Сравнительная характеристика эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in vitro

Ударцева, Ольга Олеговна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительная характеристика эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in vitro
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in vitro"

На правах рукописи

УДАРЦЕВА ОЛЬГА ОЛЕГОВНА

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭФФЕКТОВ ФОТОДИНАМИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА КЛЕТКИ СОСУДИСТОЙ СТЕНКИ IN VITRO

03.03.04 - клеточная биология, цитология и гистология 03.03.01 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2011

1 7 MAP 2911

4840660

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Государственном научном центре Российской Федерации - Институте медико-биологических проблем РАН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор кандидат биологических наук

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор доктор биологических наук

Буравкова Людмила Борисовна Андреева Елена Ромуальдовна

Болтовская Марина Николаевна Романов Юрий Аскольдович

Ведущая организация: Факультет фундаментальной медицины

МГУ им. М.ВЛомоносова

Защита диссертации состоится марта 2011 г. в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 001.004.01 в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте морфологии человека РАМН (НИИМЧ РАМН) по адресу: 117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИМЧ РАМН

Автореферат разослан февраля 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, .

доктор медицинских наук уу^ Л.П. Михайлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Фотодинамическое воздействие (ФДВ) - неинвазивный двухкомпонентный метод, одним элементом которого является фотосенсибилизатор - вещество, повышающее чувствительность биологических тканей к свету, а другим - низкоинтенсивное лазерное излучение. В результате взаимодействия фотосенсибилизатора и света определенной длины волны происходит образование активных форм кислорода (АФК), которые, как известно, являются цитотоксичными агентами, вызывающими структурные повреждения клеток и приводящими к их гибели [Гельфонд, 2007; Castaño, Demidova and Hamblin, 2004].

Метод ФДВ был впервые описан в 60-х годах XX века и с тех пор активно применяется в клинической практике для лечения онкологических и некоторых воспалительных (ревматоидный артрит, акне, псориаз и др.) заболеваний [Миронов, 1996; Странадко, 2002; Чиссов, Соколов, Булгакова и Филоненко, 2003; Толстых, Дербенев, Кулешов и др., 2008; Жилова, Бутарева и Волнухин, 2010]. При этом эффективная элиминация опухолевых клеток основана на селективном накоплении в них фотосенсибилизатора за счет более высокой метаболической активности по сравнению с окружающими здоровыми клетками. Наличие погибших клеток и их фрагментов индуцирует процесс естественной тканевой репарации, заключающийся в элиминации разрушенного клеточного материала и представляющий собой последовательные фазы воспалительной реакции. Возможность запуска аналогичных изменений в очагах поражений сосудистой стенки создает предпосылки для использования этого подхода для предотвращения дальнейшего развития патологического процесса.

В последние годы был проведен ряд успешных доклинических исследований по лечению пациентов со стенозами периферических артерий с помощью ФДВ [Jenkins, Buonaccorsi, Raphael et al., 1999; Mwipatayi, Hockings, Hofman et al., 2008]. При попытках применения этого подхода для регрессии атеросклеротических поражений следует учитывать, что, в отличие от рестенозов, подобные патологические изменения артерий человека - результат сложного взаимодействия различных типов клеток: моноцитов-макрофагов, лимфоцитов, тучных клеток, эндотелия, гладкомышечных и субэндотелиальных стромальных клеток. Кроме того, в атеросклеротических поражениях нельзя однозначно указать клетки-мишени для ФДВ, так как одни и те же клетки, в зависимости от фазы атеросклеротического поражения, могут выполнять разнонаправленные функции (макрофаги - фагоцитоз липидов vs. синтез ферментов, разрушающих соединительную ткань). С другой стороны, в отличие от опухолей, в случае атеросклеротических поражений или рестенозов,

не ставится задача полной ликвидации какого-либо типа клеток. Достаточно приостановить интенсивность процесса, например, за счет снижения фагоцитарной активности макрофагов или пролиферативной активности субэндотелиальных стромальных клеток интимы.

Одной из проблем применения ФДВ является отсутствие «идеального» фотосенсибилизатора - все фотоактивные вещества, разрешенные в настоящее время к клиническому применению (порфирины, фталоцианины, хлорины и др.), обладают рядом недостатков (неоднородный химический состав, малая селективность накопления в клетках-мишенях, длительная повышенная кожная фоточувтвительность и др.). В связи с этим остро встает вопрос о разработке новых фотосенсибилизаторов с улучшенными свойствами, отвечающих современным требованиям: наличие интенсивной полосы поглощения в длинноволновой области спектра (650 им < X < 800 нм), высокий квантовый выход триплетного состояния, постоянный химический состав, высокая селективность накопления в тканях-мишенях, быстрое выведение из организма, низкая токсичность, устойчивость при хранении и введении в организм. К таким перспективным красителям относят Фталосенс® (новый фотосенсибилизатор ряда фталоцианинов) и про-фотосенсибилизатор 5-аминолевулиновую кислоту.

Таким образом, гетерогенность клеточной популяции сосудистой стенки, а также отсутствие «идеальных» фотоактивных веществ диктуют необходимость проведения специальных исследований, посвященных изучению участия различных клеток в процессах, которые могут происходить после ФДВ в артериальной стенке, адаптации имеющихся и поиску новых фотосенсибилизаторов, а также оптимизации условий ФДВ для применения при патологии сосудов.

Цель и задачи исследования

Целью данной работы является изучение эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки в модели in vitro.

В соответствии с указанной целью были поставлены следующие экспериментальные задачи1.

1) разработать тест-систему для изучения эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in \itro;

2) изучить динамику накопления и выведения фотосенсибилизатора Фотосенс© в макрофагах, эндотелиальных и субэндотелиальных стромальных клетках человека;

3) изучить влияние фотодинамического воздействия с использованием Фотосенса® и его компонентов на клетки сосудистой стенки человека;

4) исследовать влияние дозы фотодинамического воздействия на механизм клеточной гибели;

5) проанализировать влияние фотодинамического воздействия на функциональные свойства клеток сосудистой стенки;

6) сравнить эффекты фотодинамического воздействия с использованием экзогенных фотосенсибилизаторов и про-фотосенсибилизатора на эндотелиальные клетки, макрофаги и субэндотелиапьные стромальные клетки человека.

Научная новизна

Впервые проанализировано влияние фотодинамического воздействия (ФДВ) с использованием двух фотосенсибилизаторов (Фотосенс® и Фталосенс®) и одного про-фотосенсибилизатора (5-аминолевулиновая кислота) на эндотелиальные клетки, макрофаги и субэндотелиальные стромальные клетки» которые играют важнейшую роль в формировании поражений сосудистой стенки.

Получены новые данные, свидетельствующие о различной чувствительности клеток сосудистой стенки к ФДВ. Впервые показано, что цитотоксический эффект ФДВ определяется не только способностью клеток сосудистой стенки накапливать Фотосенс®, но и их функциональными особенностями, в частности, возможностью индукции в них активных форм кислорода. Установлено, что активация эндотелия увеличивает его устойчивость к ФДВ.

Впервые изучены эффекты низкоинтенсивного ФДВ на функциональные особенности клеток сосудистой стенки. Показано, что при использовании низких доз ФДВ (0,25 Дж/см2) происходит уменьшение экспрессии основных молекул межклеточной адгезии эндотелиальных клеток (УСАМ-1 и Е-селектина), а также значительно снижается адгезия мононуклеаров к ЮТа-активированному эндотелию. Впервые установлено, что ФДВ низкой интенсивности сопровождается снижением фагоцитарной активности макрофагов, уменьшением активности секретируемых ими матриксных металлопротеаз-2 и -9 и снижением уровня секреции интерлейкина-8, что свидетельствует об антивоспалительном воздействии низких доз ФДВ.

Впервые показано, что ФДВ с использованием 5-аминолевулиновой кислоты может обеспечить селективную элиминацию субэндотелиальных стромальных клеток интимы. Проведенные сравнительные исследования позволили установить, что среди выбранных фотосенсибилизаторов ФталосенсС® позволяет наиболее эффективно регулировать численность клеток сосудистой стенки.

Теоретическая и практическая значимость работы

Разработанная модель для изучения эффектов ФДВ in vitro позволяет подбирать и оптимизировать условия воздействия на различные клетки для выполнения экспериментальных и клинических задач. Выявлены механизмы реализации ФДВ различной интенсивности в эндотелиальных клетках, макрофагах и субэндотелиальных стромальных клетках. Данные, полученные в работе, существенно дополняют представления о влиянии ФДВ на клетки сосудистой стенки, а также позволяют расширить область применения этого метода.

Результаты исследования могут стать основой для предклинических испытаний, направленных на апробацию ФДВ в качестве одного из новых методов функциональной диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

Положения, выносимые на защиту

1. Фотодинамическое воздействие с использованием Фотосенса® позволяет эффективно элиминировать клетки сосудистой стенки, чувствительность которых к этому воздействию in vitro увеличивается в ряду макрофаги - субэндотелиальные стромальные клетки -эндотелиальные клетки и определяется их функциональными свойствами.

2. В условиях in vitro низкоинтенсивное фотодинамическое воздействие с использованием Фотосенса® оказывает противовоспалительный эффект на клетки сосудистой стенки, значительно модифицируя их функциональные свойства, что выражается в уменьшении их способности к адгезии, снижении фагоцитарной и секретирующей (матриксные металлопротеиназы-2, -9) активности.

3. Использование различных фотосенсибилизаторов позволяет оптимизировать условия воздействия в зависимости от поставленных задач: фотодинамическое воздействие с использованием 5-аминолевулиновой кислоты обеспечивает избирательную элиминацию субэндотелиальных стромальных клеток, в то время как Фталосенс®-ФДВ вызывает тотальную гибель всех клеток сосудистой стенки.

Апробация работы

Основные результаты и положения диссертации были доложены и обсуждены на: 7-й - 9-й Конференциях молодых учёных и специалистов, аспирантов и студентов, посвященных дню Космонавтики (Москва, 2008, 2010); 7-й Международной конференции «Молекулярная генетика соматических клеток» (Звенигород, Москва, 2009); 5-й Конференции молодых ученых «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008); 8-й Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва,

2010); 28ft, гФ ASLMS Annual Conference (USA, Kussimmee, 2008; Washington DC, 2009); 15л International Symposium on Atherosclerosis (Boston, 2009); 23th International Congress Laser Medicine Laser Florence 2009 (Florence, Italy, 2009); French-Russian-Belarussian Conference «Neurovascular impairment induced by environmental conditions: molecular, cellular and functional approach» (Angers, France, 2010); 9lh WALT Congress (Bergen, Norway, 2010); межлабораторной конференции НИИ морфологии человека РАМН 17.01.2011 г.

По теме диссертации опубликовано 19 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах из перечня ВАК РФ.

Диссертация апробирована на заседании секции Ученого совета ГНЦ РФ - ИМБП РАН "Космическая физиология и биология" 30.11.2010 г.

Связь работы с научными программами

Работа выполнена при частичной поддержке гранта МНТЦ № 2579, гранта РФФИ № 07-04-01504а и Госконтракта Минобрнауки№ 02.SI8.II.7I4I.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из глав: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы исследований», «Результаты и обсуждение», «Заключение», «Выводы» и «Список литературы». Текст диссертации изложен на 160 страницах, содержит 18 рисунков и 8 таблиц. Список литературы состоит из 289 цитируемых источников, из которых 42 - на русском и 247 - на иностранном языке.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований

В качестве моделей основных типов клеток, принимающих участие в развитии поражений сосудистой стенки, использовали нормальный и TNFa-активированный эндотелий пупочной вены человека (ЭК пупочной вены) 1-4 пассажей, эндотелий аорты человека (ЭК аорты) 1-4 пассажей, первичную культуру клеток субэндотелиального слоя аорты человека, мезенхимные стромальные клетки жировой ткани человека (лМСК) 1-10 пассажей и первичную культуру макрофагов (Мф) человека.

Для определения кинетики накопления Фотосенса® (ФС®) клетки инкубировали с фотосенсибилизатором в конечной концентрации 10 мкг/мл от 1 до 72 ч и лизировали 0,1 М NaOH. В полученном лизате определяли интенсивность флуоресценции ФС® (X возбуждения = 608 нм, X «пускания = 687 им) и концентрацию белка. Концентрацию ФС® в лизате определяли по калибровочному графику, полученному при измерении интенсивности флуоресценции в

пробах с известными концентрациями ФС®. Внутриклеточное содержание ФС® определяли как количество ФС® на 1 мг клеточного белка [нг/мг белка]. Для определения кинетики выведения клетки инкубировали с ФС® в течение 24 ч, затем производили смену среды, инкубировали в ростовой среде без ФС® от 1 до 48 ч и определяли содержание ФС® в клетках.

Для проведения ФДВ в среду культивирования добавляли ФС® (10 мкг/мл), Фталосенс® (ФтС®) (2 мкг/мл) и 5-аминолевулиновую кислоту (АЛА) (2 мМ) (Рис. 1). Через 24 ч краситель отмывали, клетки облучали различными дозами от 0,25 до 50 Дж/см2. Облучение производили лазерным аппаратом для ФДВ «Азор - ФДТ», длина волны облучения составляла 675 нм для ФС®, 692 нм для ФтС® и 633 нм для АЛА. Эффект ФДВ анализировали через различные сроки (1-24 ч) после облучения.

Рисунок 1. Химические формулы используемых в работе фотосенсибилизаторов (R= Н или R= SO)Na). А - Фотосенс®; Б-Фталосенс®; В - Ч-аминолевулиновая кислота.

АФК в клетках после воздействия детектировали с помощью дихлордигидрофлуоресцеиндиацетата (10 мкг/мл), который добавляли в среду культивирования непосредственно после облучения. Влияние ФДВ на функциональную активность митохондрий и лизосом оценивали через 3 ч после облучения с помощью потенциал-зависимого красителя MitoTracker Red 580 и pH-зависимого красителя LysoTracker Oreen DND-26 соответственно. Для определения способа клеточной гибели после воздействия использовали набор AnnexinV-FITC - PI. Кроме того, апоптотические клетки выявляли иммуноцитохимически с использованием антител к активной каспазе 3, а также цитохимически с помощью набора NucView 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells для определения субстратной активности каспазы 3. Цитотоксический эффект ФДВ оценивали методом МТТ-тесга через 24 ч после облучения.

Влияние низкоинтенсивного ФДВ на функциональные свойства эндотелия выявляли путем оценки уровня экспрессии молекул адгезии (ICAM-1, VCAM-1, РЕСАМ-1 и Е-селектина) методом проточной цитофлуориметрии, а также путем изучения адгезии мононуклеаров периферической крови к ЭК до и после воздействия. Для изучения адгезии

свежевыделенные мононуклеары предварительно метили зеленым флуоресцентным красителем DiO. Окрашенные мононуклеары инкубировали с ЭК в течение 30 мин, затем удаляли неадгезированные лейкоциты. Оценку адгезивных свойств эндотелия проводили путем подсчета количества адгезировавших мононуклеров, не менее чем 1000 ЭК.

Для определения влияния ФДВ низкой интенсивности на функциональные свойства Мф оценивали секрецию ИЛ-lß, -2, -6 и 8 этими клетками, их фагоцитарную активность и активность синтезируемых ими матриксных металлопротеаз-2 и -9 (ММП-2, -9). Активность матриксных протеиназ выявляли методом желатиновой зимографии [Рыбко, Книжник, Каинов и др., 2008]. Фагоцитарную активность макрофагов определяли с помощью флуоресцентных частиц латекса FluoSpheres Red диаметром 1 мкм, которые добавляли к Мф в концентрации 2х107 частиц на 1 мл ростовой среды на 2 ч. Для определения фагоцитарной активности вычисляли фагоцитарный индекс путем подсчета количества фагоцитирующих Мф. В каждом случае анализировали не менее 1000 клеток. Подсчет производили с помощью программы Sigma ScanPro 5. Секрецию цитокинов Мф оценивали методом твердофазного иммуноферментного анализа («сэндвич»-методика) с помощью набора FlowCytomix human Thl/Th2 11 Plex на приборе FACS Calibur (Becton Dickinson, США).

Статистическую обработку результатов проводили с использованием программ "Excel" и "Statistica 7.0" для WinXP. При анализе данных рассчитывали среднегрупповое значение параметра и значение стандартного отклонения. Статистическую достоверность различий между двумя группами данных оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (р<0,01).

Результаты исследования и их обсуждение Влияние фотодинамического воздействия с использованием Фотосенса® на клетки сосудистой стенки

Одним из важнейших факторов, определяющим чувствительность клеток к ФДВ, является способность клеток аккумулировать фотосенсибилизатор. В работе было показано, что исследуемые клетки накапливают разное количество ФС®: наибольшее количество красителя накапливалось в Мф, а наименьшее - в ЭК (Рис. 2 А, Б). Краситель был локализован преимущественно в перинуклеарной области диффузно, однако в некоторых клетках (в основном, в Мф) в цитоплазме выявлялись гранулярные структуры, содержащие фотосенсибилизатор. Для идентификации гранулярных структур, содержащих краситель, использовали LysoTracker Green. Анализ полученных данных показал, что большая часть таких гранул являлась лизосомами (Рис. 2 В), что коррелирует с данными других исследователей по внутриклеточному распределению 3-замещенных фталоцианинов [Peng,

Farrants, Madslien et al., 1991; Bonneau, Morliere and Brault, 2004]. Остальные гранулярные структуры, по-видимому, представляли собой комплекс Гольджи и митохондрии [Fabris, Valduga, Miotto et а!., 2001]. Во всех исследованных клетках характер накопления красителя описывался многофазной кривой, состоящей из чередующихся участков быстрого накопления и плато (или медленного накопления) (Рис. 2 А). Основное количество красителя в клетках сосудистой стенки накапливалось во время 2-й экспоненциальной фазы, продолжительность которой у ЭК была около 25 ч, у лМСК и Мф - 18 ч. Различия в кинетике накопления ФС® в ЭК, лМСК и Мф объясняются, по-видимому, функциональными особенностями этих клеток: основная функция ЭК в сосудах осуществляется преимущественно путем трансцитоза, в то время как для Мф характерен активный эндоцитоз.

Кинетика выведения ФС© из ЭК, лМСК и Мф практически не различалась. Во всех исследованных клетках снижение внутриклеточного содержания фотосенсибилизатора носило двухфазный характер (Рис. 3). Полученная закономерность выведения красителя коррелировала с динамикой изменения уровня ФС® в крови при проведении ФДВ [Скидан, Бобрускин, Гуляев и др., 2001; Смирнова, Кубасова, Макарова и др., 2003]. Эти данные позволяют предположить, что в первые 6 ч фотосенсибилизатор выходит из клеток пассивно по градиенту концентрации, а затем активируются некие механизмы, препятствующие дальнейшему выходу красителя из клеток и обеспечивающие поддержание его постоянного уровня в течение длительного времени (Рис. 3).

ФДВ - двухкомпонентный метод, отдельные составляющие которого неизбирательно воздействуют на все клетки и ткани, поэтому чрезвычайно важно, чтобы ФС® и лазерное излучение сами по себе не оказывали повреждающего воздействия. В работе было установлено, что ФС® в концентрации 10 мкг/мл при 24-часовой инкубации не оказывает влияния на жизнеспособность исследованных клеток. При этом накопление фотосенсибилизатора активирует лизосомальный компартмент ЭК и клеток интимы и не изменяет функциональные свойства лизосом у Мф. Влияние накопления ФС® на функционирование митохондрий также не было установлено. Второй компонент ФДВ -лазерное облучение (2-50 Дж/см2) - не оказывал повреждающего воздействия на клетки интимы и Мф. Эндотелий был менее устойчив к этому компоненту ФДВ: только низкие дозы излучения (2 Дж/см2) не снижали жизнеспособность ЭК, в то время как высокие дозы (10-50 Дж/см2) обладали выраженным цитотоксическим эффектом (рис. 4 А). Представленные в литературе данные позволяют предположить, что цитотоксический эффект связан, в первую очередь, с чувствительностью клеток к локальной гипертермии, возникающей при использовании высоких доз облучения [Tate, Yoshiba, Yoshiba et al., 2006].

1750 1500 1250 1000 750 500 250

А 2000

1800

X 1400

<ч 1200

Ю 1000

Е 800

о 600

Е 400

200

-Г-

о а

30 40 50 Время инкубации с ФС, ч

>-Мф О лМСК д эк

т 1

Ш 1

11 1

эндотелий лМСК макрофаги

Рисунок 2. Накопление ФС® клетками сосудистой стенки. А — кинетика накопления ФС® (10 мкг/мл) клетками сосудистой стенки (M±SD, п=3); Б - сравнение накопления ФС® клетками сосудистой стенки (M+SD, * - р<0,01, п=3); В, Г - частичная колокализация ФС® (красный) с лизосомами (LysoTracker Green, зеленый) в Мф, стрелки указывают на места колокализации (желтый). Данные репрезентативного эксперимента.

900 800 700 600 500 400 300 200 100 0

й L:^: _ --щ." "___

—♦

7 " '

0 10 20 30 40 50

Время инкубации без ФС, ч

—» - Мф □ лМСК д эк Рисунок 3. Кинетика выведения ФС® (10 мкг/мл) клетками сосудистой стенки (МьЩ п=3)

Эндотелий Клетки интимы Макрофаги

■ без воздействия ■ ФС®, 10 мкг/мл И2Дж/см2 о10Дж/см2 П50Дж/см2

Эндотелий Клетки интимы Макрофаги

Рисунок 4. Влияние ФДВ и его компонентов на жизнеспособность клеток сосудистой стенки (МТТ-тест). А - цитотоксический эффект ФС® (10 мкг/мл, 24-часовая инкубация) и лазерного излучения различной интенсивности; Б - сравнение чувствительности клеток сосудистой стенки к ФДВ. Усредненные данные 5-ти независимых экспериментов (М+Б.V; * - р<0,01, различия достоверны по сравнению с контролем, критерий Манна-Уитни).

ФДВ нацелено на элиминацию клеток, поэтому в первую очередь было изучено его влияние на жизнеспособность эндотелия, клеток интимы и Мф. Было показано, что ФДВ снижает жизнеспособность клеток сосудистой стенки дозозависимым образом: высокие дозы облучения оказывают более сильное повреждающее воздействие, чем средние и низкие (Рис. 4 Б). Для сравнения чувствительности клеток к ФДВ использовали ЫЗзд -дозу, при которой погибает 90% клеток. для эндотелия, клеток субэндотелиальной интимы и Мф

составляла 2, 8 и 20 Дж/см2 соответственно. Таким образом, наиболее устойчивыми к этому воздействию были Мф, а наименее устойчивыми - ЭК.

Основным действующим компонентом ФДВ являются АФК, оказывающие повреждающее воздействие на различные клеточные структуры. Облучение исследуемых

клеток, накопивших ФС®, приводило к образованию внутриклеточных АФК (Рис. 5), однако их уровень в Мф был значительно меньше, чем в клетках интимы и ЭК, несмотря на высокое внутриклеточное содержание ФС® в них (Рис. 2 Б). При изучении влияния ФДВ на состояние клеточных органелл было показано, что подобное воздействие приводит к одновременному снижению функциональной активности митохондрий (Рис. 6 А, Б) и лизосом (Рис. 6 В), что выражалось как в уменьшении количества окрашенных зондами клеток, так и в снижении интенсивности флуоресценции зонда на клетку.

На первый взгляд, полученные результаты по образованию АФК, а также по эффективности ФДВ противоречат нашим данным по накоплению ФС® в исследуемых клетках. Однако следует учитывать, что чувствительность клеток к образующимся АФК определяется, в первую очередь, активностью антиоксидантных систем и экспрессией белков теплового шока. При этом в связи с функциональными особенностями активность антиоксидантных систем в ЭК сравнительно мала [Meilhac, Zhou, Santanam and Parthasarathy, 2000], а в Мф - достаточна высока [Pietarinen-Runtti, Lakari, Raivio and Kinnula, 2000], что, по-видимому, и объясняет указанный феномен.

При применении фотодинамического подхода in vivo важно, каким способом будут гибнуть клетки, поскольку массовая некротическая гибель, в отличие от апоптоза, обычно сопровождается развитием воспалительной реакции, что является крайне нежелательным для сосудистой стенки. Было показано, что существует прямая корреляция между дозой облучения и типом клеточной гибели после ФДВ: низкие дозы воздействия (0,5-2 Дж/см2 для ЭК и 2-5 Дж/см2 для клеток интимы и Мф) индуцируют гибель клеток преимущественно путем апоптоза (Рис. 7 Б), в то время как высокие и средние - путем некроза (Рис. 7 В). При этом было установлено, что апоптотическая гибель клеток сосудистой стенки после воздействия протекает по каспаз-зависимому пути и сопровождается активацией каспазы 3.

Таким образом, основываясь на полученных данных, можно заключить, что ФДВ может оказаться интересным и перспективным подходом для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, однако в связи со сложностью объекта воздействия необходимо дальнейшее проведение экспериментальных и клинических исследований.

Влияние фотодинамического воздействия низкой интенсивности на функциональные свойства клеток сосудистой стенки

Как было отмечено, при лечении сосудистых патологий не обязательно полностью элиминировать клетки, участвующие в развитии поражений, - достаточно изменить их функциональные свойства, уменьшив провоспалительную активность.

Рисунок 5. Образование АФК в клетках субэндотепиальной интимы после ФДВ. А - АФК в клетках до облучения; Б АФК в клетках после ФДВ I Дж/см2. Для регистрации внутриклеточных А ФК использовали Н20СР0А.

LysoTracker Green

Рисунок 6. Влияние ФДВ на состояние митохондрий (окраска MitoTracker Green) и лизосом (окраска LysoTracker Green) клеток субэндотелиалъной интимы. А - митохондрии в клетках без воздействия; Б - митохондрии в клетках после ФДВ 1 Дж/см2; В - влияние ФДВ (1 Дж/см2) на активность лизосом, проточная цитофлуориметрия (синим цветом обозначена флуоресценция зонда в клетках без воздействия; зеленым - в клетках, инкубированных 24 ч с ФС®, красным - в клетках после ФДВ 1 Дж/см2).

Рисунок 7. Влияние дозы облучения на способ клеточной гибели макрофагов (окраска Аннексии V - Пропидий Йодид). А - Мф без воздействия; Б - Мф после ФДВ 2 Дж/см2; В -Мф после ФДВ 10 Дж/см2.

В связи с этим во второй части работы было изучено влияние нзкоинтенсивного ФДВ на функциональные свойства ЭК и Мф, которым отводят ключевую роль в ремоделировании сосудистой стенки. В первую очередь, было установлено, что воздействие дозами 0,25 и 0,5 Дж/см2 практически не оказывает влияния на жизнеспособность исследуемых клеток, что позволило использовать эти дозы в дальнейших экспериментах.

При изучении влияния низкоинтенсивного ФДВ па адгезивные свойства ЭК было показано, что низкие дозы ФДВ снижают адгезию мононуклеаров к активированному эндотелию в три раза (Рис. 8 А) и не оказывают влияния на взаимодействие неактивированных ЭК с лейкоцитами. Подобное изменение степени адгезии мононуклеаров к эндотелию сопровождалось уменьшением экспрессии VCAM-1 и Е-селектина TNFa-активированными ЭК в 1,42 и 1,23 раза соответственно (Рис. 8 Б).

Оценка функциональной активности Мф показала, что облучение клеток, нагруженных ФС®, дозами 0,25 и 0,5 Дж/см2 приводит к существенному уменьшению уровня секреции ИЛ-8 (Рис. 9 А) и снижению их фагоцитарного индекса в 1,5 и 2,4 раза соответственно (Рис. 9 Б). Кроме того, низкоинтенсивное ФДВ уменьшает экспрессию и протеолитическую активность как ММП-9, так и ее предшественника - про-ММП-9 (Рис. 9 В).

В настоящее время эффекты низких доз ФДВ остаются малоизученными. Однако из единичных работ известно, что АФК (в малых концентрациях), образующиеся в результате такого воздействия, выполняют преимущественно роль внутриклеточных посредников в различных сигнальных каскадах [Griendling, Sorescu, Lassegue and Ushio-Fukai, 2000; Martindale and Holbrook, 2002; Valko, Leibfritz, Moncol et ah, 2007]. При этом основной мишенью таких радикалов являются тирозин- и протеинкиназы, опосредующие экспрессию и транслокацию специфических транскрипционных факторов - NF-кВ и АР-1. Поскольку указанные факторы транскрипции принимают непосредственное участие в регуляции экспрессии молекул межклеточной адгезии, интерлейкинов и секретируемых протеолитических ферментов, можно предположить, что эффект низких доз ФДВ обусловлен специфическим ингибированием этих факторов в результате образования АФК. Уменьшение фагоцитарной активности после низкоинтенсивного ФДВ связано, вероятно, с перестройкой цитоскелета и перекисным окислением липидов в мембранах в результате воздействия образующихся АФК.

Таким образом, ФС®-ФДВ с использованием очень низких доз существенно изменяет функциональные свойства ЭК и Мф, уменьшая их провоспалительую активность.

g 400

га X 350

0 г 300

s па

700

150

а! 100

s 0

воздействия

ФДВ 0,25 TNFa+ФДВ 0.25 Дж/см2 Дж/см2

□ без воздействия В ФДВ 0,25 Дж/см2 ВТ^а И ТМРа+ФДВ 0,25 Дж/см2

Рисунок 8. Влияние низкоинтенсивного ФДВ (0,25 Дж/см2) на функциональные свойства эндотелия. А - влияние низких доз ФДВ на адгезию мононуклеаров периферической крови к ЭК (п=3; М+ЯV; * # - р<0,01, критерий Манна-Уитни); Б - влияние ФДВ низкой интенсивности на экспрессию молекул адгезии ЭК, данные проточной цитофлуориметрии (п=3).

9000 vwl

• 8000 <>%<И1

| 7000

S 6000

h 5000 4000

s. t s J 3000 2000 1000 ■''jâ

б*з воздействия ФДВ 0,26 Дж/ом2

^ 100.00 90,00

S 60,00

5 70.00

40,00 30.00 20,00

без воздействия ФДВ 0,25 Дж/см2 ФДВ 0,5 Дж/см2

ФДВ 0.5

Дж(см2

Рисунок 9. Влияние низкоинтенсивного ФДВ на продукцию IL-8 (А), фагоцитарную активность Мф (Б) и протеолитическую активность секретируемой ими ММП-9 (В) (п=3; M+SD; *-р<0,01, критерий Манна-Уитни).

Сравнение эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки при использовании Фотосенса®, Фталосенса® и 5-аминолевулш10вой кислоты

В качестве фотосенсибилизатора для исследований первоначально был выбран ФС®. Однако, несмотря на неоспоримые преимущества, этот краситель обладает рядом недостатков, одним из которых является длительное выведение из подкожно-жировой клетчатки, что обуславливает повышенную кожную фоточувствителыюсть после воздействия. В связи с этим в данной части работы сравнивали эффективность ФДВ при использовании двух фотосенсибилизаторов ряда фталоцианинов (ФС® и ФтС®) (Рис. 1 А, Б) и одного про-фотосенсибилизатора (АЛА) (Рис. 1 В) на клетки сосудистой стенки, поскольку проведение подобных скрининговых исследований позволяет оптимизировать условия воздействия в зависимости от поставленных задач.

5-аминолевулиновая кислота (АЛА) сама по себе не обладает фотоактивными свойствами, однако при ей введении в организм в клетках происходит эндогенное образование и накопление фотосенсибилизатора - протопорфирина IX (Пп1Х). Соответственно, эффективность ФДВ при ей использовании, будет определяться количеством накопленного в клетках Пп1Х. В работе было показано, что способность исследуемых клеток аккумулировать Пп1Х значительно различается: лМСК аккумулируют наибольшее количество фотосенсибилизатора, в то время как в ЭК накопление Пп1Х практически не детектируется (Рис. 10). Способность Мф накапливать краситель зависела от индивидуальных особенностей доноров: клетки от некоторых доноров достаточно эффективно накапливали Пп1Х (Мф+), в то время как от других - не накапливали вообще (Мф-). Поскольку Пп1Х является промежуточным продуктом биосинтеза гема, способность ЭК, лМСК и Мф аккумулировать эндогенный фотосенсибилизатор определяется, по-видимому, различной активностью ферментов цепи биосинтеза гема в этих клетках [Hillegersberg, Berg, Kort et al., 1992; Castaño, Demidova and Hamblin, 2004]. Кроме того, на способность клеток накапливать Пп1Х могут влиять и другие факторы: выделение клетками N0, экспрессия молекул-переносчиков ß-аминокислот и пролиферативная активность [Rebeiz, Rebeiz, Arkins et al., 1993; Okimura, Fujita, Ogino et al., 2007].

Изучение «темновой» цитотоксичности выбранных веществ показало, что ни ФС®, ни ФтС® в концентрациях 2-10 мкг/мл не оказывают цитотоксического воздействия на клетки сосудистой стенки, в то время как 10 мМ АЛА значительно снижает жизнеспособность ЭК и клеток интимы. Дальнейшее определение зависимости эффективности ФДВ от концентрации фотосенсибилизатора позволило подобрать оптимальные концентрации красителей, позволяющие обеспечить высокую эффективность ФДВ для элиминации клеток: 10 мкг/мл

для ФС®, 2 мкг/мл для ФтС® и 2 мМ для АЛА. Выбранные концентрации использовали в дальнейших экспериментах.

В рам» инкубации клеток е АЛА. ч

—О—Мф(-) -0-Мф(+) • Л -ЛМСК -о - эк Рисунок 10. Накопление протопорфирина IX в клетках сосудистой стенки.

При сравнении эффективности воздействия с использованием ФС®, ФтС® и АЛА на клетки сосудистой стенки (Рис. 11) было показано, что цитотоксический эффект ФтС®-ФДВ значительно выше, чем ФС®-ФДВ. При этом воздействие с использованием безметального фталоцианина позволяет наиболее эффективно элиминировать не только эндотелий и клетки интимы, но и Мф. АЛА-ФДВ позволяло достаточно эффективно элиминировать лМСК и Мф (+), при этом устойчивость Мф к такому воздействию была значительно выше, чем у клеток интимы: LD90 для них составляла 50 Дж/см2 и 10 Дж/см2 соответственно (Рис. 11 Б, В). ЭК и Мф (-) оказались абсолютно не чувствительными к АЛА-ФДВ (Рис. 11 А, Г)- Исходя из литературных данных, можно предположить, что описанная эффективность ФтС®-ФДВ обусловлена не столько способностью клеток накапливать значительное количество этого фотосенсибилизатора, сколько очень высокой фотоактивностью этого вещества [Якубовская, Морозова, Кармакова и др., 2004]. В случае АЛА-ФДВ полученные результаты хорошо согласуются с данными по способности клеток накапливать эндогенный фотосенсибилизатор (Рис. 10), а также с данными других исследователей [Iinuma, Farshi, Ortel and Hasan, 1994; SpOrri, Chopra, Egger et al., 2001].

Таким образом, в данной части работы было показано, что ФДВ с использованием экзогенных и эндогенных фотосенсибилизаторов может применяться для решения различных поставленных задач, однако для этого требуется более глубокое изучение эффектов такого воздействия на разные типы клеток.

600

без 0,5Дж/см2 1 Дж/см2 2Дж/см2 5Дж/см2 10Дж/см2 воздействия

■ ФС®, 10 мкг/мл в ФтС®, 2 мкг/мл а5-АЛА2мМ

5 Дж/см2 10 Дж/см2 ЕЗ 5-АЛД 2 м М

без 0,5 Дж/см2 1 Дж/см2 2Дж/см2 воздействия

■ ФС®, 10 мкг/мл В ФтС®, 2 мкг/мл

ж 100

V ф

5 60 а

| 40

20 0

без 2Дж/см2 5Дж/см2 10Дж/см2 20Дж/см2 50Дж/ем2

воздействия

■ ФС®, 10 мкг/мл Ш ФтС®, 2 мкг/мл а5-АПА,2мМ

Рисунок 11. Сравнение эффективности ФДВ при использовании ФС®, ФтС® и АЛА. А -ФДВ на ЭК; Б - ФДВ на субэндотелиалъные стромальные клетки; В - ФДВ на Мф (+); Г - ФДВ на Мф (-). Приведены усредненные данные 5-ти независимых экспериментов (М+5Х); *, #, А - р<0,01, различия достоверны по сравнению с контролем, критерий Манна-Уитни).

выводы

1. Разработаны и успешно апробированы клеточные модели для изучения эффектов фотодинамического воздействия in vitro, подобраны условия для обеспечения эффективности (изменение функциональных свойств клеток или клеточная гибель) и специфичности воздействия.

2. Показано, что среди клеток сосудистой стенки макрофаги обладают наибольшей способностью накапливать Фотосенс®, а эндотелиальные клетки - наименьшей. Характер выведения фотосенсибилизатора не зависит от функциональных особенностей исследуемых клеток и практически не отличается у эндотелия, макрофагов и перицитоподобных клеток.

3. Накопление Фотосенса® и лазерное облучение по отдельности не оказывают влияния на жизнеспособность клеток сосудистой стенки, при этом накопление Фотосенса ® активирует лизосомальный компартмент эндотелиальных и перицитоподобных клеток и не изменяет функциональные свойства митохондрий.

4. Фотодинамическое воздействие приводит к дозозависимому снижению жизнеспособности клеток сосудистой стенки, а также к снижению активности митохондрий и лизосом. Чувствительность клеток сосудистой стенки к фотодинамическому воздействию уменьшается в ряду эндотелиальные клетки -субэндотелиальные стромальные клетки - макрофаги. Цитотоксический эффект воздействия определяется, в первую очередь, количеством образующихся активных форм кислорода, которое зависит не только от количества накопленного фотосенсибилизатора, но и от функциональных особенностей клеток. Активация эндотелиальных клеток TNFa увеличивает их устойчивость к фотодинамическому воздействию.

5. Механизм гибели макрофагов, эндотелиальных и субэндотелиальных стромальных клеток после фотодинамического воздействия определяется дозой облучения и функциональными особенностями исследуемых клеток: высокие дозы облучения индуцируют некроз, в то время как низкие - апоптоз.

также уменьшает экспрессию VCAM-1 и Е-селектина активированными эндотелиальными клетками в 1,42 и 1,23 раза соответственно. Облучение низкими дозами макрофагов, нагруженных Фотосенсом®, приводит к снижению их фагоцитарной активности и уровня секреции интерлейкина-8.

7. Эффекты фотодинамического воздействия с использованием эндогенных и экзогенных фотоактивных веществ на клетки сосудистой стенки значительно различаются. Фотодинамичское воздействие с фотосенсибилизатором Фталосенсом® позволяет наиболее эффективно регулировать численность исследуемых клеток всех типов, в то время как ФДВ с использованием 5-аминолевулиновой кислоты обеспечивает избирательную элиминацию клеток субэндотелиального слоя, которые играют важнейшую роль в формировании поражений сосудистой стенки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Андреева ЕР, Ударцева О.О., Возовиков ИН, Кузьмин СГ, Тарарак ЭМ. Изучение in vitro фотодинамического воздействия на возможные клетки-мишени сосудистой стенки.//Кардиологический вестник. -2008. - Т. 15. -№2. - С. 12-15.

2. Андреева Е.Р., Ударцева О.О., Кузьмин С.Г., Возовиков И.Н., Тарарак Э.М. Влияние фотодинамического воздействия на эндотелиальные клетки в модели in vitroM Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 148. - № 2. - С. 228-231.

3. Ударцева О.О., Андреева Е.Р., Рылова Ю.В., Буравкова Л.Б. Влияние фотодинамически индуцированной генерации АФК на состояние митохондрий и лизосом культивируемых мезенхимальных стромальных клеток человека.// Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2010. - Т. 5. - № 4. - С. 38-42.

4. Ударцева О.О., Андреева ЕР, Буравкова ЛБ, Тарарак ЭМ. Изучение цитотоксических эффектов ФДВ на макрофаги in vitro.ll Авиакосмическая и экологическая медицина. -2010,-№4,- С. 23-27.

5. Udartseva О.О., Andreeva ER, Buravkova LB, Tararak EM. Photodynamic Effects of three different photosensitizers on human macrophages.// AIP Conference Proceedings. - 2010. -Vol. 1226. - P. 59-68.

6. Ударцева O.O. Влияние внутриклеточного накопления липидов на эффективность фотодинамического воздействия на культивируемые макрофаги человека. // VII Конференция молодых специалистов, аспирантов и студентов, посвященная Дню космонавтики, г. Москва, 2008. С. 67.

7. Ударцева О.О., Гринаковская О.С. Активация TNFa повышает устойчивость эндотелиальных клеток к фотодинамическому воздействию. // V Конференция молодых ученых с международным участием: «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», г. Москва, 2008. С. 128.

8. Ударцева О.О., Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б. Влияние генерации в мезенхимальных стромальных клетках АФК на состояние митохондрий и лизосом. // Всероссийская научная школа-конференция для молодежи «Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные и клинические исследования», г. Москва, 2009, С. 74-75.

9. Ударцева О.О., Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б. Влияние культивирования в среде с различным содержанием 02 на чувствительность МСК к повреждающему

воздействию. // VII Международная конференция «Молекулярная генетика соматических клеток». Звенигород, Москва, 2009. С. 82-83.

10. Ударцева О.О. Изучение эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки. // IX Конференция молодых специалистов, аспирантов и студентов, посвященная Дню космонавтики, г. Москва, 2010. С. 74-75.

11. Ударцева О.О., Андреева Е.Р., Буравкова Л.Б., Тарарак Э.М. Влияние фотодинамического воздействия на макрофаги. // VIII Всероссийская конференция по патологии клетки, г. Москва, 2010. С. 259-260.

12. Andreeva E.R., Udartseva О.О., Tararak Е.М., Kuzmin S.G., Vozovikov I.N. Human monocyte/macrophages in vitro model for screening of photodynamic effects. // 7& ICCAD -International Congress on Coronary Artery Disease: From Prevention to Intervention, Venice, Italy, October 7 -10,2007, P. 1285.

13. Andreeva E.R., Udartseva O.O., Tararak E.M., Kuzmin S.G., Vozovikov I.N. In vitro study of photodynamic effects on vascular cells. // 28th ASLMS Annual Conference April 2-6, 2008, Kissimmee, Florida, USA.

14. Udartseva O.O., Andreeva E.R., Buravkova L.B., Kuzmin S.G., Vozovikov I.N., Tararak E.M. Photodynamic Effects of three different photosensitizers on human macrophages. 29lh ASLMS Annual Conference April 2-5,2009, Washington DC, USA.

15. Udartseva O.O., Andreeva E.R., Buravkova L.B., Tararak E.M., Vozovikov I.N. PDT Application for experimental atherosclerosis in rabbits. II 15л International Symposium on Atherosclerosis. Atherosclerosis Suppl. 2009, 10 (2), 250.

16. Udartseva O.O., Andreeva E.R., Buravkova L.B., Tararak E.M., Vozovikov I.N. Photodynamic effects of three different photosensitizers on human arterial smooth muscle cells. // 15й International Symposium on Atherosclerosis. Atherosclerosis Suppl. 2009, 10 (2), 251.

17. Udartseva O.O., Andreeva E.R., Buravkova L.B., Tararak E.M. Photodynamic Effects of three different photosensitizers on human macrophages. // 23th International Congress Laser Medicine Laser Florence 2009: Lasers in Medical Science. Florence, Italy. 2009. P. 37-38.

18. Udartseva O.O., Andreeva E.R., Buravkova L.B., Tararak E.M. Photodynamically induced impairment of vascular cells. // French-Russian-Belarussian Conference «Neurovascular impairment induced by environmental conditions: molecular, cellular and functional approach». Angers, France. 2010. P. 42.

19. Udartseva O.O., Andreeva E.R., Buravkova L.B. Effects of low-fluence PDT on human macrophages. // 9th WALT Congress. Bergen, Norway. 2010.

Список используемых сокращений:

ТОТа - фактор некроза опухолей а АЛА - 5-аминолевулиновая кислота АФК - активные формы кислорода ИЛ - интерлейкин

ММП - матриксные металлопротеазы

лМСК - мезенхимные стромальные клетки жировой ткани человека

Мф - макрофаги

Пп1Х - протопорфирин IX

ФДВ - фотодинамическое воздействие

ФС® - Фотосенс®

ФтС® - Фталосенс®

ЭК - эндотелиальные клетки.

Подписано в печать:

15.02.2011

Заказ № 4986 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ударцева, Ольга Олеговна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Патология сосудистой стенки

1.1.1. Заболевания артерий и их этиология

1.1.2. Клетки сосудистой стенки и их участие в реакциях на повреждение

1.1.2.1. Роль эндотелия в патологических изменениях сосудистой стенки

1.1.2.2. Роль клеток субэндотелиального слоя артерий в развитии 24 поражений сосудистой стенки

1.1.2.3. Роль макрофагов в формировании изменений сосудистой стенки

1.1.3. Значение процессов клеточной гибели в развитии патологии 31 сосудистой стенки

1.1.4. Использование моделей для изучения функциональных 33 особенностей клеток, участвующих в патологическом ремоделировании сосудистой стенки

1.2. Фотодинамическое воздействие

1.2.1. Понятие фотодинамического воздействия и его компоненты

1.2.2. Механизмы фотодинамического воздействия

1.2.3. Взаимодействие фотосенсибилизаторов и продуктов их активации с 44 клетками-мишенями

1.2.4. Проблемы и преспективы использования фотодинамического 49 воздействия для диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Используемое оборудование, материалы и реактивы

2.1.1. Оборудование

2.1.2. Химические реагенты

2.1.3. Антитела

2.1.4. Клеточные культуры

2.2. Приготовление сред для культивирования клеток

2.2.1. Приготовление полной среды

2.2.2. Приготовление среды для культивирования эндотелиальных клеток

2.2.3. Приготовление среды для криоконсервации клеток

2.3. Выделение и культивирование клеток сосудистой стенки человека

2.3.1. Получение первичной культуры эндотелиальных клеток пупочной 56 вены человека

2.3.2. Получение первичной культуры эндотелиальных клеток аорты 57 человека

2.3.3. Получение первичной культуры клеток субэндотелиального слоя 57 аорты человека

2.3.4. Получение первичной культуры МСК из жировой ткани человека 5В

2.3.5. Выделение лейкоцитов из периферической крови человека и 58 получение первичной культуры макрофагов

2.3.6. Пассирование культивируемых клеток

2.3.7. Криоконсервация культивируемых клеток

2.4. Методы исследования

2.4.1. Определение накопления и выведения Фотосенса® клетками

2.4.2. Определение накопления Протопорфирина IX клетками

2.4.3. Фотодинамическое воздействие на клетки сосудистой стенки

2.4.4. Проточная цитофлуориметрия

2.4.5. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток

2.4.6. Выявление активных форм кислорода в клетках

2.4.7. Выявление апоптотических и некротических клеток

2.4.8. Определение жизнеспособности клеток методом МТТ-теста

2.4.9. Выявление митохондрий и лизосом

2.4.10. Изучение адгезии лейкоцитов периферической крови к эндотелию

2.4.11. Определение фагоцитарной активности макрофагов

2.4.12. Определение активности матриксных металлопротеиназ-2,

2.4.13. Исследование количественного содержания цитокинов в среде 69 культивирования

2.5. Активированный эндотелий: клеточная модель и ее характеристика

2.6. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 73 3.1. Изучение эффектов фотодинамического воздействия с использованием Фотосенса® на клетки сосудистой стенки

3.1.1. Накопление Фотосенса® клетками сосудистой стенки

3.1.2. Выведение Фотосенса® клетками сосудистой стенки

3.1.3. Влияние компонентов фото динамического воздействия на клетки 81 сосудистой стенки

3.1.4. Клеточные эффекты фотодинамического воздействия с 85 использованием Фотосенса®

3.1.5. Влияние дозы облучения при фотодинамическом воздействии на 91 механизм гибели клеток сосудистой стенки

3.2. Изучение влияния фотодинамического воздействия низкой 98 интенсивности на функциональные свойства клеток сосудистой стенки

3.2.1. Влияние низких доз фотодинамического воздействия на 99 жизнеспособность клеток сосудистой стенки

3.2.2. Влияние фото динамического воздействия низкой интенсивности на 102 адгезивные свойства эндотелиальных клеток

3.2.3. Функциональная активность макрофагов после фото динамического 106 воздействия низкой интенсивности

3.3. Сравнение эффектов фото динамического воздействия с 115 использованием Фотосенса®, Фталосенса® и 5-аминолевулиновой кислоты на клетки сосудистой стенки

3.3.1. Накопление Протопорфирина IX в клетках сосудистой стенки

3.3.2. Влияние фотодинамического воздействия с использованием 120 различных фотосенсибилизаторов на жизнеспособность клеток сосудистой стенки

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная характеристика эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in vitro"

Сердечно-сосудистые заболевания (инфаркт, инсульт, сердечная недостаточность) - основная причина смертности в России и других, экономически развитых странах. Морфологической основой этих заболеваний являются патологические изменения артерий человека. В последние десятилетия достигнуты впечатляющие успехи в создании лекарственных средств для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Однако это лечение остается, главным образом, симптоматическим, не затрагивающим клеточные механизмы атеросклеротических поражений в сосудах. Создание такого лекарственного средства, которое бы действовало на уровне сосудистой стенки, предотвращая развитие атеросклеротических поражений или вызывая их регрессию, является предметом многих научно-исследовательских разработок. Тем не менее, поиск и/или создание препаратов прямого действия, избирательно воздействующих непосредственно на клетки поражений, до сих пор остается задачей, ждущей своего решения. Одним из наиболее перспективных методов, основанных на таком подходе, является фотодинамическое воздействие.

Фотодинамическое воздействие (ФДВ) — неинвазивпый двухкомпоиентный метод лечения, одним элементом которого является фотосенсибилизатор — вещество, повышающее чувствительность биологических тканей к свету, а другим -низкоинтенсивное лазерное излучение [Castaño, Demidova and Hamblin, 2004]. При взаимодействии фотосенсибилизатора со светом определенной длины волны происходит химическая реакция, результатом которой является интенсивное выделение синглетного кислорода и образование других АФК в ходе цепной реакции, что создает фототоксический эс|)фект, приводящий к повреждению и гибели клеток, накопивших фотосенсибилизатор. Этот метод был впервые описан в 60-х годах прошлого века и с тех пор активно применяется в медицинской практике, в основном для лечения онкологических заболеваний. Эффективность элиминации опухолевых клеток основана на селективном накоплении в них фотосенсибилизатора за счет их более высокой метаболической активности по сравнению с окружающими здоровыми клетками. Наличие погибших клеток и их фрагментов индуцирует процесс естественной тканевой репарации, заключающейся в элиминации разрушенного клеточного материала и представляющий собой последовательные фазы воспалительной реакции (инфильтрация и репарация/ пролиферация). Возможность запуска аналогичных изменений в атеросклеротических поражениях может создать необходимые предпосылки для предотвращения дальнейшего развития атеросклеротического процесса в сосудистой стенке.

В настоящее время в литературе имеются данные, полученные с использованием экспериментальных моделей на животных, по успешному применению ФДВ для предотвращения или уменьшения интимальной гиперплазии [LaMuraglia, ChandraSekar, Flotte et al., 1994; LaMuraglia, Schiereck, Heckenkamp et al., 2000]. Результаты этих исследований дают основания для следующих выводов:

- использование фотодинамического подхода во время ангиопластики может подавлять процесс развития фиброзно-клеточной гиперплазии эндотелия сосудов и, таким образом, предотвращает развитие рестеноза;

- применение ФДВ может иметь важное значение для предупреждения и лечения рестеноза после коронарного шунтирования и других реконструктивных операций на сосудах, а также после эндартерэктомии и трансплантации сердца.

На основании этих данных были проведены первые клинические исследования по лечению пациентов со стенозами периферических артерий с помощью липофильного фотосенсибилизатора (Тексафрин®), что свидетельствует об определенном прорыве в применении ФДВ для лечения сердечно-сосудистых заболеваний [Jenkins, Buonaccorsi, Raphael et al., 1999; Mwipatayi, Hockings, Hofman et al., 2008].

К сожалению, данные по применению ФДВ для лечения и профилактики атеросклеротических поражений не столь многочисленны, что, по-видимому, связано с более сложным механизмом их образования. В проведенных исследованиях было показано селективное накопление фотосенсибилизатора в атеросклеротических поражениях бедренных артерий у кроликов [Hayase, Woodburn, Perlroth et al., 2001]. В той же работе было продемонстрировано значительное уменьшение количества макрофагов и некоторое уменьшение размера атероматозного ядра после ФДВ.

Данные, полученные при применении ФДВ в экспериментальных поражениях у животных, создают предпосылки для успешного применения ФДВ при сосудистых патологиях у человека. Однако при этом необходимо учитывать особенности биологии сосудов человека, значительно отличающейся от животных. Морфологическая база атеросклеротических поражений сосудов человека — это результат сложного взаимодействия различных типов клеток: моноциты-макрофаги, лимфоциты, тучные клетки, эндотелий, гладкомышечные клетки, фибробласты, перициты. При использовании метода ФДВ объектом воздействия будут все перечисленные выше клетки. В атеросклеротических поражениях нельзя однозначно указать клетки-мишени для ФДВ, так как одни и тс же клетки, в зависимости от фазы атеросклеротического поражения, могут выполнять разнонаправленные функции (макрофаги - фагоцитоз липидов vs. синтез ферментов, разрушающих соединительную ткань). С другой стороны, в отличие от опухолей, в случае атеросклеротических поражений или рестенозов, не ставится задача полной ликвидации какого-либо типа клеток. В данном случае достаточно приостановить интенсивность процесса, например, за счет снижения фагоцитарной активности макрофагов или пролиферативной активности субэндотелиальных стромальных клеток. Таким образом, гетерогенность клеточной популяции сосудистой стенки диктует необходимость специальных исследований, посвященных изучению участия различных клеток в процессах, происходящих после ФДВ в артериальной стенке, адаптации имеющихся и разработке новых фотоснсибилизаторов, а также оптимизации условий ФДВ для применения при патологии сосудов.

Цель работы: Изучение эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки в модели in vitro.

В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи исследования:

1) Разработать тест-систему для изучения эффектов ФДВ на клетки сосудистой стенки in vitro;

2) Изучить динамику накопления и выведения фотосенсибилизатора Фотосенс® (ФС®) в макрофагах (Мф), эндотелиальных (ЭК) и субэндотелиальных стромальных клетках человека;

3) Изучить влияние фотодинамического воздействия (ФДВ) с использованием ФС® и его компонентов на клетки сосудистой стенки человека;

4) Исследовать влияние дозы ФДВ на механизм клеточной гибели;

5) Проанализировать влияние ФДВ на функциональные свойства клеток сосудистой стенки;

6) Сравнить эффекты ФДВ с использованием экзогенных фотосенсибилизаторов и про-фотосенсибилизатора на ЭК, Мф и субэндотелиальные стромальные клетки человека.

Научная новизна.

Впервые проанализировано влияние ФДВ с использованием двух фотосенсибилизаторов (Фотосенс® и Фталосенс®) и одного про-фотосенсибилизатора (5-аминолевулиновая кислота) на ЭК, субэндотелиальные стромальные клетки и Мф, которые играют важнейшую роль в формировании поражений сосудистой стснки.

Получены новые данные, свидетельствующие о различной чувствительности клеток сосудистой стенки к ФДВ. Впервые показано, что цитотоксический эффект ФДВ определяется не только способностью клеток сосудистой стенки накапливать ФС®, но и их функциональными особенностями, в частности, возможностью индукции в них АФК. Установлено, что активация ЭК увеличивает их устойчивость к ФДВ.

Впервые изучены эффекты низкоинтенсивного ФДВ на функциональные особенности клеток сосудистой стенки. Показано, что при использовании низких доз ФДВ (0,25 Дж/см2) происходит уменьшение экспрессии основных молекул межклеточной адгезии (VCAM-1 и Е-селектина) ЭК, а также значительно снижается адгезия мононуклеаров к TNFa-активированному эндотелию. Впервые установлено, что ФДВ низкой интенсивности сопровождается снижением фагоцитарной активности Мф, уменьшением активности секретируемых ими ММП-2 и -9 и отсутствием изменений в профиле цитокинов, что свидетельствует об антивоспалительном воздействии низких доз ФДВ.

Впервые показано, ФДВ с использованием АЛА может обеспечить селективную элиминацию субэндотелиальных стромальных клеток интимы. Проведенные сравнительные исследования позволили установить, что среди выбранных фотосенсибилизаторов ФтС® позволяет наиболее эффективно регулировать численность клеток сосудистой стенки.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Разработанная модель для изучения эффектов ФДВ in vitro позволяет подбирать и оптимизировать условия воздействия на различные клетки для выполнения экспериментальных и клинических задач. Данные, полученные в работе, существенно дополняют представления о влиянии ФДВ различной интенсивности на клетки сосудистой стенки, а также позволяют расширить область применения этого метода.

Результаты исследования могут лечь в основу предклинических испытаний, направленных на апробацию ФДВ в качестве одного из новых методов функциональной диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

Основные положения, выносимые на защиту:

1) Фото динамическое воздействие с использованием Фотосенса® позволяет эффективно элиминировать клетки сосудистой стенки, чувствительность которых к этому воздействию увеличивается в ряду Мф — субэндотелиальные стромальные клетки - ЭК и определяется их функциональными свойствами.

2) В условиях in vitro низкоинтенсивное фотодинамическое воздействие с использованием Фотосенса® оказывает противовоспалительный эффект на клетки сосудистой стенки, значительно модифицируя их функциональные свойства, что выражается в уменьшении их способности к адгезии, снижении фагоцитарной и секретирующей (ММП-2, -9) активности.

3) Использование различных фотосенсибилизаторов позволяет оптимизировать условия воздействия в зависимости от поставленных задач: фотодинамическое воздействие с использованием 5-аминолевулиновой кислоты позволяет избирательно элиминировать субэндотелиальные стромальные клетки, в то время как использование Фталосенса® обеспечивает тотальную элиминацию клеток сосудистой стенки.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Ударцева, Ольга Олеговна

выводы

2. Показано, что среди клеток сосудистой стенки макрофаги обладают наибольшей способностью накапливать Фотосенс®, а эндотелиальные клетки - наименьшей. Характер выведения фотосепсибилизатора не зависит от функциональных особенностей исследуемых клеток и практически не отличается у эндотелия, макрофагов и субэндотелиальных стромальных клеток.

3. Накопление Фотосенса® и лазерное облучение по отдельности не оказывают влияния на жизнеспособность клеток сосудистой стенки, при этом накопление Фотосенса® активирует лизосомальный компартмент эндотелиальных и субэндотелиальных стромальных клеток и не изменяет функциональные свойства митохондрий.

6. Фотодинамическое воздействие очень низкой интенсивности значительно изменяет функциональные свойства клеток сосудистой стенки, уменьшая их провоспалительную активность и не оказывая влияния на жизнеспособность. Фотодинамическое воздействие дозой 0,25 Дж/см (на эндотелиальные клетки) снижает адгезию мононуклеаров к ТЫРа-активированному эндотелию в 3 раза, а также уменьшает экспрессию УСАМ-1 и Е-селектина активированными эндотелиальными клетками в 1,42 и 1,23 раза соответственно. Облучение низкими дозами макрофагов, нагруженных Фотосенсом®, приводит к снижению их фагоцитарной активности и уровня секреции интерлейкина-8.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При проведении ФДВ на тканевые системы, состоящие из нескольких клеточных популяций, необходимо предварительное in vitro изучение эффектов воздействия на клетки каждого типа.

2. Для проведения скрининговых исследований при изучении эффектов ФДВ на различные клетки сосудистой стенки рекомендуется использовать модернизированную многопараметрическую установку на основе полупроводниковых лазеров с фиксированной длиной волны, поскольку такой аппарат позволяет подбирать оптимальный режим облучения, в то время как само лазерное облучение не вызывает локальную гипертермию. При изучении эффектов ФДВ на клетки, культивируемые в планшетах, рекомендуется использовать металлические цилиндры (диаметр которых соответствует размеру лунки), препятствующие «засвечиванию» соседних лунок при лазерном облучении.

3. При проведении исследований in vivo с использованием Фталосенса® следует учитывать, что ФДВ с этим фотосенсибилизатором способно вызывать необратимые изменения сосудистой стенки за счет эффективной элиминации эндотелиальных, субэндотелиальных стромальных клеток и макрофагов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ударцева, Ольга Олеговна, Москва

1. Андреева Е.Р., Михайлова И.А., Пугач И.М. и Орехов А.Н. Клеточный состав атеросклеротических поражений аорты человека.// Ангиология и сосудистая хирургия. 1999. - № 5 (приложение). - С. 6-26.

2. Аничков H.H. Новые данные по вопросу патологии и этиологии атеросклероза.// Рус. Врач.-1915.-Т. 14.-№8-9.-С. 184-186, 207-211.

3. Аничков H.H. Частная патологическая анатомия. Сердце и сосуды. Второе издание. // Л.: Медгиз, 1947. 548 с.

4. Антонов A.C., Крушинский A.B., Николаева М.А. и др. Первичная культура эндотелиальных клеток из пупочной вены человека: идентификация и характеристика растущей и конфлуентной культуры.// Цитология. — 1981. — Т. 23. — С. 1154-1159.

5. Беленков Ю.Н., Мареев В.Ю. и Агеев Ф.Т. Эндотелиальная дисфункция при сердечной недостаточности: возможности терапии ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента.// Кардиология. 2001. - Т. 41. - № 5. - С. 100-104.

6. Буравкова Л.Б., Гринаковская О.С., Андреева Е.Р. и др. Характеристика мезенхимных стромальных клеток из липоаспирата человека, культивируемых при пониженном содержании кислорода.// Цитология. -2009. Т. 51. -№1. - С. 5-11.

7. Быков В.Л. Цитология и общая гистология. Функциональная морфология клеток и тканей человека// СПб.: СОТИС, 2003 519 с.

8. Вакуловская Е.Г., Летягин В.П. и Погодина Е.М. Фотодинамическая терапия и флуоресцентная диагностика у больных раком молочной железы.// Российский Биотерапевтический Журнал. 2003. - Т. 2. - № 4. - С. 57-60.

9. Вакуловская Е.Г., Шенталь В.В., Кувшинов Ю.П. и Подцубный Б.К. Фотодинамическая терапия у больных с опухолями шеи и головы.// Российский Биотерапевтический Журнал. 2004. - Т. 3. - № 4. - С. 24-28.

10. Гельфонд М.Л. Фотодинамическая терапия в онкологии // Практическая онкология. -2007.-Т. 8.-№4.-С. 204-210.

11. Давыдовский И.В. Проблема причинности в медицине (этиология).// М.: Госуд. изд-во мед. литературы, 1962 176 с.

12. Жилова М.Б., Бутарева М.М. и Волнухин В.А. Современные аспекты фототерапии псориаза.// Вестник венерологии и дерматологии. 2010. - № 3. - С. 27-32.

13. Иванова O.A., Соболева Г.Н. и Карпов Ю.А. Эндотелиальная дисфункция важный этап атеросклеротических поражений сосудов.// Тер. Архив. - 1997. - Т. 6. - С. 7578.

14. Ильинская О.П., Кудряшова Е.Ю., Антропова Ю.Г. и др. Происхождение клеток неоинтимы, образованной в сонных артериях крыс после баллонной ангиопластики.// Цитология. 2003. - Т. 45. - № 7. - С. 678-689.

15. Красновский A.A. Синглетный молекулярный кислород и первичные механизмы фотодинамического действия оптического излучения.// Итоги науки и техники. -1992. Т. 3.-С. 63-132.

16. Кудинова Н.В. и Березов Т.Т. Фото динамическая терапия рака: поиск идеального фотосенсибилизатора. // Биомед. Хим. 2009. - Т. 55. - № 5. - С. 558-569.

17. Кухарчук В.В. и Тарарак Э.М. Атеросклероз: от A.JI. Мясникова до наших дней.// Кардиологический вестник. 2010. - Т. 5. — № 1. — С. 12-20.

18. Лукьянец Е.А. Новые фотосенсибилизаторы для фотодинамической терапии.// Российский химический журнал. 1998. - Т. 42. - № 5. - С. 9-16.

19. Манских В.Н. Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза.// Бюлл. Сиб. Мед. 2004. - № 1. - С. 63-70.

20. Миронов А.Ф. Фотосенсибилизаторы на основе порфиринов и родственных соединений для фотодинамической терапии рака.// Итоги науки и техники. 1990. -Т. З.-С. 5-63.

21. Миронов А.Ф. Фотодинамическая терапия новый эффективный метод диагностики и лечения злокачественных опухолей.// Соросовский образовательный журнал. — 1996. -№ 8. -С. 32-40.

22. Назарова В.Л., Андреева Е.Р., Тертов В.В. и др. Иммуноцитохимическое изучение локализации скевенджер-рецептора в гладкомышечных клетках аорты человека.// Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 1995. - Т. 120.-С. 195-198.

23. Орехов А.Н. и Андреева Е.Р. Клеточные механизмы атеросклероза: роль субэндотелиальных клеток интимы.// Ангиология и сосудистая хирургия. 1999. -№ 5 (приложение). - С. 96-137.

24. Пальцев М.А., Аничков Н.М. Патологическая анатомия в 2-х томах. Том 2: Частный курс. Часть 1. //М.: Медицина, 2001. 748 с.

25. Пугач И.М., Андреева Е.Р. и Орехов А.Н. Выявление перицитоподобных клеток в субэндотелии кровеносных сосудов человека.// Архив патологии. — 1999. — Т. 61. — № 4. — С.18-21.

26. Решетников A.B., Швец В.И. и Пономарев Г.В. Водорастворимые тетрапиррольные фотосенсибилизаторы для фотодинамической терапии рака.// Успехи химии порфиринов. Спб.: НИИ Химии СПбГУ. - 1999. - Т. 2. - Гл. 4. - С. 70-114.

27. Рыбко В.А., Книжник A.B., Каинов Я.А. и др. Активность протеиназ внеклеточного матрикса в экспериментальной модели опухолевой прогрессии.// Вестник РОНЦ им. Блохина РАМН. 2008. - Т. 19,-№4.-С. 16-21.

28. Скидан И.Н., Бобрускин А.И., Гуляев А.Е. и др. Оптимизация фармакокинетики Фотосенса с помощью биодеградируемых наночастиц.// Антибиотики и химиотерапия. -2001. Т. 46. -№ 4. - С.6-10.

29. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Макарова O.A. и др. Доклиническое изучение эффективности липосомальной лекарственной формы Фотосенса для фото динамической терапии.// Российский биотерапевтический журнал. 2003. - Т. 2,-№4.-С. 40-45.

30. Стожаков Г.И. и Утешев Д.Б. Роль апоптоза в развитии атеросклероза, ишемии миокарда и сердечной недостаточности.// Сердечная недостаточность. 2000. — Т. 1.- № 4. С. 131-134.

31. Странадко Е.Ф. Исторический очерк развития фотодинамической терапии.// Лазерная медицина. 2002. - Т. 6. - № 1. - С. 4-8.

32. Толстых П.И., Дербенев В.А., Кулешов И.Ю. и др. Теоретические и практические аспекты лазерной фотохимии для лечения гнойных ран.// Российский биотерапевтический журнал. 2008. - Т. 7. - № 4 . - С. 20-24.

33. Фильченков A.A., Залесский В.Н. и Стойка P.C. TGF-ß: проатерогенный или антиатерогенпый цитокин.// Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1. - № 1. - С. 17-24.

34. Фрейдлин И.С. Иммунофизиология эндотелиальных клеток.// Физиология человека.- 2006. Т. 32. -№ 3. — С. 124-135.

35. Фустер В., Росс Р., Топол Э.Д. Атеросклероз и коронарная болезнь сердца.// Пер. с англ. под ред. Чазова Е.И. М.Медицина, 2004. - 1514 с.

36. Хавкин Т.Н. О развитии атеросклеротических изменений аорты человека.// Арх. Патол. 1950. - Т. 12.-С. 23-33.

37. Чиссов В.И., Соколов В.В., Булгакова Н.Н. и Филоненко Е.В. Флуоресцентная эндоскопия, дермаскопия и спектрофотометрия в диагностике злокачественных опухолей основных локализаций // Российский биотерапевтический журнал. 2003. -Т. 2,-№4 .-С. 45-56.

38. Щелкунов С.И. Интима малых артерий и вен человека.// Арх. Биол. Наук. 1935. -Т. 35.-С. 609-637.

39. Якубовская Р.И., Лукьянец Е.А., Деркачева В.М. и Морозова Н.Б. Биораспределенис препарата Фталосенса у интактных животных и у животных с опухолями различного гистогенеза.// Российский онкологический журнал. — 2007. № 1. - С. 37-43.

40. Якубовская Р.И., Морозова Н.Б., Карматсова Т.А. и др. Фталосенс новый препарат на основе безметального фталоцианина для ФДТ рака.// Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3. - № 2 . - С. 60-61.

41. Abedin М., Tintut Y. and Demer L.L. Mesenchymal stem cells and artery wall.// Circ. Res. 2004. - Vol. 95. - P. 671-676.

42. Aeschlimann D. and Thomazy V. Protein crosslinking in assembly and remodelling of extracellular matrices: the role of transglutaminases.// Connect. Tissue. Res. 2000. - Vol. 41.-P. 1-27.

43. Akishima Y., Akasaka Y., Ishikawa Y. et al. Role of macrophage and smooth muscle cell apoptosis in association with oxidized low-density lipoprotein in the atherosclerotic development.// Modern Pathology. 2005. - Vol. 18. - P. 365-373.

44. Albelda S.M., Muller W.A., Buck C.A. and Newman P.J. Molecular and cellular properties of PECAM-1 (endoCAM/CD31): a novel vascular cell-cell adhesion molecule.// J. Cell. Biol.-1991.-Vol. 114. -№ 5. P. 1059-1068.

45. Albelda S.M., Smith C.W. and Ward P.A. Adhesion molecules and inflammatory injury.// FASEB J. 1994. - Vol. 8. - № 8. - P. 504-512.

46. Allison R.R., Downie G.H., Cuenca R. et al. Photosensitizers in clinical PDT.// Photodiag. Photochem. Ther. 2004. - Vol. 1. - P. 27-42.

47. Amemiya T., Nakajima H., Katoh T. et al. Photodynamic therapy of atherosclerosis using YAG-opo laser and Porfimer Sodium and comparison with using argon-dye laser.// Japan Circ. S. 1999. - Vol. 639. - № 94. - P. 288-295.

48. Andreesen R., Bross K., Osterholz J et al. Human macrophage maturation and heterogenity: analysis with newly generated set of monoclonal antibodies to differentiation markers.// Blood. 1986. - Vol. 87. - P. 1257-1264.

49. Andreesen R., Brugger W., Schenbenbogen C. et al. Surface phenotype analysis of human monocyte to macrophage maturation.// Journal of Leucocyte Biology. — 1990. — Vol. 11: — P.490-497.

50. Andreeva E.R., Pugach I.M., Gordon D. and Orekhov A.N. Continuous subendothelial network formed by pericyte-like cells in human vascular bed.// Tissue & Cell. 1998. -Vol. 30. -№1. - P. 127-135.

51. Andreeva E.R., Pugach I.M., Orekhov A.N. Collagen-synthesizing cells in initial and advanced atherosclerotic lesions of human aorta.// Atherosclerosis. 1997. - Vol. 130. - P. 133-142.

52. Andreeva E.R., Serebryakov V.N. and Orekhov A.N. Gap junctional communication in primary culture of cells derived from human aortic intima.// Tissue Cell. 1995. - Vol. 27. -P. 591-597.

53. Antoniades C., Bakogiannis C., Tousoulis D. et al. The CD40/ CD40 ligand system: linking inflammation with atherosclerosis. // J. Am. Coll. Cardiol. 2009. - Vol. 58. - № 8. - P. 669-677.

54. Aqel N.M., Ball R.Y., Waldmann H. and Mitchinson M.J. Identification of macrophages and smooth muscle cells in human atherosclerosis using monoclonal antibodies.// J. Pathol.- 1985.-Vol. 146.-P. 197-204.

55. Asmis R. and Begley J.G. Oxidized LDL Promotes Peroxide-Mediated Mitochondrial Dysfunction and Cell Death in Human Macrophages: A Caspase-3-Independent Pathway. // Circ. Res. 2003. - Vol. 92. - P. 20-29.

56. Ben-Hur E., Siwecld J.A., Newman H.C. et al. Mechanism of uptake of sulfonated metallophtalocyanines by cultured mammalian cells. Cancer Letters. - 1987. - Vol. 38. — P. 215-222.

57. Bennett M.R. and Boyle J.J. Apoptosis of vascular smooth muscle cells in atherosclerosis.// Atherosclerosis. 1998. - Vol. 138. - P. 3-9.

58. Berg K., Anholt H., Bech O. and Moan J. The influence of iron chelators on the accumulation of protoporphyrin IX in 5-aminolevulinic acid-treated cells.// Br. J. Cancer. -1996.-Vol. 74.-P. 688-697.

59. Best P., Hasdai D., Sangiorgi G. et al. Apoptosis: basic concepts and implications in coronary artery disease.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1999. - Vol. 19. - P. 14-22.

60. Betsholtz C., Lindblom P. and Gerhardt H. Role of pericytes in vascular morphogenesis.// EXS.-2005.-Vol. 94.-P. 115-25.

61. Beutler B. and Cerami A. Cachectin (tumor necrosis factor): a macrophage hormone governing cellular metabolism and inflammatory response.// Endocr. Rev. 1988. - Vol. 9. - № 1. - P. 57-66.

62. Bevilacqua M.P., Stengelin S., Gimbrone M.A.J, and Seed B. Endothelial leukocyte adhesion molecule 1: an inducible receptor for neutrophils related to complement regulatory proteins and lectins.// Science. 1989. - Vol. 243. - № 4895. - P. 1160-1165.

63. Biasucci L.M., Liuzzo G., Angiolillo D. et al. Inflammation and acute coronary syndromes. // Herz. 2000. - Vol. 25. - № 2. - P. 108-112.

64. Bobryshev Y.V., Lord R.S.A. Detection of vascular dendritic cells and extracellular calcium-binding protein S-100 in foci of calcification in human arteries.// Acta Histochem. Cytochem. 1995. - Vol. 4. - P. 371-380.

65. Boisvert W.A. Modulation of atherogenesis by chemoldnes.// Trends. Cardiovasc. Med. -2004.-Vol. 14. -№ 4. P. 161-165.

66. Bonfanti R., Furie B.C., Furie B. and Wagner D.D. PADGEM (GMP140) is a component of Weibcl-Palade bodies of human endothelial cells.// Blood. 1989. - Vol. 73. - 5. - P. 1109-1112.

67. Bonneau S., Morliere P. and Brault D. Dynamics of interactions of photosensitizers with lipoproteins and membrane-models: correlation with cellular incorporation and Subcellular distribution. // Biochem. Pharmacol. 2004. - Vol. 68. - P. 1443-1452.

68. Boyle J.J. Vascular smooth muscle cell apoptosis in atherosclerosis.// Int. J. Exp. Path. -1999.-Vol. 80.-P. 197-203.

69. O'Brien E.R., Garvin M.R., Stewart D.K. et al. Osteopontin is synthesized by macrophage, smooth muscle and endothelial cells in primary and restenotic human coronary atherosclerotic plaques.// Atherioscler. Thromb. 1994. - Vol. 14. - P. 1648-1656.

70. Bright J. and Khar A. Apoptosis: programmed cell death in health and disease. // Biosci. Rep. 1994. - Vol. 14. - № 2. - P. 67-81.

71. Burnier L., Fontana P., Angelillo-Scherrer A. and Kwak B.R. Intercellular communication in atherosclerosis.// Physiology. 2009. - Vol. 24. - P. 36-44.

72. Burns M.P. and DePaola N. Flow-conditioned HUVECs support clustered leukocyte adhesion by coexpressing ICAM-1 and E-selectin.// Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -2005.-Vol. 288,-№ 1.-P. 194-204.

73. Bursch W. The autophagosomal-lysosomal compartment in programmed cell death. // Cell Death Differ. -2001. Vol. 8,-№6.-P. 569-581.

74. Buytaert E., Dewaele M. and Agostinis P. Molecular effectors of multiple cell death pathways initiated by photodynamic therapy. // Biochim. Biophys. Acta. 2007. - Vol. 1776.-P. 86-107.

75. Campbell J.H. and Campbell G.R. Biology of the vessel wall and atherosclerosis.// Clin. Exp. Hypertens. A. 1989. - Vol. 11.-P. 901-913.

76. Caplan A.I. All MSCs are pericytes? // Cell Stem Cell. 2008. - Vol. 3. - № 3. - P. 229230.

77. Carlos T.M. and Harlan J.M. Membrane proteins involved in phagocyte adherence to endothelium.// Immunol. Rev. 1990. - Vol. 114. - P. 5-28.

78. Castano A.P., Demidova T.N. and Hamblin M.R. Mechanisms in photodynamic therapy: part one photosensitizers, photochemistry and cellular localization. // Photodiag. Photodynam. Ther. - 2004. - Vol. 1. -P. 279-293.

79. Castano A.P., Demidova T.N. and Hamblin M.R. Mechanisms in photodynamic therapy: part two — cellular signaling, cell metabolism and modes of cell death. // Photodiag. Photodynam. Ther.-2005.-Vol. 2.-P. 1-23.

80. Chan W.S., Svensen R., Phillips D. and Hart I.R. Cell uptake, distribution and response to aluminium chloro sulphonated phthalocyanine, a potential anti-tumour photosensitizer. // Br. J. Cancer. 1986. - Vol. 53. - P. 255-263.

81. Chang C.J., Sun C.H., Liaw L.H. et al. In vitro and in vivo photosensitizing capabilities of 5-ALA versus Photofrin® in vascular endothelial cells.// Lasers Surg. Med. 1999. - V. 24.-P. 178-186.

82. Chatterjee S. Role of oxidized human plasma low density lipoproteins in atherosclerosis: effects on smooth muscle cell proliferation.// Mol. Cell. Biochem. 1992. - Vol. 111. - № 1-2.-P. 143-147.

83. Chen C., Montelatici E., Crisan M. et al. Perivascular multi-lineage progenitor cells in human organs: regenerative unit, cytokine sourses or both? // Cytokine Growth Factor Rev. 2009. - Vol. 20. - № 5-6. - P. 429-434.

84. Chiang ILL., Terleky S.R., Plant C.P. and Dice J.F. Role for a 70-kilodalton heat shock protein in lysosomal degradation of intracellular proteins. // Science. 1989. - Vol. 246. -№4928. -P. 382-385.

85. Cines D.B., Pollak E.S., Buck C.A. et al. Endothelial Cells in Physiology and in the Pathophysiology of Vascular Disorders.// Blood. 1998. - Vol. 91. - № 10. - P. 35273561.

86. Clerget M. and Polla B.S. Erythrophagocytosis induces heat shock protein synthesis by human monocytes-macrophages. // Cell Biol. 1990. - Vol. 87. - P. 1081-1085.

87. Clowes A.W., Gown A.M., Hanson S.R. and Reidy M.A. Mcchanisms of arterial graft failure. 1. Role of cellular proliferation in early healing of PTFE prostheses. // Am. J. Pathol. 1985.-Vol. 118.-№ l.-P. 43-54.

88. Clowes A.W., Kirkman T.R. and Clowes M.M. Mechanisms of arterial graft failure. 2. Chronic endothelial and smooth muscle cell proliferation in healing of PTFE prostheses. // J. Vase. Surg. 1986. - Vol. 3. - № 6. - P. 877-884.

89. Coffey M.D., Cole R.A., Colles S.M. et al. In vitro cell injury by oxidized low-density lipoprotein involves lipid hydroperoxide-induced formation of alkoxyl, lipid and peroxide radicals. // J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 96. - P. 1866-1873.

90. Collett G.D., Canfield A.E. Angiogencsis and pericytes in the initiation of ectopic calcification. // Circ. Res. 2004. - Vol. 96. -№ 9. - P. 930-938.

91. Crisan M., Yap S., Casteilla L. et al. Perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiply human organs. Cell Stem Cell. - 2008. - Vol. 3.-№3.-P. 301-13.

92. Davies M.J., Gordon J.L., Gearing J.H. et al. The expression of the adhesion molecules ICAM-1, VCAM-1, PECAM and E-selectin in human atherosclerosis.// J. Pathol. 1993. -Vol. 171.-P. 223-229.

93. Davignon J. and Ganz P. Role of Endothelial Dysfunction in Atherosclerosis.// Circulation. 2004. - Vol. 109. - № 3. - P. 27-32.

94. Desmettre T., Maurage C.-A. and Mordon S. Heat shock protein hyperexpression chorioretinal layers after transpupillary thermotherapy. // IOVS. 2001. - Vol. 42. -№ 12. -P. 2976-2980.

95. Detty M.R., Gibson S.L. and Wagner S.J. Current clinical and preclinical photosensitizers for use in photodynamic therapy.// J. Med. Chem. 2004. - Vol. 47. - P. 3897-3915.

96. Diaz-Flores L., Gutierrez R., Lopez-Alonso A. et al. Pericytes as a supplementary source of osteoblasts in periosteal osteogenesis. // Clin. Orthop. Relat. Res. 1992. - Vol. 275. -P. 280-286.

97. Dougherty T.J., Kaufman J.E., Goldfarb A. et al. Photoradiation therapy for the treatment of malignant tumors. // Cancer Res. 1978. - Vol. 38. - P. 2628-2635.

98. Doukas J. and Pober J.S. IFN-gamma enhances endothelial activation induced by tumor necrosis factor but not IL-1.// J. Immunol. 1990. - Vol. 145. - № 6. - P. 1727-1733.

99. Du H.Y., Olivo M., Mahedran R. et al. Hypericin photoactivation triggers down-regulation of matrix metalloproteinase-9 expression in well-differentiated human nasopharyngeal cancer cells.// Cell. Mol. Life Sci. 2007. - Vol. 64. - P. 979-988.

100. Duijnhoven F.H., Aalbers R.I., Rovers J.P. et al. The immunological consequences of photodynamic treatment of cancer, a literature review.// Immunobiol. 2003. - Vol. 207. -P. 105-113.

101. Dummin H., Cernay T. and Zimmermann H.W. Selective photosensitization of mitochondria in HeLa cells by cationic Zn (II) phthalocyanines with lipophilic side-chains.//J. Photochem. Photobiol. B. 1997. - Vol. 37. - P. 219-229.

102. Egli R.J., Schober M., Hempfing A. et al. Sensitivity of osteoblasts, fibroblasts, bone marrow cells and dendritic cells to 5-aminolevulinic acid based photodynamic therapy.// J. Photochem. Photobiol. B. 2007. - Vol. 89. - P. 70-77.

103. Emeson E.E., Robertson A.L. T-lymphocytes in aortic and coronary intimas. Their potential role in atherogenesis.// Am. J. Pathol. 1988. - Vol. 130. - P. 369-376.

104. Ericson M.B., Sandberg C., Stenquist B. et al. Photodynamic therapy of actinic keratosis at varying fluence rates: assessment of photobleaching, pain and and primary clinical outcome.//Br. J. Cancer. -2004. Vol. 151.-P. 1204-1212.

105. Esmon C.T. Crosstalk between inflammation and thrombosis. // Maturitas. 2008. - Vol. 61.-№ 1-2. - P. 122-131.

106. Fabris C., Valduga G., Miotto G. et al. Photosensitization with Zn (II) phthalocyanine as a switch in the decision between apoptosis and necrosis. // Cancer Res. — 2001. — Vol. 61. — P. 7495-7500.

107. Fajardo L.F. and Prionas S.D. Endothelial cells and hyperthermia. // Int. J. Hyperthermia. — 1994. Vol. 10. - № 3. - P. 347-353.

108. Fajardo L.F., Schreiber A.B., Kelly N.I. and Hahn G.M. Thermal sensitivity of endothelial cells. // Radiation research. 1985. - Vol. 103. - P. 276-285.

109. Fan J. and Watanabe T. Inflammatory reactions in the pathogenesis of atherosclerosis.// J. Atheroscler. Thromb. 2003. - Vol. 10,-№2.-P. 63-71.

110. Farrington-Rock C., Crofts N.J., Doherty M.J. et al. Chondrogenic and adipogenic potential of microvascular pericytes. // Circulation. 2004. - Vol. 110. - № 15. - P. 22262232.

111. Frisch S.M. and Ruoslahti E. Integrins and anoikis. // Curr. Opin. Cell Biol. 1997. - Vol. 9.-P. 701-706.

112. Furukawa T., Kohno H., Tokunaga R. and Takotani S. Nitric-oxide-mediated inactivation of mammalian ferrochelatase in vivo and in vitro: possible involvement of the iron-sulfur cluster of enzyme.//Biochem. J. 1995. - Vol. 310. - P. 533-538.

113. Gabeler E.E.E., van Hillegersberg R., Sluiter W. et al. Arterial wall strength after endovascular photodynamic therapy.// Lasers Surg. Med. 2003. - Vol. 33. - P. 8-15.

114. Gamble J.R., Bradley S., Noack L. and Vadas M.A. TGF-beta and endothelial cells inhibit VCAM-1 expression on human vascular smooth muscle cells.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1995. - Vol. 15. - № 7. - P. 949-955.

115. Geng J.G., Bevilacqua M.P., Moore K.L. et al. Rapid neutrophil adhesion to activated endothelium mediated by GMP-140.// Nature. 1990. - Vol. 343. - № 6260. - P. 757-760.

116. Geng Y.J. and Libby P. Progression of atheroma a struggle between death and procreation.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2002. - Vol. 22. - P. 1370-1380.

117. Gerrity R.G. The role of the monocyte in atherogenesis: I. Transition of blood-borne monocytes into foam cells in fatty lesions.// Am. J. Pathol. 1981. - Vol. 103. - № 2. - P. 181-190.

118. Gimbrone M.J., Cotran R.S., Folkman J. Human vascular endothelial cells: growth and DNA synthesis.//The Journal of Cell Biology. 1974. - Vol. 60. -№3.-P. 673-684.

119. Girotti A.W. Mechanisms of photosensitization.// Photochem. Photobiol. 1983. - Vol. 38.-P. 745-751.

120. Gollnick S.O. and Brackett C.M. Enhancement of anti-tumor immunity by photodynamic therapy. // Immunol. Res. -2010. Vol. 46. -№ 1-3. - P. 216-226.

121. Gordon D., Reidy M.A., Benditt E.P. and Schwartz S.M. Cell proliferation in human coronary arteries.// Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 1990. Vol. 87. - № 12. - P. 46004604.

122. Gown A.M., Tsukada T. and Ross R. Human atherosclerosis. II. Immunocytochemical analysis of the cellular composition of human atherosclerotic lesions.// Am. J. Pathol. -1986.-Vol. 125.-№ 1.- 191-207.

123. Graber N., Gopal T.V., Wilson D. et al. T cells bind to cytokine-activated endothelial cells via a novel, inducible sialoglycoprotein and endothelial leukocyte adhesion molecule-1.// J. Immunol.- 1990.-Vol. 145.-№3. P. 819-830.

124. Grant W.E., Speight P.M., MacRobert A.J. et al. Photodynamic therapy of normal rat arteries after photosensitization using disulphonated aluminium phthalocyanine and 5-aminolevulinic acid. // Br. J. Cancer. 1994. - Vol. 70. - P. 72-78.

125. Gross D. Animal models in cardiovascular research.//NY.: Springer, 2009. 431 p.

126. Grüne T., Klotz L.O., Gieche J. et al. Protein oxidation and proteolysis by the non-radical oxidants singlet oxygen or peroxynitrite.// Free Radic. Biol. Med. 2001. - Vol. 30. - P. 1243-1253.

127. Haka A.S., Grosheva I., Chiang E. et al. Macrophages creates an acidic extracellular hydrolytic compartment to digest aggregated lipoproteins.// Mol. Biol. Cell. 2009. - Vol. 20.-Vol. 4932-4940.

128. Hashomoto K., Kataoka N., Nakamura E. et al. Oxidized LDL specifically promotes the initiation of monocyte invasion during transendothelial migration with upregulated

129. PEC AM-1 and downregulated VE-cadherin on endothelial junctions.// Atherosclerosis. -2007.-Vol. 194. -№ 2. P. 9-17.

130. Hayase M., Woodburn K.W., Perlroth J. et al. Photoangioplasty with local motexafin lutetium delivery reduces macrophages in a rabbit post-balloon injury model.// Cardiovasc. Res. 2001. - Vol. 49. - № 2. - P. 449-455.

131. He J., Horng M., Deahl T. et al. Variation in photodynamic efficacy during the cellular uptake of two phtalocyanine photosensitizers. // Photochem. Photobiol. 2002. - Vol. 67. -№ 6. - P. 720-728.

132. Heckenkamp J., Aleksic M., Gawenda M. et al. Modulation of human adventitial fibroblast function by photodynamic therapy of collagen matrix.// Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. -2004.-Vol. 28.-P. 651-659.

133. Henderson B.W., Busch T.M. and Snyder J.W. Fluence rate as a modulator of PDT mechanisms.// Lasers. Surg. Med. 2006. - Vol. 38. - P. 489-493.

134. Henderson B.W. and Dougherty T.J. How does photodynamic therapy work? // Photochem. Photobiol. 1992.-Vol. 55.-P. 145-157.

135. Henderson B.W., Owczarczak B., Sweeney J. and Gessner Y. Effects of photodynamic treatment of platelets or endothelial cells in vitro on platelet aggregation.// Photochem. Photobiol. 1992.-Vol. 56.-№4.-P. 513-521.

136. Hessler J.R., Morel D.W., Lewis L.J. and Chisolm G.M. Lipoprotein oxidation and lipoprotein-iduced cytotoxity.// Atheriosclerosis. 1983. - Vol. 3. - P. 215-222.

137. Hillebrands J.L., Klatter F.A., van den Hurk B.M. et al. Origin of neointimal endothelium and alfa-actin-positive smooth muscle cells in transplant arteriosclerosis.// J. Clin. Invest. -2001.-Vol. 107.-№ 11.-P. 1411-1422.

138. Van Hillegersberg R., Van den Berg J.W., Kort W.J. et al. Selective accumulation of endogenously produced porphyrins in a liver metastasis model in rats.// Gastroenterology. 1992.-Vol. 103.-P. 647-651.

139. Hryhorenko E.A., Oseroff A.R., Morgan J. and Rittenhouse-Diakun K. Antigen specific and nonspecific modulation of the immune response by aminolevulinic acid based photodynamic therapy.// Immunopharmacology. 1998. - Vol. 40. - P. 231-240.

140. Hsiang Y.N., Crespo M.T., Machan L.S. et al. Photodynamic therapy for atherosclerotic stenosis in Yucatan miniswine.// Can. J. Surg. 1994. - Vol. 37. - № 2. - P. 148-152.

141. Iinuma S., Farshi S., Ortel B. and Hasan T. A mechanistic study of ctllular photodestruction with 5-aminolevulinic acid-induced porphyrins.// Br. J. Cancer. 1994. — Vol. 70.-P. 21-28.

142. Israels S.J., Gerrard J.M., Jacques Y.V. et al. Platelet dense granule membranes contain bothgranulophysin and P-selectin (GMP-140).// Blood. 1992. - Vol. 80. -№ 1. -P. 143152.

143. Iyama K., Ohzono K., Usuku G. Electron microscopical studies on the genesis of white adipocytes: differentiation of immature pericytes into adipocytes in transplanted preadipose tissue.//Virchows Arch. B Cell Pathol. 1989. - Vol. 31. -P. 143-155.

144. Jacquier-Sarlin M.R., Fuller K., Dinh-Xuan A.T. et al. Protective effects of HSP70 in inflammation. // Experientia. 1994. - Vol. 50. - P. 1031-1038.

145. Jonasson L., Holm J., Hansson G.K, Smooth muscle cells express la antigens during arterial response to injury.// Lab. Invest. 1988. - Vol. 58. - P. 310-315.

146. Juchem G., Weiss D.R., Gansera B. et al. Pericytes in macrovascular intima: possible physiological and pathogenetic impact. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2010. -Vol. 298.-P. 754-770.

147. Kasid A., Director E.P., Stovroff M.C. et al. Cytokine regulation of tumor necrosis factor-alpha and -beta (lymphotoxin)-messenger RNA expression in human peripheral blood mononuclear cells.// Cancer Res. 1990. - Vol. 50. - № 16. - P. 5072-5076.

148. Kessel D. and Poretz R.D. Sites of photodamage induced by photodynamic therapy with a chlorine e6 triacetoxymethyl ester (CAME).// Photochem. Photobiol. 2000. - Vol. 71. -P. 94-96.

149. Kessel D., Vicente M.G. and Reiners J.J.Jr. Initiation of apoptosis and autophagy by photodynamic therapy. // Lasers Surg. Med. 2006. - Vol. 38. - № 2. - P. 482-488.

150. Kim J.M., Park K.H., Kim Y.J. et al. Thermal injury induces heat shock protein in optical nerve head in vivo. // IOVS. 2006. - Vol. 47. - № 11. - P. 4888-4894.

151. Kleindienst R., Schett G., Amberger A. et al. Atherosclerosis as an autoimmune condition.//Isr. J. Med. Sci. 1995,-Vol. 31.-№ 10.-P. 596-599.

152. Klionsky D.J. and Emr D.S. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation. // Science. -2000. Vol. 290. - 5497. - P. 1717-1721.

153. Kockx M.M., De Meyer G.R., Muhring J. et al. Apoptosis and related proteins in different stages of human atherosclerotic plaques.// Circulation. 1998. - Vol. 97. - № 23. - P. 2307-2315.

154. Kohn G., Wong H.R., Bshesh K. et al. Heat shock inhibits TNF-induced ICAM-1 expression in human endothelial cells via I kappa kinase inhibition.// Shock. 2002. - Vol. 17.-№2.-P. 91-97.

155. LaMuraglia G.M., ChandraSekar N.R., Flotte T.J. et al. Photodynamic therapy inhibition of experimental intimal hyperplasia: acute and chronic effects.// J. Vase. Surg. 1994. - Vol. 19.-P. 321-331.

156. LaMuraglia G.M., Schiereck J., Heckenkamp J. et al. Photodynamic therapy induces apoptosis in intimal hyperplastic arteries.// Am. J. Pathol. -2000. Vol. 157. - P. 867-875.

157. Larsen E., Celi A., Gilbert G.E. et al. PADGEM protein: a receptor that mediates the interaction of activated platelets with neutrophils and monocytes.// Cell. — 1989. Vol. 59. - № 2. - P. 305-312.

158. Lasky L.A. Selectins: interpreters of cell-specific carbohydrate information during inflammation.// Science. 1992. - Vol. 258. - № 5084. - P. 964-969.

159. Leitz G., Fallman E., Tuck S. and Axner O. Stress response in Caenorhabditis elegans caused by optical tweezers: wavelength, power and time dependence. // Biophys. J. 2002. -Vol. 82.-P. 2224-2231.

160. Libby P., Geng Y.J., Aikawa M. et al. Macrophages and atherosclerotic plaque stability.// Curr. Opin. Lipidol. 1996. - Vol. 7. - P. 330-335.

161. Libby P., Okamoto Y., Rocha V.Z. and Folco E. Inflammation in atherosclerosis: transition from theory to practice.// Circ. J. 2010. - Vol. 74. - P. 213-220.

162. Libby P., Ridker P.M. and Maseri A. Inflammation and atherosclerosis.// Circulation. -2002.-Vol. 105.-P. 1135-1143.

163. Lijnen H.R. Metalloproteinases in development and progression of vascular diseases.// Pathophysiol. Haemost. Thromb. 2003/2004. - Vol. 33. - P. 275-281.

164. Lim H.W., Behar S. and He D. Effect of porphyrin and irradiation on heme biosynthesis pathway in endothelial cells.// Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 1994. - Vol. 10. -№ l.-P. 17-21.

165. Liu Y., Wilkinson F.L., Jeziorska M. et al. Hepatocyte growth factor and c-Met expression in pericytes: implication for atherosclerotic plaque development. // J. Pathol. 2007. - Vol. 212.-P. 12-19.

166. Lo S.K., Lee S., Ramos R.A. et al. Endothelial-leukocyte adhesion molecule 1 stimulates the adhesive activity of leukocyte integrin CR3 (CD1 lb/CD 18, Mac-1, alpha m beta 2) on human neutrophils.//J. Exp. Med. 1991. - Vol. 173. -№ 6. - P. 1493-1500.

167. Loh C.S., MacRobert A.J., Bedwell J. et al. Oral versus intravenous administration of 5-aminolaevulinic acid for photodynamic therapy.// Br. J. Cancer. — 1993. Vol. 68. - P. 4151.

168. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Lewis F.A. et al. Protein measurment with the Folin phenol reagent.//J. Biol. Chem. 1951. - Vol. 193. - P. 265-275.

169. Ma J. and Jiang L. Photogeneration of singlet oxygen (IO2) and free radicals (Sen'-, O2*-) by tetrabrominated hypocrellin B derivative.// Free Radic. Res. 2001. - Vol. 35. -P. 767777.

170. MacDonald, Morgan, Bellnier et al. Subcellular localization patterns and their relationship to photodynamic activity of pyropheophorbide-a derivatives.// Photochem. Photobiol. — 1999.-Vol. 70.-P. 789-797.

171. Mach F., Schonbeck U. and Libby P. CD40 signaling in vascular cells: a key role in atherosclerosis?//Atherosclerosis. 1998. - Vol. 137 Suppl. - P. S89-95.

172. Majno G. and Joris I. Apoptosis, oncosis and necrosis. An overview of cell death. // Am. J. Pathol.- 1995.-Vol. 146.-№ l.-P. 3-15.

173. Martindale J.L. and Holbrook N.J. Cellular response to oxidative stress: signaling for suicide and survival. // J. Cell. Physiol. 2002. - Vol. 192. - P. 1-15.

174. Matroule J.Y., Carthy C.M., Granville D.J. et al. Mechanism of colon cancer cell apoptosis mediated by pyropheophorbide-A methylester photosensitization.// Oncogene. 2001. -Vol. 20.-P. 4070-4084.

175. Matroule J.Y., Volanti C. and Piette J. NF-kB in photodynamic therapy: discrepancies of a master regulator.// Photochem. Photobiol. 2006. - Vol. 82. - P. 1241-1246.

176. Meilhac O., Zhou M., Santanam N. and Parthasarathy S. Lipid peroxides induce expression of catalase in cultured vascular cells. // J. Lipid Res. 2000. - Vol. 41. - P. 1205-1213.

177. Melcher A., Gough M., Todryk S. and Vile R. Apoptosis or necrosis for tumor immunotherapy: what's in a name? // J. Mol. Med. 1999. - Vol. 77. - № 12. - P. 824833.

178. Merched A.J. and Chan L. Absence of p2lWafl/CiP1/SdiI modulates macrophage differentiation and inflammatory response and protects against atherosclerosis.// Circulation.-2004.-Vol. 110.-P. 3830-3841.

179. Mercurio F. and Manning A.M. Multiply signals converging on NFkB.// Curr. Opin. Cell Biol. 1999. - Vol. 11. - P. 226-232.

180. Meredith J.E., Fazeli B. and Schwartz M.A. The extracellular matrix as a cell survival factor. // Mol. Biol. Cell. 1993. - Vol. 4. - № 9. - P. 953-961.

181. Moan J. and Berg K. The photodegradation of porphyrins in cells can be used to estimate the lifetime of singlet oxygen.// Photochem. Photobiol. 1991. - Vol. 53. - P. 549-553.

182. Muller W.A., Ratti C.M., McDonnell S.L. and Cohn Z.A. A human endothelial cell-restricted, externally disposed plasmalemmal protein enriched in intercellular junctions.// J. Exp. Med. 1989. - Vol. 170. - № 2. - P. 399-414.

183. Muller W.A., Weigl S.A., Deng X. and Phillips D.M. PECAM-1 is required for transendothelial migration of leukocytes.// J. Exp. Med. 1993. - Vol. 178. - № 2. - P. 449-460.

184. Mwipatayi B.P., Hockings A., Hofman M. et al. Balloon angioplasty compared with stenting for treatment of femoropopliteal occlusive disease: a meta-analysis.// J. Vase. Surg. 2008. - Vol. 47. - № 2. - P. 461-469.

185. Nagata S., Obana A., Gohto Y. and Nakajima S. Necrotic and apoptotic cell death of human malignant melanoma cells following photodynamic therapy using an amphiphilic photosensitizer, ATX-S10 (Na). // Lasers Surg. Med. 2003. - Vol. 33. - P. 64-70.

186. Nakamura H., Sakurai I. Intimal cell population and location in arteries of Japanese children and youth.// Angiology. 1992. - Vol. 43. - P. 229-243.

187. Nawroth P.P. and Stern D.M. Modulation of endothelial cell hemostatic properties by tumor necrosis factor.// J. Exp. Med. 1986. - Vol. 1163. - № 3. - P. 740-745.

188. Obochi M.O., Ratkay L.G. and Levy J.G. Prolonged skin allograft survival after photodynamic therapy associated with modification of donor skin antigenisity.// Transplantation. 1997. - Vol. 63. -№ 6. - P. 810-817.

189. Oemar B.S., Yang Z. and Luscher T.F. Molecular and cellular mechanisms of atherosclerosis.// Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1995. - Vol. 4. - P. 82-91.

190. Okimura Y., Fujita H., Ogino T. et al. Regulation of 5-aminolevulinic acid-dependent protoporphyrin IX accumulations in human histiocytic lymphoma U937 cells.// Physiol. Chem. Phys. 2007. - Vol. 39. - P. 69-82.

191. Oleinick N.L., Morris R.L. and Belichenko I. The role of apoptosis in response to photodynamic therapy: what, where, why, and how. // Photochem Photobiol Sci. — 2002. -Vol. l.-P. 1-21.

192. Onizawa K., Muramatsu T., Matsuki M. et al. Low level (gallium-aluminium-arsenide) laser irradiation of Par-CIO cells and acinar cells of rat parotid glands. // Lasers Med. Sci. -2009.-Vol. 24.-P. 155-161.

193. Orekhov A.N., Andreeva E.R., Krushinsky A.V. et al. Intimal cells and atherosclerosis. Relationship between the number of intimal cells and major manifestations of atherosclerosis in human aorta. Am. J. Pathol. 1986. - Vol. 125. - P. 402-415.

194. Orekhov A.N., Andreeva E.R. and Tertov V.V. The distribution of cells and chemical components in the intima of human aorta.// Soc. Med. Rev. Cardiol. 1987. - Vol. l.-P. 75-100.

195. Orekhov A.N., Karpova I.I., Tertov V.V. et al. Cellular composition of atherosclerotic and uninvolved human aortic subendothelial intima. Light microscopy of dissociated aortic cells. // Am. J. Pahol. 1984. - Vol. 115. - P. 17-24.

196. Osterud B. and Bjorklid E. Role of monocytes in atherogenesis.// Physiol. Rev. — 2003. — Vol. 83.-№4. p. 1069-112.

197. Overall C.M. and Lopez-Otin C. Strategies for MMP inhibition in cancer: Innovations for the post-trial era.//Nat. Rev. Cancer. 2002. - Vol. 2. - P. 657-672.

198. Overhaus M., Heckenkamp J., Kossodo S. et al. Photodynamic therapy generates a matrix barrier to invasive vascular cell migration.// Circ. Res. 2000. - Vol. 86. - P. 334-340.

199. Park S., Kim J.A., Choi S. and Suh S.H. Superoxide is a potential culprit of caspase-3 dependent endothelial cell death induced by lisophosphatidylcholine. // J. Physiol. Pharmacol.-2010.-Vol. 61,-№4.-P. 375-381.

200. Pazos M.C. and Nader H.B. Effect of photodynamic therapy on the extracellar matrix and associated components.// Braz. J. Med. Biol. Res. 2007. - Vol. 40. - P. 1025-1035.

201. Peng Q., Farrants G.W., Madslien K. et al. Subcellular localization, redistribution and photobleaching of sulfonated aluminum phthalocyanincs in a human melanoma cell line. // Int. J. Cancer. 1991. - Vol. 49. - P. 290-295.

202. Peng Q., Warloe T., Berg K. et al. 5-Aminolevulinic acid-based photodynamic therapy. Clinical research and future challengers.// Cancer. 1997. - Vol. 79. - P. 2282-2308.

203. Pentikainen M.O., Oksjoki R., Oorni K. and Kovanen P.T. Lipoprotein lipase in the arterial wall: linking LDL to the arterial extracellular matrix and much more.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2002. - Vol. 22. - № 2. - P. 211-217.

204. Pietarinen-Runtti P., Lakari E., Raivio K.O. and Kinnula V.L. Expression of antioxidant enzymes in human inflammatory cells. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2000. - Vol. 278. — № l.-P. 118-125.

205. Piette J., Volanti C., Vantieghem A. et al. Cell death and growth arrest in responce to photodynamic therapy with membrane-bound photosensitizers. // Biochem. Pharmacol. -2003.-Vol. 66.-P. 1651-1659.

206. Plaetzer K., Kiesslich T., Krammer B. and Hammerl P. Characterization of the cell death modes and the associated changes in cellular energy supply in response to AlPcS4-PDT. // Photochem. Photobiol. Sci. -2002. Vol. l.-P. 172-177.

207. Pober J.S., Cotran R.S. The role of endothelial cells in inflammation.// Transplantation. -1990. Vol. 50. - № 4. - P. 537-544.

208. Pober J.S., Gimbrone M.A.J., Lapicrre L.A. et al. Overlapping patterns of activation of human endothelial cells by interleukin 1, tumor necrosis factor, and immune interferon.// J. Immunol. 1986.-Vol. 137.-№6.-P. 1893-1896.

209. Polla B.S. The heat shock response of human phagocytes. // Immunol. Lett. 1991. - Vol. 30.-P. 159-164.

210. Polla B.S. and Anderson R.R. Thermal injury by laser pulses: protection by heat shock despite failure to induce heat shock response. // Lasers Surg. Med. 1987. - Vol. 7. - P. 398-404.

211. Polla B.S., Kantengwa S., Francois D. et al. Mitochondria are selective targets for protective effects of heat shock against oxidative injury. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1996. Vol. 93. - P. 6458-6463.

212. Ravanat J.L. and Cadet J. Reaction of singlet oxygen with 2'-deoxyguanosine and DNA. Isolation and characterization of the main oxidation products.// Chem, Res. Toxicol. -1995.-Vol. 8.-P. 379-388.

213. Rebeiz N., Rebeiz C.C., Arkins S. et al. Photodestruction of tumor cells by induction of endogenous accumulation of protoporphyrin IX: enhancement by 1,10-phenanthroline.// Photochem. Photobiol. 1992. - Vol. 55. -№ 3. - P. 431-435.

214. Reiners J.J.Jr., Agostinis P., Berg K. et al. Assessing autophagy in the context of photodynamic therapy. // Autophagy. 2010. - Vol. 6. - № 1. - P. 7-18.

215. Rice G., Laszlo A., Li G. et al. Heat shock proteins within the mammalian cell cycle: relationship to thermal sensitivity, thermal tolerance and cell cycle progression. // J. Cell. Physiol. 1986.-Vol. 126.-№2.-P. 291-297.

216. Rice G.E., Munro J.M. and Bevilacqua M.P. Inducible cell adhesion molecule 110 (INCAM-110) is an endothelial receptor for lymphocytes. A CD11/CD18-independent adhesion mechanism.//J. Exp. Med. 1990.-Vol. 171.-№ 4.-P. 1369-1374.

217. Ross R. The pathogenesis of atherosclerosis: a perspective for the 1990s.//Nature. 1993. -Vol. 362.-P. 801-809.

218. Rossig L., Dimmeler S. and Zeiher A.M. Apoptosis in the vascular wall and atherosclerosis.// Basic. Res. Cardiol. 2001. - Vol. 96. - P. 11-22.

219. Rousset N., Vonarx V., Eleouet S. et al. Effects of photodynamic therapy on adhesion molecules and metastasis.// J. Photochem. Photobiol. B. 1999. - Vol. 52. - P. 65-73.

220. Rubbo H., Trostchansky A., Botti H. and Batthyany C. Interactions of nitric oxide and peroxynitritc with low-density lipoprotein.// Biol. Chem. 2002. - Vol. 383. - № 3-4. - P. 547-552.

221. Runnels J.M., ChenN., Ortel B. et al. BPD-MA-mediated photosensitization in vitro and in vivo: cellular adhesion and pi integrin expression in ovarian cancer cells. // Br. J. Cancer. 1999. - Vol. 80. - № 7. - P. 946-953.

222. Ryan D.H., Nuccie B.L., Abboud C.N. and Winslow J.M. Vascular cell adhesion molecule-1 and the integrin VLA-4 mediate adhesion of human В cell precursors to cultured bone marrow adherent cells.// J. Clin. Invest. 1991. - Vol. 88. - № 3. - P. 995-1004.

223. Sanz M.J., Hartnell A., Chisholm P. et al. Tumor necrosis factor alpha-induced eosinophil accumulation in rat skin is dependent on alpha4 integrin/vascular cell adhesion molecule-1 adhesion pathways.// Blood. 1997. - Vol. 1590. -№ 10. - P. 4144-4152.

224. Sata M., Saiura A., Kunisato A. et al. Hematopoietic stem cells differentiate into vascular cells that participate in the pathogenesis of atherosclerosis.// Nat. Med. 2002. - Vol. 8. -№4.-P. 403-409.

225. Schwartz S.M., Majesky M.W. and Murry C.E. The intima: development and monoclonal responses to injury.//Atherosclerosis. 1995.-Vol. 118 Suppl. - P. SI 25-140.

226. Sharwani A., Jerjes W., Hopper C. et al. Photodynamic therapy down-regulates the invasion promoting factors in human oral cancer.// Arch. Oral. Biol. 2006. — Vol. 51. — № 12. -P. 1104-1111.

227. Sheng C., Pogue B.W., Wang E. et al. Assessment of photosensitizer dosimetry and tissue damage assay for photodynamic treatment in advance-stage tumors. // Photochem. Photobiol. 2004. - Vol. 79. - P. 520-525.

228. Shepro D. and Morel N.M. Pericyte physiology. // FASEB J. 1993. - Vol. 7. - № 11. - P. 1031-1038.

229. Shi Q., Vandeberg J.F., Jett C. et al. Arterial endothelial dysfunction in baboons fed a high-cholesterol, high-fat diet.// Am. J. Clin. Nutr. 2005. - Vol. 82. - P. 751-759.

230. Shi S. and Gronthos S. Perivascular niche of postnatal mesenchymal stem cells in human bone marrow and dental pulp.// J. Bone Miner. Res. 2003. - Vol. 18. - № 4. - P. 696704.

231. Sims D.E. Reccnt advances in pericyte biology — implications for health and disease. // Can. J. Cardiol. -1991,- Vol. 7. № 10. - P. 431-443.

232. Smith S.G., Bcdwell J., MacRobert A.J. et al. Experimental studies to assess the potential of photodynamic therapy for the treatment of bronchial carcinomas. // Thorax. 1993. — Vol. 48.-P. 474-480.

233. Sorger P.K. Heat shock factor and the heat shock response. // Cell. 1991. - Vol. 65. - P. 363-366.

234. Spörri S., Chopra V., Egger N. et al. Effects of 5-aminolaevulenic acid on human ovarian cancer cells and human vascular endothelial cells in vitro.// J. Photochem. Photobiol. B. — 2001.-Vol. 64.-P. 8-20.

235. Stary H.C. Evolution and progression of atherosclerotic lesions in coronary arteries of children and young adults.// Atherosclerosis. 1989. - Vol. 9. - P. 119-132.

236. Statius van Eps R.G., Mark L.L., Schiereck J. and LaMuraglia G.M. Photodynamic therapy inhibits the injury- induced fibrotic response of vascular smooth muscle cells.// Eur. Vase. Endovasc Surg. 1999. - Vol. 18. - P. 417-423.

237. Stocker R. and Keaney J.F. Role of oxidative modifications in atherosclerosis.// Physiol. Rev.-2004.-Vol. 84.-№4,-P. 1381-1478.

238. Stockinger H., Gadd S.J., Eher R. et al. Molecular characterization and functional analysis of the leukocyte surface protein CD31.// J. Immunol. 1990. - Vol. 145. - № 11. - P. 3889-3897.

239. Sun X. and Leung W.N. Photodynamic therapy with pyropheophorbide-a methyl ester in human lung carcinoma cancer cell: efficacy, localization and apoptosis.// Photochem. Photobiol. 2002. - Vol. 75. - P. 644-651.

240. Suzuki K., Tatsumi H., Satoh S. et al. Manganese-superoxide dismutase in endothelial cells: localization and mechanism of induction. // Am. J. Physiol. 1993. - Vol. 265. - № 4. - P. 1173-1178.

241. Tabas I. Macrophage apoptosis in atherosclerosis: consequences on plaque progression and the role of endoplasmic reticulum stress.// Antioxid. Redox. Signal. 2009. - Vol. 11. - № 9.-P. 2333-2339.

242. Takashi K., Takeya M. and Sakashita N. Multifunctional roles of macrophages in the development and progression of atherosclerosis in humans and experimental animals.// Med. Electron. Microsc. 2002. - Vol. 35. - P. 179-203.

243. Tate Y., Yoshiba K., Yoshiba N. et al. Odontoblast responses to GaAlAs laser irradiation in rat molars: an experimental study using hcat-shock protein-25 immunohistochemistry. // Eur. J. Oral Sci. 2006. - Vol. 114. - P. 50-57.

244. Thannikal V.J. and Fanburg B.L. Reactive oxygen species in cellular signaling.// Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2000. - Vol. 279. - № 6. - P. 1005-1028.

245. Thyberg J., Hedin U., Sjolund M. et al. Regulation of differentiated properties and proliferation of arterial smooth muscle cells.// Arteriosclerosis. 1990. - Vol. 10. - P. 966990.

246. Tintut Y., Alfonso Z., Saini T. et al. Multilineage potential of cells from artery wall.// Circulation.-2003.-Vol. 108.-P. 2505-2510.

247. Toborek M., Barger S.W., Mattson M.P. et al. Linoleic acid and TNF-a cross-amplify oxidative injury and dysfunction of endothelial cells. // J Lipid Res. 1996. - Vol. 37. -P.123-135.

248. Tromberg B.J., Orenstein A., Kimel S. et al. In vivo tumor oxygen tension measurements for the evaluation of the efficiency of photodynamic therapy. // Photochem. Photobiol. 1990.-Vol. 52.-P. 375-385.

249. Thyberg J., Hedin U., Sjolund M. et al. Regulation of differentiated properties and proliferation of arterial smooth muscle cells.// Arteriosclerosis. 1990. - Vol. 10. - P. 966990.

250. Uzdensky A.B., Jureniene A., Kolpakova E. et al. Photosensitization with protoporphyrin IX inhibits attachment of cancer cells to a substratum. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. - Vol. 322. - № 2. - P.452-457.

251. Valko M., Leibfritz D., Moncol J. et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease.// Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2007. - Vol. 39. -№ l.-P. 44-84.

252. Vanhoutte P.M. Endothelial dysfunction: the first step toward coronary atherosclerosis. // Circ. J. 2009. - Vol. 73. - № 4. - P. 595-601.

253. Vega V.L. and Maio A. Increase in phagocytosis after geldanamycin treatment or heat shock: role of heat shock proteins. // J. Immunol. 2005. - Vol. 175. - P. 5280-5287.

254. Velican D. and Velican C. Histochcmical study on the glucosaminoglycans (acid mycopolisacharides) of the human coronary arteries.// Acta Histochem. Bd. 1977. -Vol. 59.-P. 190-200.

255. Virmani A., Burke A.P. and Farb A. Plaque morphology in sudden coronary death.// Cardiologia. 1998. - Vol. 43. - P. 267-271.

256. Volanti C., Gloire G., Vanderplasschen A. et al. Downregulation of ICAM-1 and VCAM-1 expression in endothelial cells treated by photodynamic therapy.// Oncogene. — 2004. -Vol. 23. P.8649-8658.

257. Wang R., Kovalchin J.T., Muhlenkamp P. and Chandawarkar RY. Exogenous heat shock protein 70 binds macrophage lipid raft microdomain and stimulates phagocytosis, processing and MHC-II presentation of antigens. // Blood. 2006. - Vol. 107. - P. 16361642.

258. Wang S., Diller K.R. and Aggarwal S.J. Kinetics study of endogenous heat-shock protein 70 expression. // J. Biomech. Eng. 2003. - Vol. 105. - P. 794-797.

259. Wang Y.R., Xiao X.Z., Huang S.N. et al. Heat shock pretreatment prevents hydrogen peroxide injury of pulmonary endothelial cells and macrophages in culture.// Shock. — 1996. Vol. 6.-2. - P. 134-141.

260. Weiler A., Isenmann S. and Vestweber D. Cloning of the mouse endothelial selectins. Expression of both E- and P-selectin is inducible by tumor necrosis factor alpha.// J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. -№ 21. - P. 15176-15183.

261. Wick G., Knoflach M. and Xu Q. Autoimmune and inflammatory mechanisms in atherosclerosis.// Annu. Rev. Immunol. 2004. - Vol. 22. - P. 361-403.

262. Wilson M.R. Apoptotic signal transduction: emerging pathways. // Biochem. Cell Biol. -1998. Vol. 76. - № 4. - P. 573-582.

263. Woodburn K.W., Rodriguez S., Miller R. et al. Cardiovascular indications using Autrin Photosensitization.// Proc. SPIE's BIOS. 2000. - P. 3909-3914.

264. Woodburn K.W., Vardaxis N.J., III11 J.S. et al. Subcellular localization of porphyrins using confocal laser scanning microscopy.// Photochem. Photobiol. 1991. - Vol. 54. — P. 725732.

265. Wu S.M., Ren Q.G., Zhou M.O. et al. Photodynamic effects of 5-aminolevulinic acid and its hexylester on several cell lines.// Acta. Biochim. Biophys. Sin. 2003. - Vol. 35. - № 7.-P. 665-660.

266. Wild L., Burn J.L., Reed M.W.R. and Brown N.J. Factors affecting aminolaevulinic acid-induced generation of protoporphyrin IX.// Br. J. Cancer. 1997. - Vol. 76. — № 6. - P. 705-712.

267. Xu Q. Role of heat shock proteins in atherosclerosis. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. -2002. Vol. 22. - P. 1547-1559.

268. Xu Q., Dietrich H., Steiner H.J. et al. Induction of arteriosclerosis in normocholesterolemic rabbits by immunization with heat shock protein 65.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. -1992.-Vol. 12.-P. 789-799.

269. Xue L.Y., Chiu S.M. and Oleinick N.L. Photodynamic therapyinduced death of MCF-7 human breast cancer cells: a role for caspase-3 in the late steps of apoptosis but not for the critical lethal event.// Exp. Cell Res. 2001. - Vol. 263. - P. 145-155.

270. Yaakobi T., Shoshany Y., Levkovitz S. et al. Long-term effects of low energy laser irradiation on infarction and reperfusion injury in the rat heart. // J. Appl. Physiol. 2001. -Vol. 90.-P. 2411-2419.

271. Yang Z.Y., Simari R.D., Perkins N.D. et al. Role of the cyclin-dependent kinase inhibitor in limiting intimal cell proliferation in response to arterial injury,// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996.-Vol. 93.-P. 7905-7910.

272. Zhang H., Kong X., Kang J. et al. Oxidative stress induces parallel autophagy and mitochondria dysfunction in human glioma U251 cells. // Toxicol. Sei. — 2009. Vol. 110. -№ 2. - P. 376-388.

273. Zimmerman G.A., Elstad M.R., Lorant D.E. et al. Platelet-activating factor (PAF): signalling and adhesion in cell-cell interactions.// Adv. Exp. Med. Biol. 1996. - Vol. 416. -P. 297-304.

274. Zimmerman G.A., Mclntyre T.M., Mehra M. and Prescott S.M. Endothelial celi-associated platelet-activating factor: a novel mechanism for signaling intercellular adhesion.// J. Cell. Biol. 1990. - Vol. 110. - № 2. - P. 529-540.

275. Zitvogel L., Casares N., Pequignot M.O. et al. Immune response against dying tumor cells. //Adv. Immunol. 2004. - Vol. 84.-P. 131-179.

276. Zuk P.A., Zhu M., Ashjian P. et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. // Molecular biology of the cell. 2002. - Vol. 13. - P.4279-4295.

277. Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H. et al. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.// Tissue Eng. 2001. - Vol. 7. - P. 211-228.

Информация о работе

Ударцева, Ольга Олеговна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.03.04

Диссертация

Сравнительная характеристика эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in vitro - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы