Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Синтез и применение тирозината меди для профилактики анемии у поросят-сосунов

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Синтез и применение тирозината меди для профилактики анемии у поросят-сосунов"

У? ,"'. « -и -У

«А.

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТПАТОЛОГИИ, ФАРМАКОЛОГИИ И ТЕРАПИИ

На правах рукописи

ДЕНИСОВА ОЛЬГА ФВДОРОВНА

СИНТЕЗ И ПРИМЕНЕНИЕ ТИРОЗИНАТА МЕДИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АНЕМИИ У ПОРОСЯТ-СОСУНОВ

03.00.04 - БИОХИМИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

ВОРОНЕЖ - 1992

Работа выполнена на кафедре химии Ульяновского сельскохозяйственного института.

Научные руководители:

Доктор биологических наук, профессор Тан Э.Б. Официальные оппонента:

1. Доктор биологических наук, профессор Чечеткин A.B.

2. Доктор биологических наук, профессор Бузлама B.C.

Ведущая организация: Московская ордена Трудового Красного Знамени ветеринарная академия имени К.И.Скрябина

Защита состоится "30я ¿t-Ht/^-l 1992 г. в '/'Ъ часов на заседании специального совета Д 020.65.01 во Всесоюзном научно-исследовательском ветеринарном института патологии, фармакологии и терапии <394067, г.Воронеж, ул.Ломоносова, II4-6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан л^Оя „.¿.«x/OTi 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета

Слободяник В.И.

;; i. опцая характеристика работы

"~>ii; Актуальность темы. Еелезодефицитная анемия относится в »i^i^avdoiea распространенным заболеваниям поросят, содержащихся в условиях промшленных комплексов (Кучинский М.П., Иванов Д.Г1., Шешко П.Ы., 1990}. Экономический ущерб от этого заболевания скла дыэается из недополучения живой массы и падежа животных. Частота заболевания внемией колеблется от Ьо до 90%. Смертность достигает 60-7056 (Карелин.А.И., 1983).

С момента установления причин анемии у поросят-сосунов большое внимание уделяется поискам наиболее эффективных методов ее лечения и профилактики (Комаров Н.М., Карелии А.И., I9b4; Само-хин В.Г., 1961; Справочник по 5элезням свиней, под ред. Собко А.И. , 1988). Большим достижением в этом направлении следует считать синтез железодекстрановых препаратов, которые в настоящее впеня изготавливают почти во всех странах пира (Карелии А.И., Сиротина Н.Д., 1976). К недостаткам данных препаратов следует отнести то, что они не содержат такого необходимого для процессов кроветворения микроэлемента, как медь (Приев И.Г., Атаула-ханов И.А., 1962; Кудрявцев А.П., IS06;//л.!гм., Плso»Н.$дofc?; Шустов В.Я., 1У88). Важнейшей функцией меди в организме является ее участие вместе с железом в процессах кроветворения. Не входя а состав самой молекулы гемоглобина высших животных и человека, медь катализирует включение железа в структуру гама и поэтому является незаменимым активатором образования гемоглобина (Школьник И.Я., 1967; Ga.idoi 4,1905; Herrinqtt. Unvetl ß„ I9W). Для ликвидации гипохромии достаточно введения в организм в сочетании с железом самых минимальных количеств меди (Джонс Л.Ы., 1У71).

Влияние тирозина на гематологию и биохимические показатели крови связано с классическими представлениями о роли тирозина

в горыонообразовании щитовидной яелезы (Аминокислоты в медицине, Западник В.И. и др., 1982; Березов Т.Т., Коровин B.Ö., 1Ш2; Чечеткин A.B., 1982; Березин И .В., Савин Ю.В., 1990). Гормоны щитовидкой «елззы стимулируют гемопоэз, регулируют скорость основного обмана, рост и дифференцировку тканой, обмен белков, углеводов, липидов, водно-электролитный обмен, сопротивляемость организма инфекциям и др.

Важное значение в повышении биологической доступности минеральных веществ и обеспеченности животных микроэлементами придается хелатьыя соединениям (Казаков Х.Ш., 197..; Ераюва В.Д., 1962; Тен Э.В., IS37). В сочетании с органическими соединениями активность ыикроэлошнтов возрастает в сотни тысяч раз по сравнении с ионньм их состоянием в организме животных (Кузнецов С.Г., 1989).

В отечественной литературе описано много препаратов совместного действия аелеза и меди в неорганической форме, однако, в доступной нам литературе мы нз навли примеров влияния медных хелатоз в сочетании с железосодержащими соединениями для профилактики анемии у поросят-сосуноэ.

В данной работе представлены новые исследования по проблема анемии у поросят-сосунов.

Цель и задачи исследования. Цэль» настоящей работы явилась разработка и синтез хелат-комплексного соединения меди с тирозином, оба составных компонента которого обладают высокой био-л«."ичос1сой значимостью в отношении анемии; изучение специфических сторон биохмлтама его антианемической активности и потенциальных возможностей для профилактики анемии у поросят-сосунов.

Для выполнения поставленной цели решали следующие задачи:

1. Синтез тирозината меди и изучение его физико-химических свойств.

2. Исследование биологической активности тирозината мзди при экспериментальной постгеморрагической анемии белых крыс.

3. Исследование биологической активности медного хелата при клинической юзлезодефицитной анемии поросят-сосуноо.

4. Влияние тирозината меди на продуктивность поросят.

Диссертационная работа выполнена на кафедре химии Ульяновского сельхозинститута в соответствии с государственным планом научно-исследовательской работы Ульяновского СХИ (тема 2.5 "Комплексное использование биогенных элементов для профилактики анемии поросят". Номер государственной регистрации^/КСй^сС/Сбб

Научная новизна. Впервые проведен разносторонний анализ биохимической активности тирозината меди и показано, что ого профилактическое пнтиакзиическоз действие обусловлено стимуляцией гемопоэза, активизацией цзрулоплазминя и обеспечением процессов накопления «едя и железа в органах кроветворения и депонирования.

Практическая ь.^ачишсть. Разработана технология получения тирозината меди и впервые применена в комплексе с железосодержащими препаратами для профилактики анемии у поросят-сосунов в хозяйствах Ульяновской области и Республики Татарстан. К I февраля годь произведено и реализовано через малое предприятие "Биосвет" Ульяновской области 300.ООО доз для профилактики и лечения заболевания.

Апробация рпбот». Результаты исследований доложены и обсуждены: на 1-ой Ульяновской областной научно-технической кон-

ференции "Спектроскопия конденсированных сред", г.Ульяновск, 1989; Всесоюзной научной конференции "Экологические проблемы фармакологии и токсикологии, г.Казань, 1990; Всесоюзном совещании "Новью аспекты участия биологически активных веществ в регуляции метаболизма и продуктивности сельскохозяйственных животных", г.Боровск, 1991; этчегных конференциях и Ученом совете Ульяновского сельскохозяйственного института, 1969-1991; расширенном заседании кафедры химии УСХИ, 1992.

Публикации. Но материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 100 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора ли.ературы, материала и методики исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, рекомендаций производству, списка использованной литературы, приложения. Список литературы включает 171 источник, из них 105 отечественных и переводных, (й иностранных авторов. Работа иллюстрирована 17 таблицами. 5 рисунками и I приложением.

2. Материал и методика исследования

Исследования проведены в лабораториях кафедры химии Ульяновского СХИ, биохимии Казанского НИШ, спектроскопии филиала ИГУ в г.Ульяновске, спектрального анализа НИИ атомных реакторов г.Димитровградв Ульяновской области, общей патологии ШИШШЫТ г.Воронежа.

Экспериментальными животными служили нелинейные белые крысы (16 гол.) и пороспта-оосуны (ICI гол.).

Нами разработана модель постгеморрагической анемии на белых крысах. С этой целью у животных из хвостовой вены двукратно (через день) брали по 2от общей массы крови. Содержали

крыс в теплом помещении, давали обильное питье, кормили один раз в сутки молотым комбикормом, свеклой, морковью, хлебом.

Но фоне вызванной постгеморрагической анемии проводили исследования антианемического действия тирозината меда. Схема опыта приведена в табл.1. Эксперимент длился с 26 июля по 31 августа 1990 г.

Схема опыта на крысах

Табл.1

Группа !Количество! (животных (Инъекции '(голов) ! ! ! ! Дозы

» I контроль 4 0,9 1. 2. 0,%/аМ- 0,5 мл.в/м 0,9Ц/Ш- 0,5 мл,в/м

№ 2 Ферродекс -ферродекс 7 ферродекс-ферродокс 1. 2. Фэроодекс- 0,5 мл,в/м 37^5 тУе Ферродекс-0,5 мл,в/м 37,5 мг $е

» 3 Ферродекс - ферродекс- I. Ферродекс -0,5мл,и/м 37,5 мгЯ>

тирозинат меди 7 тирозинат меди 2. Тирозинат меди -0.5 мл, 0,1ць _р-р в/и, 0,03 мг Си

В течение экспериментального периода наблюдали динамику содержания в крови гемоглобина, эритроцитов и величину гематокрита (в начале; на 3-й день посла 2-го кровопускания; на 10-Я день после введения препаратов; на 30-й день посла Проведенных инъекций). Гематологические показатели определяли по общепринятым методикам. Содержание гемоглобин* определяли гемометром типа Сали (ГС-2). Подсчет числа эритроцитов вели в камере Горярва. Величину гематокрита определяли в капиллярах, обработанных гепарином, в центрифуге Туре МРИ' -310 (Польза) при 3.000 об/мин.

Активность цзрулоплвзмина определяли по методу Ровика X.

(1901) в динамике: в начале опыта, после второго кровопускания, на 10-й, 30-й дни.

Общий белок определяли рефрактометрическим методом.

Белковые фракции в сыворотке крови определяли на 10-й день после введения препаратов по методу Карпюка С.А. (1962).

На завершающем этапе эксперимента у животных при вскрытии взял почки, печень, сердце, селезенка, головной мозг, длиннейшая мышца спины и проанализированы 126 образцов на содержание Си и Л; спектрографическим методом. Исследования проведены совместно со специалистами лаборатории спектрального анализа НИИ атомных реакторов г.Димитровграда. Исследования острой токсично "ти тирозината меди проведены специалистами лаборатории общей патологии ШИВШйиТ г.Воронежа. Акт прилагается.

Антнанемическое действие тирозината меди изучали на поросятах. Схема опыта приведена в табл.2.

Схема опыта на поросятах-сосунах

Табл. 2

Группа ¡Количество! Пнъек^и ' [ Дозы, мл.

Контрольная 35 йзрродекс I. Ферродекс - 1.5 (112,5 мг&), вД|

Ферродекс-фсрродекс йерродекс 2. Ферродекс- 1.5, (112,5 мг^ё ), в/и

Опытная 26 Ферродекс 1. Ферродекс -1,5 (112,о иг$е ) в/ы

С-ерродекс - тирозинат меди Тирозинат меди 2. Тир-Си-I,5 в/м 0,16% раствор

Для опыта использовали 7 пометов новорожденных поросят (61 гол.) крупной белой породы, которые по принципу аналогов были скомплектованы в 2 экспериментальные группы. Эксперимен-

тельный период длился от рождения до отъема. Кровь исследовали на 3-й, 15-й, 60-й дни жизни по вышеуказанным методикам.

В возрасте 18 дней у поросят брали кровь для анализа церу-лоплазмина. Анализ белковые фракций определяли методом электрофореза в полиакриламцдном геле в сыворотках 18-дневных и ЬО-дневных поросят. С целью определения количественного содержания железа и меди в печени проводили убой 10 особей 18-дневного возраста.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по общепринято? методике математической статистики (Асатиани B.C. 1965). Достоверной считали разницу при р < 0,05; р<10,01; р С 0,.01.

3. Результаты исследований 3.1. Синтез тирозината меди

Проведен направленный синтез хелат-комплексного соединения тирозината с медь^>. Полученный препарат полностью соответствует теоретическим предпосылкам как в стехиоыетрическом отношении, так и по структурному строению. Содержанке меди в препарате составляет 15,3$. Как известно из литературы, при взаимодействии ионов металлов с органическими соед:.:юниями (аминокислоты, пептиды, ¿>алки) происходит процесс хедатирования (Чер-навина И.А., 1970; Сильверстейн Р.. Басслер Г., Морри Т., 1977; Казицына Л.А., Куплетская Г.В., 1979; Гликина S-Б., Ключников Н.Г., 1982; Грассэл Д., Снейвили М., Балкин Б., 1984; Набиев Р.Н., Чуманов Г.Д., Ефремов Р.Г., 1988). Огруктура тирозината меди доказана методом длинноволновой ИК-спектроскопии по линиям 357, 290 см~*. Полученный хелат представляет собой блестящие, фиолетового цвета кристаллы, малорастворимыз в во^е, стойкие в слабощелочной среде, разлагающиеся в кислой.

СНг

I

СИ

Рис. I. Структура тирозината ыеди.

3.2. Исследование биологической актизности медного хелата при экспериментальной постгеморрагической анемии белых крыс

3.2.1. Разработка модели постгеморрагической

анемии на белых крысах

Гематологические показатели крови крыс на фона применения различных препаратов представлены в таблицах 3, 4.

В результате кровопускания картина красной крови изменилась. Уровень гемоглобина снизился у крыс всех 3-х экспериментальных -рупп: в 1-ой - на 2,5 г£ (18,2%), во 2-ой - на 3,4 г% (23,1%), з 3-ей - на 3,3 ^ (22,0?).

Аналогично снизились колигтстоо эритроцитов, показатель го-матокрита. Таким образом полученные даниш свидетельствуют о згаоашюЛ постгоморрагичзскоЛ анемии у животных.

3.2.2. Влияние тирозината кеди на общую

картину красной крови

Как следузт из результатов проведенного эксперимента, ти-розинат !.'одя восстонязлтает гегм тологические показатели при экспериментальной лссггездррагнчзскоП внзкин белых криа. Количество гемоглобина к 10-му дню возрастает на Р,4%, число эритро-цитоп - на 2%, гймь-;окрит!шй покпзате;.^ - на 14,3$ к 30-му дна. Восстонллме.-ьнал лктганость организма крыс инъецированных модным хелатом, превышает в среднем, таковую контрольных животных (П "р.) в 3 раза. Полученные данные свидетельствуют о стимулирующем влиянии »»сди в сочетании с железом на эритро- 1. гемопоэз и согласуются с литературными (Ба;.а И.Ы., Лифшиц В.И., 1973; Тен Э.В., 1960; Кальницкий Б.Д., Кузнецов С.Г., Батаавч А. ., 1968).

Гематологиадские показатели ярко на фок; применения различных препаратов

Таблица 3

Группы ! Гемоглобин, ! Эритроциты, ылн/ым3 ! Гематокрит, %

Ьреыя исследования !Нача-!ло '¡3-й ¡10-й |30-й Шачя-! ло ¡Зг.. |Ю-Й ¡30-й |Нло8"!3-й !10-й |3°-й

I группа Без введения препаратов 13,7+ 1,15 11,2+ 13,3+ 0,52 0,83 16,1+ 0,69 6,61+ 0,49" 4,93+ 6,27+ 0,13' 0,12*" кх 7,67+ 40,8+ 30,6+ 44,8+ 50,0+ 0,68" 0,25 0,24 0,25 1,48

В груши

Фероодекс -тирозинат меди 14,6+ 0,34 11,3+ 16,7+ 0,48 0,43* 16,0+ 0,46 6,72+ 0,25*" 4,28+ 7,0+ 0,14" 0,19* 7,6+ 40,9+ 26,6+ 52,11+ 51,9+ 0,38 0,2б" 0,24*" 1,26** 1,2о"

* р<0,01 ** р < 0,001

Гемата логические показатели крыс на фоне применения различных препаратов

Таблица 4

Группы Гемоглобин, !' Эритроциты, млн/мм3 1, Гематокриг, %

Время исследования !Нача-! ло " ¡3-й {Ю-й ¡30. -й !Нача-!ло |з-а | 10-й {зо-й !Нача-! ло ¡3-Я | ю-с | 30-й

П группа

Ферродекс- 14,7+ 11,3+ 15,4+ 15 ,Ь+ 6,64+ 4,47+ 6,87+ 7,01+ 41,3+ 28,4+ 55,9+ 45,4+

ферродакс 0,30 0,29 0,32 0 ,14 0,27 0,16 0,14 0,23 0,27 О'3» ОХ« 2,28

Ш группа

Ферродек - 14,6+ 11,3+ 16,7+ 16 6,72+ 4,28+ 7,0+ 7,6+ 40,9+ 26,6а; 52,11+ 51,9+

тирозинат мэди 0,34 0,48 0 ,43"** 0 ,16 0,25 0,14 0,19 0,38 0,26 0,24 1,26 1,2КХХ

- р< 0,05

- р¿0,001 * - Р<0,01

3.2.3. Определение белка и белковых фракций в сыворотке крови

Количество общего белка в контрольной группе животных, которым вводили дважды ферродекс, и опытной группе крыс, инъецированных ферродексом и тирозинатоы меди, было приблизительно одинаковым (8,28+0,01 и 8,25+0,01 г$ соответственно). Достоверность разницы в содержании альбуминов и глобулинов статистически не установлена. Альбуминовая фракция опытной группы превосходила контрольную на 15,1%. Содержание альфа-глобулинов о.гыгной группы составило 26,23+4,64^ (2,16+0,38 1$), что на 4% меньше количества этой фракции контрольной группы. По бетта-глобулинаы не было вы-кьлэно к 10-му дню после введения препаратов различий между экс-па риканта льном группчми (28,68+6,59 и 28,77+11,36^). Более высокий уровень гамма-глобулинов отмечен у крыс контрольной группы (22,07+5,2ЗД в сравнении с опытной группой (19,73+6,04%). Адь-буминово-глобулиновый коэффициент имел обратно пропорциональную зависимость от гаша глобулинов и составил для контрольной группы 0,28, оалегной - 0,34. Отсода следует, что тирозинат меди нормализует общее состояние яизотных и общую неспзцифическую реактив-кость организма.

3.2.4. Влияние тирозината меди на активность церулоплазмина

Проведенное исследование по царулоплазкину является важным по; вервдением того, что тирозинат меди способствует повьешь*л активности цврулоплг мина, начиная о 3-го и по 30-й дни опыта, по сравнению с действие« ферродекса на ыедьоксидазу (К.Ф.: 1.10.3.2). Так, к 10-му дню количество церулоплазмина у опытных крыс составило 42 4+5,1 чтс на 16,8$ ¿г,те Л-ой группы и на 4,7$ больше количества церулоплазмина у крыс 1-ой группы.

К концу наблюдения активность фермента стновится приблизительно одинаковой и составляет соответственно группам: Ы,5+6,87; 50,Э+6,9; 52,4+4,77 г&.

Результаты исследования показали, что при пост геморрагической анемии наблюдается повышение активности цэрулоплазыина. Наши данные по этому вопросу полностья согласуются с таковыми Фриден (19Ь4). Но литературным данным (Шемсетдинов Э Ш., 19/3; Тен Э.В., 198о), введение халатных соединений мэда вызывает снижение активности цэрулоплазмина в сыворотка крови крыс.

3.2.5. Ко/, -чественноо распределение железа я меди в оргснах и тканях подопытных животных

Полученные денные по изучению содержания железа в организма крыс 1-ой и Ш-ей групп показали, что тироэинат меди способствовал увеличению содержания этого эле^энта в сердце в I,4 раза (р^0р5), в головном шзге - в 2,2 раза (р^0,01). В других исследованных органах такжэ наблюдали увеличение железа, но получение результаты статистически нэ достоверны.

Результаты исследования ао обмену кда показали, что Л печени возросло содержание данного биотгаса в 4,3 раза (рО,^) Увеличение меди в остальных органах и т^знях крыс статистически нэ достоверно.

Сравнивая полученныэ данные распределения Еелезт и жди в органах животных 11-оЛ и Ш-ей групп, следует отметить, что тирозинат мед» стимулировал процесс гэмолоэза, мобилизовав железо из депо (печени, селезенки). Гак, в печени животкых 11-ой группы концентрация железа превосходит такозую (р<0,0и1). Снижение депонирования железа з печени способстзовало повыташгл отл;кения мзди а оргаьизме. Прежде всего это касается печени,

где концентрация леди еозросла в 2,4 раза (р<0,05). Получено достоверное увеличение меди в селезенке в 2,7 раза (pi 0,01), в сердце - в 1,8 раза (р^.0,001), в легких - в 1,7 раза (р<0,001). Таким образом, полученные даннш о распределении железа и меди в органах и тканях согласуются с литературными; введенная медь снижает депонирование железа в организме (SiiitC,f Cha.rleyPJ.t Butt E.h, et di,t 1962; Ершова В.Л., 1983; Болезни недостаточности у свиней, Алякгэв В.А., Иванов Д.П., Конодаль-ко П.Я. и др., 1S76).

Хелат-комплекс меди с тирозином способствовал повьшенив статуса меди в органах и тканях белых крыс и увеличивал отложение металла в тканевых депо. Ери этом наблюдаемая величина накопления меди в органах и тканях зависит как от степени участия последних в обмене этого микроэлемента, так и от участия самой меди в функционировании изучаемых органов и тканей е про цессе обмена веществ.

3.3. Исследование, биологической активности медного хелата при клинической железодефицигной анемии поросят-сосунов

о.3.1. Анализ донных влияния тирозината меди на количество эритроцитов, содержание гемоглобина и гематокритную величину

Данные анализа красной крови приведены в таблице 5.

Из гематологических показателей наиболее объективно характеризует состояние организма в отношении анемии гемоглобин. Статистически достоверное увеличение содержания гемоглобина в опытней группе наблюдали к 15-му дно жизни. Так, у поросят, иъецированньк тирозинатоы меди, этот показатель составил 11,2+0,34 в в контрольной ipynne 9,4+0,35 (p<:0,Ol).

Гематологические показатели поросят-сосунов под влиянием различных препаратов

Таблкпа 5

Гемоглобин, г% (Количество эритроцитов, млн/мм3 !Величина гематокрита, %

3-й день ! 15-й день!сО-й день 13-й день !15-й день !60-й день ! 3-й день !15-й дешЛбО-й день

Ферродекс - Зерродек с

8,8"+0,1т ! 9,4+0.35 ! И,0^,35 13,46+0,0713,79+0,25 ! 4,7+0,05 135,2+0,03 |38,0+1,12!3й,37+0,61

4 ортодокс -Тирозина! с меди

8,4+0,02 ¡11,240,34х! 10,7+0,47 13,17+0,5014,32+0,31 !5,28+0,19 131,0+0,01 137 ,4+0,£5134,9+0,77*

34 - р^.0,01

К периоду отъема (60 дней) показатели практически выравнились и составили 10,7+0,47 т^о - в оштной группе и 11,0+0,35 - в контроле.

По количеству эритроцитов обе группы в начале эксперимента отличались незначительно. В последующие сроки (на Т5-й и 60-й дни) заметно увеличилось число красных кровяных клеток в пользу опытных животных.

Из приведенных в таол.5 данных видно, что гештокритная величина с 3-х до 15-дневпого гоэрсста повышается у поросят отдной группы с 31,0+0,01 до 37,4+0,85 % и у «квотных контрольной группы с 35,2+0,03 до 38,0+1,12$. Таким образом, прирост геыатокритного показателя у ош^ных поросят составил 6,4$, а в контроле - 2,3$. К 60-ыу дню жизни гаматокритная величина в опытной группе составила 34,9+0,795?, в контрольной - 30,37+0,6155, т.е. на 4,6^ больше в опытной группе (р^.0,001).

В период с 15-го по 60-й дни наолэдалось падение гетто-критного показателя: с 37,4+0,85 до 34,9+0,77 2,£#) - в опыте; с 33,0+1,12 до 30,37+0,61 % (на 7,7%) - в контроле. У поросят , которым дваздк вводился форродекс, наблюдалась следующая динамика изменения данного показателя: с 3-х до К-^шбного возраст? отмечался рост, затем, п периоду отъема, наолгдахось снижение, Дингшка геиатокритной величины аичотных отдноН группы была диалогичной. Таким образом, приведении.} данное анализа «сардины красной крови свидетельствуцт о стимулирующем влиянии тиро-зината меди на гемопоэз в организме поросят, что подтверздается увеличением кспичества гемоглобина, числа эритроцитов, геыато-критной величины.

Полученные положительна результаты о роли меди в сочетании с железом в процессе кроветворения согласуются с выводами

других авторов {ХсЬцИге М.О., '940; Сз.гЫп^ 6.Е./55Л Кудрявцев А.П., 1963; Зотова Н.Г., 1985).

3.3.2. Исследование белковых фракций

в сыворотке крови методом электрофореза в полиакрилаывдном геле

Количество бетта-глобулинов в сыворотке опытных животных составило 17,28+0,55% (15,56+0,95 ыкг), это на 1,18% (2,0 мкг) выше показателей в контрольной группе. Из наиболее важных составных частей сывороточного белка, характеризующего резистентность организма, являются гамма-глобулины. Их содержание в группе поросят, которым вводили тирозинат меди, 37,24+0,76% (33,44+ + 1,9 мкг), а в контрольной группе животных с железодекстрьно-вой инъекцией - 35,91+0,42% (29,83+1,0 мкг). Разница в показателях составила 1,33% (3,56 мкг) в пользу опытных поросят. Альфа--2-глобулиновая фракция, включающая ца рулоплазпин, составила 8,98+0,6$ (8,04+0,07 мкг), 8,46+1,17% (6,91+0,69 мкг) опытную и контрольную группы соответственно.

Концентрация общего белка в сыворотка крови опытных поросят составила 58,3+2,37 мг/мл., что на 7,8% выше контроля. При наблюдающейся общей тенденции- к повышению приведенных показателей в пользу опытной группы статистическая достоверность не доказана. К периоду отъема белковая картина сывороток крови поросят обеих групп претерпевала изменения: бетта- и гамма-глобулиновые фракции обеих групп выравнились. Альфа-2-глобулиновая фракция опытной группы превосходила таковую контрольной группы на 3,0% (2,9 мкг), р<0,05 Количество общего белка в сыворотке поросят опытной группы составило 56,1 мг/мл, а в контрольной - 54,1 мг/. Альбзииново-глобулиновый показатель сывороток крови 10-дневных поросят бы.л приблизительно одинаковым: 0,21 - в опыте и 0,22 -

те

в контроле. К периоду отъема картина изменилась в сторону увеличения данного показателя у поросят'опытной группы (0,27) в сравнении с контролем (0,24). Это свидетельствует о положительном влиянии тирозината меди на естественную резистентность организма поросят.

3.3. Влияние хелат-комплекса меди и тирозина на активность церулоплазмина в крови

По данным табл.6 у поросят опытной группы к 18-му дню жизни активность церулоплазмина была ниже на 2,6 (4,5%). К периоду отъема содержание сывороточного белка у поросят опытной группы возросло до 59,94+1,6 оставаясь на 0,8 т$> ниже показателя контрольной группы к этому периоду.

Активность цэрулоплазмина в сыворотке крови поросят (1$)

Табл.6

Группа { Возраст, ДНИ

! 18 дней ! 60 дней

йерродэкс -ферродекс 58,10+2,42 60,75+2, Л

*ерродекс -тирозинат мер,и 55,47+3,22 . 59,94+1,46

»

Содержание железа и ыеди в печени

поросят Таблица 7

Уасса пробы, г ! Содержание железа, % масс ( Содержание меди, % масс

Средняя ! Колебания ! Средне е(х!0~^)I Ко лебйния(х10~^) ¡Среднее (хЮ-3) !Колебания(хКГ3)

Ферр'одекс -Оерродекс

2,45+0,35 I 1,58-3,22 ! 4,9+0,80** ! 2,9-6,5 ! 9,4+2,9 ! 3,5-17,6

Ферродеко - Тирозинат меди

2,08+0,27 ! 1,4,^-2,47 1 1,^+0,86 ! 0,3-4,9 ! 8,7+2,1 ! 4,2-14,3

XX р< 0,Ш1

3.3.4. Количественное распределение делеза и меди в печени поросят

Установленочто наивысший гемппоотический эффект (на 15-й день) сопровождался резким уменьшением содержания железа в печени опигных животных, в 2 б раза (р< 0,001). Тирозинат меди способствовал значительной мобилизации железа из депо. Полученные результаты совпадают с теоретическими представлениями о роли печени в кроветворении и об участии в этом процессе меди. Содержание меди в печени поросят опытной группы заметно не изменилось. Медь в виде хелата вьовала мобилизацию запасов железа. Такого же мнения придерживались Димитриенко Jl.fi., 1948;

Обносов В.11., 1969; Шагниев М.Г., 1967, цит. по Шемсетдинову Э.Ш., 1983).

3.4. Влияние тирозината мади на продуктивность порог,тг

Наглядным показателем высокоэффективного, гтротивоанемичве-кого, профилактирующего и лечебного действия тирозината меди служит рост поросят, выражающийся в увеличении их живой массы, 1табл.8).

Динамика изменений живой массы поросят, кг (сентябрь-ноябрь 1990 год) , У схи

Табл.0

ГРУШШ 1шросят!15"й Д8НЬ 140"й *ень \ ПРИР°СГ

Ферродекс-

ферродекс 36 2,72+0,15 11,46+0,2? Фс Г-эодеке -

тирозинат меди 26 2,90+0,09 12,1+0,83 6,1$

На 15-й день жизни масса поросят обеих групп была примерно одинаковой (2,72+0,15 и 2,9^0,09 кг). Анализ данных на 40-й день поквзыйавт, что в группе с тирозинатом меди масса животных достигла .2,15+0,63 кг, тогда как в контрольной группе II,46+ 0,27 кг. Таким образом, средний дополнительный прирост массы поросят под влиянием тирозината меди составил 0,09 кг (6,0%). По данному опыту проведен расчет экономической эффективности (табл.9).

Экономическая эффективность применения тирозината меди

Табл.У

Показатели

!Контроль Шпыт ферродакс-

!форродекс-ферродекс!тирозинат меди

Поголовье поросят

Срок выращивания, дней

Масса поросят, при рождении, кг

Масса поросят на 40-й день выращивания, кг

Прирост одного поросенка, кг

Срзднесуточный прирост, г

Валовый прирост, ц

Дополнительная продукция, ц

Средняя цена реализации, I ц свинины руб.

Выручка от реализации 1 ц свинины, руб.

Затраты от реализации дополнительно полученной продукции,руб.

Окупаелюсть затрат

100 40 1.0

11,46

10,46

202 10,5

286,31

100 40 1.0

12,15

11,15

279 11,2

0.7 ,

286,31 200.4

126,1 1,59

Эффективность тироэината меди в опыте составила 2,У рубля ш одно животное, окупаемость затрат рубля на один рубль затрат. Экономическая эффективность в профилактирукцем и лечебном противоанемическом действии тирозината меди в сочетании с ферродексом указывает на целесообразность его рационального применения.

Выводы

X. Разработан и внедрен способ высокотемпературного синтеза хелат-комплекса меди с тирозином, являющегося стимулятором кроветворения в организме животных. Структура комплекса доказана методом длинноволновой КК-спектроскопии по линиям 357 и 290 см"1.

2. Разработан способ моделирования постгеморрагической анемии на лабораторных животных, с помещыо которого можно изучать гемопоэтическую активность различных препаратов.

3. Под влиянием тирозината меди в сочетании с ферродексом а организме анемичных животных наблюдаются:

3.1. повышенный уровень гемоглобина в крови крыс с 10-го по 30-й дни; аналогично, с 15 дня - у поросят;

3.2. к моменту отъема поросят содержание вритроцитов в крови на 12,3% вьие контроля;

3.3. улучшение красной картины крови неизменно сопровождается повышением резистентности организма со стороны

белковых фракций крови: альбумтново-глобулиновый

показатель у крыс опытной группы (0,34 против 0,28 -

контроле);

Концентрация альфа-2-глобулинов в сыворотке крови поросят при отъеме в опытной группе 10,86*0,8852, на 38,756 вше контроля.

Альбуминово-глобуликовый показатель для поросят опытной группы - 0,27, контрольной - 0,24.

3.4. выброс железа из печени поросят для поддержания высокого уровня кроветворения увеличивается в 2,6

раза, пря этом содеожание меди в органе кг изменяется;

3.5. активизация геыопооза у крыс сопровождается увеличением содержания меди: в печени - в 2,4 раза

(р <0,05); г селезенке в ?,7 раза {*■ ¿0,01); в сердце - в 1,8 раза (р <.0,001); в легких - в 1,7 раза (р <0,001).

3,6 активность основного медьпротеида крови - церулоплаэ-шна - при введении препаратов изменяется в зависимости от ввда животньи: у белых крыс наблюдается повышение на 4,7$, у поросят, наоборот, снижение ня 4,Ь% к 10-яу дню после инъекций.

4. Экономическая эффективность использования тирозиняга чвди а сочетании с ферродексом при алиментарной анемии поросят заключается в повышении живой кассы к 40 дня на получения прибыли 1,59 рубля на I вложенный рубль.

Рекомендации

1. Для профилактики и лечения алиментарной окзыии по рог; т--сосунов рекомендуем вводить внутримышечно на 3-7 дни жизни: в начале - ферродекс-1,5 мл/кг, затем - 0,16$ раствор тирозината меди з дозе 1,5 мл/кг массы животного.

2. Рекомзвдуем использование разработанной нами модели постгеморрагической анемии белых крыс для испытания вчтианемн-ческого действие различных препарггтов. С отоЯ целью у ккпотшм

из хвостовой вены двукратно (через день) берется по 20% от общей массы крови. Испытуемые препараты вводятся спустя три дня после второго кровопускания.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

X. Денисова 0.0. Комплексы тирозина с переходными металлами. // Тез. докл. 1-ой Ульяновской обл. научн.-технич. конф. -Ульяновск, 1989. - С.9Ь-97.

2. Тен Э.В., Денисова 0.0., Липатова O.A. Стимуляция роста анемичных поросят тирозинатом меди. // Информационный листок Ульяновского Центра научн.-технич.инф. - 1991. - № 37-91. - 3 с.

3. Тен Э.В., Денисова 0.0., Липатова O.A. Профилактика анемии поросят тирозинатом меди. // Информационный листок Ульяновского Центра научн.-технич.инф. - 1991. - й 34-91. - 3 с.

4. Денисова O.Ö., Хромов A.C. Исследование комплексов ти-розината меди методом ИК-спектроскопии // Науч.тр. Ульяновского политехнического ин-та // Вещество и поле. - Ульяновск, 1&Л. -С.52-57.

5. Тен З.В., Денисова О.Ф., Липатова O.A. Синтез и применение хэлат-комплексного препарата янтианемической направленности. // Тез. докл. Всесоюзного совещ. - Боровск, 1991. -

С.72-73.