Совершенствование селекционного процесса плодовых и ягодных растений на основе цитологических методов и культуры изолированных тканей

Расторгуев, Сергей Леонидович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Совершенствование селекционного процесса плодовых и ягодных растений на основе цитологических методов и культуры изолированных тканей
ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование селекционного процесса плодовых и ягодных растений на основе цитологических методов и культуры изолированных тканей"

На правах рукописи

У У

Расторгуев Сергей Леонидович

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СЕЛЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА ПЛОДОВЫХ И ЯГОДНЫХ РАСТЕНИЙ НА ОСНОВЕ ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ И КУЛЬТУРЫ ИЗОЛИРОВАННЫХ ТКАНЕЙ

Специальность 06 01 05 - селекция и семеноводство

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

Мичуринск-наукоград РФ 2008

003172279

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийской научно-исследовательский институт генетики и селекции плодовых растений им И В Мичурина» Россельхо-закадемии и ФГОУ ВПО «Мичуринский государственный аграрный университет»

Научный консультант:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор, академик РАСХН Савельев Николай Иванович

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Деменко Василий Иванович;

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Палфитов Виктор Федорович;

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Сорокопудов Владимир Николаевич

Ведущая организация

ГНУ «Всероссийский НИИ садоводства им И В Мичурина»

Защита диссертации состоит 4 июля 2008 года в 13 30 на заседании диссертационного совета Д 220 041 01 при Мичуринском государственном аграрном университете по адресу 393760, Тамбовская область, Мичуринск, ул Интернациональная, 101

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МичГАУ Автореферат разослан /Р _2008г

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 220 041 01

кандидат сельскохозяйственных наук (¿1/ Соломатин Н М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Интенсификация садоводства, направленная на увеличение производства высококачественных плодов и ягод, предъявляет высокие требования к сортовому составу Наблюдаемое в последнее время изменение климата и ухудшение экологической обстановки указывает на необходимость совершенствования сортимента Важная роль в этом, а следовательно, в повышении продуктивности и экономической эффективности плодовых насаждений отводится селекционному улучшению сортов Попытки улучшить сортимент на основе внутривидовой гибридизации не всегда приводят к желаемым результатам

В этой связи возрастает роль отдаленной гибридизации Метод отдаленных скрещиваний позволяет объединить в одном организме наследственные факторы разных видов и родов и на базе этого конструировать новые генотипы с хозяйственно-ценными признаками, более полно удовлетворяющие запросы садоводства

Одним из ограничивающих факторов при использовании отдаленной гибридизации являются несовместимость скрещиваемых компонентов, полная или приближающаяся к таковой стерильность гибридных растений, что обычно наблюдается при инконгруэнтных скрещиваниях Различная степень бесплодия создает трудности использования аллополиплоидов в селекционном процессе Выяснение причин стерильности отдаленных гибридов может быть осуществлено посредством цитологических методов

Цитологическая оценка нарушений при формировании женской генеративной сферы и анализ прогамной фазы оплодотворения, связанных с функцией размножения растений, позволяет выявить степень стерильности конкретных форм и на основании этого более обосновано подойти к использованию их в селекции, а также наметить пути преодоления этого нежелательного явления Вместе с тем наши знания по изучению этих вопросов у отдаленных гибридов плодовых культур весьма ограничены, что свидетельствует об актуальности проведения исследований в этом направлении для решения прикладных и методических проблем отдаленной гибридизации

С другой стороны, ускорению селекционного процесса и повышению его эффективности может способствовать применение в селекции плодовых и ягодных культур (сливы, яблони, земляники, малины) высокотехнологических приемов, базирующихся на культивировании в системе in vitro тканей и органов растений Важнейшими методами клеточной инженерии в получении нового исходного материала являются эмбриокультура, индукция сомаклональных вариантов, тканевая селекция на устойчивость к стрессорам, клональное микроразмножение и др

Принимая во внимание несомненную перспективность практического использования клеточных технологий в селекционном процессе, возникает объективная необходимость в разработке новых, более эффективных приемов культивирования и надежного получения растений - регенерантов из эксплантов различного происхождения Решение этих задач позволит расширить границы

применения методов культуры изолированных соматических тканей в создании генетического разнообразия и ценных для селекции исходных форм плодовых и ягодных растений

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в разработке методов цитологического анализа и приемов культивирования изолированных тканей и органов в решении проблемы повышения эффективности отдаленной гибридизации и совершенствования селекционного процесса плодовых и ягодных культур

Задачи исследований

- определить уровень плоидности гибридного потомства при инконгру-энтных скрещиваниях как косвенного показателя степени плодовитости,

- провести сравнительный анализ развития женской генеративной сферы аллополиплоидов разного уровня плоидности для выяснения возможности использования в селекции,

- исследовать прогамную фазу оплодотворения при интрогрессивной гибридизации аллополиплоидов,

- усовершенствовать метод эмбриокультуры для повышения эффективности селекционного процесса плодовых растений,

- изучить вопросы индукции и культивирования каллусных культур, а также показать анатомические, ультраструктурные и цитогенетические особенности клеток каллуса,

- разработать и усовершенствовать приемы регенерации некоторых плодовых растений из изолированных тканевых культур (каллусов, листовых экс-плантов),

- подобрать составы питательных сред и условия культивирования для повышения морфогенетического потенциала культуры ткани,

- провести тиражирование и укоренение растений - регенерантов, полученных в системе in vitro и усовершенствовать отдельные приемы технологии ускоренного размножения некоторых ягодных культур,

- выявить возможность изменчивости регенерантов и разработать методические вопросы тканевой селекции на устойчивость к солевому стрессу у ягодных растений

Научная новизна исследований. Результаты исследований позволили расширить знания по биологии цветения и размножения отдаленных гибридов рода Prunus Mill Выявлена степень стерильности женской генеративной сферы в связи с уровнем плоидности отдаленных гибридов сливы Установлены сроки формирования зародышевых мешков, что дает возможность определить оптимальный период опыления Проведена классификация основных структурных изменений в строении и развитии женской генеративной сферы разнохромо-сомных гибридов Методом люминесцентной микроскопии выявлена степень совместимости конкретных форм при интрогрессивной гибридизации Показана целесообразность использования метода культуры зародышей для преодоления в разной степени выраженного бесплодия и повышения выхода сеянцев отдаленных гибридов сливы Предложен оригинальный способ, позволяющий получать от каждого зародыша яблони по несколько идентичных растений Методом электронной микроскопии проведено детальное изучение особенностей

клеток каллуса и установлен тип морфогенеза in vitro (земляника) Выявлена вариабельность кариотипов каллусных клеток на примере малины Разработаны и усовершенствованы приемы регенерации в культуре каллу мых и листовых тканей земляники и малины Показано, что морфогенный эффект цитокинина более активно реализуется при взаимодействии с конкретными регуляторами роста ауксиновой природы Выявлена положительная динамика влияния контрастных температур и увеличения осмотического давления среды на регенерацию и ризогенез побегов Показана эффективность двухэтапного получения побегов путем последовательного изменения условий культивирования эксплан-тов Изучено влияние составов питательных сред, исходных концентраций источников азота, продолжительности периода освещения на коэффициент размножения и затемнения среды на формирование корневой системы регенеран-тов земляники Установлена степень изменчивости регенерантов земляники, полученных в культуре каллусных и листовых тканей, и разработаны методические вопросы, позволяющие провести скрининг каллусных линий малины резистентных к солевому стрессору

Практическая значимость исследований. Впервые получено 52 сеянца F2 отдаленных гибридов, обладающих отдельными ценными признаками разных видов рода Prunus Mill, что способствует расширению генофонда сливы для выполнения селекционных программ Результаты законченных исследований вошли в «Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционной работе с плодовыми» (Мичуринск, 1987), «Методические рекомендации по применению цитологических методов в плодоводстве» (Москва, ВАСХНИЛ, 1988), «Программу и методику селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур» (Орел, 1995), рекомендации по «Индукции морфогенеза и тканевой селекции плодовых и ягодных культур» (Мичуринск, 1996) Разработан способ (А С №1045862), повышающий точность и упрощающий процедуру определения морозоустойчивости растений яблони Заложена маточная плантация суперэлитным посадочным материалом перспективных сортов земляники на площади 0,1га (учхоз «Роща» МичГАУ) Результаты методических разработок используются при проведении работ в научно-исследовательских учреждениях по садоводству, в учебном процессе высших учебных заведений при подготовке специалистов по направлению агрономия, что подтверждено справками о внедрении

Положения, выносимые на защиту

- цитоэмбриологические особенности отдаленных гибридов разного уровня плоидности и прогамной фазы оплодотворения при интрогрессивной гибридизации,

- способы повышения выхода сеянцев с использованием культуры изолированных зародышей,

- приемы регенерации растений в системе m vitro (культура изолированных апексов, каллусов, листовых эксплантов),

- изменчивость регенерантов в культуре каллусов и листовых дисков и тканевая селекция на устойчивость к засолению,

- модель использования методов культуры тканей и органов для целей селекции

Апробация работы. Основные положения и результаты работы апробированы на Всесоюзных, Всероссийских и Международных научно- практических конференциях и совещаниях в Москве (1981, 1987, 1990, 1995, 2002,2004, 2004), Мичуринске (1982, 1984, 1985, 1996, 2003, 2007), Минске (1981, 1995), Риге (1981), Мелитополе (1985), Кишиневе (1986), Новосибирске (1988), Ялте (1992), Пущино (1993), Пензе (2000), Белгороде (2000), Новочеркасске (2005), представлены на V и VI съездах ВОГИС (1987, 1992), XVIII и XX Мичуринских чтениях (1998,2000)

Работа была поддержана ГНТП «Приоритетные направления генетики» (1995)

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 55 научных работах, в том числе 8 статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 4 методические рекомендации, 1 авторское свидетельство на изобретение

Объём и структура диссертации. Работа состоит из введения, семи глав, выводов, рекомендаций для практической селекции, списка литературы Диссертация изложена на 335 страницах машинописного текста, содержит 39 таблиц, 28 рисунков Список используемой литературы включает 588 источников, из них 232 зарубежных автора

Некоторые разделы исследований были выполнены совместно с Шелабо-тиным Г П, Никольским Б В., Денисовым В Ф , Тюленевым В М, Нафталие-вым П М , Осиповой Л В , Туровским И И , Поляковым С А , Верзилиным А.В

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение. Во введение представлено обоснование актуальности работы, приведены основные направления решения научной проблемы, а также научная новизна и практическая значимость полученных результатов исследований.

Глава 1

Перспективы использования цитологических методов и культуры изолированных клеток, тканей и органов в селекционной практике

В главе представлен обзор литературы о значении отдаленной гибридизации, цитологических исследований и методов культуры изолированных тканей и органов в решении ряда проблем повышения эффективности селекционного процесса растений, в том числе плодовых и ягодных культур Применение цитологических методов в исследованиях по отдаленной гибридизации рассмотрено с позиции их роли в выяснении причин нескрещиваемости исходных форм и степени стерильности отдаленных гибридов На основе литературных данных отечественных и зарубежных авторов приведена история развития и становления методов клеточных и тканевых культур, их значение для целей селекции, а также обсуждены возможности различных технологий w vitro для создания генетического разнообразия исходных форм

Глава 2

Объекты и методика проведения исследований

Экспериментальная работа выполнена в период с 1977 по 2006 годы во ВНИИ генетики и селекции плодовых растений им И В Мичурина и в Мичуринском государственном аграрном университете (кафедра биологии растений и селекции плодовых культур)

Объектами исследований служили две группы отдаленных гибридов сливы, полученные доктором сельскохозяйственных наук Г А Курсаковым в ЦГЛ им И В Мичурина

К первой группе изучаемых растений относились отдаленные гибриды, полученные от скрещивания представителя диплоидных видов сорта вишнес-ливы - Опата (Cerasus beesseyi Bail х Prunus americana Mars), 2n(2x)=16 с тет-раплоидным видом - терном {Prunus spinosa L ), 2n(4x)=32 Были изучены гибридные формы 67-66, 312-67, 337-67, 318-67, 345-67, 340-67, 325-67 Вторая группа отдаленных гибридов была представлена сеянцами, которые получены в результате гибридизации сорта Опата с представителями гексаплоидной сливы домашней (Prunus domestica L ), 2n(6x)=48 - сорта Ренклод Альтана, Ренклод тамбовский В этой группе изучали гибриды 405-67, 96-68, 73-66 Контролем служили исходные родительские формы - терн, сорта Опата, Ренклод тамбовский

В качестве исходных эксплантов в экспериментах, в зависимости от поставленных задач, использовали меристематические верхушки апикальных и латеральных почек, листовые ткани (листовые диски, черешки) районированных и перспективных сортов земляники, малины и зародыши вышеперечисленных отдаленных гибридов сливы и сортов яблони

Растениями-донорами для взятия исходных эксплантов служили модельные сорта земляники - Рубиновый кулон, Фейерверк, Урожайная ЦГЛ, Консервная плотная, Холидей, Селекта, Редготлит, Кама, Мариева Махераух, Зефир, Зенга-Зенгана, Рапелла; малины - Карнавал, Комета, Новость Кузьмина, Молинг промис, Кумберленд, яблони - Антоновка обыкновенная, Грушовка московская, Ренет Черненко, Кандиль Горшкова, Пепин шафранный, сеянец 242 от свободного опыления сорта Мекинтош

Для исследований в работе были использованы методы искусственной гибридизации, световой, люминесцентной и электронной микроскопии, цитологии и культуры изолированных тканей и органов

Подсчет числа хромосом проводили по методике в модификации Л А Топильской, С В Лучниковой, Н П Чувашиной (1975) Фертильность и жизнеспособность пыльцы определяли по известным методикам (Рыбин, 1967, Пау-шева, 1970) Для цитоэмбриологических исследований использовали общепринятые цитологические методики (Рыбин, 1967, Паушева, 1970) При исследовании прогамной фазы оплодотворения применяли метод люминесцентной микроскопии согласно методическим рекомендациям, разработанным Y О Kho, J Ваег (1968) и модифицированным А И. Литваком (1978)

В основу методики по культивированию изолированных тканей и органов были положены методические рекомендации Р Г Бутенко (1964), А И Здруй-ковской-Рихтер (1974), Н В Катаевой, Р Г Бутенко (1983)

Извлечение зародышей из гибридных семян сливы проводили на 55-60 день после опыления, а яблони - к началу созревания плодов Условия культивирования для зародышей сливы - круглосуточное освещение, t=25±l°C, яблони - 16-часовой фотопериод, t=25±2°C

Первичные экспланты (меристематические верхушки, листья) изолировали с растений открытого грунта с последующей стерилизацией В дальнейшем, в экспериментах по культуре ткани, использовали экспланты, которые брали с опытных растений, предварительно полученных in vitro с помощью клонально-го микроразмножения

В качестве источников исходных эксплантов для индукции первичного каллуса применяли листья (листовые диски и черешки) Листовые диски имели диаметр 7-8мм, а сегменты листовых черешков длину 5-7мм Для индукции каллусной культуры экспланты инкубировали в темноте при t=25±2°C Каллу-сообразующую способность определяли в процентах, как отношение числа эксплантов, сформировавших каллус к числу введенных (стерильных) в культуру in vitro Анализ анатомических и ультраструктурных особенностей каллусных клеток проводили с помощью электронного микроскопа Тесла БС-500 (увеличение 5-30 тысяч)

В экспериментах по индукции адвентивных побегов размер кусочков каллусной ткани составлял 0,5-0,8см2, листовые диски имели диаметр около 5мм, длина листовых черешков 5-6мм Листовые диски контактировали с питательной средой как абаксиальной (нижней), так и адаксиальной (верхней) стороной Регенерационную способность эксплантов оценивали в процентах (число эксплантов, давших побеги, от общего числа стерильных) Основные условия культивирования при индукции морфогенеза - t=23±2°C, 16 часовой фотопериод, освещенность 2000-3000 люкс

В специальных опытах изучали действие контрастных температур, а также предварительного инкубирования тканевых культур в темноте при различной экспозиции и температуры на стимуляцию морфогенеза и ризогенеза Для изменения осмотического давления питательных сред добавляли повышенные концентрации глюкозы в количестве 60-90г/л При изучении влияния затемнения питательной среды на формирование корневой системы использовали реактив метиленовую синь в концентрации 0,01-0,05% В опытах по тканевой селекции на солеустойчивость в культуральные среды вводили NaCl в концентрациях 0,25; 0,5; 1,0, 1,5% При скрининге стрессоустойчивых каллусных линий использовали приемы мягкой, жесткой и ступенчатой селекции (Долгих, 1993)

В экспериментах с тканевыми культурами применяли агаризованные питательные среды, базовую основу которых составляли стандартные прописи сред - Уайта, Мурасиге-Скуга, Андерсона, Ли-де Фоссарда, Готре (В5), Хелле-ра, дополненные регуляторами роста - 6-БАП, кинетин, ИУК, ИМК, НУК, 2,4-Д, ГК3 в различных концентрациях и сочетаниях

Изучение гибридных форм проводили согласно методическим рекомендациям ВНИИС им. И В Мичурина (1980) Для статистической обработки экспериментальных данных использовали методику, рекомендованную К А Дое-пеховым (1985) Отдельные положения наших исследований по решению конкретных задач изложены в специальных методических рекомендациях (Мичуринск, 1987,1996, Москва, ВАСХНИЛ, 1988; Орел, 1995)

Глава 3

Повышение эффективности отдаленной гибридизации на основе цнтоэмбриологических методов

3.1. Уровень плоидности гибридного потомства при инконгруэнтных скрещиваниях представителей рода Prunus Mill. Цитологические исследования позволили определить уровень плоидности гибридных форм, что дает возможность прогнозировать степень фертильности растений

$ диплоид $ гексаплоид

2п=2х=16

2п=4х=32

2п=6х=48

х=24

б в

Рисунок 1 - Формообразование при инконгруэнтных скрещиваниях сливы а - исходные формы, б - гаметы, в - гибрид (Р))

Проведенный подсчет числа хромосом у аллополиплоидов сливы показал, что отдаленные гибриды сливы, полученные от инкогруэнтного скрещивания 2х х 4х, имели в соматических клетках 2п(3х)=24 хромосомы и являются триплоидами Происхождение аллотриплоидов объясняется слиянием нормаль-

но редуцированных женской гаметы диплоида х=8 с мужской гаметой тетрап-лоида х=16 (рисунок 1) Гибриды этой группы характеризуются несбалансированным геномным составом (х+2х), вследствие чего неполная конъюгация хромосом приводит к формированию массы функционально неполноценных женских гамет и почти полному бесплодию (завязываемость плодов 1,3-1,7%) Гибридные формы сливы (2х х 6х) являются аллотетраплоидами с числом хромосом 2п(4х)=32 В данном случае имело место объединение редуцированных гамет сорта Опата (х=8) и сливы домашней (х=24) Вторая группа гибридных растений характеризуется сбалансированным набором хромосом (х+Зх), генотип которых состоит из четного числа геномов У отдаленных гибридов этой группы скрещивания могут формироваться жизнеспособные женские гаметы ввиду склонности хромосом рода Prunus Mill к автоаутосиндезу Поэтому алло-тетраплоиды обладают пониженной плодовитостью и формируют до 14,1% плодов Следовательно, отмечается связь между уровнем плоидности аллопо-липлоидов и их способностью к плодоношению

3.2 и 3.3. Сравнительная оценка развития женской генеративной сферы аллополиплондов сливы (диплоид х тетраплоид, диплоид х гексап-лонд) и их исходных форм. Степень семенной продуктивности определяется состоянием женской генеративной сферы растений Анализ состояния зародышевых мешков в момент наступления цветения и сроки завершения их формирования позволяют определить наиболее оптимальный период опыления гибридных форм, что способствует повышению эффективности селекционного процесса Заложение и развитие морфологически нормальных семяпочек у отдаленных гибридов происходит однотипно Однако были установлены аномалии в их развитии и строении, которые заключались в следующем одновременное заложение в полости завязи семяпочки и одного или двух пыльников, развитие под общими наружным и внутренним интегументами двух или трех нуцеллусов (последнее нарушение у аллотетраплоида 73-66 достигает примерно 10%) и ряд других У аллотриплоидоз в среднем, примерно у 25% семяпочек, в нуцеллусе отсутствует заложение клеток археспория или происходит их ранняя дегенерация до мейоза. В результате этого семяпочки уже на ранних этапах становятся стерильными

После завершения мейоза материнских клеток макроспор, на этапе формирования тетрад, наблюдается их полная дегенерация, что характерно для изученных аллополиплондов Семяпочки, в которых происходят структурные изменения тетрад макроспор, со временем становятся абортивными и отмирают Гибель всех четырех макроспор тетрады, по нашему мнению, связана с аномалиями в процессе мейоза, степень которых зависит от уровня плоидности гибридных форм

вторичный \ археспорий

а-мкм

Ренклод 73-65 96-68 405

тамбовский

ЗАРОДЫШЕВЫЙ МЕШОК тетрада ЩЩ^х

макроспор

КЛЕТОЧНЫЙ

ДН"

л **

цвете- ^ ния 5 3

1 •1

до -3 цвете- -5 ния -7 ■9 11

Опата Тёрн 67-66 312-67

Рисунок 2 - Сроки прохождения эмбриологических стадий в развитии зародышевых мешков у отдаленных гибридов сливы и родительских форм

В нашем случае, конъюгация хромосом в профазе редукционного деления мейоза у аллотетраплоидов предположительно протекала по типу полного ав-тоаутосиндеза, где из трех геномов хромосом сливы домашней два конъюгиро-вали между собой автосиндетически, а хромосомы генома сорта Опата с одним геномом сливы домашней - аутосиндетически. Такой тип конъюгации хромосом обеспечивал образование большего числа функционально полноценных макроспор и развивающихся из них женских гаметофитов.

При изучении формирования зародышевых мешков был установлен ряд аномалий, которые снижали их жизнеспособность, что в дальнейшем влияло на процесс оплодотворения К наиболее выраженным нарушениям можно отнести отсутствие полярности и нормальной функциональной дифференциации ядер зародышевого мешка, дегенерацию отдельных его элементов и зародышевых мешков в целом на разных стадиях развития и др При этом для триплоидов характерна одновременная дегенерация большинства восьмиядерных зародышевых мешков, а также и семяпочек, в которых они закладывались Это приводило к массовому опадению цветков примерно на 97-99% Кроме того, темпы прохождения эмбриологических стадий в развитии женских гаметофитов ал-лотриплоидов в значительной степени замедлены и отставали от общего развития цветков на дереве (рисунок 2)

Полностью сформированные женские гаметофиты у триплоидов образуются в небольшом количестве (примерно 1-3%) и наблюдаются на 7-8 день цветения Выявленные нарушения являлись причиной стерильности женской генеративной сферы и почти полного отсутствия плодоношения У тетраплоидов нарушения в формировании женской генеративной сферы выражены в меньшей степени и в день массового цветения в семяпочках образовывалось 29,3-37,5% морфологически нормальных зародышевых мешков, что может быть свидетельством частичной стерильности и возможности получения большего количества жизнеспособных семян Таким образом, потенциальная способность ал-лотриплоидов формировать отдельные морфологически нормальные зародышевые мешки указывает на возможность вовлечения их в селекционный процесс, но со значительным увеличением объема гибридизационных работ Алло-тетраплоидные гибриды представляют несомненный интерес с точки зрения использования в дальнейших скрещиваниях и, в частности, для селекции на тетраплоидном уровне Для успешного развития работ по отдаленной гибридизации плодовых растений, а также выяснения причин стерильности аллополип-лоидов, обладающих отдельными ценными признаками и возможностью использования их в селекции, нужна всесторонняя цитологическая характеристика наиболее ценных форм

3.4. и 3.5. Анализ прогамной фазы оплодотворения аллополиплоидов сливы (диплоид х тетраплоид, диплоид х гексаплоид) при интрогрессивной гибридизации. Анализ прогамной фазы показал несовместимость комбинаций скрещивания триплоид х диплоид, тетраплоид х диплоид, которая выражалась в остановке роста мужских гаметофитов по тканям пестика Реакция несовместимости мужского гаметофита со спорофитом пестика проявлялась уже на рыльце и заключалась в замедленном темпе прорастания пыльцы и роста пыльцевых трубок, их извилистости и спиралевидном закручивании, отложении большого числа каплозных пробок, расположенных на небольшом расстоянии друг от друга Остановка роста пыльцевых трубок наблюдалась в средней части столбика на 2 день после опыления триплоидов, а у тетраплоидов на 4 день Это явилось одной из причин отсутствия образования плодов в данных комбинациях скрещивания Укорачивание столбика пестика гибридных форм, как прием

Зх х 2х

(пестик ■'Л укорочен)

Зх х 4х

Зх х (2х + 4х)

1 14 ?

У У 4)

* а А б б

111 У У

ГТ7 л

1 2 3 4 5 6 дни после опыления

4х х 2х

0 у (У (У

4х уко{Ючен)Х ^Х Й Й Й Й

4х х 6х

4х х (2х + 6х)

4х х 4х

;) У У У

гТ?

А?

[Ц

У У

У У 1? ф

У У У

1 2 3 4 5 6 7 дни после опыления

Рисунок 3 - Темпы роста пыльцевых трубок в пестике при интрогрессивных скрещиваниях

преодоления барьера несовместимости, не дал положительного результата Реакция несовместимости компонентов в анализируемых комбинациях скрещивания, вероятно, является следствием проявления гаметофитной системы несовместимости При совместимых комбинациях скрещивания отдаленных гибридов Fi (триплоид х терн, триплоид х Опата + терн, тетраплоид х слива домашняя, тетраплоид х Опата + слива домашняя, тетраплоид х терн) рост и развитие определенного количества пыльцевых трубок в тканях пестика несколько замедлен, но происходит без явно выраженных морфологических нарушений, что приводило к проникновению некоторых из них в семяпочку на 5-7 день с момента опыления (в зависимости от комбинации скрещивания) (рисунок 3) В результате процесса двойного оплодотворения происходило развитие семян и образование плодов, на что указывают данные учета завязываемости плодов Так, при гибридизации аллотриплоида 340-67 с терном завязалось 1,7% плодов, при скрещивании аплотетраплоидов 73-66 с сортом Ренклод Альтана и терном, 9668 с сортом Ренклод тамбовский и терном соответственно 2,2%, 3,8%, 14,1%, 10,2% Следовательно, прогамная фаза является важным этапом в познании причин нарушений полового размножения аллополиплоидов, поскольку от нее зависит успех оплодотворения и дальнейшее формирование семян, что в конечном итоге характеризует результативность отдаленной гибридизации

Глава 4

Метод эмбриокультуры в повышении эффективности селекционного процесса некоторых плодовых растений

4.1. Культура изолированных зародышей в получении сеянцев отдаленных гибридов сливы разной степени стерильности. Полученные экспериментальные данные по цитоэмбриологическим особенностям аллополиплоидов служили основанием для применения культуры изолированных зародышей в решении проблемы преодоления стерильности этих форм

Установлено, что гибридные растения развивались не из всех изолированных зародышей. На формирование проростков оказывала определенное влияние степень выполненности (развития) зародышей перед введением т vitro Применение метода эмбриокультуры позволило вырастить растения даже из слабожизнеспособных зародышей (3 балла) Из зародышей, хорошо развитых и полностью сформированных (5 и 4 балла), были получены сеянцы, имевшие более высокие ростовые показатели (длина главного корня, высота стебля, количество листочков) по сравнению с зародышами менее выполненными (таблица 1) Особенно это хорошо прослеживается в группе скрещиваний аллотет-раплоида 96-68 Наряду с нормальным формированием и развитием проростков наблюдали различные нарушения морфофизиологических процессов развития зародышей Аномалии выражались в отсутствии роста надземной части при наличии хорошо сформированного главного корня и наоборот Иногда проростки хорошо развивались, но затем корень начинал опробковевать, в результате все растение засыхало и др Выявлены нарушения, которые могли быть следствием проявления генетической отдаленности компонентов скрещивания При этом

зародыше формировали проростки, но в дальнейшем из-за несбалансированности числа геномов исходных форм происходило затухание ростовых процессов и их шбепь на всех этапах вь'ращнсапИ/Т При получении Р2 триплоида 340-47 в почвенный субстрат высаживали «микрорастения», имевшие низкие средние показатели развития главный корень - 10,2мм, стебель - 20,0мм и 2,5 листочка В дальнейшем из них были получены полноценные растения Весной в грунт были высажены вполне сформированные сеянцы, что дает преимущества перед посевом стратифицированными семенами Следовательно, представленные экспериментальные данные подтверждают большие возможности и эффективности метода эмбриокультуры для преодоления в разной степени выраженной стерильности отдаленных гибридов В результате разработки методических вопросов применения культуры зародышей получено 52 гибридных растения Нг, которые представляют интерес для селекции (таблица 2) Наибольший выход сеянцев отмечен от гибридной формы 96-68, что можно объяснить формированием большего процента морфологически нормальных женских гаметофитов (37,5%)

Таблица 1 - Влияние состояния (развитие) зародышей межвидовых гибридов

сливы на рост и развитие проростков в культуре in vitro (1981-1982гг)

Количество Полу- Средняя длина Среднее количество листьев, шт

н Происхождение зародышей зародышей чено (высота), мм

« к о. се Ю балл шт проростков, шт главного корня стебля

1 96-68 х Ренклод 5 14 13 48,5 71,5 5,9

2 тамбовский 4 12 10 39,5 53,5 5,4

3 3 8 6 34,0 46,6 4,5

4 96-68 х (Опата + 5 6 6 13,3 59,8 5,7

5 Ренклод тамбовский) 3 1 1 45,0 40,0 4,0

6 96-68 х терн 5 13 13 76,5 57,7 6,8

7 4 3 3 51,6 56,6 6,0

8 3 2 2 45,0 50,0 5,0

9 2 1 - - - -

10 73-66 х Ренклод Альтана 4 1 1 55,0 60,0 4,0

11 73-66 х Опата + Ренклод Альтана 4 1 1 60,0 70,0 5,0

12 73-66 х терн 5 2 2 15,0 75,0 7,0

13 340-67 х терн 5 2 2 10,2 20,0 2,5

Примечание Достоверные различия по коршо - между 1и 4, 2 и 3 (НСР05 =16,01), 1 и

3 (НСР05= 12,72), 1 и 12, 6 и 12, 1 и 13, 6 и 13 (НСР05 = 24,64) вариантами, по стеблю между

4 - 13 (НСР05 = 32,58), 12 и 13 (НСР05 = 39,91), 1 и 13, 6 и 13 (НСР05 =30,13 вариантами, по листьям - между 1 и 6 (НСР05 = 0,83 ), 1 и 13, 6 и 13 (НСР05 = 1,61), 4 и 6 (НСР05 = 1,05), 4 и 13 (НСР05 = 1,74), 12 и 13 (НСР05 =2,13) вариантами

Нарушение сбалансированности систем, контролирующих нормальное развитие отдаленных гибридов, может привести к нарушениям в мейозе при расхождении хромосом в анафазе и образованию гамет с разным уровнем пло-идности Поэтому мы вправе предположить, что при использовании триплои-дов и тетраплоидов в селекционном процессе они могут формировать женские гаметы разных типов

Таблица 2 - Результаты использования метода эмбриокультуры при

получении сеянцев Б; отдаленных гибридов

Происхождение зародышей

Показатель триплоид X тетраплоид X тетраплоид X тетраплоид X

тетраплоид гексаплоид (диплоид + гексаплоид) тетраплоид

Средняя оценка

развития зародышей, балл 5,0 4,2 4,6 4,5

Посеяно зародышей, шт 2 35 8 21

Развились в про- 2 30 8 20

ростки, шт,% 100 85,7 100 95,2

Высажено сеян-

цев в грунт, шт % 1 50 27 77,1 7 87,5 17 81,0

Первая группа гибридов (2п=3х=24) - х=8, 2х=16, Зх=24, вторая (2п=4х=32) - х=8, 2х=16, Зх=24, 4х=32 При гибридизации триплоидов (РО с терном в результате свободного комбинирования возможных типов гамет можно ожидать появление следующих классов потомства (Р2) Зх=24,4х=32, 5х=40 В комбинации скрещивания 4х ^1) х 6х 4х=32, 5х=40, 6х=48, 7х=56 При опылении 4х (Б]) х 4х, могут сформироваться гибридные организмы, имеющие ка-риотип Зх=24, 4х=32, 5х=40, 6х=48 (рисунок 4) Вполне возможно появление анеуплоидных форм (моносомиков, нуллисомиков, трисомиков)

Исследования показали, что сеянцы Р2 от скрещивания 4х (96-68) х 6х, 4х (96-68) х (2х+6х) и 4х х 4х характеризуются низкой степенью подмерзания (0-1 балл) Вместе с тем, в гибридной семье 4х х 4х одиночные растения имели 4-5 баллов подмерзания, несмотря на то (по литературным данным), что терн обладает высокой зимостойкостью и передает этот признак гибридам Очевидно, что при отдаленной гибридизации формируется широкий спектр форм по наследованию определенного признака Установлено, что у некоторых гибридных растений (Р2) отмечали ограниченную силу роста Причем, различия в силе роста между отдельными сеянцами в пределах гибридной семьи наблюдали уже по мере их роста в вазонах с почвой По-нашему мнению, это связано с тем, что одним из компонентов скрещивания при получении Р] и Р2 являлись слаборослые формы - сорт вишнесливы Опата и терн, которые могли передать сеянцам гены, контролирующие этот признак

триплоид^) тетраплоид (герн)

гетраллоцд (Г i) гексаплоид (слива домашняя)

тетраплоид (Fi) тетраплоид (терн)

Рисунок 4 - Формообразование в комбинациях скрещивания с участием

гибридов сливы (Fl) а - исходные формы, б - гаметы, в - гибрид (F2) Х-основное число хромосом рода Prunus Mill равно 8

Так, в гибридных семьях 4х (96-68) х 6х и 4х (96-68) х (2х+6х) выделены формы с естественным сдержанным ростом, высота которых в пятилетнем возрасте не превышала 1 м.

4.2. Влияние физиологически активных веществ на развитие зародышей яблони в культуре in vitro. Исследованиями установлено, что введение в питательную среду экзогенных результатов роста оказывало положитель-

ное влияние на формирование проростков В ряде вариантов опыта наблюдалось развитие из каждого зародыша нескольких побегов (таблица 3)

Таблица 3 - Влияние экзогенных регуляторов роста на развитие изолирован-

ных зародышей (среда Мурасиге-Скуга)

Происхождение зародышей (сорт) Концентрация регуляторов роста, мг/л Число зародышей в опыте, шт Развились в проростки, шт Всего сформировалось побегов, шт Среднее число побегов из зародыша, шт

Ренет Черненко 0 (контроль) 20 2 2 1,0

БАП 1,0 16 10 26 2,6

БАП 2,0 22 12 76 6,3

БАП 4,0 37 11 79 7,2

БАП 1,6 + ГК3 0,5 + ИМК 0,1 20 7 7 1,0

НСР05 3,0

Кандиль Горшкова 0 (контроль) 40 5 5 1,0

БАП 1,0 44 24 48 2,0

БАП 2,0 41 23 64 2,8

БАП 3,0 41 13 89 6,8

БАП 4,0 41 7 20 2,9

БАП 1,6 + ГКз 0,5+ИМК 0,1 40 28 28 1,0

НСР05 1,28

Пепин шафранный 0 (контроль) 40 3 3 1,0

БАП 1,0 36 8 17 2,1

БАП 2,0 30 6 6 1,0

БАП 3,0 36 14 38 2,7

БАП 1,6 + ГК3 0,5 + ИМК 0,1 15 5 5 1,0

НСР05 0,93

Антоновка обыкновенная 0(контроль) 35 4 4 1,0

БАП 1,0 36 8 26 3,3

БАП 2,0 30 5 5 1,0

БАП 3,0 34 6 30 5,0

БАП 1,6 + ГКз 0,5 + ИМК 0,1 30 8 8 1,0

НСР05 1,26

Грушовка московская 0(контроль) 30 0 0 0

БАП 1,0 28 8 21 2,6

БАП 2,0 33 7 16 2,3

БАП 3,0 31 9 28 зд

БАП 1,6 +ГКз 0,5+ИМК 0,1 22 6 6 1,0

НСР<в 1,21

Способность зародышей к пролиферации дополнительных побегов отмечалась при добавлении в питательную среду 6-БАП, что связано с ее физиологическим эффектом снимать япикяпьное доминирование верхушечной почк« в растении Воздействуя на верхушечную почку зародыша, 6-БАП вызывает дифференциацию пазушных почек, их пробуждение и активацию роста в побеги Зародыши по-разному реагировали на присутствие в среде синтетического аналога цитокинина При этом эффект действия зависел от его концентрации, комбинации с другими регуляторами роста, генотипических особенностей Менее интенсивно протекал процесс активации прорастания пазушных почек и развитие побегов у зародышей, культивируемых на других испытанных вариантов сред, а именно при сочетании 6-БАП с ИУК или ИМКи ГК3 Эти варианты были на уровне контроля

Контроль ризогенеза у побегов осуществляли введением в питательную среду ИМК (1,0-5,0мг/л) На этапе укоренения более эффективным оказалось добавление 5,0мг/л ИМК Частота формирования придаточных корней составила 21,7-47,8% Для стимулирования корнеобразования нами изучено влияние на этот процесс контрастных температурных факторов, путем воздействия на побеги, находящиеся на питательной среде ризогенеза с ИМК (1,0мг/л) В результате отмечена определенная тенденция одноразового и двухразового воздействия контрастными температурами на увеличение укореняемости побегов Разработанный прием контроля ризогенеза довольно прост, не требует дорогостоящего оборудования и экономит регуляторы роста группы ауксинов Следовательно, прорастание пазушных почек у зародышей и развитие дополнительных побегов может быть вызвано введением в среду 6-БАП (1,0-4,0мг/л), что способствует тиражированию побегов, увеличению выхода однородных сеянцев и сохранению ценных генотипов Усовершенствованный прием индукции дополнительных побегов представляет несомненный интерес для повышения эффективности селекционного процесса с применением отдаленной гибридизации

Глава 5

Регенерация растений in vitro и применение культуры тканей в селекции земляники

Для целей селекции рекомендуется следующая схема использования тканевых культур

1 Индукция и культивирование каллусной ткани из эксплантов различного происхождения

2 Морфогенез адвентивных побегов из каллуса

3 Регенерация придаточных побегов непосредственно из исходных эксплантов

4 Тиражирование и укоренение побегов-регенерантов в условиях т vitro

5 Перенос пробирочных растений в почвенный субстрат и адаптация к новым условиям произрастания

6 Выращивание растений-регенерантов в открытом грунте, их анализ и отбор ценных в селекционном отношении форм

5.1. Индукция и культивирование каллусной ткани, анатомические и ультраструктурные особенности клеток каллуса. В результате проведенных экспериментов были получены линии каллусных культур на средах с широким диапазоном гормонального состава Установлено, что для индукции каллуса в достаточном количестве и улучшения его морфологических показателей использования сред с 2,4-Д в концентрации (1,0 - 2,0 иг/л) или ее сочетание с ИУК и кинетином (2 1:1) является более эффективным Каллусные клетки очень крупные, с большой вакуолью по середине, ядро и органеллы цитоплазмы расположены вдоль клеточной стенки Среди колонии клеток каллуса отмечали компетентные клетки - инициале меристем Для меристематических клеток каллуса характерно наличие в центре активно увеличенного в размере ядра, фибриллярной структуры ядрышек, мелких вакуолей и электронно-плотной цитоплазмы. В каллусных тканях морфогенез осуществлялся по типу стеблевого (адвентивного) органогенеза

5.2. Морфегенез адвентивных побегов из каллуса. У растений, полученных из каллусных культур, возрастает вероятность появления генетических изменений на уровне качественных и количественных признаков (сомакло-нальная изменчивость), что имеет принципиально важное значение для селекционных исследований с привлечением тканевых технологий. Однако при этом возникает немало трудностей и главная из них - проблема индукции морфогенеза при регенерации Гормональный баланс питательной среды является ключевым фактором, способствующим реализации морфогенетического потенциала тканей к регенерации В качестве индукторов стеблевого органогенеза применяли регуляторы роста цитокининовой и ауксиновой природы в различных концентрациях и сочетаниях Отобраны варианты питательных сред, на которых происходило лучшее развитие побегов Установлено, что наибольшая частота регенерации до 64% характерна для вариантов с включением 5,0 и 10,0мг/л 6-БАП в сочетании с 0,5мг/л ИМК или ИУК (сорта Урожайна ЦГЛ, Фейерверк, Холидей) Менее интенсивно при этом сочетании регуляторов роста протекал процесс регенерации у сорта Рубиновый кулон (частота регенерации менее 5%), но замена ИМК и ИУК на 2,4-Д (0,5мг/л) повышала морфогенетическую способность каллуса до 53,6% Отмечено, что существенное влияние на регенерацию из каллуса оказывала сортовая специфика исходного экспланта при обязательном присутствии в среде 6-БАП

Таблица 4 - Стеблевой органогенез в культуре каллусных тканей 4-5 пассажей (регенерационная среда по прописи Мурасиге-Скуга, в среднем за 1991-1992гг)

Вариант среды с регуляторами роста, мг/л Фейе рверк Урожайная ЦГЛ

% регенерации поб /экспл, шт % регенерации поб /экспл, шт

6-БАП 2,0 +2,4-Д 0,1 47,8 2,9 26,9 2,3

6-БАП 5,0 + ИМК 0,5 57,1 2,3 59,2 2,0

6-БАП 10 +ИУК 0,5 52,0 2,2 35,1 1,5

НСР05 0,82 0,94

Варианты сред с установленным оптимальным составом экзогенных регуляторов роста показали положительные результаты по получению адвентивных побегов из каллуса, возраст которого составлял 140-160 суток (4-5 пассаж") Из приведенных в таблице 4 добавок регуляторов роста наиболее эффективны для стимуляции органогенеза из каллусных тканей, прошедших неоднократное субкультивирование является среда с содержанием 5,0 мг/л 6-БАП и 0,5 мг/л ИМК(10 1)

В процессе исследований были модифицированы стандартные условия культивирования тканей за счет использования предварительного выращивания каллусных культур на регенерационной среде в темноте при экспозиции 3 недели и £=23±2 °С (таблица 5)

Таблица 5 - Реакция каллуса на способность к регенерации при предварительном культивировании в темноте

(среда Мурасиге - Скуга, 6-БАП 5,0мг/л + ИМК 0,5мг/л, в среднем за 1991-1993гг)

Сорт

г=23±2 °С, 16-ч фотопериод (контроль)

% регенерации

поб /экспл, шт

1=23±2 С, темнота 3 недели

% регенерации

поб /экспл, шт

НСР05

поб / экспл

Урожайная ЦГЛ

б0,0±8,9

2,1

80,0±7,3

3,6

0,77

Фейерверк

57,1*9,0

2,3

76,9±7,8

3,9

1,07

Холидей

26,6±8,1

1,8

40,0±8,9

2,5

0,8

Консервная плотная

46,7±9,1

1,4

55,2±9,1

1,9

0,48

Установлена положительная тенденция усиления стеблевого органогенеза при изменении основных параметров светового движения Этот прием является достаточно эффективным, который позволяет повысить частоту регенерации до 80% (сорт Урожайная ЦГЛ), а у трудноразмножаемого генотипа до 40% (сорт Холидей) При двухразовом воздействии контрастных температур морфо-генетический потенциал каллусов увеличивался в 1,8 раза Разработанные методические подходы повышения регенерации в каллусных тканях могут быть использованы для других представителей вида Р апапазза ОисИ с целью повышения эффективности и направленности селекционного процесса земляники 5.3. Регенерация придаточных побегов непосредственно из исходных эксплантов. Установлено, что листовые диски способны регенерировать побеги на средах с различными добавками регуляторов роста, но с разной частотой Было выделены варианты сред, которые обеспечивалибольший процент заложения и развития побегов Физиологическое свойство 6-БАП вызывать заложение почек на листовых дисках более ярко проявлялось при взаимодействии с 2,4 - Д или ИУК в соотношении 20 1 Отмечена зависимость частоты регенерации от соотношения цитокинин ауксин в среде По мере уменьшения разницы в соотношении снижался показатель потенции к регенерации Регенерационная способность зависела от генотипических особенностей сорта Ориентация листовых дисков на поверхности среды (адаксиальной или абаксиапьной стороной) не оказывала существенного влияния на индукцию адвентивных побегов

Световой режим культивирования является важным внешним фактором, который оказывает влияние на процесс регенерации. Изменения стандартных условий культивирования за счет введения этапа предварительного помещения листовых дисков в темноту позволило увеличить регенерацию до 2-х раз (рисунок 5). Среднее число побегов на экспланте в опыте оказалось выше, чем в контроле и достигало 2,5 - 5,7 штук; на отдельных дисках вырастало ¡2-14 побегов.

Следовательно, разработанные приемы по стимуляции адвентивного органогенеза (с учетом влияния генотипа, гормонального состава, физических условий культивирования, ориентации экспланта) позволяет повысить регенера-ционную способность листовых эксплантов.

Регенерация побегов

8(Ь / .............................-у- = : ......;

Фейерверк Урожайная Рубиновый Консервная Холидей ЦГЛ кулон плотная

3 ц

о а

г>

ю о с

□ контроль ■ опыт

Рисунок 5 - Влияние предварительного культивирования листовых дисков в темноте на регенерацию (среда Мурасиге - Скуга)

Примечание: листовые диски сорта Холидей культивировали на среде с 6-БАП (10 мг/л) +ИУК (0,5 мг/л), сортов отечественной селекции - с 6-БАП (10 мг/л) + 2,4-Д (0,5 мг/л)

5.4. Тиражирование и укоренение побегов, полученных в культуре каллусных и листовых тканей. Применяя отработанные приемы, размножения в системе in vitro были получены идентичные копии побегов - регенеран-тов в количестве, необходимом для исследований Коэффициент размножения на среде Мурасиге-Скуга с 6-БАП 1,0мг/л составлял в зависимости от исходного сорта 4,7-8,3 шт В качестве индуктора ризогенеза предпочтительнее использовать ИМК 0,5мг/л Всего было получено 4423 растения из каллусных и листовых тканей сорта Фейерверк - 2048 шт, сорта Урожайная ЦГЛ - 1171 шт, сорта Рубиновый кулон - 727 шт, сорта Консервная плотная - 232 шт, сорта Холидей - 245 шт

Оптимизированы отдельные элементы технологии ускоренного размножения in vitro перспективных сортов земляники (Селекта, Редготлит, Кама, Ма-риева Махераух, Зефир) Так, установлена реакция генотипов на состав компонентов индукционной среды при пролиферации пазушных почек Для этого использовали варианты сред по прописям Мурасиге-Скуга, Vi Мурасиге-Скуга, Андерсона, Ли де Фоссарда, Готре, Хеллера При крупномасштабном производстве посадочного материала вполне пригодна среда Мурасиге-Скуга Способность к развитию дополнительных побегов апексами зависела от концентрации в среде источников азота (таблица 6) Снижение исходной концентрации NH4 NO3 в 2-8 раз не влияло на коэффициент размножения и соответствовало контролю Уменьшение содержания KN03 существенно снижало пролиферацию побегов Полученные данные можно рекомендовать для практической работы

Таблица 6 - Влияние концентрации различных источников азота на рост и

развитие пазушных побегов сорта Мариева Махераух

(среда Мурасиге-Скуга, б-БАП 1 мг/л, 1 пассаж, 2000-2001 гг)_

№ Азотные Количество Длина Количество

опыта соединения, мг/л побегов, шт побегов, см листьев, шт

nh4no3

1650 (контроль) 4,3 3,5 12,2

I 825 4,3 3,2 12,2

412,5 3,9 3,2 12,1

206,25 3,8 3,2 10,3

KN03

1900 (контроль) 5,5 2,8 -

II 950 2,0 2,1 -

475 1,7 1,8 -

237,5 1,3 1,6 -

нср05 1,3 0,8

Примечание 1 опыт - уменьшена концентрация только NH4NO3, 2 опыт - только KNO3

Большое значение для культивируемых верхушек побегов играет продолжительность светового дня При продолжительности фотопериода 16 часов коэффициент размножения выше, чем при 8 и 12-часовом световом дне Проведенное изучение методических вопросов, направленных на повышение показателей развития корневой системы (длина и количество корней), путем затемнения питательной среды ризогенеза нейтральным веществом - металеновой синью показало, что лучшие результаты наблюдались у всех генотипов при ее использовании в концентрации 0,05% (таблица 7)

Таблица 7 - Влияние затемнения среды на процесс развития корневой системы микропобегов некоторых сортов земляники (среда 'Л Мурасиге - Скуга)_

Сорт Вариант опыта НСРо5

контроль Метиленовая синь

0,01% 0,05%

Количество корней, шт Длина, см Количество корней, шт Длина, см Количество корней, шт Длина, см Количество корней Длина

Селекта 1,3 0,8 2,0 0,7 2,3 6,4 0,56 0,25

Редгонт-лит 4,8 5,3 6,4 5,6 7,8 6,7 1,19 0,52

Кама 4,2 4,8 4,2 4,7 6,5 8,0 1,02 0,83

Мариева Махераух 1,6 1,2 2,8 1,2 4,0 2,8 0,97 0,61

У растений, сформированных т viti о, следует адаптировать к росту в полевых условиях как корневую систему, так и надземную часть Эти мероприятия следует проводить в теплицах, что снижает трудоемкость процесса и сокращает сроки получения полноценной рассады, способной к росту in vivo Размещать растения в теплице рекомендуется при схеме 7 х 7см Улучшение качества тумана в теплице можно достичь за счет уменьшения диаметра отверстия распылителя до 0,7мм и повышения давления в системе до 4 атм Эти приемы позволили повысить выход адаптированных растений из теплицы до 85-90%

5.5. Анализ изменчивости растений - регенерантов. Культивирование изолированных соматических групп клеток и регенерация из них целых растений позволяет индуцировать сомаклональную изменчивость, которая основана на спонтанных генетических изменениях, возникающих в выращиваемых in vitro клетках Проведенная нами оценка степени изменений некоторых признаков у растений - регенерантов (количество цветоносов и сформировавшихся ягод на растении) в Ro, Ri, R2 вегетативном поколениях, полученных из листовых дисков сорта Фейерверк и каллусных культур сорта Урожайная ЦГЛ, позволила получить следующие результаты (таблица 8) Контроль - растения, индуцированные из меристематических верхушек указанных сортов и размноженных в системе in vitro

Таблица 8 - Изменчивость в количестве цветоносов и ягод на растениях-регенерантах, полученных в культуре тканей

Вегегаш вное школен ие Год Вариант % растений с цветоносами, шг Количеств ояшдна растении, шг Ксхэффи цишг вариаци %

0 1 2 3 4 5 >5 Кооффици шг вариации (У),%

из листовых дисков сорта Фейерверк

Ио 1993 опыт 132 69,1 4,4 юз 1,5 0 15,4 42 4,6

контроль и 162 603 132 8,8 0 0 32 6,7 29

я. 1994 опыт 0 53,0 25,8 4,6 121 1,5 3,0 203 5,4 5,9

контроль 0 19,1 54,4 17,6 7,4 и 0 5,6 7,0 1,7

1995 опыт 0 42,4 273 10,6 9,1 6,1 43 14,8 5,9 29

контроль 0 19,1 48,5 23,5 7,4 и 0 13,6 7,0 26

Иг 1996 опыт 0 31,8 25,8 21,1 7,6 7,6 6,1 15,4 5,4 23

котроль 0 16,2 48,5 19,1 14,7 13 0 125 6,8 1,1

Среднее за4 года опыт 33 49,1 20,8 93 9,7 42 3,4 163 52 3,9

кошрешь 0,4 17,7 52,9 183 9,6 1,1 0 8,7 6,9 21

из каллуса сорта Урожайная ЦГЛ

1*0 1993 ОПЫТ 3,6 20,0 21,8 182 12,7 127 11,0 202 62 193

котроль 0 16,4 34,5 43,6 5,5 0 0 6,8 6,8 4,0

1994 опыт 3,6 182 21,8 16,4 12,8 143 12,7 282 43 29,4

котроль 0 18,2 343 40,0 73 0 0 113 7,6 3,6

1995 ОПЫТ 3,6 16,4 21,8 25,5 9,1 10,9 127 30,0 23 243

котроль 0 10,9 43,6 292 14,5 1,8 0 27 6,6 43

1*2 1996 ОПЫТ 3,6 10,9 23,6 182 21,8 11,0 10,9 272 3,8 172

контроль 0 10,9 38,2 40,0 9,1 1,8 0 27 6,4 3,8

Средаееза4шда ОПЬП' 3,6 16,8 223 19,6 14,1 123 11,8 26,4 42 '22,6

котроль 0 14,1 37,7 382 9,1 0,9 0 5,9 4,0

У растений, индуцированных из листовых дисков в R0, коэффициенты вариации анализируемых признаков выше, чем в культуре апексов При оценке крайних величин признака количества цветоносов на растении или их полное отсутствие выяснилось, что наибольшее значение этих показателей оказалось у опытных растений Анализ вегетативно размноженных регенерантов (Ri) показал, что коэффициент вариации по этому признаку в опыте, в среднем за два года, имел некоторую тенденцию к увеличению В R2 у опытных и контрольных растений размах изменений по количеству цветоносов находился примерно на одном уровне (15,4% и 12,5% соответственно) Более стабильным в Ri и R2 является признак количества плодов на растении Зз годы изучения варьирование анализируемых признаков у растений индуцированных в культуре листовых дисков составило для количества цветоносов V=16,5%, ягод V=3,9%, у контрольных - V=8,7% и V=2,l% соответственно Варьирование признаков количества цветоносов и ягод у регенерировавших в каллусной культуре растений, было выражено значительно сильнее, чем в культуре меристематических верхушек Причем это наблюдалось у регенерантов всех изученных вегетативных поколениях Так, в Ri (1995г) коэффициент вариации количества цветоносов на растении в опытном варианте был на уровне 30%, а в контрольном -2,7% Аналогичная динамика отмечена в R2 В среднем за 4 года наблюдений вариабельность количества цветоносов у опытных регенерантов составила 26,4% и ягод - 22,6%, а у контрольных растений соответственно 5,9% и 4,0% Довольно низкий коэффициент вариации каждого признака в контроле связан с тем, что меристематические верхушки и индуцированные из них растения, генетически наиболее стабильны и организованы У таких растений - регенерантов варьирование анализируемых признаков в среднем за 4 года было незначительным для количества цветоносов V= 8,7% (сорт Фейерверк) и 5,9% (сорт Урожайная ЦГЛ) и ягод V=2,l% и 4,0% соответственно, что не превышает уровень естественной изменчивости

Следовательно, анализ регенерантов, полученных из каллуса, показал значительную степень изменчивости изученных признаков, которая сохранялась в Ri и R2 в течение 3 лет, что указывает на возможность отбора сомакло-нов В меньшей степени выражено варьирование признаков у растений из листовых дисков

Глава 6

Регенерация растений in vitro и применение культуры тканей в селекции малины

6.1. Клональное .микроразмножение сортов-доноров, источников экс-плантов. Отбор исходных эксплантов с растений, произрастающих in vitro, имеет свои преимущества, т к исключается техническая работа по поверхностной стерилизации материала и растительные ткани не повреждаются Исследователь может проводить эксперименты с тканевыми культурами в течение всего года, независимо от вегетационного периода растений Тип почек не оказывал влияния на характер роста и развития эксплантов in vitro В результате культивирования в пазухах розеток листьев формировались дополнительные почки, из

которых развивались побеги Процесс пролиферации почек и побегов наиболее интенсивно протекал на среде Андерсона, обогащенной 6-БАП в концентрации 1мг/л (таблица 9)

Таблица 9 - Формирование дополнительных побегов в культуре

изолированных апексов (среда Андерсона, 6-БАП 1,0 мг/л)

Сорт Коэффициент размножения побегов, шт

1-й пассаж 2-й пассаж 3-й пассаж 4-й пассаж

Карнавал 4,1 6,1 14,7 26,6

Комета 3,2 5,0 11,4 23,5

Кумберленд 2,3 4,6 7,8 15,2

Новость Кузьмина 2,1 4,2 6,0 10,5

Молинг промис 2,1 4,0 5,5 И,1

Количество развившихся микропобегов зависело от числа проведенных субкультивирований Так, коэффициент размножения сорта Карнавал особенно возрастал в третьем и четвертом пассажах и в среднем достигал 14,7-26,6 побегов При этом наблюдались сортовые различия в способности формировать дополнительные побеги. Добавление 0,5мг/л ИМК в среду Андерсона с уменьшенным в 2 раза количеством минеральных солей и содержанием 20г/л глюкозы, обеспечивал наиболее высокий уровень укореняемости побегов-регенерантов Частота корнеобразования составляла 72-92% и, в основном, зависела от генотипа Анализ данных свидетельствует о важной роли генотипа как наиболее значимого фактора при клональном микроразмножении

6.2. Индукция и культивирование каллусной ткани, цитогенетиче-ские особенности клеток каллуса. Культуральными средами были агаризо-ванные питательные среды по прописи Мурасиге-Скуга или Андерсона Индукция каллуса более успешно осуществлялась в присутствии 2,4-Д оптимальная концентрация, которой составляла 4,0мг/л Уровень каллусообразования у сортов Карнавал, Молинг промис, Новость Кузьмина, Комета составил соответственно - 72%, 84%, 100%, 100% Не установлено влияние на каллусогенез типа исходного экспланта (листовых дисков и черешков) и стандартных составов используемых питательных сред Полученная культура каллусной ткани, в основном, светло-желтого или белого цвета и имела глобулярную средне-плотную консистенцию Однако на среде с добавлением 6,0мг/л 2,4-Д часто формировался каллус с очень плотной структурой и глянцевой поверхностью, что особенно характерно для сорта Молинг промис При анатомическом изучении подобной каллусной ткани отмечали заложение элементов ксилемы или флоэмы Это, видимо, влияло на частоту регенерации побегов этого сорта Индукция каллусообразования зависела от используемых генотипов Для эксплан-тов характерны сортовые различия на присутствие в среде регуляторов роста с ауксиновой активностью или их сочетание с низкими концентрациями цитоки-нина При высоких концентрациях может снижаться уровень образования каллуса (за счет формирования корней) и его морфологические показатели.

Цитологический анализ выявил генетическую вариабельность клеток 4550 суточного каллуса При анализе клеток были обнаружены кариологические

изменения (в норме 2п=14), которые выражались в формировании гаплоидных (п=7), тетраплоидных (4п=28) и анеуплоидных (2п-1=13, 2п+1=15, 2п+2=16) клеток Одной из причин возникновения аномальных кариотипов являлось нарушение нормального процесса митоза под действием различных факторов питательной среды Следовательно, генетическая вариабельность клеток каллуса может привести к получению растений с разным уровнем плоидности, что способствует расширению спектра сомаклональной изменчивости и созданию ценного исходного материала для целей селекции малины Однако дня этого необходимо разработать эффективную систему регенерации растений в каллусной культуре

6.3. Морфогенез в культуре каллусной ткани. Базовой средой в экспериментах служила агаризованная питательная среда по прописи Андерсона, в некоторых вариантах - среда Мурасиге-Скуга Наиболее эффективной для индукции морфогенеза в каллусной ткани являлась среда Андерсона с содержанием регуляторов роста в разных концентрациях и сочетаниях, но с преобладанием препаратов цитокининовой природой над ауксиновой В результате проведенных экспериментов отобраны варианты сред, на которых наблюдалось формирование адвентивных побегов с частотой от 3,3 до 32,3%, и этот процесс зависел от исходного генотипа и присутствующих в среде регуляторов роста Варианты сред, которые обеспечивали наиболее высокий уровень стеблевого организма, представлены в таблице 10

Таблица 10 - Регенерация адвентивных побегов в культуре каллусной ткани (возраст каллуса 100 суток)_

Сорт

Вариант опыта с добавками регуляторов роста, мг/л

% регенерации

Среднее количество побегов на каллусе, шт

6-БАП 5,0 + ИУК 0,5

30,4

1,7

Карнавал

6-БАП 10,0 + ИУК 0,5

32,3

2,7

6-БАП 15,0 +ИУК 0,5

13,3

1,3

6-БАП 5,0 + 2,4-Д 0,5

18,8

1,5

6-БАП 10,0 +2,4-Д 0,5

23,3

1,9

6-БАП 5,0 + ИУК 0,5

20,8

2,0

Комета

6-БАП 10,0 + ИУК 0,5

22,5

1,4

6-БАП 5,0 + 2,4-Д 0,5

13,8

1,3

6-БАП 10,0 +2,4-Д 0,5

16,7

1,4

6-БАП 5,0 + ИУК 0,5

15,4

Новость Кузьмина

1,5

6-БАП 10,0 + ИУК 0,5

15,6

1,6

6-БАП 5,0 +2,4-Д 0,5

18,2

1,7

6-БАП 10,0 +2,4-Д 0,5

20,0

1,5

Молинг промис

6-БАП 5,0 + 2,4-Д 0,5

10,0

1,3

6-БАП 10,0+2,4-Д 0,5

13,3

2,0

Примечание В таблице указаны варианты с частотой регенерации выше 10%

Для всех изученных генотипов отмечен положительный синергический эффект при совместном добавлении в регенерационную среду 5,0 мг/л или

2В

10,0мг/л 6-БАП и 0,5мг/л ИУК (сорта Карнавал, Комета) или 0,5мг/л 2,4-Д (сорта Новость Кузьмина, Молинг промис) при котором увеличивалась способность к дифференциаций почек в культуре недмфференцирспаппых клеток каллуса (таблица 10) Относительно высокая (15,0мг/л) и низкая концентрация (1,0мг/л) 6-БАП, а также его сочетание с ИУК или 2,4-Д не оказывала достаточного стимулирования эффекта регенерации Присутствие ИМК было малоэффективно

Экспериментальные данные показали, что изменение основных параметров освещения и температуры при культивировании каллуса влияло на частоту стеблевого органогенеза, особенно у сортов с низким морфогенетическим потенциалом (Новость Кузьмина, Молинг промис), у которых этот показатель в варианте с предварительным культивированием в темноте (6 недель) при 1=25°С повысился примерно в 2 раза (таблица 11) Среднее число побегов в этом варианте опыта было выше, чем в контроле

Следовательно, повышение частоты регенерации вызвано действием внешнего «раздражителя» (темноты) на клетки, что способствует активации окислительно-восстановительных реакций и метаболических процессов и как следствие заложению адвентивных почек

Таблица 11 - Реакция каллуса на способность к регенерации при предварительном культивировании в темноте и различной температуре (среда Андерсона с 10,0 мг/л 6-БАП и 0,5 мг/л ИУК в среднем за 1993-1994 гг)

Сорт 1=25иС, 16-ч фотопериод (контроль) 1=25°С, темнота 6 недель 1=4°С, темнота 6 недель НСР05 (поб /эксп )

% регенерации поб / экспл, шт % регенерации по б/ экспл, шт % регенерации поб / экспл, шт

Карнавал 31,6 2,5 47,4 3,1 28,9 1,8 1,02

Комета 23,1 1,6 39,5 2,5 21,1 1,1 0,87

Новость Кузьмина 14,5 1,3 28,2 2,0 15,0 1,2 1,38

Молинг промис 7,5 1,3 17 5 1,6 5,0 1,0 1,21

На повышение регенерации влияло осмотическое давление питательных сред (каллусогенеза и морфогенеза) Повышение давления среды осуществлялось увеличением концентрации глюкозы с ЗОмг/л (стандарт среды Андерсона) до 60 и 90г/л Регенерация побегов в опыте повысилась, особенно этот показатель увеличивался (более чем в 2 раза) на среде с 90г/л глюкозы Частота регенерации в опытных вариантах составила 39,1-62,5%, а в контроле - 18,8-25% (рисунок 6) При сравнении процессов каллусогенеза и морфогенеза установлено, что уровень пролиферациях каллусных клеток был наиболее высоким в контроле и снижался в опытных вариантах по мере увеличения концентрации глюкозы в среде Однако при помещении таких каллусов на среду морфогенеза с повышенным осмотическим давлением способность к регенерации наоборот возрастала

30 г/л ЗОг/л еог/л 60г/л 90г/л ЗОг/л

каллусогенез регенерация каллусогенез регенерация каллусогенез регенерация побегов побегов побегов

■ Карнавал иКомета □НовостьКузьмина

Рисунок 6 - Влияние осмотического давления среды на каллусогенез (питательная среда Андерсона 2,4-Д 4,0 мг/л) и регенерацию адвентивных побегов (питательная среда Андерсона, 6-БАП 10,0 мг/л и ИУК 0,5 мг/л)

Индуцированные в опытах побеги отделяли от каллуса и после тиражирования и получения идентичных копий укореняли на среде Андерсона с добавлением 1,0мг/л 6-БАП (этап размножения) и 0,5 мг/л ИМК (этап ризогенеза). Таким образом, оптимальный подбор гормонального состава, предварительное культивирование в темноте, повышение осмотического давления питательной среды позволяет повысить уровень стеблевого органогенеза в каллусной культуре. Сочетание указанных факторов обеспечивает стабильный выход расте-ний-регенерантов и тем самым повышает эффективность биотехнологических методов в селекционном процессе.

6.4. Регенерация растений непосредственно из исходных эксплантов.

Выявлены варианты регенерационных сред, которые вызывали на эксплантах адвентивный органогенез. Среди них выделены два варианта с содержанием регуляторов роста, обеспечивших наиболее высокую частоту регенерации: 1) 6-БАП (10,0мг/л)+ИУК (0,5мг/л); 2) 6-БАП (10,0мг/л)+2,4-Д (0,5мг/л). На этих средах регенерировали побеги как из дисков, так и из черешков. Установлена зависимость, заключающаяся в различной реакции и специфических требованиях эксплантов опытных генотипов на введение в состав среды морфогенеза регуляторов роста ауксиновой природы при обязательном присутствии 6-БАП. При культивировании листовых эксплантов сортов Карнавал и Комета развитие побегов лучше происходило под влиянием ИУК, а у сортов Новость Кузьмина, Молинг промис и Кумберленд - 2,4-Д (рисунок 7).

Экспланты с побегами

б-БАП (10,0 мг/л) +ИУК 6-БАП (10,0 мг/л)+ 2,4-Д (0,5

(0,5 мг/л) мг/л)

Среднее число поб./экспл.

6-БАП (10,0 мг/л) +ИУК

6-БАП (10,0 мг/л) + 2,4-Д (0,5

Ко нота Новость Молинг Кумбврланд Карнавал Комета Новость Молит Кумбарланд Кузьмина промис Кузьмина прочие

□ листовые диски в сегменты черешков листьев

Рисунок 7 - Стеблевой органогенез в культуре листовых дисков и

черешков в зависимости от гормонального состава среды и генетических особенностей (в среднем за 1994-1995гг.)

Видимо, это связано с положительным синергическим эффектом конкретного экзогенного ауксина с 6-БАП и морфогенетической реакции генотипа сорта на то или иное сочетание регуляторов роста. При добавлении в регенера-ционную среду одного 6-БАП в различных концентрациях, в большинстве вариантов сред регенерация понижалась или вообще не происходила. Способность листовых дисков к формированию побегов несколько ниже, чем у листовых черешков. У первого типа эксплантов частота регенерации составляла 15,645,7%, а у второго - 18,2-51,1%.

Более полной реализации морфогенетического потенциала способствовал двухэтапный прием культивирования листовых дисков и черешков на регене-рационной среде, включавший предварительное (подготовительное) выращивание в полной темноте (3 недели и 1=25°С) с последующим перенесением в стандартные (16 часовой фотопериод и 1=25°С) условия с интенсивным освещением. Видимо, при нахождении клеток в темноте происходит усиление обменных

процессов, увеличение активности нуклеиновых кислот, возрастание синтеза белка, т е в клетках протекают процессы, аналогичные таковым при действии стрессовых факторов, что приводит к более активному заложению почек

Итак, биотехнологический прием получения регенерантов через прямой органогенез имеет важное значение для селекционной практики малины, в частности для возможного создания биоразнообразия форм, размножения в системе in vitro трудноразмножаемых генотипов и для генетической трансформации и получения трансгенных растений

6.5. Селекция тканевых культур резистентных к солевому стрессу. Резистентность тканевых линий оценивали по показателю частоты каллусооб-разования на селективных питательных средах В таблице 12 представлены результаты исследований по селекции каллусных линий солевыносливых к различным дозам селективного агента с применением прямой (одноступенчатой) селекции

Таблица 12 - Пролиферация колоний каллусных клеток на селективных средах в зависимости от концентрации хлорида натрия (в среднем за 1994-1995 гг)

Концентрация Частота каллусообразования, %

Сорт NaCl в среде, 1-й пас- 2-й пас- 3-й пас- 4-й пас- 5-й пас-

% саж саж саж саж саж

0 38,9 57,1 88,9 82,4 -

Молинг 0,5 27,8 40,0 50,0 40,0 -

промис 1,0 11,1 50,0 25,0 33,3 -

1,5 17,6 33,3 0 0 -

0 27,8 40,0 75,0 90,0 -

Новость 0,5 35,3 50,0 55,6 50,0 -

Кузьмина 1,0 31,6 33,3 50,0 25,0 -

1,5 5,6 0 0 0 -

0 100 100 100 93,3 92,9

0,25 81,1 100 95,0 93,3 88,9

Кумберленд 0,5 65,8 78,9 84,6 85,1 84,8

1,0 13,5 48,9 0 0 0

1,5 2,8 0 , 0 0 0

Примечание Каллус сортов Моликг промис и Новость Кузьмина культивировали на селективных средах в течение 4 пассажей, сорта Кумберленд - 5 пассажей

Пролиферация клеток каллуса более активно происходила на средах, дополненных NaCl в концентрации 0,25% и 0,5% Каллусные ткани сохраняли устойчивость к соли при культивировании их в течение нескольких пассажей на селективных средах Однако в большинстве случаев каллусной культуры малины красной в присутствии NaCl росли хуже, чем на обычной среде Частота каллусообразования в опытных вариантах была ниже контроля Каллусные линии находились в условиях имитации т vitro солевого стресса свыше 200 суток Способность каллусной культуры к росту у сорта малины черной в условиях 1,0% NaCl сохранялась только в течение двух субкультивирований и полно-

стью подавлялась в третьем пассаже, а у сортов малины красной новообразование каллуса отмечено в четвертом пассаже В варианте опыта с добавлением в срсд> высокой дозы селективниГи шента (1,5% НаСл) наблюдается резкое снижение жизнеспособности клеток и полное ингибирование процесса новообразования клеточных колоний (сорта Кумберленд, Новость Кузьмина - 2 пассаж, сорт Молинг промис - 3 пассаж)

Таблица 13 - Применение ступенчатой селекции для получения каллусных линий сорта Карнавал резистентных к хлориду натрия (среда Андерсона с 4,0 мг/л 2,4-Д)

Пассаж Концентрация ЫаС1 в Длительность куль- Частота каллусо-

среде, % тивирования, суток образования, %

1 0 43 83,3±5,9

0,25 66,0±4,4

2 0 35 100

0,5 82,8±4,6

3 0 42 94,7±3,5

1,0 54,1±4,7

4 0 39 89,5±4,9

1,0 63,1±4,4

5 0 50 100

1,5 48,6±4,6

6 0 20 89,3±5,6

1,5 46,7±5,2

7 0 30 90,0±4,7

0* 62,5±7,6

0 25 89,7±4,8

1,5 65,0±7,5

Примечание Каллус, полученный в 6 пассаже на среде с 1,5% МаС1, культивировали без селективного агента

Установлено, что высокая концентрация хлорида натрия (1,5%) оказывала сильное токсическое действие на каллус малины и поэтому колонии клеток были не способны к пролиферации Для отбора каллусных линий резистентных к высокой концентрации соли и сохраняющих способность к росту на селективной среде использовался прием ступенчатой селекции (таблица 13) Цикл последовательных пассажей каллусных культур в селективных условиях составлял 284 суток и состоял из восьми пассажей В результате культивирования каллусных клеток на среде с постепенно увеличивающейся концентрацией №С1 (0,25%-* 0,5%-» 1,0%-» 1,5%) отобраны линии, способные к росту в присутствии 1,5% соли (в опыте частота каллусообразования - 65,0%, в контроле -89,7%) Следовательно, прием ступенчатой селекции позволяет выделить линии, устойчивые к критической для пролиферации каллусных клеток малины концентрации солевого стрессора

Глава 7

Экономическая эффективность выращивания рассады земляники с использованием клонального микроразмножения

Оценка экономической эффективности выращивания рассады земляники с использованием клонального микроразмножения свидетельствует о высокой доходности (в ценах 2003г) Выход рассады с 1 га маточника увеличился по сравнению с обычной технологией на 355 тыс шт или на 98,6% Полные затраты на 1 га возросли в 2,8 раза, а денежная выручка в 4 раза В связи с тем, что темпы роста выручки выше, чем темпы роста затрат прибыль с 1 га маточных насаждений увеличилась в 5,2 раза и составила 1361,9 тыс руб при уровне рентабельности 173,9% По сравнению с обычной технологией выращивания рассады прибыль на 1 руб затрат выросла на 81 коп или 87,2%

Выводы

1 В результате проведенных исследований разработаны и усовершенствованы цитологические и биотехнологические приемы, способствующие решению проблемы повышения интенсификации селекционного процесса некоторых плодовых культур

2 Цитоэмбриологический метод в селекционных исследованиях способствует решению проблемы недостаточной семенной продуктивности отдаленных гибридов сливы разного уровня плоидности на основе исследования полного цикла развития женской генеративной сферы и прогамной фазы оплодотворения Установлены характерные отклонения от нормы в формировании женских гаметофитов, которые влияют на фертильность семяпочек и плодоношение

3 Цитологический анализ кариотипов гибридов инконгруэнтных скрещиваний позволяет дать предварительный прогноз степени плодовитости При гибридизации диплоидных и тетраплоидных форм сливы формируются ал-лотриплоиды (2п=3х=24) с геномным составом (х+2х) и полным бесплодием При скрещивании диплоид х гексаплоид гибриды являются аллотетраплоиды (2п=4х=32), геномный набор хромосом (х+Зх)

4 Установлено, что для ашютриплоидов характерны значительные нарушения в процессах развития женских гаметофитов на всех этапах, что приводит к абортивности семяпочек и массовому опадению цветков (97,0 - 99,0%) и является причиной стерильности женской генеративной сферы и почти полного отсутствия плодоношения (1,3 - 1,7%) Темпы прохождения стадий в развитии зародышевых мешков в сильной степени замедлены и отстают от общего развития цветков на дереве

5 Показано, у аллотетраплоидных гибридов нарушения в формировании женской генеративной сферы выражены в меньшей степени В период массового цветения в семяпочках гибридов формируется примерно 29,3 - 37,5% морфологически нормальных женских гаметофитов, что свидетельствует о частичной женской стерильности

6 Установлена степень совместимости в разных комбинациях скрещивания Реакция несовместимости скрещиваемых компонентов связана с нарушениями механизма взаимоотношения мужского гаметофита со спорофитом пестика и является следствием проявления гаметофитной системы несовместимости

7 Показано, метод эмбриокультуры позволяет эффективно решить проблему преодоления в разной степени выраженного бесплодия отдаленных гибридов сливы От почти полностью бесплодных и слабоплодовитых гибридов получено 52 растения F2 Среди которых выявлены формы со сдержанным ростом высота сеянцев в пятилетнем возрасте не превышала 1 метра Установлено, что выход жизнеспособных сеянцев прямо зависит от формирования морфологически нормальных женских гаметофитов и степени выполненности введенных в культуру зародышей

8 Введение в питательную среду 6-БАП позволяет индуцировать из каждого зародыша яблони по несколько дополнительных побегов и увеличить выход однородных сеянцев Разработан прием ризогенеза у полученных из зародышей ш vitro побегов путем воздействия контрастными температурами Укоренение увеличивается в 2 и более раз

9 Показано, для повышения каллусообразующей способности экс-планта и улучшения качественных показателей каллуса в среду необходимо вносит 2,4-Д (для малины) или ее сочетанием с ИУК и кинетином в соотношении 2 11 (для земляники) Установлено, что морфогенез in vitro у земляники осуществляется по типу адвентивного органогенеза Показано, что в клетках 45 - 50-дневной каллусной ткани сортов малины наблюдается вариабельность ка-риотипов Возникновение генетически нестабильных клеток составляет около 20% (сорт Карнавал)

10 Установлено, на регенерацию в культуре каллусных и листовых тканей земляники и малины оказывает влияние генетические особенности сорта, гормональный баланс питательной среды (их тип, концентрация, сочетания) и приемы воздействия на экспланты

11 Выявлены различные сортовые реакции и специфические требования тканевых культур на введение в состав регенерационных сред регуляторов роста Морфогенный эффект 6-БАП и его физиологическое свойство стимулировать регенерацию побегов реализуется при взаимодействии с экзогенными ауксинами

12 На основе базовых сред Мурасиге - Скуга (для земляники) и Андерсона (для малины) разработаны регенерационные среды с одновременным введением 6-БАП и определенного препарата ауксиновой природы в соотношении 10 I и 20 1, которые повышали морфогенетический потенциал каллусных и листовых тканей Установлено положительное влияние контрастных температур и повышенного осмотического давления среды на регенерацию побегов из каллуса

13 Разработана эффективная двухэтапная схема получения побегов т vitro в тканевых культурах модельных сортов земляники и малины, которая включает предварительное культивирование эксплантов в темноте с после-

дующим помещением их в стандартные условия выращивания, что приводит к увеличению регенерация до 2-х раз (в зависимости от типа экспланта и генотипа сорта)

14 Установлено, уменьшение в среде Мурасиге - Скуга исходной концентрации nh4no3 не оказывает существенного влияния на коэффициент размножения побегов, в то время как снижение содержания KNO3 ухудшает в 4 раза пролиферацию побегов При культивировании апексов оптимальным является 16-часовой фотопериод Затемнение среды на этапе ризогенеза посредством введения красителя метиленовой сини способствует получению растений-регенерантов с хорошо развитой корневой системой

15 Растения-регенеранты, полученные в каллусной культуре земляники, показывают значительную изменчивость некоторых признаков, а именно количества цветоносов (V=26,4%) и ягод (V=22,4%) на растении, которая сохранялась в R, и R2 вегетативном поколениях в течение 3 лет В меньшей степени выражено варьирование этих признаков у регенерантов в культуре листовых дисков Создание в культуре in vitro имитации солевого стресса способствует отбору путем одноступенчатой селекции колоний каллусных клеток малины, пролиферирующих на селективных средах с NaCl (0,25-1,0%) Применение ступенчатой селекции позволяет провести скрининг тканевых линий в условиях критической для роста клеток концентрации солевого стрессора (1,5%)

16 Выращивание посадочного материала земляники с использованием приема клонального микроразмножения экономически выгодно и позволяет повысить рентабельность производства в 1,9 раза по сравнению с традиционной технологией

Рекомендации для практической селекции

1 Для наиболее полной реализации генетического потенциала рода Prunus Mill и создания ценного исходного селекционного материала рекомендуется использовать

а) аллотетраплоидные формы, формирующие от 29,3 до 37,5% нормальных зародышевых мешков Опыление следует проводить в первый день цветения, т к в этот период женский гаметофит достигает полного развития,

б) аллотриплоидные формы, способные формировать до 3% зародышевых мешков Опыление необходимо проводить на 2-4 день цветения, увеличивая при этом количество опыляемых цветков до 1-2 тысяч штук и число вовлекаемых в гибридизацию форм

2 Для повышения результативности скрещиваний с участием отдаленных гибридов сливы разной степени фертильности рекомендуется использовать метод эмбриокультуры При работе с культурой зародышей руководствоваться разработанными «Методическими рекомендациями по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми», раздел «Применение культуры зародышей для повышения эффективности отдаленной гибридизации» (Мичуринск, 1987)

3 Рекомендуется культивировать изолированные зародыши яблони на среде Мурасиге-Скуга дополненной 6-БАП (1,0-4,0 мг/л) в целях тиражирования и сохранения ценных генотипов

4 При проведении экспериментов с культурой ткани предлагается использовать разработанные нами методические рекомендации «Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур», раздел «Регенерация растений из изолированных соматических тканей земляники и малины» (Мичуринск, 1996)

5 Индукцию адвентивного органогенеза в культуре изолированных кал-лусных тканей, листовых дисков и черешков следует проводить по схеме I этап - культивирование эксплантов без освещения в течение 3 недель (земляника), 3 и 6 недель (малина) при t=23±2 °С, II этап - культивирование эксплантов в стандартных условиях при t=23±2 °С и 16-часовом фотопериоде

6 Для получения растений-регенерантов земляники с хорошо развитой корневой системой рекомендуется прием затемнения среды ризогенеза, содержащей 0,5 мг/л ИМК, за счет добавления красителя метиленовой сини в концентрации 0,05%

7 Селекцию каллусных линий малины, устойчивых к высоким концентрациям солевого стрессора, следует осуществлять на среде с постепенно увеличивающейся дозой NaCl (0,25 -» 0,5 1,0 -> 1,5%)

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Курсаков, Г А Некоторые результаты цитологического изучения отдаленных гибридов сливы /ГА Курсаков, Н П Романова, С JI Расторгуев, ГС Смирнова//Бюл науч информ ЦГЛ им ИВ Мичурина - 1978 — Вып 31 -С 3-6

2 Курсаков, Г А Особенности формирования женского гаметофита у отдаленных гибридов сливы /ГА Курсаков, Н П Романова, С Л Расторгуев //Бюл науч информ ЦГЛ им ИВ Мичурина - 1980 - Вып 34 - С 39

3 Курсаков, ГА Цитоэмбриологическое изучение отдаленных гибридов сливы в связи с использованием их в селекции / Г А Курсаков, С Л Расторгуев//Наука - производству Тез докл науч. конф - М, 1981 -С 78

4 Расторгуев, С Л Изучение совместимости при беккроссе аллотригогоидов сливы / С Л Расторгуев // Биологические аспекты изучения и рационального использования животного и растительного мира Тез докл конф -Рига, 1981 -С 80-81

5 Расторгуев, С Л Исследование опыления аллотетраплоидов сливы методом люминесцентной микроскопии / С Л Расторгуев // Пути интенсификации картофелеводства, плодоводства и овощеводства Тез докл науч -практ конф -Минск, 1981 -С 16-17

6 Курсаков, Г А Исследования особенностей роста пыльцевых трубок при отдаленной гибридизации косточковых растений методом люминесцент-

ной микроскопии / Г.А Курсаков, Н П Романова, С Л Расторгуев, Г Г Никифорова // Бюл науч информ ЦГЛ им И В Мичурина - 1982 -Вып 39 - С 3-8

7 Расторгуев, С Л Использование метода люминесцентной микроскопии при отдаленной гибридизации сливы / С Л Расторгуев // Проблемы повышения эффективности современного садоводства Тез докл III Всес науч конф молодых ученых - Мичуринск ВНИИС им И В Мичурина, 1982 - С 161-162

8 Денисов, В Ф Способ определения морозоустойчивости растений яблони / В Ф Денисов, Б В Никольский, С Л Расторгуев //АС № 1045862, 08 06 1983

9 Дубовицкая, Л А Культура изолированных зародышей в связи с отдаленной гибридизацией косточковых плодовых растений / Л А Дубовицкая, С Л Расторгуев // Генетические особенности и практические результаты отдаленной гибридизации плодовых растений Тр ЦГЛ им И В Мичурина - Мичуринск, 1984 - С 74-81

10 Расторгуев, С Л Цитоэмбриологические особенности аллополиплоидов сливы / С Л Расторгуев, Н М Туровцева // Наука - сельскому хозяйству Тез докл науч конф молодых ученых - Мичуринск, 1985 - С 25-26

11 Расторгуев, С Л К вопросу о микроклонапьном размножении ценных генотипов земляники / С Л Расторгуев // Интенсификация садоводства -составная часть Продовольственной программы СССР Тез докл науч конф - Мелитополь, 1985 - С 11-12

12 Курсаков, Г А Цитоэмбриологические особенности и применение искусственной культуры зародышей при отдаленной гибридизации плодовых растений /ГА Курсаков, Л А Дубовицкая, С Л Расторгуев // Гаметоге-нез, оплодотворение и эмбриогенез семенных растений, папоротников и мхов Тез докл IX Всес совещ по эмбриологии растений - Кишинев Штиинца, 1986 - С 222

13 Тюленев, В М Микроклональное размножение земляники в искусственной культуре / В М Тюленев, Л В Осипова, С Л Расторгуев // Бюл науч информ ЦГЛ им И В Мичурина -1986 - Вып 43 - С 27-31

14 Тюленев, В М Биотехнологические методы в селекции плодовых растений // В М Тюленев, П М Нафталиев, Л В Осипова, С Л Расторгуев, Н В Жукова, Н Р Гребешова // V съезд ВОГИС им Н И Вавилова Тез докл -М, 1987 -Т4 - 44 - С 251

15 Шелаботин, ГП Устройство, повышающее качество цитологических препаратов и производительности при их приготовлении / Г П Шелаботин, Б В Никольский, С Л Расторгуев // Научные достижения - производству Тез докл науч конф - М, 1987 - С 71-72

16 Курсаков, Г А Применение культуры зародышей для повышения эффективности отдаленной гибридизации / ГА Курсаков, Л А Дубовицкая, С Л Расторгуев, О С Мячина // Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми - Мичуринск, 1987 - С 12-16.

17 Тюленев, В М Клональное микроразмножение ценных генотипов плодовых культур / В М Тюленев, JI В Осипова, П М Нафталиев, С Л Расторгуев // Биология культивируемых клеток и биотехнология Тез междунар совещ - Новосибирск, 1988 -С.320

18 Методические рекомендации по применению цитологических методов в плодоводстве / Н П Романова, Г П Шелаботин, В Г Леонченко, Н.П Ха-нина, Б В Никольский, С JI Расторгуев, И И Туровский - М ВАСХ-НИЛ, 1988 - 52 с

19 Тюленев, В М Способ укоренения побегов яблони / В М Тюленев, П М Нафталиев, Л В Осипова, С Л Расторгуев // Бюл науч информ ЦГЛ им И В Мичурина - 1990 - Вып 48 - С 34-36

20 Расторгуев, С Л Влияние физиологически-активных веществ на развитие изолированных зародышей яблони / С Л Расторгуев И Достижения науки -в практику Тез дохл науч конф -М, 1990 - С 110-111

21 Тюленев, В М Получение растений-регенерантов из изолированных тканей земляники / В М Тюленев, С Л Расторгуев, И И Туровский // Бюл науч информ ЦГЛ им И В Мичурина -1991 -Вып 50 - С 21-27

22 Курсаков, Г А Изучение прогамной фазы при отдаленных скрещиваниях сливы методом люминесцентной микроскопии /ГА Курсаков, Л А Ду-бовицкая, С Л Расторгуев // // Бюл науч информ ЦГЛ им И В Мичурина -1992 -Вып 51 -С 15-20

23 Тюленев, В М Усиление генетической изменчивости плодовых и ягодных растений в искусственной культуре / В М Тюленев, Л В Осипова, С Л Расторгуев // Управление генетической изменчивостью с -х растений Тез докл междунар совещ -Ялта, 1992 - С 100-101

24 Тюленев, В М Регенерация растений из изолированных тканей плодовых и ягодных культур / В М Тюленев, Л В Осипова, С Л Расторгуев // VI съезд ВОГИСим НИ Вавилова Тез докл -Минск, 1992 - 4 2 - С 156

25 Тюленев, В М Регенерация растений из изолированных соматических тканей плодовых культур /' В М Тюленев, Л В Осипова, С Л Расторгуев // Новые методы биотехнологии растений Тез докл II Российского симпозиума - Пущино, 1993 - С 173 (Tyulenev, V М Plant regeneration from isolated somatic tissues of fruit crops / V M Tyulenev, L V Osipova, S L Rastorguev // Trends in plant biotechnology Abstracts second symposium - Pushcino, 1993 -P 409)

26 Тюленев, В M Индукция морфогенеза в тканевых культурах плодовых и ягодных растений / В М Тюленев, Л В Осипова, С Л Расторгуев // Генетика -1994 -Т 30 -С 160

27 Будаговский, А В Усиление морфогенетической потенции и индуцированной иммунной реакции соматических тканей растений в культуре т vitro под действием низкоинтенсивного когерентного излучения лазеров / А В Будаговский, В М Тюленев, С Л Расторгуев // Механизм действия сверхмалых доз Тез докл II Междунар симпозиума - М, 1995 - С 143144

28 Тюленев, В М Регенерация растений из изолированных соматических тканей и анализ сомаклональной изменчивости земляники / ВМ Тюленев, С JI Расторгуев // Бюл науч информ ВНИИГиСПР им И В Мичурина -1995 -Вып 52 - С 55-56

29 Биотехнология в селекции / Е Н Джигадло, М И Джигадло, В М Тюленев, Г А Курсаков, О С Жуков, J1.B. Осипова, С Л Расторгуев, J1А Дубовиц-кая, Г С Смирнова, О Я Олейникова // Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур - Орел ВНИИСПК, 1995 - С 111-131

30 Тюленев, ВМ Применение биотехнологических методов в плодоводстве/ В М Тюленев, Л В Осипова, С.Л Расторгуев, Н В Соловых // Современные проблемы плодоводства Тез докл науч конф - Самохваловичи, 1995 -С 17

31 Соловых, Н В Применение тканевых культур в селекции плодовых растений / Н В Соловых, С Л Расторгуев // Молодые ученые - садоводству России Тез докл Всерос совещ -М, 1995 -С 9-12

32 Расторгуев, С Л Регенерация растений из изолированных соматических тканей земляники и малины / С Л Расторгуев // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур Методические рекомендации - Мичуринск, 1996 - С 40-61

33 Расторгуев, С Л Использование изолированных тканевых культур в селекции малины / С Л Расторгуев // Сельскохозяйственное производство и высшая школа на переломном этапе реформирования Мат обл науч-практ конф -Мичуринск, 1996 -С6 2 Плодоводство - 4 2 -С 35-36

34 Расторгуев, С Л Разработка способов индукции растений-регенерантов земляники и малины в культуре тканей / С Л Расторгуев // Использование биотехнологических методов для решения генетико-селекционных проблем Докл и сообщ XVIII Мичуринских чтений - Мичуринск, 1998. - С 49-52

35 Расторгуев, С Л Использование биотехнологических методов при отдаленной гибридизации сливы / С Л Расторгуев // Проблемы и перспективы отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур Тез докл и сообщ

XX Мичуринских чтений - Мичуринск, 2000 - С 43

36 Поляков, С А Особенности клонального микроразмножения сортов земляники /С А Поляков, А В Верзилин, С Л Расторгуев // Проблемы с -х производства в изменяющихся экономических и экологических условиях

XXI века Мат междунар науч-практ конф -Пенза, 2000 -С 18-20

37 Расторгуев, С Л Применение биотехнологических методов в селекции плодовых культур / С Л Расторгуев // Проблемы с -х производства на современном этапе и пути их решения Тез докл IV междунар науч -практ конф - Белгород, 2000 - С 33-34

38 Расторгуев, С Л Клеточные технологии в селекции плодовых и ягодных культур/С Л Расторгуев//Вестник МичГАУ - Мичуринск, 2001 - Т.1 -№1 - Серия плодоводство,цветоводство,овощеводство -С 99-103

39 Поляков, С А Биологические особенности перспективных сортов земляники при ускоренном размножении / С А Поляков, А В Верзилин, С Л Расторгуев, Ю Н Приходько // Научное обеспечение современных технологии производства плодов и ягод в России и странах СНГ - М , 2002 -С 78-81

40. Поляков, С А Адаптация растений-регенерантов земляники к нестерильным условиям / С А Поляков, С.Л Расторгуев, А В Верзилин // Повышение эффективности садоводства в современных условиях Мат Всерос науч -практ конф — Мичуринск-Наукоград РФ, 2003 - Т 2 - С 335-339

41 Расторгуев, С Л Технологии in vitro в селекции плодовых культур / С Л Расторгуев, ВМТюленев // Мобилизация адаптационного потенциала садовых растений в динамичных условиях внешней среды Междунар науч-практ конф -М.2004 - С 110-113

42 Тюленев, В М Система современного использования стрессоров и антистрессоров в тканевой селекции плодовых и ягодных культур / В М Тюленев, Н В Соловых, А Н Перегоедов, Д Г Шорников, С Л Расторгуев // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии Мат III междунар науч конф - М, 2004 - С 92 95

43 Поляков, А С Биологические особенности перспективных сортов земляники на этапах ризогенеза и адаптации / С А Поляков, А В Верзилин, С Л Расторгуев // Вестник МичГАУ - Мичуринск-Наукоград РФ, 2004 -Т 2 - № 2 - Серия плодоводство, цветоводство, овощеводство - С 106-108

44 Расторгуев, С Л Возможности адвентивного органогенеза из соматических тканей малины / С Л Расторгуев // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях с -х Мат конф - Новочеркасск, 2005 -С 116-121

45 Расторгуев, С Л Регенерация растений и применение культуры тканей в селекции земляники / С Л Расторгуев, В М Тюленев // Аграрная наука -2005 -№ 12 - С 16-19

46 Расторгуев, С Л Метод эмбриокультуры в селекционной работе с алло-полиплоидами сливы / С Л Расторгуев // Садоводство и виноградарство -2006 - № 2 - С 13-15

47 Расторгуев, С Л Индукция морфогенеза в культуре каллусной ткани малины/С Л Расторгуев//ВестникРАСХН -2006 -№6 - С 41-43

48 Расторгуев, С Л Применение биотехнологических приемов для создания новых форм ягодных растений / С Л Расторгуев // Вестник МичГАУ -Мичуринск-Наукоград РФ, 2006 -№1 -С 53-57

49 Расторгуев, С Л Селекция тканевых культур малины устойчивых к солевому стрессу / С Л Расторгуев // Вестник МичГАУ - Мичуринск-Наукоград РФ, 2006 -J62-C 55-58

50 Расторгуев, С Л Размножение растений малины в условиях т vitro / С Л Расторгуев//Аграрная наука -2007 -№3 -С 21-24

51 Расторгуев, С JI Скрининг резистентных к хлориду натрия тканевых линий малины/С Л Расторгуев//Arpo XXI -2007 -№4-6 - С 38-39

52 Расторгуев, С Л Оптимизация приемов регенерации из каллусных культур малины / С Л Расторгуев // Перспективы селекции яблони и других культур для промышленных насаждений Мат Всерос науч -практ конф - Мичуринск-Наукоград РФ, 2007 - С 151-155

53 Расторгуев, С Л Изменчивость растений - регенерантов земляники, полученных методом тканевых культур/ С Л Расторгуев// Вопросы современной науки и практики Университет им И В Вернадского - 2008 -№1/11 -С 46-52

54 Расторгуев, С Л Анализ изменчивости растений земляники, индуцированных в культуре каллусной ткани/ С Л Расторгуев //Аграрная наука -2008 -№5 -С 25-27

55 Расторгуев, С Л Регенерация растений в культуре изолированных зародышей яблони / С Л Расторгуев // Садоводство и виноградарство -2008 -№3 -С 15-16

Отпечатано в издательско-полиграфическом центре

ФГОУ ВПО МичГАУ Подписано в печать 27 05 08 г Формат 60x84 V^, Бумага офсетная № 1 Уел печ л 2,4 Тираж 120 экз Ризограф Заказ № 13381

Издательско-полиграфический центр Мичуринского государственного аграрного университета 393760, Тамбовская обл , г Мичуринск, ул Интернациональная, 101, тел +7 (47545) 5-55-12 E-mail wdem@mgau ru

Содержание диссертации, доктора сельскохозяйственных наук, Расторгуев, Сергей Леонидович

Введение.

Глава 1. Перспективы использования цитологических методов и культуры изолированных клеток, тканей и органов в селекционной практике.

1.1. Роль отдаленной гибридизации в создании биоразнообразия растений.

1.2. Цитоэмбриологические методы в решении проблем повышения эффективности отдаленной гибридизации.

1.3. Развитие и становление методов клеточных и тканевых культур растений.

1.4. Клеточные технологии в решении селекционных проблем.

Глава 2. Цель, задачи, объекты и методика проведения исследований.

2.1. Цель и задачи.

2.2. Объекты исследований.

2.3. Методика проведения исследований.

Глава 3 . Повышение эффективности отдаленной гибридизации на основе цитоэмбриологических методов.

3.1. Уровень плоидности гибридного потомства при инконгруэнтных скрещиваниях представителей рода Prunus Mill.

3.2.Сравнительная оценка развития женской генеративной сферы аллополип-лоидов сливы (диплоид х тетраплоид) и их исходных форм.

3.3.Сравнительная оценка развития женской генеративной сферы аллополип-лоидов сливы (диплоид х гексаплоид) и их исходных форм.

3.4.Анализ прогаммной фазы оплодотворения аллополиплоидов сливы (диплоид х тетраплоид) при интрогрессивной гибридизации.

3.5. Анализ прогаммной фазы оплодотворения аллополиплоидов сливы диплоид х гексаплоид) при интрогрессивной гибридизации.

Глава 4. Метод эмбриокультуры в повышении эффективности селекционного процесса некоторых плодовых растений.

4.1. Культура изолированных зародышей в получении сеянцев отдаленных гибридов сливы разной степени стерильности.

4.2.Влияние физиологически активных веществ на развитие зародышей яблони в культуре in vitro.

Глава 5. Регенерация растений in vitro и применение культуры тканей в селекции земляники.

5.1. Индукция и культивирование каллуспой ткани, анатомические и ультраструктурные особенности клеток каллуса.

5.2. Морфогенез адвентивных побегов из каллуса.

5.3. Регенерация придаточных побегов непосредственно из исходных экс-плантов.

5.4. Тиражирование и укоренение побегов, полученных в культуре каллусных и листовых тканей.

5.4.1. Оптимизация приемов технологии ускоренного размножения земляники in vitro.

5.5.Анализ изменчивости растений-регенерантов.

Глава 6. Регенерация растений in vitro и применение культуры тканей в селекции малины.

6.1. Клональное микроразмножение сортов-доноров, источников эксплантов.

6.2. Индукция и культивирование каллуспой ткани, цитогенетические особенности клеток каллуса.

6.3. Морфогенез в культуре каллусной ткани.

6.4. Регенерация растений непосредственно из исходных эксплантов.

6.5.Селекция тканевых культур, резистентных к солевому стрессу.

Глава 7. Оценка экономической эффективности выращивания рассады земляники с использованием клонального микроразмножения.

Выводы.

Рекомендации для практической селекции.

Список используемой литературы.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Совершенствование селекционного процесса плодовых и ягодных растений на основе цитологических методов и культуры изолированных тканей"

Быстрые темпы роста населения Земного шара вызывают необходимость значительного увеличения производства продуктов питания, учитывая при этом, что в настоящее время в мире насчитывается примерно 1,5 млрд. голодающих людей. Известно, что около 93 % пищи человека составляют продукты растениеводческих отраслей, одной из которых является садоводство. Для решения проблемы продовольственной безопасности стран необходимо существенное повышение урожайности и улучшение качества основных сельскохозяйственных растений, в том числе, плодовых и ягодных культур.

В современных условиях ухудшающейся экологической обстановки возникает другая проблема - качественное, рациональное питание человека, обеспечивающее его здоровье и долголетие. Рацион человека должен в обязательном порядке содержать в необходимом количестве биологически активные природные вещества антиоксидантного действия, повышающие устойчивость организма к неблагоприятным факторам внешней среды и, как следствие, сдерживающие старение организма и поражение его болезнями (Гудковский,2000).

В связи с этим, плоды и ягоды садовых растений являются наиболее ценными и незаменимыми источниками витаминов, органических кислот, легкоусвояемых Сахаров, макро- и микроэлементов и других биологически активных веществ, которые обладают профилактическими и лечебными свойствами. По разработанным медицинским нормам годовая потребность человека в плодах и ягодах в нашей стране должна составлять 100-120кг, фактически производится лишь 18-20кг, что явно недостаточно для нормальной жизнедеятельности организма.

Интенсификация садоводства, направленная на увеличение производства высококачественных плодов и ягод, предъявляет высокие требования к сортовому составу. Сорта должны обладать совокупностью устойчивых хозяйственно ценных признаков. Меж тем, все возрастающая нестабильность климата приводит к тому, что существующий набор сортов нуждается в значительном пополнении или даже замене. Важная роль в совершенствовании сортимента, а следовательно, и в повышении продуктивности и экономической эффективности плодовых насаждений отводится селекционному улучшению сортов. Прирост урожайности у сортов за счет селекции может достичь 30-70% и роль этого фактора, в частности, в садоводстве, будет постоянно возрастать в связи с инерционностью сортового состава, необходимостью перехода к низкозатратным, экологически безопасным технологиям (Жученко, 2001).

К настоящему времени селекционерами достигнуты определенные успехи по созданию новых высокопродуктивных сортов плодовых и ягодных культур. Вместе с тем, не все из существующих сортов в полной мере отвечают возрастающим современным требованиям. Попытки улучшить сортимент на основе внутривидовой гибридизации не всегда приводят к желаемым результатам.

В решении задач по выведению высокопродуктивных, скороплодных сортов плодовых растений, с высоким потенциалом адаптации к экстремальным факторам внешней среды и ценным биохимическим составом плодов важное место принадлежит отдаленной гибридизации. По мнению Н.И. Вавилова (1960) Н.В. Цицина (1978) и других ученых, в методе отдаленной гибридизации заложены огромные потенциальные возможности, которые позволяют решать теоретические, прикладные и методические вопросы селекции и создания на базе этого новых хозяйственно ценных форм и сортов, более полно удовлетворяющих запросы производства.

И.В. Мичурин (1948) придавал важное значение межвидовым и межродовым скрещиваниям, как эффективным и действенным приемам в создании « .совершенно новых видов плодовых растений с еще небывалыми формами и свойствами ». Метод отдаленной гибридизации позволяет конструировать новые генотипы, объединяющие наследственные факторы разных видов и родов, что способствует получению ценного исходного материала для целей селекции.

В исследованиях по отдаленной гибридизации используют конгруэнтные и инконгруэнтные скрещивания. В первом случае родительские формы имеют совместимые наборы хромосом и первое гибридное поколение обычно фертильное и нормально жизнеспособное. Во втором случае компоненты скрещивания имеют несоответствующие хромосомные наборы или разное их число. Это приводит к трудности получения гибридных семян. Однако инконгруэнтные скрещивания открывают широкие перспективы в создании видов, не существующих в природе и, видимо, не возникающих в естественных условиях.

В мейозе гибридов вследствие несоответствия геномов скрещиваемых видов, нарушается образование бивалентов, ведущее к частичной или полной стерильности. Различная степень выраженной стерильности гибридных сеянцев создает трудности получения последующих поколений для выяснения характера наследования признаков и проведения отбора.

Степень семенной продуктивности определяется состоянием женской генеративной сферы растения. Анализ состояния женских гаметофи-тов отдаленных гибридов в момент наступления цветения и сроков их формирования позволяет определить наиболее оптимальный период опыления гибридных форм. Аномалии в развитии зародышевых мешков в конечном итоге приводят к нарушению процессов оплодотворения и снижают семенную продуктивность гибридов. Изучение развития женской генеративной сферы, прогамной фазы оплодотворения, тесно связанных с функцией размножения растений, важно для повышения эффективности проведения селекционных работ. Выяснение причин стерильности аллопо-липлоидов может быть осуществлено посредством метода цитоэмбриоло-гического анализа.

Цитоэмбриологическая оценка нарушений формирования женской генеративной сферы отдаленных гибридов позволяет выявить степень стерильности конкретных гибридных форм и на основании этого более грамотно подойти к использованию их в селекции и наметить пути преодоления этого нежелательного явления. Вместе с тем наши сведения по цитоэмбриологическому изучению отдаленных гибридов плодовых культур весьма ограничены, что свидетельствует об их важности и актуальности в решении прикладных и методических проблем отдаленной гибридизации.

Процесс создания сортов традиционными методами довольно длительный. Так, на получение нового сорта малины с учетом всех этапов его формирования требуется 10-12 лет (Казаков, 2004), косточковых культур -20 и более лет, при отдаленной гибридизации эти сроки еще увеличиваются.

В настоящее время для совершенствования традиционного селекционного процесса, в том чиле отдаленной гибридизации, важное значение приобретает использование высоких технологий, которые основаны на культивировании в системе in vitro клеток, тканей и органов растений и направленных на сокращение сроков создания ценных генотипов. Клеточные технологии в селекционной работе можно разделить на две группы: 1) облегчающие и ускоряющие традиционный процесс; 2) создающие генетическое разнообразие и скрининг генотипов с ценными признаками (Бутен-ко, 1986).

Важнейшими методами клеточной инженерии в получении нового исходного селекционного материала являются: эмбриокультура, индукция сомаклональных вариантов, тканевая селекция на устойчивость к срессо-рам, клональное микроразмножение отобранных в ходе селекции особо ценных элитных форм и др.

С помощью культуры зародышей можно существенно повысить эффективность инконгруэнтных скрещиваний. Культивирование незрелых зародышей используется в том случае, когда невозможно, в силу указанных причин, получить определенную комбинацию признаков в одном генотипе традиционными методами селекции. В ряде случаев возникает необходимость получения F2 отдаленных гибридов, формирующих маложизнеспособные семена, которые в обычных условиях не прорастают. Поэтому для повышения выхода сеянцев целесообразно выращивать зародыши в системе in vitro. Вызывает интерес возможность тиражирования и сохранения ценных генотипов за счет получения от каждого зародыша нескольких дополнительных побегов, что особенно важно в работе по отдаленной гибридизации. Однако ряд методических вопросов практического выращивания сеянцев в культуре изолированных зародышей плодовых растений разработан ещё недостаточно. По сравнению с обычными приемами получения сеянцев эмбриокультура снижает риск потери селекционно-ценных генотипов, т.к. процесс их выращивания протекает в контролируемых условиях.

При культивировании соматических тканей в условиях in vitro можно получать растения - сомаклоны, которые отличаются определенными фено- и генотипическими признаками от исходных форм. В сомаклональ-ных вариантах наблюдается изменение не только моногенных, но и полигенных признаков. Было установлено, что использование сомаклонов может в два раза ускорить процесс создания нового сорта (Evans et al., 1984).

Метод тканевой селекции позволяет целенаправленно проводить в жестких селективных условиях скрининг стабильных каллусных линий, а затем и растений — регенерантов с повышенной резистентностью к конкретным абиотическим и биотическим стрессорам.

Клональное микроразмножение аналогично вегетативному способу размножения и различается лишь тем, что весь процесс протекает в условиях in vitro, где из эксплантов определенного типа можно ускоренно получать достаточно большое количество растений, идентичных исходному экземпляру. Хотя технология ускоренного размножения многих растений разработана достаточно хорошо, сведения отностительно техники кло-нального микроразмножения важных плодовых и ягодных культур далеко не полны. Поэтому этот прием имеет тенденцию к усовершенствованию отдельных этапов применительно к конкретным генотипам.

Несмотря на несомненную перспективность клеточных технологий, главная проблема, возникающая при практическом использовании культуры изолированных тканей и органов в селекционном процессе, заключается в разработке эффективных приемов надежного получения растенийрегенерантов из эксплантов различного происхождения. Изучению этого вопроса посвящен ряд работ отечественных и зарубежных авторов, что свидетельствует о большом значении проблемы регенерации для всей методологии культуры ткани, без решения которой становятся бесполезными исследования по культивированию тканей и органов in vitro для целей селекции. Способы индукции морфогенеза растений универсальны лишь только в общих закономерностях, поэтому хорошо разработанная система регенерации для конкретного генотипа не всегда подходит для других клонов данного вида и тем более представителей других видов.

На реализацию морфогенетического потенциала клеток и тканей оказывают влияние ряд факторов - внешние (химический и гормональный баланс питательной среды, физические условия культивирования) и внутренние (генотип растения- донора, его возраст, тип и физиологическое состояние экспланта). Все это необходимо учитывать при поиске оптимальных условий регенерации растений из соматических тканей при разработке базовых технологий. Однако сложность данной проблемы заключается в том, что морфогенетические потенции многолетних плодовых растений намного слабее по сравнению с однолетними культурами и поэтому труднее индуцировать регенераты из изолированных тканей. Отсюда и небольшое количество работ по плодовым культурам, что свидетельствует об актуальности решения проблемы. Совершенствование приемов стабильного получения растений-регенерантов позволит шире использовать методы культуры изолированных тканей и органов в создании исходного материала для селекции плодовых и ягодных растений.

Научная новизна исследований. Результаты исследований позволили расширить знания по биологии цветения и размножения отдаленных гибридов рода Prunus Mill. Выявлена степень стерильности женской генеративной сферы в связи с уровнем плоидности отдаленных гибридов сливы. Установлены сроки формирования зародышевых мешков, что дает возможность определить оптимальный период опыления. Проведена классификация основных структурных изменений в строении и развитии женской генеративной сферы разнохромосомных гибридов. Методом люминесцентной микроскопии выявлена степень совместимости конкретных форм при интрогрессивной гибридизации. Показана целесообразность использования метода культуры зародышей для преодоления в разной степени выраженного бесплодия и повышения выхода сеянцев отдаленных гибридов сливы. Предложен оригинальный способ, позволяющий получать от каждого зародыша яблони по несколько идентичных растений. Методом электронной микроскопии проведено детальное изучение особенностей клеток каллуса и установлен тип морфогенеза in vitro (земляника). Выявлена вариабельность кариотипов каллусных клеток на примере малины. Разработаны и усовершенствованы приемы регенерации в культуре каллусных и листовых тканей земляники и малины. Показано, что морфогенный эффект цитокинина более активно реализуется при взаимодействии с конкретными регуляторами роста ауксиновой природы. Выявлена положительная динамика влияния контрастных температур и увеличения осмотического давления среды на регенерацию и ризогенез побегов. Показана эффективность двухэтапного получения побегов путем последовательного изменения условий культивирования эксплантов. Изучено влияние составов питательных сред, исходных концентраций источников азота, продолжительности периода освещения на коэффициент размножения и затемнения среды на формирование корневой системы регенерантов земляники. Установлена степень изменчивости регенерантов земляники, полученных в культуре каллусных и листовых тканей и разработаны методические вопросы, позволяющие провести скрининг каллусных линий малины резистентных к солевому стрессору.

Практическая значимость исследований. Впервые получено 52 сеянца F2 отдаленных гибридов, обладающих отдельными ценными признаками разных видов рода Prunus Mill, что способствует расширению генофонда сливы для выполнения селекционных программ. Результаты законченных исследований вошли в: «Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетикоселекционной работе с плодовыми» (Мичуринск, 1987), «Методические рекомендации по применению цитологических методов в плодоводстве» (Москва, ВАСХНИЛ, 1988), «Программу и методику селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур» (Орел, 1995), рекомендации по «Индукции морфогенеза и тканевой селекции плодовых и ягодных культур» (Мичуринск, 1996). Разработан способ (А.С. №1045862), повышающий точность и упрощающий процедуру определения морозоустойчивости растений яблони. Заложена маточная плантация суперэлитным посадочным материалом перспективных сортов земляники на площади 0,1га (учхоз «Роща» МичГАУ). Результаты методических разработок используются при проведении работ в научно-исследовательских учреждениях по садоводству, в учебном процессе высших учебных заведений при подготовке специалистов по направлению агрономия, что подтверждено справками о внедрении.

Положения выносимые на защиту:

- цитоэмбриологические особенности отдаленных гибридов разного уровня плоидности и прогамной фазы оплодотворения при интрогрессивной гибридизации;

- способы повышения выхода сеянцев с использованием культуры изолированных зародышей;

- приемы регенерации растений в системе in vitro (культура изолированных апексов, каллусов, листовых эксплантов);

- изменчивость регенерантов в культуре каллусов и листовых дисков и тканевая селекция на устойчивость к засолению;

- модель использования методов культуры тканей и органов для целей селекции.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Расторгуев, Сергей Леонидович

выводы

1. В результате проведенных исследований разработаны и усовершенствованы цитологические и биотехнологические приемы, способствующие решению проблемы повышения интенсификации селекционного процесса некоторых плодовых культур.

2. Цитоэмбриологический метод в селекционных исследованиях способствует решению проблемы недостаточной семенной продуктивности отдаленных гибридов сливы разного уровня плоидности на основе исследования полного цикла развития женской генеративной сферы и про-гамной фазы оплодотворения. Установлены характерные отклонения от нормы в формировании женских гаметофитов, которые влияют на фер-тильность семяпочек и плодоношение.

3. Цитологический анализ кариотипов гибридов инконгруэнтных скрещиваний позволяет дать предварительный прогноз степени плодовитости. При гибридизации диплоидных и тетраплоидных форм сливы формируются аллотриплоиды (2п=3х=24) с геномным составом (х+2х) и полным бесплодием. При скрещивании диплоид х гексаплоид гибриды являются аллотетраплоиды (2п=4х=32), геномный набор хромосом (х+Зх).

4. Установлено, что для аллотриплоидов характерны значительные нарушения в процессах развития женских гаметофитов на всех этапах, что приводит к абортивности семяпочек и массовому опадению цветков (97,0 - 99,0%) и является причиной стерильности женской генеративной сферы и почти полного отсутствия плодоношения (1,3 - 1,7%). Темпы прохождения стадий в развитии зародышевых мешков в сильной степени замедлены и отстают от общего развития цветков на дереве.

5. Показано, у аллотетраплоидных гибридов нарушения в формировании женской генеративной сферы выражены в меньшей степени. В период массового цветения в семяпочках гибридов формируется примерно

29,3 - 37,5% морфологически нормальных женских гаметофитов, что свидетельствует о частичной женской стерильности.

6. Установлена степень совместимости в разных комбинациях скрещивания. Реакция несовместимости скрещиваемых компонентов связана с нарушениями механизма взаимоотношения мужского гаметофита со спорофитом пестика и является следствием проявления гаметофитной системы несовместимости.

7. Показано, метод эмбриокультуры позволяет эффективно решить проблему преодоления в разной степени выраженного бесплодия отдаленных гибридов сливы. От почти полностью бесплодных и слабоплодовитых гибридов получено 52 растения F2. Среди которых выявлены формы со сдержанным ростом, высота сеянцев в пятилетнем возрасте не превышала 1 метра. Установлено, что выход жизнеспособных сеянцев прямо зависит от формирования морфологически нормальных женских гаметофитов и степени выполненности введенных в культуру зародышей.

8. Введение в питательную среду 6-БАП позволяет индуцировать из каждого зародыша яблони по несколько дополнительных побегов и увеличить выход однородных сеянцев. Разработан прием ризогенеза у полученных из зародышей in vitro побегов путем воздействия контрастными температурами. Укоренение увеличивается в 2 и более раз.

9. Показано, для повышения каллусообразующей способности экспланта и улучшения качественных показателей каллуса в среду необходимо вносит 2,4-Д (для малины) или ее сочетанием с ИУК и кинетином в соотношении 2:1:1 (для земляники). Установлено, что морфогенез in vitro у земляники осуществляется по типу адвентивного органогенеза. Показано, что в клетках 45 - 50-дневной каллусной ткани сортов малины наблюдается вариабельность кариотипов. Возникновение генетически нестабильных клеток составляет около 20% (сорт Карнавал).

10. Установлено, на регенерацию в культуре каллусных и листовых тканей земляники и малины оказывает влияние генетические особенности сорта, гормональный баланс питательной среды (их тип, концентрация, сочетания) и приемы воздействия на экспланты.

11. Выявлены различные сортовые реакции и специфические требования тканевых культур на введение в состав регенерационных сред регуляторов роста. Морфогенный эффект 6-БАП и его физиологическое свойство стимулировать регенерацию побегов реализуется при взаимодействии с экзогенными ауксинами.

12. На основе базовых сред Мурасиге - Скуга (для земляники) и Андерсона (для малины) разработаны регенерационные среды с одновременным введением 6-БАП и определенного препарата ауксиновой природы в соотношении 10:1 и 20:1, которые повышали морфогенетический потенциал каллусных и листовых тканей. Установлено положительное влияние контрастных температур и повышенного осмотического давления среды на регенерацию побегов из каллуса.

13. Разработана эффективная двухэтапная схема получения побегов in vitro в тканевых культурах модельных сортов земляники и малины, которая включает предварительное культивирование эксплантов в темноте с последующим помещением их в стандартные условия выращивания, что приводит к увеличению регенерация до 2-х раз (в зависимости от типа экспланта и генотипа сорта).

14. Установлено, уменьшение в среде Мурасиге — Скуга исходной концентрации NH4NO3 не оказывает существенного влияния на коэффициент размножения побегов, в то время как снижение содержания KNO3 ухудшает в 4 раза пролиферацию побегов. При культивировании апексов оптимальным является 16-часовой фотопериод. Затемнение среды на этапе ризогенеза посредством введения красителя метиленовой сини способствует получению растений-регенерантов с хорошо развитой корневой системой.

15. Растения-регенеранты, полученные в каллусной культуре земляники показывают значительную изменчивость некоторых признаков, а именно количества цветоносов (V=26,4%) и ягод (V=22,4%) на растении, которая сохранялась в Ri и R2 вегетативном поколениях в течении 3 лет. В меньшей степени выражено варьирование этих признаков у регенерантов в культуре листовых дисков (для количества цветоносов V = 16,5%, ягод V = 3,9%). Создание в культуре in vitro имитации солевого стресса способствует отбору путем одноступенчатой селекции колоний каллусных клеток малины, пролиферирующих на селективных средах с NaCl (0,25-1,0%). Применение ступенчатой селекции позволяет провести скрининг тканевых линий в условиях критической для роста клеток концентрации солевого стрессора (1,5%).

16. Выращивание посадочного материала земляники с использованием приёма клонального микроразмножения экономически выгодно и позволяет повысить рентабельность производства в 1,9 раза по сравнению с традиционной технологией.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОЙ СЕЛЕКЦИИ

1. Для наиболее полной реализации генетического потенциала рода Prunus Mill и создания ценного исходного селекционного материала рекомендуется использовать: а) аллотетраплоидные формы, формирующие от 29,3 до 37,5% нормальных зародышевых мешков. Опыление следует проводить в первый день цветения, т.к. в этот период женский гаметофит достигает полного развития; б) аллотриплоидные формы, способные формировать до 3% зародышевых мешков. Опыление необходимо проводить на 2-4 день цветения, увеличивая при этом количество опыляемых цветков до 1-2 тысяч штук и число вовлекаемых в гибридизацию форм.

2. Для повышения результативности скрещиваний с участием отдаленных гибридов сливы разной степени фертильности, рекомендуется использовать метод эмбриокультуры. При работе с культурой зародышей руководствоваться разработанными «Методическими рекомендациями по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми», раздел «Применение культуры зародышей для повышения эффективности отдаленной гибридизации» (Мичуринск, 1987).

3. Рекомендуется культивировать изолированные зародыши яблони на среде Мурасиге-Скуга дополненной 6-БАП (1,0-4,0 мг/л) в целях тиражирования и сохранения ценных генотипов.

4. При проведении экспериментов с культурой ткани предлагается использовать разработанные нами методические рекомендации «Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур», раздел «Регенерация растений из изолированных соматических тканей земляники и малины» (Мичуринск, 1996).

5. Индукцию адвентивного органогенеза в культуре изолированных каллусных тканей, листовых дисков и черешков следует проводить по схеме: I этап - культивирование эксплантов без освещения в течение 3 недель (земляника), 3 и 6 недель (малина) при t=23±2 °С; II этап — культивирование эксплантов в стандартных условиях при t=23±2 °С и 16-часовом фотопериоде.

6. Для получения растений-регенерантов земляники с хорошо развитой корневой системой рекомендуется прием затемнения среды ризогене-за, содержащей 0,5 мг/л ИМК, за счет добавления красителя метиленовой сини в концентрации 0,05%.

7. Селекцию каллусных линий малины, устойчивых к высоким концентрациям солевого стрессора, следует осуществлять на среде с постепенно увеличивающейся дозой NaCl (0,25 —> 0,5 —> 1,0 —> 1,5%).

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора сельскохозяйственных наук, Расторгуев, Сергей Леонидович, Мичуринск-Наукоград РФ

1. Аветисов, В.А. Генотипические особенности морфогенеза в каллусных культурах различных сортов картофеля /В.А. Аветисов, О.С. Ме-лик Саркисов // Сельскохозяйственная биология. - 1985. - №3. - С.67 -70.

2. Алешин, Н.Е. Питательная среда для культивирования пыльников риса /Н.Е. Алешин, Э.В. Авакян, Е.П. Алешин, М.Г. Воронков, П.Н. Хар-ченко //А.С. № 1678256, 1991.

3. Артамонов, В.И. Биотехнология — агропромышленному комплексу / В.И. Артамонов. М.: Наука, 1989. - 157с.

4. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве / А. Атанасов. -Новосибирск: ИЦиГ СО РАН, 1993. 241с.

5. Ахмедова, М.М. Причины нескрещиваемости Nicotiana glauea и Petunia hibruda при прямом и обратном скрещивании / М.М. Ахмедова // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. -М.: Колос, 1970. С.205 - 207.

6. Банникова, В.П. Цитоэмбриология межвидовой несовместимости у растений / В.П. Банникова Киев, Наукова думка, 1975. - 284с.

7. Банникова, В.П. Межвидовая несовместимость у растений / В.П. Банникова Киев, Наукова думка, 1986. - 230с.

8. Банникова, В.П. Основы эмбриологии растений / В.П. Банникова, О.А. Хведынич. Киев, Наукова думка, 1982. - 163с.

9. Бартиш, И.В. Разработка методов выделения и культивирования протопластов из мезофильной ткани древесных плодовых культур / И.В. Бартиш // Новые методы биотехнологии растений: Тез.докл. II Российского симпозиума. Пущино, 1993. - С. 110.

10. Батыгина, Т.Б. Эмбриология пшеницы / Т.Б. Батыгина . - Л.: Колос, 1974.-206с.

11. Батыгина, Т.Б. Поведение зародышей некоторых покрытосеменных в культуре in vitro /Т.Б. Батыгина, В.Е. Васильева //Культура клеток растений: Тез. докл. III Всесоюзной конференции. Абовян, 1979. - С. 129 - 130.

12. Бербанк, Л. Избранные сочинения / Л.Бербанк. — М.: Иностранная лит., 1955.-716с.

13. Березенко, Н.П. Цитологическое исследование причин нескрещиваемости и бесплодия гибридов первого поколения некоторых косточковых пород / Н.П. Березенко // 4-й съезд генетиков и селекционеров Украины: Тез.докл.- Киев, 1981. С. 144 - 146.

14. Березенко, Н.П. Особенности формирования женского гаметофита у вишни и прорастание пыльцы при межвидовых реципрокных скрещиваниях ее с черешней / Н.П. Березенко // Цитология и генетика. 1982. -Т.16 - №1. - С.32 - 37.

15. Беркут, О.Д. О получении гибридов между яблоней и грушей / О.Д. Беркут // За мичуринское плодоводство. 1937. - №1. - С.22 - 24.

16. Биотехнология в селекции / Е.Н. Джигадло, М.И. Джигадло, В.М. Тюленев, Г.А. Курсаков, О.С. Жуков, JI.B. Осипова, СЛ. Расторгуев и др. // Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур. Орел.: ВНИИСПК, 1995.-С.111-131.

17. Брайт, С. Модификация хозяйственных признаков с использованием технологий in vitro С. Брайт, В. Джарретт, Р. Нельсон и др. // Биотехнология сельскохозяйственных растений. — М.: Агропромиздат, 1987. — С.234 246.

18. Брежнев, Д.Д. Мировые растительные ресурсы и отдаленная гибридизация растений / Д.Д. Брежнев // Отдаленная гибридизация растений: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1970. - С.43 - 63.

19. Бургутин, А.Б. Селекция картофеля in vitro на устойчивость к хлористому натрию / А.Б. Бургутин // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Всероссийского симпозиума. Пущино, 1993. - С.117.

20. Бурдасов, В.М. Пути использования метода изолированных зародышей в селекции яблони / В.М. Бурдасов // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979. - С.52 - 57.

21. Бутенко, Р.Г. Применение метода культуры изолированных верхушечных почек для изучения процесса роста и органогенеза растений / Р.Г.Бутенко // Физиология растений. 1960. - Т.7. - вып.6. - С.715 - 723.

22. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений /Р.Г. Бутенко. М.: Наука, 1964. - 272с.

23. Бутенко, Р.Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике / Р.Г. Бутенко // Сельскохозяйственная биология. 1979. - №3. - С. 306 - 315.

24. Бутенко, Р.Г. Клеточные технологии в селекционном процессе / Р.Г. Бутенко // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Мат. Всес. конф. Ленинград, 1986. - С.29 - 38.

25. Бутенко, Р.Г. Клеточные технологии в сельскохозяйственной науке и практике / Р.Г. Бутенко // Основы сельскохозяйственной биотехнологии.-М.: Агропромиздат, 1990.-С. 154-235.

26. Бутенко, Р.Г. Морфогенез in vitro как важный этап клеточной и генной инженерии растений / Р.Г. Бутенко // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Российского симпозиума. Пущино, 1993. - С.118.

27. Бутенко, Р.Г. К вопросу о механизме действия гидразида малеи-новой кислоты на растения / Р.Г. Бутенко, Ю.А. Баскаков // Физиология растений. 1960. - Т.7. - вып.4. - С.385 - 394.

28. Бутенко, Р.Г. Контролируемый органогенез и регенерация целого растения в культуре недифференцированной ткани / Р.Г. Бутенко, З.М. Яковлева II Известия АН СССР. 1962. - Сер. Биол. - №2. -С.230 - 231.

29. Бутенко, Р.Г. Применение метода стерильных культур для выращивания отдаленных гибридов Nicotiana / Р.Г. Бутенко, М.З. Лунева // Физиология растений. 1966. - Т.13. - вып. 4. - С.733 - 736.

30. Бутенко, Р.Г. Специфика антигенов в цикле клеточных превращений в культуре ткани табака I Р.Г. Бутенко, А.Д. Володарский // Физиология растений. 1967. - Т. 14. - вып.6. - С.965 - 971.

31. Бутенко, Р.Г. Получение межвидового соматического гибрида картофеля методом слияния изолированных протопластов /Р.Г. Бутенко, А.А. Кучко // Доклады АН СССР. 1979. - Т.247. - №2. - С.491 - 495.

32. Бутенко, Р.Г. Влияние гибберелловой кислоты на рост и ауксино-вый обмен культуры изолированной ткани, выращенной на свете разного состава / Р.Г. Бутенко, З.М. Яковлева, И.Н. Дмитриева // Доклады АН СССР. 1961. - №5. - С.1246 - 1249.

33. Бутенко, Р.Г. Регенерация растений из каллусных тканей, полученных из разных органов сортов озимой пшеницы / Р.Г. Бутенко, Ж.К. Джердеманиев, Н.Ф. Гаврилова // Физиология растений. 1986. - Т.ЗЗ. -№5. - С.837 - 842.

34. Бутова, Г.П. Индуцированный органогенез в каллусной культуре тополя бальзамического (Populus balsamifera) / Г.П. Бутова, Т.М. Табацкая // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос. -1979.-С.5-13.

35. Вавилов, Н.И. Значение межвидовой и межродовой гибридизации в селекции и эволюции / Н.И. Вавилов // Избранные труды. М.: JL: АН СССР, 1960, - Т.2. - С.444 - 460.

36. Вдовцева, Т.А. Особенности прорастания пыльцы при скрещивании персика со сливой домашней I Т.А. Вдовцева // Агробиология. — 1958. -№2. С.133 - 136.

37. Вейнбергер, Дж. X. Слива / Дж.Х. Вейнбергер // Селекция плодовых растений. -М.: Колос, 1981. С.463 -478.

38. Велчев, В. Клонално микроразмножаване на малине (Rubus Idaeus L.) / В. Велчев // Растениевъд. Науки. 2004. - 41. - №1. - С.З - 8.

39. Веньяминов, А.Н. Селекция вишни, сливы и абрикоса в условиях средней полосы СССР / А.Н. Веньяминов М.: Сельхозгиз, 1954. - 350с.

40. Веньяминов, А.Н. Применение отдаленной гибридизации в селекции сливы на зимостойкость / А.Н. Веньяминов // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1970. - С.76 -85.

41. Веньяминов, А.Н. Роль отдаленной гибридизации в формировании сортимента косточковых плодовых культур в Центрально Чернозёмном районе / А.Н. Веньяминов // Отдаленная гибридизация и её роль в интенсивном садоводстве. - Мичуринск, 1989. - С. 52 - 57.

42. Веньяминов, А.Н. Итоги селекции сливы в Черноземной зоне РСФСР / А.Н. Веньяминов, А.Г. Туровцева // Докл. советских ученых к XIX Междунар. конгрессу по садоводству (Варшава). М.: Колос, 1974. -С.27-31.

43. Витковский, В.Л. Состояние и перспективы использования видов косточковых растений в отдаленной гибридизации / В.Л. Витковский // Бюл. ВНИИР им. Н.И. Вавилова. 1982. - №123. - С.З - 10.

44. Волощук, С.И. Морфо биохимическая характеристика каллусов пшеницы при культивировании с патогенными грибами / С.И. Волощук, А.Д. Волощук, B.C. Гирко // Доклады РАСХН. - 2005. - №3. - С.35 - 38.

45. Выскот, Б.М. Индуцированный андрогенез in vitro — новый метод получения гаплоидных растений / Б.М. Выскот, Ф.И. Новак // Генетика. -1975.-вып.11.-№1.~ 136- 145.

46. Высоцкий, В.А. Особенности клонального микроразмножения некоторых форм ремонтантной малины / В.А. Высоцкий // Плодоводство и ягодоводство России. М., 1996. - С.90 - 95.

47. Высоцкий, В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений / В.А. Высоцкий // Автореф. дисс. д-ра с.-х. наук. — 1998. — 44с.

48. Высоцкий, В.А. Некоторые итоги и перспективы использования методов культуры изолированных тканей и органов в садоводстве /В.А. Высоцкий// История, современность и перспективы развития садоводства России: Мат. Междунар. конф. М., 2000. - С.163 - 191.

49. Высоцкий, В.А. Биотехнологические приемы в современном садоводстве / В.А. Высоцкий // Садоводство и виноградарство. 2006. - №2. -С.2-3.

50. Высоцкий, В.А. Совершенствование питательной среды для мик-роклонального размножения вишни / В.А. Высоцкий, Е.В. Олешко // Сб. науч. Трудов НИЗИСНП. М.: 1985. - С.72 - 76.

51. Высоцкий, В.А. Методические указания по выращиванию сеянцев вишни из зародышей, изолированных на ранних стадиях развития / В.А. Высоцкий, Г.А. Плотникова // НИЗИСНП. М., 1988. - 14с.

52. Высоцкий, В.А. Возможности регенерации растений земляники и малины из каллусов различного происхождения / В.А. Высоцкий, Ф.М. Хамукова // Ягодоводство в Нечерноземье. 1993. - С. 19 - 24.

53. Высоцкий, В.А. Биотехнологические приёмы в садоводстве: экономические аспекты / В.А.Высоцкий // Садоводство и виноградарство.-2005.-№5.-С. 24-27.

54. Гамбург, К.З. Биохимия ауксина и его действие на клетки растений / К.З. Гамбург. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1976. - 271с.

55. Гамбург, К.З. Ауксины в культуре тканей и клеток растений / К.З. Гамбург, Н.И. Рекославская, С.Г. Швецова. — Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990.-243с.

56. Гамбург, К.З. Влияние разных ауксинов на рост тканей табака и сои в суспензионной культуре / К.З. Гамбург, Е.Ф.Высоцкая, J1.A. Леонова, Л.М. Опарова, В.И. Юзенасов // Доклады АН СССР. 1972. - Т.203. - №3.- С.714 717.

57. Гапоненко, А.К. Регенерация растений различных генотипов пшеницы Triticum aestivum L. in vitro //А.К. Гапоненко, M.A. Мунтян, Н.И. Маликов, А.А. Созинов // Доклады АН СССР. 1984.- Т.278. - №5. -С.1231 - 1235.

58. Гапоненко, А.К. Получение сомаклональных линий у злаков (Tritikum aestivum L. и Hordeum vulgare L.)/ А.К. Гапоненко, Н.И. Малико-ва, Г.Н. Охрименко, А.А. Созинов // Доклады АН СССР. -1985. вып.283. -№6. - С. 1471 - 1475.

59. Герасимова Навашина, Е.Н. Развитие зародышевого мешка, двойное оплодотворение и вопрос о происхождении покрытосеменных / Е.Н. Герасимова - Навашина // Ботанический журнал. - 1954. - Т.39. - №5.- С.655 681.

60. Герчева, П. Биотехнологиите в селекцията на овощните видове / П. Герчева // Растениевъд. Науки. 2003. - 40. - №5. - С. 387 - 390.

61. Гладков, Е.А. Биотехнологические методы получения растений, устойчивых к тяжелым металлам 2. Получение растений, толерантных к ионам кадмия и свинца / Е.А. Гладков // Биотехнология. 2006. - №4. -С.87 - 91.

62. Гладков, Е.А. Биотехнологические методы получения растений, устойчивых к тяжелым металлам 3. Клеточная селекция газонных трав, толерантным к ионам меди / Е.А.Гладков, Ю.И. Долгих, В.В. Бирюков, О.В. Гладкова // Биотехнология. 2006. - №5. - С.63 - 66.

63. Глеба, Ю.Ю. Arabidobrassica: новые гибридные растения, полученные слиянием протопластов / Ю.Ю.Глеба, Ф. Хоффман // Культура клеток растений: Тез.докл. Абовян, 1979. - С. 105 - 106.

64. Глеба, Ю.Ю. Слияние протопластов и генетическое конструирование высших растений / Ю.Ю. Глеба, К.М. Сытник. Киев: Наукова думка, 1982.-104с.

65. Гонзалес, Р.А. Отбор клеток растений по требуемым признакам: устойчивость к ингибиторам / Р.А. Гонзалес, Дж. М. Уидхолм // Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат. - 1989. - С.83 - 96.

66. Горшков И.С. Отдаленная гибридизация плодовых и ягодных культур / И.С. Горшков // Отдаленная гибридизация растений и животных. Вопросы плодоводства, лесоводства и животноводства. М.: АН СССР, 1960.-С. 42-50.

67. Горшкова, Т.А. Отдаленные гибриды яблони с грушей / Т.А. Горшкова // Докл. советских ученых к XVI Между нар. конгрессу по садоводству (Брюссель). М., 1962. - С.89 - 95.

68. Гостимский, С.А. Генетическая изменчивость клеток растений при культивировании / С.А. Гостимский // Успехи современной генетики. — М.: Наука, 1987. № 14. -С.48 - 63.

69. Гревцова, Н.А. Некоторые данные о строении семяпочек яблони и груши / Н.А. Гревцова // Морфология цветковых растений. 1971. - С.64 -74.

70. Гревцова, Н.А. Цитоэмбриологические исследования яблони и груши / Н.А. Гревцова // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. М.: Колос, 1973. - С.55 — 60.

71. Гудковский, В.А. Проблемы и перспективы обеспечения свежими фруктами и повышения здоровья людей / В.А. Гудковский // История, современность и перспективы развития садоводства России: Мат. Междунар. конф. М., 2000. - С.38 - 45.

72. Данвелл, Дж. М. Культура гаплоидных клеток / Дж. М. Данвелл // Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат, 1989. -С.33-51.

73. Дарвин, Ч. Происхождение видов / Ч. Дарвин // M.:JI.: Сельхоз-гиз, 1935.-630с.

74. Деменко, В.И. Проблемы и возможности микроклонального размножения садовых растений / В.И. Деменко // Известия ТСХА. 2005. -вып.2. - С.48 - 58.

75. Деменко, В.И. Биологические и технологические особенности вегетативных способов размножения в системе производства здорового посадочного материала / В.И. Деменко // Автореф. дисс. д-ра с.-х. наук. — М., 2006.-48с.

76. Денисов, В.Ф. Способ определения морозоустойчивости растений яблони / В.Ф. Денисов, Б.В. Никольский, С.Л. Расторгуев// А.С. №1045862, 1983.

77. Джеймс, Е. Хранение клеток в условиях низких температур / Е. Джеймс // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. -Р. 153-175.

78. Джозеф, Е.Дж. Клеточная селекция яровой пшеницы на устойчивость к засолению /Е. Дж. Джозеф, А.К. Дмитриева, И.Д. Никифорова // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Российского симпозиума, Пущино, 1993. - С. 131

79. Джонс, О.П. Размножение хозяйственно-важных древесных растений in vitro / О.П. Джонс // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 134 - 152.

80. Джое, Л. Клеточная селекция пшеницы на устойчивость к септо-риозу / Л. Джое, Е.А. Калашникова // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда: Тез. докл. VII Междунар. конф. -М., 1997.-С.317.

81. Диас, С. Взаимодействие генетической и физиологической регуляции морфогенеза в культуре тканей кукурузы in vitro /С. Диас, Ю.И. Долгих,В.С. Шевелуха //Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Российского симпозиума. — Пущино, 1993. — С.132.

82. Диксон, Р.А. Изолирование и поддержание каллусных и суспензионных культур клеток / Р.А. Диксон // Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат, 1989. - С.8 - 32.

83. Дмитриева, И.Н. О роли ауксина и кинетика при индукции делений в сердцевинной паренхиме стебля табака / И.Н. Дмитриева, А.Х. Лип-ский // Физиология растений. 1973. - Т.20. - №2. - С.339 - 346.

84. Долгих, Ю.И. Принципы скрининга клеток in vitro с целью получения устойчивых к абиотическим стрессам форм растений / Ю.И. Долгих // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Российского симпозиума. Пущино, 1993. - С.103.

85. Долгих, Ю.И. Современные представления о причинах и механизмах сомаклональной изменчивости / Ю.И. Долгих, З.Б. Шамина // Молекулярные механизмы генетических процессов: Сб. докл. 7 Всес. симпозиума. 1991. - С.123 - 127.

86. Долгов, С.В. Разработка методов регенерации и генетической трансформации вишни (Cerasus vulgaris) / С.В. Долгов, А.П. Фирсов, Я.И. Бурьянов // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл II Российского симпозиума. Пущино, 1993. - С.18.

87. Дорошенко, Н.Д. Длительное хранение генофонда винограда in vitro / Н.Д. Дорошенко // Виноград и вино России. 2001. - № 2. - С.38 - 40.

88. Духанина, А.П. Несовместимость при гибридизации европейской и арктической малины / А.П. Духанина, О.С. Жуков // Бюл. Науч. информ. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1978. - вып.29. - С.26 - 29.

89. Елманов, С.Н. Цитоэмбриологические исследования абрикоса, алычи и их гибридов / С.Н. Елманов, Е.Г. Шоферистова // Тр. Никитского ботанического сада. 1970. -Т.49. - С.159 - 172.

90. Еникеев, Х.К. Выведение новых сортов сливы в средней полосе / Х.К. Еникеев // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1957. - Т.6. -С.145 - 165.

91. Еникеев, Х.К. К вопросу о происхождении крупноплодных форм терна и терносливы / Х.К. Еникеев // Докл. советских ученых к XVI Междунар. конгрессу по садоводству (Брюссель). М., 1962. — С.81 - 88.

92. Еникеев, Х.К. Методы и результаты селекции сливы в Нечерноземной зоне / Х.К. Еникеев // Селекция и технология выращивания плодовых культур. М.: Колос, 1978. - С. 101 - 108.

93. Еникеев, Х.К. Селекция сливы и вишни в Нечерноземной зоне РСФСР / Х.К. Еникеев // Бюл. ВНИИР им. Н.И. Вавилова. Л., 1982. -№123. - С.19 - 21.

94. Еникеев, Х.К. Цитологическое изучение некоторых межвидовых гибридов сливы / Х.К. Еникеев, М.С. Младенцева // Докл. советских ученых к XVII Междунар. конгрессу по садоводству (Мэриленд, США). М.: Колос, 1966.-С.99-100.

95. Еникеев, Х.К. Питательная среда для культивирования зародышей косточковых культур / Х.К. Еникеев, В.А. Высоцкий, Г.А. Плотникова // А.С. № 1261587, 1986.

96. Ергачев, М.Н. Морфологическое и цитоэмбриологическое изучение отдаленных гибридов сливы / М.Н. Ергачев // Автореф. дисс.канд. биол. наук. 1970. - 22с.

97. Ергачев, М.Н. Влияние гиббереллина на формирование зародышевого мешка и рост плодов у бесплодных сеянцев сливы / М.Н. Ергачев // Сб. науч. работ. Мичуринск, 1971. - вып. 16. - С. 145 - 151.

98. Еремин, Г.В. Тетраплоидные межвидовые гибриды слив и перспективы их селекционного использования /Г.В. Еремин // Докл. ВАСХ-НИЛ. 1973. - №2. - С.12 - 13.

99. Еремин, Г.В. Отдаленная гибридизация в селекции сливы / Г.В. Еремин М.: Колос, 1977. 200с.

100. Ерёмин, Г.В. Отдаленная гибридизация и происхождение некоторых видов слив / Г.В.Ерёмин // Интродукция, отдаленная гибридизация растений, озеленение. Кишинев, 1986. - С. 55 - 63.

101. Еремин, Г.В. Слива / Г.В. Еремин, B.JI. Витковский М.: Колос, 1980.-254с.

102. Ш.Еремин, Г.В. Некоторые особенности индуцированных полиплоидов косточковых культур и их использование в селекции / Г.В. Еремин, Э.Г. Рассветаева // Докл. ВАСНИЛ. 1980. - №7. - С.18 - 20.

103. Еремин, Г.В. Достижения и задачи селекции косточковых культур / Г.В. Еремин, А.Н. Лейн // Интенсификация садоводства и виноградарства. 1981. - С.41 -46.

104. Еремин, Г.В. Тетраплоидные межвидовые гибриды терна / Г.В. Еремин, В.В. Ковалева // Проблемы и перспективы отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур: Тез. докл. и сообщ. . XX Мичуринских чтений. Мичуринск, 2000. - С.38.

105. Еремин, Г.В. Результаты изучения отдаленных гибридов косточковых / Г.В. Еремин, Э.Г. Рассветаева, B.C. Житков // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. -М., 1973.-С.138-141.

106. Жуков, О.С. Кариологические исследования отдаленных гибридов косточковых и действие гиббереллина на скрещиваемость / О.С. Жуков // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХ-НИЛ.-М.: Колос, 1970.-С.118 122.

107. Жуков, О.С. Цитологические исследования плодовых растений в связи с отдаленной гибридизацией и мутагенезом / О.С. Жуков // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. -М., 1973.-С. 113 117.

108. Жуков, О.С. Создание устойчивых к коккомикозу сортов вишни путем отдаленной гибридизации /О.С. Жуков // Селекционно-генетические проблемы развития садоводства в средней полосе Европейской части России. Мичуринск, 1995. - С. 61 - 64.

109. Жуковский, П.М. Культурные растения и их сородичи / П.М.Жуковский Л.: Колос, 1971. - 751 с.

110. Жученко, А.А. Адаптивная система селекции растений (эколого-генетические основы) /А.А. Жученко. М.: Изд-во РУДН, 2001. — Т.1. -780с, Т.2. - 708с.

111. Жученко, А.А. Роль растениеводства в век биологии и экономики знаний / А.А. Жученко // Вестник РАСХН. 2006. - №1. - С.З - 6.

112. Загорска, Н.А. Способность к регенерации в культурах тканей разного происхождения / Н.А. Загорска, З.Б. Шамина // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. С.158 - 162.

113. Здруйковская Рихтер, А.И. Получение сеянцев ранних сортов черешни путем воспитания зародышей на искусственной питательной среде / А.И. Здруйковская Рихтер // Бюл. Главного ботанического сада АН СССР. - 1955. - Вып.22 - С.56 - 67.

114. Здруйковская Рихтер, А.И. Воспитание зародышей «нежизнеспособных» семян плодовых растений / А.И. Здруйковская - Рихтер // Проблемы современной эмбриологии. - Л., 1956. — С.71 - 74.

115. Здруйковская Рихтер, А.И. Культура изолированных зародышей и некоторые другие приемы выращивания растений in vitro /А.И. Здруйковская - Рихтер // Методические рекомендации. - М.: ВАСХНИЛ, 1974. -62с.

116. Здруйковская Рихтер, А.И. Культура изолированных зародышей и генеративных органов как метод селекции плодовых растений /А.И. Здруйковская - Рихтер // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. - М.: Колос, 1979. - С.57 - 70.

117. Здруйковская Здруйковская - Рихтер, А.И. Культура зародышей in vitro и получение новых форм растений / А.И. Здруйковская - Рихтер // Автореф. дисс. д-ра биол. наук. - 1981. -33с.

118. Рихтер, А.И. Опыление и оплодотворение семяпочек в культуре in vitro / А.И. Здруйковская Рихтер, М.С. Бабасюк // Доклады АН СССР. -1974. - вып.218. - №6. - С.1482 - 1484.

119. Зубкус, Л.П. Культура зародышей и семян на искусственных питательных средах как метод интродукции декоративных растений Сибири / Л.П. Зубкус// Культура изолированных органов, тканей и клеток растений: Тр.1 Всес. конф. М.: Наука, 1970. - С. 45 - 47.

120. Зубов, А.А. Теоретические основы селекции земляники / А.А. Зубов. Мичуринск, 2004. - 195с.

121. Зыкин, В.А. Роль отдаленной гибридизации в создании высококачественных сортов пшеницы /В.А. Зыкин, Ю.В. Кол маков, И. А. Белан // Вестник РАСХН. 2004. - №1. -С. 47 - 49.

122. Ивановская, Е.В. Культура гибридных зародышей злаков на искусственной среде / Е.В. Ивановская // Докл. АН СССР. 1946. - Т.54. -№5. - С.449 -452.

123. Ивановская, Е.В. Структура семяпочек и природа полиэмбрионии у яблони сорта «Папировка» / Е.В. Ивановская // Науч. докл. высшей школы. Биологические науки. 1960. - №1. - С.99 - 102.

124. Иоффе, М.Д. Культура изолированных зародышей покрытосеменных растений на искусственной среде / М.Д. Иоффе, Г.Я. Жукова // Ботанический журнал. 1965. -Т.50. - №8. - С.1157 - 1182.

125. Искаков, А.Р. Селекционное изучение растений — регенерантов ячменя / А.Р. Искаков, Б.С. Сариев, А.К. Гапоненко // Селекция и урожай. 1988.-С.104-117.

126. Казаков, И.В. Перспективы селекции ремонтантной малины / И.В. Казаков // Вестник РАСХН. 2004. - №4. - С.42 - 45.

127. Казаков, И.В. Оптимизация метода клонального микроразмножения для ускорения селекции ремонтантных форм малины / И.В. Казаков,

128. B.В. Заякин, И.Я. Нам, В. В. Вовк // Использование биотехнологических методов для решения генетико-селекционных проблем: Докл. и сообщ. XVIII Мичуринских чтений. Мичуринск, 1998. - С.16 - 19.

129. Казьмин, Г.Т. Практические результаты отдаленной гибридизации в селекции плодовых культур на Дальнем Востоке / Г.Т. Казьмин // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1970. - С.26 - 33.

130. Казьмин, Г.Т. Селекция зимостойких сортов косточковых культур на Дальнем Востоке / Г.Т. Казьмин // Докл. советских ученых к XIX Меж-дунар. конгрессу по садоводству (Варшава). М.: Колос, 1974. - С.97 -100.

131. Калашникова, Е.А. Клеточная и тканевая биотехнология в селекции и растениеводстве / Е.А. Калашникова // Сельскохозяйственная биотехнология. М.: Высш. шк., 2003. - С.77 - 160.

132. Калинин, Ф.Л. Культура изолированных зародышей, как возможный путь переделки природы растений / Ф.Л. Калинин // Труды института физиологии растений. 1951. - вып.2. - С.153 - 192.

133. Калинин, Ф.Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии / Ф.Л. Калинин, В.В. Сарнацкая, В.Е. Полищук. Киев: Наукова думка, 1980.-488с.

134. Канделаки, Г.В. Отдаленная гибридизация и ее закономерности / Т.В. Канделаки. Тбилиси: Мецниереба, 1969. - 160с.

135. Капинос, Г.Е. О причинах нескрещиваемости Cerasus vulgaris и Cerasus Besseyi / Г.Е. Капинос // Изв. АН АССР. 1946. -вып.1. - №3.1. C.92-96.

136. Капинос,Г.Е. Эмбриологическое исследование Cerasus besseyi Bail /Г.Е. Капинос // Тр. Ботанического института АН АССР. 1949. - Т. 14. -С.123 -143.

137. Нб.Карпеченко, Г.Д. Теория отдаленной гибридизации / Г.Д. Карпе-ченко // Теоретические основы селекции растений. М.: Л.: Сельхозгиз, 1935.-T.I.-64с.

138. Картель, Н.А. Биоинженерия: методы и возможности /Н.А.Картель. Минск: Ураджай,1989. - 143с.

139. Катаева, Н.В. Клональное микроразмножение растений / Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко. М.: Наука, 1983. - 96с.

140. Кельрейтер, И.Г. Учение о поле и гибридизации растений / И.Г. Кельрейтер. М.: Сельхозгиз, 1940. - 246с.

141. Кефели, В.И. Рост растений / В.И. Кефели. М.: Колос, 1973. -120с.

142. Кильчевский, А.В. Влияние физических факторов на андрогенез у томата / А.В. Кильчевский, А.П. Ермишин, Т.В. Никонович, Е.В. Воронко-ва // Сельскохозяйственная биотехнология: Мат. междунар. науч. практ. конф. - Горки, 1998. - С.44 - 47.

143. Кирьян, Н.Г. Клеточная селекция клевера лугового на устойчивость к фузариозу / Н.Г. Кирьян, В.В. Мазин // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. I Всес. симпозиума. Пущино, 1991. - С.66 - 67.

144. Кичина, В.В. О межвидовых скрещиваниях в роде Malus / В.В. Кичина // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. -М.: Колос, 1970. С.68 - 71.

145. Клоконос, Н.П. Клональное микроразмножение ежевики и жимолости и перспективы его использования в Казахстане / Н.П. Клоконос // Садоводство и виноградарство. — 2004. №4. - С.14 - 16.

146. Ключарева, М.В. Цитоэмбриологическое изучение персика (Рег-sica vulgaris Mill) / М.В. Ключарева // Тр. Института генетики. М.: АН СССР, 1954. - №21. - С.150 - 178.

147. Кобель, Ф. Плодоводство на физиологической основе / Ф. Кобель -М., 1957.-374с.

148. Ковалев, Н.В. К изучению рода Prunus Focke / Н.В. Ковалев, К.Ф. Костина // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1935 -сер.8. - №4. - 75с.

149. Ковалев, Н.В. Терн в природе и селекции / Н.В. Ковалев // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции. 1973. -Т.50. - вып.2. - С. 178 -188.

150. Козлова, Н.А. Некоторые морфологические особенности развития генеративных органов и семян у вишни Латвийской Низкой / Н.А. Козлова //Ботанический журнал. 1960. - Т. 15. - №1. - С.84 - 89.

151. Козлова, Н.А. Влияние биологически активных веществ на морфогенез некоторых растений / Н.А. Козлова // Труды Бот. ин та им. Комарова. - 1962. - сер.7. - вып.5. - С.225 - 237.

152. Козлова, Н.А. Причины бессемянности вишни Латвийской /Н.А. Козлова, В.Т. Киеце // Изв. АН ЛССР. 1956. - Т.7 - С. 108 - 110.

153. Кокинг, Э.К. Генетическая трансформация посредством соматической гибридизации / Э.К. Кокинг // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - С.225 - 233.

154. Колесникова, А.Ф. Результаты селекции сливы за 40лет / А,Ф. Колесникова, Е.Н. Джигадло, Ю.И. Хабаров // Селекция и сортоизучение садовых культур. Орел, 1995. - С. 180 - 185.

155. Константинов, А.В. Эмбриология некоторых сортов яблони / А.В. Константинов // Изв. АН СССР: Сер. биол. 1960. - №2. - С.256 - 264.

156. Константинов, Ю.М. Возможный свободнорадикальный механизм возникновения сомаклональной изменчивости растений /Ю.М. Константинов, М.И. Ривкин // Молекулярные механизмы генетических процессов: Сб. докл.7. Всес. симпозиума. 1991. - С.166 - 185.

157. Константинова, JI.H. Эмбриологические причины опадения завязей сливы, терна и алычи / JI.H. Константинова // Бюл. ВНИИР им. Н.И. Вавилова. 1976. - вып.61. - С.64 - 66.

158. Кордюм, E.JI. Значение эмбриологии для решения вопросов систематики и филогении покрытосеменных растений / E.JI. Кордюм // Проблемы эмбриологии. Киев.: Наукова думка, 1971. - С.196 - 216.

159. Коробова, С.Н. Движение спермиев покрытосеменных растений в пыльцевой трубке и в зародышевом мешке / С.Н. Коробова // Актуальные вопросы эмбриологии покрытосеменных. JL: Наука, 1979. — С.5 - 19.

160. Костина, К.Ф. Отдаленная гибридизация косточковых плодовых растений / К.Ф. Костина, И.Н. Рябов // Докл. советских ученых к XVII Ме-ждунар. конгрессу по садоводству (Мэриленд, США). М.: Колос, 1966. — С.152 -159.

161. Котоман, Е.М. Изучение цитоэмбриологии культурной сливы / Е.М. Котоман // Биология оплодотворения и гетерозис культурных растений. Кишинев: Картя Молдовеняскэ, 1966. - вып.4. - С. 184 - 191.

162. Котоман, Е.М. Изучение некоторых вопросов эмбриологии культурной сливы / Е.М. Котоман // Биология оплодотворения, секция садоводство, виноградарство и виноделие: Мат. IV конф. молод, уч. Молдавии. — Кишинев, 1968. С. 17 - 21.

163. Котоман, Е.М. Цитоэмбриологическое исследование некоторых сортов вишни / Е.М. Котоман, В.В. Крылова // Селекция и сортоизучение плодовых и орехоплодных культур. Кишинев: Штиинца, 1973. - С.95 — 100.

164. Кравцов, П.В. Опыт применения культуры изолированных зародышей для преодоления стерильности отдаленных гибридов плодовых растений / П.В. Кравцов, В.Г. Касьянова // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. -Мичуринск, 1969. Т. 10. - С.236 - 244.

165. Кравцов, П.В. Опыт применения культуры изолированных зародышей в селекции плодовых растений / П.В. Кравцов // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М., 1970. — С.41 — 45.

166. Крен, М.В. Генетика и селекция овощных и садовых растений / М.В. Крен, У.Д. Лауренс. М.: Л.: Сельхозгиз, 1936. - 232с.

167. Крылова, В.В. Эмбриология яблони / В.В.Крылова Кишинев: Штиинца, 1981.- 148с.

168. Крючкова, В.А. Биотехнологические приемы оптимизации мик-роклонального размножения и адаптации генотипов сирени: В.А. Крючкова Автореф.дис.канд.с.-х. наук / -М.: 2005. -21с.

169. Кузнецова, О.И. Исследования растений регенерантов гороха (Pisum sativum L.) с помощью молекулярных RAPD и ISSR - маркеров

170. О.И. Кузнецова, О.А. Аш, Г.А. Хартина, С.А. Гостимский // Генетика. -2005. Т.41. - №1. - С.71 - 77.

171. Кулаева, О.Н. К вопросу о механизме действия кинетина на синтез белка / О.Н. Кулаева, И.П. Воробьёва // Физиология растений. 1962. -Т.9. - вып.1 - С.106 - 108.

172. Кунах, В.А. Изменчивость растительного генома в процессе де-дифференцировки и каллусообразования / В.А.Кунах // Физиология растений. 1999. - Т.46. - №6. -С.919 - 929.

173. Курсаков, Г.А. Опыт применения искусственной культуры зародышей при отдаленной гибридизации сливы / Г.А. Курсаков // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1967. - Т.9. - С. 120 - 125.

174. Курсаков, Г.А. Межродовая и межвидовая гибридизация плодовых культур и искусственная культура зародышей / Г.А. Курсаков // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1970. -С.123- 126.

175. Курсаков, Г.А. Исследования по отдаленной гибридизации и селекции сливы в ЦГЛ им. И.В. Мичурина / Г.А. Курсаков // Селекция и технология выращивания плодовых культур. М.: Колос, 1978. - С.108 - 115.

176. Курсаков, Г.А. Применение изолированной культуры зародышей и тканей при отдаленной гибридизации плодовых растений / Г.А. Курсаков // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979. - С.70 - 77.

177. Курсаков, Г.А. Отдаленная гибридизация плодовых растений / Г.А. Курсаков. М.: Агропромиздат, 1986. - 111с.

178. Курсаков, Г.А. Генетико-селекционные проблемы отдаленной гибридизации плодовых растений и пути их решения / Г.А. Курсаков // Генетика и наследование важнейших признаков плодовых растений. — Мичуринск, 1994. С.48 - 52.

179. Курсаков, Г.А. Изучение эмбриогенеза при межвидовых скрещиваниях в роде Prunus Mill / Г.А. Курсаков, Г.А. Седышева // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1971. - Т.12. - С.145 - 156.

180. Курсаков, Г.А. Изучение эмбриогенеза сливы сорта «Мичуринская» / Г.А. Курсаков, Л.А. Дубовицкая // Научные достижения в практику: Крат. тез. докл. науч. конф. - Тамбов, 1974. - С.З - 5.

181. Курсаков, Г.А. Аномалии цветков отдаленных гибридов сливы / Г.А. Курсаков, Н.М. Туровцева // Бюл. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1977. - вып.27. - С.З - 7.

182. Кучеренко, JI.A. Сомаклональные варианты и клеточная селекция риса / JI.A. Кучеренко // Биология культивируемых клеток и биотехнология. Новосибирск, 1988. - Т. 1. - С.5.

183. Кучеренко, JI.A. Подходы к разработке технологии массовой регенерации растений in vitro / JI.A. Кучеренко // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.232 - 242.

184. Кучеренко, JI.A. Каллусогенез и органогенез в культуре ткани различных сортов риса / JI.A. Кучеренко, Г.Г. Мамаева // Сельскохозяйственная биология. 1980. - №3. - С.384 - 386.

185. Кучеренко, JI.A. Использование методов биотехнологии в селекции риса /Л.А. Кучеренко, П.Н. Харченко, Е.Н. Ковалёва // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Мат. Всес. конф. Ленинград, 1986. - С.92 - 96.

186. Кучко, А.А. Культура изолированных пыльников картофеля / А.А. Кучко, И.М. Маруненко // Сельскохозяйственная биотехнология. — 1983. №5. - С.16 - 19.

187. Ларькина, Н.И. Преодоление барьера несовместимости между видами Nicotiana при использовании опыления in vitro /Н.И. Ларькина // Культура клеток растений: Тез. докл. III Всес. конф. Абовян,1979. -С.186.

188. Лебедев, В.А. Потенциальные возможности адвентивного органогенеза у различных сортов груши / В.А. Лебедев, В.И. Деменко, С.В. Долгов // Известия ТСХА, 2004. вып. 4. - С.81 - 87.

189. Левицкая, Л.И. О самоплодности некоторых сортов сливы / Л.И. Левицкая, Е.М. Котоман // Садоводство, виноградарство и виноделие в Молдавии. 1980. - №7. - С.21 - 24.

190. Лейке, Г.Использование культуры тканей и органов в селекции растений и производстве посадочного материала / Г. Лейке, Р. Лабес, К. Эртель, М. Петерсдорф. М.: Колос, 1980. - 77с.

191. Лизнев, В.Н. Использование межвидовых скрещиваний для получения полиплоидов яблони / В.Н. Лизнев // Генетика. — 1976. Т.12. - №8. -С.21 -29.

192. Линскенс, Г.Ф. Реакция торможения при несовместимом опылении и ее преодоления // Г.Ф. Линскенс // Физиология растений. 1973. -Т.20. - вып.1. - С. 192 - 203.

193. Литвак, А.И. Состояние и перспективы применения люминесцентной микро- и макроскопии в эмбриологии растений / А.И.Литвак // Половой процесс и эмбриогенез растений. М., 1973. — С.135.

194. Литвак, А.И. Люминесцентная макро- и микроскопия в исследованиях плодовых культур и винограда / А.И.Литвак. Кишинев: Штиинца, 1978.-112с.

195. Лихонос, Ф.Д. О происхождении сортов культурной яблони / Ф.Д. Лихонос // Генетика. 1968. - №3. - С.165 - 174.

196. Лобанов, Г.А. Роль повторных скрещиваний при отдаленной гибридизации яблони / Г.А. Лобанов // Селекция и технология выращивания плодовых культур. М.: Колос, 1978. - С.75 - 79.

197. Лукъяненко, П.П. Гибридизация отдаленных эколого-географических форм и проблема использования гетерозиса в селекции пшеницы / П.П. Лукъяненко // Вестник сельскохозяйственной науки. — 1967.-№3.-С.31-35.

198. Лунева, М.З. Преодоление стерильности гибридов Fi Nicotiana alata х N. glauca / М.З. Лунева // Отдаленная гибридизация и полиплоидия. М.: Наука, 1970. - С.235 - 244.

199. Лунева, М.З. Размножение ирисов методом культуры апикальных меристем /М.З. Лунева // Ботанический журнал. 1977. — вып.62. - №3. — С.416 - 421.

200. Магешвари, П. Эмбриология покрытосеменных / П. Магешвари. -М.: Иностранная лит., 1954. — 439с.

201. Мазур, A.M. Клональное микроразмножение восточных гибридов лилий /A.M. Мазур, Е.А. Калашникова // Сельскохозяйственная биотехнология: Мат. междунар. науч.- практ. конф. Горки, 1998. - С.93 - 96.

202. Майсурян, А.Н. Отбор клеток табака, устойчивых к высоким концентрациям аминокислот в среде / А.Н. Майсурян, Н.В. Хадеева, В.З. По-госов // Культура клеток растений: III Всес. конф. Абовян, 1979. — С.170.

203. Максимов, Г.Б. Влияние гиббереллина на рост каллусной ткани табака в суспензиальной культуре /Г.Б. Максимов, К.З. Гамбург, Г.П. Акимова, Л.А. Леонов // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. - С.203 - 204.

204. Малюкевич, М.П. Анатомо-морфологические и цитоэмбриологическое изучение сортов яблони разной степени плоидности / М.П. Малю-кевич // Автореф. дис. .канд.с-х. наук., 1981. 22с.

205. Мандрик, В.Ю. Цитоэмбриологическое исследование малины и ежевики обыкновенной / В.Ю. Мандрик, Ю.Ю. Петрус // Цитологические ицитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. -М.: Колос, 1973. С.79 - 89.

206. Мезенцев, А.В. Влияние генотипических особенностей люцерны на каллусообразование и соматический эмбриогенез при различных условиях культивирования тканей /А.В. Мезенцев, Н.А. Карелина // Генетика. — 1982.-Т.17.-С.999-1003.

207. Методические рекомендации по применению цитологических методов в плодоводстве /Н.П. Романова, Г.П. Шелаботин, В.Г. Леонченко, Н.П. Ханина, Б.В. Никольский, С.Л. Расторгуев, И.И. Туровский. М.: ВАСХНИЛ, 1988.-52с.

208. Михеев, A.M. Использование отдаленной гибридизации в селекции сортов и подвоев вишни на зимостойкость / А.М.Михеев // Бюл. НИИР им. Н.И. Вавилова. Л., 1982. - №123. - С.44 - 46.

209. Мичурин, И.В. Сочинения / И.В.Мичурин. М.: Сельхозгиз, 1948. -T.I. - 715с.

210. Модилевский, Я.С. Цитоэмбриология высших растений / Я.С. Модилевский. Киев: АН УССР, 1963. - 371с.

211. Моисеева, Н.А. Молекулярные и клеточные механизмы морфогенеза в культуре клеток растений / Н.А. Моисеева // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: 1991. - С. 166 - 185.

212. Морель, Ж. Борьба с вирусными болезнями растений с помощью культивирования тканей / Ж. Морель // Сельскохозяйственная биология. -1967. вып.2. - №4. - С.622 - 628.

213. Муратова, С.А. Культивирование in vitro и регенерация из соматических тканей сливы домашней / С.А. Муратова // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства: Мат. конф. Новочеркасск, 2005. — С. 107 — 116.

214. Муромцев, Г.С. Гиббереллины / Г.С. Муромцев, В.Н. Агнистико-ва. М.: Наука, 1984. - 208с.

215. Нестеров, Я.С. Использование генофонда плодовых и ягодных растений при отдаленной гибридизации / Я.С. Нестеров // Селекция и технология выращивания плодовых культур. М., 1978. - С.З - 9.

216. Никитина, Е.Д. Роль физических факторов в реализации морфо-генетического потенциала клеточных культур Т. aestivum / Е.Д. Никитина // Новые методы биотехнологии растений: Тез.докл. II Российского симпозиума. Пущино, 1993. - С. 159.

217. Ницше, В. Гаплоиды в селекции растений / В. Ницше, Г. Венцель. -М.: Колос, 1980.-127с.

218. Овчинников, Ю.А. Биотехнология и её место в научном и техническом прогрессе / Ю.А. Овчинников // Вестник АН СССР. 1982. - №4. -С.4-17.

219. Орлов, П.А. Темпы развития морфогенных структур в культуре пыльников пшеницы в зависимости от генотипа сорта / П.А. Орлов // Сельскохозяйственная биотехнология: Мат. междунар. науч. практ. конф. -Горки, 1998.-С.124- 128.

220. Ошмарина, В.И. Получение резистентных к NaCl и этионину клеточных линий Nicotiana sylvestuis и их характеристика / В.И. Ошмарина, З.Б. Шамина, Р.Г. Бутенко // Генетика. 1983. - №5. - С.822 - 827.

221. Павер, Дж.Б. Изолирование, культивирование и генетические манипуляции с протопластами растений / Дж.Б. Павер, Дж.В. Чепмен // Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат. - 1989. - С.52 -82.

222. Паушева, З.П. Практикум по цитологии растений / З.П. Паушева. -М.: Колос, 1970.-255с.

223. Пахомова, Н.П. Цитоэмбриологическое изучение яблоне — грушевых гибридов / Н.П.Романова // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. — М.: Колос, 1973. — С.109-113.

224. Першина, JI.A. Проблемы использования методов in vitro при отдаленной гибридизации злаков / JI.A. Паршина, В.К. Шумный // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. -С.102 - 114.

225. Петрова, К.А. О некоторых особенностях в развитии женского гаметофита представителей сложноцветных и злаков / К.А.Петрова // Бюл. главного ботанического сада АН СССР. 1951. -вып.9. - С.39 - 53.

226. Поддубная Арнольди, В.А. Значение эмбриологических исследований для построения филогенетических систем покрытосеменных растений / В.А. Поддубная - Арнольди // Проблемы ботаники. - 1958. - №3. -С.196 -247.

227. Поддубная Арнольди, В.А. Культура семяпочек некоторых орхидных на искусственной питательной среде /В.А. Поддубная — Арнольди // Доклады АН СССР. - 1959. - вып. 125. - № 1. - С.223 - 226.

228. Поддубная Арнольди, В.А. Цитоэмбриология покрытосеменных растений / В.А. Поддубная - Арнольди. - М.: Наука, 1976. - 507с.

229. Поддубная Арнольди, В.А. Цитоэмбриологическое исследование отдаленных гибридов в семействе злаков / В.А. Поддубная — Арнольди, И.А. Иванова // Бюл. Главного бот. Сада АН СССР. - 1970. - вып. 76. -С.38-41.

230. Поляков, А.В. Сомаклональная изменчивость у льна (Linum usita-tissimum L.) / А.В. Поляков, И. Рутковская Краусе // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда: Тез. докл. VII Междунар. конф. - М., 1997. - С.225.

231. Поляков, И.М. Три фазы процесса оплодотворения у цветковых растений / И.П. Поляков // Селекция и семеноводство. 1970. - №15. - С.З -12.

232. Попов, А.С. Значение криобанка клеток и меристем растений для их биотехнологического применения /А.С. Попов // Биотехнология. М.: Наука, 1984. - С. 254 - 260.

233. Попов, А.С. Криосохранение клеточных штаммов и меристем растений: влияние подготовки и криопротекторов / А.С. Попов, Л.А. Волкова, Т.М.А. Гонзалес и др. // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С. 260 - 270.

234. Попов, Ю.Г. Ускоренное размножение земляники с помощью метода культуры меристематической верхушки / Ю.Г. Попов // Сельскохозяйственная биология. — 1977. — вып. 12. №1. — С.45 — 47.

235. Попов, Ю.Г. Применение метода культуры меристематических верхушек в селекционной работе с земляникой / Ю.Г. Попов, А.С. Равкин // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. — М.: Колос, 1979. С.115 - 123. .

236. Потемкина, Г.А. Особенности формирования генеративной сферы у сортов вишни проявляющих женскую стерильность / Г.А.Потемкина // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. М., 1973. - С.74 - 79.

237. Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур. Мичуринск, 1980. - 530с.

238. Радионенко, А.Я. Цитоэмбриологическое наблюдение над гибридом Ribes nigrum х Grossularia reclinata /А.Я. Радионенко // Цитология и генетика. 1968. - Т.2. - №5 - С.466 - 469.

239. Рассветаева, Э.Г. Изучение отдаленных гибридов сливы / Э.П. Рассветаева// Автореф. дис.канд. с-х. наук. — 1970. — 23с.

240. Расторгуев, С.Л. Регенерация растений из изолированных соматических тканей земляники и малины /С.Л. Расторгуев // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур: Методические рекомендации. Мичуринск, 1996. - С.40 - 61.

241. Расторгуев С.Л. Регенерация растений и применение культуры тканей в селекции земляники / С.Л. Расторгуев, В.М. Тюленев // Аграрная наука. 2005. - №12. - С.16 - 19.

242. Рингерц, Н. Гибридные клетки /Н. Рингерц, Р. Сэвидж. М.: Мир, 1979.-415с.

243. Рожанская, О.А. Количественная изменчивость в популяциях со-маклонов и мутантов люцерны / О.А. Рожанская // Доклады РАСХН. -2006. -№1.-С.18-20.

244. Розанова, М.А. Межвидовая гибридизация в пределе родов Ribes, Rubus и Fragaria в связи с вопросами формообразования / М.А.Розанова // Изв. АН СССР. 1938. - №3. - С667 - 679.

245. Романов, И.Д. Типы развития зародышевого мешка покрытосеменных растений / И.Д.Романов // Проблемы эмбриологии. Киев: Науко-ва думка, 1971.-С.72 - 112.

246. Руденко, И.С. Отдаленная гибридизация и полиплоидия у плодовых растений / И.С. Руденко. Кишинев: Штиинца, 1978. - 164с.

247. Рудь, Г.Я. Эмбриональное развитие абрикоса / Г.Я. Рудь, Г.А. Ковшова // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. М.: Колос, 1973. - С.99 - 102.

248. Рыбин, В.А. Гибриды терна и алычи и проблема происхождения культурной сливы / В.А.Рыбин // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции. — 1936. №10. -сер 2. - 44с.

249. Рыбин, В.А. Цитологический метод в селекции плодовых / В.А. Рыбин. М.: Колос, 1967. - 216с.

250. Рябов, И.Н. Гибрид культурной яблони с айвой обыкновенной / И.Н.Рябов // Отдаленная гибридизация растений и животных: Науч. Тр. ВАСХНИЛ. М.: Колос, 1970. - С.49 - 54.

251. Рябов, И.Н. Межродовая гибридизация косточковых плодовых культур / И.Н. Рябов // Тр. Государственного Никитского ботанического сада. 1978. - Т.76. - С.7 - 70.

252. Савельев, Н.И. Андрогенез яблони в культуре in vitro / Н.И. Савельев, О.Я. Олейникова, О.С. Жуков // Сельскохозяйственная биология. -1999.-№3.-С.48-53.

253. Савельев, Н.И. Культура in vitro пыльников яблони: достижения и перспективы / Н.И. Савельев, О.Я. Олейникова // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях сельского хозяйства: Мат. конф. Новочеркасск, 2005. - С.42 - 47.

254. Савченко, М.И. Морфология семяпочек покрытосеменных растений / М.И. Савченко // Л.: Наука, 1973.- 1 Юс.

255. Сафразбекян, С.А. Роль сахарозы в регуляции морфогенеза каперса in vitro / С.А. Сафразбекян, В.В. Урманцев, Н.В. Катаева // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. -С.192 - 197.

256. Севостьянова, Л.А. Отдаленная гибридизация в селекции сливы в условиях Татарии / Л.А. Севостьянова // Бюл. ВНИИР им. Н.И.Вавилова. -1982.-№123.-С.21-23.

257. Седов, Е.Н. Роль полиплоидов в селекции яблони. / Е.Н.Седов, Г.А.Седышева- Тула, 1985. 144с.

258. Седышева, Г.А. Некоторые особенности эмбриогенеза при отдаленных скрещиваниях в подсемействе Prunoideae / Г.А.Седышева // I Всес. конф. молод, ученых по садоводству: Сб. докл. Мичуринск, 1969. - Т.2. -С.215 -219.

259. Седышева, Г.А. Некоторые особенности развития эндосперма при межвидовых скрещиваниях / Г.А.Седышева // Наука производству: Крат, тез. док. науч. конф. - Тамбов, 1970: - С.54 — 56. •

260. Седышева, Г.А. Состояние женской генеративной сферы у яблони в зависимости от степени плоидности / Г.А.Седышева // Селекция, сортои-зучение, агротехника плодовых и ягодных культур. Орел, 1982. - С.27

261. Седышева, Г.А. Формирование женского гаметофита у слива / Г.А. Селышева, Г.А. Курсаков // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1976. - Т.17. - С.ЗЗ - 38.

262. Сергеева, К.Д. Применение отдаленной гибридизации в селекции черной смородины / К.Д. Сергеева // Докл. советских ученых к XIX Меж-дунар. конгрессу по садоводству (Варшава). М.: Колос, 1974. - С.246 — 250.

263. Симиренко, Л.П. Помология / Л.П. Симиренко. Киев, 1963. -Т.З. — 555с.

264. Смирнов, А.С. Рост и метаболизм изолированных корней в стерильной культуре / А.С. Смирнов. М.: Наука, 1970. - 455с.

265. Смит, М.В. Эффективность соматического эмбриогенеза в клеточных суспензиях разных сортов и линий моркови / М.В. Смит, Н.А. Моисеева // Биология культивируемых клеток и биотехнология. Новосибирск, 1988.-С.250.

266. Солдатов, И.В. Основные результаты отдаленной гибридизации сливы домашней / И.В. Солдатов // Проблемы и. перспективы отдаленнойгибридизации плодовых и ягодных культур: Тез. докл. и сообщ. XX Мичуринских чтений. Мичуринск, 2000. - С.39 - 40.

267. Сорта плодовых и ягодных культур. М.: Сельхозгиз, 1953. -1008с.

268. Спицын, И.П. Оценка гибридов вишни и черешни на основе цито-эмбриологических исследований и культуры изолированных зародышей / И.П. Спицын // Наука производству: Тез. докл. науч. конф. - М., 1988. С.58.

269. Спицын, И.П. Генетика, цитология и эмбриология вишни. Экология / И.П. Спицын. Тамбов, 1994. - 108с.

270. Спицын, И.П. Цитоэмбриологические, генетические и экологические исследования продуктивности вишни / И.П. Спицын. — Тамбов, 2001. -214с.

271. Спицын, И.П. Проблемы эмбриологии, цитологии, селекции, генетики и экологии в исследованиях на вишни / И.П. Спицын. Тамбов, 2002. - 350с.

272. Спицын, И.В. Культура изолированных зародышей как один из методов биотехнологии / И.В. Спицын, М.В. Коновалова // 8-ой Междунар. семинар совещание фитофизиологов. - Тамбов, 2001. — С.121 — 123.

273. Спицын, И.П. Цито-эмбриологические исследования женских га-метофитов у вишни, черешни и вишне черешневых гибридов. / И.П. Спицын, А.В. Гугнявых, Д.И. Спицын // Державинские чтения. - Тамбов, 2000.- С.84.

274. Суркова, Л.И. Эмбриологическое исследование сливы Венгерки итальянской / Л.И. Суркова, К.П. Скипина // Сб. науч. работ Сочинской опыт, станции субтропических и плодовых культур. 1963. - С.143 - 152.

275. Суркова, Л.И. Эмбриология некоторых сортов сливы / Л.И. Суркова, К.П. Скипина // Науч. докл. высшей школы. Биологические науки. -1966.-№3.-С.124-127.

276. Татаринцев, А.С. Рост пыльцевых трубок в столбике при некоторых межродовых скрещиваниях / А.С. Татаринцев // Тр. Плодоовощного института им. И.В. Мичурина. 1948. - Т.5. - С.27 - 75.

277. Терновский, М.Ф. Получение межвидовых гибридов табака путем опыления семяпочек in vitro / М.Ф. Терновский, И.К. Шынкарева, Н.И. Ларькина//Генетика. 1976. -Т.П.- № Ю.-С. 40-45.

278. Тиссера, Б. Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений / Б. Тиссера // Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат, 1987.-С.97- 127.

279. Тихонов, Н.Н. Селекция сливы на Красноярской опытной станции плодоводства / Н.Н. Тихонов, А.С. Толмачев // Селекция и технология выращивания плодовых культур. М.: Колос, 1978. - С. 137 - 142.

280. Толмачев, А.С. Селекция сливо вишневых гибридов в Красноярске / А.С. Толмачев // Науч. чтения памяти академика М.А. Лисавенко. -Барнаул, 1974. - вып.5. - С.84 - 91.

281. Трофинец, Л.Н. Биотехнология в семеноводстве картофеля /Л.Н. Трофинец// Биотехнология в картофелеводстве: Науч. труды. М.,1991.- С. 3 - 12.

282. Туманов, И.И. Повышение морозостойкости культуры каллусной ткани ели путем вымораживания менее устойчивых клеток / И.И. Туманов, Р.Г. Бутенко, И.В. Оголевец, В.В. Сметюк // Физиология растений. — 1977. Т.24. - вып.5. - С.895 - 900.

283. Туровская, Н.И. Регулирование процесса ризогенеза при микроразмножении яблони / Н.И. Туровская // Микроразмножение растений в промышленном плодоводстве и цветоводстве: Сб. науч. тр. — Мичуринск, 1989.-С.8-13.

284. Туровцева, А.Г. Цитоэмбриологическое изучение отдаленных гибридов сливы / А.Г. Туровцева // Науч. докл. высшей школы. Биологические науки. 1965. -№1. С. 112- 116.

285. Туровцева, А.Г. Предварительная эмбриологическая характеристика отдаленных гибридов подсемейства Prunoideae / А.Г. Туровцева // Ботанический журнал. 1965а. - №3. - Т.50. - С.381 - 384.

286. Туровцева, А.Г. Применение цитоэмбриологического метода в изучении отдаленных гибридов сливы / А.Г. Туровцева // Отдаленная гибридизация растений и животных: Реферативное обозрение. М., 1968. -С.108 - 109.

287. Тюленев, В.М. Индукция морфогенеза из изолированных соматических тканей яблони и груши / В.М. Тюленев // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур: Методические рекомендации. Мичуринск, 1996. - С.4 - 23.

288. Тюленев, В.М. Сомаклональная изменчивость земляники / В.М. Тюленев, Н.В. Соловых // Биотехнология. 1999. - №2. - С.34 - 40.

289. Уайт, Ф.Р. Культура растительных тканей /Ф.Р. Уайт. М.: Иностранная литература, 1949. - 159с.

290. Удачина, Е.Г. Исследование роста пыльцевых трубок в пестике вишни методом люминесцентной микроскопии / Е.Г. Удачина, В.А. Поддубная Арнольди, Х.К. Еникеев // Бюл. Главного ботанического сада АН СССР. - 1976. - вып. 101. - С.85 - 94.

291. Уизерс, JI.A. Криосохранение и хранение генофонда / JI.A. Уизерс // Биотехнология растений: культура клеток. М.: Агропромиздат, 1989. -С. 204-233.

292. Уильяме, У. Генетические основы и селекция растений / У. Уильяме М.: Колос, 1968. - 48с.

293. Ульянищев, М.М. Селекция абрикоса на юге Воронежской области / М.М. Ульянищев // Селекция косточковых культур. М., 1956. - С. 163 -192.

294. Упадышев, М.Т. Клональное микроразмножение некоторых нетрадиционных культур рода Rubus / М.Т. Упадышев // Ягодоводство в Нечерноземье. М., 1993. - С.10 - 18.

295. Упадышев, М.Т. Об использовании флоридзина при микроразмножении садовых растений / М.Т. Упадышев, Э.М. Дроздовский // Сельскохозяйственная биология. 2003. - №1. - С.87 - 92.

296. Федорова, Н.Я. Межвидовая и внутривидовая гибридизация земляники и ее значение для селекции / Н.Я. Федорова // Тр. По прикладной ботанике, генетике и селекции. 1935. - №5. - серия А. - С.101 - 110.

297. Финаев, Е.П. Селекция вишни и сливы в Среднем Поволжье / Е.П. Финаев // Селекция плодовых и ягодных культур на ежегодную урожайность и зимостойкость. -М.: Сельхозгиз, 1961. — С. 187 — 196.

298. Фоменко, Т.И. Сомаклональная вариабельность в культуре ткани картофеля / Т.И. Фоменко, И.П. Кондрацкая, И.М. Чумакова // Сельскохозяйственная биотехнология: Мат. междунар. науч. практ. конф. - Горки, 1998.-С.167-170.

299. Френкель, Р. Механизм опыления, размножения и селекция растений / Р. Френкель, Э. Галун М.: Колос, 1982. - 384с.

300. Харитонова, Е.Н. Вишне черешневые гибриды / Е.Н. Харитонова // Отдаленная гибридизация растений и животных: Вопросы плодоводства, лесоводства и животноводства. - М.: АН СССР, 1960. - С.45 - 58.

301. Харитонова, Е.Н. Цитологическое изучение вишне черешневых гибридов / Е.Н. Харитонова // Цитологические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. - М., 1973. - С. 147 - 154.

302. Харитонова, Е.Н. Проращивание зародышей вишни на питательной среде / Е.Н. Харитонова, И.П. Спицын // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. 1962. - Т.8. - С.73 - 77.

303. Харченко, П.Н. ДНК технологии в развитии агробиологии / П.Н. Харченко, В.И. Глазко. - М.: Воскресенье, 2006. - 480с.

304. Хасси, Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro / Г. Хасси // Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропром-издат, 1987.-С, 105- 133.

305. Хеншоу, Г.Г. Методы in vitro для сохранения и использования мирового генофонда растений / Г.Г. Хеншоу, Дж. Ф.О. Хара //Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987.-Р. 205-224.

306. Хомукова, Ф.Н. Регенерация растений земляники малины из эксплантов различного происхождения / Ф.Н. Хомукова // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. 1996. - 18с.

307. Хромова, Л.М. Влияние условий выращивания исходных растений картофеля на выделение протопластов и их жизнеспособность / Л.М. Хромова, Г.В. Седнина, Р.Г. Бутенко // Сельскохозяйственная биология. — 1984. -№11.-С.41 -45.

308. Хромова, Л.М. Клеточная селекция картофеля / Л.М. Хромова, Г.В. Седина, Р.Г. Бутенко и др. // Сельскохозяйственная биология. 1983. -№6. - С.З - 12.

309. Худяк, М.И. Цитоэмбриологические основы явления несовместимости при отдаленной гибридизации покрытосеменных растений / М.И. Худяк, В.П. Банникова // Цитология и генетика. 1968. - №2. - С. 152 — 164.

310. Цингер, Н.В. Каллозные пробки пыльцевых трубок, пути их возникновения и физиологическая роль / Н.В. Цингер, Т.П. Петровская Баранова // Физиология растений. - 1967. - №3. - Т.14. - С.477 - 485.

311. Цицин, Н.В. Отдаленная гибридизация растений / Н.В. Цицин. — М.: Наука, 1978.-71с.

312. Челак, В.Р. Прогамная фаза оплодотворения при внутри и межвидовом опылении видов рода Triticum L.I В.Р. Челак // Эмбриология и анатомия репродуктивных и вегетативных органов семенных растений. — Кишинев: Штиинца, 1986. - С.52 - 66.

313. Черненко, С.Ф. Полвека работы в саду. / С.Ф. Черненко. М.: Сельхозгиз, 1957. - 504с.

314. Чувашина, Н.П. Цитогенетика и селекция отдаленных гибридов и полиплоидов смородины. / Н.П. Чувашина. — Л.: Наука, 1980. 120с.

315. Чувашина, Н.П. Эмбриологические особенности полиплоидов в роде Ribes LJ Н.П. Чувашина, Г.П. Шелаботин // Цитогенетические и цитоэмбриологические методы в селекции плодовых и ягодных культур. -М., 1973.-С.155- 165.

316. Шамина, З.Б. Оптимизация питательной среды для культуры ткани Vicia faba / З.Б. Шамина, Р.Г. Бутенко // Физиология растений. 1976. -вып.23. - №6. - С. 1264 - 1266.

317. Шевелуха, B.C. Проблемы и перспективы новой биотехнологии в селекции и растениеводстве / B.C. Шевелуха // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Мат. Всес. конф. Ленинград, 1986. — С.23 -28.

318. Шевелуха, B.C. Биотехнология в селекции растений / B.C. Шевелуха // Новые методы биотехнологии растений: Тез. док. II Российского симпозиума. -Пущино, 1993.-С. 101.

319. Шевелуха, B.C. Применение достижений биотехнологии и биоинженерии в агропромышленном производстве / B.C. Шевелуха // Сельскохозяйственная биотехнология. М.: Высш. шк., 2003. С.420 - 433.

320. Шелаботин, Г.П. Макроспорогенез и развитие женского гаметофита у некоторых аллополиплоидных форм в роде Ribes L. / Г.П. Шелаботин // Тр. ЦГЛ им. И.В. Мичурина. Мичуринск, 1971. - Т.12. - С.204 -209.

321. Шелаботин, Г.П. Устройство, повышающее качество цитологических препаратов и производительность при их приготовлении / Г.П. Шелаботин, Б.В. Никольский, С.Л. Расторгуев // Научные достижения производству: Тез. докл. науч. конф. - М., 1987. — С.71 - 72.

322. Шинкарева, И.К. Амфиплоиды рода Nicotiana, полученные методом культуры тканей / И.К. Шинкарева // Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986. - С. 188 - 192.

323. Шуман, У. Выделение, культивирование и слияние протопластов различных видов картофеля /У. Шуман, X. Коблиц// Культура клеток растений: Тез. докл. Абовян, 1979. - С.104 - 105.

324. Щеглов, Н.И. Применение метода'культуры зародышей в селекции косточковых / Н.И. Щеглов // Докл. АН СССР. 1973. - Т.208. - №4. -С.998 - 999.

325. Щеглов, Н.И. Методы культуры зародышей в генетико-селекционном изучении косточковых растений / Н.И. Щеглов // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979. - С.85 - 93.

326. Якимов, Л.М. Использование люминесцентной микроскопии при изучении опыления винограда / Л.М. Якимов, Ю.Г. Прикоп, Т.В. Малтабар // Половой процесс и эмбриогенез растений. М., 1973. - С.288 - 289.

327. Яковлев, М.С. Эмбриогенез и его значение для филогении растений / М.С. Яковлев. М.: Л.: АН СССР, 1960. - 40с.

328. Яковлев, С.П. Разработка способов культивирования недоразвитых зародышей и завязей груши / С.П.Яковлев, А.В.Кожин, Е.Н. Луткова и др. // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979. - С.93 - 99.

329. Яцына, А.А. Использование культуры изолированных пыльников в селекции сорго / А.А. Яцына, Б.Н. Малиновская, А.С. Казакова // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Мат. Всес. конф. Ленинград, 1986. - С.107 - 108.

330. Adamson, D. Expansion and division in anxin treated plant cells / D. Adamson // Can. J. Bot. - 1962. - vol. 40. - P. 719 - 740.

331. Ahloowalia, B.S. Transmission of somaclonal variation in wheat / B.S.Ahloowalia, J. Sherington // Euphytica. 1985. - vol. 34. - P. 525 - 537.

332. Alderman, W.H. An analysis of the breeding value of certain plum varieties / W.H. Alderman, E. Angelo // Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 1935. - vol. 23.-P. 351 -356.

333. Alderman, W.H. New fruits produced at the University of Minnesota fruit breeding farm / W.H. Alderman // Bull. Minn. Agr. Exp. Stat. 1926. -vol. 230-p. 3-47.

334. Anderson, H.M. Micro propagation of strawberry plants in vitro - effect of growth regulators on incidence of multi - apex abnormality / H. M. Anderson, A.J. Abbott, S. Wiltshire // Sci. Hort. - 1982. - vol. 16. - P. 331 -341.

335. An van, S. F. Untersuchungen tiber das Pollenschlauchwachstum und die Entwicklung der Samenanlagen in Bezehung sum Fruchtansatz bei Sauerkir-schen {Prunus cerasus ) / Anvari S.F. // Diss . Hohenheim, 1977. 105 s.

336. Агпоп, D.I. Microelements in culture solution experiments with higher plants / D. I. Arnon // Amer. J. Bot. - 1938. - vol. 25. - P. 322 - 325.

337. Ball, E. Studies of the nutrition of the callns culture of Sequoia sem-pervirens / E. Ball // Ann.Biol. 1955. - vol. 31. - № 3. - P. 80 - 105.

338. Bernhard, R. Le Pecher Amadier et son utilization / R. Bernhard // Rev. Hort.-Paris, 1949.-vol. 121.-P. 97-101.

339. Blasse, W. Zur Erblichkeitsanalyse von Artbastarden zwischen Prunus cerasus L und Prunus avium L. / W. Blasse // Arch. Gartenbau. 1957. - Bd. 5. - № 2. - S. 104-172.

340. Bonner, J. Cultivation in vitro of excised pea roots / J. Bonner, F. Ad-dicott // Bot. Gaz. 1937. - vol. 99 - P. 144 - 170.

341. Bonner, J. Thiamin (vitamin Bl) and the growth of roots: the relation of chemical structure to physiological activity / J. Bonner // Amet. J. Bot. -1938.-vol. 25.-P. 543-549.

342. Bourgin, J.P. Obtention de Nicotiana haploids a partir detamines cultives

343. Boxus, P. La "micropropagation", procede industriel de multiplication rapide du fraisier / P. Boxus, // Fruit beige. 1977. - vol. 45. - № 378. - p. 120124.

344. Boxus, P. The production of strawberry planst by in vitro micropropagation / P.Boxus // J. Hort. Science. 1974. - vol. 49 - P. 209 - 210.

345. Brewbaker, J.L. Pollen cytology and self incompatibility systems in plants / J. L. Brewbaker // Heredity. - 1957. - vol. 48. - № 6. - P. 271 - 277.

346. Brink, R.A. The endosperm in seed development / R.A. Brink, D.C. Cooper // Bot. Rev. 1947. - vol. 13. - № 8-9. - P. 423 - 541.

347. Brock, R.D. Hormone induced pear - apple hybrids / R.D. Brock // Heredity. - 1954. - № 8. - P. 421.

348. Broome, O.C. In vitro propagation of blackberry / O.C. Broome, R.H. Zimmerman // Hort. Sci. 1978. - vol. 13. - № 2. - P. 151 - 153.

349. Bruisma, J. Effects of auxins and cytokinins on the growth of discs of parenchymous tissues / J. Bruisma // Acta Bot. Neerl. 1967. - vol. 16 - № 4 -P. 153 - 155.

350. Bulard, C. Cultures aseptiques de plantules de Ble separees de l'albu-men: action de l'acide gibberellique / C.Bulard // C.R. Acad. Sci. 1960. - vol. 250. - №22.-3716-3718.

351. Btinning, E. Photoperidische Reaktionen und pflanzlichen Gewebekul-turen / E. Burning, H. Welt // Physiol. Plantarum. 1954. - b. 7. - S. 453 - 454.

352. Carlson, P.S. Parasexual interspecific plant hybridization / P.S. Carlson, H.H. Smith, R.D. Dearing // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1972. - vol. 69. - P. 2292 - 2294.

353. Chandler, F.B. Fertilizen requirement of cranberry plants / F.B. Chandler, W.J. Golby // Moss. Bull. 1951. - P. 466.

354. Choi, J.H. Cloning of genes developmentally regylated during plant embryogenesis / J.H. Choi, Z. S. Lin, Z. R. Sung // Proc. Nat. Acad. Sci. US. -1987. - vol. 84. - P. 1906 - 1910.

355. Christianson, M.L. Phenocritical times in the process of in vitro shoot organogenesis / M.L. Christianson, D.A. Warnick // Ibid. !984. - vol. 101. - P. 382-390. - - •

356. Clements, R. The prospects for sweet cherries // R. Clements // Hort. Industry. 1977. - P. 691 - 692.

357. Cocking, E.C. A method for the isolation of plant protoplasts and vacuoles / E.C. Cocking // Nature. 1960. - vol. 187. - p. 962 - 963.

358. Cocking, E.C. Parasexual reproduction in flowering plants / E.C. Cocking // New Zealand J. Bot. 1979. - vol. 17. - P. 665 - 671.

359. Collins, G.B. Culture of embryos / G.B. Collins, J. W. Grosser // Cell culture and somatic cell genetics of plants. L.: Acad. Press, 1984. - P. 241 -257.

360. Cooper, D.C. Somatoplastic sterility as a cause of seed tailure after interspecific hybridization / D.C. Cooper, R.A. Brink // Genet. 1940. - vol. 25. -№6.-P. 593-617.

361. Crane, M.B. Pear apple hybrids / M.B. Crane, E. Marks // Nature. -1952.-vol. 170.-P. 10-17.

362. Crane, M.B. Studies in relation to sterility in plums, cherries, apples and raspberries / M.R. Crane // Mem. Hort. Soc. 1927. - vol. 3. - P. 119 - 134.

363. Czech, H. Kultur von pflanzlichen Gewebezellen / H. Czech // Arch, exptl. Zellforsch. 1927. - Bd. 3. - S. 176 - 200.

364. Dallessandro, G. Interaction of auxin, cytokinin and gibberellin on cell division and xylen differentiation in cultured explants of Jerusalem artichoke / G. Dallessandro // Plant Cell Physiol. 1973. - vol. 14. - № 6. - P. 1167 - 1176.

365. Darlington, C.D. Primary and secondary chromosome balance in Pyrus / C.D. Darlington, A.A. Moffet // J. Genet. 1930. - vol. 22. - № 2. - P. 129 -151.

366. Darlington, C.D. Studies in Prunus. 1 and 2 / C.D. Darlington // J. Genet. 1928. - vol. 19. - P. 65 - 93.

367. Dhaliwal, S. Direct pollination of Zea mays ovules in vitro woth Z. mays, Z. Mexicana and Sorghum bicolor pollen / S. Dhaliwal, P.J. King // Theor. And Appl. Genet. 1978. - vol. 53. - P. 43 - 46.

368. Dodds, T. Experiments in plant tissue culture / T. Dodds, L. Roberts // Cambridge Univ. press. 1985. - 232 p.

369. D'Onofrio, C. Simultaneous regeneration of different morphogenic stuctures from quince leaves as affected by growth regulator combination and treatment length / C. D'Onofrio, S. Marini // Biol. Plant. 2003. - vol. 47. - № 3 -P. 321-325.

370. Dorsey, M.D. A study of sterility in the plum. / M.D. Dorsey// Agricultural Experiment Station of the University of Minnesota. 1919. - vol. 19. -P. 429-489.

371. Drain, B.D. Inheritance in black raspberry species / B.D. Drain // Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 1956 - vol. 68. - P. 169 - 170.

372. Dure, L.S. The in influence of gibberellic acid and indolelacetic acid on cotton embryos cultured in vitro / L.S. Dure, W.A. Jensen // Bot. Gaz. -1957. vol. 118. - № 4. - P. 254 - 261.

373. East, E.M. A new interpretation of the hereditary behaviour of self-sterill / E.M. East, A.J. Mangelsdort // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1925. - vol.11.-№2.-P. 166-171.

374. East, E.M. Self sterility / E.M. East // Genet. - 1929. - vol. 5. - P. 331 -370.

375. Eaton, G.W. Asstudy of megagametophyte in Prunus avium and its relation to fruit setting / G.W. Eaton // Canad. J. PL Sci. 1959. - vol. 39. - № 4. -P. 466-476.

376. Elssmann, E., Beitrage zur Frag Hach den Befruchtungsferhaltnissen der fur Deutschlandwirtschaftlich wertvollsten Kern Stein und Beerenobstsor-ten / E. Elssmann, R. V. Ven // Gartenbauwiss. - 1931. - S. 1 - 54.

377. Evans, D.A. Somaclonal and gametoclonal variation / D.A. Evans, W.R. Sharp, H.P. Medina Filho // Am. J. Bot. - 1984. - vol. 71. - P. 759 -774.

378. Evans, D.A. Somaclonal variation genetic basis and breeding applications / D.A. Evans // Trends in Genet. - 1989. - vol. 5. - № 2 - P. 45 - 50.

379. Fasolo, F. Adventitious shoot formation on excised leaves of in vitro grown shoots of apple cultivars / F. Fasolo, R.H. Zimmerman, I. Fordham // Plant Cell, Tissus Organ Cult. 1989. - vol. 16. - № 2 - P. 75 - 87.

380. Flin, B.S. The role of cell clusters and promeristomounds in determination and competence for caulogenesis by Pinus strobus cotuledons in vitro / B.S. Flin, D.T. Webb, W. Newcamb // Canad. J. Bot. 1988 vol. 66. - P. 1556 -1565.

381. Fonnesbech, A. in vitro propagation of Monstera dolicuosa / A. Fon-nesbech, M. Fonnesbech // Hort. Sci. 1980. - vol. 15. - P. 740 - 741.

382. Fry, S.C. Gibberellin sensitive suspension cultures / S.C. Fry, H.E. Street // Plant Physiol. - 1980. - vol. 65. - № 3. - P. 97 - 112.

383. Galiga, G. Substitution analysis of plant regeneration from callus culture in wheat / G. Galiga, G. Kovacs, J. Sutka // Plant Breeding. 1986. - vol. 97.-P. 261-263.

384. Galligar, G.C. Growth behavior of one millimeter excised root tips / G.C. Galligar // Plant Physiol. - 1939. - vol. 14. - P. 163 - 169.

385. Galston, A.W. Auxin activity of isatin and oxindole 3 - acetic acid / A.W. Galston, H.R. Chen // Plant Physiol. - 1965. - vol. 40. - № 4. - P. 699 -705.

386. Gamborg, O.L. Culture methods and detection of glucanases in cultures of wheat and barley / O.L. Gamborg, D.E. Eveligh // Can. J. Biochem. -1968. vol. 46.-№ 5. - P. 125 - 128.

387. Gamborg, O.L. Nutrient requirements of suspension cultures / O.L. Gamborg, R.A. Miller, K. Ogima // Exptl. Cell. Res. 1968. - vol.50 - № 1 - P. 151 - 158.

388. Gamborg, O.L. Plant tissue culture media / O.L. Gamborg, T. Mura-shige, T.A. Thorpe, I.K. Vasil // In vitro. 1976. - vol. 12. - № 7. - P. 473 -478.

389. Gautheret, R.J. Culture du tissue cambial / R.J. Gautheret // C.R. Acad. Sci. 1934. - T. 198. - P. 2195 - 2196.

390. Gautheret, R.J. La culture des tissus vegetaux. Technique et realisations / R.J. Gautheret. Paris: Masson et Cie, 1959. - 864 p.

391. Gautheret, R.J. Sur la culture d' extremites de racines / R.J. Gautheret // Compt. Rend. Soc. Boil. 1932. - T. 109. - P. 1236 - 1238.

392. Gautheret, R.J. Sur la culture du tissue cambial de Carotte / R.J. Gautheret // Compt. Rend. Soc. Boil. 1940. - T. 134 - P. 398 - 399.

393. Gautheret, R.J. Sur la possibilite de realiser la culture indefinite des tissus de tubercule de carotte / R.J. Gautheret // C.R. Acad. Sei. 1939. - vol. 208.-№ l.-P. 118-120.

394. Gorczynski, T. Untersuchungen uber die Entwicklung der Samenanla-ge und dess Embryosackes bei der Apfelsorte, "Schoner von Boskoop" / T. Gorczynski // Acta Soc. Bot. Polon. 1934. - Bd. 87. - S. 83 - 108.

395. Graig, I. Haploid Plants (2n = 21) fromin in vitro Anther culture of Triticum aestivum /1. Graig // Can. J. Genet. Cytol. 1974. - vol. 16. - P. 697 -700.

396. Guha, S. In vitro production of embryos from anthers of Datura / S. Guha, S.C. Maheshwari // Nature. 1964. - vol. 204. - P. 497 - 498.

397. Gunter, E. Fruhreife Erdbeeren nach Kreuzung mit Fragaria platype-tala. Rybd/ E. Gunter // Zuchtung. 1958. - Bd. 28. - № 3. - S. 144 - 146.

398. Gupta, G.R.P. Differentiation of buds from leaves of Nicotiana ta-bacum Linn. In sterile culture / G.R.P. Cupta, S. Guha, S.C. Maheshwari // Phy-tomorphology. 1966. - vol. 16. - № 2 - P. 175 - 182.

399. Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen / G. Haberlandt // Sitzungsber. Akad. der Wiss., Wien, Math. Wiss. Reine. 1902. -Bd.lll.-S. 69-92.

400. Hansen, N.H. The relative value of homozygous and heterozygous, parents in the breeding of the apple, plum, cherry,grape and other fruits / N.H. Hansen // Bull. S. Dak. Agr. Exp. Stat. 1928. - vol. 2. - P. 12 - 24.

401. Hari, V. Effects of cell density changes and conditioned on carrot cell embryogenesis / V. Hari // J. Plant Physiol. 1980. - vol. 96. - P. 227 - 233.

402. Heller, R. De quelques composes du soufre assimilables par les tissues vegetaux cultives in vitro / R. Heller // C.R. Acad. Sci. 1955. - vol. 241. - P. 234 - 236.

403. Heller, R. Recherches sur la nutrition minerale des tissus vegetaux cultives in vitro / R. Heller // Bot. Biol. Et Veget. 1953. - vol. 14. - P. 1 - 223.

404. Henderson, J.H.M. The changing nutritional pattern from normal to habituated sunflower callus tissue in vitro / J.H.M. Henderson // Annee biol. -1954.-vol. 30.-P. 329-348.

405. Hicks, G.S. Pattern of organ development in plant tissue culture and the problem of organ determination / G.S. Hicks // Bot. Rev. 1980. - vol. 46. -P. 1-23.

406. Hildebrandt, A.C. Influence of concentrations of sugars and polysaccharides on callns tissue growth in vitro / A.C. Hildebrandt, A.J. Riker // Amer. J. Bot. 1953. - vol. 40. - № 1. P. 66 -76.

407. Hodges, Т. K. Genotype specificity of somatic embryogenes and regeneration in maize / Т.К. Hodges, K.K. Kato, C.W. Imbrie, M.R. Becwar // Biothechnology. 1986. - vol. 4 - P. 219 - 223.

408. Hofer, M. Erzeugung von haploiden und DH Material bei Apfel / M. Hofer, C. Grafe // Erwerbs - Ostbau. - 1999. - B. 41. - H. 4. - S. 143 - 148.

409. Hughes, M.B. Self incompatibility in Crepis foetida L. / M.B. Hughes, E.B. Babcock // Genet. - 1950. - vol. 35. - P. 570 - 588.

410. Ingram, C. A peach almond hybrid /С. Ingram // J. Roj. Hort. Soc. -1970. - vol. 95. - № 9. - P. 414.

411. James, D.J. Factors affecting high frequency plant regeneration from apple leaf tissues cultured in vitro / D.J. James, A.J. Passey, E. Rugini // J. Plant Physiol. 1988. - vol. 132. - № 2. - P. 148 - 154.

412. Johanson, D.A. Plant embryology / D.A. Johanson // Waltham. Mass.- 1950.-305 p.

413. John, B.M. Embryology and taxonomy / B.M. Johri // Recent advances in the embryology of angiosperms. Delhi, 1964. - P. 395 - 444.

414. Jones, L.H. Propagation of clonal oil palms by tissue culture / L. H. Jones // Oil Palm News. 1974. - vol. 17 - P. 1 - 8.

415. Jones, O.P. Effect of benzyl adenine on apple shoots / O.P. Jones // Nature. 1967. - vol. 215. - P. 1514 - 1515.

416. Jones, O.P. Effect of phloridzin and phloroglucinol in apple shoots / O.P. Jones // Nature. 1976. - vol 262. - P. 392 - 393.

417. Jones, O.P. Effects of cytokinins in xylem sap from apple trees on apple shoot growth / O.P. Jones // J. Hort. Sciv. 1973. - vol. 48. - P. 181 - 188.

418. Jones, O.P. The production of strawberry plants from callus cultures / O.P. Jones, B.J. Waltes, M.G. Beech // Plant Cell Tissue Cult. 1988. - vol 12. -№3.-C. 235-241.

419. Jones, R.W. Hybridization of apricot x almond / R.W. Jones I I Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 1968. - vol. 92. - P. 29 - 33.

420. Kanta, K. Test tube fertilization in a flowering plant / K. Kanta, N.S. Ranga Swamy, P. Maheshwari // Nature. 1962. - vol. 194. - P. 1214 - 1217.

421. Kao, K.N. A method for high frequency intergenetic fusion of plant protoplasts / K.N. Kao, M.R. Michayluk // Planta. - 1974. - vol. 115. - № 4. - P. 355-367.

422. Kao, K.N. Nutrient requirements for growth of Vicia hajastana cells and protoplasts at a very low population density in liquid media / K.N. Kao, M.R. Michayluk // Planta. 1975. - vol. 126. - № 2. - 105 - 110.

423. Kataoka, I. Interspecific hybridization between Microcerasus and other Prunus sp. /1. Kataoka, A.Sugiura, T. Tomana // J. Japan. Soc. Hortic. Sci.- 1988. vol. 56. № 4 - P. 398 - 407.

424. Keep, E. Interspecific hybridization in Ribes / E.Keep // Genet. 1962. -vol. 33.-p. 1-23.

425. Kester, D.E. Rootstock potentialities of F1 hybrids between peach {Prunus persica L.) and Almond {Prunus amygdalus Batsch.) / D.E. Kester,

426. C.J. Hansen // Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 1966. - vol. 89. - P. 100 - 109.

427. Kho, Y.O. Observing pollen tubes by means of fluorescence / Y.O. Kho, J. Baer // Euphytica. 1968. - vol. 17. - P. 298 -302.

428. Klein, R.M. The role of zink in the growth of plant tissue cultures / R.M. Klein, E.M. Caputo, B.A. Watterholt // Amer. J. Bot. 1962. - vol. 49. -P. 323 -327.

429. Knight, R.L. Fruit Breeding / R.L. Knight // J. Roy Hort. Soc. 1962. -vol. 87.-P. 103-113.

430. Kobel, F. Zytologische Untersuchungen an Prunoideen und Pomoi-deen / F. Kobel // Arch. J. Klaus. Stift. Vererbungforsch. Sozialanthrop. und Rassenhyg. - 1927. - Bd. 3. - S. 1 - 84.

431. Kotte, W. Kulturversuche mit isolierten Wurzelspitzen / W. Kotte // Beitr. allgem. Bot. 1922. - Bd. 2. - S. 413 - 434.

432. Kramer, S. Beitrage zur Zuchtungsforschung beim Pfirsich / S. Kramer // Arch. Gartenbau. 1956. - Bd. 4. - H.l.

433. Kuhne, U. Moglichkeiten der Verbesserung der Bewurzelung in der in vitro Phase bei Kern und Steinobst / U. Kuhne, S. Gennerich, B. Hennig, V. Hanke // Gaztenbau. - 1988. - vol. 35. - № 6. - P. 180 - 182.

434. Kumar, V. Isolation and characterization of sodium chloride resistant callus culture of Vigna radiata (L) Welczek var. radiata / V. Kumar, D.R. Sharma // J. Exper. Bot. - 1989. - vol. 40. - P. 143 - 147.

435. Lane, D.W. Regeneration of pear plants from shoot meristem tips /

436. D. W. Lane // Plant Sciv Letters. 1979. - vol. 13 - P. 281 - 285.

437. Larkin, P.J. Heritable somaclonal variation in wheat / P.J. Larkin, S. A. Ryan, R.J.S. Brettell, E.W.R. Scowcroft // Theor. and Appl. Genet. 1984. -vol. 67.-№2.-P. 443-445.

438. Lee, C.L. Pollenkeimung, Pollenschlauchwachstum und Befruch-tungsverhaltnisse bei Prunus domestica. Befruchtungsverhalten einiger blauer Pflaumensorten / C.L.Lee., G. Btinemann // Gartenbauwiss. 1981. - Bd. 46. -H. 5.-S. 217-223.

439. Lee, C.L. Pollenkeimung, Pollenschlauchwachstum und Befruch-tungsverhaltnisse bei Prunus domestica. I. Pollenkeimung in vitro und in vivo / C.L. Lee // Gartenbauwiss. 1980. - Bd. 45. - H. 5. - S. 228 - 235.

440. Lee, C.L. Pollenkeimung, Pollenschlauchwachstum und Befruch-tungsverhaltnisse bei Prunus domestica. 2. Pollenschlauchwachstum im Griffel / C.L. Lee // Gartenbauwiss. 1980 a. - Bd. 45. - H. 6. - S. 241 - 248.

441. Lee, M. Agronomic evalutation of inbred lines dereved from tissus cultures of maize / M. Lee, J.L. Geadelmann, R.L. Phillips // Theor. and Appl. Genet. 1988. - vol. 75. - № 6. - P. 841 - 849.

442. Leibach, F. Methods of work with embryos / F. Leibach // J. Hered -1929.-№20.-P. 201-208.

443. Lewis, D. Icompatibility in flowering plant / D. Lewis // Biol. Reviews. Cambridge, 1949. - vol. 24. - P. 472 - 492.

444. Limasset, P. Recherche de virus la mosaique du tabac (Marmor Tabaci, Holmes) dans les meristemes des plantes in fectees / P. Limasset, P. Cornuet //C.R. Acad. Sci. 1949. - vol. 228. - P. 1971 - 1972.

445. Linslcens, H.F. Biochemistry of incompatibility / H.F. Linskens // Genet. Today. Pergamon, Oxford. 1965. - vol. 3 - P. 629 - 636.

446. Linskens, H.F. Fertilization meckanisms in higher plants / H.F. Linskens // Ac. Press. New York, London, 1969. - vol. 2. - P. 189 - 253.

447. Linskens, H.F. Uber eine spezifische Anforbung den Pollenschlauche in Griffel und Zahl der Kalloseenprophen nach selbetung und Fremdung / H.F Linskens, K.L. Esser//Naturwissenschaften. 1957.-Bd. 44. -H. 1 - S. 16.

448. Linsmaier, E.M. Organic growth factor requirement of tobacco tissue cultures / E.M. Linsmaier, F. Skoog // Physiol. Plant. 1965. - vol. 18. - № 1. -P. 100-127.

449. Liu, Z.R. Plant regeneration by organogenesis from strawberry leaf and runner tissue / Z. R. Liu, J.C. Sanford // Hort. Sci. 1988. - vol. 23. - № 1. -P. 1057- 1059.

450. Lustinec, J. Changes in the distribution of glucose Си in alternative catabolic pathways induced by kineti - analogue in the callus tissue of carrot Dancus carota / J. Lustinec, E. Petru, V. Pokorna // Experientia. - 1962. - vol. 18.-№4.-P. 187.

451. Maheshwari, P. Embryology in relation to taxonomy / P. Maheshwari // Recent advances in botany. Montreal, 1959. - P. 246 - 259.

452. Malyschev, N. Das Wachstum des isolierten Wurzel meristems auf sterilen Nahrboden / N. Malyschev // Biol. Zbl. - 1932. - Bd. 52. - S. 257 -265.

453. Manney, J.R. The culture in vitro of immature cotton embryos / J.R. Mauney // Bot. Gas. 1961. - vol. 122. - № 3. - P. 205 - 209.

454. Meins, F. Variation on the competence of tobacco pith cells to cyto-kinin habituation in culture / F. Meins, J. Lutz, A.N. Binns // Differentiation. -1980.-vol. 16.-P. 71-75.

455. Melchers, G. Potatoes for combined somatic and sexual breeding methods plants for protoplasts and fusion of protoplasts of potato and tomato / G. Melchers // Production of natural compounds by cell culture methods. -Miinchen, 1978.-P. 306-311.

456. Miller, C.O. Kinetin a cell division factor from deoxyribonucleic acid / C.O. Miller, F. Skoog, M. von Saltza, F.M. Strong // J. Amer. Chem. Soc. -1955. vol. 77. - № 10. - P. 1392 - 1399.

457. Miller, C.O. Kinetin and Kinetin like compounds / C.O. Miller // Mod. Meth. Pflanzeanal. - 1963. - vol. 6. - № 6 - S. 194 - 202.

458. Mohan, J.S. Tissue culture derived variation in crop improvement / J.S. Mohan //Euphytica. - 2001. -vol. 118.-P. 153-166.

459. Morel ,G.M. La culture in vitro du meristeme apical de certaines Or-chidees / G.M. Morel // C.R. Acad. Sei. 1963. - vol. 256. - № 23. - P. 4955-4957.

460. Morel, G. Action de lacide pantothenique sur la croissance des tissus daubepine cultives in vitro / G. Morel // C.R. Acad. Sci. 1946. - vol. 223. - P. 166-168.

461. Morel, G. Biochemistry of morphogenesis of plant shoots / G. Morel // Proc. 4 Internat. Congr. Biochem. L. etc.: Pergamon press. 1959. - vol. 6. -P. 221 -222.

462. Morel, G. La culture in vitro du meristeme apical de la pomme de terre /G. Morel, J.F. Muller//C.R. Acad. Sci. 1964.-vol. 258. -№21.-P. 52505252.

463. Mullin, M. Tissue culture of some monocotyledonnous plants / M. Mullin // Austral. J. Biol. 1970. - vol. 23. - № 2. - P. 473 - 478.

464. Mtintzing, A. Outlines to a Genetic Momograph of the Genus Galeop-sis. With Special Reference to the Nature and Inheritance of Fartial Sterility / A. Muntzing // J. Hered. 1930. - vol. 13. - № 23. - P. 185 - 341.

465. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and biossays with tobacco tussue cultures / T. Murashige, F.A. Skoog // Physiol Plant. 1962. -vol.15.- № 13.-P. 473-497.

466. Murashige, T. Manipulation* of organ culture in plant tissue cultures / T. Murashige // Bot. Bull. Acad. Sei. 1977. - vol. 18. - P. 1 - 24.

467. Murashige, T. Plant propagation through tissue cultures / T. Murashige // Plant Physiol. 1974. - vol. 25. - P. 135 - 166.

468. Murawski, H. 40 Jahre der Obstztichtung in Miincheberg / H. Mu-rawski // Arch. Gartenbau. 1968. - Bd. 16. - № 5. - S. 400 - 430.

469. Nehra, N.S. Regeneration of plant from immature leaf derived callus of strawberry (Fragaria ananassa) /'N.S. Nehra, C. Stushnoff, K.K. Katha // Plant Sci.- 1990.-vol. 66.-№ l.-P. 119-126.

470. Nickel, L.G. Crop improvement in sugar cane: studies using in vitro methods / L.G. Nickell // Crop Sci. 1977. - vol. 17. - P. 717 - 719.

471. Nickell, L.G. Atypical growth of plants. 2. Growth in virto of virus tumors of Rumex in relation to temperature, pH and various of nitrogen, carbon and sulphur / L.G. Nickell, P.R. Burkholder // Amer. J. Bot. 1950. - vol. 37. -№6.-P. 538-547.

472. Nickell, L.G. The utilization of sugars and starch as carbon sources by sugarcane cell suspension cultures / L.G. Nickell, A. Maretzki // Plant Cell Physiol.-1970.-vol. 11.-№ l.-P. 183- 185.

473. Nitsch, C. Growth and development in vitro of excised ovaries / C. Nitsch // Amer. J. Bot. 1951. - vol. 38. - № 7. - P. 566 - 577.

474. Nitsch, J.P. Auxin dependent growth of excised Helianthus tubero-sus tissues / J.P. Nitsch, C. Nitsch // Amer. J. Bot. - 1956. - vol. 43. - P. 839 -851.

475. Nitsch, J.P. Experimental androgenesis in Nicotiana / J.P. Nitsch // Phytomorphology. 1969. - vol. 19. - P. 389 - 404.

476. Nomura, K. Identification and isolation of single cells that produce somatic embryos at a high frequency in carrot suspension culture / K. Nomura, A. Komamine // Plant Physiol. 1985. - vol. 79. - P. 988 - 991.

477. Olden, E.J. Hybridiseringsforsok inom plommongruppen / E.J. Olden // Sver. Pomol. Foren Arsskr. 1955. - P. 155 - 174.

478. Olden, E.J. On the origin of Prunus cerasus L. / E.J. Olden, N. Nybom // J. Hered. 1968. - vol. 59. - № 2-3. - P. 327 - 345.

479. Paris, D. Recherches sur la nutrition des tissus normaux d Aubepine cultives in vitro / D. Paris // C.R. Acad. Sci. 1958. - vol. 246. - P. 449 - 451.

480. Passelt, R. Untersuchungen zur pragamen Inkompatibilitat bei Prunus Arten und - Artbastarden / R. Passelt // Arch. Zuchtungsforschung. - 1978. -Bd. 8.- H. 2.-S. 127-138.

481. Pedieri, S. High frequency shoot regeneration from leaves of the apple rootstock M26 {Malus pumila Mill) / S. Pedieri, F.F.F. Malavasi // Plant Cell, Tissus OrganCult. - 1989. - vol. 17. - № 2. - P. 133 - 142.

482. Pierik, R.L.M. Vegative propagation of Freesia through the isolation of shoots in vitro / R.L.M. Pierik, Y.Y.M. Steegmans // Neth. J. Agr. Sci. -1976. vol. 24. - № 4. - P. 274 - 277.

483. Pilet, P.E. Auxins and the process of aging in root cells / P.E. Pilet // Plant Growth Regulatuon: 4 internat. Conf. Iowa. Univ. Press. 1961. - P. 167 -179.

484. Raghavan, V. Growth and morphogenesis of globular and older embryos of Capsella in culture / V. Raghavan, J. G. Torrey // Amer. J. Bot. 1963. -vol. 50.-№6.-P. 540-551.

485. Rakoczy Trojanowska, M. Wplyw czynnikow genetycznych na regenerate roslin w Kylturach in vitro / M. Rakoczy - Trojanowska, S. Malerp-szy // Post. Biol. Komorki. - 1990. - v. 17. - № 3. - P. 247 - 257.

486. Ramming, D.W. The use of embryo culture in fruit breeding / D.W. Ramming // Hort Sci. 1990. - vol. 25. - № 4. - P. 393 - 398.

487. Ramming, D.W. In ovulo embrio culture of early maturing Prunus / D.W. Ramming // Hort Sci. 1985. - vol. 20. - № 3. - P. 419 - 420.

488. Rappaport, J. In vitro culture of plants embryos and facors controlling their growth / J. Rappoport // Bot. Rev. 1954. - vol. 20 - P. 201 - 225.

489. Rashid, A. The development of haploid embryoids from anther cultures of Atropa belladonna L. / A. Rashid. Y.E. Street // Planta. 1973. - vol. 113.-№3.- P. 263-270.

490. Reinert, J. Plant Cell and Tissue Culture / J. Reinert, M.M. Yeoman // A. Laboratory Manual. Berlin: N.Y. Springer - Verlag. - 1982. - 86 p.

491. Rick, Ch.M. Hybrids between Lycopersicum esculentum Mill, and So-lanum lycopersicoides Dun. / Ch. M. Rick // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1951. -vol. 37.-P. 741-744.

492. Rier, J.P. The relationship of temperature and nutrition to the growth of sun flower tumor tissue in vitro / J.P. Rier, J.H. Henderson // Plant Physiol. -1957.-vol. 32.-P. 494-497.

493. Rietsema, J. Hybridesinterspecifiques des genres Ribes et Rubus / J. Rietsema//Rpt. 14th. Int. Hort. Cong. 1955. - vol. l.-P. 712-715.

494. Robbins, W. J. Cultivation of excised root tips and stem tips under sterile conditions / W.J. Robbins // Bot.Gaz. 1922. - vol. 73. - P. 376 - 390.

495. Robbins, W.J. Effect of autolyzed yeast and peptone on growth of excised corn root tips in the dark / W.J. Robbins // Bot. Gaz. 1922 a. - vol. 74. -P. 59-79.

496. Robbins, W.J. Growth of excised of the tomato / W.J. Robbins, M.B.

497. Rutishauser, A. Embriologie und Fortpflanzungsbiologie der Angi-ospermen. / A. Rutishauser // Wein; New York, 1969.

498. Salesses, G. Connaissances cytogenetiques et hybridation interspeci-fique dans le sous genre Prunophora, section Euprunus / G. Salesses // Ann. Ameliorat. Plantes. - 1967. - vol. 17. - № 4. - P. 397 - 408.

499. Salesses, G. Creation of plum rootstocks for peach and plum by inter-specifis hybridization / G. Salesses, R. Renaud, A. Bonnet // Acta Hortic. Hradec Kralove. 1988. - P. 339 - 343.

500. Sargent, P.A. Investigation of growth promoting factors in conditioned soybean root cells and in the liquid medium in which they grow: ammonium, glutamine and amino acids / P.A. Sargent, J. King // Can. J. Bot. - 1974. -vol. 52.-P. 1747.- 1755.

501. Schenk, B.U. Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures / R.U. Schenk, A.C. Hildebrandt // Can. J. Bot. 1972. - vol.50. - № 1. - P. 199 - 204.

502. Schmid, H. Breeding dwarfing rootstocks for sweet cherris / H. Schmid, W, Gruppe // Hort. Sciv. 1988. - vol. 23. - P. 112 - 114.

503. Schmidt // Bot. Gaz. 1938. - vol. 99. - P. 671 - 678.

504. Schnarf, K. Die Bedeutung der embriologischen Forschung fur das nu-turliche System der Pflanzen / K. Schnarf// Biol. Generalis. 1933. - Bd. 9. -№ 2.-S. 271-288.

505. Schneider, G.W. Megagametogesis and embryology in a diploid and an aneuploid apple / G.W. Schneider // Amer. J. Bot. 1933. - vol. 40. - № 3. -P. 196-203.

506. Shivanna, K.R. In vitro fertilization and seed formation in Petunia violacea Lindl / K.R. Shivanna // Phytomorphology. 1965. - vol. 15 - № 2 -P. 183-185.

507. Simard, A. Initiation of DNA synthesis by kinetin and experimental factors in tobacco pith tissues in vitro / A. Simard // Gan. J. Bot. 1971. - vol. 49.-№9.- 1541 - 1549.

508. Simon, I. Preliminary notes on somaclonal variation of strawberry / I. Simon, E. Racz, J. M. Zatyko // Fruit. Sci. Rep. Skierniewice. 1987. - vol. 14. - № 4. - P. 151-154.

509. Singh, B.D. Effects of gibberellic acid and cell suspension cultures of higher plants / B.D. Singh, E.T. Thomas, B. L. Harvey // Indian J. Exptl. Biol. -1974.-vol. 12.-№3.-P. 213-215.

510. Skirm, G. W. Embryo culturing as an aid to plant Breeding / G. W. Skirm // J. Hered. 1942. - vol. 33. - № 6. - P. 211 - 215.

511. Skirvin, R.M. Natural and induced variation in tissue culture / R.M. Skirvin // Euphytica. 1978. - vol. 27. - P. 241 - 266.

512. Skirvin, R.M. Natural and induced variation in tissue culture / R.M. Skirvin // Euphytica. 1978. - vol. 27. - P. 241 - 266.

513. Skoog, F. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro / F.Skoog, C.O. Miller // Symp. Soc. Exptl. Biol. -1957. vol. 11 -P. 118-131.

514. Skoog, F. Cytokinins: structure activity relationships / F. Skoog, H.Q. Hamzi, A.M. Szweykowska, N.J. Leonard, K.L. Carraway et al. // Phytochemis-try. 1967. - vol. 6. - № 9. - P. 1169 - 1192.

515. Smith, J.A. A nuclear protein associated weth cell division in plants / J.A. Smith, M.R. Krauss, C. Borkird, Z.R. Sung // Planta. 1988. - vol. 174. -P. 462-472.

516. Sriskandarajah, S. Induction of adventitious rooting in vitro in duffi-cult to - propagata cultivars of apple / S. Sriskandarajah, M.G. Mullins, Y. Nair // Plant Sci. Letters. - 1982. - vol. 24. - P. 1-9.

517. Sriskandarajah, S. The effect of adventitious root development on scion apple cultivars in vitro / S. Sriskandarajah,R.M. Skirvin, H. Abu Qaond // Plant Cell, Tissus Organ Cult. - 1990. - vol. 21. - № 2. - P. 185 - 189.

518. Standartti, A. Effecto della luce, del carbone attive e dell' IBA silla radicazione in vitro di germgli di melo / A. Standartti // Ann. Fac. Agr. Univ. Studi Perugia. 1987. - № 39. - P. 109 - 120.

519. Steffen, K. Male gametophyte / K. Steffen // Recent advances in embryology of angiosperms. 1963. - P. 15-40.

520. Steineger, P. Cytologisch bedingte Ei und Zitogensterlitat dei triploi-den Apfelsorten / P. Steineger // Ber. Schweiz. Bot. Ges. - 1933. - vol. 42. - P. 285-339.

521. Steward, F.C. A tissue culture from potato: the synergistic action of 2,4 D and coconut milk / F.C. Steward, S.M. Caplin // Sciv. - 1951. - vol. 113. -P. 518-520.

522. Steward, F.C. Growth and organized development of cultured cells. III. Interpretation of the growth from free cells to carrot plants / F.C. Steward // Amer. J. Bot. 1958. - vol. 45. - P. 709 - 713.

523. Stoltz, L.P. Agar restriction of the growth of excised mature iris embryos / L.P. Stoltz // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1971. - vol. 96. - № 5. - P. 681 -684.

524. Stott, K.G. Pollen germination and pollen tube characteristics in a range of apple cultivars / K. G. Stott // J. Hort. Sci. - 1972. - vol. 47. - № 2. - P. 191-198.

525. Straub, Y. Die Bedeutung naturwissenschaftlicher Forschung sergeb-nisse fur Pflanzenziichtung /Y. Straub // Angew. Bot. 1978. - Bd. 52 - № 1-2. -S.107- 115.

526. Street, H.E. Nutrition and metabolism of plant tissue cultures / H.E. Street // J. Nat. Cancer inst. 1957. - vol. 19. - P. 467 - 485.

527. Subhashini, K. Evaluation of the progeny under stess of regenerated salt tolerant rice / K.Subhashini, G.M.Reddy // J. Genet. Brreed. 1989. - vol. 43.- № 3. - P. 125- 130.

528. Templeton Somers, K.M. Selection of cold - resistant cell lines of carrot / K.M. Templeton - Somers, W.R. Sharp, R.M. Peister // Z. Pflanzen-physiol.- 1981.-Bd. 103. -№2.-P. 139-148.

529. Thanutong, P. Resistat tobacco plants from protoplast derived calluses selected for their resistance to Preudomonas and Alternaria toxins / P. Thanutong, M. Yamamoto // Theor. And Appl. Genet. - 1983. - vol. 66. - P. 209-215.

530. Thimann, K.V. Protein synthesis during uptake by tuber tissue/IC.V. Thimann, G.M. Loss // Plant Physiol. 1957. - vol. 32. - P. 274 - 279.

531. Thimann, K.V. The extraction of auxsin from plant tissues / K.V. Thimann, F. Skoog // Amer. J. Bot. 1940, - vol. 27. - P. 951 - 960.

532. Toponi, M.A. DNA modification ffecting the plant regeneration in vitro / M.A. Toponi, M.N. Michele // Basis and Appl. Histochem. 1989. - vol. 33-P. 101.

533. Tran Thanh Van, K.M. Control of morphogenesis in virto cultures / K.M. Tran Thanh Van // Annu. Rev. Plant Physiol. 1981. vol. 33. - P. 291 -311.

534. Tukey, H. B. Embryo abortiom in early ripening varieties of Prunus avium / H.B. Tukey // Bot. Gaz. - 1933 a. - vol. 94. - P. 433 - 468.

535. Tukey, H.B. Artificial culture methods for isolated embryos of deciduous fruits / H.B. Tukey // Proc. Amer. Soc.Hort. Sci. 1934. - vol. 32. - № 2. -P. 312-322.

536. Tukey, H.B. Artificial culture of sweet cherry embryo / H.B. Tukey // J. Hered. 1933. - vol. 24. - № 1. - P. 7 - 12.

537. Uspenski, E.E. Reinkultur und ungeschlechtliche Fortpflanzung der Volvox minor und Volvox globator in einer synthetishen Nahrlosung / E.E. Uspenski, W.J. Uspenskaja // Z. Bot. 1925. - Bd. 17. - S. 273 - 308.

538. Vagera, J. Somaklonalni variabilita u obilovin / J. Vagera // Sbornik CSAZ Ceskosl. Alcad. zemed. - 1989. - vol. 127. - P. 28 - 33.

539. Vasil, I.K. Cultivation of excised anthers in vitro: Effect of nucleic acids / I.K. Vasil // J. Exptl. Bot. 1959. - vol. 10. - P. 399 - 408.

540. Wang Yu Zhu. Zhiwn Shenglizue ting - xun / Wang Yu - Zhu, Shi Hong // Plant Physiol. Commun. - 1996. - vol. 32. - № 2. - P. 127 - 128.

541. Warmund, M.R. Freezing tolerance of tissue cultured Rubus plants / M.R. Warmund, C.J. Starbuck, M.F. George // Fruit. Varieties J. 1989. - vol. 43.- № 3. - P. 109-113.

542. Warmund, M.R. Freezingtolerance of tissue cultured Rubus plants / M.R. Warmund, C.J. Starbuck, M.F. George // Fruit. Varieties. J. 1989. - vol. 43.- № 3. - P. 109-113.

543. Welander, M. In vitro rooting of the apple rootstock M26 in adult juvenile growth phases and acclimatization of the plantles / M. Welander // Physiol. Plant. 1983. - vol. 58. - P. 231 - 238.

544. Welander, M. Plant regeneration from leaf and stem segments of shoots raised in vitro from mature apple trees / M. Welander // J. Plant Physiol. 1988. - vol. 132. - № 6. - P. 738 - 744.

545. Welander, M. The rooting ability of shoots raised in vitro from the apple rootstock A2 in juvenile and adult growth phas / M. Welander, I. Huntrieser //Physiol. Plant. 1981.-vol. 53.-P. 301 -306.

546. Wellander, T. Effects of nitrogen, sucrose, IAA and kinetun on ex-plants of Beta vulgaris grown in vitro / T. Wellander // Physiol. Plant. 1976. -vol.36.- №1. -P. 7-10.

547. Wellington, R. An experiment in breeding plums / R. Wellington // Techn. Bull. State Agr. Exp. Stat. 1927. - vol. 127. - P. 1 - 61.

548. Werckmeister, P. Uber die kiinstliche Aufzuch von Embryonen aus Iris / P. Werckmeister // Gartenbauwiss. 1934. - Bd. 8. - P. 606 - 608.

549. Wernicke, W. Effect of auxin on the mitotic cell cycle in cultured leaf segments at different stages of development in wheat / W. Wernicke, L. Milk-ovits// Physiol. Plant. 1987. vol. 69. - № 1. - P. 16 - 22.

550. White, P.R. Controlled differentiation in a plant tissue / P.R. White // Bull. Torrey Bot. Club. 1939 a. - vol. 66. - P. 507 - 513.

551. White, P.R. Plant tissue cultures. A preliminary report of results obtained in the culturing of certain plant meristems / P.R. White // Arch, exptl. Zellforsch. 1932. - Bd. 12. - S. 602 - 620.

552. White, P.R. Plant tissue cultures. Results of preliminary experiments on the culturing of isolated stem tips of Stellaria media / P.R. White // Protoplasms- 1933. - Bd. 19. - S. 97 - 116.

553. White, P.R. Potentially unlimited growth of excised plant callus in an artificial nutrient / P.R. White // Amer. J. Bot. 1939. - vol. 26. - № 1. - P. 59 -64.

554. White, P.R. Potentially unlimited growth of excised tomato root tips in a liquid medium / P.R. White // Plant Physiol. 1934. - vol. 9. - P. 585 - 600.

555. Williams, C.F. Influence of parentage in species hybridization of raspberries / C.F. Williams // Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 1950. - vol. 56. - P. 149 -156.

556. Williams, R.R. The effect of summer nitrogen applications on the quality of apple blossoms / R.R. Williams//Hort. Sci. 1965. - vol. 40. - № 1. -P. 31 -41.

557. Zenkteler, M. Test tube fertilization of ovules in Merandrium album mill with pollen grains of several species of the Caryophylaceae family / M. Zenkteler // Experientia. 1967. - vol. 23. - № 9. - P. 775.

Информация о работе

Расторгуев, Сергей Леонидович
доктора сельскохозяйственных наук
Мичуринск-Наукоград РФ, 2008
ВАК 06.01.05

Диссертация

Совершенствование селекционного процесса плодовых и ягодных растений на основе цитологических методов и культуры изолированных тканей - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы