Сравнительный анализ генетического разнообразия пород крупного рогатого скота на основе ISSR-фингерпринтинга и полиморфизма гена Каппа-Казеина

Ахани Азари Моджтаба

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительный анализ генетического разнообразия пород крупного рогатого скота на основе ISSR-фингерпринтинга и полиморфизма гена Каппа-Казеина
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Сравнительный анализ генетического разнообразия пород крупного рогатого скота на основе ISSR-фингерпринтинга и полиморфизма гена Каппа-Казеина"

На правах рукописи

АХАЛИ АЗАРИ МОДЖГАБА

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ ПОРОД КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ОСНОВЕ 188И-ФИНГЕРПРННТИНГА И ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА КАППА-КАЗЕИНА

Специальность 03.00.15 -генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

обязательный

бесплатный

с^'зшпляр

МОСКВА-2006

Работа выполнена в лаборатории сравнительной генетики -животных Института общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ

доктор биологических наук, профессор Сулимова Галина Ефимовна

ОФИЦАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ доктор биологических наук, профессор доктор биологических наук

Митрофанов Владимир Григорьевич Муха Дмитрий Владимирович

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

Кафедра генетики Биологического факультета МГУ им. М. В. Ломоносова

Защита состоится « » 2006 г. в часов на заселении Диссертационного совета Д 002.214.01 в Институте общей генетики им. Н. И. Вавилова РАН по адресу: 119991, ГСП-1, Москва, ул. Губкина, 3. Факс: (095) 132 89 62.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института общей генетики игл. Н. И, Вавилова РАН.

Автореферат разослан «_»_2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук

Полухина Галина Николаевна

Актуальность проблемы. Современная теория селекции животных основывается на детальном изучении генетических аспектов улучшения породных в продуктивных качеств молочных пород крупного рогатого скота (КРС). Интенсивная селекция КРС привела к созданию специализированных пород. При существующей системе разведения крупного рогатого скота большую опасность представляет снижение в породе, стадах, линиях, семействах генетического разнообразия, которое существенно влияет не только на продуктивность и воспроизводство, но и резко ограничивает ириспосабливаемость к условиям содержания и жизнеспособность потомства. В настоящее время селекция на создание высокопродуктивных молочных пород КРС была успешной, однако она привела к серьезным проблемам, связанным с резким преобладанием во всем мире одной породы • голштяно-фризской. Результатом этого явилось значительное сокращение численности других пород, а, следовательно, и сокращение общего v генетического разнообразия генофонда КРС. Например, из 66 пород,

разводившихся в 80-90 годах XX века в бывшем СССР, в 2001 году в Российской Федерации осталось 33 породы, из которых только 16 имеют достаточную численность для нормального воспроизводства (Алтухов и др., 2004). Обеднение генофонда в будущем может привести к отрицательным непредсказуемым последствиям, поскольку невозможно предсказать возникновение новых требований к продуктивности и резистентности КРС к заболеваниям. Важно поддерживать максимально возможное разнообразие генофонда. Необходимым условием для проведения таких работ является проведение генетического мониторинга пород КРС на молекулярном уровне.

В качестве тест-систем для изучения генетического разнообразия КРС на

молекулярном уровне используют монолокусные н мультилокусныс ДНК-маркеры.

В качестве монолокусных ДНК-маркеров особый интерес представляют

полиморфные варианты генов, участвующих в формировании хозяйственно-

полезных признаков. К таким генам относится ген каппа-казеина (CSN3),

аллельные варианты которого оказывают значительное влияние на физические и

химические свойства молока (Schaar et al, 1984, 1985; Robitaille 1995), его

пригодность для сыроделия (Zadwomy & Kuchnlein, 1990). Для оценки уровня

полиморфизма генома в целом используются мииросателлнтные и мультилокусные

fOC. НАЦИОНАЛЬНАЯ

1 С,-П бур г

ОЭ 20эймт а

ДНК-маркеры. Микросателлитные маркеры широко используются для исследования генетического полиморфизма различных видов, однако, стандартные тест-системы на основе определенного набора из 12-20 мнкросателлитных локусов разработаны только дня пяти видов млекопитающих: человека, лошади, КРС, собаки и мыши (Applied Biosystems). При этом необходимо иметь в виду, что предлагаемые для КРС наборы могут оказаться неподходящими для мало изученных аборигенных пород, в особенности зебувидного происхождения, и для родственных видов (яков, зубров). Кроме того, следует указать на высокую стоимость оборудования и наборов для тестирования, что делает затруднительным использование данного подхода для популяционных исследований.

В связи с этим большой интерес у исследователей вызывают мультилокусные тест-системы, такие как RAPD (Randomly amplified polymorphic DNA), AFLP (Amplified fragment length polymoiphism) и ISSR (Inter-simple-sequence-repeats). Эти системы не дорогостоящи и, кроме того, могут быть использованы для исследования мало изученных видов, поскольку для их применения не нужно знания нуклеотидной последовательности ДНК исследуемого объекта.

В качестве тест-системы для изучения генетического разнообразия и дифференциации пород КРС нами был использован анализ межмикросателлитного полиморфизма - ISSR-анализ или, как его еще иногда называют, - ISSR-фннгерпрннтинг. Этот метод относится к методам молекулярного мультилокусного анализа. Он позволяет одновременно оценивать полиморфизм десятков локусов (до 30 локусов и выше). Данный подход широко применяется для дифференциации видов и сортов растений, однако, крайне мало используется в исследованиях генофондов сельскохозяйственных животных.

В генетико-селекционных исследованиях сельскохозяйственных животных большое значение имеет анализ популяции, изучение их гетерогенности, дифференциация и идентификация пород. Использование молекулярных маркеров значительно расширяет возможности генетического анализа популяций, позволяет установить меж- и внутрипородную вариабельность отдельных участков генома и составить представление о генетической структуре породы.

Целью настоящей работы является сравнительный анализ генетического разнообразия российских и зарубежных пород КРС с использованием межмшфосателлшного анализа (ISSR-фингерпринтинга), а также характеристики исследованных российских пород по локусу CSN3.

Дня достижения указанной цепи были поставлены следующие задачи:

1. Оценить частоту встречаемости аллельных вариантов гена CSN3 у российских пород КРС.

2. Определить уровень генетического разнообразия у российских н зарубежных пород КРС и яков с использованием ISSR-анализа.

3. Провести сравнительный анализ спектров ISSR-полиморфизма у исследованных пород с использованием двух типов праймеров: (GA^C и (AG)»C.

4. Охарактеризовать генетическое разнообразие исследованных пород и их линий на основе ISSR-маркеров.

5. Рассмотреть возможность применения GA- и AG-ISSR-маркеров дня дифференциации исследуемых пород.

Научная новизна н практическая ценность работы. В настоящей работе впервые исследовано генетическое разнообразие 15 пород КРС и популяции монгольских яков с использованием метода мультилокусного межмикросателлитного порлиморфвзма (ISSR-фингерпринтинг). При исследовании 535 особей выявлено 55 индивидуальных ISSR-фрагментов, из которых 53 были полиморфными: 31 полиморфный фрагмент для AG-ISSR- и 24 фрагмента для GA-IS SR-маркера (22 полиморфных). Исследованные популяции различались по обоим типам маркеров как по спектру фрагментов, так и по их частотам. Для некоторых пород выявлены породоспецифичные фрагменты. Для всех исследованных пород отмечен низкий уровень гегерозиготности и высокие значения коэффициента внутригрушового сходства, что указывает на низкую подразделенность пород.

Впервые показано, что ISSR-маркеры позволяют четко дифференцировать породы КРС, относящиеся к разным видам (Bos taurus, В. indicas и В, grunniens). Продемонстрировано успешное применение ISSR-анализа для дифференциации близкородственных популяций: пород одного корня (например, турано-

монгольских)) отдельных стад и линий одной порода (на примере ярославского скота).

Впервые на уровне геномного полиморфизма исследованы взаимоотношения турано-монгольских пород и показано, что якутский и монгольский скот являются близкородственными, в отличие от калмыцкого скота, имеющего независимое от указанных пород происхождение.

Впервые показано, что уровень внутрипородного разнообразия КРС по локусу каппа-казеина выше, чем межпородного (по критерию Кульбака и а следовательно, хотя генотшшрованис КРС по локусу каппа-казеина чрезвычайно важно для селекционной практики, но частоты этого гена не могут служить характеристикой породы и использоваться в качестве генетического маркера в филогенетических исследованиях КРС.

Полученные результаты могут найти применение в сельскохозяйственной практике для оцепки геномного разнообразия и паспортизации пород и линий КРС, что позволит избежать влияния инбриндинга при разведении КРС. Апробация работы. Основные результаты диссертации представлены на 8 Международных и Всероссийских конференциях, в том числе на следующих профильных конференциях: IV национальном конгрессе по биотехнологии (Керман, Иран, 2005), Международной научно-практической конференции по актуальным проблемам животноводства на современном этапе (Улан-Уде, 2006), 14-оЙ Международной конференции н дискуссионного научного клуба по новым информационным технологиям в медицине, биологии, фармакологии и экологии (Крым, Ялта-Гурзуф, Украина, 2006), пятой Международной научной конференции по современным достижениям и проблемам биотехнологии сельскохозяйственных животных (ВИЖ, Дубровицы, 2006), 13-ой Международной конференции Иранских исследователей в Европе (IR.CE 2005) (Англия, 2005), Международной конференции по генетике, посвященной 40-легию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (Москва, 2006), Международной научной конференции по современным проблемам генетики (Минск, Беларусь, 2005). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ (2 в печати).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 237 наименований и приложения. Работа содержит IS таблиц, 32 рисунка и 3 схемы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе изучены популяция монгольских яков (п=35) и выборки 15 российских и зарубежных пород КРС: калмыцкой (п=90), бестужевской (п=60), российской черно-пестрой (п=43), Н'Дама (п=°30), новозеландской фризской (п=30), голштино-фризской (п=30), норвежской красной (tis30), нормандской (п=30), Монбельярд (п=30), якутской (п=б9), монгольской (п=30), ярославской (п=67), Хариана (п=10), Тарпаркер (п=10), Сахнвал (п=8). Породы Хариана, Тарпаркер и Сахивал относятся к Bos indicus, остальные породы КРС относятся к виду Bos taurus, причем монгольскую, калмыцкую и якутскую породы некоторые авторы относят к отдельному подвиду Bos taurus turano-mongolicus.

Реакцию амплификации проводили с использованием сухого набора реагентов для ПЦР «GenePak™ PCR Cote» согласно прописи фирмы-изготовителя (IsoGene, Москва). При амплификации фрагмента гена CSN3 использовали праймеры SGE (5'- tatcatttatggccattggacca) н SGO (5'- ctictttgatgtctccttagagtt), а при проведении ISSR-анализа - праймеры (AG)sC или (GA^C. Амплификацию проводили в термоциклере фирмы «MJ Research» (США) "РТС-100" или "Amply 4L" ("BioCom", Россия). Для типирования аллельных вариантов CSN3 был использован также метод аллель-специфичной ПЦР с помощью набора «GenePak® к-казеин А/В PCR testo («IsoGene», Москва). Типирование аллелей А а В гена CSNS методом ПЦР-ПДРФ проводили с использованием рестрикгаз Hinfl. и Taql Электрофоретическое разделение продуктов амплификации проводили в 2%-ном геле агарозы, продуктов рестрикции - в 6%-ном полиакриламидном геле.

Статистический анализ данных осуществляли с помощью пакетов программ: POPGENE 3.1, STAT1STICA 6.0 и "GELSTATS, version 2.6". Для оценки избытка гетерозигот в изучаемых выборках животных использовали коэффициент Селендера (D) (Pudovkin, 1996). Гетерогенность выборок оценивали на основе критерия Кульбака (Животовский, 1991).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Аллельныы полиморфизм гена CSN3 у российских пород КРС. Тестирование аллельных вариантов гена CSN3 проводили на основе анализа полиморфизма (ПЦР-ПДРФ) и аллель-специфичной ПЦР участка гена длиной 22$ пл., расположенного в экзоне IV (Alexander et al.,1988).

Частоты аллелей и генотипов гена CSN3 значительно различались у исследованных пород КРС (таб.1). Частоты генотипа ВВ у всех исследованных пород были низкими и не превышали 10%. Соотношение наблюдаемых и ожидаемых частот генотипов соответствовало равновесию Харди-Вайнберга, за исключением якутского скота, для которого было отмечено достоверное отличие наблюдаемой гетерозиготносга от ожидаемой (Gi=5,523, р=0,019) в сторону избытка гетерозигот (D=0,18).

Полиморфизм генов казеинов и, в частности, гена CSN3 часто рассматриваеся как одна из характеристик породы. Однако, рядом авторов было отмечено, что разные стада одной породы могут существенно различаться по частотам генотипов CSN3, Нами были собраны и проанализированы собственные и литературные данные по частотам аллелей и генотипов CSN3 в стадах и породах КРС России (таб.1). Анализ пород на гомогенность по критерию Кульбака (таб.1) показал, что все исследованные породы КРС гетерогенны и уровень внутрипородного разнообразия no CSN3 выше, чем межпородного. О том же свидетельствуют и низкие значения Fst, составляющие от 0,0025 до 0,0431. Использование искусственного осеменения, по-видимому, резко меняет структуру субпопуляций (стад), увеличивая вклад быков-производителей в генофонд популяции. Таким образом, хотя генотипирование гена CSN3 чрезвычайно важно для селекционной практики, но частоты этого гена не могут служить характеристикой породы, поскольку они в основном зависят от генотипа быков-производителей и могут существенно меняться уже в следующем поколении. Иными словами данный генетический маркер может быть не адекватен при использовании его для маркирования породных различий или филогенетических взаимоотношений.

Частоты аллелей и генотипов гена каппа-казенна у пород крупного рогатого скота России

Таблица 1,

Логмяа N Частоты аллелей ± Б»* Чясплы гепоп шов ± Бр* Ссыпка 6* Р*

А в АА ЛВ вв

Я[,"угскял, рка^пша Сохи 33 56.06i4.67 43.9444,67 21.2147.12 69.7048.00 9.ШМ® 9,177 0.0102

«9 74,6443,70 253643.70 i2.17ii.01 44ДЬЬ5,99 2,9012,02 Собств. допинг

Чфпо-пктрат •Мось. обл. -Моск. оба. -К'раснвврсюя! ц>. 52 84.iJi3.54 15,3®±3,54 71ЛШД9 27,0046,16 2,0041+94 Ссостт. ятлшис 24,622 0.МЙЮ15

71 »iW.ll li.67i3.ll ЗД904&46 28,2045.30 2^041,98 СЛЛШШДО V ДО^ОМ)

«;.72±2.44 34.2842,44 40,00*3.88 52,0043,96 8.004247 (ЦШКОДеОВДО. 2М.П

Крзсво-пмтрши - Мордовия 90 «,78*3^98 5 51,12±5Д7 31Д1ДШ 16,6743,93 {Кглэппйкеы п др.. 2 КО) 14.1М 0.000072

- Кроакигрскиц Ер. 105 30,4842,65 42,0044.82 3.00*1,« {Ккашнлкеы п др* ■¡чип

-Лнкецкпя обл. 55 56,36*4,73 43,6444,73 30.9146,23 50,9146,74 18,1845,20 20М)

Бк^хешкоя; -ЖШ^ГОЭСХПЯ обл. 20 60.0 №±7.75 40.0047.75 «0.0047.75 40.00i7.75 60.0Ш.75 (ДфиигаЛЭД) 3,659 0.161

-Татпрспш » 70.6Ht4.06 1937 ±4.06 4».20±63й 42Л646.23 7.94ИЛ Собств, пшшь»

Х^чиршроая: - АрЗДНГСПЬСКВД обл.4 * 1336 70.4740.92 29.5340.92 4i.03il.42 42.8841.41 8.да=ьо.7в одт»коэ.20<м) 20.33 0,0025

• Московская обл.** 176 74.724232 25.284232 53.9843.76 4ЫШ.71 4.554Ь57

- Коми" 1495 66.8940.84 33.11*0.84 43.4841.28 46.S2il.29 9.7040.77

-Ряодская обо. 79 75.9543.40 34.05iJ.4Q 35.444538 63342.74 (Пплэп л лр..

Яртыаншз: - ^МидоКпоасхое» «0 «лсмл» 33.53i6.fl» 433346.40 (Срчш а 0,155

- «Гоишцхяв «0 50.0044,56 50Л0Ы.56 20.0045.16 60.01Ш32 20.0045.16

Голипопскап: ТлНфстон (бъпас* прсфпваоттшто) 50 100.00 0.00 100.00 0.00 00.00 {Хеершнюэаяр* 1И7) - -

Кммышла 91 67.5843.47 32.42i3.47 43.9645.20 47.2545.23 8.7942Э7 Собств. донпие -

Спцнсгаальсиии - Воронежски обл. 113 77.4341.78 22Л742.78 29.20W.28 7.9ШЛ5 (Клгюисщ и др* 1ММ) 13.6В2 0.0084

- Боронеэкская обл. 84 63.6943.71 363143.71 44.0545.42 39.294533 16.644.07 {КМОМЛЭИЮрч И441

- Орловская ой'1. Ш 75^0±3.04 24^043,04 55.0&ьМ7 41.0044.92 4.00*1.56 (Ккилэхои ш ДРИГО«

Примечание: N—размер выборки, Бр—стандартная ошибка, С - критерий. Кульбака, Р -уровень достоверности; * - ошибка частот аллелей н генотипов и оценка критерия Кульбэна раесчшаны нами на основе формул, привеаштх в работе ( ЖнвоговсигК,!^!); ** - пшнрованне А- и В-аляелей кашт-казеква проводняк с помощью электрофореза белков молока в крахмальном геле.

Дифференциация пород КРС и яков с помощью молекулярного мультолокусного анализа (lSSR-анализ). Поскольку к настоящему времени ISSR-маркеры относятся к мало изученным маркерам, особенно у сельскохозяйственных животных и, в частности у КРС, целью нашей работы стало не только изучение генетического разнообразия пород КРС, но и сравнительный анализ информативности двух типов ISSR-маркеров, использованных в работе: GA-ISSR-маркера, полученного на основе амплификации ДИК с праймером (GA^C, и AG-ISSR-маркера, полученного на основе амплификации ДНК о маркером (AG)»C.

При использовании праймера (AG)9C был получен более широкий спектр ампликонов, чем при использовании праймера (GA)9C: 31 фрагмент (от 190 до 2450 п.н,) и 24 фрагмента (от 210 до 2430 п.н.) соответствекно.Полученные спектры ампликонов для исследуемых популяций представлены на рис. I и 2,

Рис. I. Спектр ампликонов, подученный методом /УЗК с использованием праймера (АО^С, у исследованных пород КРС и яков. Более яркие фрагменты в паттернах показаны чёрным, остальные - серым цветом

Исследуемые выборки пород КРС и монгольских яков различались по числу и частотам встречаемости фрагментов. Некоторые фрагменты встречались во всех исследованных выборках, хотя и с разными частотами. Другие являлись редкими и присутствовали только у одной, двух или трех пород. Были обнаружены породоспецифичные фрагменты.

ж £ 8 ас = ;г

ММ»)

га

»П.»»

Мш мЪ зн<т

О Но» 1*вша Рз пм мшпп

Рис. 2. Спектр ампликонов, полученный методом с использованием праймера (йА)$С, у исследованных пород КРС и яков. Более яркие фрагменты в паттернах показаны чёрным, остальные - серым цветом

Для АЗ-КЗК-маркера это были фрагменты 13 и 25, представленные только у норвежского скота (частоты - 0,1 и 0,233 соответственно), для вАЛвЗК-маркера -фрагменты 3 и 12 у хариава (частоты = 0,1)> фрагмент 2 у бестужевской (частота = 0,048) и фрагмент 5 у нормандской порода (частота = 0,111). К сожалению частоты породоспецифичных фрагментов невелики и они не могут служить полноценными породоспецифичными маркерами, но все же они представляют значительный интерес для характеристики пород и свидетельствуют о своеобразных чертах их генофондов.

Обращает на себя внимание тот факт, что профили частот фрагментов у разных пород имеют сходный характер (рис, 3). Особенно четко это прослеживается на группах пород одного корня: турано-монгольских, зебувидных, фризских (рис.4). Уровень сходства по профилям частот фрагментов в турано-монгольской группе пород (без учета яков) составил 65%, в группе зебувидных пород - 58%, в группе фризских пород - около 64% (рис.4). Аналогичная картина была отмечена и для ОА-15БЕ.-маркера. Более того, уровень сходства профилей частот фрагментов для ОА-ХЗЭК-маркера был даже выше, чем для АО-ХЗЭК-маркера и достигал 79% для турано-монгольской труппы пород.

б в 10 13 Н 10 1® Н> И 14 50 10 М 52 Фрегтдйет

--------кгргйаал

в Боагумкхм

—' — Инцрмкег

"-1 —

Черчэ-дестроя ------—ОДК&1 АкЭДп

МИапл

РисЗ. Профили частот фрагментов Ав*13$Я-маркера у исследуемьгх выборок животных.

1X1 чи м 01 а вв

Iй

3 04 01 02 01 0.0

> II 19 в и « И К 1! » Я >1 Фрэмскт

игасгя

о н и в « « и а » у зо я

ФрОЛЦЕЧТ

1000 о»

01-ОЛ.

31 ■

Ъй

□

1 4 п л? 1Г 31 7Ь 15 V ъ М

Фра/и еет ЧСДОЛССТРСЯ

—нсмм

—г— г*грсосйа

Рис 4. Профили частот АО -iSS.fi-фрагментов в исследуемых выборках животных:

а - тураио-моигольских пород КРС (якутской,калмыцкой, монгольской) и яков,

Ь-зебувидных пород ( тарпаркер, хариана н сахивал,), с-фризских пород (черно-пёстройI, гатитино-фризской и новозеландской фризской)

Породы КРС и яков отличаются друг от друга по общему (наблюдаемому) числу фрагментов и среднему числу фрагментов на особь (табД). Наибольшее число тестируемых фрагментов в AG-ISSR-спеюрах было выявлено у норвежской красной породы (26), а в GA-ISSR-спеюрах - у хариана (16). Наименьшее число фрагментов по AG-маркеру было отмечено у Н'Дама и у новозеландской фризской (16), по GA-ISSR-маркеру - только у Н'Дама (9). Интересно отметить, что все российские аборигенные породы характеризуются высоким общим содержанием фрагментов в ISSR-спектрах и по этому параметру значительно превосходят зарубежные породы. Надо полагать, что это отражает высокий уровень генетического разнообразия российских аборигенных пород. Исключение составляет бестужевская порода, у которой число тестируемых GA-ISSR-фрагменгов составило всего 11, хотя число тестируемых фрагментов по AG-ISSR-маркеру было высоким (23).

Наибольшее среднее число фрагментов на особь по обоим маркерам было отмечено у якутской породы. По этому параметру она превосходит все другие исследованные породы с высоким уровнем достоверности (0.ОООК р <0.029). Другие российские аборигенные породы также имеют высокие значения этого параметра. Наименьшее среднее число фрагментов на особь по AG-ISSR-маркеру было найдено у черно-пестрой породы, а также у новозеландской фризской и нормандской пород, которые недостоверно отличались от чёрно-пёстрой породы по этому параметру (р >0.097 и р >0,401 соответственно). Наименьшее число GA-ISSR-фрагментов выявлено у бестужевской породы (5,790±0,130). Интересно, что бестужевская порода менее полиморфна по GA-ISSR, чем по AG-ISSR-маркеру. Самое низкое среднее число фрагментов принадлежит якам и достоверно отличается от большинства пород КРС, за исключением бестужевской породы, у которой это значение ниже по GA-ISSR-маркеру.

На уровне межвидового {Bos taurus$ Bos indicus и Bos grumiens) и межпородного полиморфизма практически все выявленные фрагмента (за исключением GA-ISSR-фрагментов 14 и 15, которые представлены у всех исследованных популяций с частотой 1,0) являются полиморфными, поскольку представлены в исследованных популяциях с разной частотой. Однако, на внугрипородном уровне доля полиморфных фрагментов у разных пород

Таблица 2.

Характеристика исследованных пород по АСМаВВ. и ОА-КВИ-маркерам

Число »3 лестьи Общее час.» Среднее чпело Доля Квэффашяеыт Гетерозоготиотть

Породы ПО ЛрэПмерЛ.М фрагментов фрагментов ъя ЛйЛ1П10рфПЫЕ (пи 51егЬе«»)

влккгре огобь фряшгвш «олсгс.ч

(АО»С (СА),С <АС>»С (РЛЬС (АЗДС (БЛЬС (АС)*С (САЬС <А<3»,С (САЬС (АфрС дальс

Яроммвскля «3 67 25 14 15,206« 9,751* 0,616 0,530 0387 0,890 0,163 0,152

0,211 0,167

Кллиыпкая 8» 88 25 14 14,236* 3,634* 0,819 0,449 0,818 0,866 0,281 0,187

0336 0,180

Якутскпа 3« 32 22 14 16,500* 9,933* 0,202 0,213 0,910 0,877 0,097 0,117

0.287 0,262

МОНГОЛЬСКИЙ 27 31 19 11 14,556* 8,226* 0,525» 0/<65 0,906 0,94? 0,143 0,101

0.343 0.111

Бестужева«« 57 «2 23 11 14,702* 5,750* 0,662 0,600 0,845 0,883 0,243 0,160

0.383 О.ВО

ЧРрпд-пепряя 43 42 18 13 11,047* 3,186* 0,583 0,413 0.816 0,810 0,250 0,217

0394 0,298

Н'Дама 29 30 <6 9 13.103* 3,067* 0,461 0,445 0,833 0,941 0,177 ОД 19

0,464 0,172

Новотелллдсклв фрпмкяп 29 зй 16 п 11,328* 3,733* 0,442 0,449 0,866 0,344 0,192 0,204

0,553 0,383

Гвлтпшо-Фризгкая 25 30 18 а 14,720± 9,333* 0,467 0,384 одоз 0,895 0,122 0,150

0*156 0.28]

Норвежская красяал 3« 25 26 14 14Д00± 8,440* 0,551 0,565 0,771 0,820 0,275 0,223

0,419 0,405

Нормандская 24 27 20 и 12,203* 3,889* 0,892 0,444 0,300 0,789 0322 0Д37

0,605 0.448

Мопбельяра 30 30 20 13 13,267* 9,100* 0,713 0,477 0,332 0,362 0,271 0,189

0.445 0,293

Харпаня 10 10 20 16 14,300± 3,Й00± 0,567 0,427 0,819 0,764 0,238 0,231

1,023 0,733

Тярияркер 9 10 18 12 13,778* 3,500* 0,635 0,317 0,303 0,855 0,258 0,151

1.152 0,543

Слмвял 7 7 18 и 13,143± 3,857± 0,613 0,346 0,787 0,863 0,273 0,153

1.405 0,670

Якп 33 35 18 13 11,242* 7,171± 0,876 0,323 0,723 0,781 0,394 0,215

0.622 0.311

Всего 535 556 31 24

существенно различается и варьирует от 0,213 до 0,600 для GA-ISSR и от 0,202 до 0,892 для AG-ISSR-маркера (таб.2). Для большинства пород КРС доля полиморфных фрагментов по маркеру GA-ISSR ниже, чем по AG-ISSR-маркеру. Доля полиморфных фрагментов у якутской породы по обоим маркерам - самая низкая (таб. 2), что, по-видимому, объясняется крайне низкой численностью данной породы (около 1000 голов).

У всех исследованных пород отмечены высокие значения коэффициента внутригруппового сходства и низкий уровень гетерозиготности (по Stephens) по обоим маркерам. Для AG- и GA-lSSR-марксров коэффициент внутригруппового сходства варьировал от 0.723 до 0.933 и от 0.764 до 0.949 соответственно, а уровень гетерозиготности по Stephens - от 0.097 до 0.394 н от 0.101 до 0.237 соответственно (таб. 2),

По AG-ISSR-маркеру среди пород КРС гояштино-фризская имеет наиболее ( высокий коэффициет внутригруппового сходства. За ней следуют российские

породы: якутская, ярославская и монгольская породы, которые недостоверно отличаются от голштино-фризской по этому параметру (р>0.071, р>0.075 и р>0.101 соответственно). Породы И'Дама и новозеландская фризская также имели высокие значения коэффициента внутригруппового сходства. У них значения этого параметра недостоверно отличаются от такового у указанных российских пород КРС (0.504<р<0.0,683 и 0.136<р<0.175 соответственно).

У яков отмечено самое низкое значение коэффициента внутригруппового сходства (0.723), достоверно отличающееся or большинства пород КРС (О.ОООК р< 0.024), за исключением норвежской красной (р>0.130) и пород, относящихся к ' виду Bos indicus: хариана (р>0.145), тарпаркер (р>0,145), и сахиваи (р>0,253).

Недостоверность различий по коэффициенту внутригруппового сходства у яков и зебувидных пород КРС объясняется малым размером выборок зебувидных пород. Уровень генетического разнообразия яков приближается к природным популяциям. Высокие значения коэффициента внутригруппового сходства (таб.2) указывают на низкий уровень полиморфизма («обеднснкость» генофондов) у всех исследованных пород КРС, что, по-видимому, связано с высоким давлением искусственного отбора.

О низкой уровне генетического полиморфизма пород БРС свидетельствуют и низкие значения гегерозиготности (таб.2). Яки имеют наиболее высокий уровень гегерозиготности (0,394) среда исследуемых выборок животных и достоверно отличаются по этому параметру от всех пород КРС(0.0001< р <0.002), Это также свидетельствует о сохранении в популяции яков более высокого уровня генетического разнообразия, что, по-видимому, объясняется тем, что яки по сравнению с породами КРС не находятся под столь интенсивным давлением селекции.

По ОА-185Б.-маркеру, в отличие от АС-К&К-маркера, среди пород КРС наиболее высокие значения коэффициента внутригруппового сходства имеют монгольская и Н'Дама (0.949 и 0.941 соответственно). У хариана отмечено наименьшее значение этого коэффициента (0.764). По вА-1$5В.-маркеру яки не дифференцируются от пород КРС; коэффициент внутригруппового сходства у них составляет 0,781, и по этому показателю нет достоверных отличий между яками и такими породами как хариана и нормандская породи (р>0.329). Уровень гетерозипшюсти яков (Н=0.215) также лежит в пределах вариаций между породами КРС (0,101 - 0,237). Это указывает на более низкую дифференцирующую способность ОА-ВБЙ-маркера по сравнению с АО-К^Й..

Высокие значения коэффициента внутригруппового сходства и низкий уровень гегерозиготности, по-видимому, связаны с повсеместным обеднением генофонда КРС. Интенсивная селекция на создание высокопродуктивных молочных пород привела к преобладанию в Европе и Северной Америке одной породы - голштино-фризской и резкому сокращению численности других пород, а следовательно, и к снижению биоразнообразия КРС. Те же процессы происходят и в России. Согласно литературным данным Россия потеряла за последние 10 лет около 30% пород КРС, 21% - находятся в критическом состоянии. К породам КРС, находящимся в критическом состоянии относятся и такие исследованные нами российские породы как калмыцкая, якутская, бестужевская.

При проведении 1$5К.~анаяиза с использованием (АС)$С- и (вА)дС-праймеров было получено 31 и 22 полиморфных фрагмента соответственно. Каждый из фрагментов можно рассматривать как отдельный маркер, представляющий собой нуклеотидную последовательность, заключенную между

двумя инвертированными мшфосателлигными повторами. Это может быть одна уникальная последовательность, маркирующая конкретный локус, или труппа последовательностей равной длины, но локализованных в разных областях генома. Индивидуальные ШЯ-маркеры (представленные отдельными фрагментами ЮвИ-спектра) могут быть локализованы в областях генома с разной функциональной нагрузкой, это могут быть гены или межгенные области. Неоднозначность функциональной нагрузки индивидуальных ШЭЯ-маркеров затрудняет их использование как генетических маркеров, осложняет статистическую обработку данных и трактовку полученных результатов.

Для анализа геномного полиморфизма пород КРС и яков и дифференциации исследуемых популяций нами был использован метод главных компонент. Данный анализ проводился совместно с к.б.н. Лазебным О.Б. Проекция наблюдений на плоскость главных компонент 1 и 2 для АО-КвЯ маркера представлена на рис. 5.

«р • ягу

та^ МОНГ ^ О V » Нар

•1Л -0,4 м <5,6

ГК<'35,72*

Рис. 5. Расположение проекций наблюдений не плоскость первых двух главных компонент, основанных на АО-КЗЛ-анализе исследуемых животных. Обозначения пород: Хор - хориста, Сох - сахивал, Тар - тарпаркер, Яку - якутская, Мот — монгольская, ЧП - черно-пестрая, Нор - нормандская. Мои — моибельярд, ИК■ норвежская красная. Кал - калмыцкая, ИД - Н'Дама, Яро - ярославская, НЗФ -новозеландская фризская, Бес - бестужевская, ГФ - Готшпино-фризская

По первым двум компонентам четко дифференцируются яка и зебувидные породы (хариана, тарпаркер, сахивал). В цепом следует отметить, что Аб-КЗК-маркер обладает высокой дифференцирующей способностью на уровне видов тигив, В. 1пеИсгя и В. ритпепя), но недостаточно информативен для анализа внутривидовой (породной) изменчивости.

Для GA-ISSR-маркера также выделены три пивных компонента. Яки, как и а сдучае с AG-ISSR-маркером, расположены на плоскостях главных компонент отдельно от всех исследованных пород КРС. Резко отличается от всех других пород КРС бестужевская порода. Остальные породы плохо дифференцируются.

Б целом, на основе полученных нами данных по обоим ISSR-маркерам следует отметить, что большинство пород КРС слабо консолидированы и имеют низкую подраздекенность. Это отражает реально существующую ситуацию. В мире практически не сохранились аборигенные породы, используемые коммерческие породы имеют смешанное происхождение. Огромный вклад вносит голштянский скот, который повсеместно используется в селекционной практике для повышения молочной продуктивности пород КРС, используемых в разных странах. Это приводит к тому, что генофонд исследуемых пород в значительной мере теряет свою уникальность, приобретает более унифицированный вид и, в конечном счете, приводит, к обеднению генофонда КРС. В связи с этим особый интерес представляет исследование аборигенных пород, которые еще сохранились в различных регионах. В нашей стране к таким породам относятся породы турано-монгольского корня - якутский и калмыцкий скот.

Дифференциация пород турано-монгольского корня с использованием AG-ISSR и GA-ISSR-маркеров. К подвиду Bos tawus turano-mongolicus относят бурятский, калмыцкий, киргизский, якутский, сибирский, сойотский, монгольский и маньчжурский скот (Колесник, 1949). Из этого разнообразия пород в настоящее время сохранились немногие. На территории России сохранились якутская и калмыцкая породы, хотя их численность невелика. Так, якутский аборигенный скот сохранился и содержится б чистоте в количестве около 1000 голов в Верхоянском районе Якутии. На основании краниологических исследований (Колесник, 1949) якутский скот отнесен к подвиду Bos taurus turano-mongolicus. Вначале предком якутского скота считали зебувидный скот. Однако позднее на основе исследований белкового полиморфизма якутского скота и некоторых родственных ему пород была выдвинута гипотеза о родстве якутской, киргизской, тувинской пород и независимом от монгольского скота формировании аборигенного скота Якутии (Слепцов, 1976). Калмыцкий скот выделяют в группу туземных, или аборигенных, пород Европы и Азии (Кулешов, 1931). Некоторые авторы считают несомненным

участие индийского скота в происхождении калмыцкой породы (Кулешов, 1931), другие - участие бантенга (Придорогин, 1924). Есть мнение, что основоположником калмыцкого скота был дикий азиатский «сот (Колесник,1936; Лискун, 1949). Наиболее часто калмыцкий скот относят к краниологическому типу Bos taunts turano-mongolicus. Иными словами, вопрос о происхождении калмыцкого и якутского скота и связи его с монгольским скотом до сих пор остается открытым. При этом животные этих пород обладают целым рядом ценных качеств. Якутский скот представляет собой большую экономическую ценность и уникальность по таким признакам, как высокая жирномолочность, устойчивость к экстремальным природным факторам и болезням, неприхотливость к кормам, способность к быстрому росту и развитию. Калмыцкая порода относится к мясному типу скота и характеризуется хорошей мясной продуктивностью н высоким качеством мяса.

В связи со всем вышесказанным анализу данных по породам турано-монгольского корня нами было уделено особое внимание. Показано, что значения коэффициента внутригруппового сходства, полученные на основе AG-ISSR-анализа, у якутской и монгольской пород одинаковы, однако сильно отличаются от калмыцкой (Р< 0.001 и Р< 0.002 соответственно). Уровень гетерозиготности у калмыцкой породы в 2-3 раза выше, чем у двух других пород и достоверно отличается от них (Р< 0.001). При использовании GA-ISSR-маркера значение среднего числа фрагментов на особь у калмыцкой породы ближе к таковому у монгольской, чем у якутской породы. Калмыцкая и якутская породы достоверно отличаются от монгольской по коэффициенту среднего внутригруппового сходства (Р< 0.001), но по уровню геторозиготности только калмыцкая порода (0.19) достоверно (Р<0.001) отличается от двух других пород.

Для уточнения вопроса о филогенетических связях исследуемых турано-монгольских пород нами был использован метод главных компонент и построена дендрограмма взаимоотношений между породами (рис. б). На плоскости главных компонент 1 и 2 все три породы расположены далеко друг от друга. По первой компоненте, вклад который в совокупную изменчивость составляет 77.03%, калмыцкая порода далеко отстоит и от якутской, и от монгольской пород (рис. 6а). Как это видно на дендрограмме (рис. бЬ), якутская и монгольская породы формируют совместный кластер, калмыцкий скот довольно далеко отстоит от них.

Рис. 6. Расположение проекций наблюдений на плоскости первых двух главных компонент, основанных на ОА-18$В.'аиаяизе исследуемых животных (а); дендрограмма взаимоотношений между породами, построенная по методу иРвМА на основе матрацы генетического сходства, рассчитанной по &4-185Я-потинорфшма (Ь). Популяция яков была использована в качестве референтной группы.

Таким образом, на основе сравнительного анализа данных по двум использованным ISSR-маркерам (AG- н GA-), можно придти к заключению об общности происхождения якутской и монгольской породы и якутский скот может быть отнесен к подвиду Bos taurus turano-mongolicus не только на основании краниологических исследований (Колесник, 1949), но и на основе данных мультилокусного межмикросателлитного анализа. Однако, гипотеза о независимом от монгольского скота формировании аборигенного скота Якутии (Слепцов, 1976) нашими данными не подтверждается. Калмыцкий скот, папротив, по-видимому, имеет независимое от монгольской породы происхождение, но на основании наших данных нельзя отдать предпочтение какой-либо из ранее выдвинутых гипотез. Для решения вопроса о происхождении калмыцкого скота необходимы дальнейшие исследования с привлечением пород индийского скота, бантенга, пород, ведущих свое происхождение от дикого азиатского скота.

Дифференциация стад и линий ярославской породы KP С по AG-ISSR н GA-ISSR-маркерам.

В данной работе методом ISSR-анализа исследовано генетическое разнообразие пяти линий ярославской породы КРС. Линии животных принадлежали к двум

хозяйствам «Михайловское» и «Горшиха»: животные Линии Марта и Жилета были выбраны из хозяйства «Михайловское», а линии Вольного, Мурата и Доброго - из хозяйства «Горшиха».Спектры амшшконов, полученных с использованием разных праймеров, резко отличались друг от друга. Использование праймера (AG)9C позволяло получать более широкий спектр ампликонов по сравнению с праймером (GA)t)C. Исследованные выборки животных отдельных линий и хозяйств в целом различались как по наличию/отсутствию отдельных фрагментов, так и по их частотам. AG-ISSR-фрагменты 19 и 22 были обнаружены только у животных линии Вольного (« Горшиха»), фрагмент 7, кроме линии Вольного, встречался только в линии Марта («Михайловское»). Фрагменты 16 и 17 встречались только у линии Марта. В отличие от большинства линий у линии Жилета («Михайловское») нет фрагментов 3 и 8. Фрагмент 8 отсутствует также в линии Доброго («Горшиха»), Фрагментов 14 и 26 нет в линии Вольного, в то время как в линии Мурата («Горшиха») отсутствует только фрагмент 26. По GA-ISSR-маркеру линии также отличаются по наличию/отсутствию некоторых фрагментов. Например, фрагмент 1, размером 2358 п,н., наблюдался у всех линий, кроме Доброго. Фрагмент 8 обнаружен только у линии Жилета.

Профили частот фрагментов AG-ISSR-маркера и GA-ISSR-маркера в линиях ярославской породы имеют сходный характер. Уровень сходства для AG-ISSR-маркера составил около 50%, для GA-ISSR-маркера - около 70%.

По частотам AG-ISSR- и GA-ISSR-фрагментов суммарные выборки из двух хозяйств «Горшиха» и «Михайловское» достоверно (р=0,028) отличались друг от друга, хотя по отдельным линиям внутри хозяйств достоверных отличий выявлено не было. Для исследованных линий ярославского скота были рассчитаны среднее число фрагментов на особь, доля полиморфных фрагментов, среднее попарное сходство (коэффициент внутригруппового сходства), гетерозиготность (по Stephens), представленные в таб.3.

Сравнение среднего числа фрагментов на особь в линиях животных из двух хозяйств проводили с использованием иерархического дисперсионного анализа. При использовании AG-ISSR-маркера по среднему числу фрагментов на особь достоверно не отличаются ira хозяйства (р>0.731), ни линии (р>0.152), за исключением линий Вольного и Мурата, которые достоверно (р<0.006)

отличаются друг от друга по этому параметру.

Таблица 3.

Характеристика исследованных лнннй ярославской породы по AG- н GA-ISSR -_маркерам_

Хозяйства Лннпв (AG)SC (САЪС

N СЧФ ДПФ СПС Hs N СЧФ ДПФ СПС Hs

Миай-ловское Марта Жилета Всего 25 15-2$МШ 034 0.90 0.13 8 15.25*0.37 0.09 0.92 0.06 33 15.27*027 0.34 0.90 0.12 25 9.20*0.13 0.0В 0.93 0.06 8 9.50*1.05 0.47 0.77 025 33 9.27*0,26 0.50 0.88 0.17

Горшвха Вольного Мурата Доброго Всего 12 14.5840.42 0.23 0.88 0.12 12 16,00*0.21 0.08 0.94 0.05 б 14.5tel.34 0.42 0.83 0.20 30 15.33*0.34 0.62 0.89 0.19 13 10.77*0.26 020 0.95 0.07 12 10.25*0.25 0.15 0.89 0.09 9 9.67*1.34 0.11 0.92 0.07 30 10.29*0.17 0.15 0.91 0.09

Примечания; N - размер выборки, СЧФ - среднее число фрагментов; ДПФ - доля полиморфных фрагментов, СПС - среднее попарное сходство, Hs - гетерозиготность по Stephens.

При использовании ОАЛБвЯ-маркера по среднему числу фрагментов на особь достоверно различались только линии Вольного и Доброго (р<0.015).

По локусам, тестируемым Ав- и ОА-КЗЯ-маркерами, были получены высокие значения коэффициентов внутригруппового сходства и низкие - для уровня гетерозиготности (табЗ), что свидетельствует о слабой подразделенное™ линий. По уровню гетерозиготности суммарные выборки животных из двух хозяйств достоверно различаются по обоим маркерам, хотя различия по АО-КБЯ-маркеру менее выражены. В отличие от гетерозиготности по попарному сходству эти различия недостоверны. При сравнении линий хозяйства «Мнхайловское» (линии Марта и Жилета) было показано, что по гетерозиготности по обоим маркерам они сильно (Р< 0.0001) отличаются друг от друга, но по попарному сходству эти различия достоверны только для ОА-КвЯ-маркера (Р< 0.0001). В хозяйстве «Горшиха» линии Вольного и Мурата (при использовании обоих маркеров) и по гетерозиготности и по попарному сходству различаются достоверно. Линии Вольного и Доброго достоверно различаются (Р<0.028) только по попарному сходству и только по вА-ШвЯ-маркеру, Линии Мурата и Доброго можно дифференцировать по гетерозиготности (Р< 0.012) и тоже только при использовании ОА-183й-маркера.

Уровень гетерозиготности по Ав-ЕЖ-маркеру в выборках животных хозяйства «Горшиха» выше (0.19), чем в хозяйстве «Мнхайловское» (0.12). Наиболее высокий уровень гетерозиготности по этому маркеру был отмечен в

линии Доброго (0,20). По GA-ISSR-маркеру, напротив, уровень гетерозиготности в хозяйстве «Михайловское» был почти в два раза выше, чем в хозяйстве «Горшиха». Наиболее полиморфной была линия Жилета (уровень гетерозиготности = 0,25).

С целью более четкой дифференциации линий ярославской породы был использован метод главных компонент. Проекция наблюдений на плоскость главных компонент 1 и 2 для AG-ISSR маркера представлена на рис. 7.

Б 4 3 2

§ 1

Й о

£ .2

-3 -4 -5

-7 -в -в -S -а -1 о 1 г 3 4 $

fact« 1:42.93%

Рис.7. Расположение проекций наблюдений на плоскость первых двух главных компонент, основанных на AG-lSSR-анализе выборок животных линий ярославской породы КРС.

Как это можно видеть на рис.7, выборки линий разделяются на 3 группы. В одной лежат рядом три линии: Жилета, Марта (обе из х-ва «Михайловское») и Мурата. Интересно, что линии из х-ва «Горшиха» сильно разнесены. При использовании GA-ISSR-маркера линии также разделяются на 3 группы, но в этом случае линии Жилета и Доброго меняют свое расположение. Две линии х-ва «Михайловское» (Жилета и Марта) значительно различаются по обоим главным компонентам. Линия Вольного по-прежнему дифференцируется отдельно от всех других линий.

Таким образом, использованный нами подход позволял дифференцировать как линии, так и хозяйства. В некоторых случаях был более эффективен один тип ISSR-маркера, в других случаях - второй тип. Наиболее четко отличается or всех других линия Вольного, которая надежно дифференцируется по обоим маркерам.

Жилет

Мурат о Март

Добрый в

Вольный

выводы

1. Сравнительный анализ пород и стад отечественного крупного рогатого скота по частотам аллелей и генотипов гена каппа-казеша (CSNS) на основе собственных и литературных данных (всего 21 популяция) показал, что уровень внутрипородного разнообразия по CSN3 выше, чем межпородного (по критерию Кульбака и Fst), а следовательно, хотя генотипирование КРС по локусу каппа-казеша чрезвычайно важно для селекционной практики, но частоты этого гена не могут служить характеристикой породы и использоваться в качестве генетического маркера в филогенетических исследованиях КРС.

2. Идентифицировано 55 ДНК-фрагментов (из них 53 полиморфных) на основе мультилокусного межмикросателлитного анализа (ISSR-анализа) 535 особей 15 пород КРС и популяции монгольского яка с использованием маркеров AG-ISSR и GA-ISSR. Сравнительный анализ геномного полиморфизма у исследуемых пород КРС и яков показал, что они различаются как по наличию/отсутствию отдельных фрагментов в ISSR-спектрах, так и по их частотам. У некоторых исследуемых пород КРС обнаружены породоспецифичные фрагменты.

3. Все исследованные породы КРС имеют сходные профиля частот распределения фрагментов, низкий уровень гетерознготности (no Stephens) и высокие значения внутригруппового сходства, что указывает на низкую подразделенность пород. При анализе геномного полиморфизма всей совокупности исследованных пород методом главных компонент четкая дифференциация была получена только для пород, относящихся к разным видам (Bos taurus, В. indicus и В. grunniens),

4. Впервые на уровне геномного полиморфизма с использованием кластерного анализа и метода главных компонент исследованы взаимоотношения калмыцкой, якутской и монгольской пород турано-монгольского корня: подтверждена правомочность отнесения якутского скота к подвалу Bos taurus turano-mongolicus и продемонстрирована общность происхождения якутского и монгольского скота, в отличие от калмыцкого скота, который, по-видимому, имеет независимое происхождение.

5. Впервые с использованием Ав- и СА-1$8К-маркеров охарактеризован геномный полиморфизм пяти линий ярославского скота из двух хозяйств «Михайловское» и «Горшиха». Показано, что исследованные линии достоверно различались по ряду параметров (наличию/отсутствию отдельных фрагментов и частотам их встречаемости, уровню гетерозиготноеги). Применение метода главных компонент позволяет четко дифференцировать исследуемые линии животных друг от друга.

6. Впервые показано, что высокий уровень полиморфности АО- и ОА-КвЯ-маркеров (31 и 22 полиморфных фрагмента соответственно) делает их более информативными для дифференциации близкородственных популяций (породы одного корня, стада и линии животных), чем для дифференциации пород КРС.

Публикации во материалам диссертации 1. Ахаав Азари М., Лазебный ОХ, Сулиыова Г.Б. Применение ISSR-PCR (Inter-mictosatellite-PCR) в нзучешш генетического разнообразия 12 пород крупного рогатого скота и яков И Открытое образование. 2006. С.50-52,

2. Сулимова Г. Е., Ахави Азари М. Анализ генетического разнообразия Калмыцкого скота с использованием IS SR-фингерпрннтинга // Материалы Международной научно-практической конференции " Актуальные проблемы животноводства на современном этапе посвяшенноЙ 75-лешю технологического факультета Бурятской государственной селькохозяйственной академии. 22-25 нюня 2006. Улан-Уда. С. 55-58

3. Сулнмова Г. Е., Ахявн Азари М., Ростамзадех Д., Мохаммад Абади MP. Аллель ный полиморфизм гена каппа-казенна (CSN3) у Российских пород крупного рогатого скота и его информативность как генетического маркера// Генетика. 2007. Т. 43. № 1.С. 1-7.

4. Ahani Azari М., Rostamzadeh J., Suiimova G. E. Genotyping of the two common variants of k-casein gene (CSN3) in three Russian cattle breeds, using PCR-RFLP// in: Proceedings of the 4th National congress of Biotechnology. Kerraan, Iran, 2005. P. 9?.

5. Ahani Azari M., Rostamzadeh J., Suiimova G. E. Identification of k-casein gene (CSN3), variants A and В in Bestoozhevski Russian cattle using PCR-RFLP// In: Proceedings of the И1*1 Iranian Researchers Conference in Europe (IRCE 2005). Leeds. England. 2005.

6. Ahani Azari M„ Rostamzadeh J., Mohammad Abadi M., Suiimova G. E. Генотипироваяне пята российских пород крупного рогатого скота по локусу каппа-казенна (CSN3) с использованием метода ПЦР-ПДРФ // Материалы Международной конференции, посвященной 40-летию ИОГен РАН. 2006. С.8.

7. Сулнмова Г.Б., М.Р. Мохаммад Абадн, Ахани Азари М., А-В.Юдин, ТА. Коваленко, Д. Ростамзадех. Генетическое разнообразие копытных по мультшюкусным межмикросателитным ДНК-маркерам (ISSR-авализ)// Сборник материалов Международной научной конференции "Современные проблемы генетики". Минск, Беларусь, 2005. С.190.

8. Аханп Азарн М., Лазерный О.Е., Сулнмова Г.Е. Сравнительный анализ генетического разнообразия у пяти линий Ярославской породы крупного рогатого скота методом межмикросателяитного полиморфизма - ISSR-анализ // Материалы V международной научной конференции "Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных ВИЖ, Дубровины. 2006 г.

9. Штыфурко Т.А., Ахани Азарн М., Сулнмова TJB. Оценка уровня внутрипородного полиморфизма Якутского скота // Материалы V международной научной конференции "Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных". ВИЖ, Дубровицы.2006 г.

Напечатано с готового оригинал-макет

Йздогельстпо ООО "МАКС Пресс" Лицензия ИД N00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 01.12.2006 г. Формат 60x901/16. Усл.печл. 1,5. Тираж 80 экз. Заказ 861. Тел. 939-3890. Тел/Факс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, 2-й учебный корпус, 627 к.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ахани Азари Моджтаба

1.ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. БЕЛКИ, СОДЕРЖАЩИЕСЯ В МОЛОКЕ

2.1.1. Полиморфизм белков молока

2.1.2. Полиморфизм aSl- казеина

2.1.3. Полиморфизм aS2- казеина

2.1.4. Полиморфизм р-казеина

2.1.5. Полиморфизм каппа-казеина

2.1.5.1. Частота встречаемости аллельных вариантов гена каппа-казеина у крупного рогатого скота

2.2. ВЛИЯНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА КАППА-КАЗЕИНА НА МОЛОЧНУЮ ПРОДУКТИВНОСТЬ И КАЧЕСТВО МОЛОКА

2.3. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА КАППА-КАЗЕИНА

2.4. ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОРОД КРУПНОГО РУГАТОГО СКОТА ПО ДНК-МАРКЕРАМ

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Объекты исследований

3.2. Выделение ДНК

3.3. Определение концентрации ДНК

3.4. Проведение полимеразной цепной реакции

3.5. Проведение ПЦР для амплификации гена каппа-казеина

3.6. Типирование А- и Б-аллелей гена CSN3 с использованием рестрикционного анализа (метод ПЦР-ПДРФ)

3.7. Типирование А- и Б-аллелей гена CSN3 с помощью аллель-специфичной ПЦР

3.8. Проведение ISSR-анализа

3.9. Статистический анализ данных

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 49 4.1. АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА КАППА-КАЗЕИНА (CSN3) У РОССИЙСКИХ ПОРОД КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

4.1.1.Типирование аллелей гена каппа-казеина у исследуемых животных

4.1.2. Оценка частот встречаемости А- и В-аллелей гена каппа-казеина у исследуемых пород крупного рогатого скота

4.1.3. Обсуадение результатов 51 4.2. ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОРОД КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ЯКОВ С ПОМОЩЬЮ МОЛЕКУЛЯРНОГО МУЛЬТИЛОКУСНОГО АНАЛИЗА (ISSR- АНАЛИЗ)

4.2.1. Спектры ISSR-полиморфизма у исследуемых животных

4.2.2. Дифференциация пород крупного рогатого скота и яков по AG-ISSRh GA-ISSR-маркерам

4.2.2.1. Характеристика исследуемых популяций по числу и частотам встречаемости А G-ISSR-фрагментов

4.2.2.2. Характеристика исследуемых популяций по числу и частотам встречаемости GA-ISSR-фрагментов

4.2.2.3. Сравнительный анализ исследуемых выборок животных по AG- и GA-ISSR-маркерам (доля полиморфных фрагментов, коэффициент внутригруппового сходства и уровень гетерозиготности)

4.2.3 Характеристика AG-ISSR- и GA-ISSR-маркеров и возможности их использования для дифференциации пород крупного рогатого скота

4.2.3.1. Дифференциация пород крупного рогатого скота на основе

А G-ISSR-маркера

4.2.3.2. Дифференциация пород крупного рогатого скота на основе GA-ISSR-маркера

4.2.3.3. Дифференциация пород турано-монгольского корня с использованием AG-ISSR и GA-ISSR-маркеров

4.2.4. Дифференциация стад и линий ярославской породы по AG-ISSR и GA-ISSR- маркерам

4.2.5 Обсуадение результатов

5. ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительный анализ генетического разнообразия пород крупного рогатого скота на основе ISSR-фингерпринтинга и полиморфизма гена Каппа-Казеина"

Современная теория селекции животных основывается на детальном изучении генетических аспектов улучшения породных и продуктивных качеств молочных пород крупного рогатого скота (КРС). Интенсивная селекция КРС привела к созданию специализированных пород. При существующей системе разведения КРС большую опасность представляет снижение в породе, стадах, линиях, семействах генетического разнообразия, которое существенно влияет не только на продуктивность и воспроизводство, но и резко ограничивает приспосабливаемость к условиям содержания, жизнеспособность потомства.

Хотя в настоящее время селекция на создание высокопродуктивных молочных пород КРС была успешной, однако она привела к серьезным проблемам, связанным с резким преобладанием во всем мире одной породы - голштино-фризской. Результатом этого явилось значительное сокращение численности других пород, а, следовательно, и сокращение общего генетического разнообразия генофонда КРС. Например, Россия в первой половине XX века потеряла более 30 местных пород и отродий КРС. Из 66 пород КРС, разводившихся в 80-90 годах XX века в бывшем СССР, в 2001 году в Российской Федерации осталось 33 породы. Из 33-х оставшихся пород только 16 имеют достаточную численность для нормального воспроизводства (Алтухов и др., 2004). Обеднение генофонда КРС в будущем может привести к отрицательным непредсказуемым последствиям, поскольку невозможно предсказать возникновение новых требований к продуктивности и резистентности КРС к заболеваниям. Важно поддерживать максимально возможное разнообразие генофонда КРС. Необходимым условием для проведения таких работ является проведение генетического мониторинга пород КРС на молекулярном уровне.

За рубежом большое внимание уделяется проблемам изучения биоразнообразия КРС. Многие ведущие зарубежные институты разрабатывают долгосрочные проекты, посвященные генетическому мониторингу и, в частности, ДНК-мониторингу генофонда КРС (например, проект Roslin Institute (Edinburg) -"Genetic Diversity in Cattle"). С использованием молекулярных методов анализа исследуется генетическая структура пород КРС (MacHugh et al., 1998), их происхождение (Troy et al., 2001; Hanotte et al., 2002); создана международная программа и база данных по картированию генома Bos taurus (http://www.ri.bbsrc.ac.ul^ovmap/bovmap.htm). С молекулярно-генетической точки зрения, зарубежные породы лучше исследованы по сравнению с местными и аборигенными породами. В связи со всем вышесказанным становится очевидной необходимость сравнительных исследований генетического разнообразия российских и зарубежных пород КРС, в особенности, аборигенных пород.

В качестве тест-систем для изучения генетического разнообразия пород КРС на молекулярном уровне используют монолокусные и мультилокусные ДНК-маркеры. В качестве монолокусных ДНК-маркеров особый интерес представляют полиморфные варианты генов, участвующих в формировании хозяйственно-полезных признаков. К таким генам относится ген каппа-казеина (CSN3), аллельные варианты которого оказывают значительное влияние на физические и химические свойства молока (Schaar et al., 1984, 1985; Robitaille 1995), его пригодность для сыроделия (Zadworny & Kuchnlein, 1990). Интерес исследователей к изучению генетического полиморфизма этого гена связан также с тем, что различные аллельные варианты этого гена могут быть использованы в качестве генетических маркеров качества молока в селекционных программах разведения молочного скота.

Для оценки уровня полиморфизма генома в целом используются микросателлитные и мультилокусные ДНК-маркеры. Микросателлитные маркеры широко используются для исследования генетического полиморфизма различных видов, однако, стандартные тест-системы на основе определенного набора из 1220 микросателлитных локусов разработаны только для пяти видов млекопитающих: человека, лошади, КРС, собаки и мыши (Applied Biosystems). При этом необходимо иметь в виду, что предлагаемые для КРС наборы могут оказаться неподходящими для мало изученных аборигенных пород, в особенности зебувидного происхождения, и для родственных видов (яков, зубров). Кроме того, следует указать на высокую стоимость оборудования и наборов для тестирования, что делает затруднительным использования данного подхода для популяционных исследований.

В связи с этим большой интерес у исследователей вызывают мультилокусные тест-системы, такие как RAPD (Randomly amplified polymorphic DNA), AFLP (Amplified fragment length polymorphism) и ISSR (Inter-simple-sequence-repeats). Эти системы не дорогостоящи и, кроме того, могут быть использованы для исследования мало изученных видов, поскольку для их применения не нужно знания нуклеотидной последовательности ДНК исследуемого объекта.

В качестве тест-системы для изучения генетического разнообразия и дифференциации пород КРС нами был использован анализ межмикросателлитного полиморфизма - ISSR-анализ или, как его еще иногда называют, - ISSR-фингерпринтинг. Этот метод относится к методам молекулярного мультилокусного анализа. Он позволяет одновременно оценивать полиморфизм десятков локусов (до 30 локусов и выше). Данный подход широко применяется для дифференциации видов и сортов растений, однако, крайне мало используется в исследованиях генофондов сельскохозяйственных животных.

В генетико-селекционных исследованиях сельскохозяйственных животных большое значение имеет анализ популяции, изучение их гетерогенности, дифференциация и идентификация пород. Использование молекулярных маркеров значительно расширяет возможности генетического анализа популяций, позволяет установить меж- и внутри-породную вариабельность отдельных участков генома и составить представление о генетической структуре породы.

Целью настоящей работы является сравнительный анализ генетического разнообразия российских и зарубежных пород КРС с использованием межмикросателлитного анализа (ISSR-фингерпринтпинга), а также характеристики исследованных российский пород по локусу каппа-казеина.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить частоту встречаемости аллельных вариантов гена каппа-казеина у российских пород КРС с использованием ПЦР-ПДРФ.

2. Определить уровень генетического разнообразия у российских и зарубежных пород КРС и монгольских яков с использованием ISSR- анализа.

3. Провести сравнительный анализ спектров ISSR-полиморфизма у исследованных пород с использованием двух типов праймеров: (GA)9C и (AG)9C.

4. Охарактеризовать генетическое разнообразие исследованных пород и их линий на основе ISSR-маркеров.

5. Рассмотреть возможность применения (GA^C- и (AG^C-ISSR-MapKepoe для дифференциации исследуемых пород.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Ахани Азари Моджтаба

5. ВЫВОДЫ

1. Сравнительный анализ пород и стад отечественного крупного рогатого скота по частотам аллелей и генотипов гена каппа-казеина (CSN3) на основе собственных и литературных данных (всего 21 популяция) показал, что уровень внутрипородного разнообразия по CSN3 выше, чем межпородного (по критерию Кульбака и Fst), а следовательно, генотипирование КРС по локусу каппа-казеина чрезвычайно важно для селекционной практики, но частоты этого гена не могут служить характеристикой породы и использоваться в качестве генетического маркера в филогенетических исследованиях КРС.

2. Идентифицировано 55 ДНК-фрагментов (из них 53 полиморфных) на основе мультилокусного межмикросателлитного анализа (ISSR-анализа) 535 особей 15 пород КРС и популяции монгольского яка с использованием маркеров (AG)9C-ISSR и (GA)9C-ISSR. Сравнительный анализ геномного полиморфизма у исследуемых пород КРС и яков показал, что они различаются как по наличию/отсутствию отдельных фрагментов в ISSR-спектрах, так и по их частотам. У некоторых исследуемых пород КРС обнаружены породоспецифичные фрагменты.

3. Все исследованные породы КРС имеют сходные профили частот распределения фрагментов, низкий уровень гетерозиготности (по Stephens) и высокие значения внутригруппового сходства, что указывает на низкую подразделенность пород. При анализе геномного полиморфизма всей совокупности исследованных пород методом главных компонент четкая дифференциация была получена только для пород, относящихся к разным видам (Bos taurus, В. indicus и В. grunniens).

4. Впервые на уровне геномного полиморфизма с использованием кластерного анализа и метода главных компонент исследованы взаимоотношения калмыцкой, якутской и монгольской пород турано-монгольского корня: подтверждена правомочность отнесения якутского скота к подвиду Bos taurus turano-mongolicus и продемонстрирована общность происхождения якутского и монгольского скота, в отличие от калмыцкого скота, который, по-видимому, имеет независимое происхождение.

5. Впервые с использованием AG- и GA-ISSR-маркеров охарактеризован геномный полиморфизм пяти линий ярославского скота из двух хозяйств

Михайловское» и «Горшиха». Показано, что исследованные линии достоверно различались по ряду параметров (наличию/отсутствию отдельных фрагментов и частотам их встречаемости, уровню гетерозиготности). Применение метода главных компонент позволяет четко дифференцировать исследуемые линии животных друг от друга.

6. Впервые показано, что высокий уровень полиморфности AG- и GA-ISSR-маркеров (31 и 22 полиморфных фрагмента соответственно) делает их более информативными для дифференциации близкородственных популяций (породы одного корня, стада и линии животных), чем для дифференциации пород КРС.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ахани Азари Моджтаба, Москва

1. Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., Курбатова О. Л., Победоносцева Е. Ю., Политов Д. В., Евсюков А. Н., Жукова О. В., Захаров Е. А., Моисеева И. Г.,

2. Столповский Ю. А., Пухальский В. А., Поморцев А. А., Упелниек В. П.,

3. Калабушкин Б. А. Динамика популяционных генофондов // 2004.619 С.

4. Башарин Г.П. История животноводства в Якутии второй половины Х1Х-начала X в. Якутск: Якуткнигоиздат.1962. 128 с.

5. Глазко В. И., Дымань Т. Н., Тарасюк С. И., Дубин А. В. Полиморфизм белков,

6. RAPD-PCR и ISSR-PCR маркеров у зубров, бизонов и крупного рогатого скота // Цитология и генетика. 1999. Т.ЗЗ. № 6 . С. 30-39.

7. Глазко В.И., Журавль Е.В. Полиморфизм каппа-казеина у пород крупногорогатого скота // Вестник аграрной науки. 1997. №5. С.78.

8. Городецкий С.И., Каледин А.С. Анализ нуклеотидной последовательности к-ДНК каппа-казеина коровы // Генетика. 1987. Т. 23. № 4. С. 596-604.

9. Городная А. В., Глазко В. И. ISSR-PCR в дифференциации генофондов пород крупного рогатого скота // Цитология и генетика. 2003. Т. 37. №. 1. С. 61-67.

10. Гостимский С.А., Кокаева З.Г., Боброва В.К. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений// Генетика. 1999. Т.35. №11. С. 1538-1549.

11. Гроклод Ф. Полиморфизм белков молока, некоторые биохимические и генетические аспекты // Материалы 16-й Междунар. Конф. по группам крови и биохим. полиморфизму животных. Ленинград. 1979. Т.1. С. 55-94.

12. Денисенко Е.А., Калашникова Л.А. Молочнная продуктивность коров черно-пестрой породы с различными генотипами каппа-казеина // В сб.: «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2004. С. 47-49.

13. Дерюшева С.Е. Определение генотипа к-казеина у коров бестужевской породы методом полимеразной цепной реакции //Бюлл. ВНИИ генетики и разведения с/х животных. 1993. Вып. 137. С.36-39.

14. Доротюк Э.Н. Калмыцкий скот и пути его совершенствования. М.: Россельхозиздат. 1981.144 с.

15. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. /М.: Наука. 1991. 271 с.

16. Жебровский Л.С. Селекционно-генетические основы белкового состава молока коров. М.: Колос, 1977.248 с.

17. Жебровский Л.С., Бабуков А.В., Митюков В.Е. Связь полиморфизма белков с продуктивностью черно-пестрого скота // Животноводство. 1979. №7. С. 25-27.

18. Зиновьева Н.А. Применение полимеразной цепной реакции для тестирования животных на трансгенность // Вопросы интенсификации животноводства. Вып. 110. Дубровицы, 2001. С. 19-21.

19. Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А., Эрнст Л.К., Брем Г. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных. ВИЖ. 2002. 11с.

20. Зыскунова Р.Н. Значение разных видов отбора при совершенствовании высокопродуктивного молочного стада // Дис. канд. биол. наук. Дубровицы, 1990. 170 с.

21. Иолчиев B.C. Эффективность использования быков-производителей черно-пестрой породы разного племенного достоинства // Дис. канд. с.-х. наук. ВИЖ. Дубровицы, 1994. 125 с.

22. Иолчиев Б.С. Частота аллелей и распределение фенотипов белковых фракций молока дочерей разных быков // Новое в селекции сельскохозяйственных животных. Сб. научных трудов ВИЖ. Дубровицы. 1993. Вып. 56. С. 129-132.

23. Иолчиев B.C., Сельцов В.И. Взаимосвязь системы каппа-казеина с молочной продуктивностью коров // Зоотехния. 1999. №6. С. 4-5.

24. Калашникова JI.A., Дунин И.М., Глазко В.И. Селекция XXI века: использование ДНК-технологий. Изд. ВНИИплем. 2000. С. 14.

25. Капелинская Т.В., Ткач Т.М., Смирнов И.К., Городецкий С.И. Гены казеинов Bos taurus. Выделение и характеристика гена каппа-казеина // Генетика. 1989. Т. 25 № 1.С. 15-23.

26. Кириленко С.Д., Глазко В.И. Идентификация генотипов по каппа-казеину и BLAD мутации с использованием полимеразной цепной реакции у крупного рогатого скота // Цитология и генетика. 1995.Т. 29. № 6. С. 60-62.

27. Колесник Н.Н. Крупный рогатый скот Монголии и его происхождение // Домашние животные Монголии. М.; JL, 1936. С. 245—291.

28. Колесник Н.Н. Эволюция крупного рогатого скота. Сталинабад: Тадж. фил. АН СССР, 1949. 840 с.

29. Костюченко М.В., Удина И.Г., Зайцев A.M., Храброва JI.A., Сулимова Г.Е. Изучение генетического разнообразия пород лошадей отечественной селекциина основе RAPD-PCR и микросателлитных маркеров // Сельскохоз. биология. 2001. №6. С.29-34.

30. Кулешов П.Н. Крупный рогатый скот. 7-е изд. М.; JL: Сельхозгиз.1931.201 с.

31. Левченкова В.П., Иванова Г.А., Петрушина Г.Е., Марченко Л.А. Продуктивное действие генов полиморфных белков молока на молочную продуктивность коров швицкой породы // Интенсиф. с.-х. производства: Тез. Докл. Смоленск. 1990. С. 146-148.

32. Лискун Е.Ф. Отечественные породы крупного рогатого скота. М.: Сельхозгиз. 1949. 173с.

33. Матюков B.C. Внутрипопуляционная дифференциация чистопородного холмогорского скота по генным частотам локуса каппа-казеина //Цитология и генетика. 2004. № 2. С. 46-50.

34. Митюков А.С. Генетическая обусловленность внутрипородных количественных вариаций полиморфных систем белков молока // Автореф. дис. канд. с.-х. наук. 1974. 20 с.

35. Митютько В.Е. Генетическая структура популяции крупного рогатого скота по полиморфным белковым системам и основы их использования в селекции // Дис. докт. биол. наук. Новгород. 1990. 511с.

36. Окладников А.П. Прошлое Якутии до присоединения к Русскому государству. Якутск: Якуткнигоиздат. 1949. 438 с.

37. Павлова И.Ю., Труфанов В.Г., Калашникова Л.А. Генотипирование молочных белков у холмогорского скота // В сб.: «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», Дубровицы, 2004, С. 79-81.

38. Придорогин М.Н. Крупный рогатый скот: Важнейшие породы. М.: Гостехиздат.1924. № 5.141 с.

39. Романосова Е.Г. Влияние генетических и средовых факторов на молочную продуктивность и технологические качества молока коров швицкой породы // Автореф. дис. канд. биол. наук. Дубровицы, 1999.20 с.

40. Сивкин Н.В. Экстерьер, молочная продуктивность и полиморфизм белков молока у коров швицкой и черно-пестрой пород // Автореф. дис. канд. с.-х. наук. Дубровицы, 1995. 24 с.

41. Слепцов М.К. Типы гемоглобина крупного рогатого скота Якутии // Эколого-физиологические особенности животных Якутии. Новосибирск. 1976. С. 58-86.

42. Стрекозов Н.И., Сивкин Н.В., Иолчиев Б.С. Белковый состав молока и биохимический полиморфизм его фракций // Вестник Россельхозакадемии, 1996, № 1.С. 52-53.

43. Стрекозов Н.И., Чернушенко В.К., Цысь В.И. Интенсификация молочного скотоводства России. Смоленск. 1997. С. 50-53.

44. Сулимова Г.Е. ДНК-маркеры в генетических исследованиях: типы маркеров, их свойства и области применения // Успехи современной биологии. 2004. Т. 124. № 3. С. 260-271.

45. Сулимова Г.Е., Бадагуева Ю.Н., Удина И.Г. Полиморфизм гена каппа-казеина в популяциях подсемейства Воутае//Генетика. 1996. Т.32.№ И. С.1576-1582.

46. Сулимова Г.Е., Соколова С.С., Семикозова О.П. и др. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BoLA) // Tsitologiya i Genetika.l992.T. 26. №. 5. С.18-26.

47. Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Берберов Э.М., Маркарян А.Ю., Кандалова Л.Г. Генотипирование локуса каппа-казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции// Генетика. 1991. Т.27. №12. С.2053-2062.

48. Сулимова Г.Е., Ахани Азари М., Ростамзадех Д., Мохаммад Абади М.Р., Лазебный О.Е.Аллельный полиморфизм гена каппа-казеина(СЗШ) у Российских пород крупного рогатого скота и его информативность как генетического маркера// Генетика. 2007. Т.43. № 1. С.

49. Терлецкой В.П., Н.В. Дементьева.2001.

50. Тинаев А.Ш. Молочная продуктивность коров-первотелок черно-пестрой породы в связи с генотипом каппа-казеина // ВНИИплем. Лесные поляны. 2003. С.52-54.

51. Трчунян Д.В., Геворнян С.С. Полиморфные белковые системы молока коров кавказской бурой и черно-пестрой пород // Вопр. интенсификации животноводства в Арм. ССР. Абовян. 1986. С. 21-27

52. Хаертдинов Р.А. Содержание белков в молоке коров бестужевской породы с различными генотипами по альфа-Si, бета-, каппа-казеинам и бета-лактоглобулину// Сельхоз. биология. 1988. №5. С. 71-75.

53. Хаертдинов Р.А. Использование генофонда быков молока в селекции крупного рогатого скота // Автореф. дисс. докт. биол. наук. Пушкин. 1992. 44 с.

54. Хаертдинов Р.А., Салахов И.Б., Афанасьев М.П. и др. Холмогорский скот и его совершенсвование в Татарстане // Казань. Изд. Матбугатйорты. 2000. С. 71-81.

55. Хаертдинов Р.А., Сулимова Г.Е., Губайдуллин Э.С., Афанасьев М.П. Генотипирование быков-производителей голштинской породы по каппа-казеину//Тезисы докладов международной конференции «Агробиотехнологии растений и животных». Киев, 1997. С.37-38.

56. Хатами С.Р., Лазебный О.Е., Максименко В.Ф., Сулимова Г.Е. ДНК-полиморфизм генов гормона роста и пролактина у ярославского и черно-пестрого скота в связи с молочной продуктивностью // Генетика. 2005. Т.41. №2. С. 229-236.

57. Храпалова И.А., Рыжова Н. Н., Пухальский В. А., Кочиева Е. 3. Филогенетические отношения видов рода Lycopersicon (Tourn) Mill, и молекулярные данные RAPD- и ISSR-анализов // Генетические коллекции овощных растении. 2001. С. 244-251.

58. Alexander L.J., Stewart A.F., Mackinlay A.G. Kapelinskaya T.V., Tkach T.M., Gorodetsky S.I. Isolation and characterization of the bovine kappa-casein gene // Eur. J. Biochem. 1988. V. 178. № 2. P. 395-401.

59. Ashafenburg R., Sen A., Thompson M. P. Genetic variants of casein in Indian and African zebu cattle.// Сотр. Biochem. Physiol. 1968. V. 25. P. 177-184.

60. Backer A.C.M., Manwell C. Chemical classification of cattle. I. Breed groups. //Anim. Blood Groups Biochem.Genet. 1980. V.ll. P. 127-150.

61. Banks J.M., Home D.S., Muir D.D. Genetic variants of k-casein in relation to efficiency of recovery of fat in crud in cheddar cheese manufacture // International dairy congress. Melbourne. Australia. 1994. P. 243.

62. Baranyl M., Bosze Z., Buchberger J., Krause I. Genetic polymorphism of milk proteins in Hungarian spotted and Hungarian grey cattle: a possible new genetic variant of B-lactoglobulin // J. Dairy Sci. 1993. V.76. P.630-635.

63. Barroso A., Dunner S., Canon J. Detection of Bovine kappa-casein variants А, В, С and E by means of polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP)//J. Anim. Sci. 1998. V. 76. N.6. P. 1535-1538.

64. Bech A.M., Kristiansen K.R. Milk protein polymorphism in Danish dairy cattle and the influence of genetic variants on milk yield // J. Dairy Res. 1990. V. 57. P. 53- 62.

65. Bell K., Hopper K.E., McKenzie H.A. Bovine a-Lactalbumin С and asl-, P- and k-Caseins of Bali (Banteng) Cattle, Bos (Bibos) javanicus // Aust. J. Biol. Sci.l981.V. 34. N. 2. P.149-159.

66. Bonsing J., Ring J.M., Stewart A.F., MacKinlay A.G. Complete nucleotide sequence of the bovine p-casein gene//Aust. J. Biol. Sci.l988.V. 41. P. 527-537.

67. Bosze Z., Dohy J. Improvement of the quality of milk protein by new biotechnological methods // Hung. Agric. Res. 1993. V. 2. N.l. P. 26-29.

68. Bovenhuis H., Van Harendonk J.A.M. Estimation of milk protein gene frequencies in crossbred cattle by maximum likelihood // J. Diary Sci. 1991. V. 74. P. 2728-2736.

69. Bovenhuis H., Van Arendock J.A.M., Korver S. Associations between milk protein polymorphisms and milk productions traits // J. Dairy Sci. 1992. V. 75. P. 2549.

70. Bovenhuis H., Weller J.I. Mapping and analysis of dairy cattle quantitative trait loci by maximum likelihood methodology using milk protein genes as genetic markers // Genetics. 1994. V.137. P. 267.

71. Brignon G., Ribadeau-Dumas В., Mercier J.C., Pelissier J.P., Das B.C. Complete amino acid sequence of bovine as2 casein // FEBS Letters. 1977.V.76. P.274-279.

72. Buchberger J., Dove P. Lactoprotein genetic variants in cattle and cheese making ability // Food Technol. Biotechnol. 2000. V.38. N. 2. P. 91-98.

73. Buchberger J., Graml R., Krause I. Frequency of genetic variants of milk proteins of Bavarian breeds in different periods // Materials of specialists meeting on "Genetic polymorphism of milk proteins". 1991. Zurich. 11-12 April.

74. Caetano-Anolles G., Bassam B.J., Gresshoff P.M. DNA amplification fingerprinting using very short arbitrary oligonucleotides // Biotechnology. 1991. V.9. N.6. P.553-557.

75. Caroli A., Bolla P., Budelli E., Barbieri G., Leone P. Effect of k-casein E allele on clotting aptitude of Italian Friesian milk // Zoot. Nutr. Anim. 2000.V. 26. N. 3.P. 127-130

76. Chikuni K., Kageyama S., Koshkawa Т., Kato S. Identification of bovine kappa-casein genotypes using polymerase chain reaction method // J. Zootechn. Sci. 1991. N. 7. P. 654-659.

77. Citek J., Filistowicz A., Rehout V., Neubauerova V. Comparison of growth hormone and kappa-casein gene polymorphism in Polish Red and German Red cattle breeds // Appl.Genet. 2000. V. 41. N. 3. P. 181-185.

78. Cowan С. M., Dentine M.R., Coule T. Chromosome substitution effects associated with k-casein and 6-lactoglobulin in Holstein cattle. Genetics and Breeding // J. Dairy Sci. 1992. V. 75. N. 4. P. 1097-1104.

79. Damiani G., Ferretti L., Rognoni G., Sgaramella V. RFLPs of bovine k-casein gene //Anim. Genet. 1989.V. 20 (Suppl. 1) P.97.

80. Damiani G., Ferretti L., Rognoni G., Sgaramella V. Restriction analysis of the k-casein locus in cattle //Anim. Genet. 1990.V. 21. P. 107-114.

81. Del Lama S.N., Zago M.A. Identification of kappa-casein and beta-lactoglobulin genotypes in Brazilian Bos indicus and Bubalus bubalis population // Braz. J. Genet. 1996. V.19.P. 73-77.

82. Denicourt D., Sabour M.P., McAllister A.J. Detection of bovine k-casein genomic variants by the polymerase chain reaction method // Anim. Genet. 1990. V.21. P. 215216.

83. Di Stasio L., Mariani P. The role of protein polymorphism in the genetic improvement of milk production // Zoot. Nutr. Anim. 2000.V.3. 69-90

84. Di Stasio L., Merlin P. Polimorfismi biochimici del latte nella razza bovina Grigio Alpina // Rivista di Zootecnia e Veterinaria.1979. V. 7. N. 2. P. 64-67.

85. Di Stasio L., Merlin P. A new k-casein variant in cattle // Proceedings XVIth Intern. Conf. Animal Blood Grps and Biochem. Polimorph., Leningrad, 1978. USSR. P. 97.

86. Donnelly W.J., McNeill G.P., Buchheim W., McGann T.C.A. A comprehensive study of the relationship between size and protein composition in natural bovine casein micelles // Biochim. Biophys Acta. 1984. V.789. P. 136-143.

87. Erhardt G. Kappa-casein in bovine milk. Evidence of a further allele (kappa-casein E) in different breeds //J. Anim. Breed. Genet. 1989. N. 106. P. 225 -231.

88. Erhardt G. Detection of new kappa-casein variant in milk of Pizgauer cattle // Anim. Genet. 1996. V. 27. P. 105-107.

89. Erhardt G., Doring C., Senft В., Grandke R. A new alpha SI casein variant in cow's milk// Intern. Soc. Anim. Gen. (I.S.A.G.) 1992. Conference. Interlaken. Switzerland. 3-7 August.

90. Erhardt G., Senft B. Integration of milk protein variants in bovine breeding programmes using an economical screening method // Anim. Genet. 1989. V.20 (Suppl.l). P.61

91. Fang D.Q., Federici C.T., Roose M.L. A high-resolution linkage map of the citrus tristeza virus resistance gene region in Poncirus trifoliata (L.) Raf. // Genetics. 1998. V.150. N.2. P.883.

92. Fiat A.M., Jolles P. Caseins active casein peptide and physiological aspects // Mol. Cell. Biochem. 1989. V. 87. P. 27-30.

93. Fitzgerald R.J. Expploitation of casein variants // Milk composition, production and biotechnology. Wallingford, U.K. 1995. P. 153-171.

94. Formaggioni, P., A. Summer, M. Malacarne, and P. Mariani. Milk protein polymorphism: Detection and diffusion of the genetic variants in Bos Genus // Ann. Fac. Med. Vet. Univ. Parma. 1999. V.19. P.127-165.

95. Fox P., Mullvichil D.M. Milk proteines: molecular, colloid and functional properties // J. Dairy Res. 1982. V. 49. P. 678-693.

96. Golijow C.D., Giovambattista G., Poli M., Dulout F.N., Lojio M.M. k-casein gene frequencies support subdivision and historical origin of Argentine Creole cattle // Braz. J. Genet. 1996. V.19. P. 583-586.

97. Gonyon D.S., Mather R.E., Hines H.C., Haenlein G.F.W., Arave C.W. & Guant S.N. Associations of bonine blood and milk polymorphisms with lactation traits: Holsteins // J. Dairy Sci. 1987. V. 70. P. 2585-98

98. Gorodetskij S.I., Kaledin A.S. Analysis of nucleotide sequence of bovine k-casein // Genetika. 1987. USSR.V. 23. N. 4. P. 596-604.

99. Graml V., Buchberger J., Klostermeyer H., Pirchner F. Pleiotropic effects of B-lactoglobulin and casein genotypes on milk composition of Simmentals and German Browns in Bavaria. Z. Tierz// Zuechtungsbiol. 1985. V. 102. P. 355.

100. Gravert H.O. Genomanalyse und Milchqualitat // Schriftenr. D. Agrar-wiss. Fakultat der Univ. Kiel. 1990. B. 72. S. 147-154.

101. Gravert H.O., Schultze-Corene H., Oloffs K. The relevance of k-casein for genetic differences in cheesemaking properties // Materials on 'Genetic polymorphism of milk proteins' 1991. Zurich.

102. Grosclaude F., Mahe M. F., Mercier J. C., Robadean Duma. B. Localisation dec substitutions d acides amines differenciant les variants A et В de la caseine bovine // Ann. Genet. Sel. Anim. 1972. V. 4. P. 515- 521.

103. Grosclaude F. Genetic polymorphism of the main bovine lactoproteins. Relationships with milk yield, composition, and cheese yielding capacity // 1988. INRA Prod. Anim. V.l (1). P.5-17.

104. Groves M.L., Gordon W.J. Evidence from amino acid analysis for a relationship in the biosynthesis of gamma- and B-caseins // Bioch. Bioph. Acta. 1969. V. 194. N. 3. P. 421-432.

105. Gupta M., Chyi Y.S., Romero-Severson J., Owen J.L. Amplification of DNA markers from evolutionarily diverse genomes using single primers of simple-sequence repeats // Theoret. Appl. Genet. 1994. V. 89. P. 998-1006.

106. Irzikovska L., Wolko В., Swi^cicki W.K. The genetic linkage map of pea (Pisum sativum L.) based on molecular, biochemical and morphological markers // Pisum Genetics. 2001. V.33. N.l. P. 13.

107. Hanotte 0., Bradley D.G., Ochieng J.W., Verjee Y., Hill E.W., Rege J.E. African pastoralism: genetic imprints of origins and migrations // Science. 2002. V.12. N.296 (5566). P.336-339.

108. Hansen H. The advantages of using Brown Swiss bloodlines // The Cow International. 1990. N. 9. P. 31.

109. Jakob E., Puhan Z. Technological properties of milk as influenced by genetic polymorphism of milk protein. A review // Int. Dairy J.1992. V. 2. P. 157-178.

110. Jolles P., Loucheux-Lefebvre M.H., Henschen A. Structural relatedness of k-casein and fibrinogen y-chain // J. Mol. Evol. 1978.V. 11. P. 271-277.

111. Hill J.P., Boland M.J., Davis S.R. The association of k-casein BB phenotypes with high protein content in New Zealand Jersey dairy cattle // Materials of International

112. Seminar on " Milk protein variants, molecular biology, technological properties, animal breeding". 1992. Hanko. 2-4 September.

113. Ikonen Т., Ruottinen 0., Erhardt G., Ojala M. Allele frequencies of the major milk proteins in the Finnish Ayrshire and detection of a new k-casein variant // Anim. Genet. 1996.V. 27. P. 179-181.

114. Kaminski S. Bovine kappa-casein (CASK) gene molecular nature and application in dairy cattle breeding//J. Appl. Genet. 1996. V.37. P.179-196.

115. Kaminski S., Figiel I. Kappa-casein genotyping of Polish Black-and-White * Holstein-Friesian bulls by polymerase chain reaction //Genet. Pol. 1993.V. 34.P. 6572.

116. Kaminski S. Identyficacja genotypu beta-lactoglbuliny u buhajov przy pomocy metod genetyki molekularnej // Pr. Mater. Zootech. 1994. V. N. 3. P. 103-104.

117. Kaminski S. Hph I and Dde I RFLPs at the 5' region of bovine kappa-casein gene // Biotechnologia. 1995. V. 4. N. 31. P. 138-143.

118. Kawamoto Y., Naticava Т., Adachi A. et al. A population genetic study on yaks cattle and their hybrids in Nepal using milk protein variations // Animal. Sci Technol. (Jpn.). 1992. V. 63. N. 6. P. 563-575.

119. Klauzinska M., Zwierzxhowski L., Siadkowska E., et al. Comparison of selected gene polymorphisms in Polish red and Polish black-and-white cattle // Anim. Sci. Pap. Rep.) 2000. V. 18. P. 107-116.

120. Klauzinska M., Siadkowska E., Grochowska R., Zurkowski L. Polymorphism of molecular-genetic systems in the Polish red cattle // Cytology and Genetics. 2001. V. 1. P. 58-60.

121. Krzyzewski J., Strzalkowska N., Ryniewicz Z. Zwiazek miedzy genetycznym polimorfizmem bialek a wydajnoscia skladem chemicznym I parametrami technologicznymi melka // Pr. Mater. Zootech. 1998. V. 52. P. 7-36.

122. Lara, M.A.C., Gama, L.T., Bufarah, G., Sereno, J.R.B., Celegato, E.M.L. and de

123. Abreu U.P. Genetic polymorphisms at the k-casein locus in Pantaneiro cattle // Arch. Zootec. 2002 V.51. P.99-105

124. Law A.J.R., Leaver J., Banks J.M., Home D.S. Quantitative fractionation of whey proteins by gel permeation FPLC // Milchwis-senschaft. 1993. V. 48. № 12. P. 663666.

125. Lien S., Rogne S. Bovine casein haplotypes: number, frequencies and applicability as genetic markers // Anim. Genet. 1993. V.24. P.373-376.

126. Leonhardkiuz I., Gwozdziewicz A. Zwiazck miedzy polimorfizmem bialek micka a produkcyjnoscia krow w nicktrorych oborach na terenie rejonu zachowawczego bydla polskiego czerwonego // Roczniki Naukowe Zootechniki. 1985. V.12. P. 105-122.

127. Leveziel H., Metrier L., Mahe M.F. Choplain J. Identification of the two common alleles of the bovine k-casein locus by the RFLP technique, using the enzyme Hindlll // Gen. Sel. Evol.1988. V. 20. P. 247-252.

128. Lien S., Kaminski S., Alestroem P., Rogne S. A simple and powerful method for linkage analysis by amplification of DNA from single sperm cells // Genetics. 1993. V.16. P. 41-44.

129. Lin C.Y., McAllister A.J., Ng-Kwai-Hang K.F. & Hayes J.F. Effects of milk protein loci on first lactation production in dairy cattle // J. Dairy Sci. 1986.V. 69. P. 704-712

130. Litt M. & Luty J. A. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene // Am J Hum Genet. 1989 V. 44. N. 3. P. 397-401.

131. Lin C.Y., Mc Allister J., Ng-Kwai-Hang K.F., et al. Relationship of milk protein types to lifetime performance//J. Dairy Sci. 1989. V.72. P. 3085-3095.

132. Lunden A., Nilsson M., Janson L. Marked effect of P-lactoglobulin polymorphismon the ratio of casein to total protein in milk // J. Dairy Sci.1997. V.80. P. 2996-3005.

133. MacHugh D.E, Loftus R.T., Cunningham P., Bradley D.G. Genetic structure of seven European cattle breeds assessed using 20 microsatellite markers //Anim. Genet. 1998. V.29. N.5. P.333-340.

134. MacKinlay A.G., Wake R.G. Fractionation of S-Carboxymethyl-k-casein and characterization of the components // Bioch. Bioph. Acta. 1965.V. 104. P 167180.

135. Mackinlay A.G., Wake R.G. The heterogeneity of k-casein // Bioch. Bioph. Acta. 1964. V. 93.P. 378-386.

136. Mao I.L.L., Bittazzoni G., Aleandri R. Effects of polymorphic milk protein genes on milk yield and composition traits in Holstein cattle // Acta Agriculturae Scandinavica. 1992. Section A: Animal Science. V. 42. P. 1-8.

137. Mariani P., Losi G., Russo V., et al. Caseification tests made with milk characterized by variants A and В of k-casein in the production of Parmigiano-Reggiano cheese // Scienza с technical lattiero-casearia. 1976. V.27. P. 208-227.

138. Mariani P., Pecorari M. II ruolo delle varianti genetiche della k-caseina nella produzione del formaggio. // Sci. Teen. Latt.Cas. 1991. V. 42. P. 255-285.

139. Mariani P. Sulla presenza di una terza k-caseina nel latte di vacche di razza Bruna // Scienza e Tecnica Lattiero-Casearia. 1983. V. 34. P. 174-181.

140. Mariani P., Summer A. Polimorfismo delle proteine ed attitudine tecnologico-casearia del latte // Scienza e Tecnica Lattiero-Casearia. 1999. V. 50. P. 197-230

141. Marziali, A.S., Ng-Kwai-Hang K.F. Effects of milk composition and genetic polymorphism on cheese composition // J. Dairy Sci.l986.V.69. P. 2533 2542.

142. McLean D.V., Graham E.R.B., Ponzoni R.W., Mc Kenzie Н/А/ Effects of milk protein genetic variants on milk yield and composition // J. Dairy Res. 1984. V.51. P. 531-546.

143. McLean D.M., Graham E.R.B., Ponzoni R.W. & McKenzie H.A. Effects of milk protein genetic variants and composition on heat stability of milk // J. Dairy Res. 1987. V.54. P. 219-235

144. Medrano J.F., Aguilar-Cordova E. Genotyping of bovine kappa-casein loci following DNA sequence amplification // Biotechnology. 1990. V. 8. P 45-48.

145. Menz M.A., Klein R.R., Mullet J.E., Obert J.A., Unruh N.C., Klein P.E. A High-density Genetic Map of Sorghum bicolor (L.) Moench based on 2926 AFLP®, RFLP and SSR Markers. // Plant Mol Biol. 2002. V. 48. N.5-6. P.483

146. Mercier J.C., Brignon G., Ribadeau-Dumas B. Structure primaire de la caseine к bovine. Sequence Complete // Eur. J. Bioch.l973.V.35. P.222-235.

147. Mercier J.C., Chobert J.M., Addeo F. Comparative study of the amino acid sequences of the casein macropeptides from seven species//FEBS Letters. 1976. V.72. P.208-214.

148. Mercier J.C., Grosclaude F., Ribadeau-Dumas B. Structure primaire de la caseine asl bovine. Sequence complete // Eur. J. Bioch.1971. V. 23. P. 41-51.

149. Miranda G., Anglade P., Mahe M., Erhardt G. Biochemical characterization of the bovine genetic kappa-casein С and E variants //Anim. Genet. 1993. N. 24. P. 27-31.

150. Mohammadabadi M., Rakhmanaliev E.R., Sulimova G.E. Kappa-casein polymorphism in Yaroslavl cattle // Proceeding of the 4th international Iran and Russian conference.2004. P. 218-220.

151. Morini D., Losi G., Cactacweti G. Properties of ripered cheese in cheesemaking experiments with milk characterized by k-casein variants A and В // Sciera e Technica Zattiero-Casearia. 1979. N. 30. P. 243-262.

152. Mueller U.G., Wolfenbarger L. AFLP genotyping and fingerprinting // Trends Ecol. Evol. 1999. V.14. N.10. P.389.

153. Murphy R.F., Downey W.K. (1969) Milk protein polymorphism in the Kerry breed of cattle // J.Dairy Sci. V. 52. P. 1113-1115.

154. Naqvi N.I., Chattoo B.B. Development of a sequence characterized amplified region (SCAR) based indirect selection method for a dominant blast-resistance gene in rice // Genome. 1996. V.39. N.1.P.26.

155. Neelin J.M. Variants of k-casein revealed by improved starch gel electrophoresis // J. Dairy Sci. 1964. V. 47. P. 506-509.

156. Neve G., Meglecz E. Microsatellite frequencies in different taxa // Trends Ecol. Evol.2000. V.15. N.9. P.376.

157. Newton C.R., Graham A., Heptinstall L.E., Powell S.J., Summers C., Kalsheker N., Smith J.C., Markham A.F. Analysis of any point mutation in DNA.The amplification refractory mutation system(ARMS). //Nucl. Acid Res. 1989. 17.2503-2516.

158. Ng-Kwai-Hang K.F., Grosclaude F. Genetic polymorphism of milk proteins // Advanced dairy chemistry. 1992. V. 1. P. 405-455.

159. Ng-Kwai Hang K.F., Genetic variants of milk proteins and cheese yield // IDF Seminar Cheese yield and factors affecting its control. Cork. 1993. P. 160-166.

160. Ng-Kwai-Hang K.F., Hayes J., Moxley J., Monardes G. Relationships between milk protein polymorphisms and major constituents in Holstein-Friesian cows // J. Dairy Sci. 1986. V. 69.-P.22-26.

161. Ng-Kwai-Hang K.F. Genetic polymorphism of milk proteins: relationships with production traits, milk composition and technological properties// Canad. J. Anim. Sci.1998. 78(Suppl.l), P.131-147.

162. Niki R., Kim G.Y., Kimura Т., Takahashi K., Kohyama K., Nishinari K. Physical properties microstructure of rennet gelts from micelles of different sizes // Milchwissenschaft. 1994. V. 49. N. 6. P. 326-329.

163. Oloffs K. Genetische grundlagen der kasereitau von rohmilch.// 1991.Dissertation. Christian Albrechts Universitat. Kil.

164. Pabst K. Effects of milk composition and genetic polymorphism on cheese composition // J. Dairy Sci. 1992 V. 69. P. 2533-2542.

165. Pagnacco G., Caroli F. Effect of casein and p-lactoglobulin genotypes on renneting properties of milks // J. Dairy Res. 1987. V. 54. P. 479-485.

166. Pedersen J. Selection to increase frequency of kappa-casein variant В in dairy cattle// J. Anim. Breed. Genet.l991.V. 108. P. 434-445.

167. Perry B.N., Sawa D., Radley E., et al. Restriction fragment length polymorphisms in bovine milk protein genes // Anim. Prod. 1989. V.48. P.661.

168. Pinder S.J., Perry B.N., Skidmore C.J., Sawa D. Analysis of polymorphism in the bovine casein genes by use of the polymerase chain reaction // Anim. Genet. 1991. V. 22. P.11-20.

169. Prinzenberg E.M., Erhardt G. A new CSN3 allele in Bos indicus cattle is characterised by Mspl PCR-RFLP //Anim. Genet. 1999. V.30. P. 164 (abstr.).

170. Prinzenberg E.M., Hiendleder S., Ikonen Т., Erhardt G. Molecular genetic characterization of new bovine kappa-casein alleles CSN3F and CSN3G and genotyping by PCR-RFLP // Anim. Genet. 1996. V.27.P. 347-349.

171. Pudovkin A.I., Zaykin D.V., Hedgecock D. On the potential for estimating the effective number of breeders from heterozygote-excess in progeny. // Genetics. 1996. V. 144. P. 383-387.

172. Puhan z., Jakob E. Genetic variants of milk proteins and cheese yield // "IDF, International Dairy Federation", Brussels, Belgium, Special Issue no.9402, P. 111-122. 1994.

173. Rahali V., Menard J. Influence of genetic variants of beta-lactoglobulin and kappa-casein on milk composition and cheesemaking properties // Lait. 1991. 71. P. 275279.

174. Rando A., DiGregorio P., Masina P. Identification of bovine k-casein genotypes on the DNA level // Anim. Genet. 1988. V.19. P.5I-54.

175. Ribadeau-Dumas В., Brignon G., Grosclaude F., Mercier J.C.,- Structure primaire de la caseine p bovine. Sequence complete // Eur. J. Biochem. 1972.V. 25. P. 505-514.

176. Robitaille G. Influence of к-casein and (3-lactoglobulin genetic variants on the heat stability of milk // J. Dairy Res. 1995.62. N. 4. P. 593-600.

177. Rogne S., Lien S., Vegarud G., Steine T. et al. A method for k-casein genotyping of bulls //Anim. Genet. 1989. V.20. P. 317-321.

178. Ron M., Yoffe 0., Ezra E., Medrano J., Weller J. Determination of effects of milk protein genotype on production traits of Israeli Holsteins // J. Dairy Sci. 1994 .N.77. P. 1106-1113.

179. Russo V., Mariani P. Polimorfismo delle proteine del latte e relazioni tra varianti genetiche e caratteristiche di interesse zootecnico, tecnologico e caseario // Rivista di Zootecnia e Veterinaria. 1978. V. 6. N. 5,6. P. 289-304,365-379.

180. Sabour M.P., Lin C.Y., Lee AJ., McAllister A.J. Association between milk protein genetic variants and genetic values of Canadian Holstein bulls for milk yield traits.// J Dairy Sci. 1996 . V.79. N.6. P. 1050-1056.

181. Saiki R.K., Gelfand D., Staffel S. et al. Primer-directed enzymatic amplication of with a thermostable DNA polymerase // Science. 1988. V. 239. P. 487-491.

182. Saiki R.K., Sharf F., Faloona F., et al. Enzymatic amplification of B-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia // Ibid. 1985. V. 230. P.1350-1354.

183. Schaar J. Effects of k-casein genetic variants and lactation number on the renneting properties of individual milks//J. Dairy Res. 1984. V. 51. P. 397-406.

184. Schaar J., Hansson В., Pettersson H.-E. Effects of genetic variants of k-casein and p-lactoglobulin on cheesmaking // J. Dairy Res.1985. V. 52. P. 429-437.

185. Schellander V.K., Mayr В., Kalat M. Genomische analyse des k-casein-locus bei osterreichischen zuchtstieren // J. Anim. Breed. Genet. 1992. V 109. P. 311-315.

186. Schild T.A., Wagner V., Geldermann H. Variants within the 5'-flanking regions of bovine milk protein genes: I. k-casein-encoding gene // Theor. Appl. Genet. 1994. V.89. P.l 16-120.

187. Shlieben S., Erhardt G., Senft G. Genotyping of bovine k-casein (k-CN A, -k-CN B, K-CN C, K-CN E) following DNA sequence amplification and direct sequencing of k-CN3 PCR product // Anim. Genet. 1991. V. 22. P. 333-342.

188. Schmidt D.G. Starch gel electrophoresis of k-casein // Bioch. Bioph. Acta. 1964. V.90. P. 411-414.

189. Seibert В., Erhardt G., Senft B. Detection of a new k-casein variant in cow's milk // Anim. Genet. 1987. V. 18. P. 269-272.

190. StatSoft. STATISTIC A for Windows (computer program manual) / 1996. StatSoft, Inc., Tulsa, OK.

191. Strzalkowska N., Krzyzewski J., Ryniewicz Z. Wplyw genotype beta-laktoglobuliny I kappa-kazeiny na wydajnosc, sklad chemiczny I podstawowe parametry technologiczne melka krow cb // Pr. Mat. Zootech. 2000. V. 56. P. 107-119.

192. Sulimova G.E. On the nomenclature of k-casein alleles in representatives of subfamily Bovinae // Rus. J. Genet. 1998. V. 34. N.4. P. 465-467.

193. Taha F., Puhan Z. Milk protein polymorphism in Swiss dairy cattle // Agr. Sci. Finl. 1993. V.2. N. 5. P. 423-429.

194. Tambasco, M.D. Dete?ao de polimorfismo dos genes de kappa-casina e Beta-lactoglobulina em animais da ra?a Jersey. Monografia // Universidade Federal de Sao Carlos, SP.1998.

195. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers // Nucl. Acids Res. 1989 V. 17. N. 16. P. 6463-71.

196. Threadgill, DW, and Womack, JE. 1990. Genomic analysis of the major bovine milk protein genes. Nucl. Acids Res. 18:6935-6942.

197. Troy C.S., MacHugh D.E., Bailey G.F. et al. Genetic evidence for Near Eastern origins of European cattle // Nature. 2001. V.410. P. 1088-1091.

198. Udina I.G., Badagueva Yu.N., Sulimova G.E., Zakharov I.A. Allele distribution of the k-casein genes in populations of European Bison (Bison bonasus) // Genetika. 1995. V.31.N.12.P. 1704-1706.

199. Van Eenennaam A.L., Medrano J.F. Differences in allelic protein expression in themilk of heterozygous k-casein cows //J. Dairy Sci. 1991. V. 74. P. 1491-1496.

200. Van Eenennaam A.L. Milk protein polymorphisms in California dairy cattle // J. Dairy Sci. 1991. V. 74. P. 1730.

201. Vasconcellos L.P., Talhari D.T., Pereira A.P., Coutinho L.L., Regitano L. C. Genetic characterization of Aberdeen Angus cattle using molecular markers // Genet. Mol. Biol. 2003. V. 26. P. 2.

202. Vasicek D., Ukrin P., Chtnek P. et al. Genotyping of kappa-casein in different cattle breeds in Slovakia // J. Zivocisna Vyroba. 1995. N. 6. Vol. 40. P. 241-244.

203. Velmala R., Mantysaari E.A., Maki-Tanila A. Molecular genetic polymorphism at the k-casein and B-lactjblobulin loci in Finish diary bulls // Ari. Sci. Finl. 1993. V. 2. P. 431-435.

204. Viana J.L., Fernandez A., Iglesias A., Sanchez L., Becerra J. Analysis by PCR/RFLPs of the most frequent k-casein genotypes in Rubia Galega cattle breed // Arch.Zootech. 2001. V. 50. P. 91-96.

205. Vogi, J., Baranyi M. Association between milk protein genotypes milk production and fertility in Hungarian Holstein Friesian, Hungarian feeckvieh and hungarofries herds. 1990.

206. Vos P., Hogers R., Bleeker M., Rejans M., van de Lee Т., Homes M., Fritjers A., Pot J., Peleman J., Kuiper M., Zabeau M. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting // Nucl. Acids Res. 1995. V.23. N.21. P.4407-4414.

207. Walsh C.D., Guinee T.P., Harrington D.et al. Cheddar cheesemaking and rennet coagulation characteristics of bovine milks containing k-casein AA or BB genetic variants // Milchwissenschaft. 1995. V. 50. P. 492-496.

208. Waugh R., Powell W. Using RAPD marker for crop improvement //Trends Biotechnol. 1992. V.10. P.186-191.

209. Weber J. L. & May P. E. Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction // Am J Hum Genet. 1989 V. 44. N. 3. P. 388-96.

210. Velmala R., Mantysaari E.A., Maki-Tanila A. Molecular genetic polymorphism at the k-casein and B-lactoblobulin loci in Finish diary bulls // Ari. Sci. Finl. 1993. V. 2. P. 431-435.

211. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Nucl. Acids Res. 1990. V.18. N.24. P.7213-7218.

212. Williams I., Kubelik A.R., Livak K.I., Rafalski I.A., Tongey S.N. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetics markers // Nucl. Acids Res. 1990. V.18. N.22. P.6531-6535.

213. Woychik J.H. Phenotyping k-casein // J. Dairy Sci.1965. V. 48. P. 496-497.

214. Woychik J.H. Polymorphism in k-casein of cow's milk // Bioch. Bioph. Res. Communications. 1964. V.16. P. 267-271.

215. Yeh F.C., Yang R.-C. Boyle T. POPGENE VERSION 1.31 Microsoft Window-based Freeware for Population Genetic Analysis Quick User Guide/ 1999.

216. Zadworny D., Kuhlein U. The identification of the kappa-casein genotype in the Holstein dairy cattle using the polymerase chain reaction // Theor. And Appl. Genet. 1990. V. 80. P. 631 -634.

217. Zietkievicz E, Rafalski A, Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification // Genome. 1994. V.20. P. 176-183.

218. Автор искрение благодарен д.б.н. О.Е. Лазебному за неоценимую помощь в статистической обработке результатов, Г.Н. Полухину за помощь и внимание в течение 3 лет аспирантуры.

219. Автор выражает искреннюю благодарность своей супруге Самире Эшгиниа и дочке Пегах за терпение и любовь.

Информация о работе

Ахани Азари Моджтаба
кандидата биологических наук
Москва, 2006
ВАК 03.00.15

Диссертация

Сравнительный анализ генетического разнообразия пород крупного рогатого скота на основе ISSR-фингерпринтинга и полиморфизма гена Каппа-Казеина - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы