Сравнительная биохимическая характеристика патентованных препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии

Хвостова, Татьяна Станиславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительная биохимическая характеристика патентованных препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная биохимическая характеристика патентованных препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии"

На правах рукописи

Хвостова Татьяна Станиславовна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАТЕНТОВАНННЫХ ПРЕПАРАТОВ ФЕРМЕНТОЗАМЕСТИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ В ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИИ

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 2003

"Работа выполнена в Кубанской государственной медицинской академии и Российском центре функциональной хирургической гастроэнтерологии".

Ведущая организация: Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Защита диссертации состоится «27» ноября 2003 года на заседании диссертационного совета Д. 212. 208. 07 по биологическим наукам в Ростовском государственном университете (344006, г. Росгов-на-Дону, ул.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке РГУ (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148).

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Сторожук П.Г.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Шугалей B.C.

кандидат биологических наук, доцент Колмакова Т.О.

Большая Садовая, 105, РГУ, ауд.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного Совета

доктор биологических наук

Бабенко В.В.

>72-o-J

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ферментозаместительная терапия является одной из наиболее важных звеньев лечебных мероприятий в гастроэнтерологии (Златкина А.Р., 1998; Охлобыстин A.B., 2001).

Многие заболевания органов гастропанкреатодуоденальной зоны сопровождаются снижением их секреторной функции, что приводит к нарушению процессов пищеварения в желудочно-кишечном тракте (Логинов A.C., Исакова З.С., 1984; Багненко С.Ф. и соавт., 2000; Andersen B.N. et al., 1982). К наиболее частым причинам ферментативной недостаточности относятся хронический панкреатит, состояние после резекции поджелудочной железы, хронический гастрит с пониженной кислотообразующей функцией желудка, хронический энтерит, опухоль поджелудочной железы, диетический фиброз (Яхонтова О.И., 1980; Петухов В.А., Дибров А.Д., 1999; Halgreen H., 1986; Kashima К., 1997).

Такие заболевания, как правило, сопровождаются изменением процесса адсорбции панкреатических ферментов на поверхности слизистой оболочки тонкой кишки, что приводит к нарушению переваривания и всасывания пищевых веществ - синдрому мальдегистии / мальабсорбции нутриентов (Клюева Ж.И. и соавт., 1980; Каретерс Дж.М., 1997). Для лечения этого синдрома широко используются препараты ферментозамести-тельной терапии.

В настоящее время мировая фармацевтическая промышленность выпускает большое количество ферментных препаратов в виде таблеток, порошка или капсул. Они отличаются друг от друга по количеству входящих компонентов, активности энзимов, способу произвоства, а также по коммерческой стоимости. (Машковский М.Д., 1998; PJIC - Энциклопедия лекарств, 2000; Справочник Видаль, 2001).

Основным компонентом всех ферментных препаратов, изготовленных из животного сырья (поджелудочная железа свиней) является панкреатин, который в своем составе содержит протеазы, липазу и амилазу.

Ферментные препараты, наряду с ферментозаместительной терапией в гастроэнтерологии, широко применяются в хирургии, педиатрии, а также населением как безрецептурные лекарственные средства (Яковенко Э.П. 1998; Фролькис A.B., 2000). К сожалению, большинство из них часто оказываются мало эффективными, поскольку обладают небольшим потенциалом активности содержащихся в них ферментов. Крупнейший специалист в области ферментозаместительной терапии в России профессор Н.П. Пятницкий установил, что для нормального желудочного пищеварения желудочные железы здорового взрослого человека в течение суток должны продуцировать не менее 1 г пепсина. (Сторожук П.Г., 1985; Сторожук П.Г. и соавт., 2001)

Поэтому вопрос об изыскании новых средств энзимотерапии и изучении их влияния на экскреторную функцию поджелудочной железы остается актуальным и в настоящее время.

На кафедре биохимии Кубанской государственной медицинской академии в этом направлении на протяжении многих лет ведутся исследовательские работы. Так, проф. Н.П. Пятницким и его учениками были созданы и внедрены в практическое здравоохранение препараты с высоким содержанием ферментов (пепсидил, копепсидил, панинтестин), широко применяемые в гастроэнтерологии.

При изучении состава и механизмов действия отечественных препаратов было установлено, что в них содержатся биологически активные пептиды, обладающие способностью влиять на секреторные процессы пищеварительных желез. Из пепсидила и копепсидила, которые получают из слизистой оболочки желудка свиней или из сычуга крупного рогатого скота, а также из панинтестина выделены пептиды, обладающие способностью стимулировать не только секрецию пепсина, но и ферментообразова-ние в поджелудочной железе и в слизистой тонкой кишки (Быков И.М., 1982; Быков И.М. и соавт., 2000).

В последнее время появились экспериментальные доказательства того, что эффективность действия препаратов энзимотерапии определяется главным образом высокой активностью ферментов, при помощи которых частично компенсируется секреторная недостаточность пищеварительных ферментов, и наличием в препаратах биологически активных пептидов, которые обладают свойством преимущественно стимулировать ослабленную патологическим процессом секреторную деятельность пищеварительных желез (Златкина А.Р., 2000; Сторожук П.Г. и соавт., 2001).

Однако при всем многообразии ферментных препаратов для эффективного лечения патологий желудочно-кишечного тракта, подобрать соответствующую ферментозаместительную терапию, представляется весьма нелегкой задачей. В каждом конкретном случае, подбор ферментного препарата в основном проводится по наличию в их составе высокой активности того или иного фермента (особенно трипсина и липазы), содержащегося в нем.

При изучении сигнатурных данных установлено, что почти во всех препаратах сведения о раздельном содержании основных протеиназ -трипсина и химотрипсина отсутствует, указывается только суммарная протеолитическая активность, хотя основанием для выбора ферментного препарата в качестве обезболивающего средства при хроническом панкреатите является высокое содержание трипсина в таблетке (Охлобыстин A.B., 2001).

Международной Федерации фармации), для других - в единицах Ph Eur (единица действия Европейской фармакопии), а для третьей категории препаратов активность ферментов отдельно не указывается, только приводится количество основного компонента (панкреатина) в мг.

Поэтому изучение и сравнительная оценка патентованных препаратов энзимотерапии по активности ферментов содержащихся в них, и по механизму их действия на секреторную функцию пищеварительных желез представляет теоретический и практический интерес, так как успех коррелирующей ферментотерапии зависит от правильного подбора препарата. Цель исследования. Целью настоящей работы явилось проведение сравнительного анализа активности ферментов в патентованных импортных и отечественных препаратах и препарате панинтестине, разработанном на кафедре биохимии КГМА и изучение их действия на активность ферментов в пищеварительных железах.

Для реализации указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Определить активность основных протеиназ (трипсина, химотрипси-на), а также амилазы и липазы содержащихся в наиболее широко распространенных препаратах энзимотерапии.

2. Провести сравнительный анализ активности ферментов выраженных в международных единицах в девяти патентованных препаратах: панзи-норм, ликреаза, панцитрат, креон, энзистал, фестал, дигестал, мезим форте и панкреатин (Югославия) с результатами собственных исследований.

3. Изучить в условиях in vitro способность защитных оболочек в различных лекарственных формах (таблетки, драже, капсулы) противостоять соляной кислоте желудочного сока.

4. Изучить способность препаратов энзимотерапии и пептида В), выделенного из панинтестина влиять на активность пищеварительных ферментов в слизистой желудка, поджелудочной железе и слизистой двенадцатиперстной кишки при их парентеральном введении в экспериментах на крысах.

Научная новизна результатов исследования.

Впервые дан сравнительный анализ наиболее распространенных патентованных препаратов ферментозаместительной терапии: мезим форте, панкреатин (Акрихин), креон, панцитрат, панкреатин (Югославия), панкреатин (Биомед), дигестал, панзинорм, холензим, энзистал, фестал, ликреаза, вобэнзим, ипентал, по сигнатурным и собственным данным, показывающий, что активность ферментов в изучаемых препаратах не всегда совпадает с сигнатурными данными.

ферменты подвергаются частичной инактивации и особенно чувствительна липаза.

В экспериментах на крысах дана сравнительная оценка способности панинтестина, патентованных препаратов ферментозаместительной терапии и пептида Вь выделенного из панинтестина методом гель-хроматографии, влиять на активность ферментов в поджелудочной железе, желудке и двенадцатиперстной кишке.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Экспериментально установлено, что активность ферментов в лекарственной форме препаратов энзимотерапии (в таблетке или драже) не одинакова и колеблется в широких пределах. Разработанный на кафедре препарат панинтестин по активности ферментов не уступает многим отечественным и зарубежным аналогам, а по некоторым биохимическим показателям их превосходит.

2. Выявлено, что процентное соотношение активности ферментов, определенное по сигнатурным данным в патентованных препаратах ферментозаместительной терапии как отечественного так и зарубежного производства не всегда совпадает с данными собственных исследований.

3. Экспериментально доказано, что традиционные лекарственные формы препаратов - крупные таблетки и драже - хотя и покрыты защитной оболочкой, но она недостаточно устойчива в кислой среде; высокая резистентность к действию соляной кислоты наблюдается у препаратов нового поколения, которые выпускаются в виде микросфер или микротаблеток.

4. Установлено, что ферментные препараты при парентеральном введении обладают способностью оказывать влияние на активность ферментов в желудке, поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке.

5. Выявлено, что сила действия панинтестина, в большей степени зависит от биологически активных пептидов, которые наряду с пищеварительными ферментами входят в его состав.

6. Предполагается, что в патентованных препаратах ферментозаместительной терапии основной компонент - панкреатин также содержит биологически активные пептиды, обладающие способностью влиять на секреторные процессы пищеварительных желез.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные результаты по сравнительному анализу активности ферментов в препаратах энзимотерапии как в лекарственной форме (таблетки, драже) так и в пересчете на 1 мг белка могут быть реализованы в гастроэнтерологической практике для разработки оптимальных схем лечения больных с нарушенной внешнесекреторной функцией поджелудочной железы и секреторной недостаточностью желудка и слизистой тонкой кишки.

Установленые данные, что в крупных таблетках и драже диаметром 3 - 5 мм (фестал, энзистал, панкреатин и др.) защитные покрытия не обла-

дают достаточным кислотоустойчивым свойством, приводящим к инактивации большей части ферментов, могут способствовать наиболее правильному подбору лекарственной формы или соответствующей дозы ферментных препаратов при назначении заместительной ферментотерапии.

Материалы диссертационной работы используются гастроэнтерологами Республиканского гастроцентра и в лечебных учрежденях г. Краснодара, а также при чтении курса лекций на кафедрах биохимии, нормальной физиологии, патофизиологии, гастроэнтерологии с курсом интроскопии факультета последипломной подготовки врачей Кубанской государственной медицинской академии.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на 4-м Международном конгрессе по проблеме «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2000) и на Всероссийской научно-практической конференции «Органосохраняющие принципы в хирургии неотложных состояний» (Ейск, 2001).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материал и методы исследования», двух глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 139 отечественных и 95 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 18 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определена фактическая активность ферментов — основных протеи-наз (трипсина и химотрипсина), амилазы и липазы в 14 наиболее широко распространненных в России препаратах энзимотерапии: дигестал (INC, Югославия), креон (Solvay Pharma, Германия), мезим форте (Berlin Chemie, Германия), панзинорм (KRKA, Словения), панцитрат (Knoll, Германия), панкреатин (Акрихин, Россия), панкреатин (Югославия), панкреатин (Биомед, Беларусь), фестал (Moechst Harion Roussel, Германия), энзистал (Torrent, Индия), холензим (Биомед Беларусь), ликреаза (Laboratoires LAPHAL, Франция), вобэнзим (MUCOS Pharma, Германия), ипентал (IPCA laboratories, Индия). В качестве препарата сравнения (эталона) был взят ферментный препарат панинтестин, разработанный на кафедре биохимии Кубанской государственой медицинской академии (Сторожук П.Г. с со-авт., 1987, автор, св. СССР, № 1476653). Предлагаемый препарат панинтестин обладает высокой ферментативной активностью и оказывает выраженное стимулирующее влияние на внешнесекреторную функцию поджелудочной железы и секреторную функцию желудка. (Павлюченко И.И., 1987).

Для определения активности ферментов из препаратов энзимотера-пии готовили экстракты. В этих целях с них предварительно снимали кислотоустойчивую оболочку, и ядро измельчали в фарфоровой ступке до порошкообразной массы. Затем определяли вес каждого препарата без оболочки, а для панинтестина брали навеску, равную средней массе исследуемых таблеток. Полученную порошкообразную массу растворяли в одинаковых условиях и получали экстракты, в которых определяли активность ферментов: протеиназ суммарно - по методу H.JI. Ansona (1938) в модификации П.Г. Сторожука и B.JI. Криштопы (1969), трипсина - по методу Н. Турру et al (1962), химотрипсина - по М.Т. Проскурякову (1966), амилазы - по методу С.П. Корочанской и П.Г. Сторожука (1974) и липазы - по методу Титца в модификации В.И. Окулова и Л.В. Дударя (1982).

В некоторых препаратах энзимотерапии была определена активность трипсина, суммарных протеиназ, амилазы и липазы после их инкубации в течение 60 мин при 137°С в растворе 0,1 н. соляной кислоты.

Для изучения влияния патентованных препаратов энзимотерапии и пептида В| (ММ 3000 - 3300 Да), выделеного из панинтестина методом гель-хроматографии на секрецию желудка, поджелудочной железы и двенадцатиперстной кишки были поставлены острые опыты на 175 белых крысах массой 180 — 200 г. Постановка экспериментов на животных проводилась с соблюдением правил, изложенных в приложении к приказу Минздрава Российской Федерации (Западнюк И.П. и соавт., 1983).

После 24-часового голодания (при свободном доступе к воде) крысам на фоне пищевого раздражителя вводили парентерально экстракт одного из исследуемых препаратов: вобэнзим, дигестал, ликреазу, панкреатин, панинтестин или испытуемый биологически активный пептид.

Дозу препаратов рассчитывали по количеству содержащегося в них белка, которое определяли методом Кьельдапя в модификации Конвея (Покровский A.A., 1964).

После 90-минутной экспозиции крысам производилась декапитация. По срединной линии вскрывали брюшную полость и извлекали желудок, двенадцатиперстную кишку и поджелудочную железу. Желудок и двенадцатиперстную кишку вскрывали, промывали в дистиллированной воде, промокали фильтровальной бумагой и тщательно измельчали с помощью стеклянного гомогенизатора. Измельченные органы взвешивали и готовили из них 10% гомогенаты на дистиллированной воде.

В гомогенатах желудка определяли молокосвертывающую (химаз-ную) активность пепсина по Пятницкому (1968) и протеолитическую активность по Ансону (1938).

Суммарная протеолитическая активность, а также содержание трипсина, химотрипсина, амилазы и липазы в гомогенатах поджелудочной же-

лезы и двенадцатиперстной кишки определялись по тем же методикам, что и при изучении препаратов ферментозаместительной терапии in vitro.

Полученные результаты представлены графически различными видами диаграмм, при построении которых использовался программный пакет Excel (MS Office 98). Все полученные данные статистически обработаны с использованием как стандартных, так и специально разработанных программ анализа. Процент возможной ошибки находили по таблице Стьюдента, выражаемый в виде значений достоверности различия - «р» (Мерков A.M., Поляков Л.Е., 1974; Гланц С.А., 1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Определение активности ферментов в патентованных препаратах заместительной энзимотерапии и сравнение ее с панинтестином. Ферментные препараты, предназначенные для проведения заместительной терапии при заболеваниях органов гастропанкреатодуоденальной зоны, сопровождающихся снижением их секреторной функции, отличаются друг от друга по количеству входящих компонентов, активности энзимов и способу производства. Содержание в препаратах высоких концентраций ферментов (особенно трипсина), а также их форма выпуска (драже, таблетки, микрогранулы) играют немаловажную роль в эффективности терапии, проводимой данными лекарственными средствами.

Поэтому представляет интерес установить, какова удельная активность ферментов, входящих в состав препаратов энзимотерапии, и насколько высока резистентность оболочек препаратов с разными формами выпуска к действию соляной кислоты.

В результате проведенных исследований установлено, что в изучаемых препаратах количество белка колеблется от 57 мг (панкреатин) до 115 мг (ликреаза) (табл. 1). Все они обладают относительно высокой активностью ферментов, которая варьирует в очень широких пределах.

Активность препаратов ферментозаместительной терапии оценивалась с помощью биохимических методов путем их сравнения как между собой, так и с сигнатурными данными, при этом учитывались дата изготовления препарата (7 - 14 месяцев со дня выпуска) и условия их хранения (в соответствии с инструкцией).

Самая высокая активность трипсина обнаружена в вобэнзиме (802 ед) и фестале (801 ед). По отношению к этим препаратам активность трипсина в панзинорме составляет 92% (в расчете на таблетку). Достаточно высокое содержание этого фермента установлено также в дигестале, панкреатине (Югославия) (81% в каждом) и ликреазе (77%). Такие препараты, как мезим форте и холензим относительно бедны трипсином. Если их сравнивать с фесталом, то в процентном отношении содержание этого

Таблица 1

Активность протеиназ в препаратах ферментозаместительной терапии (М + ш; п = 10 в каждой серии)

Препараты Кол-во белка, мг Протеиназы (суммарно) мМоль - Т/мин (ед) Трипсин мкМоль-S/mhh (ед) Химотрипсин мг/мл (ед)

на таблетку на 1 мг белка на таблетку на 1 мг белка на таблетку на 1 мг белка

Панзинорм 92,9 449,3 + 9,8 4,84+ 0,102 736,8 + 15,1 7,96 + 0,161 12,6 + 0,97 0,14 + 0,013

Панцитрат 87,1 372,1 + 12,1 4,27 + 0,085 325,0 + 8,0 3,73 + 0,121 15,2 + 1,12 0,17 + 0,017

Фесгал 112,7 417,7 + 16,8 3,71 + 0,075 800,9 + 17,3 7,11 + 0,146 11,4 + 0,81 0,10 + 0,013

Дигестал 93,8 316,3 + 17,2 3,69 + 0,074 664,2 + 25,3 7,08 + 0,152 11,8 + 0,92 0,13+ 0,020

Вобэнзим 114,5 370,8 + 4,5 3,24 + 0,071 802,0 + 10,5 7,00 + 0,134 12,2 + 0,95 0,11 + 0,012

Панинтестин" 79,9 341,2 + 13,1 4,27 + 0,100 489,1 + 18,7 6,12 + 0,152 9,5 ± 0,72 0,12 + 0,011

Ликреаза 115,3 327,6 + 8,5 2,84 + 0,052 619,1 + 5,1 5,37 + 0,124 10,2 + 0,84 0,09 + 0,010

Энзистал 113,2 192,7 + 5,6 1,702 + 0,055 563,4 + 13,2 4,98 + 0,146 8,8 + 0,70 0,08 + 0,008

Креон 108,2 294,5 + 11,4 2,72 + 0,055 229,4 + 6,8 4,98 + 0,015 9,0 + 0,75 0,08 + 0,009

Ипентал 101,4 122,8 + 5,3 1,21 + 0,060 488,4 + 6,1 4,82 + 0,123 7,9 + 0,60 0,08 + 0,009

Панкреатин (Югославия) 109,1 236,2 + 16,0 2,16 + 0,053 664,0 + 12,1 6,09+ 0,143 8,7 + 0,66 0,08 + 0,008

Мезим форте 72,9 98,2 + 3,5 1,35 + 0,050 156,6 + 9,6 2,16 + 0,117 6,2 + 0,40 0,08 + 0,011

Холензим 69,7 37,4 + 3,2 0,54 + 0,050 41,0 + 1,5 0,59 + 0,091 4,2 + 0,37 0,06 + 0,007

Панкреатин (Акрихин) 60,3 42,5 + 4,2 0,70 + 0,047 293,2 + 5,1 4,86 + 0,136 6,0 + 0,31 0,10 + 0,010

Панкреатин (Биомед) 57,4 39,4 + 1,6 0,69 + 0,050 196,1 + 4,6 3,416 + 0,124 5,8 + 0,34 0,10 + 0,011

Примечание' * - препарат, созданный на кафедре биохимии КГМА.

фермента составляет 20% для первого препарата и всего 5% для второго.

Самая высокая активность химотрипсина установлена в панцитрате (15 ед). По данному показателю к нему приближаются панзинорм (84%), вобэнзим (81%), дигестал (79%) и фестал (76%). Препараты панкреатин (Акрихин) и панкреатин (Биомед) имеют относительно небольшую активность химотрипсина. У них на 31-33% фермента меньше по сравнению с панкреатином югославского производства.

По суммарной протеолитической активности (СПА) наиболее активным является панзинорм (449 ед). По сравнению с ним довольно высокую активность этого фермента имеют также фестал (93%), вобэнзим и пан-цитрат (83% в каждом).

Наименьшая СПА так же, как и активность трипсина, наблюдается в холензиме (37 ед), что в 12 раз меньше, чем в панзинорме.

При сравнении результатов полученных исследований с сигнатурными данными тех же препаратов наблюдается следующая картина: наиболее высокой активностью суммарных протеиназ по сигнатурным данным является ликреаза. По результатам наших исследований, наряду с лик-реазой, высокая СПА наблюдается также в фестале и панцитрате (рис. 1).

ШЛикреаза □Дигестал Р Панкреатин

Сигнатурные Собственные Сигнатурные Собственные Сигнатурные Собственные данные данные данные данные данные данные

СПА Липаза Амилаза

Рис. 1. Сравнительный анализ активности ферментов по

сигнатурным данным и собственным исследованиям в препаратах ферментозаместительной терапии

Что же касается других препаратов, то сравнительный анализ СПА показал, что активность суммарных протеиназ в наших опытах не всегда совпадает с сигнатурными данными.

Ферментные препараты, рекомендуемые для лечения внешнесекре-торной панкреатической недостаточности, должны содержать кроме про-теаз еще достаточное количество амилазы и особенно липазы (не менее 20000 - 40000 Е), поскольку при экзокринной панкреатической недостаточности переваривание жиров нарушается в первую очередь.

Среди изучаемых препаратов энзимотерапии наибольшая активность липазы обнаружена в ликреазе: 4040 ед (табл. 2). Высокое содержание липазы отмечается также в таких препаратах, как панцитрат и панзи-норм (52 - 67%) по сравнению с ликреазой.

Относительно небольшой активностью липазы обладают панкреати-ны различных фирм и холензим. Активность данного фермента в таблетках у них в пределах от 597 ед в панкреатине (Югославия) до 556 ед у хо-лензима, что примерно в 5 раз меньше по сравнению с ликреазой.

Сравнительный анализ результатов собственных исследований с сигнатурными данными показал, что наибольшей активностью липазы в обоих случаях обладает ликреаза (рис. 1). По данным аннотации, после ликреазы высокую активность этого фермента имеют панцитрат и креон. В наших исследованиях наряду с ликреазой высокое содержание липазы наблюдается в панзинорме.

При сравнении активности амилазы в препаратах энзимотерапии, установлено, что самой высокой активностью этого фермента обладают вобэнзим (3520 ед) и панзинорм (3093 ед). Немного уступает им по данному показателю (на 7 — 8%) ликреаза (табл. 2). Относительно небольшой активностью амилазы обладают такие препараты, как ипентал и холензим: их активность в таблетке примерно в 4 раза меньше, чем в ликреазе, и в 5 раз - чем в вобэнзиме.

При сопоставлении результатов собственнных исследований с сигнатурными данными установлено, что в обоих случаях высокой активностью амилазы обладает ликреаза (рис. 1). По данным аннотации, после ликреазы высокую активность этого фермента имеют панцитрат и креон. В наших исследованиях наряду с ликреазой высокая активность амилазы наблюдается также в панзинорме и по этому показателю он значительно превышает активность данного фермента в панцитрате и креоне. Затем, по результатам фактической активности амилазы, наименьшее количество данного фермента находится в мезим форте, а по сигнатурным данным - в фестале.

Такие препараты ферментозаместительной терапии, как мезим форте, панкреатины российского и белорусского производства, а также холензим, имеют в своем составе относительно небольшое содержание всех указанных пищеварительных ферментов.

Таблица 2.

Показатели активности липазы и амилазы в препаратах ферментозаместительной терапии (М + т; п = 10 в каждой серии)

Препараты Кол-во белка (в 1 таблетке), мг Липаза мг/л/ч (ед) Амилаза мг-Э/мин (ед)

На таблетку На 1мг белка На таблетку На 1мг белка

Ликреаза 115,3 4040,1+57,6 35,04+0,396 2880,6+153,4 25,0+1,74

Панзинорм 92,9 2694,0+63,7 29,00+0,295 3093,4±106,8 33,3+2,15

Панцитрат 87,1 2115,8+60,9 24,29+0,296 2266,1+108,7 26,0+1,80

Дигестал 93,8 1685,0+54,3 17,96+0,249 2113,4+95,5 27,8+2,07

Энзистал 113,2 1085,0+41,4 9,58+0,208 1583,3+73,8 14,0+0,75

Фестал 112,7 1071,6 ±40,7 9,51+0,198 1974,2+81,9 17,5+0,83

Креон 108,2 1984,7+39,6 9,09+0,206 1892,6+71,5 17,0±0,95

Панинтестин 79,9 1873,0+27,9 10,93+0,218 1883,4+72,4 23,6+1,44

Вобэнзим 114,5 787,3+25,2 6,88+0,158 3520,3+213,5 30,7+3,16

Мезим форте 72,6 716,0+21,1 9,86+0,200 1344,8+91,7 18,5+0,92

Ипентал 101,4 640,2+23,9 6,31±0,110 684,5+41,2 6,8+0,13

Панкреатин (Югославия) 109,1 596,9+21,6 5,47+0,104 1071,2+70,2 9,8+0,11

Панкреатин (Акрихин) 60,3 572,4+19,9 9492,5+236,0 994,2+0,52 16,4+ 1,03

Панкреатин (Биомед) 57,4 560,8+18,6 9770,0+248,9 802,7+0,46 14,0+0,97

Холензим 69,7 556,4+18,8 7982,8+0,12 642,5+0,48 9,2+0,14

Таким образом, среди изучаемых лекарственных средств по активности ферментов наиболее высокие показатели имеют 5 препаратов: фестал, вобэнзим, панзинорм, панцитрат и ликреаза. Причем протеолитическая активность наиболее ярко выражена у фестала и вобэнзима (за счет активности трипсина), а в панцитрате и панзинорме (за счет активности химот-рипсина). Наряду с высоким содержанием протеиназ, вобэнзим и панзинорм обладают также высокой активностью амилазы. Ликреаза обладает самой высокой активностью липазы и достаточно высоким содержанием амилазы.

Разработанный на нашей кафедре препарат панинтестин по активности ферментов не уступает отечественным и многим зарубежным аналогам, а по некоторым показателям даже превосходит их. Так, по сравнению дигесталом, панкреатином (Югославия), ликреазой и мезим форте активность СП А в панинтестине выше на 4 - 71%. Активность трипсина в па-нинтестине практически совпадает с этим показателем в ипентале (489 ед) и выше почти в 2 раза, чем в креоне и панкреатине (Россия), а активность химотрипсина у него на 5 - 9% выше, чем в креоне, энзистале и панкреатине (Югославия).

Липолитическая активность панинтестина практически одинаковая с креоном и превышает ее на 58% в вобэнзиме.

Активность амилазы в панинтестине составляет 1883 ед, что выше на 16%, чем в энзистале, и на 43%, чем в панкреатине (Югославия).

Зависимость стабильности ферментов в ПФЗТ от формы выпуска препарата. Высокая доза ферментов, поступающих в желудок, не всегда обеспечивает положительный эффект. Основные составляющие ферментных препаратов - трипсин и липаза - быстро теряют активность в кислой среде (инактивация трипсина происходит при рН < 3, а липазы - при рН < 4). Поэтому перед тем, как препарат попадает в двенадцатиперстную кишку, может разрушаться более половины содержащихся в нем ферментов (Баярмаа Н. и соавт., 2000).

Все патентованные препараты энзимотерапии, подвергшиеся биохимическому исследованию и имеющие различные формы выпуска (таблетки, драже, микрогранулы), покрыты защитной кислотоустойчивой оболочкой. В результате эксперимента с соляной кислотой (в условиях, приближенных к желудочным) выяснилось, что не все защитные покрытия обладают достаточно высоким энтеросолюбильным свойством и это напрямую связано с их формой выпуска (рис. 2).

Активность трипсина в препаратах с традиционной формой выпуска в виде таблеток или драже (вобэнзим, дигестал, ликреаза, панкреатин, фес-тал и энзистал) после их инкубации в растворе соляной кислоты уменьшается на 36 - 52%, активность химотрипсина - на 28 - 48%, а СПА падает на 21 - 40%. В препаратах с новой энтеросолюбильной оболочкой (креон, ликреаза и панцитрат) протеолитическая активность уменьшается незначительно (р > 0,05).

Активность амилазы в традиционных препаратах (выпускаемых в виде таблеток и драже) после обработки соляной кислотой инактивирует-ся на 20 - 30%, а в новых лекарственных формах (в виде микротаблеток и микросфер) она снижается всего на 6-9% (р > 0,5).

Что же касается липолитической активности, то после обработки соляной кислотой препараты с традиционными формами выпуска теряют

Трипсин Химшрилсин СПА Липа» Амилаза

Рис. 2. Изменение активности ферментов в препаратах

энзимотерапии с защитным покрытием под действием соляной кислоты

активность данного фермента на 48 - 80%. У современных препаратов с новой энтеросолюбильной оболочкой также происходит снижение активности липазы, но разница, по сравнению с исходной формой, меньше, чем у препаратов предыдущей группы.

Таким образом, установлено, что традиционные лекарственные формы в виде таблеток и драже диаметром 3 — 5 мм покрыты оболочкой, которая частично разрушаются под действием желудочного сока, что приводит к инактивации большей части ферментов, содержащихся в них. Современные препараты с формой выпуска в виде микротаблеток и микросфер диаметром не более 2 мм покрыты оболочкой, защитные свойства которой значительно превосходят покрытие указанных препаратов.

Ферментообразующая функция органов гастродуоденальной зоны у крыс при парентеральном введении препаратов заместительной ферментотерапии и пептида, выделенного из панинтестина. В более ранних работах кафедры экспериментальным путем на собаках, установлено, что панинтестин стимулирует деятельность железистого аппарата желудка, а также секрецию пищеварительных органов и двенадцатиперстной кишки за счет биологически активных пептидов, образующихся из слизистой оболочки тонкой кишки и железистой ткани поджелудочной железы в процессе изготовления препарата (Павлюченко И. И., 1987).

Поскольку технология приготовления препарата предусматривает перевод проферментов в активные формы, то неизбежно идет гидролиз белков этих органов с образованием многочисленных пептидов, в том числе и биологически активных. Например, из панинтестина уже выделен ряд

фракций, которые обладают стимулирующим и тормозящим действием (Быков И.М., 2002).

Изучение механизмов действия патентованных препаратов энзимо-терапии, а также подтверждения данных, установленных в экспериментах на собаках, требовали проведения серии опытов на другом виде животных. Для этих целей были проведены острые опыты на крысах, у которых изучалось действие препаратов энзимотерапии на секреторную функцию желудка, и экскреторную функцию поджелудочной железы.

Крысам на фоне пищевого раздражителя (1 мл бульона «Галина Бланка») внутрибрюшинно вводили экстракт одного из исследуемых препаратов: вобэнзима, дигестала, ликреазы, панкреатина, панинтестина или петид В], выделенный из панинтестина методом гель-хроматограии в дозе 6 мкг на 1кг веса. Препараты энзимотерапии брали в равных дозировках по содержанию в них общего количества аминного азота.

Из таблицы 3 видно, что в слизистой оболочке желудка пептид В[ вызывает самое высокое увеличение как протеолитической так и химазной активности пепсина.

ТаблицаЗ

Показатели протеолитической и химазной активности пепсина в слизистой желудка (мг/г сырой ткани) у контрольных (п = 25) и опытных (п = 25) групп крыс в ответ на введение препаратов ферментозаместительной терапии

Серия опытов Пепсин по Ансону, протеолитическая активность, мг Пепсин по Пятницкому, молокосвертывающая активность, мг/мл

М±т % М + т %

Фш, р-р и бульон (контроль) 64,2 х 1,62 100 51,9+1,56 100

Пептид В| и бульон 92,4 ±4,01 144* 70,3 + 3,41 135*

Вобэнзим и бульон 79,2 + 3,37 123* 59,7 ±2,17 115*

Дигестал и бульон 77,7 ± 2,92 121* 60,8 + 3,01 117*

Ликреаза бульон 73,0 ± 3,23 114* 58,9 ±2,12 114*

Панинтестин и бульон 78,7 ± 3,02 122* 60,6 ±2,79 117*

Панкреатин и бульон 80,4 ± 3,94 125* 61,2 ±2,96 123*

Примечание: знаком * отмечено р < 0,05

Из числа изучаемых ферментных препаратов наиболее выраженное 1 увеличение протеолитической, а также молокосвертывающей активности

пепсина наблюдается при введении панкреатина и составляет 23 и 25% со'' ответственно. Статистически достоверное повышение активности пепси' на происходит также при введении других исследуемых препаратов. I В поджелудочной железе после введения пептида Вь активность суммарных протеиназ, трипсина и химотрипсина увеличивается на 34 -82% по сравнению с контролем (рис.3). Препараты ферментозаместитель-I ной терапии также повышают протеолитическую активность в этом органе, но сила их действия уступает испытуемому пептиду. СПА под воздей-I ствием вобэнзима, дигестала, панкреатина и панинтестина повышается на 17 - 29%, активность трипсина увеличивается на 22 - 36%, а - химотрип-4 сина возрастает на 39 - 56% (см. рис. 3). Ликреаза вызывает незначительное повышение активности протеолитических ферментов всего на 6% (р > 0,05). Это вероятно связано с тем, что в ней высокие концентрации ферментов достигаются за счет более тщательной их очистки и остается меньше сопутствующих пептидов, способных оказывать стимулирующее действие на ферментообразование в пищеварительных органах.

Активность липазы увеличивается под воздействием ликреазы и вобэнзима на 37 - 52%, а при введении остальных изучаемых препаратов эн-зимотерапии статистически достоверного изменения активности данного фермента не происходит (р > 0,5). Биологически активный пептид В1 вызывает уменьшение активности липазы на 56%. ( Активность амилазы под воздействием пептида В, выделенного из

панинтестина увеличивается примерно в 2 раза и составляет 196% по сравнению с контролем. После введения дигестала, вобэнзима и панинтестина активность данного фермента возрастает на 57 - 66%. Панкреатин вызывает увеличение активности амилазы на 34%, а введение ликреазы приводит к уменьшению данного фермента на 27%.

В двенадцатиперстной кишке также как и в поджелудочной железе самое высокое увеличение активности суммарных протеиназ, трипсина и 1 химотрипсина отмечается после введения пептида В], (рис. 4).

Под воздействием препаратов энзимотерапии: вобэнзима, дигестала, ^ панкреатина и панинтестина СПА возрастает на 15 - 26%. При этом ак-

тивность трипсина увеличивается на 15 — 20%, а активность химотрипси-I на возрастает на 37 - 49% по сравнению с контролем. Видимое увеличение

| активности протеолитических ферментов на 3 - 6% под воздействием лик-

реазы является статистически не достоверным (р>0,05).

Трипсин, химотрипсин и амилаза в слизистой тонкой кишки не синтезируется, но они адсорбируются на поверхности ворсинок. Поэтому после промывания кишечника они остаются на ворсинках и обнаруживаются 1 в довольно высоких концентрациях в гомогенатах.

Трипсин Химотрипсин СПА Липаза Амилаза

Рис. 3. Изменение активностей ферментов в гомогенате

поджелудочной железы под действием препаратов энзимотерапии и петида В| по сравнению с контролем

| □ Контроль □ Пептид В1 ВВобэнзим ОДигестал ■ Ликреаэа ВПанинтесгин ■ Панкреатин

200

Трипсин Химотрипсин СПА Липаза Амилаза

Рис. 4. Изменение активностей ферментов в гомогенате

двенадцатиперстной кишки под действием препаратов энзимотерапии и петида В[ по сравнению с контролем

,1 I

В двенадцатиперстной кишке активность амилазы возрастает больше | всего (на 83%) под воздействием пептида В1. Вобэнзим, панкреатин, па-

: нинтестин и дигестал повышают ее активность на 20 - 28%, а после вве-

< дения ликреазы она уменьшается на 17%.

' Увеличение активности липазы в двенадцатиперстной кишке проис-

| ходит значительно (на 30-33%) только под воздействием ликреазы и во-

; бэнзима. Панкреатин, дигестал и панинтестин также как и в поджелудоч-

ной железе не оказывают существенного влияния на секрецию этого фермента (р > 0,05). Введение животным пептида Вь уменьшает активность липазы в этом органе примерно в 2 раза.

Таким образом, в экспериментах на крысах, патентованные препараты ферментозаместительной терапии, также как и препарат панинтестин, 4 разработанный на нашей кафедре, при внутрибрюшинном введении обла-

дают способностью оказывать влияние на секрецию в пищеварительных железах, но их сила воздействия значительно уступает пептиду, выделенному из панинтестина и исследуемого в тех же условиях.

Сила действия препаратов, вероятно, в большей степени зависит от биологически активных пептидов, которые наряду с пищеварительными ферментами входят в состав панкреатина - основного компонента препаратов энзимотерапии (Сторожук П.Г. и соавт., 2001).

рипсин, амилаза, липаза и др.), сразу же включаются в гидролиз пищевых веществ, а биологически активные пептиды оказывают свое регулирующее гормоноподобное действие на активность пищеварительных ферментов, которое чаще является стимулирующим.

ВЫВОДЫ

^ 1. В отечественных и зарубежных препаратах энзимотерапии, при-

меняемых в гастроэнтерологии, активность пищеварительных ферментов в разовой дозе (таблетке, драже, капсуле) неодинакова и колеблется в широ-ч ких пределах. Активность каждого фермента в препаратах энзимотерапии

по сигнатурным данным не всегда совпадает с результатами собственных I исследований.

2. ПФЗТ нового поколения, выпускаемые в виде микросфер или микротаблеток, покрыты защитными оболочками, которые более устойчивы к воздействию соляной кислоты, чем традиционные формы препаратов. По степени инактивации ферментов содержащихся в препаратах энзимотерапии под воздействием соляной кислоты их можно расположить в следующем порядке: липаза > химотрипсин > трипсин > суммарные про-теиназы > амилаза.

3. Разработанный на кафедре биохимии КГМА ферментный препарат панинтестин по активности ферментов не уступает многим отечественным и зарубежным аналогам, а по некоторым биохимическим показателям даже превосходит их.

4. В экспериментах на крысах установлено, что панинтестин обладает способностью стимулировать секрецию желудка, тонкой кишки и поджелудочной железы и этот эффект, главным образом, принадлежит пептидам, выделенным из панинтестина, в частности пептиду В) (ММ 3000-3300 Да)

5. Гастроэнтерологические препараты энзимотерапии: вобэнзим, ди-гестал, ликреаза и панкреатин, при их парентеральном введении крысам способны чаще вызывать стимуляцию ферментообразования, чем торможение в пищеварительных железах, но сила их действия значительно уступает действию пептиду Вь выделенному из панинтестина, что вероятно связано с более низкой концентрацией содержащихся в них биологически активных пептидов.

6. На основании экспериментальных данных можно полагать, что лечебный эффект препаратов ферментозаместительной терапии, складывается с одной стороны за счет высокой активности ферментов, содержащихся в их составе, а с другой стороны, за счет действия содержащихся в них биологически активных пептидов, как это было показано на примере панинтестина.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сравнительная биохимическая оценка патентованных гастроэнтерологических препаратов фермнтозаместительной терапии (Быков И.М., Сторожук П.Г., Плахотнюкова В.В., Быков М.И) // Ыегп.Г. оп шшипоге-ЬаЫНШюп. - 2000. - V. 2. - № 1. - Р. 201- 203.

2. Действие пептидов, выделенных из Панинтестина, на биосинтез ферментов желудочно-кишечного тракта у крыс (Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е., Быков М.И.) // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепато-логии, колопроктологии. - 2000. — Т. 10, № 5. - С. 72.

3. Биохимическая оценка гастроэнтерологических препаратов ферментозаместительной терапии (Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е., Быков М.И.) // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2000. - Т. 10, № 5. - С. 72.

4. Новый взгляд на механизмы действия препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии (Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е., Быков М.И., Плахотнюкова В.В.) // Аллергология и иммунология.-2001.- Т. 2, № 1.- С. 148-154.

5. Протеолитические свойства и другие биохимические характеристики патентованных препаратов ферментозаместительной терапии (Сто-рожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е., Быков М.И.) // Кубан. науч. мед. вестн.-2001,- №1 (55).- С. 9-11.

6. Хроматографическое выделение биологически активных ферментов из панинтестина и исследование их действия на синтез ферментов поджелудочной железы, желудка и двенадцатиперстной кишки (Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е.) // Кубан. науч. мед. вестн. - 2001. - № 1 (55).- С. 19-21.

7. Триптическая и общая протеолитическая активность некоторых отечественных и зарубежных препаратов ферментозаместительной терапии (Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е., Быков М.И.) // Материалы Всерос. науч.-практ. конф. «Органосохраняющие принципы в хирургии неотложных состояний». - Ейск, 2001. - С. 119-121.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

БАПНА - бензоиларгинин-р-нитроанилид

КГМ А - Кубанская государственная медицинская академия

ММ - молекулярная масса

ПФЗТ- препараты ферментозаместительной терапии С ПА - суммарная протеолитическая активность

Издательство ООО «ЦВВР» Лицензия ЛР № 65-36 от 05 08 99 г Заказ № 427 от 22 10 2003 г. Тираж 100 экземпляров Печ лист 1,0. Услпечл. 1,0. Формат 60*84/16. Компьютерный набор и верстка Издательско-полиграфический комплекс « Биос» РГУ 344091, г. Ростов-на-Дону, ул. Зорге, 28/2, корп. 5 «В», 4 этаж. Лицензия на полиграфическую деятельность № 65-125 от 09 02 98 г

то/

р17 20 7

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Хвостова, Татьяна Станиславовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ ЭНЗИМОТЕРАПИИ ПРИ СЕКРЕТОРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ОРГАНОВ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ.

1.1. Основные гидролазы желудочно-кишечного тракта.

1.2. Применение пищеварительных ферментов в гастроэнтерологической практике

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Препараты ферментозаместительной терапии. k, 2.1.1. Методы изучения активности ферментов в исследуемых препаратах

2.2. Методы постановки экспериментов на крысах и методы определения активности пищеварительных ферментов в гомогенатах слизистой желудка, двенадцатиперстной кишки и поджелудочной железы

2.3. Статистические методы исследования. т

Глава 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

В ПАТЕНТОВАННЫХ ПРЕПАРАТАХ ФЕРМЕНТОЗАМЕСТИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ

И СРАВНЕНИЕ ЕЕ С СИГНАТУРНЫМИ ДАННЫМИ.

3.1. Характеристика препаратов энзимотерапии.

3.1.1. Определение протеолитической активности в препаратах ферментозаместительной терапии.

3.1.2. Определение активности липазы и амилазы в препаратах ферментотозаместительной терапии.

3.2 Зависимость стабильности ферментов в препаратах энзимотерапиитерапии от их формы выпуска.

Глава 4. ФЕРМЕНТООБРАЗУЮЩАЯ ФУНКЦИЯ ОРГАНОВ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ЗОНЫ У КРЫС ПРИ ПАРЕНТЕРАЛЬ НОМ ВВЕДЕНИИ ПРЕПАРАТОВ ЗАМЕСТИТЕЛЬНОЙ ФЕРМЕНТОТЕРАПИИ

4.1. Протеолитическая активность слизистой желудка, двенадцатиперстной кишки и поджелудочной железы крыс при парентеральном введении пептида В! и препаратов ферментозаместительной терапии.

4.2. Активность амилазы и липазы в поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке у крыс при парентеральном введении пептида Bj и препаратов ферментозаместительной терапии.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная биохимическая характеристика патентованных препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии"

Актуальность темы. Ферментозаместительная терапия является одной из наиболее важных звеньев лечебных мероприятий в гастроэнтерологии (Златкина А.Р., 1998; Охлобыстин А.В., 2001).

Многие заболевания органов гастропанкреатодуоденальной зоны сопровождаются снижением их секреторной функции, что приводит к нарушению процессов пищеварения в желудочно-кишечном тракте (Логинов А.С., Исакова З.С., 1984; Багненко С.Ф. и соавт., 2000; Andersen B.N. et al., 1982). К наиболее частым причинам ферментативной недостаточности относятся хронический панкреатит, состояние после резекции поджелудочной железы, хронический гастрит с пониженной кислотообразующей функцией желудка, хронический энтерит, опухоль поджелудочной железы, цистический фиброз (Яхонтова О.И., 1980; Петухов В.А., Дибров А.Д., 1999; Halgreen Н., 1986; KashimaK., 1997).

Такие заболевания, как правило, сопровождаются изменением процесса адсорбции панкреатических ферментов на поверхности слизистой оболочки тонкой кишки, что приводит к нарушению переваривания и всасывания пищевых веществ - синдрому мальдегистии / мальабсорбции нутриентов (Клюева Ж.И. и соавт., 1980; Каретерс Дж.М., 1997). Для лечения этого синдрома широко используются ферментные препараты фер-ментозаместительной терапии.

Ферментные препараты, наряду с ферментозаместительной терапией в гастроэнтерологии, широко применяются в хирургии, педиатрии, а также населением как безрецешурные лекарственные средства (Яковенко Э.П. 1998; Фролькис А.В., 2000). К сожалению, большинство из них часто оказываются мало эффективными, поскольку обладают небольшим потенциалом активности содержащихся в них ферментов. Крупнейший специалист в области ферментозаместительной терапии в России профессор Н.П. Пятницкий установил, что для нормального желудочного пищеварения желудочные железы здорового взрослого человека в течение суток должны продуцировать не менее 1 г пепсина. (Сторожук П.Г., 1985; Сторожук П.Г. и соавт., 2001)

На кафедре биохимии Кубанской государственной медицинской академии в этом направлении на протяжении многих лет ведутся исследовательские работы. Так, проф. ЯП. Пятницким и его учениками были созданы и внедрены в практическое здравоохранение препараты с высоким содержанием ферментов (пепсидил, копепсидил, панинтестин), широко применяемые в гастроэнтерологии.

В последнее время появились экспериментальные доказательства того, что эффективность действия препаратов энзимотерапии определяется главным образом высокой активностью ферментов, при помощи которых частично компенсируется секреторная недостаточность пищеварительных ферментов, и наличием в препаратах биологически активных пептидов, которые обладают свойством преимущественно стимулировать ослабленную патологическим процессом секреторную деятельность пищеварительных желез (Сторожук П.Г. и соавт., 2001; Lankisch P.G., 1998).

При изучении сигнатурных данных установлено, что почти во всех препаратах сведения о раздельном содержании основных протеиназ — трипсина и химотрипсина отсутствует, указывается только суммарная протеолитическая активность, хотя основанием для выбора ферментного препарата в качестве обезболивающего средства при хроническом панкреатите является высокое содержание трипсина в таблетке (Охлобыстин А.В.,2001).

Кроме того, по сигнатурным данным активность протеиназ, амилазы и липазы в разных препаратах сравнивать невозможно, так как ферменты в одних препаратов выражаются в единицах FTP (единица действия Международной Федерации фармации), для других - в единицах Ph Eur единица действия Европейской фармакопии), а для третьей категории препаратов активность ферментов отдельно не указывается, только приводится количество основного компонента (панкреатина) в мг.

Целью настоящей работы явилось проведение сравнительного анализа активности ферментов в патентованных импортных и отечественных препаратах с препаратом панинтестин, разработанным на кафедре биохимии и изучение их биологического действия на активность ферментов в пищеварительных железах.

В связи с этим перед исследователем стояли следующие задачи:

1. Определить активность основных протеиназ (трипсина, химотрипси-на), а также амилазы и липазы в наиболее широко распространенных препаратах энзимотерапии.

2. Провести сравнительный анализ активности ферментов, выраженных в международных единицах, в девяти патентованных препаратах: панзи-норм, ликреаза, панцитрат, креон, энзистал, фестал, дигестал, мезим форте и панкреатин (Югославия) с результатами собственных исследований.

4. Изучить способность препаратов энзимотерапии и пептида Вь выделенного из панинтестина влиять на активность пищеварительных ферментов одновременно в слизистой желудка, поджелудочной железе и слизистой двенадцатиперстной кишки при их парентеральном введении в экспериментах на крысах.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Экспериментально установлено, что активность ферментов в лекарственной форме (таблетки, драже, капсулы) препаратов энзимотера-пии не одинакова и колеблется в широких пределах. Разработанный на кафедре препарат панинтестин по активности ферментов не уступает многим отечественным и зарубежным аналогам, а по некоторым биохимическим показателям их превосходит.

2. Выявлено, что процентное соотношение активности основных ферментов в патентованных препаратах ферментозаместительной терапии отечественного и зарубежного производства по сигнатурным данным не всегда совпадает с результатами собственных исследований.

3. Экспериментально доказано, что традиционные лекарственные формы ферментных препаратов - крупные таблетки и драже - покрыты защитной оболочкой, которая недостаточно устойчива в кислой среде, а высокая резистентность к действию соляной кислоты наблюдается у препаратов нового поколения с формой выпуска в виде микросфер или микротаблеток.

4. Установлено, что ферментные препараты при парентеральном введении обладают способностью оказывать влияние на активность ферментов в в поджелудочной железе, желудке и двенадцатиперстной кишке.

6. Предполагается, что в патентованных препаратах ферментозаместительной терапии основной компонент — панкреатин также содержит биологически активные пептиды, обладающие способностью влиять на секреторные процессы пищеварительных желез.

Новизна исследования

Впервые дан сравнительный анализ наиболее распространенных патентованных препаратов ферментозамеегительной терапии: мезим форте, панкреатин (Акрихин), креон, панцитрат, панкреатин (Югославия), панкреатин (Биомед), дигестал, панзинорм, холензим, энзистал, фестал, лик-реаза, вобэнзим ипентал, по результатам собственных исследований и сигнатурным данным, показывающий, что активность ферментов в изучаемых препаратах не всегда совпадает с сигнатурными данными.

В эксперименте in vitro установлено, что в традиционных лекарственных формах в виде таблеток и драже защитные оболочки не обладают достаточно высоким кислотоустойчивым свойством, в результате чего все ферменты, содержащиеся в препарате, подвергаются частичной инактивации, и особенно липаза.

В экспериментах на крысах дана сравнительная оценка способности панинтестина, патентованных препаратов ферментозаместительной терапии и пептида Bls выделенного из панинтестина методом гель-хроматографии влиять на активность ферментов в поджелудочной железе, желудке и двенадцатиперстной кишке.

Научно-практическая значимость работы

Полученные результаты по сравнительному анализу активности ферментов в препаратах энзимотерапии как в разовой лекарственной дозе (таблетки, драже) так и в пересчете на 1 г белка могут быть реализованы в гастроэнтерологической практике для разработки оптимальной схемы лечения больных с нарушенной внешнесекреторной функцией поджелудочной железы.

Установленые данные, что в крупных таблетках и драже диаметром 3-5 мм (фестал, энзистал, панкреатин и др.) защитные покрытия не обладают достаточным кислотоустойчивым свойством, приводящим к инактивации большей части ферментов, могут способствовать наиболее правильному подбору лекарственной формы или соответствующей дозы ферментных препаратов при назначении заместительной ферментотерапии.

Сведения о внедрении результатов исследования в практику

По материалам проведенных исследований опубликовано 7 печатных работ. Основные положения работы доложены на IV Международном конгрессе по проблеме «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2000) и Всероссийской научно-практической конференции «Органосо-храняющие принципы в хирургии неотложных состояний» (Ейск, 2001). и

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Хвостова, Татьяна Станиславовна

выводы

1. В отечественных и зарубежных препаратах энзимотерапии, применяемых в гастроэнтерологии, активность пищеварительных ферментов в разовой дозе (таблетке, драже, капсуле) неодинакова и колеблется в широких пределах. Активность каждого фермента в препаратах энзимотерапии по сигнатурным данным не всегда совпадает с результатами собственных исследований.

2. ПФЗТ нового поколения, выпускаемые в виде микросфер или микротаблеток, покрыты защитными оболочками, которые более устойчивы к действию соляной кислоты, чем традиционные формы препаратов. По степени инактивации ферментов, содержащихся в препаратах энзимотерапии, под воздействием соляной кислоты их можно расположить в следующем порядке: липаза > химотрипсин > трипсин > суммарные протеи-назы > амилаза.

5. Гастроэнтерологические препараты энзимотерапии: вобэнзим, дигестал, ликреаза и панкреатин, при их парентеральном введении крысам способны чаще вызывать стимуляцию ферментообразования, чем торможение в пищеварительных железах, но сила их действия значительно уступает действию пептиду Вь выделенному из панинтестина, что вероятно связано с более низкой концентрацией содержащихся в них биологически активных пептидов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Пищеварительные ферменты - одна из наиболее часто используемых в гастроэнтерологии групп препаратов, которые широко применяются в терапевтических и хирургических клиниках- В первом случае ферментные препараты назначаются с целью восполнения дефицита ферментов в пищеварительном канале вследствие врожденных аномалий ферментов или развившейся их недостаточности в результате патологического процесса, а во втором случае недостаточность пищеварительных энзимов необходимо восполнять после различных хирургических вмешательств на органах пищеварительной системы (Яковенко Э.П., 1998; Рысс Е., Звартау, 1998; Златкина А.Р., 1998; Сторожук П.Г. и соавт., 2001).

Несмотря на постоянно увеличивающийся арсенал ферментных препаратов для заместительной терапии при секреторной недостаточности желудка и внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы, опыт их применения показал, что зачастую они не оказывают желаемого эффекта, используются нерационально. Наиболее важными причинами малоэффективной терапии ферментными препаратами являются не до конца изученные механизмы их влияния на желудочную секрецию, панкреатическую экскрецию, а также технологические и фармакологические недостатки при их приготовлении (Сторожук П.Г., Быков И.М., 1994; Златкина А.Р. и соавт., 1999).

Изучение механизмов действия препаратов ферментозаместитель-ной терапии на кафедре биохимии Кубанской государственной медицинской академии проводятся многие годы. Клиническое и физиологическое действие препаратов пепсина на желудочную секрецию изучалось Н.С. Маланьиной и соавт. (1974), Т.Н. Хангалдовой (1977), И.М. Быковым (1982). Исследования показали, что эффективность данных препаратов зависит от высоких доз пепсина, который своим действием восполняет недостаточность этого фермента в собственном желудочном соке больных.

Затем коллектив кафедры стал проводить исследования по выявлению биологических и физиологических свойств полиферментных препаратов, применяемых при лечении внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы.

Дальнейшие работы в этом направлении привели к разработке технологии производства полиферментного препарата панинтестина, (Сто-рожук П.Г. и соавт., 1982), В диссертационной работе И.М. Быкова (2002), посвященной изучению биологической ценности панинтестина и таких патентованных препаратов ферментозаместительной терапии, как фестал, панзинорм и панкреатин, были установлены следующие факты. Во-первых, препараты заместительной терапии обладают свойством стимулировать желудочную секрецию и экскреторную функцию поджелудочной железы. Во-вторых, стимулирующий эффект под действием данных ферментных препаратов достигается не только за счет частичной компенсации недостающих пищеварительных ферментов, но и в большей степени за счет действия биологически активных пептидов, содержащихся в их составе,

В последнее время к ферментным препаратам предъявляют ряд требований, самыми важными из которых являются: 1) хорошая переносимость; 2) оптимум действия в интервале рН 4,0 - 7,0; 3) содержание достаточного количества активных пищеварительных ферментов, обеспечивающих расщепление нутриентов; 4) устойчивость панкреато-дуоденальных ферментов к действию соляной кислоты, пепсинов и других протеиназ.

Большинство имеющихся в аптечной сети и широко применяемых в лечебной практике препаратов ферментозаместительной терапии не удовлетворяют как минимум двум последним требованиям, поскольку имеют защитные покрытия, которые быстро растворяются в желудке под действием соляной кислоты, и, следовательно, высвобождающиеся ферменты инактивируются желудочным соком.

Кроме того, диагностика недостаточности внешней секреции поджелудочной железы нередко бывает запоздалой (Губергриц О .Я., 1984; Ри-марчук Г.В., 1995; Banks Р.А., 1994). Это предопределяет необходимость введения больших доз ферментов, в частности, липазы, содержащихся в препарате для заместительной терапии. К сожалению, этому требованию удовлетворяют далеко не все ферментные средства из-за низкой стабильности липазы в кислой среде химуса желудка. Следует подчеркнуть, что лечебный эффект заместительной терапии наблюдается лишь при назначении адекватной дозы того или иного фермента, содержащегося в препарате, и достаточной продолжительности приема данного лекарственного средства, соответствующей характеру заболевания и степени тяжести секреторных нарушений.

С учетом вышеизложенного выбор препарата для коррекции ферментной недостаточности поджелудочной железы представляется не простой задачей, поскольку активность ферментов в разных препаратах по сигнатурным данным выражается в различных единицах, в некоторых лекарственных формах вообще не приводится количество отдельных ферментов, а указывается только содержание панкреатина - основного компонента этих препаратов.

В связи с этим настоящее исследование посвящено изучению фактической активности ферментов в наиболее широко представленных в нашей стране препаратах энзимотерапии по сравнению с активностью ферментов в панинтестине, а также изучение их биологического действия на ферментообразование в пищеварительных железах.

Биохимическому исследованию активности ферментов подвергли 6 препаратов энзимотерапии: мезим форте, панкреатин (Акрихин), креон, панцитрат, панкреатин (Югославия), панкреатин (Биомед), содержащих в своем составе только панкреатин; и 8 препаратов, в состав которых наряду с панкреатином входят также гемицеллюлаза и компоненты желчи: дигестал, панзинорм, холензим, энзистал фестал, ликреаза, вобензим и ипен-тал.

В качестве препарата сравнения (эталона) был взят ферментный препарат панинтестин, разработанный на кафедре биохимии Кубанской госу-дарственой медицинской академии (Сторожук П.Г. с соавт., 1987, автор, св. СССР, № 1476653). Предлагаемый препарат панинтестин обладает высокой ферментативной активностью и оказывает выраженное стимулирующее влияние на внешнесекреторную функцию поджелудочной железы и секреторную функцию желудка. (Павлюченко И.И., 1987).

Активность препаратов ферментозаместительной терапии оценивалась с помощью биохимических методов путем их сравнения как между собой, так и с сигнатурными данными, при этом учитывались дата изготовления препарата и условия их хранения (в соответствии с инструкцией).

Для определения содержания ферментов в исследуемых препаратах из них получали экстракты. Поэтому с них предварительно снимали кислотоустойчивую оболочку и измельчали в фарфоровой ступке до порошкообразной массы. Затем эти порошки растворяли в одинаковых условиях, получали экстракты, в которых определяли активность следующих ферментов: трипсина, химотрипсина, протеиназ суммарно, амилазы и липазы.

В результате исследований установлено, что в лекарственных формах (таблетки, драже, капсулы) количество белка колеблется от 57 мг (панкреатин) до 115 мг (ликреаза). Все они обладают относительно высокими концентрациями вышеприведенных ферментов, но их активность варьирует в очень широких пределах.

Самой высокой активностью трипсина среди них обладают вобэнзим (802 ед), фестал (801 ед). По отношению к этим препаратам активность трипсина в панзинорме составляет 92% (в расчете на таблетку). Достаточно высокое содержание этого фермента отмечено в дигестале, панкреатине (Югославия) (81% в каждом) и ликреазе (77%).

Самая высокая активность химотрипсина наблюдается в панцитрате (15 ед). По этому показателю к нему приближаются панзинорм (84%) во-бэнзим (81%), дигестал (79%) и фестал (76%).

По суммарной протеолитической активности наиболее активным является панзинорм (449 ед). По сравнению с ним довольно высокую активность этого фермента имеют также фестал (93%), вобэнзим и панцитрат (83% в каждом).

Самая высокая активность амилазы отмечена в вобэнзиме (3520 ед) и панзинорме (3093 ед). Немного уступает им по данному показателю (на 7 — 8%) ликреаза.

При определении активности липазы наибольшее ее содержание наблюдают в ликреазе (4040 ед). Высокая активность липазы по сравнению с ликреазой отмечается еще в таких препаратах, как панцитрат и панзинорм (52 - 67%).

Таким образом, среди изучаемых лекарственных средств по активности ферментов, наиболее высокие показатели имеют 5 препаратов: фестал, вобэнзим, панзинорм, панцитрат и ликреаза. Причем протеолитическая активность наиболее ярко выражена у фестала и вобэнзима (за счет содержания трипсина), а также в панцитрате и панзинорме (за счет высокой активности химотрипсина). Наряду с высоким содержанием протеиназ, вобэнзим и панзинорм обладают также высокой активностью амилазы. Ликреаза обладает самой высокой активностью липазы и достаточно высоким содержанием амилазы.

Разработанный на нашей кафедре препарат панинтестин по активности ферментов не уступает отечественным и многим зарубежным аналогам в ряду исследуемых препаратов. Так, по сравнению с такими распространенными лекарствами, как креон, панкреатин (Югославия) ликреаза и мезим форте активность СПА в панинтестине выше на 4 - 71%.

Активность трипсина в панинтестине практически совпадает с этим показателем в ипентале (489 ед) и выше почти в 2 раза, чем креоне и панкреатине (Россия), а количество химотрипсина у него на 5 - 9% выше, чем в креоне, энзистале и панкреатине (Югославия).

Липолитическая активность панинтестина практически одинакова с креоном и превышает ее на 58% в вобэнзиме.

Такие препараты ферментозаместительной терапии, как мезим форте, панкреатины российского и белорусского производства, а также холен-зим, имеют в своем составе относительно небольшое содержание всех этих пищеварительных ферментов.

Все патентованные препараты энзимотерапии, подвергшиеся биохимическому исследованию и имеющие различные формы выпуска (таблетки, драже, микрогранулы), покрыты защитной кислотоустойчивой оболочкой. В результате эксперимента с соляной кислотой (в условиях, приближенных к желудочным) выяснилось, что не все защитные покрытия обладают достаточно высоким энтеросолюбильным свойством, это напрямую связано с формой выпуска того или иного препарата.

Активность трипсина в препаратах с традиционной формой выпуска (в виде таблеток или драже) после их инкубации в растворе соляной кислоты уменьшается на 36 - 52%, активность химотрипсина - на 28 - 48%, а содержание протеиназ суммарно падает на 21 - 40%. В препаратах с новой энтеросолюбильной оболочкой протеолитическая активность уменьшается незначительно. Активность трипсина в панцитрате (микротаблетки) и креоне (микросферы) под воздействием соляной кислоты уменьшается на 8 — 10%, а в ликреазе снижение этого фермента не происходит. Активность химотрипсина и СПА в этих препаратах после обработки соляной кислотой остаются примерно в тех же пределах, что и в исходной форме (р > 0,05).

Активность амилазы в традиционных препаратах (выпускаемых в виде таблеток и драже) после обработки соляной кислотой инактивируется на 20 - 30%, а в новых лекарственных формах (в виде микротаблеток и микросфер) снижение концентрации этого фермента составляет всего 6 — 9% (р > 0,5). Что же касается липолитической активности, то после обработки соляной кислотой препараты с традиционными формами выпуска теряют активность этого фермента на 48 - 80%, а иногда липаза разрушается практически полностью. У современных препаратов с новой энтеро-солюбильной оболочкой также происходит снижение активности липазы, но разница, по сравнению с исходной формой, меньше, чем у препаратов предыдущей группы.

Таким образом, установлено, что традиционные лекарственные формы в виде таблеток и драже диаметром 3 - 5 мм покрыты оболочкой, которая частично разрушаются под действием желудочного сока, что приводит к инактивации большей части ферментов, содержащихся в них. Современные препараты с формой выпуска в виде микротаблеток и микросфер диаметром не более 2 мм покрыты оболочкой, защитные свойства которой значительно превосходят покрытие указанных препаратов.

В более ранних работах кафедры экспериментальным путем на собаках, установлено, что панинтестин стимулирует деятельность железистого аппарата желудка, а также секрецию пищеварительных органов и двенадцатиперстной кишки за счет биологически активных пептидов, образующихся из слизистой оболочки тонкой кишки и железистой ткани поджелудочной железы в процессе изготовления препарата (Павлюченко И.И., 1987).

Изучение механизмов действия патентованных препаратов энзимотерапии, а также подтверждения данных, установленных в экспериментах на собаках, требовали проведения серии опытов на другом виде животных. Для этих целей были проведены острые опыты на крысах, у которых изучалось действие препаратов энзимотерапии на секреторную функцию желудка, и экскреторную функцию поджелудочной железы.

Крысам на фоне пищевого раздражителя (1 мл бульона «Галина Бланка») внутрибрюшинно вводили экстракт одного из исследуемых препаратов: вобэнзима, дигестала, ликреазы, панкреатина, панинтестина или петид Bj, выделенный из панинтестина методом гель-хроматограии в дозе 6 мкг на 1кг веса. Препараты энзимотерапии брали в равных дозировках по содержанию в них общего количества аминного азота.

Данные, полученные в ходе этих исследований, показали, что полиферментные препараты, вводимые парентерально, обладают способностью разнонаправленно оказывать влияние на секрецию желудка, экскреторную функцию поджелудочной железы и ферментообразование слизистой двенадцатиперстной кишки.

В слизистой оболочке желудка пептид Bi вызывает самое высокое увеличение как протеолитической так и химазной активности пепсина. После введения вышеуказанных препаратов протеолитическая и химазная (молокосвертывающая) активность пепсина также увеличивается. При этом вобэнзим, дигестал, панкреатин и панинтестин повышают протеоли-тическую активность на 20%, а химазную - на 15 - 17%. Под действием ликреазы происходит одинаковое повышение на 14% как химазной, так и протеолитической активности пепсина.

В поджелудочной железе после введения пептида В1} активность суммарных протеиназ, трипсина и химотрипсина увеличивается на 34 — 82% по сравнению с контролем. Препараты ферментозаместительной терапии также повышают протеолитическую активность в этом органе, но сила их действия уступает испытуемому пептиду. СПА под воздействием вобэнзима, дигестала, панкреатина и панинтестина повышается на 17 — 29%, активность трипсина увеличивается на 22 - 36%, а — химотрипсина возрастает на 39 - 56% (см. рис. 5). Ликреаза вызывает незначительное повышение активности протеолитических ферментов всего на 6% (р > 0,05). Это вероятно связано с тем, что в ней высокие концентрации ферментов достигаются за счет более тщательной их очистки и остается меньше сопутствующих пептидов, способных оказывать стимулирующее действие на ферментообразование в пищеварительных органах.

После введения препаратов энзимотерапии активность амилазы значительно возрастает (на 57 - 66%) под воздействием, дигестала, вобэнзима и панинтестина. Панкреатин вызывает увеличение этого фермента на 34%, а введение ликреазы приводит к уменьшению активности амилазы на 27% по сравнению с контрольными пробами. Активность амилазы под воздействием пептида Bi, выделенного из панинтестина увеличивается примерно в 2 раза и составляет 196% по сравнению с контролем.

Активность липазы увеличивается под воздействием ликреазы и вобэнзима на 37 — 52%, а при введении остальных изучаемых препаратов статистически достоверного изменения содержания этого фермента не происходит. Биологически активный пептид Bj вызывает уменьшение активности липазы на 56%.

В двенадцатиперстной кишке также как и в поджелудочной железе самое высокое увеличение активности суммарных протеиназ, трипсина и химотрипсина отмечается после введения пептида Вь

Под воздействием препаратов энзимотерапии: вобэнзима, дигестала, панкреатина и панинтестина СПА возрастает на 15 - 26%. При этом активность трипсина увеличивается на 15 - 20%, а активность химотрипсина возрастает на 37 - 49% по сравнению с контролем. Видимое увеличение активности протеолитических ферментов на 3 — 6% под воздействием ликреазы является статистически не достоверным (р>0,05).

Трипсин, химотрипсин и амилаза в слизистой тонкой кишки не синтезируется, но они адсорбируются на поверхности ворсинок. Поэтому после промывания кишечника они остаются на ворсинках и обнаруживаются в довольно высоких концентрациях в гомогенатах.

В двенадцатиперстной кишке активность амилазы возрастает больше всего (на 83%) под воздействием пептида Bj. Вобэнзим, панкреатин, панинтестин и дигестал повышают ее активность на 20 — 28%, а после введения ликреазы она уменьшается на 17%.

Увеличение активности липазы в двенадцатиперстной кишке происходит значительно (на 30-33%) только под воздействием ликреазы и вобэнзима. Панкреатин, дигестал и панинтестин также как и в поджелудочной железе не оказывают существенного влияния на секрецию этого фермента (р > 0,05). Введение животным пептида Вь уменьшает активность липазы в этом органе примерно в 2 раза.

Таким образом, в экспериментах на крысах, патентованные препараты ферментозаместительной терапии, также как и препарат панинтестин, разработанный на нашей кафедре, при внутрибрюшинном введении обладают способностью оказывать влияние на секрецию в пищеварительных железах, но их сила воздействия значительно уступает пептиду, выделенному из панинтестина и исследуемого в тех же условиях.

На наш взгляд все препараты ферментозаместительной терапии, применяемые в гастроэнтерологии, одновременно содержат ферменты и биологически активные пептиды, от действия которых зависит лечебный эффект. Ферменты, поступающие с препаратом (пепсин, трипсин, химот-рипсин, амилаза, липаза и др.), сразу же включаются в гидролиз пищевых веществ, а биологически активные пептиды оказывают свое регулирующее гормоноподобное действие на биосинтез пищеварительных ферментов, которое чаще является стимулирующим.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хвостова, Татьяна Станиславовна, Ростов-на-Дону

1. Амиров Н.Ш., Антонов Д.В. К вопросу об агрессивности желудочного сока // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1981. - № 3. — С. 300.

2. Антонов В.К. Химия протеолиза. М.: Наука, 1983. - 367 с.

3. Бабкин Б.П. Секреторный механизм пищеварительных желез. Л.: Медгиз, 1960. - 778 с.

4. Багненко С.Ф., Курыкин А.А., Рухляда Н.В., Смирнов А.Д. Хронический панкреатит: руководство для врачей. СПб: Питер, 2000. — 416 с.

5. Балтова С., Попов К., Кынчев В. О полиморфизме а-амилазы // Судеб.-мед. экспертиза. 1990. - Т. 33, № 3. - С. 18-19.

6. Балыпе А.Б., Бахматова И.В., Чюрмис Т.К. а- амилаза морфологических вариантов и их каталитические свойства. 5-й всесоюз. биохим. съезд: Тезисы стендовых сообщ. М., 1986. - Т. 2. - С. 25.

7. Барсукова Т.А., Фишзон-Рысс Ю.И. Заболевания желудка // Диагностика заболеваний органов пищеварения. Л., 1976. - С. 28-45.

8. Баярмаа Н., Охлобыстин А.В., Ивашкин В.Т. Новые возможности ферментной терапии хронического панкреатита // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2000. - Т. 10, № 2. - С. 54-58.

9. Белоусов А.С. Дифференциальная диагностика болезней органов пищеварения. М.: Медицина, 1984. — 288 с.

10. Беляев О.А. Оценка влияния желчи и протеиназ на переваривающую способность микробных гидролаз // Химико-фармац. журн. 1989. — № 7. - С.20-22.

11. Богданова Т.Я. Фармакологические свойства липазы микробной: Авто-реф. дис. канд. мед. наук. Смоленск, 1981. - 16с.

12. Брокерхоф X., Дженсен Р. Липолитические ферменты: Пер. с англ. -М., 1978.-247 с.

13. Быков И.М. Действие отечественных препаратов пепсина на секреторную функцию желудка в норме и при патологии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ростов - нД, 1982. - 18 с.

14. Быков И.М. Биохимическая оценка гастроэнтерологических ферментных препаратов и выделенных из них биологически активных пептидов: Автореф. дисс. . д-ра мед. наук. Ростов-нД, 2001. - 45с.

15. Валенкевич JI.H. Современные заместительные ферментные пищеварительные препараты // Сов. мед. 1987. — № 11. — С. 96-98.

16. Валцева Т.А., Гинодман Н.М., Баршевская Т.Н., Гусейнов Ф.Т. О локализации карбоксильной группы активного центра пепсина, ацилирую-щей фрагмент субстрата // Биохимия, 1973. Т. 38, № 3. - С. 435-441.

17. Вафин А.З. Биохимическая характеристика лечебных препаратов натуральных желудочных соков собак, лошадей и крупного рогатого скота // Материалы 16-й научн. конф. физиологов, биохимиков и фармакологов юга РСФСР. Орджоникидзе, 1967. - С. 71-73.

18. Вахитова Э.А., Амирханян Н.М., Степанов В.М. Фосфопептидный фрагмент пепсина свиньи // Биохимия, 1970. Т. 35, № 6. — С. 11641169.

19. Владимиров Т.Е., Лызлова С.Н. Энзимология. JL: Изд-во ЛГУ, 1962. — 256 с.

20. Вороиенкова И. Роль секреторной функции поджелудочной железы и желудка в изменениях общего обмена веществ: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Л., 1968. - 24 с.

21. Гальперин Ю.М., Лазарев П.И. Пищеварение и гомеостаз. — М.: Наука, 1986.-304 с.

22. Геллер Л.И. Желудочная секреция и механизмы ее регуляции у здорового человека.- Л.: Наука, 1975. 132 с.

23. Геллер Л.И. Клиническая физиология поджелудочной железы. Хабаровск, 1977. - 93 с.

24. Гинодман Л.М., Луценко Н.Г. О характере механизма функционирования пепсина // Биохимия, 1972.-Т. 37, № 1.-С. 101-111.

25. Гланц С.А. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. — 459 с.

26. Гребенев А.Л., Мягкова Л.П. Болезни кишечника. М.: Медицина, 1994. - 397 с.

27. Григорьев П.Я., Яковенко Э.П. Диагностика и лечение болезней органов пищеварения. М.: Медицина, 1996. - 515 с.

28. Губергриц О .Я. Хронические болезни поджелудочной железы. — Киев: Здоровья, 1984. 125 с.

29. Дегтярева И.И., Харченко Н.В. Язвенная болезнь (современные аспекты диагностики и лечения). — М.: Здоровье, 1995. 336 с.

30. Дорофеев Г.И., Лещенко Н.М., Ткаченко Б.И. Клиническое значение метода определения гастриксина и пепсина в желудочном соке // Сов. медицина. 1978. - № 2. - С. 26-29.

31. Дыкуль Н.М. Диск-электрофорез дуоденального сока в полиакрила-мидном геле (методы идентификации) // Лаб. дело. 1975. - № 3. - С. 187-189.

32. Завьялова Р.В. Исследование желудочных протеиназ у новорожденных детей // Педиатрия. — 1976. № 6. - С. 34-36.

33. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Западнюк Г.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев, 1983. - 384 с.

34. Зб.Зинченко А.А. Румш Л.Д., Антонов В.К. Активация и ингибирование пепсинового катализа // Биоорганическая химия. 1978. — Т. 4, № 8. — С. 1122-1128.

35. Златкина А.Р. Фармакотерапия хронических заболеваний органов пищеварения. М.: Медицина, 1998. - 288 с.

36. Златкина А.Р., Белоусова Е.А., Никитина Н.В., Силеверстова Т.Р. Современная ферментная терапия Афонического панкреатита // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. — Т. 7, № 5. - 1997.-С. 109-112.

37. Зуфаров К.А., Дворжак М., Петков П., Боголепов Н.Н., Караганов Б.А., Хидоятов В.А. Ультраструктурные основы системной организации органов и тканей. Ташкент, 1983. - 470 с.

38. Ивашкин В.Т. Метаболическая организация функций желудка. — Л.: Наука, 1981.-214 с.

39. Ивашкин В.Т., Минасян Г.А. Лечение хронического панкреатита // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 1996. — Т. 6,№4.-С. 10-17.

40. Ивашкин В.Т., Шешулин А.А. Клиника, диагностика и лечение синдрома мальабсорбции // Клин, медицина. 2000. - Т. 78, № 8. — С. 27-31.

41. Ивашкин В.Т. Состояние и перспективы развития гастроэнтерологии // Рос. журн. Гепатологии, гастроэнтерологии, проктологии 2001. - Т. 1, №6. -С. 3-5.

42. Иезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М. Развитие современных представлений о процессах ассимиляции пищи // Физиол. журн. 1996. - Т. 82, № 3. — С. 5-18.

43. Калинин А.В. Кислотозависимые заболевания верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Медикаментозная коррекция секреторных расстройств // Клинич. перспективы в гастроэнтерологии. — 2001. — № 2.-С. 16-22.

44. Калинин А.В. Нарушение полостного пищеварения и его медикаментозная коррекция // Клин, перспект. в гастроэнтерол., гепатол. — 2001. -№3. С. 21-25.

45. Каретерс Дж. М. Мальабсорбция // Патофиз. органов пищеварения. — СПб: Бином и Невский Диалект, 1997. С. 121-164.

46. Климов ПК., Фокина А.А. Физиология поджелудочной железы. Регуляция внешнесекреторной функции. JL: Наука. - 1987. - 152 с.

47. Клюева Ж.И., Титова JI.C., Патаркина А.А., Бейер Л.В., Варначева Л.Н., Леканцева Г.А. Активность пищеварительных ферментов при заболеваниях с синдромом мальабсорбции наследственного генеза И Вопр. охр. мат. и детства. 1980. - № 5. - С. 21-23.

48. Козловский И.В., Сорокина В.Г., Михайлова В.Н. Протеолитическая активность желудочного сока у больных язвенной болезнью // Терапевт, арх. 1981. - Т. 53, № 2. - С. 27-29.

49. Колодзейская М.В., Пилявская КС. Пептид азы. Киев: Наук. Думка, 1982.-176 с.

50. Коротько Г.Ф. Желудочное пищеварение, его функциональная организация и роль в пищеварительном конвейере. Ташкент: Медицина, 1980.-219 с.

51. Коротько Г.Ф., Абдурахманов А.Х., Лемешкина Г.С. Адсорбция панкреатических ферментов тонкой кишки как один из механизмов сопряжения полостного и мембранного кишечного пищеварения // Физиол. журн. им И.М. Сеченова. 1992. - Т. 78, № 8. - с. 164-170.

52. Коротько Г.Ф., Веприцкая Э.А., Юабова Е. Ю. Значение белков плазмы крови в обеспечении постоянства ее гидролитических свойств // Физиол. журн. им И.М. Сеченова. 1993. - Т. 79, № 9. - с. 72-80.

53. Коротько Г.Ф. Саморегуляция панкреатической секреции // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1994. — Т. 4. - № 3. -С. 41-49.

54. Коротько Г.Ф. Регуляция секреции поджелудочной железы // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. - Т. 9. -№4.-С. 41-49.

55. Корочанская С.П., Сторожук П.Г. К методике определения амилазы // Лаб. дело. 1974. - № 5. - С. 274.

56. Кудрин А.Н., Беленький Е.Е., Князев Е.Н., Смирнова Л.М. Краткий справочник по фармакотерапии. Ташкент: Медицина, 1978. - 410 с.

57. Кузин М.И., Данилов М.В., Благовидов Д.Ф. Хронический панкреатит. М.: Медицина, 1985. - 368 с.

58. Кушак Р.И. Пищеварительно-транспортная система энтероцитов. — Рига, 1983. 304 с.

59. Латышева Т.Г. Получение и молокоствораживающие свойства бычьего пепсина. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Одесса, 1975.-21 с.

60. Левицкий А.П. Субстратная специфичность липазы поджелудочной железы. Автореф. дис. канд. мед. наук. Одесса, 1965. 18с.

61. Лейтес Ф.А. Липопротеидная липаза // Успехи современной биологии. 1965. - Т. 59, №2. - С. 226-245.

62. Логинов А.С., Исакова З.С. Лечение больных хроническим панкреатитом // Терапевтический архив. 1984. — № 9. - С. 8-14.

63. Логинов А.С., Парфенов А.И. Болезни кишечника: Руководство для врачей. М.: Медицина, 2000. — 632 с.

64. Маланьина Н.С. Секреторно-выделительная деятельность желудка у детей первой недели жизни и ее изменение под влиянием сальпепсина и пепсикона // Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 1974. - 19 с.

65. Машковский М.Д. Лекарственные средства. — М.: Новая волна, 1998. — Т. 2. 590 с.

66. Мерков A.M., Поляков Л.Е. Санитарная статистика. — М.: Медицина, 1974.-С. 51-92.

67. Минушкин О.Н. Хронический панкреатит // Терапевт, арх. 2001. -№1. - С. 62-65.

68. Морозов К.А., Валенкевич Л.Н., Берташ В.И., Зубковский Ю.Ю. Кли-нико-морфологические состояния при язвенной болезни с локализацией язвы в желудке и двенадцатиперстной кишке. Деп. во ВНИИМИ МЗ СССР. 1979, № 25.С. 32-79.

69. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971. - 414 с.

70. Мухина Ю.Г. Особенности нарушения полостного пищеварения как причина мальабсорбции у детей // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепа-тологии, колопроктологии. 1997. - Т. 7, № 3. - С. 56-60.

71. Мыш В.Г. Секреторная функция желудка и язвенная болезнь. Новосибирск: Наука, 1987. - 176 с.

72. Нестеренко Ю.А., Глабай В.П., Шаповальянц С.Г. Хронический панкреатит. — М.: Мокеевка, 2000. — 181 с.

73. Окороков А.Н. Лечение болезней внутренних органов: Рук. Минск: Вышейшая школа. - 1995. - Т. 1. - С. 436-460.

74. Окулов В.И., Дударь Л.В. Модификация метода Титца для определения липазы в дуоденальном содержимом и моче // Лаб. дело. 1982, № 11.— С. 58.

75. Орехович В.Н., Гинодман Л.М., Локшина Л.А. Склобовская М.В., Соловьева Н.И., Шпикитер В.О. // 5-й Международный биохимический конгр., симпоз. М., 1961. - Т.4. - С. 3.

76. Осадчук М.А., Кашкина Е.И. Болашов В.И. Болезни поджелудочной железы. Саратов, 1999. - 186 с.

77. Охлобыстин А.В. Применение препаратов пищеварительных ферментов в гастроэнтерологии // Клин, перспектива в гастроэнтерологии, ге-патологии. 2001. - № 2. - С. 34-38.

78. Охлобыстин А.В., Баярмаа Н. Ферментные препараты при консервативном лечении хронического панкреатита // Терапевт, арх. 1998. — Т. 70, № 10. - С. 86-88.

79. Охлобыстин А.В., Баярмаа Н. Эффективность препарата "Ликреаза" при хроническом панкреатите // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепато-логии, колопроктологии. 1998. - Т. 8, № 5. - С. 136-137.

80. Павлюченко И.И. Сравнительная биохимическая и физиологическая характеристика ферментных препаратов поджелудочной железы // Авторе ф. дис. . канд. мед. наук. -Ростов-н/Д, 1987. 16 с.

81. Панасюк Е.Н., Скляров А.Я., Скляров Е.Я. Пепсиноген: физиологические и клинические аспекты (использование в гастроэнтерологии). Обзор литературы // Врачеб. дело 1990. - № 10. С. 80-83.

82. Парфенов А.И. Мальабсорбция // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 1999. Т. 9, № 1. — С. 62-66.

83. Паршин А.Н., Калиновский В.П., Горюхина Т.А. Изоформы пепсина желудочного сока здоровых людей и больных // Вопросы мед. хим. — 1968.-Т. 14, №1.- С. 71-74.

84. Пелещук А.П. Мусиенко Л.П. Синдромы нарушенного пищеварения и всасывания // Клин. мед. 1990. № 12. - С. 73-78.

85. Петухов В.А. Препарат "Креон" в лечении хронического постнекротического панкреатита II Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. - Т. 8, № 5. - С. 142.

86. Петухов В.А., Дибиров А.Д. Хронический постнекротический панкреатит (патофизиология, диагностика и лечение) II Пособие для практических врачей. — М., 1999. 27 с.

87. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике. — М., 1969.-С. 206-210.

88. Полак Дж. М., Блум С.Р., Райт Н.А., Батлер А.Г. Физиология и патофизиология желудочно-кишечного тракта. М., 1989. — 349 с.

89. Полтырев С.С., Курцин И.Т. Физиология пищеварения. М.: Высш. Школа, 1980.-256 с.

90. Проскуряков М.Т. Выделение и некоторые свойства химотрипсина свиньи // Прикл. биохимия и микробиология. 1966. - Т. 2, № 2. — С. 206-210.

91. Пятницкий Н.П. Определение пепсина, химозина, уропепсиногена, ге-мопепсиногена, лактопепсиногена и химотрипсиногена // Достижения биологии в сельскоехоз-во.-М., 1965.-С. 158-160.

92. Пятницкий Н.П. О причинах низкой терапевтической активности лечебных препаратов пепсина // Материалы 16-й науч. конф. физиологов юга РСФСР при участии биохимиков и фармакологов. Орджоникидзе, 1967.-С. 317.

93. Пятницкий Н.П. Способ определения количества пепсина: А. с. № 211030, 1968.

94. Пятницкий Н.П., Пятницкая И.Н. Лекарственное средство: Авт. Свид. №263308,1969.

95. Пятницкий Н.П. Новые ферментные препараты пепсина и их применение в лечебных целях // Материалы респ. науч.-практ. конф. врачей гастроэнтерологов. Черновцы, 1970.-С. 121-122.

96. Римарчук Г.В. Особенности современной диагностики и терапии хронического панкреатита // Рос. журн. Гастоэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1995. Т. 5, № 3 (приложение № 1). - С.200.

97. РЛС Энциклопедия лекарств. - М.: РЛС - 2000. - 1520 с.

98. Розин Д.Г. Ферментовыделительная деятельность поджелудочной железы. — Ташкент: Медицина, 1981. 164 с.

99. Ротанова Т.В., Клаус Р., Иванова А.Г. Изучение топографии активного центра панкреатической липазы методом бифункционального обратимого ингибирования борорганическими кислотами // Биоорганическая химия. 1976. Т. 2, № 6. - С. 837-845.

100. Рысс Е.С., Звартау Э.Э. Фармакотерапия язвенной болезни. СПб. -М.: Невский диалект - Изд-во "БИНОМ", 1998. - 253 с.

101. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. — М.: АстраФарм, 2001. 1536 с.

102. Степанов В.М. Протеиназы и протеолиз // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. - Т. 10, № 1. — С. 41-47.

103. Сторожук П.Г., Анашкина Т.И. Экспресс-метод количественного определения активности амилазы слюны, панкреатического сока и диастазы мочи // 2-й Всесоюз. биохим. Съезд: Тез. секционных сообщ. — Ташкент, 1969. Секция 24. - С. 90-91.

104. Сторожук П.Г., Мыкртычан М.М. Способ получения желудочного сока: А. с. № 908358, 1982.

105. Сторожук П.Г. Успехи и проблемы ферментотерапии при патологии органов гастродуоденальной зоны // Некоторые вопр. медицинской и прикл. энзимологии: Научн. тр. Краснодар, 1985. - С. 4-15.

106. Сторожук П.Г. Быков И.М., Павлюченко И.И. Способ получения биологически активного вещества для ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии: А. с. СССР № 1476653,1987.

107. Сторожук П.Г., Быков И.М. К механизму действия препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии и целенаправленности их применения // Кубан. науч. мед. вестник. 1994. - № 24. — С. 137-140.

108. Сторожук П.Г., Быков И.М., Хвостова Т.С., Брещенко Е.Е., Быков М.И. Биохимическая оценка гастроэнтерологических препаратов ферментозаместительной терапии // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2000. - Т. 10, № 5. - С. 72.

109. Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко EJE., Хвостова Т.С., Быков М.И., Плахотнюкова В.В. Новый взгляд на механизмы действия препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии // Аллергология и иммунология. 2001. - Т. 2, № 1. - С. 148-154.

110. Сторожук П.Г., Быков И.М., Хвостова Т.С., Брещенко Е.Е., Быков М.И. Протеолитические свойства и другие биохимические характеристики патентованных препаратов ферментозаместительной терапии // Кубан. науч. мед. вестник. 2001. - № 1(55). - С. 9-11.

111. Сторожук П.Г., Криштопа В.А. Спектрофотометрическое определение суммарной активности протеиназ панкреатического сока // Сб. материалов к научн. конф. молодых ученых Кубани. Краснодар, 1969. -С. 115-116.

112. Танг Дж. Н., Харчук Дж. А., Маркинизин Дж. и др. в кн.: Советско-американский симпозиум по химии и физике белка. - Рига, 1976. — С. 14-15.

113. Тимофеева Н.М. Роль пептидаз в ассимиляции белков: Обзор современных данных // Физиол. журн. 1993. - Т. 79, № 6. - С. 1-18.

114. Тимофеева Н.М. Гидролазы тонкой кишки //Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. - Т. 10, № 1. - С. 41-47.

115. Уголев A.M. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций. Л.: Наука, 1985. - 544 с.

116. Уголев А.М. Мембранный гидролиз и транспорт: новые данные и гипотезы. Л., 1986. - 240 с.

117. Уголев A.M., Иезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М. Энзиматический барьер тонкой кишки // Физиол. журн. 1992. - Т. 78, №1. С. 1-20.

118. Фролькис А.В. Современная фармакотерапия в гастроэнтерологии. — СПб: СпецЛит, 2000. 190 с.

119. Хазанов А.И., Васильев А.П., Спесивцев В.Н., Логинов А.Ф., Долин-ский А.Г., Некрасова Н.Н. Хронический панкреатит, его течение и исходы II Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 1999.-Т. 9,№4.-С. 18-30.

120. Хазанов А.И., Ивлев А.С., Пискунов Г.Г. Осложненные формы хронического панкреатита // Рос. журн. Гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 1994. - Т. 4, № 3. - С. 38-42.

121. Хангалдова Т.Н. Новые отечественные препараты пепсина и их влияние на желудочную секрецию у собак // Автореф. дис. . канд. мед. наук. Краснодар, 1977. - 15 с.

122. Цырепович А.С., Авдеев В.Г. Дипептидазы // Успехи биол. химии. — 1978.-Т. 19.-С. 61-81.

123. Шлыгин Г.К. Парентеральное питание и пищеварительная система // Успехи физиол. наук. 1981. - Т. 12, № 3. - С. 45-61.

124. Шлыгин Г.К. Пепсин: его свойства, секреция и физиологическая роль // Клин. мед. 1985. - Т. 63, № 11. - С.18-26.

125. Шлыгин Г.К., Василевская JLC. Современные взгляды на регуляцию секреции пепсина желудочными железами // Успехи физиол. наук. — 1985.-Т. 16,№3.-С. 3-31.

126. Шубникова Е.А., Коротько Г.Ф. Секреция желез. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1986. - 131 с.

127. Яблоков Е.Г., Петухов В.А., Каралкин А.В., Дибиров А.Д. Лечение хронического постнекротического панкреатита препаратом "Креон" // Анналы хирургии. 1998. - № 4. - С. 45-49.

128. Яковенко А.В. Лечение хронического панкреатита // Практикующий врач. 1998. - № 13. - С. 36-37.

129. Яковенко Э.П Ферментные препараты в клинической практике И Клин, фармакология. 1998. - Т. 7, № 1. - С. 1-5.

130. Янсоне И.Л. Влияние факторов питания на приспособление протео-литических желудочных ферментов к измененной секреции желудка человека // Ферментативная адаптация живого организма. — М.: Колос, 1974.-С. 165-167.

131. Янсоне И.Л. Протеолитическая активность и белковые компоненты желудочного сока. Рига: Зинатна, 1975. - 167 с.

132. Яхонтова О.И. Клиническая оценка современных методов исследования при хроническом дуодените и энтерите // Терапевтический архив. -1980.-№11.-С. 90-93.

133. Adler G., Mullenhoff А., Koop J., Bozkurt Т., Goke В., Beglinger С., Arnold R. Stimulation of pancreatic secretion in man by protease inhibitor // Europ. J. Invest.-1988.- V. 18, № 1.-P. 98-104.

134. Anson M.L. The estimation of pepsin, trypsin and cathepsin with hemoglobin // J. Gen. Physiol. 1938. - V. 22. - P. 79-86.

135. Alpers D. H. Digestion and absorption of carbohydrates and proteins // Physiology of the gastrointestinal tract / Ed. L. R. Johnson. New York, 1987. -V. 40. -P. 1469-1487.

136. Ammann R.W. A clinically based classification system for alcoholic chronic pancreatitis: summary of an international workshop on chronic pancreatitis // Pancreas. -1997. V. 14, № 3. - P. 215-221.

137. Andersen B.N., Scheel J., Rune S.J., Worning H. Exocrine pancreatic function in patients with dyspepsia // Acta hepatogastroenterol. 1982. - V. 29, № l.-P. 35-37.

138. Argent B.E., Case M.R. Pancreatic ducts. In: Johnson L.R., ed. Physyol-ogy of Gastrointestinal Tract. 3 rd. ed. New York: Raven Press. 1994. - P. 1473-1497.

139. Banks P.A. Management of pancreatic pain // Pancreas. 1991. V. 6, №1.-P. 952-959.

140. Baron J.H. Gastric secretion // Mt. Sinai. J. Med. 2000. - V. 1. - P. 3236.

141. Binek J. Conservative medical treatment of chronic pancreatitis // Schweis. Rundsch. Med. Prax. 1998. - V. 88, № 20. - P. 678-682.

142. Borgstrom B. Fat Digestion and adsorption //Biomembranes / Ed. D.H. Smith. L.; N.Y.: Plenum Press, 1974. - 4B. - P. 556-620.

143. Bradley E.L. Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis // Amer. J. Surg. 1982. - V. 144, № 3. - P. 313-317.

144. Braga M., Cristallo M., De Franchis R. et al. Correction of malnutrion and maldigistion with enzyme supplementation in patients with surgical suppression of exocrine pancreatic function // Surg. Gynec. Obstet. 1988. V. 167, Dec. - № 6. - P. 485-492.

145. Brannon P.M. Adaptation on the exocrine pancreas to diet // Annu. Rev. Nutr. 1990.-№ 10. -P. 85-105.

146. Brown A., Hughes M., Tenner S., Banks P. Doses pancreatic enzyme supplementation reduce pain in patients with chronic pancreatitis: a metaanalysis // Amer. J. Gastroenterol. 1997. - V. 92, № 11. - P. 2032-2035.

147. Buchs S. Zum Wirkungsmechanismus der Pepsine im Magen // Med. Lab. 1974. - Bd. 27, № 10. - S. 235-241.

148. Case M.R. Pancreatic Exocrine Secretion: Mechanism and Control // The Pancreas / Ed. H. G. Beger et al. Blackwell Science. - 1998. - V. 1. - P. 63-100.

149. Cassidy C.S., Lin J., Frey P.A. A new concept for the mechanism of action of chymotrypsin: the role of the low-barrier hydrogen bond // Biochemistry. 1997. - V. 36, № 15. - P. 4576- 4584.

150. Chiang L., Sanchez-Chiang L., Mills F.N., Tang J. Purification and properties of parcine gastricsin // J. Biol. Chem. 1967. - V. 242. - P. 30913098.

151. Clement J. Intestinal absorbtion of triglycerol // Rep. Nutr. Develop. -1980.-V. 20.-P. 1285-1307.

152. Danielsen E.M., Cowell G.M., Noren O., Sjostrom H. Biosynthesis of mi-crovillar proteins // Biochem. J. 1984. - V. 221. - P. 1-14.

153. DiMagno E.P. Pancreatic enzymes in Health and Disease. — Berlin, 1991. -P. 1-10.

154. DiMagno E.P. Future aspects of enzyme replacement therapy // Lankisch (Ed.) Pancreatic enzymes in health and disease. — Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, 1991. P. 209-214.

155. DiMagno E.P. Patterns of human exocrine pancreatic secretion and fate of human pancreatic enzymes during aboral transit // Lankisch (Ed) Pacreatic enzymes in health and disease. — Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, 1991. -P. 1-10.

156. DiMagno E.P. Toward understanding (and management) of painful chronic pancreatitis // Gastroenterol. 1999. - V. 116, № 5. - P. 1252-1257.

157. Ebbekoj N. Pancreatic tissue fluid pressure and pain in chronic pancreatitis // Dan. Med. Bull. 1990. - V. 39, № 2. - P. 128-133.

158. Ebert E.C. Maldigestion and malabsorption // Dis Mon. 2001. - V. 47, №2.-P. 49-68.

159. Erickson R. H., Kim Y.S. Digestion and absorption of dietary protein // Ann. Rev. Med. 1990. - V. 41, № 41. - P. 133-139.

160. Farkas G., Takacs Т., Baradnay G., Szasz Z. Effect of pancreatin replacement on pancreatic function in the postoperative period afte pancreatic surgery // Orv. Hetil. 1999. - Dec 5. - V. 140, № 49. - P. 2751-2754.

161. Figarello C., Clemente F., Guy O. On zymogens of human pancreatic juice // Febbs Letters. 1969. - V. 3, № 5. - P. 351-354.

162. Folsch U.R. Feedback regulation of pancreatic exocrine in animal and man // Europ. J. Clin. Ivest. 1990. - V. 20, № 20. - P. 40-44.

163. Foltmann В., Pedersen V. B. In: Advances in experimental Medicine and biologi / Ed. J. Tang. New York. - 1977. - V. 95. - P. 3-22.

164. Gardner M.L. Gastrointestinal absorption of intact protein // Ann. Rev. Nutr. 1988. V. 8. - P. 329-350.

165. Gorelick F.S., Jamieson J.D. Structure-Function Relationship of the Pancreas // Physiology of the Gastrointestinal Tract. 2th ed. - New York: Raven Press, 1987. - V. 2. - P. 1089-1108.

166. Gray G. Carbohydrate absorption and malabsortion I I Physiology of the gastrointestinal tract / Ed. by L.R. Johnson. — New York: Raven Press. — 1981.-P. 1063-1072.

167. Gullo L., Priori P., Costa P.L., Mattioli G., Labo G. Action secretin on pancreatic enzyme secretion in man. Studies on pure pancreatic juice // Gut.- 1984. V. 25, № 8. - P. 867-873.

168. Gulzow M. Erkrankungen des exokrinen Pankreas // Fischer Verlag. — Jena. 1975.-294 s.

169. Guy O., Lombardo D., Bartelt D.C., Amic J., Figarello C. The two human tiypsinogens: purfication, molecular properties and N-terminal sequences // Biochemistry. 1978. - V. 17. - P. 1669-1675.

170. Halgreen H., Thorsgaard-Pedersen N. Symptomatic effect of pancreatic епгуте therapy in patients with chronic pancreatitis // Scand. J. Gastroenterol. 1986. - V. 21. - P. 104-108.

171. Haschen R.J. Enzymodiagnostik // Jena: Fischer, 1981. 240 s.

172. Hirschowitz B.I. Pepsinogen // Postgrad, med. J. 1984. - V. 60, № 79.- P. 743-750.

173. Hirschowitz B.I. Gastric secretion of acid and pepsin in patients with esophageal stricture and appropriate controls // Dig. Dis. Sci. 1996. - V.41, № 11.-P. 2115-2122.

174. Hirst B.H. Dietary regulation of intestinal carries // Proc. Nutr. Soc. -1993. -V. 30. P. 1667-1678.

175. Isaksson G., Ihse J. Pain reduction by an oral pancreatic enzyme prepare-tion in chronic pancreatitis // Dig. Dis. Sci. 1983. - V. 28, № 2. - P. 97102.

176. Jamieson J.D., Palade G.E. Synthesis, intracellular transport and discharge of secretory proteins in stimulated pancreatic exocrine cells // J. Cell Biol. 1971. V. 50. - P. 135-158.

177. Jonhson R. Physiology of gastrointestinal tract. New York: Raven Press, 1987.-368 p.

178. Kashima K. Diagnosis and treatment of chronic pancreatitis // Nippon Naika Gakkai Zasshi. 1997. - V.l 0, № 3. - P. 406-410.

179. Khan A.R., Chernaia M.M., Tarasova H.I., James M.N. Crystallographic studies of an activation intermediate of human gastricsin // Adv. Exp. Med. Biol. 1998. - V. 436. - P. 265-270.

180. Kraut Joseph. Serine proteases: Structure and mechanism catalysis // Annu. Rev. Biochem. V. 46. Plato Alto Calif - 1977. - P. 331-358.

181. Lamberts R. Introduction to histological studies of gastric secretion // Microsc. Res. Tech. 2000. - V. 48, № 5. - P. 239-240.

182. Lanas A.L., Anderson J.W., Uemura N., Hirschowitz B.I. Effects of cholinergic, histaminergic, and peptidergic stimulation on pepsinogen secretion by isolated human peptic cells // Scand. J. Gastroenterol. 1994. - V. 29, № 8.-P. 678-683.

183. Lankisch P.G. Conservative therapy of chronic pancreatitis // Med. Welt. 1998.-№39.-P. 453-456.

184. Lankisch P.G. Ensyme treatment of exocrine pancreatic insufficiency in chronic pancreatitis // Digestion. 1993. - V. 54, Suppl. 2. - P. 21-29.

185. Lankisch P.G. Pancreatic disease towards the year 2000 // Gut. 1999. -V. 45, №4.-P. 630.

186. Lankisch P.G., Banks P.A. Pancreatitis // Springer-Verlag: Berlin, Heidelberg. 1998. - P. 377.199. (Lehninger A.L.) Ленинджер А. Основы биохимии. Пер. с англ. М.: Мир, 1985.-Т. 3.-320 с.

187. Lindberg Т., Noren О., Sjostrom Н. Peptidases in the intestinal mucosa // Peptide transport in protein nutrition / Ed. D. M. Matthews, Y.W. Payne. -Amsterdam ect: ASP, 1975. P.268-282.

188. Lozano P., De Diego Т., Iborra J.L. Dynamic structure/function relationships in the alpha-chymotrypsin deactivation process by heat and pH // Eur, J. Biochem. 1997. - V. 248, № 1. - P. 80-85.

189. Maiwald L. Funktionelle Bedeutung der gastralen Proteolyse // Med. Klin. 1979. -Bd. 74, № 43. - S. 1569-1574.

190. Mattnews D.M. Mechanismis of peptide transport // Dipeptides as new substrates in nutrition therapy / Eds S. A. Adibi, W. Fekl, P. Furst, M. O'ehmke. London, 1987. P. 6-53.

191. Mossner J. Palliation of pain in chronic pancreatitis. Use of enzymes // Surg Clin North Amer. 1999. - V. 79, № 4. - P. 861-872.

192. Neutra M., Fostner J. Gastrointestinal Mucus: Synthesis, Secretion and function. In: Physiology of The Gastrointestinal Tract. Raven Press, 1996. -V. l.-P. 975-1011.

193. Okazaki K., Yamonoto Y. Pressure of papillary zone and pancreatic main duct in patients with chronic pancreatitis in the early state // Scand. J. Gastroenterol. 1988. - V. 23. - P. 501-506.

194. Opekun A.R., Sutton F. M., Graham D.Y. Lack of dose-response with Pancrease MT for the treatment of exocrine pancreatic insufficiency in aduts // Aliment. Pharmacol. Then 1997, Oct. - V. 11, № 5. - P. 981 - 986.

195. Polgar L., Halaz P. Current problems in mechanistic studies of serine and cysteine proteinases // Biochem. J. 1983. - V. 207. - P. 1-10.

196. Prout W. On the nature of the acid and saline nature, usually existing in the stomachs of animals // Phylos. Trans. 1824. - V. l.-P. 45-49.

197. Reber P., Buchler M. Management of pain in chronic pancreatitis. In: V. Farthing, J. Misiewiez. (eds). Evidence-based Clinical Gastroenterology. John Libbey Eurotexst -1997. P.l 126-1134.

198. Rick W. Klinisch-chemische Untersuchung des Pankreas // Handbuch in-nerer Medizin / Ed. Schwiegk. 1976. - Bd. 3, T. 6. - S. 323-346.

199. Roberts I.M. Enzyme therapy for malabsortion in exocrine pancreatic insufficiency // Pancreas. 1989. - V. 4. - P. 496-503.

200. Roberts N.B., Peek K., Keen J.N., Taylor W.H. Five human gastric aspar-tic proteinases: N-terminal amino acid sequences and aminoacid composition // Intern. J. Biochem. Cell. Biol. 1995. - V. 27, № 2. - P. 133-137.

201. Samloff I., Liebman W. Cellular localization of group П pepsinogens in human stomach and duodenum by immunofluorescence // Gastroenterol. — 1973.-V. 65.-P. 36-42.

202. Sato Т., Miyashita E. The role of surgical treatment for chronic pancreatitis // Ann. Surg. 1986. - V. 203, № 3. - P. 266-271.

203. Schulz J., Stolze H.H. The exocrine pancreas: the role of secretagogues, cyclic nucleotides, and calcium in enzyme secretion // Annu. Rev. Physiol. -1980.-V. 42.-P. 127-156.

204. Scratshered T. Pancreatic function tests: the physiological beckground // Gut. 1975. - V. 16. - P. 648-653.

205. Seijffers M.J., Segal H.L., Miller L.L. Separation of pepsin I, pepsin II A, pepsin П B, and pepsin in from human gastric mucosa // Amer. J. Physiol. — 1963.-V. 205.-P. 1106-1112.

206. Semb G., Myren F., Hersey S. Lack of interaction between acid secretion and pepsinogen secretion in isolated gastric glands // Amer. J. Physiol. -1986.-V. 245.-P. 775.

207. Sleisenger M.H., Fordtran J.S. Gastrointestinal disease. London-New-York-Toronto. 1978. - P. 744.

208. Snook J.T. Protein digestoin // World Rev. Nutr. Diet. 1973. - V. 18. -P. 161-174.

209. Spiro H.M. Clinical gastroenterology. — New York etc.: Macmillan, 1994. -1290 p.

210. Suzuki A., Mizumoto A., Rerknimutr R. et al. Effect of bacterial or porcine lipase with low- or high-fat diets on nutrient absorbtion in pancreatic-insufficitnt dogs // Gastroenterology. 1999, Feb. - V. 116, № 2. - P. 431437.

211. Taylor W.H. Studies of gastric proteolysis (2) // Biochem. 1959. - V. 71.-P. 373-383.

212. Taylor W.H. Biochemistry of pepsins // Alimentary canal (Handbook of Physiology) / Ed.Code C.F., Amer. Physiologi Society. 1968. - V. 5. - P. 2567 - 2587.

213. Ventrucci М., Gullo L., Costa P.L. et al. Relation between pancreatic lipase and steatorrhoea in pancreatic disease // Ital. J. Gastroenterol. 1980. -V. 12.-P. 76-78.

214. Waterman F., Schwann N. A study of the relationship between serum group I pepsinogen levels and gastric acid secretion // Gastroenterol. — 1969. -V. 1196.-P. 1975-1978.

215. Watson H.C., Shotton D.M., Cox J.M., Muirhead H. Elastase structure //Nature 1970. - V. 225. - P. 806-811.

216. Weinstein W., Lechago J., Samloff I., Bowes K. Pepsinogens in human gastric cardiac and esophageal glands // Clin. Res. 1977. - V. 25. - P. 690692.

217. Wojdermann M., Olsen O., Larsen S., Sternby В., Rehfeld J.F. Deficient gastric lipase secretion in pancreatic insufficiency // Scand. J. Gastro-enterol. 1997. - V. 32, № 3. - P. 268-272.

218. СПИСОК ПЕЧАТНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

219. Сторожук П.Г., Быков И.М., Хвостова Т.С., Брещенко Е.Е., Быков М.И. Биохимическая оценка гастроэнтерологических препаратов ферментозаместительной терапии // Там же. С. 72.

220. Сторожук П.Г., Быков И.М., Брещенко Е.Е., Хвостова Т.С., Быков М.И., Плахотнюкова В.В. Новый взгляд на механизмы действия препаратов ферментозаместительной терапии в настроэнтерологии // Аллергология и иммунология.-2001.- Т.2, №1.- С. 148-154.

221. Сторожук П.Г., Быков И.М., Хвостова Т.С., Брещенко Е.Е., Быков М.И. Протеолитические свойства и другие биохимические характеристики патентованных препаратов ферментозаместительной терапии // Кубан. науч. мед. веста. 2001. - № 1 (55). - С. 9-11.

222. Сторожук П.Г., Оноприев А.В., Быков И.М., Быков М.И., Брещенко Е.Е., Хвостова Т.С. Выделение пептидов из ульцерозной ткани желудка и исследование их биологической активности // Intern. J. on Immunore-habilitation. 2002. - Т. 4, № 1. - С. 28-32.

Информация о работе

Хвостова, Татьяна Станиславовна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2003
ВАК 03.00.04

Диссертация

Сравнительная биохимическая характеристика патентованных препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Сравнительная биохимическая характеристика патентованных препаратов ферментозаместительной терапии в гастроэнтерологии - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы