Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Совершенствование ранней диагностики туберкулеза животных
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат диссертации по теме "Совершенствование ранней диагностики туберкулеза животных"
На правах рукописи
Полякова Ольга Николаевна
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЖИВОТНЫХ
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Новочеркасск - 2011
4841789
Работа выполнена в Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук
Научный руководитель:
Доктор ветеринарных наук, профессор Дубовой Борис Лаврентьевич
Официальные оппоненты:
Доктор ветеринарных наук Попов М.А.
Доктор ветеринарных наук, доцент Хабузов И.П.
Ведущая организация:
ГНУ Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемия
Защита диссертации состоится 24 марта 2011 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 006.106.01 при Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук. 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Северо-Кавказский зональный Научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакаде-мии - 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0.
Автореферат разослан
Ученый секретарь диссертационного совета, д.б.н.
А.М. Ермаков
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Борьба с туберкулезом животных - важнейшая проблема. Ликвидация туберкулеза животных имеет не только ветеринарное, но и экономическое и эпидемиологическое значение.
Наиболее важным в системе противотуберкулезных мероприятий является своевременное выявление зараженных животных и удаление их из стада как источника возбудителя туберкулеза.
От момента заражения до появления первых клинических признаков туберкулеза может пройти несколько месяцев и даже лет. При использовании метода аллергической диагностики отмечаются случаи обнаружения реагирующих на туберкулин животных, у которых не удается подтвердить наличие болезни. Объясняют появление таких реакций на туберкулин сенсибилизацией организма животных атипичными и паратуберкулезными микобактериями, заражением микобактериями птичьего вица, наличием некоторых паразитарных болезней и другими причинами. Изучением неспецифических реакций занимались много авторов (А.И. Кузин (1992г.), A.C. Донченко (1987г.), Г.А. Юдин (1990г.), М.А. Сафин (1992г.), Д.Д. Новак (1990г), О.В. Мартма (1978г.), А.Х. Найманов (2009г.), А.Н. Шаров (2000г.), Л.И. Ходун (1987), В.М. Харитонова (1983), A.M. Падалица (1998г.) и др.).
В связи с этим при постановке диагноза на туберкулез особенно важна дифференциация специфических и неспецифических реакций на внутрикожное введение туберкулина.
Одной из важнейших задач профилактики туберкулеза сельскохозяйственных животных является совершенствование диагностики, так как существующие методы не обеспечивают обнаружение больных животных в начальной стадии болезни.
Проблема совершенствования диагностики туберкулеза животных имеет своей целью поиск способа ранней доклинической диагностики болезни и решения ряда задач, связанных с дифференциальной диагностикой туберкулеза, туберкулиновых реакций, вызванных сенсибилизацией организма атипичными микобактериями и птичьим видом. Поэтому необходим способ диагностики, который в кратчайший срок поможет выявить инфицированное и больное животное и предотвратить неоправданный и необоснованный убой высокопродуктивных животных.
Цель исследования - разработать способ ранней диагностики туберкулеза животных и дифференциации специфических и неспецифических реакций на внутрикожное введение туберкулина.
Достижение намеченной цели осуществлялось решением следующих задач:
1) определить рабочую дозу аллергена;
2) изучить специфичность и активность реакции лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) in vitro с аллергенами: ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM;
3) исследовать возможность использования реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) для дифференциации специфических и неспецифических
реакций у положительно реагировавших на туберкулин коров.
Научная новизна. Разработан способ ранней диагностики туберкулеза, позволяющий в течение суток после заражения выявить инфицированное животное и дифференцировать туберкулиновые специфические реакции от неспецифических. Использование реакции специфического лизиса лейкоцитов с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM позволило выявить неспецифическую сенсибилизацию организма, вызванную атипичными микобактериям.
Научная новизна подтверждена патентом на изобретение №2366454 «Способ ранней диагностики туберкулеза животных».
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Ранняя диагностика туберкулеза животных.
2. Дифференциация туберкулиновых реакций.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», ГНУ Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН в 2006-2010 гг. и на всероссийских и международной научно-практических конференциях гг. Махачкала, Казань, Новочеркасск.
Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», проходят апробацию в областной ветеринарной лаборатории, СББЖ г. Новочеркасска, СПК «Рассвет», Матвеево-Курганского района, ОАО «Южное», Сальского района и СПК «Советинский», Неклиновского района, Ростовской области.
Публикации по теме. По материалам диссертационной работы опубликовано 15 научных работ, три из них - в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК РФ и патент РФ на способ диагностики.
Практическая значимость. Полученный научный материал позволяет обнаружить инфицированное животное в первые сутки после заражения и отличить положительные неспецифические туберкулиновые реакции, вызванные атипичными и птичьими микобактериями от специфических, что имеет важное •практическое значение для сохранения животных с неспецифическими туберкулиновыми реакциями. РСЛЛ рекомендуется применять при ретроспективной диагностике туберкулеза и дифференциальной диагностике специфических и неспецифических реакций на введение ППД-туберкулина для млекопитающих при внутрикожной туберкулиновой пробе.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 153 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. В диссертации приведены 28 таблиц. Список литературы включает 264 источника, в том числе 58 иностранных авторов.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы и методы исследований. Работу проводили на кафедре эпизоотологии ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», в учхозе «Донское» (ДонГАУ, пос. Персиановский), в лаборатории ГНУ СКЗНИВИ, в промышленном районе города Новочеркасска, в хозяйствах Мат-веево-Курганского, Неклиновского и Сапьского районов Ростовской области.
Для проведения опытов отобрали животных (крупный рогатый скот, свиней, собак и кроликов), у которых физиологические и гематологические показатели находились в пределах нормы. Были сформированы пять опытных и одна контрольная группа животных. Контрольную группу сформировали для сравнения с опытной для доказательства специфичности реакции. Каждая опытная и контрольная группа состояла из пяти животных.
В процессе выполнения работы изучали гематологические показатели свежей крови (количество лейкоцитов) и реакцию специфического лизиса лейкоцитов крупного рогатого скота, свиней, собак, кроликов.
Животных опытных групп разделили на пять групп в зависимости от дозы вводимой вакцины, чтобы определить интенсивность реакции. После введения животным опытных групп живых микобактерий вакцины БЦЖ, а животным, контрольных групп вакцины против бруцеллеза шт.82 брали кровь. Кровь от животных при каждом заборе делили на опытные и контрольные пробы. Контрольные пробы - кровь с добавлением 3,8% раствор цитрата натрия и физиологическим раствором, опытные пробы - кровь с добавлением 3,8% раствора цитрата натрия с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM.
В опытных и контрольных пробах подсчитывали количество лейкоцитов, чтобы в последующем определить процент лизиса лейкоцитов по формуле.
Подбор рабочей дозы аллергенов выполняли с кровью животных, у которых физиологические и гематологические показатели находились в пределах нормы, выбирая дозу, при которой, процент лизиса лейкоцитов был не более 10. Предположительный поиск аллергена находился в дозе от 0,05 до 0,15 мл.
Для постановки реакции специфического лизиса лейкоцитов использовали существующую методику определения количества лейкоцитов в крови. Подсчитывали количество лейкоцитов в опытных и контрольной пробах, рассчитывали процент лизиса лейкоцитов по формуле.
В опытную лунку планшета, содержащую 0,05 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия вносили 0,1 мл исследуемой крови и рабочую дозу аллергена 0,05мл. Контрольную лунку с кровью заполняли в том же объеме, но с физиологическим раствором вместо аллергена.
Пробы крови с туберкулинами, KAM и физиологическим раствором инкубировали в термостате в течение 2 часов при +37°С, периодически легко встряхивая. Затем для разрушения эритроцитов из контрольной и трех опытных лунок брали по 0,02 мл крови и переносили в лунки планшета содержащие 0,4мл жидкости Тюрка. Подсчитывали число лейкоцитов (в камере Горяева) во всех пробах.
Затем рассчитывали процент лизиса лейкоцитов по формуле: РСЛЛ = ,00%
Лк
Где Лк и Ло - абсолютное количество лейкоцитов в контрольной и опытной пробе крови при единовременном заборе.
РСЛЛ считали положительной при показателе 10% и более.
При моделировании туберкулезного процесса для определения активности и специфичности реакции было сформировано шесть групп животных: пять опытных и одна контрольная.
Каждой опытной группе была введена определенная дозы живых микобак-терий вакцины БЦЖ. Животным контрольной группы была введена одна доза противобруцеллезной вакцины шт. 82. В момент введения и через кажцые 24 часа ог животных брали кровь, делили ее на пробы с добавлением в нее 3,8% раствора цитрата натрия и диагностикумов для определения процента лизиса лейкоцитов, исследования чувствительности, активности и специфичности реакции.
В хозяйствах от реагировавших на туберкулин коров исследовали кровь реакцией специфического лизиса лейкоцитов. Взятую кровь делили на опытные пробы с добавлением ППД-туберкулина для млекопитающих, ППД-туберкулина для птиц, KAM и контрольную пробу с физиологическим раствором. Подсчитали количество лейкоцитов во всех пробах и рассчитали показатель РСЛЛ.
После исследования реакции специфического лизиса лейкоцитов был проведен контрольно-диагностический убой коров, положительно реагировавших на туберкулин и послеубойная ветеринарно-санитарная экспертиза туш и внутренних органов для обнаружения патологоанатомических изменений, характерных при заболевании и для изучения этиологии вызывающих положительные реакции туберкулиновых проб при неспецифических реакциях.
Учитывали, какая доля положительных туберкулиновых проб совпадает с результатами РСЛЛ, с патологоанатомическими изменениями, характерными для туберкулеза. Какая доля составляет совпадение положительных туберкулиновых проб, РСЛЛ и патологоанатомических изменений, несвойственных туберкулезу. Сколько положительных туберкулиновых проб совпадает в РСЛЛ с ППД-туберкулином для млекопитающих, с ППД-туберкулином для птиц и KAM. Сколько положительных туберкулиновых проб совпадает с эхинококко-зом, установленным при патологоанатолическом исследовании туш убитых с диагностической целью коров.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Определение рабочей дозы ППД-туберкулина для млекопитающих, ППД-туберкулина для птиц и KAM
Рабочую дозу диагностических аллергенов отрабатывали на цитратной крови животных, у которых физиологические и гематологические показатели находились в пределах нормы. Аллерген использовали в дозе 0,05мл, 0,1мл и 0,15мл и в таких же объемах брали физиологический раствор.
Рабочая доза не должна вызывать разрушение лейкоцитов и сенсибилизацию к аллергену, антигену и диагностическим препаратам.
В таблице показано объемное соотношение туберкулинов и KAM с кровью и 3,8% раствором цитрата натрия.
В опытных и контрольной пробах подсчитывали количество лейкоцитов и по формуле рассчитывали процент лизиса лейкоцитов.
Реакция специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) во всех пробах крови с аллергенами у крупного рогатого скота, свиней и кроликов доходила до 3% , у собак - до 7 %. Поэтому экономнее в качестве рабочей дозы использовать дозу 0,05 мл аллергена (туберкулина или KAM), т.к. РСЛЛ у нее оказалась ниже, чем при дозе 0,15мл. И величина ее была практически одинаковой для ППД - туберкулина для млекопитающих, ППД - туберкулина для птиц и KAM.
Рабочая доза туберкулинов и KAM для РСЛЛ была взята 0,05 мл, так как она оказалась экономична и не вызывала разрушения лейкоцитов.
Таблица 1.
Определение рабочей дозы туберкулинов и KAM.
№ 3,8 % раствор Кровь Опытные про- Контрольные
пробы цитрата натрия (мл) бы с пробы с физио-
(мл) ППД мл., ППД логичёским
пт. и KAM раствором
(мл) (мл)
1 0,05 0,1 0.05 0,05
2 0,05 0,1 0,1 0,1
3 0,05 0,1 0,15 0,15
3.2. Изучение специфичности и активности реакции специфического лизиса лейкоцитов
3.2.1. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови крупного рогатого скота при введении живых мпкобактерий вакцины БЦЖ
Опыт проводили в учхозе «Донское», Октябрьского района Ростовской области.
Для исследований отобрали тридцать голов молодняка крупного рогатого
скота в возрасте четырех - шести месяцев.
Были сформированы пять опытных и одна контрольная группа животных. В каждую группу взяли по пять животных.
Животным опытных групп вводили живые микобактерии вакцинного штамма БЦЖ в прививочных дозах: одна, три, пять, семь, десять. Бычкам контрольной группы была введена одна доза вакцины против бруцеллеза из шт. 82. Затем от всех животных брали кровь для исследования реакцией специфического лизиса лейкоцитов (PCJLJI).
Сенсибилизированные микобактериями вакцины БЦЖ в организме лейкоциты приобретают повышенную чувствительность к антигену и при встрече вне организма (in vitro) с подобным аллергеном лизируются.
В день введения животным вакцины БЦЖ количество лейкоцитов (в среднем по группе) вне организма в пробах крови при взаимодействии с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM было практически одинаковым, что свидетельствует об отсутствии сенсибилизированных лейкоцитов микобактериями БЦЖ.
Через 24 часа после введения вакцины БЦЖ количество лейкоцитов (в среднем по группе) в пробах крови вне организма с ППД-туберкулином для млекопитающих уменьшалось в результате их лизиса, вызванного взаимодействием сенсибилизированных клеток с аллергеном. При введении бычкам одной иммунной дозы вакцины БЦЖ количество лейкоцитов составило 9,0-10 9 /л (Табл.№2), трех доз - 8,6-10 9 /л, пяти доз - 8,7-109 /л, семи доз - 8,6-10 9 /л, десяти доз - 7,1-10 9 /л (Р<0,001). РСЛЛ составила при одной иммунной дозе -14%, трех дозах -16%, пяти дозах - 20%, семи дозах - 28%, десяти дозах - 34%. С увеличением дозы вакцины количество сенсибилизированных лейкоцитов возрастало, что и приводило к повышению лизиса.
В пробах крови с физиологическим раствором, ППД-туберкулином для птиц и KAM количество лейкоцитов через 24 часа увеличивалось под воздействием вакцины БЦЖ на организм. При исследовании проб крови с физиологическим раствором вне организма от животных, которым инъецировали по одной дозе вакцины БЦЖ количество лейкоцитов (в среднем по группе) составило 10,5-10 9 /л, трех доз - 10,2-10 9 /л, пяти доз - 10,9 -10 9 /л, семи доз - 12,0 -10 9 /л, десять доз - 12,0-10 9 /л. Процент лизиса лейкоцитов в пробах крови с ППД-туберкулином для птиц и KAM отсутствовал. Увеличение связано с реакцией организма на введенную вакцину и сопровождается лейкоцитозом. Сенсибилизированные БЦЖ лейкоциты не вступают in vitro во взаимодействие с неродственным аллергеном. Это указывает на специфичность РСЛЛ.
Во всех опытных группах животных количество лейкоцитов в пробах крови с физиологическим раствором, ППД-туберкулином для птиц и KAM через 48 часов достигало максимального уровня. Число лейкоцитов (в среднем по группе) в пробах, содержащих физиологический раствор, ППД-туберкулин для птиц и KAM составило при введении одной иммунной дозы БЦЖ 11,3-10 9 /л, трех доз - 11,6-109 /л, пяти доз - 12,1-10 9 /л, семи доз - 13,3 -10 9 /л, десяти доз - 14,5-109 /л. И после 72 часов медленно начинало снижаться.
Таблица 2.
Количество лейкоцитов и показатели РСЛЛ в крови у крупного рогатого скота сенсибилизированных 1 дозой вакцины БЦЖ.
Время после введения живых микобакте-рий БЦЖ (час.) Кол-во лейкоцитов Кол-во лейкоцитов РСЛЛ%
с физ. р-ром М±ш с ППДмл. М±ш с ППДпт. М±гп с КАМ М±ш с ппд мл. с ппд пт. КАМ,
В момент сенсибилизации 9,2±0,10 9,1±0,07 9,2±0,09 9,1 ±0,06 1 0 1 ; . !
24 10,5±0,10 9,0±0,11 10,5±0,11 10,5±0,07 14 0 0
48 11,3±0,17 8,2±0,17 11,1±0,04 11,1±0,06 27 2 ■■ 2
72. 10,9±0,06 8,4±0,09 10,8±0,10 10,9±0,06 23 1 0 ;
96 10,7±0,07 8,7±0,04 10,6±0,04 10,7±0,07 19 1 0
120 1 ОДЫ),05 8,9±0,07 10,1 ±0,04 10,0±0,03 13 1 2-
144 9,7±0,09 9,0±0,08 9,6±0,08 9,5±0,04 7 1 2
168 9,1 ±0,04 9,2±0,03 9,1 ±0,03 9,1 ±0,04 -1 0 0
М ± ш — среднее значение ± ошибка средней арифметической
С увеличением иммунной дозы БЦЖ количество сенсибилизированных лейкоцитов в пробах крови возрастает и при взаимодействии их in vitro с ППД-туберкулином для млекопитающих они разрушаются, в результате процент лизиса лейкоцитов увеличивается.
Через 48 часов in vitro в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих в результате лизиса происходило снижение количества лейкоцитов. При введении одной иммунной дозы БЦЖ животным число лейкоцитов при повторной встрече с аллергеном in vitro (в среднем по группе) составило 8,2-10 9 /л, трех доз - 8,0-10 9 /л, пяти доз - 7,9 -10 9 /л, семи доз - 7,7-109 /л, десяти доз - 7,5-10 9 /л. Реакция специфического лизиса лейкоцитов in vitro определялась для одной иммунной дозы на животное - 27%, трех доз - 31%, пяти доз — 35%, семи доз - 42%, десяти доз - 48%. Через 72часа лизис лейкоцитов достигал при одной иммунной дозы на животное - 23%, трех доз - 28%, пяти доз - 31%, семи доз - 37%, десяти доз - 41%.
После 72 часов реакция специфического лизиса лейкоцитов снижалась во всех подопытных группах животных.
Количество лейкоцитов в крови крупного рогатого скота в последующие дни (3 -7-й день) снижалось и приходило к первоначальной величине (отмеченной в день вакцинации вакциной БЦЖ) при введении одной, трех доз на 6-й день (144часа), пяти, семи доз - 7-й день (168часов) и десяти доз на 8-й день (192часа).
В пробах крови бычков, содержащих ППД-туберкулин для птиц и KAM показатели РСЛЛ во все дни опытов были отрицательными, лизис лейкоцитов отсутствовал. Результаты свидетельствуют о специфичности реакции.
Большой процент лизиса лейкоцитов наблюдается в пробах крови животных, содержащих ППД-туберкулин для млекопитающих, а процент лизиса лейкоцитов в пробах крови содержащих ППД-туберкулин для птиц и KAM не превышал 3%, то есть был ниже учитываемого порога. Так как лейкоциты, сенсибилизированные микобактериями БЦЖ, in vitro под воздействием специфического родственного аллергена разрушаются.
Активность РСЛЛ характеризуется тем, что при повышении дозы живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ от 0,05 мг до 0,50 мг на животное, увеличивается количество сенсибилизированных лейкоцитов и возрастает процент лизиса лейкоцитов.
С увеличением процента лизиса лейкоцитов в зависимости от введенной прививочной дозы вакцины БЦЖ наблюдается повышенная интенсивность и продолжительность реакции специфического лизиса лейкоцитов.
Выполненные исследования с введением живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ бычкам, позволили установить специфичность и активность реакции специфического лизиса лейкоцитов, что необходимо для дифференциальной диагностики специфических реакций и к другому аллергену, реакция специфического лизиса лейкоцитов с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM была отрицательной, так как количество лейкоцитов в опытных пробах крови с туберкулинами и KAM, а также в контрольных пробах с физиологическим раствором было практически одинаковым.
Отсутствие реакции лизиса лейкоцитов у вакцинированных животных вакциной против бруцеллеза шт.82 с ППД-туберкулином для млекопитающих также указывает на специфичность реакции лизиса лейкоцитов, так как в пробах крови находятся лейкоциты, сенсибилизированные другим неродственным аллергеном.
3.2.2. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови свиней при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ
Для опыта были отобраны 30 голов поросят трехмесячного возраста, принадлежащих гражданам города Новочеркасска.
Поросят разделили на пять групп по 5 голов в каждой, которым подкожно инъецировали по одной, две, три, четыре и пять прививочных доз вакцины БПЖ.
Количество лейкоцитов (в среднем по группе) у свиней в день введения ми-
кобактерий вакцины БЦЖ во всех пробах колебалось от 10,7 до 10,9-10 9 /л, т.е. было в физиологических пределах.
Через 24 часа после введения вакцины в пробах крови с физиологическим раствором, ППД-туберкулином для птиц и KAM количество лейкоцитов было примерно одинаковым. При введении одной иммунной дозы 11,8 - 11,9-10 ', двух доз 13,2-10 9, трех доз 14,8 - 14,9-10 9, четыре доз 15,4 - 15,5-10 9, пяти доз 15,8 - 15,9-109, т.к. сенсибилизированные лейкоциты в реакцию с физиологическим раствором и неродственными аллергенами не вступают, и лизис лейкоцитов отсутствует.
В пробах крови от вакцинированных БЦЖ поросят, несмотря на лейкоцитоз в организме, in vitro в пробах крови при взаимодействии с ППД-туберкулином для млекопитающих количество лейкоцитов стало уменьшаться через 24 часа в результате лизиса сенсибилизированных клеток при встрече с родственным аллергеном. При введении поросятам одной иммунной дозы вакцины БЦЖ, количество лейкоцитов in vitro (в среднем по группе) равнялось 10,5-10 9 /л, двух, трех, четырех доз - 10,0 -10 9 /л, пяти доз - 9,9 -10 9 /л (Р<0,01). Процент лизиса лейкоцитов составил при вакцинации одной дозой 12%, двумя - 14%, тремя -33%, четырьмя - 36%, пятью дозами - 38%, то есть с увеличением дозы мико-бактерий БЦЖ сенсибилизированных лейкоцитов становилось больше, и потому возрастал процент лизиса лейкоцитов. -
Через 48 часов количество лейкоцитоз в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих in vitro достигло минимального значения. Затем количество лейкоцитов увеличивалось. Лизис лейкоцитов составил соответственно введенным дозам. 33%, 41%, 47%, 52%, 55%. Через 48 часов отмечался наибольший процент лизиса лейкоцитов в опытных пробах.
В пробах крови, содержащих физиологический раствор, ППД-туберкулин для птиц и KAM, количество лейкоцитов повышалось и достигло своего максимального значения через 48 часов с момента введения поросятам вакцины БЦЖ. С увеличением дозы введенной вакцины БЦЖ увеличивалось количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих физиологический раствор, ППД-туберкулин для птиц и KAM, то есть возрастание дозы микобактерий БЦЖ сопровождалось увеличением лейкоцитоза в организме, следовательно, повышалось количество лейкоцитов в пробах крови с неспецифическими аллергенами (опытные пробы) и с физиологическим раствором (контрольная проба). Затем (через 72 часа) наблюдали снижение числа лейкоцитов, в этих пробах кров и.
У вакцинированных свиней положительные показатели РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих обнаруживали через 24 - 120 часов после введения одной, двух, трех, четырех доз и через 24-144 часа при пяти прививочных дозах вакцины БЦЖ.
В опытах, проведенных на поросятах, количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих ППД-туберкулин для птиц и KAM, было аналогичным, как в пробах с физиологическим раствором. РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для птиц и KAM была отрицательной, что подтверждает специфичность РСЛЛ с ППД-туберкулином для млекопитающих.
У свиней, вакцинированных вакциной против бруцеллеза шт. 82, количество лейкоцитов в пробах крови с туберкулином и физиологическим раствором было практически одинаковым, следовательно, PCJIJI с ППД - туберкулином для млекопитающих, ППД - туберкулином для птиц и KAM была отрицательной, т.к. лейкоциты, сенсибилизированные другим аллергеном в реакцию с физиологическим раствором и неродственными аллергенами не вступают и лизис лейкоцитов отсутствует. Это свидетельствует о специфичности реакции.
3.2.3. Изучение специфичности и активности PCJIJI крови собак при введении живых микобакгерий вакцины БЦЖ
Опыты проводили на собаках, принадлежащих гражданам города Новочеркасска Ростовской области.
Сформировали пять опытных и одну контрольную группу животных. В каждой группе находилось по 5 собак.
Для проведения исследований собакам подкожно инъецировали одну (0,05мл), две (0,1мл), три (0,15мл), четыре (0,2мл) и пять (0,25мл) прививочных доз вакцины БЦЖ. Животным контрольной группы вводили одну дозу вакцины против бруцеллеза шт. 82.
В день введения вакцины БЦЖ количество лейкоцитов во всех пробах крови по группам in vitro было практически одинаковым.
Через 24 часа после введения животным микобактерий БЦЖ при взаимодействии крови с физиологическим раствором вне организма количество лейкоцитов (в среднем по группе) составило при введении одной прививочной дозы вакцины БЦЖ - 6,1-109/л, двух доз - 6,9-109/л, трех доз - 7,4-109/л, четырех доз -7,7-Ю9/л, пяти доз - 8,3-109/л. В пробах крови с ППД-туберкулином для птиц и KAM были получены данные, близкие к таковым в пробах крови с физиологическим раствором. Обнаруживали лейкоцитоз, так как организм реагирует на введение вакцины БЦЖ, и сенсибилизированные лейкоциты не вступают во взаимодействие с неродственными антигенами.
При дальнейшем исследовании обнаружили, что через 48 часов количество лейкоцитов (в среднем по группе) в пробах крови in vitro, содержащих физиологический раствор, достигло максимального уровня, при введении одной иммунной дозы вакцины - 6,2-109/л; двух доз - 7,4-109/л; трех доз - 8,5-109/л; четырех доз - 9,5-109/л; пяти доз - 10,8-109/л. Количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих физиологический раствор, было большим в два и более раза по сравнению с количеством лейкоцитов в день введения вакцины. Затем количество лейкоцитов начинало повышаться. Угасание реакции связано с вырабатыванием иммунной системой нормальных антител.
В среднем по группе число лейкоцитов в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих уменьшается и достигает минимума через 48 часов при введении одной дозы БЦЖ - 4,6-109/л; двух доз - 3,8-109/л; трех доз - 3,4-109/л; четырех доз - 3,3-109/л; пяти доз - 3,1-109/л. Лизис лейкоцитов в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих был наибольшим и составил при введении одной дозы БЦЖ - 26%, двух доз - 49%, трех доз - 60%, четырех доз -65%, пяти доз - 71%. Чем выше доза введенной вакцины БЦЖ, тем больший
процент лизиса лейкоцитов. При введении больших доз возбудителя в организме наступает сильная аллергия и больше сенсибилизированных лейкоцитов разрушается при встрече с родственным (специфическим) антигеном, что видно из опытов в РСЛЛ вне организма.
Установлено, что через 72 часа количество лейкоцитов (в среднем по группе) в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих увеличивалось, а в пробах с физиологическим раствором с ППД-туберкулином для птиц и KAM уменьшалось. Процент лизиса лейкоцитов через 72часа в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих равен при введении одной иммунной дозы 23%, двух доз - 39%,трех доз - 50 %, четырех доз - 60%, пяти доз - 64%.
Положительные показатели реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в пробах крови, содержащих ППД-туберкулин для млекопитающих, отмечали при введении одной дозы вакцины БЦЖ через 24 - 96 часов, двух доз - через 24-120 часов, трех доз - 24 - 120 часов, четырех доз 24-168 часов, пяти доз 24 - 240 часов.
Активность реакции специфического лизиса лейкоцитов характеризуется тем, что с повышением введенной дозы живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ животному возрастает показатель РСЛЛ и продолжительность сенсибилизации лейкоцитов.
Реакция специфического лизиса лейкоцитов в пробах крови опытных групп, содержащих ППД-туберкулин для птиц и KAM, была отрицательной и колебалась до 3%.
У вакцинированных собак одной дозой противобруцеллезной вакцины реакция специфического лизиса лейкоцитов в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM была отрицательной. Количество лейкоцитов в опытных и контрольных пробах крови с тубер-кулинами, KAM и физиологическим раствором было практически одинаковым, что указывает на специфичность реакции лизиса лейкоцитов, так как в пробах крови сенсибилизированные лейкоциты не вступают во взаимодействие с неродственными антигенами.
3.2.4. Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови кроликов при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ
Для поведения опытов отобрали 15 кроликов и разделили их на три группы.
После введения пяти, десяти доз микобактерий вакцины БЦЖ кроликам опытных групп и одной дозы вакцины противобруцеллезной шт. 82 животным контрольной группы, была взята кровь и разделена на пробы.
При исследовании установлено, что в день введения вакцины количество лейкоцитов во всех группах составило 7,9- 8,8-109/л.
В пробах крови от кроликов, вакцинированных пятью дозами живых микобактерий вакцины БЦЖ, с физиологическим раствором в момент введения вакцины, количество лейкоцитов в среднем по группе было 8,8-109/л. Затем количество лейкоцитов увеличивается и через 24 часа составило 11,3-109/л, а через 48 часов достигает максимального уровня - 16,1-109/л. Это связано с усиле-
нием функциональной деятельности кроветворных органов, вызванной поступающими в организм антигенами - микобаетериями БЦЖ.
При взаимодействии крови вне организма с ППД—туберкулином для млекопитающих через 24 часа наблюдали самое низкое содержание лейкоцитов. Реакция специфического лизиса лейкоцитов через 24 часа равна 58%, через 48 часов - 71,4%, 72 часа - 70,5%. Максимальный процент лизиса лейкоцитов был зарегистрирован через 48 часов, затем процент лизиса лейкоцитов уменьшался. Положительная PCJIJI с ППД-туберкулином для млекопитающих наблюдалась через 24 - 96 часов.
Количество лейкоцитов в пробах крови с ППД-туберкулином для птиц и KAM было аналогичным, как и в пробах крови с физиологическим раствором. Реакция специфического лизиса лейкоцитов с ППД-туберкулином для птиц и KAM была отрицательна (от -1% до 1%), что свидетельствует о специфичности реакции, так как сенсибилизированные лейкоциты не вступают во взаимодействие с чужеродными аллергенами.
Исследованиями установлено, что при введении десяти доз живых микобак-терий вакцины БЦЖ, через 24 и 48 часов наименьшее количество лейкоцитов in vitro было в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих. Уменьшение количества лейкоцитов в пробах крови с однородным антигеном ППД-туберкулином для млекопитающих нельзя отнести к лейкопении, так как по существу лизис лейкоцитов произошел вне организма и лейколиз вызван усиленным разрушением сенсибилизированных лейкоцитов при воздействии специфического аллергена.
Определено, что при взаимодействии крови с ППД-туберкулином для млекопитающих процент лизиса лейкоцитов через 24 часа составлял 56%, через 48 часов - 72%, через 72 часа - 41%.
Затем количество лейкоцитов начинало повышаться и соответствовало норме через 672 часа.
В пробах крови с физиологическим раствором при введении десяти доз вакцины БЦЖ количество лейкоцитов стало повышаться через 24 часа. Наибольшее количество лейкоцитов in vitro зафиксировали через 96 часов после введения вакцины БЦЖ. Затем количество лейкоцитов медленно снижалось и соответствовало норме (число лейкоцитов в день введения вакцины) через 672 часа.
При повышении дозы живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ, увеличивается количество сенсибилизированных лейкоцитов, возрастает процент лизиса лейкоцитов и продолжительность реакции, этим характеризуется активность реакции специфического лизиса лейкоцитов.
Результаты в пробах крови с ППД-туберкулином для птиц и KAM были практически одинаковыми с пробами крови, содержащими физиологический раствор, следовательно, PCJIJI отсутствовала, что свидетельствует о специфичности реакции, так как лейкоциты не вступают в реакцию с чужеродными аллергенами.
У вакцинированных одной дозой противобруцеллезной вакцины шт. 82 кроликов PCJIJI с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц, KAM была отрицательной, так как в крови отсутство-
вали сенсибилизированные лейкоциты к этим аллергенам - диагностикумам. Количество лейкоцитов в пробах крови, содержащих туберкулин и физиологи-, ческий раствор, у животных было практически одинаковым.
Отсутствие реакции лизиса лейкоцитов в пробах крови у вакцинированных животных вакциной противобруцеллезной шт. 82 , содержащих ППД-туберкулин для млекопитающих указывает на специфичность реакции, так как диагностикумы - аллергены не вступают в реакцию с сенсибилизированными лейкоцитами иного аллергена.
3.3. Исследование возможности использования PCJIJI для дифференциации неспецифических реакций у коров, положительно реагировавших
на туберкулин
3.3.1. Исследование РСЛЛ крови у коров, положительно реагировавших на туберкулин в Матвеево-Курганском районе
Диагностику туберкулеза реакцией специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) в производственных условиях выполняли в СПК «Рассвет» Матвеево-Курганского района, Ростовской области.
27 ноября 2006 г. на бойне СПК «Рассвет» был произведен комиссионный контрольно-диагностический убой семи коров, реагирующих на туберкулин, с последующим проведением послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизы.
Перед убоем у коров взяли кровь для исследования реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ).
При исследовании установлено, что у трех (43%) коров реакция специфического лизиса лейкоцитов с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM была отрицательной, т.е. процент лизиса лейкоцитов был равен 1% - 4%.
У четырех коров (57%) лизис лейкоцитов в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих составил 27%, 29%, 36%, 71%, тогда как РСЛЛ с ППД-туберкулином для птиц и с KAM была отрицательной.
При проведении послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизы семи реагирующих на туберкулин коров только у четырех (57%) были положительными показателями РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих. У двух (29%) из них обнаружены изменения в лимфатических узлах, характерные для туберкулеза: у одной в подчелюстном, у второй в надартери-альном лимфатических узлах. В тушах двух убитых коров (29%) с положительной реакцией на туберкулиновую пробу и положительными показателями РСЛЛ, патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, во внутренних органах и лимфатических узлах визуально не обнаружено. Это, связано с недавним инфицированием животных возбудителем туберкулеза, поэтому патологоанатомические изменения еще не успели сформироваться. Кроме этого установлено, что положительные реакции на внутрикожное введение туберкулина с отрицательными показателями РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих были у двух (29%) глубокостельных (7 - 8,5 мес. беременности) коров и у одной (14%) - с острым эндометритом.
У семи коров (100%) с положительной туберкулиновой пробой, PCJIJI в пробах с ППД-туберкулином для птиц и KAM отрицательна, т.к. сенсибилизация не вызвана птичьими и атипичными микобактериями.
3.3.2. Исследование реакцией специфического лизиса лейкоцитов крови у коров в Сальском районе, положительно реагировавших на туберкулин
В производственных условиях диагностику туберкулеза РСЛЛ выполняли в ОАО «Южное», Сальского района, Ростовской области.
24 августа 2009 г. на мясокомбинате Песчанокопского района был произведен комиссионный контрольно-диагностический убой 32 коров, реагировавших на туберкулин, с последующей ветеринарно-санитарной экспертизой.
Перед убоем у коров была взята кровь для исследования в реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ). Результаты исследований по количеству лейкоцитов и показателям РСЛЛ у коров, с выраженной реакцией на туберкулин представлены в таблице №3.
Из 32 коров, реагировавших на внутрикожное введение туберкулина, только у восьми (25%) РСЛЛ была положительна при взаимодействии проб крови с ППД - туберкулином для млекопитающих. Процент лизиса составил у коров 19%, 20%, 23,1%, 23,8%, 24,5%, 30,2%, 31%, 32,7%.
Исследованиями установлено, что в пробах с ППД-туберкулином для птиц у восьми (25%) жив'бтных лизис лейкоцитов составил 14,3%, 15,8%, 20,1%, 21%, 23,1%, 23,8%, 27,3%, 34,5%.
У семи (22%) коров положительная РСЛЛ была с KAM. РСЛЛ составила 19%, 20%, 23,2%, 23,8%, 24,6%, 28,6%, 33,3%.
Из них у шести (19%) коров положительная РСЛЛ наблюдалась как с ППД-туберкулином для млекопитающих, так и с ППД-туберкулином для птиц. У двух коров (6,3%) положительная реакция была на ППД-туберкулин для млекопитающих, ППД-туберкулин для птиц и KAM. У восемнадцати (56%) животных, реагировавших "на' внутрикожное введение туберкулина, реакция специфического лизиса лейкоцитов'была отрицательна во всех пробах крови.
Послеубойный осмотр туш и внутренних органов 32 коров, реагирующих на туберкулин, показал, что из восьми (25%) коров с положительными показателями РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих, только у одной (3%) обнаружены в заглоточных лимфатических узлах изменения, характерные для туберкулеза, у двух (6%) - эхинококк в печени, у трех (9%) - стельность, у двух (6%) - стельность и эхинококк в печени.
Из 32 коров, реагирующих на внутрикожное введение туберкулина, у 14 (44%) были обнаружены эхинококковые пузыри в печени и у одной (3%) - в легких. В одном случае (3%) был обнаружен гнойный абсцесс в печени. Двадцать голов (63%) были стельные, из них четыре (13%) коровы были больны эхинококкозом, а у одной (3%) обнаружены туберкулезные изменения в заглоточных лимфатических узлах.
Таблица 3.
Количество лейкоцитов, показатели РСЛЛ и патологоанатомические изменения у коров в Сальском районе, положительно прореагировавших на туберкулин.
№ п.п. Ин-вен-тарный № Количество лейкоцитов при взаимодействии крови с РСЛЛ, % Патологоанатомические изменения, стельность
Физ р- ром ппд -Т для мл. ППД - Т для пт. К А М ппд -Т для мл. ппд -Т ДЛЯ пт. к А М
1 5948 5,2 3,5 5,2 5,2 32,7 0 0 Ст.7мес., изменения, характерные для туберкулеза в заглоточных лимф, узлах
2 5070 5,8 4,0 3,8 5,8 31,0 34,5 0 Ст.Змес.
3 5625 6,3 4,4 5,0 6,3 30,2 20,1 0 Эхинококкоз печени.
4 4533 4,9 3,7 4,9 4,9 24,5 0 0 Эхинококкоз печени.
5 5926 10,5 8,0 8,0 8,0 23,8 23,8 23,8 Ст.Змес., эхинококкоз печени.
6 5602 6,5 5,0 5,0 6,5 23,1 23,1 0 Ст.8мес.
7 5631 9,5 7,6 8,0 9,5 20 15,8 0 Ст.Змес.
8 5563 10,5 8,5 8,3 7,5 19 21 28,6 Ст.Змес., эхинококкоз печени.
9 5916 5,5 5,0 4,0 4,4 9,1 27,3 20 Эхинококкоз печени.
10 5567 5,6 5,6 5,6 4,3 0 0 23,2 Ст.бмес., эхинококкоз печени.
11 5632 6,6 6,6 6,6 4,8 0 0 24,6 Эхинококкоз печени.
12 3016 4,2 4,2 3,6 4,2 0 14,3 0 Эхинококкоз печени.
13 5077 4,5 4,5 4,5 3,0 0 0 33,3 Ст.бмес.
14 5923 5,8 5,8 5,8 4,7 0 0 19 Ст.8мес.
15 5578 6,2 6,0 6,2 6,2 3,2 0 0 Эхинококкоз печени.
16 6626 5,1 5,1 5,1 5,1 0 0 0 Эхинококкоз печени.
17 5573 5,3 5,0 5,3 5,3 7 0 0 Ст.7мес., эхинококкоз печени.
18 5599 6,5 5,9 6,5 6,5 9,2 0 0 Эхинококкоз печени.
19 5660 4,8 4,8 4,8 4,5 0 0 6,3 Эхинококкоз легких.
20 5664 6,2 6,2 6,2 6,0 0 0 3,2 Эхинококкоз печени.
21 5538 5,4 4,9 5,3 5,4 9,3 1,8 0 Эхинококкоз печени.
22 7406 5,5 5,5 5,5 5,5 0 1,8 0 Ст.7мес.
23 5137 6,4 5,9 6,4 6,4 7,8 0 0 Ст.7мес.
24 5241 15,5 15,5 15,5 15,0 0 0 3,2 Ст.5мес.
25 5946 10,0 10,0 10,0 9,8 0 0 2 Гнойный процесс в печени.
26 5176 5,0 5,0 4,9 4,8 0 2 4 Ст.8мес.
27 5668 5,0 5,0 4,8 5,0 0 4 0 Ст.8мес.
28 4506 5,3 5,3 5,3 5,3 0 0 0 Ст.4мес.
29 6514 7,1 7,1 7,1 7,1 0 0 0 Ст.Змес.
30 5027 6,5 6,5 6,5 6,5 0 0 0 Ст.бмес.
31 6063 5,5 5,5 5,5 5,5 0 0 0 Ст.бмес
32 4922 6,8 6,8 6,8 6,8 0 0 0 Ст.7мес.
Из восьми убитых коров, у которых РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих была положительной, только у одной (12,5%) были обнаружены изменения в заглоточных лимфатических узлах, характерные для туберкулеза. У семи (87,5%) убитых животных с положительной РСЛЛ патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах, характерных для туберкулеза, не обнаружено, что, вероятно, связано с недавним инфицированием этих коров возбудителем туберкулеза, и пато-логоанатомические изменения еще не успели сформироваться.
У семи (21%) из 32 коров, реагировавших на туберкулин, положительная реакция была в пробах крови с KAM, что связано с инфицированием организма атипичными микобактериями.
Положительная реакция в пробах крови с ППД-туберкулином для птиц наблюдалась у восьми (25%) убитых животных, это объясняется с инфицированием коров микобактериями птичьего вида (М. avium).
Выявлены животные с положительной пробой на туберкулин, которые заражены несколькими видами микобактерий. Так, у четырех (12,5%) коров положительная реакция была в пробах с ППД-туберкулином для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц, у одной (3,1%) - с ППД-туберкулином для птиц и KAM, у двух (6,3%) - с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM.
Из 32 коров, положительно реагировавших на внутрикожное введение туберкулина, у 18 коров (56%) РСЛЛ в пробах с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM была отрицательной, что связано с другими заболеваниями (эхинококкозом и т.д.) и стельностью.
Бактериологические исследования патматериала на туберкулез дали отрицательные результаты.
3.3.3. Исследование РСЛЛ крови коров в Неклиновском районе, положительно реагировавших на туберкулин
В производственных условиях диагностику туберкулеза реакцией специфического лизиса лейкоцитов выполняли в СПК «Советинский», Неклиновского района, Ростовский области.
Восемь коров на ранее благополучной ферме положительно реагировали на туберкулин.
6 сентября 2009г. был произведен контрольно-диагностический убой коров, положительно реагирующих на туберкулин. При послеубойном осмотре патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах визуально не обнаружено. Бактериологические исследования патматериала на туберкулез в Ростовской областной лаборатории дали отрицательные результаты.
Перед убоем, у коров, реагировавших на туберкулин, взяли кровь, для проведения реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ).
Установлено, что из восьми коров с положительными туберкулиновыми пробами только у двух РСЛЛ была положительна при взаимодействии проб
крови с ППД-туберкулином для млекопитающих. Процент лизиса лейкоцитов у коров равен 10% и 16%.
У трех коров реакция специфического лизиса лейкоцитов была положительна с ППД-туберкулином для птиц. Лизис лейкоцитов у животных был 26%, 20%, 20%.
В пробах крови, содержащих KAM, были получены отрицательные результаты РСЛЛ. Процент лизиса лейкоцитов составил от 0% до 2%.
У трех коров (37,5%), реагировавших на туберкулин, РСЛЛ во всех пробах была отрицательна.
У двух убитых коров (25%) с положительной туберкулиновой пробой и давших положительную РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих, патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не выявлено, это связано с недавним инфицированием животных возбудителем туберкулеза, в связи с чем патологоанатомические изменения еще не успели сформироваться.
Положительная реакция в пробах крови с ППД-туберкулином для птиц наблюдалась у трех животных (37,5%), положительно реагировавших на внутри-кожное введение туберкулина, у которых патологоанатомические изменения характерные для туберкулеза не обнаружены, что можно объяснить инфицированием коров микобактериями птичьего вида (М. avium).
Если сенсибилизация вызвана не туберкулезными микобактериями, то есть этиология сенсибилизации другая, то результаты РСЛЛ в пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих будут отрицательными.
Возможность применения способа ранней диагностики туберкулеза in vitro на клетках крови непосредственно в практических условиях хозяйств будет способствовать широкому применению аллергенов различной природы в качестве средств дифференциальной диагностики специфических и неспецифических туберкулиновых реакций.
4. ВЫВОДЫ
1. Рабочая доза для реакции специфического лизиса лейкоцитов в пробе 0,1 мл исследуемой крови и 0,05 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия составляет 0,05мл для ППД-туберкулинов и KAM.
2. У сенсибилизированных животных путем введении в организм животных живых микобактерий вакцины БЦЖ положительная РСЛЛ вне организма обнаружена через 24 часа после введением вакцины с аллергенами - ППД-туберкулином для млекопитающих.
3. Повышение дозы живых микобактерий вакцинного штамма БЦЖ животному сопровождается увеличением показателя РСЛЛ и продолжительности реакции, что свидетельствует о возрастании сенсибилизированных лейкоцитов и активности реакции специфического лизиса лейкоцитов.
4. В пробах крови с физиологическим раствором, ППД-туберкулином для птиц и KAM у вакцинированных животных живыми микобактериями вакцины БЦЖ
и i! пробах крови с физиологическим раствором, ППД-туберкулином для млекопитающих, ПЦЦ-туберкулином для птиц и KAM вакцинированных вакциной из штамма 82 количество лейкоцитов было одинаковым, то есть получена отрицательная РСЛЛ, что указывает на специфичность реакции, так как сенсибилизированные лейкоциты не вступают в реакцию с чужеродными аллергенами.
5, В реакции специфического лизиса лейкоцитов можно использовать много аллергенов, что позволяет дифференцировать неспецифические реакции на туберкулин ..
6. Предлагаемый нами способ РСЛЛ дополняет и совершенствует комплекс существующей диагностики и дифференциальной диагностики туберкулеза животных.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Реакция специфического лизиса лейкоцитов позволяет обнаружить инфицированное животное в первые сутки после заражения, поэтому имеет большое практическое значение для ранней диагностики туберкулеза.
2. Рекомендуем для прижизненной дифференциальной диагностики специфических и неспецифических реакций на введение ППД-туберкулина для млекопитающих применять реакцию специфического лизиса лейкоцитов, что позволит уточнить диагноз на туберкулез и предотвратить неоправданный и необоснованный убой здоровых высокопродуктивных животных.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Дубовой, Б.Л. Новое в дифференциальной диагностике туберкулеза сельскохозяйственных животных / Б.Л. Дубовой, О.Н. Соловьева, Н.В. Улько // Сборник научных трудов «Диагностика, профилактика и лечение при инфекционных болезнях сельскохозяйственных животных».- Персиановский,' 2000.-С.8-12.
2. Дубовой, Б.Л. Метод ранней диагностики туберкулеза крупного рогатого скота РСЛЛ / Б.Л. Дубовой, О.Н. Полякова // Ветеринарная медицина-домашних животных.-Казань.-№3,2006.-С. 54-56.
3. Дубовой, Б.Л. Поиск ранней диагностики туберкулеза животных / Б.Л. Дубовой, О.Н. Полякова // Международная научно-практическая, конференция .«Основные проблемы, тенденции и перспективы устойчивого развития сельскохозяйственного производства».-Махачкала.-Т.2, 2006.-С.68-69.
4. Дубовой, Б.Л. Исследования специфичности и активности РСЛЛ при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Б.Л. Дубовой, О.Н. Полякова // Инновационный путь развития АПК-магистральное направление научных исследований для сельского хозяйства.-Персиановский.-2007.-С.67-69.
5. Полякова, О.Н. Ранняя диагностика туберкулеза свиней / Полякова О.Н,, Дубовой Б.Л.// Материалы межрегиональной конференции «Интенсивные технологии в свиноводстве: проблемы и пути решения»,- Персиановский,-200.7,-С.124-125. У"
6. Полякова, О.Н. РСЛЛ у дважды положительно прореагировавших корон на внутрикожную туберкулиновую пробу / О.Н. Полякова, Б.Л. Дубовой, H.A. Соловьев// Материалы Всероссийская научно-практическая конференция «Aicry-альные проблемы функциональной и морфофункциональной диагностики болезней животных».-Новочеркасск.-2007.-С. 179-180.
7. Полякова, О.Н. Изучение изменений активности туберкулина-ППД для мле копитающих РСЛЛ / О.Н. Полякова, Б.Л. Дубовой // Материалы Всероссийская научно-практическая конференция «Актуальные проблемы патологии морфологии и онкологии животных».-Новочеркасск.-2007.-С.74-75.
8. Полякова, О.Н. Реакция специфического лизиса лейкоцитов при диагностики туберкулеза животных / О.Н. Полякова.// Материалы Всероссийская научно-практическая конференция «Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК».-Новочеркасск.-2008.--С.18-19.
9. Полякова, О.Ы. Изучение неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота /О.Н. Полякова // Вестник Саратовского госагро -университета им.Н.И.Вавнлова.-№6,2008.-С.50-53.
10. Дубовой, Б.Л. Дифференциальная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота реакцией специфического лизиса лейкоцитов / Б.Л. Дубовой, О.Н. Полякова // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы на ос нове инновационных достижений».-Новочеркасск.-2009.-С.З-7.
11. Дубовой Б.Л. Способ ранней диагностики туберкулеза животных / Б.Л. Дубовой, О.Н. Полякова, А.И. Клименко, A.B. Коваленко, Л.П. Миронова // Изобретения. Полезные модели. Официальный бюллетень №25,2009.-С.2.
12. Полякова, О.Н. Дифференциальная диагностика внутрикожных реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих (Тмл) у коров / О.Н. Полякова, Б.Л. Ду-бозой, В.В. Мосейчук // Материалы Международной научно-практической комференциию «Интеграция науки, образования продовольственной безопасности российской федерации».-Персиановский.-Т.№3,2010.-С.177-180.
13. Дубовой, Б.Л. Диагностика туберкулеза дифференциацией положительных внутрикожных туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота / Б.Л. Дубовой, О.Н. Полякова, В.И. Добрелин, В.В. Мосейчук, Г.В. Горячева II Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства».-Новочеркасск.-2010,-С. 10-13.
14. Полякова, О.Н. Реакция специфического лизиса лейкоцитов при постановке дифференциального диагноза на туберкулез / О.Н. Полякова, Б.Л. Дубовой // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства».- Новочеркасск.-^ 10.-С.8-9.
15. Дубовой, Б Л. Диагностика неспецифических туберкулиновых реакций, вызванных атипичными и птичьими микобактериями /БЛ. Дубовой, О.Н.Полякова // Ветеринария Кубани. - Краснодар.-№1,2011. - С. 21-23.
16. Полякова, О.Н.Определение причин неспецифических туберкулиновых реакций ППД-туберкулином для птиц и KAM вне организма /О.Н. Полякова, БЛ. Дубовой // Ветеринария Кубани. - Краснодар.-JVsl, 2011. - С. 810.
Список сокращений:
1. БЦЖ - сухая вакцина БЦЖ представляет собой высушенные живые ми-кобактерии туберкулеза вакцинного штамма БЦЖ.
2. KAM - комплекс атипичных микобактерий.
3. ППД для мл. — протеин пурифиед дериват для млекопитающих, представляет собой очищенную белковую фракцию, выделенную из культураль-ной жидкости возбудителя туберкулеза соответственно бычьего вида, выращенного на синтетической питательной среде.
4. ППД для пт. - протеин пурифиед дериват для птиц, представляет собой очищенную белковую фракцию, выделенную из культуральной жидкости возбудителя туберкулеза соответственно птичьего вида, выращенного на синтетической питательной среде.
5. РСЛЛ - реакция специфического лизиса лейкоцитов.
Полякова Ольга Николаевна СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЖИВОТНЫХ.
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Подписано в печать I4.01.il Печать оперативная Объем 1 усл.печ.лнст. Заказ № 198/1 Тираж 100 экз. Издательско-полиграфическое предприятие ООО "МП Книга", г.Ростов-ка-Доку, Таганрогское шоссе, 106
Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Полякова, Ольга Николаевна
Введение.
1. Обзор литературы.:.
1.1 Общие сведения о туберкулезе и его возбудителе.
1.2 Эпизоотологические данные.
1.3 Диагностика туберкулеза.
1.4 Неспецифические реакции на туберкулин.
1.5 Дифференциальная диагностика туберкулеза.
1.6 Течение, клинические признаки и формы проявления туберкулеза.
1.7 Патогенез, патологоанатомические изменения при туберкулезе.
1.8 Обсуждение литературного обзора.
2. Собственные исследования.
2.1 Реакция специфического лизиса лейкоцитов.
2.2 Материалы и методы исследования РСЛЛ.
3. Результаты собственных исследований.
3.1 Определение для РСЛЛ рабочей дозы ППД-туберкулина для млекопитающих, ППД-туберкулина для птиц и КАМ (in vitro).
3.2 Изучение специфичности и активности реакции специфического лизиса лейкоцитов.
3.2.1 Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови крупного рогатого скота при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ.
3.2.2 Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови свиней при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ.
3.2.3 Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови собак при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ.
3.2.4 Изучение специфичности и активности РСЛЛ крови кроликов при введении живых микобактерий вакцины БЦЖ.
3.3 Исследование РСЛЛ для дифференциации неспецифических реакций коров, реагировавших на туберкулин.
3.3.1 Исследование РСЛЛ крови у коров, реагировавших на туберкулин, в Матвеево-Курганском районе Ростовской области.
3.3.2 Исследование крови коров, реагировавших на туберкулин реакцией специфического лизиса лейкоцитов в Сальском районе Ростовской области.
3.3.3 Исследование РСЛЛ крови коров, реагировавших на туберкулин в Неклиновском районе Ростовской области.
3.4 Экономический ущерб и экономический эффект.
3.5 Обсуждение результатов исследований.
4. Выводы.
5. Практические предложения.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Совершенствование ранней диагностики туберкулеза животных"
Актуальность темы. По статистическим данным Департамента ветеринарии Минсельхоза России туберкулез крупного рогатого скота занимает второе место (после лейкоза) в структуре инфекционных болезней. Во-первых потому, что им болеют люди, все виды животных и птиц. Во-вторых, эта болезнь значительно распространена в настоящее время, хотя с момента открытия ее возбудителя Р.Кохом прошло много лет, а победить болезнь не удается до сих пор. Заболевание регистрируется во многих странах.
Поэтому борьба с туберкулезом животных - важнейшая проблема. Ликвидация туберкулеза животных имеет не только экономическое значение, но и социально-гигиеническое и эпидемиологическое.
Хозяйства несут значительные убытки, связанные с выбраковкой мяса при убое больных животных, недополучением продукции, приплода, а также затраты на обеззараживание молока, диагностические исследования, дезинфекцию животноводческих помещений и т. д.
Распространение туберкулеза среди крупного рогатого скота, свиней, овец, коз и других видов животных ведет к расходам на проведение вынужденных и профилактических мероприятий по купированию, уничтожению и недопущению заноса инфекции.
Источник возбудителя инфекции - больные животные всех видов, а также человек. Обязательным условием эпизоотического процесса является наличие восприимчивых животных, со сниженной резистентностью организма.
Наиболее важным в системе профилактических противотуберкулезных мероприятий является своевременное выявление зараженных животных, как источника возбудителя туберкулеза и удаление их из стада.
Одной из задач профилактики туберкулеза является совершенствование диагностики туберкулеза сельскохозяйственных животных, так как существующие методы диагностики не обеспечивают обнаружение возбудителя в начальной стадии болезни. Клинические признаки не всегда типичны. От момента заражения до появления первых признаков туберкулеза может пройти несколько месяцев, и даже лет. Ветеринарным врачам при постановке диагноза на туберкулез требуются более чувствительные методы, позволяющие обнаруживать состояние сенсибилизации, выявлять этиологию туберкулиновых реакций при туберкулезе на всех этапах развития аллергического процесса в доклинический период.
Причины возникновения аллергических реакций различны, это поражение гельминтами (фасциолез, эхинококкоз, дикроцелиоз), лейкоз, гнойные воспалительные процессы (абсцессы, бурситы, маститы, эндометриты), а также гормональные воздействия (охота, стельность), избыток белка в рационе животных, различные стрессовые факторы.
Многие ученые при изучении аллергической диагностики, отмечают случаи обнаружения реагирующих на туберкулин животных, у которых не удается подтвердить наличие болезни. Объясняют появление таких реакций на туберкулин сенсибилизацией организма животных атипичными и паратуберкулезными микобактериями, заражением микобактериями человеческого и птичьего вида [98].
Изучением неспецифических реакций занимались многие авторы: О.В. Мартма (1978), В.М. Харитонова (1983), A.B. Гуркин (1985), Л.И. Ходун (1987), A.C. Донченко (1987.), Д.Д. Новак (1990), Г.А. Юдин (1990), М.А. Сафин (1992), А.И. Кузин (1992), A.M. Падалица (1998), А.Н. Шаров (2000), А.Х. Найманов (2009) и другие.
В связи с этим при постановке диагноза на туберкулез особенно необходима дифференциация специфических и иеспецифических реакций на внутрикожное введение туберкулина.
Существующая прижизненная диагностика аллергическими исследованиями и лабораторная диагностика не выявляет животных в первые дни, и даже месяцы после их заражения. Поэтому, требуются более чувствительные методы, которые позволяют дифференцировать специфические и неспецифические реакции на внутрикожное введение туберкулина.
Проблема совершенствования прижизненных методов диагностики туберкулеза животных имеет своей целью поиск ранней доклинической постановки диагноза и решения ряда задач, связанных с дифференциацией туберкулиновых реакций, вызванных различными видами микобактерий, что имеет большое ветеринарно-санитарное и эпизоотическое значение.
Нужен метод, который в кратчайший срок поможет выявить больное животное и предотвратить неоправданный и необоснованный убой высокопродуктивных животных.
Цель исследования. Целью наших исследований являлась разработка способа ранней диагностики туберкулеза животных и дифференциация специфических реакций от неспецифических, на внутрикожное введение туберкулина.
Для достижения намеченной цели решались следующие задачи:
1. Определить для реакции специфического лизиса лейкоцитов рабочую дозу ППД-туберкулина для млекопитающих, ППД-туберкулина для птиц и KAM (in vitro).
2. Изучить специфичность и активность лейкоцитов в реакции специфического лизиса лейкоцитов in vitro с аллергенами: ГТПД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM, на животных сенсибилизированных живыми микобактериями БЦЖ.
3. Исследовать реакцию специфического лизиса лейкоцитов (PCJ1J1) для дифференциации специфических и неспецифических реакций у реагировавших на туберкулин коров.
Научная новизна. Разработан, испытан и предложен лабораторный аллергический способ диагностики туберкулеза и дифференциации л t туберкулиновых проб методом in vitro реакцией специфического лизиса лейкоцитов. Использование реакции специфического лизиса лейкоцитов с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и KAM позволило выявить неспецифическую сенсибилизацию организма, вызванную птичьими и атипичными микобактериями.
Научная новизна подтверждена патентом на изобретение №2366454 «Способ ранней диагностики туберкулеза животных».
Основные положения, выносимые на защиту: 1 1. Специфичность и активность реакции специфического лизиса лейкоцитов при введении интактным животным живых микобактерий БЦЖ и противобруцеллезиой вакцины штамма 82.
2. Дифференциация неспецифических туберкулиновых реакций у реагирующих на туберкулин коров в производственных условиях реакцией специфического лизиса лейкоцитов.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», ГНУ Северо-Кавказский 1 зональный научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН в 2006-2010 гг. и на всероссийских и международных научно-практических конференциях гг. Махачкале, Казани, Новочеркасске, п. Персиаповский.
Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», проходят апробацию в областной ветеринарной лаборатории, СББЖ г. Новочеркасска, СПК «Рассвет» Матвеево-Курганского района, ОАО «Южное» Сальского района и СПК «Советинский» 1 Неклиновского района Ростовской области.
Публикации по теме. По материалам диссертационной работы опубликовано 15 научных работ, три из них в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК РФ, и патент РФ на способ диагностики.
Практическая значимость. Полученный научный материал позволяет обнаружить инфицированное животное в начальной стадии заражения и отличить неспецифические туберкулиновые реакции, вызванные атипичными и птичьими микобактериями, от специфических, что имеет важное практическое значение для сохранения животных с неспецифическими туберкулиновыми реакциями. РСЛЛ рекомендуется применять при ранней диагностике туберкулеза и дифференциальной диагностике специфических и неспецифических реакций на введение ППД-туберкулина для млекопитающих при внутрикожной туберкулиновой пробе.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 153 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. В диссертации приведены 28 таблиц. Список литературы включает 264 источника, в том числе 58 иностранных авторов.
Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Полякова, Ольга Николаевна
125 5. Выводы
1. Реакция специфического лизиса лейкоцитов в сравнении с туберкулиновой пробой является более специфичной, что позволяет выявить зараженных туберкулезом животных на более ранних стадиях инфицирования. PCJIJI дополняет комплекс существующей диагностики и дифференциальной диагностики туберкулеза животных.
2. Для реакции специфического лизиса лейкоцитов в пробе с 0,1 мл исследуемой крови и 0,05 мл 3,8%-го раствора цитрата натрия рабочая доза 1И1 Д-туберкулинов и KAM составляет 0,05 мл.
3. В опытах на интактных животных при введении им живых микобактерий БЦЖ положительная РСЛЛ вне организма обнаруживается в первые сутки.
4. При повышении введенных доз живых микобактерий вакцинного штамма БЦЖ увеличивается количество сенсибилизированных лейкоцитов, активность реакции лизиса проявляется более интенсивно и продолжительно.
5. Сенсибилизированные лейкоциты не вступают в реакцию с чужеродными аллергенами, чему свидетельствуют исследования опытных проб крови, от животных вакцинированных противобруцеллезпой вакцины из шт. 82.
6. В реакции специфического лизиса лейкоцитов можно использовать ППД-туберкулин для млекопитающих, ППД-туберкулин для птиц и KAM, что позволяет дифференцировать неспецифические реакции на туберкулин, вызванные атипичными и птичьими микобактериями.
6. Практические предложения
1. Реакция специфического лизиса лейкоцитов позволяет обнаружить инфицированное животное в начальной стадии заболевания, поэтому имеет большое практическое значение для ранней диагностики туберкулеза.
2. Рекомендуем для прижизненной дифференциальной диагностики специфических и неспецифических реакций на введение 1И1 Д-туберкулина для млекопитающих применять реакцию специфического лизиса лейкоцитов, что позволит уточнить диагноз на туберкулез и предотвратить неоправданный и необоснованный убой здоровых высокопродуктивных животных.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Полякова, Ольга Николаевна, Новочеркасск
1. Авилов, В.М. Больше внимание профилактике и борьбе с туберкулезом животных / В.М. Авилов, В.Ф. Пылинин, Н.П. Овдиенко, В.А. Ведерников // Ветеринария. 1997. - №8. - С.3-8.
2. Авилов, В.М. Эпизоотическое состояние животноводства по туберкулезу в РСФСР и меры борьбы с болезнью / В.М. Авилов, В.Ф. Пылинин // Ветеринария. 1992. - №1. - СЗ-9.
3. Агапова, М.Ф. Материалы Сибирского международного ветеринарного конгресса. Новосибирск. - 2005.
4. Александров, H.A. Обоснование и опыт искоренения туберкулеза крупного рогатого скота методом замены / H.A. Александров // Изд. Саратовского унта. 1975. - С.57.
5. Алипер, Т.И. ПЦР в реальном времени для диагностики туберкулеза / Т.И. Алипер, Н.И. Потапов, Е.А. Непоклонов, А. Д. Забережный, Т.В. Гребенникова // Ветеринарная жизнь. 2006. - №7-8. - С. 13.
6. Аллахвердиев В.М. Природные резервуары туберкулеза / В.М. Аллахвердиев //Ветеринария. 1997. - №5. - С.60-62.
7. Антонов, Б.И. Использование метода ПЦР при диагностике острых инфекционных болезней животных / Б.И. Антонов // Медицинский центр «Наследственность». Н.Новгород.-2002.
8. Бакулов, И.А. Законы и категории эпизоотологии / И.А. Бакулов // Вестник РАСХН. 1994,- №1.-С. 44-46.
9. Бакулов, И.А. Практические занятия по эпизоотологии с микробиологией / И.А. Бакулов // М. -1962. - С. 248.
10. Баскаков, Н.И. Профилактика туберкулеза и бруцеллеза животных в Калужской области / Н.И. Баскаков, А.Н. Деринов, В.А. Бархударян // Ветеринария. 2006. - №4. - С.3-8.
11. Белобородова, A.A. Повышение эффективности лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / A.A. Белобородова // Автореферат-Новосибирск. 2008. - С.З.
12. Белоусов, В.И. Лабораторная диагностика туберкулеза животных в Российской Федерации / В.И. Белоусов, М.В. Калмыков, Л.А. Таранова // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). - С.23-24.
13. Благодарный, Я.А. Туберкулез как антропозооноз / Я.А. Благодарный // Алма-Ата:Кайнар, 1972. С.200.
14. Боганец, Н.С. Эффективность питательных сред в диагностике туберкулеза / Н.С. Боганец // Ветеринария. 2006. - №3. - С.28-30.
15. Бокун, А.О.- В сб. научных трудов Северо-Кавказского зонального НИВИ, 1977.
16. Бокун, А.О. Опыт профилактики и ликвидации туберкулеза / А.О. Бокун // Материалы конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных. Киев. 1982. - С. 114-116.
17. Болдырев, Д.Н. Обеспечение устойчивого благополучия Крымской области по туберкулезу крупного рогатого скота / Д.Н. Болдырев // Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных. Киев, 1982. С.64-65.
18. Болоцкий, И.А. Инфекционные болезни свиней / И.А. Болоцкий // Ростов н/Д : Феникс, 2007. С.346.
19. Борисович, Ю.Ф.Инфекционные болезни животных: Справочник. / Ю.Ф. Борисович, JI.B. Кирилов; под ред. Д.Ф.Осидзе.- М.:Агропромиздат, 1987. -С. 288.
20. Буряк, E.H. Изучение реактивности к туберкулезу у коров из длительноч)неблагополучных по туберкулезу стад / E.H. Буряк // Материалы конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных.-Киев, 1982. С.76-78.
21. Буряк, Е.И. Эффективность разных способов прижизненной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота / Е.И. Буряк // Ветеринария. 1984. -№10. - С.25-27.
22. Буряк, Е.И. Эффективность разных способов прижизненной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота / Е.И. Буряков // Ветеринария. 1986. - №6. - С.23-26.
23. Василенко, К.Ф. Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним / К.Ф. Василенко.- Западно-Сибирское книж. изд., Омское отд., 1972. -С.24.
24. Верховский, O.A. Динамика содержания содержания Y -интерферона в крови крупного рогатого скота при туберкулезе / O.A. Верховский, А.Х Найманов, O.A. Савицкая // Ветеринарная Патология. 2004. - №1-2(9). -С.121-123.
25. Верховский, O.A. Использование метода «сэндвич-ИФА» для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / Г.А. Верховский, А.Х. Найманов, O.A. Савицкая // Сб. трудов ВНИИБТЖ. Омск, 2001. - С.173-174.
26. Водолазский, Д.К. В сб. научных трудов Ставропольского СХИ, 1980. С.43.
27. Воробьева, А.Н. В сб. научных трудов Северо-кавказского зонального НИВИ, 1977.
28. Воробьев, A.A. Современное состояние и перспективы совершенствования иммуноферментного анализа для решения задач клинической диагностики / A.A. Воробьев, И.В. Виха // ЖМЭИ. 1987. №9. -С.3-8.
29. Воробьева, З.Г. Реакция латекс-агглютинации для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / З.Г. Воробьева, A.JI. Лазовская, Ю.В. Лукин // Ветеринария. 1996. - №4. - С.27-28.
30. Воробьева, З.Г. Экспресс-диагностика туберкулеза крупного рогатого скота / З.Г. Воробьева, А.Л. Лазовская, К.Н. Слинина // Ветеринарная Патология. 2004. - №1-2(9). - С. 126-127.
31. Вышелевский, С.Н. Частная эпизоотология / С.Н. Вышелевский // М.:Сельхозгиз, 1940. С.594.
32. Горбатов, В.А. Распределение микобактерий в иммунокомпетентных органах / В.А. Горбатов, А.П. Востряков, B.C. Гуткин, H.A. Иванова // Ветеринария. 1982. - №7. - С.30-32.
33. Горегляд, Х.С. Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии переработки продуктов животноводства / Х.С. Горегляд // М.:Колос, 1981.-С.583.
34. Гребенников, Т.В. Молекулярные методы исследования в диагностике туберкулеза / Т.В. Гребенникова, С.Л. Кальнова, А.Д. Забережный, Т.И. Алипер, Е.А. Непоклонов // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). -С.92-93.
35. Гребнева, Т.В. Дифференциальная диагностика микобактерий методом полимеразной цепной реакции / Т.В. Гребенникова, В.В. Грабовецкий, С.Л. Кальнов, Е.А. Непоклонов, Я.И. Шумский // Ветеринария. 1999. - №3. -С. 17-20.
36. Григорьев, М.И. Внутривенная туберкулиновая проба в диагностике туберкулеза / М.И. Григорьев, З.А. Глинников // Тез. докл. республик, науч,-практ. конф. Гродно, 1982. - С.71-72.
37. Григорьев, М.И. Внутривенная туберкулиновая проба дополнительный тест в диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота / М.И. Григорьев, В.А. Сюсюкин, Г.А. Объедков // Ветеринарная наука производству. - Минск, 1984.-№22.-С.3-5.
38. Деринов, А.Н. Вероятность неспецифических реакций на туберкулин на фоне инвазионных болезней / А.Н. Деринов, Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, Н.И. Баскаков, В.А. Барчударян // Ветеринария. 2007. - №4. - С.22-24.
39. Джупина, С.И. Теория эпизоотического процесса / С.И. Джупина // Ветеринария. 1997. - №2. - С. 15-19.
40. Дзантиев, Б.Б., Егоров A.M. Журнал Всесоюзного химического общества им. Менделеева. 1982, 27.4.
41. Донченко, A.C. Безыгольные инъекторы при туберкулинизации скота / A.C. Донченко, В.В. Майер // Ветеринария. 1979. - №9. - С. 18.
42. Донченко, A.C. Внутривенная туберкулиновая проба у кроликов / A.C. Донченко, В.Н. Лапыков // Вестн. С.-х. Науки Казахстана. Алма-ата, 1971. -№8. - С.56-60.
43. Донченко, A.C. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота / A.C. Донченко, Н.П. Овдиенко, H.A. Донченко // Новосибирск, 2004. С.309.
44. Донченко, A.C. Дифференциальная диагностика туберкулиновых реакций в благополучных по туберкулезу хозяйств: Методические рекомендации / A.C. Донченко, H.A. Донченко, A.A. Колосов // Новосибирск, 2002.
45. Донченко, A.C. Геномная дактилоскопия в эпидемиологии туберкулеза /A.C. Донченко, А.Т. Пузырев // Генетика, 1998.- Т.2. № 2. - С.2-6.
46. Донченко, A.C. Использование механического безыгольного инъектора БИ-7 «Овод» при туберкулезе / A.C. Донченко, А.Г. Нестеров, В.В. Майер // Профилактика и меры борьбы с инфекц. Болезиями с.-х. Животных в Казахстане. Алма-Ата, 1979. - ТЛ8. - С.31-33.
47. Донченко, А.С.Использование офтальмопробы для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота / A.C. Донченко // Сб. науч. тр. РАСХН.Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. Новосибирск, 1993. - С.16-19.
48. Донченко, A.C. Контроль благополучия стад крупного рогатого скота по туберкулезу с парааллергическим фоном сенсибилизации к туберкулезу / A.C. Донченко, Ю.И. Смолянинов, А.И. Лапшин, Н.И. Тимофеев, В.Г.
49. Донченко, A.C. Люминесцентная микроскопия при диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / A.C. Донченко // Информ. Листок Гурьев. ЦНТИ. Гурьев, 1976. - №45, сер.21. - С. 1-3.
50. Донченко, A.C. Люминесцентная микроскопия в диагностике туберкулеза / A.C. Донченко, В.Н. Донченко // Ветеринария. 1977. - №6. - С.100-103.
51. Донченко, A.C. Механизация аллергического метода диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / A.C. Донченко // Науч.-тех. бюл. РАСХН. Сиб. Отд-ние. ИЭВСиДВ. Новосибирск, 1980. - Вып.16. - С.28-31.
52. Донченко, A.C. Особенности взаимосвязи туберкулеза человека и животных при проведении противотуберкулезных мероприятий / A.C. Донченко, В.Г. Мерман // Барнаул, 1997. С.21-22.
53. Донченко, A.C. Реакция связывания комплемент при диагностике туберкулеза / A.C. Донченко, З.В. Булдакова // Сб. науч. тр. ВАХНИЛ.Сиб. отд-ние. ИЭВСиДВ. Новосибирск, 1987. - С.21-27.
54. Донченко, A.C. Установление парааллергии на туберкулин у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах / A.C. Донченко // Ветеринария. -1987. №12. - С.37-38.
55. Донченко, A.C. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей / A.C. Донченко, В.Н. Донченко // Новосибирск, 1994.-С.352.
56. Донченко, H.A. Генетическое типирование микобактерий туберкулезного комплекса с помощью анализа ПДФР ампликонов / H.A. Донченко, A.C. Донченко, В.И. Семенихин // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). -С.71-73.
57. Дубовой, Б.JT. Методы определения сенсибилизации организма животных / Б. Л. Дубовой, А .Я. Кулик, A.B. Гуркин // СКЗНИВИ. Новочеркасск, 1987. - С.4.
58. Душкин, В.А. Опыт работы по использованию метода ПЦР в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота в Нижегородской области / В.А. Душкин, О.Н. Воинова, И.В. Ефимычев // Ветеринарная Патология. 2004. -№1-2(9). -С.99-104.
59. Егорова, Л.М. Изменение частоты парааллергических реакций у крупного рогатого скота на туберкулин в процессе оздоровления стад от лейкоза / Л.М. Егоров, Т.В. Агарков // Материалы конф. молодых ученых. СО РАСХН. Новосибирск, 1996. С.34-35.
60. Житенко, П.В. Ветеринарная экспертиза продуктов животноводства / П.В. Житенко, М.Ф. Боровков // М.:Колос, 2000. С.-335.
61. Звозчик, В.Г. Экономическая эффективность безыголыюго струйного метода внутрикожной туберкулинизации крупного рогатого скота / В.Г. Звозчик // Материалы конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных.-Киев, 1982, С.69.
62. Зыков, М.П. Потенциально-патогенные микобактерии и лабораторная диагностика микобактериозов / М.П. Зыков, Т.Б. Ильина // М.;Медицина. 1978. -С.176.
63. Исхаков, О.З. Вакцина БЦЖ в комплексе противотуберкулезных мероприятий / О.З. Исхазов, В.Ф. Пылинин // Ветеринария. 1985. - №8. -С.7-9.
64. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных.-М.: Агропромиздат, 1986.-24с.
65. Карлсон, Д. Домашний ветеринарный справочник для владельцев собак / Делберт Карлсон, Джуймс Гиффин // М.: Центрполиграф, 2006. - С.84-85.
66. Кассич, В.Ю. Микобактериозы как паразитозы и сапронозы / В.Ю. Кассич // Ветеринарная патология. 2004. №1-2 (9). С. 127-129.
67. Кассич, Ю.Я. ЗначениеРСК при диагностике туберкулеза / Ю.Я. Кассич // Ветеринария. 1982. - №5. - С.24-27.
68. Кассич, Ю.Я. Изучение природы аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота / Ю.Я. Кассич, П.М. Тихонов, В.Н. Кравченко, Ф.Г. Минаев, В.А. Кубло, В.В. Замиуский //Ветеринария. 1991. - №8. - С.21-23.
69. Кассич, Ю.Я. Комплексная диагностика туберкулеза / Ю.Я. Кассич, А.Т. Борзяк // Ветеринария 1985. - №4. - С.28-29.
70. Кассич, Ю.Я. Туберкулез животных и меры борьбы с ним / Ю.Я. Кассич, А.Т. Борзяк, А.Ф. Кочмарский, О.В. Мартма и др. // К.: Урожай, 1990. С. 304.
71. Кассич, Ю.Я. Туберкулез животных и меры борьбы с ним / Ю.Я. Кассич // К.: Урожай,1990.-С.304.
72. Киселев, B.C. Выращивание здоровых телят, родившихся от реагирующих на туберкулин коров / B.C. Киселев // Ветеринария.-1953.-№3.-С. 18-20.
73. Козлов, В.Е.Стандартизация аллергенов для дифференциальной диагностики туберкулеза / В.Е. Козлов // Ветеринария. 2007. - №5. - С.6-8.
74. Колошанский, В.А. Животноводство на промышленную основу / В.А. Колошанский, P.M. Мандрик // Кишенев, 1975.
75. Коляков, Я.Е. Ветеринарная иммунология / Я.Е. Коляков // М.: Агропромиздат, 1986. — С.272.
76. Конопаткин, A.A. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / A.A. Конопаткин // М. Колос , 1984 -С.544.
77. Конопаткин, A.A. Эпизоотология и инфекционные болезни / A.A. Конопаткин // М.:Колос, 1993 С.688.
78. Корнева, И.Н. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции / И.Н. Корнева, Е.П. Осипова,
79. A.Х. Найманов и др. // Сб. тезисов 4-й Всерос.научно-практ. Конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний». М., 2002. С.343-344.
80. Корнева, И.Н. Конструирование ПЦР-теста-систем для обнаружения и идентификации микобактерий туберкулеза у животных / И.Н. Корнева, В.В. Демкин // Ветеринарная Патология. 2004. - №1-2(9). - С.95-96.
81. Коромыслов, Г.Ф. Иммуноферментный анализ и применение его в ветеринарии / Г.Ф. Коромыслов, В.М. Авилов // Бюлл. ВИЭВ. Москва, 1985.1. B.58. С.6-9.
82. Коромыслов, Г.Ф. Состояние системы Т- и B-лимфоцитов при туберкулезе / Г.Ф. Коромыслов, В.Л. Солодовников // Ветеринария. 1982. -№7.- С.27-30.
83. Корх, В.А. Причины неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота / В.А. Корх // Ветеринария. 1990. - №6. - С. 19-20.
84. Коршунов, Л.Н. Патоморфология, патогенез и диагностика болезней с.-х. животных / Л.Н. Коршунов // М., 1980.
85. Костюк, Р.В. ПЦР при контроле благополучия скота по туберкулезу // Р.В. Костюк // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). - С. 105-107.
86. Кочмарский, А.Ф. Эпизоотология и меры борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в западном полесье Украинской ССР / А.Ф. Кочмарский // Материалы конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных.-Киев, 1982, С.56-58.
87. Кузин, А.И. Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза / А.И. Кузин // М.:Россельхозиздат, 1987. С.138.
88. Кузин, А.И. Оздоровление животноводческих хозяйст от туберкулеза / А.И. Кузин // М.: Россельхозиздат,1982. С. 103.
89. Кузин, А.И. Оздоровление животноводческих хозяйст от туберкулеза / А.И. Кузин // М.: Россельхозиздат, 1987. С. 141.
90. Кузин, А.И.Опыт ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота // Ветеринария. 1981. - №5. - С.32-34.
91. Кузин, А.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных и его профилактика.-МоскваРосагропромиздат, 1992. С. 189.
92. Лакман, Э.Д. Значение анергии в осуществлении противотуберкулезных мероприятий / Э.Д. Лакман // Материалы конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных.-Киев,. 982. С.89-91.
93. Лакман, Э.Д. РСК при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота /Э.Д. Лакман//Ветеринария. 1981.- №4. - С.31-32.
94. Латышев, A.C. О внутривенной туберкулинизации крупного рогатого скота / A.C. Латышев / Сб. науч. работ / Новосиб. НИВС.-Новосибирск, 1968. Вып.З. - С. 185-192. '
95. Лукашев, И.И. Частная эпизоотология / И.И. Лукашев // М.:Сельхозгиз, 1961.-С.303.
96. Мартма, О.В. Современное состояние проблемы атипичных микобактерий в ветеринарии / О.В. Мартма // Ветеринария. 1978. - №4. -С.32-35.
97. Маслов, Е.В. Оптимизация непрямого иммуноферментного анализа для выявления антигел к Mycobacterium bovis /Е.В. Маслов, А.А. Бойко, И.А. Хорьков // Ветеринария. 1986. - № 10. - С.64-68.
98. Маслов, Е.В. Оптимизация непрямого иммуноферментного анализа для выявления антител к Mycobacterium bovis / Е.В. Маслов, А.А. Бойко, И.А. Хорьков // Ветеринария. 2000. - №10. - С. 19-21.
99. Мегер, С.М. Характеристика иммунного ответа у крупного рогатого скота и овец, экспериментально инфицированных BJIKPC, М. Bovis, М. smegmatis и вакцинированных БЦЖ в различных сочетаниях: Дис.канд. вет. наук. Новосибирск, 1992. С. 108.
100. Методы определения сенсибилизации организма животных: методические рекомендации / СКЗНИВИ.-Новочеркасск, 1987.-31с.
101. Найманов, А.Х. Диагностическое значение внутрикожной туберкулиновой пробы и Y-ИФН ИФА при туберкулезе крупного рогатого скота / А.Х. Найманов, О.А. Верховский, О.А. Савицкая // Ветеринарная Патология. 2004.- № 1-2(9). - С.118-121.
102. Найманов, А.Х. Дифференциация аллергических реакций на туберкулин / А.Х. Найманов // Ветеринария. 2002. - №3.- С. 10-12.
103. Найманов, А.Х. Оздоровление неблагополучных по туберкулезу хозяйств со смешанной инфекцией / А.Х. Найманов, В.В. Пеньков, В.П. Чуян, A.B. Гладышев // Ветеринария. 2002. - №2. - С.9-11.
104. Найманов, А.Х. Применение диагностических тестов в неблагополучных по туберкулину хозяйствах / А.Х. Найманов, P.A. Нуратинов, И.С. Дубовой // Ветеринария. 1990. - №1. - С.31-33.
105. Найманов, А.Х. Полимеразная цепная реакция (системы sen X3-regX3 ) при диагностике туберкулезе крупного рогатого скота / А.Х. Найманов, Н.П.Овдиенко, Е.П.Осипова, И.В.Солодова, В.С.Суворов // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). - С.96-99.
106. Найманов, А.Х. ПЦР при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / А.Х. Найманов, Н.П. Овдиенко, Е.П. Осипова, И.В. Солодова, B.C. Суворов, И.Н. Корнева,В.В. Демкин // Ветеринария. 2004. - С. 19-23.
107. Найманов, А.Х. Совершенствование диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в индивидуальных и общественных хозяйствах / А.Х.
108. Найманов, Н.П. Помыканов, Н.Х. Канеев // Ветеринария. 2006. - №4. - С. 1822.
109. Найманов, А.Х. Совершенствование глазной туберкулиновой пробы /
110. A.Х. Найманов // Ветеринария. 1990. - №2. - С.30-32.
111. Найманов, А.Х. Сравнительная оценка прижизненных методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / А.Х. Найманов // Ветеринария. 2009. - №2. - С.7-13.
112. Найманов, А.Х.Туберкулез крупного рогатого скота / А.Х. Найманов,
113. B.Е. Щуревский // Ветеринария. 1980. - №6. - С.39-40.118(24). Наставления по диагностике туберкулеза животных. Утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ 18.11.2002г.
114. Налетов, Н.А.Патологическая физиология и патологическая анатомия животных / Под ред. H.A. Налетова // М.:Агропромиздат, 1991. С.352.
115. Нахмансон, В.М. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных / В.М. Нахмансон, Л.Г. Бурба // М.: Росагропромиздат , 1990. С.37-40.
116. Никифоров, И.П. Результаты комплексных исследований при выяснении причин туберкулиновых реакций у животных благополучных ферм Алтайского края / И.П. Никифоров, В.В. Разумовская, В.А. Степнов, Т.В.
117. Новак, Д.Д. Послеубойная диагностика туберкулеза / Д.Д. Новак // Ветеринария 1990. -№11.- С.26.
118. Новак, Д.Д. Туберкулез крупного рогатого скота / Д.Д.Новак // Алма-Ата. :Кайнер, 1984. С. 160.
119. Нуратинов, P.A. Аллергические реакции на туберкулин у больного актиномикозом крупного рогатого скота / P.A. Нуратинов, М.О. Баранов // Вестник ветеринарии. 2001. - №19. - С.3-6.
120. Нуратинов, P.A. Туберкулез крупного рогатого скота в республике Дагестан / P.A. Нуратинов // Вестник ветеринарии. 2000. - №2. - С.14-19.
121. Обухов, И.Л. Использование полимеразной цепной реакции в практике ветеринарных лабораториях / И.Л. Обухов, К.Н. Груздев, А.Н. Панин // Ветеринария. 1997. - №2. - С.24-27.
122. Обухов, И.Л. Лабораторная диагностика инфекционных болезней методом ДНК-амплификации при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) / И.Л. Обухов, К.Н. Груздев // Сб. науч. трудов ВГНКИ.-Москва, 1995(1996). Т.57. - С.36-45.
123. Обухов, И.Л. Усовершенствование коммерческих ПЦР-тест-систем для диагностики туберкулеза животных / И.Л.Обухов, Н.К. Букова, О.В. Клименкова. // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). - С.94.
124. Овдиенко, Н.П. Бактериальная диагностика туберкулеза животных / Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, Ю.И. Смолянинов, Н.В. Мельник, С.А. Коломыцев,С.Н. Хруленко //Ветеринария. 2006. - №12. - С.3-5.
125. Овдиенко, Н.П. Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним / Н.П. Овдиенко, В.Ф. Пылинин // М.:Россельхозиздат, 1987. С. 10.
126. Овдиенко, Н.И. Эпизоотология туберкулеза крупного рогатого скота за рубежом / Н.И. Овдиенко // Ветеринария. 1989. - №8.
127. Околелов, В.И. Спектрофотометрия для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / В.И. Околелов // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). - С. 123-125.
128. Павлас, М. Значение внутрикожной туберкулинизации для ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота / М. Павлас // Ветеринария. 1991. -№5.-С.16-19.
129. Падалица, A.M. Факторы неспецифической реактивности крупного рогатого скота к туберкулину, способы его выяснения и устранения / A.M. Падалица // Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. Новосибирск, 1998.-С.19.
130. Потапов, Н.И. ПЦР в реальном времени для диагностики туберкулеза / Н.И. Потапов, Т.В. Гребенникова, А.Д. Забережный, Т.П. Алипер, Е.А. Непоклонов // Ветеринария. 2006. - №9. - С.54-55.
131. Приймак, A.A. Применение иммуноферментного твердофазного метода выявления антител к микобактериям для серологической диагностики туберкулеза / A.A. Приймак // Лабораторное дело. 1986. - №9. - С.558-562.
132. Радчук, H.A. Практикум по заразным болезням для оператора по ветеринарной обработке животных / H.A. Радчук, П.И. Пашкин, С.И. Лютинский и др.; под ред. Г.А. Кононова // Л.:Колос.Ленингр. отд-ние, 1984. -С.318.
133. Рекомендации. Оптимизация аллергических исследований -профилактика туберкулеза крупного рогатого скота в Ростовской области / ГНУ СКЗНИВИРОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ. Новочеркасск, 2008,- 18с.
134. Ротов, В.И., Книш C.B., Дорожко В.П., Нарожний П.А. В сб.: «Ветеринария», Киев, Урожай, 1975, 2.
135. Ротов, В.И.Туберкулез сельскохозяйственных животных / В.И. Ротова // Киев.: Урожай, 1978. С.240.
136. Ротов, В.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных / В.И. Ротова // Киев: Урожай, 1987. С.382.
137. Сайтаниди, В.Н. Краткий справочник ветеринарного врача / Под ред. В.Н. Сайтаниди // М. ВО Агропромиздат, 1990. - С. 29-30.
138. Сафин, М.А. Современные методы диагностики и меры борьбы с туберкулезом. / М.А. Сафин, Г.З. Идрисов // Казань, 1992. С.178.
139. Скрябин, К.И. Ветеринарная энциклопедия / Под ред. К.И. Скрябина,-М.: Советская энциклопедия, 1975. С.634-635.
140. Смирнов, A.M. Современные проблемы диагностики и профилактики туберкулеза животных / A.M. Смирнов // Ветеринарная Патология. 2004. -№ 1-2(9).-С.10-13.
141. Смирнов, К.А. Искоренение туберкулеза крупного роганого скота. / К.А. Смирнов, А.И. Кузин // Ветеринария. 1966. - №1. - С.37-39.
142. Сорокин, И.В. Результаты изучения экономической эффективности ветеринарных мероптиятий по борьбе с отдельными болезнями сельскохозяйственных животных. / И.В. Сорокин // Труды ВГНКИ ветпрепаратов. -М.,1967. -т.14. С.393-399.
143. Сосов, Р.Ф. Эпизоотология / Р.Ф. Сосов // М.-Колос, 1969. С.400.
144. Сосов, Р.Ф.Эпизоотология / Р.Ф. Сосов // М.:Колос, 1974. С.536.
145. Султанов, З.А. К оценке аллергической реакции на туберкулин у крупного рогатого скота / Г.А. Султанов, З.А. Урманов, П.М. Тетерюк, З.Г. Янбухтин, Л.М. Олейник // Ветеринария. 1981. - №4. - С.29-30.
146. Сюсюкин, В.А. Т- и В-розеткообразующие лимфоциты у больного туберкулезом крупного рогатого скота / В.А. Сюсюкин, Г.А. Карпова, Г.А. Объедков // Материалы конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных. Киев, 1982. - С. 105-107.
147. Трегубов, В.И. Клинический анализ крови сельскохозяйственных животных / В.И. Трегубов // Методическое указание для студентов по специальности 310800 «Ветеринария» и ветеринарных врачей ординаторов.- Персиановский, 2005. С. 19-20.
148. Трегубов, В.И. Клинический анализ крови сельскохозяйственных животных / В.И. Трегубов // Методическое указание для студентов по специальности 111201 «Ветеринария» и ветеринарных врачей ординаторов.- Персиановский, 2006. С. 17.
149. Третьякова, А.Д. Организация и экономика ветеринарного дела /Под ред. А.Д. Третьякова. М.Колос, 1982 - С.319.
150. Трофимов, И.Г. Туберкулез сельскохозяйственных животных / И.Г.Трофимов // Лекция от 18.06.96. С. 10.
151. Тузова, Р.В. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птицы / Р.В. Тузова // Минск.¡Урожай, 1983. С.263.
152. Тулякин, В.Ф. Домашний доктор / В. Ф. Тулякин , Т. И. Тулянкина // М.: ООО « РЕПЕР ВТ», 2001. С.944.
153. Тюрин, В.Г.Выживаемость микобактерий в навозе, стоках и современные методы их обеззараживания / В.Г. Тюрин, Г.А. Мысова // Ветеринарная Патология. 2004. - № 1-2(9). - С. 163-165.
154. Удальцов, Е.А. Туберкулез животных: ликвидация или контроль / Е.А. Удальцов // Ветеринарный консультант. 2005. - №15(63). - С.4-6.
155. Удальцов, Е.У. Этапы планирования интегригованной программы борьбы с туберкулезом животных / Е.У. Удальцов // Вестник ветеринарии. -2004.-№3.-С.13-19.
156. Урбан, В.П. Практикум по эпизоотологии / В.П. Урбан // Ленинград:Колос, 1981.-С.224.
157. Урбан, В.П. Туберкулезный анатоксин как средство активной иммунопрофилактики туберкулеза / В.П. Урбан, A.A. Евглевский, В.А. Бусол, A.A. Евглевский, A.B. Епифанов, A.M. Коваленко // Вестник ветеринарии. -2000. №2. С.11-14.
158. Федосеева, Г.Б. Современная медицинская энциклопедия. / Американское издание под ред. Р. Боркоу. Русское издание под ред.Г.Б. Федосеева // С-Пб.: Норинг, 2001 С. 1264.
159. Федюшин, В.Т, Утешев А.И. Ветеринария. - 1952. - №6.
160. Хазипов, Н.З. Туберкулез крупного рогатого скота / Н.З. Хазипов, М.А. Сафин, Г.З. Идрисов // М.:Агропромиздат,1985. С.125-128.
161. Хазипов, Н.З. и др. // Учебное пособие, 2000.
162. Харитонов, М.В. Неспецифические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота и факторы, обуславливающие их / М.В. Харитонов, Р.Г. Гамиров, С.А. Хамитова//Ветеринарный врач. 2003. - №4(16). - С. 11-14.
163. Харитонов, М.В. О дифференциации специфических реакций на туберкулин от неспецифических / М.В. Харитонов // Ветеринария. 1983. -№1. - С.30-31.
164. Харитонов, М.В. Этиология неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота / М.В. Харитонов // Диагностика, профилактика и методы борьбы с туберкулезом животных: Сборник научных трудов. -Казань, 1985.-С. 15-16.
165. Хитров, B.C. Справочник по ветеринарным биологическим препаратам /
166. B.C. Хитров, P.M. Алехин // М.:Колос,1973. С.327.
167. Ходин, JI.M. Выделение атипичных микобактерий от не реагирующих на туберкулин животных / JI.M. Ходин, JI.B. Погуляева, J1.A. Ильиных // Ветеринария. 1990. - №6. - С.29.
168. Ходун, JI.H. Диагностика туберкулеза при массовых туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота / JI.M. Ходун, Н.И. Овсянов, JI.B. Погуляева, Ю.В. Мартынов, Т.А. Беспалова, В.П. Курдюк, В.Ш. Пинзберг,
169. C.С. Чережденов, В.Ф. Черный // Ветеринария. 1991 .-№11.- С.23-25.
170. Ходун, JI.H. Иммуноферментный анализ для диагностики туберкулеза животных / JI.M. Ходун и др// Методические рекомендации Омск, 1990.
171. Ходун, JI.H. О сезонной зависимости аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота / JI.M. Ходун, В.П. Курдюк // Ветеринария. -1987. №12. - С.38-39.
172. Хоменко, А.Г. Итоги конференции международного Союза борьба с туберкулезом (1997г.) / А.Г. Хоменко // Проблемы туберкулеза. 1998. - №2. - С. 57-58.
173. Черноусова, JI.H. Роль ПЦР-анализа в комплексных бактериологических исследованиях во фтизиатрии / JI.H. Черноусова, Е.Е. Ларионова, Э.В. Севастьянова и др. // Проблемы туберкулеза. 2001. - №3. - С.58-60.
174. Чурбанов, Н.К. Автореферат диссертации кандидата ветеринарных наук. -Фрунзе, 1967.
175. Шагинян, И. А. ПЦР-генетическое типирование патогенных микроорганизмов / И.А. Шагинян, А.Л. Гинзбург // Генетика. 1995. - Т.31. -Ж5. - С.600-610.
176. Шаров, А.Н. ПЦР при диагностике туберкулеза / А.Н. Шаров, Л.А. Ерошенко, И.П. Суханов, С.Л. Кальнов, Т.В. Гребенникова, В.В. Грабовецкий // Ветеринария. 2000. - №10. - С. 19-21.
177. Шаров, А.Н. Тест-система ПЦР при туберкулезе / А.Н. Шаров, В.А. Седов //Ветеринария. 1998. - №3. - С.20-22.
178. Шаров, А.Н. Чувствительность кожи при, туберкулинизации / А.Н. Шаров, К.Н. Ауштрова // Ветеринария. 1990. - №12. - С.24-25.
179. Шаров, А.Н. Эффективность методов прижизненной диагностики туберкулеза / А.Н. Шаров, Л.А. Ерошенко, И.П. Суханов и др. // Ветеринария. 2000. №2. - С. 16-18.
180. Шенжанов, К.Т. Биотехнологические основы совершенствования диагностики туберкулеза / К.Т. Шенжанов // Ветеринарная Патология. -2004.-№ 1-2(9).-С.137-138.
181. Шишков, В.П. Ветеринарный энциклопедический словарь / Под ред. В.П. Шишков.-М.¡Издательство «советская энциклопедия», 1981. -С 527-528.
182. Шишков, В.П. Туберкулез животных, методы диагностики и профилактики / В.П. Шишков, A.B. Ткачев-Кузьмин, С.П. Качанова // М., 1986. С.44.
183. Щуревский, В.Е. Атипичные микобактерии и их патогенность для сельскохозяйственных животных / В.Е. Щуревский , Н.П. Овдиенко , A.M. Кадочкин // Ветеринария. 1978. - №4.- С. 32-35.
184. Щуревский, В.Е. Патологическая диагностика туберкулеза / В.Е.Щуревский, О.В.Якушева, Н.П.Овдиенко, В.А.Шаров // Ветеринария. -1980. №10. С.31-33.
185. Юдин, Г.А. Причины, распространение дифференциация и профилактика не специфических реакций на туберкулин / Г.А. Юдин // Ветеринария. 1987. - №12. - С.29-32.
186. Юдин, Г.А. Совршенствование диагностики туберкулеза животных / Г.А. Юдин //Ветеринария. 1990. - №6. - С.27-28.
187. Юсковец, М.К. Туберкулез домашних животных и методы борьбы с ним / М.К.Юсковец // М.ОГИЗ Сельхозгиз, 1948. - С.240.
188. Юсковец, М.К. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птиц / М.К.Юсковец // Минск, 1963. С .'450.
189. Acland М., Whitlook R. Experimental infection of pigs wir A. avium serotype 4. Intern, pig Vet. Society proceedings 8th IPV congress. Ghent, Belgium, 2731/8, 1984, p. 141.
190. Alhaji, Johnson, Muscoplat, Thoen-Amer, J. Vet. Res, 1974, 35, 5.
191. Amstutz M. E. Practical aspects of ТВ diagnosis in cattle. Modern Vet. Pract., 1980, v. 61, p. 433-435.209. Berlin. Germany .P. 204.
192. Bovine and human tuberculosis in domestic and wild animals in six Central European countries During 1990-1999./ I. Pavlik, I.Parnova, M.Havelkova/-Int.J.Tubercl.Lung Dis.-2002.-Vol.6, N10, suppl 1.-S.108.
193. Бъчварова Я. Изолиране на коринебактериум екви от респирали на туберкулин говеда. Веет, сбирка, 1984, v. 82, п. 17-18.
194. Chapman М. J. Tuberculin testing of Goats. Ministry of Agriculture, Fisherie and Food, 1984, September 29-30, p. 1.
195. Choi C. S., Frost A. J., Francis J. The comparative tuberculin test in guinea pigs using PPD. extracts prepared from mycobacteria killed with phenol. Austral. Veter. J., 1983, v. 59, N 6, p. 183-186.
196. Cleary T.J. // J. Clin. Microbiol., 2003.
197. Gonzalez Gallo J. A., Veitia F., Remon S., Delgado L. Micobacterias aisladas de bovinos que reaccionaron a las pruebas tuberculinicas. — Rev. cub. Cienn. Veter., 1983, v. 14, N 3, p. 173-176.
198. Donald B. Occurrence of mycobacteria in normal lymal lymphnodes. Amer. Vet. Journal, 1983, v. 60, p. 256-257.
199. Flis, Lubkowski Med. Wet. 1969, 25, 2.
200. Frais G., Grimm H., Surmiak B. Mycobacterium tuberculosis jaco prziczyna nowych zakazen w stadach uznanych za wolne od grwzlichy bydla. Gruzlica, 1969, 8, s. 723-728.
201. Frawz I., Mensik I., Stepanek I. ELISA and its role in infectiouse diseases diagnostic. Veterinarstvi, 1983, v. 33, .№4, p. 172-175.
202. Grebennikova,T.V., Grabovetsky V.V., Shumsky N I Kalnov, S.L., Nepoklonov, E.A. Differential diagnostics of mycobacteria by polymerase chain reaction. 1999. Veterinaria ( Rus.). №. 3. P. 17-20.
203. Grebennikova,T.V., Nepoklonov, E.A. // Detection and identification of Mycobacteria isolates from human clinical samples // 1999, 9 th ECCMID. March -C.21.
204. Hejj Z. et al //Naguar allatorvoosor Zapia, 1968. 23. 7.
205. Huitema 19 congreso mundial de medicina, veterinaria i zootecnia, 1971, 1.
206. Joubert L., Prave M. La stagnation de l'assainissement en matiere de tuberculosis bovine causes et remedes. Bull. Soc. Sc. Vet. Med. Comp Lyon, 1978, 80, 6,p. 271-274.
207. King J.O.L. The effect of disturbances on milk production in cows // Vet. Ree. 1976. - V.98. -.№3-P.41-42.
208. Katial R. K. Hershey J., Purohit-Seth T. et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2001. 8:339-345.
209. Kleeberg H. H. Tuberculosis othen mycobacterissis. In: Diseases transmitted from animals to man. Eds W. T. Hubbert et al. Shringfield, Charles С. Thomas, 1975, p. 303-360.
210. Короленко, Jl.C. Етзоотологшш особливосп туберкульозу велико! poraToi худоби в умовах Степу Украши, удосконаления /лдагностикта боротьби / Л.С. Короленко // Автореф. дис. канд. вет. наук. Харюв, 1999. -С.16.
211. Kouba V. Animal Health yearbook, 1984, N 24, p. 1-139 FAO-WHO-OIE.
212. Knudsen P. H. Cattle diseases. Agriculture in Denmark. Copenhagen, 1977, s. "149-151.
213. Meyer W. Untersuchungen zur Heteroallergie der Nyberkulinreaktion beim Rind // Monattshett. Veterinarved. 1963. 18.№9.
214. Meisinger G. Untersuchungenuber die ökonomischen Auswirkungen der Rindertuberkuiosetilgung auf die Produktivität der Rinderbtstande (Mitt. L. Auswirkung auf die Fleischproduktion)// Mh. Vet. Med 1970. - Ii. 1. - S.7-13.
215. Mullis K.B. et al.// Method Enzymol., 1987.
216. Oellerich J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 1984, 22, 12.
217. Osinski J. Walka z gruzlica Med. Weteryn. 1967, 3,s.62.
218. Quarante M. Les reactions parasitaires distonuennes en interferense aves les reactions tuberculiniques (intradermoreactions) // Rev. Pathd. Conep. et nud. exp. 1970. №806.
219. Pollock J.M., Girvin R.M., Lightbody K.A., Clements R.A., Neill S.D., Buddle B.M., Andersen P. Assesment of defined antigens for diagnosis of bovine tuberculosis in skin test-reactor cattle. Vet. Ree., 2000, 146(23):59-65.
220. Radin, Zeiss, Phair-Jnt. Arch. Allergy Appl. Immunol, 1983, 70, 1.
221. Roder G. // Tiererzte Umsh., 1963. 7.
222. Rothel J.S., Jones S.L., Corner L.A. et al. A sandwich ensym immunoas say for bovine interferon-r and its use for the detection of tuberculosis in cattle.-Abst. Vet. J., 1990, 67, 134-137.
223. Ryan T.J., Buddle B. M., De Lisle GW. An evaluation of the gamma interferon test for detection bovine tuberculosis in catte 8 to 28 days after tuberculin skin testing. Res. Vet. Sei., 2000, 69 (1): 57-61.
224. Rivers T. Viruses and Koch's postulates. J.Bacterion. 1973, 33, 1-12.
225. Runyon F. Anonimous mycobacteria in pulmonary diseas. Med. Clin, of North America, 1959, v. 29, 1, p. 78.
226. Safrenovie D et al. Uporedua vrednost Razlicitih metoda u dijagnostici tuberculose zaklanih svinja. Vet. Glasnik, 1982, v. 36, p. 931-935.
227. Schlieser T. Infektionen mit M. bovis (Rindertuberkulose). -Handbuch der bakteriellen Infektionen bei Tieren. VEB Gustav Fischer Verlag. Jena, 1985, Bd 5, S. 217-235.
228. Schliesser -Tierztl. Umschau, 1964, 19, 5.
229. Shpagnum som arsag til mykobakteriose hos svin Forelobig meddelelse. -Dansk veterinartidsskrift, 1983, v. 66, 23, p. 1093.
230. Stinson S.C. // Chem. End. News. 1999. Vol. 77. .N13. p. 36-38.
231. Switzky D. Procedures not pigs suffer from tuberculosis. National Hog Farmer, 1983, v. 28, N. 5, p. 73.
232. TB: increase in herd breakdowns. Veterinary Record, 1981, v. 109, N 21, p. 15.
233. The Eradication of tuberculosis in cattle. Irish Veter. J., 1985, v. 39, N 1, p. 15-16.
234. Thoen, Eacret, Hirnes Av. Diseases, 1978, 22, 1.
235. Thoen C., Hall M. et al. Detection of Mycobacterial antibodies in sera of cattle experimentally exposed to M. bovis by use of a modified ELISA. Am. Assn. Vet. Labor. Diagnosticians, Sahara Hotel. Las Vegas, Nevada. Oct., 17-18, 1983, p. 25-38.
236. Thoen C. O., Hirnes E. M., Richards W. D. e. a. Bovne tubtrculosis in the United States and Puerto Rico: a laboratory summary. Am. J. veter Res., 1979, v. 40, N1, p. 118-120.
237. Thoen C., Karlson A. Tuberculosis. In: Diseases of swine, Leman A., Glock R. et al. Iowa State University Press, Ames., Iowa, 1981, p. 508-515.
238. Thorns C.J. and Morris J.A. // Vet. Bull., Weybridge. 1983. 53. 543-550.
239. Thorel M. F. A propos de ¡'incidence de Mycobacterium avium dans la tuberculose bovine. Bull. Soc. Veter. Prat. Fr., 1978, v. 62, N 6, p. 453-458.
240. Tsukamura M.A reviem on the taxonomy of the genus Mycobacterium. I. Definition of the denus Mycobacterim. «Kekkaku». 1980. 55. №6.- P. 289-295.
241. Tsukamura M.A reviem on the taxonomy of the genus Mycobacterium. II. Species within the genus Mycobacterium-Trial of new grouping. «Kekkaku». 1980. 55. №7. P.341-347.
242. Windsor R., Durrant D., Burn K. Avian tuberculosis in pigs. M. intracellulare infection in a breeding herd. The Vet. Record, 1984, v. 114, p. 497-500.
243. Wisconsin Accredited TB-free dbring WVMA meeting. J. Amer. Vet. med. Assn., 1981, v. 178, N 6, p. 550.
244. Wood P.R., Rothel J.S. In vitro immunodiagnostic assays for bovine tuberculosis. Vet. Microbiol., 1994, 40, 125-135.
245. Zorawski Med. Wet., 1976, 33, 6.
-
Полякова, Ольга Николаевна
-
кандидата ветеринарных наук
-
Новочеркасск, 2011
-
ВАК 06.02.02
- Особенности диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в общественном и частном секторе
- Туберкулез птиц в юго-восточном регионе Таджикистана
- Совершенствование диагностики, профилактики и мер ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота в зоне длительного неблагополучия
- Туберкулез собак и кошек и меры борьбы с ним
- Ретроспективный анализ изменений эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации за 1951-2009 гг.
