Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами "Фотогем", "Фотосенс" и "Фотодитазин"

Бурмистрова, Нелля Владиславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами "Фотогем", "Фотосенс" и "Фотодитазин"
ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами "Фотогем", "Фотосенс" и "Фотодитазин""

На правах рукописи

Бурмистрова Нелля Владиславовна

Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами «Фотогем», «Фотосенс» и «Фотодитазин»

03.00.01 - радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени ' кандидата биологических наук

Обнинск - 2005

Работа выполнена в Государственном Учреждении Медицинском Радиологическом Научном Центре РАМН г. Обнинск.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Михаил Александрович Каплан доктор медицинских наук, профессор Рутений Александрович Бродский

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Анатолий Георгиевич Коноплянников доктор технических наук, профессор Андрей Рудольфович Евстигнеев

Ведущая организация: Государственный научный центр лазерной медицины Минздрава России

Защита состоится 24 января 2005 года в 11 ч. на заседании диссертационного совета Д 001.011.01 в ГУ Медицинском радиологическом научном центре РАМН (249036, Калужская обл., г. Обнинск, ул. Королева, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Медицинского радиологического научного центра РАМН.

Автореферат разослан « / у>С$¥ХЮклК 2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Куликов В.А.

сШб -у

2 2 (о 03 О О

Актуальность работы

Одной из задач медицины и биологии является поиск способов повышения эффективности лечения злокачественных новообразований с максимальным разрушением опухоли при минимальном повреждении здоровых тканей. Перспективным направлением в решении проблемы избирательного поражения опухолей является метод фотодинамической терапии (ФДТ). Будущее ФДТ заключается в создании безопасных, эффективных, готовых к употреблению препаратов, быстрое выведение которых из организма позволит свести к минимуму необходимость защиты пациентов от солнечного света после курса лечения. Фотосенсибилизатор (ФС) должен избирательно поглощаться и удерживаться в значительных пропорциях опухолью, чем окружающей или отдаленной здоровой тканью. Создание новых препаратов очень дорогостоящий и довольно длительный процесс. Поэтому важным моментом дальнейшего развития метода фотодинамической терапии является оптимизация режимов с существующими препаратами. Это позволяет оценить реакцию тканей на фотодинамическое воздействие и выявить достоинства и недостатки используемых фотосенсибилизаторов. Для успешного проведения лечения методом ФДТ необходимо четко определить оптимальные параметры дозировки ФС и плотности энергии лазерного излучения.

Цель и основные задачи исследования

Целью настоящей работы являлась оценка эффективности «Фотогема», «Фотосенса» и «Фотодитазина» для фотодинамической терапии на модели опухоли саркома М-1 крыс.

Задачи исследования

1. Изучить динамику накопления «Фотосенса» и «Фотодитазина» в опухолевой и здоровой тканях крыс с саркомой М-1.

2. Установить оптимальное сочетание дозы исследуемых фотосенсибилизаторов и плотности энергии лазерного излучения.

3. Сопоставить эффективность фотодинамической терапии саркомы М-1 с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином».

4. Исследовать морфологические изменения в зоне фотодинамического воздействия при оптимальных соотношениях дозы препаратов и плотности энергии лазерного излучения.

Научная новизна

Впервые проведена сравнительная оценка эффективности разработанных в нашей стране фотосенсибилизаторов, принадлежащих различным классам химических соединений. Определены оптимальные соотношения дозы «Фотогема», «Фотосенса» и «Фотодитазина» и плотности энергии лазерного излучения для ФДТ саркомы М-1. Выявлена зависимость эффективности ФДТ от дозы вводимого ФС и плотности энергии лазерного излучения. Изучены морфологические изменения в опухолевой и здоровой тканях после сеанса ФДТ с использованием исследованных препаратов.

Научно-практическая значимость

Уточнены принципы и методические основы применения «Фотогема», «Фотосенса» и «Фотодитазина». Показана сравнительная эффективность исследованных препаратов для ФДТ злокачественных опухолей в экспериментальных условиях. Полученные в работе результата " позволяют выбрать оптимальные параметры начала

к-

облучения после введения ФС и условия для проведения терапии. Представленные данные свидетельствуют о перспективности и целесообразности использования полученных сведений для лечения онкологических заболеваний. Разработанные методики внедряются в клинику МРНЦ РАМН.

На защиту выносятся основные положения:

1. Фотодинамическая терапия с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином» подавляет рост саркомы М-1 при всех использованных дозах сенсибилизаторов и плотности энергии лазерного излучения.

2. Установленные соотношения дозы препаратов и плотности энергии лазерного облучения позволяют получить максимальный фотодинамический эффект.

3. Максимальное разрушение опухоли при минимальном повреждении окружающих тканей достигается после ФДТ с «Фотодитазином».

Основные положения диссертационной работы представлены в трех публикациях и доложены на трех научно-практических конференциях:

- «Современные методы флюоресцентной диагностики, фотодинамической и лазерной терапии» 13-15 июня 2001 г., г. Обнинск

- Всероссийская научно-практическая конференция «Отечественные противоопухолевые препараты» 17-19 марта 2004 г., г. Москва

- Всероссийская научно-практическая конференция «Отечественные противоопухолевые препараты» 16-18 марта 2005 г., г. Москва

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 111 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 таблицами, 27 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы по материалам и методам исследования, главы по результатам исследования и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, включающего 148 источников.

. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на 529 беспородных крысах (самках) с перевитой под кожу в область бедра саркомой М-1. Для решения поставленных задач использовали синтезированные в нашей стране фотосенсибилизаторы, которые относятся к разным классам химических соединений «Фотогем» -порфиринам, «Фотосенс» - фталоцианинам и «Фотодитазин» - хлоринам. Контролем к каждой группе эксперимента служили интактные живот ные-опухоленосители. ФС вводили внутрибрюшинно в дозах: 2,5; 5,0; 10,0 мг/кг массы тела животного. Для проведения процедуры облучения животных наркотизировали 0,25% раствором тиопентала Na в дозе 0,1 мл/100 г массы тела. Шерстный покров в зоне роста опухоли депилировали. Для корректной оценки эффективности ФДТ во всех режимах облучения применяли одинаковые величины мощности излучения - 0,75 Вт и диаметра светового пятна - 1,5 см. Данным параметрам соответствует плотность мощности лазерного излучения 0,42 Вт/см2. Плотность экспозиционной дозы облучения составляла 150, 300, 600 Дж/см2. Облучение после введения «Фотогема» проводили через 3, 6, 24 часа на лазерном терапевтическом аппарате на красителе с накачкой «Металаз-М-1» (к - 630 нм); «Фотосенса» - через 3, 6, 24 часа на полупроводниковом лазерном аппарате «ЛД 6802000» (А. - 670 нм); «Фотодитазина» - через 2,5 - 3 часа на полупроводниковом лазерном аппарате «Аткус-2» (X - 662 нм).

Наблюдение за животными проводили в течение 21 дня. Регулярно на 7, 10, 14 и 21 сутки регистрировали общее физиологическое состояние и

объем опухоли, определяемый по формуле: V = п ^ , где: d |23 - три

6 ^

взаимно перпендикулярных диаметра опухоли. Фотодинамический эффект оценивали с помощью показателя полной регрессии (отсутствие пальпируемой опухоли); показателя продолженного роста (рост опухоли после ФДТ) и коэффициента абсолютного прироста опухоли (К),

к Jt-VQ

рассчитываемому по формуле: Л ~ „ , где: Vo - объем опухоли до

"о

воздействия; VT - объем опухоли на определенный срок наблюдения.

Для морфологического исследования на месте облучения после ФДТ вырезали мягкие ткани бедра животных толщиной 5 мм, фиксировали в 10% формалине трое суток, затем обезвоживали спиртами и заливали в парафин. Микротомные срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилин-эозином.

При обработке экспериментальных данных использовали стандартные (параметрические и непараметрические) методы статистического анализа. Все первичные данные проверяли на наличие артефактов. В случае сравнения двух несвязанных выборок использовали непараметрический U-критерием (критерий Уилкоксона - Манна - Уитни).

При оценке полученных экспериментальных данных использовали пакет iipoi раммы STATISTICA 6.0 (StatSoft, USA).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование динамики накопления ФС в тканях

Перед сеансом ФДТ проводили измерения накопления ФС в опухолевой и здоровой тканях на диагностическом спектрометрическом комплексе «Ьева-б». Датчики подводили к коже над опухолью в 4 точках. По полученным данным вычисляли среднее значение накопления препарата в опухоли на определенный срок. Накопление в здоровых тканях определяли на противоположном бедре. Индекс контрастности опухоль\здоровая ткань V

вычисляли по отношению величин накопления ФС в опухоли и здоровой ткани Время накопления препаратов имеет индивидуальные колебания. Увеличение дозы препарата (2,5; 5,0 и 10,0 мг/кг массы животного) не приводит к существенной разнице накопления сенсибилизатора в тканях.

Высокое содержание «Фотосенса» в опухоли при всех использованных дозах отмечается уже через 1 час и сохраняется до трех суток. Однако в здоровых тканях также наблюдается высокое содержание ФС. Максимальный индекс контрастности опухоль/здоровая ткань при всех использованных дозах регистрируется через 1 сутки после введения «Фотосенса» (рис. 1).

Содержание «Фотодитазина» в опухоли превышает концентрацию ФС в здоровой ткани уже через 30 мин после введения. Высокий показатель 1

индекса контрастности опухоль/здоровая ткань регистрируется при всех использованных дозах ФС в интервале от 1,5 до 6 часов (рис.1).

Таким образом, сравнение данных о накоплении ФС в опухоли показало, что «Фотодитазин» быстрее накапливается в экспериментальной саркоме М-1 после введения препарата. В то же время индекс контрастности опухоль/здоровая ткань «Фотосенса» и «Фотодитазина» практически одинаковый.

Фотосенс

Фотодитазин

дош ФС 2.5 мг/кг

||||||||||

О 0,5 1 1,в 2 2,8 3 4 в 24 72 ((сугки> ®

1 1,6 2 2,5 3

дола ФС 5.0 мг/кг

||Щ|Щ||

О 0,5 1 1,6 2 1А 3 4 6 24 72 | (су гки) 0 0 6 1 1.6 2 2,5 1 4 «

<)<??я ФС 10.0 мг/кг

Рис. 1. Индекс контрастности опухоль/здоровая ткань (диагностическо-спектрометрический комплекс «Ьеяа-б»)

Изучение временного интервала между введением ФС и облучением лазером.

Исследование временного интервала с момента введения ФС до облучения лазером проводили в связи с тем, что спектрометрическое исследование «Фотогема» не представлялось возможным. ФДТ с «Фотогемом» и «Фотосенсом» проводили через разные интервалы времени после введения ФС. Сенсибилизаторы в дозе 5 мг/кг массы животного вводили за 3, 6 и 24 ч до облучения лазером плотностью энергии 300 Дж/см2.

По материалам рис. 2 видно, что при 3-х и 6-ти часовом интервалах времени между введением «Фотогема» и лазерным воздействием полной регрессии саркомы М-1 не отмечается. В результате проведения сеанса ФДТ через 24 часа после введения ФС полная регрессия опухоли на 21 сутки наблюдения составляет 50%. У остальных 50% животных опухоли продолжали расти. Однако при этом коэффициент абсолютного прироста опухолей ниже, чем в контрольной группе.

Анализ проведенного исследования с «Фотосенсом» (рис. 2) показывает, что максимальный показатель (50%) полной регрессии саркомы М-1 наблюдали при облучении через 24 ч после введения препарата. В результате ФДТ, проведенной через 3 и 6 часов после введения препарата полную регрессию отмечали только у 10 и 18%

%100-|

90-

80-

70-

60-

50-

40-

30-

20-

10-

Полная регрессия опухоли

Коэффициент абсолютного прирост опухоли

3 ч 6 ч 24 ч контроль

11 Фотогем Фотосенс

ФС-5,0мг/кг Е-300Дж/см2

Рис. 2. Эффективность ФДТ с «Фотогемом» и «Фотосенсом»

животных в каждой группе соответственно. Однако коэффициент абсолютного прироста опухолей, продолжающих рост после проведенной ФДТ с «Фотосенсом», значимо ниже по сравнению с контрольной группой и данными исследования «Фотогема».

Отсюда следует, что проведение курса фотодинамической терапии саркомы М-1 с «Фотогемом» и «Фотосенсом» нужно осуществлять во временном интервале 24 ч с момента введения ФС.

Оценка эффективности ФДТ с различными ФС

Эффективность ФДТ оценивали в зависимости от дозы препарата и плотности энергии лазерного излучения по двум показателям: темпу прироста опухолей, продолжающих рост после проведенной терапии и по проценту полной регрессии на 21 сутки.

Эффективность ФДТ с «Фотогемом». При анализе экспериментальных данных (табл. 1) можно отметить статистически значимое снижение темпа роста опухоли после ФДТ со следующими параметрами: введение 2,5 мг/кг «Фотогема» при плотности энергии 300 Дж/см2; 2,5; 5,0; 10,0 мг/кг препарата в сочетании с плотностью энергии лазерного облучения 600 Дж/см2. Результаты полной регрессии саркомы М-1 в зависимости от количества введенного ФС и плотности энергии лазерного облучения представлены на рис. 3-а. Наибольший процент неудач лечения саркомы М-1 имел место при использовании «Фотогема» в дозе 2,5 мг/кг. С увеличением количества вводимого ФС в 2 эффективность ФДТ повышается. Полная регрессия опухоли отмечается в 60% случаев. Дальнейшее повышение количества введенного препарата до 10,0 мг/кг не улучшает результатов лечения. Максимально эффективная плотность энергии лазерного излучения 600 Дж/см2.

Следовательно, оптимальной дозой «Фотогема» для ФДТ является 5,0 мг/кг при плотности энергии лазерного излучения 600 Дж/см2.

Табтца 1

Коэффициент абсолютного прироста саркомы М-1 после ФДТ с «Фотогемом» (М±8)

Плотность энергии, Дж/см2 Сроки наблюдений, сут.

7 10 14 21

Доза «Фотогема» 2,5 мг/кг

150 2,5±0,5* р=0,019 8,8±1,2* р=0,033 14,6±2,6 р=0,093 46,7±8,2 р=0,425

300 3,7±0,7* р=0,021 6,2±1,1 * р=0,043 12,3±1,7 р=0,080 26,1 ±3,4* р=0,024

600 0,9±0,4** р=0,002 1,82±0,7** р=0,0005 20,4±17,7 р=0,189 12,0±3,6** р=0,003

Доза «Фотогема» 5,0 мг/кг

150 3,6±1,2* р=0,013 8,7±4,0** р=0,004 14,2±4,3* р=0,038 49,8±8,8 р=0,341

300 2,6±0,7* р=0,020 4,2±1,4** р=0,006 7,0±2,2** р=0,004 34,6±10,3 р=0,262

600 1,8±1,1* р=0,019 3,6±1,8** р=0,007 8,6±1,9** р=0,007 25,9±6,3* р=0,024

Доза «Фотогема» 10,0 мг/кг

150 6,8±0,9 р=0,066 12,7±2,2* р=0,035 22,4±4,2* р=0,036 49,7±5,8 р=0,032

300 4,3±1,4 р=0,286 11,0±3,9 р=0,355 20,4±5,4 р=0,259 44,1 ±7,6 р=0,427

600 5,6±0,6 р=0,520 9,1 ±2,2* р=0,022 10,6±4,0** р=0,008 30,0±8,2* р=0,036

Контроль 5,1±1,0 9,8±2,1 22,8±6,3 48,2±9,4

Таблица -

Коэффициент абсолютного прироста саркомы М-1 после ФДТ через 24 ч после введения «Фотосенса» (М±Б)

Плотность Сроки наблюдений, сут.

энергии, Дж/см2 7 10 14 21

Доза «Фотосенса» 2,5 мг/кг

150 2,3±0,3** 4,1 ±0,9** 9,5±3,5** 17,2±3,7**

р=0,001 р=0,001 р=0,008 р=0,009

300 1,7±1,3* 1,7±0,9** 5,5±2,8** 11,9±3,7**

р=0,0|9 р=0,004 р=0,002 р=0,003

600 4,4±4,2* 7,9±4,7**

- 0 р=0,021 р=0,009

Доза «Фотосенса» 5,0 мг/кг

150 1,6±0,5** 4,3±0,9** 7,3±2,2** 25,6±4,9*

р=0,001 р=0,004 р=0,004 р=0,024

300 0,1 ±0,1 1,5±1,1** ' 4,8±1,3** 22,8±5,1*

р=0,500 р=0,004 р=0,001 р=0,019

600 15,7±10,0** р=0,003

Доза «Фотосенса» 10,0 мг/кг

150 0,6±0,3** 0,8±0,4** 4,8±1,7** 17,6±5,4**

р=0,003 р=0,0005 р=0,001 р=0,009

300 0,4±0,1** 1,0±0,3** 2,9±0,6** 13,0±4,5**

р=0,0005 р=0,0005 р=0,0005 р=0,003

600 - - 2,0 6,4

Контроль 5,8±0,7 9,5±1,0 16,9±2,1 43,7±9,7

Таблица 3

Коэффициент абсолютного прироста саркомы М-1 после ФДТ через 3 ч после введения «Фотодитазина» (М±8)

Плотность энергии, Дж/см2 Сроки наблюдений, сут.

7 10 14 21

Доза «Фотодитазина» 2,5 мг/кг

150 1,2±0,7** р=0,0005 2,6±0,9** р=0,0002 10,8±2,8** р=0,0005 39,2±8,9** р=0,040

300 3,1 ±2,8 р=0,068 10,3±5,8 р=0,304 11,9±5,8* 0,032 37,2±10,9* р=0,023

600 - - - 13,4±7,5** р=0,005

Доза «Фотодитазина» 5,0 мг/кг

150 1,1±1,1* р=0,015 3,4±2,4* р=0,019 4,6±1,5** 0,0005 25,5±9,2** р=0,007

300 0,5 р-0,500 4,6 р=0,500 3,0±1,5** р=0,003 23,8±2,2** р=0,004

600 - - 6,2 р=0500 14,3±12,8* р=0,018

Доза «Фотодитазина» 10,0 мг/кг

150 0,2±0,2** р=0,009 0,9±0,4** р=0,002 6,4±2,1** р=0,0005 18,4±6,0** р=0,0005

300 0 9,7±7,3 р=0,134 13,2±8,1* р=0,029 15,2±9,2** р=0,003

600 - - - -

Контроль 6,5±0,6 14,9±2,0 33,4±4,0 78,5±9,4

2,5 мг/кг 5,0 мг/кг 10,0 мг/кг

Г~~1150 Дж/см2 ^> 300 Дж/см2 I— 600 Дж/см2

Рис.3. Процент полной регрессии после ФДТ с «Фотогемом» (а), «Фотосенсом» (б), «Фотодитазином» (в)

1(1

Эффективность ФДТ с «Фотосенсом» зависит от количества введенного препарата и плотности энергии лазерного излучения. Полученные результаты свидетельствуют, что ФДТ с «Фотосенсом» значимо тормозит рост опухолевого узла в сравнении с контролем на все сроки наблюдения (табл. 2). Самый низкий прирост опухолей продолжающих расти после фотодинамического воздействия отмечали при облучении лазером с плотностью энергии 600 Дж/см2. Высокий показатель регрессии опухоли регистрировали при сочетании 2,5 и 5,0 мг/кг «Фотосенса» с плотностью световой энергии 600 Дж/см2 (рис. З-б). Максимальный фотодинамический эффект отмечали при сочетании «Фотосенса» в дозе 10,0 мг/кг, Е-600 Дж/см2. В этом случае полная регрессия опухоли отмечается в 86 %.

Эффективность ФДТ с «Фотодитазином». Анализ коэффициента абсолютного прироста опухолей, продолжающих расти после проведенной терапии, показал, что ФДТ с «Фотодитазином» статистичёски значимо снижает прирост саркомы М-1 при использованных дозах на все сроки наблюдения (табл. 3). С увеличением дозы «Фотодитазина» темп роста опухолей замедляется в 1,5-2 раза. В группах животных, подвергшихся облучению лазером с плотностью энергии 600 Дж/см2, коэффициент абсолютного прироста саркомы М-1 в 2-3 раза ниже, чем у крыс, получавших 150 Дж/см2. При анализе показателя полной регрессии (рис. 3в), следует обратить внимание, что после ФДТ с «Фотодитазином» в дозе 2,5 мг/кг при плотности энергии лазерного излучения 300 Дж/см2 отметили полную регрессию опухолей в 78% случаев. При этом на месте воздействия наблюдали полное заживление с хорошим косметическим эффектом и восстановлением шерстного покрова. При сочетании 10,0 мг/кг «Фотодитазина» и плотности энергии 600 Дж/см2 отмечали полную регрессию опухоли в 100% случаев. Однако при таких параметрах ФДТ

фиксировали значительный отек облученной конечности, атрофию мышечной ткани, образование на месте воздействия плотного толстого струпа, после отторжения, которого обнажалась язва, сохраняющаяся до конца срока наблюдения.

Таким образом, максимальный фотодинамический эффект после ФДТ с «Фотодитазином» отмечали при сочетании 10,0 мг/кг препарата и плотности энергии лазерного излучения 600 Дж/см2.

Для детального анализа эффективности ФДТ саркомы М-1 провели оценку морфологических изменений в зоне облучения с выбранными оптимальными сочетаниями дозы использованных ФС и плотности энергии лазерного излучения на 21 сутки после воздействия.

Анализ морфочогических изменений после ФДТ с «Фотогемом» в дозе 5 мг/кг, Е-600 Дж/см2. В зоне воздействия наблюдали осумкованную опухоль, часть которой некротизирована. Окружающая ее соединительная ткань отечна, подлежащие мышечные волокна находятся в стадии миоцитолизиса (рис. 4 -а).

Анализ морфологических изменений после ФДТ с «Фотосенсом» в дозе 10 мг/кг, Е-600 Дж/см2. В зоне воздействия отмечали ограниченную капсулой опухоль в стадии некроза и образования клеточного детрита г (рис. 4 - б).

Анализ морфочогических изменений после ФДТ с «Фотодитазином» в • дозе 10,0 мг/кг, Е-600 Дж/см2. На месте воздействия опухолевых

образований не выявили. Микроскопически видна резко измененная мышечная ткань с отечными гомогенизированными, лизированными волокнами и частичные разрывы мышц. Соединительно-тканные структуры эндо- и перимизия подвержены полной деструкции, как и расположенные в них сосуды (рис. 4 - в).

Рис. 4. Морфологические изменения тканей после ФДТ с «Фотогемом» (а), «Фотосенсом» (б) и «Фотодитазином»(в, г)

В связи с тем, что после ФДТ с «Фотодитазином» в дозе 2,5 мг/кг при плотности энергии лазерного иг ¡учения 300 Дж/см2 регистрировали высокий процент полной регрессии опухолей с полным заживлением и восстановлением шерстного покрова, провели анализ морфологического исследования с выбранным сочетанием. На 21 сутки на месте воздействия опухолевая ткань не обнаружена, мышечные волокна находятся в стадии миоцитолизиса (рис. 4 - г).

Полученные данные морфологического исследования свидетельствуют, что ФДТ саркомы М-1 с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином» вызывает некродистрофические изменения в опухоли.

Наиболее результативные разрушения опухоли при минимальном повреждении мышечно-соединительно-тканных и сосудистых структур бедра наблюдали при сочетании 2,5 мг/кг «Фотодитазина» и плотности лазерного излучения 300 Дж/см2. При сочетании дозы «Фотодитазина» 10 мг/кг и плотности лазерного излучения 600 Дж/см2, вызывающих наиболее интенсивную деструкцию саркомы М-1, в мышечных и кожных гистоструктурах наблюдали глубокие некродистрофические и рубцовые 4 изменения.

Согласно существующим представлениям, эффективность ФДТ обусловлена способностью ФС накапливаться в высоких концентрациях опухолевой тканью. На накопление ФС влияют многие параметры, в том числе химическая структура соединения. Известно, что наибольшую эффективность в качестве ФС для ФДТ проявляют амфифильные соединения. В настоящее время ведется поиск таких соединений среди производных хлоринового ряда. Представителем группы хлоринов в настоящей работе является препарат «Фотодитазин». Сравнение эффективности изученных ФС выявило неоспоримые преимущества нового отечественного препарата «Фотодитазин» (рис. 5).

Максимальный процент полной регрессии саркомы М-1 с «Фотогемом» наблюдали в 60% случаев, в то время как с «Фотосенсом» и «Фотодитазином» в 86% и 100% соответственно. Однако достоверность отличий по критерию Хи-квадрат (р=0,01) фиксировали только при сравнении эффективности ФДТ с «Фотогемом» и «Фотодитазином». Полученные результаты дают основание отнести «Фотодитазин» к числу наиболее эффективных ФС для ФДТ злокачественных новообразований.

Фотогем (5,0 мг/кг)

г-Ц

полная регрессия опухоли ■■■ продолженный рост опухоли

Рис. 5. Эффективность ФДТ с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином»

В целом, в работе представлена сравнительная оценка эффективности трех разработанных в нашей стране ФС, принадлежащих различным классам химических соединений. Определены оптимальные параметры ФДТ саркомы М-1. Изучены морфологические изменения в опухолевой и здоровой тканях после сеанса ФДТ с использованием исследованных препаратов. Представленные результаты позволяют выбрать оптимальное время начала облучения после введения ФС. Полученные данные свидетельствуют о перспективности и целесообразности использования полученных сведений для лечения онкологических заболеваний. Разработанные методики внедряются в клинику центра.

Фотосенс (10,0 мг/кг)

е |001

| «Н р 7<н

1 «Н

Фотодитазин (10,0 мг/кг)

■I ОПЫТ

ХУЛ контроль

выводы

1. Фотодинамическая терапия с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином» подавляет рост саркомы М-1 при всех использованных дозах фотосеснсибилизаторов.

2. Максимальное соотношение между содержанием сенсибилизатора в опухолевой и нормальной тканях наступает для «Фотосенса» через 24 ч, «Фотодитазина» через 2,5-3 ч после введения препарата при всех использованных дозах.

3. Максимальный фотодинамический эффект, приводящий к полной регрессии саркомы М-1 в 60% случаев, проявляется через 24 ч после введения «Фотогема» в дозе 5,0 мг/кг при лазерном облучении 630 нм плотностью энергии 600 Дж/см2.

4. Оптимальными параметрами фотодинамической терапии саркомы М-1, обеспечивающими полную регрессию опухоли в 86 % случаев, являются воздействие лазерного излучения 670 нм плотностью энергии 600 Дж/см2 через 24 ч после введения «Фотосенса» в дозе 10,0 мг/кг.

5. 100 % регрессия саркомы М-1 достигнута после фотодинамической терапии с «Фотодитазином» в дозе 10,0 мг/кг и лазерным облучением 662 нм плотностью энергии 600 Дж/см2.

6. Максимальное разрушение опухоли при минимальном повреждении здоровых тканей отмечали после фотодинамической терапии с «Фотодитазином» в дозе 2,5 мг/кг при лазерном излучении 662 нм [уютностью энергии 300 Дж/см2.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Каплан М.А., Романко Ю.С., Мардынская В.П., Малыгина А.И., Бурмистрова Н.В., Ярославцева-Исаева Е.В., Спиченкова И.С. Разработка метода фотодинамической терапии у экспериментальных животных с саркомой М-1.// Рос. биотерапевтический журнал, 2004, № 2, С. 52-55

2. Бурмистрова Н.В., Каплан М.А., Мардынская В.П., Сокол Н.И. Оценка фотодинамической эффективности «Фотодитазина» на модели опухоли саркома М-1 крыс. //Лазерная медицина, 2004, № 8 (1-2), С.14-16

3. Бурмистрова Н.В., Каплан М.А., Бродский P.A., Мардынская В.П. Эффективности ФДТ с «Фотогемом», «Фотосенсом», «Фотодитазином» на модели опухоли саркома М-1 крыс. // Рос. биотерапевтический журнал (в печати)

4. Бурмистрова Н.В, Каплан М.А., Бродский P.A., Мардынская В.П. Сравнительная оценка эффективности фотосенсибилизаторов для ФДТ в экспериментальных условиях. // Физическая медицина (в печати)

5. Бурмистрова Н.В., Каплан М.А., Бродский P.A., Мардынская В.П Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с различными фотосенсибилизаторами. // Лазерная медицина (в печати)

6. Каплан М.А., Пономарев Г.В., Мардынская В.П., Мальи ина А.И., Бурмистрова Н.В. Изучение специфической фотодинамической активности «Фотодитазина» при фотодинамической терапии саркомы М-1 у крыс // Материалы научно-практической конференции «Современные методы флюоресцентной диагностики, фотодинамической и лазерной терапии» 13-15 июня 2001 г., г. Обнинск, С. 43

Каплан М.А., Мардынская В.П., Малыгина А.И., Бурмистрова Н.В., Ярославцева-Исаева Е.В., Спиченкова И.С. Разработка метода фотодинамической терапии у экспериментальных животных с саркомой М-1. // Материалы III Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» 17-19 марта 2004 г., г. Москва, С. 14-16

Бурмистрова Н.В., Каплан М.А., Бродский P.A., Мардынская В.П Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с различными фотосенсибилизаторами. // Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» 16-18 марта 2005 г., г. Москва, С.36-38

Заказ 3225. Объем 1 п.л. Печать офсетная Тираж 100 Формат 60x841/i6

Отпечатано в МП «Обнинская типография» 249035, Калужская обл , г Обнинск, ул. Комарова, 6

47 3

РНБ Русский фонд

2006-4 29334

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бурмистрова, Нелля Владиславовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

I.I. Характерные черты фотодинамической терапии.

1.2 Механизм фотодинамического повреждения.

1.3 Клеточные аспекты фотодинамической терапии.

1.4. Фармакокинетика в фотодинамической терапии.

1.5. Фотосенсибилизаторы.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика материала.

2.2 Методика экспериментального исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Локальные клинические проявления после ФДТ.

3.2. Оценка эффективности ФДТ саркомы Мс различными Фотосенсибилизаторами.

3.2.1. Изучение эффективности ФДТ с «Фотогемом».

3.2.2. Исследование эффективности ФДТ с «Фотосенсом».

1.2.3. Оценка эффективности «Фотодитазина» для ФДТ саркомы М-1.

3.3.1. Динамика накопления Фотосенсибилизаторов в опухолевой и здоровой тканях.

3.3.2. Оценка эффективности ФДТ с различными ФС.

3.3.3. Определение оптимальной плотности энергии лазерного излучения для ФДТ с различными ФС.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами "Фотогем", "Фотосенс" и "Фотодитазин""

Актуальность работы. Одной из задач современной радиобиологии является поиск способов повышения эффективности лечения злокачественных новообразований с максимальным разрушением опухоли при минимальном повреждении здоровых тканей. Перспективным направлением в решении проблемы избирательного поражения опухолей является метод фотодинамической терапии. Фотодинамическая терапия (ФДТ) - принципиально новый метод лечения злокачественных новообразований, основанный на использовании фотодинамического повреждения опухолевых клеток в ходе фотохимической реакции. ФДТ - двухкомпонентный метод лечения. Одним компонентом является фотосенсибилизатор (ФС), накапливающийся в опухоли и задерживающийся в ней дольше, чем в нормальных тканях. Другим компонентом ФДТ является световое воздействие. При локальном облучении опухоли светом определенной длины волны, соответствующей пику поглощения фотосенсибилизатора, в опухоли начинается фотохимическая реакция с образованием синглетного кислорода и кислородных свободных радикалов, оказывающих токсическое действие на опухолевые клетки. Опухоль разрушается и постепенно замещается соединительной тканью. Локальность фотодинамического повреждения опухоли обеспечивается селективностью накопления фотосенсибилизатора в опухолевой ткани и направленным, локальным, четко ограниченным лазерным облучением.

Будущее ФДТ заключается в создании безопасных, эффективных, готовых к употреблению препаратов, быстрое выведение которых из организма позволит свести к минимуму необходимость защиты пациентов от солнечного света после курса лечения. ФС должен избирательно поглощаться и удерживаться в значительных пропорциях опухолью, чем окружающей или отдаленной здоровой тканью. Создание новых препаратов дорогостоящий и довольно длительный процесс. Поэтому важным моментом дальнейшего развития метода фотодинамической терапии является оптимизация режимов с существующими препаратами. Это позволяет оценить реакцию тканей на фотодинамическое воздействие и выявить достоинства и недостатки используемых фотосенсибилизаторов. Для успешного проведения лечения методом ФДТ необходимо четко определить оптимальные параметры дозировки ФС и плотности энергии лазерного излучения.

Цель и основные задачи исследования. Целью настоящей работы являлась оценка эффективности «Фотогема», «Фотосенса» и «Фотодитазина» для фотодинамической терапии на модели опухоли саркома М-1 крыс.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

3. Сопоставить эффективность фото динамической терапии саркомы М-1 с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином».

4. Исследовать морфологические изменения тканей в зоне фотодинамического воздействия при оптимальных соотношениях дозы препаратов и плотности энергии лазерного излучения.

Научная новизна. Впервые проведена сравнительная оценка эффективности трех фотосенсибилизаторов разработанных в нашей стране, принадлежащих различным классам химических соединений. Определены оптимальные соотношения дозы «Фотогема», «Фотосенса» и «Фотодитазина» и плотности энергии лазерного излучения для ФДТ саркомы М-1. Выявлена зависимость эффективности ФДТ от дозы вводимого ФС и плотности энергии лазерного излучения. Изучены морфологические изменения в опухолевой и здоровой тканях после сеанса ФДТ с использованием исследованных препаратов.

Научно-практическая значимость. Уточнены принципы и методические основы применения «Фотогема», «Фотосенса» и «Фотодитазина». Показана сравнительная эффективность исследованных препаратов для фотодинамической терапии злокачественных опухолей в экспериментальных условиях. Представленная в работе схема планирования ФДТ позволяет выбрать оптимальные параметры начала облучения после введения ФС и условия для проведения терапии. Представленные данные свидетельствуют о перспективности и целесообразности использования полученных сведений для лечения онкологических заболеваний. Разработанные методики внедряются в клинику МРНЦ РАМН.

На защиту выносятся основные положения:

3. «Фотодитазин» является наиболее эффективным сенсибилизатором для фотодинамической терапии саркомы М-1 по сравнению с «Фотогемом» и «Фотосенсом».

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Бурмистрова, Нелля Владиславовна

ВЫВОДЫ

Фотодинамическая терапия с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином» подавляет рост саркомы М-1 при всех использованных дозах фотосеснсибилизаторов.

Максимальное соотношение между содержанием сенсибилизатора в опухолевой и нормальной тканях наступает для «Фотосенса» через 24 ч, «Фотодитазина» через 2,5-3 ч после введения препарата при всех использованных дозах.

Максимальный фотодинамический эффект, приводящий к полной регрессии саркомы М-1 в 60% случаев, проявляется через 24 ч после введения «Фотогема» в дозе 5,0 мг/кг при лазерном облучении 630 нм плотностью энергии 600 Дж/см2.

Оптимальными параметрами фотодинамической терапии саркомы М-1, обеспечивающими полную регрессию опухоли в 86 % случаев, являются воздействие лазерного излучения 670 нм плотностью о энергии 600 Дж/см через 24 ч после введения «Фотосенса» в дозе 10,0 мг/кг.

100 % регрессия саркомы М-1 достигнута после фотодинамической терапии с «Фотодитазином» в дозе 10,0 мг/кг и лазерным облучением л

662 нм плотностью энергии 600 Дж/см .

Максимальное разрушение опухоли при минимальном повреждении здоровых тканей отмечали после фотодинамической терапии с «Фотодитазином» в дозе 2,5 мг/кг при лазерном л излучении 662 нм плотностью энергии 300 Дж/см .

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ литературных данных, охватывающий основные вопросы фотодинамической терапии, показал, что во всем мире ведется активная работа по совершенствованию метода. Во-первых, идет поиск новых ФС и изучение вопросов дозирования этих препаратов. Во-вторых, актуальными и важными, хотя и очень сложными являются вопросы, связанные с дозированием лазерного облучения. Таким образом, оптимизация методики ФДТ с использованием различных ФС и разных световых доз позволит повысить эффективность лечения злокачественных опухолей.

В настоящее время в клинической практике используют производные гематопорфирина, которые в зависимости от способа приготовления в разных странах получило название «Фотофрин-1» и' «Фотофрин-2» (США, Канада), «Фотосан» (Германия), ПРО (Китай), «Фотогем» (Россия); препараты группы фталоцианинов (например, «Фотосенс») и хлоринов («Хлорин Е6», «Фотолон»). Каждый из используемых сенсибилизаторов имеет свои преимущества и недостатки.

В данной работе представлена сравнительная оценка эффективности ФДТ с ФС, которые относятся к различным классам химических соединений («Фотогем» - порфирины, «Фотосенс» -фталоцианины и «Фотодитазин» — хлорины).

Знание количественных кинетических параметров позволяет выбрать подходящий временной интервал после введения препарата, во время которого разница в концентрациях ФС в опухолевых и нормальных тканях оптимальна. Это позволяет рассчитывать на максимальное повреждение опухоли при минимальном сопутствующем разрушении нормальных тканей. Выбор оптимального временного интервала зависит от химических и биологических свойств ФС.

Изучение динамики накопления изученных ФС в опухоли и окружающих тканях, показало, что увеличение дозы препарата не приводит к существенной разнице накопления ФС в тканях. Препараты «Фотосенс» и «Фотодитазин» характеризуются хорошей динамичностью, высокое накопление ФС в тканях наблюдали уже через один час после введения. «Фотодитазин» обладает лучшими фармакокинетическими свойствами, чем «Фотогем» и «Фотосенс». Оптимальным временем начала облучения опухолей является 2,5-3 часа после введения «Фотодитазина», в то время как максимальный индекс контрастности «Фотогема» и «Фотосенса» достигается только через 24 часа. «Фотосенс» и «Фотогем» сохраняются в организме более трёх месяцев, а «Фотодитазина» 28 ч [65]. Данное обстоятельство позволяет считать «Фотодитазин» более перспективным соединением для задач фотодинамической терапии, так как это позволяет уменьшить время проведения сеанса лечения и избежать побочных реакций после терапии.

Эффективность фотодинамической терапии злокачественных опухолей определяется многими факторами. Важнейшими составляющими ФДТ являются плотность энергии лазерного облучения и доза используемого сенсибилизатора. Оптимальное соотношение этих показателей может инициировать фотодинамическую реакцию, приводящую к максимальному разрушению опухоли при минимальном повреждении здоровых тканей.

В представленной работе разработаны оптимальные схемы ФДТ саркомы М-1 с «Фотогемом», «Фотосенсом» и «Фотодитазином».

ФДТ с «Фотогемом» наиболее эффективна при дозе ФС 5 мг/кг. Дальнейшее увеличение дозы препарата не приводило к повышению эффективности лечения. С возрастанием плотности энергии лазерного излучения увеличивался процент полной регрессии опухолей. Максимальную эффективность ФДТ с «Фотогемом» отмечали при плотности энергии лазерного излучения 600 Дж/см2.

При использовании «Фотосенса» наблюдали четкую зависимость эффективности ФДТ от количества введенного препарата и плотности энергии лазерного излучения. Наиболее значимым оказалось увеличение плотности энергии лазерного излучения. При 600 Дж/см2 даже минимальная доза ФС приводила к полной регрессии саркомы М-1 в 73% случаев и уменьшению коэффициента продолженного роста в два раза по сравнению с контрольной группой. Максимальный фотодинамический эффект отмечали при сочетании «Фотосенса» в дозе л

10,0 мг/кг, Е-600 Дж/см , полная регрессия опухолей в 86% случаев.

ФДТ с «Фотодитазином» подавляет рост саркомы М-1 при использованных дозах на все сроки наблюдения. Эффективность ФДТ зависит от экспозиционной дозы лазерного излучения и от количества введенного «Фотодитазина». С увеличением плотности энергии лазерного излучения возрастал процент полной регрессии опухолей и уменьшался коэффициент продолженного роста в 2-4 раза по сравнению с контрольной группой. При дозе препарата 10,0 мг/кг, Е-600 Дж/см2 отмечали 100% регрессию опухоли. Высокий процент полной регрессии опухоли (78%) наблюдали при введении «Фотодитазина» в дозе 2,5 мг/кг в сочетании с плотностью энергии лазерного облучения 300 Дж/см2.

Таким образом, максимально эффективной плотностью энергии лазерного облучения для ФДТ с использованными сенсибилизаторами л является 600 Дж/см в сочетании с дозой «Фотогема» 5,0 мг/кг, «Фотосенса» и «Фотодитазина» - 10 мг/кг.

Анализ морфологических изменений в зоне воздействия при оптимальных соотношениях дозы препаратов и плотности лазерного облучения свидетельствует, что ФДТ саркомы М-1 вызывает некроз опухолевых клеток, обусловленный деструкцией сенсибилизированных клеточных структур. Наиболее результативные разрушения опухоли при минимальном повреждении мышечно-соединительно-тканных и сосудистых структур бедра наблюдали при использовании «Фотодитазина» в дозе 2,5 мг/кг и плотности энергии лазерного л излучения 300 Дж/см .

Полученные данные свидетельствуют о перспективности разработки приемов и методов повышения эффективности ФДТ за счет использования в качестве ФС производное хлорина Еб - «Фотодитазин». Поскольку при минимальной дозе препарата и относительно невысокой плотности энергии достигается высокий терапевтический эффект при отсутствии глубоких некродистрофических и Рубцовых изменений.

Следует отметить, что полученные в настоящей работе результаты свидетельствуют о перспективности и целесообразности использования представленных данных для лечения онкологических заболеваний.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бурмистрова, Нелля Владиславовна, Обнинск

1. Астраханкина Т.А. ФДТ рака кожи. Дисс. канд. наук, М, 1995

2. Ашмарин И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. Изд. 2-е, испр. JL, Изд-во Ленингр. ун-та, 1975, 80 с.

3. Барабаш Р. Д., Андреева К.П., Норманский В.Е. и др. Токсикологическая характеристика фотосенсибилизаторов порфириновой природы в зависимости от световых режимов и дозы препаратов // Применение лазеров в хирургии и медицине, 1988, с.433-435

4. Барра Ж.-Р. Основные понятия математической статистики. Пер. с франц. Под ред. А.А. Ширяевой, М, Мир, 1974, 280 с.

5. Блознелите л., Понамарев И.В. Эффективность ФДТ опухолей различной гистологической структуры // Рос. онкологический журнал, 1997,3 4, с. 18-21

6. Блознялите Л., Гинюкас П., Смельчавичюс В. ФДТ перевиваемых опухолей у экспериментальных животных // Методы лазерной биофизики и их применение в медицине Тарту, 1989, с.74-79

7. Блознялите Л.М. К вопросу о фотодинамической и гаммадинамической терапии в онкологии (экспериментальные исследования). Дисс. канд. наук, Вильнюс, 1990

8. Боярский А.Я. Статистические методы в экспериментальных медицинских исследованиях М, Медгиз, 1955, 261с.

9. Брюсов ПР., Метафонов В.А., Северцев А.Н. ФДТ злокачественных опухолей: Обзор // Вопросы онкологии, 1994, 40, №4-5-6, с.139-145

10. Быков В.А., Лунач Э.В. Латышевская Р.В, Интраоперационная ФДТ, экспериментальные и клинические аспекты // Съезд оторинолорингологов России, 25-29 сентября 1995 г., СПб, 1995, т.2, с.461-463

11. Вопросы клинической и экспериментальной онкологии: Сб. науч. тр./ Ташкент: ТашМИ, 1987, 128 с.

12. Гамалея Н.Ф., Михалкин И.А. Световая терапия опухолей с применением фотосенсибилизатора // Эксперим. онкология, 1988, т.10,3 1, с.9-16

13. Гаркуша Н.Ф., Гончарова Н.Ю. Характеристика саркомы М-1 крыс // Науч. докл. высш. шк. биол. науки, 1990, № 6, с.154-160

14. Иванов А.В. Пути повышения эффективности ФДТ опухолей // Лазеры в медицине и биологии 1995, № 2-3, с.5-8

15. Иванов А.В., Лаптев В.П., Панферова Н.Г. и др. Оценка противоопухолевой активности нового фотосенсибилизатора для клинического использования «Радахлорина», 0,35%-ного раствора для внутривенного введения («Фотохлорина») // Рос. онколог, журнал, 2001

16. Казачкина Н.И., Печерских Е.В., Фомина Р.И. и др. Экспериментальное изучение фотосенсибилизаторов, предназначенных для флюоресцентной диагностики и ФДТопухолей // Высокие технологии в онкологии, Ростов н/Д, 2000, т.1, с. 165-167

17. Каплан М.А. Фотодинамическая терапия (состояние проблемы)// Физ.медицина, 1993, т.З, № 3-4, с.2-3

18. Каплан М.А., Романко Ю.С., Евстигнеев А.Р.// Лазеры на парах меди и золота в медицине М.,1998. - с.55-62

19. Кац В.А., Воробьев С.В., Степанова JI.H. и др. Теоретические и экспериментальные аспекты прогнозирования эффективности ФДТ // В сб.: Новые достижения лазерной медицины 1993, с.202-203

20. Ковтонюк Н.Ф., Иванов А.В., Полутонов А.Г. Управление лазерным излучением в ФДТ опухолей // Биомед. радиоэлектроника, 2000, № 10, с. 14-20

21. Коган Е.А., Невольских А.А., Жаркова Н.Н. и др. Морфо-патогенез повреждений злокачественных опухолей при ФДТ // Архив патологии, 1993, 6, с.73-76

22. Козлов А.П., Акимов А. А., Москалик К.Г. О лечении экспериментальных опухолей лазерным излучением в сочетании с быстрыми электронами // Вопросы онкологии, 1973, т. 19, № 6, с.93-97

23. Колобанов А.С., Скобелкин O.K. применение источников оптического излучения для ФДТ и диагностики рака // Светотехника. Энергоатомиздат, 1994, с. 17-19

24. Корабоев У. М. ФДТ гнойных длительно не заживающих ран и трофических язв (экспериментально- клинические исследования) Дисс. доктора наук, М, 2001

25. Красновский А. А. Синглетный молекулярный кислород и первичные механизмы фотодинамического действия оптического излучения // Итоги науки и техники. Сер. соврем, пробл. лаз. физики Т.З. Изд-во ВИНИТИ, с.63-135

26. Кулаев М.Т., Абдель Гафур ФДТ злокачественных опухолей // Современные методы диагностики и лечения в медицине, Саранск, 2000, с. 195-196

27. Лаптев В.П. Экспериментальное обоснование возможности применения соединений ряда порфина в ФДТ опухолей. Дисс. канд. наук, М, 1991

28. Литвин Г.Д., Петухов М.И., Колобанов А.С. и др. Исследование световой токсичности Фотогема // В сб.: Перспективные направления лазерной медицины. Материалы Междунар. конф. Москва Одесса, 1992, с.421-423

29. Литвин Г.Д., Петухов М.И., Колобанов А.С. и др. Исследование темновой токсичности Фотогема // В сб.: Перспективные направления лазерной медицины. Материалы Междунар. конф. Москва Одесса, 1992, с.418-420

30. Лукьянец Е.А. Новые сенсибилизаторы для фотодинамической терапии // Фотодинамическая терапия. М., 1999, с. 117-128

31. Луценко С.В. Применение фотосенсибилизаторов и криодеструкции в лазерной терапии перевитых опухолей Автореф. дисс. Киев, 1976

32. Масычева В.И., Даниленко Е.Д., Гамалей С.Г. и др. Исследование особенностей фармакокинетики и противоопухолевой активности производных гематопорфирина у мышей — опухоленосителей // Лазерная мед. 1999, т.З, вып. 3-4

33. Миронов А.Ф. Фотодинамическое воздействие лазерного излучения на биомолекулы и клетки // Итоги науки и техники. Сер. соврем, пробл. лаз. физики Т.З. Изд-во ВИНИТИ, 1990, с.5

34. Миронов А.Ф. Фотосенсибилизаторы на основе порфиринов и родственные соединения для ФДТ рака // Итоги науки и техники. Сер. соврем, пробл. лаз. физики Т.З. Изд-во ВИНИТИ, с.5-56

35. Миронов А.Ф. Фотосенсибилизаторы на основе порфиринов и родственные соединения для ФДТ рака // Кн. Современные проблемы лазерной физики. Под ред. Ахманова А.С., М, ВИНИТИ, 1990, т.З, с.5-62

36. Москалик К.Г. Экспериментальное и клиническое обоснование противоопухолевого действия импульсного лазерного излучения. Автореф. дисс. Л., 1990,45 с.

37. Ойвин И. А. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований // Пат. физиология и эксперим. терапия, 1960, т.4, с.76-85

38. Пасс Х.И. Фотодинамическая терапия в онкологии: механизмы и клиническое применение // Физ.медицина, 1993, т.З, № 3-4, с.3-9

39. Петровский А.В. Использование ФДТ в сочетании с аскорбиновой кислотой //Материалы конференции 23-25 апреля 1997 г., М, 1997, с.96

40. Петухов М.И., Андреева К.П., Литвин Г.Д. и др. Фармакокинетика фотосенсибилизаторов различной природы в интактном и пораженном опухолью организме // В ich. : Актуальные вопросы лазерной медицины, М, 1991,с.25

41. Петухов М.И., Барабаш Р.Д., Норманский В.Е. О влиянии опухолевого роста на фармакокинетику порфириновых фотосенсибилизаторов // Медико- биол. аспекты изучения и применения порфиринов, 1989, с.78-79

42. Петухов М.И., Козлов В.И., Герман О.А. Влияние фотодинамического воздействия на состояние системы микроциркуляции тканей // Применение лазеров в науке и технике, Иркутск, 1996, вып.8, с. 168-174

43. Петухов М.И., Литвин Г.Д., Ходырева А.Ф. Изучение аллергенных свойств Фотогема // В сб.: Новые достижения лазерной медицины 1993, с.206-208

44. Петухов М.И., Норманский В.Е., Колобанов А.С. Основные итоги и перспективы доклинических испытаний метода ФДТ // Новое в лазерной медицине и хирургии, М, 1991, с.259-265

45. Полсачев В.И., Трифонова Н.В. Первые результаты применения ФДТ рака // Материалы Юбилейной научно-практической конф., М, 1999, с.67-68

46. Порфирины спектроскопия, электрохимия, применение. // Под ред. Ениколопетяна И.С., М: Наука, 1987, с.384

47. Посудин Ю.И.,Лобода И.П.Добода В.И. Фотодинамическая диагностика и терапия злокачественных опухолей // Клиническая хирургия, 1982, 5, с.

48. Решетников А.В., Козлов Ю.В., Залевский И.Д. и др. Основные результаты доклинического изучения нового Фотосенсибилизатора «Радахлорина» // Биотерапевтический ж. №2, т. 1,2002, с.141

49. Рыльнов В.В., Маслов В.Г., Огурцов Р.П. и др. Фотостимуляция защитных реакций организма при ФДТ опухолей // В сб.: Новые достижения лазерной медицины 1993, с.214-215

50. Современные возможности клинической химиотерапии злокачественных новообразований / Под ред. Грициоте Л.А. // Материалы Всесоюзн. конф.- Вильнюс, 1984,248 с.

51. Современные методы флюоресцентной диагностики, фотодинамической и лазерной терапии: Материалы конференции, 13-15 июня 2001 г. / Под ред. А.Ф.Цыба, М.А.Каплана; МРНЦ РАМН Обнинск, 2001, 83 с.

52. Соколов В.В., Странадко Е.Ф. и др. Фотодинамическая терапия злокачественных опухолей основной локализации с препаратом Фотогем и Фотосенс // Вопросы онкологии, 1995, 41, № 2, с. 134138

53. Статистическая оценка достоверности результатов исследования. Под ред. А.М.Меркова, М, 1965

54. Странадко Е.Ф. Исторический очерк развития фотодинамической терапии // Лазерная медицина, 2002, т.6, вып.1,с.4-8

55. Странадко Е.Ф. Механизмы действия фотодинамической терапии // Фотодинамическая терапия, М., 1999, с.3-15

56. Странадко Е.Ф.// Применение низкоинтенсивных лазеров в клинической практике/ Под ред. О.К.Скобелкина, М.? 1997. -с.173-184

57. Странадко Е.Ф. Экспериментально-клиническая разработка метода лазерной ФДТ злокачественных опухолей с использованием отечественных Фотосенсибилизаторов I и II поколения // Лазеры в медицине и биологии 1994, № 11-12, с.20-26

58. Странадко Е.Ф., Скобелкин O.K. Пятилетний опыт клинического применения ФДТ // Рос. онкологический журнал, 1998, № 4, с. 1318

59. Странадко Е.Ф., Скобелкин O.K., Литвин Г.Д. и др. Анализ непосредственных результатов ФДТ злокачественных новообразований. // В сб.: Новые достижения лазерной медицины -1993, с.218-220

60. Странадко Е.Ф., Астраханкина Т. А. ФДТ злокачественных новообразований кожи // Физ. медицина,1994, т.4, № 12, с.80-81

61. Сухин Т.М., Миронов А.Ф., Ахманов С.А. и др. Применение производного гематопорфирина для фотохимиотерапии опухолей //Химиотерапия опухолей 1987, вып. 50, с.54-56

62. Сухова Т.Е. Особенности клиники и течения базалиомы в Москве и Московской области и разработка метода ФДТ базалиомы на основе отечественного фотосенсибилизатора Фотосенса. Дисс. канд. наук, М, М, 2001

63. Филоненко Е.В. Эндоскопическая ФДТ начальных форм пищевода и желудка с использованием фотосенсибилизатора Фотогем. Дисс. канд. наук, М, 199765. «Фотодитазин» Фотосенсибилизатор нового поколения. М., 2003, с.1

64. Цыб А.Ф., Каплан М.А. Возможности применения фотодинамической терапии (экспериментально-клинические исследования) // Рос. мед. вести,2002, т.VII, № 2, с. 19-24

65. Цыб А.Ф., Каплан М.А., Молочков В.А и др. // О применении фотодинамической терапии в лечении солитарных и множественных базалиом / Рос. ж. кожных и венерических болезней, 2000, №4

66. Черняева Е,Б., Степанова Н.В.,Литинская Л.Л. Механизмы взаимодействия фотосенсибилизаторов с клетками // Итоги науки и техники. Сер. соврем, пробл. лаз. физики Т.З. Изд-во ВИНИТИ, с.136-224

67. Чиссов В.И., Казачкина Н.И., Фомина Р.И. и др. Хлорин рб и его производные как новые фотосенсибилизаторы для ФДТ рака // Рос. онкологический журнал, 1999, № 5, с.22-25

68. Чиссов В.И., Скобелкин О.Н., Миронов А.Ф. и др. ФДТ и флюоресцентная диагностика злокачественных опухолей препаратом Фотогем // Хирургия, 1994,12, с.3-6

69. Чиссов В.И., Соколов В.В., Филоненко Е.В. и др Клиническая флюоресцентная диагностика опухолей с фотосенсибилизатором Фотогем // Хирургия, 1995, № 5, с.37-47

70. Щтенталь В.В., Вакуловский Е.Г., Любаев В.Л. и др. ФДТ опухолей кожи и нижней губы // Новое в онкологии: Сб. науч.тр., Воронеж, 1997.

71. Щтенталь В.В., Лощенов В.Б., Поддубный Б.К. и др. Разработка метода ФДТ и диагностики опухолей головы и шеи с использованием Фотосенса. // Новое в онкологии: Сб.науч.тр. Воронеж, 1995, № вып.1,с.65-66

72. Якубовская Р.И., Казачкина Н.И., Оганезов В.К. и др. Изучение новых Фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии и флюоресцентной диагностики злокачественных новообразований // Мат-лы 1 съезда онкологов стран СНГ. М., 1996, ч.1, с.257-258

73. Agarwal M.L., Larkin Н.Е. Saidi S.I., Mukhtar Н., Oleinick N.L. Phospholipase activation triggers apoptosis in photosensitized mouse tymphoma cells Cancer Res 1993; 53: 5897-5902.

74. Ф 76. Akhiynina T.V., Rosenkranz A.A., Jans D.A., Sobolev A.S. Insulinmediated intracellular targeting enhances the photodynamic activity of • chlorin e6. Cancer Resl995;55:1014~1019

75. Blom D.J.,Schuitmaker H.J., de Waard-Siebinga L., Dubbelman T.M., Jager M.J. decreased expression of HLC class I on ocular melanoma cells following in vitro photodynamic therapy. Cancer Lett 1997; 112: 239-243.

76. Bordin F., Marzano C., Gatto C., Carlassare F., Rodighiero P.,Raccichetti F.4,6,4' Trymethylangelic ininduces interstrand ross-links inmammalian cell DNA. J Photochem Photobio В-Biol 1994; 26: 197-201.

77. Bremner J.C., Adams G.E., Pearson J.K. et al. Increasing the effect of Photodynamictherapy on the RIF-1 morine sarcoma, using the bioreductive drugs RSU 1069 and R B6145. Br.J/ Cancer 1992; 66: 1070-1076.

78. Efficacy and mechanism of aluminium phthalocyanine and its sulphonated derivatives mediated photodynamic therapy on murine tumours. Eur J. Cancer 1997; 13;1855 -1859.

79. Deahl I.T., Oleinick N.L., Evans H.H. Large mutagenic lesions are ф induced by photodynamic therapy in murine L5178 lympboblasts,

80. Photochem Photobiol 1993; 58: 259-264.

81. Dougherty T.J. Studies on the structure of porphyrins contained in photofrin II //Photochem. Amd photobiol. 1987, vol. 46 (5), p.569

82. Evans S., Matthews W., Perry R. et al. Effect of photodynamic therapy on tumor necrosis factor production by murine macrophages // S. Natl. Cancer. Inst. 1990, vol.82, p.34-39

83. Foote C.S. Mechanisms of photooxygenation // In Porphyrin localization and treatment of tumors (Doirion D.R., Gomer С J. egs) -New York. Alan R. Liss 1984., p.3-18

84. Fostel E.T., Fletcher J.O., McDonagh J., Hui K.K. Selective cytotoxicity of low- density lipoprotein to helper T cells of cutaneous T-cell lymphoma after photoperoxidation with S-methoxypsoralen. J. Natl Cancer lest 1991; 83: 1316-1321.

85. Gollnick S.O., Liu X., Owczarezak В., Musser D.A., Henderson B.W. Altered expression of interleun 6 and interleukin 10 as a result of photodynamic therapy in vivo. Cancer Res 1997; 57: 3904-3909.

86. Hayata Y., Kato H., Konaka C. et al. Hematoporphyrin derivative and laser photoradiation in the treatment of lung cancer // Chest. 1982, vol. 81, p. 269-277

87. Henderson B.W. and Dougherty T.J. How does Photodynamic therapy work? // Photochem and photobil. 1992, Vol. 55, p.145-157

88. Henderson B.W. Fingar V.H. Oxygen limitation of direct tumor cell kill during photodynamic treatment of a murine tumor model. Phoiocheni Photobiol 1989; 49: 299-304.

89. Linuma S., Farshi S.S, Ortel В., Hasan T.A. mechanistic study of cellular photodestruction with 5-aminolaevulinic acid-induced porphyrin. Br. J. Cancer 1994; 70: 21-28.

90. Johnson P.G., Bellinier D.A., Henderson B.W. et al. // Combination PDT targeting vessels and tumor cells using. Anionic and cationic photosensitizers // Photochem. And photobiol. 1993, vol. 57, p.50

91. Kelly J. I., Snell M.E. Hematoporphyrin derivative a possible aid in the diagnosis and therapy of carcinoma of the bladder // J. Urol. 1976, vol. 115, p. 150-151

92. Kessel D. Determinants of photosensitization by mono-L-aspartyl chlorin e6. Photochem Photobiol 1989; 49: 447-452.

93. Kessel D., Sites of photodamage by the iminium salt of a copper oclaethylbenzochlorin, Photochem Photobiol 1993,58: 613-626.

94. Kessel D., Erickson C. Porphyrin photosensitization of multi-drug resistant cell types. Phulochem Photobiol 1992; 55: 397- 399.

95. Kesset D., Luo Y. Delayed oxidative photodamage induced by photodynamic therapy. Photochem Photobiol 1996; 64: 601-604.

96. Kimel S., Gottfried V., Berns M.W. Vascular response in photodynamic therapy I I Laser surg. and vtd. 1994, suppl № 6, p.39

97. Kohen E., Satus R., Hirschberg J.G. // Photobiol. San Diego, London, 1995

98. Laskin J.D., Lee E., Yurkow E J., Laskin D.L., Gaito M.A., A possible mechanism of psoralen phototoxicity not involving direct inleraction with DNA. Proc Ntil Acad Sci USA 1985: 82: 6158-0162.

99. Leunig A., Staub F., Peters J. et al. Relation of early Photofrin uptake to photodynarnically induced phototoxicity and changes of cell volume in different cell lines. Eur J Cancer 1994; 30 A: 78-83

100. Lipson R.L., Gray M.J., Baldes E. J. Hematoporphyrin derivative for detection and management of cancer / proc. 9-th International cancer congress. Tokyo, Japan, 1966, p.393

101. Luna M.C., Ferrario A., Rucker N., Gonrer С J. Decreased expression and function of atph.t-2 macroglobulin receptor/low density lipoprotein receptor-related protein in pholndynamic therapy-resistant mouse tumor cells, Cancer Res 1995; 55: 1820-1823

102. Malham G.M., Thomsen R.J., Finlay G.&^agutey B.C. Subceilular distribution and photocytotoxicity of aluminium phthalocyanines andhaematoporphyrin derivative in cultured human meningioma cells. Br J Neurosurg 1996; 10. 51-57.

103. Matthews W. Cook J. Mitchell J.B. Perry RR. Evans S. Pass H.J. In vitro photodynamic thierapy of human lung cancer- investigation of dost-rate effects. Cancer Res 1989: 49: 1718- 1721.

104. Milauesi C. Zhou C. Biolo R. Jori Zn(H)-phthalocyaninc as a photodynamic agent for tumours. II Studies on the mechanism or photosensitized tumour necrosis. Br J Cancer 1990: 61: 846-850.

105. Miller G.G., Brown K., Moore R.B, et al. Uptake kinetics and intracellular localization of hvpocrellin photosensitizers for photodynamic therapy: a confocal microscopy study. Photochem Pnulobiol 1995; 61; 632-638.

106. Muller M. Reich B, Steiner U. Heicappell R, Miller K. Photodynmnic effects of112. sulfonated aluminium chlorophthalocyianine in human urinary bladder carcinoma cells in vitro. Eur Urol 1997: 32: 339-343

107. Nair C.N. Davis R. Photochemical inhibition of poliovirus replication by 4.58-trimethylpsoralen plus light- Intel-virology 1978; 9: 65-75

108. Pass H.I. // Ibid. 1993, vol.85, №6, p.443-456

109. Peng Q, Moan J, Farrants G.W, Danielsen H.F., Rimington C. Location of P-II and A I PCS4 in human tumor LOX in vitro and in vivo by means of computeienbauced video tluorescence microscopy. Cancer Lett 1991; 58: 37^-7.

110. Pollack I.F. Kawecki S The effect of catphostin C, a potent photodependent protein kinase С inhibitor, on the proliferation of glioma cells in vitro. J Neuro-Oncol 1997; 31: 255- 266.

111. Qiu K, Traill D.L, Sieber F. Limited cell-cycle dependence of the merocynnine 540-sensitized photoinactivation of LI 210 leukemia cells. Photochein Pholobiol 1992; 56: 277-280.

112. Rafcliffe S.L. Matthews H.K. Modification of the photodynamic action of delta-aminolaevulinic acid (ALA) on rat pancreatoma cells by mitochondriai benzodiazepine receptor ligands. Br J Cancer 1995; 71: 300-305

113. Sanlus R. Stobbe C.C, McPhee M.S. Chapman J.D. Protection against light-activaled Photofrin II killing of tumor cells by nitioimidazoles Radial Res 1992; 130:31 37

114. Sliarkey S.M. Wilson B.C, Monehead R, Singh G. Mitochondriai alterations in photodynamic therapyresistant cells. Cancer Res 1993; 53: 4994 -4999.

115. Smith O.M. Traul D.L. Sieber F. Photodamnging effects of merocyanine 540 on neutrophils and HL-60celk Exp Hematol 1992; 20: 1278-1284

116. Stockert J C, Juarranz. A,Villnnueva A. Canete M. Photodynamic damage to Hela cell inicrotuibules induced by thiazine dyes. Cancer Chem Pharmacol 1996;39:167 169

117. Stranadko E.F., Skobelkin O.K., Mironov A.F. et al. Photodynamic therapy of cancer. G. Jori, S. Moan, W.M. Star, Edition. Proc. SPIE 2078? P. 499-501

118. Veenhuizer R.B., Ruevekamp M.C. Oppelaar H. et al. Intraperitineal photodynamic therapy: comparison of red and green light distribution and toxicity // Photochem and photobiol. 1997, vol. 66, № 3, p.389-395

119. West C.M. Size-dependent resistance of human tumor spheroids to photodynamic treatment. Br J Cancer 19S9; 59: 510- 514.

120. Yamamoto N. Tunioricidal capacities of macrophages photodynamically activated with hemiitopurphyriu derivative. Photochem Photobiol 1992; 56:245-250

Информация о работе

Бурмистрова, Нелля Владиславовна
кандидата биологических наук
Обнинск, 2005
ВАК 03.00.01

Диссертация

Фотодинамическая терапия саркомы М-1 с фотосенсибилизаторами "Фотогем", "Фотосенс" и "Фотодитазин" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы