается и в случае подавления активности ФЛ А2 тем же антиоксидантом в икросомах, хотя и меньшей степени, чем в митохондриях, что хорошо корре-ирует с уровнем ингибирования накопления МДА в присутствии ФК в тех ;е фракциях (рис.6).

Анализ данных, полученных в модельной системе, выявил прямо эотивоположную картину. Активность ФЛ А^ возрастает с увеличением знцентрации ФК, достигая 74% при концентрации антиоксиданта КИМ.

Таким образом, синтетический антиоксид ант ФК в биологической и одельной системах оказывает диаметрально противоположное действие на ак-{вность ФЛ Aj. Возможно, в модельных системах образуется активный фер-;нт-субстратный комплекс за счет распределения ассиметричных зарядов в ;тивном центре ФЛ А^ и заряда самого ФК. Однако, существует и другое ¡ъяснение наблюдаемого явления. Известно, что липидная пероксидация из-:няет структурную упорядоченность ФЛ биомембран, изменяет их вязкость, »верхностный заряд и т. д. В результате таких модификаций происходит вход клетку экстрацеллюлярного Са2+. Эти сдвиги, согласно существующим пред-авлениям активируют ФЛ А^ Ингибирование же процессов ПОЛ под вли-мем антиоксиданта ведет к репарации мембранных структур и, как следстви-к деоптимизации условий для функционирования ФЛ А2. С другой сторо-1, показано, что некоторые ферменты, такие, как например, гидропероксид-висимая циклооксигеназа, активируются продуктами ПОЛ. Возможно, что Л А^ также может быть активирована подобным путем и, следовательно, иминирование этих продуктов может привести к ингибированию активности

Л А2

чреналинзависимая модификация ферментативного дролиза фосфолипидов печени

В стресс-индуцированных механизмах интенсификации процессов ОЛ, наряду с изменениями метаболизма основных субстратов переокисле—

ния -.мембранных ФЛ, существенная роль, в настоящеевремя придается акт! вированию адренергических структур.

о

а «о

X

6

<

и

1.2

1.8

в.8

е.6

о.4

о.г

0.0

1.2

о

а чэ

е.8

е.6 |

Ж

е.4 5

■и е.в —

10

10

10"" М ФК

о

1.0

0.8

0.6

1 0.4

X в

6

0. в

В

10

о

лч

а

Э.8 |

0.6

0.4

0.2

и

0. о

л в'4 М ФК

Ряс.6 Влияние ФК на активности ФЛ А, и ФЛ А^ выраженные соответственно в нм [14( - лизофосфатидилхолина и [МС] - олеиновой кислоты/мг белка в течение 30 мин инкубацю А - митохондрии, В - микросомы; * - достоверные данные, р<0,05.

оказано, что усиление процессов ПОЛ в микросомах печени при ИМО >едупреждается (3-адрёноблокаторами, в то время как адреномиметики усили-ют ПОЛ (С. Мкртчян, К. Алексанян и соавт. ,1987). Установлено, что >едварительное введение животным адреналина (0,1 мг/кг) сопровождается чественными изменениями состава и количественными сдвигами в содержа-ги СЖК в основном в плазматических мембранах и микросомах печени. Ко-чество СЖК увеличивается уже в пробах, инкубированных с хлороформом, идетельствуя, очевидно, об уже возросшей интенсивности липолиза в этих >акциях. Инкубация с Са2+ также резко повышает уровень СЖК и актив-сть фосфолипаз по сранению с контрольными животными (на 70% в мик-сомах и на 198% в плазматических мембранах). Следует указать, что судя > увеличению ИН, возрастание уровня СЖК при введении адреналина в ачительной степени обеспечивается за 'счет НЖК, что свидетельствует о по-ныении активности ФЛ Аг При сопоставлении указанных сдвигов с измене-ями интенсивности ПОЛ обращает на себя внимание, что наиболее значи-льное активирование ФЛ А в плазматических мембранах сопровождается ижением уровня МДА, в то время как в микросомах, где наблюдается не эль выраженное активирование ФЛ А, и в митохондриях, где отмечается же их ингибирование, интенсивность ПОЛ практически не изменяется, одовательно, активирование ФЛ А^ можно рассматривать в качестве одного защитных механизмов при увеличении уровня ПОЛ. Имеются основания пускать, что неизмененный (в микросомах), и даже уменьшенный (в плаз-тических мембранах), уровни ПОЛ являются следствием соответствующего вышения активности ФЛ А2. Интересно, что в митохондриях печени при здействии адреналина активность фосфолипаз не только не возрастает, а да: понижается на 36,1% (рис.7).

При сопоставлении указанных сдвигов с изменениями интенсивности ЭЛ обращает, на себя внимание, что наиболее значительное активирование Л А в плазматических мембранах сопровождается снижением уровня МДА, го время как в микросомах, где наблюдается не столь выраженное активиро-те ФЛ А, и в митохондриях, где отмечается даже их ингибирование, ин-геивность ПОЛ практически не изменяется. Следовательно, активирование Л А2 можно рассматривать в качестве одного из защитных механизмов при сличении уровня ПОЛ. Имеются основания допускать, что неизмененный микросомах), и даже уменьшенный (в плазматических мембранах), уровни ЭЛ являются следствием соответствующего повышения активности ФЛ А2. :ключением являются митохондрии, где стабилизация уровня ПОЛ не соп-зождается активированием ФЛ А2.

Рис.7 Уровень МДА (а) и активность ФЛ А (б) в микросомах (1), митохондриях (2) и плазматических мембранах (3) печени при действии адреналина (в % от контрольного уровня);

+ - р<0,05.

Можно полагать, что если в микросомах и плазматических мембранах адрена лин-индуцированная стабилизация или снижение ПОЛ может быть вызван' стимулированной липазной активностью, то для митохондрий использованна концентрация адреналина оказалась чрезмерно высокой, в результате чего пов лекла за собой уменьшение ПОЛ, поскольку показано, что высокие дозы ад реналина оказывают антиоксидантное действие (В. Гукасов и соавт. ,1977). Процессы ПОЛ и активность ион-транспортных АТФ-аз в крови и микросомах мозга.

Установлено, что при остром и повторяемом ИМО в эритроцитарны мембранах значительно активируются аскорбат- и НАДФН- зависимые пут: индуцированного ПОЛ, при этом выявленные сдвиги носят однотипный хара ктер, с пиками на 1-,3-,5- и 6-й дни иммобилизации. На 7-й день интенсив ность ПОЛ, наоборот, несколько подавляется. В тех же условиях исходны "фоновый" уровень ПОЛ в плазме крови находится ниже контрольного уров ня. Существенно, что в различные сроки ИМО сдвиги ПОЛ в эритроцитар ных мембранах и плазме крови имеют диаметрально противоположный харак тер, при этом максимум уровня липоперекисей в эритроцитарных мембранах основном совпадают с их минимумом в плазме крови.

При ИМО изменения в липидном обмене затрагивают также антиок сидантную систему, поскольку выявлено, что содержание витамина Е, как в

казме, так и в эритроцитарной мембране понижается, причем во все сроки •ресса. Изучение активности одного из важных ферментов антирадикальной щиты клетки - СОД, показало, что при ИМО он ингибируется в пределах ■ 20% до 50%. Согласно существующим представлениям, увеличение содер-ания активных форм кислорода - гидроксильного радикала и синглетного ки-юрода приводит к интенсификции ПОЛ в эритроцитарных мембранах. Акти-[рование ПОЛ и уменьшение запасов витамина Е сопровождается структур->-функциональными изменениями эритроцитарных мембран. Согласно совре-:нным представлениям функционирование ион-транспортных систем контро-фуется липидным окружением. Так, показано, что ферментативной активное-,ю обладает лишь липид-белковый комплекс Na+-, К+-АТФазы, требую-ий наличия фосфатидилсерина. Mg2+-saBHCHMaH- АТФазная система конфор-щионно связана с фосфатидилхолиновым окружением (Langer, 1980). По nsen & al. , (1976). ФЛ участвуют в топологии связывания ионов и АТФ АТФазе. Ыа+-К+-АТФ-аза способствует гидролизу АТФ, а освобождае-1Я при этом энергия расходуется на транспорт 2 ионов К4" из окружающей >еды в клетку и 3 ионов Na+ из клетки в окружающую среду. Фактически а+- К+-АТФ-аза функционирует и как насос, и как фермент.

Результаты наших исследований свидетельствуют о том, что интенси-нкация ПОЛ и изменения липидной фазы эритроцитарных мембран при !МО существенно влияют на активность ион-транспортных АТФ-аз. Во все юки иммобилизационного стресса (кроме 7-кратного) значительно активируе-:я Ыа+-К+-АТФаза. Эффект особено выражен после 1, 3 и 4-разовой им-эбилизации, когда активность фермента превосходит контрольный уровень в •3,5 раза. Заслуживает внимания то обстоятельство, что Mg2*-зависимая ТФаза при ИМО теряет свою активность, за исключением 3 и 5-разовой иксации животных. Одновременно сдвиги в активности суммарной АТФазы висят от разнонаправленное™ интегральных изменений отдельных ион-тран-юртных систем.

В указанном плане заслуживают внимания результаты исследований I. Мелконян, А. Шалджян, В. Мхитаряна (1984), показавших, что при дли-¡льном воздействии шума отмечается значительное подавление общей АТФ-1Ной активности мембран эритроцитов, причем в большей степени за счет Ig2*-ATOa3bi. Имеются основания полагать, что интенсификация ПОЛ при ■рессе изменяет фосфолипидное окружение, и тем самым активность транс-зртных АТФ-аз, что связано с изменениями процессов ионной проницаемос-I. и понижением устойчивости эритроцитарных мембран, проявляющимися в аде ферментемии. И частности, установлено, что при ИМО в крови аначи -¡льно повышается активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и С ПА, сви-

детельствующая о существенных структурных изменениях в эритроцитарнь мембранах, обусловленных интенсификацией процессов ПОЛ при стрессе.

Известно, что активность липидзависимой Na+ -К+-АТФазы в зн чительной степени обусловлена упаковкой липидного бислоя, уровнем холе терина, количественным содержанием и спектральной характеристикой индив! дуальных ФЛ, некоторые из которых выступают в качестве эффекторов фе| мента. Установлено, что интенсификация ПОЛ при ИМО сопровождает повышением содержания в эритроцитарных мембранах лизофосфатидилхол) на, содержание которого возрастает на 36% по сравнению с контролем. Мей ду тем показано, что последний является эффектором Ыа+-К+-АТФаэы, вt зывающим ингибирование фермента, с потерей его специфичности (Karli, а]. ,1979). Существенно, что повышение количества лизофосфатидилхолина эритроцитарных мембранах при 7- кратной иммобилизации животных хорои коррелирует со степенью ингибирования активности АТФ-азы, хотя при од» кратной иммобилизации рост уровня лизофосфатидилхолина сопровождает активированием фермента.

Была изучена АТФ-азная активность и в другой мембранной систе» микросомах мозга. Имеющиеся литературные данные относительно изм нения активности Na+- К+- АТФазы мозговой ткани при интенсификац! процессов ПОЛ достаточно противоречивы. Так, согласно данным Т. Сазо] товой и соавт.(1984), ПОЛ в синаптосомальных мембранах мозга в у слови, in vitro ингибирует Na+- К+-АТФазу, что авторы склонны объяснить к следствие окисления определенных групп активного центра фермента. С др; гой стороны показано, что избыточная липидная пероксидация при эмоцион льно-болевом стрессе сопровождается активацией ион-транспортной АТФ-аг в мозговой ткани и ингибированием ее в сердечной мышце (Ф. Меерсон соавт. ,1982; В. Якушев и соавт. ,1985). Как свидетельствуют получент данные, при остром и повторяемом ИМО (от 1 до 6) в микросомах мозга а

тивируются как НАДФН", так и аскорбатзависимое ПОЛ. При 7-кратн< фиксации животных происходит почти полная нормализация уровня липопер ксидации. Исследование активности АТФазы микросом мозга при этих г условиях позволило выявить, что последняя активируется при 1 И' 5-крат» ИМО. Диаметрально противоположная картина выявлена при 3-, 4-, 6- и кратной ИМО, когда активность фермента ингибируется.

Таким образом, при остром стрессе изменения в активности ио ^ранспортных-АТФ-аз в различных мембранных системах однотипны. Одна ко, характер изменений активности Na+-K+-АТФ-азы и Mg^-АТФ-азы пр тивоположны. Активность Ыа+-К+-АТФ-азы повышается на 72% в эритр цитарных мембранах и 18,5% в микросомах мозга. В случае Mg2+ -АТФ-азь:

эльшую лабильность проявляет микросомальная, активность которой подавлялся на 64%, тогда как в мембранах эритроцитов всего на 15%.

При повторяемом стрессе в различных тканях также наблюдаются щотипные изменения в активности ион-транспортных АТФ-аз. Нужно отбить, что подобные сдвиги в активности данного фермента хорошо коррели-тот с изменениями процессов ПОЛ, количественными модификациями липи-гого состава, зависят от микровязкости липидного бислоя, определяемого со-•ношением отдельных фракций липидов - ФХ/ФЭ, СФМ/ФХ, ОЛ/СФЛ, ХОЛ/ФХ, ХОЛ/СФМ. Характер зависимости активности :рмента от указанных параметров определяется длительностью стрессового 'Здействия, а также комплексом сложных взаимосвязанных регуляторных ме-болических адаптивных перестроек.

Таким образом, полученные данные позволяют по-новому оценить юблему активации ПОЛ, его взаимосвязь с фосфолиполизом при стрессе, о в большой степени связано с реорганизацией мембранных структур клетки изменением их проницаемости. В этом плане можно рекомендовать примене-е СЖК в качестве природных антиоксидантов при различных стрессовых стояниях. Так, известно, что жители Гренландии, употребляющие в большом личестве в пищу рыбий жир, содержащий, как известно, много свободных насыщенных жирных кислот, не болеют атеросклерозом (Murray et al,1990). >гласно же О. Н. Воскресенскому (1975), атеросклероз сопровождается вышением процессов ПОЛ.

ВЫВОДЫ

При ИМО в клетке происходит значительная активация процессов деаци-рования мембранных ФЛ с преимущественным высвобождением НЖК, что здетельствует о повышении активности ФЛ Аз и в конечном итоге приводит товышению ПОЛ.

Экзогенная ФЛ А2, способствуя увеличению содержания СЖК в субклето-ых фракциях, выраженно ингибирует в них процессы липопероксидации. В опытах in vitro НЖК оказывают ингибирующее действие на процессы ЭЛ. В тех же условиях активированные жирные кислоты значительно инте-1фицируют ПОЛ.

Синтетический антиоксидант фенозан К, наряду с угнетением ПОЛ, тор-зит активность ФЛ А2, что является свидетельством наличия взаимосвязи жду процессами липидной пероксидации и гидролиза ФЛ. При ИМО-стрессе резко повышается исходный уровень ПОЛ с одновре-' иным уменьшением содержания витамина Е и СОД, возрастает активность утих защитных антиоксидантных систем.

6. Изменения состояния ПОЛ и антиоксйдантных систем клетки вызывай сдвиги в количественном и качественном составе липидного компонента биом< мбран.Это приводит к изменению их проницаемости,в результате которой ув< личивается Ыа+-К+-АТФ-азная и угнетается Mg2+- АТФ-азная активности.

7. Установленная адреналин-зависимая модификация ферментного гид роли ФЛ позволяет выдвинуть предположение о наличии в клетке метаболическс кооперации между стресс-лимитированной индукцией процессов фосфолиполз за и ПОЛ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Перекисное окисление липидов в эритроцитарных мембранах и крови п[ стрессе. Журн. эксп. и клинич. мед. 1984, т. XXIU, N2, стр.123-129 (соав Микаелян Э. М. , Мхитарян В. Г.).

2. Ферментативный гидролиз фосфолипидов плазматических мембран пече крыс при иммобилизационном стрессе. Тез. докл. IV Респ. молодежи, кон по физико-химической биологии. Ереван, 1987, стр.38 (соавт. Мкртчян С.).

3. Влияние адреналина на Са-зависимое накопление свободных жирных кисл в микросомах печени. Тез. докл. XVI Республ. научн. конф. молодых медик Грузии.Тбилиси,1987, стр.25-26 (соавт. Мкртчян СЛ.).

4. Ненасыщенные жирные кислоты и перекисное окисление в печени крь Докл. АН Арм .ССР, 1988, т. LXXXVI, N 4, стр.187-192 (соавт. Мкрт С. Л. , Мхитарян В. Г.).

5. Адреналинзависимая модификация ферментативного гидролиза фосфолип дов печени крыс. Докл. АН Арм . ССР, 1988, т. LXXXUI, N 1, стр.4 45 (соавт. Мкртчян С. Л. , Казарян Ш. А. , Мхитарян В. Г.).

6. Влияние фосфолипазы на перекисное окисление липидов. • Докл. Р Арм . ССР , 1988, т. LXXXVII, N 1, стр.41-44 (соавт. Мкртчян С. Л Айанян А. Е. , Мхитарян В. Г.).

7. Активность Na-K -АТФазы микросомной фракции мозга и мембран эр роцитов при остром и повторяемом стрессе. Биологич. журн. Армении, 19Í т. XLI, N7, стр. 561-568 (соавт. Микаелян Э. М.).

8. Активность фосфолипаэ А в печени крыс при иммобилизационном стрес Вопр. мед. химии. Деп. в ВИНИТИ, 31.01.90, N 618-В (соавт. Мкртчян Л. , Мхитарян В. Г. , Паносян А. Г. , Агаджанов М. И.).

9. Phospholipase А2 and lipid peroxidation: The effect of antioxydant on phospholipids hydrolysis.

Abstr. of 22-nd FEBS Meeting, 1993,p 214, Stokholm, Sweden (Mkrtchian

L. , Tadevosyan Yu. V. , Vartanyan G. S. , Mkhitarian V. G.). /*

^jUa'^M

:f|mgmjimp ijdqofltnpiffi ijmtimí{bulueln dqddmih ügmpfimdydmd gmfehu|ujihíiq(fc<{;q iJfmiJlTimdqel gi[fmihgmlti|naoi -mq IqfmutaQ gq liudmli 'liqihfiqp ihqq t{dqgihgqpdq<k gtnfimliugmqihZmhi ' -qgfrpimlqbdm i{ilqg nqfiudhi gilfmlmljipmiu ihmbm 'ildqgihgmtnjnaomlimq -ihfm 3gudu 'ütíqgiueíelmfntlmp unifiqbmq ?u Jiqmg Iqijdbügü ¿qp tjtlqgfiui фЬпЗГпйп gijrmihgmlnjnaomíimq i]<5iJ3d q рш^йшЗшиш Uu 'piugmdg q pi -mftnij fldu 'Imfdqdmdqti gmjifimftjihlim i|iiqgnqfimlln i(fnu[/itnUi{naodqlTi i -mtnflnifl IqdqdmJhiLfi piufiqihup dug mjlmih gq 1Гше1 üdqglmrjiih Qmjifimi :piupqihm{n gi{fttilqliup dpmpñmSmum i{ndqlhiputi giffmtfimdthndum-ihr -dq(fc ]u[ihfim flgq piudihmfimd Sgqp piuilqgpqihm{n gmljmgmdmngqli Jiq i mlqliuji flgiufdiufiqlibm dqddmth iJihgmln{naomiim> :dpmrmfmiidqg ijihgml -aomljmq ^ gmbugq<£ gq Iqjulm àgudu 'üdqggiufehuihubmihqq piugfimám gq giufelimMtlämihqq çqn -fiilpiuihubmihqq ijdqgilgmügqfi <jm{if]ilmdqg дф -qdüm йийшфпд gq Iqjifimihn agudu 'fldqgagiufbdm fiqmg gq piunm gijtf gmpügfn ЬГц :Л1|ршГта(та flilqggmtídjiqji gijfm¿t¡¿d q piugmínihZmfti -ЧдйфтпЦифпиф çmflmtajnao gqlidm ]iulqgfimli{fimqü mg du ilgma 'gml\tnl -mlnihZmln nqftidu Iqthipi q iflqdmfj dihgqpdq<£ íifm gfmympmq gijdqglmf <?m]i?í\ :md|» ijdqgnqfiudln xirmxlfimlnlnaodqln gilfmln[hu[l ügmfehufiqü ipimlilnu 1}ГшЪт!т11[1ифгшф ZV 04 jnutiqdmdqji agudu *fldqglmf}nh gfm |iq jnujimdb gq giurehudümZqu fldqgiuelelmímlmp ihmbm i|ni{Ingfiug дшЗ *g -Лшй1[пЯо jmifiiiilmelgq gi{q ihZqq iflqtim 3qp líjibmf] ijdqgln|lmjln<£nu<£ i[( -gmddpqp gq jnujigtfib agudu 'üdqgurelelmíndmp xjmfiqbmq ?u 'q gfm ,gn -шфт?тдф1о di}adamihqq Iqihfmqmfimd fiqliih giufdiudu}imdmgq du *q r flagiuflidm gmljmgpx[q ijdqggiufeliuüiubnuhqq nfji :mJ[i Tjfmijfimtajnaod gijrmlnllmll giufehuñqlibm ?i{gmeln{ 'iimumfimqligfl 'gif/iqíJqdnifiiuií piuflli iJüqglmffigmjjm <jm|ifim|ii[thiim ijdqguielelmhulmp gfiug lifm üdqgdgiufb {jmji/imihn pimlqgmijqn mufji ildqçdu<j> :milfi ijdqgnqfiudln gmpfimln{naoi] gilfmlnflïu{l ügiufehuñqübm ftpimlqbdm iJdqgiuelelmfTidtnp çmfiqbmq ?u üi -m nijlmih gq fifiufi ûdqglmfjiih jjmfimihn piudqggmpftnhi ojjia dj

:giufeIiufimgmZg в

-mumdxPi - fiijpbulj mufp 'f]i{ihqduqel diugmqügfl dujiqdml) fiilpliuíi ijp gq ddqgagiurtalm дпфЛтйщ :fimgmpmp ijnqdihn Jiqmg piujiel üfm '3qp ^ -pbiJgmTi{qp gmpümbdmb i{dqgl]mpifl> gml|ini{bulu€lmln dqddmih fldшфшl ijdqü ijdqglnlnaodqln gijímlnlhujl q piugfimbdmb üagmihmn[Zm Iml^s

ЛЧиФУФИП

Бумаге 30 i 40/8, 3,5 п/л, Додпдомо к печати 09.95г.з.655,т.100 Отдел оперативной полжграфи Ереванского иплииинского универсивта, Ереван - Корина 2