Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная оценка экспрессных методов диагностики урогенитального хламидиоза

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная оценка экспрессных методов диагностики урогенитального хламидиоза"

л

> ^

^ На правах рукописи

ШИЛОВА Екатерина Альбертовна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭКСПРЕССНЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ХЛАМИДИОЗА

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени -кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1997

Работа выполнена в Санкт-Петербургской Государственной Меда цинской Академии им. И.И.Мечникова

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.ГШванов

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор,

Лауреат Государственной премии А.М. КороЛюк

Член-корреспондент РАЕН, доктор медицинских наук, профессор В.В. Тец

Ведущая организация:

Санкт-Петербургская Медицинская Академия Последипломного Образования

Защита диссертации состоится "_"_ 1997г.

"_" часов на заседании диссертационного совета IC.084.21.01 при Саню

Петербургской Государственной Медицинской Академии т И.И.Мечникова (195067, Санкт-Петербург, Пискаревский пр., д. 47)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербург ской Государственной Медицинской Академии им. И.И.Мечникова.

Автореферат разослан "__1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

А.Г.Бойцов

Актуальность проблемы

Инфекционная патология урогенитальной сферы представляет серьезную медицинскую и социальную проблему. В последние годы наблюдается резкое увеличение числа заболеваний, вызываемых такими возбудителями как хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, цитомегаловирусы, вирусы простого герпеса, гарднереллы. И хотя вопрос об этиологической значимости этих микроорганизмов до сих пор остается малоизученным, необходимость их достоверной диагностики не вызывает сомнений.

Воспалительные заболевания мочеполовых органов у мужчин и женщин указанной этиологии объединяют прежде всего наклонность к длительному хроническому течению воспалительного процесса, а также много-симптомность, схожесть и тяжесть осложнений, возможность передачи инфекции плоду и новорожденному ребенку, склонность к длительному, рецидивирующему течению. В настоящее время повсеместно основное значение среди заболеваний, передающихся половым путем, имеег хламидиоз.

По данным ВОЗ, только в 1995 году в мире зарегистрировано более 89 миллионов новых случаев заболеваний хламидийной инфекцией [Соггасй в. й а1., 1995]. По данным М.А. Башмаковой [1990], хламидиоз встречается в 2-5 раз чаще, чем гонорея. Заболеваемость хламидиозом в Российской Федерации в 1994 году по сравнению с предыдущим годом увеличилась в 1,7 раза и достигла уровня 61,8 на 100 тыс.. жителей. В 1995-1996 годах рост заболеваемости продолжился [Ремизов А.П., 1996].

По оценкам американских авторов около 50 тысяч женщин в США становятся ежегодно бесплодными по причине хламидийной инфекции [Washington A. et al., 1995]. Четверть случаев (24%) офтальмопатологии и респираторных заболеваний у новорожденных и детей младшего возраста связана с хламидийной инфекцией [ Naher Н., 1995].

Известно также, что урогенитапьные хламидиозы протекают часто как смешанные инфекции, ассоциированные с гонореей, трихомониазом и другими традиционными заболеваниями, передающимися 'половым путем [Дорохши Г.И., 1986; Милтиньш А.П. и соавг., 1986; Борисенко К.К. и со-авт., 1988]. Такие сочеташше формы "маскируются" классическими венерическими заболеваниями и в результате не диагносцируются. По данным С.П.Кяушас и соавт. [1991], хламидиоз диагностирован при гонорее у 49% больных, смешанной гнойно- трихомонадной инфекции - у 53%, трихомо-ниазе - у 50%, первичном сифилисе - у 54%.

Эти данные отражают актуальность, определяют повышенный научный и практический интерес к решению данной проблемы, в особенности к вопросу диагностики урогенитальпых инфекций, в том числе - хламидиоза.

Особую ценность приобретают ускоренные, легковоспроизводимые, высокоспецифичные, высокочувствительные методы. В настоящее время для диагностики хламидиоза предложен целый ряд методов, включающих куль-туральные методы, реакцию иммунофлуоресценции, иммунноферментный анализ, полимеразную цепную реакцию и другие. При наличии разнообразия экспрессных методов диагностики возникает необходимость упорядочения их применения, создания единой cxet.ibi использования с учетом их достоинств и недостатков. Это должно в свою очередь обеспечить существенное повышение эффективности диагностической работы в медицинских учреждениях.

Цели и задачи исследования

Целью настоящей работы является обоснование оптимальной схемы лабораторной диагностики урогениталышх заболеваний у пациентов урологического и пшекологичес сого профилей путем сравнительной оценки информативное^ современных экспресс-методов обнаружения хламидий и частоты находок отдельных видов возбудителей заболеваний, передающихся половым путем.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- оценить сравнительную распространенность основных возбудителей заболеваний, передающихся половым путем среди пациентов гинекологического и урологического профилей, выявить удельный вес микстин-фекций при хламидиозе;

- дать оценку диагностической и экономической эффективности применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) для массовой диагностики урогениталышх инфекций в условиях практического здравоохранения;

- сопоставить эффективность реакции иммунофлуоресценции (РИФ) и полимеразной цепной реакции при диагностике хламидиоза.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Хламидии наряду с микоплазмами и уреаплазмами являются актуальными для населения г. Санкт-Петербурга возбудителями урогениталышх инфекций.

2. Широкое распространение микстинфекций создаёт необходимость комплексного подхода к диагностике урогениталышх инфекций. Исследования, направленные на выявление только одного возбудителя, например, только хламидий, могут дезориентировать лечащего врача.

3. Комплексная схема диагностики урогенитальных инфекций должна включать выявление хламидий, микоплазм, уреаплазм, возбудителей вирусных инфекций с помощью полимеразной цепной реакции в сочетании с классическими методами диагностики венерических заболеваний и бактериологическим исследованием, направленным на выявление условно-патогенных бактерий.

4. Реакцию иммунофлуоресценции целесообразно использовать как скри-нинговый метод диагностики хламидиоза, при этом положительные результаты должны подтверждаться с помощью альтернативных методов, например, ПЦР.

/

Научная новизна и теоретическая значимость исследования

Впервые с помощью современного метода диагностики - полимеразной цепной реакции дана оценка распространенности возбудителей наиболее актуальных урогенитальных инфекций (хламидиоз, уреаплазмоз, микоплаз-моз, геннтальный герпес, цитомегаловирусная инфекция) среди жителей Санкт-Петербурга, обратившихся за медицинской помощью к врачам гинекологам, урологам и венерологам. Получены новые данные о распространенности микстинфекций и обоснована необходимость комплексного подхода к диагностике урогенитальных инфекций.

Практическая ценность работы

Разработаны рекомендации по оптимизации схем этиологической диагностики урогенитальных инфекций в условиях практического здравоохранения. Показана целесообразность широкомасштабного применения в

условиях практического здравоохранения полимеразной цепной реакции для комплексной диагностики урогеииталышх инфекций, том числе и хламидио-ia. Реакция иммунофлуоресценции при диагностике хламидиоза может быть эекомендована только в качестве скршшнгопого метода.

Материалы работы отражены в информационном листке "Правила ззятия материала для диагностики урогенитальных инфекций", утвержденном Ученым советом СПбГМА .им. И.И. Мечникова 3.10.97, используются в учебном процессе на кафедрах микробиологии СПбГМА и СПбМАПО. По-пученные данные также были использованы ТОО "Протеиновый контур" при разработке препаратов для диагностики хламидиоза в реакции иммунофлуоресценции, АОЗТ "Внедрение систем в медицину при разработке информационного письма "ПЦР при диагностике урогенитальных инфекций".

Апробация работы

Результаты работы доложены на конференции молодых ученых СПбГМА им. И.И. Мечникова в апреле 1995 года, на IV международной конференции по проблемам СПИДа (Санкт-Петербург, 1996), на VII съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 1997), на 5-ой международной конференции по проблемам СПИДа и онкологических заболеваний (Санкт-Петербург, 1997).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы.

Структура и объем диссертации.

Работа изложена на 118 страницах машинописного текста, состот из введения, б глав, выводов, списка использованной литературы. Списо! литературы включает 155 источников, в т.ч. 38 - отечественных авторов . Диссертация содержит 15 таблиц, иллюстрирована 9 рисунками.

Методы исследования

Необходимость широкомасштабной лабораторной диагностики I обязательной регистрации хламидиоза определена приказом МЗ и МП РФ К 286 от 07.12.93. "О совершенствовании контроля за заболеваниями, переда

I

ваемыми половым путем". Для диагностики хламидиоза в условиях практи ческого здравоохранения рекомендованы к использованию реакция имму нофлюоресценции (приказ МЗ и МП РФ № 286 от 07.12.93) и полимеразнш цепная реакция (МР №95-106 "Диагностика хламидийной, микоплазменны? и герпесвирусных инфекций методом цепной полимеразной реакции", М. МЗ и МП РФ, 1995). Однако, целесообразность применения того или иногс метода в условиях практического здравоохранения не определена, хотя известно, что они в значительной мере различаются по показателям диагно стической ценности, а также по трудоемкости и себестоимости исследова ния.

Эти методы были использованы нами при обследовании пациентов обратившихся за медицинской помощью к гинекологам, урологам и дерма товенерологам клиник и консультативно-диагностической поликлиник! СПбГМА.

Параллельно часть пациентов, были обследованы нами бактериоско пическим и бактериологическим методами в соответствии с приказом № 53;

"Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследованиях, применяемых в клинических лабораториях лечебно-профилактических учреждений" и приказом № 1570 "Об улучшении выявления больных гонореей и трихомониазом в акушерских и гинекологических отделениях (палатах, кабинетах), женских консультациях и урологических кабинетах поликлиник".

Диагностику гарднереЛйеза осуществляли в соответствии с методическими указаниями МЗ СССР №10 -11/38 "Урогенитальные хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез (диагностика, лечение, профилактика)".

С помощью реакции иммунофлуоресценции проводили исследование на хламидии соскобов из уретры и цервикального канала. Для постановки РИФ использовали наборы отечественных фирм: "ХлаМоноСкрин" ("Ниармедик"), "Хламид иген" (ТОО "Протеиновый контур" на базе НИИ ОЧБ), "Хламискан-2" (АО "Союзагромед"). Все три препарата предназначены для постановки прямой реакции иммунофлуоресценции. Препараты были приобретены непосредственно у изготовителей. Постановку реакции осуществляли в строгом соответствии с инструкциями, приложенными к препаратам.

Для диагностики урогенитальных инфекций с помощью полимераз-ной цепной реакции было использовано оборудование, входящее в комплект ПЦР-лаборатории, разработанной и выпускаемой АОЗТ "Внедрение систем в медицину" (Москва) и КБ приборостроения (Тула). В комплект лаборатории входят программируемый термостат (амплификатор), микроцентрйфуга, источник тока и камера для электрофореза, трансиллюминатор.

Постановку полимеразной цепной реакции осуществляли с помощью диагностических наборов, выпускаемых АОЗТ "Внедрение систем в медици-• ну".

Результаты исследований

Основную группу больных, обследованных с помощью ПЦР, в количестве 1245 человек (1025 женщин и 220 мужчин) составили пациенты с различными воспалительными заболеваниями с неясной симптоматикой, контактные и ранее перенесшие хламидиоз, а также обследовавшиеся с профилактической целью.

Хламидии были выявлены у 18,9% обследованных. В то же время микоплазмы были обнаружены у 22,3% пациентов, уреаплазмы - у 18,6%. Возбудители вирусных инфекций встречались несколько реже. Так, вирусы простого герпеса выделены у 8,0% обследованных, а цитомегаловирусы - у 14,7%. Полученные результаты свидетельствуют о высоком удельной весе хламидий среди возможных этиологических агентов при урогенитальных инфекциях. Следует особо отметить, что хламидийная инфекция у значительной части больных сочеталась с микоплазмозом, уреаплазмозом, гардае-реллезом или вирусными инфекциями (рис.1).

Нами установлено, что вероятность обнаружения других "возбудителей урогенитальных инфекций была в 1,5 - 2 раза выше у лиц с хламидийной инфекцией по сравнению с теми, у которых хламидии не были обнаружены. Это связано с единым путем передачи при указанных инфекциях и свидетельствует о том, что лица, инфицированные хламидиями, должны рассматриваться как группа повышенного риска в плане урогенитальных вирусных инфекций, уреаплазмозов и микоплазмозов. Особо следует подчеркнуть, что хламидиоз и микоплазмоз практичесхш ие отличимы по клинической картине заболевания.

Рйс.1. Число находок хламидий в сочетании с возбудителями других урогенитальных инфекций у мужчин и женщин.

При оценке этиологии патологического процесса и выборе схемы лечения врач ориентируется в первую очередь на данные лабораторных исследований. Поэтому при диагностике так называемых скрытых инфекций урогенитального тракта необходимо проводить комплексное обследование на наличие хламидий, микоплазм, уреаплазм, не ограничиваясь поиском одного возбудителя. В противном случае неизбежны диагностические ошибки и, как их следствие, неэффективность терапии.

Для выявления сочетания хламидий с прочими бактериальными агентами, вызывающими воспалительные заболевания урогенитальной сферы, нами обследовано 168 пациенток-с помощью культурального метода.

11

Диагностически значимым считали обнаружение условно-патогенных микроорганизмов в отделяемом из цервикалыюго канала в количестве, соответствующем 3-4 степени роста [Приказ №535 МЗ СССР]. Из 168 пациенток хламидийная инфекция была выявлена у 31 (18%), из них у 15 одновременно во влагалищных мазках были обнаружены патогенные н условно-патогенные микроорганизмы в диагностически значимом количестве.

Чаще всего хламидийной инфекции сопутствовало выделение Gardnerella vaginalis как в монокультуре (19%), так и в ассоциациях (23%). При этом частота находок G.vaginalis у женщин с хламвднозом была в 2 раза выше, чем у женщин без хламндиоза (22,58 и 10,95% соответственно). Можно предположить, что указанное различие связано с большим риском инфн-

I

цирования хламидиями и гарднереллами женщин, ведущих активную половую жизнь с разными партнерами.

Частота находок других бактерий и грибов рода Candida у женщин сопоставляемых категорий была близкой. Это подтверждает точку зрения, согласно которой при вагинитах имеет место эндогсшюе инфицирование на фоне гормонального дисбаланса и дисбактериоза влагалища [Кьри ЕФ, 1995}.

Приведенные сведения определяют необходимость комплексного 'обследования больных при подозрении на хламидшшуго инфекцию. Возможность здорового касательства и отсутствие четких критериев этиологической значимости факта обнаружения хламвдий подчеркивают необходимость исключения возможных патологических процессов другой этиологии.

Комплексное ускоренное выявление большой совокупности возбудителей в одной пробе возможно только при использовании ПНР. Однако, учитывая возможную роль условно-патогенных бактерий и грибов рода Кандида, использование ПЦР должно, на наш взгляд, сочетаться с классическим бактериологическим методом исследования вагинальных мазков.

12

Учитывая важность дальнейшего исследования больного в плане оценки эффективности проведенной терапии, представляет особый интерес оценка метода ПЦР с точки зрения использования его в качестве контроля изпеченности.

С целью контроля эффективности лечения нами были повторно обследованы с помощью ПЦР 52 больных. Повторное обследование проводилось через 1 - 6 месяцев после первичного анализа (через 1-5 месяцев после окончания лечения). У всех пациентов на момент обследования клинически отмечено стойкое улучшение состояния и исчезновение симптомов основного заболевания. У 46 обследованных пациентов после лечения хламидии не были обнаружены. Положительный результат имел место в 6 случаях. Следует отметить, что эти больные были обследованы через 2-6 месяцев после завершения терапии, в связи с чем нельзя исключить повторного заражения хламидиозом. Таким образом, ПЦР может быть использована не только для первичной диагностики, по и для оценки эффективности терапшг.

Одной го важнейших характеристик диагностической значимости метода является прогностическая ценность отрицательного результата. В связи с этим мы попытались оценить достоверность отрицательного результата, полученного с помощью ПЦР путем повторного обследования пациентов, у которых хламидии первоначально не были обнаружены. Из 51 пациента хламидии повторно не были обнаружены у 48 (94%). У всех 3 пациентов, у которых повторное исследование дало положительный результат ( из них: 2 женщины и 1 мужчина) интервал между первым и вторым обследовашге состав™ 1-2 месяца.

Как было отмечено в обзоре литературы, взятие материала из уретры ' сопряжено с определенными трудностями. В связи с этим возникла необходимость оценки результативности ПЦР в сочетании с неинвазивными метр-

13

дами взятия исследуемого материала. Нами дополнительно было обследова но 30 мужчин, у которых параллельно исследовали соскобы из уретры i образцы мочи. Из 30 параллельно исследованных образцов мочи и соско-бов из уретры результаты совпали в 30 случаях. При этом положительньн результаты отмечены у 5, а отрицательные - у 25 больных. Полученные ре зультаты совпадают с данными зарубежных авторов о возможности диагностики хламидиоза при исследовании с помощью ПЦР образцов мочг [Chernesky М., 1990; Moneada J et al., 1993].

Метод РИФ используется в практическом здравоохранение значительно дольше ПЦР. Он отличается относительной дешевизной, простотой постановки, реактивы для его постановки общедоступны, отсутствуют особые требования к лабораторному помещению. Кажущаяся простота освоения метода и отсутствие необходимости существенных капиталовложений сделали этот метод исключительно популярным среди работников практического здравоохранения.

Из 161 обследованных больных с помощью РИФ хламидии обнаруживались у 29%. Из них у 9% - в уретре и цервикальном канале, у 10% -только в уретре и у 10% - только в цервикальном канале. У 71% больных хламидии обнаружены не были.

В следующей серии исследований была проведена оценка чувствительности и специфичности РИФ с отечественными тест-системами по отношению к ПЦР. В зависимости от вида диагностического набора чувствительность РИФ составляла 37,5 - 100%, специфичность - 60,6 - 70,6%, про-о о

гностическая значимость положительных результатов - 20 - 31%, а прогностическая значимость отрицательных результатов - 83,6 о 100%. Эти данные подчеркивают необхо&шость подтверждения положительных результатов РИФ с помощью альтернативных методов (рис. 2).

14

Учитывая определенные различия показателей специфичности и чувствительности при постановке РИФ с разными препаратами, возникла необходимость исследования совпадения положительных и отрицательных результатов при их параллельном применении.

Совпадение отрицательных результатов выше всего оказалось при' параллельном применении "ХлаМоноСкрина" и "ХламиСкана" - 71,3%. Совпадение положительных результатов оказалось наиболее высоким при применении двух пар -"Хламидиген'7"ХлаМоноСкрин" (11,6%). и "Хламадиген'7"ХламиСкан" (11,5%).

Наибольшее несовпадение результатов (35,1%) было отмечено при параллельном использовании "Хламидигена" и "ХлаМоноСкрина". Наименьшее несовпадение отмечалось при парном применении "ХламиСкана" и "ХлаМоноСкрина" (20,0%).

Причины ложноположительных результатов РИФ многообразны и только часть из них связана с качеством препарата. Наибольшее значение среди причин гипердиагностики хламидиоза с помощью РИФ, на наш взгляд, имеет субъективный характер учета результатов. Оценка специфичности свечения во многом определяется опытом и психофизиологическим состоянием исследователя. Поэтому проста в освоении этого метода обманчива, и к его реализации могут быть допущены только специалисты, прошедшие специальную подготовку.

Диатостжеские препараты, использозанньй для постановки РИФ

Рис. 2 Количество находок хламидий в РИФ с различными диагностический» препаратами по сравнению с ПЦР

Для повышения достоверности результатов РИФ представляется целесообразным использовать параллельно два препарата, применение которых

V)

характеризуется наибольшим несовпадением результатов - "Хламидиген" и

"ХлаМоноСкрин", причем, в качестве скринишового, ориентировочного

16

исследования с подтверждением положительного результата методом ПЦР. А при использовании только одного препарата, предпочтительнее выбор того, у которого выявлена наибольшая чувствительность и наибольшая прогностическая ценность отрицательного результата. Таким препаратом, по данным наших исследований, из трех примененных оказался "Хламидиген".

Одной из задач настоящей работы явилась сравнительная оценка РИФ и ПЦР с точки зрения возможности применения этих методов в условиях практического здравоохранения. Важнейшими параметрами, обеспечивающими применение диагностического метода в практике, являются:

- спектр диагностических возможностей;

- доступность получения и возможность длительной транспортировки исследуемого материала;

- диагностические характеристики (чувствительность, специфичность, прогностическая значимость положительного и отрицательного результатов);

- техническая простота воплощения и стоимость исследования.

Как РИФ, так и ПЦР, кроме диагностики хламидиоза, могут быть использованы и для диагностики других заболеваний с половым путем передачи. Спектр диагностируемых инфекций при этом определяется техническими возможностями метода и перечнем имеющихся на рынке диагностических препаратов. Однако, если в случае применения РИФ для выявления каждого потенциального возбудителя необходим отдельный препарат (мазок), то с помощью ПЦР индикация всех инфекционных агентов осуществляется в одной пробе, что несомненно более удобно.

Исследуемым материалом как для РИФ, так и для ПЦР служат со-скобы из уретры и цервикального канала, забираемые с помощью ложечки Фолькмана или специальных приспособлений (цитощеток). Кроме этого, пфг

17

диагностике хламидиоза у мужчин (а по последним данным и у женщин) возможно исследование осадка первой порции мочи. Этот способ не уступает по своей информативности исследованию соскобов, но является неинва-зивным методом исследования и удобен при проведении массовых, скрн-нинговых исследований, обследовании контактных. При диагностике простатитов с помощью ПЦР возможно исследование сока Простаты и спермы.

Недостатками ПЦР по сравнению с РИФ являются более жесткие требования к условиям транспортировки и срокам хранения препаратов. В то же время в условиях лаборатории материал может сохраняться достаточно долго, поэтому в случае необходимости возможно повторное его исследование, в том числе на более широкий круг возбудителей, что невозможно при использовании РИФ.

Ценность каждого метода прежде всего определяется его диагностическими достоинствами. Так, метод ПЦР помимо высокой чувствительности и специфичности отличается от РИФ объективной оценкой результатов исследования.

Следует подчеркнуть, что специфичность РИФ в значительной степени определяется квалификацией врача-лаборанта и его психофизиологическим состоянием в момент проведения исследования, так как оценка результата носит крайне субъективный характер. Врач делает заключение о специфичности свечения, оценивая его интенсивность, цвет и размеры частицы, размеры которой приближаются к разрешающей способности микроскопа. В связи с этим в зарубежной практике диагноз "хламидиоз", установленный с

о О

помощью РИФ, принято подтверждать с помощью культурального метода.

Несмотря на вышесказанное, РИФ - достаточно ценный метод, так как при несколько болЛ) низких показателях чувствительности и специфичности по сравнению с ПЦР, постановка этой реакции проста, не требует

18

больших материальных затрат и доступна практически любой диагностической лаборатории.

Таким образом, в условиях практического здравоохранения для диагностики хламвдиоза могут быть использованы как РИФ, так и ПЦР. Достоинствами РИФ является относительная дешевизна базового набора оборудования, быстрота получения ответа, доступность диагностических препаратов, возможность длительного хранения исследуемого материала без охлаждения. Однако, РИФ обладает более низкой по сравнению с ПЦР чувствительностью и специфичностью, оценка результатов носит нередко субъективный характер. Кроме того, с помощью этой реакции возможна диагностика лишь незначительной части заболеваний, передающихся половым путем, что требует параллельного применения других методов.

ПЦР является наиболее чувствительным и специфичным из доступных практическому здравоохранению методов диагностики хламвдиоза. С ее помощью в одной пробе могут быть выявлены и другие возбудители заболеваний, передающихся половым путем. В то же время использование этого метода требует больших начальных капиталовложений, организации доставки исследуемого материала в лабораторию в течение двух часов и может быть связано с определенны, ш трудностями при доставке диагностических наборов (холодовая цепь).

В связи с вышеизложенным ПЦР в первую очередь необходимо использовать в крупных медицинских учреждениях, оказывающих квалифицированную медицинскую помощь населению.

Комплексная схема диагностики урогенитальных инфекций должна включать выявление хламидий, микоплазм, уреаплазм, возбудителей вирусных инфекций с помощью ПЦР в сочетании с классическими методами М-

агностики венерических заболеваний и бактериологическим исследованием направленным на выявление условно-патогенных бактерий.

ВЫВОДЫ

1. При обследовании с помощью полимеразной цепной реакции 1245 человек (1025 женщин и 220 мужчин), обратившихся за медицинской помощью к урологам, гинекологам и венерологам, хламидии были обнаружены у 18,9% обследованных. У женщин возбудитель был выделен в 17,9% случаев, а у мужчин - в 23,6%.

2. У этих же пациентов с помощью полимеразной цепной реакции были выделены и другие возбудители урогенитальных инфекций. Мико-плазмы были обнаружены у 22,4% больных, уреаплазмы - у 18,6%, цитоме-галовирусы - у 14,7%, вирусы простого герпеса - у 8% обследованных. Различия между частотой обнаружения хламидий, уреаплазм и микоплазм оказались статистически недостоверны.

3. Показано, что при исследовании с помощью полимеразной цепной реакцией на выявление пяти возбудителей в одной пробе (хламщцш, мико-плазмы, уреаплазмы, цитомегаловирусы, вирусы простого герпеса), ассоциации хдамидий с другими микроорганизмами отмечаются в 54,5% случаев у мужчин и в 68,9% у женщин.

4. При анализе сочетания хламидий с прочими бактериальными агентами, вызывающими воспалительные заболевания урогенитальной сферы, установлено, что чаще всего хламидийной инфекции сопутствовало

о о

выделение гарднерелл как в монокультуре (19%), так и в ассоциациях (23%).

В связи с этим пациенты, инфицированные хламидиямф должны в обязательном порядке обслеДЪваться на весь комплекс урогенитальных инфекций.

5. Реакцию иммунофлуоресценции целесообразно применять в условиях практического здравоохранения только в качестве ориентировочного метода выявления хламидий. Получаемые при этом положительные результаты нуждаются в дополнительном подтверждении. При невозможности использования других методов диагностики необходимо подтверждать положительные результаты РИФ путем постановки этой реакции с другими диагностическими препаратами, что позволит повысить специфичность метода до 87,6%, а прогностическую значимость положительного результата до 42,9%.

6. Полимеразная цепная реакция является высокоэффективным методом диагностики хламидиоза и других урогенитальных инфекций в условиях практического здравоохранения. Наряду с высокой чувствительностью и специфичностью ее преимуществами по сравнешпо с реакцией иммунофлуоресценции являются возможность диагностики всего комплекса урогенитальных инфекций при обследовании одного образца и использования в качестве исследуемого материала мочи.

7. Комплексная схема микробиологической диагностики урогенитальных инфекций в связи с многообразием возможных возбудителей и пре-имуществешшм их обнаружением в сочетанием варианте должна включать использование как ускоренных методов диагностики (ПЦР, РИФ), так и классических методов, а также бактериологическое исследование, направленное" на выявление микроорганизмов, относящихся к представителям условно-патогенной микрофлоры.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

о

1. Эффективность некоторых методов выявления гарднерелл. // В сб.

Проблема оптимизации образа жизни и здоровья человека (тезисы докладов)

21

- СПЙ - 1995 - с. 212 (соавт. Бойцов А.Г., Порин А.А., Ластовка О.Н., Васильев О.Д.).

2. Diagnostics of urogenital infection in polimerase chain reaction. // 4 International Conference AIDS, Cancer and Related. - Спб - 1996 - с. 296 (соавт. Бойцов А.Г., Порин А.А., Белоусова Е.В.).

3. Диагностика урогенитальной инфекций полимеразной цепной реакцией. И Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (тезисы докладов) - М - 1997 - с. 396 (соавт. Бойцов А.Г., Порин А.А., Щербо'С.Н.).

4. Role of immunofluorescence test' for chlamidiasis diagnostics. // Russian Journal of HIV/AIDS and Related Problems. - Спб - 1997 - т.1 - с. 248 (соавт. Бойцов А.Г., Порин А.А., Ластовка О.Н.)