Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Система для мониторинга антител к условно патогенным бактериям и аутоантител. Опыт ее применения

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Система для мониторинга антител к условно патогенным бактериям и аутоантител. Опыт ее применения"

На правах рукописи

ЯСТРЕБОВА Наталия Евгеньевна

СИСТЕМА ДЛЯ МОНИТОРИНГ А АНТИТЕЛ К УСЛОВНО ПАТОГЕННЫМ БАКТЕРИЯМ И АУТОАНТИТЕЛ. ОПЫТ ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ

14.00.36 - аллергология и иммунология 03.00.07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 2007

003061657

Работа выполнена в ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И И Мечникова РАМН

Научный консультант:

Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Борис Федорович Семенов

Официальные оппоненты:

1 Доктор медицинских наук, профессор Алла Петровна Батуро

2 Доктор медицинских наук, профессор Борис Владимирович Пинегин

3 Доктор биологических наук, профессор Серафима Семеновна Хромова

Ведущая организация:

Федеральное государственное учреждение науки Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им Л А Тарасевича

Защита диссертации состоится 20 сентября 2007 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И Мечникова РАМН по адресу. 105064, Москва, Малый Казенный пер, д 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИВС им И И.Мечникова РАМН

Ученый секретарь специализированного ученого совета, кандидат биологических наук

Яковлева И В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Со второй половины XX века для решения многих теоретических и практических задач медицинской науки и здравоохранения начали активно использовать метод мониторинга (Стародубов В И. с соавт, 2003, Щепин О П., 2001, Петров Р В , 1995)

В медицине понятие мониторинг подразумевает систему наблюдений, анализа, оценки и прогноза состояния здоровья населения и среды обитания человека, а также определение причинно следственных связей между состоянием здоровья человека и воздействием факторов среды обитания человека (Стародубов В И с соавт., 2003)

Метод мониторинга широко используется при иммунологических исследованиях на популяционном уровне Петров Р В, Хаитов Р М. и их коллеги (Петров РВ. с соавт, 1992, 1995, Хаитов РМ с соавт., 1995, Орадовская ИВ, 1991, Черешнев В А, 2000) положили начало проводимым в разных регионах России исследованиям в области экологической иммунологии Результаты этих исследований позволят разрабатывать методы предупреждения критических (неблагоприятных) воздействий разнообразных факторов внешней среды на здоровье людей, проживающих и работающих на территориях разного масштаба (предприятие, город, регион)

По результатам мониторинга, итогом вакцинопрофилактики в последние десятилетия XX века стала ликвидация полиомиелита в России, превращение массовых детских инфекций (дифтерия, коклюш, корь) в спорадические, а также существенное снижение заболеваемости вирусным гепатитом В, краснухой, паротитом (Покровский В И, Онищенко Г Г., Черкасский Б.Л, 2003г) Однако проблема инфекционных заболеваний как серьезной угрозы здоровью населения сохраняется и по прогнозам специалистов будет существовать впредь (Онищенко Г Г, 2007)

В последние годы возрастает внимание к условно патогенным микроорганизмам (УПМ), которые являются этиологическими возбудителями заболеваний человека. Так, Ecoli ассоциирована с 80% циститов в России (Страчунский J1C с соавт., 2002) S pneumoniae является возбудителем

внеболыгачных пневмоний в 30,5% случаев (Щерба Ю В. Гончарова И.В, 2005) По данным официальной статистики в нашей стране ежегодно регистрируется от 30 до 50 тыс случаев внутрибольничных инфекций, возбудителями которых, как правило, являются УПМ (Семина Н А с соавт, 2000, Ясинский А А с соавт, 2005)

В настоящее время хорошо аргументирована связь инфекционного процесса с пуском аутоиммунных реакций (Behar SM, Porcelli SA., 1995, Anders HJ et al, 2005; Fae K.C et al, 2005). Полагают, что условно патогенным микроорганизмам принадлежит существенная роль в индукции многих аутоиммунных состояний (Malkiel S. et al, 2000, Caballero E et al, 2001, Snider LA., Swedo SE, 2003, Gangi E et al, 2004, Newkirk MM. et al, 2005)

В свете изложенного становится очевидным, что мониторинг инфекций, вызываемых условно патогенными микроорганизмами, и исследование вероятности развития при этом аутоиммунных процессов представляет как теоретический, так и практический интерес Однако к началу наших исследований такого рода работы практически не проводились, поскольку не было системы, позволяющей одновременно определять антитела (AT) к широкому спектру УПМ и аутоантигенам основных органов человека Решению сформулированной проблемы посвящена наша работа При этом мы исходили из предположения, что решение такой задачи возможно при использовании твердофазного ИФА с сорбцией на отдельных стрипах полистирольного планшета различных антигенных (АГ) препаратов, что позволяет проводить комплексную оценку уровня антибактериальных антител и аутоантител

Целью исследования явилось создание и оценка эффективности иммуноферментной системы для одновременного мониторинга антител к антигенам условно патогенных бактерий и аутоантител к антигенам основных органов-мишеней и органонеспецифическим антигенам человека

Задачи исследования

1 Сформулировать и обосновать принципы создания скрининговых иммуноферментных тестов для мониторинга специфических IgG антител к бактериальным и тканевым антигенам

2 Разработать на основе сформулированных принципов иммуноферментную тест-систему для мониторинга 1^0 антител к условно патогенным бактериям

3 Разработать иммуноферментную тест-систему для мониторинга ^О антител к различным антигенам тканей органов человека и органонеспецифическим антигенам

4. Провести мониторинг антител к условно патогенным бактериям и тканевым антигенам в различных группах клинически здоровых людей и работающих в экологически неблагоприятных условиях

5 Провести мониторинг антител к условно патогенным бактериям и тканевым антигенам в группах больных различными формами соматической и аутоиммунной патологии

Научная новизна

1 Впервые определены, научно обоснованы и реализованы принципы разработки иммуноферментной системы для мониторинга широкого спектра антител.

-использование в едином тесте модулей различной специфичности, -применение антигенов, обладающих видовой (клеточные стенки условно патогенных бактерий) и органной (микросомальные субклеточные фракции) специфичностью,

-применение единого внутреннего контроля;

-применение единого способа выражения и оценки результатов ИФА

2 Впервые разработана система для мониторинга антител к условно патогенным бактериям и к тканевым антигенам Максимально унифицированная система впервые дает возможность определять специфические Iантитела в едином тесте к антигенам 14-ти видов условно патогенных бактерий, 4-м органонеспецифическим и 11-ти антигенам органов-мишеней

3 Продемонстрирована перспективность использования разработанной

системы для мониторинга антител у клинически здоровых людей, лиц,

работающих в экологически неблагоприятных условиях, лиц 65 лет и старше,

5

пациентов с различными формами соматической, аутоиммунной и эндокринной патологии

4. Впервые определены нормальные уровни антител для каждого из антигенов системы, которым соответствуют показатели разности оптической плотности (ДОП) в сыворотках 90% клинически здоровых людей от -0,1 до +0,1 для тканевых и от -0,2 до +0,2 для бактериальных антигенов Показатели выше нормы были характерны не более чем для 5% лиц этой группы

5 Впервые показано, что разработанная система может быть использована для оценки влияния экологически неблагоприятных факторов Обследование работников подземных сооружений Московского метрополитена выявило двукратное увеличение частоты обнаружения повышенных уровней антител одновременно к бактериальным и тканевым антигенам (у работников метрополитена 16,4% против 8,2% у доноров, р<0,05)

6 Впервые дана комплексная характеристика спектра антибактериальных и противотканевых антител при различных видах соматической и аутоиммунной патологии

- показано преимущественное наличие повышенных уровней антител к конкретным видам условно патогенных микроорганизмов и/или тканевым антигенам;

- выявлено наличие повышенных уровней антител к трем и более бактериальным и/или тканевым антигенам (от 17,0% до 34,4% при различных заболеваниях против 5,2% у здоровых к бактериальным и от 13,3% до 30,2% против 0% у здоровых к тканевым антигенам),

- выявлено наличие одновременно повышенных уровней антител к бактериальным и тканевым антигенам (35,1% при аутоиммунных заболеваниях против 8,2% у здоровых)

7 Показано, что аутоиммунные процессы являются составляющей

патогенеза многих соматических заболеваний бронхолегочных, желудочно-

кишечных, сердечно-сосудистых, мочевыводящей системы При этих

заболеваниях наличие аутоантител сочеталось с выявлением антител к условно

патогенным бактериям (например у больных колитом определяли антитела к

антигенам тканей толстого кишечника-58,8%, тонкого кишечника-41,2%,

6

почек-52,9% и клеточным стенкам Ecoli-23,5%, Р aeruginosa-41,2%, Р mirabihs-58,8%)

8 Разработанная система позволила установить полиорганный характер органоспецифических аутоиммунных заболеваний выявлен высокий уровень аутоантител не только к антигенам органа-мишени, но и к другим органам и тканям

- при сахарном диабете I типа- антитела к антигенам микросомальной фракции ткани поджелудочной железы, коллагену, эластину, почек, щитовидной железы, желудку, надпочечников,

- при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы — антитела к эластину, коллагену, а также к микросомальным фракциям тканей щитовидной железы, желудка, надпочечников, поджелудочной железы

Практическая ценность

Разработана скрининговая тест-система для определения IgG антител- к

антигенам клеточных стенок (КС) 14 представителей условно патогенных

бактерий (S aureus, S epidermidis, S saprophytics, Spneumoniae, Streptococus sp,

Mluteus, Ecoli, P vulgaris, P mirabihs, P aeruginosa, H influenzae, К pneumoniae,

Y enterocolitica, M catarrhahs); к 4 органонеспецифическим антигенам (н-ДНК,

д-ДНК, эластин, коллаген), к 11 органоспецифическим антигенам (миокард,

легкое, почки, печень, тонкий и толстый кишечник, желудок, гипофиз,

щитовидная железа, поджелудочная железа, надпочечник)

Разработанную тест-систему можно использовать для контроля

содержания антител к антигенам условно патогенных бактерий в сыворотке

крови доноров, для эколого-иммунологического мониторинга лиц,

проживающих и работающих в неблагоприятных условиях, выявления

неблагополучия в состоянии иммунитета у лиц с различными заболеваниями,

для наблюдения за эффективностью проводимого лечения, для выявления

распространенности аутоиммунного процесса и его преимущественной

направленности, в научных исследованиях в области биологии и медицины

Система прошла экспертизу и контроль в ГИСК им Тарасевича

Рекомендована Комитетом иммунобиологических препаратов к регистрации в

7

РФ (протокол №10 от 24 12 2003 г) Документация и система полностью готовы к производственному выпуску Лабораторные серии системы использованы для научных исследований в ГУ гематологический научный центр РАМН, ФГУ МНИИ глазных болезней им. Гельмгольца Росздрава и др

Основные положения, выносимые на защиту

1 Основными принципами создания систем для мониторинга IgG антител к бактериальным и тканевым антигенам являются использование широкого спектра антигенов, позволяющих проводить комплексную оценку специфического гуморального иммунитета (мультимедийность); применение в качестве антигенов условно патогенных бактерий клеточных стенок, содержащих видовые антигены, а в качестве тканевых антигенов -микросомальных фракций, содержащих основные органоспецифические АГ, использование единого внутреннего контроля и единого способа выражения результатов ИФА, позволяющих унифицировать оценку результатов определения антител любой специфичности

2 Разработанная иммуноферментная система на основе антигенов 14 представителей условно патогенных бактерий, 4 органонеспецифических и 11 антигенов органов мишеней, обладает высокой чувствительностью (>90%), специфичностью (>95%) и надежностью (коэффициент вариации < 8%)

3 Мониторинг сывороток клинически здоровых людей свидетельствует, что более 90% сывороток имеют показатели разности оптической плотности (ДОП) от -0,1 до +0,1 для тканевых антигенов, и от -0,2 до +0,2 для бактериальных антигенов, что позволило принять указанный диапазон за норму Повышенный уровень АТ к бактериальным, а также к тканевым АГ наблюдается, как правило, не более, чем в 5% случаев

4 Показатели адаптивного иммунитета у людей, больных

различными заболеваниями, достоверно отличаются от таковых у клинически

здоровых по спектру определяемых антител, по существенно меньшей доле

людей с нормальными показателями уровня антител к бактериальным и

тканевым антигенам (от 22,9% до 42,8% у больных и 67,5% у здоровых); по

количеству людей с повышенным уровнем антител к трем и более

бактериальным (от 17,0% до 34,4% у больных и 5,2% у здоровых) или

8

тканевым антигенам (от 11,6% до 30,2% у больных и 0% у здоровых), по частоте одновременного определения высокого уровня антител к бактериальным и тканевым антигенам (в 35,1% у больных АИЗ и в 8,2% у здоровых).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 51 печатная работа, из них 23 в журналах, рекомендованных ВАК РФ, получены 4 патента РФ на изобретения

Основные результаты работы доложены и обсуждены на Международном конгрессе «Современные методы диагностики и лечения аллергии, астмы и иммунодефицитов» (Тбилиси, Грузия, 1999 г.), III съезде иммунологов России (Сочи, 2000 г), заседании секции медицинской микробиологии и химиотерапии в МНИИЭМ им Габричевского (Москва, 2001г); 5-м конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002 г), 3-ем Международном конгрессе по аутоиммунитету (Женева, Швейцария, 2002г); научно-практической конференции «Актуальные вопросы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия и охраны здоровья населения центрального региона России» (Смоленск, 2002 г), Российской научно-практической конференции «Эпидемиологический надзор и социально-гигиенический мониторинг» (Москва, 2002 г), IV, V и XI Всероссийских научных конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (С-Петербург, 2002, 2003, 2007гг); Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке» (Пермь, 2003 г), Объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004 г), 1-ой Международной научной конференции «Донозология 2005» (Санкт-Петербург, 2005 г), 1-ой Московской международной конференции «Естественный аутоиммунитет в норме и патологии» (Москва, 2005 г), 5-й международной конференции «Актуальные аспекты экстракорпорального очищения крови в интенсивной терапии» (Москва, 2006 г.); 6-м съезде гематологов и трансфузиологов Республики Беларусь (Минск, 2007 г)

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 239

страницах компьютерного текста, включает 15 рисунков, 38 таблиц

9

Библиография содержит 83 отечественных и 343 зарубежных источника литературы Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Штаммы микроорганизмов В работе использовали 112 штаммов, относящихся к 14 видам условно патогенных микроорганизмов (таблица 1).

Таблица 1

Штаммы условно патогенных микроорганизмов, использованные в работе___

№№ п/п Виды бактерий Штаммы и/или серотипы Источник получения

1 S aureus Wood 46, 1986 ГНИИСКим Тарасевича НИИВС им И И Мечникова

2 S epidermichs 14/63; 87 ГНИИСКим Тарасевича

3 S saprophyticus СЕМ 2727 ГНИИСКим Тарасевича

4 S pneumoniae 3(3), 56(4), 19/57 (9N), 29/57(23F), 4/56 (6В) ГНИИСК им Тарасевича НИИВС им И И Мечникова

5 Streptococcus sp 51 НИИВС им И И Мечникова

6 Micrococcus luteus 2665 Там же

7 Ecoh 08 К87 Н19 F-147 (075 KlOO) К 873 Там же

8 P vulgaris 177(016 Н6) Там же

9 P mirabilis vi со Там же

10 P aeruginosa 8, 5; 1677 Там же

11 H influenzae 11/64, 118R 2191,1599 ГНИИСКим Тарасевича НИИ педиатрии

12 К pneumoniae 204; 51; 1898,142 (К54, К16 и др K-типы Всего 76типов) ГНИИСКим Тарасевича НИИ педиатрии

13 Yenterocolitis 707(03), 92(09) ЦНИИ эпидемиологии МЗ

14 Mcatarrhahs 36621, 8193 321; 494, 513 ГИСКим Тарасевича НИИ педиатрии

Большинство штаммов находилось в в-форме. Все использованные в работе штаммы микроорганизмов выращивали на синтетической питательной среде Ледерберга с добавлением необходимых д ля каждого вида бактерий факторов роста Контроль биологической чистоты и культивирование бактерий проводили в лаборатории непарентеральных методов иммунизации НИИВС им.ИИ Мечникова.

Биоматериал Для выделения тканевых антигенов использовали ткани следующих органов сердце, легкие, почки, печень, тонкий и толстый кишечник, гипофиз, щитовидная железа, желудок, поджелудочная железа, надпочечники Биоматериал получали из Бюро судебно-медицинской экспертизы №4 Комитета здравоохранения г Москвы на основании Законов РФ «О трансплантации органов и (или) тканей человека» и «О погребении и похоронном деле» Антигенные препараты выделяли из тканей органов, полученных от лиц (возраст от 20 до 35 лет) с 0 (1) группой крови, погибших в результате случайной смерти без алкогольной и наркотической интоксикации Забор аутопсийного материала проводили в ранние сроки не позднее 12 часов с момента смерти, при условии полного отсутствия визуальных признаков патологических изменений и аутолиза. Также использовали ткани различных органов лабораторных животных после процедуры получения гипериммунных сывороток.

Сыворотки животных В работе использованы гипериммунные кроличьи сыворотки к 14 видам условно патогенных бактерий, любезно предоставленные сотрудниками различных лабораторий НИИВС им И.И Мечникова. Титр сывороток в реакции агглютинации — от 1.640 до 1 6400 Кроме того, использовали сыворотки животных, иммунизированных различными тканевыми антигенами

Сыворотки людей. Для анализа использовали 2688 сывороток крови клинически здоровых и больных различными заболеваниями людей Сыворотки были предоставлены специалистами различных медицинских учреждений г Москвы и г Тулы

клинически здоровые доноры станций переливания крови- 560;

работающие в экологически неблагоприятных условиях - работники метрополитена 399;

заболевания органов дыхания бронхиальная астма, пневмония, хроническая пневмония, хронический бронхит, криптогенный фиброзирующий альвеолит (КФА), саркоидоз, экзогенный аллергический альвеолит (ЭАА), врожденные пороки развития легких - 350;

заболевания органов желудочно-кишечного тракта: хронический гастрит, гастрит, гастродуоденит, язва желудка, энтероколит, хронический гепатит, холецистит, колит, язва 12-ти перстной кишки, пищевые токсикоинфекции -318;

заболевания сердца и сосудов: эндокардит, миокардиопатия, ишемическая болезнь сердца (ИБС), атеросклероз, гипертоническая болезнь (ГБ), ревмокардит -113;

заболевания органов мочевыводящей системы гломерулонефрит, цистит, хроническая почечная недостаточность, пиелонефрит -112, аутоиммунные заболевания: системная красная волчанка (СКВ), системная склеродермия (ССД), дерматомиозит (ДМ), ревматоидный артрит (РА), болезнь Бехтерева-367,

заболевания эндокринной системы. первичная гипофизарная недостаточность, аутоиммунные заболевания щитовидной железы (АЗЩЖ), сахарный диабет I типа, сахарный диабет II типа, первичная хроническая надпочечниковая недостаточность - 339

Коммерческие препараты В качестве органонеспецифических антигенов использовали коммерческие препараты- ДНК из селезенки крупного рогатого скота (Биолар, Латвия), ДНК из спермы лосося (Bochringer GmbH, Германия), коллаген, выделенный из сухожилий быка (Sigma, США), эластин (ICN Biomedicals Inc.)

Для изучения специфичности разработанной системы использовали следующие коммерческие наборы anti-DNA, anti-insulin (Orgentec Diagnostica-GmbH, Германия), anti-TPO (Immunotech, Чехия), AT к ß-клеткам (Biomerica, США).

Конъюгатами для ИФА были антитела диагностические против иммуноглобулинов классов G (человека, кролика, мыши, морской свинки), меченные пероксидазой хрена (производство НИИЭМ им Н.Ф Гамалеи РАМН)

Клеточные стенки условно патогенных бактерий выделяли по единой методике, в основе которой были ультразвуковая дезинтеграция микробных клеток и последующее дифференциальное центрифугирование (Peterson. Ph К et al, 1978) Все операции центрифугирования проводили на центрифуге "Beckman" (США), ротор JA-14

Микросомалъные фракции тканевых антигенов получали по единой методике, используя метод субклеточного фракционирования (Hutton J С et al, 1982, Yoshinari M et al, 1985) В качестве среды выделения использовали 0,05М буферный раствор Tris HCL рН-7,5 и 0,25М раствор сахарозы, содержащий 1мМ ЭДТА (рН-7,4) Подготовленную ткань в среде выделения подвергали механической дезинтеграции (ножевой дезинтегратор ЕТА 0010) и последующему центрифугированию (центрифуга «Beckman» J2-21) и ультрацентрифугированию (центрифуга «Вескшап-75»)

Получение гипериммунных сывороток к тканевым антигенам проводили путем иммунизации морских свинок и мышей линии СВА смесью антигенного препарата и полного адьюванта Фрейнда, с последующей реиммунизацией через восемь недель Иммунный ответ на введенный антиген оценивали по уровню антител в иммуноферментном анализе

Световая микроскопия была выполнена в отделении электронной микроскопии и патоморфологии НИИ туберкулеза РАМН Метод использовали для определения изменений в органах животных после гипериммунизации микросомальными субклеточными фракциями тканевых антигенов

Химический анализ препаратов антигенов выполняли с использованием традиционных методов для данного уровня исследований Для определения белка использовали метод, предложенный Lowry О.Н et al (1951), углеводов -метод Dubois М et al (1956), нуклеиновых кислот - метод Спирина (1958)

Измерения производили на спектрофотометре Ultrospec II Е, Pharmacia LKB (Швеция)

Иммуноферментный анализ проводили в стандартных условиях в 96-луночных полистироловых планшетах (Медполимер, Россия), оптическую плотность растворов в каждой ячейке измеряли с помощью многоканального автоматического фотометра "Titertech Multiscan®MC" фирмы "Flow Laboratoires" (Англия). Учет результатов проводили при длине волны 492 нм.

Для определения специфичности иммуноферментной системы использовали тест торможения иммуноферментной реакции различными антигенными препаратами В лунки, сорбированные антигенами, последовательно вносили по 90 мкл соответствующих антисывороток в необходимом разведении, предварительно инкубированных с 10 мкл раствора антигена в концентрации 1 мг/мл Далее постановка ИФА была традиционной. Процент торможения рассчитывали, сравнивая оптические плотности лунок, содержащих гомологичные сыворотки с добавлением гетерологичных антигенов, по отношению к оптической плотности лунок, содержащих гомологичную сыворотку и антиген, и принимаемую за 100%

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя автоматические компьютерные программы Microsoft Excel и БИОСТАТИСТИКА (Primer of Biostatistics, Version 4.03 by Stanton AGlantz) Для определения специфичности и чувствительности ИФА использовали метод, описанный Glynn A. A., Ison С, 1982.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Обоснование принципов создания тест-систем для мониторинга IgG антител к бактериальным и тканевым антигенам

Важным принципом создания системы является мультимедийность, те. использование в едином тесте модулей (иммуносорбентов) различной специфичности. Это дает возможность проводить анализ антител различной специфичности одновременно на одной пластине Реализация этого принципа

становится возможной при обоснованном выборе антигенов и унификации этапов ИФА

Поэтому следующим принципом разработки иммуноферментных тестов является выбор антигенов

Анализ данных литературы, касающийся антигенного состава условно патогенных бактерий, позволяет прийти к выводу, что основная масса видовых антигенов сосредоточена в составе КС У представителей грамотрицательных бактерий видовые антигены представлены белками наружной мембраны, а у большинства грамположительных -пептидогликанами и тейхоевыми кислотами КС (Воробьев А А., 2006) Поиск, выделение и изучение диагностической значимости каждого из видовых АГ условно патогенных бактерий для использования в скрининговом тесте является неоправданным Поэтому, для изучения показателей специфического иммунитета использованы препараты КС, выделенные по единой методике

Химический состав различных серий препаратов КС был стабильным Выход препаратов в расчете на 1л культуральной жидкости для грамотрицательных бактерий составлял в среднем около 10 мг сухого вещества, а для грамположительных - около 4 мг Содержание белка в препаратах КС колебалось от 10,7 до 20,8% (в зависимости от вида), примесь нуклеиновых кислот - от 0,6 до 4,0% По содержанию углеводов КС грамотрицательных и грамположительных бактерий достоверно отличались (р<0,05) В составе КС грамотрицательных бактерий было от 18,7% до 26,8% углеводов (в зависимости от вида УПМ), а КС грамположительных бактерий содержали от 8,3% до 10,8% нейтральных моносахаридов

Анализ результатов торможения ИФА (таблица 2) выявил тот факт,

что КС в гомологичной системе вызывают наиболее значимое снижение

оптической плотности (100%), что свидетельствует о присутствии в каждом

препарате КС видовых антигенов Дополнительным свидетельством видовой

специфичности препаратов КС служили результаты торможения ИФА на

основе КС К.рпеитотае штаммами, принадлежащими к 76 серотипам Из 76

штаммов - бактерии 41-го К-типа давали торможение иммуноферментной

реакции, превышающее 80%, остальные тормозили ИФА не менее чем на 50%

15

Использование для выделения антигенов нескольких штаммов, принадлежащих к одному виду, а также гипериммунных сывороток к бактериям различных видов и сероваров в реакции торможения ИФА показало, что препараты клеточных стенок обладают видовой специфичностью

Таблица 2

Степень перекрёстного торможения ИФА препаратами клеточных стенок условно патогенных бактерий

В составе иммуносорбента КС бактерий n роцент торможения антигенами КС бактерий

« S 2 s « Ы5 4 ! SO сэ S О 1 ч to S pneumoniae Streptococcus sp M luteus Ecoli P vulgaris P aeruginosa Я influenzae К pneumoniae Y enterocolitis P mirabilis M catarrhalis

S aureus 100 30 33 10 5 15 1 7 15 11 6 0 0 0

S epidermidis 41 100 18 0 4 0 4 0 15 0 0 0 0 0

S saprophytics 60 40 100 0 0 0 15 12 2 0 17 0 0 0

S pneumoniae 0 0 0 100 20 15 5 0 5 10 12 0 0 0

Streptococcus sp 0 0 17 0 100 3 0 0 0 0 20 0 0 0

M luteins 0 0 0 0 0 100 0 0 10 10 0 0 0 0

Ecoli 0 0 10 0 0 0 100 24 8 0 40 0 0 0

P vulgaris 20 0 30 0 0 0 0 100 20 25 40 0 0 0

P aeruginosa 0 0 0 0 0 4 0 0 100 0 0 0 0 5

H influenzae 0 0 0 0 0 0 0 0 30 100 20 0 0 0

К pneumoniae 0 0 0 0 0 0 26 3 10 0 100 0 0 5

Y enterocolitis 20 5 10 15 7 7 10 21 30 10 12 100 30 0

P mirabilis 10 5 10 10 0 0 15 0 10 0 10 30 100 0

M catarrhalis 0 0 0 0 0 0 10 5 10 20 0 0 10 100

В качестве препаратов органоспецифических антигенов использовали микросомальные фракции, выделенные из экстрактов тканей различных органов, так как по данным литературы в составе именно этих фракций находится подавляющее большинство известных, охарактеризованных, диагностически значимых маркеров органной специфичности (Роит А с соавт 2000, Степанова ЕН., 2000) Выход лиофильно высушенных препаратов органоспецифических антигенов составил 25 мг на 1 г тканевого материала. Полученные с помощью метода субклеточного фракционирования препараты

16

микросомальных фракций характеризовались стабильным составом белков, углеводов и нуклеиновых кислот

Несмотря на недостоверные различия в химическом составе каждый из выделенных препаратов обладал органной специфичностью, что было продемонстрировано в торможении ИФА, где были использованы гипериммунные сыворотки морских свинок (таблица 3)

Таблица 3

Степень перекрёстного торможения ИФА микросомальными фракциями различных органов человека

№ п/ п Антиген в составе иммуносорбента процент торможения ИФА

сердце лёгкое | ПОЧКИ ^ печень тонкий кишечник 1 толстый кишечн гипофиз щитовидная железа . желудок поджелудочная ж елеза I надпочечник 1

1 сердце 100 30 25 10 0 0 10 10 0 0 10

2 лёгкое 40 100 30 10 0 0 10 10 0 0 20

3 почки 10 10 100 0 0 10 10 0 10 10 10

4 печень 10 0 0 100 25 20 0 15 20 20 15

5 тонк кишечник 10 10 10 10 100 45 10 15 20 10 0

6 толе кишечник 10 10 10 20 35 100 10 10 35 15 10

7 гипофиз 20 15 0 10 0 0 100 15 10 10 15

8 щитовидная железа 10 10 10 0 20 10 10 100 15 0 10

9 желудок 0 0 10 20 20 30 20 10 100 10 15

10 поджелудочная железа 0 0 10 15 10 20 20 10 20 100 0

11 надпочечник 10 20 20 20 5 10 30 15 20 20 100

В качестве органонеспецифических антигенов были использованы коммерческие препараты ДНК, эластина и коллагена, выпускаемые зарубежными фирмами.

Разработка комплексных тест-систем (когда в каждом стрипе одного планшета сорбированы антигены одной специфичности) должна сопровождаться использованием единого внутреннего контроля, обеспечивающим возможность унифицированной оценки результатов определения антител любой специфичности Для оценки результатов ИФА был использован стандартизованный по оптической плотности (ОП) единый контрольный образец, представляющий собой пул равных объемов сывороток 100 клинически здоровых людей, т.е. не истинно отрицательный контроль, а «усреднённый» контроль Оптическая плотность такого контроля по экспериментальным данным должна находится в пределах значений 0,2 - 0,5. Для создания контрольного образца использованы сыворотки людей, допущенных к донорству крови Различные серии отрицательного контроля (К-), приготовленные описанным способом, не отличались между собой (р>0,05), поэтому могли использоваться в качестве контроля для оценки результатов ИФА с иммуносорбентами различной специфичности (таблица 4)

В качестве положительного контроля использованы пулированные сыворотки больных с высоким уровнем антител к большинству антигенов Положительный контроль не участвует в оценке результата реакции, его высокая оптическая плотность служит лишь признаком специфичности тест-системы.

Следующий принцип - единый способ оценки результатов При наличии стандартизованного контроля (К-) целесообразно оценивать уровень специфических антител по разности ОП между результатом анализа тестируемой сыворотки и К- (ДОП) При этом, значения результатов могут быть как со знаком «+», так и со знаком «-»

Разработка единого критерия оценки результатов анализа также является важным принципом создания скрининговой иммуноферментной системы Для реализации этого принципа прибегли к определению единой точки отсечения отрицательных показателей. Для повышения надежности разрабатываемой тест-системы, а также для повышения ее специфичности нами использован общепризнанный подход «cut off» отрицательных показателей должна

отсекать около 95% сывороток крови клинически здоровых людей Примеры подхода к оценке "cut off' приведены также на рисунке 1

Таблица 4

Характеристика единого внутреннего отрицательного контроля в комплексной ИФ-системе для оценки уровней специфических IgG антител

Антиген в составе иммуносорбента ОП К- в сериях*

1 2 3 4 5

Saureus 0,48±0,03 0,45±0,03 0,50±0,02 0,49±0,03 0,47±0,02

S epidermidis 0,37±0,02 0,42±0,02 0,42±0,03 0,40±0,03 0,38±0,02

S saprophyiicus 0,41±0,02 0,42±0,02 0,40±0,02 0,43±0,02 0,42±0,01

S pneumoniae 0,47±0,03 0,44±0,03 0,46±0,01 0,45±0,02 0,44±0,03

Streptococcus sp 0,3 (Щ),02 0,29±0,02 0,26±0,03 0,28±0,02 0,29±0,02

Mluteus 0,47±0,03 0,45±0,03 0,43±0,02 0,47±0,02 0,44±0,02

Ecoli 0,45±0,02 0,40±0,02 0,46±0,02 0,43±0,03 0,44±0,02

P aeruginosa 0,46±0,03 0,42±0,03 0,43±0,02 0,42±0,02 0,45±0,02

H influenzae 0,36±0,02 0,32±0,01 0,36±0,01 0,34±0,02 0,33±0,02

P vulgaris 0,30±0,01 0,25±0,01 0,25±0,02 0,26±0,01 0,29±0,01

ДНК-н 0,21±0,01 0,20±0,01 0,20±0,02 0,22±0,02 0,24±0,01

ДНК-д 0,25±0,01 0,24±0,01 0,23±0,01 0,24±0,02 0,25±0,01

эластин 0,29±0,01 0,27±0,01 0,26±0,01 0,27±0,01 0,30±0,02

лёгкое 0,22±0,01 0,21±0,01 0,20±0,01 0,23±0,02 0,24±0,01

почка 0,27±0,02 0,26±0,02 0,28±0,01 0,30±0,02 0,26±0,01

печень 0,23±0,01 0,25±0,01 0,25±0,02 0,26±0,01 0,24±0,02

тонк. кишечник 0,32±0,02 0,34±0,02 0,32±0,01 0,35±0,01 0,33±0,01

толе, кишечник 0,28±0,01 0,30±0,01 0,30±0,01 0,29±0,02 0,30±0,01

гипофиз 0,38±0,02 0,40±0,02 0,39±0,01 0,42±0,02 0,40±0,01

щитовидная железа 0,35±0,02 0,38±0,02 0,35±0,01 0,38±0,02 0,36±0,02

поджелудочная железа 0,25±0,01 0,26±0,01 0,28±0,02 0,28±0,01 0,27±0,01

надпочечник 0,27±0,02 0,23±0,02 0,24±0,02 0,25±0,01 0,27±0,01

Примечание * различия между сериями К- не достоверны (р>0,05)

щитовидная

1 ♦ н-ДНК* \ «• ) • •: • . ; ч « • печень* ♦ ♦♦ • « • • « • железа* 1 * > * • : ••

де» ♦ [ЧГ* до*

: г • а. • * г • • • ♦ •

доп КС Баигеиа* 1,2 т

0,8 О,в 0,4 0,2 О •0,2 -0,4 -0,6 -0,8

7 13 7 14 7 КС 5 рпеитотае* КС Нгтфиегсае*

! • 1 • «• # 1 • 1 V \Т • • • • • •• • • м Р

и-'

Г* 9 • • - ! > •••; 1 ••• * • •

15 7

7 1

Рисунок 1 Определение точки отсечения отрицательных показателей на примере распределения по АОП в ИФА сывороток 1-практически здоровых людей (п=35), 2-больных СКВ (п=30), 3-больных хроническим гепатитом (п=25), 4-больных аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы (п=27), 5-больных стафилококковым эндокардитом (п=29), 6-больных пневмококковой пневмонией (п=16), 7-больных хр обструктивными заболеваниями легких, вызванными Н тАиегсае (п=28). *-Антиген, сорбированный на пластине

Таким образом, основными принципами создания скрининговой тест-системы являются использование широкого спектра бактериальных и тканевых антигенов, позволяющих проводить комплексную оценку показателей специфического гуморального иммунитета, применение препаратов клеточных стенок бактерий, содержащих видовые антигены УПМ, а в качестве препаратов, содержащих основные органоспецифические АГ -микросомальные субклеточные фракции; использование единого внутреннего контроля и единого способа выражения результатов ИФА, позволяющих унифицировать оценку результатов определения антител любой специфичности

Разработка и характеристика иммуноферментной системы для определения ^ антител к условно патогенным бактериям и тканевым антигенам

При разработке иммуноферментной тест-системы использовали общепринятые этапы, включающие выбор полистироловой подложки, подбор концентрации антигена и буферного раствора для сорбции; определение длительности и температуры сорбции антигена на полистироле, определение рабочего разведения коныогата и сывороток; выбор хромогена и длительности контакта компонентов реакции, определение времени остановки реакции Учитывая многофакторность этапов, стремились к возможно большей унификации условий постановки реакции Оптимальные условия должны обеспечивать максимальные различия между К+ и К- и не приводить к значительному (ОП>(),15) увеличению фоновых значений (лунки без антигена + все компоненты реакции, лунки со всеми компонентами, но без сыворотки) Исследования показали, что для достижения высокой специфичности целесообразно использовать различные концентрации тканевых АГ и единое рабочее разведение сывороток (1:100) Для достижения видовой специфичности антигенов УПМ необходимо было использовать

разные разведения сывороток; при этом единой была концентрация АГ на полистироле. Общими были длительность и температура сорбции антигенов на полистироле, рабочее разведение конъюгата, длительность и температура контакта компонентов реакции и субстратной смеси (таблица 5).

Таблица 5

Характеристика основных параметров постановки ИФА для определения антибактериальных и противотканевых антител

Условия приготовления иммуносорбентов Рабочее Рабоч разведение конъю гата Длит Длит

№ п/п Антигены в составе иммуносорбента Кона (мкг/мл) Сорбир буферный раствор Длит, t°cop6-ции сыв-ток, [обратные титры) конт комп реакц конт ссубс гмесью

1 ДНК-н 20,0

2 ДНК-д 10,0

3 Эластин 10,0

4 Коллаген 10,0

5 Сердце 5,0

6 Легкое 5,0 VO

7 Почка 5,0 СТч X а.

8 Печень 5,0 о и

9 Тонкий кишечник 2,5 W и и 2! Е-1

10 Толстый кишечник 2,5 и В CJ

11 Гипофиз 2,5 U о 10 о о M оо

12 Щитовидная железа 5,0 о а

13 Желудок 10,0 03

14 Поджелуд ж 15,0 s S1 I s s о 1 О

15 Надпочечник 15,5 1 vo

16 S aureus + 1600-3200 1 ^ 6

17 Sepidermidis о О 200400 КС ©

18 Ssaprophyùcvs m 100-200 щ в

19 S pneumoniae В* 1600-3200 4> О о

20 Streptococcus sp •Ч 100 к i—

21 M. luteus oô 200-400 s

22 E coli 5,0 ЧО 200-400 S"

23 P vulgaris К о. 200-400

24 P aeruginosa ta О 400

25 H influenzae О 400

26 К pneumoniae 100-200

27 P mirabilis 100-200

28 Y enterocohtica 100-200

29 Mcatarrhahi 1600

Достигнутая унификация позволяет комплектовать систему иммуносорбентами различной специфичности и при необходимости расширить спектр определяемых антител

Основными критериями качества, обеспечивающими надежность иммуноферментных тестов, являются высокая воспроизводимость результатов, специфичность и чувствительность Специфичность определяли при анализе сывороток здоровых доноров и выражали в процентах (таблица 6).

Таблица 6

Характеристика специфичности отдельных нммуносорбентов на основе бактериальных и тканевых антигенов, полученная при анализе сывороток практически здоровых людей (п=103)

Иммуносорбент на основе антигенов Частота положительных реакций,% Специфичность, %

S aureus 3,9±1,9 96,Ш,9

S saprophytics 2,9±1,6 97,1±1,6

S pneumoniae 3,9±1,9 96,1±1,9

Mluteus 1,9±1,3 98,1±1,3

E coli 4,8±2 1 95,2±2,1

P vulgaris 1,9±1,3 98,1±1,3

H influenzae 2,9±1,6 97,1±1,6

К pneumoniae 2,9±1,6 97,1±1,6

Mcatarrhahs 3,9±1,9 96,1±1,9

ДНК-н — 100,0

коллаген — 100,0

почка — 100,0

сердце — 100

легкое 1,0±1,0 99,0±1,0

толстый кишечник __ 100,0

щитовидная железа 1,0±1,0 99,0±1,0

желудок — 100,0

поджелуд железа 2,9±1,6 97,1±1,6

надпочечник 1,0±1,0 99,0±1,0

Чувствительность определяли исходя из результатов, полученных при анализе сывороток больных, для которых уже имелись данные о повышенных уровнях антител, выявленные с помощью других серологических методов, а в

случае определения антител к бактериальным антигенам - данные бактериологического анализа (таблица 7)

Таблица 7

Характеристика чувствительности иммуноферментных тестов на основе бактериальных и тканевых антигенов, полученная при анализе сывороток больных различными заболеваниями (опытные группы)

Тест, подтверждаю- Результаты ИФА

Иммуносорбент на основе антигенов Клинический Кол-во исследо -ваний частота отрицательных р-ций, % чувстви-

диагноз щий тельность

диагноз %

S aureus эндокардит бак анализ 23 8,7±5,9 91,3±5,9

S epidertmdis эндокардит бак анализ 20 5,0±4,9 95,0±4,9

S pneumoniae пневмония бак анализ 38 5,3±3,6 94,7±3,6

Y enterocolitis РА РПГА 39 25,6±7,0 74,4±7,0

Mcatarrhalis хронический бронхит бак анализ 12 8,3±8,0 91,7±8,0

E coli пиелонефрит бак анализ 22 4,5±4,4 95,5±4,4

P vulgaris энтероколит бак. анализ 13 7,7±7,7 92,3±7,7

P aeruginosa энтероколит бак анализ 16 12,5±8,5 87,5±8,5

H influenzae хронический бронхит бак анализ 20 5,0±5,0 95,0±5,0

К pneumoniae пневмония бак анализ 14 7,1±7,1 92,9±7,1

P mirabilis РА РПГА 19 - 100,0

ДНК-н СКВ ИФА 28 3,6±3,6 96,4±3,6

ДНК-д СКВ нет 28 - 100,0

печень аутоиммунный гепатит иммуно-флюоресценция 9 - 100,0

щитовидная железа АЗЩЖ ИФА 25 8,0±5,5 92,0±5,5

поджелудочная железа сахарный диабет 1типа ИФА 12 8,3±8,0 91,7±8,0

надпочечник первичная недостаточность ИФА 11 9,1±9,1 90,9±9,1

Таким образом, на основе сформулированных принципов впервые разработана надежная, высокоспецифичная комплексная иммуноферментная система для определения антител

Информативность разработанной системы для мониторинга антител

Перспективность использования разработанной системы продемонстрирована при мониторинге антибактериальных и противотканевых антител у клинически здоровых людей, людей работающих в неблагоприятных условиях и пациентов с различной соматической и аутоиммунной патологией.

Мониторинг /¿»б антител в сыворотках клинически здоровых людей

Исследования показали, что более 90% сывороток здоровых людей при

анализе противотканевых антител различной специфичности имеют

Таблица 8

Распределение сывороток клинически здоровых людей (п=560) по

Иммуносорбент % сывороток со значениями

<-0,2** <-0,1*** от-0,2 до +0,2** от-0,1до+0,1*** > +0,2** >+0,1***

S aureus 2,7±0,7 92,7 ±1,1 4,6+0,9

S saprophyticus 2,0+0,6 95,9±0,8 2,1+0,6

Р vulgaris 1,6±0,5 96,2±0,8 2,1+0,6

Ecoli 3,2±0,7 92,1±1,1 4,6+0,9

Н influenzae 3,2±0,7 93,2+1,1 3,6+0,8

ДНК 0,2±0,2 99,5+0,3 0,4+0,3

коллаген 0,4±0,3 99,1±0,4 0,5+0,3

сердце 0,9±0,4 96,8±0,7 2,3+0,6

поджелудочная железа 2,1±0,6 95,7+0,9 2,2+0,7

желудок 0,2±0,2 99,5+0,3 0,4+0,3

Примечание *)ДОП - разность оптической плотности, **) указаны значения для реакций с бактериальными антигенами, ***) указаны значения для реакций с тканевыми антигенами

показатели ДОП от -0,1 до +0,1, а при анализе антител к различным видам условно патогенных микроорганизмов - от -0,2 до +0,2 (таблица 8). Диапазон этих показателей приняли за норму. Среди сывороток здоровых людей уровень АТ, превышающий условные границы нормы имеют, как правило, не более 5,0%

Изучение уровней антибактериальных и противотканевых антител у 560 доноров станций переливания крови г.г Москвы и Тулы выявило отсутствие повышенного уровня ^О АТ в 67,5% случаев с бактериальными и тканевыми антигенами. У 24,1% обследованных выявлены повышенные уровни АТ к одному из бактериальных АГ, у 0,2% - к тканевым, 8,2% доноров имели одновременно повышенный уровень антител к бактериальным и тканевым АГ (таблица 9)

Таблица 9

Распределение уровней антител у клинически здоровых людей (доноры)

Доноры Год Кол-во Частота встречаемости сочетаний, %

бак(-) ткан(-) бак(+) ткан(-) бак(-) ткан(+) бак(+) ткан(+)

всего 19972004 560 67,5±3,9 24,1±1,8 0,2±0,2 8,2±1,1

Москва 1999 103 65,0±4,7 34,0±4,7 - 1,0±1,0

Тула 1999 122 59,0±4,4 26,2±4,0 0,8±0,8 13,9±3,1*

Примечание * - различия достоверны по сравнению со всей группой доноров

(р<0,05), бак(-), ткан(-) отсутствие повышенных уровней антител к бактериальным и/или тканевым антигенам, бак(+), ткан(+) - наличие антител к ним

Среди доноров Тулы одновременно повышенный уровень антител к бактериальным и тканевым АГ имели 13,9% обследованных лиц. Величина последнего показателя в значительной степени обусловлена высокой частотой совпадений положительных реакций с антигенами КС У еШегосокиса и антигенами щитовидной железы в сыворотках крови доноров г Тулы в 1999 г (таблица 10) Установлено, что у доноров Тулы, имеющих повышенный уровень АТ к У еШегосоЫюа, в 78,6% одновременно определяли повышенный уровень АТ к АГ щитовидной железы. Тогда как среди доноров Москвы такие совпадения результатов отмечены только у 6,7% Выявленные особенности позволяют предположить, что инициирующими рост аутоантител у лиц, проживающих в г Туле, были факторы, раскрытие которых требует специальных эпидемиологических исследований

Таблица 10.

Средние уровни ^С антител к бактериальным и тканевым антигенам у клинически здоровых людей*

№ Частота выявления (%)

№ п/ п Иммуносорбент Москва 1997 п=101 Москва 1999 п=103 Тула 1999 п=122 Москва 2001 п=104 Москва 2004 п=130 средние значения п=560

1 S aureus 5,0±2,2 3,9±1,9 3,3±1,6 3,8±1,9 6,9±1,0 4,6±0,9

2 S epidermidis 4,0±1,9 4,8±2,1 3,3±1,6 4,8±2,1 2,3±1,3 3,8±0,8

3 S saprophytics 1,0±1,0 2,9±1,6 3,3±1,6 2,9±1,6 0,8±0,8 2,1 ±0,6

4 S pneumoniae 5,0±2,2 3,9±1,9 9,0±2,6* 6,7±2,4 2,3±1,3 5,4±0,9

5 Streptococcus sp 2,0±1,4 1,9±1,3 1,7±1,2 1,9±1,3 3,1±1,5 2,1 ±0,6

6 Mluteus 5,9±2,3 1,941,3 1,7±1,2 1,9±1,3 4,6±1,8 3,2±0,7

7 Ecoli 5,9±2,3 4,8±2,1 4,1±1,8 4,8±2,1 3,1±1,5 4,6±0,9

S P vulgaris 2,0±1,4 1,9±1,3 2,4±1,4 2,9±1,6 1,5±1,1 2,1±0,6

9 P aeruginosa 1,0±1,0 10,7±3,0* 7,4±2,4 5,8±2,3 2,3±1,3 5,2±0,9

10 H influenzae 6,9±2,5 2,9±1,6 2,5±1,4 2,9±1,6 3,1±1,5 3,6±0,8

11 К pneumoniae 0 2,9±1,6 6,6±2,2 4,8±2,1 3,1±1,5 3,6±0,8

12 P mirabilis н/о 6,8±2,5* 0,8±0,8 3,8±1,9 1,5±1,1 3,0±0,8

13 Y enterocolitica н/о 13,6±3,4* 11,5±2,9* 4,8±2,1 3,1±1,3 8,1±1,3*

14 M catarrhalis н/о н/о н/о 1,0±1,0 0,8±0,8 0,8±0,6

15 ДНК-н 1,0±1,0 0 0 0 1,5±1,1 0,4±0,3

16 ДНК-д 2,0±1,4 0 0 0 1,5±1,1 0,7±0,3

17 эластин 0 0 0 1,0±1,0 0,8±0,8 0,4±0,3

18 коллаген 1,0±1,0 0 0,8±0,8 0 0,8±0,8 0,5±0,3

19 почка 1,0±1,0 0 0,8±0,8 1,0±1,0 0 0,5±0,3

20 Печень 3,0±1,7 0 0 2,9±1,6 0,8±0,8 1,3±0,5

21 сердце 3,0±1,7 0 3,3±1,6 2,9±1,6 2,3±1,3 2,3±0,6

22 лёгкое 1,0±1,0 1,0±1,0 0 I,Ott 1,0 0 0,5±0,3

23 тонкий кишечник 0 0 0,8±0,8 1,0±1,0 0 0,4±0,3

24 толст, кишечник 1,0±1,0 0 4,9±1,9* 2,9±1,6 0 1,6±0,5

25 гипофиз н/о 9,8±2,9* 4,9±1,9 5,8±2,3 1,5±1,1 5,2±0,3*

26 щитовидная ж. н/о 1,9±1,3 13,9±0,8* 3,8±1,9 1,5±1,1 5,0±1,0*

27 желудок н/о 0 0,8±0,8 0 0,8±0,8 0,4±0,3

28 поджеяудочн ж н/о 2,9±1,6 2,5±1,4 2,9±1,6 0,8±0,8 2,2±0,7

29 надпочечник н/о 1,0+1,0 0,8±0,8 1,0±1,0 0 0,6±0,4

*-различия достоверны по сравнению с донорами г Москвы 2004 г (р<0,05)

Мониторинг IgG антител в сыворотках людей, работающих в экологически неблагоприятных условиях

В качестве объекта исследований, был выбран метрополитен, т к он является адекватной техногенной моделью воздействия различных уровней аэромикрофлоры на организм человека В основных вентиляционных системах метрополитена не предусмотрена очистка воздуха от пыли и микроорганизмов Проведено обследование больших контингентов лиц, работающих в сооружениях и подразделениях с различными степенями контакта с пассажирскими потоками. Необходимо было исследовать воздействие микробной обсемененности воздушной среды подземных сооружений метрополитена на иммунную систему обслуживающего персонала По данным СЭС Московского метрополитена 47% культур, высеянных из проб воздуха 3-х станций, составлял S aureus, доля Ecoh составила около 5% культур

В 1999-2000 гт с помощью разработанной системы было проведено исследование гуморального иммунного ответа к 12 представителям УПМ и 10 тканевым антигенам у 399 работников Московского метрополитена Известно, что уровень IgG антител к антигенам УПМ в сыворотках крови человека отражает реальное состояние иммунологической резистентности организма

[Хаитов Р М, 2002] Повышение содержания этих антител прямо указывает на наличие соответствующей антигенной стимуляции, а понижение, напротив - на отсутствие такой стимуляции Исследования показали, что основная масса сывороток крови работников (около 80%), как мужчин, так и женщин, не содержит повышенного уровня антител к антигенам бактерий, находящихся в микрофлоре станций метрополитена Однако, если у доноров частота встречаемости повышенного уровня антител к различным антигенам колебалась в пределах (0,4-8,1)% (таблица 10), то у работников метрополитена эти показатели составляли (2,3-24,1)% Важно отметить, что повышенные уровни антител одновременно к широкому спектру антигенов наблюдались у (17,8±1,9)% обследованных, что отличало работников

28

метрополитена от клинически здоровых людей Наличие существенно более частого, чем у доноров, повышения уровня антибактериальных антител в сыворотках крови работников метрополитена дает основание предположить, что в основе этого феномена лежит стимуляция эффекторов врожденного и адаптивного иммунитета бактериями, составляющими микрофлору станций метрополитена, патоген-ассоциированные структуры которых, при контакте с соответствующими рецепторами на эффекторах врожденного иммунитета (макрофаги, дендритные клетки), запускают иммунный процесс

Таблица 11

Распределение реакций с бактериальными и тканевыми антигенами у работников Московского метрополитена

Группы обследуемых Кол-во Частота встречаемости сочетаний, (%)

бак(-) ткан(-) бак(+) ткан(-) бак(-) ткан(+) бак(+) ткан(+)

работающие в подземных сооружениях 238 60,9±3,4 25,2±2,8 1,2±0,7 16,4±2,4*

работающие в наземных сооружениях 161 71,4±3,6 16,1 ±2,9 - 8,7±2,2

всего 399 65,2±2,4 21,5±2,1 0,8±0,4 13,3±1,7

Примечание * - различия достоверны по сравнению с группой работников

наземных сооружений (р<0,05), бак(-), ткан(-) отсутствие повышенных уровней антител к бактериальным и/или тканевым антигенам, бак(+), ткан(+) - наличие антител к ним

Исследование у работников Московского метрополитена частоты выявления антител к тканевым антигенам позволило установить наличие аутоиммунного ответа, не имеющего клинических проявлений Кроме того, среди этих людей были такие, у которых определяли повышенный уровень антител к двум, трем и более бактериальным и/или тканевым антигенам Результаты исследований показали, что у работников метрополитена достоверно чаще (р<0,05), в отличие от доноров, наблюдается одновременное сочетание высокого уровня АТ к бактериальным и тканевым АГ (16,4% против 8,2%), что позволяет предположить влияние УПМ на возникновение аутоиммунного ответа у обследуемого контингента Влияние это очевидно еще и потому, что как в сыворотках клинически здоровых людей (см табл 9),

29

так и лиц обследуемой группы (таблица 11) частота положительных реакций только к тканевым антигенам составляла не более 0,8%.

Таким образом, анализ результатов показывает, что определение в сыворотках крови широкого спектра антибактериальных и противотканевых антител может быть использовано в качестве чувствительного и специфического критерия оценки воздействия бактериального состава среды обитания на иммунную систему Иммуноферментный скрининг антибактериальных антител в сыворотках крови позволил провести практическую гигиеническую оценку условий труда репрезентативных профессиональных групп, а обнаружение высокого уровня AT к тканевым АГ позволяет сформировать группу риска по развитию аутоиммунных заболеваний

Мониторинг IgG антител к бактериальным и тканевым антигенам в сыворотках людей при различных заболеваниях

Выявление особенностей спектра антибактериальных, органонеспецифических и органоспецифических антител в 1599 сыворотках больных разичными заболеваниями людей проводили в сравнении с клинически здоровыми людьми

В группах больных бронхолегочными, желудочно-кишечными и аутоиммунными заболеваниями достаточно часто определяли антитела к трем и более бактериальным антигенам (в 28,0%, 32,4% и 34,4% случаях соответственно) В этих же группах часто определяли антитела к трем и более тканевым АГ У больных бронхолегочными заболеваниями в 59,3% определяли AT только к бактериальным АГ, а у больных желудочно-кишечными заболеваниями таких было 38,0%

Среди больных обструктивными заболеваниями легких наиболее часто выявляли повышенные уровни антител к трем видам пневмотропных (S pneumoniae, Н influenzae, М catarrhalis) бактерий (таблица 12) Наиболее часто AT к Spneumoniae определяли у больных бронхиальной астмой (46,0%), хронической пневмонией (32,2%) и хроническим бронхитом (24,7%) (таблица

30

12) У больных криптогенным фиброзирующим алъвеолитом (КФА) достоверно более часто наблюдали интенсивные реакции с антигенами Mcatarrhalis и S aureus (45,2 и 25,8% соответственно) У больных КФА чаще, чем у больных другими заболеваниями, наблюдали положительные реакции с н-ДНК (32,2%) Больные хроническим бронхитом, пневмонией и КФА достоверно чаще имели повышенный уровень антител к коллагену (14,8%, 25,8% и 22,6%) и эластину (18,5%, 22,6%, 16,1%) Для этих же больных была характерна большая доля положительных реакций с антигеном легочной ткани Кроме этого, больные КФА чаще больных другими заболеваниями имели повышенный уровень антител к антигенным препаратам печени и тонкого кишечника (таблица 12) Это свидетельствует о присутствии в этих препаратах общих антигенов, одним из которых может быть цитокератин-8 -структурный белок интермедиальных филаментов определенных видов тканей (Rungger-Brandle Е et al, 1983).

При мониторинге IgG антител в сыворотках больных сердечнососудистыми заболеваниями было отмечено, что болеющие ИБС и гипертонической болезнью имеют положительные реакции с той или иной частотой с антигенами КС всех 12 использованных видов УПМ, тогда как больные эндокардитом - с двумя видами стафилококков (таблица 13) При этом у больных эндокардитом часто наблюдали повышенные уровни антител к органонеспецифическим антигенам (н-ДНК, д-ДНК, коллаген)

Больных с гипертонической болезнью отличала от здоровых людей и больных другими сердечно-сосудистыми заболеваниями большая частота положительных реакций с антигенами почек (25,8%). Больных ИБС характеризовали частые положительные реакции с антигенными препаратами из тканей сердца, легкого и почек (22,2%, 14,8%, 18,5% соответственно) Это может свидетельствовать о наличии аутоиммунного процесса, сопровождающегося поражением нескольких органов

Таблица 12

Результаты мониторинга IgG антител у больных с заболеваниями opt ¡шив дыхании

Частота положительных реакций {%) при заболеваниях

Антигены в составе и ммуносорбента бронхна ль-пая астма п=50 хропич- ский бронхит п=81 хрониче -екая пневмония L1LICUMO- ния п-49 сарком-доз п=25 КФА п=31

п=62

5. aureus 12.0J 4.6 8.6-ЬЗ. 1 9.9+3.3 4,1+2,8 12,0+6,5 25,8+8,8

S.epidermidis 32;Ö+6?6 NWffö 9.7=3,8 8.2+3,9 4,0+3,9 3,2+3,2

S. saprophytics 8,0+3.8 1.2+1,2 1.6+1.6 0 0 0

S.pneumoniae MS шШ 28,6+6,5 0 9,7+5,3

Streptococcus xpp. 8,0+3,8 0 0 0 0 0

M. luteus 4,0=2,8 0 0 2,0+2,0 0 0

P.aeruginosa 12,0+4,6 3,7+2,1 4,1+2,5 10,2+4,3 0 0

E.cuii U^g 1,2+1,2 9,7+3,8 4,1+2,8 0 3.2^3,2

P. vulgaris 8.0+3.8 4.9+2.4 3,2+2.2 4,1+2,8 0 3,2+3.2

P.mirahilis 6.0±1,3 4,9+2,4 6.4+3,1 2,0+2,0 0

11, influenzae 22,0:5,8 22МШ ЗЩРЗ, 9 24,0+6.(1 16,1+6,6

K.pneumoniae i« 8,1+3.5 10,2+4,3 0 0

Y.enterocoUtica 6,0+ 1,3 11,1±3,5 6,4+3,1 10,2+4,3 16,0+7,3 6,4+1,4

XL catarrhal is 2,0+2,0 4.9+2,4 24.5-5.5 4,1+2,8 16,0+7.3 45.2-8.9

н-ДНК 6,0+3.4 3,7+2,1 3.2+2,2 0 8.0+5.4 32Ш&4

д-ДНК 11,3 ¿3 16,Н1.0 0 8,0+5,4 6,4+4,4

коллаген 8,0+3.8 Ч^ 25,8*5$ 4,0+3,9 2

эластин тыл 185+4,3 2ШШ liafeM 0 !Щ|1ЩЙ

сердце 8,0+3,8 7.4+2,9 10.2+4.3 0 9.7+5,3

легкие штм =14,8+3.9 ЗДЖ 4,1+2.8 4.0±3,9 «i

почки 4,0+2,8 2,5±1,7 6.4+3.1 4,1+2,8 0 9.7+5,3

печень 8,0+3.8 7,4+2,9 6,4+3.1 2.0+2.0 4,0+3,9 29,0+8,1

тон.кишечник 0 3,7+2,1 1,6+1,6 0 8,0+5,4 2ХМР.Ж

тол. кишечник 6,0±3,4 3,7+2.1 6,4+3,1 4,1+2,8 0 12,9+6,0

гипофиз 2,0+2,0 3,7+2,1 3,2+2,2 0 0 6,4+4,4

щитовидная« железа 4,0+2,8 2,5+1,7 1,6+1,6 0 4,0+3,9 9.7+5,3

желудок 4,0±2,8 2,5+3,7 1.6+! ,6 0 4.0+3.9 12.9±6.0

поджелудочная железа 2,0+2,0 1,2+1,2 1,6+1,6 0 0 12,9+6,0

надпочечники 2,0+2,0 0 0 0 0 0

Примечание: здесь » к последующих таблицах, выделены цветом достоверные различия с клинически здоровыми людьми (p<ü,05)

таблица 13

Результаты мониторинга tgG антител у больных с сердечнососудистыми заболеваниями

Антигены в составе иммуносор бен та Частота положительных реакций (%) при заболеваниях

ИБС п=27 ГБ п=31 эндокар ЛИТ п=30 атеросклероз л--JO кардио-миопатия ii=10 ревмокардит п=5

5. aureus jftpftJB 3,2+3,2 8Ö.Ö;|8,9 ¡0.0+10.0 20,0+12,7 20,0120,0

S.epidermidis 7,4+5,0 6,4+4,4 1 10,0+10,0 20,0+12,7 20.0+20.0

S.saprophytieus 7.4+5,0 6,4+4,4 6,7+4,6 io,o±m,o 10.0+10,0

S. pneumoniae 7,4+5,0 3,2±3,2 2,3+3,3 10,0+10,0 0 40,0+24,5

Streptococcus spp. 3,7+3,6 6,4+4,4 mm 0 0 40,0+24,5

M.luteus 11,0+6,0 3,2+3,2 0 0 0 0

P. aeruginosa 11,0+6,0 12,9+6.0 0 0 0 0

E.coli 11,0+6.0 12,9+6.0 6,7+4.6 0 0 0

P. vulgaris 7,4+5,0 9,7+5,3 0 0 0 0

Я .influenzae 14,8+6,8 12,9+6,0 6,7+4.6 10,0+10,0 0 0

K.pneumoniae 14,8+6,8 ¡2,9+6,0 6,7+4,6 10,0+10,0 0 | 0

Y.enterocolitica 7,416,8 6,4+4.4 0 0 0 0

н-ДНК 0 0 KS© 10,0+10,0 20.0+12,7 20,0+20,0

Д-ДПК 3,7«,7 0 ШШ 0 20,0± 12,7 20,0+20,0

коллаген 11,1=45,0 9,7±5,3 «« 20.0+12,6 10.0+10,0 20,0+20,0

эластин 11,1+6,0 6.4+4.4 10,0+5,5 20,0=12,7 20,0+20.0

сердце 6,4+4.4 3.3+3,3 0 №15.5 60,0+24Й

легкие 1:4,8+6,8 6.4+4,4 0 3(1.0: 14.5 30.0+14,5 30,0+20,0

ПОЧКИ ! 8:5+7:5 10,0+5,5 0 (J 0

печень 7,4+5,0 6,4+4.4 3,3+3,3 20,&t 12,6 20,0+12.8 20,0+20,0

топ. кишечник 3,7+3,6 3,2=3,2 3,3+3,3 10,0+10,0 10,0+10,0 0

тол. кишечник 7.4+5,0 6,4+4,4 3,3 ±3,3 20.0+12,6 0 0

При заболеваниях органов мочевыводящеЙ системы JO 47.4% больных имели повышенный уровень антител к стафилококкам 3-х видов и кишечной палочке (таблица (4). Кроме того, дня больных пиелонефритом и циститом были характерны частые положительные реакции с КС большей части УПМ (8 и.з 12). При гломерулонефрюте У 55.7% больных выявлен высокий уровень антител к антигену почечной ткани. У половины больных этой группы

выявлены высокие уровни антител к д-ДНК. Эти данные свидетаяьегвуют ¿'« аутоиммунных нарушениях при гломерулонефрите.

Таблица 14

Результаты мониторинга IgC антител у больных с заболеваниями моче вы водя шей системы

Антш-ены в состане и м м у носорбе н га Частота положительных реакций (%) при заболеваниях

пиелонефрит П—38 хроническая почечная недостаточность п=12 Гяомеруло-нефрит п=7 цистит п=55

5". aureus 44,7*8,1 25,0*13,1 42,9+20,2 12.7+4.5

S.epidennidis liste 8.3*8.3 28,6+18,4 32,7-6,3

S. sapr ophylicus 25,0*13,1 42,9*20,2 3-1.5" 6 4

S.pmumoniae 2,6+2,6 8,3+8.3 14,3=14,3 3,6+2,5

Streptococcus spp. Iшш 8, 3*8,3 14,3*14,3 3,6=2,5

MJuieus 0 0 ] 8,2*5^2

P. aeruginosa 7,9+4.4 0 0

E. coli 4М.ЕЙЙН 0 0 2Ю

P. vulgaris 8,3*8,3 14,3*14,3

I ¡.influenzae 5,3*3,6 0 0 3,6*2,5

¡{.pneumoniae 15,84.5,9 0 0 3,6*2,5

Y.enterocolitica 10,5*5,0 8.3*8,3 14,3+14,3 9,1+3,9

а-днк 10,5+5.0 25,0*13,1 28,6*18,4 1,8*1,8

Д-ДНК 7.9+4,4 ттт тшэ. 1,8*1,8

коллаген 0 16,7± 11,2 0 0

жастин 0 8.3*8,3 14,3±14,3 1,8*1,8

сердце 5.3+3,6 ] 6,7* 11.2 0 9,1*3,9

легкие 5,3+3.6 8,3+8,3 14,3*14,3 5.4*3,0

почки 2,6*2,6 83,3-. ! 12 85.7:! 4.3 5,4+3,0

печень 10,0±5,0 25,0* 13.1 28,6+18.4 1,8*1,8

гол. кишечник 2,б±2,6 0 0 5,4+3.0

Тол. кишечник 5,3*3,6 8,3*8,3 14,3+14.3 5,4*3,0

Таблица 15

Результаты мониторинга IgC антител у больных желудочно-кишечными заболеваниями

Антигены в составе иммуносорбен та Частота 1> олпжитедьмьи реакций (%} При заболеваниях |

хронический гастрит П=65 гастро-дуоденит n=21 язва желудка п=30 язва 12-Пгретной КИШКИ п=13 энтероколит п=58 кшит л=17 1жщ.ток СИКОИнфекция п=39 холецистит п=35 хронический гепатит п=14

S aurûus 10,8±3,8 14,3+7,8 33,3±.8£ Uj+Г4;4 12,1+4^ 23,5+¡0,6 5,1+3,5 тт-щ 7.1+7,1

S. sapropkyttcus 4,6±2,6 4.8+4.8 10.0+5.5 7,7±7.7 8.6x3,7 17,6+9,5 0 2£,0+6,8 0

P.aernginosa 32.3+5,8 9,5+6,5 26.7±8,f 30.8+13,3 ,2+12,3 25|Щ) 25.7+7Н 28,6+12.5

E.coli 9,2±3,6 23,8+9,5 10.0+5,5 ттт шт 23,5=10,6 10.3+4,9 25,7^57,'4 7,1+7,1

P.vulgaris 6,1+3,0 Î0,0±5;5 30,8+13.3 ШАШ» И,4+5,4 14,3+9,7

P. mirabilis 3,1+2,1 4.8+4. К 6.7+4.6 0 58,SJ-12.3 тт0 0

H.iniluenzae 6,1+3,0 9.5+6,5 6,7+4.6 7,7+7.7 ШЩ, 0 2.6+2.5 14.3+5,9 0

K-pneumomae 4,6+2,6 4,8+4,8 0 7.7+7,7 домен 5,9+5,9 7.7=4,3 8.6+4.7 0

Y.enlerocolitica 4,6±2,6 38.1+10.9 6.7+4,6 15.4+10,4 41 7+12,3 mmi 8,6=4,7 7.1+7,1

M.catarrhalis 4,6±2.6 0 6.7+4.6 7,7+7,7 5,9+5,9 0 5.7+3.9 0

в-ДИК «й« 4,8+4,8 10,(Ъ5.5 0 3,4+2.4 11,8=8,1 0 2,9+2.8 73,6+11,4

д-ДНК 15.4 : 1.5 4,8+4,8 10,0+5,5 0 0 0 0 2.9±2,8

коллаген 9.5±6,6 10,0+5.5 0 Ш&ВЯ 0 2,9+2,8 Жй

эластин 6.1 ±3.0 4.8—4,8 3,3+3,1 7.7+7.7 5,9+5,9 0 0 14.3+9,7

легкие 0 0 7,7+7.7 8.6+3,7 5.9+5.9 0 2,9+2.8 7,1+7.1

почки 9.5+6.6 6,7+4.6 441+14,4 20.7^5,3 ~$2Ш%5 2,6+2.6 11.4+5.4 7,1+7.1

печень 1«ША8 9,5+6,6 6,7+4.6 23,αJ 2.1 25.S&5.7 ШШШ6 0 9.6+5.1 тю

тон.кжпечиик т,офё 14,3+7.8 6.7+4,6 25.9+5.7 тшт 0 9,6+5,1 14,3+9.7

ТОЛ. КИП 164 ник шмш 19,8+8,8 Ш зо.кшй жтм 0 ¡1.4+5.4 3117+133

щитовидная железа ШШ 0 0 0 0 0 2,6+2,6 0 0

желудок Ьщщг- 4.8+4.8 6.7+4.6 - 5,2 d 2.9 0 2,6+2,6 2.9+2.8 7,1+7,1

поджелуд. ж. 6,1+3,0 19,0+8,8 i 0,0+5,5 7,7+7.7-« 12.1+43 0 0 ! 4,3 5.(» i-Жз

Мониторинг IgG антител у больных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) позволил установить, что наиболее часто повышенные уровни антител определялись к антигенам грамнегативных бактерий При этом, наиболее часто, антитела определяли к КС синегнойной палочки (до 41,2%), протея (до 58,8%) и кишечной палочки (до 30,8%) С тканевыми антигенами наиболее часто имели положительные реакции сыворотки больных хроническим гепатитом, хроническим гастритом и энтероколитом (таблица 15). Для этих больных были характерны частые реакции с органонеспецифическими антигенами (н- и д- ДНК, коллагеном) и органоспецифическими антигенами желудочно-кишечной локализации У больных гепатитом в 100% случаев определяли также повышенный уровень антител к антигенам печени

Больные аутоиммунными заболеваниями более часто, чем больные с эндокринной патологией, имели повышенный уровень антител к широкому спектру УПМ (таблицы 16 и 17). Наиболее высокие уровни антител к антигенам КС многих УПМ характерны для больных системной красной волчанкой (СКВ) и ревматоидным артритом (РА). У значительной части лиц с РА наблюдали интенсивные реакции с антигенами E.coh, Р mirabilis, Yenterocolitica и Р aeruginosa У больных болезнью Бехтерева в 65,4% определяли повышенные уровни антител к К pneumoniae и в 50,0% случаев к S aureus и Spneumoniae У значительного числа больных с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы (АЗЩЖ) определяли повышенный уровень антител к Y enterocolitica (45,9%) Высокие уровни антител к Р mirabilis. Y enterocolitica и К pneumoniae, подтверждают обсуждаемую в научной литературе гипотезу о роли этих микроорганизмов в развитии таких заболеваний, как ревматоидный артрит, АЗЩЖ и болезнь Бехтерева [Newkik MM. et al, 2005, Nielen М et al, 2004, Stneder TG et al, 2003] Исключением в группе больных аутоиммунными заболеваниями были больные дерматомиозитом

Таблица 16

Результаты мониторинга [gG антител у больных с аутоиммунными Заболеваниями

Антигены в составе иммуно сорбента Частота положительных реакций (%) при заболеваниях

СКВ п=] 28 сед п=67 дм п=16 РА п=!30 б-нь Бехтерева n—26

S. aureus mm 18,7110,1 ,r7;7i3J: mmm

S.epidermidis 7,Ö±2,2 4,512,5 6,246,2 0,810.8 19.2+7.9

S.saproplwliciis 6,012,9 6,2±6.2 3.811,7 15.4+7.2

S.pneumoniae шш 13,414,2 25.0+11,2 8.5±2.4

Streptococcus spp. 0 0 3,8И,7 illfeif

M. lute us 2,311,3 1,5+1.5 0 1.1 ±23 0

P.aeruginosa 0 0 6.216,2 mtm 15,4±7,2

E.coU штт 3,0+2,1 12.518.5 mm 15,4+7,2

P. vulgaris 3. lit,5 4.5±2.5 6,216,2 3,811,7 15,4+7,2

P. mir ab Iiis 9,т:й Ж®5 12.518,5 код о 15.4+7,2

H. influenae 8,6+2,5 7,5+3,2 12,5+8,5 1,5И,1 11,5+6,4

K.pneumoniae 6,2+2.1 4,5+2,5 0 12,3+2,9 ШШШ

Y.enterocolitica 8.6-2,5 11,9.1.4.0 ¡8,7110,0 36,9; 4,2

M.catarrhal is 1ШШ ШАШ 6,216,2 1м 0

н-ДНК «Ш 1.3±1.5 0 7,7+5,3

Д-ДНК ш&щ 1,5+1.5 0 4Л, 1x4.4 15.4+7,2

коллаген 29.7,4.0 ЗЩЗ a&ra 0

эластин 6,0±2,9 6,216,2 5,412,9 7,7+5,3

сердце 6,0+2,9 0 9,212.5 7,7+5,3

легкие ЯЛ 2,0+2.1 0 0

почки 23.4:3.7 0 6.216.2 3.111.5 1ШЩ

печен 1. mm jre 6.2+6,2 5,412,0 7,7+5,3

тон .кишечник бШ, 1 6.2+6,2 0

тол. кишечник 5,5+4,1 6,0+2,9 6,216,2 5,412,0 0

гипофиз 8,6+2,5 3.0-1:2,1 6.216,2 mm 7,7±J,3

щитовидная ж. 2,3±1.3 0 0 2,3+1,3 69Ж9,2

желудок 0 0 1,5-11,1 33,,№8,4

подже.чуд ж. 1,6±i,i 0 0 3,i+l.5 mm

надпочечники 3,1 j 1,5 16.4:4.5 0 £7ЩЗ 7,7+7,2

Характерной особенностью больных с аутоиммунной и эндокринной патологией было наличие повышенных уровней антител ко многим органонеспецифическим и органоспецифическим антигенам (таблицы 16 и 17) У больных СКВ наиболее часто определяли антитела к антигенам микросомальной фракции из ткани почек, что свидетельствует о поражении почек у значительной части этих лиц Наличие у больных СКВ, РА и системной склеродермией антител не только к органонеспецифическим антигенам, но и к органоспецифическим антигенам, подтверждает наличии у таких больных органных поражений Обращает внимание частота повышенного уровня антител к антигенам ткани щитовидной железы у больных болезнью Бехтерева (таблица 16), сопоставимая с аналогичным показателем у больных АЗЩЖ (таблица 17) Это может быть свидетельством высокой частоты вовлечения щитовидной железы в патологический процесс у больных болезнью Бехтерева, или обусловлено наличием перекрестно-реагирующих антител к КС К pneumoniae Значительная часть больных АЗЩЖ имела повышенный уровень антител не только к антигенам ткани щитовидной железы, но и к другим тканевым антигенам, в том числе к антигенам тканей эндокринных органов (таблица 17), указывая на системный аутоиммунный процесс То же самое наблюдали у больных сахарным диабетом Кроме высокого уровня антител к антигенам поджелудочной железы, у них выявлены повышенные уровни антител к большинству органоспецифических антигенов (таблица 17) Больные хронической надпочечниковой недостаточностью имели повышенный уровень антител только к антигенам надпочечников (58,3%) А обследованная группа больных с первичной гипофизарной недостаточностью не имели достоверно повышенного уровня антител даже с антигенами органа-мишени

Таблица 17

Результаты мониторинга IgG антител у больных с эндокринной патологией

Антигены в Частота положительных реакций (%) при заболеваниях

составе иммуносорбента первичная гппофизарная АЗЩЖ сахарный диабет п=212 хроническая надпочниковая

недо статоч t гость п=17 п=98 недостаточность п=12

S. aureus 11,Ш,1 ШШ »,0 8.3+8.3

S.epidermidis 5,9=5.9 4,1+2,0 1,4+0,8 8.3+8,3

S.saprophyticüs 5,9+5,9 6,1+2.4 3.8+1,3 8.3±8,3

S. pneumoniae 0 8.2+2,8 5,2+1,5 О

Streptococcus spp. 0 0 0,5+0,5 0

M.I ute us 0 2,0+1,4 1,4+0,8 0

P. aeruginosa 5,9+5,9 3,1 + 1.7 1,9+0.9 0

E.coli 5,9+5,9 10,2+3,0 9,0+2.0 8,3±8,3

1', vulgaris 0 2.0+1.4 6,1 + 1,6 0

P. nur ab His 5,9+5,9 7.1+2.6 7,|±1.8 8,3+8,3

H.influenzae 5.9+5,9 7.1 ±2.6 5,7+1,6 0

¿(■pneumoniae 0 0 2,8+1,1 0

Y.enierocolitica 11,8+8,1 щшш 11,8+2,2 25.0+17,0

M.catarrhalis 11.8+8.1 ÜSfcfc8 16,7±11J

и-ДНК 0 0 0 0

Д-ДНК 0 4,1 ±2,0 1,9±0.9 0

коллаген 0 mm 25,0+13Л

эластин 17.6+9.5 ШШ Tfii&^S 8,3+8,3

сердце 5,9±5,9 5.1+2,2 9,4+Ш 8,3+8,3

легкие 0 4.1+2.0 0

почки 0 3,1+1,7 AiU+2,4. 0

печень 5,9+5,9 ■1! -2-1-3 ,2 ШШЛ. 8.3+8.3

тонк. кишечник 5,9+5,9 spfe 0

юле. кишечник 5.9+5.9 $,2+2, s 1,1+1,8 0

гипофиз 17.6+9.5 ШШ &1±),б 16,7+11,2

щитовидная ж. Ü 66,3+4,8 тщ- 0

желудок 0 22,6*2:9 16.7+11,2

гюджслуд, ж. 0 айш 17,(3+2,6 8.3+8,3

надпочечники 5,9+5,9 ШВЗ »,1+2,4 58,3+141

Разработанная нами иммуноферментная система использована для скрининга сывороток крови 130 человек в возрасте 65 лет и старше, проживающих в пансионате ветеранов труда г Москвы Возрастные особенности изменения уровня антител к тканевым и микробным антигенам представляют существенный интерес Запрограммирована ли генетически сила иммунного ответа макроорганизма и его восприимчивость к инфекционным и многим другим заболеваниям'' И может ли она меняться с возрастом9 Характерной особенностью данной группы была в несколько раз меньшая доля лиц с отсутствием повышенного уровня АТ к бактериальным антигенам (21,5% против 67,5% у доноров), а также наличие в сыворотках АТ к широкому спектру УПМ (таблица 18) Так, у 49,3% пожилых людей был повышен уровень ^О АТ к трем и более АГ УПМ, что может быть связано не только с перенесенными заболеваниями, но и контактами с различными возбудителями в течение жизни, не исключена и поликлональная стимуляция иммунной системы отдельными видами УПМ Скрининг АТ к органоспецифическим АГ внутренних органов достоверно чаще, чем у доноров (р<0,05), выявлял повышенный уровень АТ к шести АГ. Наиболее часто выраженное усиление иммунитета регистрировали с органоспецифическими АГ сердца и печени (12,3%)

Таблица 18

Распределение реакций с бактериальными и тканевыми антигенами у

лиц 65 лет и старше (п=130)

Частота ощ эеделения, (%)

Обследованные бак(-) ткан(-) бак(+) ткан(+) бак(-) ткан(+) бак(+) ткан(-) К трем и более АГ

группы бактериальным тканевым

Возрастная группа 18-64 лет-здоровые 67,5 8,2 0,2 24,1 5,2 0

Возрастная группа 65 лет и старше 0* 9,3 21,5* 69,2* 49,3* 15,4*

Примечание * - достоверные отличия (р<0,05) по сравнению со здоровыми, бак(-), ткан(-) отсутствие повышенных уровней антител к бактериальным и/или тканевым антигенам, бак(+), ткан(+) - наличие антител к ним

У пожилых людей чаще, чем у клинически здоровых лиц, регистрировали положительные реакции с антигенами щитовидной железы (р<0,05) Характерно, что у людей 65 лет и старше чаще, чем в других группах (р<0,05), определяли противотканевые АТ одновременно к широкому спектру аутоантигенов (15,4% против 0 у доноров и 5,6% - у работников Московского метрополитена) Часть лиц обследуемой группы не имела повышенного уровня АТ к УПМ, но содержала АТ к одному или нескольким тканевым АГ (21,5%), что связано, по-видимому со снижением супрессирующей функции иммунитета Часть пожилых людей, чьи сыворотки анализировали с помощью разработанных тестов, была вакцинирована вакцинами «Гриппол» и «Иммуновак ВП-4» Результаты скрининга сывороток, проведенное в динамике до и после вакцинации, показали отсутствие нарастания уровня противотканевых аутоантител (Егорова Н Б. с соавт, 2002], что свидетельствует о возможности применения разработанных тестов для изучения поствакцинального иммунитета и оценки безопасности вакцин

ВЫВОДЫ

1 Сформулированы и экспериментально обоснованы принципы конструирования иммуноферментной системы для одновременного мониторинга антител к большому спектру бактериальных и тканевых антигенов Стандартизация результатов исследования в многокомпонентной тест-системе достигается использованием единого внутреннего контроля, единого способа оценки и интерпретации результатов

2 Разработана иммуноферментная система для мониторинга антибактериальных и противотканевых антител у людей В качестве антигенов использованы клеточные стенки бактерий (14), органонеспецифические антигены (4) и антигены тканей органов человека (11) Система позволяет выявлять 1^0 антитела в сыворотке крови к видовым антигенам условно патогенных микроорганизмов, учитывая их штаммовое разнообразие,

аутоантитела к антигенам микросомальных фракций тканей различных органов и органонеспецифическим антигенам

3 Продемонстрирована перспективность использования созданной системы при мониторинге клинически здоровых людей разных возрастных групп, лиц, работающих в экологически неблагоприятных условиях и пациентов с различными формами соматической и аутоиммунной патологии

4 Установлено, что у более чем 90% клинически здоровых людей нормальные показатели уровня 1§0 антител для каждого из антигенов системы, находятся в диапазоне (ДОП) от -0,1 до +0,1 для тканевых и от -0,2 до +0,2 для бактериальных антигенов Показатели выше нормы были характерны не более чем для 5% лиц этой группы

5. Продемонстрировано, что разработанная система может быть использована для оценки влияния экологически неблагоприятных факторов При обследовании работников подземных сооружений Московского метрополитена выявлено двукратное увеличение частоты обнаружения одновременно повышенных уровней ^О антител к бактериальным и тканевым антигенам (у работников метрополитена 16,4% против 8,2% у доноров)

6 С помощью разработанной системы установлено, что у всех обследованных лиц 65 лет и старше повышены уровни антибактериальных и/или противотканевых антител Повышение уровня антител к бактериальным антигенам выявлено у 69,2%, к тканевым антигенам - у 21,5%

7 Использование системы позволяет дать комплексную характеристику спектра антибактериальных и противотканевых антител при различных видах соматической и аутоиммунной патологии преимущественное выявление повышенных уровней антител к конкретным видам условно патогенных батерий и/или тканевым антигенам, наличие повышенных уровней антител к трем и более бактериальным и/или тканевым антигенам, наличие одновременно повышенных уровней антител к бактериальным и тканевым антигенам

8 Применение системы позволяет выявлять развитие аутоиммунных процессов при многих соматических заболеваниях бронхо-легочных,

желудочно-кишечных, сердечно-сосудистых, мочевыводящей системы Во многих случаях выявление аутоантител сочеталось с выявлением антител к условно патогенным микроорганизмам (например при колите антитела к антигенам тканей толстого кишечника-58,8%, тонкого кишечника-41,2%, почек-52,9% с антителами к клеточным стенкам ЕсоЬ-23,5%, Р аег^тояа-41,2%, РгтгаЪйк-58,8%)

9 Разработанная система позволила определить, что при органоспецифических аутоиммунных заболеваниях выявляются антитела не только к антигенам органа-мишени (при сахарном диабете I типа- антитела к антигенам микросомальной фракции ткани поджелудочной железы), но и к другим органам и тканям (коллагену, эластину, почек, щитовидной железы, желудку, надпочечников)

10. Данные, полученные при мониторинге антибактериальных и противотканевых антител, позволяют рекомендовать разработанную систему для использования при отборе донорского сырья и контроле на производстве специфических иммуноглобулинов, при иммунологическом обследовании лиц, проживающих и работающих в экологически неблагоприятных условиях; при оценке распространенности аутоиммунных процессов в конкретных популяциях людей

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ястребова НЕ, Ванеева НП, Тоганбекова С К Иммуноферментный анализ антител к ДНК // Сб "Метод ИФА в биологии и медицине"- М.-1983-с 121-126.

2. Ванеева Н П., Ястребова Н Е Цветкова Н В , Хургес И С, Болыпухина Л А Сравнительный иммуноферментный анализ сывороток на наличие антител к препарату тейхоевых кислот золотистого стафилококка и ДНК // Журн. микробиол - 1985 -№1-с 33-35

3 Ванеева Н П, Ястребова Н.Е Цветкова Н В , Уразгильдиев 3 И, Шакина Ю Г Выявление антител к тейхоевым кислотам золотистого

стафилококка в сыворотках больных остеомиелитом // Журн микробиол. - 1985- №1 - с, 49-51

4 Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Демин А А, Дробышева В П, Корчова И, Межевитинов В В., Поляченко И Г Иммуноферментный анализ антител к нативной и денатурированной ДНК//Иммунология-1987-№5 -с 7375

5 Ванеева Н П, Ефремова В.Н, Шагам Н.Л, Ястребова Н Е, Каверина К Г Исследование перекрестных реакций между золотистым стафилококком и менингококком // Журн микробиол - 1988 - №1. - с. 58-61

6 Ястребова Н Е Ванеева Н П Выявление аутоантител к ДНК в сыворотках людей с помощью ИФА // Сб «Применение иммуноферментного анализа в медицине» - 1989 - Харьков - С. 23-24

7 Ястребова Н Е Ванеева Н П. Аутоантитела к ДНК и иммуноферментный метод их определения // Сб Трудов НИИВС им Мечникова «Иммуноферментный анализ в диагностике заболеваний» - М.- 1989,- с 110-125

8 Ястребова Н Е., Ванеева Н П Диагностическая значимость ИФ-систем на основе золотистого стафилококка и ДНК // Тез Республиканской конференции "Новые методы диагностики СПИД, др вирусных и бактериальных инфекций в практике инфекционистов и противоэпидемиологической службы", Алушта - 1990 - с. 32-33

9 Ковалева В Н., Ястребова Н Е. Изучение показателей уровня антител к ДНК при диффузных болезнях соединительной ткани у детей // Сб «Современные аспекты диффузных болезней соединительной ткани у детей» - М.-1991 - с 34-36

10 Кричевская Г.И, Лихванцева ВГ, Аджелов ВО, Егорова ЭВ, Ястребова Н Е , Ванеева Н П Способ прогнозирования воспалительных осложнений при экстракции катаракты.// Патент № 1649442,1994 г

11 Ястребова Н Е, Ванеева Н.П., Царев В.Н., Ушаков Р В. Применение твердофазного ИФ-анализа для диагностики гнойной инфекции челюстно-лицевой области, вызванной Bacteriodis melamnogemcus и Staphylococcus aureus // Журн микробиол. - 1994,- №4 - с 49-51

12.Yastrebova N.E, Vaneeva N Р, Romanova R Y Autoantibody spectrum in tuberculosis // The official J of the international union against tuberculosis and lung disease. October, 1995 - Vol 76. -Suppl 2. - p. 26

13.Ястребова HE Ванеева НП, Романова РЮ Антитела к органоспецифическим и органонеспецифическим антигенам в сыворотках крови людей, больных бронхолегочными заболеваниями // Журн микробиол -1995 -№6-с 67-68.

14Ястребова НЕ, Ванеева НП, Кудряшова НМ Спектр аутоантител различной специфичности в сыворотках крови больных СКВ // Сб «Иммунодиагностика и иммунотерапия» Витебск, Международная конференция -1995 - с 174-175

15 Царев В.Н., Ястребова Н.Е, Ванеева НП, Калинин ЮА. Применение иммуноферментного анализа для диагностики анаэробной инфекции челюстно-лицевой области // Стоматология - 1995 - №1 - т 74 - с 3840.

16.Ястребова Н Е Ванеева Н П, Логина Н Ю, Серова Т.А Способ диагностики аутоиммунных расстройств // Патент № 2059245, 1996г

17 Мигунов В М, Ястребова Н Е, Ванеева Н П Естественные аутоантитела в препаратах иммуноглобулина противоаллергического и нормального из плазмы крови человека//Сб трудов 1-ой национальной конференции Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии» - М - 1997,- с 292

18 Дубровская Т А, Лебедев С В, Ванеева Н П, Ястребова Н Е, Турина О И., Грибова И Е Иммуноферментный скрининг бактериальных

антител в сыворотках крови работников московского метрополитена // Журн микробиол.-1999 -№2 -с 87-89.

19 Дубровская Т.А., Лебедев С В , Ванеева Н П, Ястребова Н Е, Овечко НН Исследование антибактериального иммунитета у работников московского метрополитена // Сб трудов научно-практической конференции «Актуальные проблемы здравоохранения на железнодорожном транспорте»- М -1999 — с. 99-100

20 Ястребова Н Е, Ванеева Н.П, Цветкова Н.В, Овечко Н.Н., Лебедь Н Е., Елкина С.И, Сергеев В В Характеристика скринингового иммуноферментного теста и определение антител к условно-патогенным бактериям // Аллергия, астма и клиническая иммунология - 1999 - №9 -с. 148-151

21 Klychkova Е, Yastrebova N, Vaneeva N., Padyukov L Specific and nonspecific immunity in acute and chronic lung diseases //Scandinavian J of Immunology-1999 -№3 - v 50 -p 328

22 Padyukov L, Klychkova E, Yastrebova N, Vaneeva N. Antibodies to gram positive and gram negative bacteria m the patients with chronic bronchtis and COPD//Scandinavian J of Immunology - 1999 - №3.-v 50.-p 329

23 Поддубиков А В, Ястребова H E., Ванеева H П, Лебедь Н Е Характеристика активности антител к тканевым антигенам гормон продуцирующих органов у доноров крови // Сб «Проблемы инфекционных болезней» - 2000 - ч 2. - с 41-45.

24 Лебедь Н Е, Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Поддубиков А В Определение антител к Y enterocohtica в сыворотках крови доноров //Сб «Проблемы инфекционных болезней» - 2000 - ч.2 - с. 35-38

25 Ushakova М I., Muravyev V А, Yastrebova N В., Maslova I.I, Zacharova N Е Does Proteus mirabilis is an etiologic factor of Rheumatoid arthritis // 28th Scandinavian congress of Rheumatology Turku-Finland congress - 2000. -IX -p 171-172.

26 Ястребова Н Е, Ванеева Н П., Цветкова Н В , Ляшова В.Н, Поддубиков А В, Котосова Л.К, Сничак Т В Изучение диагностических возможностей скринингового иммуноферментного теста для определения антител к условно патогенным бактериям // Аллергия, астма и клиническая иммунология - 2001 -№1 -с 138-143

27. Лебедь Н Е , Поддубиков А В , Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Захарова НЕ Специфические противоиерсинеозные антитела классов G и М у здоровых доноров крови и больных пищевой токсикоинфекцией // Журн микробиол -2001 -№2. - с 87-89

28 Маркина О А, Ястребова Н Е, Ванеева Н П Аутоантитела у детей с хроническими воспалительными заболеваниями легких // Журн микробиол -2001 - Кеб -с 52-56

29 Ястребова Н Е., Ванеева Н П Комплексные скрининговые тест-системы для изучения состояния гуморального иммунитета //Медицинская иммунология - 2002. - №2 - с 171.

30 Поддубиков А.В, Васильева Г., Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Костинов М П, Лыскина Г А. Специфический гуморальный иммунитет у больных диффузными болезными соединительной ткани // Сб трудов 5го конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» -М-2002 -т2-с 112

31 Маркина О А, Ястребова Н Е, Ванеева Н П., Степанян И Э Антитела к цитокератину-8 у больных различной легочной патологией // Журн. микробиол -2002 - №5 -с 76-78

32 Маркина О А, Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Волков И К. Распространенность аутоиммунных нарушений среди детей с хроническими воспалительными заболеваниями легких И Intern J of Immunoreabihtation -2002.-v3 -Jfsl.-c 68

33 Ястребова H E, Ванеева H П., Цветкова H В , Поддубиков А.В Специфический гуморальный иммунитет у больных болезнью Бехтерева

// Сб трудов 5го конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» - М - 2002. - т 2. - с. 187

34 Ястребова Н Е Ванеева Н.П, Поддубиков А В. Перекрестные реакции между антигенными препаратам щитовидной железы и У еп1егосо1Шса // Материалы научно-практической конференции "Актуальные вопросы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия и охраны здоровья населения центрального региона России» - Смоленск - 2002г -с. 321-323.

35 Егорова НБ, Семёнов БФ., Курбатова ЕА, Ястребова НЕ, Поддубиков А В , Ефремова В Н., Семенова И.Б. Динамика аутоантител у пожилых людей в процессе вакцинации Грипполом и поликомпонентной вакциной ВП-4 // Журн микробиол - 2002 - №5 - с 29-35

36 Ванеева Н П., Ястребова Н Е , Елкина С И, Цветкова Н В , Сергеев В В , Калина Н Г. Способ одновременного выявления ^О антител к антигенам условно патогенных бактерий в сыворотке крови человека для определения состояния гуморального иммунитета // Патент № 2213972, -2003 г

37 Поддубиков АВ, Ванеева НП, Ястребова Н.Е, Маркина О А., Цветкова Н В Способ оценки состояния гуморального органоспецифического иммунитета при аутоиммунных заболеваниях и состояниях // Патент № 2213971, - 2003г

38 Орлова М Л., Шобухова Т С , Ястребова Н Е., Санков М.Н, Мигунов ВН Иммунохимический анализ антибактериальных антител в плазме крови доноров // Медицинская иммунология - 2003 - том 5. - № 3-4 - с 315-316

39 Поддубиков А В , Ястребова Н Е., Ванеева Н П, Маркина О А, Цветкова НВ К разработке комплексного иммуноферментного теста для определения антител к некоторьм органоспецифическим антигенам

гормонпродуцирующих органов // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 2003. - №9 - с. 167-172

40 Ястребова Н Е, Биткова Е Е, Михайлова Н А, Хватов В Б , Ванеева НП, Годков МА Иммуноферментаый скрининг антибактериальных антител как метод отбора сывороточного сырья для производства иммуноглобулинов направленного действия // Сб материалов Всероссийской научной конференции „Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке".- Пермь - 2003. - с. 147-150.

41 Маркина О А, Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Ляшова В Н, Овечко Н Н Перекрёстные взаимодействия между антигенами здоровой лёгочной ткани и МсаШггИак$ II Журн микробиол - 2004. - №4 - с 40-43.

42.Маркина О А, Ястребова Н Е, Ванеева Н П, Ляшова В Н Особенности гуморального иммунитета больных криптогенным фиброзирующим альвеолитом // Журн. микробиол - 2004. - №5 - с 76-80.

43 Ястребова Н Е, Ванеева Н П Принципы создания скрининговых иммуноферментных систем для оценки состояния гуморального иммунитета // Тезисы докладов Объединенного иммунологического форума - Екатеринбург. - 2004. -май-июнь - с 94

44 Поддубиков А В, Ястребова Н Е, Ванеева Н П Перекрестные реакции между тканевыми антигенами и антигенами условно патогенных бактерий II Тезисы докладов Объединённого иммунологического форума.-Екатеринбург -2004 - май-июнь.-с 177.

45 Орлова М Л, Мигуиов В Н, Орлова Г К Ястребова Н Е, Темпер Р М, Шулутко ЕМ, Седова А А, Дергунова НН Новые методические подходы к оценке эффективности применения свежезамороженной плазмы у больных сепсисом в отделении реанимации и интенсивной терапии // Сб научных трудов «Клиническая трансплантология органов» -М. -2005 - с 166-168

46 Баснакьян И А , Алексахина Н Н., Ястребова Н Е, Ванеева Н П Менингококк в состоянии стресса перекрестно реагирует с антигенами

других бактерий и человека // Эпидемиология и инфекционные болезни -2005 -№3 - с. 9-14.

47 Орлова М.Л, Мигунов В Н, Орлова Г К., Ястребова Н Е, Санков М Н, Шулутко ЕМ, Седова А А, Дергунова НН Методы определения содержания антител в плазме (сыворотке) крови к условно патогенным бактериям // Материалы Первой Международной научной конференции «Донозология-2005» - июнь 2005г. - Санкт-Петербург - С 252-254

48 Баснакьян И А, Алексахина Н Н., Ястребова Н Е, Ванеева Н П Экспериментальный вакцинный препарат из Klebsiella pneumoniae фазы замедления скорости роста перекрестно реагирует с антигенами других бактерий//Эпидемиология и вакцинопрофилактика -2005 - №5 - с 3743.

49 Теплинская JI.E, Ястребова Н Е., Ветров Ю Д, Ванеева Н П Иммунологическая аутоагрессия у больных диабетической ретинопатией при сахарном диабете! типа//Журн. микробиол -2006 - №7 - с 59-62

50Ястребова НЕ. Мониторинг антибактериальных и противотканевых антител у людей 65 лет и старше // Медицинская иммунология - 2007. -т 9 -№2-3 -с 317

51.Ястребова НЕ Результаты мониторинга антибактериальных и противотканевых

антител у здоровых и больных различными заболеваниями людей // Журн микробиол - 2007. - №3 - с 42-47

Формат 60x84 1/16, Уел Печ Лист 3 Подписано в печать 15 08 07 г Тираж 100 экз Заказ № 2401 Отпечатано в типографии «АллА Принт» Тел (495) 621-86-07, факс (495) 621-70-09 мутуй'аИартйги

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Ястребова, Наталия Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ - КАК ИНФОРМАЦИОННАЯ СИСТЕМА ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ КРИТИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЙ ПРИРОДНОЙ СРЕДЫ НА ЗДОРОВЬЕ

ЧЕЛОВЕКА

Глава 2. РОЛЬ УСЛОВНО ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ В ПАТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА И ОСОБЕННОСТИ АНТИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА К

Глава 3. ОСНОВНЫЕ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РАЗВИТИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АУТОАНТИТЕЛ

3.1. Основные патогенетические факторы развития аутоиммунных заболеваний

3.2. Циркулирующие аутоантитела и их роль в диагностике аутоиммунных заболеваний

ЧАСТЬ 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 1. МАТЕРИАЛЫ

1.1. Штаммы условно патогенных микроорганизмов

1.2. Биоматериал

1.3. Коммерческие препараты

1.4. Сыворотки животных

1.5. Сыворотки людей

Глава 2. МЕТОДЫ

2.1.Получение препаратов антигенов условнопатогенных бактерий

2.2. Получение препаратов антигенов органов мишеней

2.3 Метод получения гипериммунных сывороток к антигенам органов мишеней

2.4. Методы химического анализа препаратов

2.5. Световая микроскопия

2.6. Методы иммунохимического анализа

2.7. Методы математической и статистической обработки результатов исследований

ЧАСТЬ 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 1. ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ СОЗДАНИЯ СКРИНИНГОВЫХ ТЕСТОВ ДЛЯ МОНИТОРИНГА СПЕЦИФИЧЕСКИХ ^ АНТИТЕЛ К БАКТЕРИАЛЬНЫМ И ТКАНЕВЫМ АНТИГЕНАМ

1.1 Определение широкого спектра специфических антител - один из важных принципов оценки иммунного статуса человека

1.2 Обоснованный выбор антигенов для комплексных тестов - важный принцип определения антител видовой (УПБ) и органной (ткани различных органов человека) специфичности

1.3 Использование единого внутреннего контроля - важный принцип создания мультимедийных тест-систем

1.4 Единый способ оценки результатов ИФА — важный принцип унификации комплексных тест-систем

Глава 2. РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОЙ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ МОНИТОРИНГА АНТИТЕЛ К УСЛОВНО ПАТОГЕННЫМ БАКТЕРИЯМ И ТКАНЕВЫМ АНТИГЕНАМ

2.1 Получение иммуносорбентов

2.2 Определение рабочих разведений сывороток и конъюгата при анализе ^О антител различной специфичности

2.3 Определение длительности контакта компонентов иммуноферментной реакции

2.4.Характеристика аналитической надежности комплексной иммуноферментной системы для мониторинга антибактериальных и противотканевых IgG антител

Глава 3. ИЗУЧЕНИЕ ИНФОРМАТИВНОСТИ . РАЗРАБОТАННОЙ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ СИСТЕМЫ

3.1.Мониторинг антител различной специфичности в популяции клинически здоровых людей

3.2,Мониторинг антител у людей, пребывающих в неблагоприятных экологических и гигиенических условиях (на примере анализа антител у работников Московского метрополитена)

3.3.Особенности адаптивного иммунитета у лиц 65 лет и старше

3.4. Мониторинг антител у больных различными заболеваниями людей

Введение Диссертация по биологии, на тему "Система для мониторинга антител к условно патогенным бактериям и аутоантител. Опыт ее применения"

Со второй половины 20-го века для решения многих вопросов теоретической и практической медицины широко используется мониторинг. Термин мониторинг применяется для обозначения «целенаправленной деятельности, связанной с постоянным или периодическим наблюдением, оценкой и прогнозом состояния наблюдаемого объекта (процесса, явления, системы) в целях его развития в желаемом направлении» [10]. Как показывает анализ литературы с помощью мониторинга можно получить и получают ответы на многие вопросы, актуальные для решения теоретических и прикладных вопросов здравоохранения.

Так, с помощью мониторинга показано, что вакцинопрофилактика, с охватом прививками 95% детей первых лет жизни, позволила существенно снизить уровень массовых детских инфекций [18]. В 2002 году в Европе ликвидирован полиомиелит [59], существенно снижена заболеваемость корью, дифтерией и т.д.[69]. В 2005 году в России было зарегистрировано 0,25 случаев дифтерии (в довакцинальный период 140,7) и 0,29 случаев кори на 100 тыс. населения (в довакцинальный период -1200) [18, 33].

Однако, в настоящее время, на смену управляемым инфекциям приходят заболевания, вызываемые условно патогенными микроорганизмами, которые ассоциированы с развитием многих соматических заболеваний, внутрибольничных инфекций, а также аутоиммунных процессов [55, 91, 98, 179, 190, 213, 383]. В отличие от инфекций, возбудителями которых являются патогенные микроорганизмы, при всех заболеваниях, вызванных УПБ, их выделение от больного ещё не доказывает их этиологическую значимость [45, 50]. Между тем, в настоящее время, число заболеваний, в патогенезе которых велика роль УПБ, неуклонно растет.

На протяжении многих лет, аутоиммунные болезни составляют одну из главных нерешенных проблем в клинической медицине. Данное положение обусловлено, прежде всего, недостаточным объемом знаний в области этиологии, патогенеза и диагностики аутоиммунных заболеваний и как следствие этого - невозможностью выработки концепций специфической терапии и профилактики. В условиях физиологической нормы постоянно синтезируются естественные аутоантитела, разной антигенной специфичности, играющие важную роль в поддержании гомеостаза организма. Однако, мониторинга естественных антител различной специфичности практически не проводилось.

В настоящее время большое значение придается участию микроорганизмов в развитии аутоиммунных заболеваний. Это обосновывается наличием у многих микроорганизмов антигенов, обладающих некоторым структурным сходством с антигенами тканей человека. Такие микроорганизмы могут индуцировать образование антител перекрестно реагирующих с антигенами тканей человека, что возможно как при манифестной, так и бессимптомной инфекции [34, 81, 86, 92, 98, 105, 149, 426]. Определение аутоантител является высокоинформативным и надежным инструментом в руках клиницистов самых разных специальностей для диагностики и мониторирования заболеваний аутоиммунной природы, составивших по данным ВОЗ, около трети от общего числа нозологий [148, 150, 156, 158, 244, 295, 297, 300]. Хорошо известно, что при развитии аутоиммунного процесса могут одновременно образовываться как органонеспецифические, так и органоспецифические антитела [312, 350].

Сказанное свидетельствует о том, что мониторинг антител к УПБ должен обязательно сочетаться с определением аутоантител. Решение поставленной задачи требует создания многокомпонентной системы, позволяющей одновременно определять антитела как к доминирующим на современном этапе УПБ, так и к широкому кругу аутоантигенов человека.

Для решения такой задачи мы использовали метод твердофазного ИФА с сорбцией на отдельных стрипах полистирольного планшета различных антигенных препаратов, что позволило провести комплексную оценку уровня антител.

Целью исследования явилось создание и оценка эффективности иммуноферментной системы для одновременного мониторинга антител к антигенам условно патогенных бактерий и аутоантител к антигенам основных органов-мишеней и органонеспецифическим антигенам человека.

Задачи:

1 .Сформулировать и обосновать принципы создания скрининговых иммуноферментных тестов для мониторинга специфических антител к бактериальным и тканевым антигенам.

2.Разработать на основе сформулированных принципов иммуноферментную тест-систему для мониторинга ^О антител к условно патогенным бактериям.

3. Разработать иммуноферментную тест-систему для мониторинга ^О антител к различным антигенам тканей органов человека и органонеспецифическим антигенам.

4.Провести мониторинг антител к условно патогенным бактериям и тканевым антигенам в различных группах клинически здоровых людей и работающих в экологически неблагоприятных условиях.

5.Провести мониторинг антител к условно патогенным бактериям и тканевым антигенам в группах больных различными формами соматической и аутоиммунной патологии.

Научная новизна

1. Впервые определены, научно обоснованы и реализованы принципы разработки иммуноферментной системы для мониторинга широкого спектра антител:

-использование в едином тесте модулей различной специфичности; -применение антигенов, обладающих видовой (клеточные стенки условно патогенных бактерий) и органной (микросомальные субклеточные фракции) специфичностью; -применение единого внутреннего контроля;

-применение единого способа выражения и оценки результатов ИФА.

2. Впервые разработана система для мониторинга антител к условно патогенным бактериям и к тканевым антигенам. Максимально унифицированная система впервые дает возможность определять специфические 1§С антитела в едином тесте к антигенам 14-ти видов условно патогенных бактерий, 4-м органонеспецифическим и 11 -ти антигенам органов-мишеней.

3. Продемонстрирована перспективность использования разработанной системы для мониторинга антител у клинически здоровых людей, лиц, работающих в экологически неблагоприятных условиях, лиц 65 лет и старше, пациентов с различными формами соматической, аутоиммунной и эндокринной патологии.

4. Впервые определены нормальные уровни 1§0 антител для каждого из антигенов системы, которым соответствуют показатели разности оптической плотности (ДОП) в сыворотках 90% клинически здоровых людей: от -0,1 до +0,1 для тканевых и от -0,2 до +0,2 для бактериальных антигенов. Показатели выше нормы были характерны не более чем для 5% лиц этой группы.

5. Впервые показано, что разработанная система может быть использована для оценки влияния экологически неблагоприятных факторов. Обследование работников подземных сооружений Московского метрополитена выявило двукратное увеличение частоты обнаружения повышенных уровней антител одновременно к бактериальным и тканевым антигенам (у работников метрополитена 16,4% против 8,2% у доноров, р<0,05).

6. Впервые дана комплексная характеристика спектра антибактериальных и противотканевых антител при различных видах соматической и аутоиммунной патологии:

- показано преимущественное наличие повышенных уровней антител к конкретным видам условно патогенных микроорганизмов и/или тканевым антигенам;

- выявлено наличие повышенных уровней антител к трем и более бактериальным и/или тканевым антигенам (от 17,0% до 34,4% у больных против 5,2% у здоровых к бактериальным и от 13,3% до 30,2% у больных против 0%о у здоровых к тканевым антигенам);

- выявлено наличие одновременно повышенных уровней антител к бактериальным и тканевым антигенам (35,1 % при аутоиммунных заболеваниях против 8,2% у здоровых).

7. Показано, что аутоиммунные процессы являются составляющей патогенеза многих соматических заболеваний: бронхолегочных, желудочно-кишечных, сердечно-сосудистых, мочевыводящей системы. При различных заболеваниях наличие аутоантител сопровождалось выявлением антител к условно патогенным бактериям (например: у больных колитом определяли антитела к антигенам тканей толстого кишечника-58,8%, тонкого кишечника-41,2%, почек-52,9% и клеточным стенкам Е.соН-23,5%, Р.аегщтоза-41,2%, /ЪшУ а 6 /7« - 5 8,8 %).

8. Разработанная система позволила установить полиорганный характер органоспецифических аутоиммунных заболеваний: выявлен высокий уровень аутоантител не только к антигенам органа-мишени, но и к другим органам и тканям:

- при сахарном диабете I типа- антитела к антигенам микросомальной фракции ткани поджелудочной железы, коллагену, эластину, почек, щитовидной железы, желудку, надпочечников;

- при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы -антитела к эластину, коллагену, а также к микросомальным фракциям тканей щитовидной железы, желудка, надпочечников, поджелудочной железы.

Практическая ценность

Разработана скрининговая тест-система для определения IgG антител: к антигенам клеточных стенок 14 представителей условно патогенных бактерий (S aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus, S.pneumoniae, Streptococus sp., M.luteus, E.coli, P.vulgaris, P.mirabilis, P.aeruginosa, H.influenzae, K.pneumoniae, Y.enterocolitica, M.catarrhalis); к 4 органонеспецифическим антигенам (н-ДНК, д-ДНК, эластин, коллаген); к 11 органоспецифическим антигенам (миокард, легкое, почки, печень, тонкий и толстый кишечник, желудок, гипофиз, щитовидная железа, поджелудочная железа, надпочечник).

Разработанную тест-систему можно использовать для: контроля содержания антител к антигенам условно патогенных бактерий в сыворотке крови доноров; эколого-иммунологического мониторинга лиц, проживающих и работающих в неблагоприятных условиях; выявления неблагополучия в состоянии иммунитета у лиц с различными заболеваниями; для наблюдения за эффективностью проводимого лечения, для выявления распространенности аутоиммунного процесса и его преимущественной направленности; в научных исследованиях в области биологии и медицины.

Система прошла экспертизу и контроль в ГИСК им. Тарасевича. Рекомендована комитетом иммунобиологических препаратов к регистрации в РФ (протокол №10 от 24.12.2003 г.). Система и документация полностью готовы к передаче на производство. Лабораторные серии системы использованы для научных исследований в гематологическом научном центре РАМН, ФГУ МНИИ глазных болезней им. Гельмгольца Росздрава и др.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Основными принципами создания системы для мониторинга антител к бактериальным и тканевым антигенам являются: использование широкого спектра антигенов, позволяющих проводить комплексную оценку специфического гуморального иммунитета (мультимедийность); применение в качестве антигенов условно патогенных бактерий клеточных стенок, содержащих видовые антигены, а в качестве тканевых антигенов - микросомальных фракций, содержащих основные органоспецифические АГ; использование единого внутреннего контроля и единого способа выражения результатов ИФА, позволяющих унифицировать оценку результатов определения антител любой специфичности.

2. Разработанная иммуноферментная система на основе антигенов 14 представителей условно патогенных бактерий, 4 органонеспецифических и 11 антигенов органов мишеней, обладает высокой чувствительностью (>90%), специфичностью (>95%) и надежностью (коэффициент вариации < 8%).

3. Мониторинг сывороток клинически здоровых людей свидетельствует, что более 90% сывороток имеют показатели разности оптической плотности (ДОП) от -0,1 до +0,1 для тканевых антигенов, и от -0,2 до +0,2 для бактериальных антигенов, что позволило принять указанный диапазон за норму. Повышенный уровень АТ к бактериальным, а также к тканевым АГ наблюдается, как правило, не более, чем в 5% случаев.

4. Показатели адаптивного иммунитета у людей, больных различными заболеваниями, достоверно отличаются от таковых у клинически здоровых по спектру определяемых антител; по существенно меньшей доле людей с нормальными показателями уровня антител к бактериальным и тканевым антигенам (от 22,9% до 42,8% у больных и

67,5% у здоровых); по количеству людей с повышенным уровнем антител к трем и более бактериальным (от 17,0% до 34,4% у больных и 5,2% у здоровых) или тканевым антигенам (от 11,6% до 30,2% у больных и 0% у здоровых); по частоте определения высокого уровня антител одновременно к бактериальным и тканевым антигенам (35,1% у больных АИЗ против 8,2%) у здоровых).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 51 печатная работа, из них 23 в журналах, рекомендованных ВАК РФ, получены 4 патента РФ на изобретения.

Основные результаты работы доложены и обсуждены

На 5-м конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002г); Международном конгрессе «Современные методы диагностики и лечения аллергии, астмы и иммунодефицитов» (Тбилиси, Грузия, 1999г.); III съезде иммунологов России (Сочи,2000г.); заседании секции медицинской микробиологии и химиотерапии в МНИИЭМ им. Габричевского (Москва, 2001 г); IV и V Всероссийской научной конференции «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (С-Петербург, 2002, 2003гг); 3 Международном конгрессе по аутоиммунитету (Женева, Швейцария, 2002г); научно-практической конференции «Актуальные вопросы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия и охраны здоровья населения центрального региона России» (Смоленск, 2002г); Российской научно-практической конференции «Эпидемиологический надзор и социально-гигиенический мониторинг» (Москва, 2002г); Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке» (Пермь, 2003г.); Объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004г.); 1-ой Международной научной конференции

Донозология 2005» (Санкт-Петербург, 2005г.); 1-ой Московской международной конференции «Естественный аутоиммунитет в норме и патологии» (Москва, 2005г); 5-й международной конференции «Актуальные аспекты экстракорпорального очищения крови в интенсивной терапии» (Москва, 2006); 6-м съезде гематологов и трансфузиологов Республики Беларусь (Минск, 2007).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Ястребова, Наталия Евгеньевна

выводы

1. Сформулированы и экспериментально обоснованы принципы конструирования иммуноферментной системы для одновременного мониторинга антител к большому спектру бактериальных и тканевых антигенов. Стандартизация результатов исследования в многокомпонентной тест-системе достигается использованием единого внутреннего контроля, единого способа оценки и интерпретации результатов.

2. Разработана иммуноферментная система для мониторинга антибактериальных и противотканевых антител у людей. В качестве антигенов использованы клеточные стенки бактерий (14), органонеспецифические антигены (4) и антигены тканей органов человека (11). Система позволяет выявлять антитела в сыворотке крови к видовым антигенам условно патогенных микроорганизмов, учитывая их штаммовое разнообразие, аутоантитела к антигенам микросомальных фракций тканей различных органов и органонеспецифическим антигенам.

3. Продемонстрирована перспективность использования созданной системы при мониторинге клинически здоровых людей разных возрастных групп, лиц, работающих в экологически неблагоприятных условиях и пациентов с различными формами соматической и аутоиммунной патологии.

4. Установлено, что у более чем 90% клинически здоровых людей нормальные показатели уровня антител для каждого из антигенов системы, находятся в диапазоне (АОП) от -0,1 до +0,1 для тканевых и от -0,2 до +0,2 для бактериальных антигенов. Показатели выше нормы были характерны не более чем для 5% лиц этой группы.

5. Продемонстрировано, что разработанная система может быть использована для оценки влияния экологически неблагоприятных факторов. При обследовании работников подземных сооружений Московского метрополитена выявлено двукратное увеличение частоты обнаружения одновременно повышенных уровней антител к бактериальным и тканевым антигенам (у работников метрополитена 16,4% против 8,2% у доноров).

6. С помощью разработанной системы установлено, что у всех обследованных лиц 65 лет и старше повышены уровни антибактериальных и/или противотканевых антител. Повышение уровня антител к бактериальным антигенам выявлено у 69,2%, к тканевым антигенам - у 21,5%.

7. Использование системы позволяет дать комплексную характеристику спектра антибактериальных и противотканевых антител при различных видах соматической и аутоиммунной патологии: преимущественное выявление повышенных уровней антител к конкретным видам условно патогенных батерий и/или тканевым антигенам; наличие повышенных уровней антител к трем и более бактериальным и/или тканевым антигенам; наличие одновременно повышенных уровней антител к бактериальным и тканевым антигенам.

8. Применение системы позволяет выявлять развитие аутоиммунных процессов при многих соматических заболеваниях: бронхо-легочных, желудочно-кишечных, сердечно-сосудистых, мочевыводящей системы. Во многих случаях определяли повышенные уровни аутоантител и антител к условно патогенным микроорганизмам (например: при колите антитела к антигенам тканей толстого кишечника-58,8%, тонкого кишечника-41,2%, почек-52,9% и антитела к клеточным стенкам Е.соИ-23,5%, Р.аегщтоаа-41,2%о, Р. /ш"га№-58,8%).

9. Разработанная система позволила определить, что при органоспецифических аутоиммунных заболеваниях выявляются антитела не только к антигенам органа-мишени (при сахарном диабете I типа- антитела к антигенам микросомальной фракции ткани поджелудочной железы), но и к другим органам и тканям (коллагену, эластину, почек, щитовидной железы, желудку, надпочечников).

10. Данные, полученные при мониторинге антибактериальных и противотканевых антител, позволяют рекомендовать разработанную систему для использования при отборе донорского сырья и контроле на производстве специфических иммуноглобулинов; при иммунологическом обследовании лиц, проживающих и работающих в экологически неблагоприятных условиях; при оценке распространенности аутоиммунных процессов в конкретных популяциях людей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время в исследованиях, проводимых для оценки влияния на организм человека различных неблагоприятных факторов, широко применяется метод мониторинга. Первостепенное значение приобретает иммунологический мониторинг, так как иммунная система является индикатором ранних неблагоприятных изменений, происходящих в организме под воздействием различных факторов внешней среды, в том числе под воздействием микроорганизмов. Иммунологический мониторинг является одним из главных методических приемов иммунологии, позволяющим оценить выполнение иммунной системой своей задачи по распознаванию и элиминации чужеродных агентов экзогенной и эндогенной природы. Известно, что самыми распространенными и «проблемными» являются заболевания, вызываемые условно патогенными микроорганизмами. Болезнь развивается незаметно для человека и первые ее симптомы, возникают через промежуток времени после начала патологического процесса, что объясняется наличием и активацией системы компенсаторно-приспособительных реакций, являющихся одним из основных механизмов адаптационных процессов. Профилактика, диагностика и лечение этих заболеваний являются одной из самых серьезных задач современной медицины. Мониторинг показателей адаптивного иммунитета, в том числе специфических антител, может быть важным инструментом для получения данных о состоянии специфического иммунитета у здоровых и больных различными заболеваниями людей.

Одним из высокочувствительных и специфичных методов определения активности антител является иммуноферментный анализ. Тест-системы на его основе используются во всех областях медицинской науки. Известны тесты для диагностики различных бактериальных инфекций, аутоиммунных заболеваний [6, 12, 24, 39, 45, 51]. В основе каждого из них лежат антигенные препараты разной структуры, полученные различным путём. Каждый из тестов имеет свой критерий оценки результатов ИФА, что не позволяет одновременно применять их для массовых исследований для оценки активности антител различной специфичности в одном образце сыворотки.

Нами разработана и создана иммуноферментная система для мониторинга антибактериальных и противотканевых антител. Система позволяет выявлять антитела к видовым антигенам условно патогенных бактерий, учитывая их штаммовое разнообразие; аутоантитела к органонеспецифическим антигенам и антигенам микросомальных фракций различных органов мишеней. В иммуносорбенте использованы клеточные стенки бактерий, органонеспецифические антигены и комплекс антигенов органов человека. Выбор объектов для создания тест-системы обусловлен распространённостью условно патогенных микроорганизмов, которые являются наиболее частой причиной многих заболеваний человека, в том числе, таких тяжелых, как пневмония, сепсис, эндокардит, менингит и др [17]. В силу молекулярной мимикрии условно патогенные бактерии могут быть триггерами аутоиммунных заболеваний и расстройств, а экологически неблагоприятные условия труда и проживания способствуют росту этих заболеваний среди населения промышленных городов [71].

В ходе исследований нами сформулированы основные принципы создания скрининговых иммуноферментных систем: возможность анализа на одной пластине антител различной специфичности (мультимедийность теста); выбор антигенов, обладающих видовой (бактерии) и органной (ткани различных органов человека) специфичностью с унифицированным способом выделения; использование единого внутреннего контроля и единого критерия оценки результатов анализа.

Использование твердофазного ИФА с сорбцией различных антигенных препаратов на отдельных стрипах полистирольного планшета, дает возможность проводить анализ антител различной специфичности одновременно на одной пластине. Применение для этих целей отдельных диагностических препаратов не оправдано, поскольку не позволяет проводить комплексную оценку этих показателей.

Вторым принципом разработки иммуноферментных тестов, сформулированным нами, является выбор антигенов. Для определения антител к условно патогенным бактериям мы использовали препараты клеточных стенок, так как антигены КС, наряду с капсульными антигенами и экзотоксинами, играют важную роль в патогенезе заболеваний, вызываемых УПБ. Видовую специфичность в составе КС грампозитивных микроорганизмов имеют пептидогликаны и тейхоевые кислоты, а у грампегативных бактерий - белки наружной мембраны [100, 316]. Применение отдельных видовых антигенов потребовало бы разработки специальных методов их выделения, очистки и стандартизации [6, 24, 68].

Использование для выделения антигенов нескольких штаммов, принадлежащих одному виду, а также гипериммунных сывороток к бактериям различных видов и сероваров в реакции торможения ИФА показало, что препараты клеточных стенок обладают видовой специфичностью. Подтверждением наличия в составе клеточных стенок видовых эпитопов является высокая видовая чувствительность теста на их основе, выявленная нами при анализе сывороток крови больных с подтвержденной бактериологическими методами этиологией того или иного заболевания (табл.19).

При получении препаратов клеточных стенок важно было избежать присутствия в их составе примеси Б-специфических липополисахаридов, что достигалось использованием бактерий в Я-форме или применением специальных химических манипуляций. Использование в качестве антигенов для ИФА препаратов клеточных стенок, выделенных по единой методике из многих видов бактерий, способствует объективной оценке уровней антител у клинически здоровых и больных различными заболеваниями людей.

В качестве органонеспецифических антигенов были использованы коммерческие препараты ДНК, эластина и коллагена, выпускаемые зарубежными фирмами.

В качестве препаратов органоспецифических антигенов нами использованы микросомальные фракции, выделенные из экстрактов тканей различных органов, так как по данным литературы в составе именно этих фракций находится подавляющее большинство уже известных и охарактеризованных диагностически значимых маркеров органной специфичности [4, 16, 52, 64]. При получении тканевых антигенов важным моментом был выбор источника аутоантигенов. Во избежание перекрестной активности с антигенами групп крови, выделение антигенных препаратов проводили из тканей органов, полученных от лиц в возрасте 20-35 лет, с 0(1) группой крови, погибших в результате случайной смерти, без алкогольной или наркотической интоксикации. Забор аутопсийного материала проводили не позднее 12 часов с момента смерти, при условии полного отсутствия визуальных признаков патологических изменений и аутолиза в органах.

Все перечисленные антигены должны обладать минимальной способностью к перекрестным реакциям и стандартизоваться по химическому составу и серологической специфичности.

По химическому составу в бактериальных антигенных препаратах преобладали вещества углеводной природы, а в органоспецифических препаратах - вещества белковой природы. При создании иммуноферментной системы необходимо было нивелировать перекрестные взаимодействия подбором оптимальной концентрации антигенов или разведения анализируемых сывороток. Для этих целей, прежде всего, необходимо создание внутренних контролей.

Поэтому третий основной принцип создания скрининговых иммуноферментных тестов, используемый нами в работе, заключался в использовании единого внутреннего контроля.

Внутренним контролем в иммуноферментной системе является пул 100 сывороток доноров станций переливания крови, т.е. клинически здоровых людей. По сравнению с этим контролем мы оценивали результаты ИФА, выражая их в величинах разности оптической плотности. Внутренний контроль не является истинным отрицательным контролем, поскольку содержит около 5% сывороток с высоким уровнем антител к различным бактериальным и тканевым антигенам. Основной принцип стандартизации этого контроля заключается в определении оптической плотности с различными антигенами. Эта величина не должна превосходить значения 0,5. Для большинства антигенов величина оптической плотности внутреннего контроля не превышает значения 0,3.

Введение стандартизованного единого внутреннего контроля позволило использовать в одном иммуноферментном наборе иммуносорбенты различной специфичности, что дополнительно унифицировало всю систему.

В качестве положительного контроля использовали пулированные сыворотки больных с высоким уровнем антител к большинству антигенов. Положительный контроль не участвует в расчете результата реакции, а его высокая оптическая плотность служит лишь признаком специфичности системы.

При использовании положительного контроля и контроля сравнения определяли условия проведения ИФА: сорбционную дозу антигенов, разведение сывороток для анализа и конъюгата. Во всех случаях об оптимальных условиях проведения ИФА судили по максимальной разности оптической плотности между этими сыворотками.

С целью полного использования в ИФА видовых антигенов клеточные стенки различных видов бактерий использовали в единых концентрациях - 5мкг/мл. Для препаратов органоспецифических антигенов концентрация при сорбции была различной - от 2,5 до 15мкг/мл. Оптимальной сорбирующей дозой для препаратов органонеспецифических антигенов была концентрация 10-20 мкг/мл.

Унификация скрининговых тестов различной специфичности предусматривает анализ сывороток в одном разведении. Этот принцип был реализован лишь в отношении аутоантигенов, где при разведении сывороток 1:100 наблюдали максимальные различия в оптической плотности между контролями. В случае условно патогенных бактерий этот принцип реализовать не удалось, вероятно, в силу различной иммуногенности различных антигенов и адаптации макроорганизма к некоторым бактериям. Поэтому усложнением этого теста явилось использование для определения антител различной специфичности разных рабочих разведений сывороток.

Еще одним принципом, лежащим в основе разработки скрининговых тестов, явился единый критерий оценки результатов анализа.

Для реализации этого принципа прибегли к нахождению единой точки отсечения отрицательных показателей. Общепризнано, что «cut off» отрицательных показателей должна отсекать около 95% сывороток крови клинически здоровых людей. Исследования показали, что более 80% сывороток при анализе антител к условно патогенным бактериям имеют показатели АОП от -0,2 до +0,2, а при анализе противотканевых антител — от-0,1 до +0,1. В большинстве случаев не более 5% сывороток клинически здоровых людей имели уровень антител к тканевым антигенам, превышающий величину АОП +0,1, а к условно патогенным бактериям, превышающий АОП +0,2. Поэтому, указанные значения были приняты за точку отсечения отрицательных показателей.

Специфичность системы оценивали при анализе сывороток клинически здоровых людей, а чувствительность — при анализе сывороток больных с подтверждением заболевания бактериологическими методами, в случае использования теста на основе антигенов условно патогенных бактерий, или при анализе сывороток животных, подвергшихся иммунизации различными аутоантигенами. Коэффициент вариации результатов рассчитывали при 24-кратном анализе с каждым антигеном контрольных сывороток. Его величины свидетельствовали о высокой воспроизводимости результатов (<8%).

При разработке иммуноферментной системы использовали общепринятые этапы. Учитывая многофакторность этапов, стремились к возможно большей унификации условий постановки реакции. Для этого применяли разработанный нами алгоритм (табл.14). При разработке ИФА, кроме максимальных различий между К+ и К-, оптимальными считали условия не приводящие к значительному увеличению фоновых значений (ОП > 0,15). Таким образом, в соответствии с предложенными принципами, удалось максимально унифицировать условия реакций при определении антител различной специфичности. Общими были длительность и температура сорбции антигенов на полистироле, рабочее разведение КГ, длительность и температура контакта компонентов реакции и субстратной смеси. К сожалению не удалось унифицировать концентрацию тканевых АГ при сохранении единого рабочего разведения сывороток (1:100). Нет единого разведения сывороток при определении АТ к различным бактериальным антигенам. Однако, достигнутая унификация, на наш взгляд, позволяет компановать систему иммуносорбентами различной специфичности и при необходимости расширить спектр определяемых антител. N

Эффективность разработанной системы продемонстрирована при мониторинге антибактериальных и противотканевых антител у клинически здоровых людей, людей работающих в неблагоприятных условиях и пациентов с различной соматической и аутоиммунной патологией. Всего проанализировано 2688 сывороток здоровых и больных людей.

Изучение антибактериальных и противотканевых антител у 560 доноров станций переливания крови г.г. Москвы и Тулы выявило отсутствие повышенного уровня IgG AT в (67,5±3,9) случаев с бактериальными антигенами и в (91,6±1,4)% с тканевыми АГ. Однако частота положительных реакций к отдельным антигенам колебалась от 0 до 13,6% в зависимости от года, когда забиралась кровь у доноров. Так установлено, что доноры крови г. Москвы в 1997г. не содержали повышенного уровня AT к K.pneumoniae, а в 1999г. частота положительных реакций с Y.enterocolitica достигала 13,6%. В 1999г. у доноров Москвы достоверно чаще определяли повышенную частоту положительных реакций с P.aeruginosa. В отличии от доноров г. Москвы доноры г. Тулы достоверно чаще содержали повышенный уровень IgG AT к S.pneumoniae и Y.enterocolitica. Повышенный уровень AT к бактериальным АГ свидетельствует о перенесенном заболевании, вызванном отдельным видом УПБ.

При анализе антител к тканевым АГ установлено, что доля положительных реакций в разные годы низка и не превышает 2,2%. Однако около 13,5% клинически здоровых доноров г.Тулы достоверно более часто содержали повышенный уровень IgG AT к щитовидной железе. Более того, для доноров г.Тулы было характерно смещение нормальных показателей AT к щитовидной железе в сторону положительных значений, тогда как для доноров г. Москвы - в область отрицательных показателей. При дальнейшем изучении результатов анализа сывороток доноров, выяснилось, что 78,6% доноров Тулы, имеющих повышенный уровень AT к Y.enterocolitica одновременно имели повышенный уровень AT к АГ щитовидной железы. Учитывая то, что среди доноров Москвы совпадения результатов было только у 6,7%, можно предположить, что инициирующими аутоиммунные расстройства у лиц, проживающих в г. Туле, являются другие факторы, способствующие изменению структуры тканей щитовидной железы, делая их похожими на антигенные структуры Y.enterocolitica.

Исходя из полученных нами результатов разработанную систему можно рекомендовать для оценки донорского сырья при производстве препаратов крови. При этом донорское сырье, на наш взгляд, не должно содержать AT к тканевым АГ, во избежании патогенетического влияния аутоантител.

При мониторинге работающих в неблагоприятных экологических условиях (на примере работников Московского метрополитена) было определено, что основная масса сывороток крови работников различных профессиональных групп (около 80%), как мужчин, так и женщин, являются сероиегативными по отношению к антигенам бактерий, находящихся в микрофлоре станций метрополитена. Всего проанализировано 399 сывороток (работники наземных и подземных сооружений, работающие с посажиропотоками, работники ремонтных бригад и администрация). Более высокая, по сравнению с донорами, частота позитивных реакций с антигенами S.aureus у работников метрополитена может быть связана как с высокой микробной обсеменённостью воздуха станций, так и с заболеваниями, по поводу которых они обращались к врачу. Исследование функционального состояния иммунной системы работников Московского метрополитена в отношении активности антител к тканевым антигенам позволило выявить аутоиммунные нарушения у тех лиц, которые о нем не подозревали. Следует отметить, что среди сывороток работников Московского метрополитена были такие, которые реагировали с двумя, тремя и более бактериальными и тканевыми антигенами одновременно, что на наш взгляд, может свидетельствовать об активации иммунитета под воздействием окружающей микрофлоры, что не всегда ограничивается адаптивными реакциями. На наш взгляд, полученные результаты следует учитывать при диагностике и лечении заболеваний работников метрополитена.

При анализе 1599 сывороток различных групп больных было замечено, что довольно часто определение антител к одному из антигенов сочетается с высокой активностью антител к некоторым другим. В группах больных бронхолегочными, желудочно-кишечными и аутоиммунными заболеваниями достаточно часто определяли антитела к трем и более бактериальным антигенам (28,0, 32,4 и 34,4% соответственно). В этих же группах часто определяли антитела к трем и более тканевым АГ. У больных бронхолегочными заболеваниями в 59,3% определяли АТ только к бактериальным АГ. Среди сывороток больных желудочно-кишечными заболеваниями таких было 38,0%. У больных обструктивными болезнями лёгких наиболее часто выявляли повышенные уровни антител к трём видам пневмотропных (Б.рпеитотае, Нлп/1иетае, М.ссйаггкаШ) бактерий. Наиболее часто АТ к Б.рпеитотае определяли у больных бронхиальной астмой (46,0%), хронической пневмонией (32,2%) и хроническим бронхитом (24,7%), что свидетельствует о значимой роли этого вида микроорганизмов в патогенезе указанных заболеваний. У больных, страдающих желудочно-кишечными заболеваниями, - к Р.аегщтозае, Е.соН и Р.ум/^ага. Наиболее высокие уровни антител к золотистому стафилококку и клебсиелам выявлены у больных, страдающих болезнью Бехтерева, а при таких заболеваниях как ревматоидный артрит и аутоиммунные заболевания щитовидной железы наиболее часто определяли антитела к иерсиниям (36,9 и 45,9% соответственно).

Получены данные о преимущественной этиологической значимости стафилококков 3-х видов и кишечной палочки при патологии мочевыводящей системы, поскольку до 47,4% сывороток больных содержали повышенный уровень антител к ним. Довольно часто AT к P.mirabilis и Y.enterocolitica определяли у больных колитом (в 58,8 и 41,2% случаев соответственно), пищевыми токсикоинфекциями (43,6 и 25,6%), а также у больных аутоиммунными заболеваниями -при ревматоидном артрите (30,0 и 36,9%) и болезни Бехтерева (15,4 и 23,1%). Кроме того, при болезни Бехтерева у пациентов был повышен уровень AT к S. aureus (50,0%), S. pneumoniae (50,0%) и к Kpneumoniae (65,4%). Как нам представляется, высокая активность сывороток, перечисленных групп больных с бактериальными антигенами может быть обусловлена поликлональной стимуляцией иммунной системы отдельными видами бактерий или ролью нескольких видов бактерий в патогенезе этих заболеваний, что часто происходит при бронхолегочных, желудочно-кишечных и заболеваниях мочевыводящей системы. Со специфичностью разработанной системы эти результаты, на наш взгляд, не связаны, поскольку торможение иммуноферментной реакции, проведённое в рамках данного исследования, демонстрирует видовую специфичность каждого антигена (таблица 16). Кроме того, в настоящее время, в научной литературе обсуждается роль P.mirabilis, Y.enterocolitica и K.pneumoniae в развитии таких заболеваний как ревматоидный артрит, аутоиммунные заболевания щитовидной железы и болезни Бехтерева [84, 298, 300].

При анализе сывороток больных хронической пневмонией подтверждение бактериологического анализа определением активности IgG AT было в 46,3-54,4%) случаев. Однако имели место результаты, когда высеву микроорганизмов предшествовали положительные результаты ИФА. На наш взгляд, мониторинг антител, с помощью разработанной системы, может быть дополнительным методом подтверждения предполагаемой этиологии заболевания, особенно, когда результаты бактериологического анализа отрицательны, вследствие многих причин.

При исследовании сывороток в отношении уровня антител к органоспецифическим антигенам было замечено, что в группе больных бронхолегочными заболеваниями более частые положительные реакции наблюдали с антигенами миокарда и лёгочной ткани; в группе больных сердечно-сосудистыми заболеваниями - с ДНК, антигенами сердца и легких; в группе больных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта -с антигенами печени и кишечника; в группе больных обменно-эндокринной патологией - к антигенам тканей эндокринной системы. До 60,0% сывороток больных кардиомиопатией и ревмокардитом имели положительную реакцию с антигеном миокарда, а доля положительных реакций с АГ печени у больных хроническим активным гепатитом доходил до 100%. При гломерулонефрите до 85,7% больных этой патологией имели высокий уровень антител к антигенам почечной ткани. На наш взгляд, этот показатель может иметь диагностическое значение. Среди сывороток больных аутоиммунными заболеваниями положительные реакции только с тканевыми АГ имели 21,9%. При этом высокий процент положительных реакций среди больных аутоиммунными заболеваниями давали больные первичной надпочечниковой недостаточностью (с АГ надпочечников -58,3%), а среди больных с обменно-эндокринной патологией — пациенты с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы (с АГ щит. железы-66,3%>). Результаты аналогичных исследований в отношении органонеспецифических антител показали, что наибольшая частота положительных реакций обнаруживается у больных СКВ с ДНК (89,8%>); при хроническом гепатите этот показатель достигает 78,6%.

При мониторинге антител различной специфичности у лиц, болеющих различными заболеваниями, стало очевидным, что они отличаются от клинически здоровых не только более частыми положительными реакциями с тремя и более бактериальными и/или тканевыми АГ, но и более частым одновременным определением AT к ним. При этом, если у доноров таких сочетаний 8,2%, то у больных аутоиммунными заболеваниями их 35,1%. Таким образом, проведенные нами исследования позволили определить с какими заболеваниями ассоциируется определение значимого высокого уровня AT к тем или иным видам условно патогенных бактерий и различным тканевым АГ.

Особую группу составили пожилые люди (65 лет и старше). В отличие от клинически здоровых людей все лица пожилого возраста имели повышенный уровень антител к тем или иным бактериальным и тканевым антигенам. Сыворотки людей этой группы характеризовались самой высокой частотой позитивных реакций с большим числом бактериальных антигенов, что вероятно связано с большим числом заболеваний, которыми страдает каждый из включенных в группу лиц пожилого возраста.

В сыворотках пожилых людей достоверно чаще, чем у доноров, определяли высокую активность AT к шести органоспецифическим АГ. При этом, чаще всего, повышенную активность AT к условно патогенным бактериям они не имели. В связи с этим можно предположить, что микроорганизмы не участвуют в запуске аутоиммунных процессов, а аутоантитела выполняют защитную функцию, освобождая организм от продуктов деградации. Часть пожилых людей, чьи сыворотки анализировали с помощью разработанных тестов, была иммунизирована вакцинами «Гриппол» и «Иммуновак ВП-4». Последняя содержит антигены 4-х видов условно патогенных бактерий: S.aureus, К.pneumoniae, P.vulgaris и E.coli. Результаты скрининга сывороток вакцинированных показали отсутствие нарастания уровня противотканевых аутоантител [15], что свидетельствует о возможности применения разработанной системы для изучения поствакцинального иммунитета и оценки безопасности вакцин.

Таким образом, нами создана многокомпонентная иммуноферментная система для одновременного мониторинга антител к 14 антигенам условно патогенных бактерий и 15 аутоантигенам. Разработанная система была использована для обследования клинически здоровых людей, лиц, работающих в неблагоприятных экологических условиях (подземные сооружения, большие пассажиропотоки, отсутствие очистки воздуха) и больных различными формами соматической и аутоиммунной патологии. Полученные результаты показали высокую эффективность системы и возможность использования её для мониторинга воздействия контактов с бактериальной флорой среды обитания человека на иммунную систему и изучения триггерной роли условно патогенных бактерий в возникновении аутоиммунных расстройств.

Система прошла экспертизу и контроль в ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Рекомендована Комитетом иммунобиологических препаратов к регистрации в РФ (протокол №10 от24.12.2003г.). Система и документация полностью готовы для передачи на производство.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Ястребова, Наталия Евгеньевна, Москва

1. Абелев Г.И. Взаимодействие врожденного и приобретенного иммунитета в защите организма от инфекции.//Соровский образовательный журнал.-1998.-№2. с.53-58.

2. Баснакьян И.А. Стресс у бактерий. М., Медицина, 2003.

3. Белая О.Ф., Черкасов B.JL, Белая Ю.А. Методические рекомендации

4. Реакция коагглютинации при кишечных инфекционных заболеваниях».1. М. 1990.

5. Биологические мембраны/Под ред. Дж.Б.Финдлея, У.Г.Эванза.- М., Мир- 1990.-424с.

6. Бойли Н. Статистические методы в микробиологии.-М.: Иностранная лит-ра, 1962. -260с.

7. Ванеева Н.П., Цветкова Н.В., Гудкова В.Г., и др. Использование тейхоевых кислот S.aureus в иммуноферментной реакции для диагностики стафилококковой инфекции.//Сб.«Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине».М. 1983. - с. 105108.

8. Власов В.В. Введение в доказательную медицину. М.,: Медиа Сфера. 2001.-392с.

9. Глазанова Т.В., Бубнова Л.IT., Мазуров В.И. Аутоиммунные заболевания щитовидной железы: роль иммунологических и иммуногенетических факторов.// Медицинская иммунология. 2000.-№3.-С.257-270.

10. Глоссарий терминов, используемых в серии «Здоровье для всех» №№1-8, ВОЗ: Женева, 1984.-42с.

11. Ю.Голухов ГН., Райзберг БА., Шиленко ЮВ. Медицинскиймеждисциплинарный словарь .// Москва,- 2003.-320с.

12. Голубева И.В., Килесо В.А., Киселева Б.С. и др. Энтеробактерии (Руководство для врачей) М., Медицина. 1985: 321с.

13. Горбунов С.Г., Дёмина A.A., Спирихина JI.B., Грачёва A.M., Самсонова И.М. Диагностическая ценность различных методов лабораторной диагностики пневмонии, обусловленной Haemophilus influenzae типа В.//Журн. Микробиол.,2002. №4, с.51-54.

14. Гришина Т.И., Пухальский А.Л. Основы иммунодиагностики //В кн:

15. Клиническая иммунология (ред.Е.И. Соколов).-М.,Медицина.-1998.-С.5778.

16. Диханов Г.Г., Подкладчиков О.М. Информационный бюллетень. Саратов, 1989.-№1.-с.17-18.

17. Егорова Н.Б., Семёнов Б.Ф., Курбатова Е.А., и др. Динамика аутоантител у пожилых людей в процессе вакцинации Грипполом и поликомпонентной вакциной ВП-4. // Ж. микробиол. — 2002. -№5. — с.29-35.

18. Иммунологические методы/Под ред. Г.Фримеля; Пер. с нем. АП.Тарасова. М.: Медицина, 1987. -472с.

19. Инфекционные болезни. Руководство для врачей./Под ред. В.И. Покровского.-М. :Медицина -1996.-528с.

20. Инфекционная заболеваемость в Российской Федерации в 20042005гг.// Информационный сборник статистических и аналитических материалов.-Москва.-2006.

21. Кашкин К.П. Иммунологические исследования в клинике инфекционных заболеваний.//Новости прикладной иммунологии и аллергологии.-2004.-№8 .-с. 1-10.

22. Киселева Е.П., Косицкая JIC., Кузьменок ОИ., Потапнев МП. Отдаленные последствия облучения у ликвидаторов аварии на Чернобольской АЭС: аутоиммунные реакции к антигенам нормальных тканей.// Иммунология.- 1998.- №6.- с.29.

23. Клиническая иммунология и аллергология. Пер. с англ./Под ред. Г.

24. Лолора.-М.:Практика.-2000.-806с.

25. Клиническая иммунология. Руководство для врачей./ Под ред. Акад. РАМН Соколова Е.И.- М.: Медицина, 1998. - 272с.

26. Колмогорова О.В., Каверина К.Г., Падюков Л.Н. Иммуноферментный анализ для определения антител к Haemophilus influenzae серовара b на основе бактериальных клеток // Ж.Микробиол.-1991.-№8.-с. 84-85.

27. Королюк A.M., Голованова С.Н., Дулатова М.В. Выбор рациональных методов определения антител к Y.enterocolitica.llЖ. Микробиол.-1988.-№9.-с.45-47.

28. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник. СПб. Специальная Литература,-1998.-592 е., с ил.

29. Кулаков A.B., Пинегин Б.В., Карсонова М.И. и др. Специфический гуморальный антибактериальный иммунитет у ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом.//Русский иммунологический журнал 1998.-3(1).-с.29-36.

30. Кулаков A.B., Пинегин Б.В., Мартынов А.И., Хаитов Р.М.Оценка иммунного статуса различных групп рабочих химического производства при помощи матричного метода матиматического анализа.//Иммунология.- 1993.-№2.-с.54-57.

31. Лыткина И.Н. Эпидемиологическая ситуация по кишечным инфекциям в Москве. Информационный бюллетень. М.: 2000.-2(4).-с.9-15.

32. Малета Ю.С., Тарасов B.B. Математические методы статистического анализа в биологии и медицине.//Кн.-М.-изд. Моск. университета-1981-с.176.

33. Марамович A.C., Лысалов Ю.И., Климов В.Т. и др. Эпидемиология иерсиниоза: Обзор литературы. Инфекция и паразитарные болезни.//Экспресс-информация.-1990.- вып.4.-с. 1-20.

34. Маркина O.A. Особенности гуморального иммунитета больных криптогенным (идиопатическим) фиброзирующим альвеолитом: Автореф. . канд. мед. наук. -М., 2003.

35. Маркина С.С., Максимова НМ., Черкасова ВВ., Кошкина НА. Эпидемиологическая ситуация по дифтерии в России в настоящее время// Вакцинация.- 2006.- №1.- с.7-9.

36. Марков И.Г. Синдром Рейтера у больных иерсиниозом //Врачебное дело.-1989.-№1.- с.111-114.

37. Маянский А.Н. Микробиология для врачей. Из-во НГМА (Нижний Новгород).-1999.-3 93 с.

38. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник /Под ред.акад. А.А.Воробьева М: Медицинское информационное агенство - 2006. - 704с.

39. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. М: Медицина, 1996. - 544с.

40. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития.-М. :Наука.-1991 .-с. 184-187.

41. Насонов В.А., Осипенко М.Г. Клиническая ревматология. М., Медицина, - 1989.

42. Насонов Е.Л. Перспективы лабораторной диагностики хронических воспалительных и аутоиммунных болезней человека.//Российские медицинские вести.-2001 .-№3 .-с.20-26.

43. Насонов Е.Л., Баранов A.A., Шилкина Н.П. Патология сосудов при антифосфолипидном синдроме (клиника, диагностика, лечение). Ярославль: Типография Яросл. Гос техн. ун-та, 1995.

44. Падюков JI.H., Харитоненков И.Г. Иммунодиагностика инфекций. Иммунология инфекционного процесса. Рук-во для врачей. М.-1994.-с.222-249.

45. Пелтола X. Заболевания, вызванные H.influenzae тип Ь, в начале 21-го столетия: глобальный анализ актуальности инфекции после 10 лет использования конъюгированных вакцин.//Вакцинация.-2003.-№2(26).-с.З.

46. Петров РВ., Хаитов РМ.,Пинегин БВ., Черноусов АД.//Иммунология.-1995.-№2.-с.4-5.

47. Поддубиков A.B., Ястребова Н.Е., Ванеева Н.П, Лебедь Н.Е. Характеристика активности антител к тканевым антигенам гормонпродуцирующих органов у доноров крови.//Сб. Проблемы инфекционных болезней.-М.-2000.-241-245с.

48. Полетаев А.Б., Морозов С.Г., Ковалев И.Е. Регуляторная метасистема. М., «Медицина», 2002. 168с.

49. Покровский В.И., Адамбеков Д.А., Литвинов В.И. Иммунология бактериальных инфекций. Рук-во для врачей.-Москва, Бишкек.-1994.-т.1.-с.183-195.

50. Потехин O.E., Малышев B.C. Современное состояние иммунологической диагностики аутоиммунных заболеваний.//Иммунопатология, аллергология, инфектология.- 2000.-№1.-с. 44-49.

51. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология,- М., Мир.-2000.

52. Рытикова Н.С. Современные аспекты лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний // Новости прикладной иммунологии и аллергологии. 2000.-№4.- С.7-9.

53. Саркулова М.Н. Характер и этиологическая структуравнутрибольничных инфекций у урологических больных.//Урология-2006.1.-с. 19-22.

54. Семина H.A., Ковалева Е.П., Генчикова JI.A., Шаханина И.Л. Внутрибольничные инфекции.//Российские медицинские вести -2000. -№3. -с.9-12.

55. Семёнов Б.Ф., Хозинский В.В. Аутоиммунитет при вирусных инфекциях.//Итоги науки и техники. Серия: Вирусология-1993. 152с.

56. Семенов Б.Ф., Зверев В.В. Принципы иммунопрофилактики новых и возвращающихся инфекций.//Молекулярная медицина -М. -2004. -№4.

57. Сепиашвили Р.И., Шубич М.Г., Колесникова Н.В., Славянская Т.А., Ломтатидзе Л.В. Апоптоз в иммунологических процессах.//Аллергология и иммунология. 2000. - №1(1). - С.15-23.

58. Сергеев ВП. Ликвидация полиомиелита в Европейском регионе ВОЗ.// Вакцинация.- 2002.- №6(24).- с.2-5.

59. Сон И.М., Меснер А.Ф., Ростовцев С.А., с соавт. Система мониторинга туберкулеза в Москве.//Проблемы туберкулеза и заболеваний легких.-2005.-№8.-с.8-14.

60. Сперанский А.И., Иванова С.М. Аутоиммунные болезни (клинические и теоретические аспекты).//Аллергология и иммунология.-2002.-т.3(1).-с.62-83.

61. Спирин A.C. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот.//Биохимия. 1958.-23.-№5.-с.656.

62. Стародубов В.И., Соболева Н.П., Кайгородова Т.В. Профилактика заболеваний. Терминологический словарь-Москва,-2003,-ЦНИИ ОИЗ

63. Степанова E.H. Основные принципы лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний.//Новости прикладной иммунологии и аллергологии-2000.-№4.-С.10-11.

64. Страчунский JIC., Белоусов ЮБ., Козлов CH. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии.//Москва, Боргес.-2002.- 383с.

65. Сучков C.B. Габибов А.Г. Аутоантитела различных уровней специфичности и их клиническое значение при системных и локализованных формах аутоиммунной патологии // Аллергология и иммунология. -2001. -Т.2(1). С. 137-147.

66. Сучков C.B., Габибов А.Г., Гнучев Н.В. Феномен кросс-реактивности

67. ДНК-абзимов и его значение для механизмов цитотоксичности и апоптоза

68. Онтогенез. -2001. Т.32, -№5. - С.348-352.

69. Таранов А.Г. Диагностические тест-системы. М.,-2002., 288с.

70. Тихонова HT., Герасимова АГ., Мамаева ТА. Проблема элиминации кори в Российской Федерации.// Вакцинация.- 2002.-№5(23).- с.6-7.

71. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.-1975.-292с.

72. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. // Экологическаяиммунология M.-1995 .-219с.

73. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология: Учебник.М. Медицина 2002.-536с.

74. Хоробрых Н.Е. Изучение различных препаратов Yersinia enterocolitica и перспектива их использования для серодиагностики иерсиниозов: Автореф. . канд. мед. наук. М., 2004.

75. Чучалин А.Г. Синопалышков А.И., Яковлев C.B. с соавт. Внебольничная пневмония у взрослых: практические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике // Клинич.микробиол.антимикроб.химиотерап.-2003 .-№3 .-с. 198-224.

76. Ценева Г .Я. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза. Пособие для врачей. СПб., Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера. 1997.-64с.

77. Черешнев В. А. Экология, иммунитет, здоровье.//Известия Уральского государственного университета.-2000.-№16.

78. Щерба ЮВ., Гончарова ИВ. Новые этиологические, эпидемиологические и клинические характеристики современной внебольничной пневмонии.//Поликлиника.-2005.-№2.

79. Яковлев C.B. Госпитальная пневмония: вопросы диагностики и антибактериальной терапии.// Консилиум медикум, 2000, №10, с.400-404.

80. Ярилин A.A. Основы иммунологии. // М., Медицина, 1999., 607с.

81. Ясинский АА., Коршунова ГС., Котова ЕА. О состоянии заболеваемости и мерах борьбы с внутрибольничными инфекциями в Российской Федерации в 2002-2003 годах. //Эпидемиология и вакцинопрофилактика.-2005.-3(22).-с.39-42.

82. Ястребова Н.Е., Ванеева Н.П., Романова Р.Ю. Антитела к органоспецифическим и органонеспецифическим антигенам в сыворотках крови людей, больных бронхо-легочными заболеваниями.//Ж. Микробиол.-1996.-№6.-с.67-68.

83. Ястребова Н.Е., Ванеева Н.П., Тоганбекова Н.Б. Иммуноферментный анализ антител к ДНК. //Сб. тр. «Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине», М., 1983., с. 121-126.

84. Ястребова Н.Е. Ванеева Н.П., Цветкова Н.В и др. Характеристика скринингового иммуноферментного теста для определения антител к условно-патогенным бактериям.//Ж.Аллергология, астма и клиническая иммунология.-1999.-№9.-с. 148-150.

85. Ahmadi К, Wilson С, Tiwana Н, Binder A, Ebringer A. Antibodies to Klebsiella pneumoniae lipopolisaccharide in patients with ankylosing spondylitis.//Br.J.Rlieumatol.-1998.-37(12).-p. 1330-1333.

86. Alarson GS., Calvo-Alen J., McGwin G., et al. Systemic lupus erythematosusin a multiethnic cohort: LUMINA XXXV. Predictive factors of high diseaseactivity over time.//Ann Rheum Dis.-2006.-v.31

87. Albert L.J. Inman R.D. Molecular mimicry and autoimmunity // N. Engl. J. -1999.-34 l.-p2068-74.

88. Alberti C., Brun-Buisson C., Burchardi H., et al. Epidemiolody of sepsis and infection in ICU patients from an international multicentre cohort study//Intensive Care Med.-2002.-28(2).-p. 108-121.

89. Alessandri C, Bombardieri M, Scrivo R, et al. Anti-carbonic anhydrase II antibodies in systemic sclerosis: association with lung involvement. // Autoimmunity.-2003.-36(2).-p.85-89.

90. Al-Lozi M., Pestronk A. Organ-specific autoantibodies with muscle weakness // Curr. Opin. Rheumatology -1999. Vol. 11. - P. 483-488.

91. Aoki S, Yoshikawa K, Yokoyama T, et al. Role of enteric bacteria in the pathogenesis of rheumatoid arthritis: evidence for antibodies to enterobacterial common antigens in rheumatoid sera and synovial fluids. // Ann.Rheum.Dis.-l 996.-55(6).-p.363-369.

92. Asherson RA., Cervera R. Antiphospholipid antibodies and infections. // Ann. Rheum. Dis.-2003.-62(5).-p.388-393.

93. Babcock HM., Zack JE., Garrison T., et al. Ventilator-associated pneumonia in a multi-hospital system: differences in microbiology by location.//Infect Control Hosp Epidemiol.-2003.-v.24(l 1).- p.853-858.

94. Bach J.F. Current concepts of autoimmunity. // Rev. Neurol.-2002.-158(10 Pt 1).-p.881-886.

95. Bach J.F., Koutouzov S., van Endert PM. Are there unique autoantigens triggering autoimmune diseases. // Immunol. Rev.-1998.-164.-p.139-155.

96. Bach J.F. Symposium on autoimmunity // J. Autoimmunity. 1996. - Vol. 9. -P. 205-304.

97. Bachmaier K., Neu N., de la Maza L.M. Pal S., Hessel A., Penninger J.M. Chlamydia infections and heart disease linked through antigenic mimicry // Science 1999.- V.283. - P.1335-1339.

98. Badenhoop K., Schwarz G., Schleusener H. et al. TNF beta gene polymorphisms in Grave's disease.//J.of Clin. Endocrinol. Metab.-1992.-v.74.-p.287-291.

99. Baddilley J. Teichoic acid in walls and cells of grampositive bacteria // Fed. Proc.-1962.-N21.-p. 1084-1088.

100. Baiu DC, Barger B, Sandor M, Fabry Z, Hart MN. Autoantibodies tovascular smooth muscle are pathogenic for vasculitis // AmJ.Pathol.-2005.166(6).-p. 1851-1860.

101. Ballow M. Первичные иммунодефицита с преобладанием дефектов гуморального иммунитета // Аллергология и иммунология.-2003.-том 4.-№3.-с.78-90.

102. Baranovskii A.G., Ershova N.A., Buneva V.N., Kanyshkova T.G., et al. Catalytic heterogeneity of polyclonal DNA-hydrolyzing antibodies from the sera of patients with multiple sclerosis // Immunol.Lett. -2001. Vol. 76(3). - P. 163167.

103. Beck K, J.H.Lansen, J.M.Hansen and J.Nerup Y. enterocolitica infection and disorder // Lancet -1998 (2) -p.951.

104. Behar S.M., Porcelli S.A. Mechanisms of autoimmune disease induction: the role of the immune response to microbial pathogens // Arthritis Rheum.-1995.- 3,- P.485-476.

105. Belizna C., Tervaert J.W. Specificity, pathogenecity and clinical value of antiendothelial cell antibodies // Semin. Arthritis Rheum. 1997.- Vol. 27(2). -P. 98-109.

106. Benoit C, Guiyoule A, Carniel E. Serodiagnosis of human pathogenic Yersinia infections // Presse Med.-1996. 9; Vol. 25(34) - P.1627-1630.

107. Betterle C, Pra CD, Pedini B, et al. Assessment of adrenocortical function and autoantibodies in a baby born to a mother with autoimmune polyglandular syndrome type 2 // J.Endocrinol.Invest. 2004. - Vol. 27(7).- P.618-621.

108. Bijl M., Horst G., Limburg P.C., Kallenberg C.G. Anti-CD3-induced and anti-Fas-induced apoptosis in systemic lupus erythematosus (SLE) // Clin. Exp. Immunol. -2001. Vol. 123(1). -P.127-132.

109. Blaf S., Haferkamp C., Specker Ch. Et al. Rheumatoid arthritis: autereactive T cells recognizing a novel 68kd autoantigen // Ann. Rheum. Dis. -1997.-Vol.56.-P. 317-322.

110. Borza DB, Chedid MF, Colon S, Lager DJ, Leung N, Fervenza FC. Recurrent Coodpature's disease secondary to monoclonal IgAl-kappa antibody autoreactive with the alphal/alpha2 chains of type IV collagen // Am.J.Kidney Dis. 2005.- vol. 45(2). - P.397-406.

111. Boudewyns A, Verbelen J, Koekelkoren E, Van Offel J, et al.Wegener's granulomatosis triggered by infection? // Acta Otorhinolaryngol.Belg .- 2001. -Vol. 55(1). -P.57-63.

112. Bouza E., Garcia-Garrote F., Cercenado E. et al. Pseudomonas aeruginosa: a multicenter study in 136 hospitals in Spain.//Rev. Esp. Quimioter.-2003.-16( 1 ).-41 -52.

113. Brimnes J, Nielsen OH, Wiik A, Heegaard NH. Autoantibodies to molecular targets in neutrophils in patients with ulcerative colitis // Dig. Dis. Sei. 1999. - Vol. 44(2). - P.415-423.

114. Bruns A., Blass S., Hausdorf G., Burmester G.R., Hiepe F. Do elevated levels of serum-soluble Fas contribute to the persistence of activatedlymphocytes in systemic lupus erythematosus? // Arthritis Rheum. — 2000. -Vol.43(10).-P. 2307-2315.

115. Budhai L., Oh K., Davidson A. An in vitro assay for detection of glomerular binding IgG autoantibodies in patients with systemic lupus erythematosus // J. Clin. Invest. 1996. - Vol. 98. - P. 1585-1593.

116. Burek CL. Profile of autoantibodies in human diseases // Lab.Res.Methods Biol.Med .- 1983.- Vol.8.- P.101-120.

117. Burman K.D., Baker J.R. Immune mechanisms in Graves' disease // Endocrinol. Rev. 1996. -Vol.6. - P. 183-232.

118. Caballero E, Drobnic ME, Perez MT, et al. Anti-Pseudomonas aeruginosa antibody detection in patients with bronchiectasis without cystic fibrosis // Thorax. -2001. Vol. 56(9). - P.669-674.

119. Cabral A.R., Alarcyn-Segovia D. Autoantibodies in systemic lupus erythematosus // Curr. Opin. Rheum. 1997. - Vol. 9(5). - P.387-392.

120. Cabral A.R., Alarcyn-Segovia D. Autoantibodies in systemic lupus erythematosus // Curr. Opin. Rheumatol. 1998. - Vol. 10(5). -P.409-416.

121. Caforio A.L., Daliento L., Angelini A., Bottaro S. et al. Autoimmune myocarditis and dilated cardiomyopathy: focus on cardiac autoantibodies // Lupus. 2005. - Vol. 14(9). - P. 652-655.

122. Caforio A.L., Mahon N.J., Mckenna W.J. Cardiac autoantibodies to myosin and other heart-specific autoantigens in myocarditis and dilated cardiomyopathy // Autoimmunity. 2001. - Vol. 34(3). - P. 199-204.

123. Caforio A.L., Mahon N.J., Mckenna W.J. Clinical implications of anti-cardiac immunity in dilated cardiomyopathy.// Ernst. Schering. Res. Found. Workshop.- 2006.-v.55.-p. 169-193.

124. Cai J., Terasaki PI. Human leukocyte antigen antibodies for monitoring transplant patients // Surg. Today. 2005.- 35(8).-p.605-612.

125. Calvani M, Parisi G, Giannelli C, et al. The role of endomysium antibodies in the diagnosis and monitoring of celiac disease // Recenti.Prog.Med. 1994. - Vol. 85(6). - P.318-322.

126. Candore G., Dilogenzo G., Mansueto P. at al. Prevalence of organ-specific and non organ-specific autoantibodies in healthy centenarians. //Mechanisms of Ageing and Development 1997. -Vol.94(1-3). - p.183-190.

127. Cardo DM., Simone PM. Monitoring and preventing healthcare-associated infections. The CDC approach // Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheeitsschutz.- 2005.-Sep;48(9)- p. 1043-1047.

128. Carreras L.O., Forastiero R.R. Pathogenic role of antiprotein-phospholipid antibodies // Haemostasis. 1996. -Vol. 26, Suppl. 4. - P.340-357.

129. Carroccio A, Di Prima L, Falci C, Le Moli C, et al. Predictive value of serological tests in the diagnosis of celiac disease // Ann.Ital.Med.Int. 2002. -Vol. 17(2).-P.102-107.

130. Casiano C.A., Martin S.J., Green D.R., Tan E.M. Selective cleavage of nuclear autoantigens during CD95 (Fas/APO-1)- mediated T cell apoptosis // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 184. - P. 765-770.

131. Casiano C.A., Tan E.M. Recent developments in the understanding of antinuclear antibodies // Int. Arch. Allergy Immunol. 1996. - Vol. 111(4). -P.308-313.

132. Cassani F, Cataleta M, Valentini P, Giostra F, et al. Serum autoantibodies in chronic hepatitis C: comparison with autoimmune hepatitis and impact on the disease profile // Hepatology. 1997. - Vol. 26(3). - P.561-566.

133. Celli B., Benditt J., Albert RK. Chronic obstructive pulmonary disease.//Comprehensive Respiratory Medicine. London, UK: Mosby International Ltd.-2001 .-p.371 -395.

134. Chan AW., Butzner JD., McKenna R., Fritzler MJ. Tissue transglutaminase enzyme-linked immunosorbent assay as a screening test for celiac disease in pediatric patients.//Pediatrics.-2001.-v.l07(l):E8.

135. Chan T.M., Cheng I.K. Identification of endothelial cell membrane proteins that bind anti-DNA antibodies from patients with systemic lupuserythematosus by direct and indirect mechanisms // J. Autoimmun. 1997. -Vol. 10(5).-P. 433-439.

136. Chan-Yeung M., Muller N.L. Cryptogenic Fibrosing alveolitis.// Lancet-1997.-350.-p.651-656.

137. Cheng H.M. Cell penetration by antiphospholipid autoantibodies // Immunol. Today. 1998. - Vol. 19(1). - P. 49-59.

138. Chikuba N., Akazawa S., Yamaguchi Y. et al. Immunogenetic heterogeneity in type 1 (insulin-dependent) diabetes among Japanese class II antigen and autoimmune thyroid disease.//Diabetes Research Clin. Practice.-1995.-v.27.-p.'31-37.

139. Chou C.T. Enterobacterial antibodies in Chinese patients with rheumatoid arthritis and ankylosing spondylitis // Clin. Exp. Rheumatol. 1998. -Mar-Apr.-Vol. 16(2).-P. 161-164.

140. Chowdhry IA, Kowal C, Hardin J, Zhou Z, Diamond B. Autoantibodies that bind glomeruli: cross-reactivity with bacterial antigen // Arthritis Rheum .2005. Vol.52(8). - P.2403-2410.

141. Clinical Immunology: Guidelines forits Organization, Training and Certification. Relationships with Allergology and Other Medical Disciplines.- A WHO/IUIS/IAACI// Report.Clinical Immunology a.Immunopath.-1993 .-v.69.-p.234-243.

142. Conrad K., Tan E.M., Humbbel R.L., Shoenfeld Y. Autoantibodies -diagnostic, pathogenic and pathognostic relevance // Clin. Exp. Rheum. 1997. -Vol. 15.-P. 457-465.

143. Cortese I., Capone S., Luchetti S., Cortese R., Nicosia A. Cross-reactive phage-displayed mimotopes lead to the discovery of mimicry between HSV-1 and a brain-specific protein // J. Neuroimmunol. 2001. - Vol. 113(1). - P.l19-128.

144. Cortes-Hernandez J., Ordi-Ros J., Labrador M., et al. Antihistone and anti-dsDNA antibodies are associated with renal disease in systemic lupus erythematosus. // Am.J.Med. 2004. - №1. - Vol. 116(3). - P. 165-173.

145. Countinho A. Current concepts of autoimmunity // Eds. Kazatchkine M.D., Moreli A. IVIG research and Therap. Parthenon publishing, New York, USA.- 1997.-P. 115-122.

146. Cover T., Aber R.C. Y.enterocolitica II N. Engl J. Med. 1989. -Vol 321. - N1. - P.16-24.

147. Cowan RG, Winnie GB. Anli-Pseudomonas aeruginosa IgG subclass titers in patients with cystic fibrosis: correlations with pulmonary function, neutrophil chemotaxis and phagocytosis // J.Clin.Immunol. 1993. - Vol. 13(5).-P.359-370.

148. Crespo Ade M, Falcao DP, de AP,de MB. Effects of Yersinia enterocolitica 0:3 derivatives on B lymphocyte action in vivo // Microbiol. Immunol. 2002. - Vol. 46(2). - P.95-100.

149. Csepregi A., Szodoray P., Zeher M. Do Autoantibodies predict autoimmune liver disease in primary Sjogren's syndrome? Data of 180 patients upon a 5 Year follow-up. // Scand. J. Immunol. 2002.- Vol.56(6). - p.623-629.

150. Cui Z, Zhao MN. Avidity of anti-glomerular basement membrane autoantibodies was associated with disease severity // Clin.Immunol. 2005. -Vol. 116(1). -P.77-82.

151. Cunningham MW. T cell mimicry in inflammatory heart disease. // Mol. Immunol.-2004.-Vol. 40 .-P. 1121-1127.

152. Da Rosa Utiyama SR, da Silva Kootze LM, Nisihara RM, et al. Spectrum of autoantibodies in celiac patients and relatives.// Dig. Dis. Sci.-2001.-46(12).-p.2624-2630.

153. Daskalova M., Taskov H., Dimitrova E., Baydanoff S. Humoral and cellular immune response to elastin in patients with systemic sclerosis // Autoimmunity. 1997. -Vol. 25(4). -P.233-241.

154. Davidson A., Diamond B. Autoimmune diseases // N. Engl. J. Med. -2001 345. P.340-350.

155. Dayan- C., Chu N., Londei M. T-cells involved in human autoimmune disease are resistant to tolerance.// J.Immunol.-1993.-v.l51.-p.1606-1613.

156. Delves P. J., Roitt I.M. The immune system first of two parts // N. Engl. J. Med. - 2000. -343. - P.37-49.

157. Devis BH. Improved diagnostic approaches to infection/sepsis detection./ZExpert. Rev. Mol. Diagn.-2005.-5(2).-p. 193-207.

158. De Vlam K., De Keyser F., Verbruggen G., Vandenbossche M., et al. Detection and identification of antinuclear antibodies in the serum of normal blood donors // Clin. Exp. Rheum. 1993. - Vol. 11. - P.393-397.

159. Dighiero G. Natural autoantibodies, tolerance and autoimmunity // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1997. - Vol. 85.-P. 182-192.

160. Dinkla K., Rohde M., Jansen W.T.M.m et al. Rheumatic fever -associated Streptococcus pyogenes isolates aggregate collagen // J. Clin. Invest. 2003. - №15; - Vol.111(12). -P. 1905-1912.

161. Dominguez-Lopez ML., Burgos-Vargas R., Galicia-Serrano H. et al. IgG antibodies to enterobacteria 60 kDa heat shok proteins in the sera of HLA-B27 positive ankylosing spondylinis patients.// Scand. J. Rheumatol. 2002.-31(5).-p.260-265.

162. Dominguez-Lopez ML., Cancino-Diaz ME., Jimenez-Zamudio L. et al. Cellular immune response to Klebsiella pneumoniae antigens in patients with HLA B27+ ankylosing spondylitis.//J.Rheumatol.-2000.-27(6).-p. 1453-1460.

163. Dubois M., Gillor K.A., Hamilton J.K. et al. A colometrie method for the determination of sugars.//Anal. Chemistry.-1956.-Vol 28.-p.350.

164. Duzgun N., Hoiermadsen M., Wiik A., Tokgoz G. The frequency of autoantibodies in Turkish patients with lupus nephritis. // Rheumatology International. 1997. - Vol. 17(1). — p. 1-4.

165. Eguchi K. Apoptosis in autoimmune diseases // Intern. Med. 2001. -Vol. 40(4).-P. 275-284.

166. Eguchi K., Matsuoka N., Nagataki S. Cellular immunity in autoimmune Thyroid disease.// Baillieres Clin. Endocrinol. Metab.-1995.-vol.9.-p.71-94.

167. Ehrlich P., Morgenroth J. On hemolysins. Third communication // The collected papers of Paul Ehrlich. London: Pergamon Press. 1957. - Vol. 2. -P. 205-212.

168. Eichbaum Q.G., Hughes E.J., Epstein J.E., Beatty D.W. Rheumatic fever: Autoantibodies against a variety of cardiac, nuclear and streptococcal antigens // Ann. Rheum. Dis. 1995. - Vol. 54(9). - P. 740-743.

169. File T.M. Community-acquired pneumonia// Lancet.-2003.-V.362.-p.1991-2001.

170. Eller J., Ede A., Schaberg T., et al. Infective exacerbation of chronic bronchitis: relation between bacteriologic etiology and lung function.//Chest.-1998.-113.-p.l542-1548.

171. Emlen W., Oneill L. Clinical significance of antinuclear antibodies, Comparison of detection with immunofluorescence and enzyme-linked immunosorbent assays. // Arthritis and Rheumatism 1997. - Vol.40(9). -p.1612-1618.

172. Erbay H., Yalcin A.N., Sebin S. et al. Nosocomial infections in intensive care unit in a Turkish university hospital: a 2-year survey .//Intensive Care Med. -2003.-29(9).-p. 1482-1488.

173. Fairweather D., Kaya Z., Shellam GR., Lawson CM., Rose NR. From infection to autoimmunity.// J.Autoimmunity-2001.-16(3).-p.l75-186.

174. Faller G., Kirchner T. Helicobacter pylori and antigastric autoimmunity.// Pathologe.-2001.-22(l).-p.25-30.

175. Fan L., Zhong R., Zhang S, et al. Expression and identification of specific autoantigens in autoimmune hepatitis // Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi -2002.-Vol. 10(2). -P.l 13-115.

176. Fedota AM., Kozlov AN. Investigation of the level of genetical safety of urban population.// Tsitol. Genet. 2005.-39(4).-p.41-44.

177. Fielder M, Tiwana H, Youinou P, et al. The specificity of the anti -Proteus antibody response in tissue-typed rheumatoid arthritis (RA) patients from Brest .// Rheumatol Int.-1995.-15(2).-p.79-82.

178. Folds JD., Schmitz JL. Clinical and laboratory assessment of immunity .//J. Allergy Clin. Immunol.-2003. -111(2). -p.702-711.

179. Folwaczny C, Noehl N, Tschop K, Endres SP, et al. Goblet cell autoantibodies in patients with inflammatory bowel disease and their first-degree relatives. // Gastroenterology.-1997.-113(l).-p. 101-106.

180. Gastmeier P. Nosocomial urinary tract infection: many unresolved questions.//Clin Microbiol Infect.-2001.-v.7.-p.521-523.

181. Gaston JS. Immunological basis of Chlamydia induced reactive arthritis.//Sex Transm Infect.-2000.- v.76 (3).- p. 156-161.

182. Gaston JS., Cox C., Granfors K. Clinical and experimental evidence for persistent Yersinia infection in reactive arthritis.//Arthritis Rheum.-1999.-v.42.- p.2239-2242.

183. Gautam V., Sehgal R., Paramjeet SG., Arora DR. Detection of anti-Proteus antibodies in sera of patients with rheumatoid arthritis // Indian. J. Pathol. Microbiol. 2003. - Vol. 46(l).-p.l37-141.

184. Glynn A.A., Ison C. Enzyme .Immunoassays bacteriology // In: Immunoassay sin.-80.-1982.-p.431 -440.

185. Georgescu L., Vakkalanka R.K., Elkon K.B., Crow M.K. Interleukin-10 promotes activation-induced cell death of SLE lymphocytes mediated by Fas ligand // J. Clin. Invest. 1997.-Vol. 100(10).-P. 2622-2633.

186. Gibb D., Spoulou V., Giacomelli A., et al. Antibody responses to Hemophilis influenzae type b and Streptococcus pneumoniae vaccines in children with human immunodeficiency virus infection.// Pediatr. Infect. Dis. J.- 1995.-14.-p.129-135.

187. Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Global strategy for the diagnosis, management and prevention of chronic obstructive pulmonary disease. NHLBI/WHO workshop report (publication №2701); 2001.

188. Gminski J., Poborski W., Kasprzak A., et al. Anti-elastin antibodies in systemic lipus erythematosus // Pol. Tyg. Lek. 1990. -Vol.45(25-26). -P.513-515.

189. Goldblatt F, Gordon TP, Waterman SA. Antibody-mediated gastrointestinal dysmotility in scleroderma // Gastroenterology. 2002. — Vol. 123(4). -P.l 144-1150.

190. Granfors K., Ogasavara M., Mill L. et al. Análisis of IgA-antibodies to LPS in Y.enterocolitica-triggered reactive arthritis.//J.Inf. Diseases.-1989.-Vol.159.-p.1142-1147.

191. Gregorio G.V., Davies E.T., Mieli-Vergani G., Vergani D. Significance of extractable nuclear antigens in childhood autoimmune liver disease.//Clin.Exp.Immunol.-l 995.-102(2).-p.308-313.

192. Grippenberg-Lerche C., Skurnic M., Zhang 1. et al. Role of Yad A in arthritogenicity of Y.enterocolitica serotype 08 experimental studies with rats // Infect. Immun.-1994.-Vol.62.-№12.-p.5568-5575.

193. Gruber R, Felber E, Pape GR, Hochtlen-Vollmar W, Riethmuller G. Detection of autoantibodies against M2, LKM-1, and SLA in liver diseases by standardized uniform ELISA-techniques.// J.Clin.Lab.Anal.-1994.-8(5).-p.284-292.

194. Han S, Tredger M, Gregorio GV, Mieli-Vergani G, Vergani D. Anti-liver cytosolic antigen type 1 (LCI) antibodies in childhood autoimmunine liver disease // Hepatology.-1995.-21(l).-p.58-62.

195. Hashimoto T. The guidelines for the diagnosis and monitoring of endocrine diseases (expert of diabetes mellitus)// Rinsho.Byori.-2003.-51(6).-p.592-594.

196. Hee-Sook Jun, Ji-Won Yoon. A newlook at virusses in type 1 diabetes // Diabetes. Metab. Res. Rev.- 2003.- v. 19- p.8-31.

197. Hernandez-Fuentes MP., Warrens AN., Lechler RL Immunologic monitoring // Immunol.Rev.- 2003.-Des; 196.-p.247-264.

198. Heyma P. and L.C.Harrison. Precipitation the thyrotropin reception identification of thyroid autoantigens using Graves disease immunoglobulins // J.Clin. Invest.-1984(74).-p. 1090.

199. Herzberg MC., Nobbs A., Tao L., et al. Oral streptococci and cardiovascular disease: searching for the platelet aggregation-assciated protein gene and mechanisms of Streptococcus sanguis-induced thrombosis.// J.Periodontol.-2005.-76(ll).-p.2101-2105.

200. Hoffmann SC., Pearl JP., Blair PJ., Kirk AD. Immune profiling: molecular monitoring in renal transplantation.// Front. Biosci.-2003.-Sep 1;8.-p.444-462.

201. Hohlfeld R., Engel A.G. The immunobiology of muscle // Immun. Today.-1994.-15.-p.269-280.

202. Holmen C, Christensson M, Pettersson E, et al. Wegener's granulomatosis is associated with organ-specific antiendothelial cell antibodies.// Kidney.Int.-2004.-66(3).-l 049-1060.

203. Homburger HA, Cahen YD, Griffiths J, Jacob GL. Detection of antinuclear antibodies: comparative evaluation of enzyme immunoassay and indirect immunofluorescence methods.// Arch.Pathol.Lab.Med.-1998.-122(1 l).-p.993-999.

204. Hopkinson N. Sexually-acquired reactive arthritis.//Hosp Med.-2001.-v.62(2).-p.83-85.

205. Hrycaj P., Lacki J.K. Antibodies to ubiquitin in relation to Yersinia infection status in patients with ankylosing spondylitis.//Clin. Rheumatol.-2003.-Feb, 22(l).-p.33-36.

206. Hrycek A., Pochopien-Kenig G. Parameters of disease activity used in systemic lupus erythematosus.//Pol Arch Med Wewn.-2004.-v.l 1 1(3).-p.367-374.

207. Humbert P., Dupond J. Multiple autoimmune syndromes.// Ann. Med. Interne Paris.-1988.- vol.l39.-p.l59-168.

208. Hyoty H., Taylor KW. The role of virusis in human diabetes.//Diabetologia.-2002.-45( 10).-p. 1353-61.

209. Iarilin AA. Radiation and immunity. Interference of ionizing radiation with key immune processes.// Radiats. Biol. Radioecol.-1999.-39(10.-p. 181189.

210. Isenberg D. Anti-dsDNA antibodies: still a useful criterion for patients with systemic lupus erythematosus?//Lupus.-2004.-v. 13(11).-p.881-885.

211. Ishiwada N., Niwa K., Tateno S., et al. Causative organism influences clinical profile and outcome of infective endocarditis in pediatric patients and adults with congenital heart disease.// Circ.J.-2005.- 69(10).-p. 1266-1270.

212. Isshi K., Hirohata S. Differential roles of the anti-ribosomal P-antibody and antineuronal antibody in the pathogenesis of central nervous system involvent in systemic lupus erythematosus.//Arthritis Rheum.-1998.-v.41.-p.1819-1827.

213. Ivanova SM., Karpova GG., Bogachiova NV., et al. Ribosomal P protein antibodies.//Ann.of Rheumatic Diseases.Eular 2001, Prague, 13-16 June 2001, pplOl.

214. Janeway C.A., Travery P., Walpot M., Capra J.D. Immunology. The immune system in health and disease. // London, 1999. P.735.

215. Johnson G., Moore S.W. Cholinesterase-like catalytic antibodies: reaction with substrates and inhibitors // Mol. Immunol. 2000. - Vol. 37(12-13). - P. 707-719.

216. Kamrads T., Mitchison N.A. Tolerance and autoimmunity // N. Engl. J. Med.-2001 .-9(l).-vol.344.- P.655-667.

217. Kanzler S, Weidermann C, Gerken G, et al. Clinical significance of autoantibodies to soluble liver antigen in autoimmune hepatitis // J.Hepatol.-1999.-3 l(4).-p.635-640.

218. Karchmer T., Gianetta E., Muto CM., et al. A randomized crossover study of silver-coated urinary catheter in hospitalized patients.//Arch Intern Med.-2000.- v.160. p.3294-3298.

219. Kidd A.N.,Okita V.V., Rom and R.Volpe. Immunologic aspectic Graves and Hashimoto's diseases.//Metabolism.-1980.-p.29-80.

220. Kim SW., Grant JE., Kim SI., et al. A possible association of recurrent streptococcal infections and acute onset of obsessivecompulsive disorder.// J. Neuropsychiatry Clin. Neurosci.-2004.-16(3).-p.252-260.

221. Kirvan CA., Swedo SE., Heuser JS., Cunningham M.W. Mimicry and autoantibody-mediated neuronal cell signaling in Sydenham chorea.// Nat. Med.-2003.-9(7).-p.823-825.

222. Klug D., Wallet F., Kacet S., Courcol RJ. Involvement of adherence and adhesion Staphylococcus epidermidis genes in pacemaker lead-associated infections.//J.Clin. Microbiol.-2003.- 41(7).-p.3348-3350.

223. Koh J.S., Levine J.S. Apoptosis and autoimmunity // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1997. - Vol. 6(3). - P. 259-266.

224. Koh J.S., Wang Z., Levine J.S. Cytokine dysregulation induced by apoptotic cells is a shared characteristic of murine lupus // J. Immunol. — 2000.-Vol. 165(8). -P.4190-4201.

225. Korzeniowska-Kowal A, Witkowska D, Gamian A. Molecular mimicry of bacterial polysaccharides and their in etiology of infectious and autoimmune diseases. // Postery Hig Med. Dosw.-2001.-55(2).-p.211-232.

226. Kossa K, Coulthart A, Ives CT, Pusey CD, Hodgson HJ. Antigen specificity of circulating anti-neutrophil cytoplasmic antibodies in inflammatory bowel disease // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.-1995.-7(8).-p.783-789.

227. Kovacs B., Liossis S.N., Dennis G.J., Tsokos G.C. Increased expression of functional Fas-ligand in activivated T cells from patients with systemic lupus erythematosus // Autoimmunity. 1997. - Vol. 25(4). - P. 213-221.

228. Kowal C., Weinstein A., Diamond B. Molecular mimicry between bacterial and self antigen in patient with systemic lupus erythematosus // Eur. J. Immunol. 1999. - Vol. 29(6). - P. 1901 -1911.

229. Kozyr A.V., Kolesnikov A.V., Zelenova N.A., Sashchenco L.P. et al. Autoantibodies to nuclear antigens // Biotechnol. and Appl. Biochem. -2000. Vol.83. - P.255-270.

230. Kroeger K., Kreuzfelder E. Autoantibodies and peripheral arterial occlusive disease // Herz. 2004. - Vol.29(l). - P. 26-31.

231. Kuroda M., Yamashita A., Hirakava H., et al. Whole genome sequence of Staphylococcus saprophyticus reveals the pathogenesis of uncomplicated urinary tract infection.//Proc Natl Acad Sci USA.-2005.-Sep 13; 102(37)-p.13272-13277.

232. Laboratory Investigations in Clinical Immunology Methods: pitfalls and clinical indications.- A second IUIS/WHO report IUIS/WHO Working group.// Clinical Immunology a. Immunopath.- 1988.-v.49.- p.487-497.

233. Le Deist F., Emile J.F., Rieux-Laucat F. et al. Clinical, immunological, and pathological consequences of Fas-dificient conditions // Lancet 1996. -Vol. 348.-P. 719-723.

234. Le Petit J.C., Barthélémy C., Boucheron S., Brizard C.P., Fraisse H. Antibodies against gastric parietal cells in gastritis (author's transi) // Nouv. Presse Med. 1981. -№16.-Vol. 10(22). - C. 1799-1802.t

235. Lefkowith J.B., Kiehl M., Rubenstein J., DiValerio R. et al. Heterogeneity and clinical significance of glomerular-binding antibodies in systemic lupus erythematosus // J.Clin. Invest. 1996. - Vol. 98. - P. 1373-1380.

236. Leeper KV., Jones AM., Tillotson G. The changing bacterial etiology of chronic obstructive pulmonary disease.//Chest-1997.-112:21S.

237. Li BA, He WP, Liu Y, et al Detection of autoimmune parameter of SARS patients // Zhong.Shi.Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi.-2005.-19(2).-p.121-123.

238. Lindorfer M.A., Schuman T.A., Craig M.L., Martin E.N.,Taylor R.P. A bispecific dsDNA monoclonal antibody construct for clearance of antidsDNA IgG in systemic lupus erythematosus // J. Immunol. Methods -2001. Vol.248(l-2). - P. 125-138.

239. Liossis S.N.C., Ding D.Z., Kiang J.G., Tsokos G.C. Overexpression of the heat shock protein 70 enhances the TCR/CD3- and Fas/Apo-l/CD95-mediated apoptotic cell death in Jurkat T cells // J. Immunol. — 1997. -Vol. 158. P.5668-5675.

240. Lorenz H.M., Herrmann M., Winkler T., Gaipl U., Kalden J.R. Role of apoptosis in autoimmunity // Apoptosis 2000. -Vol.5(5). - P. 443-449.

241. Lowry O.H., Rosenbrought N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J.Biol.Chemistry.-1951.-Vol.l93.-p.265-275.

242. Ludewig B, Krebs P, Metters H, Tatzel J, Tureci O, Sahin U. Molecular characterization of virus-induced autoantibody responses // J.Exp.Med.-2004.-Sep 6;200(5).-637-646.

243. Luo G. Purification and characterization of Y. enterocolitica envelope proteins which induce antibodies that react with the thyrotropin receptor // J.Immunol.-l 994.-152:922.

244. Maki-Ikola O, Lahesmaa R, Heesemann J, et al. Yersinia-specific antibodies in serum and synovial fluid in patients with Yersinia triggered reactive arthritis.//Ann Rheum.Dis.-1994.-53(8).-p.535-539.

245. Maki-Ikola O, Nissila M, Lehtinen K, et al. Antibodies to Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli and Proteus mirabilis in the sera of patients with axial and peripheral form of ankylosing spondylitis // Br. J.Rheumatol.-1995 .-3 4(5).-p.413-417.

246. Mankai A, Sakly W, Landolsi H, Gueddah L, et al. Tissue transglutaminase antibodies in celiac disease, comparison of an enzyme linked immunosorbent assay and a dot blot assay.// Pathoi. Biol.-2005.-53(4).-p.204-209.

247. Martinova F., Trankova V., Borissova A.M., Kovatcheva R. HLA class I and class II antigens associated with Hashimoto's Thyroiditis // 1st Balcan and Southeastern European Congress on Histocompatibility and Immunogenetics. Abstracts.-1996.-p.41.

248. Mason L.J., Isenberg D.A. Immunopathogenesis of SLE // Baillieres Clin. Rheum. 1998.-vol. 12(3).-P. 385-403.

249. Matsui T., Kurokawa M., Kobata T., Oki S. et al. Autoantibodies to T cell costimulatory molecules in systemic autoimmune diseases // J. Immunol. — 1999. Vol. 162(7). -P.4328-4335.

250. McNally J., Yoo D.H., Drappa J. et al. Fas ligand expression and function in systemic lupus erythematosus // Autoimmunity. 1997. - Vol. 25(4). -P. 213-221.

251. Metzger A.L., Morris R.I. Appropriate laboratory testing in rheumatic diseases // Lippincotts Prim. Care Pract. 1998. - Vol. 2(1). - P.52-65.

252. Mevorach D., Zhou J.L., Song X., Elkon K.B. Systemic exposure to irradiated apoptotic cells induces autoantibody production // J. Exp. Med. — 1998.-Vol. 188(2).-P.387-392.

253. Michalska Z., Stalke P., Witczak-Malinowska K., et al. Autoimmune reactions in HBV and HCV // Med. Sei. Monit. 2001. - Vol. 7(1). -P.175-180.

254. Microbial threats to health// Eds Smolinski M.S., Hamburg M.A., Lederberg J.-Washington The National academies oress - 2001 -396p.

255. Milgrom F., Swierczynski Z. Are cross-reacting natural antibodies multispecific? // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1986. - Vol. 80. - P. 200-210.

256. Mimori T. Collagen diseases and autoantibodies- current topics. // Nippon. Naika Gakkai Zasshi. 2004. -№10.-Vol. 93(9).-P.1951-1956.

257. Mitchison N.A., Wedderburn L.R. B cells in autoimmunity // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-2000. 97.- p.8750-51.

258. Miyakawa H, Kikazawa E, Abe K, et al. Detection of anti-LKM-l(anti-CYP2D6) by an enzyme-linked immunosorbent assay in adult patients with chronic livar diseases // Autoimmunity.-1999,- 30(2).- p.107-114.

259. Mohan C., Liu F., Xie C., Williams R.C. Jr. Anti-subnucleosome reactivities in systemic lupus erythematosus (SLE) patients and their first-degree relatives // Clin. Exp. Immunol. 2001. - Vol. 123(1). - P. 119126.

260. Monestier M. Autoantibodies to nucleosome and histone-DNA complex // Methods. 1997. - Vol. 11(1). - P. 36-43.

261. Moran AP, Prendergast M.M. Molecular mimicry in Campylobacter jejuni and Helicobacter pylori lipopolysaccharides: contribution of gastrointestinal infections to autoimmunity // J.Autoimmun.-2001. 16(3). -p. 241-256.

262. Mosca PJ., Clay TM., Morse MA., Lyarly HK. Immune monitoring // Cancer Treat. Res. 2005.-123.-p.369-388.

263. Mostoslavsky G., Fischel R., Yachimovich N., Yarkoni Y. et al. Lupus anti-DNA autoantibodies cross-react with a glomerular structural protein: a case for tissue injury by molecular mimicry // Eur. J. Immunol. 2001. -Vol. 31(4).-P. 1221-1227.

264. Mu MM, Chakravortty D, Takahashi K, et al. Production of experimental autoimmune sialadenitis in mice immunized with homologous salivary gland extract and Klebsiella 03 lipopolysaccharidis // J.Autoimmun.-2001.- 16(1).- p.29-36.

265. Murase M. Perspective of laboratory examination system for infectious disease // Rinsho. Byori. -2001 .-49(9).-p.894-899.

266. Muratori P, Muratori L, Agostinelli D, Pappas G, et al. Smooth muscle antibodies and type 1 autoimmune hepatitis // Autoimmunity.-2002.35(8).p.497-500.

267. Murphy TF., Brauer AL., Grant BJ., Sethi S Moraxella catarrhalis in chronic obstructive pulmonary disease: burden of disease and immune response // Am.J.Respir.Crit.Care Med.-2005.-Jul. 15; 172(2).-p 195-199.

268. Myhre AG, Undlien DE, Lovas K, et al. Autoimmune adrenocortical failure in Norway autoantibodies and human leukocyte antigen class II associations related to clinical features // J.Clin.Endocrinol.Metab.-2002.-87(2).-p.618-623.

269. Murray CJL., Lopez AD. Alternative projections of mortality and1 disability by cause 1990-2020: global burden of disease study.//Lancet.1997.-349.-p. 1498-1504.

270. Nakajima A., Hirai H., Kayagaki N. et al. Treatment of lupus in NZB/W F1 mice with monoclonal antibody against Fas ligand // J.Autoimmun. -2000.-Vol. 14(2).-p. 151-157.

271. Nakamura N., Ban T., Yamaji K., Yoneda Y., Wada Y. Localization of the apoptosis-inducing activity of lupus anticoagulant in an annexin V-binding antibody set // J.Clin. Invest. 1998. - Vol. 101(9). - P. 19511959.

272. Nakamura H., Genma R., Mikami T. et al. High incidence of positive autoantibodies against thyroid peroxidase and thyroglobulin in patients with sarcoidosis // Clinical Endocrynology 1997. - Vol. 46(4). - P. 467472.

273. Naparstek Y., Protz P.H. The role of autoantibodies in autoimmune disease // Annu. Rev. Immunol. 1993. - Vol. 11. - P. 79-104.

274. Navratil J.S., Ahearn J.M. Apoptosis and autoimmunity: complement deficiency and systemic lupus erythematosus revisited // Curr. Rheumatol. Rep. 2000. - Vol. 2(1). - P.32-38.

275. Negrini R, Savio A, Appelmelk BJ. Autoantibodies to gastric mucosa in Helicobacter pylori infection // Helicobacter.- 1997.- 2.Suppl.l.- p.13-16.

276. Nicoloff G., Blazhev A., Petrova C., et al. Detection of free antielastin antibodies among diabetic children. // J. Investig. Med. 2005. - Vol. 53(3). -P.128-134.

277. Nielen MM., van Schaardenburg D., Reesink H W., et al. Specific autoantibodies precede the symptoms of rheumatoid arthritis: a study of serial measurements in blood donors.//Arthritis Rheum.-2004.-50.-p.3 80386.

278. Nishio A., Vandewater J., Leung PSC et al. Comparative studies of antimitochondrial autoantibodies in sera and bile in primary biliary cirrhosis//Hepatology. 1997. - Vol. 25(5). - P. 1085-1089.

279. Nozawa K., Kayagaki N., Tokano Y. et al. Soluble Fas (APO-1, CD95) and soluble Fas ligand in rheumatic diseases // Arthritis Rheum. 1997. -Vol. 41(3).-P. 1126-1129.

280. Ogasawara M, Kono DH, Yu DT. Mimicry of human histocompatibility HLA-B27 antigens by Klebsiella pneumoniae.//Infect.Immon.-1986.-51(3).-p.901-908.

281. Okazaki T., Honjo T. Pathogenic roles of cardiac autoantibodies in dilated cardiomyopathy// Trends.Mol.Med. 2005.- v.l l(7).-p.322-326.

282. Orth T, Gerken G, Meyer Zum Buschenfelde KH, May et WJ. Antineutrophil nuclear antibodies (ANNA) in primary biliary cirrhosis: their prevalence and antigen specificity.//Z.Gastroenterol.-1997.-35(2).-p.113-121.

283. Pape L., Gunzer F., Ziesing S. et al. Bacterial pathogens, resistance patterns and treatment options in community acquired pediatric urinary tract infection.//Clin Pediatr. -2004.-v.216(2).-p.83-86.

284. Parkinson AJ., Butler JC. Potential impacts of climate on infectious diseases in the Arctic // Int.J.Circumpolar.Health. 2005.-v.64(5).-p.478-486.

285. Paul S., Li L., Kalaga R., O'Dell J. et al. Characterization of thyroglobulin-directed and polyreactive catalytic antibodies in autoimmune disease // J. Immunol. 1997. - Vol. 159(3). - P. 1530-1536.

286. Pavic S, Simonovic J, Boricic I, Svirtlih N. Autoantibodies characteristic for autoimmune hepatitis found in chronic hepatitis C // Srp. Arh. Celok. Lek.-2003.-131(1 l-12).-p.437-442.

287. Pedersen SS, Espersen F, Hoiby N, Jensen T. IgA and IgG antibody responses to alginates from Pseudomonas aeruginosa in patients with cystic fibrosis // J.Clin.Microbiol.-l990.-28(4).-p.747-755.

288. Pepe J.C., Miller V.L. The biological role of invasing during a Y. enterocolitica infection // Infect. Agents Diseases.-1993.-Vol.2.-N4.-p.236-241.

289. Perry C.R. Septic arthritis //Am.J.Orthop. -1999. -28(3). p.168-178.

290. Peters C, Tenbergen-Meekes AM, Poolmann J,Zegers B, Rijkers G. Induction of anti-pneumococcal cell wall polysaccharide antibodies by type 4pneumococcal polysaccharide-protein conjugates // Med.Microbiol.Immunol. -1992.-18 l(l).-p.35-42.

291. Peters J.B., Shoenfeld Y. Autoantibodies // Elsevier, Amsterdam, The Netherlands. 1997.

292. Peterson Ph.K., Wilkinson B.Y., Kim Y. et al. The key role of peptidoglycan in the opsonization of Staphylococcus aureus // J.Clin. Investig. 1978. -Vol.61.- p.597-609.

293. Pickering M.C., Botto M., Taylor P.R., Lachmann P.J., Walport M.J. Systemic lupus erythematosus, complement deficiency, and apoptosis // Adv. Immunol. 2000. - Vol. 76. - P. 227-324.

294. Pietropaolo MYS., Libman IM., Pietropaolo SL., et al. Cytoplasmic islet cell antibodies remain valuable in defining risk of progression to type I diabetes in subjects with other islet autoantibodies// Pediatr.Diabetes.- 2005.-v.6(4).-p.181-183.

295. Pinigin MA., Petrova IV., Molkov IN., et al. Study of immunity in the population during sociohygienic monitoring.//Gig. Sanit. -2004.-(5).-36-38.

296. Pisetsky D.S. Specificity and immunochemical properties of antibodies to bacterial DNA // Methods. 1997. - Vol. 11(1). - P. 55-61.

297. Pokrovskii V.l., Maleev V.V., Semina N.A. The role of laboratory studies in the diagnosis and monitoring of infectious diseases // Clin.Lab.Diagn. 1995. -Nov-Dec; (6).-P.28-33.

298. Pradhan VD, Badakere SS, Ghosh K, pawar AR. Spectrum of anti-neutrophil cytoplasmic antibodies in patients with pulmonary turbeculosis overlaps with of Wegener's granulomatosis // Indian.J.Med.Sci.-2004.-58(7).-p.283-288.

299. Presotto F., Sabini B., Cecchetto A., et al Helicobacter pylori infection and gastric autoimmune diseases: is there a link? // Helicobacter.-2003.-8(6).-p.578-84.

300. Quataert S, Martin D, Anderson P, et al. A multi-laboratory evaluation of an enzyme-linked immunoassay quantitating human antibodies to Streptococcus pneumoniae./7 Immunol.Invest.-2001.-30(3).-p. 191-207.

301. Quintana FJ., Cohen IR. The natural autoantibody repertoire and autoimmune disease // Biomed. Pharmacother.- 2004.-v.58(5).-p.276-281.

302. Rafiq M.,, Worthington T., Tebbs SE., Treacy RB., et al. Serological detection of Gram-positive bacterial infection around prostheses.// J. Bone Joint. Surg. Br.-2000.-82(8).-p.l 156-1161.

303. Reindl M., Linington C., Brehm U., et al. Antibodies against the myelin oligodendrocyte glycoprotein and the myelin basic protein in multiple sclerosis and other neurological diseases: a comparative study // Brain. -1999. 122(11).-p.2047-2056.

304. Reynolds K.A., Watt P.M., Boone S.A., Gerba C.P. Occurrence of bacteria and biochemical markers on public surfaces.//Int. J.Environ Heath Res.-2005.-v. 15(3).-p.225-234.

305. Riboldi P, Gerosa M, Moroni G, et al. Anti-DNA antibodies: a diagnostic and prognostic tool for systemic lupus erythematosus? // Autoimmunity.-2005.-38(l).-p.39-45.

306. Richards MJ., Edwards JR., Culver DH., Gaynes RP. Nosocomial infections in medical intensive care units in the United States. National Nosocomial Infections Surveillance System.//Crit Care Med. -1999.-v.27(5).-p.887-892.

307. Richardet J.P., Lons T., Johanet C., et al. Prevalence and characteristics of anti-tissue antibodies in chronic hepatitis caused by hepatitis C virus // Gastroenterol. Clin. Biol. 1994. -Vol.l8(10). -P. 819-823.

308. Ring G.H., Lakkis F.G. Breakdown of self-tolerance and the pathogenesis of autoimmunity// Semin. Nephrol. 1999. - Vol. 19(1).-P. 25-33.

309. Ryding U, Espersen F, Soderquist B., Christensson B. Evaluation of seven different enzyme-linked immunosorbent assays for serodiagnosis of

310. Staphylococcus aureus bacteremia. // Diagn. Microbiol. Infect. Dis.-2002.42(l).-p.9-15.

311. Romero-Gomez M, Wichmann I, Crespo J, Pares A, et al. Serumimmunological profile in patients with chronic autoimmune cholestasis //

312. Am.J.Gastroenterol.-2004.-99(l 1).2150-2157.

313. Roudier C., Auger I., Roudier J. Molecular mimicry reflected throughdatabase screening: serendipity or survival strategy?// Immunol. Today — 1996.-Vol.17.-P.357-358.

314. Safdar N, Maki D. Risk factors for nosocomial colonization and infection with antimicrobial resistant S.aureus, Enterococcus spp., gram-negative bacilli, C.difficile and Candida.//Annals of Int Med.- 2002.-v.l36.-№l 1.-p.341-365.

315. Sakaguichi S.M., Toda M., Asano M., Itoh S.S., Morse N. T cell-mediated maintenance of natural self-tolerance: its breakdown as possible cause of various autoimmune disease // J. Autoimmunol. 1996. - V.9. P. 211.

316. Sarmiento E., Rodriguez-Molina JJ., Fernandez-yanez j. et al. IgG monitoring to indentify the risk for development of infection in heart transplant recipients.//Transpl.Infect.Dis.-2006.-8( 1 ).-p.49-53.

317. Schattner A, Aviel-Ronen S, Mark EJ. Accelerated usual interstitial pneumonitis, antiDNA antibodies and hypocomplementemia. //J.Intern.Med.-2003 .-254(2).-p. 193-196.

318. Scherbaum WA, Mogel H, Boehm BO, et al. Autoantibodies to adrenal medullary and thyroid calcitonin cells in type I diabetes mellitus a prospective stady.//J.Autoimmun.-1988.-1 (3).-p.219-230.

319. Schille R., Sierig G., Spencker FB., Handrick W. Urinary tract infection by Staphylococcus saprophyticus in a child.//Clin. Padiatr.-2000.-212(3).-p.126-128.

320. Segal R., Dayan M., Zinger H., Mozes E. Suppression of experimental systemic lupus erythematosus (SLE) in mice via TNF-alpha inhibition by an anti-TNF-alpha monoclonal antibody and by pentoxiphylline // Lupus 2001. -Vol. 10(1). -P.23-31.

321. Schreiter T, Liu C, Gerlcen G, Treichel U. Detection of circulating autoantibodies directed against the asialoglycoprotein receptor using recombinant receptor subunit HI // J.Immunol. Methods. -2005. Vol. 301(1-2). -P.1-10.

322. Sharma A, Isenberg D, Diamond B. Studies of human polyclonal and monoclonal antibodies binding to lupus autoantigens and cross-reactive antigens // Rheumatology.-2003.-42(3).-p.453-463.

323. Sheldon J. Laboratory testing in autoimmune rheumatic diseases // Best. Pract. Res. Clin. Rheumatol.-2004.-18(3).-p.349-469.

324. Shevach E.M. Regulatory T cells in autoimmunity // Annu. Rev. Immunol.-2000.-18.-p423-449.

325. Shoenfeld Y., Isenberg D.A. Natural autoantibodies: Their physiological role and regulatory significance // CRC Press, Boca Raton, FL, USA. 1993.

326. Shoenfeld Y. The kaleidoscope of autoimmunity // Autoimmunity. -1993. Vol. 15(3). - P. 245-252.

327. Shoenfeld Y. Etiology and pathogenetic mechanisms of the anti-phospholipid syndrome unraveled // Trends.Immunol.-2003.-24(l).-p.2-4.

328. Seibold F, Brandwein S, Simpson S, et al. pANCA represents a cross-reactivity to enteric bacterial antigens // J.Clin.Immunol.-1998.-18(2).-p.l53-160.

329. Selva-Ocallaghan A, Labrador-Horrillo M, Munoz-Gall X, et al.

330. Polymyositis/dermatomyositis-assoeiated lung disease: analysis of a serias of81 patients.// Lupus.-2005.-14(7).-p.534-542.

331. Seissler J, Schott M, Steinbrenner H, et al. Autoantibodies to adrenal cytochrome P450 antigens in isolated Addison's disease and autoimmune polyendocrine syndrome type II // Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes.-1999.-107(3).-p.208-213.

332. Silva RC, Faical S, Laureti S, et al. Detection of adrenocortical autoantibodies in Addison's disease with a peroxidase-labelled protein A technique // Braz. J.Med.Biol.Res.-1998.-31 (9).-p. 1141-1148.

333. Schultz H, Schinke S, Weiss J, et al. BPI-ANCA in transporter associated with antigen presentation (TAP) deficiency: possible role in susceptibility to Gram-negative bacterial infections // Clin.Exp.Immunol.- 2003. — Vol. 133(2).-P.252-259.

334. Scofield R.H. Autoantibodies as predictors of disease // Lancet. 2004. -363. -P.1544-1546.

335. Sinico RA., Bollini B., Sabadini E., et al. The use of laboratory tests in diagnosis and monitoring of systemic lupus erythematosus // J.Nephrol.-2002.- v.15.- Suppl 6. -p.20-27.

336. Snider LA., Swedo SE. Post-streptococcal autoimmune disorders of the central nervous system // Curr.Opin. Neurol.-2003. -16(3).-p.359-365.

337. Soderbergh A, Winqvist O, Norheim I, et al. Adrenal autoantibodies and organ-specific autoimmunity in patients with addison's disease.//Clin.Endocrinol.-1996.-45(4).-p.453-460.

338. Stein DM, Robbins J, Miller MA, Lin FY, Schneerson R. Are antibodies to the capsular polysaccharide of Neisseria meningitidis group B and Escherichia coli Kl associated with immunopathology? // Vaccine.-2006.-V.24(3 ).-p.221 -228.

339. Sturfelt G., Sjoholm AG., Svensson B. Complement components, CI activation and disease activity in SLE.//Int Arch Allergy Appl Immunol.-1983.-v.70(l).-p. 12-18.

340. Storch W. Possibilities for the use of immunofluorescence in clinical immunologic diagnosis.//Acta histochem.Suppl.-1984.-30.-p.89-92.

341. Strieder T.G., Wenzel B.E., Prummel M.F., et al. Increased prevalence of antibodies to enteropathogenic Yersinia enterocolitica virulence proteins in relatives of patiens with autoimmune thyroid disease.//Clin. Exp. Immunol.-2003.-132(2).-p.278-282.

342. Sung JY, Chan FK, Lawton J, et al. Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) and inflammatory bowel diseases in Chinese.//Dig Dis.Sci.-1994.-39(4).-p.886-892.

343. Sukegawa Y., Kamiya S., Yagita A., Sugamata M., Atomi Y. Induction of autoimmune colitis by Yersinia enterocolitica 60-kilodalton heat-shoch protein // Scand. J. Gastroenterol. 2000. - Vol. 35(11). - P. 1188-1193.

344. Suzuki Y., Funato T., Munakata Y., Sato K. Chemically modified ribozyme to V gene inhibits anti-DNA production and the formation of immune deposits caused by lupus lymphocytes // J. Immunol. 2000. - Vol. 165(10).-P. 5900-5905.

345. Swaak AJ. Diagnostic significance of antinuclear antibodies.//Ned. Tijdschr. Geneeskd.-2000.-25;144(13).-p.585-589.

346. Swedler W., Wallman J., Froelich CJ., Teodorescu M. Routine measurement of IgM, IgG and IgA rheumatoid factors: high sensitivity,specifity and predictive value for rheumatoid arthritis.//J.of Rheumatology.-1997.-v.24(6).-p. 103 7-1044.

347. Takai T. Fc receptors and their role in immune regulation and autoimmunity.//!. Clin. Immunol.-2005.-25(l).-p.l-18.

348. Tan E.M. Antinuclear antibodies: diagnostic markers and clues to the basis of systemic autoimmunity // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. - Vol. 7, N 5(suppl.). -P.S3-9.

349. Tan E.M. Autoantibodies and autoimmunity: A three-decade perspective-A tribute to Henry G. Kunkel // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1997. - Vol. 815. - P. 1-14.

350. Tan E.M. Pathophysiology of antinuclear antibodies in systemic lupus erythematosus and related diseases // Adv. Dent. Res. 1996. - Vol. 10. - P. 44-46.

351. Tanaca T. Common antigenicity between protein and the retina, and role in uveitis // Ophthalmic. Res.-1996.-28(5).-p.284-288.

352. Taylor S.I., Barbetti F., Accili D., Roth J., Gorden P. Syndromes of autoimmunity and hypoglycemia. Autoantibodies directed against insulin and its receptor // Endocrinol. Metab. Clin. N. Am. 1989. - Vol. 18. - P. 123143.

353. Taylor J.A., Havari E., Mclnerney M.F., Bronson R., Wucherpfennig K.W., Lipes M.A. A spontaneous model for autoimmune myocarditis using the human MHC molecule HLA-DQ8 // J. Immunol. 2004. - Vol. 15; 172(4). -P. 2651-2658.

354. Theofilopoulos A.N. The basis autoimmunity: Part I. Mechanisms of aberrant self-recognition // Immunol. Today. — 1995. Vol. 16. - P. 90-98.

355. Theofilopolus A.N. The basis of autoimmunity: Part II. Genetic predisposition // Immunol. Today. 1995. - Vol. 16. - P. 150-159.

356. Thorsby E. Invited anniversary review: HLA associated diseases // Human Immunology.-1997.- v.53.-p.l-l 1.

357. Teubner A., Tillmann HL., Schuppan D, Gericke G., Manns M.P., Stolzel U. Prevalence of circulating autoantibodies in healthy individuals // Med. Klin. 2002. -№15.- Vol. 97(11). - C.645-649.

358. Tiwana H, Wilson C, Walmsley RS, et al. Antibody responses to gut bacteria in ankylosing spondylitis, rheumatoid arthritis, Crohn's disease and ulcerative colitis.//Rheumatol Int.-1997.-17( 1 ).-p. 11-16.

359. Tlaskalova-Hogenova H., Stepankova R., Hudcovic T. et al Commensal bacteria (normal microflora), mucosal immunity and chronic inflammatory and autoimmune diseases.//Immunol.Lett.-2004.-May 15;93(2-3).-p.97-l 08.

360. Toyoda N., Nishikawa M., Iwasaka T. Anti-thyroglobulin antibodies.//Nippon Rinsho.-l 999.-v.57(8).-p. 1810-1814.

361. Trbojevic B., Djurica S. Diagnosis of autoimmune thyroid disease.//Srp Arh Celok Lek.-2005.-v.l33.-suppl l.-p.25-33.

362. Trouw LA, Daha MR. Role of anti-Clq autoantibodies in the pathogenesis of lupus nephritis.//Expert.Opin.Biol.Ther.-2005.-5(2).-p.243-251.

363. Uibo RM, Krohn KJ. Demonstration of gastrin cell autoantibodies in antral gastritis with avidin-biotin complex antibody technique.//Clin.Exp.Immunol.-1984.-58(2).-p.341-347.

364. Van der Heijden IM. Yersinia enterocolitica\a. cause of chronic polyarthritis.//Clin. Infect. Dis.-1997.-Oct.25(4).-p.831-837.

365. Verhaz A., Skrbic R., Rakita-Music M. Resistance of catheter-associated urinary tract infections to antibacterials.//Vojnosanit Pregl. 2005.-v.62(3).-p.l81-187.

366. Vondra K., Vrbikova J., Ivaskoval E., et al. Thyroglobulin and microsome autoantibodies and their clinical significance in adult type I diabetics // Vnitr. Lek.- 1996. Vol. 42(11). -P.767-771.

367. Weinstein E., Peeva E., Putterman C., Diamond B. B-cell biology // Rheum. Dis. Clin. North. Am. 2004. - V.30(l). - P. 175.

368. Wen Z, Fiocchi C. Inflammatory bowel disease: autoimmune or immunemediated pathogenesis? //Clin.Dev.Immunol.-2004.-l l(3-4).-p. 195-204.

369. Wenzel B., Chow A., Baur R., et al. NK cell activity in patients with Graves' disease and Hashimoto's thyroiditis // Thyroid.-1998.-v.8 -p.1019-1022.

370. Wesche B, Jaeckel E, Trautwein C, et al. Induction of autoantibodies to the adrenal cortex and pancreatic islet cells by interferon alpha therapy for chronic hepatitis C.//Gut. 2001.-48(3).-p.378-383.

371. West SE, Zeng L, Lee BL, Kosorok MR, et al. Respiratory infection with Pseudomonas aeruginosa in children with cyctic fibrosis: early detection by serology and assessment of risk factors.//JAMA.-2002.-12; 287(22).-p.2958-2967.

372. Westman E, Melhus A, Hellstrom S, Hermansson A. Moraxella catarrhalis-'mducQd purulent otitis media in the rat middle ear. Structure, protection and serum antibodies // APMIS.-1999.- 107(8).-p.737-746.

373. Wheatland R. Molecular mimicry of ACTH in SARS implications for corticosteroid treatment and prophylaxis // Med.Hypotheses.-2004.-63(5).-p.855-862.

374. Whiteside TL. Methods to monitor immune response and quality control//Dev.Biol.-2004.-v. 116.-p.219-228.

375. Whiteside TL., Gooding W. Immune monitoring of human gene therapy trials: potential application to leukemia and lymphoma.//Blood Cells Mol Dis.-2003.-v.31(l).-p.63-71.

376. Wieder ED. Real-time monitoring of immune responses // Cytotherapy.-2002.- v.4(4).-p.347-352. '

377. Wildner G., Diedrichs-Mohring M. Autoimmune uveitis induced by molecular mimicry of peptides from rotavirus, bovine casein and retinal S-antigen.//Eur. J. Immunol.-2003.-33(9).-p.2577-87.

378. Wisplinghoff H., Bischoff T., Tallent S. et al. Nosocomial bloodstream infections in US Hospitals: analysis of 24179 cases from a prospective nationwide surveillance study.//Clin Infect Dis. 2004.- v.39.- p.309-317.

379. Witebsky E., Rose N.R., Terplan K. et al. Chronic thyroiditis and autoimmunization // J. Am. Med. Ass. 1957. - 164. - P. 1439-1447.

380. Worrell BM., Juneja R., Minokadeh A., et al. Cellular immune responses to human islet proteins in antibody positiv type 2 diabetic patients./ZDiabetes-1999.-vol.48(5).-p.983-988.

381. Wu J., Arends J., Borillo J., Zhou C., et al. A self T cell epitope induces autoantibody response: mechanism for production of antibodies to diverse glomerular basement membrane antigens // The J. of Immunology, -2004. -Vol.172, -p.4567-4574.

382. Wu X., Liu B., Van der Merwe P.L., Kalis N.N., Berney S.M., Young D.C. Myosin-reactive autoantibodies in rheumatic carditis and normal fetus //Clin. Immunol. Immunopathol. 1998. -Vol. 87(2). - P. 184-192.

383. Wu Z., Stephens H., Sachs J., Bottazzo GF. Molecular analysis of HLA-DQ and -DP genes in caucasoid patients with Hashimoto thyroiditis // Tissue Antigens. -1994. -v.43- p. 116-119.

384. Wucherpfennig K.W., Strominger J.L. Molecular mimicry in T cellmediated autoimmunity: viral peptides activate human T cell clones specific for myelin basic protein. // Cell 1995. - Vol. 80. - P.695-705.

385. Wurl P, Weigmann F, Meye A, Fittkau M, et al. Detection of p53 autoantibodies in sera of gastric cancer patients and their prognostic relevance.//Scand. J.Gastroenterol.-1997.-32(1 l).-p.l 147-1151.

386. Xavier R.M., Yamauchi Y., Nakamura M., Tanigawa Y. et al. Antinuclear antibodies in healthy aging people: A prospective study // Mech. Ageing Dev. 1995.-Vol. 78.-P. 145-154.

387. Yan HP, Zhuang H, Liu YM, Feng X, et al. Immunological characteristics of primary biliary cirrhosis patients.// Zhonghua.Gan.Zang.Bing.Za Zhi.-2005.-13(l).p.12-16.

388. Yanase K., Smith R.M., Puccetti A., Jarett L., Madaio M.P. Receptor-mediated cellular entry of nuclear locelizing anti-DNA antibodies via myosin I // J.Clin. Invest. 1997. - Vol. 100(1). - P. 25-31.

389. Yoneyama A. Serologic tests and detection of microbial antigens for diagnosis of infectious diseases./ZRinsho. Byori.-2003.-Suppl. 124.-p.32-38.

390. Yu C.L., Huang M.H., Tsai C.Y. et al. The effect of human polyclonal anti-dsDNA autoantibodies on apoptotic gene expression in cultured rat glomerular mesangial cells // Scand. J. Rheum. 1998. - Vol. 27(1). - P. 54-60.

391. Yu D., Kuipers JG. Role of bacteria and HLA-B27 in the pathogenesis of reactive arthritis.//Rheum Dis Clin North Am.-2003.-v.29(l).-p.21-36.

392. Zamulaeva I.A., Lekakh I.V., Kiseleva V.l. et al. Natural hidden antibodies reacting with DNA or cardiolipin bind to thymocytes and evoke their death // FEBS Lett. 1997. - Vol. 413(2). - P. 231-235.

393. Zhang H., Kaur I., Niesei D.W et al. Lipoprotein from Yersinia entericilitica contains epitopes that cross-react with the Human Thyrotropin Receptor.//! Immunol.-1997.-Vol.l58.-p.l976-1983.

394. Zhang H., Kaur I., Niesei D.W.,Seetharamaiuh G.S., Peterso J.W. Yersinia enterocolitica envelope proteins that are cross-react with the thyrotropin receptor (TSHR) also have B-cell mitogenis activity.//J.Autoimmun.-1996.-9(4).-p.509-516.

395. Zhang FC., Zhou B., Dong Y. The roles of complement lq and anti-Clq autoantibodies in pathogenesis of lupus nephritis.// Zhonghua.Yi.Xue Za.Zhi.-2005.-13 ;85(14).-p.955-959.

396. Zhao Z, Weinstein E, Tuzova M, et al. Cross-reactivity of human lupus anti-DNA antibodies with alpha-actinin and nephritogenic potential.//Arthritis Rheum.-2005.-52(2).-p.522-530.

397. Zhao Z., Granucci F., Yeh L., Schaffer P.A., Cantor H. Molecular mimicry by herpes simplex virus-type 1: autoimmune disease after viral infection // Science 1998. - V.279. - P. 1344-1347.

398. Zeidler H., Kuipers J., Kohler L. Chlamidia-induced arthritis.//Curr Opin Rheumatol.-2004.-v.l6(4).-p.380-392.1. CJ