Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Стафилококковое бактерионосительство (микробиологические, иммуногенетические аспекты)

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Стафилококковое бактерионосительство (микробиологические, иммуногенетические аспекты)"

и .1

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Пермская государственная медицинская академия

На правах рукописи

КОЛЕВАТЫХ Екатерина Петровна

СТАФИЛОКОККОВОЕ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВО (МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ, ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ

АСПЕКТЫ)

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь 1995 г

Работа выполнена в Кировском государственном медицинском институте, Кировском НИИ гематологии и переливания крови

Научные руководители - доктор медицинских наук Г.А.Зайцева

- доктор медицинских наук, профессор

Э.С.Горовиц

Официальные оппоненты - доктор медицинских наук,

ПООсЪ&ССОы I .(ч.

- кандидат медицинских наук,

доцент Г.В.Яхлакова

Ведущее учреждение Пермский НИИ вакцин и сывороток

' ' г~ У Л' ° С

Защита диссертации состоится " "I " Л^-СЬ'/ЬЯ 7<£ 199.5 г. в у О час. на заседании специализированного ученого совета по присуждению ученой степени кандидата медицинских наук Пермской государственной медицинской академии (614000, г. Пермь, ул. Куйбышева, 39).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной медицинской академии (614000, г. Пермь, ул. Коммунистическая, 26).

Автореферат разослан " ^ / " ¿\и1и/1.\ 199^_г.

Ученый секретарь

специализированного совета

доцент Р.С.Кузяев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы нарастает частота гнойно-септических заболеваний, нередко протекающих как внутрибольничная инфекция (Брусина Е.Б. и соавт., 1987; Варенко Ю.С. исоав., 1988; Паевский С.А., 1988; Семина H.A., Прямухина Н.С., 1990). Несмотря на изменение микробного пейзажа, существенную роль в этиологии гнойно-септических заболеваний играют стафилококки (Касымбеков A.A., 1988; Черномордик А.Б., 1989; Покровский В.И., 1993; Цинзерлинг A.B., 1993). Установлено, что основными источниками инфекций, вызываемых Staphylococcus aureus, являются носители (Чернова О.Л., 1987; Рябинин Н.В., 1989; Григорьева В.Е., Хисамутдинов А.Г., 1990). Они служат не только главным источником возникновения стафилококковых инфекций, но и последующего распространения их.

Стафилококковое бактерионосительство - достаточно распространенное явление в популяции здоровых лиц. В.В.Смирнов, А. Е. Вершигора (1988) отмечают значительные колебания числа носителей среди людей различных возрастных групп (41-90,9%). Однако влияние экологических факторов на частоту стафилококкового бактерионосительства исследовано недостаточно. Междутем, ухудшение экологической ситуации, значительный роствторичных иммунодефицитов среди населения способны оказать заметное воздействие на характер контаминации слизистых оболочек патогенными стафилококками.

Нельзя признать окончательно изученными вопросы патогенеза стафилококкового носительства, важную роль в котором играют иммунные механизмы. Имеющиеся в литературе данные о состоянии иммунной системы носителей весьма противоречивы (Киборт Р.В. с соавт., 1984; Косых В.А. с соавт., 1992; Бенчев Б.,1986).

Полагают, что в формировании стафилококкового носительства значительную роль .играет генетическая предрасположенность индивидуума к длительной персистенции микробов в организме. В роли факторов, обусловливающих характер иммунного реагирования на стафилококк, могут выступать тканевые структуры. Однако до сих пор остаются неизученными особенности распределения НLA-антигенов, их фенотипических и гаплотипических сочетаний у носителей патогенного стафилококка.

Целью настоящей работы явилась микробиологическая и имунногенетическая оценка стафилококкового бактерионосительства с учетом влияния неблагоприятных факторов внешней среды.

Задачи исследования:

1. Определить частоту носительства патогенных стафилококков у различных групп населения с учетом влияния неблагоприятных факторов внешней среды.

2. Изучить особенности штаммов стафилококка, выделенных от бактерионосителей.

3. Исследовать показатели клеточного и гуморального иммунитета, фчкторт нбспецифичоской защиты организма у постоянных носителей патогенных стафилококков, в том числе часто болеющих.

4. Оценить влияние Н1.А - фенотипа на предрасположенность к носительству патогенных стафилококков.

Научная новизна: впервые осуществлен комплексный подход к анализу проблемы стафилококкового носительства с учетом особенностей циркулирующих шташммов, неблагоприятных факторов внешней среды, состояния иммунной системы и генетической предрасположенности.

Практическая ценность: определены экзогенные и эндогенные факторы риска формирования постоянного стафилококкового бактерионосительства, что помогает обосновать проведение плановых профилактических мероприятий.

Положения, выносимые на защиту:

1. К числу экологических факторов, влияющих на частоту распространения, формы стафилококкового бактерионосительства, биологические свойства персистирующего в организме стафилококка, относятся профессиональный контакт с кормовыми дрожжами, воздействие малых доз ионизирующей радиации, госпитальный фактор.

2. У постоянных носителей патогенного стафилококка отмечаются нарушения показателей клеточного и гуморального иммунитета, факторов неспецифической резистентности организма.

3. Специфика антигенного состава тканей обусловливает генетическую предрасположенность к формированию стафилококкового бактерионосительства.

4. Для часто болеющих носителей характерно снижение относительного содержания В-лимфоцитов в периферической крови, уровня иммуноглобулина А, титра антител к St. aureus и активности бета- лизинов, а также присутствие в фенотапе антигенов HLA-B17, В41, DR3, DR7, гаплотипа АЗ-В17, фенотипов В7-В17, В17-В41.

Внедрение результатов исследования.

Изданы методические рекомендации "Использование тканевого типирования в иммунологическом мониторинге лиц со стафилококковой инфекцией" (1994), два информационных письма: "Частота распространения здорового носительства патогенного стафилококка в зависимости от экологических факторов" (1992), "Характер микрофлоры зева и носа в различных контингентах детей" (1993). По материалам работы подана заявка на предполагаемое изобретение "Способ диагностики индивидуальной чувствительности к инфекции у носителей патогенного ста фил ококка" (номер гос.регистрации 5024156 от 20 февраля 1992 г.).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Всесоюзнойучебно-методической и научно-практической конференции "Экономика, экология, здоровье" (Ижевск, 1991), зональной научно-практической конференции "Здоровье человека и экологические проблемы" (Киров, 1991), конференции молодых ученых "Вопросы трансфузиологии и клинической медицины" (Киров, 1992), Всесоюзной научной конференции "Методологические и методические проблемы оценки состояния здоровья населения" (Санкт-Петербург, 1992), VIII зональной научно-практической конференции молодых ученых-медиков "Медикобиологические и экологические проблемы развития Севера" (Архангельск, 1992), I съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), I научной конференции "Актуальные вопросы клинической педиатрии, акушерства и гинекологии" (Киров, 1992), научной конференции "Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины" (Киров, 1993), научной конференции "Экологическая безопасность городов" (Санкт-Петербург, 1993), научной конференции молодых ученых России "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века" (Москва, 1994).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных научных работ, из них 6 - в центральной печати.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 85отечественных и 91 иностранных источников. Диссертация изложена на 121 странице машинописи, иллюстрирована 23 таблицами и 5 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследыаания. Под мпбг^дениеч находились 2556 практически здоровых лиц в возрасте от 17 до 50 лет, из них 1120 (43,8%) мужчин и 1436 (56,2%) женщин. Все наблюдавшиеся -жители города Кирова, среди них 750 (29,3%) - рабочие и служащие различных предприятий без каких-либо профессиональных вредностей (I группа, группа сравнения), 201 (7,9%)-сотрудникибиохимического завода (II группа), 905 (35,4%) -студенты медицинского института (III группа), 437 (17,1%) - медицинские работники ( IV группа), 263 (10,3%) - участники ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС (V группа).

Для определения частоты и типа стафилококкового бакгерионосительстваобследованиепроводиливдинамикенапротяжении 1988-1993 гг. в разные сезоны года. Поскольку значительная часть (29,3%) наблюдавшихся являлись донорами крови, клинико-лабораторный контроль за состоянием их здоровья осуществлялся в соответствии с требованиями действующих инструкций. Все остальные обследовались во время диспансерных осмотров. Среди наблюдавшихся была выявлена группа часто и длительно болеющих (97 человек), которых дифференцировали методом возрастно-лоловых персентилей (Альбицкий В.Ю., Баранов A.A., 1986)

Согласно существующим рекомендациям по классификации носительства (Чистович Г.Н., 1969; Покровский В.И., Семина H.A., 1992), всех обследованных распределили на 4 категории:

I - постоянные носители "резидентного" типа ("злостные"), у которых при многократном обследовании с интервалом 3 недели на протяжении 3-6 месяцев обнаруживались патогенные стафилококки одних и тех же фаготипов в массивном количестве;

2 - постоянные носители "транзиторного" типа, у которых постоянно обнаруживались патогенные стафилококки, но фаготипы и количество их изменялись;

3 - временные носители, у которых стафилококки обнаруживались непостоянно, периодически, разных фаготипов в небольшом количестве;

4 - постоянные "неносители", у которых при такой схеме обследования стафилококки не обнаруживались.

Выделениестафилококков со слизистых верхних дыхательных путей осуществляли в соответствии с Методическими указаниями МЗ СССР (1985). Идентификацию культур стафилококка проводили по основным биохимическим признакам: анаэробному расщеплению маннита и глюкозы, окислению глицерина, активности фосфатазы, пигментообразованию. Наряду сэтим, изучали способность продуцировать лецитовителлазу, хлопьеобразующий фактор, коагулазу, ДНК-азу, фибринолизин, гиалуронидазу, гемолизины, лизоцим, бакгериоцины. Антилизоцимную активность определяли по методу О.В.Бухарина и Б.Я.Усвяцова (1984). Чувствительность стафилококков к антибактериальным препаратам изучали по таблице пограничных значений диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно чувствительных и чувствительных микроорганизмов (Методические указания МЗ СССР, 1985). Исследовали чувствительность к 19 видам антибиотиков. Фаготипирование St. aureus проводили фагами Международного типового набора. Подсчетмикроорганизмов осуществляли поупрощенной методике И.А. Бочкова с соавт. (1989). Для цитоскопической диагностики стафилококкового бактерионосительства применяли метод Л. Н.Терновской (1980) в модификации О.В.Бухарина, Б.Я.Усвяцова (1985). Изучение иммунного статуса проведено у 186 постоянных носителей St. aureus. Подсчет количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови (Е-РОК, ЕАС-РОК) осуществляли в реакции розеткообразования (Bianco С. et а!., 1970; Jonda! М. et а!., 1972). Соотношение субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров определяли в непрямой реакции поверхностной иммунофлюоресценции в пробирках с применением мышиных моноклональных антител ИКО-86 и ИКО-31, выпускаемых НПО "Медбиоспектр" Института онкологии (г. Москва). Уровень иммуноглобулинов классов G, А, М выявляли методом радиальной иммунод иффузии по G. Mancini с помощью моноспецифических сывороток, изготовляемых Нижегородским предприятием по производству бакте-

рийных препаратов (НИИ эпидемиологии и микробиологии, г. Нижний Новгород). Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали с инертными частицами латекса размером 0,8мкм по методу С. Г. Потаповой и соавт. (1977). Метаболическую активность системы фагоцитирующих нейтрофилов оценивали в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест)по В. Н. Parketa!.(1968). Антимикробные противостафилококковые антитела определяли в реакции непрямой гемагглютинации с двумя эритроцитарными диагностикумами : антигены St. aureus штаммов 209 Р, Cowan-1 и антигены St. epidermidis штамма 2124, выпускаемых Казахским НИИЭМ и инфекционных болезней. Титрование антиальфастафилолизина в сыворотке крови выполняли в реакция нейтрализация гсмсяитически* <"«<">ür.TR стафилококкового альфатоксина согласно методическим указаниям "ИСК им. ЛАТарасевича. Для определения уровня циркулирующих иммунных комплексов использовали седиментационный метод с полиэтиленгликолем ( Белокриницкий Д.В., 1987). Функциональную активность системы комплемента оценивали микрометодом по 100% гемолизу (Вавилова Л. М. и соавт., 1984). Концентрация сывороточных бета-лизинов и лизоцима измерялась ускоренным фотонефелометрическим способом, основанным на регистрации степени лизиса В. subtilis при исследовании бета-лизинов и М. lysodeikticus при определении лизоцима (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974, 1977).

Идентификацию HLA - антигенов локусов А, В, С, DR проводили в микролимфоцитотоксическом тесте ( Terasaki Р. et al., 1970) по панели типирующих сывороток Российского НИИ гематологии и переливания крови.

Статистическую обработку полученных результатов, вычисление популяционно-генетических параметров, доверительного коэффициента Стьюдента-Фишера (t) осуществляли на персональной ЭВМ "Robotron" с использованием программ, составленных сотрудниками Кировского НИИ гематологии и переливания крови.

Результаты исследования и их обсуждение. В результате проведенного нами бактериологического обследования 2556 лиц установлено, что частота носительства St. aureus на слизистых носа и зева составила 47,5%.

У рабочих и служащих биохимического завода по производству кормовых дрожжей St. aureus и St. epidermidis присутствовали изолированно на слизистой носа реже, чем в группе сравнения ( 29,6 ± 4, 6%; 27,9 ± 5,4%

и 56,8 + 2,8%; 41,2 ± 2,6% ; Р< 0,05); только на слизистой зева реже вегетировал St. epidermidis (11,8 ±3,9% и 40,1 ±2,5%; Р< 0,001). Частота выделения St. aureus (14,3 ± 3,5 %) и St. saprophytics (23,5 ± 7,3%) из зева была одинаковой в обеих группах. Отмечалось заметное увеличение присутствия St. aureus, St. epidermidis и St. saprophytics одновременно в носу и зеве (56,1 ± 5,0%; 60,3 ±5,9%; 55,9 ± 8,5% и 27,5 ± 2,5%; 18,7 ± 2,0%; 7,9 ± 3,4%; Р<0,01).

Среди студентов-медиков персистирование St.aureus и St. saprophyticus было выше (52,7 ± 1,7%; 15,4 ± 1,2% и 41,6 +1,8%; 8,4± 1,0%; Р< 0,001), a St. epidermidis - ниже (37,9 + 1,6% и 49,2 +1,8 % соответственно; Р<0,001). Чаще, чем в I группе, St. epidermidis встречался только на слизистой носа (56,9 ± 2,7% и 41,2 ± 2,6%; Р<0,001) и одновременно в носу и зеве (34,1 ±2,6%и18,7± 2,0%; Р< 0,001), реже-на слизистой зева (9,0 ±1,5%и40,1 ± 2,5%; Р<0,001). Существенно меньше было лиц, у которых St. saprophyticus определялся только на слизистых носа (19,4 ± 3,3% и 68,2 ± 5,9%; Р<0,001), и больше - на слизистых зева ( 50,4 ± 4,2% и 23,8 ±5,4 %; Р<0,001), а также одновременно в носу и зеве ( 30,2 + 3,9% и 7,9 ± 3,4%; Р<0,001). Установлено, что у студенов разных курсов частота обнаружения стафилококков в носоглотке неодинакова. По мере перехода к клиническим дисциплинам уровень носительства St. aureus и St. saprophyticus повышался: у студентов I курса - 42,6 ± 1,9% и 8,1 ± 2,1% соответственно, VI курса - 53,7 + 2,0% и 20,3 ± 1,8% (Р<0,001). По-видимому, это связано с артифициальным механизмом передачи стафилококков (Покровский В.И., Семина H.A., 1992).

Влияние профессионального фактора на частоту и особенности стафилококкового бактерионосительства зарегистрировано у медицинских работников. Так, у сотрудников различных стационаров уровень носительства St. aureus и St. saprophyticus достигал соответственно 56,1 ± 2,4% и 18,3 ± 1,8% (в контроле 41,6 ± 1,8% и 8,4 ± 1,0%; Р< 0,001). St. saprophyticus чаще выделяли со слизистой зева (46,2± 5,6% и 23,8 ± 5,4 %; Р=0,004) и одновременно со слизистых носа и зева (41,3 ± 5,5% и 7,9 ± 3,4 %; Р< 0,001), реже - только со слизистой носа (12,5 ± 3,7% и 68,2 ±5,9%; Р<0,001).

Исходя из факта, что любое неблагополучие окружающей среды может влиять на распространенность стафилококкового носительства, мы сочли целесообразным исследовать его частоту у лиц, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующей радиации во время восстановительных работ на Чернобыльской АЭС. Величина дозы

облучения составила от 10 до 50 БЭР. У этих лиц по отношению к группе сравнения наблюдалось снижение частоты выделения St. aureus (30,8 ± 2,8 % и 41,6 ± 1,8%; Р= 0,001) на фоне резкого возрастания частоты St.

saprophyticus (25,5 ±2,7% и 8,4 ±1,0%; Р< 0,001). Показатели вегетации St. epidermidis не отличались от l-ой группы (51,7 ± 3,1% и 49,2 ± 1,8%).

В то же время значительно увеличилось число лиц, имевших St. epidermidis только на слизистой носа (64,1 ± 4,1% и 41,2 ± 2,6%; Р< 0,001). Изолированное носительство этого вида микроба на слизистой зева определялось реже (17,6 ± 3,3% и 40,1 ± 2,5%; Р< 0,001), St. saprophyticus - в равной мере (23,9 ± 5,2% и 23,8 ± 5,4%).

Неодинаковым среди наблюдавшихся групп оказалось и распределение носителей St. aureus по категориям (табл.1).

Таблица 1

Распределение обследованных по категориям стафилококкового бактерионосительства

Группы Количество Категории носительства(%)

обследо- обследо- постоянные временные

ванных ванных резидентного типа транзиторного типа

I 750 6,9 ± 0,9 12,9 ± 1,2 21,7 ±1,5

II 201 13,9 ± 2,4* 12,4 ± 2,3 22,4 ± 2,9

III 905 14,1 ± 1,1* 10,3 ± 1,0 28,3 ± 1,5

IV 437 16,3 ± 1,8* 14,0 ± 1,7 25,8 ±2,1

Всего 2293 12,2 ±0,7 12,0 ±0,7 25,2 ± 0,9

Примечания: * - различие с группой сравнения достоверно при Р<0,01;

В V группе категории носительства не определялись в связи с однократным обследованием.

В целом среди обследованных постоянное носительство составило 24,2 ± 0,9 %. Резидентный тип носительства чаще регистрировали среди представителей II группы (Р<0,01), у студентов - медиков (Р<0,001) и медицинских работников (Р<0,001). Причем самый высокий процент "злостных" носителей обнаружен среди медицинских работников.

Известно, что в процессе формирования стафилококкового носительства происходит постепенное и неуклонное изменение состава микрофлоры полости носа, приводящее к преобладанию St. aureus. Поэтому представлялось целесообразным определить частоту высеваемости St. aureus из микробных ассоциаций. В группе сравнения St. aureus чаще высевали в комбинации с St. epidermidis (Р<0,001). Среди рабочих биохимического завода часто наблюдали комбинацию St. aureus с дрожжеподобными грибками (15,3% и 4,2% ; Р< 0,01), даже у временных носителей (12,0% и 4,3%). Значительно чаще у них выявляли высокую концентрацию грибков рода Кандида (47,2% и 8,0%; Р< 0,001). С другой стороны, St. aureus в этой группе преимущественно определяли в виде монокультуры, по-видимому, из-за антагонизма остальной флоры с грибковой. Так, у резидентных носителей St.aureus вегетаровал совместно с St. epidermidis всего в 3,6% случаев по сравнению с 13,5 % в первой группе, у транзиторных - 8% случаев против 14,4% в контроле.

У студентов-медиков, в сравнении с контрольной группой, отличий в характере микробных ассоциаций не было. Среди медицинских работников обнаружено увеличение частоты выделения St. aureus в сочетании с St. epidermidis (20,4% и 13,5%), причем наиболее частым такой симбиоз был у транзиторных носителей (32,8% по сравнению с 14,4%).

У ликвидаторов, как правило, констатировали смешанный тип носительства: St. aureus чаще выделяли в ассоциации с St. epidermidis (30,9% и 13,5%; Р=0,001), St. saprophyticus (33,3% и 3,2%; Р<0,001), грибковой флорой (17,3% и 4,2%; Р<0,01).

Таким образом, обнаружены различия в частоте вегетации стафилококка и распределении типов носительства в зависимости от проанализированных профессиональных факторов, а именно,

отмечается высокий процент "злостного" носительства у медицинских работников, студентов медицинского института и рабочих биохимического завода по производству кормовых дрожжей. St. aureus в ассоциации с дрожжеподобными грибками рода Кандида чаще определяется у рабочих биохимзавода и у ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС, с St. epidermidis - у медицинских работников.

При изучении биологических свойств St. aureus различия между обследованными группами не были четко выраженными. Лишь у ликвидаторов реже обнаруживались штаммы с лецитиназной активностью (79.9 ± 3.0% и 90,1 ± 1,2%; Р< 0,001), но чаще - вырабатывавшие белый пигмент, чем золотистый (59,& * V"/n ** ¿2-4 ж 3,5%; Р'0,001), и бактериоцины (36,0 ± 6,8% и 18,0 ± 5,4% , Р<0,05). Вместе с тем, хлопьеобразующий фактор чаще имелся у штаммов, выделенных от медицинских работников (34,1 ±2,0%и 23,0± 1,7%; Р<0,001). Урабочих биохимзавода чаще регистрировались штаммы, обладавшие бактериоциногенной активностью (40,0 ± 6,9% и 18,0 ± 5,4%; Р<0,05).

St. aureus с антилизоцимной активностью чаще определялся при резидентном типе носительства ( 70,9-84,1%), реже-при транзиторном

(31,2 - 33,4%) и временном (10,0 -10,1%), независимо от группы обследованных.

Фаготипированию подверглись все выделенные штаммы St. aureus. В группе сравнения они наиболее часто лизировались фагами второй группы, реже - первой (58,4 ± 2,0% и 24,1 ± 1,7%; Р<0,001). Среди рабочих и служащих биохимзавода также преобладала вторая фагогруппа (65,0 ±3,5% и 15,6 ± 2,7%; Р<0,001). Стафилококки , выделенные у студентов-медиков, чащетипировались фагами третьей фагогруппы (43,7 ± 1,5% и 8,3 + 1,1%; Р<0,001). Фагопейзаж стафилококков, выделенных со слизистых носа и зева медицинских работников, также был представлен в основном третьей фагогруппой (77,5 + 1,8% и 8,3±1,1%; Р<0,001). Микробы, вегетирующие на слизистых носа и зева представителей V группы, чаще типировались фагами первой фагогруппы (31,8 ± 3,5% и 13,4 + 2,5% ; Р<0,01).

За шестилетний период наблюдения нам удалось отметить рост распространения метициллинорезистентных штаммов St. aureus во всех группах обследованных от 19,1 % до 38,1%. Носители метициллиноустойчивых штаммов играют большую роль в распространении госпитальной инфекции. Такие штаммы часто не

фаготипируются, обладают повышенной вирулентностью, устойчивы к факторам окружающей среды и обладают мультирезистентностью к другим антибиотикам.

Особого внимания заслуживает факт широкого распространения Si. aureus с множественной устойчивостью к антибиотикам (табл. 2).

Таблица 2

Частота обнаружения штаммов золотистого стафилококка с множественной устойчивостью к антибиотикам

Группа обследованных Исследовано штаммов Количество штаммов с одновременной устойчивостью (%)

к 5-7 антибиотикам к 9-14 антибиотикам

I 635 24,7 ± 1,7 5,0 ±0,9

II 186 29,0 ± 3,3 8,1 ±2,0

III 1032 40,0 ± 0,5* 20,0 ±1,2*

IV 543 45,8 ±2,1* 25,0 ± 1,9*

V 179 34,6 ± 3,5 14,0 ± 2,6*

Всего 2575 36,3 ± 0,9 16,1 ± 0,7

Примечание: * - различие достоверно при Р<0,01

ВI группе обследованных 24,7% культур были нечувствительными к 5-7антибиотикам одновременно, 5%- к9-14антибиотикам. Достоверно выше количество мультирезистентных штаммов, выделенных от медицинских работников: устойчивость к 5-7 антибиотикам выявлена у 45,8% культур (Р<0,001), к 9-14 антибиотикам - у 25% (Р<0,001). Такая же тенденция обнаружена среди студентов-медиков: резистентностью к 5-7 антибиотикам обладали 40% культур, к 9-14 антибиотикам - 20% (Р<0,001).

Вегетирование стафилококков с множественной антибиотикоустойчивостью свойственно также V группе обследованных (14,0 ± 2,6% и 5,0 ± 0,9%; Р<0,01).

С целью уточнения глубины и характера иммунологических нарушений при постоянном носительстве St. aureus нами обследовано 80 транзиторных, 106 резидентных носителей, а также 47 часто болеющих носителей, в анамнезе которых отмечались неоднократные ангины, фарингиты, риниты. Полученные данные сопоставили с иммунологическими показателями 101 индивида, свободных от носительства патогенного стафилококка на слизистых носа и зева, и

иНДЛОП'ЧНЫ^ ''С.С14.Т^ЛЯМ ПО оп^ряг.ту

Выявлено снижение относительного содержания В-лимфоцитов у транзиторных, резидентных и часто болеющих носителей (24,7 ± 0,9%; 24,9 ± 0,62%; 24,9 ± 1,3% и 29,1 ± 0,9%; Р<0,05). Наряду с этим, у резидентных и часто болеющих носителей наблюдалось снижение уровня сывороточного Jg А (1,45 ± 0,06 г/л; 1,4 ± 0,1 г/л и 2,2 ±0,04 г/л; Р<0,05). Снижение относительного содержания Т-хелперов констатировали только у носителей, склонных к частым острым респираторным заболеваниям (43,1 ±2,1% и 50,0 ± 1,1%; Р<0,05).

Имелись отличия и в показателях гуморального антистафилококкового иммунитета у разных групп обследованных. Титр антител к видоспецифическим антигенам St.aureus у резидентных носителей был выше, чем у транзиторных, но ниже, чем у интактных лиц (82,8 ± 14,5; 61,28 ± 17,7; 142,0 ± 19,8). В то же время, титр противомикробных антител к St. epidermidis превышал их значения у транзиторных и в группе сравнения. Содержание антиальфастафилолизина в сыворотке крови резидентных носителей было также выше, чем у транзиторных носителей, но не отличалось от группы сравнения. У часто болеющих носителей имело место выраженное снижение титра антител квидоспецифическим антагенам St. aureus (Р<0,001), титр антимикробных антител к St. epidermidis был выше, чем у "неносителей" (Р<0,001).

Увеличение концентрации циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови отмечалиутранзиторных, резидентных и часто болеющих носителей (0,139 ± 0,007; 0,115 ± 0,005; 0,122 ± 0,009 И 0,074 ± 0,003; Р<0,05), что указывает на их замедленную элиминацию. При исследовании факторов неспецифической резистентности организма выявили

увеличение активности сывороточного лизоцима (7,5 + 0,18%; 7,68 ± 0,165%; 7,8 ± 0,25% и 6,5 ± 0,08%; Р<0,05) и комплемента (8,18 ± 0,09; 7,34 ± 0,06; 6,0 ± 0,01 и 4,7 + 0,04; Р<0,05) у всех постоянных носителей St. aureus. При резидентном типе носительства и у часто болеющих носителей наблюдали снижение активности бета-лизинов в сыворотке крови (26,2 ± 1,2%; 24,9 ± 1,5% и 33,7 ± 0,54%; Р<0,05).

Установлено, что у часто болеющих носителей снижение относительного содержания В-лимфоцитов в периферической крови, уровня Jg А, титра антител к St. aureus и активности бета-лизинов встречается существенно чаще, чем у здоровых носителей (табл.3).

Таблица 3

Частота снижения иммунологических показателей у носителей патогенного стафилококка

Иммунологические показатели Количество лиц (%) со снижением показателей ?на 2 6

часто болеющие носители здоровые носители

В-лимфоциты 46,8 16,1

Иммуноглобулин А 61,7 12,9

Бета-лизины 25,5 9,7

Титр антител к золотистому стафилококку 12,8 0,0

Снижение всех четырех показателей 21,3 0,0

Наиболее демонстративное отличие обнаружено в количестве лиц, имевших сочетанное снижение всех 4-х иммунологических параметров. Выявленный нами факт находится в полном соответствии с мнением тех исследователей, которые считают, что длительная персистенция

стафилококков в условиях воздействия неблагоприятных факторов может привести к нарушению сложившегося симбиоза. В результате возрастает опасность заболевания у носителя и одновременно повышается риск развития инфекционного процесса у контактирующих лиц (Черномордик A.B., 1989).

С целью выяснения роли генетических факторов в предрасположенности к длительной персистенции стафилококка идентифицировали HLA - антигены локусов А,В,С - у 600 носителей, локуса ОК-у82носителей. Характер распределения антигенову носителей сопоставили с иммуногенетическими параметрами 795 человек

^рзндомизироэа"«?!*' группя ! пТ"ОСв»1И»СЯ К ТОЙ же популяции НйикПёмИй.

Среди носителей St. aureus по сравнению с контрольной группой достоверно чаще встречаются лица с антигенами HLA-B16 (X2 =20; Р<0,01) и HLA-B17 (X2 =14,7; Р<0,01). Каких-либо особенностей в распределении HLA-антигенов среди носителей St.epidermidis и в общей группе обследованных не выявлено. Увеличение частоты антигена HLA-В16 наблюдается у злостных (Х2=12,0; Р<0,01), транзиторных (Х2= 7,6; Р<0,01) и временных (Х2=9,2; Р<0,01) носителей. Резидентный тип носительства патогенного стафилококка ассоциируется с присутствием в тканях антигена В17 (X2 =11,0; Р<0,01). Особенно часто этот антиген обнаруживается у носителей, склонных к повторным респираторным заболеваниям (X2 =10,6; Р<0,01). Среди последних увеличено также число лиц с антигеном HLA-B41 (Х2=8,1; Р<0,01) иаллелями DR-локуса: DR3 (Х2=6,5; Р<0,01) и DR7 (Х2=8,1; Р<0,01).

Носительство St. aureus ассоциировалось не только с отдельными HLA-антигенами, но и с некоторыми их фенотипическими и гаплотипическими сочетаниями. Среди носителей с повышенной частотой регистрировались фенотипы A2-Ao, B17-Bo, В7-В16 и гаплотипы А2-В17, А9-В17. Некоторые комбинации антигенов чаще выявлялись при резидентном типе носительства (В7-В16, В15-В17, В17-В41), другие при транзиторном(В16-В22) и временном (В16-Во, В8-В16). С другой стороны, имелись сочетания HLA-антигенов, которые редко обнаруживались среди носителей или вообще отсутствовали: B35-Bo, B40-Bo, В14-В35, AI-All, В8-В35. Очевидно, перечисленные антигенные признаки обусловливают определенную устойчивость к формированию стафилококкового бактерионосительства. В то же время, присутствие в фенотипе индивида антигена В16, В17 или их сочетаний с некоторыми другими аллелями HLA-комплекса повышает риск развития носительства в 2,3 - 23,8 раза ( по коэффициенту относительного риска RR).

Таким образом, полученные результаты подтверждают роль генетического фактора в стафилококковом бактерионосительстве. Практическое значение этого факта заключается в том, что определение HLA-фенотипа дает возможность оценить индивидуальный рискразвития длительного носительства патогенного стафилококка.

ВЫВОДЫ

1. Частота и характер носительства патогенного стафилококка зависят от влияния экологических факторов, связанных с профессией. В общей популяции обследованных частота носительства составила 47,5%, у медицинских работников она достигала 56,1 %. У них же чаще наблюдали резидентный и транзиторный типы носительства. У студентов медицинского института по мере перехода к клиническим дисциплинам выявлялась контаминация слизистых госпитальными штаммами St. aureus, нарастала частота резидентного носительства.

2. У рабочих завода по производству кормовых дрожжей носительство St. aureus обнаружили в 48,8% случаев. Для них характерно частое присутствие St. aureus одновременно в носу и зеве в виде монокультуры или в сочетании с грибками рода Кандида. У 47,2% рабочих наблюдали высокую концентрацию дрожжеподобных грибков.

3. У ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС отмечали дисбиотические изменения микрофлоры носа и зева. St. aureus, как правило, выделяли в ассоциации с St. epidermidis , St. saprophytics и грабками рода Кандида.

4. При резидентном типе носительства во всех группах обследованных чаще встречались штаммы St. aureus с высокой антилизоцимной активностью. Культуры St. aureus , изолированные от медицинских работников, студентов-медиков и "ликвидаторов", чаще обладали множественной антибиотикоустойчивостью.

5. У постоянных носителей St. aureus выявили снижение относительного содержания В-лимфоцитов, уровня сывороточного Jg А, титра видоспецифических антител к золотистому стафилококку, угнетение бета-литической активности крови. В то же время у них налюдалось повышение активности сывороточного лизоцима, титра комплемента,

концентрации ЦИКититра противомикробных антител кэпидермальному стафилококку.

6. У носителей, склонных к повторным острым респираторным заболеваниям, часто регистрировалось одновременное снижение относительного содержания В-лимфоцитов, уровня JgA, титра антител к St. aureus и угнетение активности бета-лизинов в сыворотке крови. Комплекс перечисленных тестов можно использовать для прогнозирования предрасположенности носителей к респираторным инфекциям.

7. Повышенный dhck стафилококкового бактерионосительства ассоциируется с присутствием в тканях антш «нов HLA-B16, В17и сочетаний В7-В16, В17-Во, А9-В16, А9-В17, тогда как у лиц, имеющих сочетания AI-АЗ, А2-В15, А9-В35, А10-В35, существует определенная устойчивость к формированию постоянного носительства.

8. Наличие в фенотипе антигенов В17, В41, DR3, DR7 обусловливает предрасположенность носителей патогенного стафилококка к повторным острым респираторным заболеваниям.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При проведении санирующих мероприятий необходимо учитывать биологические особенности вегетирующего на слизистых носа и зева Staphylococcus aureus , которые возникают в результате воздействия неблагоприятных экологических факторов.

2. Для более полной оценки иммунного статуса носителей патогенного стафилококка рекомендуется исследование HLA-фенотипа. Наличие в тканях индивида антигена В17 расценивают как генетический

признак, предрасполагающий к формированию постоянного носительства "резидентного" типа.

3. Определение у постоянных носителей патогенного стафилококка относительного содержания В-лимфоцитов, уровня иммуноглобулина А, бета-лизинов и титра антител к золотистому стафилококку может быть использовано для прогнозирования их предрасположенности к повторным респираторным заболеваниям. Наличие в фенотипе антигенов системы HLA- В17, В41, DR3, DR7, гаплотипа АЗ-В17, фенотипов В7-В17, В17-В41

также несет в себе риск повышенной предрасположенности носителей к частым инфекциям верхних дыхательных путей.

4. Носители золотистого стафилококка из групп риска нуждаются в систематическом мониторинге, проведении настойчивых санирующих мероприятий.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О некоторых различиях в носительстве патогенных стафилококков и стрептококков среди различных контингентов населения

// Экономика, экология, здоровье: Тез. докл. учебно-методической и научно-практической конференции. - Ижевск, 1991. -С. 126-127 (соавт. Г.АЗайцева, Т.В.Симкина).

2. Характеристика патогенных микроорганизмов, выделенных из носа и зева здоровых лиц // Здоровье человека и экологические проблемы: Тез. докл. зональной научно-практической конференции. -Киров, 1991. -С. 9193 (соавт. Г.А.Зайцева).

3. Характер распределения НЬА-антигенов среди носителей патогенных стафилококков //Антигены гистосовместимости и заболевания: Сб. науч. тр. -Санкт-Петербург, 1991. -С. 60-62 (соавт. Г.А.Зайцева, Н.С.Дюпина).

4. Оценка иммунного статуса доноров крови и плазмы // Казанский мед. журнал. -1991. -Т.72, N5. -С.321-324 (соавт. Г.А.Зайцева, В.И.Шардаков, Т.Г.Копанева, О.Ю.Садовникова, Н.Н.Кузнецова, С.Г.Порохненко).

5. О некоторых особенностях иммуногенетического статуса стафилококковых бактерионосителей // Вопросы трансфузиологии и клинической медицины: Тез. докл. конф. молодых ученых. - Киров, 1992. -С.23-24 (соавт. Г.А.Зайцева).

6. Анализ иммунологических показателей у носителей патогенного стафилококка // Методологические и методические проблемы оценки состояния здоровья населения: Тез. докл. Всесоюзной науч. конф. -Санкт-Петербург, 1992. -С. 353-354 (соавт. Г.А. Зайцева, О. Ю. Садовникова, В.И.Шардаков, Н.В.Войнова).

7. Частота распространения стафилококкового бактерионосительства среди студентов-медиков разных курсов // Медико-биологические и экологические проблемы развития Севера : Сб. науч. тр. -Архангельск, 1992. -С.62-64.

8. Иммуногенетические аспекты антистафилококкового иммунитета

// I съезд иммунологов России. -Новосибирск, 1992. -С. 169-170 (соавт. Г.А.Зайцева).

9. О некоторых особенностях стафилококков, выделенных у детей в семьях участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЗС /,' Актуальные «нинимкской педиа.ч;/.»., ^иу&ёрстга гинекологии: Материалы науч. конф. -Киров, 1392. -С.23-30 (соавт. Г.А.Зайцева).

10. Микробиологическая и иммунологическая характеристика стафилококкового бактерионосительства // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины: Материалы науч. конф. -Киров, 1993. -С.78-79 (соавт. Г.А.Зайцева).

11. Характеристика микроорганизмов, персистирующих на слизистых зева и носа у детей организованных коллективов, расположенных в районе БХЗ //Экологическая безопасность городов: Материалы конф. -Санкт-Петербург, 1993. -С.53-54 (соавт. Г.А.Зайцева, М.Е.Кофтунова).

12. Показатели клеточного и гуморального иммунитета у резидентных и транзиторных носителей патогенного стафилококка // Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века Тез. докл. конф молодых ученых России. -Москва, 1994. -С.75-76 (соавт. Г.А.Зайцева).