Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Состав и физико-химические свойства липопротеинов крови при действии внешнего гамма-облучения

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Состав и физико-химические свойства липопротеинов крови при действии внешнего гамма-облучения"

АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНИ

<С*ЛИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТ А ЛЫЮЯ ПАТОЛОГИИ. ОНКОЛОГИИ И РАДИОБИОЛОГИИ им. Р. Е. КАВЕПКОГО

СОСТАВ И ФИЗИЮ-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛЖЮПРОТЕЮЮВ ГОТОВЯ ПРИ ДЕЙСТВИИ ВКЕШЕГО ГАКМА-ОБЛУЧЕНИЯ

(03.00.01 - рЭДИОбИОЛОГЙР)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соишсаяие ученой степей« кандидата 0нологических наук

Киев - 1992

На правах р/копией

«

ЛЯГОВЧУК Николай Николаевич

работа выполнена в Институте экспериментальной радиологии • Украинского научного центра радиационной медицины Ш и АН Украины,

Научный руководитель:

доктор медицинских наук П. П. Чаяло

Официальные опонент

доктор биологических наук Е А. Дружина

кандидат биологических наук И. 0. Павленко

Профильное учреждение - Институт радиобиологии

АН Беларуси, г. Минск

Защита диссертации состоится "2"Г" 1992 г,

в " / 5" часов на заседании специализированного совета Д О^б. 33.02. по аашите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Институте экспериментальной патологии, онкологии И радиобиологии ии. Р. Е. Кавецкого АН Украины (262022, Киев, ул. Васильковская,45)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экспериментальной патологии онкологии и радиобиологии им, Р. Е. Кавецкого АН Украины

Автореферат равослан " Я , /-О..А 199? г.

• ученый секретарь специализированного совета, кандидат иедищшскюс наук

г. г. шдавд

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Авария на Чернобыльской АЭС поставила пе-ед практическим здравоохранением, радиационной медициной и радиобио-огией множество проблем. Одна из них связана с необходимостью оценки прогнова здоровья людей, пострадавших в результате аварии на Черио-ыдьской АЭО, а также населения контролируемых районов. Решение этих дожних проблем проводится по ряду направлений, в том числе по пути яробации существующих и разработке новых критериев оценки меднкю-би-погичесюя последствий воздействия ионизирующих излучений. Воздейст-ие ионизирующей радиации на организм приводит к развитию сложной 1ртины нарушений, включающих физико-химические, биохимические, функ-юцздьные изменения в органах и тканях. Результатом подобных наруше-*й является возникновение отдельных патологических последствий сто-ютической и нестохастической природы, среди которых необходимо выдать увеличение частоты атеросклеротических поражения сердечно-со-гдистой системы, что, в частности, отмечено у лиц, перенесших атом-го бомбардировку в Хиросиме и Нагасаки (M. Kurihara, 1981; T. Ml taira, 1984). Результаты эпидемиологических исследований в регионах, ютрадавиих при аварии на ЧАЭС, показывают нарастание соматичес/шх ьболэваний, в том числе и сердечно-сосудистых. В качестве метаболи-¡ской основы развития атеросклероза рассматриваются нарушения обмена тидов и липопротеинов (А, Н. Климов, 1987; И. П. Смирнова, 1990), что [ределяет интерес к изучению данного вида обмена при воздействии иодирующего Излучения.

Экспериментальное работы, касающиеся особенностей влияния радиа-и на лшшдный и яшюпротеиновый обмен, проведены главным образом на овне летальных и сублетальных доз, освещая преимущэственно состоя-:е метаболизма липидов и мало ватрагивают лкпопротеины крови, в час-ости характер изменений их состава, структуры и физико-химических раметров.

Цель и основные задачи исследования. Целью настоящей работы явись экспериментально-клиническое изучение влияния ионизир/кицих нзлу-ння на состав и неюторые физико-химические свойства липопротеинов ob|î для оценки их возможной роли в механизмах формирования постра-ационных дислипопрстеинемий.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи;

1. Изучить в динамике характер изменений липидного и дипопротеи-вого спектра крови у лиц, подвергшихся воздействию ионизирующих изданий в результате аварии на Чернобыльской АЭС.

заказ -JS5

2. Изучить содержание и состав липопротеинов крон к экспериментальных животных при воздействии разных доз и режимов слепшего гамма-облучения.

3. Исследовать кинетику свободнорадикальных реакций в плазме крови и липопротеинах в эксперименте при внешнем гамма-облучении.

4. Изучить содержание Простагландинов в липопротеинах и плазме крови в эксперименте при внешнем гамма-облучении.

5. Определить поверхностные заряды и размеры липопротеиновых частиц плазмы крови экспериментальных животных при внешнем гамма-облучении.

6. Изучить содержание липидов в тканях печени, сердца и аорты экспериментальных животных в отдаленные сроки после внешнего гамма-облучения.

Научная новизна работы заключается в том, что впервые в динамик было проведено исследование липидов и липопротеинов крови людей, перенесших острую лучевую болезнь (ОЛБ). Установлено увеличение в кров содержания холестерина, триглицеридов, атерогенных 2-а, 2-6 и 4 типо гиперлипопротеинемий. Указанные изменения носят устойчивый характер. Экспериментальными исследованиями показано, что разные режимы внешне го гамма-облучения в дозе 3 Гр вызывают гипер-бета- н гипер-пребета-. липопротеинешш, сохраняющуюся на протяжении месяца после воздействия. Впервые определены содержание простагландинов и кинетика свобод норадикальных реакций в разных классах липопротеинов, установлены из менения в составе липидов, состоянии ааряда поверхностных ионогенных групп и геометрических параметрах липопротеинов при радиационном воз действии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У лиц, перенесших-ОЛБ, установлено увеличение содержания холестерина и триглицеридов в плазме крови, частоты атерогенных типов гиперлипопротеинемий. Выявленные нарушения носят устойчивый характер

2. Однократное и фракционированное внешнее гамма-облучение крыс в дозе 3 Гр вызывает длительно сохраняющуюся гипер-бета- и гипер-пре Соташпопротеинемию, более выраженную при однократном облучении.

3. Внешнее гамма-облучение вызывает изменения кинетики свободно радикальных реакций, содержания простагландинов, липидного состава, состояния заряда поверхностных ионогенных групп и размеров разных классов липопротеинов. Указанные изменения могут лежать в основе раз вития пострадиационных дислипопротеинемий.

Научно-практическая "значимость работы.

Результаты юпшико-биохг.мическм исследований обосновывают необходимость проведения гшголипидемичееких мероприятий, направленных на снижение возшмюсти развития атеросклеротических иовревдений сердечно-сосудистой системы у лиц, перенесших радиационное воздействие в результате аварии на Чернобыльской АЭС. Практически значимыми результатами работы являются представления о механизмах нарушений в обмена липопротеинов при воздействии ионизирующих излучений, что пожег лежать в основе патогенетической терапии пострадиационных дислипопроте-инемкй.

Публикации и апробация диссертации.. Результаты исследований по материалам диссертации опубликованы в 0-ми научных работах. Основные положения работы долокэны на Республиканской научной конференции "Медицинские проблемы радиационной завдты" (Киев, 1987); Республиканской научно-практической конференции по радиобиологии и радиоэкологии (Шшск,1988); I Всесоюзном съезде радиобиологов (Шсква, 1939); IV съезде Республиканского намного общества врачей-лаборантов (Луганск, 1989); Взесошной конференции "Радиобиологические последствия аварии на Чернобыльской" АЗС" (Шшск, 1991).

Структура н объем диссертации. Диссертация состоит иа введения; обзора литературы; главы *'1!атериалц и методы исследований"; трех глав, содержащих собственные данниз и их обсуждение; выводов; указателя цитируемой литературы. Работа изложена на 123 стр. машинописи, иллюстрирована £0 таблицами и 9 рисунками. Библиографический указатель содержит 110 работ отечественных и 86 работ аарубекних авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАШШ.

Шзшико-Сиохимлческие исследование' проведены на 28 мужчинах в возрасте 2Б - Б5 лет, перенесших ОЛВ 1 или 2 степени, находившихся на обследовании и лечении а отделении лучзвой патологии Украинского научного центра радиационной медицины Ш и ЛЯ Украины (ОЛВ -1 - 17, ОЛВ -2 - 11 человек). Эгаперименталышэ исследования выполнены на половозрелых крысах-самцах линия Вистар в количестве 750 шт. Внешнее гаи-ма-облучение проводили на усганоэдсе "Игур" с источшнсом излучения Сз-137, мопиюсть дозы 188,4 Рн/шш.

Основными материалами исследования явились плазма крови и фрак-щи липопротеинов, с отдельных сериях экспериментальных исследований кспользовали ткани печени, сердца и аорты. Забор крови осуществляли черев 12 - 14 ч после последнего приема пищ1. В качестве аитикоагу-дянта применяли здтл в концентрации 1 да на 1 мл крови. Плавыу цолу-«али общепринятыми методами. фракции липопро'/еиков вцделяля из плазмы

2-аакаэ 455

крови одномоментным (В.H.Chang, 1 SSO) и последовательным ультрацентрифугированием (F. Т.Lindgren,1972) в солевых растворах NaßL и НаВг соответствующих плотностей на удьтрадентрифуге "Backman" L8 8Q-M (США). Чистоту фракций контролировали с помощью диск-электрофореза в полиак-риламидном геле (Е. Я Ыаграчеиа, 1973). Указанным методом определяли спектр липопротеинов плазмы крови. Денситомзтрию гелей проводили на денситометре "Cansa" (Донау, Швейцария) при длине волны 560 ¡ш.

Определенно содержания липидов проводили в иаопропаноловых экстрактах плазш крови, хлоро$орм-ыетанольных экстрактах гомогенатов тканей и разных классов липопротеинов на автоаншшзаторе ДА-И фирмы . "Technicon" (США), в соответствии с методами для холестерина (L.L. Abell, 1952) и триглицеридов (L. A. Carlson, 1963).

Хеммлшинесцонци» плазмы крови и отдельных классов лшопратекнов научали на квантомехаяичэской установте ХЛЖЦ-01, используя в качества инициатора переписного окисления липидов соли двухвалентного кэ-лээа Ш А. Владимиров, 1973).

Величины рК и количество доступных для связывания протонов ионо-гешшх групп липопротеинов определяли методом потенциометрического титрования (Ю. Д. Холодова, 1980). Титрование липопротеинов проводили 0,1N HCl при 25 С. Концентрация белка в препаратах липопротеинов составляла О, Б - 1,0 мг/ыл. Использовали схему с прямш отсчетом, где сигнал с рН-метра подавался на записывающее устройство с усилителем EZ-2, Пределы, титрования - 8,5-2,7 pH. Титрационные кривые рассчитывали с учетом данных титрования среды суспендирования, выражали как зависимость количества связывающегося Н+ от pH среды и анализировали в дифференциальной форме, предполагая независимость участков связывания. Бее расчеты проведены на ЭЩ СУ-1 с использованием соответствующих программ.

Геометрические параметры липопротеинов изучали методом лазерной корреляционной спектроскопии (А. Д. Лебедев, 1987). Измерения проводили на корреляционном спектрофотометре фирмы "Ma}vern" (Англия). Концент-рацня бел;« в препаратах липопротеинов составляла 0,6-1 ыг/мл.

Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами вариационной статистики, выбор которых определялся конкретными задачами, с исцольвованием соответствующих программ на персональном компьютере фирш Olivetti modej 290 (Италия).

' РЕЗУЛЬТАТЫ ЙССЛЕДОВАЮМ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Ii. Характер изменений дилидного и липопротеинового спектра крови Z ffläL подвергшихся вовдействию шниаируюзуп: излучений в ßgi

- Б -

вульгате аварии на Чернобыльской АЭС..

Результаты определения содеряшшл общего холестерина и триглицеридов у одних и тех те лиц с ОЛБ, обследованных в разные сроки (1987 и 1989 гг.) после радиационного воздействия, указыЕМ/г на увеличение данных показателей , как через год, так и через три года после облучения по сравнению с данными популяционных исследований. В то гв время в динамике мевду 1987 и 19В9 год«.« существенных различий в уров-1шк липидов крови не отмечается. Это говорит об устойчивом харатаере выявленных метаболических нарушений. Увеличение индекса атерогеннос-ти, представляющего соотношение холестерина липопротеинов высокой плотности (JIM) к холестерину липопротеинов низкой (ЛНЩ и очень низкой плотности (JIOHID, характерно только для 1987 года.

Типированио гиперлипопротелнемий указывает на высокий процент атерогенных 2-а, 2-6 и IV типов дислипопротеинемий у лиц о ОЛБ. При этом во все сроки наблюдений частота пшерлияопротеинемий значительно (в 1,5-2,5 раза) превышает данные популяционных исследований.

Полученные результаты позволяют предполагать, что одной из главных причин нарушений в спектре лкпидоп и липопротеинов кропи у лиц, перенесши ОЛВ при аварии на Чернобыльской АЭС, является влияние радиационного фактора. Экспериментальные исследования указываю? на ги-перлипидем1чес1сий зф&гкт в ранние сроки после воздействия радиации (IL К. Коломийцева, 1986). Высоте с тем, повышение уровня липидов и учащение случаев атерогенных чипов гиперлипопротеинемий у лиц, перенесших ОЛЕ, нельве, по-видимому, связывать только лииь с действием облучения. В клинической картине сдай больны;: отмечались заболевания кедудочно-кишечяого тракта, печени, состояние психической дезадаптации и стрессовые реакции (V. G. Bebeshko, 1989) шгорыз могут усиливать гнперлипндэмичэсний эффект влияния ионнзнрумщей радиации. Ваяно отметить, что, как правило, эти эсболевшшя у больных с ОЛЗ носили стойкий характер, приобретая хроническое течение, которое вполне закономерно могло служить патологической основой для устойчивых нарушений метаболизма липидов и липопротеинов.

Учитывая вышеизложенное, представляло интерес г.ыяснить вопрос о том, являются ли нарушения в метаболизме липидов*и липопротеинов в отдаленные сроки у лиц, перонеспих радиационное воздействие в результате аварии на Чернобыльской АЭО, следствием непосредственного воздействия тонизирующих излучений или других фЭКГОрОВ, сопутствующих облучению (стресс, наличие соматических заболеваний). Ответ на этот вопрос иояет быть получен при згсссгрямэитэдьпом исследовании, когда

оценивается действие одного патологического фактора, в даком случае Ионизирующего излучения на липидный и лююпротеиновый спег^р крови экспериментальных животных в разные сроки после действия облучения.

Особенности состава и физико-химических свойств липопротеинов плазмы крови крна при воздействии внешнего гамма-излучения.

Представлялось целесообразным в экспериментальных условиях оценить непосредственное влияние ионизирующих излучений на содержание, состав и физико-химические характеристики липопротеинов крови для выяснения роли их нарушений в формировании пострадиационных дислипопро-теинемий.

2.1. Содержание лип идо в и лигсопротеиновый спектр крови.

Исследования по изучению яипидного и липопротеинового спектров крови крыс в ранние сроки после внешнего гамма-облучения в дозах 1, 2, и 3 Гр показывает, что изменения в содержании общего холестерина как через 2, так и через 24 часа не отмечаются. В то же время, изменения содержания триглицеридов наблюдаются при всех дозах облучения. При этом, если через 2 часа после облучения увеличение содержания триглицеридов отмечается при дозах 2 Гр (110 мг%) и 3 Гр (150 мг%), то через Д сутки увеличение содержания триглицеридов носит более выраженный характер и затрагивает все три группы опытных животных (соответствующие величины равны 103,6; 110,0; 150,4 мг%; в контрольной группе - 62 мгХ). Таким образом, наблюдается определенная аависимость увеличения уровня содержания триглицеридов от увеличения дозы облучения (чем выше доза, тем выше уровень данного параметра), хотя строго линейная закономерность не установлена."

При анализе показателей липопротеинового спектра крови следует отметить изменения в содержании Л0НГ1 Так, уже через Z часа после облучения в дозах 2 и 3 Гр возрастает содержание этой фракции до 7,8% (доза 2 Гр) и 8,6% (доза 3 Гр), в контрольной группе 5,0% . В последующий срок, через 24 часа, тенденция к увеличению содержания ЛОНП сохраняется во всех трех группах экспериментальных животных , достигая величин 8,4; 8,6; 9,2% соответственно дозам 1, 2 и 3 Гр. Наряду с четкой зависимостью увеличения содержания ЛОКП от увеличения дозы облучения, следует указать на наличие взаимосвязи меэду увеличением уровня данного класса липопротеинов, являющихся главной транспортной формой эндогенных триглицеридов и увеличением содержания триглицеридов в крови облученных животных. На фоне увеличения содержания ЛОНП, через 24 часа после облучения регистрировалось снижение уровня содержания ЛВП при дозах 2 и 3 Гр до 86,4 и 86,3% соответственно против

SIS контрольной группы. Изменений в содержании ЛНП не наблюдалось.

Следовательно, воздействие внешнего гамма-облучения в интервале доз от 1 до 3 Гр вызывает выраженную гипердипидэмию и гиперлипопроте-инемию, проявляющиеся уже через 2 часа после облучения и сохраняющиеся в течении суток после облучения.

Учитывая тот факт, что воздействие ионизируют?« излучений при аварии на Чернобыльской АЗС носило комплексный харшстер и не было ограничено строго во времени, при адекватном моделировании в эксперименте представлялось целесообразным изучить характер нарушений в лн-пидном и липопротеиновом спектрах крови в динамике Гот суток до S месяцев) при разных режимах облучения.

Литературные1 данные, имеющие отношение к представленным вопросам не многочислена (Г. Э. Нурулаевз, 1ЭЗЗ; А. Николов, ,1987). Шжалуй толь-га в монографии И Г. Григорьева и соавт. (1886) наблюдения за кивотними проводились длительно - в течение 10-12 лет после облучения. В данной работо анализируются результаты комплексной программы по моделированию радиационной ситуации, возникающий при космическом полете (круглосуточное облучение собак с помощью гамма-источника Со-00 на протя:жнии 3-х и 6-ти лет в дозах 21, 62 и 125 сГр за год). При этом выявлены периодические повшенкя. в крови содергакия ЯОШ и ЛНП.

Изучение лкпвдного и липопротеикового спектров крови крнс, проведенных нами при разных режимах внешнего гамма-облучения показывает, что ивкэнзния больиинстга покаеглслей при однократном облучении' косят более выралгми.:й харшстер, чем при Фракционированном. Тек, при однократной облучеетш увеличение содержания холоетеряла иаблвдаетоя в плазме крови через недели поело облучения, достигая максимальных во-личии к -1-й недеда. Гиперхолестеркнэыия сохраняется до 8-tm недель, после чего наступает нормализация величин данного показателя к 16 ве~ деле. Увеличение содержания общего холестерина при фракционированном облучений достоверно регистрируется только через 4 недели после облучения.

Определение содержания холестерина в составе рваных классов Л1-попротекков показызаот, что изменения в содержании холестерина в составе ЛШ наблюдается только при однократном облучении - регистрируется его сниигнке к 4 неделе. Изменения в содержании холестерина з составе ЛНП и ЛОНП отмечается как при однократном, так и при фракционированном облучении. Так, при обоих ре ¡гаях облучения отмечается увеличение содержания холестерина в составе ЛШ от 1-й до 8-й надели с поолэ;!утеЯ нормализацией. Определение содержания холестерина в сос-

З-яаеаз 45Г»

таве ЛОНП показывает, что на 1-е сутки после облучения навидается увеличение данного показателя, сохраняющееся при фракционированном облучении до 4-х, при однократном - до 8-ми недель.

Определение содержания триглицеридов в плазме крови при однократной и фракционированном облучении показывает, что в обоих случал» уке на 1-е сутки наблюдается их резкое увеличение, сохраняющееся на протяжении четырех недель.

Исследованиями по определению содержншя триглицеридов в составе равных классов липопротеинов показано, что изменения характерны только для ЯГО и ЛОНП. Они являются однотипными и регистрируются при обоих режшах облучения. Увеличение содержания триглицеридов в.составе ЛНП наблюдается на протяжении первой - четвертой недели, в составе ЛОНП - от первых суток до четвертой недели после облучения с последующей нормализацией исследуемого показателя.

Анализ липопротеинового спектра крови облученных язшотных показывает, что изменения наблюдается во исех трех классах липопротеинов как при однократном, так и при фракционированном облучении. Уже на первые сутки отмечается увеличение содержания ЛОНП, сохраняющееся до 16 недель. К первой неделе после облучения наблюдается увеличение со-дерзиния ЛШ1, сохраняющееся при однократном облучении до 16-тн, при фракционированном - до 8 недель. На фоне увеличения содержания ЛОНП и ЛНП IX 4-й неделе после облучения отмечается сшетзниа содержания ЛБП при 2-х режимах облучения. Необходимо отметить, что изменения в ли-попротеиновом спэкгре крови после однократного облучения носят более продолжительный характер, чем при фракционированном.

Обобщая приведенные результаты, следует подчеркнуть, что доза 3 Гр, вызывающая у крыс коетно-мозговую форму лучевой болезни (И.К.КО-ломийцева,1989), способна оказать выралвнный гиперлипидемический и гипердипопротеинемический эффекты, сохраняющиеся длительное время и более выраженные при однократном, чем при фракционированном облучении. Нарушения в спектре и составе липопротеинов крови затрагивает в основной атерогенные классы и носят характер гипер-бетглипопротеинэ-мии и гишр-преветалипопротеинении, что имеет сходство с характером изменений в лилидах и липопротеияах крови у лиц, перенесших ОЛБ в результате аварии на Чернобыльской АЗС.

2.2. Кинетика овоОоднорадикалькых реакций в плазме крови и разных классах липопротеинов.

Обсувдая характер патологического влияния нарушений в лнпонроте-иновом спектре крови на клетки п ткани облученных ¡ответных, наряду с

- g -

фактором гипердипопротецнеизш необходимо учитывать изменения в составе и физико-химических свойствах отдельных классов липопротеинов. В етой связи большой интерес представляет изучение шшетики свободнора-дикагьиых реакций в равных icxaccax липопротеинов после облучения.

йжилимипесцентннй анализ плазмы крови в разные сроки после воздействия ионизируЕщга излучений, показывает, что однократное облучение вызывает более выраженные изменении исследуемых параметров хеми-• люминесценции, чем фракционированное. Tat, через сутки после однократного облучения наблюдается увеличение высоты быстрой вспышки, латентного периода, высоты и величины светосуимы медленной вспшки, что указывает на активацию антжиссидантных систем, усиление интенсивности свободорадикажьных процессов, увеличение количества перекисных радикалов а накопление гидроперекиси« соединений. Ранняя пострадиационная интенсификация процессов перекисного окисления липидов и усиление интенсивности хемилшинесценции [фови связана с непосредственны}! действием шнизирувдей радиации (Л Е Абрамова, 1991; RA. Нарабой, 1939). В последующие сроки наблюдается достоверное снимание величин свето-сунмы и высоты медленной встоки в плазме крови, сохраняющееся до 4-х недель после облучения.

Кзучалие показателей хемилтешесценции рааких классов липопротеинов показывает, что только при однократном облучении регистрируются достоверные изменения в ДШ1 Отмечается сжшэн&) интенсивности сво-боднорадикальиш; рея:сдн;1 и количества перзюязншг радикалов от 1-й да 4-й недели nowe обдртгеяяя.

Учитывав тот Фркт, что а пор;.э у крш шзпдыетса различный характер интенсивности своооднорадшсальных реакций в разных классах лц-попротегаш и основной вклад в хеишзшикеецэпцщэ вносят ЛБП, снигэцие кинетики свободнорадикальных реакций в плазме крови от 1-й до 4-й недели после облучения связано с регистрируемым нами сшшэннем данного класса лкпопротекков в укязаниио сроки. Дзгтоднитошшм ([актором, спо-собствуода) саиавнию кинетики обободкорадиказьт» реакция, явлпется вайлвдзешз в stoïï период стшзнае содерга"тлл тиков в ЛВП, что привода к изменению состкшзтга окисш^хся ко>.«оиентов. Онжаше па-рвмэтров аядуцкровшшоЯ шсм?шк&сц$яцей в плазкэ rtpowt и ЯШ пссго однократного сб.чршт, вероятно сбябзио с теи, чгс яа фоне форадфуа-идася д:!сдипо11)от01(иэ»яй с tposb шйфззвттся ан&читшюв дашгеео?-50 бхэшдогичэскп амчгаилк шгкетв, которые пзхтотея аатиокаидянтпи и силы» укеньюга уровень оодвдтылп процессов, a laia-s изменяется vV.'Jïnosfâima ошмшоадхся кошошггов (ЯИ, Оеркиз, 1387).

^акционированное облучение не вывивает достоверных изменений исследуемых параметров индуцированной хемилюминесцэиции плазмы крови И лвп.

Изменения ¡¡apaiстера хемидюминесценции ЛИП и ЛОШ плааш крови посла однократного и фракционированного облучения носили сходный характер. Так при двух режимах облучения наблюдается увеличение свето-суши медленной вспышки, указывающей на реличение количества пере-кисных радикалов на 4-ю неделю после облучения, что свяаано с максимальным увеличением содержания ЛИП в плааш крови в указанный срок. Увеличение содержания ЛОШ плазмы крови на 1-е сутки после облучения, как при однократном так и при фракционированном облучении, сопровождается усилением кинетики свободнорадикальных реакций , увеличением количества переписных радикалов , гидроперекисных соединений. К 1-й неделе отмечается снижение интенсивности свободнорадикальных процессов с последующей нормализацией в более поздние сроки.

Изучение кинетики саободнорадйкальньк реакций отдельных классов липопротеинов и плазмы крови крыс после внешнего гамма-облучения показывает, что интенсивность развития свободнорадикальных.процессов . коррелирует с изменением содержания лшпопротеикоз крови >i их дипиднш компонентов и при однократном облучении носит более выраженный характер.

2.3, Содержание простагландинов в плазме крови и разных классах липопротеинов.

Учитывая, что наиболее выраженные изменения в характера хешшо-минесценции плазмы крови выявлены через сутки после однократного внешнего 'гамыа-облучения, изучено содержание простагландина F-1U и трсыбоксака В-2 в раннем периоде после воздействия ионизирующих излучений. Исследование атого класса соединений,-которые являются биологически активными дипидаыи и транспортируются в крови липид-белковыми макромолекулами, представляет интерес, с одной стороны, с учетом их возможной роли в развитии патологических последствий воздействия тонизирующих излучений (Е, S. Романцев, 1986) и с другой стороны тем, что процессы сЕободкорадикального окисления липидов и образованна простагландинов имеют общие пути ыэтабол^зма (С. Livingstone, 1988).

Установлено, что в норме простагландян F-1L. почти равномерно распределяется меаду разными классами липопротеинов. Шслэ сблучзнвд изменение содержания простагландина F-1L характерно только для ЛНП (62 пг/ыл в норма^ Зо пг/мл через g часа и 29 пг/мз через £4 часа после облучения). Снижение простагландина F-1L в ЛИП связано, возмог,-

но, о увеличением в крови содерзкания гидроперекисей и перекисных радикалов, о чем свидетельствует усиление кинетики свободнорадшсадьнык реакций в первые сутки после гамма-облучения. Указанные соединения являются сильным ингибиторами простациклин-синтетазы. В то же время, полученные данные можно рассматривать и с учетом выявленных существенных нарушений состава, размеров и структуры ионогенных групп ЛНП после облучения, то есть не исключается возможность нарушений характера взаимосвязи липопротешовых частиц с простацикдином, циркулирующим в крови после его биосинтеза в тканях.

Тромбонеан В-2 в норме главным образом определяется во фракциях ЛВП и ЛНП. Через 2 часа после облучения наблюдается увеличение трои-боксана В-2 в ЛВП, после чего, на 1-е сутки, происходит его снижение до исходного уровня. Во фракции ЛОНП отмечается резкое увеличение тромбоксана В-2 через 2 часа,, сохраняющееся до суток после облучения. Такие сукрственные нарушения содержания тромбоксана в составе ЛОНП (увеличение в Б-7 раз) наблюдаются на фоне значительно меньшего увеличения содержания ЛОНП а плазме крови облученных .тавотных (в 2 раза), и, вероятно, связаны с усилением процессов образования тромбоксана в организме. Имеющиеся литературные данные указывают на то, что В ранние сроки после гамма-облучения наблюдается интенсификация биосинтеза отдельных классов лростагландинов в тканях печени, головном мозге, семениках (Е. Ф. Романцев, 1986). По мнению автора ыехалиам резкого усиления биосинтеза лростагландинов в бликайпмэ минута после облучения, вероятно, связан с активацией системы гипоталамус-гипо-физ-кора надпочечников, усиленным образованием соответствующих гормонов.

Следует подчеркнуть, что выявленные нарушения содержания простат ландина Г-И. и тромбоксана В-2 касаются главным образом атероген-ншг классов липопротеинов - ЛНП,и ЛОНП. Эти и другие полученные на!<и результаты указывают на большую уязвимость данных классов липопротеинов при воздействии внешнего гамма-облучения.

В целом выявленные изменения содержания простагландннов указывают на увеличение соотношения тромбоксана В-2 и простагландина Р-1Ь, что, о учетом вааоконстрикторнш свойств тромбоксана, шмет вшивать шетныэ нарушения кровообращения и метаболизма в сосудистой стенке. Подобные явления рассматриваются в качестве факторов, способствующих атерагенеоу (ЕП. Куаник, 1989).

2- 4. Изучение поверхностных ионогенных групп разных классов липопротеинов.

Как следует из представленных данных, наиболее вираженша изие-

изния дипидного и липопротеииоього спектров крови отмечаются на протяжении изсяца поила облучения и характерны для ЛОНП и ЛШ1 Выявленные нарушения содержания и состава отдельных классов випопротеииов , но видимому, могут вызывать изменения структуры этих дшнд-белковых

макромолекул.

Результаты г.отенцжштрнческого титрования 'разных классов тпоц-ротеинов показывает (табл. 1), что узка через сутки после облучения наблюдаются вамэтные изменения в структуре варяизниых групп на поверхности липопрогеиновых частиц. Во всех трек классах липопротеиюв увеличивается количество вторичных фосфорнокислых групп, в ЛОКЛ и ДЕЛ ■ снижается содержание карбоксильных групп. Однако, изменения ионоген-ных групп не сопровождается отклонениями величин их рК. Это свидетельствует об отсутствии информационных перестроек в атих группах.

Через 30 суток после облучения изменения в структуре варяшшых групп носят более выраженный характер и затрагиваиг все ионогешше группы. Достоверные сдвиги значений рК выявлены для имидазольпых групп гнстидина и вторичных фосфорнокислых групп ЛОНП, концевых карбоксильных групп Ж! Необходимо отметить, что наиболее еамегныс изменения емкости проявлялись во всех исследуемых классах липопротеинов в случае концевых карботеильных групп. Ш-видкмоку, столь значительные изменения емкости (в 10 н более раз) нельзя объяснить лииъ изиэ-И&НМЯ/.Ш доступности этих групп для прогонов вследствие их конфорыаца-ошш перестроек или экранирования. Такие изменения могут быть связаны с фрагментацией noteicyii апопротеииов. Кроме того, наблюдаете иэ-иэненая структура липопротеинов могут приводить к иаруиениаи внутренние гидрофобю» участков аьфифш,на» L-спирали щюошопротекнов и пронкишвению в них прогонов, увеличивая таккц образсш количество ионов водорода, связанных с чааткцей липопротеинов i-.e злектрастатшшс-i-jî.

К 30-н суткам после облучения наблюдается увеличение количества групп, способны;-: связывать ионы №-, к sto увеличение происходит в ос-во&юм за счет карбоксильных и вторичанх фзефорноюилш групп. Поскольку в области с рЯ 2,6 - 8,0 t-Kïpywoa в основном группы, иосупиэ отрицательный варпд, коню предположить увеличенка отрицательного заряда ксоледуешх' кдаооов шшопротеинав при форсировании помрадаеци-оиннх дкояийопротевдэмий. Швышэниэ поверхностного наряда зшгаироге«-йовщ частиц когдг тормозить иа электростатическое взашэдейстш с отрицательней клеточной ыокбраноt.. Такое повьзандо заряда савдетель-çsui'eï oû умзпъшзник количества экагомировашшх в водиую <1лзу оатат-

Таблица

Природа и количество варя ¡генных групп в лииопротештх плазмы крови !фыс в разные сроки после внешнего гамма-облучения в дозе 3 Гр.

Участок Диссоциирующие рк Емсость

связы- группы _уг-зкв/г белка

вания 1 сутки ЗОсуток 1 сутки 30суток

лвп

I Опыт СООН-концевые 3, 6+0,2 3,810,1 5,610,8 2418,4л

Норма (рК 3,6) 3,7+0,2 3,710,2 6,311,7 6, а+1,7

II Спьгг, СООН-боковь© 4,9+0,1 4,3+0,1 3,410,3 9,011,3л

Норка (рК 4,0) 4,9+0,1 4,910,1 4,110,9 4,110,9

III Опыт Вторичные фосфорно- Б, 8+0,1 5,910,1 3,3+0,3 6,110,5*

Норма кислые (рК 5,4-6,5) Б, 610,1 5,810,1 2,010, «2 2,9+0,2

IV Опыт ТШвдазол гистидинч 6,3+0,1 6,810,1* 3,1+0,4 1 ' — 1 3,710,5

Норма (РК 6,2) 6,3+0,1 6,310,1 3,3+р, 3 З.ЗЮ.З

лнп

I Опыт СООН-концевые 3,0+0,1 3,110,1л 3,210,3 42+4,5*

Норма (рК 3,6) 3,8+0,1 3,810,1 3,6+0,2 3,5+0,2

II Опыт СОСН-Ооковые 4,6+0,1 4,810,1 3,7+0,4 5,911,5

Норма (рК 4,6) 4,0+0,1 4, С НЭ, 1 3,910,7 3,910,7

III Опыт Вторичные фосфорно- 5,810,1 С,910,1 3,910,4 4.410,1

Норма кислые (рК 5,4-6,5) 5,810,1 5,810,1 5,6+0,7 5,610,7

IV Опыт Кмидазол гистидииа 6,610,1 6,7+0,1 26+0,3 7,411,5*

Норма (рК 6,2) 6,5+0,1 6,5+0,1 25+0,4 25,3+0,4

лэш

1 Опыт СООН-концэвкз 3,7+0,1 3,610,1 4,310,5 9,3+1,2*

Норма (рК 3,6) 3,610,1 3,610,1 4,110,6 4,110,6

И Опыт СС0Н-С0К0ЕЫ9 4,0+0,1 4,9+0,1 2,8+0,2 Б, 6+1,3

Изрма (рК 4,6) 4,9+0,1 4,9+0,1 3,5+1,1 3,5+1,1

III Опыт Вторичные фосфорно- 5,6+0,2 6,910,1а 3,410,7 3,410,3

Норма кислые (рК 5,4-6,5) 5,8+0,1 5,810,1 2,510,2 2,410,2

IV Опят йяц'лзод гистидина 6,4+0,1 6,8+0,1* 2,0+0,2 4,4+1,1

Норма (рН 6,2) 6,2+0,1 6,2+0,1 3,1+0,1 3,110,1

* - Различия достоверны по огношени" гсонтролл (р<0,05).

ков лизина и аргинина

Отмеченные изменения физико-химических параметров ЛОНП и ЛНП могут влиять на их метаболические превращения. Известно, что рвцапторо-вязьтающие участки апопротеинов В и Е включают в себя в основном аминокислотные остатки аргинина, лизина и гистидина, которые взаимодействуя с глугачшном и аспарагином апоВ,Е-рецептора, обеспечивают специфическое взаимодействие ЛНП с клетками (R. W.Kfahley, 1986). Наблюдаемые нами информационные перестройки в ЛНП через 30 суток после воздействия внешнего гамма-облучения , затрагивающие имидазольные кольца гистидина и вызывающие значительное уменьшение емкости участка с рн 6,0 - 6,2, где титруются имидазольные группы гистидина, с 26,3+0,4 до 7,4+1,6 мзкв/г белка могут быть одной из главных причин возможного нарушения рецептор-опосредованного эндоцитоза липопротеинов клетками.

2- 5. Геометрические параметры липопротеиновых частиц.

Размеры липопротеинов, регистрируемые методом лазерной корреляционной спектроскопии, существенно ¡¡вменяются, чзрегз 1 и SO суток после облучения крыс (рис.1). Через сутки после облучения наблюдается уменьшение среднего диаметра ЛОНП, сохраняющееся на протяжении месяца, Данные нарушения вряд ли могут быть связаны с изменениями на стадии катаОолических превращений ЛОНП, так как в раннем периоде после облучения активность липопротеиновой липазы снигяагтся (М. Carton, N. Dausset, 1975), а вызваны изменением процессов биосипгееа ЛОНП d гепатоцитая. Известно, что гамма-облучение ирыо в доввх блинках к нашим, ведет к резкой активации липогенеза (Л К. Колокийцзва, 1S85; Е. Г. Новоселова, 1988). При этом наблюдается усиление биосинтеза холестерина, триглицерядов, нарушение в системе внутриклеточных ли-пид-переносящик белков, что не мотет не сказаться на процессе сборки и формирования липопротеиновых частиц.

Изменения размеров ЛНП заключаются в появлении бимодального характера распределения частиц через сутки после облучения, который к 30-м суткам трасформируется в исходный одномодальный. Еа первые сутки формируются две четко разграниченные моды липопротеиновых частиц, от-личакящеся по своим средним диаметрам. При этом основная мода, содержал ТО. липопротеиновых частиц, не отличается по размеру от среднего диаметра ЛНП, регистрируемого в норме (31,0 км), в то время как другая мода, содержащая до 237. частиц, имеет средний диаметр 9,0 ни. Поскольку ЛНП образуются в кровяном русле кз ЛОНП, то, по-видимому, появление моды ЛНП с диаметром 3,0 им связано с включением в метаболический цикл вновь синтезированных ЛОНП меньших размеров. Однако от-

- 1Б

Контроль ©

1 сутки 30 суток Л В П---

Л О Н П

Pec.1. Результаты определения.размеров (ям) липспротеинов плазмы крови крыс в разные сроют после внешнего гамш-облучения в дозе 3 Гр.

* - различия достоверны по отношению к контролю (р<0,05).

носительно невысокое содержание таких модифицированных ЛШ.' а раннем периоде после облучения связано с угнетением активности липопротеино-вой лилешы. Эти предположения подтверждаются тем фактом, что через сутки после облучения на фоне резкого увеличения количества ЛОНП значительных изменений в содержании ЛНП в крови облученных ямочных не наблюдается.

К 30-м суткам после облучения не наблюдается нормализация вели. чин средних диаметров, как ЛОНП так и ЛШ, что свидетельствует о длительном и стойком характере нарушений в метаболизме липопротеинов.

Необходимо отметить, что изменения размеров липопротеиновых частиц приводят к нарушению их стерических параметров, которые обеспечивают рецепгорный 8ахват липопротеинов клеточной мембраной, что отра-тается на метаболизме ЛОНП и ЛНП и может служить существенным фактором в механизмах формирования пострадиационных дислипопротеинеыий.

3. Содержание липидов в тканях облученных иивотных.

Описанные раннее нарушения в составе, структуре и спектре липопротеинов крови после воздействия ионизирующей радиации должны определенным образом сказываться на состоянии отдельных органов и тканей облученного организма Большинством авторов, при изучении ваимосвяоп нарушений лиопротеинового обмена с развитием атеросклероза, содержание липидов в тканях рассматривается, как биохимический индикатор атеросклеротических поражений.

Через 24 недели после однократного и фракционированного облучения определялось содерзвшшп липидов в тканях печени, сердца и аорты. Полученные данные указывают на снижение содержания обвэго холестерина и трнглицеридов в тканях печени и сердца. Отмечается увеличение содержания общих липидов в тканях печени и снияение данного показателя в тканях сердца.

Таким образом характер изменений в содержании липидов тканей в конце эксперимента тождественны для обоих режимов облучения. Это может быть связано с приблизительно одинаковым уровнем гиперлипидемий как в случае однократного так и фракционированного облучения и наличием определенного латентного периода мевду временем нормализации исследуемых показателей крови и сроком окончания эксперимента. Последним фактом подчеркивается то обстоятельство, что изменения в тканях формировались на протяжении длительного периода и на фоне сходных патологических сдвигов в крови в обеих группах экспериментальных животных. Следует выделить особенности изменений содержания липидов и тканях сердца, за'шгатиеся в снижении уровня холестерина, триглщери-

- /?-ИОНИЗИРУЮЩЕЕ

ИЗЛУЧЕНИЕ

///////////////////////

Активация синтеза Ж, ТГ, ФЛ, ало-ЛИ

Рцс. 2 . Схема возиошцх нарушений обмена дипопротеинов (I транспорта холестерина при действии ионизирующего излучения. хЬ - холестерин, ТГ - триглицериды, ФЛ - фосфолипиды, ЭХП - зфири холестерина, апо-ЛП - аполипопротеины. ЛПЛ - лшопротеинлипаза,

дат - лецитин-холестерин-ацилтранс.ферааа.

дов и общих лншдов, Такая направленность сдвигов отражает процесс склерозирования тканей, что соответствует существующим представлениям в радиобиологии о высокой частоте подобных осложнений среди отдаленных последствий вовдействия ионизирующих излучений (Ю. И. Ыэшса-лев, 1987).

Полученные нами результаты и литературные данные позволяв следующим образом представить характер изменений в обмене липопротеинон при радиационном воадействи (рис,2). Ионизирующие излучения вызывают активацию биосинтеза гепатоциташ основных структурно компонентов дипопротеинов (холестерина, триглицеридои, фосфолипидов, апопротеи-нов), что приводит к гипер-пребеталилопротеинемии. Дополнительный фактором, способствующим увеличению содержания ЛОНП в крови при облучении, моют явиться обнаруживаемое в атих условиях угнетение активности липопротеиновой ляпазы. Известно, что даный фермент ответственен 8а превращение ЛОНП в Ж1 Шесте с тем, не исключено, что отсутствие активации липопротеиновой липазы, являющейся индуцибидьлии ферментом, в ответ на увеличение содержания ЛОНП в крови, связано с существенны},!и нарушениями состава, структуры и физико-химических свойств ЛОНП облученных животных. С угнетением активности липопротеиновой липазы нельзя связать наблюдаемую гипер-бетадипопротеинемиш. Возможно, что главным обстоятельством указанного факта является нарушение катаболических превращений ЛИП. Этому мокет способствовать описанный выше широкий спектр нарушений обмзна липолротеинов после воздействия ионизирующих излучений, появление модифицированных липопротеиновых частиц, а, следовательно, изменение электростатического взаимодействия таких липопротеинов с клеточной мембраной, нарушение их связывания со специфическими рецепторами. Нарушение рецептор-опосредованного андоцитоза, неспецифическое взаимодействие липопротеинов с клеточной мембраной ведет к нерегулируемому поглощению холестерина клеткой. С другой стороны накоплению холестерина в клетках способствует сщшэние в кровн содержания ЛВП и угнетение активности лецитин-холесте-рин-ацнлтрансферазы (ЛХАТ) при облучении. Известно, что система ЛВД-ЛВД играет важную роль в переносе холестерина с плазматических мембран к печени.

1, У лиц, перенесших ОЛБ в результате облучения при аварии на Чернобыльской АЭС, установлено увеличение содержания холестерина и триглицёридов в плазме крови, частоты атерогеиных типов гиперколесте-ринемий через год после облучения, выявленные нарушения носят устой-

чивый характер и обнаруживаются при повторном обследовании одних и те* лэ лиц через 3 года после аварии.

2. Внешнее гамма-облучение крыс в интервале доз от 1 до 3 Гр вывивает выраженные гиперллпидемию и гнперлипопротеинемию, проявляющиеся в ранние сроки (2 и 24 часа) после облучения. Выявленные нарушения носяг дозсзависимый характер.

3. Однократное и фракционированное облучение в дозе 3 Гр вызывает длительно сохраняющиеся изменения состава липопротеинов крови и содержания в них липидных компонентов. Указанные нарушения носят характер гипер-бета и гипер-пребеталипопротейнемий и более выражении при однократном облучении животных.

4. Изучение кинетики свободнорвдикальных реакций отдельных классов липопротеинов и плазмы крови крыс после внешнего гамма-облучения показывает, что интенсивность развития свободнорадикалыгых процессов коррелирует с изменением содержания липопротеинов крови и их липидных компонентов и при однократном облучении носит более выраженный характер. л

Б. Внешнее гамма-облучение в дозе 3 Гр приводит к снижению содержания простагландина Г-И в составе ЛИП и увеличению содержания тромбоксана В-2 в составе ЛОШ крови крыс.

6. Облучение в дозе 3 Гр вызывает изменения содержания ионоген-ных групп на поверхности липопротеинов, имеющие особенности в зависимости от классов липопротеинов и сроков исследования (1 и 30 суток). Наиболее выражнные изменения отмечены через 30 суток после облучения й заключаются в достоверных сдвигах значений рК для имидазольных групп ЛВП, концевых карбоксильных групп ЛНП, вторичных фосфорнокислых и имидазольных групп ЛОНП, снижении содержания имидазольных групп гистидина ЛНП, увеличении концевых карбоксильных групп и злектроотри-цательности частиц ЛОШ, ЛНП и ЛВП.

7. Внешнее гамма-облучение в дозе 3 Гр вызывает уменьшение среднего диаметра ЛОНП и ЛНП при исследованиях на 1-е и 30-е сутки посла воздействия. Через сутки происходит изменение одиомодального характера распределения частиц ЛНП по размерам на бимодальный, который к 30-м суткам трансформируется в исходный одномодальный.

8. Однократное и фракционированное облучения в дозе 3 Гр вызывает снижение содержание холестерина и триглицеридов в тканях сердца и печени крыс через 6 месяцев после воздействия радиации.

Описок работ, опубликованных по темэ диссертации.

1. Чаяло П. П., Преварский Е П., Курик М. Е , Чоботько Г. М., Ля-

ховчук а Е , Холявко И- Г., Коваленко С. Е К биохимической оценке отдаленных последствий воздействия ионизирующего излучения у лиц, участвующих в ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС // в кн; Ближайшие и отдаленные последствия радиационной аварии на Чернобыльской АЗС. -Н-198?.-0.634-63?.

2. Чаяло П. П., Пре варе кий Б. П., Курик М- К , Цукалов И. 0., Чэ-Оотька Г. М., Ляховчук НИ, Холявко И. Г. Липиды, липопротеины и некоторые показатели антиокислительной системы крови у лиц, участвовавших В шевидации аварии на Чернобыльской АЭС // Йедицинские проблемы радиационной ващиты. -Киев. -1987.-С. 325- 328.

3. Чаяло П. Е , Преварский & Е , Курик Ы. а , Чоботько Г. Е, Ля-ковчук Е Е , Холявко И. Г., ЕЕ Береза, М. Ю. Черникова Характеристика дислилопротеинемий у лиц, подвергшихся радиационному воздействию, в разные сроки после аварии на ЧАЭО и пути их коррекции // Республиканская научно-практическая конференция по радиобиологии и радиоэкологии: Тезисы докладов. -Минск. - 1988. -0.174.

4. Чаяло Е Е , Чоботько Г. М., Ляховчук Е Е , Холявко И. Г.,

В- Я. Береза. Возрастная характеристика дисдипопротеинемий у лиц с острой лучевой болезнью, участвовавших в ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС // Сборник научных трудов АМН СССР "Проблемы радиационной медицины". - Киев, Здоровье.-1982.-Вып. 1, С. 196-201.

Б. Чаяло Е П, Береза Е Я., Ковалев А. М., Ляховчук Е Е , Чоботько Г.М К оценке метаболических факторов риска развития отдаленных нес-тахостических аффектов ионизирующего излучения // Всесоюзный радиобиологический съезд, Е, 21-27 августа 1989 г.: Теа. докладов. - Пущи-110. -1989. -С. 858-859.

6. Чаяло Е Е , Цреварский К Е, Чоботько Г. Ы., Ляховчук Е Е ,

Е Е Береза, М. ¡0. Черникова. К использованию методов клинической биохи-ши в радиационной медицине // IV съезд республиканского научного общества врачей-лаборантов: с. 402. Тезисы докладов. -Луганск. -108Э. -С. 402.

7. Ляховчук Е Е Характеристика состава и некоторых физико-химических свойств липопротеинса крови крыс при действии внешнего гам-ыа-облучения // Всесоюзная конференция "Радиобиологические последствия аварии на Чернобыльской АЭС"; Тезисы докладов. -

Шнек.-1991.-С. 80.

. 8. Чаяло ЕЕ", Ляховчук ЕЕ , Чоботько Г.Е Липиды крови и характеристика свободнорадикальних процессов в отдельных классах липоп-•ротеинов у крыс в ранние сроки после воздействия внешнего гамма-излучения // Украинский биохимический журнал. - 1992. - 64, N3. - С. 91-98.