Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительное изучение действия этаноламина и ацетилэтаноламина на некоторые стороны азотистого обмена в органах животных

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительное изучение действия этаноламина и ацетилэтаноламина на некоторые стороны азотистого обмена в органах животных"

<ZS-U3

- Ч -

ыншгтн>стю сньсрсго хозяйств! ссср ерюшский 300гшничбсю - ШГШШЦШЙ ивстягг

Ва арлтх давлен ЮКШШ Buna ДяпрАВЖКоап

сшштшвок взгчш1в дшстнн эгшшыш я (а- дцвпнэхшшинаш. нвняоив сготош дзо-. тистого ошни в оепшах гавотшх

Онщахшое» » 03.00.0t - бшпивк

АВТОРЕФЕРАТ

джосертвцжм ш оояокакке учета стене dwitnmoBDC шух

ВРЕЕАН - 1975

министжггбо сыьсюго хозяйства ссср бгавшяий зоотевйичвсю - ебткринаршй шня'шт

Напрааах рукопжсм ЙОТОШН Ввзгвя Авдранжхгагс

срашстнгшов кзпш1е .Шагая тношина. и сД- щяяктпахшш на нкютогав сторош азотистого ов(ш в органах швотш!

Спвцщажьностъ Л 03.00.04 - биохимии

автореферат

диссертация ш ооиоканшв ученой степе бшиогичесетх вазгк

• v ■ '/.. i .. ,. I ^ i ' >' i

WBBAH - 1975

Работа выполнена б отделе биогвнкнг аминов проблемной да борат орт биохимия щи кафедре биохимии я ортвячасшй химии Ереванского зоотехвичесюо-ветвриваряого института.

Научные руководителя: доктор биологических наук,профессор ( . -- ГАСПЛРЯН М.Г.

- . кандидат биологических наук, старший научн.сотрудник КЙМАЛЯН Р.Г.

Официальные оппоненты; - > ■

1. Доктор биологических наук ЛПНШШ Г.В. г

2. Кандидат биологических наук ЩРСЛДШШ Т.К.

Ведущее предприятие: Ереване гай Государственный Университет. ^

Автореферат разослан т$,0* №_ 1975 гола.

Зашита диссертации состоится К 1975 г.

в 13 ч.ЗО нов на заседании ученого совета Ереванского зоотех-ничесло—ветеринарного института»

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (ул.ННрова, 15).

Отзывы на автореферат ( в 2-х экз.) просьба направить по адресу: 375000, Ереван, 25, ул. Налбанддна, 128, Зоовет : институт, ученоиу секретарю совета.

УчеаыЙ;секретарь совета, кандидат <шоя.наух

и.МЛяргиянц

"ошя ХАРАКТЕРИСТИКА. РАВУШ

Актуальность проблемы. Структура и сруиздии шиш: систем дерашвагтся постоянно протека штыи, процессами ¿взоко-хши -ческой прореди; осуществляемыми различным способом организовавшими белковыми отру ну рами, чаще всего кошшексированныки ■• о другими органическими пешмерами.

. , - Ферментативные процесса, осзтесгвляемые белковыми комплексами, лежат в основе жизнедеятельности организмов и строго контролируются взаиносвязанндаи системами регуляции. Першч -. вой ролы? двух важнейших полимеров, белков и нукдеаношх юк>-дот, объясняется естественный интерес исследователей к изучения их структура и ^унииЗ, опредедшшш разительные достижения биологии за последние десятилетия, . ^ "' Фунгазии белков в организме чрезвычайно многообразна /структурная, каталитическая, механохимическая, защитная, • транспортная и др./ и осуществление их связано о во влечением многочисленных низкомолецулярти соадиненяа /субстратов, кофакторов , горюнов, медиаторов г др./, поштапцих либо нови- ' жавдих активность тех ила других макромолекул, в 'частности, , белков. Входящие в состав белков и других нативных вддиме -ров низиомоле^лярш« соедапешот, обладая тш иди иной стелены) сродства к ним, могут периодически вюютатъ либо выключать их функции, т.е. контролировать шсактивность.Следовательно, в координированной интеграция процессов жизне -деятельности низвэмодекулярнш соединениям /со крайней мере многим из них/ ^принадлежит не меньшая роль, чеысашм ыакроыо-деяуяам^ в частности, белкам.

К таким низяомоде^лярнна биологически активным соединениям относятся многие аминокислоты, их производные - био: генные амины, азотистые основана* лшпддов, ряд жирных кислот и др. ■ " ' ' ' " '

Являясь продуктами ферментапшпгх превращения етп соединения вкдшаотся в осуществление многообразных функция и всех ■ без исюшченнг метаболических циклов организма.

В настоящее время большое внимание уделяется изыскании эвдогенных веществ, гатенси$ициружщих обменнне процесса и важнейшие жизненные <£уняща в дозах, не оказмвапшх токси -ческого воздеЗствия на организм. К тагам соединениям отно -

сится я г та вола иен, роль которого в метаболизме н функциях клетки ва протяжении-3-х десятков дет подробно изучалась ' проф. Камадяяом д сотрудниками« ■ ' ■

; Совокупность этих исследований позволяла проф. Камаля-ну предложить етаяоламяв в качестве стимулятора роста сель-, скохозяйственннх животных ж лечебного претрата при роде яг заболеваний. В яастащее времяон применяется не только в ветеринарной практике, но апробируется и используется в не-ддцинсвих клиниках при номплексноЗ терапии яеяоторхс!заболеваний ;печеня,; почек я сердца человека* .■ ■ . - • v > : Несмотря па многогранные исследования по действо» эта-нодамина наобмени Зункцки организма некоторте стороны ые-;, табодизма самого зтанол&мяяа, а также влияния возможных его . продуктов /0- я V-ацетшроизводные/ ва метаболизм недостаточно изучены.

'Педь я задачи явсдеясваию. Исходя из выиесяазанного в га стоя щей работе мы задались целью исследовать респределенже и у утяяяэапшо этаноламяго в ряде органов /мозг, сердце ,печекь,; сочки/, возможность ацетидировашен его в организме, а таяяе вдкняе его в л/-ацетилэтанодамжна на некоторые сторона , . азотистого обмена» в частности обмен дюярбоновыхаыипокно-■лот, которые играют важную роль в функциях я метаболизме ' оргаяязма. ' . - : ■■

Научная новизна результатов носледдрани^. Результата осы" тов впервые выявили возможность апетняяроёапжя атаводокина ; нгвдролиза //-ацетидэтанодамива в организме. Хотя к вадя^ чяе ацетшшроизводных этаводамява в организме не устаноые- ! во, присутствие м, в связи о обнаруженной в настоящей работе возможность» ацетяяяровавяя, не исключено. Вартанян /1970/показаш большая эффективность О-ацетялэтаноламищ в анаболических процессах по сравнению с этанолаюшем, ва- , шедшим применение в стимудгаши роста цшшят ияйцевссюсти . кур.Известно, что О-адетилэтанодамин соединепсе нестабильное я легко переходят в '//-ецетиялро из водное» синтез кого — , poro'довольно прост. Сравнительное изучение действен этано^ дамива'я V-ацетидэтаноламина ва показатели азотистого об-

нет проводилось ваше вггерше. Поюзаво неоднозвачное» а,-ь некоторых случаях прямо противоположное влияние- атанола-ше л/—вдетидвтанола мияа на изученные бисошмлче с кие показателя /азот, вукдепвоше кислоты^;дикарбоноше аиино -кдслоты и ГАМК, активность трансаианав/. Следовательно -действие экзогенных втаноламина' в // -едетидэтанолавеша' ' , наштенсивностьи каярзвяекность обменных процессов"в " \ организме в какой-то мере определяется степевю их взахшо-превращениа.1 . • 4 ■

Практическая ревность работ Р реализация -результатов ио - ; следований* Этанодашихдошд и этанолашгкфос$ат рекшендо-ваш и внедрены в'качестве стимуляторов роста хшилят в. ч, продуктивности кур. Вшшчение ацетильного радикала в ыоде-куду атанолашша в возможность ферм вата -1 и шого гндроляэа л/-асетид этанола мила в организме с высвобождений! этанола-шша в ацетильного радюада, которне используются в синте-.зе'АТФ^ жирных кислот я фосфолшщдов, способствует сона-ишмданнш ретенции азотистых соединений /общий вбелвавнй азот, дщязрбововке аминокислоты/ в повышает уровень анаболических процессов без напряжения в обмене нук4еиношх гаю— лот» Исходя из этого У-ацетндэтанолаиии мохег явиться'более аффевхквнвы я щадашим стимулятором обменных процессов» чегг этаяодамин, в при разработке дешевого ыетада его сив-, теза иохет быть в дальнейшем использован в животвоводчесгоЗ . практике.

Аяробашя работы. Материалы диссертации Сылв доложены в 4 годовых отчетаг БрЗШ за 1971-1374 гг.,.на научных юов$е' -реншях £рОШ в 1272 в 1975 гг., ва • симпозиуме "Биологии ~ ,етанолпшша г его применение в народном хозяйстве", сос -тонвшемоа в г.Ереване в 1974 г. Работа апробирована ва заседаниях кафедр бвохвидд и физиологии ЕрЗШ нкафедрв ' бжохшии ЕЕ7. ■'

ртблувдщд. По результатам вшюлненннг исследований опубли-' ковано 5 работ. '

Обмм табоун. Диссертации состоит из введения» 3-х глав, собственннг иоследсФанна, обсуждения в списка литератур!.

,' Список литературн содержит 283 наиыевовавиа, в той числе --,'> •182 жяостронти, Диссертация иэлохенана 102 стр., содержит'"' 23 таблицы в I схему. '' '-г.

Otftegr и методика исддедманий. Опытн проводились на белнх гЛ: iq?Hcax в кроликах-самцах. Вес ирн© 150-200 г, вес »роликов - * 2^5-3,0 кг.Животных содержали ва соответствушшх но^миро ванвых ворыошг рационах. В опытах in vivo ,sa чао до, за-• боя жввотша! вводили нейтрализованный соляной кислотой эта- : ноламин в дозе 20-25 иг/яг веса жвготвого и л/-аиетидэтано-: -Л дамка в вшшолярвнх концентрациях, цриыерво 34-43 «г/яг. , ;4 ^^ Ислользовалж коилерчесетй препарат этанолаыива, яоторна -: - подвергался ваш перегонке в валуна, //~ацетилэтанолаынн ! синтезировался сотрудниками кафедра биохимии ж органической -хяяея по методу , Coineéius. 1Ш. '

Жнвохвнг умертадядв обезглавливанием, быстро извлекв - "

- V ли соотвегствуицне органы, брели на холоду навески тканей

• в в закдошосхв от цели эксперимента подвергалисоответох-^ , / вутоей обработке.. . - "1 .'*'■;

\В органах намиопредедялись этанолаыкн, дикарбоноше V; .- ашшоислоти /глутамат и аспартат/, у -аминомасляная шо --,лота,-глутамая в амыиак.фрагаши азота и нуклеиновые вис -/ . /лога» Этанаяамвн в тканевых бутанодовых или этаноловыхг ' "'экстрактах определяли по методика, описанной Барсегавоа

ДОбе/. '' ■■ -V>

В опытах по изучении утшизацги добавленного этанола-' ' мина для определевия' последнего ваше использовался метод" •. электрофореза в барбитуратам буфере /рН-8,6/, алектрофо '/[•' рёз проводили в течение I часа при силе тока 10 ма. Окра-■ кивание, проявление и количественное определение этанола ; ;; мина проводились тагасе.яак в в случае аминокислот. / ".".'/-,'? . Дикарбоновые аминокислота я ГАМК в тканевых трихлор- '." ¡ ■','.' уксусных экстрактах после введения препаратов в опытах •" - ' -' V. in vivo > а тагад после инкубации с гомогенатаыи и мнто- /.* , f хоядральнаи $ракциет определяли методом Робертов в Френке^- -- ля /Rо¿e\ts , Гъапке& 1950/ с некоторыми видоизменения - ; ■ .. ыи применительно к аппарату для шеоюволэтного электро-'.

- вореза* .■ ■ - г ■ ■'■■г' "V" ■■ i;- о1т , ''

- Количество аминокислот, а также этмо^шша,-'шсчитнЕа-;■ л , - яось по калибровочная в&тш, построеннъм на основании, гало- о:-) i рпметрированиа стандартных их количеств, подвергнутых элев^ v г.' трофореэу. окраске шшгидрзнсм в йлтагровинюоспнртоши раст— .".■■: ворош сервошслоа меди. • г • ;Vv-

...Аммиак и глуташи определяли по методу ыивродиф^узион- V..,' > ной перегони, paspe бота наойЗелигсрнаии /¿eti^so'n,,*£e¿i£- : '".'-...son V 1951/ в модвхдкадии Сила ko bo й и др. 'Д962/. Фракляи ^

- аэота определяй во ыакрометсду Кьеддадя, нуклеивоше1 кисло-, ' í - i тн спевтрофотоаетричесЕа по Спирину и сотр. Д962/, голи -

V чество ДНК определяли по методу, описанному Орловым в Орло-

. вой Д961/. До разнила ■ между суммарнга количеством ну клеи - : : . новых кислот и ДНК определяли количество РНК* -

^ Активность аспартатаишотрансферазн и аданиванянотранс- '

V феразы опредслялипо видоизмененной ■ Пасхиноа Д959/ метода-. ; ' ке Тонгазя я др. /Топhazy et 1950/. 'J ■

' Препараты ацилазн -I получали из ацетонового порошка ■ ■■почек свиньи во метеяу Орехошча и Ци Чжев-у ДЭ57/., - V

,: Митахондриальнур фракцию иозга в опытах по изучению -.'■■■ действия зтаводамива и -ацетилэтанодашша на утилизацию ".

добавленного глутаыата тшелядл по методу 1^>сди и Бейна " ' /Bicdú ,Ba¡n,I952/. в модификации Пялладкна. д Кирсенюо ^ ■■,

Д961/, используя неыешую /ОТ/ рефрижераторную центрифу- . ; ху.маряк R-24 яли отечественную, марка 1ШР-1. >,. "■ " ; Гомогенизацию мозга проводили в 0,291 сахарозе ва

V 0.05Ы Тряо-НСТбуфере /рП-7,4/. Готовили IO.OJÍ гомогенат; "

- в стеклянном гомогенизаторе с плотно пригнанный те$лоноаа1: пестлгом. Гомогенат центрифугировали при о°-5° в течение ' . ^ : ; десяти минут прл вООсс^ для удалешя ядернса фракции.". Надо-.

\ садочную жидкость для получения осадка митохондрий центра- '

. Йргироваля в течение 15' прж18000х£. 1фитериеы бяохимя -л. ческой активвостя китохондрвальной Фракция служила степень

фоофорялирования /Lovívup, 1961/. Проведенные с помощью. •; фазовоковтрастноа.мивроскопии исследования, а таие определение преимущественной локализации сукцинатоксидазной актив- .

- : booth в полученной вага субклеточной фращии позволяй pao-

сматривать ее как грубую митахондрнальную фракцию /с г u de

miîocliontKlai /i-action /. . Полученные вами давше подвергнута статистической otf- ' работке методом,. описаянш Каминским Д95Э/. -

Оймен бпологнчесвя активных веществ и их мшши на метаболические процессе я функции клеток животного организма представляет 8начителышА ustepee sas в свете прзбдиже-- та к раэмснению механизмов их действия, так я в связи о/ их применением в медицине и сельском хозяйстве. К биологи-чесни активным веществам относятся многие незаменимые аминокислота и их модифицированные производные, биогенные амины, такие как адреналин и норадрешлин, серотонин, я гиота-мнн, ацетияхолдн в тираний в другие. Нарушения обмена этих ■ соединений лежат в " основе многих патодогичесгапс состояний я в свои очередь возникает вследствие последних.

'К подобный активным.соединениям, широко распространен-нш в растительных и животных организмах, относится в эха-нодамин. Этаноламин встречается в организмах как в свобод- ' вом.состоянии, так и в молекуле важнейших структурных . и , фу ищи опальных компонентов клетга, ташос как фэсфолшщцы,. /этанодаминфосфатид, згаволамиивлазмалогенД фосфоридэта- -ноламин, глвцерофосфсрилетаноламин, ЦЦФ-этаводамин, нор-адреналин /диоксифенняэтанолаыинЛ ацетил-СоА в др. - . . ' . Этаноламкн метаболически тесно связан с такими сведи» нениями как холен, метпошш, серив, глицин, содержащие се- ; ру аминокислоты н др. Очевидно, воздейстше этаноламива-на метаболизм и$ушаши тетю во многом осуществляется через вышеуказанные соединения. Однако, имеются н существенные различия в действии- зтаноаамвна в связанных в ним метаболитов ш швотвый организм. В частности, ' это касается действия этаноламшана рост и развитие животных, .регенерацию , ,. тканей в другие Функции. Как биостимулятор, ов более эффективен, чей ходив и глтппт. -.. -

Следовательно, он обладает исвойственныма лишь ' ему, сторонами действия на обменные процессы. '." ^ •

Камалян /Камалян, i960; Еаыалян в др., 1971/ предгошь гаа возможность ацетилирова кия этаноламина в гивотноы орга-. вязме как во азоту, так в во окспгруппе. Оообенно интересо-. вало его может ли синтезироваться в организме О-ацетдлэта но-

; ламин, деметилнраванвыВ аналог адегидходива, я какое учао- ." .'тив он uoser принимать в передаче нервного импульса. Одна,' КО пошит обнаружить это соединение в экстрактах печени и ыозпз бшш безуспешны /Накаляв и др., IS7I/. Задолго до этого им исследовались фармакологические эффекты л/-аде-тидэтаводакшш на изолированной петле* кишки морской свинки' и (кию показана его большая еффектиБвость по сравнению с у ; этанодаыиноы. Оба препарата оказывала адетилходиноподобное действие.

Исходя из вышеизложенного мы задались цельв исследо -вать возможность адетилзроваши атанодамтша ' по азоту и гидролиза W-апетилэтанолаиина в животно« оргаяизме,а также . изучить сравнительное влияние обоих соединений ш неготорыв стороны азотистого обмена в органах, на Фунгаши которых ата-нодамия оказывает определенное влияние /сердце, почки,мозг/.

/Определяя количество этаноламина в органах после введения исследуемых препаратов, ми обнаружили, что после введение V-ацетилэтанолашша уровень этаноламина в орта- ■ . нах бывает даже несколько вьие, чем при введении этанол ^ амина /табл.1/. Изучая утилизацию добавленного этанолами -на в-гомогенатах'сервда,-почек и печени, мы заметили, что достоверной утилизации этанодамин подвергается лишь в то- , могенатах сердца, т.е. в органе, где при введении препаратов достоверного прироста этаноламина не набдвдается. , '■ / табл.2/. ' - ' -

'"■ ; Это говорит о том, что //-апетилэтаяодамин, по-видзыо- . му, лучше проникает через мембранные, öaptefu и подвергает -оя в тканях гадролизу с образованием этанодамива.;

В ряде органов имеется фермент,\ацетидируюта бодь -шинство аминокислот и аминов /спермин, сперыидин^ пававе -рин и др./ по аэоту /Gveenstein , 1955; Орехович и др., ; 1Э58/. Ваиболшеа акгишосты) фермента /ашшаэа-I/ отмечается почечная ткань, откуда он и был ввделен и в достаточной езепеш подвергнут очистке. Было показано, что его простои бедок, содержащий £>Н_грушы^ ответственные за . активность. №щ из вышеизложенного, мы выделили из ночек свинга ацилазу-I по метолу Гривштейна /ÛvcehSÎeïn ,

M

.м-.-.

" . m "

- . ..

■■ ■-'■ .01'.

'S

\ . : i

!,.-.. ' : О j

V .'

v о ;

i .. -с. . <л

^ 'Lfj.j'1 - ч/ "

% . ¡3 •

V * со ;

% вJ

сл Ч;

'fe ' M *

<о V,

•fe

V * о

'fe ' a>

■Й

'fe . »3 '.

Ö

'fe' 0> ,

Ъ "M

'fe " œ

s?

'fe

V 4

'fe I '.4, ' ÖV

'S О '

'fe • *

■fe . 00, 1 ■ д» *

Ol ■

'fe ' |-t ' :

S. V« ;;

'fe *

M i л* -i ■+

'fe * / M" -

О сл о 1

Контроль ,

Этаяодамш

л/-ацетил-этаяоламка

Контроль

■" i . ■

Этанолаыгн.

У-ацетга-атаволаыян

: - s ' ь Ь 1

Контроль

Этаволамдн

■ А/ —адвтвя-этаноламзш

Контроль ..

Этанолймдн

л/ —ацетид-гтаводашш

КрНТроДЬ

Этаводамин

Ы-,йдетвх-втанолацна

Утилизация:атаводаиива в гоыогенатах .' т(;:|'." , : ■ -органов белых крыо (мкг/на пробу/ч) ' ■[■'."■■'"•''■'

Сердце;. . П о ч к в ; 1 П'е;ч в н в ' контроль инкубация контроль ин^бация контроль инкубация

1647,7 1131,21+ .1664,7 1660,3 " 1650,9 1606,3 +45,12_ +24,28 ¿49,19 ¿49,04 +36,07 ±34,8 .'

1948/ в модификации Оретовича я сотр. /1958/ и, использовав ' в качестве субстрата этаноламив, показали, что поддеЯст-вяем очищенного ферментав фосфатном буфере /рН-7,2/ отмечается заыетная утилизагоя этанодаиинав среде, содержащей л/а -ацетат /табл.3/. У-■ ■

....,.'"..'-V/, .. . Таблица 3 '

Определение этанолаыива1 в опытах с ищ^бацией- > " ^ \ этанолаиина и /У-ацетилэтаноламина с ацилазой-1,

выделенной из почек свиньи' (ыд/мольна пробу). ...

^ - 1 , . ' о ч К и -■■ ■ . 1 . -

Фермент Этаноламин ЭА+ферыент л/-ап.этано-. . ламян1 • - лЛ-ац.ЭА+7. фермент

0 .'• :48,4+р,45 Зб.гЧрИЭ 2,98+0,51 18,9* ¿0,49

Ферыенткаталиэируетобратнувреагапш с большей с ко- ~ ростью.Прииннубапин его о //-ацетплэтанолаыином в отсутствие лб-ацетата отмечалось звачительное увеличение этаног ламива. Таким.образом, эти данные свидетельствуют о возможности ' взаимопревращения этаволамива и //-ацетиаэтанолашва в животном оргарэмв. • •

Исходя из установленного факта ма заинтересовались вопросом не играет ли л/-адетил9танолашш определеняую роль г >

стимулврущем действия зтаноиамява. Последний на. основания исследований Камалян и сотр. / Камалян я Барсеган, 1959;- ■■ Камалян я др., 1962; Карадхяя, 1972/ нашел применение в сельскохозяйственной практике как стимулятор роста цыплят я яйценоскости -

. . - Известно, что стимуляция роста связана в основной с интенсификацией азотистого обмена. С этой цель» намибыло проведено изучение фракций азота я нуклеиновых кислот в моз гй, сердце и почках-роликов / табл.4 и б/.

Полученные данные показали, что //-аиетидэтаноламин через час после внутрибршинного я внутривенного введения вызывает достоверное повышение уровня белкового в общего азота, в севцце н'Почках* Этаволамин подобного действия при однократно« введении ив; течении столь короткого времени Л час/оказывал^ несмотря ва то, что вызывал достовер -нов увеличение-содержания РНК в органах. Следует- указа тв, что при сравнительном изучении влияния этаноламина в О-аце-тилэтаноламяна на', некоторые показатели белкового обмена /Фрагаиш азота, РНК, фоофопротеивн я др./ в печени и мцш — пах белях крвю,'вря дяятельям! введении />«. о« препаратов была показана большая эффективность ацетилпроизводного /Вартанян, 1970/.

Центральную рс&ъ в тканевом азотистой ск5ыене играет система дихарбоновмх аминокислот, осушествлящая интегрирование путей метаболизма азота*.Дикарбоновыеяетокислотн /ы. -кетоглутаровая и щавелево-уксусная/, а также пируват легко акцептирует аминогруппу большинства аминокислот и других азотистых соединений, генерируя ддкарбоноше амино-. кислоты и адандо. Последние,. в основном, глутамат, путем дезаминазных реакций превращаются в кетоотслоты я аммиак* { ГлутамаадегшЕрогеназвая реакция в физиологических условиях; сдвинута в сторону синтеза глутамата, ютовый акцептируя , аммиак, может легко донировать аминогруппу различным кето-кислотам, тем самый регулируя соотношение амивокиолот в ' аминокислотном фоаде органовчто играет решагсую роль в Ентенсиввости синтеза бедва.

1 Шло показано, что молодые врысы растут примерно с

г ; , V '; ; '/'Л1/ 4 Тайша 4

Содержание азота и нувлеинояп кислот в ткаяях поляков после . .внутрябршинвого введения втавмшшнв'и //-$ц$ тилэтаноламкна, ■"

Контроль V *

а/- аветилэташшшш Э т а в о л а и и н

почюг серше мозг.. почки , сердце мозг ' почки серще мозг

ОЛдий азот . 2828 , 2646 • ±105,92 ±49,39.

Остаточный 455.7 460,6' азот . ¿19,72 ±28,07

Белкошй ~2Э72 • 2185,5 азот ±90,98, ±34,43 ■

ДНК Г 28.6- 10.0 :, +1,60 ¿0,53 \

РНК • 33.1 14.3 ±1,50 +0,50

2095 : 3224,7+ 1 2959*"

±69,39; ±89,51 ■■ ± 107

' 455.7 ЭТЗ.З^• 504.7

+10,25 ±29,15 ¿28,86

1639.3 2651.5+' ~ 2454+

±62,01 , +66,69-;'. ±79,34

~5,0 Т30,7 * . 10.1

+0,51 • ±1,50 . +0,50

12.7 "32*6 ' ~ 14.9

+1,20 +1,20 ±0,80. ,

20СЕ- '2637,6 ±113,4 ±68,7

505,5 394 ' ' ±28,45 +19,82

~1495,4~2243,8 +100,§2+55,71,

3,8 "25,1 +0,49+1,60

~13.0 ~Э7,0 +0 ,€0+1,70

2833 ±83.8 -

475.3 ±24,59

2357.5 +60,75

•8,г

+0,42*

I7.lt , +0,50

-2X93 +70,33

~445,9 ±37,46

1747.3 ±67,55,

+р1з2

15.3 ±0,30

Таблица 5

Содержание азота и нукаеяношх кислот в .тканях яродасо» после , внутривенного введения этаноламива и //-ацетшдтанолашша.в иг£.

К о в трод ъ

//-ацетилэтанолашш

Этан одам и я.

-'-. почки -сердце мозг почки ' седае мозг почта сердце ыозг

Обшй азот

Остаточный азот .....

2962 2571 +П7(18 ¿71,30

~45Х 399 +23 ¿15,33

■ БешошЗ; ; 2526 7Г 2X72 ' азот ■=..-. +98 ¿58,33

ДНК • ~27.0 \7,7 У / 40,6 +0,2 •

гак • • -^гэ.о" п.6*.

-+0,6 ¿0,3 ,

1871.4 +65,56

336 , +17,10

1535 -±49 .5,2 1Р|2 8,8 , +0,4

,'3355* ¿110

498 +24

2862 +91

л 27.6.

-ю,€

Ж

-2917* ¿65,80

■454 ¿31,48

• " 2463* ¿59,64

' 7,6 : 9,в*

ж-

••2038 " 2856 • ¿£7,59 ¿37 ;

-~403 - 386 ¿24,27 ¿32 .

! 1635 2470 : ¿56,78 ¿69

4,5+ -26,5 1 40,2 .+0,4.

9,0 "32,Г+ .¿5,3 +0,8

' 2693- ,' 2044-+81,16 : ¿97,59'

~399 ' ~416 ¿18,75: ¿18

22941628 ¿86,205 +85,51

5,7*.гЗ,^: ¿0»2 - +р!1 -

.12.9+- Ю.84-+0,3 ¿0,3 -

! одинаковой интенсивность» при кормлении синтетической дие-. той, содержащей 10 незаменимых аминокислот и гдутаминовую /* '

кясдоту, и рационом, в которой 5 незаменимых аминокислот v /лейцин, >изолейюга, вялдн, фенилдланин и метионин/.заиене^ . ' вы соответстцупцими кетогаслотами и экЕиетлентнш источником азота /Уооб |Соо&у -1954/.1 '' V л *г" :; > Компоненты системы дикарбоновш: аминокислот учаогвуют-. ,в переносе ^электронов, в сопряженном фосфоршшровании, син-? тезе и распаде аминокислот в.переходе их в/углеводы^в <|ик-: *сация и высвобождении угленюлоты и аммиака,-всинтезе

спепяЗичесшх азотистих компонентов клетки и гонечныхпро-' . дуктов азотистого обмена. V-..J ■:'■■ ■:■. ■ Vr.\ .■'■'V-.'-'

, \Учитиван вышеуказанное ,мыисследовали активность -у. асшртат- и аланан-тренсаминаз н содержание днкэрбоновшс , ' аминокислот в почках, сердце и мозге / в последнем определяли и ГйИ/. после внутрибрпшганого введения этанолаыина ^ и //-ацетяаэтаволамина /табл.6/А Это было вызвано также и ;. тем, что меченный по углероду этаноааыин включается в эти . аминокислоты белковых гидролизатов /Pitqexman ei а£,, 1953/. .л1' 'Г

v'. . Полученные данные показали; что исследуемые препара- .;,'■ тнвызывагтзначительные сдвиги в содержании дикарбоновых • ' ;аминокислот. Причем, направленность действия препаратов противоположна. Так, атанолаыш приводит к снижению уровня глуташта, аспартата в ГМК в мозге на 25,0 , 33,7 я 41%

■ соответственно. л/-ацетидзтанодамин.несгс>дько увеличивает', уровень этих аминокислот:- глутамат -*на14»б£,аспартат - "*

- го.оя... • V, •

. . Повышение уровня дикарбоновыз аминокислот под деЯст- -' вхем V-ацетия&танодамииа наблвдается также в сердце'и . почвах. Этаноламия же,-не изменяя содержания аспартата в •' ^ ^почках я сердце, выэывает некоторое повышение глуташта . в почках я вначительное снижение в сердце / на 51,0 %/. .: Изучение травсамявазяой активности пор®зало,\что

■ //-a^MXfjftgntpmqmre яп в . ' . мозге. Активность аспаргатакинотрансферезн снижается при -мерио на 21%, а аланянамижяравсфервэн ив 29%, Снижается ■ ;

Таблица 6

Содержание аминокислот /цг&/ и активность аспартаттранеаминазы /АСГ/ и алавивтрвнсашшазы /АДТ//в мкг пирувата/ в исатх кроликов после внутривенного введения - втаводаиша я //-адетилэтанолашш.

Контроль

//-ацетллэтанолашш . 0_т анодами в',-.

почки - сердце

мозг

пачка -..сердце мозг ' нами сердце ' чюэ:

А С Т АЛТ

Тлутаыат Аспартат

Г АМ к

32666 ¿5800

8933 +350

> * 91.7 -

'■НА'

11.5 ''

' 93000 +3100

~7Э70 ±163-

36 Л 7,7

54666 +1960

"4693 ±286 ■

,109,8 ±3,0&

31.5 +Р,Й9

19,8 +р,80

" 31000 . 82000* +1690 +2730

~9466 ~7360 ±510 . ±490

102.4+_ , 47.2+ ±1,08, +1,0.

. 17.1+

-

II.7+ +0,5 .

.43000 ±1302

тзззз +236 1

24666 ±4200

-6000* ±360

86000 -50166

+3430 ±1518

~6346+ 4000 ■

+355 +245

125.9*'103,а* 17.6* . 82 Л+ ±2,И ±1,6 ±1,3 ^ ±2,60

36,5* ±0/0

24,0* +0,70

. '7

11.4. ±1,2

8,3-±Р»9

; -18.6*

13,' 2*. +0,10

также аетишостьаспартатаминотрансферазн в сердце. Этаио-лймзннесколька понижает активность алапшашшотрвнсферазы в нотках и сердце._

Сравнение ддтт*""" по действах) препаратов на уровень .. дикарбоношх аминокислот ж активность трансаминаз не:вш№ ляеткакоЗ-либокорреляцанмеадуэтими показателями. Comiso, сема наблюдаете сдвига свидетельствуют об активной вмешательстве препаратов в азотистый обмен клетки. Полученные вамисявнгя в активности трансаминаз в органах кролтив не совпадают о давними Еарсехяна /1965/ ж Евртанян Д970А об активированги этонодвмлном трансаминаз печени и скелет- ; ной мтщн белы? врио. Однако, в опытах вышеуказанных авторов, препарата вводились более длительно и исследовались другие органы. . s.

Количественные сдвиги в дикарбоношх аминокислотах и ГАМК в мозге под действием исследуемнхпретратовпредста»-дяют значительный-интерес в связи с представленностью, и ролью этих аминокислот в функциональной активности мозга.-Колебанш в соотношении глутамат /у-адшзмасдяная кислота могут привести к усилению дибо подаздежию нейрональнай активности, что не может в твою очередь не отразиться на сфсхоянжж других органов и систем. 1фоые того показано,что увеличение глутаыата в мозге приводит к торможению синтеза белка /Ovte^o »Ьрмввг», 1967/, «оосда как доновение уровня продукта его декарбоксияирования ГЖК, напротив, стимулирует включение Сг4-аминокислот в белка /Téwati ,£>axte%-1969/. . . , . :

Исхода из роди глутаминовой кислоты в энергетическом обмене мозга в последушей серии® следований нами было .. . изучено влияние этанодамина ж (//-ацетилэтаноламина на утилизацию глутаыата в митодондриальной фракции мозга /табл.7/.

, Подученные данные показали, что этаноламин заметно •• усиливает утилизацию добавленного глутамата в митохондриальной фракции мозга. Подобные, более выраженнш действием - , обладает АТФ, но в действии этих веке ста отмечается в существенное различие. Вели над действием АТФ усиление утилизации глутамата сопровождается почта эквимолярным прироста* аспар-

Таблица 7 .'■_.;:.

Определение сдвигов аминокислот в митохондрнальнсй , фракции мозга прииш&бапт ее о "раэдиташ доба»- , \ ' ленными веществами / в мл- на пробу/.- . ' - "М

Добавка Глутамат Аспартат ' Г А М.К-' ;

КОНрхаь фвксир. 3718,5+127,9 32,6+0,95 '21,8+1,32

Г К 3228,2+144,9 101,4^.3,52 33,810,58

ЭА + ГК 2546,2+150,7 108,0+8,82 37,0+1,09 , '

/у-8п. + ГК 2987,6+112,6 94,8+1,98 33,1+1,08

АТФ + ГК : ' 2055,(>108,5 618,0+22,85 20,4+0,81

АТФ + ЭА + ГК 2198,61256,0 662,2+33,53 42,9^0,84 . '

АТФ +л/-ац.+ТК '2318,^163;4 590,6+17,27. 47,0+1,3? ; •

АТФ + ЭА + //-ац. ' ■ " , ' ■'" ,

+ ГК 2257,0+190,5 588,4+7,64 . 49,6+0,60

Контроль фаюси- ■■'■■' '

ровая. . . 85,38^6,45 32,4+1,28 21,Ск1,22. '

Инзстбапионный * : 1 ■ ~

контроль 65,72+4,19 49,4+1,39 •18,2£1,07

Этаноламин ■ 80,3444,21 .54,2+0,91 26,7+1,29

//-адетилэтано- ■■■ . '

ламав 71*66+7,17 - 50,8+0,73 19,1+р,39

АТФ 42,18+3,47 67,6^1,91 '14,1+0,90

ЭА + //-ацетил- - ■■ ; ■ ■ - ''1 ■' " ■ '-■-■

этаноламин , : 53,58+1,63 *- 45,€¿1,12 . 22,6+0,83 . .

л/-ад..+ АТФ 45,84+0,92 63,2*1,12 16 ,-3+р ,'66 * ;

ЭА +//-ЗД. + АТФ '40,46+1,34 66,4+1,86- 19,4^3,81 • ■ ■

тага, то в присутствии этаяодамива «того не отмечается.

Основной путь утилвэацаи глутамиаовоа вислотн э мозге, как и в других органах,- - ттансамишцювашюс^гаведево^ук- ; сусноа кислотой /К«Й5, ЪгЫагл^ 1960; Зе^Л^ег еТ .

1962;Наг£ат, Кхъ&ь , 1963;во1<«*2, 1965{ Камалян и др., 1966, 1968/. - ;",

Травсамивироваике тлутамивово& кислота в митохондриях мозга'лимитируется количеством АТО ж ионов магния /Камалян/

а др., 1966/. При. вышиенни из среди того кож иного яз [ : 8тшс компонентов утилизация глутамага резко подавляется. Одааво, ДДФ и в отсутствии ионов магния резко усиливает ' ухнлхзаци» гдутамата и образование из негоасдаргата. Авто-; ; рв овязызагт оф$екг АТФ и ионов магнии с активированием _ I,' : ' Н^ -^ависткЛ АТФ-азн митоховдрий. По даннш .Гвспарян * -, /1967/ этанола мин стимулирует АТФ-донуя активность митоховд-' ри4 печени, влжяет на нонтрактильные свойства _ митоховдрий.. и пошшает в них количество судьфгидрильшд групп* Возможг-' но аналогичное действие os оказывает и на митохондрии моэ-/ ■ га,'генерируя АДФ, под действием которого к усиливается ~ распад гяутомата. -Не исклхнево, что этансламии усаливает /дегидрогеназный дуть распада гдутамата, либо способствует' ■ преврювдвтз образуицейся из вето аспарагияовой.кислоты, V. В опигах бе» добавления глутамата, однако, отмечает- ..-. ся задержка его вопользованвя в присутствии этаноламина и. У-ацетждэтаноламина, что возможно связано с распадом , эндогенного гшутамина.: Как показали-нави опыты с гомогена--. ;^ами мозга/табд.8/ втаноламвн вызввает значительное умень-' шение эндогенного глуташша, одновременно несколько увели, ' чявая количество аммиака. В присутствии ДТФ, которые необходим для синтеза гдутамива он тормозит его образование из ^добавленного глутаиата. Эти данные • сведетельотцуга о де&ст-' ''бии атаиодамина на глутамишзнае' системы мозга,, игрзпцие ' важнув роль' в поддержании соотношения глутамиц/аммвак. л I Таким-обрезом, полученные нами данные показываго,что . ■' -■íB организме животных этанодамин может подвергаться ацетяли-

рованив с образованием //-ацетилэтаноламива, препарата,., ^по-видимому, более эффективно стимулярувдего анаболлтическае процессы. Оба 1феаарата оказывает активное влияние на про - -цессн азотистого обмена, в частности на систему аминокислот : группы, гдутавата, что может иметь значение в функциональней активности:как мозга, так и других органов. - >...;

" Таблица 8

. Определенна сдвигов аммиака и глутвшша при инкубации гоыогенатов мозга / в uií/.r;

Добавка -.'■ ' Ашиак" . i Гдутамин ...

Контроль ишсубашш .3,34+0.28

Этаноламик /ЭА/ 4,60МЭ,10 39,7+1,6 ; /';":

а/-ацдтилэтаноламян.. ' „

/V-ац е тил-ЭА/ 3,94¿0,20 20,5+1,1 ' ■ ';

AT« II,9íwp¿6I 33,0tl,2 .. !

Глутамат /ГК/ 3,55+0,20 . 11,2+0,9

ЗА + АТФ " 12,5&$р,30 20,4+1,0

// -ацегил-ЭА + АТФ 10,86*0,21 I6,8f0,4

ГК + АТФ 6,05jp,48 55,3+1,1

ГК+ЭА , -'i; : 3,65К),17 33,5+1,2

ГК + V-ацетиа - ЭА 2,9^0,13 18,7+1,1

ГК + fJ-ацетия-ЭА+АТФ 7,2%0,35 46,5+2,4 ,.

ГК+ЭА + АТФ .- . ■ 10,54+0,64 , 4I,5¿0,9 -

'й-*;:Л ■ - 21 - ' ■ л л." л Л;"';-'-ч-ч 5

■К'- .У..':", ... в Ы В О Д • Ы • • - ( ." -,. ' ■. ..■■,/ .1. Показана возможность ацетишгровавия »таноламина я ' ' V \ гидролиза' ацетил эта ноламина в животном организме»: ' 7>!

Дшиаза-1, выделенная из дочек сиппд катализирует аце- , тилярование этаноламина во 'азоту. ■ . . * 7 ■ -,

Процесс гидролиза л/-ацетилэтаноламина осуществляется 77 ферментом интенсивнее, чем процесс ацетилированго этанолами-" на. / _ [' 7...*.;; .■ . . -Ч'.;.

, 2. Внутрибршинное введение животным V-ацетилэта нола-мина'и этаволамяна приводит "спустя 60* . к некоторому повыше- -, вив урошя этаноламина в мозга, почках и печени. При ' этом 7 : введение -.//-ацетнлэтаволамшаприводит.к несколько больше'-:/' ■ ' иу накоплению этаноламина в тканях. .-"'■. ' | ■

3. Добавленные этаноламин подвергается достоверной утн-7 лизации в гомогенатах сердца. В гомогенатах печена я почек 7 'этого не отмечается. ■7.^

7 " 4. л/-ацетилэтанодяшш через чао после в/бр7 и в/в вве--: дения приводит к повышению уровня общего и белкового азота.в ■ . сердце, и почвах кроликов. Этаноламин подобного действия в условиях наших опытов не оказывает. :

' :;7 5. Под действием этаноламина отмечается повышение уров-.7 ня РНК в сердце, мозге я почвах кроликов. Противоположное 7. 7 действие вызывает А^-ацвтиаэтанодамин в почтах и сердце. ; 7

6. Оба препарата оказывают - противоположное действие '> также на содержание дикарбоновых ^ аминокислот. Этаноламин

.-вызывает понижение содержания.гдутаиата, аспартата и ГДМК ч'-':, в мозге кроликов,. //-адетклэтанолаиив же повышает их уро вень, что, по-видимому^"; связано о высвобождением ацегдпьно«- <■ 7 го радикала я подавлением" им утилизация дикарбоновых амяно- 1 - кислот. Значительное снижение гдутаиата отмечается в' сердце после введения этаноламина.. ■ . ■ ■ "- .I

7. /У-ацетилэтаноламин вызывает достоверное снижение ' ; активности аспартаттрансаминазы в мозге и. сердце роликов ■

7- я аланинтраисамшгазной активности в'мозге. Активность по- ,.■ '7 г сдеднего фермента понижается также в почках и сердце кроди-*7

■у > ' ' - 22 - ./У ;У: ." ■

ков после введения втаноламива. , У1 . -

а. Этаволамвн вызывает заметное уменьшение зндогеннога-глутамина ори инкубации с гомогенатаии мозга и несколько повышает выход аммиака, В митохондряальной фракции, мозга эта- .. шшмин усиливает утшшзатиго добавленного глутэмага.без соответствующего увеличения уровня аспартата.' ^

9. Эффекта этаноламива и его //-анетилпроизводнога на ; изученные показатели азотистого обмена в большинстве слу ^ чаев разношправлены, что в связи с обнаруженной наш воз- ; можность» взаимоперехода этих соединений может иметь,опре- ; . деленное физиологическое значение.

. . Список работ, опубликованных по теме диссертации:

■ I'. Действие этанодзмина в //-ацетпдэтанолаыина на некоторые стороны азотистого обмена в тканях здоликов. Биодоги -ческий журнал Армении, т,Ш1, » 6 , 32, 1973 (совместно о' Камалян Р.Г., Язнчян A.C., Дурузнн С.А.),

.2. Влияше этаноламива и //-ацетилэтанодамина на содержание диварбоновых аминокислот и ГАНК в «кашо: 1фоликов. ■ Биологичесюй журнал. Армении, т. ХХУХ, Я 7, 107, 1973 (совместно с Камалян Р.Г., Ейгватан Л.О.).

3 • Обмен дикарбововых аминокислот и ГАМК в органах яроУ ликов при введении этанолаыина н лЛ-ацеганэтаноламша. Тез.. симп. "Биология этаноламина и его применение в народнш хозяйстве", Ереван, 1974, стр.57 (совместно с Камалян Р.Г., Дурухяв С.А.).

■4, Утшшзашя этаноламива гомогенатамк органов крыс и препаратами ацшшзи-I из почек свиньи. Тез.докл.научи,конф» ЕрЗШ, Ереван, 1975, стр. (совместно с Камалян Р.Г., Ду-рухян С.А.). , ч / j

5 .■ Действие этаноламива в л/-ацетилэтаноламива на' содержание аммиака н глутамина в гоыогенатах мозга кроликов. Научп.труды Ставропольского.с/х института,,шп.38, т.5, 1975 (совместно о Камалян ?.Г., Бартанян С.А.).

Заказ 342

Тираж 200

Печатво-ыяотителькая лаборатория Ереванского медицинского института, Ереван-Кирова 2