Соленостные адаптации инфузорий рода Paramecium (Ciliophora, Peniculia)

Смуров, Алексей Олегович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Соленостные адаптации инфузорий рода Paramecium (Ciliophora, Peniculia)
ВАК РФ 03.00.33, Протистология

Автореферат диссертации по теме "Соленостные адаптации инфузорий рода Paramecium (Ciliophora, Peniculia)"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ЗООЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

ООЗОБ7272

На правах рукописи

СМУРОВ Алексей Олегович

СОЛЕНОСТНЫЕ АДАПТАЦИИ ИНФУЗОРИЙ РОДА PARAMECIUM (CILIOPHORA, PENICULIA)

03.00.33 - Протистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2006

Работа выполнена в лаборатории солоноватоводной гидробиологии ЗИН РАН и лаборатории зоологии беспозвоночных ВНИИ Биолого-почвенного факультета СПбГУ, г. Санкт-Петербург

Научные руководители:

доктор биологических наук доктор биологических наук

Официальные оппоненты: доктор биологических наук доктор биологических наук, профессор

Ведущее учреждение:

Фокин Сергей Иванович Аладин Николай Васильевич

Скарлато Сергей Орестович

Бергер Виктор Яковлевич

Педагогический университет им. А.И. Герцена

Защита диссертации состоится « ЗО » 2007 г. в

часов на заседании Диссертационного совёта Д 002.223.01 по защите диссертаций при Зоологическом институте РАН по адресу:

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб. д. 1, актовый зал.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Зоологического института РАН

Автореферат разослан « » $е*га<&>Я( 200&Г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы

Проблема отношений между индивидуумами, популяциями и средой их обитания является одной из основных проблем биологии. Известным способом изучения этих отношений являются экспериментальные исследования.

Для разработки теоретических положений и получения практических результатов при изучении адаптаций организмов исключительное значение имеет феномен акклимации, который заключается в реагировании организма на изменения только одного какого-либо фактора среды. Очевидно, что исследование акклимации можно провести в "чистом" виде только в лабораторных условиях. В настоящее время явление акклимации, которое первоначально рассматривалось как лабораторный феномен, подтверждено многочисленными исследованиями и для естественных популяций организмов, относящихся ко многим систематическим группам (Хлебович, 1981). Наибольшее количество работ к настоящему времени посвящено изучению температурных акклимаций организмов. Акклимации к другим факторам среды, в том числе и к изменению солености, изучены менее полно.

Несмотря на значительные методические сложности исследования адаптаций одноклеточных организмов, протисты как экспериментальные объекты обладают по сравнению с многоклеточными гидробионтами рядом преимуществ, а именно возможностью: а) вырастить в короткий срок большое количество экспериментальных клеток; б) работать с генетически однородным материалом. Кроме того, простейших в силу своей двойственной природы, т.е. сочетания в своей организации одноклеточности и полноценного организма можно рассматривать как более простой экспериментальный объект по сравнению с многоклеточными организмами, при изучении которого не нужно учитывать специфику функционирования клеток различных тканей.

Успех экспериментальных исследований в значительной мере предопределяется выбором объекта, который должен соответствовать нескольким критериям. Кроме легкости и быстроты проведения экспериментов, значение имеет также накопленный в литературе большой объем информации об этом организме. Этим условиям удовлетворяют инфузории, принадлежащие к родам Paramecium и Tetrahymena, о чем свидетельствует имеющееся к

настоящему времени огромное количество публикаций по различным аспектам биологии и физиологии этих простейших.

Большинство экспериментальных исследований отношения инфузорий к солености среды выполнено на парамециях, - представители рода Tetrahymena в этом отношении исследованы значительно хуже. Важное значение для настоящего исследования имеет то, что все виды рода Paramecium способны существовать в пресноводных биотопах. Кроме того, парамеции регулярно встречаются в олигогалинных участках эстуариев, и иногда одни и те же виды были обнаружены одновременно как в полигалинных, так и в пресных водах.

В недавнее время впервые был проведен многоуровневый анализ данных, полученных для большинства известных видов парамеций, по единой схеме с использованием максимально стандартизированных оценок, позволивший выявить филогенетические связи и разработать систематику рода Paramecium (Фокин, 2001, 2002; Fokin et al., 2004). Такое исследование оказалось возможным благодаря собранной С.И. Фокиным уникальной коллекции живых культур парамеций, включающей почти все валидные морфологические виды. Соответственно, появилась возможность провести исследование соленостных реакций нескольких видов рода Paramecium по стандартным схемам. Полученные в результате экспериментов данные с учетом уже имеющихся сведений о филогенетическом положении видов дают возможность увидеть, как менялись соленостные реакции парамеций в процессе эволюции. В свою очередь, это позволило обосновать новую методологию анализа данных по экологическим реакциям видов для использования их в филогенетических и систематических построениях.

Феномен соленостных адаптаций можно изучать на разных уровнях, - от молекулярного до уровня экологии популяций. Действительно, в литературе имеются факты, показывающие существование феномена адаптации к солености у Paramecium как на указанных, так и на промежуточных уровнях (Плеханов и др., 2006; Ах, Ах, 1960; Cronkite et al., 1991; Tominaga et al., 1998; Stock et al., 2001). Так как было невозможно охватить в нашем исследовании весь спектр проблем, касающихся соленостных адаптаций парамеций, мы ограничили поле исследований. Главное внимание было уделено изучению соленостной толерантности и резистентности различных видов инфузорий рода Paramecium.

В настоящей работе мы использовали два взаимосвязанных подхода, которые позволили, как нам кажется, успешно сравнивать экологические характеристики видов: толерантный по-

лигон и потенциальную толерантность. Эти характеристики остаются практически неизменными для каждого вида, если в качестве среды при их оценке используется вода с постоянными соотношениями ионов.

Для континентальных водоемов характерны иные, чем в океане, пропорции ионов, которые изменяют соленостные реакции гидробионтов. Исследователями давно было замечено, что в континентальных соленых озерах при той же солености, что и в море, многие виды имеют более широкие соленостные толерантные диапазоны (Хлебович, 1974; Аладин, 1995; Williams, 1998). Однако этот результат получен только для многоклеточных гидробионтов: одноклеточные организмы отсутствуют в списке тестированных видов. Поэтому мы решили изучить также влияние воды с другими, чем в океане, ионными пропорциями (аральской) на толерантные полигоны и потенциальную толерантность парамеций.

Среди реакций организма на изменение солености среды, кроме резистентности и толерантности, перспективно изучение изменения уровня белков теплового шока, что также может отражать эволюционные тенденции видов, различающихся по своему отношению к солености среды.

Цель и задачи исследования

Основной целью работы была проверка высказанной нами гипотезы о соответствии между филогенетической позицией различных видов рода Paramecium и их соленостными реакциями.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методы оценки соленостной толерантности у инфузорий.

2. Выявить потенциальные соленостные толерантные диапазоны и построить соленостные толерантные полигоны для 13 видов инфузорий рода Paramecium, различающихся по своему отношению к солености среды.

3. Сопоставить полученные данные по потенциальной соленостной толерантности и соленостным толерантным полигонам видов рода Paramecium с филогенетическими построениями, сделанными ранее на основе морфологических, морфометрических и молекулярно-биологических данных для тех же самых видов парамеций.

4. Оценить различия в толерантности разных парамеций к изменению солености воды с аральским и океаническим составом солей во всем диапазоне потенциальной соленостной толерантности видов.

5. Получить данные об изменении уровня белков теплового шока семейства 70 кДа в клетках пресноводных парамеций при изменении солёности среды их обитания.

Научная новизна работы

1. Разработан новый метод определения толерантных границ у одноклеточных организмов.

2. Выяснено, что род Paramecium пресноводного происхождения.

3. Впервые установлено, что одноклеточные организмы могут реагировать на изменение солености среды изменением уровня содержания белков теплового шока семейства 70 кДа.

4. Изменения толерантных границ одноклеточных организмов при их адаптации к воде с составом солей, отличающимся от океанического, происходят так же, как и у многоклеточных организмов.

Теоретическая и практическая значимость работы

В настоящей работе установлена возможность применения разработанных ранее методов изучения температурных адаптаций многоклеточных гидробионтов в исследованиях по соленостным адаптациям одноклеточных организмов. Показана возможность использования данных по соленостной потенциальной толерантности организмов в исследованиях по их систематике. Материалы диссертации могут быть использованы при чтении курсов по протистологии и экологии беспозвоночных.

Апробация работы

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на VI, VII и VIII конференциях по теме "Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря" в 1995, 1998 и 2001 гг., на Беломорской конференции СПбГУ в 2001 г., на Отчетных сессиях ЗоологическогоинститутаРАНв 1997,1998, 2000, 2003 и 2005гг., на семинарах лаборатории солоноватоводной гидробиологии ЗИН РАН.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 статей, 1 глава в коллективной монографии и 7 тезисов докладов.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 111 страницах, содержит 40 рисунков и 7 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1.

Материал и методика

Экспериментальные исследования выполнены в лаборатории солоноватоводной гидробиологии Зоологического института РАН, Беломорской Биологической станции Зоологического института РАН и лаборатории Зоологии беспозвоночных БиНИИ Санкт-Петербургского государственного университета в 1995-2005 гг.

Всего в работе было использованы 20 клонов 13 видов парамеций из коллекции живых культур лаборатории беспозвоночных БНИИ Санкт-Петербургского университета: P. caudatum (KAR98-

1), P. multimicronucleatum (YIA3-3, GL-5), P. jenningsi (IA, SA1-10), P. bursaria (РК-60), P.putrinum (PG-5), P.primaurelia (HV15-

2), P. biaurelia (T10-5), P. sexaurelia (Psex-3), P.polycaryum (Sh2-4, K-2, Pp-5), P. calkinsi (OCE4-1), P. duboscqui (AHV3-3, BB2-3), P. nephridiatum (11-5-4, SR98-1, SR98-2), P. woodruffi (BB-5).

Инфузорий культивировали на салатной среде инокулиро-ванной Klebsiella aerogenes (Sonneborn, 1970). Необходимую соленость создавали добавлением в среду раствора искусственной морской соли, приготовленной по рецепту Шубравого (1983) на дистиллированной воде или разведением дистиллированной водой концентрата беломорской морской воды. Инфузорий кормили 12 раза в неделю.

Устойчивость инфузорий к действию солености была определена для Р. caudatum, Р. jenningsi, Р. polycaryum, P.putrinum, P. sexaurelia, P. bursaria, P. calkinsi и P. nephridiatum.

Во время "острых" опытов клетки переносили из среды, в которой их содержали, в ряд тестовых соленостей в диапазоне 5-15 %о. Если клетки какого-либо клона выживали в данной солености, то опыт повторяли в ряду более высоких соленостей (15-60 %о).

В каждом опыте, который проводили в одной повторности для каждого значения солености, тестировали смертность 25-70 клеток (как правило, 30-40), а в контроле, - 25-30 клеток.

Для полученных в фиксированные промежутки времени данных по смертности рассчитывали логиты, для которых затем

находили коэффициенты уравнения линейной регрессии. Полученные уравнения использовали для расчета времени 10% (LTW), 50% (LT50)h90% (LT9q) смертности клеток в тестовой солености.

В ходе выполнения этой работы применяли два способа определения толерантных границ. В первом из них за толерантную границу принимали асимптоту, перпендикулярную оси тестовой солености, полученную с помощью расчета дробно-линейной регрессии. Для расчета дробно-линейной регрессии была создана оригинальная программа, в которой реализовано несколько алгоритмов ее расчета (Smurov et al., 1999).

Второй способ основан на предложенной нами методике (Smurov, Fokin, 1998), которая учитывает особенности биологии протистов. Мы предложили считать толерантной границей не летальное значение солености для отдельных клеток, а таковое значение для клеточной популяции. При этом учитывается, что отдельные клетки, подвергнутые действию солености могут выживать и существовать в течение длительного времени, но при этом не способны дать потомство, которое, выжив, в свою очередь тоже даст потомство.

Потенциальная соленостная толерантность инфузорий, аккли-мированных к различным соленостям, и толерантные соленостные полигоны были получены для 15 клонов, относящихся к 13 видам парамеций.

Примененный нами метод получения данных, необходимых для построения толерантного полигона, заключается в акклимации к нескольким соленостным концентрациям внутри толерантного диапазона. После завершения срока, необходимого для полной акклимации (около 1.5-2 месяцев), для всех значений солености акклимации определяли толерантные границы. Для вновь полученных культур снова определяли толерантные границы. Процедура повторялась до достижения потенциальных толерантных границ. В результате был построен подробный график зависимости значений толерантных границ от солености акклимации.

Сходство толерантных полигонов оценивалось по формуле: 2С/ (А+В), где С - величина общей площади толерантных полигонов, А - площадь первого полигона, В - площадь второго полигона. Матрица сходства была кластеризована при помощи взвешенного парно-группового метода.

Белки теплового шока определяли у пресноводной инфузории Paramecium jenningsi (клон SA1-10). Для проведения опытов инфузории были акклимированы к пресной среде и к воде соле-

ностью 2 %о. Срок акклимации клеток составлял не менее 2 месяцев при комнатной температуре (18-20° С). Для простейших стрессовым соленостным воздействием считался перекрестный перенос клеток из одной солености акклимации в другую.

Глава 2.

Систематика и филогения парамеций

Род Paramecium относится к подклассу Peniculia класса Oligohymenophorea. Пеникулины были впервые указаны как таксон высокого ранга в работе Корлисса (Corliss, 1956). Группа получила название благодаря присутствию у клеток пеникулюса, который был впервые описан в работе Гелей (Gelei, 1934) и позднее использован в целях таксономии (Faure-Fremiet, 1950).

Вудруф (Woodruff, 1921) ввел подразделение рода Paramecium на две группы не таксономического характера: "aurelia" и "bursaria". К этой группе относят виды комплекса "P. aurelia", а также P. caudatum, P. multimicronucleatum, P. jenningsi и Р. wichtermani (Wichterman, 1986). Группа видов "bursaria" включает P. bursaria, P. calkinsi, P.polycaryum и P.putrinum.

Изучение морфологических особенностей видов этих групп (строения и числа ядер, топографии кинет и кинетосом, способа стоматогенеза при делении, особенностей конъюгации и т.п.) в дополнение к форме тела позволило Янковскому предложить деление рода на 3 группы, имеющие статус подрода: Helianter, Cypreostoma и Paramecium (Янковский, 1969; Jankowski, 1972). Янковским была также предложена схема эволюции рода, которая, по его мнению, происходила следующим образом: Helianter —»Cypreostoma —> Paramecium.

К настоящему времени накопилось значительное количество данных не только по классической морфологии парамеций, но и по ультраструктуре переходной зоны ресничек (Фокин, 1995), видовому составу эндобионтов (Фокин, 1989а, 19896,1989с; Fokin, Sabaneeva, 1993; Fokin et al., 1996, 1999a, 19996), морфологии и функциональным особенностям макро- и микронуклеусов (Фокин, 1979, 1989а; Fokin, 1997; Fokin, Chivilev, 1999; Fokin, Ossipov, 1981), морфологии сократительных вакуолей (Фокин, 1986), сравнительному анализу гена рибосомальной РНК малой субъединицы(Struder-Kypkeetal., 2000; Fokinetal., 2004, 2006), морфометрическому анализу клонов (Fokin, Chivilev, 1999,2000).

Основные результаты по исследованию сходств и различий разных видов рода Paramecium, полученные с использованием

разных методов, оказываются схожими и приводят к следующим обобщениям (Фокин, 2001):

1. Самыми древними видами оказываются P. bursaria, Р. putrinum и P. duboscqui. Они располагаются в основании родового древа и значительно отличаются от других видов парамеций по ряду морфологических и биологических признаков.

2. Недостаточно ясной представляется позиция P.polycaryum. Морфологические и биологические особенности этого вида имеют сходство с аналогичными особенностями видов, относящимися к разным группам.

3. Выделяются 2 кластера видов: кластер P. woodruffi, P. nephri-diatum, P. calkinsi и кластер в составе P. jenningsi, P. caudatum, P. multimicronucleatum и комплекса видов P. aurelia.

По результатам комплексного анализа данных, полученных разными методами С.И. Фокиным (Fokin et al., 2004) была предложена следующая система рода, которая использована в настоящем исследовании: Subgenus Chloroparamecium Fokin et al., 2004 в составе Paramecium (Chloroparamecium) bursaria Focke, 1836; Subgenus Helianter Jankowski, 1969 в составе P.putrinum Claparede et Lachman, 1858; P. duboscqui Chatton et Brachon, 1933; Subgenus Cypriostomum Fokin et al., 2004 в составе P. calkinsi Woodruff, 1921; P.polycaryum Woodruff et Spencer, 1923; P. nephridiatum Gelei, 1925; P. woodruffi Wenrich, 1928; P.pseudoputrinum Drages-co, 1970; Subgenus Paramecium Jankowski, 1969 в составе P. caudatum Ehrenberg, 1833; Комплекс P. aurelia (15 видов) (Sonneborn 1975; Aufderheide et al.,1983), P. multimicronucleatum Powers et Mitchel, 1910; P. jenningsi Diller et Earl, 1958; P. wichtermani Mohammed et Nashed, 1968-1969; P. africanum Dragesco, 1970; P. jankowskii Dragesco, 1972; P. ugandae Dragesco, 1972; P. schewia-koffi Fokin et al., 2001.

Глава 3.

Физиологические механизмы и органеллы, обеспе-чивающие адаптацию инфузорий к солености среды

На основе литературных данных для инфузорий нами выделены несколько коррелированных процессов, ответственных за адаптацию клетки к солености среды: осмотическая регуляция, ионная регуляция, работа сократительной вакуоли, изменение содержания свободных аминокислот в клетке, формирование поверхностных пузырьков, формирование пищеварительных вакуолей. В главе подробно описана динамика этих процессов и их

связь. Показано, что инфузории (как пресноводный так и морские) поддерживают гийеросмотичность цитоплазмы по отношению к осмотичности внешней среды.

Рис. 1. а - БТШ70 Р. ¡ептп081, акклимировадных к пресной среде. Данные иммуноблоттинга после электрофореза в 13 % -ном пол иакри ла м и дно м геле. 1 - реперы молекулярной массы: 66 кДа (бычий сывороточный альбумин) и 45 кДа (яичный альбумин), окраска понсо 8: 2 - тотальный белковый экстракт Р. иммуноферментная реакция с

антителами против Б'ГШ-70 быка, проявление методом ЕСЬ. 6 - Повышение уровня ЕТШ70 в клетках Р. ¡ещрьпфх в результате "соленостного" шока. Дот-блоттинг тотального белкового экстракта Р. }епп1п0з1. Иммунохимическое окрашивание с Применением антител против БТЩ-70 быка. Проявление бензидином. 1 - инфузории, акклимированные к пресной среде; 2 - инфузории, акклимированные к 2%о; 3 -"соленостный" шок: инфузории перенесены в среду с соленостью 2%о из пресной среды; 4 - "соленостный" шок: инфузории перенесены в пресную среду из среды с соленостью 2%о,

Глава 4.

Изменение уровня БТШ70 при адаптации инфузорий к солености среды

Методом иммуноблоттинга в тотальном белковом экстракте инфузории Р. jerгningsi, акклимироватшой к пресной среде, нами выявлен полипептидный антиген, который перекрестно реагирует

с антителами к БТШ70 крупного рогатого скота (рис. 1). Молекулярная масса выявленного белка одинакова, как для клеток, акклимированных к пресной и соленой салатной среде, так и для клеток, подвергнутых тепловому и соленостному шоку.

У инфузорий P. jenningsi, акклимированных к пресной среде, БТШ70 обнаружен в незначительной концентрации, тогда как у клеток, акклимированных к солености 2 %о, - в значительной. Уровень экспрессии БТШ70 у клеток, подвергнутых соленостному стрессу (стрессовым соленостным воздействием считался перенос клеток из пресной среды в воду соленостью 2 %о, и наоборот), также был выше, чем у инфузорий, акклимированных к пресной среде. У инфузорий, перенесенных из пресной среды в воду соленостью 2 %о, белок, очевидно, частично синтезируется de novo так же, как и в ответ на понижение солености.

Глава 5.

Соленостная резистентность' и соленостные толерантные границы парамеций

В главе рассмотрены теоретические воззрения на понятия резистентной и толерантной зон действия фактора в связи с методами определения их границ. Приведен обзор методов оценки устойчивости и толерантных границ у многоклеточных и одноклеточных организмов. На основании анализа литературных и собственных данных, приведенных в этой главе, показано, что величины соленостных толерантных границ, полученные при использовании метода сохранения клона, очень сходны с результатами, полученными при математической обработке кривых смертности. Проверка на сходство результатов, полученных обоими методами, выявила отсутствие достоверных различий на 95 %-ном уровне значимости.

В главе также приведены собственные данные по оценке соленостной устойчивости 8 видов парамеций, акклимированных к пресной среде. Полученные данные по зависимости медианного времени 50 %-ной гибели от тестовой солености для всех исследованных видов оказалось удобно описывать при помощи гиперболических кривых. Кривая 50 %-ной смертности имеет типичную гиперболическую форму для всех полученных нами экспериментальных данных. Показано, что график смертности акклимированных к среде соленостью 6 %о P. jenningsi и к среде соленостью 5 %о P. caudatum расположен в обоих случаях выше, чем для неакклимированных.

Анализ кривых 50 % -ной смертности для инфузорий подрода Paramecium показывает, что, несмотря на значительное увеличение (в результате акклимадии) продолжительности жизни в соленостях, близких к критической, верхний порог выживаемости изменяется незначительно. Соленость 8-9 %о остается непреодолимой.

Другая картина была получена нами для инфузорий, относящихся к подроду Cypreostomum. Все изученные виды легко акклимируются к соленостям, значительно превышающим критическую соленость (5-8 %о), которая может служить надежным маркером для разделения пресноводной и морской фаун (Хлебович, 1974).

Наименьшую устойчивость к воздействию солености демонстрируют виды, относящиеся к подродам Helianter и Chloroparamecium. Верхняя толерантная граница для обоих видов (P. putrinum, P. bursaria), акклимированных к пресной среде, расположена в области 3 %о, а время выживания в средах соленостью 5-7 %о также заметно меньше, чем у всех других изученных видов.

Глава 6.

Соленостные толерантные полигоны и соленостные потенциальные толерантные диапазоны парамеций

Концепция температурного толерантного полигона впервые была предложена канадским ихтиологом Фраем (Fry, 1947; Fry et al., 1942, 1946). Если определить толерантные границы к повышению и понижению тестовых значений температурного фактора для всего диапазона значений фактора, при которых возможна акклимация организма, то можно построить толерантный полигон. Он представляет собою график зависимости верхней и нижней толерантных границ от акклимационных значений фактора. Фактически толерантный полигон отражает не только зависимость толерантности от условий акклимации, но и зону потенциальной толерантности. Так как потенциальный толерантный диапазон представляет проекцию толерантного полигона на ось акклимационных значений фактора, или на ось тестовых значений фактора, его можно рассматривать как "линейный" образ толерантного полигона. Эти проекции равны.

Температурный толерантный полигон имеет, как правило, форму многоугольника. Сходную форму имеют полученные нами для парамеций соленостные толерантные полигоны (рис. 2-5).

2,5

0,5-.-,-,-.-—I

0 1 1,5 2

Рис. 2. Соленостный толерантный полигон Р.риМпит. По оси абсцисс - соленость акклимации, %о; по оси ординат - тестовая соленость,%о.

Рис. 3. Соленостный толерантный полигон Р. тиШт^сгопис1е-аЬит. По оси абсцисс - соленость акклимации, %о; по оси ординат - тестовая соленость, %о.

Форма полигона исследованных нами видов варьирует от четырехугольной у Р.риШпит, до пятиугольной у Р. Ъигзапа, Р. саийаЬит, Р. ]епп1п8з1, Р. тиШтЬсгописЬеаЫт, Р. перкпсИаШт, Р. са1Ыпв1, Р. \voodruffi, Р. dubosqui и шестиугольной у Р. роХусагуит, Р. рНтаигеИа, Р. ЫаигеИа, Р. вехаигеНа.

<-«-«-»-

0 1 1,5 2

Рис. 4. Соленостный толерантный полигон Р. рптаигеНа. По оси абсцисс - соленость акклимации, %о; по оси ординат -тестовая соленость, %о.

Рис. 5. Соленостный толерантный полигон P. woodruff i. По оси абсцисс - соленость акклимации, %о; по оси ординат • тестовая соленость, %о.

Наиболее важными характеристиками при описании полигонов мы считали: значение верхней толерантной границы при акклимации к пресной салатной среде (начальная ордината); существование нижней толерантной границы, отличающейся по значению от 0 (ноль соответствует пресной минерализации); ширину зоны потенциальной толерантности; площадь толерантного полигона; ширину зоны, в которой возрастает значение верхней толерантной границы при изменении солености акклимации.

P.putrinum и P. bursaria демонстрируют наименьшую площадь толерантных полигонов. Эти виды не могут приспосабливаться к солености более чем 2-3 %о. P. putrinum не может аккли-мироваться вообще. Для P. bursaria возможна акклимация в диапазоне от пресной воды до солености среды 0.5 %о.

P. caudatum, P. multimicronucleatum и P. jenningsi имеют большую площадь толерантных полигонов, чем P. putrinum и Р. bursaria. Соленостные толерантные границы клонов этих видов, акклимированных к пресной среде, имеют значения в пределах 3-4.5 %о. P. caudatum, P. multimicronucleatum и P. jenningsi могут быть акклимированы к солености 6.5-8.5 %о.

Виды комплекса P. aurelia, имеют большую площадь толерантных полигонов, чем вышеупомянутые 3 вида. Они могут акклимироваться к солености 12-15 %о. Полигон толерантности P. polycaryum имеет почти те же особенности, что полигоны видов комплекса P. aurelia.

Эвригалинные виды парамеций P. calkinsi, P. duboscqui, Р. nephridiatum и P. woodruffi имеют наибольшие площади толерантных полигонов. Соленостные толерантные границы клонов этих видов, акклимированных к пресной среде, значительно превышают величину критической солености (5-8 %о). Ширина зоны, в которой возрастает значение верхней толерантной границы, при изменении солености акклимации, почти та же, что и для других видов парамеций.

Для того чтобы выявить наиболее важные характеристики толерантных полигонов парамеций, мы описали 14 их признаков и провели анализ главных компонент. Согласно проведенному анализу первые два фактора исчерпывают более 93 % общей дисперсии (71.2 % - для первого фактора и 22.5 % - для второго). На основании распределения значений факторов 13 видов парамеций в пространстве первого и второго факторов можно

12 13

Рис. 6. Диаграмма сходства толерантных полигонов парамеций. 1 - P. nephridiatum, 2-P. duboscqui, 3 - P. woodruffi, А-P. calkinsi, 5 - P.putrinum, 6 - P. bursaria, 7 - P.primaurelia, 8 - P. biaurelia, 9 - P. sexaurelia, 10 - P. polycaryum, 11 - P. caudatum, 12 - P. multimicronucleatum, 13 - P. jenningsi.

выявить сходные полигоны. Всего этим методом нами выделены три группы. В первую входят такие виды, как Р. саийаШт, Р. тиШт1сгопис1еаЫт, Р. ¿епт^вЬ, Р. Ьигвапа и Р. риМпит, во вторую - Р.рптаигеЫа, Р. ЫаигеНа, Р. вехаигека и Р.ро1усагуит, в третью - Р. саШтЬ, Р. duЪoscqui, Р. перЬ^1аЫт и Р. woodruffi.

Для оценки сходства толерантных полигонов нами был предложен другой метод, основанный на выявлении доли общей площади двух сравниваемых полигонов. В матрице сходства толерантных полигонов, полученной для 13 видов парамеций взвешенным парно-групповым методом, выделяются три кластера аналогичных выделенным на основании метода главных компонент (рис. 6).

1~♦— морская год» -*—аральсая юда |

Рис. 7. Соленостный толерантный полигон Р. уеппгпдо! в воде

океанического и аральского состава солей. По оси абсцисс -

соленость акклимации, %о; по оси ординат - тестовая соленость,

%о.

Глава 7.

Влияние химического состава растворенных в воде солей на соленостные толерантные границы инфузорий

Для экспериментов были выбраны виды, изначально имеющие разную потенциальную соленостную толерантность. Она была наименьшей у Р. саийаЫт и наибольшей - у Р.рптаигеИа. Различия в потенциальной толерантности парамеций в аральской и морской воде были тем больше, чем выше было значение потенциальной толерантной границы для морской воды.

Соленостный толерантный полигон Р. саийсЛит в аральской воде имел большую площадь, чем в воде с океаническим составом

|—»— мзрская вода —*—аральская вода |

Рис. 8. Соленостный толерантный полигон Р. /еппшдо! в воде океанического и аральского состава солей. По оси абсцисс -соленость акклимации, %о С1-; по оси ординат- тестовая соленость, %о С1-.

солей (рис. 7, 8). Это относится и к остальным двум полигонам исследованных видов. Кроме того, несколько менялась форма полигонов.

Если заменить значения солености соответствующими им хлорностями, то различия в величине толерантных границ сглаживались: в меньшей степени - у Р. саийаШт и заметно - для двух других видов.

Мы проверили гипотезу о том, что замена величин верхней границы соленостной толерантности соответствующими им хлорностями сводит на нет различия между экспериментальными данными, полученными для морской и аральской воды.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что различия между величинами толерантных границ инфузорий в морской и аральской воде объясняются количественными различиями концентраций ионов (Р<0.01).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Методы, применяемые для оценки толерантных границ инфузорий, акклимированных к пресной и соленой среде, как методом сохранения клона, так и при помощи дробно-линейной регрессии зависимости времени 50 % -ной смертности от тестовой солености, дают достоверно не различающиеся результаты.

Оценки толерантных границ, полученные главным образом при помощи метода сохранения клона, были применены для построения толерантных полигонов.

Выделенные нами группы в значительной степени совпадают с установленными ранее другими методами: морфометрическим анализом и анализом последовательности гена малой субъединицы рибосомальной РНК.

С учетом последней классификации рода Paramecium (Fokin et al., 2004), выделенные на основании анализа соленостных толерантных полигонов и потенциальных соленостных толерантных диапазонов группы в значительной степени совпадают с подродами Paramecium и Cypriostoma.

Наши данные показали сходство с данными, полученными другими методами, и подтверждают возможность использования соленостных толерантных полигонов в исследованиях по систематике водных организмов, по крайней мере, для таксонов низшего ранга.

С учетом того, что в основании филогенетического древа располагаются пресноводные виды, а также того, что верхние толерантные границы меняются почти исключительно в области солености акклимации от пресной воды до величины 5-6 %о, можно заключить, что род Paramecium - пресноводного происхождения.

Результаты, полученные нами, позволяют видеть некоторые экологические группировки видов, способных существовать в пресных водах. Пути возникновения экологических групп, выделенных по отношению к солености среды, позволяют проследить данные по филогенетическим позициям видов Paramecium.

Таких экологических групп может быть не менее 4. Первая группа включает виды, способные существовать в пределах от пресной воды до солености 6-8 %о. Вторая группа, которую мы назвали "истинно пресноводными видами", происходит от вышеупомянутой группы. Эти виды способны существовать при соленостях не превышающих 2.5-3 %о, и, соответственно, могут регулировать внутреннюю осмолярность в этих пределах. Третью группу формируют многочисленные виды комплекса P. aurelia и

Р. ро1усагуит. Эти виды могут существовать в более соленой воде - до 12-16 %о . Левая часть их толерантных полигонов, в отличие от правой приблизительно соответствует толерантным полигонам центральной группы. Эти виды в соленостях выше 8-9 %о фактически могут только выживать, так как темп деления сильно уменьшается. Мы назвали эту группу "метапресноводной". Последняя (четвертая) группа включает формы, которые можно назвать "истинно эвригалинными" (термин вводится нами). Они могут выдерживать прямой перенос от верхней потенциальной соле-ностной границы непосредственно в пресную воду. Верхняя граница потенциальной соленостной толерантности приблизительно равна океанической солености.

У парамеций в воде с аральским составом солей происходит смещение соленостных толерантных диапазонов в сторону их увеличения. Так же, как это было показано ранее другими исследователями, для многоклеточных животных, наблюдается совпадение соленостных толерантных диапазонов по хлорности.

Обитание парамеций в условиях повышенной солености для них можно оценить как неблагоприятное, что маркируется повышенным (по сравнению с пресной средой) содержанием белка теплового шока. При переносе в иную соленость уже накопленный в клетке БТШ70 расходуется, и одновременно идет синтез нового белка.

ВЫВОДЫ

1. Соленостные толерантные границы для инфузорий можно оценивать двумя методами: а) оценка верхней пороговой солености, основанная на анализе кривых "соленость-медианное летальное время" и б) метод сохранения клона, основанный на способности клеточной популяции сохранять жизнеспособность после изменения солености среды. Оба метода приводят к идентичным результатам и могут быть использованы для получения данных, необходимых для построения толерантного полигона.

2. На основании анализа потенциальной соленостной толерантности и видовых соленостных толерантных полигонов выделены 4 группы видов:

а) стеногалинные пресноводные: Р.риШпитп и Р. Ьигэапа;

б) пресноводные: Р. саийаЫт, Р. у'еттш^, Р. тиШтюгопис-1еаШт;

в) метапресноводные: виды группы Р. аигеНа и Р.ро1усагуит;

г) эвригалинные: P. duboscqui, P. nephridiatum, P. woodruffi и P. calkinsi.

3. Сопоставление имеющихся в литературе представлений о филогении рода Paramecium с полученными в настоящей работе данными по соленостным реакциям парамеций позволяет заключить, что этот род пресноводного происхождения.

4. Соленостные толерантные границы парамеций, адаптированных к воде с аральским составом солей, отличаются от определенных для тех же видов в воде с океаническим составом солей.

5. Уровень содержания белков теплового шока семейства 70 кДа в клетках пресноводных парамеций увеличивается при их адаптации к повышению солености среды.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Смурое А.О., Фокин С.И. Адаптационные возможности различных парамеций к фактору солености // Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря. Материалы VI Международной конференции. -Кандалакша, 1995. С. 93.

2. Смурое А.О., Фокин С.И. Новая методика определения потенциальных толерантных соленостных границ у простейших // Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря. Материалы VII Международной конференции. - Архангельск, 1998. С. 194-196.

3. Фокин С.И., Смурое А.О. Влияние заражения Paramecium caudatum макронуклеарным симбионтом Holospora obtusa на устойчивость к действию солености // Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря. Материалы VII Международной конференции. - Архангельск, 1998. С. 134-136.

4. Смурое А.О., Фокин С.И. Роль макронуклеарных симбионтов парамеций при адаптации клеток к неблагоприятной солености/ / Отчетная научная сессия по итогам работ 1997 г. Тезисы докладов. - СПб., 1998. С. 39.

5. Смурое А.О., Плотников И.С., Фокин С.И. Использование данных по смертности парамеций для оценки их толерантных диапазонов // Отчетная научная сессия по итогам работ 1998 г. Тезисы докладов. - СПб., 1999. С. 46-47.

6. Smurov А.О., Fokin S.I. Resistance of Paramecium caudatum infected with endonuclear bacteria Holospora against salinity impact // Proceed. Zool. Inst. Russ. Acad. Sei. 1998. Vol. 276. P. 175-178.

7. Smurov A.O., Fokin S.I. Resistance of various Paramecium species (Ciliophora, Peniculina) to salinity of environment // Protistology, 1999. V. 1, № 1. P. 53-63.

8. Smurov A.O., Plotnikov I.S., Fokin S.I. Using the data of Paramecium mortality for estimation of their tolerant ranges // Proceed. Zool. Inst. Russ. Acad. Sci. 1999. Vol. 281. P. 135-140.

9. Smurov A.O. On the methods for estimation on salinity tolerance of ciliates // Protistology, 2000. Vol. 1. № 3. P. 123-131.

10. Смурое A.O., Фокин С.И. Использование данных по со-леностной толерантности парамеций для таксономических исследований // Вестн. СПбГУ. 2001. Вып. 4, № 27, сер. 3. С. 16-19.

11. Смурое А.О. Фокин С.И. Соленостная толерантность Paramecium (Ciliophora, Peniclia) // Филогенетический аспект. Отчетная научная сессия по итогам работ 2000 г. 2001. - СПб., ЗИН РАН, С. 43-44.

12. Фокин С.И., Смурое А.О. Способы использования соленост-ных толерантных полигонов в исследованиях по систематике водных организмов // Материалы VIII региональной научно-практической конференции "Проблемы изучения, рационального использования и охраны природных ресурсов Белого моря". 2001. С. 53-54.

13. Fokin S.I., Smurov А.О. Salinity tolerance of Paramecium (Ciliophora, Peniculia): phylogenetical aspect // Proceed. Zool. Inst. Russ. Acad. Sci. 2001. Vol. 289. P. 83-88.

14. Смурое А.О. Планктонные инфузории солоноватоводных карстовых озер // Уникальные экосистемы солоноватоводных карстовых озер Среднего Поволжья (ред. А.Ф. Алимов, Н.М. Мингазова). - Казань: Издательство Казанского ун-та. 2001. С. 141148.

15. Smurov А.О., Fokin S.I. Use of salinity tolerance data for investigation of systematic of Paramecium (Ciliophora, Peniculia) // Protistology, 2001. Vol. 2. № 2. P. 130-138.

16. Plekhanov A.Yu„ Smurov A.O., Ivanova L.O., Goodkov A.V. Change in Hsp70 level in freshwater ciliates and amoebae during adaptation to environmental salinity change // Proceed. Zool. Inst. Russ. Acad. Sci. 2005. Vol. 308. P. 63-70.

17. Плеханов А.Ю., Смурое A.O., Подлипаееа Ю.И., Иванова JI.О., Гудков А.В. Белок теплового шока пресноводных простейших и его участие в адаптации к изменению солености среды обитания // Цитология. 2006. Т. 8. Вып. 6. С. 530-534.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность своим руководителям, д.б.н. С.И. Фокину и д.б.н. Н.В. Аладину - за руководство и консультации по теме работы; своим коллегам из лаборатории солонова-товодной гидробиологии ЗИН РАН и лаборатории зоологии беспозвоночных ВНИИ СПбГУ за помощь в работе над диссертацией, сотрудникам ББС ЗИН РАН им. O.A. Скарлато за неформальное обсуждение проблем теории адаптаций. Выражаю особую благодарность проф., д.б.н. В.В. Хлебовичу и к.б.н. A.B. Гудкову за ценные советы.

Подписано к печати 20.12.2006 Формат 60x84 1/16 Печать ризограф. Бумага офсетная. Тираж 100 экз. Объем 1,5 п.л.

Зоологический институт РАН 199034, СПб., Университетская наб., 1.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Смуров, Алексей Олегович

Оглавление

Введение

Глава 1. Материал и методика

Глава 2. Систематика и филогения парамеций

Глава 3. Физиологические механизмы и органеллы, 23 обеспечивающие адаптацию инфузорий к солености среды

3.1. Введение

3.2. Сократительная вакуоль

3.3. Осмотические отношения между клеткой инфузории и внешней средой

3.4. Формирование поверхностных пузырьков

3.5. Регуляция концентрации свободных аминокислот

3.6. Формирование пищеварительных вакуолей

Глава 4. Изменение уровня БТШ70 при адаптации инфузорий 36 к солености среды

Глава 5. Соленостная резистентность и соленостные толерантные 39 границы парамеций

5.1. Понятия резистентности и толерантности

5.1.1. Резистентность

5.1.2. Толерантные границы

5.2. Устойчивость парамеций к действию солености

Глава 6. Соленостные толерантные полигоны и соленостные 63 потенциальные толерантные диапазоны парамеций

5.1. Общая характеристика толерантного полигона

5.2. Обзор методов постановки экспериментов по определению соленостного толерантного полигона и соленостного потенциального толерантного диапазона

5.3. Литературные данные по потенциальной соленостной толерантности парамеций

5.4. Соленостные толерантные полигоны парамеций

Глава 7. Влияние химического состава растворенных в воде 91 солей на соленостные толерантные границы инфузорий Заключение 103 Выводы 111 Список литературы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Соленостные адаптации инфузорий рода Paramecium (Ciliophora, Peniculia)"

Проблема отношений между индивидуумами, популяциями и средой их обитания является одной из основных проблем биологии. Многочисленными исследованиями было показано, что реальные отношения очень сложны и для их описания наиболее подходят методы многомерного математического анализа, которые, тем не менее, довольно сложно реализовать на практике. Поэтому, к анализу этих отношений наиболее часто подходят двумя главными способами. Во-первых, расчленением сложного явления и исследованием выявленных компонентов одномерными методами. Во-вторых, созданием качественного или полуколичественного описания многомерных аспектов проблемы. Различия между этими подходами аналогичны различиям между лабораторными и полевыми методами исследований биологических проблем (Alderdice, 1972).

Лабораторные исследования традиционно имеют дело с упрощенными, по сравнению с естественными для многих видов, условиями среды. Исключение из плана эксперимента факторов, которые могут быть лимитирующими в природных условиях, позволяет выявить потенциал изучаемых биологических процессов.

Для экспериментальных исследований исключительное значение имеет феномен акклимации, который заключается в реагировании организма на изменения только одного какого-либо фактора среды. Очевидно, что исследование акклимации можно провести в «чистом» виде только в лабораторных условиях.

Понятие об акклимации возникло в результате исследований экологии водных животных, а в последствие было применено и для наземных животных. В результате многочисленных работ по изучению границ жизнедеятельности организмов было выяснено, что пределы выживания, размножения или функционирования каких-либо их внутренних систем зависят от значений фактора, при которых содержались животные до опыта.

В настоящее время явление акклимации, которое первоначально рассматривалось как чисто лабораторный феномен, подтверждено многочисленными исследованиями и для естественных популяций организмов, относящихся ко многим систематическим группам (Хлебович, 1981). Наибольшее количество работ к настоящему времени посвящено изучению температурных акклимации организмов. Акклимации к другим факторам среды, в том числе и к изменению солености, изучены менее полно.

Несмотря на значительные методические сложности исследования адаптаций одноклеточных организмов, протисты, как экспериментальные объекты обладают, по сравнению с многоклеточными гидробионтами, рядом достоинств. А именно, возможностью вырастить в короткий срок большое количество экспериментальных объектов и тем, что можно работать с генетически идентичными организмами (клонами). Кроме того, особенностью организации простейших является то, что они представляют собой одновременно и клетку, и полноценный организм. Следовательно, реакции простейших на воздействие внешней среды можно рассматривать как более простую модель, по сравнению с многоклеточными организмами.

Большинство экспериментальных исследований отношений инфузорий к солености среды выполнено на парамециях - представители рода Tetrahymena в этом отношении исследованы значительно хуже. Важно отметить также, что все виды рода Paramecium способны существовать в пресноводных биотопах. Кроме того, парамеции регулярно встречаются в олигогалинных участках эстуариев и иногда одни и те же виды были обнаружены одновременно как в полигалинных, так и в пресных водах. Среди многочисленных видов Paramecium только четыре вида, а именно Р. woodruff1, P. calkinsi, P. nephridiatum и P. duboscqui могут считаться эвригалинными. Эти виды часто встречаются на побережьях северных морей (Фокин, Сабанеева, 1990; Fokin et al., 1995, 1999а, 19996), хотя в научной литературе они упоминаются как редкие (Wichtermann, 1986). Соответственно, можно априорно предположить разнообразие реакций видов рода Paramecium в ответ на воздействие солености среды.

В недавнее время впервые был проведен многоуровневый анализ данных, полученных для большинства из известных видов парамеций, по единой схеме с использованием максимально стандартизированных оценок, позволивший выявить филогенетические связи и разработать систематику рода Paramecium (Фокин, 2001, 2002; Fokin et al., 2004). Такое исследование оказалось возможным благодаря наличию в нашем распоряжении уникальной коллекции живых культур парамеций, включающей почти все валидные морфологические виды. Соответственно, появилась возможность провести исследование соленостных реакций нескольких видов рода Paramecium по стандартным схемам. Полученные в результате экспериментов данные с учетом уже имеющихся сведений о филогенетическом положении видов могут дать возможность увидеть, как менялись соленостные реакции парамеций в процессе эволюции. Так как имеющаяся в настоящее время в научной литературе информация свидетельствует о разнообразии соленостных реакций этих простейших, эволюционные изменения обязательно должны существовать. В свою очередь, анализ полученных результатов позволит обосновать новую методологию анализа данных по экологическим реакциям видов для использования их в филогенетических и систематических построениях.

В проведении такого исследования особое значение приобретают методы оценки изменения соленостных реакций. Накопленный к настоящему времени материал в основном касается организменных и суборганизменных адаптации. Большинство работ было выполнено в первой половине 20 столетия на примитивном, по современным понятиям, методическом уровне. Публикации же последних лет посвящены, главным образом, механизмам осмотической адаптации. Многочисленные оценки отношения к солености различных видов инфузорий основаны на данных по встречаемости видов, которые отражают не только отношение вида к фактору среды, но и опосредованы многими биотическими отношениями.

Феномен соленостных адаптаций можно изучать на разных уровнях - от молекулярного до уровня экологии популяций. Действительно, в литературе имеются факты, показывающие существование феномена адаптации к солености у Paramecium как на указанных, так и на промежуточных уровнях. Поэтому ограничение поля исследований представлялось необходимым. В процессе работы над диссертацией главное внимание было уделено изучению соленостной толерантности и резистентности различных видов инфузорий рода Paramecium.

Очевидно, что первым шагом в подобном исследовании должна быть ревизия существующих и разработка оригинальных методических приемов определения резистентности и толерантности у парамеций.

Использование экологических характеристик видов в систематических целях имеет некоторые трудности. Во-первых, они должны быть довольно устойчивы, т.е. мало изменяться для разных организмов одного вида. Во-вторых, необходима оценка риска того, что группировка, основанная на экологических особенностях, приведет к выделению экологических групп, не имеющих систематического значения. В данной работе мы использовали два взаимосвязанных подхода, которые позволили, как нам кажется, успешно сравнивать экологические характеристики видов: толерантный полигон и потенциальную толерантность. Эти характеристики остаются практически неизменными для каждого вида, если при их оценке используется вода с постоянными соотношениями ионов. Однако в мире существует много соленых водоемов с иными, чем океане пропорциями ионов.

Исследователями соленых континентальных водоемов давно было замечено, что при одинаковой с морской водой соленостью, в континентальных соленых озерах многие виды имеют более широкие соленостные толерантные диапазоны, чем в море (Хлебович, 1974; Аладин, 1995; Williams, 1998). Считается, что за это ответственны ионные отношения, главными из которых являются отношения хлора и натрия к общему количеству растворенных солей, а также отношения главных ионов к хлору (Карпевич, 1975; Williams, 1998). Наиболее исследованными в этом отношении оказались многоклеточные гидробионты, обитающие в крупных континентальных водоемах Аральском и Каспийском морях. В солидном списке тестированных видов, однако, отсутствовали одноклеточные организмы. Поэтому мы решили изучить также влияние воды с иными ионными пропорциями (аральской) на толерантные полигоны и потенциальную толерантность парамеций. Полученные результаты помогут установить особенности изменения соленостной толерантности организмов, обитающих в воде океанического ионного состава, при их адаптации (вселении) в Аральское море, причем не только для инфузорий, но и для многоклеточных гидробионтов.

Известно, что клетки всех живых организмов в ответ на действие стрессорных факторов отвечают усилением синтеза так называемых белков теплового шока (БТШ) (Feder, Hofmann, 1999). Основная функция белков теплового шока - цитопротекторная. Белки семейства БТШ70 широко представлены в простейших организмах. Имеется множество литературных данных, касающихся исследований белков этого семейства в паразитических простейших (Triana et al., 2000; Maslov et al., 2001; Lloyd et al., 2002; Varadharajan et al., 2004).

Значительно меньше внимания уделяется БТШ70 свободноживущих простейших. Тем не менее, существуют исследования, посвященные БТШ70 свободноживущих амёб (Podlipaeva, 2001), жгутиковых (Drzymalla et al., 1996) и инфузорий (McMullin, Hallberg, 1987, Fink, Zeuthen, 1980, Budin, Philippe, 1998).

Так как белки теплового шока являются универсальными цитопротекторами, представляется логичным предполагать их участие, и в частности, участие БТШ70, в адаптации к различным иным абиотическим факторам, а не только к повышению температуры. Чрезвычайный интерес в этой связи представляет приспособление свободноживущих простейших к изменению солёности водной среды, в которой они обитают.

Реакцию простейших на стресс можно рассматривать как модель более простую, по сравнению с многоклеточными организмами не опосредованную спецификой функционирования клеток различных тканей. То, что уровень белков теплового шока в клетках разных тканей одного организма, подвергнутого соленостному стрессу, может достоверно различаться хорошо известно (Deane, Norman, 2004).

В данной работе представлена первая попытка исследования изменения уровня белков теплового шока пресноводных инфузорий в ответ на изменение солености среды.

Основной целью настоящей работы была проверка гипотезы о соответствии между филогенетической позицией конкретных видов рода Paramecium и их соленостными реакциями.

В соответствие с этим были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методы оценки соленостной толерантности у инфузорий.

Заключение Диссертация по теме "Протистология", Смуров, Алексей Олегович

выводы

1. Соленостные толерантные границы для инфузорий можно оценивать двумя методами: а) оценка верхней пороговой солености, основанная на анализе кривых «соленость-медианное летальное время» и б) метод сохранения клона, основанный на способности клеточной популяции сохранять жизнеспособность после изменения солености среды. Оба метода приводят к идентичным результатам и могут быть использованы для получения данных, необходимых для построения толерантного полигона.

2. На основании анализа потенциальной соленостной толерантности и видовых соленостных толерантных полигонов выделены 4 группы видов: а) стеногалинные пресноводные: P. putrinum и P. bursaria; б) пресноводные: P. caudatum, P.jenningsi, P. multimicronucleatum', в) метапресноводные: виды группы P. aurelia и P. polycaryum', г) эвригалинные: P. duboscqui, P. nephridiatum, P. woodruffi и P. calkinsi.

Заключение

Полученные нами данные по резистентности различных видов парамеций, акклимированных к пресной среде доказывают недостаточность модели, описывающей 50 % смертность в зависимости от тестовых значений фактора в виде кривой, состоящей из двух отрезков, расположенных под некоторым углом.

Модели, применяемые для оценки толерантных границ, инфузорий, акклимированных к пресной и соленой среде, как методом сохранения клона, так и при помощи дробно-линейной регрессии зависимости время 50 % смертности от тестовой солености выглядят более обоснованными. Применение обоих методов дает достоверно не различающиеся результаты.

Оценки толерантных границ, полученные с их использованием обеих моделей, были применены нами для построения толерантных полигонов (Глава 6).

Полученные в процессе выполнения настоящей работы данные позволяют ответить на вопрос о видовой специфичности оценок соленостной потенциальной толерантности и соленостных толерантных полигонов трех видов парамеций. Три клона редкого вида P. polycaryum, выделенные из географически удаленных регионов демонстрируют поразительное совпадение этих оценок (Рис. 27), напротив - толерантные полигоны, полученные для разных клонов P. jenningsi (Рис. 23, 36) и P. nephridiatum (Рис. 29) имеют явные различия. Вопрос о видоспецифичности толерантных полигонов водных организмов рассматривался ранее. Согласно имеющимся в литературе данным температурные толерантные полигоны могут быть как видоспецифичными так и нет (Prosser, 1973). Таким образом, в отношении видоспецифичности соленостные толерантные полигоны имеют те же особенности что и температурные.

Анализ сходства и различия соленостных толерантных полигонов с использованием метода главных компонент привел нас к выделению трех групп полигонов, а в случае использования впервые предложенного нами попарного сравнения толерантных полигонов и потенциальных толерантных диапазонов, к выделению четырех кластеров.

Различие между двумя методами классификации толерантных полигонов в том, что при использовании метода главных компонент в одну группу оказались объединены виды парамеций, способные выживать до 6-8.5 %о (Р. jenningsi, P. caudatum, P. multimicronucleatum) и виды способные выживать только до 3.5 %о (P. bursaria) и до 2. 375 %о (P. putrinum).

Выделенные нами группы во многом совпадают с выделенными ранее другими методами: морфометрическим анализом и анализом последовательности гена 16 S РНК.

С учетом последней классификации рода Paramecium (Fokin et al., 2004) выделенные на основании анализа соленостных толерантных полигонов и потенциальных соленостных толерантных диапазонов группы в значительной степени совпадают с подродами Paramecium и Cypriostomum.

Так наши данные показали сходство с данными, полученными другими методами и подтверждают возможность использования соленостных толерантных полигонов в исследованиях по систематике водных организмов по крайней мере для таксонов низшего ранга.

С учетом того, что в основании филогенетического древа располагаются пресноводные виды, а также того, что верхние толерантные границы парамеций меняются исключительно в области до 10 %о можно заключить, что род Paramecium пресноводного происхождения.

Рядом работ было показано, что цитоплазма инфузорий является гиперосмотичной по отношению к внешней среде. Для многоклеточных пресноводных организмов гиперосмотичность подтверждена многими исследователями, и была отражена в правиле Бидла (Beadle, 1959; Хлебович, 1974). Пресноводные инфузории, как и некоторые виды многоклеточных организмов, способны к регуляции внутреннего ионного состава, вероятно, в тех же пределах, что и последние, т.е. до 5 %о. Морские виды инфузорий, очевидно, являются гиперосмотиками в более широких пределах.

Толерантная граница в 5 %о для пресноводных видов инфузорий и предел способности к осмотической регуляции явно связаны друг с другом. При солености выше 5 %о, пресноводные виды инфузорий в результате акклимации становятся пойкилоосмотиками или приобретают способность к осморегуляции в узких пределах - критическая соленость для них непреодолима. Критерием разграничения между пресноводными и морскими формами для большинства видов инфузорий может являться способность выживать в среде соленостью 9-10 %о, после их предварительной акклимации к пресной салатной среде в течение 3-5 недель, если культура получена из из осолоненных биотопов. В случае, если отбор клеток какого-либо вида произведен из явно пресных водоемов, опыт можно проводить непосредственно, считая вид акклимированным к пресной среде.

Важной особенностью эвригалинных инфузорий является способность к расширению толерантных границ по мере увеличения солености в ряду от пресной среды до солоноватоводной и, возможно, морской. Эта способность позволяет с большей легкостью приспосабливаться в местах с быстро меняющемся соленостным режимом клеткам, акклимированным к большей солености. Соответственно, можно предположить, что такие биотопы оккупируются преимущественно морскими популяциями эвригалинных видов инфузорий.

Все виды подрода Cypreostomum, за исключением P.polycaryum, были найдены на литорали Белого моря (Фокин, Сабанеева, 1990; Fokin et al., 1995). Натурные исследования беломорских популяций этих трех видов инфузорий (литораль островов Керетского архипелага, 1983-1994) позволили установить устойчивость их существования в течение ряда лет при возможных перепадах солености от 4 до 45 %о ((Фокин, Сабанеева, 1990). Данные формы доминировали в большинстве изученных биотопов в пределах указанного соленостного градиента при вариациях видового состава инфузорий других систематических групп.

Проведенные нами эксперименты и натурные наблюдения показали, что эти виды обладают способностью расширять толерантные границы при увеличении солености акклимации. Следовательно, изучение соленостных адаптаций парамеций может помочь в понимании биологических процессов, происходящих в местах смешения пресных и морских вод и в биотопах с быстро меняющимся соленостным режимом.

Современными исследователями показано существование групп, хорошо различающихся по потенциальной соленостной толерантности внутри типов, классов и даже иногда семейств (Аладин, 1996). Интересно, что градация толерантности этих групп практически одна и та же в различных типах многоклеточных организмов. Поэтому повышение таксономического ранга при использовании нашей методики, апробированной для парамеций, скорее всего приведет к выделению групп, которые не имеют систематического статуса, но будут отражать главные стадии эволюции соленостной адаптации организмов.

Результаты, полученные нами, позволяют выделить некоторые экологические группировки видов способных существовать в пресных водах. В случае если эти группы те же самые, что и для многоклеточных гидробионтов, тогда комбинированный анализ филогенетических отношений в пределах Paramecium и экологических групп видов в отношении солености в пределах рода приведет к пониманию путей их возникновения.

Таких экологических групп не менее 4. Центральная группа включает виды способные существовать в пределах от пресной воды до приблизительно 6-8 %о. Эту группу можно назвать истинно пресноводными видами (стеногалинные пресноводные виды согласно Зенкевичу (Зенкевич, 1963) происходят от вышеупомянутой группы. Эти виды способны существовать при соленостях не превышающих 2.5 - 3 %о, и соответственно, могут регулировать внутреннюю осмолярность в этих пределах. Аналогичные экологические группы существуют у моллюсков.

Кроме того, они способны длительное, но ограниченное время (приблизительно 2-2.5 недели) существовать в солености 3-3.5 %о. В пределах потенциальной соленостной толерантности возможен их прямой перенос без предварительной акклимации. Среди инфузорий возможно существует группа, включающая кроме 2 видов парамеций (P. putrinum и P. bursaria) большое количество обычных форм, например виды Spirostomum и Loxodes. Эти формы существуют в водоемах, которые имеют высокий уровень общего минерализации (2-3 г/л) в которых абсолютное содержание ионов Na+, и СГ является незначительным. Эта особенность связана с регуляцией внутренней концентрации кальция.

Наиболее интересную группу формируют многочисленные виды комплекса P. aurelia и P. polycaryum. Эти виды могут существовать в более соленой воде - до to 12 -16 %о. Левая часть их толерантных полигонов приблизительно соответствует толерантным полигонам центральной группы, правую часть следует считать новообразованием. Особых преимуществ она (правая часть) не дает и позволяет фактически только выживать в соленостях выше 8-9 %о, так как темп деления сильно уменьшается. Аналогичная экологическая группа, которая способна существовать в пределах от пресной воды до 12 -18 %о была найдена у остракод (Аладин, 1996). Мы предлагаем называть организмы, способные существовать в пределах от пресной воды до воды соленостью 12 -18 %о метапресноводными видами.

Последняя группа включает формы, которые можно назвать истинно эвригалинными (термин вводится нами). Они могут переносить прямой перенос от верхней потенциальной соленостной границы непосредственно в пресную воду. Верхняя граница потенциальной соленостной толерантности почти равна океанической солености.

Концепция экологических групп имеет важное значение для создания классификации отношения эукариот к солености.

Согласно общепринятым воззрениям в пресных водах могут существовать как пресноводные, так и эвригалинные и солоноватоводные организмы. Сейчас всеми исследователями признается что, способность поддерживать общую осмотическую концентрацию внутри организма на более высоком уровне, чем во внешней среде является необходимым условием для жизни в пресной воде или в воде с низкой минерализацией (Аладин, 1996).

Пресноводные инфузории, согласно Аксу и Аксу (Ах, Ах, 1960), разделяются на три группы по их отношению к фактору солености. Но после нашей проверки его экспериментальных данных, выясняется, что их только две. Первую из них можно назвать ограниченными пресноводными регуляторами. Они способны регулировать внутриклеточную среду в пределах от пресной воды до 1.5-2%о. Пределы их существования в солоноватых водах ограничены этими же значениями. Эти виды способны длительное, но ограниченное (до 2-2.5 недель) время существовать и в несколько более высоких соленостях (3-3.5%о). В пределах всей потенциальной соленостной толерантности возможен их прямой перенос без предварительной акклимации. Из исследованных нами видов, которые также встречены в соленых озерах Татарстана и Марий Эл, к ним относятся Spirostomum ambiquum, S. teres, P. putrinum.

Многие моря и континентальные водоемы имеют варьирующий соленостный режим. Сильные вариации солености в этом случае становятся лимитирующим фактором, который ограничивает фауны разного происхождения. В настоящее время изучение этого феномена развивается в трех направлениях: экспериментальное определение ширины соленостных толерантных диапазонов, изучение типов осмотических отношений внутренней среды водных организмов с соленостью среды, анализу информации о соленостных границах распространения организмов в природе (Аладин, 1988). Все три аспекта достаточно хорошо изучены только у небольшого количества представителей различных типов и классов водных животных. Однако объем информации, полученной исследователями для каждого направления достаточно велик.

Проблема соленостных границ распространения гидробионтов наиболее хорошо изучена. Наилучшими объектами для реализации таких исследований являются водоемы, где соленость варьирует в широких пределах. Классическим объектом для исследований такого рода является Балтийское море, которое имеет плавный соленостный градиент от пресной воды до почти океанической солености. Первыми, кто решил эту проблему для данного водоема были Ремане (Remane, 1934; 1940) и Валикаганс (Valikangas, 1926; 1933). Логика исследований в этом направлении с необходимостью приводит к попытке классификации солоноватоводной фауны, оккупирующей эти водоемы, или к классификации по солености воды, в которой она существует (Хлебович, 1974).

Попытки классификации предпринимались позднее (Dahl, 1956; Segestrale, 1959), в том числе и в недавнем прошлом (Williams, 1972, 1991; Williams et. al., 1990). Необходимо отметить, что некоторые авторы предлагали не одну систему (более 1 системы), что вероятно связано с неудовлетворительностью всех систем. Фактически, авторы создавали системы для одного какого-либо водоема или группы водоемов.

Очевидно, что различия между системами объясняются взаимодействием фактора солености с другими факторами, в том числе и биотическими. Значение взаимодействия факторов для этого случая хорошо известно (Филиппов, 1995). Необходимым логическим дополнением этих систем может быть знание потенциальных соленостных диапазонов, которые выражают воздействие солености "в чистом виде". Как уже было показано (нами), анализ потенциальных толерантных диапазонов видов приводит к выделению экологических групп. Если проанализировать потенциальные толерантные диапазоны видов в связи с их осмотическими отношениями со средой то возможно создать классификацию отношения организмов к солености среды. Эта классификация объединит результаты полученные исследователями трех направлений в единое целое.

Исследования различий и сходства адаптаций к воде разного ионного состава в первую очередь показали важность различия понятий толерантного диапазона и потенциального толерантного диапазона. При адаптации организмов одного вида к воде различного ионного состава они меняются неодинаково.

У парамеций в воде с аральским составом солей происходит смещение соленостных толерантных диапазонов в сторону их увеличения. Также как это было показано ранее другими исследователями, для многоклеточных животных наблюдается совпадение соленостных толерантных диапазонов по хлорности. Различие между толерантными диапазонами в водах разного ионного состава (морской и аральской) носит количественный характер. По-видимому, давнее высказывание Леба (1926) о сбалансированности ионного состава морской воды можно распространить и на континентальные соленые воды, в случае, если обитающая в них фауна достаточно разнообразна.

Обитание в среде с соленостью 2 %о. для пресноводных простейших можно рассматривать как неблагоприятное, что маркируется повышенным содержанием белка теплового шока у простейших. Акклимированные к соленой среде инфузории при стрессовом воздействии преимущественно расходуют накопленный БТШ70. Изначально высоким содержанием БТШ70 отличаются не только обитающие в соленой, но и в пресной среде инфузории. Повышенное в норме содержание БТШ70 было также обнаружено и у пресноводных амеб. Поэтому можно предположить, что пресноводные простейшие, по-видимому, преадаптированы к изменению факторов среды.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Смуров, Алексей Олегович, Санкт-Петербург

1. Аладин Н. В. О смещении барьера критической солености в Каспийском и Аральском морях на примере жаброногих и ракушковых ракообразных // Зоол. журн., 1983. Т. 62, Вып. 5. С. 689-694.

2. Аладин Н. В. Прогнозирование качественного и количественного состава фауны ракушковых и жаброногих ракообразных в морских и континентальных водах с меняющейся соленостью // Тр. Зоол. ин-та АН СССР, 1986. Т. 141. С. 98-113.

3. Аладин Н. В. Концепция относительности и множественности зон барьерных соленостей // Журн. общ. биол., 1988. Т. 49, Вып. 6. С. 825-833.

4. Аладин Н.В. Критический характер биологического действия каспийской воды соленостью 7-11 %о и аральской воды соленостью 8-13 %о // Тр. Зоол. ин-та АН СССР, 1989. Т. 196. С. 12-21.

5. Аладин Н. В. Соленостные адаптации Ostracoda и Branchiopoda. Л., Наука, 1996. 206 с.

6. Александров В. Я. О связи между теплоустойчивостью протоплазмы и температурными условиями существования // ДАН СССР, 1952. Т. 83. Вып. 1.С. 149-152.

7. Александров В. Я. Проблема авторегуляции в цитологии. III. Реактивное повышение устойчивости клеток к действию повреждающих агентов (адаптация) // Цитология, 1965. Т. 7. Вып. 4. С. 447-466.

8. Александров В. Я. Клетки, макромолекулы и температура. Л., Наука, 1975. 332 с.

9. Беклемишев В.Н. Предварительные исследования по вопросу выживания Entomostraca в растворах солей. I. // Изв. НИИ и Биол. Ст. при Пермском Гос. Унив. 1923. Т. 2. Вып. 4. С. 152-164.

10. Беклемишев В.Н. Предварительные исследования по вопросу выживания Entomostraca в растворах солей. 11. Способы летального действия солей112

11. Изв. НИИ и Биол. Ст. при Пермском Гос. Унив. 1924. Т. 3. Вып. 3. С. 95-107.

12. Беклемишев В. Н., Любищев А. А. Формулы для нахождения констант в уравнениях ядовитости // Изв. НИИ и Биол. Ст. при Пермском Гос. Унив. 1924. Т. 3. Вып. 2. С. 41-52.

13. Бекмурзаев Б. Распространение, выживание и дыхание некоторых беспозвоночных Аральского моря найденных в воде разной солености // Труды ВНИИРО, 1971а. Т. 26. Вып 3. С. 185-191.

14. Бекмурзаев Б. Донные беспозвоночные прибрежной части юга Арала и влияние на них среды обитания. Автореф. кандидатской диссерт. Алма-Ата, 19716.21 с.

15. Бергер В. Я. Адаптации морских моллюсков к изменениям солености среды // Исследование фауны морей, 1986. Т. 32. Вып. 40. Л., Наука. 214 с.

16. Гаузе Г. Ф. Экология и некоторые проблемы происхождения видов // Экология и эволюционная теория. Л., Наука. 1984. С. 3-105.

17. Дорошев С.И. Солеустойчивость некоторых видов рыб, рекомендованных для вселения в Азовское море // Труды ВНИРО, 1964. Т. 55. Вып. 2, С. 97-109.

18. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. М., 1991. 207 с.

19. Жирмунский А. В. Теплоустойчивость актиний и их мерцательного эпителия в естественных условиях и при экспериментальном изменении температуры среды // Цитология, 1959. Т. 2. Вып. 3. С. 270-276.

20. Жирмунский А.В. Реакция клеток мерцательного эпителия мидий и актиний на повышение солености. // Журн. Общ. Биол., 1962. Т. 23. Вып. 2. С. 119-126.

21. Жирмунский А. В. Сравнительное исследование теплоустойчивости клеток морских беспозвоночных в связи с их географическим распространением и экологией // Клетка и температура среды. М., JI., Наука. 1964. С. 142-150.

22. Жирмунский А.В. Сравнительное изучение теплоустойчивости моллюсков Белого моря в отношении вертикального распределения видов и истории формирования фауны // Журн. Общ. Биол., Т. 30. С. 686-704.

23. Зенкевич Л. А. Биология морей СССР. М., Изд. АН ССР. 1963. 739 с.

24. Карпевич А. Ф. Предпосылки к акклиматизации новых форм в Аральском море//Доклады ВНИРО, 1947. Вып. 6. С. 13-17.

25. Карпевич А.Ф. Отношение двустворчатых моллюсков Сев. Каспия и Арала к изменению солености среды. Автореферат докторской диссертации. МГУ, 1953.20 с.

26. Карпевич А. Ф. Выживание, размножение и дыхание мизиды Paramysis lacustris kowalevskyie водах солоноватых водоемов СССР // Зоол. журн., 1958. Т. 37. Вып. 8, С. 1121-1135.

27. Карпевич А. Ф. Требования белого амура и толстолобика к солености воды при вселении их в солоноватые водоемы // Рыбохозяйственное освоение растительноядных рыб. М., 1966. С. 89-94.

28. Карпевич А. Ф. Особенности размножения и роста двустворчатых моллюсков солоновато-водных морей СССР // Экология беспозвоночных южных морей. М„ ВГБО АН СССР. 1964. С. 3-60.

29. Карпевич А. Ф. Теория и практика акклиматизации водных организмов. М., Пищевая промышленность. 1975.432 с.

30. Кондратенков А. П. Анализ межпопуляционных различий Hydrobia ulvae (Gastropoda) методом ступенчатой акклимации // Соленостные адаптации водных организмов. Исследование фауны морей, 1976.Т. 17. С. 124-131.

31. Кондратенков А. П. Способы определения потенциальной соленостной толерантности гидробии и мидии из Белого моря // Экологические исследования перспективных объектов марикультуры в Белом море. JI., Зоол. ин-т. 1985. С. 13-22.

32. Лабас Ю. А., Хлебович В. В. «Фенотипическое окно» генома и прогрессивная эволюция // Соленостные адаптации водных организмов. Исследование фауны морей, 1976.Т. 17. С. 4-25.

33. Леб Ж. Организм как целое с физико-химической точки зрения. М., Л., Гос. Издат. 1926. 290 с.

34. Лесников Л.А. Развитие норм допустимых уровней вредных веществ в рыбоводных водоемах // Труды ГОСВНИОРХ, 1979. Т. 144. С. 3-41.

35. Ллойд Э., Ледерман У. (ред.) Справочник по прикладной статистике. Т. 1. М., Финансы и статистика. 1989. 510 с.

36. Плеханов А. Ю., Смуров А. О., Подлипаева Ю. И., Иванова Л. О., Гудков А. В. Белок теплового шока пресноводных простейших и его участие в адаптации к изменению солености среды обитания // Цитология, 2006. Т. 8. Вып. 6. С. 530-534.

37. Полянский Ю.И. Температурные адаптации у инфузорий. I. Зависимость теплоустойчивости P. caudatum от температурных условий существования // Зоол. журн., 1957. Т. 36. Вып. 11. С. 1630-1636.

38. Полянский Ю.И. Температурные адаптации у инфузорий. II. Изменение теплоустойчивости и холодоустойчивости P. caudatum при культивировании при низкой температуре // Цитология, 1959. Т. 1. С. 714-727.

39. Проссер Р., Браун Ф. Сравнительная физиология животных. М., 1967. 765 с.

40. Серавин JI. Н. Изменения резистентности Paramecium caudatum в процессе адаптации к солям СаС12, NaCl КС1 // Докл. Акад Наук СССР., 1958. Т. 121. В. 6. С. 593-596.

41. Серавин Я. Н. Изменения резистентности, верхнего порога выживаемости и темпа деления Paramecium caudatum в процессе привыкания к растворам солей //Тр. Петергоф. Биол. Инст., 1960. Т. 18. С. 178-192.

42. Серавин J1. Н. Зависимость формы кривой времени наступления наркоза у Lumbriculus variegatus и Paramecium caudatum от условий наркотизации // Цитология, 1965. Т. 7. В. 4. С. 546-553.

43. Филиппов А. А. К вопросу о солеустойчивости донных организмов Аральского моря // Тр. ЗИН РАН, 1995. Т. 262. С. 103-167.

44. Филиппов А.А. К методам определения потенциальной соленостной толерантности водных беспозвоночных // Экология, 1998. Т. 4. С. 291296.

45. Филиппов А. А. Адаптивные способности беломорских Масота balthica (Bivalvia, Tellinidae) к изменению солености среды обитания // Зоол. Журн. 2004. Т. 83. Вып. 7. С. 771-775.

46. Филиппов А.А., Орлова М.И., Русакова О.М., Жакова JI.B., Плотников И.С., Смуров А.О., Аладин Н.В. Планктон и бентос залива Большой Сарычеганак (Аральское море) // Гидробиол. журн. 1998, № 4. С. 15-32.

47. Филиппов А. А., Комендантов А. Ю., Халаман В. В. Соленостная толерантность беломорского моллюска Hiatella arctica (Bivalvia, Heterodonta) // Зоол. журн. 2003. Т. 82, № 8. С. 913-918.

48. Фокин С. И. О существовании межъядерных взаимодействий у инфузорий // Цитология, 1979. Т. 21. С. 1348-1352.

49. Фокин С. И. Морфология сократительных вакуолей инфузорий рода Paramecium (Hymenostomatida, Peniculina) как видовой признак // Зоол. журн., 1986. Т. 65. С. 5-16.

50. Фокин С. И. Бактериальные эндобионты инфузории Paramecium woodruffi I. Эндобионты из макронуклеуса // Цитология, 1989а. Т. 31. С. 839-844.

51. Фокин С. И. Бактериальные эндобионты инфузории Paramecium woodruffi II. Эндобионты из перинуклеарного пространства // Цитология, 19896. Т. 31. С. 845-850.

52. Фокин С. И. Бактериальные эндобионты инфузории Paramecium woodruffi III. Эндобионты из цитоплазмы // Цитология, 1989в. Т. 31. С. 964-970.

53. Фокин С. И. Морфология переходной зоны ресничек инфузорий (Ciliophora) II. Представители классов Kinetophragminophora и Polyhymenophora // Цитология, 1995. Т. 37. С. 145-154.

54. Фокин С. И. Paramecium (Ciliophora, Protista). Систематика и филогенетические связи // Зоол. журн., 2001. Т. 80. С. 899-908.

55. Фокин С. И., Сабанеева Е. В. Эвригалинные парамеции (Ciliophora, Peniculina) побережий Баренцева и Белого морей и их эндобионты // В кн.: Экология, воспроизводство и защита биоресурсов северных морей Европы. Мурманск. 1990. С. 139-141.

56. Фокин С. И. Ревизия рода Paramecium O.F. Muller, 1773: сравнительно-биологический анализ, систематика и филогенетические связи. -Автореф. Дис. Док. Наук. СПб. 2002. 36 с.

57. Хлебович В.В. Критическая соленость биологических процессов. J1., Наука. 1974. 236 с.

58. Хлебович В.В. Акклимация животных организмов. JI., Наука. 1981. 136 с.

59. Хлебович В.В. К биологической типологии эстуариев Советского Союза // Труды ЗИН АН СССР, 1986. Т. 141. С. 5-16.

60. Хлебович В.В. Критическая соленость и хорогалиникум: современный анализ понятий // Труды ЗИН АН СССР, 1989. Т. 196. С. 5-11.

61. Хлебович В.В., Кондратенков А.П., 1971. Потенциальная эвригалинность беломорского моллюска Hydrobia ulvae И Моллюски. Пути, методы и итоги их изучения. JL, Наука. С. 37-38.

62. Хлебович В.В. Критическая соленость и хорогалиникум: современный анализ понятий // Труды ЗИН АН СССР, 1989. Т. 196. С. 5-11.

63. Шубравый О.И. 1983. Аквариум с искусственной морской водой для содержания примитивного многоклеточного организма Trichoplax и других мелких беспозвоночных // Зоол. журн. Т. 62. Вып. 4. С. 618-621.

64. Янковский А.В. Предполагаемая классификация рода Paramecium Hill, 1752 // Зоол. журн. 1969. Т. 48. С. 30-40.

65. Ярославцева JI.M. Устойчивость к опреснению клеток некоторых моллюсков и влияние на нее тоничности солевого раствора // Биология моря, 1976. № 1.С. 36-40.

66. Ярославцева J1.M., Павленко В.А., Федосеева С.В. О соотношении клеточной устойчивости к опреснению и способности к соленостной акклимации у некоторых морских моллюсков // Биология моря, 1981. № 1. С. 54-60.

67. Adolph E.F. Some physiological distinctions between fresh water and marine organisms // Biol. Bull. Mar. Biol. Labor. Wood's Hole, 1925. Vol. 48. P. 327-334.

68. Adolph E. F. The metabolism of water in amoeba as measured in contractile vacuole //J. Exp. Zool., 1926. Vol. 44. P. 355-381.

69. Alderdice D. F. Some concepts and descriptions of physiological tolerance: rate-temperature curves of poikilotherms astransects of response surface // J. Fish. Res. Board Can., 1976. V. 33. P. 299-307.

70. Alderdice D. F. Factor combinations // Marine ecology. Vol. 1. Environmental factors. Part 3. (Ed. 0. Kinne). 1972. Wiley-Interscience, London. P. 16591722.

71. Ax V. P., Ax R. Experimentelle Untersuchungen uber die Salzgehaltstoleranz von Ciliaten aus dem Brackwasser und SuPwasser // Biologishes Zntralblatt., 1960. Vol. 79. № 1-3. P. 7-31.

72. Baas-Becking L. G. M. Salt effects on swarmers of Dunaliella viridis Teod // J. of Gen. Physiol., 1931. Vol. 14. P. 765-779.

73. Balbiani E.G. Etudes sur Paction des sels sur les Infusories // Arch. Anat. Microsc., 1898. Vol. 2. P. 518-600.

74. Beadle L.C. Osmotic and ionic regulation in relation to the classification of brackish and inland saline waters // Arch. Oceanogr. e Limnol., 1959. V. 11. P. 143-151.

75. Becker C.D., Genoway R.G. Evaluation of the critical thermal maximum for determining thermal tolerance of freshwater fish // Env. Biol. Fish., 1979. Vol. 4. P. 245-256.

76. Beitinger T. L., Bennett W. A. Quantification of the role of acclimation temperature tolerance of fishes // Envir. Biol. Fish., 2000. V. 58. P. 277-288.

77. Bjornn Т. C., Reiser D.W. Habitat requirements of anadromous salmonids. Influences of forest and rangeland management on salmonid fishes and their habitats//Am. Fish. Soc. Special Publ., 1991. Vol. 19. P. 83-138.

78. Brett, J. R. Temperature tolerance in young Pacific salmon, genus Oncorhynchus II J. Fish. Res. Board Can., 1952. Vol. 9. P. 265-323.

79. Budin K., Philippe H. New insights into the phylogeny of eukaryotes based on ciliate Hsp70 sequences // Mol. Biol, and Evol., 1998. Vol. 15. P. 943-956.

80. Chatton E., Tellier L. Sur les limites de resistance de quelques infusoires d'eau douce aux solutions des chlorures // C. r. Soc. Biol. Paris. 1927. Vol. 97, № 21. P. 285-288.

81. Corliss J. O. On the evolution and systematics of ciliated protozoa // Systematic Zoology, 1956. Vol. 5. P. 68-91.

82. Corliss J. 0. The ciliated protozoa: characterization, classification, and guide to the literature // 2nd ed. Pergamon. Oxford, UK, New York. 1979. 455 p.

83. Cronkite D. L., Gustafson A. N., Bauer B. F. Role of protein synthesis and ninhydrin-positive substances in acclimation of Paramecium tetraurelia to high NaCl // J. ofExp. Zool., 1985. Vol. 233.№ l.P.21-28.

84. Cronkite D. L., Diekman А. В., Lewallen В., Phillips L. Aminotransferase and the production of alanine during hyperosmotic stress in Paramecium calkinsi II J. Euk. Microbiol., 1993. Vol. 40. P. 796-800.

85. Cronkite D. L., Neuman J., Walker D., Pierce S. K. The response of contractile and non-contractile vacuoles of Paramecium calkinsi to widely varying salinities III Protozool., 1991. Vol. 38. P. 565-573.

86. Cronkite D. L., Pierce S. K. Free amino acids and cell volume regulation in the euryhaline ciliate Paramecium calkinsi И J. Exp. Zool., 1989. Vol. 251. P. 275-284.

87. Dahl E. Ecological salinity boundaries in poikilohaline waters // Oikos, 1956. Vol. 7. P. 1-27.

88. Day H.C. Studies on the contractile vacuole in Spirostomum and Paramecium II Physiol. Zool., 1930. Vol. 3. P. 56-71.

89. Deane E. E., Norman Y. S. Woo. Differential gene expression associated with euryhalinity in sea bream {Sparus sarba) II Am. J. Physiol., 2004. Vol. 287. P. 1054-1063.

90. Didier P. Sous-classe des Peniculia // Infusoires cilies. Fasc. 2. Systematique. Traite de Zoologie. (Puytorac P. ed.). Masson, Paris. 1994. Vol. 2. P. 603— 620.

91. Drainville G., Gagnon A. Osmoregulation in Acanthamoeba castellanii. I. Variations of the concentrations of free intracellular amino acids and of the water content // Сотр. Biochem. Physiol., 1973. Vol. 45A. P. 379-388.

92. Drzymalla C., Schroda M., Beck C.F. Light- inducible gene HSP70B encodes a chloroplast-localized heat shock protein in Chlamydomonas reinhardtii II Plant Mol. Biol., 1996. Vol. 31. P. 1185-1194.

93. Gaw H. Z. Physiology of contractile vacuole in ciliates. Effect of osmotic pressure //Ibid., 1936. Vol. 87. P. 185-193.

94. Gelei J. Der feinere Bau des Cytopharynx von Paramecium und seine systematische Bedeutung//Arch. Protistenkd., 1934. Vol. 82. P. 331-362.

95. Elliott J.M. Some aspects of thermal stress on freshwater teleosts // Stress and fish. (A.D. Pickering ed.). Academic Press. 1981. P. 209-245.

96. Elliott, J. M., Elliott J. A. The effect of the rate of temperature increase on the critical thermal maximum for Atlantic salmon and brown trout // J. Fish Biol., 1995. V. 47. P. 917-919.

97. Faure-Fremiet E. Morphologie comparee et systematique des cilies // Bulletin of the Society of Zoological France, 1950. Vol. 75. P. 109-122.

98. Feder M. E., Hofmann G. E. Heat-shock proteins molecular chaperones, and the stress response: evolutionary and ecological physiology // Ann. Rev. Physiol., 1999. Vol. 61. P. 243-282.

99. Filippov A. A. On the method for estimating the salinity tolerance of water invertebrates // Rus. J. Ecology., 1998. Vol. 29. P. 253-257.121

100. Fink К., Zeuthen E. Heat shock proteins in Tetrahymena studied under growth conditions // Exp. Cell Res., 1980. Vol. 128. P. 23-30.

101. Finlay H.E. 1930. Toleration of fresh water protozoa to increasing salinity // Ecology, Vol. 11. P. 337-347.

102. Florkin M. La regulation isoosmotique intracellulaire chez les invertebres marine euryhalins // Bull. CI. Sci. Acad. Roy. Belg., 1962. Vol. 48. P. 687-694.

103. Fokin S.I., Morphological diversity of the micronuclei in Paramecium II Arch. Protistenkd., 1997. Vol. 148. P. 375-387.

104. Fokin S.I., Sabaneeva E.V. Bacterial endobionts of the ciliate Paramecium calkinsi // Europ. J. Protistol., 1993. V. 29. P. 390-395.

105. Fokin S.I., Brigge Т., Brenner J., Gortz H.-D. Holospora species infecting the nuclei of Paramecium appear to belong into two groups of bacteria // Europ. J. Protistol., 1996. V. 32 (suppl. 1). P. 19-24.

106. Fokin S.I, Chivilev S.M. Brackish water Paramecium species and Paramecium polycaryum. Morphometric analysis and some biological peculiarities // Acta Protozool., 1999. Vol. 38. P. 105-117.

107. Fokin S.I., Chivilev S.M. Paramecium. Morphometric analysis and taxonomy // Acta Protozool., 2000. Vol. 39. P. 1-14.

108. Fokin S. I., Stoeck Т., Schmidt H. J. Rediscovery of Paramecium nephridiatum Gelei, 1925 and its characteristics // J. Eukaiyot. Microbiol., 1999a.V. 46. P. 416-426.

109. Fokin S.I., Stoeck Т., Schmidt H.J. Paramecium duboscqui Chatton & Brachon, 1933. Distribution, ecology and taxonomy // Europ. J. Protistol., 19996.V. 35. P. 161-167.

110. Fokin S.I., Smurov A.O. Salinity tolerance of Paramecium (Ciliophora, Peniculia): phylogenetical aspect // Proceed, of the Zool. Inst., 2001. V. 289. P. 83-88.

111. Fokin S., Andreoli I., Verni F., Petroni G. Apofrontonia dohrni sp. n. and the phylogenetic relationships within Peniculia (Protista, Ciliophora, Oligohymenophorea) // Zoologica Scripta, V. 35. № 4. 2006. pp. 289-300.

112. Frankel J., Williams N.F., Nelsen E.M., Keeling P.J. An evaluation of Hsp90 as a mediator of cortical patterning in Tetrahymena II J. Eukar. Microbiol., 2001. Vol.48. P. 147-160.

113. Frish S.J. The experimental adaptation of Paramecium to sea water // Arch. Protistenkd., 1939. Vol. 93. P. 38-71.

114. Frish S.J., John A. Experimental adaptation of fresh-water ciliates to sea water // Science, 1935. Vol. 81. P. 2109.

115. Frisch J. A. The rate of pulsation and the function of the contractile vacuole in Paramecium multimicronucleatum II Arch. Protistenk., 1937. Vol. 90. P. 123161.

116. Frish S. J., John A. The adaptation of Paramecium to sea water // Biol. Bull. Mar. Biol. Labor. Wood's Hole, 1937. Vol. 73. P. 383.

117. Fry F. E. J. Effects of the environment on animal activity // Univ. Toronto Studies Biol. Series No. 55, Pub. Ont. Fish. Res. Lab., 1947. Vol. 68. P. 1-62.

118. Fry F.E.J., Brett J. R., Clawson G.H. Lethal limits of temperature for young goldfish//Rev. Can. Biol., 1942. Vol. l.P. 50-56.

119. Fry F. E. J., Brett J. R., Walker K.F. Lethal temperature relations for a sample of young speckled trout (Salvelinus fontinalis). Univ. Toronto Studies Biol. Series No. 55, Pub. Ont. Fish. Res. Lab., 1946. Vol. 66. P. 9-35.

120. Hart J.S. Lethal temperature relations of certain fish of the Toronto region // Trans. Royal Soc. Can., 1947. Vol. 41. P. 57-71.

121. Hart J. S. Geographic variations of some physiological and morphological characters in certain freshwater fish // Univ. Toronto Studies Biol. Series No. 60, Pub. Ont. Fish. Res. Lab., 1952. Vol. 72. P. 1-79.

122. Hartog M. Preliminary note on the functions and homologies of the contractile vacuole in plants and animals // Rep. Brit. Ass., 1888. Vol. 58. P. 714-716.

123. Heres A. 1922. Die pulsierende Vacuole der Protozoen, ein Shutzorgan gegen Aussuung Studien uber Anpassung der Organismen an das Leben im Suwasser. Arch. Protistenkd. 44,227-260.

124. Herfs A. Die pulsierende Vacuole der Protozoen, ein Schutzorgan gegen Aussussung// Arch. Protistenk., 1922. Vol. 44. P. 227-260.

125. Jankowski, A.W. Cytogenetics of Paramecium putrinum C.et L., 1858 // Acta Protozool., 1972. Vol. 10. P. 285-394.

126. Kamada T. Diameter of contractile vacuole in Paramecium II Ibid., 1936. Vol. 4. P. 195-202.

127. Kaneshiro E. S., Dunham P. В., Holz G. G. Jr. Osmoregulation in a marine ciliate, Miamiensis avidus. I. Regulation of inorganic ions and water // Biol. Bull., 1969a. Vol. 136. P. 63-75.

128. Kaneshiro E. S., Holz G. G., Dunham P. B. Osmoregulation in a marine ciliate, Miamiensis avidus. II. Regulation of intracellular free amino acids // Biol. Bull., 19696. Vol. 137. P. 161-169.

129. Khlebovich V.V. and Kondratenkov A.P. Stepwise acclimation a method for estimating the potential eurychalinity of the gastropod Hydrobia ulvae H Marine Biol., 1973. Vol. 18. P. 6-8.

130. Kilgour D. M., McCauley R. W. Reconciling the two methods of measuring upper lethal temperatures in fishes // Env. Biol. Fish., 1986. Vol. 17. P. 281-290.

131. Kitching J. A. The physiology of contractile vacuoles. I. Osmotic relations // J. Exp. Biol., 1934. Vol. 11. P. 364-381.

132. Kitching J. A. Contractile vacuoles // Biol. Rev., 1938. Vol. 13. P. 403-444.

133. Kitching J. A. The physiology of contractile vacuoles. VII. Osmotic relations in a suctorian, with special reference to the mechanism of control of vacuolar output//Ibid., 1951. Vol. 28. P. 203-214.

134. Mast S. 0., Hopkins D. L. Regulation of the water content of Amoeba mira and adaptation to change in the osmotic concentration of the surrounding medium //Ibid., 1941. Vol. 17. P. 31-48.

135. McLeese D.W. Effects of temperature, salinity, and oxygen on the survival of the American lobster//J. Fish. Res. Board Can., 1956. V. 13. P. 247-272.

136. McMullin Th.W., Hallberg R.L. A normal mitochondrial protein is selectively synthesized and accumulated during heat shock in Tetrahymena thermophila // Mol. Cell Biol., 1987. Vol. 7. P. 4414-4423.

137. Muller R. Die osmoregulatorische Bedeutung der kontraktilen Vacuolen von Amoeba proteus, Zoothamnium hiketes und Frontonia marina // Arch. Protistenk., 1936. Vol. 87. P. 345-382.

138. Naitoh Y., Tominaga Т., Ishida M., Fok A. K., Aihara M. S., Allen R. D. How does the contractile vacuole of Paramecium multimicronucleatum expel fluid? Modelling the expulsion mechanism // J. Exp. Biol., 1997. Vol. 200. P. 713— 721.

139. Oberthur K. Untersuchungen an Frontonia marina Fabre-Dom. Aus einer Binnenland-Salzquelle unter besonderer Berucksichtigung der pulsierenden Vakuole // Ibid., 1937. Vol. 88. P. 387-420.

140. Ostwald W. Uber die Beziehungen zwischen Adsorption und Giftigkeit von Salz-losungen fur Siisswassertiere (Gammarus) // Pflugers Archiv European Journal of Physiology. 1907. V. 120. № (1-2). P. 19-30.

141. Patterson D. J. Contractile vacuoles and associated structures: their organization and function // Biol. Rev., 1980. Vol. 55. P. 1-46.

142. Plekhanov A.Y. Immunoreplica from the gel surface: rapid and sensitive blot plus intact gel // Anal. Biochem., 1996. Vol. 239. P. 110-111.

143. Podlipaeva Y. I. Heat shock protein of 70 kDa in Amoeba proteus // Protistology, 2001. Vol. 2. P. 123-129.

144. Rautian M. S., Potekhin A. A. Electrokaryotypes of Macronuclei of Several Paramecium Species // J. Euk. Microbiol., 2002. Vol. 49. № 4. P. 296-304.

145. Powers E.B. The goldfish (Carassius carassius) as a test animal in the study of toxity // Illinois Biol. Monogr., 1917. Vol. 4. № 2. P. 1-73.

146. Precht. H. Uber die temperaturabhangigkeit vo Lebensprozessen // Z. Naturforsch., 1949. V. 46. P. 26-35.

147. Precht H. Concept of temperature adaptation of unchanging reactions systems of cold-blooded animals // Physiological adaptation. Washington, 1958. P. 5075.

148. Precht H. Uber die Resistenzadaptation wechselwarmen tiere an extreme temperaturen und ihre ursachen // Helgol. Wiss. Meeresunters., 1964. V. 9. P. 392-411.

149. Prosser C.L. (Ed.) Comparative Animal Physiology. Phyladelphia. W.B.Saunders Company. 1973. 606 p.

150. Remane A. Brackwasserfauna // Zool. Anz., 1934. V. 7. P. 34-74.

151. Remane A. Einfuhrung in die Zoologische Okologie der Nordund Ostsee // Tierwelt der Nord und Ostsee. Stuttgart. 1940. Vol. 34. P. 1-238.

152. Shelford V.E. Animal communities in Temperate America. Chicago. Univ. Press. 1913.

153. Segestrale S.G. Brackishwater classification: a historical surrey // Arch, oceanograph. Limnol. 1959. Vol. 11. P. 7-33.

154. Smurov A.O., Fokin S.I. Resistance of Paramecium caudatum infected with endonuclear bacteria Holospora against salinity impact // Proceed, of Zool. Inst., 1998. Vol. 276. P. 175-178.

155. Smurov A.O., Plotnikov I.S., Fokin S.I. Using the data of Paramecium mortality for estimation of their tolerant ranges // Proceed. Zool. Inst. Russ. Acad. Sci. 1999. V. 281. P. 135-140.

156. Smurov A.O., Fokin S.I. Resistance of various Paramecium species (Ciliophora, Peniculina) to salinity of environment // Protistology, 1999. Vol. 1. № 1. P. 43-53.

157. Smurov A.O. On the methods for estimation on salinity tolerance of ciliates // Protistology, 2000. Vol. 1. №3, 123-131.

158. Smurov A.O., Fokin S.I. Use of salinity tolerance data for investigation of fylogeny of Paramecium (Ciliophora, Peniculina) // Protistology, 2001. Vol. 2, №2. P. 130-138.

159. Sonneborn T.M. Methods in Paramecium research // Methods in cell Physiology (D.M. Prescott ed.). New York. 1970. Vol. 4. P. 241-339.

160. Stempell W. Weitere Beitrage zur Phisiologie der pulsierende Vacuole von Paramecium. I Lyotrope und cytotrope Reihen // Arch. Protistenk., 1924. Vol. 48. P. 342-364.

161. Stoeck Т., Przybo E., Schmidt H. J. A combination of genetics with inter and intra-strain crosses and RAPD-fingerprints reveals different population structureswithin the Paramecium aurelia species complex // Europ. J. Protistol., 1998. V. 34 P. 348-355.

162. Stoner L. C., Dunham P. B. Regulation of cellular osmolarity and volume in Tetrahymena//J. Exp. Biol., 1970. Vol. 53. P. 391-399.

163. Struder-Kypke M. C., Wright A.-D. G., Fokin S., Lynn D. H. Phylogenetic relationships of the subclass Peniculia (Oligohymenophorea, Ciliophora) inferred from small subunit rRNA gene sequences // J. of Euk. Microbiol., 2000. Vol.47. P. 419-429.

164. Tchakhotine S. L'effect d'arret de la fonction de la vacuole pulsatile de la Paramecie par micropuncture ultraviolette // CR. Soc. Biol. Paris., 1935. Vol. 120. P. 782-784.

165. Tominaga Т., Allen R.D., Naitoh Y. Electrophysiology of the contractile vacuole comlex of Paramecium reveals its membrane dynamics and electrogenic site during osmoregulatory activity//J. Exp. Biol., 1998. Vol. 201. P. 451-460.

166. Towbin H., Staeheln Т., Gordon J. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 76 :4350-4354.

167. Triana O., Galanti N., Olea H., Wernstedt L.H., Medina С., Того G. C. Chromatin and histones from Giardia lamblia: a new puzzle in primitive eukaryotes // J. Cell. Biochem., 2000. Vol. 82. P. 573-582.

168. Valikangas I. Planktonogische Untersuchungen im Hafengebiet von Helsingfors // Acta Zool. Fennica, 1926. Vol. 1. P. 1-298.

169. Valikangas I. Uber die Biologie der Ostsee als Brackwassergebiet // Vehr. Intern. Vereinig. Limnol., 1933. Vol. 6. P. 62-112.

170. Varadharajan S., Chandrashekar B.K.S., Rangarajan P.N., Govindarajan P. Localization of ferrochelatase in Plasmodium falciparum II Biochem. J., 2004. Vol. 384. P. 429-436.

171. Warren E. On the reaction of Daphnia magna to certain changes in its environment // Quart. J. Microsopic Soc., 1900. V. 43. P. 199.

172. Warren С. E., Doudoroff P. (ed.) Biology and Water Pollution Control by Bioscience, Vol. 21, No. 14. 1971. 791 p.

173. Weatherby J. H. The function of the contractile vacuole in Paramecium caudatum, with special reference to the excretion of nitrogenous compounds // Biol. Bull., 1927. Vol. 52. P. 208-218.

174. Wichtermann R. The biology of Paramecium. 2-nd ed. Plenum, New York. 1986. 599 p.

175. Williams W.D. The uniqueness of salt lake ecosystem // Perpective Problems of Freshwaters. WarszawaKrakov. 1972. P. 350-361.

176. Williams W.D., Boulton, A.J. and Taafe R.G. Salinity as a determinant of salt lake fauna: a question of scale // Hydrobiologia, 1990. Vol. 197. P. 257-266.

177. Williams W.D. (ed). 1991. Salt lakes and salinity. Junk, Dordrecht.

178. Woodruff L.L. The structure, life history and intrageneric relationship of Paramecium calkinsi n. sp. // Biol. Bull., 1921. Vol. 41. P. 171 -180.

179. Zuelzer M. Uber den Einfludes Meerwassers auf die pulsierende Vakuole // Arch. Entw. Mechan., 1910.Vol. 29. № (3-4). P. 632-640.

180. Zeuthen T. From contractile vacuole to leaky epithelia. Coupling between salt and water fluxes in biological membranes // Biochim. Biophys. Acta. 1992. Vol. 1113. P. 229-258.

Информация о работе

Смуров, Алексей Олегович
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2006
ВАК 03.00.33

Диссертация

Соленостные адаптации инфузорий рода Paramecium (Ciliophora, Peniculia) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы