Сравнительное изучение геномов видов льна секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum рода Linum с использованием C/DAPI-бэндинга и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)

Юркевич, Ольга Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительное изучение геномов видов льна секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum рода Linum с использованием C/DAPI-бэндинга и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительное изучение геномов видов льна секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum рода Linum с использованием C/DAPI-бэндинга и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)"

На правах рукописи 003456005

ЮРКЕВИЧ Ольга Юрьевна

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГЕНОМОВ ВИДОВ ЛЬНА СЕКЦИЙ ьтим, АВЕИОЬтиМ, БТЕЫЕЯ01ШиМ РОДА ымим С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СЛ)АР1-БЭНДИНГА И ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ ШЯГШ

Специальность 03.00.03 - молекулярная биология 03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2008

о 5 ДЕК Ш

003456005

Работа выполнена в Лаборатории молекулярной кариологии и основ клеточной терапии Учреждения Российской академии наук Института молекулярной биологии им. В.А. Эигельгардта РАН.

Научимс руководители: доктор биологических наук, профессор

Александр Владимирович Зеленин кандидат биологических наук Ольга Викторовна Муравенко

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Юрий Федорович Богданов доктор биологических наук Виктор Евгеньевич Барский

Ведущая организация: Ботанический институт им. В. Л. Комарова РАН

Защита состоится «<* О ,>2008 г. вчасов на заседании диссертационного совета Д 002.238.01 при Учреждении Российской академии наук Институте молекулярной биологии имени В.А. Эигельгардта РАН по адресу: 119991, Москва, ул. Вавилова, д. 32.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института молекулярной биологии имени В.А. Эигельгардта РАН.

Автореферат разослан «

2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук

А.М. Крицын

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Локализация высокоповторяющихся последовательностей ДНК и семейств мультикопийных генов (например, рРНК генов), С-дифференциалыюе окрашивание и флуорохромный б'эндинг играют большую роль в анализе хромосомной организации геномов растений. Получение нескольких специфических структурных характеристик хромосом позволяет не только их идентифицировать в геномах и субгеномах, но и выявить хромосомные перестройки и амплификации повторяющихся последовательностей ДНК, произошедших в процессе видообразования и селекции. Высокий консерватизм в локализации рибосомных РНК генов на хромосомах открывает возможность их использования как синапоморфного признака для установления геномного родства у различных видов и их филогенетических взаимоотношении.

Культурный вид Ыпнт изиаи.ттит - хорошо известная техническая культура. Этот вид доместицирован более 6000 лет назад и до сих пор не потерял своей хозяйственной ценности. Изо льна получают ткани, масло, лекарственные препараты. Широкое применение льна, являющегося ценнейшим сырьем для промышленности, обусловливает необходимость получения все новых высокопродуктивных и устойчивых сортов льна, что в свою очередь требует хороших знаний генетических особенностей льна культурного и его дикорастущих сородичей. Как известно, генофонд дикорастущих видов остается для возделываемых сельскохозяйственных культур основным источником генов устойчивости к различным заболеваниям и неблагоприятным условиям среды. По этой причине исследование геномов различных дикорастущих сородичей хозяйственно-ценных видов представляет особый интерес для понимания эволюции, генетики и селекции культурных видов. Наиболее простым способом, позволяющим получить ценные сведения о геномах, является исследование хромосом, что особенно актуально для возделываемого вида льна Ь. ияНаНяятит. Культурный лен обладает необыкновенно пластичным геномом. Это ярко демонстрирует возникновение наследуемых геномных различий 1! онтогенезе у генотрофов льна. Изучение особенностей хромосомной организации генома льна и его родственных дикорастущих видов дадут возможность для лучшего понимания их филогенеза и генетических особенностей, что, в свою очередь, откроет новые возможности для целенаправленного ведения селекционного процесса получения новых высокопродуктивных сортов.

Цель и задачи работы. Целью данной работы было сравнительное молекулярио-цитогенетическое исследование кариотипов культурного вида льна Пиши

iisitatissimuin L. и дикорастущих видов секций Linum, Adenolinum и Stellerolinum для определения особенностей и филогенетических взаимосвязей их геномов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определение хромосомных чисел и формул кариотипа у видов секций Linum, Adenolbutm, Stellerolinum с помощью метода C/DAPI-окрашивания и морфометрнческого анализа.

2. Идентификация хромосом по рисунку C/DAPI-бэндинга в кариотипах изученных видов, построение кариограмм и идиограмм.

3. Локализация рибосомных генов и определение их функциональной активности в кариотипах исследуемых видов секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum с помощью метода флуоресцентной гибридизации in situ и Ag-NOR-окрашивания.

4. Сравнительный анализ геномов по рисункам C/DAPI-бэндинга и локализации 26S и 5S рДНК у видов, объединяемых в одну секцию.

5. Сравнение полученных результатов исследования у видов, которые по морфолого-анатомическим признакам распределены в разные секции и подсекции, с целью установления особенностей их геномов и подтверждения секционной самостоятельности.

6. Реконструкция возможных филогенетических взаимосвязей культурного и дикорастущих видов льна и путей эволюции их геномов от предкового вида.

Научная повита работы. При изучении кариотипов видов рода Linum L. впервые установлены хромосомные числа у видов: L. squamulosiim (2и=18) и L. komarovii (2п = 18); уточнены хромосомные числа у видов: L. decumbens (2n=16), L. narbonensa (2и=28), L. stelleroides (2n=18), L. pallescens (2n=18). Составлены формулы кариотипов для всех изученных видов льнов. С помощью C/DAPI-бэндинга впервые идентифицированы все хромосомы в кариотипах льнов с 2п = 30, 2п=1б, 2п=28 и 2п=18. На хромосомах 16 исследованных видов льна впервые методом флуоресцентной гибридизации in situ были картированы 26S и 5S рибосомные РНК гены, выделенные с помощью полпмеразной цепной реакции из геномной ДНК L.austriacum. Проведен сравнительный анализ геномов всех видов jii.ua, впервые выявлены транслокации в геномах 16- и 18-хромосомных видов, а также перицентрическая инверсия, по которой различаются вид/,, angustifolium (2п = 30) и виды L. usitatissimum и L. bienne (2n = 30). Показано особое положение вида L. narbonensa (2п=28) в секции Linum, кариотип которого резко отличается от кариотипов других представителей этой секции. Предложены пути эволюции видов из секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum. Сравнительное исследование

кариотипов позволяет предполагать, что 16-, 18-и 30-хромосомныс пилы льна произошли от общего 16-хромосомиого предка.

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют представть полные цитогенетические характеристики генома такого ценного сельскохозяйственного растения как лен культурный L. usitatissimum, а также геномов его дикорастущих сородичей. Использование этих данных открывает новые возможности для обогащения генофонда культурного вида льна. Полученные результаты представляют особую ценность для генетических исследовании сортов и селекционных форм льна и для ускорения селекционного процесса получения новых сортов культурного льна с заданными свойствами. С помощью современных методов исследования хромосом выявлены новые диагностические кариологическне признаки, позволяющие уточнить таксономический статус видов рода Linum, а также представляющие новые факты для прояснения путей эволюции культурного льна.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на VIII молодежной конференции ботаников (Санкт-Петербург, Россия, 2004 г.) и на VII международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» (Москва, Россия, 2007 г.). Результаты, полученные в данной работе, также были представлены на следующих научных конференциях: на III съезде ВОГиС «Генетика в XXI веке; современное состояние и перспективы развития» (Москва, Россия, 2004 г.), на II съезде Общества клеточной биологии совместно с юбилейной конференцией, посвященной 50-летию Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, Россия, 2007 г.), на Международной конференции «Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке: состояние, проблемы, перспективы», Всероссийский институт растениеводства им. Н И. Вавилова, (Санкт-Петербург, Россия, 2007 г.), на 6-ой международной хромосомной конференции (16th ICC) (Амстердам, Нидерланды, 2007 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена па /«Страницах машинописного текста и включает следующие главы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение, заключение, выводы. Диссертация содержит 6 таблиц, 12 рисунков и 189 литературных ссылок.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Хромосомные числа видов пыш т секций Linum, AdenoUnum и Stellerolinum.

Материалом для исследования послужили образцы 16 видов льна, полученные из Генного Панка Института генетики растений и исследования возделываемых растеииГг г. Гетерслебена, Германия (Institute of Plant Genetics and Crop Plant Research, Gatersleben, Germany) и Института цитологии и генетики Национальной академии наук Беларуси (Минск) (Таблица 1). Перед анализом рисунков C/DAPI-бэндинга и данных FISH произведен подсчет хромосом на метафазных пластинках всех видов льна. В Таблице 1 представлены результаты подсчета хромосомных чисел, результатов их морфометрического анализа, литературных данных, а также формулы кариотипов у изученных нами видовых образцов льна из трех секций - Linum, Adenolinum и Stellerolinum. В секцию Linum входят 30-, 16-хромосомпые виды и один 28-хромосомный вид, а в секцию Adenolinum - 18-хромосомпые виды, в секцию Stellerolinum - один вид с 2п=18. Морфометрнческий анализ хромосом позволил установить, что исследуемые виды по размеру хромосом делятся на три группы - виды с мелкими хромосомами (1-1,5 мкм)- 2п=30, виды с хромосомами среднего размера (1,5-4 мкм) - 2п=1 б, 2п=18 и вид с крупными хромосомами (3-5 мкм) - 2п=28. Это хорошо согласуется с данными, полученными ранее (Ray,1944; Chennaveeraiah, Joshi, 1983). Результаты нашего исследования показали, что кариотип для всех изученных видов в основном представлен метацентрическими хромосомами и наличием одной пары спутннчных хромосом у 30-,16-, 18-хромосомных видов и двух пар спутннчных хромосом у вида с 2п=28. Почти у всех видов (за исключением L. narbonense) спутничные хромосомы имели вторичную перетяжку в прпцентромерном районе и сходный рисунок C/DAPI-окраски. Хромосомные числа всех изученных видов почти всегда совпадают с литературными данными (Таблица 1). Изучение кариотипов 16 видов рода Linum L. позволило впервые установить хромосомные числа у видов: L. squamulosum (2п = 18), L. mcsostylum (2n = 18) и L. komarovii (2n = 18); уточнить хромосомные числа у видов: L. decumbens (2п = 16), L. narbonense (2п = 28), L. stelleroides (2n=18), L. pallesccns (2n = 18) и подтвердить число хромосом в кариотипах у видов: L bienne (2п = 30), L. angustifolium (2п = 30), L. usitatissimum (2п = 30), L. grandißoritm (2п = 16), L. austriacum (2п = 18), L. altaicum (2п = 18), L. leonii (2и = 18), L.lewisii (2п = 18), L. perenne (2п = 18). Ранее в работе Chennaveeraiah, Joshi (1983) были представлены формулы кариотипов для видов L. usitatissimum , L. angustifolium (2п=30), L. grandißoritm (2n=16), L. narbonense (2n=28) и двух 18-хромосомных видов L. austriacum и L. perenne. В них не были указаны спутничные хромосомы, и было другое, по сравнению с нашими данными,

соотношение метацентриков и субметацентриков. Следует отметить, что спутничная хромосома является одной из самых крупных в кариотипе, а спутник по размеру сопоставим с самыми маленькими хромосомами. Этим можно объяснить различия в хромосомных числах на одну пару хромосом, определяемых для видов, в кариотипе которых присутствуют подобные спутничные хромосомы. Так, при изучении монохромно окрашенных хромосом для L. usitatissímum было определено два хромосомных числа 2п = 30 и 2и = 32, спутничные хромосомы не указывались (Марценицина, 1927). Аналогичная ошибка, по всей видимости, имела место при подсчете хромосом и в кариотипе L. stelleroides, для которого ранее было определено 2п=20 dittp://mobot.mobot.org/). В результате нашего исследования с помощью методом дифференциального окрашивания и флуоресцентной гибридизации in situ с пробами рибосомных генов было выявлено, что хромосомное число вида L. usitatissimnm 2п = 30, а для L. stelleroides установлено число хромосом 2и = 18. Вид L. stelleroides имеет такую же формулу кариотипа, как л виды секции Adenolinum, для которых 2п = 18 (Таблица 1). Для L. pallescens ранее было указано хромосомное число 2п = 30 (Gill, Yérmanos, 1967; Seetharam, 1972). Наше исследование показало, что у этого вида хромосомное число 2п = 18, как и для других представителей секции Adenolinum (Таблица 1). Все виды имеют кариотипы, сходные как друг с другом, так и с другими видами секции Adenolinum, поэтому предыдущее определение числа хромосом для L. pallescens 2п = 30 (Gilí, Yérmanos, 1967; Seetharam, 1972) можно считать ошибочным.

Таблица 1. Хромосомные числа, размеры хромосом , формулы карнотнпов изученных видов льна и данные литературных источников.

Исследуемый Размеры Число Формула Литературные данные

вид хром., мкм хром., 2п кариотипа

Число хром., 2п Источник

сек. Linum

L. angustifolium Huds. 1-1.5 30 К=М" +3M+lSM+9in+ 30 Ray (1944); Chennaveeraiah and

№15 Ism 32 Joshi (19S3);G¡11 and Yérmanos (1967); Seetharam (1972) Марценицина (1927)

L. bieime Mill. №14 1-1.5 30 то же 30 Ockendon and Walters (1968)

L. asitalissimimi L. var. usitatissimum сорт Оршанский 2 №39 1-1.5 30 то же 30 32 Ray (1944); Seetharam (1972); Gilí and Yérmanos (1967); Chennaveeraiah and Joshi (1983); Егорова (1996) Марценицина (1927)

/.. gnmdijlonmi Desf. Lin 4/99 1.9-4.3 16 K=1M" +3M+3m+lsm 16 Ray (1944); Seetharam (1972); Chennaveeraiah and Joshi (1983); Егорова (1996)

/.. decumbens Desf. Lili 1913/9S Lin 1754 1.9-4.3 16 то же 30 18 32 Gilí and Yérmanos (1967) Chichiricco.Tammaro* (1980) Mohamed* (1997)

L. narboiieii.se L. Lin 1653/83 Lin 2002 2,9-4,8 28 K=6M+lSM+4m +lsm+2sin" 18 20 28 30 Seetharam (1972) Gilí and Yérmanos (1967); Chennaveeraiah and Joshi(1983) Ray (1944) Oekendon and Walters (1968)

CQR./tllenolilllllll

L. auslriacum subsp. austriacum L. Lin 6/76 L. auslriacum L. Lin 1831/94 Lin 1608/82 1,6-3,4 18 K=1M" +3M+4m+lsm 18 36 Oekendon and Walters (1968); Chennaveeraiah and Joshi (1983) Seetharam (1972)

/.. auslriacum, subsp. eitxinum Juz. (= L. squüiiiuhsum Rudolphi) Lin 1546 1,6-3,4 18 то же пет данных

/.. altaicum Lcdeb. Lili 1632/S3 1,7-3,2 18 то же 18 Ray (1944); Gilí and Yérmanos (1967)

L. komarovii Ju?;. 2,1-4,0 18 то же пет

Lin 1716/92 данных

L. mesostylum Juz. Lin 1662/90 1,6-3,2 18 то же нет данных

L. perenne L. Lin 1807/94 L.perenne subsp. perenne L. Lin 1521/81 1,7-3,9 18 18 то же 18 36 Ray (1944); Gill and Yérmanos (1967); Ockendon and Walters (1968) Егорова (1996) Chennaveeraiah and Joshi(1983)

L. leonii F.W. Schultz Lin 1672/92 1.7-3.9 18 то же 18 Ockendon and Walters (1968)

L. pallescens Bunge Lin 1645/01 1,7-3,2 18 то же 30 Gill and Yérmanos (1967); Seetharam (1972)

L.lewisii Pursh. Lin 1550/84 1,7-3,2 18 то же 18 Ray (1944); Harris (1968)

сек. Stellerolinum

L. stelleroides Planch Lin 1655/82 1.7-3.0 18 то же 20 Sokolovskaya, Probatova* (1985)

Примечание: * - автор цитируется по электронной базе данных http://mobot.mobot.org/

C/DAPI-бэндинг. На хромосомах исследованных видов льна, после процедуры FISH, получен рисунок DAPI-дифференциального окрашивания, который был сходен с рисунком С-окраски хромосом (Рис.1). В связи с этим, в дальнейшем С-блоки, также выявляемые по DAPI, мы будем называть C/DAPI-блоки. Анализ рисунков распределения C/DAPI-бэндов по длине хромосом у представителей 30-, 16-, 18- и 28-хромосомных видов показал, что в их кариотипах более крупные гетерохроматические блоки в большинстве хромосом расположены в прицентромерных районах хромосом, а средние и небольшие C/DAPI-бэнды -преимущественно в теломерных и интеркалярных районах (Рис.1). Хромосомспецифичные рисунки C/DAPI-окрашивания позволили не только идентифицировать все пары гомологов в кариотипах изученных видов, но и точно определить районы локализации 26S и 5S рДНК. Схематическое расположение C/DAPI-блоков и рибосомных генов на хромосомах указано на идиограммах (Рис.2).

Рис.1 .Рисунки С-бэндинга и DAPI-инвертированных изображений L. angustifolium

(2п=30) (а,е), L. grandiflorum (2n=16) (b,f), L.narbonense (2п=28) (с, g),

L. perenne (2n=18) (d,h). Стрелками показаны спутничные хромосомы. Bar=5pm.

-% U ' * 1 и*

я у L» т* ~ - *

sn^VC

1 ч * f щ*. v •: v -:

V • 8 да*

h / y

nJB ' ^ П t

4 ""

Сравнительное исследование трех 30-хромосомных видов секции Linum. C/DAPI-бэпдинг. Изучено три вида льна с 2п=30 из секции Linum - L. angustifolium,L. usitatissimum и L. bienne. Кариотип представлен, в основном, метацентрическими хромосомами. Рисунок C/DAPI-окрашивания специфичен для каждой хромосомы. На Рис.2 (а, Ь) представлены идиограммы распределения C/DAPI-бэндов и локализации рДНК на хромосомах для видов L. angustifolium.L. usitatissimum.

FISH. По данным FISH у 30-хромосомных видов 5 S и 26S рДНК колокализованы на спутничной хромосоме 1, захватывая часть спутника, спутничную нить и прицентромерный район хромосомы (Рис. 3, а, Ь). Сайты рДНК яркие и одинаковой интенсивности. Ag-NOR-окрашивание выявило интенсивную окраску района вторичной перетяжки спутничной хромосомы 1. У видов льна с 2п=30 отдельные сайты 5S рДНК локализованы на трех парах хромосом. У L. angustifolium самый крупный сайт 5 S рДНК расположен в коротком плече хромосомы 3, его положение совпадает с дистальным C/DAPI-блоком в позиции 3S1.3. У L. usitatissimum и L. bienne сайт 5S рДНК с сигналом высокой интенсивности локализован проксимально на длинном плече хромосомы 3 в районе 3L1.3. (Рис. 2, Ь). Остальные локусы 5S рДНК средней величины располагаются в проксимальном районе длинного плеча хромосомы 8 (8L1.3) и в субтеломерном районе короткого плеча хромосомы 13 (13S1.3). Иногда в кариотипах всех видов вместе с сайтами 5 S рДНК выявляются минорные полиморфные сайты 26S рДНК.

При изучении 30-хромосомных видов L. usitatissimum, L. angustifolium и L. bienne выявлено высокое сходство их кариотипов - по размерам хромосом (1-1,5 мкм) и их морфологии, рисункам C/DAPI-бэндинга и локализации рибосомных генов (за некоторым исключением). На основании рисунка C/DAPI-дифференциального окрашивания было установлено, что спутничная хромосома является самой крупной хромосомой в кариотипе у всех изученных видов и имеет сходные морфологию и рисунок C/DAPI-окрашивания. По размерам C/DAPI-блоков выявлено большее сходство между кариотипами L. usitatissimum и L. bienne, поскольку хромосомы в кариотипе L. angustifolium более гетерохроматизированы (например, прицентромерная область хромосомы 1). По данным FISH у L. usitatissimum и L. bienne сайт 5S рДНК расположен в длинном плече хромосомы 3, а у L. angustifolium - в коротком (Рис.3). Это позволило нам предположить перицентрическую инверсию в хромосоме 3, захватывающую локус 5 S рДНК, по которой L. angustifolium отличается от видов L. usitatissimum и L. bienne. На основании межвидовых скрещиваний показано, что L. usitatissimum отличается от L. angustifolium одной транслокацией (Gill, Yérmanos, 1967).Таким образом, сравнительное исследование указывает на большую геномную близость

Рис.2 Идиограммы распределения СЛ)АР1-бэндов и локализации рДНК на хромосомах Ь. апдияИ/оИит (2п=30) (а),

тИаШхит/т (2п=30) (Ь), '¿гапсЧАогит (2п=16) (с), Ь. йеситЪеп* (2п=16) (а), I. ашЫасит (2п=18) (е), Ь.котагоуи ((), (g). 268 1ША - зеленый сигнал, 58 гО^- красный сигнал

10«

• I

ДЕ - ш.ф —=М—Я-

о!]

8':;; * 3?, •

Я*

к *

■ и В

|| Ё •

Ё^ С

10 11 т—З^*-

12 13 14 15

■И Е'В ^

¡г 01 5 Н =

1.5 »

•c

1 -! -S "1 со ПИ со I Mil

4 « 1 4V •

к 1 it Í к Iii 1

ÙU m

» 1 MI) * OÍD

m m

» 1 HI) » i M i i

« uU . hi i

Я *

со (Dili « ÍÜCD

с 1 INI 1 с, я i Bf i 1

a a

3 3 I- ü 2 - 1 NI 1 - íüíi

(Ml

» III ) «

. IN Í

» 1 Ml i

n bffi

* im f

о I IN II

V illfj

-ti £

«j» ЛЬ

■if"

I Nil)

L. usitatissimum и L. bienne. Полученные нами результаты не согласуются с мнением систематиков, отождествляющих виды L. angustifolium и L. bienne (Ockendon, Walters, 1968; Егорова 1996) и соответствуют точке зрения тех таксономистов, которые считают L. bienne подвидом L. usitatissimum (Черноморская,Станкевич, 1987) или все три вида рассматривают как отдельные (Юзепчук, 1949).

Сравнительное исследование двух 16-хромосомных видов секции Linum. C/DAPI-бэндинг. Исследовано два 16-хромосомных вида из секции Linum - L. grandiflorum и L. decumbens. C/DAPI-бэндинг выявил высокое сходство кариотипов обоих видов. Однако, в хромосомах L. grandiflorum прителомерные C/DAPI-бэнды несколько крупнее по сравнению с L. decumbens. На Рис.2 (c,d) представлены идиограммы C/DAPI-бэндинга изученных видов.

FISH. У L. grandiflorum и L. decumbens (2п=16) большие сайты гибридизации 5S и 26S рДНК располагаются вместе и функционально активны в ЯОР-хромосоме 1 в районе вторичной перетяжки, как и у 30-хромосомных видов. Сайты рДНК яркие и одинаковой интенсивности. Достаточно большой сайт 5S рДНК локализован в медианном районе длинного плеча хромосомы 3 и совпадает с положением интеркалярного C/DAPI-бэнда в районе (3L1.3) (Рис.3, d).

Высокое сходство рисунков C/DAPI-бэндинга и локализации рибосомных генов в хромосомах вида L. decumbens и 16-хромосомного вида L. grandiflorum указывает на близость их геномов. По литературным данным у L. decumbens определено 2п = 18, 30 и 32. По результатам нашего исследования для этого вида установлено 2п = 16 (Табл. 1). Родство геномов L. grandiflorum и L. decumbens установлено методами AFLP- и RAPD-анализа, а также работами по изучению жирнокислотного состава семян (Velasco ,Goffman, 2000; Fu, 2002; Vromans, 2006). Как показало исследование материалов Гербариев Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН (LE) и Музея естественной истории Венгрии (BP), L. decumbens по своим морфологическим признакам также близок к L. grandiflorum. (Светлова, 2007). Совокупность приведенных выше морфологических и кариологических признаков L. decumbens и L. grandiflorum дает нам основание выделить эти виды в самостоятельную подсекцию секции Linum. Однако этот вопрос требует дополнительного изучения. Особое положение L. narbonense (2п=28) в секции Linum.

C/DAPI-бэндинг. Изучен один 28-хромосомный вид из секции Linum - L. narbonense. Обнаружено, что по размерам и рисунку C/DAPI-бэндинга хромосом L. narbonense резко отличается от остальных исследованных видов сек. Linum. Идиограмма распределения C/DAPI-блоков в хромосомах L. narbonense представлена на Рис.4.

Рис.3. Метафазные пластинки L. usitatissimum (2n=30) (a), L. angustifolium (2n=30) (Ь), L.narbonense (2п=28) (с), L. grandiflorum (2n=16) (d), L. perenne (2n=18) (е), L.komarovii (2n=18) (í), L.stelleroides (2n=18) (g) после FISH с 26S рДНК (зеленый сигнал) и 5S рДНК (красный сигнал). Стрелками показаны спутничные хромосомы, головками стрелок-сайты 5S рДНК. Bar=5pm.

\ V

V. «

«•г

At /

Р1БН. У Ь. пагЬопете (2п = 28) сайты гибридизации 58 и 268 рДНК высокой интенсивности колокализованы в районе вторичной перетяжки на двух спутничных хромосомах 8 и 13 (Рис.3, с). На обеих спутничных хромосомах сайты рРНК генов яркие и одинаковой интенсивности. Отдельные локусы 58 рДНК картированы на четырех парах хромосом. На хромосомах 2 и 9 в районе центромеры расположены достаточно яркие сайты 58 рДНК. На хромосомах 4 и 11 сайты 58 рДНК локализованы дистально в длинном плече и совпадают с положением С/БАР1-бэндов в позиции 4Ы.7 и 111Л.5 соответственно (Рис.4).

Для Ь. пагЬопете секции Ыпит ранее было определено четыре хромосомных числа: 2п = 18, 20, 28 и 30. В данном исследовании для этого вида установлено 2п = 28 (табл. 1). Выявлено, что кариотип Ь. пагЬопете сильно отличается от кариотипов других представителей секции Ыпит по морфологии, числу и размеру хромосом, а также наличием двух пар субметацентрических спутничных хромосом со вторичными перетяжками в дистальной части короткого плеча (Рис.4).

Рис.4 Идиограмма распределения СЛ)АР1-бэндов и локализация рДНК на хромосомах Ь.пагЬопепэе (2п=28). 26$ гО^- зеленый сигнал, 58 гО^- красный сигнал

10 11

12 13

При анализе рисунков С/БАРЬокрашивания хромосом выявлено, что все пары хромосом имеют пару, сходную по рисунку дифференциального окрашивания. Например, хромосомы 1 и 3, 5 и 6, 7 и 14. Сходство морфологии и рисунков С/БАР1-окрашивания спутничных хромосом 8 и 13, а также наличие четырех пар хромосом с сигналами 58 рРНК генов, позволяют предположить полиплоидное происхождение этого вида.

Результаты нашего исследования свидетельствуют об особом положении

L. narbonense в секции Linum, что подтверждается данными и других авторов. Так, анализ RAPD-спектров выявил, что L. narbonense кластеризуется в отдельную группу среди изученных представителен секции Limim, и наиболее отдален от них в генетическом отношении (Лемеш и др., 2005). Как показало исследование материалов Гербариев Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН (LE) и Музея естественной истории Венгрии (BP), L. narbonense морфологически близок к другому виду из секции Linum — L. nervosum. В секции Linum вид L. nen'osuin по морфологическим признакам выделен в самостоятельную подсекцию Ncn-osa (Оптасюк, 2007; Светлова, 2007). Отсюда следует, что L. narbonense, который по своим признакам близок к L. nerx'osum, можно рассматривать в этой же подсекции.

Сравнительное исследование IS-хромосомных видов секции Adenolinum. C/DAPI-бэндинг. Исследовано 9 видов льна секции Adenolinum и 1 вид секции Steüerolinum. Анализ рисунка C/DAPI-бэндинга хромосом показал, что всс виды имеют в кариотипе 2п=18 и сходный рисунок C/DAPI-окрашивашм. На Рис.2 (е, Г, g) представлены идиограммы C/DAPI-бэндинга у некоторых представителей секций Adenolinum, Stellerolinum. Большее количество гетерохроматина выявлено в кариотипах L.austriacum, L.leonii, L.komarovii, L.mesostylum, L.pcrenne, L.squamuloswn.

FISH. У видов (2u=18) секции Adenolinum и Stellerolinum выявлены сайты 26S и 5S рДНК на спутничной хромосоме (Рис. 3, е, f, g). Крупный яркий сигнал гибридизации 26S рДНК захватывает спутничную нить и прилегающие к ней районы хромосомы 1. С ним колокализован более слабый, чем у 16- и 30-хромосомных видов, сигнал гибридизации 5S рДНК. В другом плече этой хромосомы в районе C/DAPI-бэнда 1L1.3 также расположен крупный сайт 5S рДНК. Там же наблюдается, как правило, слабый полиморфный сигнал 26S рДНК. Ag-NOR-окрашнвание выявило интенсивную окраску района вторичной перетяжки спутничной хромосомы 1.

Секция Adenolinum является одной из наиболее таксономически сложных групп в роде Linum. Считается, что внды секции Adenolinum по морфологическим признакам различаются мало (Юзепчук 1949). Исследования с применением биохимических и молекулярных маркеров позволяют на уровне секции отделить представителей секции Adenolinum от видов других секций (Кутузова и др., 1999; Velasco , Goffman, 2000; Fu Yong-Bi, 2002; Vromans, 2006). По последним данным некоторые анатомические особенности льнов могут являться дополнительными диагностическими признаками на уровне вида (Светлова, 2005; Оптасюк, 2006). По результатам нашего исследования кариотипы всех изученных 18-ти хромосомных видов существенно не различаются по морфологии, рисункам C/DAPI-бэндинга хромосом и по расположению на них рибосомных генов. Большее количество

гетерохроматина выявлено в кариотнпах L.austriacum, L.leonii, L. komarovii , L. mesostyhm, L.perenne, L.squamulosum. На хромосомах 2, 3, 4 у отдельных видов наблюдается варьирование размеров прицентромерных и интеркалярных C/DAPI-бэндов. У L. perenne хромосома 2 имеет меньший центромерный индекс. По данным Gill, Yérmanos (1967 б) при проведении межвидовых скрещиваний было показано, что виды с 2n=18 L. aastriacum, L. perenne, L, allaicum отличаются друг от друга одной реципроктной транслокацией. К сожалению, нами не было обнаружено этой транслокации. Долгое время оставалось неоднозначным положение L. steUeroides в системе рода Limim. Ранее для L. stelleroides было определено 2п = 20 (http://mobot.mobot.org/'). В результате нашего исследования в кариотипе этого вида выявлена пара спутничных хромосом с прицентромерной вторичной перетяжкой, и установлено число хромосом 2п =18. Выявлено, что кариотип L. stelleroides аналогичен кариотнпам 18-хромосомных видов из секции Adenolinum. Несмотря на сходство с видами секции Adenolinwn,отдельные морфолого-анатомнческие признаки свидетельствуют в пользу выделения L. stelleroides в самостоятельную секцию Stellerolinum (Светлова, Яковлева, 2006; Светлова, 2008).

Сравнительный анализ 18-,16- и 30-хромосомиых видов.

Распределение C/DAPI-блоков по длине хромосом внутри каждой группы видов (2п=30, 2п=18, 2и=16) было сходным (Рис. 2, а, с, е.). При сравнении кариотипов 16- и 18-хромосомных видов мы обнаружили, что рисунки дифференциального окрашивания 1-8 пар хромосом у этих групп видов в основном схожи. Однако имеются и некоторые различия. У 16-хромосомных видов прителомерные C/DAPI-блоки крупнее, чем у 18-хромосомных видов. Кроме того, у 18-хромосомных видов на ЯОР-хромосоме 1 в середине длинного плеча располагается крупный гетерохроматиновый блок, в то же время C/DAPI-блок в середине длинного плеча хромосомы 3 несколько крупнее у 16-хромосомных видов. Хромосомы 9 пары 18-хромосомных льнов похожи по размерам и C/DAPI-окрашиваншо на хромосомы 8 пары, но их центромерный индекс немного меньше, а размеры C/DAPI-блоков немного больше. Несмотря на значительно меньшие размеры, многие хромосомы 30-хромосомных льнов по рисунку C/DAPI-окраскн также имеют сходство с хромосомами 16- и 18-хромосомных видов. ЯОР хромосома 1 и хромосомы 2,3 сходны у всех изученных видов. Обнаруженное сходство рисунков C/DAPI-окрашивания хромосом между 16-, 18- и 30-хромосомными видами, особенно заметное у видов с сопоставимыми размерами и числом хромосом (2п=18, 2п=16), а также наличие в кариотнпах всех изученных видов морфологически одинаковых спутничных хромосом, свидетельствует в пользу общности происхождения их геномов.

По расположению 5S рДНК на спутничпой хромосоме 1 изученные виды можно разделить на две группы. У 16- и 30- хромосомных видов 5S рДНК колокалпзована с 26S рДНК. У 18-хромосомных видов, кроме колокализации 26S и 5S рДНК, в длинном плече хромосомы 1 выявлен еще один сайт 5S рДНК (Рис.2). В геномах 30- и 16- хромосомных видов льна присутствуют отдельные локусы 5S рДНК, расположенные на хромосомах 3,8,13 у видов с 2п=30 и на хромосоме 3 у видов с 2п=16. Различия между видами в локализации сайта 5S рДНК на хромосомах 1 и 3 стало основанием для предположения, что в геноме 18-хромосомных видов произошла трапслокация с точками разрывов по границам районов 1L 1.3 и 3L 1.3 (Рис. 3). Обнаруженные различия по хромосомной локализации сайтов рибосомных генов у видов льна с 2п=1 б, 2п=30 и с 2п=18 согласуются с точкой зрения ряда систематиков об их принадлежности к разным секциям Liman и Adenolinum соответственно.

Возможные пуши эволюции видов секций Liiuim, Adenolinum, Steüerolmum.

Работы по изучению вопросов эволюции льнов практически отсутствуют, за исключением работ по культурному льну L. usitatissimum. Совсем недавно систематиками предложена гипотеза об уровнях эволюционного развития секций рода Linum, основанная на совокупности примитивных и продвинутых признаков. Считается, что наиболее примитивными секциями в роде Linum, по-видимому, являются секции Adenolinum, Stellerolinum, Linum (Светлова, 2007; Оптасюк, 2007). Ранее, при анализе монохромно окрашенных хромосом, было построено эволюционное древо, в котором L. austriacum (2п=18) был предложен в качестве исходного вида при видообразовании 16- и 30-хромосомных видов (Chennaveeraiah, Joslii, 1983). Однако, по результатам межвидовых скрещиваний некоторые авторы предполагают, что L. usitatissimum (2п=3 0) произошел от вида L. grandiflorum (2и=16) через полиплоидизацию с последующим уменьшением числа хромосом в процессе естественного отбора (Gill , Yérmanos, 1967; Dubey, Kumar,1973). По данным Seetharam (1972) L. usitatissimum (l\\ = 30) легче скрещивался с L.gnmdiJIorum (li\ = 16), и труднее с L. austriacum (2n = 18). При опылении L. usitatissimum пыльцой дикорастущих 18-хромосомных видов {L.komarovii и L.austriacum) коробочки не завязывались. Однако, в трех из четырех случаев при нанесении пыльцы L. grandiflorum на рыльца L. usitatissimum наблюдали формирование коробочек (Могилевская и др., 2002). Все это говорит о более близком геномном родстве 30- и 16-хромосомпых видов. Следует отмстить, что в кариотнпах всех изученных нами 30-хромосомных льнов, некоторые пары хромосом, различающиеся по размеру, сходны между собой по рисунку дифференциального окрашивания. Таким образом, полученные нами данные подтверждают полиплоидное происхождение 30-хромосомных видов от

предкового вида с 2п = 16. Вероятно, 16- и 18-хромосомные виды также произошли от общего 16-хромосомного предка. В процессе видообразования в геноме 18-хромосомпых видов произошла транслокация на хромосомах 1 и 3 и дупликация хромосомы 8. Возможно, что эта транслокация стала отправной точкой дивергенции 18-ти и 16-ти хромосомных групп видов от предковой формы с 2п = 16.

Филогенетические взаимоотношения 30-хромосомных видов и возможное происхождение культурного льна.

Считается, что дикорастущий вид L. angustifolium является предковой формой L. usitatissimum (Zohary, Hopf ,1988; Diederichsen, Hammer 1995; Fu, 2002). Лен двулетний L.bierme Юзепчук (1949) рассматривает как примитивный тип культурных льнов, наиболее близкий к дикорастущему L. angustifolinm. До настоящего времени нет единого мнения по поводу роли L.bienne в процессе видообразования L. usitatissimum (Lay, Dybing, 1989). При межвидовых гибридизациях L. usitatissimum легче скрещивается с L. bienne, и труднее с L. angustifolium. Завязываемость семян для L. usitatissimum х L. bienne составляет приблизительно 30%, для L. usitatissimum х L. angustifolium - примерно 5% (Seetharam, 1972; Муравенко и др., 2003). L. angustifolium в отличие от L. usitatissimum и L. bienne имеет растрескивающиеся коробочки (Юзепчук 1949). В процессе доместикации предковой формы этот признак оказался бесполезным, но возможно, повысил шанс к выживанию L. angustifolium как дикорастущей формы. Учитывая локализацию рибосомных генов у 30-хромосомных видов можно заключить, что виды очень близки и произошли от общего предка. Обнаруженное отличие геномов L. usitatissimum и L. bienne от L. angustifolium по перицентрическон инверсии в хромосоме 3, может объяснить их дивергенцию в процессе доместикации предковой формы.

ВЫВОДЫ

1. Изучение кариотипов 16 видов рода Linum L. с помощью C/DAPI-бэндинга позволило впервые установить хромосомные числа у видов: L. squamulosum (2п = 18) и L. komarovii (2п = 18); уточнить хромосомные числа у видов: L. decumbens (2п = 16), L. narbonense (2п = 28), L. stelleroides (2n=18), L. pallescens (2п = 18). Составлены формулы кариотипов и идиограммы для всех изученных видов льнов.

2. В геномах всех изученных видов по рисунку C/DAPI-бэндинга проведена полная идентификация хромосом. С помощью FISH в кариотипах всех видов льна картированы 26S и 5S рДНК, выделенные с помощью ПЦР из геномной ДНК

Ь.тШпасит. Кроме того, изучена функциональная активность рибосомных генов методом AgNOR-oкpaшивaння.

3. Исследование рисунков СЛЭАИ-окрашивания хромосом и локализации 268 и 58 рДНК у трех близкородственных видов Ы си^иэИ/оИтп, Ь. изНаНзз/тит и I. Ыеппе с 2п=30 секции Ыпит обнаружило сходство их кариотинов и показало их автотетраплоидное происхождение. Выявлена пернцентрическая инверсия в хромосоме 3, захватывающая локус 58 рДНК, по которой различаются вид I. ап&мЧ/оИит и виды Ь. ги/'/д/ияиштн и Ь. Ыеппе и которая могла возникнуть в процессе доместикации предковой формы.

4. Обнаружено высокое сходство хромосом у видов Ь. с1еситЪет и Ы gnmd¡jlorum (2и = 16) секции Ыпит по рисункам С/ОАР1-бэндинга и локализации рибосомных генов, что указывает на их близкое родство. Полученные результаты согласуются с точкой зрения систематиков о выделении Ь. ¿еситЪет и Ь. §гапсИ/1отт по совокупности морфологических и ультраструктурных признаков в самостоятельную подсекцию секции Ыпит.

5. Установлено, что кариотип Ы пагЬопете (2п=28) секции Ыпит отличается от карнотипов других представителей этой секции по числу, размеру и морфологии хромосом, а также по наличию двух пар спутиичных хромосом. Анализ результатов исследования позволяет предположить полиплоидное происхождение Ь. пагЬопете, а также свидетельствует в пользу пересмотра таксономического статуса этого вида.

6. Выявлено, что кариотипы близкородственных дикорастущих видов с 2п=18 секции Ас1епоИтт1 существенно не различаются по рисункам С/БАИ-бэидинга хромосом и локализации рибосомных генов. Выделенный систематиками из секции АЛепоНпит в монотипную секцию 51еПегоПпиш, вид Ы з1е11его1с1е$ (2п=18) имел кариотип аналогичный кариотипам 18-хромосомных видов из секции АЛепоИпшп .

7. Обнаруженные различия по хромосомной локализации сайтов рибосомных генов у видов с 2п=30, 2п=16 и у льнов с 2п=18 согласуются с точкой зрения ряда систематиков об их принадлежности к разным секциям Ыпит и А(]епоНтт1 соответственно. Геном 18-хромосомных видов от 16-хромосомных отличает транслокация на хромосомах 1 и 3 с точками разрывов по границам районов 1.3 и ЗЬ 1.3 и дупликация хромосомы 8. Сравнительный анализ карнотипов видов из этих секций позволяет предполагать, что 16-, 18-и 30-хромосомные виды льна произошли от общего 16-хромосомного предка.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи

1. Муравенко О.В., Лемеш В.А., Саматадзе Т.Е., Амосова А.В, Грушецкая З.Е, Попов КВ., Семенова О.Ю. (Юркевич О.Ю.), Хотылева Л.В., Зеленин А.В. Сравнение геномов трех близкородственных видов льна и их гибридов с использованием хромосомных и молекулярных маркеров // Генетика. 2003. Т.39. №4. С.510-518.

2. Муравенко О.В., Амосова А.В, Саматадзе Т.Е., Семенова О.Ю. (Юркевич О.Ю.), Носова И.В., Попов К.В., Шостак Н.Г., Зощук С.А., Зеленин А.В. Хромосомная локализация 5S и 45S рибосомной ДНК у видов рода Limim L. секции Linum (syn.= Protolinum) и AdenolinumH Генетика. 2004. Т.40. № 2. С. 1-5.

3. Семенова О.Ю. (Юркевич О.Ю.), Саматадзе Т.Е., Зеленин А.В., Муравенко

0.В. Сравнительное изучение геномов видов льна секций Adenolinum и Stellerolimim с использованием флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) // Биол. мембраны. 2006. Т. 23. № 6. С. 453-460.

4. Muravenko O.V., Yurkevich O.Yu., Bolsheva N.L., Samatadze Т.Е., Nosova I.V., Zelenina D.A., Volkov A.A., Popov K.V. , Zelenin A.V. Comparison of genomes of eight species of sections Linum and Adenolinum from the genus Linum based on chromosome banding, molecular markers and RAPD analysis // Genetica online 26 мая 2008(littp://springerlink.com/content/61h27618581875q5/?p=5010b5399a2e405d8d8b27 27al54277b&pi=l)

5. Юркевич О. Ю., Светлова А. А., Муравенко О. В. Хромосомные числа некоторых видов секций Linum, Adenolinum и Stellerolimim рода Linum (Linaceae) Бот. журнал 2008, в печати

Тезисы

1. Muravenko O.V., Samatadze Т.Е., Amosova A.V., Popov К. V., Semenova О. Yu. (Юркевич О.Ю.), Nosova I.V., Zelenin A.V. The comparison of five related flax species genomes by different chromosome markers // International Polyploidy Conference. 27-30 April 2003. Linear Society and Royal Botanic Gardens, Kew. P.28.

2. Семенова О.Ю. (Юркевич О.Ю.), Амосова А.В., Саматадзе Т.Е., Муравенко О.В., Зеленин А.В. Цитогенетическое исследование видов льна из секции Linum И Материалы VIII молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге. 17-21 мая 2004. С.249.

3. Семенова О.Ю. (Юрксвич О.Ю.), Амосова A.B., Саматадзе Т.Е., Муравенко О.В., Зеленин A.B. Цнтогенетическое исследование видов льна из секции Limim // Труды III съезда ВОГиС: "Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития". Москва. 6-12 июня, 2004. С. 301.

4. Юркевич О.Ю., Саматадзе Т.Е., Зеленин A.B., Муравенко О.В. Молекулярпо-цитогенетический анализ видов льна секций Limim, Adenoliniim, Slellcroiimini рода Linum L.// Материалы международной конференции «Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке: состояние, проблемы, перспективы», Всероссийский институт растениеводства им. Н.И. Вавилова. Санкт-Петербург, 2630 ноября. 2007. С. 377-378.

5. Юркевич О.Ю., Саматадзе Т.Е., Большева Н.Л., Зеленин A.B., Муравенко О.В. Сравнительное изучение геномов 15 видов рода Limim L секций Linum, Adenoliniim, Stellerolimim с использованием C/DAPI дифференциального окрашивания, флуоресцентной гибридизации in situ с рибосомными генами и AgNOR окрашивания // VII международный симпозиум «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» Пущино, 2007. Т.З. С. 307-308.

6. Муравенко О.В., Саматадзе Т.Е., Большева Н.Л., Юркевич О.Ю., Зеленин A.B.. Особенности идентификации мелких хромосом растений // Тезисы докладов и сообщений, представленные на II съезд Общества клеточной биологии совместно с юбилейной конференцией, посвященной 50-летию Института цитологии РАН. Санкт-Петербург. 16 - 19 октября 2007. Цитология. 2007. Т. 49. № 9. С. 779-780.

7. Muravenko О., Yurkcvich О., Samatadze Т., Bolsheva N., Zelenina D., Popov К., Zelenin A. Chromosome evolution of flax and related species from sec. Linum and Adenolinum studied by molecular-cytogenetic analysis // 6th International Chromosome Conference (16th ICC). 25-29 August 2007. RAI conference centre, Amsterdam. Chromosome research._2007. V.15. Suppl. 2. P. 44.

рДНК (РНК) - рибосомная ДНК (РНК)

ЯОР - ядрышко-организующий район

AFLP - amplification fragment length polymorphism

DAPI - 4'-6-Diamidino-2-phenylindole

FISH - fluorescence in situ hybridization

Ag-NOR- argyrophilic nucleolar organizer region

RAPD - random amplified polymorphic DNA

Список сокращений

Заказ Кй 89/11/08 Подписано в печать 11.11.2008 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,25

ООО "Цифровичок", тел. (495) 797-75-76; (495) 778-22-20 www.cir.ru; e-mail:inio@clr.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Юркевич, Ольга Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Цитогенетические и молекулярные методы исследования хромосом растений.

1.1. Методы окрашивания хромосом растений.

1.1.1. Монохромное окрашивание.

1.1.2. Методы дифференциального окрашивания в кариотипировании мелкохромосомных растений.

1.1.2.1. С - дифференциальное окрашивание.

1.1.2.2. Окрашивание флуорохромами.

1.1.3. Ag-NOR окрашивание.

1.2. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

1.2.1. FISH с отдельными классами повторяющихся последовательностей ДНК и семействами мультикопийных генов.

1.2.2. FISH с уникальными генами из геномных библиотек и с крупными геномными клонами: космидами, ВАС , YAC.

1.2.3. Изучение мелкохромосомных растений с применением комплексных методов.

2. Характеристика льна культурного L. usitatissimum L. и его дикорастущих сородичей.

2.1. Видовой состав рода Ыпит.

2.1.1. Использование дополнительных диагностических признаков в систематике рода Linum.

2.2. Систематическое положение и классификация культурного льна Linum usitatissimum L.

2.3. Происхождение культурного льнаХ. usitatissimum.

2.4. Доместикация и применение культурного льна L. usitatissimum.

2.5. Геном L. usitatissimum.

2.5.1. Структура генома.

2.5.2. Гены рРНК в геноме льна.

2.5.2.1. 45SpPHK гены.

2.5.2.2. 5S рРНК гены.

2.6. Структура кариотипов льна культурного и дикорастущих видов.

II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1.Материалы для исследования.

2. Методы исследования.

2.1. Приготовление хромосомных препаратов.

2.1.1 Проращивание семян и предобработка корневой меристемы

2.1.2. Приготовление хромосомных препаратов для FISH.

2.1.3. Приготовление хромосомных препаратов для С-дифференциального окрашивания.

2.2. Методы окрашивания хромосом.

2.2.1. С-дифференциальное окрашивание.

2.2.2. DAPI-бэндинг.

2.2.3. Ag-NOR окрашивание ядрышкообразующих районов хромосом.

2.3. Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

2.3.1. Получение проб для FISH.

2.3.1.1. Клонирование и секвенирование ПЦР-фрагментов.

2.3.1.2. Поиск гомологичных последовательностей в компьютерных базах данных.

2.3.1.3. Мечение проб.

2.3.2. Гибридизация.

2.3.3. Детекция сайтов гибридизации.

2.4. Хромосомный анализ.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ.

1. Число и размеры хромосом видов льна секций Ыпит и Adenolinum, Stetlerolinum.

2. C/DAPI-бэидинг хромосом видов льна секций Linum и

Adenolinum, Stellerolinum.

3. Результаты исследования видов секции Linum.

3.1 .Результаты исследования видов секции Linum с 2п=30.

3.1.1. C/DAPI-бэндинг кариотипов видов секции Linum с 2п=30.

3.1.2 FISH с рибосомными генами на хромосомах видов секции Linum с 2п=30.

3.1.3.Ag NOR- окрашивание видов секции Linum с 2п=30.

3.2 Результаты исследования видов секции Linum с 2п=16.

3.2.1.C/DAPI-бэндинг кариотипов видов секции Linum с 2п=16.

3.2.2. FISH с рибосомными генами на хромосомах видов секции Linum с 2п=16.

3.2.3. Ag NOR- окрашивание видов секции Linum с 2п=16.

3.3 Результаты исследования вида секции Linum с 2п=28.

3.3.1. C/DAPI-бэндинг на хромосомах вида секции Linum с 2п=28.

3.3.2. FISH с рибосомными генами на хромосомах вида секции Linum с 2п=28.

4. Результаты исследования видов секций Adenolinum, Stellerolinum.

4.1. C/DAPI-бэндинг на хромосомах видов секций Adenolinum, Stellerolinum.

4.2. FISH с рибосомными генами на хромосомах видов секций А denolinum, Stellerolinum.

4.3. Ag NOR- окрашивание видов секций Adenolinum, Stell его l inum.

5. Сравнительный анализ кариотипов видов льна секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum.

VI. ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Хромосомные числа видов секций Lim/m, Adenolinum, Stellerolinum.

2. C/DAPI-бэндинг.

3. Сравнение трех 30-хромосомных видов секции Linum по данным C/DAPI-бэндинга и FISH с рибосомными РНК генами.

4. Сравнение двух 16-хромосомных видов секции Linum по данным

C/DAPI-бэндинга и FISH с рибосомными РНК генами.

5.Особое положение L. narbonense в секции Linum.

6. Сравнительный анализ 18-хромосомных видов секции Adenolinum по данным C/DAPI-бэндинга и FISH с рибосомными РНК генами.

7. Монотипная секция Stellerolinum.

8. Расположение на хромосомах и функциональная активность рибосомных генов у изученных видов льна.

9. Возможные пути эволюции видов секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum.

10. Эволюционные взаимоотношения 30-хромосомных видов и возможное происхождение культурного льна.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительное изучение геномов видов льна секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum рода Linum с использованием C/DAPI-бэндинга и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)"

Локализация высокоповторяющихся последовательностей ДНК и семейств мультикопийных генов (например, рРНК генов), С-дифференциальное окрашивание и флуорохромный бэндинг играют большую роль в анализе хромосомной организации геномов растений. Получение нескольких специфических структурных характеристик хромосом позволяет не только их идентифицировать в геномах и субгеномах, но и выявить хромосомные перестройки и амплификации повторяющихся последовательностей ДНК, произошедших в процессе видообразования и селекции. Высокий консерватизм в локализации рибосомных РНК генов на хромосомах открывает возможность их использования как синапоморфного признака для установления геномного родства у различных видов и их филогенетических взаимоотношений (Mukai et al., 1990; Schwarzacher et al., 1992; Schmidt, Heslop-Harrison, 1996; Vershinin et al., 1996).

Культурный вид L. usitatissimum -хорошо известная техническая культура. Этот вид доместицирован более 6000 лет назад и до сих пор не потерял своей хозяйственной ценности (Zohary, Hopf, 1988). Изо льна получают ткани, масло, лекарственные препараты. Широкое применение льна, являющегося ценнейшим сырьем для промышленности, обуславливает необходимость получения все новых высокопродуктивных и устойчивых сортов льна, что в свою очередь требует хороших знаний генетических особенностей льна культурного и его дикорастущих сородичей. Как известно, генофонд дикорастущих видов остается для возделываемых сельскохозяйственных культур основным источником генов устойчивости к различным заболеваниям и неблагоприятным условиям среды. По этой причине исследование геномов различных дикорастущих сородичей хозяйственно-ценных видов представляет особый интерес для понимания эволюции, генетики и селекции культурных видов. Наиболее простым способом, позволяющим получить ценные сведения о геномах, является исследование хромосом, что особенно актуально для возделываемого вида льна L. usitatissimum. Культурный лен обладает необыкновенно пластичным геномом. Это ярко демонстрирует возникновение наследуемых геномных различий в онтогенезе у генотрофов льна. Изучение особенностей хромосомной организации генома льна и его родственных дикорастущих видов дадут возможность для лучшего понимания их филогенеза и генетических особенностей, что, в свою очередь, откроет новые возможности для целенаправленного ведения селекционного процесса получения новых высокопродуктивных сортов. Таким образом, работа по получению такой информации сегодня является актуальной и востребованной.

Целью данной работы было сравнительное исследование хромосом по молекулярно-цитогенетическим маркерам в кариотипах культурного вида льна Limim usitatissimum L. и его дикорастущих сородичей секций Limim, Adenolinum и Stellerolinum для определения особенностей и филогенетических взаимосвязей их геномов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определение хромосомных чисел и формул кариотипа у видов секций Limim, Adenolinum, Stellerolinum с помощью метода C/DAPI-окрашивания и морфометрического анализа.

2. Идентификация хромосом по рисунку C/DAPI-бэндинга в кариотипах изученных видов, построение кариограмм и обобщенных видовых идиограмм.

3. Картирование рибосомных генов и определение их функциональной активности в кариотипах исследуемых видов секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum с помощью метода флуоресцентной гибридизации in situ и Ag-NOR-окрашивания.

4. Сравнительный анализ геномов по рисункам С/Т)АР1-бэндинга и локализации 26Э и 5Э рДНК у видов, объединяемых в одну секцию.

5. Сравнение полученных результатов исследования у видов, которые по морфолого-анатомическим признакам распределены в разные секции и подсекции с целью установления особенностей их геномов и подтверждения секционной самостоятельности.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Цитогенетнческие и молекулярные методы исследования хромосом растений.

Хромосомные (цитогенетнческие) исследования геномов растений и животных имеют длинную историю. Термин "геном" был предложен Винклером в начале XX века для обозначения гаплоидного набора хромосом с содержащимися в них генами (Winkler, 1920). Описание генома организма, начинают с исследования и описания полного набора его хромосом (кариотипа). В 20-30-е годы 20 века бурный прогресс хромосомного анализа с применением монохромного окрашивания был связан в основном с растительными объектами. Развитие сравнительной кариологии растений связано с трудами С.Г. Навашина, Агара, Сакамуры (Зощук и др., 2001).3а прошедшие 100 лет возможности хромосомного анализа резко расширились. Открытие Касперссоном Q-дифференциального окрашивания на хромосомах млекопитающих и некоторых растений стимулировало создание новых протоколов для хромосомной предобработки и окрашивания. Появились наиболее распространенные методы бэндинга: с использованием флуоресцентных красителей - квенокрена (Q-бэндинг), Hoechst 33258 (Н-бэндинг), акридинового оранжевого (АО-бэндинг) и на основе красителя Гимза -С-бэндинг, G-бэндинг (окрашивание после предобработки трипсином), N-бэндинг (окрашивание после предобработки фосфатным буфером) (Jong, 2003). G-бэндинг является наиболее значимым в цитогенетике человека и млекопитающих, тогда как С- бэндинг играет большую роль в кариотипировании растений. Технические и молекулярные инновации в биологии усовершенствовали возможности хромосомного анализа. Все эти достижения привели к развитию метода флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). В настоящее время FISH широко используется для физической локализации фрагментов ДНК внутри генома, совмещения хромосомных и генетических карт сцепления, для понимания геномной организации и изучения трехмерного пространственного распределения последовательностей ДНК в интерфазном ядре (Schwarzacher, 2003). Для характеристики геномов сейчас также успешно используют методы биохимического исследования клеточных белков, молекулярные маркеры на основе анализа рестрикционного полиморфизма (AFLP, RFLP-методы) и на основе полимеразной цепной реакции ДНК (RAPD, ISSR, ITS- методы) (Зеленин, 2003).

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Юркевич, Ольга Юрьевна

выводы.

1. Изучение кариотипов 16 видов рода Linum L. с помощью C/DAPI-бэндинга позволило впервые установить хромосомные числа у видов: L. squamulosum Rudolphi (2n = 18) и L. komarovii Juz. (2n = 18); уточнить хромосомные числа у видов: L. decumbens ( 2n = 16), L. narbonense (2n = 28), L. stelleroides (2n=18), L. pallescens (2n = 18) и подтвердить число хромосом в кариотипах у видов: L. bienne (2п = 30), L. angiistifolium (2п = 30) , L. usitatissimum (2п = 30), L. grandiflorum (2п = 16), L. austriacum (2п = 18), L. altaicwn (2n = 18), L. mesostylum (2n = 18), L. leonii (2п = 18), L. lewisii (2п = 18), L. perenne (2п = 18). Составлены формулы кариотипов и идиограммы для всех изученных видов льнов.

2. У всех изученных видов. по рисунку C/DAPI-бэндинга с учетом морфологии хромосом проведена полная идентификация хромосом в геномах, на них FISH-методом картированы 26S и 5S рДНК, выделенные с помощью ПЦР из геномной ДНК льна австрийского. Кроме того, изучена функциональная активность рибосомных генов методом AgNOR-окрашивания.

3. Исследование рисунков C/DAPI-окрашивания хромосом и локализации 26S и 5S рДНК у трех близкородственных видов L. angustifolium , L. usitatissimum и L. bienne с одинаковыми хромосомными числами 2п=30 секции Linum обнаружило сходство их кариотипов и показало автотетраплоидное происхождение не только культурного вида, но и двух других видов.

4.Сравнение результатов дифференциального окрашивания хромосом и расположения рибосомных генов обнаружило большее сходство геномов культурного льна L. usitatissimum и льна двулетнего L. bienne. Выявлена перицентрическая инверсия в хромосоме 3, захватывающая локус 5S рДНК, по которой различаются вид L. angustifolium и виды L. usitatissimum и L. bienne и которая могла возникнуть в процессе доместикации предковой формы.

5. Обнаружено высокое сходство хромосом у видов L. decumbens и L. grandiflorum (2п = 16) секции Linum по рисункам C/DAPI-бэндинга и локализации рибосомных генов, что указывает на их близкое родство. Сравнение геномов этих видов с видами L. angustifolium, L. usitatissimum, L. bienne, дало основание предположить, что, несмотря на различную плоидность, эти виды имели общий предковый геном. Полученные результаты согласуются с точкой зрения систематиков о выделении L. decumbens и L. grandiflorum по совокупности морфологических и ультраструктурных признаков в самостоятельную подсекцию секции Linum.

6. Установлено, что кариотип L. narbonense (2п=28) секции Linum отличается от кариотипов других представителей этой секции по числу, размеру и морфологии хромосом, а также по наличию двух пар спутничных хромосом. Сходство по рисункам C/DAPI-окрашивания и расположению вторичной перетяжки обеих спутничных хромосом, а также хромосом, несущих гены 5S рРНК в геноме этого вида, позволяет предположить его полиплоидное происхождение. Результаты хромосомного анализа с в и д ете л ьстуют в пользу пересмотра таксономического статуса L. narbonense и, как полагают систематики, его можно рассматривать в подсекции Nervosa секции Linum.

7. По результатам исследования близкородственных дикорастущих видов L. squamulosum , L. komarovii, L. pallescens, L. austriacum, L. altaicum, L. mesostylum, L. leonii, L.lewisii, L. perenne с 2n=18 секции Adenolinum выявлено, что их кариотипы почти не различаются по рисункам C/DAPI-бэндинга хромосом и локализации рибосомных генов. Выделенный систематиками из секции Adenolinum в монотипную секцию Stelleroliпит, вид L. stelleroides (2п=18) имел кариотип аналогичный кариотипам 18-хромосомных видов из секции Adenolinum .

8. Обнаруженные различия по хромосомной локализации сайтов рибосомных генов у видов льна с 2п=16 и 2п=30 и с 2п=18 согласуются с точкой зрения ряда систематиков об их принадлежности к разным секциям Ыпит и Ас1епоИпит соответственно. Геном 18-хромосомных видов от 16-хромосомных отличает транслокация на хромосомах 1 и 3 с точками разрывов по границам районов 1Ь 1.3 и ЗЬ 1.3 и дупликация хромосомы 8. Сравнительный анализ кариотипов видов из этих секций позволяет предполагать, что 16-, 18-и 30-хромосомные виды льна произошли от общего 16-хромосомного предка.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

При изучении кариотипов 16 видов рода Linum L. с использованием молекулярно-цитогенетических методов уточнены хромосомные числа, составлены формулы кариотипов и идиограммы для всех видов. С помощью C/DAPI-бэндинга и флуоресцентной гибридизации in situ с 26S и 5S рибосомными РНК генами впервые идентифицированы все хромосомы в кариотипах льнов с 2п = 30, 2п = 16, 2п = 28 и 2п = 18. Проведен сравнительный анализ геномов всех изученных видов льна секций Ыпит, Adenolinum, Stellerolinum. В геномах 16- и 18-хромосомных видов впервые выявлены транслокации, в геномах 30-хромосомных видов перицентрическая инверсия. Показано особое положение вида L. narbonense (2п=28) в секции Linum, кариотип которого резко отличается от кариотипов других представителей этой секции. Предложены пути эволюции видов из секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum.

Полученные результаты позволяют представить полные цитогенетические характеристики генома такого ценного сельскохозяйственного растения как лен культурный L. usitatissimum , а также геномов его близкородственных дикорастущих сородичей. Использование этих данных открывает новые возможности для обогащения генофонда культурного вида льна. Полученные результаты представляют особую ценность для генетических исследований и для ускорения селекции новых сортов культурного льна с заданными свойствами. С помощью современных методов исследования хромосом выявлены новые диагностические кариологические признаки, позволяющие уточнить таксономический статус видов рода Linum, а также представляющие новые факты для прояснения путей эволюции культурного льна.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Юркевич, Ольга Юрьевна, Москва

1. Абрамова Л.И. Определение числа хромосом и описание их морфологии в меристеме и пыльцевых зернах культурных растений // Л. Изд-во ВИР.1986.

2. Агапова Н.Д., Гриф В.Г. О хромосомной терминологии//Ботанический журнал. 1982. Т.67. №9. С.123-127

3. Акопов И. Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение // Ташкент. Медицина. 1990. 444 с.

4. Амосова A.B., Бадаев Н.С., Дьяченко Л.Ф., Оноприенко В.С, Каминир Л.Б. Площадь Ag-окрашенных ядрышкообразующих районов хромосом мягкой пшеницы коррелирует с содержанием рибосомальных генов// Докл. Акад.наук СССР, 1989. Т.305, С.453-457

5. Бадаева Е.Д., Бадаев Н.С., Созинова Л.Ф., Турбин Н.В. Метод дифференциального окрашивания для создания «хромосомного паспорта» хлебных злаков //Сельскохозяйственная биология. 1989. № 1.С.68-72

6. Босток К., Самнер Э. Хромосома эукариотической клетки // Мир.1981.С.592

7. Брач Н. Б. Внутривидовое разнообразие льна (L. usitatissimum L.) и его использование в генетических исследованиях и селекции //Автореф. дис. докт. биол. наук. СПб. 2007. 38 с.

8. Вавилов Н.И. Центры происхождения культурных растений// (1926). Тр. по прикл. бот, генет, селек. Т. 16 . №2. С. 42-54

9. Григорьева В. В. Морфология пыльцевых зерен рода Linum (Linaceae) флоры СССР// Бот. журн. 1988. Т. 73. № Ю. С. 1409 1417.

10. Ю.Губанов И. А., Крылов И. Л., Тихонова В. Л. Дикорастущие полезные растения СССР// М.: Мысль. 1976. 360 с.

11. П.Егорова Т. В. Сем. Linaceae DC. ex S. F. Gray — льновые // Флора Восточной Европы. СПб. 1996. Т. 9. С. 346 361.

12. Зеленин A.B. Геном растений // Вестник Российской Академии наук. 2003. Т.73. №9. С. 797-80613.3ощук Н.В., Бадаева Е.Д., Зеленин A.B. История хромосомного анализа // Биол Мембр. 2001. Т. 18. №3. С. 164-172

13. Ким Е.С., Пунина Е. О., Родионов A.B. CPD/(PI/DAPI)- и CMA/DAPI-дифференциальная исчерченность хромосом Allium сера L // Генетика. 2002. Т.38. №4. С.489-496

14. Кутузова С.Н., Гаврилюк И.П., Эгги Э.Э. Перспективы использования белковых маркеров в уточнении систематики и эволюции рода Linum // Труды по ботанике, генетике и селекции . 1999. Т. 156. С. 29-39

15. Куцик Р. В., Зузук Б. М. Лен культурный (син. лен посевной) Linum usitatissimum L.Аналитический обзор // Провизор.2006. №3. С.5-10

16. Лемеш В.А., Малышев C.B., Хотылева Л.В. Использование молекулярных маркеров для изучения генетического разнообразия льна // ДИАН Беларуси. 1999. Т.43. N 3. С. 70-72

17. Лемеш В. А., Малышев C.B., Грушецкая З.Е., Хотылева Л.В. Применение RAPD-анализа для определения таксономического статуса диких сородичей культурного льна // ДНАН Беларуси. 2001. Т.45. № 3. С. 88-90

18. МарценицинаК.К. Хромозомы некоторых видов рода Limmi L.// Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1927. Т. 17. вып. 3. С. 253-262

19. Могилевская Л.А, Сорока А.И., Лях В.А. Условия культивирования изолированных неоплодотворенных семяпочек льна масличного для получения гаплоидных растений //В i с ник Запор1зького державного ушверситету. 2002. №3. С. 1-5

20. Мороз О.М., Цимбалюк З.М. Палиноморфологическая характеристика представителей секций Adenolinum (Reichenb.) Juz., Dasylinum (Planch.) Juz., Linopsis (Reichenb.) Engelm. рода Linum L. флоры Украины // Укр. ботан. журн. 2005а. Т. 62. № 5. С. 666 678

21. Мороз О.М., Цимбалюк З.М. Палиноморфологическая характеристика представителей секций Syllinum Griseb., Linum, Cathartolinum (Reichenb.) Griseb. рода Linum L. флоры Украины // Укр. ботан. журн. — 20056. Т.62. № 6. С. 821 -832

22. Муравенко О.В., Бадаев Н.С., Бадаева Е.Д., Пухальский В.А., Зеленин A.B., 1986. Идентификация хромосом ячменя в соответствии с генетической номенклатурой хромосом пшеницы //Докл. Акад. Наук СССР. Т. 288. №3. С. 724-727

23. Муравенко О.В., Саматадзе Т.Е., Зеленин A.B. Компьютерный и визуальный анализ рисунка G-подобного бэндинга хромосом ромашки аптечной // Биологические мембраны. 1998. Т. 15. N 6. С. 670-678

24. Попов К.В., Муравенко О.В., Саматадзе Т.Е. и др. Особенности изучения гетерохроматических районов в мелких хромосомах растений // Докл. РАН. 2001.Т.381. №4. С.562-565

25. Пробатова Н.С. Сем. льновые Linaceae S.F.Gray // Под ред. Харкевич С.С. Сосудистые растения Советского Дальнего Востока. Л., 1988. Т. З.С. 133-136

26. Рогаш А.Р. Льноводство// Москва. Колос. 1967. 583 С.

27. Родионов A.B., Пунина Е.О., Чуиов B.C. Эволюция блочной организации хромосом растений// Биол Мембр. 2001. Т.18. №3. С. 240248

28. Савченко Е.К., Бадаева Е.Д., Бойко Е.В., Бадаев Н.С., Кунах В.А., Моргун В.В., Зеленин A.B. Кариотипический анализ различных генотипов кукурузы // Генетика. 1986. Т. 22. № 1. С. 95-101

29. Саматадзе Т.Е., Муравенко О.В., Зеленин A.B., Гостимский С.А. Идентификация хромосом reHOMá гороха (Pisum sativum L.) по рисунку С-окраски // Доклады Академии Наук. 2002. Т. 387. С. 714 717

30. Саматадзе Т.Е., Муравенко О.В., Зеленин A.B. Сравнение С-окрашенных хромосом в кариотипах трех видов рода Matricaria L. // Генетика. 1998. Т. 34. № 12. С. 1720-1724

31. Светлова A.A. Систематика видов секции Adenolinum рода Linum (Linaceae) флоры Восточной Европы// Бот. журнал. 2005а. Т. 90. № 7 . С.1076-1087

32. Светлова A.A. Таксономический обзор видов секции Adenolinum (Reichenb.) Juz. рода Linum L. (Linaceae) флоры Северной Евразии II Новости систематики высших растений. СПб. 20056. Т. 37. С. 112 — 133.

33. Светлова A.A., Яковлева О.В. Сравнительная анатомия семенной кожуры видов некоторых секций рода Linum (Linaceae)!! Бот.журн. 2006. Т. 91. №12. С.1868-1875

34. Светлова А. А. Род Linum L. (Linaceae DC. ex Perleb) во флоре Северной Евразии: систематика, география, эволюция// Автореф. дис. . канд.биол. наук. СПб. 2007. 26 с.

35. Светлова А. А. Ультраскульптура семян и анатомическое строение семенной кожуры видов секций Steller olinum, Linum, Heleolinum, Linopsis и Cathartolinum рода Linum (Linaceae) // Бот. журн. 2008. Т. 93. №8. С. 1076-1081.

36. Сизов И.А. Лен//Москва. 1955.С. 106-111

37. Ченцов Ю.С. Введение в клеточную биологию// Москва. Академкнига. 2004. 493 с.

38. Черноморская Н.М., Станкевич А.К. К вопросу о внутривидовой классификации льна обыкновенного (Linum usitatissimum L) // Сборник трудов по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1987. Т. 113. С. 53-63

39. Юзепчук С. В. Сем. Льновые Linaceae Dumort // Флора СССР. М.; Л., 1949. Т. 14. С. 84-146.

40. Agarwal M.L., Aldrich J., Agarwal A., Cullis C.A. The flax ribosomal RNA-encoding genes are arranged in tandem at a single locus interspersed by 'non-rDNA' sequences // Gene. 1992. V.120. N.2. P.151-156

41. Alefeld F. Ueber Adenolinum Rchb// Bot. Zeit. 1867. Bd.25. P. 249 255

42. Alkhimova AG, Heslop-Harrison JS, Shchapova AI, Vershinin AV. Rye chromosome variability in wheat-rye addition and substitution lines //Chrom Res. 1999. V.7.N.3.P.205-12.

43. Badaeva E.D., Friebe B. , Gill B.S. Genome differentiation in Aegilops. 1. Distribution of highly repetitive DNA sequences on chromosomes of diploid species// Genome. 1996. V.29.P. 293-306

44. Bauchan G.R., Hossain M.A. Constitutive heterochromatin DNA polymorphisms in diploid Medicago sativa ssp. Falcate // Genome. 1999.V.42.P. 930-935

45. Belkhiri A., Buchko, J. and Klassen G.R. The 5S ribosomal RNA gene in Pythium species: two different genomic locations//Mol. Biol. Evol. 1992.V.9 P. 1089-1102

46. Bennett M. D. Plant genome values: How much do we know? // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1998.V. 95. P. 2011-2016

47. Cai Q, Lu S, Chinnappa CC. Analisis of kariotypes and Giemsa C-banding patterns in eight species of Arachis// Genome. 1987. V.29.P. 187-194

48. Carvalho R. De, Guerra M. Cytogenetics of Manihot esculenta Crantz (cassava) and eight related species// Hereditas. 2002. V.136. P. 159-168

49. Caspersson T., Farber S., Foley G., Kudynowski J., Modest E.J., Simonsson E., Wagh U., Zech L. Chemical differentiation along metaphase chromosomes//Experimental Cell Research. 1968. V.49.P.219-222

50. Cerbah M., Coulaud J., Siljak-Yakovlev S. rDNA organization and evolutionary relationships in the genus Hypochaeris (Asteraceae)!7 The Journal of Heredity. 1998. V.89.N.4. 312-318.

51. Chen R., An Z., Song W., Li X., Su J. A preliminary study on the G-bands of chromosomes in some plants// J. Wuham Bot. Res. 1986. V. 4. P. 111-118

52. Cheng B.F., Heneen W.K.Satellited Chromosomes, Nucleolus Organizer Regions and Nucleoli of Brassica campestris L., B. nigra{L.) Koch, and Sinapis arvensis L. // Hereditas. 1995. V.122.N.2. P. 113-118

53. Cheng Z., Buell C. R., Wing R. A., Gu M., Jiang J. Toward a cytological characterization of the rice genome// Genome Res. 200 I.V. 11.P. 2133-2141

54. Chennaveeraiah M.S., Joshi K.K .Karyotypes in cultivated and wild species oiLinum// Cytologia. 1983. V. 48. P. 833-841

55. Corner lio M. T. M. N., Figueiroa A. R. S., Santos K. G. B., Carvalho R., Soares Filho W. S., Guerra M. Chromosomal relationships among cultivars of Citrus reticulate Blanco, its hybrids and related species// Plant Syst. Evol. 2003. V. 240. P. 149-161

56. Costal J. Y., Forni-Martins E. R., Vanzela A. L. L. Karyotype characterization of five Brazilian species of Echinodorus (Alismataceae) with chromosomal banding and 45S rDNA FISHtl PI. Syst. Evol. 2006. V.257. P. 119-127

57. Cullis C.A. DNA sequence organization in the flax genome // Biochim Biophys Acta. 1981. V.652. N.l. P.l-15.

58. Cullis C.A., Cleary W. Rapidly varying DNA sequences in flax// Canadian Journal of Genetics and Cytology. 1986. V.28. P. 252-259

59. Cullis C.A., Swami S., Song Y. RAPD polymorphisms detected among the flax genotrophs// Plant Mol Biol. 1999. V. 41. P. 795-800

60. Cullis C.A. Mechanisms and control of rapid genomic changes in flax// Annals of Botany. 2005. V.95. P.201-206.

61. Dagne K. Karyotypes, C-banding and nueleolar numbers in Guizotia (Compositae)// P1. Syst. Evol. 1995. V. 195.P. 121-135

62. Dagne K., Cheng B., Heneen W.K. Number and sites of rDNA loci of Guizotia abyssinica (L.f.) Cass, as determined by fluorescence in situ hybridization// Hereditas. 2000. V.132. P.63-65

63. Dhar M. K., Kaul S., Friebe B., Gill B. S. Chromosome identification in Plantago ovata Forsk. through C-banding and FISH// Current science. 2002. V. 83. N. 2. P. 150-152

64. Diederichsen A, Hammer K. Variation of cultivated flax (Linum usitatissimum L. subsp. usitatissimum) and its wild progenitor pale flax (subsp. angustifolium (Huds.) Thell.)// Gen Res Crop Evol. 1995. V. 42. P.263-272

65. Diederichsen A. Ex situ collections of cultivated flax (Linum usitatissimum L.) and other species of the genus Linum L// Genet Resour Crop Evol. 2007. V. 54. P.661-678

66. Dematteis M., Fernandez A. Chromosome studies on nine South American species of Vernonia (Vernonieae, Asteraceae) // Caryologia. 2000.V.53, N. 11. P. 55-61

67. Desel C., Jung C., Cai D., Kleine M., Schmidt T. High-resolution mapping of YACs and the single-copy gene Hslpro-1 on Beta vulgaris chromosomes by multi-colour fluorescence in situ hybridization// Plant Molecular Biology, 2001. V.45.P.113-122

68. Dong F., Song J., Naess S.K., Helgeson J.P., Gebhardt C., Jiang J. Development and applications of a set of chromosome-specific cytogenetic DNA markers in potato// Theor Appl Genet. 2000. V. 101. P. 1001-1007

69. Dong J., Kharb P., Cervera M., Hall T.C. The. use of FISH in chromosomal localization of transgenes in rice// Methods in Cell Science. 2001. V. 23. P. 105-113

70. Dubey D.K., Kumar S. Cross-relationship between two Linum species bearing different basic chromosome numbers// Indian J Agric Soi. 1973. V. 43. N.l. P. 18-20

71. Evans G.M., Durrant A., Rees H. Associated nuclear changes in the induction of flax genotrophs// Nature .1966. V.212. P.697-699

72. Felix L. P. and Guerra M. Basic chromosome numbers of terrestrial orchids// PI. Syst. Evol. 2005. V.254. P. 131-148

73. Fu Y.B. , Peterson G., Diederichsen A. et al .RAPD analysis of genetic relationships of seven flax species in the genus Linum L.// Gen Res Crop Evol.2002. V. 49. P.253-259

74. Gall J.G., Pardue M.L. Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations// Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 1969. V. 63.P. 378-383

75. Garrido M. A., Jamilena M., Lozano R., RuizRejon C. ,RuizRejon M., Parker J. S. rDNA site number polymorphism and NOR inactivation in natural populations of Allium schoenoprasum II Genetica. 1994. V. 94. N. 1. P. 67-71

76. Gerlach W.L., Bedbrook J.R. Cloning and characterization of ribosomal RNA genes from wheat and barley //Nucleic Acids Res. 1979. V.7. P. 18691885

77. Gerlach W.L., Dyer T.A. Sequence organization of the nucleus of wheat wich contain 5S rRNA genes // Nucleic Acids Res. 1980. V.8. P.4851-4865

78. Gill K.S., Yermanos D.M. Cytogenetic studies on the genus Linum I. Hybrids among taxa with 15 as the haploid chromosome number // Crop science, 1967a. V.7. P.623-627

79. Gill K. S. and Yermanos D. M. Cytogenetic Studies on the Genus Linum II. Hybrids Among Taxa With Nine as the Haploid Chromosome Number//Crop Sci. 19676. V. 7.P. 627-631.

80. Gitai J., Horres R., Benko-Iseppon A. M. Chromosomal features and evolution of Bromeliaceaell PI. Syst. Evol. 2005. V. 253.P. 65-80

81. Goldsbrough P.B, Cullis C.A. Characterisation of the genes for ribosomal RNA in flax//Nucleic Acids Res. 1981. V.9. N.6. P.1301-1309.

82. Goldsbrough P.B., Ellis T.H., Cullis C.A. Organisation of the 5S RNA genes in flax//Nucleic Acids Res. 1981. V.9. N.22. P.5895-5904

83. Goldsbrough P.B, Ellis T.H., Lomonossoff G.P. Sequence variation and methylation of the flax 5S RNA genes // Nucleic Acids Res. 1982. V.10. N.15. P.4501-4514

84. Goodpasture C., Bloom S.E. Visualization of nucleolar organizer regions in mammalian chromosomes using silver stalling// Chromosoma. 1975. V.53.P.37-50

85. Guerra M.Patterns of heterochromatin distribution in plant chromosomes// Genetics and Molecular Biology 2000.V. 23. №4. P. 1029-1041

86. Hajdera D., Siwinska R., Hasterok J. et al .Molecular cytogenetic analysis of genome structure in Lupimis angustifolius and Lupinus cosentiniill Theor Appl Genet .2003. V. 107. P.988-996

87. Harris B.D. Chromosome numbers and evolution in North American species of Limun //J. Bot. 1968. V.55. P. 1197-1204

88. Hasterok R., Jenkins G., Langdon T., Jones R.N., Maluszynska J. Ribosomal DNA is an effective marker of Brassica chromosomes// Theor Appl Genet. 2001. V. 103.P.486-490

89. Heslop-Harrison J.S. Comparative Genome Organization in Plants: From Sequence and Markers to Chromatin and chromosomes// The Plant Cell. 2000. V. 12.P. 617-635

90. Howell W.M., Denton T.E., Diamond J.K. Differential staining of the satellite region of human acrocentric chromosomes/ZExperientia, 1975. V. 31. P. 260-262

91. Howell E.C., Barker G.C.,Jones G.H., Kearsey M.J., King G.J., Kop E.P., Ryder C.D., Teakle G.R., Vicente J.G., Armstrong S.J. Integration of the cytogenetic and genetic linkage maps of Brassica oleracealIGqnetics. 2002. V.161. N.3. P.1225-34 ,

92. Hubbell M. R. Silver staining as an indicator of active ribosomal genes// Stain Tech. 1985. V. 60.P. 285-294

93. Irifune K., Hirai K., Zheng J., Tanaka R., Morikawa H. Nucleotide sequence of a highly repeated DNA sequence and its chromosomal localization in Allium fistulosumll Theor Appl Genet .1995. V. 90. P.312-316

94. John H., Bimsteil M.L., Jones K.W. RNA-DNA hybrids at cytological levels//Nature, 1969. V. 223.P. 582-587

95. Jong H. Visualizing DNA domains and sequences by microscopy: a fifty-year history of molecular cytogenetics //Genome.2003. V. 46. P. 943-946

96. Jordan E .G. Nucleolar nomenclature. J Cell Sci .1984. V.67.P.217-220

97. Kakeda K., Yamagata H., Fukui K., Ohno M., Fukui K., Wei Z.Z., Zhu E.S. High resolution bands in maize chromosomes by G-banding methods // Theor Appl Genet. 1990. V. 80. P.265-272

98. Kellogg E.A., Bennetzen J. L. The evolution of nuclear genome structure in seed plants //Am. J. Bot. 2004. V.91. N.10. P. 1709-1725

99. Kim J., Klein P. E, Klein R. R., Price H. J., Mullet J. E., Stelly D. M. Chromosome identification and nomenclature of Sorghum bicolorll Genetics. 2005. V. 169. P. 1169-1173

100. Kitamura S., Inoue M., Shikazono N., Tanaka A. Relationships among Nicotiana species revealed by the 5S rDNA spacer sequence and fluorescence in situ hybridization// Theor Appl Genet.2001. V. 103. P.678-686

101. Koo D.H., Hur Y., Jin D.C. et al .Karyotype analysis of a korean cucumber cultivar (Cucumis sativus L. cv. Winter Long) using C-bandingand bicolor fluorescence in situ hybridization// Mol. Cells. 2002. V. 13. N.3. P.413-418

102. Kubis S., Schmidt T., Heslop-Harrison J.S. Repetitive DNA elements as a major component of plant genomes//Ann Bot. 1998. V.82 (Suppl. A). P. 4555

103. Lacadena J.R., Cermeno M.C., Orellana J., Santos J.L. Evidence for wheat-rye nuclejlar competition (amphiplasty) in triticale by silver-staining procedure// Theor. Appl.Genet. 1984. V.67. P. 201-213

104. Lay C.L., Dybing C.D. Linseed. In: Robbelen G et al (ed) Oil crops of the world// McGraw-Hill, New York. 1989. P. 416-430

105. Leitch I J. and Heslop-Harrison J.S. Physical mapping of the 18S-5.8S-26S rRNA genes in barley by in situ Hybridization// Genome. 1992. V. 35.P. 1013-1018

106. Lewis W.H. A hexaploid Linum (Lineceaceae) from eastern Ethiopia// Sida. 1964. V. l.P.383-384

107. Jing Yu Liu, Chao Wen She, Zhong Li Hu, Zhi Yong Xiong, Li Hua Liu, Yun Chun Song. A new chromosome fluorescence banding technique combining DAPI staining with image analysis in plants// Chromosoma. 2004. V.l 13. P.16-21

108. Maggini F.T., Cremonini R., Zolfino C. et al. Structure and chromosome localization of DNA sequences related to ribosomal subrepeats in Vicia faba II Chromosoma. 1991. V.l00. P. 229-234

109. Maluszynska J., Heslop-Harrison J.S .Physical mapping of rDNA loci in Brassica species// Genome. 1993. V. 36. P.774-781

110. Mansby E.O., Diaz R von Bothmer Preliminary study of genetic diversity in Swedish flax (L. usitatissimum)ll Gen Res Crop Evol.2000. V. 47.P. 417424

111. Medina F.J, Cerdido A., Fernandez-Gomez A. Components of the nucleolar processing complex (pre-rRNA, fibrillarin, and nucleolin)colocalize during mitosis and are incorporated to daughter nuclei// Exp Cell Res. 1995. V. 221. P.l 11-125

112. De Melo N. F., Cervi A. C., Guerra M. Karyology and cytotaxonomy of the genus Passiflora L. (Passifloraceae)/! PI. Syst. Evol. 2001. V. 226. N. 1-2. P.69-84

113. Miller D.A., Dev V.G., Tantravahi R., Miller O.J. Supression of human nucleolus organizer activity in mouse-human somatic hybrid cells// Exp.Cell Res. 1976. V.101. P.235-243

114. Moscone E.A., Lambrou M. and Ehrendorfer F. Fluorescent chromosome banding in cultivated species of Capsicum {Solanaceae)/f.Plant Syst. Evol. 1996. V. 202. P. 37-63

115. Moscone E.A., Klein F., Lambrou M., Fuchs J., Schweizer D. Quantitative karyotyping and dual-color FISH mapping of 5S and 18S-25S rDNA probes in the cultivated Phaseolus species (Leguminosae)// Genome. 1999. V.42. J5. 1224-1233

116. Mosquin T. Biosystematic studies in the North American species of Limim section Adenolinum (Linaceae) I I Can. Journ. Bot. 1971. V. 49. P. 1379- 1388

117. Mukai Y., Endo T.R. and Gill B.S. Physical mapping of the 5S rRNA multigene family in common wheat// J. Hered. 1990. V. 81.P. 290-295

118. Mukai Y., Endo T.R., Gill B.S. Physical mapping of the 18 S-26 S rRNA multigene family in common wheat: identification of a new locus// Chromosoma. 1991. V. 100. P.71-78

119. Murata M., Heslop-Harrison J.S., Motoyoshi F. Physical mapping of the 5S ribosomal RNA genes in Arabidopsis thaliana by multi-color fluorescence in situ hybridization with cosmid clones// The Plant Journal. 1997. V. 12. N.l. P. 31-37

120. Muravenko O.V., Amosova A.V., Samatadze T.E. et al. 9-Aminoacridine: An efficient reagent to improve human and plant chromosome banding patterns and to standardize chromosome image analysis// Cytometry. 2003. V. 51. N.l. P. 52-57

121. Nakamura R., Kitamura S., Inoue M., Ohmido N., Fukui K. Karyotype analysis of Nicotiana kawakamii Y. Ohashi using DAPI banding and rDNA FISH//Theor Appl Genet. 2001. V. 102. P.810-814

122. Ockendon D. J., Walters S. M. Linum L// Flora Europaea. Cambridge, 1968. V. 2. P. 206-211.

123. Oh T.J., Gorman M., Cullis C.A. RFLP and RAPD mapping in flax (Linum usitatissimum)// Theor Appl Genet.2000. V. 101. P.590—593

124. Oh T.J., Cullis C.A. Labile DNA sequences in flax identified by combined sample representational difference analysis (csRDA)// Plant Mol Biol. 2003. Jun. V.52. N.3. P.527-536.

125. Ohmido N., Akiyama Y., Fukui K. Physical mapping of unique nucleotide sequences on identified rice chromosomes// Plant Mol Biol. 1998. V.38.P. 1043-1052

126. Olin-Fatih M. A new method for differential staining of Brassica metaphase chromosomes, and karyotypes of B. campestris, B. oleracea and B. napusll Hereditas .1994. V.120.P. 253-259

127. Olin-Fatih M., Heneen W.K. C-banded karyotypes of Brassica campestris, B. oleraceae, andB. napusll Genome. 1992. V. 35. P. 583-589

128. Pardue M.L., Gall J.G. Chromosomal localization of mouse satellite DNA// Science. 1970. V.168.P. 1356-1358.

129. Pearce S.R., Harrison G., Heslop-Harrison J.S., Flavell A.,Kumar A. The Tyl-copia group retrotransposons in Vicia faba species: copy number, sequence heterogeneity and chromosomal localization// Mol Gen Genet. 1996. V. 250. P.305-315

130. Pedrosa A., Schweizer D., Guerra M. Cytological heterozygosity and the hybrid origin of sweet orange (Citrus sinensis (L.) Osbeck)// Theor Appl Genet.2000. V. 100. P.361-367

131. Pedrosa A., Sandal Niels, Stougaard Jens, Schweizer Dieter, Bachmair Andreas. Chromosomal map of the model legume Lotus japonicas// Genetics. 2002. V. 161. P. 1661-1672

132. Daniel G.Peterson, Nora L.V.Lapitan and Stephen M.Stack. Localization of single- and low copy sequences on tomato synaptonemal complex spreads using fluorescence in situ hybridization (FISH)//Genetics. 1999. V. 152. P.427^139

133. Petrova A.V. IOPB chromosome number report XXXV 11 Taxon. 1973. V.21.P. 164

134. Pierozzi N.I., Pinto-Maglio C.A.F., Cruz N.D. Characterization of somatic chromosomes of two diploid species of Coffea L. with acetic orcein and C-band techniques//Caiyologia. 1999.V.52.N.1-2. P. 1-8

135. Pierozzi N.I., Galgaro M.L., Lopes C.L. Application of C-banding in two Arachis wild species, Arachis pintoi Krapov. and A.villosulicarpa Hoehne to mitotic chromosome analyses// Caryologia. 2001. V. 54. N.4. P.377-384

136. Planchon J. E. Sur le famille des Linees // London J. Bot. 1847. V. 6. P. 588-603.

137. Ray C. Cytological studies on the flax genus (Linum)// Amer J Bot. 1944. V. 31. P.241-248

138. Reeder R.H. Mechanisms of nucleolar dominance in animals and plants// J Cell Biol. 1985. V. 101. P.2013-2016

139. Rogers C.M. Linaceae, North American Flora, 1984.ser.2. V.12. P.l-58

140. Rogers S.O, Bendich A.J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues// Plant Mol Biol. 1985. V. 5. P.69-76

141. Roose-Amsaleg, C., Cariou-Pham, E. Vautrin, D., Tavernier R., Solignac, M. Polymorphic microsatellite loci in Linum usitatissimum //Molecular Ecology Notes. 2006. V. 63. P. 796-799

142. Roussel P., Andre C., Comai L., Hernandez-Verdun D. The rDNA transcription machinery is assembled during mitosis in active and absent in inactive NORs// J Cell Biol. 1996. V. 133. P.235-246

143. Schlarbaum S.E., Small E., Johnson L.B. Karyotypic evolution, morphological variability and phylogeny in Medicago sect. IntertextaelI PI. Syst.Evol. 1984. V. 145. P.203-222

144. Schneeberger R.G., Creissen G.P., Cullis C.A. Chromosomal and molecular analysis of 5S RNA gene organization in the flax Linum usitatissimum // Gene. 1989. V.83. N.l. P.75-84

145. Schneeberger R.G., Cullis C.A. Specific DNA alterations associated with the environmental induction of heritable changes in flax// Genetics. 1991. V.128. N.3. P.619-630

146. Schräder O., Ahne R., Jo Erg Fuchs , Schubert Ingo. Karyotype analysis of Helianthus annuus using Giemsa banding and fluorescence in situ hybridization// Chromosome Research. 1997. V. 5. P. 451-456

147. Schräder O., Budahn H., Ahne R. Detection of 5S and 25S rRNA genes in Sinapis alba, Raphanus sativus and Brassica napus by double fluorescence in situ hybridization// Theor Appl Genet. 2000. V. 100. P.665-669

148. I. Schubert R. Rieger. G and/or C-bands in plant chromosomes?//J Cell Sei. 1984. V. 71. P.ll 1-120

149. I. Schubert, U. Wobus In situ hybridization confirms jumping nucleolus organizing regions in Allium // Chromosoma. 1985. V.92. N.2. P. 143-148

150. Schwarzacher T. DNA, chromosomes, and in situ hybridization// Genome. 2003. V.46.P. 953-962

151. Scweizer D. Fluorescent chromosome banding in plants; applications, mechanisms, and implications for chromosome structure. In: Davids DR, Hopwood DA The Plant Genome// The John Innes Institute. Norwich, UK. 1980. P. 61-71

152. Seetharam A. Interspecific hybridization in Linum 11 Euphytica. 1972. V.21. P.489-495

153. Song Y. C., Liu L. H., Ding Y., Tian X. B., Yao Q., Meng L., He C. R., Xu M. S. Comparisons of G-banding patterns in six species of the Poaceae II Hereditas.1994. V. 121.N.1.P. 31-38

154. Srivastava A.K. , Schlessinger D. Structure and organization of ribosomal DNA// Biochimie. 1991. V.73. P.631-638

155. Staginnus C., Winter P., Desel C., Schmidt T., Kahl G. Molecular structure and chromosomal localization of major repetitive DNA families in the chickpea (Cicer arietinum L.) genome// Plant Molecular Biology. 1999. V.39. P. 1037-1050

156. Urdampilleta J. D., Ferrucci M. S., Torezan J. M. D., Vanzela A. L. L. Karyotype relationships among four South American species of Urvillea (Sapindaceae: aullinieae)// PI. Syst. Evol. 2006. V.258. P. 85-95

157. Valarik M., Simkova H., Hribova E., J. S afar , M. Dolez elova, J. Dolezel Isolation, characterization and chromosome localization of repetitive DNA sequences in bananas (Musa spp.)// Chromosome Research. 2002. V.10. P. 89-100

158. Vanzela A.L., Ruas C.F., Oliveira M.F. et al .Characterization of diploid, tetraploid and hexaploid Helianthus species by chromosome banding and FISH with 45S rDNA probe// Genetica .2002. V. 114. P. 105-111

159. Viccini L. F., P. M. O. Pierre, M. M. Praca, D. C. Souza da Costal, E. da Costa Romanel, S. M. de Sousa, P. H. Pereira Peixoto, and F. R. Goncalves Salimena.Chromosome numbers in the genus Lippia (Verbenaceae)/'/ PL Syst. Evol. 2006. V.256. P. 171-178

160. Velasco L., Goffman F.D. Tocopherol, plastochromanol and fatty acid patterns in the genus LinumH Plant Syst Evol .2000. V. 221. P.77-88

161. Vershinin A.V., Alkhimova E.G., Heslop-Harrison J.S. Molecular diversification of tandemly organized DNA sequences and heterochromatic chromosome regions in some Triticeae species// Chrom Res. 1996. V.4. P.

162. Vromans J. Molecular genetic studies in flax (Linum usitatissimum L.) // PhD thesis. Wageningen University. The Netherlands. 2006

163. Wang H.C., Kao K.N. G-banding in plant chromosomes// Genome. 1988. V. 30. P. 48-51

164. Winkler H. Verbreitung und Versache der Parthenegenesis im Pflanzen-und Tierre// Jena. 1920

165. Wetschnig W. Giemsa C-banded karyotypes of Allium ericetorum and A. kermesinum (Alliaceae)/'/ Plant Systematics and Evolution. 1995.V. 195. N. 1-2. P. 45-59

166. Xu J., Earle E.D .High resolution physical mapping of 45S (5.8S, 18S and 25S) rDNA gene loci in the tomato genome using a combination of karyotyping and FISH of pachytene chromosomes// Chromosoma. 1996. V.104. N.8. P.545 550

167. Zohary D., Hopf M. Domestication of plants in the Old Word// Oxford Science Publications. Clarendon Press, Oxford. 1988

168. Zoldos V., Papes D., Cerbah M. et al. Molecular-cytogenetic studies of ribosomal genes and heterochromatin reveal conserved genome organization among 11 Ouercus species// Theor Appl Genet. 1999. V. 99. P.969-977

Информация о работе

Юркевич, Ольга Юрьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.03

Диссертация

Сравнительное изучение геномов видов льна секций Linum, Adenolinum, Stellerolinum рода Linum с использованием C/DAPI-бэндинга и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы