Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе
ВАК РФ 03.00.13, Физиология
Автореферат диссертации по теме "Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе"
На правах рукописи
Герасимова Елена Вячеславовна
□□316689 1
СЕРОВОДОРОД КАК ЭНДОГЕННЫЙ МОДУЛЯТОР ОСВОБОЖДЕНИЯ МЕДИАТОРА В НЕРВНО-МЫШЕЧНОМ СИНАПСЕ
03.00 13 - физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
КАЗАНЬ - 2008
1 6 АГ.Р ¿003
003166891
Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Казанский государственный университет им В И Ульянова-Ленина» Федерального агентства по образованию и науке Российской Федерации
Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент
Ситдикова Гузель Фаритовна
Официальные оппоненты: доктор биологических наук,
профессор,
Раевский Владимир Вячеславович
доктор медицинских наук, профессор,
Волков Евгений Михайлович
Ведущая организация - Государственное образовательное учреждение «Московский государственный университет имени М В Ломоносова» (г Москва)
Защита состоится «¿<3 ¿Н/ 2008 г в «_|_2^>> часов на заседании диссертационного Совета Д 212 078 02 при ГОУ ВПО «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет» по адресу 420021, г Казань, ул Татарстана, 2
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет» по адресу 420021, г Казань, ул Татарстана, 2
Автореферат разослан «ILO» \М gyfficA 2008 г
Ученый секретарь диссертационного Совета доктор медицинских наук, профессор
Зефиров Т Л
Актуальность исследования. Исследование механизмов регуляции синаптической передачи является одним из актуальных направлений в нейрофизиологии В конце прошлого века был открыт новый класс биологически активных веществ - газообразных посредников, осуществляющих как межклеточную, так и внутриклеточную регуляцию различных физиологических функций В настоящее время к этому классу относят оксид азота, монооксид углерода и сероводород (R Wang, 2002, D Boehning, S H Snyder, 2003, Ситдикова, A JI, Зефиров, 2006, L Li, Р К Moore, 2008) Оказалось, что физиологическое значение газов не ограничивается регуляцией функций желудочно-кишечного тракта и сосудистой системы, где оно было определено первоначально, но также распространяется на центральную и периферическую нервную систему (R Wang, 2004, AB Яковлев и др, 2005, GF. Sitdikova et al, 2007, EV Gerasîmova et al, 2008)
Сероводород - газ, обладающий хорошо известными токсическими эффектами, связанными с нарушением окислительного фосфорилирования в клетке (R J Reiffenstein et al, 1992) В тканях млекопитающих были обнаружены высокие концентрации сероводорода в плазме крови крыс 46 мкМ, а в тканях мозга 50-100 мкМ (MF Warenycia et al, 1989, С J Richardson, 2000, JE Doeller, 2005), что предположило возможную физиологическую роль этого газа Также как оксид азота и монооксид углерода сероводород участвует в расслаблении гладкой мускулатуры (W Zhao et al, 2001, В Teague et al, 2002), физиологические концентрации этого газа усиливают активность Ы-метил-О-аспартат-рецепторов и облегчают индукцию долговременной потенциации в гиппокампе (К Abe, H Кшшга, 1996) Показано, что сероводород приводит к увеличению внутриклеточного кальция в астроцитах и вызывает кальциевые волны, опосредуя взаимодействие между нейронами и глией (Y Nagai, 2004) Известными мишенями H2S являются аденилатциклаза (H Kimura, 2000) и АТФ-зависимые К+-каналы (R Wang, 2002, G Tang et al, 2005) При некоторых нейродегенеративных процессах и сердечно-сосудистых заболеваниях наблюдаются изменения уровня сероводорода в тканях (Р К Moore et al, 2003)
Эндогенно сероводород синтезируется из L-цистеина пиридоксаль-5'-фосфат-зависимыми ферментами - цистатионин ß-синтазой и цистатионин у-лиазой, экспрессируюхцимися практически во всех тканях (К Eto et al, 2002) Показано, что эндогенный синтез сероводорода в нервной системе вызывается кратковременной активацией цистатионин ß—синтазы вследствие нейронального возбуждения и входа кальция (К Eto et al, 2002), что предполагает нейромедиаторную роль сероводорода, как и других газов Исследования эффектов экзогенного и эндогенного сероводорода на секрецию медиатора и выявление внутриклеточных механизмов его влияния на функцию нервно-мышечного синапса позволит определить основные мишени действия сероводорода при модуляции синаптических функций
Цель и задачи исследования Целью исследования являлось определение механизмов, лежащих в основе действия сероводорода на секрецию медиатора, и выявление возможности его эндогенного синтеза в области нервно-мышечного синапса теплокровных и холоднокровных животных
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи
1 Изучить эффекты газообразного сероводорода и его донора гидросульфида натрия на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки
2 Исследовать эффекты сероводорода на спонтанную и вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши
3 Проанализировать роль системы гуанилатциклазы/иГМФ и аденилатциклазы/цАМФ в эффектах сероводорода
4 Выявить роль рианодиновых рецепторов внутриклеточных кальциевых депо в эффектах сероводорода
5 Исследовать возможность эндогенного синтеза сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши с использованием блокаторов цистатионин р-синтазы и цистатионин у-лиазы
6 Определить экспрессию генов ферментов синтеза сероводорода в диафрагмальной мышце мыши методом обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции
Положения, выносимые на защиту:
1 Экзогенный сероводород усиливает спонтанную и вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе без изменения кинетики ионных токов двигательного нервного окончания
2 Пресинаптические эффекты сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки опосредуются увеличением внутриклеточного уровня кальция за счет активации рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума
3 Сероводород эндогенно синтезируется в области нервно-мышечного синапса лягушки и мыши
Научная новизна. В работе впервые показано, что сероводород является пресинаптическим модулятором передачи возбуждения в нервно-мышечных соединениях холоднокровных и теплокровных животных Установлено, что сероводород увеличивает вызванное и спонтанное освобождение медиатора, не изменяя электрогенез двигательного нервного окончания Впервые выявлено, что блокирование ферментов синтеза сероводорода приводит к эффектам, противоположным действию газа, что говорит о его эндогенном синтезе в области нервно-мышечного синапса как холоднокровных, так и теплокровных животных Определена экспрессия мРНК цистатионин Р-синтазы и цистатионин у-лиазы - ферментов синтеза сероводорода в диафрагме мыши Впервые исследованы внутриклеточные механизмы действия сероводорода на секрецию медиатора в двигательном
нервном окончаний лягушки Показано, что в основе эффектов сероводорода на секрецию медиатора лежит увеличение внутриклеточной концентрации Са2+ за счет активации рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума
Научно-практическая ценность Полученные в работе данные расширяют представления о возможности модуляции синаптической передачи эндогенными физиологически активными соединениями Это, в частности, касается вопросов о влиянии газообразных посредников, имеющих уникальные свойства, отличающие их от классических медиаторов, на функционирование нервной системы Впервые исследована роль газообразного посредника - сероводорода в модуляции секреции медиатора в нервно-мышечном синапсе как холоднокровных, так и теплокровных животных Научную ценность представляют данные об участии рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума в эффектах сероводорода Поскольку основные закономерности функционирования нервно-мышечного синапса идентичны процессам, происходящим в синапсах центральной нервной системы, результаты работы полезны для объяснения механизмов регуляции процессов секреции нейромедиаторов и гормонов эндогенными газообразными посредниками в секреторных, нейросекреторных клетках и нейронах Полученные данные имеют не только фундаментальное значение, но и могут быть использованы при разработке средств фармакологической коррекции нарушений нервно-мышечной передачи Результаты исследования представляют практическую ценность для физиологов, биофизиков, биохимиков, фармакологов и нейрохимиков Полученные данные используются при чтении лекций на кафедре физиологии человека и животных Казанского государственного университета Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ (06-04-49125), «Ведущая научная школа» (НШ-4520 2006 4, гос контракт № 02 445 11 7351), АН РТ (03 3 8-343/2005-2006), АН РТ для молодых ученых (14-7/2005)
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на следующих конференциях и съездах. Всероссийском научном симпозиуме «Растущий организм адаптация к физической и умственной нагрузке» (Казань, 2006), конференции молодых ученых "Биология - наука 21-го века" (Пущино, 2005), Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2005, 2007), XX Съезде физиологического общества имени ИП Павлова (Москва 2007), IX Всероссийской школе молодых ученых «Актуальные проблемы нейробиологии» (Казань, 2005), Международном симпозиуме «Biological motility» (Пущино, 2006), ХШ международном совещании и VI школе по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006), I Съезде физиологов СНГ (Дагомыс, 2005), Международной школе-конференции «Простые нервные системы» (Казань, 2006), Всероссийской конференции
«Нейрохимия Фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), ежегодных научных конференциях в Казанском государственном университете и Казанском медицинском государственном университете
Реализация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ, в том числе 3 публикаций в рецензируемых журналах (из списка ВАК) Материалы диссертации неоднократно доложены на ежегодных научных конференциях в Казанском государственном университете
Структура и объем диссертации Диссертация объемом 153 страницы состоит из введения, обзора литературы, описания методики исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы Список цитируемой литературы включает 311 источников, из них 34 - отечественных и 277- иностранных авторов Диссертация содержит 22 рисунка и 2 таблицы
ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования, использованные растворы и химические вещества. Эксперименты проводили на изолированном нервно-мышечном препарате кожно-грудинной мышцы лягушки Rana ridibunda и диафрагме лабораторных белых мышей Все эксперименты выполнены в условиях постоянной перфузии препарата со скоростью 5 мл/мин Использовали раствор Рингера для холоднокровных животных следующего состава (в мМ) NaCl - 115, КС1 - 2 5, СаС12 - 1 8, HEPES - 5 (t=20°C, рН 7 2-7 4), и раствор Кребса для теплокровных животных (в мМ) NaCl - 154, КС1 - 5, СаС12 - 2, HEPES - 5 , MgCl2 - 1, глюкоза - 11 (t=20°C, рН 72-7 4) Для устранения сокращения мышц в раствор добавляли d-тубокурарин (20-30 мкМ) или использовали раствор Рингера с пониженной (низкой) концентрацией ионов кальция ([Са2+]0) (0 2-0 4 мМ) и повышенной (высокой) концентрацией ионов магния ([Mg2+]0) (2-4 мМ)
В экспериментах использовали следующие фармакологические препараты фирмы Sigma гидросульфид натрия (NaHS), L-цистеин, аминооксиацетиловая кислота (АОАК), р-цианоаланин (р-ЦА), 8(4-chlorophenylthio)-adenosme-3,5-cyclic monophosphate (pCPT-cAMP), 8(4-chlorophenylthio)- guanosme-3,5-cychc monophosphate (pCPT-cGMP), cisN-(2-phenylcyclopentyl) azacyclotndeclen-amme hydrochloride (MDL-12330A), 1H-[l,2,4]-oxadiazolo[4,3-a]quinoxalm-l-one (ODQ), кофеин, дантролен, 4-аминопиридин Водонерастворимые вещества растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO) Концентрация DMSO в используемых растворах не превышала 0 01%
Газообразный сероводород (H2S) получали в реакции* Na2S+2HCl = 2NaCl+H2S, которую проводили в вытяжном шкафу (Карякин, 1974) Образовавшимся в результате реакции H2S насыщали 20 мл раствора Рингера в течение 30 мин непосредственно перед экспериментом С учетом
растворимости H2S концентрация базового раствора составляла 98 мМ (Михайленко, 1966) Данный раствор сразу же доводили до используемой концентрации H2S и добавляли в систему перфузии Гидросульфид натрия (NaHS) широко используется в научных исследованиях в качестве донора H2S (Abe, Kimura, 1996), так как в водных растворах диссоциирует до иона натрия (Na+) и гидросульфидного аниона (HS), который реагирует с протоном (Н+), образуя H2S Известно, что в физиологическом растворе одна треть H2S находится в недиссоциированной форме, а остальные две трети существуют в виде HS' (Abe, Kimura, 1996)
Электрофизиологический метод Раздражение двигательного нерва проводили прямоугольными электрическими импульсами сверхпороговой силы длительностью 0 2-0 3 мс с частотой 0.2-0 4 имп/с или пачками ритмических стимулов (500 раздражений) с частотой 10 или 50 имп/с Регистрацию биопотенциалов производили с помощью микроэлектродов Методом внеклеточного отведения регистрировали трехфазные ответы нервного окончания (НО) и следующий за ними ток концевой пластинки (ТКП) В условиях низкой [Са2+]о (0 2-0 4 мМ) амплитуда 3-й фазы ответа НО в основном отражает величину потенциалзависимых К+-токов (Зефиров, Халилов и др, 1987) Для выявления Са2ч-активируемых К+-токов в стандартный раствор Рингера ([Са2+]0 - (1 8 мМ)) для холоднокровных добавляли 4-аминопиридин (100 мкМ) При добавлении в раствор 4-аминопиридина происходит блокирование потенциалзависимых К+-каналов, что ведет к увеличению длительности потенциала действия и, следовательно, большему входу Са2* в НО В результате выходящие Са2+-активируемые К+-токи становятся преобладающими в суммарном выходящем токе Таким образом, амплитуда 3-й фазы ответа НО будет отражать величину Са2+-активируемых К+-токов (Зефиров, Халилов и др , 1987)
Методом внутриклеточного отведения регистрировали вызванные потенциалы концевой пластинки (ГТКП) и спонтанные (миниатюрные) ПКП (МПКП) При внеклеточном отведении проводили анализ амплитуды и квантового состава ТКП, параметров второй и третьей фазы ответа НО Квантовый состав рассчитывался по методу выпадений М = ln No/N, где No -число раздражений, N - число раздражений, не вызвавших ТКП (Каменская, 1972) Для определения синаптической задержки подсчитывали временной интервал между пиком второй фазы ответа НО и началом одноквантового ТКП (на уровне 20% его амплитуды) При внутриклеточном отведении анализировали амплитуду, время нарастания (RT) и время полуспада (т) ПКП и МПКП, а также частоту МПКП Для анализа и последующей обработки параметров сигналов применяли автоматизированную систему, созданную на базе АЦП L-CARD-1250 и Pentium-IH с использованием оригинальной программы «Ritm» (автор программы -ТВ Лайков) Среднее значение в серии получали по результатам экспериментов на 5-12 животных Для статистической обработки экспериментальных данных использовали
параметрический i-критерий Стьюдента в программе Microcal
Origin 6 1 (Microcal Software, Inc, 1991-2000)
Проведение обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ЛЦР) 1 Образец исследуемой ткани (диафрагма мыши) массой 100 мг замораживали в жидком азоте Для осаждения мРНК полученный гомогенат вводили в лизирующий раствор следующего состава гуанидинтиоционат (7 5М), фенол(50%), {3-меркаптоэтанол (1%), 0 5 мкг/мл дрожжевой тРНК (Chomczynski, Sacchi, 1987) Полученные препараты нуклеиновых кислот вводили в реакцию ОТ-ПЦР
Синтез клонированной ДНК (кДНК) проводили с использованием реакционной смеси следующего состава диоксирибонуклеотид трифосфат (dNTPs) (0 25 мМ), буфер для M-MuLV-обратной транскриптазы (Трис-НС1 (50 мМ), MgCl2 (3 мМ), КС1 (75 мМ), дитиотреитол (5 мМ), IRNase (2 единицы) (Хеликон, Россия), M-MuLV-обратной транскриптазы (1 единица) (СибЭнзим, Россия), 500 нг олигонуклеотида (dT)t5 В реакционную смесь объемом 20 мкл вносили 5 мкл препарата выделенной мРНК Реакцию проводили при 37°С в течение 1 ч ПЦР проводили в реакционной смеси следующего состава dNTPs (0 2 мМ), однократный буфер для Taq ДНК-полимеразы (ТрисНС1 (60 мМ), MgCl2 (15 мМ), КС1 (25 мМ), (3-меркаптоэтанол (5 мМ), Тритон Х-100(0 05%), Taq ДНК-полимеразы (1 единица) (СибЭнзим, Россия), олигонуклеотидные праймеры (1 мкМ каждого) В работе использовались олигонуклеотиды следующего состава CSEm-f (5'-aagcagtggctgcgttg-3') и CSEm-r (5'-tgtggtgtaatcgctgcc-3'), а также CBSm-f (5'-agccaacttctggcaac-3') и CBSm-r (5'-caccagcatatccagcttc-3') В реакционную смесь объемом 20 мкл вносили 5 мкл препарата кДНК Амплификацию ДНК проводили с использованием системы «Терцик МС2» (ДНК-Технология, Россия) в следующем температурном режиме 1 цикл 94°С - 5 мин, 42 цикла 94°С - 1 мин, 60°С -1 мин, 72°С -1 мин, 1 цикл 72°С - 7 мин, хранение 4°С Для проверки специфичности реакции полученные фрагменты ДНК обрабатывали рестриктазой НаеШ (СибЭнзим, Россия)
Детекцию результатов ПЦР проводили методом горизонтального электрофореза в 2% агарозном геле, содержащем бромистый этидий (0,5 мкг/мл) Электрофоретическое разделение проводили в трис-боратном буфере (рН 8 0) Результаты визуализировали в УФ-свете (1=310 нм) Полученные электрофореграммы фотографировали цифровым фотоаппаратом Nikon CoolPix 4500 с оранжевым светофильтром Для определения размеров амплифицированных фрагментов ДНК использовали молекулярные маркеры (100-1000 пары оснований (по)), произведенные НПО «СибЭнзим» (Россия)
1 Рабата проводилась в ГМУ « Татарский научно-исследовательский институт сельского хозяйства РАСХН» отдел сельскохозяйственной биотехнологии совместно с научным сотрудником Вологиньш С Г
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Влияние газообразного и Ь'аНБ на секрецию медиатора и электрогеиез двигательного нервного окончания лягушки. Аппликация газообразного НлБ (500 мкМ) в условиях низкой [Са2+]0 (0 2-0 4 мМ) (внеклеточное отведение) приводила к быстрому и обратимому увеличению амплитуды ТКП, которая к 15 мин эксперимента увеличилась до 216±29% относительно контроля Увеличение амплитуды сопровождалось ростом квантового состава ТКП до 320±42% (п=5, р<0 05) (рис 1А) Донор сероводорода - (500 мкМ) к 15 мин эксперимента также обратимо
повышал амплитуду и квантовый состав ТКП до 225±21% и 288±31% («=5, р<0 05) (рис 1А), соответственно Идентичность эффектов Н28 и ИаНБ позволила нам в дальнейших экспериментах использовать ИаНБ в качестве донора сероводорода На рис 1Б представлена кривая дозозависимости эффектов ЫаНБ на квантовый состав ТКП, ЕС50=72±31мкМ Ни газообразный Н2В, ни его донор - КаНБ не вызывали изменения амплитудно-временных параметров ответа НО, что свидетельствует об отсутствии эффекта на потенциалзависимые и К*-токи В последующих экспериментах использовался ЫаНБ (100 мкМ) А Б
400*11
л 2001
т о
Г—И 25 ^-м.нэ
Ь'ГуР'^
Г"
• МаНЭ
3 100
30 40
МИН
100 1000
Концентрация №Н5, мкМ
Рис 1 Влияние газообразного Н;8 и №№ на вызванную секрецию мслнатора
А - Изменение кванговою состава токов концевой пластинки на фоне действия (500 мкМ) и N8148 (500 мкМ) при одиночной стчм^чяции (▼- НгБ, Л - На вкладке
усредненные ответы нервного окончания и следующие за ними токи концевой пластинки (30 реализаций) в контроле, при действии НгЗ (500 мкМ) и (500 мкМ) в отдельных экспериментах Б - Кривая дозозависимости эффектов на квантовый состав токов
концевой пластинки ([Са2+]о=0 2-0 4 мМ, [К^2+]0= 2-4 мМ)
В >словиях нормальной [Са2+]0 (1 8 мМ) аппликация блокатора потенциалзависимых К+-канапов - 4-аминопиридина (100 мкМ) приводила к повышению амплитуды третьей фазы ответа НО за счет усиления Са*" активируемых К+-токов и появлению повторной активности двигательного НО Добавление ЫаНБ на фоне действия 4-аминопиридина не приводило к достоверному изменению амплитуды и длительности третьей фазы ответа НО
Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что экзогенный сероводород в микромолярных концентрациях оказывает облегчающее влияние на вызванное освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки и его эффекты не опосредуются изменением элекгрогенеза НО
Влияние МаНБ на спонтанные и вызванные постсинаптические сигналы в нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши. С использованием внутриклеточного отведения синаптических сигналов в условиях нормальной [Са2+]0 (1 8 мМ) анализировали влияние донора НгЭ на МПКП в нервно-мышечном синапсе лягушки Аппликация МаНЗ приводила к обратимому увеличению частоты МПКП до 253±46% (п=5, р<0 05) относительно контроля к 20 минуте эксперимента (рис 2А, Б) Амплитудно-временные характеристики МПКП в присутствии ЫаЬВ достоверно не изменялись, ИаНБ также приводил к обратимому увеличению амплитуды ПКП до 125±8% (п=4, р<0 05) (рис 2В, Г) относительно контроля без изменения временных параметров вызванных сигналов
Б
05с
контроль
№Н5
„ J_
£ 200-
с £
5 100
2 мс
<
Контроль
контроль Манэ Котропь ,аНЗ
Рис 2 Влияние (100 мкМ) на спонтанные и вызванные потенциалы концевой пластинки в нервно-мышечном синапсе лягушки
А - Миниатюрные потенциалы концевой пластинки в контроле и при действии ИаШ (отдельный эксперимент) Б - Изменение частоты миниатюрных потенциалов концевой пластинки при действии В - усредненные потенциалы концевой пластинки (10
реализаций) в контроле и при действии ЫаШ (отдельный эксперимент) Г - Влияние КаН5 на амплитуду потенциалов концевой пластинки [Са2ч]0=1 8 мМ
Эксперименты на нервно-мышечном синапсе мыши в тех же условиях показали, что добавление ИаНЭ также вызывало быстрое и обратимое увеличение вызванной секреции медиатора. Наблюдалось увеличение амплитуды ПКП, которая к 8 минуте эксперимента достигло 186±15% (п=3, р<0 05) относительно контроля (рис ЗА) Кроме того, аппликация ЫаНБ приводила к
увеличению частоты МПКП до 189±35% (п=7, р<0 05) к 10-15 минуте эксперимента относительно контроля (рис 3) Амплитуда и временные параметры МПКП не изменялись
Таким образом, КаНБ вызывает усиление вызванной и спонтанной секреции медиатора в нервно-мышечных синапсах как лягушки, так и мыши
А Б
NaHS 100 мкМ
Рис 3 Эффекты NaHS на вызв§пну1Ь"^спонтанную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши
А- Изменение амплитуды потенциалов концевой пластинки при действии ЫаШ На вкладке усредненные потенциалы концевой пластинки (10 реализаций) в контроле и при действии ИаНБ (100 мкМ) в отдельном эксперименте Б - Влияние КаПЭ на частоту миниатюрных потенциалов концевой пластинки Время действия вещества показано сплошной линией [Са2+]0 =] 8 мМ
I КОНТРОЛЬ 3 NaHS
Эффекты H2S и NaHS на кинетику секреции медиатора в нервно-
мышечном синапсе лягушки. В ,5 а„ условиях низкой [Са2+]0, когда
потенциал действия вызывает выброс не более одного кванта медиатора, распределение
синаптических задержек
одноквантовых ТКП является показателем асинхронности секреции медиатора (В Katz, R Miledi, 1965, W Van der Kloot, 1988, E A Bukharaeva et al, 1999, AL Zefirov et al, 2000). Ha основе расчета синаптических задержек в контроле и при действии газообразного H2S (100 мкМ) и NaHS (100 мкМ) строили гистограммы распределения и кумулятивные кривые
Определяли минимальную и
lllli,
Рис 4 Влияние N3118 на "бреиенной ход секреции медиатора
А - кумулятивные кривые синаптических задержек при действии ЫаШ (100 мкМ) Б -гистограмма распределения синаптических задержек при действии МаНЪ (100 мкМ)
максимальную синаптические задержки, отражающие выделение
самого «быстрого» и самого «медленного» кванта медиатора, главную моду гистограммы распределения задержек По кумулятивным кривым анализировали параметры Р50 и параметр Р90, характеризующие временной интервал, в который попадает 50% и 90% значений синаптических задержек, ранжируемых по возрастанию. Достоверных изменений исследованных параметров при действии H2S и NaHS выявлено не было На рис 4 представлены гистограммы и кумулятивные кривые синаптических задержек, полученные в одном эксперименте в контроле и после аппликации NaHS
Влияние NaHS на развитие облегчения и динамику выходящих К^-токов при ритмической стимуляции в нервно-мышечном синапсе лягушки. Ритмическая активность является естественной формой функционирования синапса, поэтому мы использовали высокочастотную стимуляцию двигательного нерва, которая в условиях низкой [Са2+]0 сопровождается увеличением секреции медиатора - облегчением (RS Zucker, WG Regehr, 2002) Известно, что в основе развития облегчения лежит как накопление остаточного кальция (R S Zucker, W G Regehr, 2002), так и изменение динамики ионных токов пресинаптической терминали (А Л Зефиров, МА Мухамедьяров, 2004). В условиях пониженной [Са2+]0 ритмическая стимуляция с частотами 10 и 50 имп/с в контроле сопровождалась развитием облегчения, которое выражалось в увеличении средней амплитуды и квантового состава ТКП Аппликация NaHS приводила к значительному увеличению начального уровня освобождения медиатора, поэтому при ритмической стимуляции анализ квантового состава методом выпадений не представлялся возможным Для оценки облегчения мы использовали усредненную (по 100 раздражениям) амплитуду ТКП В контрольных экспериментах при стимуляции с частотой 10 имп/с средняя амплитуда ТКП к 40-й секунде (401-500 сигналы) возрастала до 250±28 % (п=9, р<0 05) (рис 5А), а при частоте 50 имп/с к 8-й секунде (401-500 сигналы) - до 717±73% (п=9, р<0 05) (рис 5В) по отношению к исходному уровню секреции Аппликация NaHS приводила к снижению выраженности облегчения по отношению к контрольным экспериментам При стимуляции с частотой 10 имп/с на фоне NaHS средняя амплитуда ТКП составила 141+25% (п=8, р<0 05) (рис 5А) и при стимуляции с частотой 50 имп/с - 320±90% (п=8, р<0 05) (рис 5В) Ритмическое раздражение в контроле наряду с облегчением секреции медиатора приводило к прогрессирующим изменениям формы ответа НО (А Л Зефиров, М А Мухамедьяров, 2004) Во время стимуляции с частотой 10 имп/с амплитуда 3-й фазы ответа НО к 40-й секунде снижалась до 70±5% (п=9, р<0 05) (рис 5Б), а с частотой 50 имп/с к 8-й секунде - до 80±3% (п=9, р<0 05) (рис 5 Г) Динамика амплитуды 3-й фазы ответа НО во время ритмической стимуляции после предварительной аппликации NaHS не отличалась от контрольной (рис 5Б, Г)
А
Б
с «о-
I- 600
ц 300
^ 400
п
ТОО-
100
--}—{—*
10 имп/с
60
10 имп/с
В
700 ^600 ¡£500 5400 £300 | 200 °100
800
0<
70.
т
0 100 200 300 400 500 N8 сигнала
О 100 200 300 400 £00 N3 сигнала
Рис 5 Влияние КаИ8 (100 мкМ) на секрецию медиатора и амплитуду 3 фазы ответа нервного окончания при ритмическом раздражении.
Изменение амплитуды токов концевой пластинки (А, В) и 3-й фазы ответа нервного окончания (Б, Г) в контроле и в присутствии ЫаШ при стимуляции с частотой 10 имп/с и 50 имп/с По оси абсцисс - номер сигнала, по оси ординат - амплитуда токов концевой пластинки и амплитуда 3-й фазы ответа нервного окончания в % относительно исходного уровня ■- контроль, □- ЫаШ [Са2+]о=0 2-0 4 мМ
Исследование роли аденилатциклазной системы в эффектах на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки Для увеличения уровня цАМФ в НО использовали мембранопроникающий негидролизуемый аналог циклического нуклеотида - рСРТ-сАМР Аппликация рСРТ-сАМР (100 мкМ) вызывала увеличение квантового состава ТКП до 153±9% (п=7, р<0 05) относительно контроля В условиях повышенной внутриклеточной концентрации цАМФ эффекты МаШ были выражены в меньшей степени, чем в контроле КаШ увеличивал квантовый состав ТКП до 174±5% (п=7, р<0 05) (рис 6А) по отношению к уровню секреции на фоне действия рСРТ-сАМР Добавление в раствор Рингера специфического ингибитора аденилатциклазы - МЕ)Ь-12330А (0 8 мкМ) вызывало уменьшение секреции медиатора из нервной терминали Амплитуда и квантовый состав ТКП к 60 минуте действия МПЬ-12330А уменьшились до 48+6% и 34±5% (п=6, р<0 05) относительно контроля, соответственно В условиях сниженной активности аденилатциклазы эффект ИаНЗ полностью сохранялся амплитуда ТКП к 20 минуте действия вещества повышалась до 170+35% (п=5, р<0 05), а квантовый состав ТКП увеличивался до 219±15% (п=4, р<0 05) (рис 6Б) по отношению к уровню секреции на фоне действия МЕ>Ь-12330А
А Б
Рис 6 Эффекты 1Ча118 на вызванную секрецию медиатора в условиях увеличенной концентрации цАМФ и при ингибировании аденилатциклазы
А - Изменение квантового состава токов концевой пластинки при действ™ НаШ (100 мкМ) в контроле (•) и на фоне действия аналога цАМФ - рСРТ-сАМР (100 мкМ) (а) Б -Изменение квантового состава токов концевой пластинки при действии ИаНБ (100 мкМ) в контроле (•) и на фоне действия ингибитора аденилатциклазы - МОЬ-123ЭО А (0 8 мкМ) (0) Время действия вещества показано сплошной линией [Са2+]о=0 2-0 4 мМ
зоо 250 200 150 100 50
Исследование роли гуанилатциклазной системы в эффектах Н^ на
секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки. Для увеличения уровня цГМФ в НО использовали мембранопроникающий негидролизуемый аналог циклического нуклеотида - рСРТ-свМР (100 мкМ) В условиях повышенной внутриклеточной концентрации цГМФ эффекты МаГО были выражены в той же степени, что и в контроле - квантовый состав ТКП увеличивался до 240±18% (п=4, р<0 05) (рис 7)
Для понижения внутриклеточной концентрации цГМФ использовали специфический ингибитор растворимой гуанилатциклазы - ОБСЗ Аппликация ОБО (01 мкМ) вызывала снижение секреции медиатора Амплитуда и квантовый состав ТКП к 60 минуте уменьшились относительно контроля до 48±3% и 76±6% (п=5, р<0 05), соответственно В условиях сниженной активности гуанилатциклазы эффект
NaHS pCPT-cGMP ODQ +NaHS + NaHS
Рис 7 Эффекты NaHS на вызванную секрецию медиатора в условиях увеличенной
концентрации цГМФ и при ингибировании гуанилатциклазы Изменения квантового состава токов концевой пластинки под действием NaHS (100 мкМ) в контроле, на фоне аналога цГМФ - pCPT-cGMP (100 мкМ), и ингибитора гуанилатциклазы - ODQ (100 мкМ) [Са2+]о=0 2-0 4 мМ
NaHS полностью сохранялся, амплитуда ТКП к 20 минуте действия вещества повышалась до 182±16% (п=5, р<0 05), а квантовый состав ТКП увеличивался до 224±9% (п=4; р<0 05) (рис 7) по отношению к уровню секреции на фоне действия ODQ
Таким образом, система гуанилатциклазы в эффектах сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки не участвует
Исследование роли рианодиновых рецепторов внутриклеточных Ca24 -депо в эффектах Hß на секрецию медиатора. Для выявления влияния сероводорода на рианодиновые рецепторы (Ри-рецепторы) внутриклеточных Са2+ -депо использовали активатор Ри-рецепторов - кофеин и ингибитор Ри-рецепторов - дантролен (F. Znao et al, 2001, ОП Балезина, 2002) Кофеин сенсибилизирует Ри-рецептор к ионам Са2+ и открывает Са2+-канал (В Ehrliche al, 1994) В условиях нормальной [Са2+]0 (1 8 мМ) добавление в перфузионный раствор кофеина (3 мМ) вызывало увеличение амплитуды ТКП до 145±17% (п=4, р<0 05) относительно контроля Аппликация NaHS на фоне действия кофеина не приводило к достоверному изменению амплитуды ТКП (рис 8 А)
Добавление в раствор Рингера дантролена (25 мкМ) вызывало уменьшение секреции медиатора из нервной терминали Амплитуда ТКП к 30 минуте действия дантролена уменьшалась до 65+10% (п=4, р<0 05) относительно контроля На фоне блокирования Ри-рецепторов добавление NaHS не приводило к увеличению амплитуды ТКП (рис 8 Б).
с Ь
170 160 150140
3
| 130 | 120 I 110 100-1
№HS
кофеш
i/H+i-ШШ
110
^ 100
в4
g 90
I-§ 80 и1
I 70
га 60
10
—1— 20
50
дантролен
NaHS
ч
'Ч
той
30 40 0 10 20 ~3(Г 40
Ерезд мин время, мин
Рис. 8 Эффекты N3115 на вызванную секрецию медиатора в условиях активации и ингибировании рианодиновых рецепторов
А - Изменение амплитуды токов концевой пластинки на фоне действия активатора Ри-рецепторов - кофеина (3 мМ) и NaHS (100 мкМ), апплицированного на фоне кофеина. Б - Изменение амплитуды токов концевой пластинки на фоне действия ингибитора Ри-рецепторов - дантролена (25 мкМ) и МаЬВ (100 мкМ), апплицированного на фоне дантролена. Время действия вещества показано сплошной линией [Са2н%= 1 8 мМ
Таким образом, активация и блокирование Ри-рецепторов
эндоплазматического ретикулума предотвращало усиление вызванного освобождения медиатора при действии сероводорода
Влияние субстрата и блокаторов синтеза на секрецию медиатора из двигательного нервного окончания лягушки L-цистеин является основным субстратом эндогенного синтеза сероводорода в тканях (К N Maclean, Е Kraus, 2004) В условиях нормальной [Са2+]0 (1 8 мМ) в нервно-мышечном синапсе лягушки L-цистеин (1мМ) увеличивал амплитуду ТКП до 117±2% (п=4, р<0 05) по отношению к контролю
Аминооксиацетиловая кислота (АОАК) - ингибитор - цистатионин (3-синтазы (CBS) и ß-цианоаланин (ß-ЦА) - ингибитор цистатионин у-лиазы (CSE), широко используются для блокирования эндогенного синтеза сероводорода (М Pfeer, С Ressler, 1967, А Е Braunstein et al, 1971, JR Uren et al, 1978, В Teague et al, 2002)
120п
с 115-
in
ь-
m cf 110-
&
С с 105-
5
га
100-
L-цистеин
M
/
Й1
100
SS. 80
I«*
I
£ 40
i»
то
10 15 20 25 время, мин
Конгрогъ ß-Ufi АС»К
Рис 9 Эффекты субстрата и блокаторов ферментов синтеза НгБ на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки
Л - Изменение амплитуды токов концевой пластинки при действии субстрата сингаз Н^ - |.-ш1стеина (1мМ) (•) По оси абсцисс - время от начала эксперимента {в чин) по оси ординат - изменение амплитуды токов концевой пластинки относительно исходного значения Время действия вещества показано сплошной линией [Са2+]0 =1 8 мМ Ь - Влияние блокаторов ферментов синтеза Н )8 р-цианоаланина (р-ЦА) и аминооксиацетиловой кислоты (АОАК) на амплитуду токов концевой пластинки [Са2+]0 = 1 8 мМ
В условиях нормальной [Са2+]0 (1 8 мМ) аппликация р-цианоаланина (1 мМ) приводила к уменьшению амплитуды ТКП к 15 минуте эксперимента до 63±13% (п=4, р<0 05) (рис 9Б) относительно контроля Добавление аминооксиацетиловой кислоты (I мМ) вызывало снижение амплитуды ТКП до 63±16% (п=5, р<0 05) относительно контроля к 15 минуте эксперимента (рис 9 Б) Параметры ответа НО при действии аминооксиацетиловой кислоты и Р-цианоаланина не изменялись
Таким образом, субстрат синтеза H2S увеличивал высвобождение медиатора, а ингибиторы ферментов синтеза H2S оказывали противоположные эффекты, что свидетельствует о том, что эндогенно синтезирующийся газ (H2S) в области нервно-мышечного синапса в естественных условиях модулирует секрецию медиатора
Влияние блокаторов синтеза Hß на секрецию медиатора из
двигательного нервного окончания мыши. В условиях нормальной [Са2+]о (1 8 мМ) в нервно-мышечном синапсе мыши блокирование CSE с помощью ß-цианоаланина (1 мМ) приводило к уменьшение амплитуды ТКП до 73±8% (п=3, р<0 05) (рис 10 ) по отношению к контролю Сходные изменения наблюдались и при блокировании CBS Добавление аминооксиацетиловой кислоты (1 мМ) уменьшало амплитуду ТКП до 69±9% (п=5, р<0 05) относительно контроля (рис 10) Снижение вызванного освобождения медиатора из двигательного НО мыши при ингибированш ферментов синтеза H2S предполагает его эндогенное образование и модулирующее влияние на нервно-мышечную передачу у теплокровных животных
Выявление ферментов, генерирующих сероводород, в скелетной мышце мыши методом обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР). Для выявления экспрессии ферментов, генерирующих сероводород, в диафрагмальной мышце мыши использовали метод ОТ-ПЦР Метод ПЦР основан на высокоспецифичной амплификации нуклеотидных последовательностей в условиях m vitro Мишенью ПЦР являются молекулы ДНК Молекулы РНК могут быть выявлены в ПЦР после проведения реакции обратной транскрипции и синтеза одноцепочечной кДНК
Нами были сконструированы олигонуклеотидные праймеры, специфичные к мРНК изучаемых ферментов Для этого использовалась информация о нуклеотидной последовательности мРНК CSE и CBS, содержащаяся в базе данных GenBank (локусы NM_145953 и NM_178224) Ожидаемый размер амплифицируемых фрагментов ДНК ограниченных праймерами CSEm-f и CSEm-r составляет 232 п о, а для олигонуклеотидов CBSm-f и CBSm-r - 325 п о При введении в реакцию ОТ-ПЦР препаратов мРНК, полученных из диафрагмы мыши, на электрофореграмме были выявлены фрагменты ДНК лежащие в области 320-330 и 240-250 по.
100-
S 80-
1-
60-
t>
s с 40-
s
га 20-
0-1_I--Ьшт_гонит
контроль р-ца АОАК
Рис. 10 Эффекты блокаторов синтеза Н28 на вызванную секрецию медиатора из нервного окончания мыши Влияние р-цианоаланина (р-ЦА) и аминооксиацетиловой кислоты (АОАК) на амплитуду токов концевой пластинки [Са2+]о =1 8 мМ
Обнаруженные фрагменты по своему размеру соответствуют теоретически ожидаемым амплификонам - 325 и 232 п.о., специфичных для мРНК CSE (рис. 11 А) и CBS (рис. 11 Б), соответственно.
А Б
Рнс. П. Выявление мРНК CSE и CBS в диафрагме мыши методом обратно-транскриптазной цепной реакции.
А- электрофореграмма для мРНК CSE;B- электрофореграмма для мРНК CBS; М - маркер молекулярных размеров; 1 - фрагмент ДНК, специфичный мРНК CSE (А) и CBS (Б). 2 - амплифицированный фрагмент, обработанный рестриктазой НаеШ; 3 -контроль (образец, обработанный рибонуклеазой А); 4 - отрицательный контроль (деионизованная вода).
Для проверки специфичности реакции ОТ-ПЦР, образовавшиеся амплификоны были обработаны рестриктазой НаеШ и подвергнуты электрофоретическому разделению. Амплификон размером 325 п.о. был расщеплен на фрагменты с размерами, близкими к теоретически ожидаемым (78 и 247 п.о.). При изучении размеров продуктов рестрикции фрагмента 232 и.о. на электрофореграмме выявлены полосы соответствующие фрагментам с массой 39 и 193 п.о., что говорит о специфичности проведения ОТ-ПЦР. Амплификационный синтез ДНК отсутствовал в препаратах нуклеиновых кислот, предварительно обработанных рибонуклеазой А. Это подтверждает факт, что молекулярной мишенью в реакции ОТ-ПЦР служила мРНК. На основании полученных результатов можно сделать вывод об экспрессии мРНК CSE и CBS в изученных образцах.
Заключение
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что экзогенный сероводород в микромолярных концентрациях оказывает облегчающее влияние на спонтанное и вызванное освобождение медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши. Было показано, что эффекты сероводорода на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки дозозависимы и не опосредуются изменением
электрогенеза НО и кинетики секреции медиатора Однако нельзя исключать возможность непосредственного вмешательства H2S в механизмы экзоцитоза синаптических везикул, связанных с трансформацией белков SNARE-комплекса, о чем свидетельствует увеличение частоты МПКП В условиях ритмической активности (10 и 50 имп/с) сероводород оказывал менее выраженное облегчение освобождения медиатора по отношению контролю, не изменяя при этом амплитуды выходящих калиевых токов НО По-видимому, это связано увеличением исходного уровня секреции медиатора при действии сероводорода и подтверждает отсутствие его влияния на КГ1-токиНО
Из литературных данных известно, что физиологические концентрации H2S увеличивают синтез цАМФ в первичных культурах нейронов мозга (Y Kimura, 2000) Кроме того, при исследовании механизмов действия NO и СО на нервно-мышечную передачу было показано, что их эффекты опосредованы изменением уровня цАМФ и цГМФ (А В Яковлев и др , 2005, G F Sitdikova et al, 2007), поэтому исследовали роль системы циклических нуклеотидов в эффектах сероводорода Было показано, что ингибирование как гуанилатциклазы, так и аденилатциклазы не изменяло выраженности эффектов H2S на секрецию медиатора Увеличение внутриклеточной концентрации цАМФ и цГМФ с помощью мембранопроникающих аналогов показало, что изменение уровня цАМФ вовлечено в реализацию эффекта сероводорода на синаптическую передачу Повышение внутриклеточной концентрации цАМФ приводит к активации протеинкиназы А, которая регулирует внутриклеточный уровень Са2+, фосфорилируя субъединицы потенциалзависимых кальциевых каналов и рианодиновых рецепторов (Т Takasago et al, 1989, RD Hain et al, 1995, D M Teman, 1995), участвует в процессах экзоцитоза и эндоцитоза синаптических везикул (А.М Петров и др, 2008) В условиях активации Ри-рецепторов кофеином облегчающего влияния H2S на вызванную секрецию медиатора не наблюдалось На фоне блокирования рианодиновых рецепторов Са2+-депо дантроленом H2S также не проявлял своих эффектов. Полученные данные позволяют предположить, что активация рианодиновых рецепторов внутриклеточных Са2+-депо опосредует усиление секреции медиатора при действии сероводорода
О возможности эндогенного синтеза сероводорода в области нервно-мышечного синапса свидетельствуют эксперименты с блокированием ферментов синтеза сероводорода Блокирование CBS и CSE приводило к снижению освобождения медиатора как в двигательных НО лягушки, так и мыши, что противоположно действию H2S Кроме того, с использованием метода ОТ-ПЦР была показана специфическая экспрессия мРНК CBS и CSE в диафрагмальной мышце мыши. Синтез H2S регулируется как на уровне экспрессии ферментов CSE и CBS в тканях, так и путем изменения их активности (Е Lowiska, 2007) В нервной системе электрическая стимуляция и глутамат увеличивают активность CBS Са/кальмодулин-зависимым образом (К Eto et al, 2002) Деполяризация мембраны НО или
мышечных волокон будет приводить к эндогенному синтезу НгБ и усилению освобождения медиатора.
Таким образом, сероводород является эндогенным модулятором освобождения медиатора в нервно-мышечных синапсах холоднокровных и теплокровных животных Пресинаптические эффекты сероводорода в нервно-мышечном соединении лягушки опосредуются активацией рианодиновых рецепторов внутриклеточных Са2+-депо
Выводы
1 Газообразный сероводород (Н28) и его донор - ЫаНБ вызывают дозозависимое (10-500 мкМ) и обратимое увеличение амплитуды и квантового состава токов концевой пластинки (ТКП), не изменяя электрогенез и синхронность выброса медиатора из двигательного нервного окончания лягушки В диафрагмальном нервно-мышечном препарате мыши ИаНБ (100 мкМ) увеличивает амплитуду потенциалов концевой пластинки (ПКП)
2 В нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши НаНБ увеличивает частоту миниатюрных потенциалов концевой пластинки (МПКП), не изменяя их амплитудно-временных параметров
3 В условиях ритмической стимуляции двигательного нерва лягушки (10 и 50 имп/с) при низкой внеклеточной концентрации ионов кальция МаНБ приводит к уменьшению выраженности облегчения амплитуды ТКП, что связано с более высоким исходным уровнем освобождения медиатора
4 Увеличение внутриклеточной концентрации цГМФ с помощью мембранопроникающего аналога рСРТ-свМР (100 мкМ) и ингибирование гуанилатциклазы с помощью СЮС> (0 1 мкМ) не предотвращает эффекта ЫаШ на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки
5 Ингибирование аденилатциклазы с помощью МБЬ-12330А (0 8 мкМ) не изменяет эффектов МаШ В условиях увеличения внутриклеточной концентрации цАМФ с помощью мембранопроникающего аналога рСРТ-сАМР (100 мкМ) КаНБ приводит к менее выраженному усилению секреции медиатора, чем в контроле
6 Активация (кофеин, 3 мМ) или ингибирование (дантролен, 50 мкМ) рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума в двигательных нервных окончаниях лягушки предотвращает увеличение вызванного освобождения медиатора при действии N8118, что указывает на участие рианодиновых рецепторов в эффектах сероводорода
7 Р-цианоаланин (1 мМ) - блокатор цистатионин у-лиазы и аминооксиацетиловая кислота (1 мМ) - блокатор цистатионин Р-синтазы оказывают эффекты противоположные действию Н28 на секрецию медиатора из двигательных нервных окончаний лягушки и мыши
8 Выявлена экспрессия мРНК цистатионин (^-синтазы и цистатионин у-лиазы в диафрагмальной мышце мыши с помощью метода обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции(ОТ-ПЦР)
Список публикаций Герасимовой Е.В. по материалам диссертации:
1. Герасимова ЕВ Дозозависимые эффекты сероводорода на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе/ Е В Герасимова, А В Яковлев, Г Ф Ситдикова, A JI Зефиров // Сборник статей «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» -Пущино -2005 - С 166-169
2 Герасимова Е В Сравнительный анализ действия H2S и его донора NaHS на вызванную секрецию медиатора/ Е В Герасимова, О В Яковлева, А В Яковлев // Научные труды I Съезд физиологов СНГ - Сочи, Дагомыс -
2005 - Т 1 - С 51
3 Герасимова ЕВ Исследование эффектов различных концентраций сероводорода на нервно-мышечную передачу/ Е В Герасимова, О В, Яковлева, А Р Ибатуллина // X Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине» -Казань —2005 —С 216-217
4 Герасимова ЕВ Влияние монооксида углерода и сероводорода на нервно- мышечную передачу/ Е В Герасимова, В Р. Бикеева, А В Яковлев // ХШ Международное совещание и VI школа по эволюционной физиологии. -Санкт-Петербург. - 2006 - С. 59-60
5 Gerasimova Е V Role of cAMP level in the effects of hydrogen sulphide on evoked transmitter release m frog neuromomuscular junction/ E V Gerasimova, V V Peryakova // International symposium Biological motility - Pushcino - 2006 -P 44
6 Герасимова ЕВ Роль аденилатциклазной системы в реализации эффектов газообразных посредников на вызванное освобождение ацетилхолина / Г Ф Ситдикова, Е В Герасимова, А.В Яковлев, A JI Зефиров //Материалы III Всероссийской с международным участием школы-конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности - Москва —
2006 - С 126
7. Герасимова Е В Роль внутриклеточного уровня цАМФ в эффектах газообразных посредников на нервно-мышечный синапс / Г Ф Ситдикова, Е В Герасимова, В В Пермякова //Тезисы VII всероссийского симпозиума и школы семинара молодых ученых и учителей «Растущий организм адаптация к физической и умственной нагрузке» - Казань - 2006 - С 100101
8 Gerasimova Е V Cyclic AMP involvement m the effects of hydrogen sulphide / E V. Gerasimova, V V Peryakova // "Simpler nervous systems" VII east European conference of the International society of invertebrate neurobiology -Kazan -2006-P 23
9 Герасимова E В Газообразные посредники - оксид азота (И), монооксид углерода и сероводород как модуляторы освобождения медиатора
в нервно-мышечном синапсе / ГФ Ситдикова, ЕВ Герасимова, О В Яковлева, В В Пермякова //Материалы меясдународной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» -Астрахань -2006 - С 144-147
10 Герасимова ЕВ Жирные кислоты модулируют процессы секреции медиатора и функционирования калиевых каналов в двигательном нервном окончании / О В Яковлева, Г Ф Ситдикова, Е В Герасимова, А Л Зефиров // Нейрохимия -2006 -Т 23 -№4 -С 310-316
11 Герасимова ЕВ Влияние сероводорода на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе холоднокровных/ В В Пермякова, Е В Герасимова // Сборник статей «Итоговая научно-образовательная конференция Казанского государственного университета 2006 года» -Казань -2006 - С 14-16
12 Герасимова ЕВ Сероводород - модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе теплокровных и холоднокровных / ЕВ Герасимова, В В Пермякова, Г Ф. Ситдикова // Тезисы докладов XX съезда физиологического общества им ИП Павлова - Москва -2007 -С 192
13 Герасимова Е.В Эффекты гидросульфида натрия — донора сероводорода на секрецию медиатора и ионные токи нервного окончания /ЕВ Герасимова, В В Пермякова // Тезисы докладов и стендовых сообщений научной конференции «Нейроспецифические метаболиты и энзимологические основы деятельности ЦНС» -Пенза -2006 -С 119
14 Герасимова ЕВ Эффекты блокаторов синтеза сероводорода на секрецию медиатора/ ЕВ Герасимова, О В Яковлева //XI Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине» - Казань -2007-С 287-288
15 Герасимова ЕВ Роль цАМФ и цГМФ в эффектах сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки/ Е В Герасимова, Г Ф Ситдикова, А Л Зефиров //Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» -Пущино-2007 -С 114-116
16 Герасимова ЕВ. Исследование блокаторов синтеза сероводорода на секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки/ Е В Герасимова, Г Ф Ситдикова, А Л Зефиров // Неврологический вестник - Казань - 2007 -Т XXXIX - выпуск 1 -С 83-84
17 Герасимова ЕВ Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки/ Е В Герасимова, Г Ф Ситдикова, А Л Зефиров // Нейрохимия - 2008 - Т. 25, №1-2-С 138-145
Отпечатано в ООО «Печатный дворя г. Казань, ул. Журналистов, 1/16, оф 207
Тел 272-74-59, 541-76-41, 541-76-51 Лицензия ПД№7-0215 от 0111 2001 г Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ Подписано в печать 12 03 2008г. Уел п.л 1,0 Заказ № К-6510 Тираж 100 экз Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Печать - ризография.
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Герасимова, Елена Вячеславовна
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ
1 ВВЕДЕНИЕ
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Особенности газообразных посредники как регуляторов физиологических функций
2.2 Сероводород, структура, физико-химические свойства
2.3 Синтез сероводорода
2.3.1 Метаболизм серосодержащих аминокислот
2.3.2 Молекулярная биология цистатионин р-синтазы и цистатионин у-лиазы
2.3.3 Ферментативный синтез сероводорода
2.3.4 Неферментативный синтез сероводорода
2.3.5 Катаболизм сероводорода
2.4 Токсичные эффекты сероводорода
2.5 Физиологическая роль сероводорода и мишени его действия
2.5.1 Эффекты сероводорода в нервной системе
2.5.2 Сероводород в гладкой мышце
2.6 Взаимодействие газообразных посредников - сероводорода, оксида азота (И) и монооксида углерода
2.7 Механизмы регуляции освобождения медиатора из двигательного нервного окончания
2.7.1 Электрогенез нервного окончания и освобождение медиатора
2.7.2 Временной ход секреции медиатора
2.7.3 Роль циклических нуклеотидов в регуляции секреции медиатора
2.7.4 Роль рианодиновых рецепторов внутриклеточных Са2+ - депо в регуляции секреции медиатора
3 ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Объект исследования
3.2 Растворы и фармакологические вещества
3.3 Электро физиологический метод
3.4 Проведение обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции
4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1 Влияние газообразного сероводорода и, гидросульфида натрия на вызванную секрецию медиатора и электрогенез двигательного нервного окончания лягушки в условиях низкого содержания ионов кальция в растворе
4.2 Влияние гидросульфида натрия на кальций- активируемые калиевые токи нервного окончания
4.3 Влияния газообразного сероводорода и его донора -гидросульфида натрия на кинетику секреции медиатора
4.4 Влияние гидросульфида натрия на развитие облегчения и динамику выходящих К+-токов при ритмической стимуляции
4.5 Влияние гидросульфида натрия на спонтанные и вызванные постсинаптические сигналы при нормальной концентрации о 1 ионов Са в растворе
4.6 Исследование роли аденилатциклазной системы в эффектах сероводорода на секрецию медиатора
4.7 Исследование роли гуанилатциклазной системы в эффектах сероводорода на секрецию медиатора и ионные токи нервного-окончания
4.8 Исследование роли рианодиновых рецепторов внутриклеточных Са -депо в эффектах сероводорода на секрецию медиатора
4.9 Влияние субстрата и блокаторов синтеза сероводорода на секрецию медиатора в двигательном нервном окончании лягушки
4.10 Влияние гидросульфида натрия на спонтанную и вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши
4.11 Влияние блокаторов синтеза сероводорода на секрецию медиатора из двигательного нервного окончания мыши
4.12 Выявление ферментов, генерирующих сероводород, в скелетной мышце мыши методом обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакцией
5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
5.1 Пресинаптическое влияние сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши
5.2 Эффекты сероводорода на секрецию медиатора и пресинаптический ответ нервного окончания в процессе ритмической активности синапса
5.3 Влияние сероводорода на кинетику секреции медиатора
5.4 Роль циклических нуклеотидов'в реализации эффектов сероводорода на нервно-мышечную передачу
5.5 Роль внутриклеточных Са +-депо в реализации эффектов сероводорода на нервно-мышечную передачу
5.6 Возможность эндогенного синтеза сероводорода в области нервно-мышечного синапса лягушки и мыши
Выводы
Введение Диссертация по биологии, на тему "Сероводород как эндогенный модулятор освобождения медиатора в нервно-мышечном синапсе"
Исследование механизмов регуляции синаптической передачи является одним из актуальных направлений в нейрофизиологии: В конце прошлого века был открыт новый класс биологически активных веществ -газообразных посредников, осуществляющих как межклеточную, так и внутриклеточную регуляцию различных физиологических функций. В. настоящее время к этому классу относят оксид азота, монооксид углерода и сероводород [23, 52, 166, 283]. Оказалось, что физиологическое значение газов не ограничивается регуляцией функций- желудочно-кишечного тракта и сосудистой системы, где оно было определено первоначально, но также распространяется на центральную и периферическую нервную систему [26, 110, 165, 249, 280]:
Сероводород - газ, обладающий хорошо известными, токсическими эффектами, связанными- с нарушением окислительного фосфорилирования в клетке [230]. В- тканях млекопитающих были обнаружены высокие концентрации сероводорода: в плазме крови крыс 46 мкМ, а в.тканях мозга 50-100 мкМ [33, 86, 232, 287], что предположило возможную физиологическую роль этого газа. Также как оксид азота и монооксид углерода сероводород участвует в расслаблении гладкой мускулатуры [32, 85, 231, 286], физиологические концентрации этого газа усиливают активность 1Ч-метил-В-аспартат-рецепторов и облегчают индукцию долговременной потенциации в гиппокампе [28]. Показано, что сероводород приводит к. увеличению внутриклеточного кальция в астроцитах и вызывает кальциевые волны, опосредуя взаимодействие между нейронами и глией [176, 202]. Известными мишенями Н28 являются аденилатциклаза [121, 146] и АТФ-зависимые К+-каналы [255, 235, 263, 283]. При некоторых нейродегенеративных процессах и сердечно-сосудистых заболеваниях наблюдаются изменения уровня сероводорода в тканях [171, 173, 197, 198].
Эндогенно сероводород синтезируется из Ь-цистеина пиридоксаль-5'-фосфат-зависимыми ферментами - цистатионин р-синтазой и цистатионин у-лиазой, экспрессирующимися практически во всех тканях [96, 98]. Показано, что эндогенный синтез сероводорода в нервной системе вызывается кратковременной активацией цистатионин р-синтазы вследствие нейронального возбуждения и входа' кальция [96], что предполагает нейромедиаторную роль сероводорода, как и других газов. Исследования эффектов экзогенного и эндогенного сероводорода на секрецию медиатора и выявление внутриклеточных механизмов его влияния на функцию нервно-мышечного синапса позволит определить основные мишени действия сероводорода при модуляции синаптических функций.
1.2 Цель и задачи исследования
Целью данного исследования являлось определение механизмов, лежащих в основе действия сероводорода на секрецию медиатора, и выявление возможности его эндогенного синтеза в области нервно-мышечного синапса теплокровных и холоднокровных животных.
В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:
1. Изучить эффекты газообразного сероводорода и его донора гидросульфида натрия на секрецию медиатора и ионные токи двигательного нервного окончания лягушки.
2. Исследовать эффекты сероводорода на спонтанную и вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе мыши.
3. Проанализировать роль системы гуанилатциклазы/цГМФ и аденилатциклазы/цАМФ в эффектах сероводорода.
4. Выявить роль рианодиновых рецепторов внутриклеточных кальциевых депо в эффектах сероводорода.
5. Исследовать возможность эндогенного синтеза сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши с использованием блокаторов цистатионин (3-синтазы и цистатионин у—л и азы.
6. Определить экспрессию генов ферментов синтеза сероводорода в диафрагмальной мышце мыши методом обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции.
1.3 Научная новизна
В работе впервые показано, что сероводород является пресинаптическим модулятором передачи возбуждения в нервно-мышечных соединениях холоднокровных и теплокровных животных. Установлено, что сероводород увеличивает вызванное и спонтанное освобождение медиатора, не изменяя электрогенез двигательного нервного окончания. Впервые выявлено, что блокирование ферментов синтеза сероводорода приводит к эффектам, противоположным действию газа, что говорит о его эндогенном синтезе в области нервно-мышечного синапса как холоднокровных, так и теплокровных животных. Определена экспрессия мРНК цистатионин р-синтазы и цистатионин у-лиазы - ферментов синтеза сероводорода в диафрагме мыши. Впервые исследованы внутриклеточные механизмы действия сероводорода на секрецию медиатора в двигательном нервном окончании лягушки. Показано, что в основе эффектов сероводорода на секрецию медиатора лежит увеличение внутриклеточной концентрации Са2+ за счет • активации рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума.
1.4 Положения, выносимые на защиту
1. Экзогенный сероводород усиливает спонтанную и вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе без изменения кинетики ионных токов двигательного нервного окончания.
2. Пресинаптические эффекты сероводорода в нервно-мышечном синапсе лягушки опосредуются увеличением внутриклеточного уровня кальция за счет активации рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума.
3. Сероводород эндогенно синтезируется в области нервно-мышечного синапса лягушки и мыши.
1.5 Научно-практическая ценность
Полученные в работе данные расширяют представления о возможности модуляции синаптической передачи эндогенными физиологически активными соединениями. Это, в частности, касается вопросов о влиянии газообразных посредников, имеющих уникальные свойства, отличающих их от классических медиаторов, на функционирование нервной системы. Впервые показана роль нового газообразного посредника - сероводорода в * модуляции секреции медиатора в нервно-мышечном синапсе как холоднокровных, так и теплокровных животных. Научную ценность представляют данные об участии рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума в эффектах сероводорода. Поскольку основные закономерности функционирования нервно-мышечного синапса идентичны процессам, происходящим в синапсах центральной нервной 4 системы, результаты работы полезны для объяснения механизмов регуляции процессов секреции нейромедиаторов и гормонов эндогенными газообразными посредниками в секреторных, нейросекреторных клетках и нейронах. Полученные данные имеют не только фундаментальное значение, но и могут быть использованы при разработке средств фармакологической коррекции нарушений нервно-мышечной передачи. Результаты исследования представляют практическую ценность для физиологов, биофизиков, биохимиков, фармакологов и нейрохимиков. Полученные данные используются при чтении лекций на кафедре физиологии человека и животных Казанского государственного университета. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ (06-04-49125); «Ведущая научная школа» (НШ-4520.2006.4, гос. контракт № 02.445.11.7351); АН РТ (03.3.8343/2005-2006); АН РТ для молодых ученых (14-7/2005).
1.6 Апробация работы
Основные результаты диссертационной работы доложены на следующих конференциях и форумах: Всероссийском научном симпозиуме «Растущий организм: адаптация к физической и умственной нагрузке» (Казань, 2006), конференции молодых ученых "Биология - наука 21-го века" (Пущино, 2005), Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2005, 2007), XX Съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Москва 2007), IX Всероссийской школе молодых учёных «Актуальные проблемы нейробиологии» (Казань, 2005), Международном симпозиуме «Biological motility» (Пущино, 2006), XIII международном совещании и VI школе по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006), I Съезде физиологов СНГ (Дагомыс, 2005), Международной школе-конференции «Простые нервные системы» (Казань, 2006), Всероссийской конференции «Нейрохимия: Фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), ежегодных научных конференциях в Казанском государственном университете и Казанском медицинском государственном университете.
11 \
1.7 Реализация результатов исследования
По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ, в том числе 3 публикаций в рецензируемых журналах (из списка ВАК). Материалы диссертации неоднократно доложены на ежегодных научных конференциях в Казанском государственном университете.
1.8 Структура и объем диссертации
Диссертация объемом 133 страницы состоит из введения, обзора литературы, описания методики исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы. Список цитируемой литературы включает 311 источников, из них 27 - отечественных и 284 -иностранных авторов. Диссертация содержит 22 рисунка и 2 таблицы.
Заключение Диссертация по теме "Физиология", Герасимова, Елена Вячеславовна
ВЫВОДЫ
1. Газообразный сероводород (Н28) и его донор — №Н8 вызывают дозозависнмое (10-500 мкМ) и обратимое увеличение амплитуды и квантового состава токов концевой пластинки, не изменяя электрогенез и синхронность выброса медиатора* из двигательного нервного окончания лягушки. В диафрагмальном нервно-мышечном препарате мыши №Н8 (100 мкМ) увеличивает амплитуду потенциалов концевой пластинки.
2. В нервно-мышечном синапсе лягушки и мыши КаНЗ увеличивает частоту миниатюрных потенциалов концевой пластинки, не изменяя их амплитудно-временных параметров.
3. В условиях ритмической стимуляции двигательного нерва лягушки (10 и 50 имп/с) при низкой внеклеточной концентрации ионов кальция КаН5 приводит к уменьшению выраженности облегчения амплитуды ТКП, что связано с более высоким исходным уровнем освобождения медиатора.
4. Увеличение внутриклеточной концентрации цГМФ с помощью мембранопроникающего аналога рСРТ-сОМР (100 мкМ) и ингибирование гуанилатциклазы с помощью СЮС) (0.1 мкМ) не предотвращает эффекта №Н8 на вызванную секрецию медиатора в нервно-мышечном синапсе лягушки.
5. Ингибирование аденилатциклазы с помощью МЕ)Ь-12330А (0.8 мкМ) не изменяет эффектов №Н8. В условиях увеличения внутриклеточной концентрации цАМФ с помощью мембранопроникающего аналога рСРТ-сАМР (100 мкМ) №Н8 приводит к менее выраженному усилению секреции медиатора, чем в контроле.
6. Активация (кофеин, 3 мМ) или ингибирование (дантролен, 50 мкМ) рианодиновых рецепторов эндоплазматического ретикулума в двигательных нервных окончаниях лягушки предотвращает увеличение к вызванного освобождения медиатора при действии ЫаЖ, что указывает на участие рианодиновых рецепторов в эффектах сероводорода.
7. (3-цианоаланин (1 мМ) — блокатор цистатионин у-лиазы и аминооксиацетиловая кислота (1 мМ) - блокатор цистатионин (3-синтазы оказывают эффекты противоположные действию Н28 на секрецию медиатора из двигательных нервных окончаний лягушки и мыши.
8. Выявлена экспрессия мРНК цистатионин [3-синтазы и цистатионин у—лиазы в диафрагмальной мышце мыши с помощью метода обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Герасимова, Елена Вячеславовна, Казань
1. Ашмарин, И.П. Нейрохимия/ И.П. Ашмарин, П.В. Стукалова. -М.:Изд. Института биомедицинской химии РАМН, 1996. 470 с.
2. Балезина, О.П. Спонтанная активность нервно-мышечных синапсов мыши на фоне действия дантролена / О.П. Балезина, А.Н. Букия // Нейрофизиология. 2001. - Т. 33, № 2. - С.90-97.
3. Балезина, О. П. Роль внутриклеточных кальциевых каналов нервных терминалей в различиях секреции медиатора / О. П. Балезина // Успехи физиол. наук. 2002. - Т. 33, № 3. - С. 38-56.
4. Вислобокова, А.И. Кальциевые каналы клеточных мембран / А.И. Вислобокова, А.Т. Копылов, В.Т. Бовтюшко //Успехифизиол. наук. -1995.-Т. 26, № 1.-С. 93-110.
5. Зефиров, А. Л. Ионные каналы нервного окончания/ А. Л. Зефиров, Г. Ф. Ситдикова //Успехи физиологических наук. 2002. — Т. 33, №4.-С. 3-33.
6. Зефиров, А.Л. Действие экзогенного ацетилхолина на калиевые токи двигательного нервного окончания лягушки / А.Л.Зефиров, Д.М.Шакиръянова // Нейрофизиология. 1992. - Т. 24, № 6. - С. 678-683.
7. Зефиров, АЛ. Ионные токи нервного окончания лягушки / А.Ж Зефиров, H.A. Халилов //Нейрофизиология. 1985. -Т.' 17, №6. - С. 771-779.
8. Зефиров, А.Л. Исследование; кинетики ионных токов нервного окончания с неоднородным распределением плотности ионных каналов/ А.Л. Зефиров, Б.Ш. Гафуров // Биофизика. -1996. Т. 41, № 2. - С. 384-392.
9. Зефиров;„A.JI. Кальциевые и кальций;активируемые калиевые токи в двигательной' нервной« терминали лягушки/ А.Л.Зефиров, H.A., Халилов; Х.С. Хамитов // Нейрофизиология. 1987. - Т. 19, №4. - С. 525-532;
10. Зефиров, A.JI. Механизмы кратковременных форм синаптической пластичности: / А.Л. Зефиров, М.А. Мухамедьяров // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. -2004; Т. 90, № 8. - С. 10411059.
11. Казанский, В.В. Методика» изготовления? «самозаполняющихся» мшфоэлектродов 7 В.В. Казанский // Физиол. журнал СССР; 1973V - Т. 59. № 6. - С. 695-696.
12. Карякин, Ю.В. Чистые химические вещества/ Ю.В. Карякин, И.И.Ангелов. М.: Химия, 1974. - 408 с.
13. Козловский;, B.JI. Регуляция; кальциевого гомеостаза в нервных клетках // В;Л: Козловский / Успехифизйош наук. 1995. - Т. 26, № 31 - С. 1424.
14. Костюк, П.Г. Ионы; кальция; как-; вторичные посредники: в • нервной клетке / Ü.F. Костюк // Журн. эволюц. Биохимии и физиологии. 1992. - Т. 28, №' 2. - С. 150-155. . . . '.'. .
15. Костюк, П.Г. Микроэлектродная техника/ П.Г. Костюк. Киев: Наукова думка, 1960. — 175 с.1.• .
16. Крутецкая, З.И. Механизмы внутриклеточной сигнализации: монография/ 3;И; крутецкая; O.E. Лебедев, Л.С. Курилова. СПб.: С.Петерб: Ун-та, 2003. - 2008 с.
17. Михайленко Я.И. Курс общей и неорганической химии/ Я:И. Михайленко. М.: Высшая школа, 1966. - 565 с.
18. Петров, A.M. Роль сигнальных каскадов цАМФ в круговороте синаптических везикул в двигательном, нервном окончании- лягушки/ A.M. Петров, А.Р: Гиниатуллина, А.Л: Зёфиров//Нейрохимия. — 2008:(в*печати)
19. Реутов, В.Г1. Циклические' • превращения NO в организме млекопитающих/В.П. Реутов-E.F; Сорокина, В.Е.Охотин,Н.С. Косицин. -М.: Наука, 1998.-159 с.
20. Рубцов, A.M. Кальциевые каналы (рианодиновые рецепторы)саркоплазматического ретикулума: структура и свойства/ A.M. Рубцов, М.А.
21. Батрукова//Биохимия. 1997. - Т. 62, № 9.- С. 1091-1105.■ ■ ,
22. Ситдикова, Г.Ф. Газообразные посредники' в нервной; системе /
23. Г.Ф; Ситдикова, А.Л: Зефиррв // Рос. Физиол. Журнал. 2006; - Т. 92, № 7. -С.872-882.
24. Теппермен, Дж.,, Теппермен X. Физиология обмена? веществ и; эндокринной* системы. М:: Мир. 1989! - С. 656.25: Циклические нуклеогиды и рефляция клеточного метаболизма/ Я.Х. Туракуловси-др.;- Ташкент: Фащ 1983:.-240, с.
25. Яковлев, А. В. Внутриклеточные, пресинаптические механизмы эффектов оксида азота (II) в нервно-мышечном соединении-лягушки/ А. В. Яковлев, F. Ф. Ситдикова, А. Л. Зефиров//Нейрохимияю 2005: - Т. 22, №1. -С. 81-87.
26. Яковлев, А.В. Роль циклических нуклеотидов в реализации; эффектов оксида азота (II) на секр'ецию медиатора и электрогенез двигательного .нервногоs окончания / А.В. Яковлев, Г.Ф: Ситдикова; А. Л.Зефиров // ДАН. 2002. - Т. 382, № 2. - С. 1-4.
27. АЬе, К. The possible- role of hydrogen sulfide as am endogenous, neuromodulator/ K. Abe, H:Kimura // J. Neurosci;- 1996. Vol:16V - P 1066-1071.
28. Aitken, S.M. The enzymology of cystathionine biosynthesis: strategies for the control of substrate and reaction specificity/ S.M.Aitken, J.F. Kirsch. //. Arch: Biochem. Biophys. 2005. - Vol.433. - P. 166-175.
29. Regulation of vascular nitric oxide in vitro and in vivo; a new role for endogenous hydrogen sulphide?/ M;Y Ali et al.// Br. J. Pharmac. 2006: - Vol. 149.-P. 625-634/ .
30. Alturi;, P.P. Delayed release of neurotransmitter from cerebellar granule cells / P.P. Alturi, W.G. Regehr //J. Neurosci. 1998.- Vol.18. -P. 8214-8227.
31. Andreopoulos, S. Molecular aspects of soluble guanylyl cyclase regulation / S. Andreopoulos, A. Papapertropouios // General Pharmacology. — 2000. Vol. 34. - P. 147-157.
32. Angaut, Petit D. Electrical activity of mouse motor endings during muscle reinnervation/ Petit D. Angaut, A.Mall art // Neuroscience. 1985. - Vol. 16.-P. 1047-1056.
33. Angaut, Petit D. Membrane;currents in lizard motor nerve terminals and nodes of Ranvier/Petit D. Angaut, E. Benoit, A.Mallart//Pflugers Arch. 1989. -Vol; 415i- P: 81-87. , .:,/ . . .
34. Augustine, G.J. The calcium- signal for transmitter, secretions from presynaptic nerve terminals / G.J. Augustine, E.M. Adler, M.P. Charlton // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1991. - Vol. 635. - P. 365-81.
35. Changes in- cystathionine -y-lyase levels in? rat: liver, during lactation/ S. Awata K. et al. // Biochem. Mol. Biol Int. 1993. - Vol. 31. - P. 185-191. '
36. Bablito, J. Activation of the voltage-sensitive sodium channel by a beta-scorpion toxin in rat brain nerve-ending particles / J. Bablito, E. Jover , F. Couraud //J. Neurochem. 1986. - Vol. 46. - P. 1763-1770.
37. Barrett, E.F. The kinetics of transmitter release at the frog neuromuscular junction / E.F. Barrett, C.F. Stevens / J. Physiol. 1072. - Vol. 227. -P. 691-708.
38. T. Bartholomew, T.C. Oxidation of sodium sulphide by rat liver, lungs and kidney/ T.C. Bartholomew, G.M. Powell, K.S. Dodgson, C.G. Curtis // Biochem. Pharmacol. 1980. -Vol. 29, № 18. -P.2431-2437.
39. Bartschat, D.K.Calcium-activated potassium channels in isolated presynaptic nerve terminals from rat brain / D.K. Bartschat, M.P. Blaustein // J. Physiol. (Lond.). 1985. - Vol. 361. - P. 441-457.
40. Beauchamp, R. O. A critical review of the literature on hydrogen sulfide toxicity/ R. O. Beauchamp, J. S. Bus, J. Popp// CRC. Crit. Rev. Toxicol. -1984.-Vol. 13*.-P. 25-97.
41. Belardinelli, M.C. Urinary sulfur 'compounds in Down syndrome/ M.C. Belardinelli, A. Chabli, B. Chadefaux-Vekemans, P. Kamoun//Clin. Chem. 2001. -Vol.47.-P.1500-1501.
42. Hydrogen sulfide mediates the vasoactivity of garlic/ G.A. Benavides et al.// Proceed. Nat. Academ. Sci. Unit. St. Am. 2007. - Vol. 104. - P. 1797717982.
43. Berridge, M.J. Inositol triphosphate: a' novel second) messenger in cellular signal transduction^/ M.JI Berridge, R.F. Irvine // Nature. 1984. - Vol. 312.-P. 315-321.
44. Identification of a ryanodine receptor in rat heart' mitochondria5 / G. Beutner et al. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276, № 24. - P. 21482-21488.
45. Bielefeldt, K. A calcium-activated potassium channel causes frequencey-dependent action-potential failures in a mammalian nerve terminal / K. Bielefeldt, M.B. Jackson // J. Neurophysiol. 1993. Vol. 70. P. 284-298.
46. Bielefeldt, K. Phosphorylation and dephosphorylation modulate a Ca2+-activated K+ channel-in rat peptidergic nerve terminals/ K. Bielefeldt, M.B. Jackson // J. Physiol. (Lond.). 1994. - Vol. 475. - P. 241-254.
47. Bielefeldt, K. Three potassium channels in rat posterior pituitary nerve terminals / K. Bielefeldt, J.L.Rotter, M.B. Jackson- //J. Physiol. (Lond.). 1992. -Vol. 458.-P. 41-67.
48. Blondel, O. Inositol 1,-4,-5-triphosphate receptors, secretory granules and secretion in endocrine and neuroendocrine cells / O. Blondel, G.I. Bell, S. Seino//TINS. 1995.-Vol. 18.-P. 157-161.
49. Boehning, D. Novel neural modulators/ D. Boehning, S.H. Snyder // Snyder. Annu. Rev. Neurosci. 2003. - Vol. 26. - P. 105-131.
50. Bondarenko, V.E. A model of graded calcium release and L-type Ca2+ channel inactivation in' cardiac muscle/ V.E. Bondarenko, G.C. Bett, R.L. Rasmusson // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2004. - Vol. 286, №3. - P. H1154-H1169.
51. Borst, J.G.G. Calcium current during a single action potential in a large presynaptic terminal of the rat brainstem / J.G.G. Borst, B. Sakmann // J. Physiol. — 1998. -Vol. 506. -P.143-157.
52. Borst, J.G.G. Pre- and postsynaptic whole-cell recordings in the medial nucleus of the trapezoid body of the rat / J.G.G. Borst, F. Helmchen, B. Sakmann // J. Physiol. 1995. - Vol. 489. - P. 825-840.
53. Bouron, A. Modulation of spontaneous quantal release of neurotransmitters in-the hippocampus / A. Bouron // Progress in Neurobiology. — 2001.-Vol. 63.-P. 613-635.
54. Brain, K.L. Calcium in sympathetic varicosities of mouse vas deferens during facilitation, augmentation and autoinhibition/ K.L. 'Brain, M.R". Bennet //J. Physiol. 1997. -Vol. 502, №.3.- P.521-536.
55. Branisteanu, DID. Cyclic GMP and protein kinase G inhibit the quantal transmitter release induced by protein kinase / D.D. Branisteanu,. L.M.Popescu, D.D. Branisteanu, I.D. Haulica // C. Molecular Brain Research. 1988: - Vol. 4. -P. 263-266. '
56. Specificity and some other properties of liver serine sulphhydrase: evidence for its identity with'cystathionine-P-synthase/ A.E. Braunstein et al. // Biochim. Biophys. Ada.- 1971.- Vol. 242.- P.247-260.
57. Interaction1 of nitric oxide synthase with the postsynaptic density protein PSD-95/ J.E. Brenman et al.// Cell. 1996. - Vol. 84. - P. 757-767.
58. Bukharaeva E.A. Noradrenaline synchronizes evoked quantal release at frog neuromuscular junction/ E.A. Bukharaeva, E.E. Nikolsky, K.Kh. Kim// J. Physiology (London); 1999.- 517, №3:- P. 879-888.
59. Bukharaeva E.A. Modulation of the time course of evoked quantum release in the nerve-muscle junction/ E.A. Bukharaeva, E.E. Nikolsky, F.Vyskocil // Neurophysiology.- 2000.- Vol.32, №3.-P. 244-246.
60. Cerne, R. Enhancement of the N-methyl-D-aspartate response in spinal, dorsal horn neurons by cAMP-dependent protein kinase/ R. Cerne, K.L Rusin, M: Randic //Neurosci. Lett. 1993. - Vol. 161, № 2. - P. 124-128
61. Human cystathionine p-synthase: gene organization and expression of different 5' alternative splicing/ J.F. Chasse et al. // Mamm. Genome. 1997.1. Vol. 8.-P. 917- 921.
62. Chaudhari, K. Role of sex and eNOS in cystathionine—lyase expression in mouse heart, brain and skeletal muscle/ K. Chaudhari, N. H. Wisniewski, S. E. Bearden// FASEB J. 2007. - Vol. 21. - P.577.b
63. Chen, C. The mechanism of cAMP-mediated enhancement at a cerebellar synapse/ C. Chen, W.G. Regehr // J. Neurosci. 1997. - Vol. 17. № 22. - P. 86878694.
64. Chen, P. Homocysteine metabolism in cardiovascular cells and tissues: implications for hyperhomocysteinemia and cardiovascular disease/ P.Chen, R. Poddar, E.V. Tipa //Adv Enzyme Regul. 1999. - Vol. 39. - P. 93-109.
65. Chen, X. Production of the neuro-modulator HS by cystathionine 3-synthase via the condensation of cysteine and homocysteine/ X. Chen, K.H. Jhee, W.D. Kruger// J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. - P. 52082-52086.
66. Hydrogen sulfide-induced relaxation of resistance mesentericartery beds of rats/ Y. Cheng et al.// Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2004. - Vol. 287. - P. H2316-H23 23.
67. Cheung, U.S. Drosophila larva neuromuscular junction's responses to reduction of cAMP in the nervous system/ U.S.Cheung, A.J. Shayan, H.L. Atwood //J. Neurobiol. 1999. - V. 40. № l.-P. 1-13.
68. Phosphorylation of Snapin by PKA modulates its interaction with the SNARE complex/ M.G. Chheda et al.,.//Nat. Cell Biol. 2001. - Vol. 3, № 4. -P. 331-338.'
69. Cohen, I.S. Facilitation and delayed release at single frog neuromuscular junctions / I.S. Cohen, W. Van der Kloot // J. Neurosci. 1986. -V. 6. -P. 2366-2370.
70. Coldberg, A.L. Evidence for the role cyclic AMP in neuromuscular transmission / A.L. Coldberg, J.J.Singer // Proc. Natl. Acad. Sci. 1969. - Vol. 64. -P. 131-141.
71. Synapses/ W.M. Cowan et al.; ed. W.M. Cowan. London: The John Hopkins University Press, 2000. - 767 p.
72. Evidence that hydrogen sulphide can modulate hypothalamo- pituitary-adrenal axis function: in vitro and in vivo studies in the rat/ C. Dello Russo et al.// J. Neuroendocrinol. 2000. - Vol. 12. - P. 225-233.
73. Denninger, J.W. Guanylate cyclase and the NO/cGMP signaling pathway / J;W. Denninger, M.A.Marletta // Biochimica et Biophysica Acta. 1999. - Vol. 1411.-P. 334-350. ' .
74. Distrutti, E. Evidence that hydrogen sulfide exerts antinociceptive effects in thegastrointestinal tract by activating KATP channels/ E. Distrutti, L. Sediari, A. Mencarelli// J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006. Vol. 316. — P.325-335.
75. Polarographic measurement of hydrogen sulfide production and consumption by mammalian tissues/ J.E. Doeller et al.// Anal. Biochem. 2005.- Vol. 341, №1.-P. 40-51. .
76. Dombkowski, R.A. Hydrogen sulfide as an endogenous: regulator of vascular smooth muscle tone in trout/ R.A. Dombkowski, M.J. Russell, K.R. Olson// Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2004. - Vol. 286. - P. R678-R685.
77. Vertebrate phylogeny of hydrogen sulfide vasoactivity/ R.A. Dombkowski et al.//Am. J. Physiol. Regul. Integ.r Comp. Physiol. -2005. Vol. 288. - P. R243-R252.1.l
78. Domek-Lopacinska, K. Cyclic GMP metabolism and its role in brain physiology / K. Domek-Lopacinska, J.B. Strosznajader // J. Physiologe and Pharmacology-2005. Vol. 56, № 2. - P. 15-34.
79. Dreyer, F. The actions of presynaptic snake toxins' on- membrane currents of mouse motor nerve terminals/ F. Dreyer, B. Penner // J: Physiol: (Londi).- 1987.-P. 455-463.
80. Droge, W. Modulation«of lymphocyte functions and!immune responses by cysteine and cysteine,derivatives/ W. Droge, H.P. Eck, H. Gmiinder, S. Mihm //Am. J. Med. 1991. - Vol. 30, №91. - P. 140S-144S.
81. Duman, J.G. What is the role of SNARE proteins in membrane fusion? / J.G. Duman, J.G. Forte// Am. J: Physiol. Cell Physiol: 2003. - Vol. 285. - P. C237-C249
82. Ehrlich, B. The pharmacology of intracellular Ca 2+ -release channels/ B. Ehrlich, E. Kaftan, S. Besprozvannaja, I. Besprozvanniy // TIPS. 1994'. - Vol. 15.-P. 145-149:
83. Eto, K. A novel enhancing mechanism' for hydrogen- sulfide-producing activity of cystathionine p-synthase/ K. Eto, H: Kimura'// .J-Biol. Chem. 2002. -Vol: 277. -P.42680-12685.
84. Eto, K. Brainhydrogen sulfide is severely decreased in Alzheimer's disease/ K. Eto,- T. Asada, K. Arima et al.// Biochem. Biophys. Res. Commun. -2002,-Vol. 293.-P. 1485-1488.
85. Hydrogen sulfide is produced in response to neuronal excitation/ K. Eto et al.// J. Neurosci.- 2002. Vol. 22. - P. 3386-3391.
86. Eto, K. The production of hydrogen sulfide is regulated by testosterone and S-adenosyl-L-methionine in mouse brain / K. Eto, H: Kimura //J; Neurochem. -2002.-Vol. 83-P. 80-86.
87. Evans, G.J. Phosphorylation-dependent interaction of synaptic vesicle proteins cysteine string protein and synaptotagmin/ G.J. Evans, A. Morgan// Biochem. J. 2002. - Vol. 364. - P. 343-347.
88. Finkelstein, J.D. Activation' of cystathionine synthase by adenosylmethionine and adenosylethionirie/ J.D. Finkelstein,. W.E. Kyle, J.L. Martin, A.M. Pick// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975. - Vol.66. - P.81-87.
89. Fiorucci, S. The emerging roles of hydrogen sulfide- in the gastrointestinal tract and liver/ S. Fiorucci, E. Distrutti, G. Cirino, J.ErWallace // Gastroenterology. 2006. - Vol: 131. - P. 259-271.
90. Flink, M.T. Ca2+ channels as targets of neurological disease: Lambert-Eaton Syndrome and other Ca2+ channelopathies/ M.T. Flink, W.D. Atchison //J. Bioenerg. Biomembr. 2003. - Vol. 35, № 6. - P. 697-718.
91. Forsythe, I.D. Direct patch recording from identified presynaptic terminals mediating glutamatergic EPSCs in the rat CNS, in vitro / I.D. Forsythe //JJPhysiol. (Lond.). 1994. - Vol. 479: - P. 381-387.
92. Fossier, F. Calcium transients and neurotransmitter release at an identified synapse/ F. Fossier, L. Tauc, G. Baux // TINS. 1999. - Vol. 22. - P. 161-166.
93. Oxidation of hydrogen sulfide and methanethiol to thiosulfate by rat tissues: a specialized function of the colonic mucosa/ J! Furne et al. //Biochem. Pharmacol.-2001.- Vol. 62.-P. 255-259.
94. Garcia-Bereguiain, M.A. Hydrogen sulfide raises cytosolic calcium in neurons through activation of L-type Ca channels/ M.A. Garcia-Bereguiain,
95. AiK. Samhan-Arias, F.J. Martin-Romero, C. Gutierrez-Merino// Antiox. Redox Signal. 2008. - Vol. 10.-P. 31-41.
96. Gerasimova, E.V. Hydrogen Sulfide as an Endogenous Modulator of Mediator Release in: the? Frog Neuromuscular Synapse/ E.V. Gerasimova, G.F. Sitdikova, A.L. Zefirov// Neurochemical J. 2008/ - Vol. 2, № 1-2. -P. 120-126.
97. Goda, Y. Two components of transmitter release at a central- synapse / Y. Goda, C.F. Stevens // Proc Natl Acad Sci U S A. 1994:-Vol. 91.-P. 1294212946.
98. Goldberg, A.L. Evidece for the role of cyclic AMP1 in neuromuscular transmission / A.L. Goldberg, J.J. Singer // PNAS USA. 1969. - Vol. 64. - P. 131-141.
99. Determination of sulfide in brain tissue by gas dialysis/ion chromatography: postmortem studies and two case reports/ L.R. Goodwin et al. // J. Anal. Toxicol. 1989. - Vol. 13. -P. 105-109.
100. Hain, R.D. Respiratory symptoms in children dying from malignant disease/ R.D. Hain, N. Patel, S. Crabtree, R.Pihkerton://Palliat: Med: 1995. -Vol.9, №3. - P.201-206.
101. Adenylyl cyclase: structure, regulation and function in am enzyme superfamily/ J. Hanoune et al. // Molecular and Gellur Endocrinology. 1997. -Vol. 128.-P.179-194.
102. Henzi, V. Characteristi9s and function of Ca2+ and inositol 1,4,5-triphosphate-releasable stores of Ca2+ in neurons / V.Henzi, A.B. MacDermott // Neurosci. 1992. - Vol. 46. - P. 251-274.
103. Hepp, R Differential phosphorylation of SNAP-25 in vivo by protein kinase C and protein kinase Al R. Hepp, J.P. Cabaniols, P.A. Roche// FEBS Lett. -2002.-Vol. 532.-P. 52-56.
104. Properties of the ryanodine-sensitive release channels that underlie caffeine-induced Ca2+ mobilization from intracellular stores in mammalian sympathetic neurons / A. Hernandez-Cruz et al.// Eur. J. Neurosci. 1995. - Vol. 7.-P. 1684-1699.
105. Hidalgo, C. Redox regulation of RyR-mediated Ca2+ release in muscle and neurons/ C. Hidalgo, R. Bull, M.I«. Behrens, P. Donoso// Biol. Res. 2004. -Vol. 37, № 45. — P.39-52.
106. Hodgkin, A.L.The effect of sodium ions on the electical activity of the giant axons of the squid / A.L. Hodgkin, B. Katz. //J. Physiol. (Lond.). 1949. -Voli 108. - P. 37-77.r
107. Hong, S.J. Physiological and regenerative acetylcholine release from motor nerve-deifferential inhibitions by vesamicol and omega-agatoxin IVAl S J. Hong, S.H: Lee, C.C. Chang //Neuroscience.' 1995. - Vol. 67. - P. 169-175. ' •
108. Hosoki, R, The possible role of hydrogen sulfide as an endogenous smooth muscle relaxant in synergy with nitric oxide/ R. Hosoki, N. Matsuki, H: Kimura //Biochem Biophys Res Commun. 1997. - Vol. 237. - P. 527-531.
109. Hudson, T.Y. Nitric oxide regulates adenylyl cyclase activity in rat striatal membranes/ T.Y. Hudson , J.A. Corbett , A.C. Howlett , C Klein //J. Neurochem. 2001. - Vol. 77, № 5. -P.1279-1284.
110. Hudspeth, A J. Kinetic analysis of voltage- and ion-dependent conductances in saccular hair cells of the bull-frog, Rana catesbeiana // A.J. Hudspeth, R.S. Lewis / J. Physiol. 1988. - Vol. 400. - P. 237-274.
111. Huganir, R.L. Protein phosphorylation of nicotinic acetylcholine receptors / R.L. Huganir, K. Miles // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1989. - Vol. 24.-P. 183-215.
112. Iciek, M. Allyldisulfide as donor and cyanide as acceptor of sulfane sulfur in the mouse tissues/ M. Iciek, A. Bilska, L. Ksiazek// Pharmacol. Rep. -2005.-Vol. 57-P. 212-218.
113. Murine cystathionine gamma-lyase: complete cDNA and genomic sequences, promoter activity, tissue distribution and developmental expression/ I. Ishii et al. // Biochem. J. 2004- Vol. 381 P. 113-123
114. Jackson, M.B. Action potential broadening and frequency-dependent facilitation of calcium signals in pituitary nerve terminals / M.B. Jackson, A. Konnerth, G.J. Augustine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - Vol. 88. - P. 380384.
115. Jhee, K.H. Domain architecture of the heme-independent yeast cystathionine p-synthase provides insights into mechanisms of catalysis and regulation/ K.H. Jhee, P. McPhie, E.W. Miles// Biochemistry. 2000. - Vol. 39. -P.10548-10556.
116. Kamoun, P: Endogenous production of hydrogen sulfide in mammals/ P: Kamoun// Amino Acids. 2004. - Vol. 26. - P. 243-254.
117. Kaneko, S. Differential regulation of N- and Q-type Ca channel by cyclic nucleotides and G-protein / S. Kaneko, A. Akaike, M. Satoh // Life Sci. -1998. Vol. 62. № 17. - P. 1543-1547.
118. Katz, B. Tetrodotoxin and neuromusculartransmission/ B. Katz, R. Miledi //Proc. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci.- 1967. Vol. 167. - P. 8-22.
119. Katz, Bi: The: measurements of synaptic delay- and? the time: course: of acetylcholine release at the neuromuscular junction / B; Katz, RLMiledi*// ProciR • SocLondSer A.- 1965.-Vol.161.-P. 483-495.
120. Katz, B. The: release of acetylcholine fromnerve: endings» by gradedi electric pulses/ B. Katz, RLMiledi*//Proc. R1,Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1967. - Vol. 167. - P: 23-38.
121. Keller,, J:N; Cyclic nucleotides; attenuate lipid peroxidation-mediated neurons toxin/ JiNi Keller;. K.B; Hanni; M;P: Mattson;. W.R. Markesbery // Neuroreport. 1998. - Vol. 9. № 16. - P. 1-4.
122. Kery, V. Trypsin cleavage1 of human cystathionine p-synthase into an evolutionarily conserved active core: structural and functional consequences/ V. Kery , L. Poneleiti, J;P; Kraus.//. Arch Bioehem. Biophys. 1998. - Vol. 355; -P.222-232.
123. Khan, A. A. Effects of hydrogen sulfide exposure on lung mitochondrial respiratory chain enzymes in rats/ A.A. Khan et al. // Toxicol. Appl. Pharm. -1990. Vol. 103, № 3 . - P. 482-490.
124. Kim;. S;K. ,Effect of acute betaine administratiomomhepaticmetabolism of S-amino acids in: rats andi mice/ S:K. Kim^ K.H; Choi; Y.G. Kim// Biochem; Pharmacol; -2003: — Vol; 65;-P; 1565-1574;
125. Kimura, H.K. Physiological roles of hydrogen' sulfide: synaptic modulation^ neur2009oprotectin, and smooth muscle relaxation/ H.K., Kimura, Y.
126. Nigai, K. Umemura, Y Kimura// Antiox.& redox signaling. — 2005. Vol. 7. № 5-6.-P. 795-803.
127. Kimura, H: Hydrogen sulfide induces cyclic AMP and modulates the NMDA receptor/ H. Kimura //Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 267.-P. 129-133.
128. Kimura, Y. Hydrogen sulfide protects HT neuronal cells from. oxidative stress/ Y. Kimura, R. Dargusch, D. Schubert, H: Kimura// Antioxid. Redox. Signal. 2006. - Vol. 81 - P: 661-670.
129. Kimura, Y. Hydrogen sulfide protects neurons from oxidative stress/ Y. Kimura, H:Kimura//FASEB J.-2004.-Vol. 18.-P. 1165-1167.
130. Kindgren, C.A. Identification of ionic currents at presynaptic nerve endings of the lizard / C.A. Kindgren, J.W. Moore //J. Physiol. (Lond.). 1989. -Vol.414.-P. 201-222.
131. Kombian, S. B. Effects of acute.intoxication with hydro gen sulfide on central amino acid transmitter systems/ S. B. Kombian, M. W. Warenycia,,F. G. Mele, R. J. Reiffenstein// NeuroToxicology. 1988. - Vol. 9. - P.* 587-596.
132. Konishi, T. Electical activity of mouse motor nerve terminals / T. Konishi, T.A. Sears // Proc. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1984. -Vol. 22.-P. 115-120.
133. Konnerth, A. Brief dendritic calcium signals initiate long-lasting synaptic depression in cerebellar Purkinje cells / A. Konnerth, J;. Dreessen, G.J. Augustine // PNAS. 1992. - Vol. 89. - P. 7051-7055«.
134. Kraus, J.P. Cystathionine beta-synthase from human liver: improved purification scheme and additional characterization of the enzyme in- crude and; pure form/. J.P. Kraus, L.E. Rosenberg// Arch. Biochem. Biophys. 1983. - Vol: 222.-P. 44-52.
135. Kraus, J.P.The human cystathionine p-synthase (CBS) gene: complete sequence, alternative splicing, and polymorphisms/ J.P. Kraus, J. Oliveriusova, J. Sokolova//Genomics.- 1998.-Vol. 52.-P.312-324.
136. Kredich, N.M. Foote U, KeenanBS. The stoichiometry and kinetics of the inducible cysteine- desulphydrase from Salmonella' lyphimurium/ N.M. Kredich, U. Foote, B.S. Keenan // J. BioL.Chem. 1973.- Vol.248. - P. 61876196.
137. Adenylyl cyclase amino acid sequence: Possible channel- or transporter-like'structure / J. Krupinski et al.V/ Science. 1989. - Vol: 244. - P. 1558-1564.
138. Kuba, K. Ca2+-induced Ca2+ release in neurones / K.Kuba // Jap. J. Physiol. 1994: - Vol: 44. - P. 613-650. (
139. Kuba, K. Release of calcium ions linked to/the activation of potassium conductance' in caffeine treated' sympathetic neurons / K. Kuba // J. Physiol., -1980.-Vol. 298.-P. 251-259.
140. Kuba, K. Rhythmic hyperpolarizations and' depolarization of sympathetic ganglion cells induced by caffeine / K. Kuba, S. Nishi* // J. Neurophysiol. 1976. - Vol. 39. - P. 547-563.
141. Hydrogen sulfide inhibits activity of three isoforms. of recombinant nitric oxide synthase/ S. Kubo et al.,//Toxicology. 2007. - Vol. 241. - P. 92-97.
142. Type-3 ryanodine receptor involved in Ca(2+)-induced Ca2+ release and transmitter exocytosis-at frog motor nerve terminal / M. Kubota et al.//Cell" Calcium. 2005. - Vol. 38; №6. -P. 557-567.
143. Detoxification of hydrogen, sulfide and methanethiol in the cecal, mucosa/ M.D. Levitt et al. // J. Clin: Invest. 1999. - Vol. 104. -P.l107-1114.
144. Levonen, A. L. Human cystathionine gamma-lyase: developmental and in vitro expression of two isoforms/ A. L. Levonen, R.Lapatto, M. Saksela, K. O. Raivio// Biochem. J. 2000.-Vol: 347.-P. 291-295.
145. Leffler, C.W. Carbon monoxide and hydrogen sulfide: gaseous messengers in cerebrovascular circulation/ G.W. Leffler, H. Parfenova, J.H. Jaggar, R:Wang// J. Appl. Physiol. 2006. - Vol. 100. - P. 1065-1076.
146. Li6 L. Putative biological roles of hydrogen sulfide in health and disease: a breath of not so fresh air?/ L. Li, P.K. Moore// Trends Pharmacol Sci— 2008. Vol.29, №. 2. - P:84-90.
147. Liang, Y. Calcium signaling at single mossy fiber presynaptic terminals in the rat hippocampus/ Y. Liang, L.L. Yuan, D: Johnston, R. Gray //J. Neurophysiol. 2002. - Vol. 87, № 2. - P. 1132-1137.
148. Lindgren, S.A. Nitroprusside inhibits neurotransmitter release at the frog neuromuscular junction / S.'A. Lindgren, M.W. Laird // NeuroReport. 1994. -Vol. 5. № 16. - P. 2205-2208.
149. Llinas, R: Presynaptic calcium currents in-squid giant synapse / R. Llinas, Z. Steinberg, K. Walton // Biophys. J. 1981. - Vol. 33. -P.289-322.
150. Llinas, R'. Transmission by presynaptic spike-like depolarization at the squid giant synapse / R. Llinas, M. Sugimori, S.M. Simon //Proc: Natl. Acad. Sci. USA. -1982.-Vol. 79?-P. 2415-2419.
151. Llinas, R.R. Microdomains of high calcium concentration in presynaptic terminal / R.R. Llinas, M. Sugimori, R.B. Silver // Science; 1992. -Vol. 256. - P. 677-679.
152. LoPachin, R.M. Synaptic cysteine sulfhydryl groups as targets of electrophilic neurotoxicants/ R.M. LoPachin, D;S. Barber //Toxicol. Sci. 2006. -Vol. 94; №2.-P. 240-255.
153. Nasal lesions in rats exposed* to hydrogen sulfide for four hours/ A. Lopez et al.// Am. J. Vet. Res. 1988. - Vol. 49 - P. 1107-1111.
154. Loscher, W. Effect of inhibitors of GAB A aminotransferase on the metabolism of GABA in brain tissue and synaptosomal fractions/ W.Loscher // J. Neurochem. -1981.-Vol. 36.-P. 1521-1527.
155. Lotshaw, D.P. Fine tuning of neuronal electrical activity: modulation of several ion channels by intracellular messengers in a< single identified nerve cell/
156. D.P. Lotshaw, E.S. Levitan, I.B. Levitan // J. Exp Biol. 1986. - Vol. 124. - P. 307-322.
157. Lowicka, E. Hydrogen sulfide — the third gas of interest for pharmacologists/ E. Lowicka, J. Beltowski // Pharmacol. Rep. 2007. - Vol. 59. -P. 4-24.
158. Lu, S.C. Regulation of hepatic glutathione synthesis: current concepts and controversies/ S.C. Lu //. FASEB J. 1999. - Vol. 13 - P. 1169-1183.
159. Lu, Y. Cloning and nucleotide sequence of human liver cDNA encoding for cystathionine-y-lyase/ Y. Lu, B.F. O'Dowd, H. Orrego, Y. Israel// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. - Vol. 189. - P. 749-758:
160. Guanylyl cyclase and signaling by cyclic GMP/ K.A.Lucas et al. // Pharmocol. Rev. -2000. Vol. 52. - P. 375-413.
161. Maclean, K.N. Structure of human cystathionine p-synthase: a unique pyridoxal 5-phos- phate-dependent heme protein/ K.N. Maclean, E. Kraus, J.P: Kraus, P. Burkhard //EMBO J. 2001. -Vol. 20. - P. 3910-3916.
162. Mallart, A. A calcium-activated potassium current in motor nerve terminals of the mouse / A. Mallart // J. Physiol. (Lond.). 1985. - Vol. 368. - P. 577-591. '
163. Mariggio, M.A. Sulfide enhancement of PMN apoptosis/ M.A. Mariggio, V. Minunno, S. Riccardi et al.// Immunopharmacol Immunotoxicol. -1998. Vol. 20. - P. 399-408:
164. Martinez-Serrano, A. Caffeine-sensitive calcium stores in presynaptic nerve endings: a physiological role?// A. Martinez-Serrano, J. Satrustegui /Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. - Vol. 161, № 3. - P965-971.
165. McGarry, S.J. Digoxin activates sarcoplasmic reticulum Ca2+-release channels: a possible role in cardiac inotropy / S.J. McGarry, A. Williams // Brit. J. Pharmacol. 1993. - Vol. 108. - P. 1043-1050.
166. McGraw, C.F. Localization of calcium in presynaptic nerve terminals/ C.F. McGraw, A.U. Somlyo, M.P. Blaustaein // J. Cell. Biol. 1980. - Vol. 85. - P. 228-241.
167. Structure of human cystathionine beta-synthase: a unique pyridoxal 5'-phosphate-dependent heme protein/ M. Meier et al.// EMBO J. 2001. - Vol. 20. -P. 3910-3916.
168. Ion channels in presynaptic nerve terminals and control of transmitter release / A. Meir et al. //Physiol. Rev. 1999. - Vol. 79, № 3. - P. 1019-1089.
169. Meissner, G. Ryanodine receptor/Ca 2+ release channels and their regulation by endogenous effectors / G. Meissner // Ann. Rev. Physiol: 1994. -Vol. 56. - P. 485-508.
170. Meyers, D:E. Distribution, of ionic currents in' the soma» and growing region of an- identified peptidergic neuron in defined culture /D.E. Meyers // J. Neurophysiol. - 1993. - Vol: 69. - P. 406-415.
171. Miles, E.W. Cystathionine beta-synthase: structure, function, regulation, and location of homocystinuria-causing mutations/ E.W. Miles, J.P. Kraus//J. Biol.Chem. 2004. - Vol. 279. - P. 29871-29874.
172. Miller, R'.J. Voltage-sensitive Ca channels/ R.J. Miller // J.Biol'.Chem. -1990. Vol. 267." - P. 1403-1406.
173. Mirrales, F. Activity-dependent modulation- of the presynaptic potassium current in the frog neuro-muscular junction/ F. Mirrales, C. Solsona // Jt Physiol. (Lond.). 1996: - Vol*. 495. - P. 717-732.
174. High-performance liquid1 chromatography« detection of sulfide in tissues from sulfide-treated mice/ T. W. Mitchell et al. //J. Appl. Toxicol. 1993. -Vol. 13.-P. 389-394.
175. Mitsuhashi, H. Is sulfite an, antiatherogenic compound in wine?/ H. Mitsuhashi, H. Ikeuchi, Y. Nojima// Clin. Chem. 2001. - Vol. 47. - P. 1872-1873.
176. Mok, Y.Y. Role of hydrogen sulphide in haemorrhagic shock in the rat: protective effect of inhibitors of hydrogen sulphide biosynthesis/ Y.Y. Mok et al. //Br. J. Pharmacol: -2004. Vol. 143. - P. 881-889.
177. Moore, A.H. Neuroinflammation and anti-inflammatory therapy for Alzheimer's disease/ A.H. Moore, M.K. O'Banion// Adv. Drug Deliv. Rev. 2002. -Vol. 54.- P. 1627-1656.
178. Moore, P.K. Hydrogen sulfide: from the smell of the past to> the mediator of the- future?/ P:K. Moore, M: Bhatia-, S. Moochhala// Trends. Pharmacol.,Sci. 2003. - Vol. 24 - P. 609-611.
179. Morita, K. Evidence for -two calcium-dependent potassium conductances in lizard<motor nerveterminals / K.Morita, E.F. Barret //J. Neurosci. -1990. Vol. 10: - P. 2614-2625.
180. Nicholls, P. Oxidation of sulphide by cytochrome aa3/ P. Nicholls, J. K.
181. Kim//Biochim. Biophys. Acta. 1981. - Vol. 637.-P. 312-320.
182. Nishi, N. Identification of probasin-related antigen as cystathionine-y-lyase by molecular cloning/ N. Nishi et al. // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. -P. 1015-1019.
183. Hydrogen sulfide inhibits nitric oxide production and nuclear factor-kappa (3 via heme-oxygenase-1 expression in RAW264.7 macrophages stimulated with lipopolysaccharide/ G.S. Oh et al.// Free. Radic. Biol. Med. 2006.-Vol. 41. - P. 106-119.
184. Olson, K.R. Vascular actions of hydrogen- sulfide in nonmammalian vertebrates/ K.R. Olson//Antioxid. Redox signal. -2005. -Vol.7. -P.804-811-.
185. Onodera, K. Effect of caffeine'on the neuromuscular junction-of the frog, and its relation to external calcium concentration/ K. Onodera- //Jpn. J. Physiol. 1973. - Vol. 23, №6. - P.587-597.
186. Transient increase of calcium tin pre- and postsynaptic organelles of rat superior, cervical ganglion after tetanizing stimulation / A. Parducz et al. // Neurosci. 1987. - Vol. 23. - P. 1057-1061.
187. Patacchini, R. Hydrogen sulfide (H2S) stimulates capsaicin-sensitive primaryafferent neurons in the rat urinary bladder/ R. Patacchini, P. Santicioli, S. Giuliani, C.A. Maggi //Br. J. Pharmacol. 2004 - Vol.142. - P. 31-34.
188. Pozzan, T. Molecular and cellular, physiology* of intracellular calcium stores / T. Pozzan; P: Vôipe, R: Rizzuto; L Meldolesi // Physiol; Rev. 1994: - Vol. 74. - P. 595-636.
189. Hydrogen sulfide: Neurochemistry and neurobiology/ K.Qu et al. // Neurochem. Int. 2008. - Vol. 52. - P. 155-165.
190. Quayle, J.M. Calcitonin'gene-related peptide activated ATP-sensitive K+ currents in rabbit arterial smooth muscle via protein kinase A/ J.M. Quayle, A.D. Bonev, J:E. Brayden M.T. Nelson// J. Physiol. 1994. - Vol. 475. - P. 9-13.
191. Reiffenstein, R. J. H. Toxicology of hydrogen sulfide/ R. J. Reiffenstein, W. C. Hulbert, S. H. Roth II Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 1992. -Vol.32. -P.109-134.
192. Robitaille, R. Functionali colocalization of calcium and: calcium-gated potassium channels in control of transmitter release/ R. Robitaille, M.L. Garcia, G.J. Kaczorowski, M.P. Charlton //Neuron. 1993. - Vol. 11. - P. 645-655.
193. Rubinstein, D: The metabolism of the erythrocyte. III. The tricarboxylic acid cycle in the avian erythrocyte/ D. Rubinstein; 0:F. Denstedt// J. .Biol; Chem. -1953.-Vol. 204. №2. — P.623-37.
194. Scholten,. A. An introductions^^ to>cAMP/cGMP'signaling / A. Scholten, A.J.R. Heck// (Ghapterl)iThesis;Arjen:Scholten —2006; — Vol. HI V6 P.9-51.
195. Sivaramakrishnan, S. Pre-synaptic facilitation- at the: crayfich neuromuscular• junction. Role; of calcium-activated potassium conductance/ S. Sivaramakrishnan; .MS'; Brodwick, G.D. Bittner //J. Gen. Physiol. 1991. - Vol: 98.-P. 1181-1196. .
196. Regulation cAMP and? cGMP signaling: new: phosphodiesterases^ and new functions/: S.H. Soderling et al. // Beavo Curr. Opin. in Cell Biol. 2000. -Vol.12.-P.174-179.
197. Stipanuk, M.H. Characterization of the enzymic capacity for cysteine desulphhydration in liver and kidney of the rat/ M.H. Stipanuk, P.W. Beck// Biochem. J. 1982. - Vol. 206. - P. 267-277.
198. Mammalian cysteine metabolism: new insights- into regulation of cysteine metabolism/ M.H. Stipanuk et al.// J; Nutr: 2006. - Vol; 136 (Suppl.). -P. 1652S-1659S.
199. Sutherland; E.W. Fractionation and characterization of a.cyclic adenine ribonucleotide formed by tissue particles / E.W. Sutherland, I.W. Rail // Biol; Chem. 1958. - Vol. 232. - P. 1077-1059.
200. Tabti, N. Three potassium currnts in mouse motor nerve terminals/ N. Tabti, C'.Bourret, A. Mallart // Pflugers Arch. 1989. - Vol. 413. - P. 395-400.
201. Takasago, T. Phosphorylation of the cardiac ryanodine receptor by cAMP-dependent protein kinase/ T. Takasago, T. Imagawa, M. Shigekawa//J. Biochem: — 1989 Vol!. 106 j №5k> - P:. 872-877.
202. Tëague,.BlThe:smooth' muscle relaxant effect of hydrogen^ sulphide: in. vitro: evidence for; a. physiological?.' role1 to> control! intestinal contractility/ B: Teague, S. Asiedu, T.K. Moore // Br. J: Pharmac; 2002.-Vol. 137.-P. 139-145.
203. Terri an, D:M. Persistent enhancement of sustained calcium-dependent glutamate release by phorbol esters-.requirement for localized calcium entry / DM. Terrian // J. Neurochem. 1995. -Vol; 64. - P. 172-180.
204. Tomas, S. Differetial frequency-dependent regulation of transmitter release by endogenous nitric oxide at the amphibian neuromuscular synapse / S. Tomas, R. Robitaille // J. Neurosciensce 2Ö01 - Vol. 21. № 4. - P. 1087-1095.
205. Townsend, D.M. Sulfur containing amino acids and human disease /D.M. Townsend, K.D. Tew, H. Tapiero// Biomed. Pharmacother. 2004. - Vol. 58.-P. 47-55.
206. Molecular mechanisms of hydrogen sulfide toxicity/ D.H. Truong et al.//Drug. Metab. Rev. 2006. - Vol. 38, № 4. - P. 733-744.
207. Urbano, F.J. Coupling of L-type calcium channels to neurotransmitter release at mouse motor nerve terminals/ F.J. Urbano, R.S. Depetris, O.D. Uchitel // Pflugers. Arch. 2001. - Vol. 441, № 6. - P. 824-831.
208. Uren, J.R. Modulation of cysteine metabolism in mice-effects of propargylglycine and L-cysteine-degrading enzymes/ J.R. Uren, R. Ragin, M. Chaykovsky. // Biochem. Pharmacol. 1978. - Vol. 27.- P.2807-2814.
209. Valitutti, S. Effect of sulfurous (thermal) water on T-lymphocyte proliferative response/ S. Valitutti, F. Castellino, P. Musiani// Ann. Allergy. -1990.-Vol. 65. -P.463-468.
210. Van der Kloot, W. The kinetics of quantal releases during end-plate currents at the frog neuromuscular junction/ W.Van der Kloot //J. Physiol. 1988. -Vol. 402.-P. 605-626.
211. Van der Kloot, W. Quantal acetylcholine release at the vertebrate neuromuscular junction/ W. Van der Kloot, J. Molgö // Physiol. Rev. 1994. -Vol. 74. №4.-P. 899-991.
212. Homocysteine metabolism in endothelial cells of a patient homozygous for cystathionine beta-synthase (CS) deficiency/ E.F. Van der Molen et al. // Thromb. Haemost. -1997. Vol. 78. -P.827-833.
213. Vargas, J.E. Maternal -y-cysta-thionase deficiency: absence of both teratogenic effects and pregnancy complications/ J.E. Vargas, S.H. Mudd, S.E. Waisbren, H.L. Levy//Am. J. Obstet. Gynecol. 1999. - Vol. 181. - P.753-755.
214. Role of phosphodiesterase and protein kinase G on nitric oxide-induced inhibition of prolactin release from the rat anterior pituitary/ M.O. Velardez et al.// Eur. J. Endocrinol. 2000. - Vol. 143, № 2. - P. 279-284.
215. Verstreken, P. Synaptojanin is recruited by endophilin to promote synaptic vesicle uncoating / P. Verstreken et al. // Neuron. — 2003. — Vol. 40. — P.733-748.
216. Signal transduction and gasotrasmitters/R. Wang et al.; ed. R. Wang. Vancouver: Human Press, 2004. - 377p.
217. Wang, G. A novel large-conductance Ca2+-activated potassium channel and current in, nerve terminals of the rat neurohypophysis/ G. Wang, P. Thorn, J.R. Lemos //J. Physiol. (Lond.). 1-992. - Vol. 457. - P. 47-74.
218. Wang, J. Genomic basis of cystathioninuria (MIM219500) revealed by multiple mutations in cystathionine-y-lyase (CTH)/ J. Wang, RA. Hegele// Hum. Genet. 2003. - Vol. 112. - P.404-408.
219. Wang, R. Two's company, three's a crowd: can H2S be the third endogenous gaseous transmitter?/ R. Wang //FASEB J.- 2002. -Vol. 16.- P. 17921298.
220. Wang, T. Nitric oxide mediates activity-dependent synaptic supression at developing activity-dependent synaptic supression at developing neuromuscular synapses/ T. Wang, Z. Xie, B. Lu // Nature.-: 1995. Vol. 374. - P. 262-266.
221. Wangemann, P. Maxi-K+ channel in single isolated*, cochlear efferent nerve terminals / P. Wangemann, S.Takeuchi // Hear. Res. 1993. - Vol. 66. - P. 123-129.
222. Acute hydrogen sulfide poisoning. Demonstration of selective up take of sulfide by the brainstem by measurement of brain sulfide levels/ M.W. Warenycia et al. // Benishin. Biochem Pharmacol. 1989. - Vol. 38. - P. 973981.
223. Dithiothreitol liberates non-acid labile sulfide from brain tissue of H2S-poisoned animals/ M. W. Warenycia et al. // Arch. Toxicol. 1990. - Vol. 64. - P. 650-55
224. The novel" neuromodulator hydrogen sulfide: an endogenous peroxynitrite:'scavenger'?/ M. Whiteman et al. // J. Neurochem. 2004. - Vol. 90. - P. 765-768.
225. Yang, G, Cystathionine-lyase overexpres-sion inhibits cell proliferation via a H2S-dependent modulation of ERK1/2 phosphorylation and p21Cip/WAK-l / G. Yang, K. Gao, L. Wu, R. Wang// J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. - P.49199-49205.
226. Vascular complications of severe hyperhomocys-teinemia in patients with homocystinuria due to cystathioninebeta-synthase deficiency: effects of homocysteine-lowering therapy/ S. Yap et al. // Semin. Thromb. Hemost. 2000. -Vol. 26.-P. 335-340.
227. Yasmineh, W.G. Satellite DNA in mouse autosomal heterochromatin/i
228. Yoshihara, M. Synaptotagmin I functions as a calcium sensor to synchronize neurotransmitter release / M: Yoshihara, J.T. Littleton // Neuron. -2002. V. 36: - P.897-908. , - —
229. Zefirov, A.L. The role of extracellular calcium in exo- and endocytosis of synaptic vesicles at the« frog motor, nerve terminals/ Zefirov A.L., M.M. Abdrahmanov, V.F. Mukhamedyarov, P.N. Grigoryev//J. Neuroscince. 2006-Vol. 143. - P. 9005-910. , .
230. Zhao; W. HS-induced vasorelaxation and underlying cellular and molecular mechanisms/ W. Zhao, R:Wang // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. -2002. Vol.283. - P. H474-H480.
231. Zhao, W. The vasorelaxant effect of H2S as a novel endogenous gaseous KATP channel opener / W.Zhao, J.Zhang, Y. Lu, R.Wang // EMBO J.-2001. Vol. 20. - P. 6008-6016.
232. The role of hydrogen sulfide generation in the pathogenesis of hypertension in rats induced by inhibition of nitric oxidesynthase/ G. Zhong et al. // J. Hypertens. — 2003. Vol. 21.-P. 1879-1885.
233. Zissimopoulos, S. Redox regulation of the ryanodine receptor/calcium release channel/ S. Zissimopoulos, F.A. Lai // Biochem. Soc. Trans. 2006. - Vol. 34, №Pt 5. -P. 919-921.
234. Dantrolene inhibition of ryanodine receptor Ca2+ release channels: molecular mechanism and isoform selectivity / F. Znao et al. // J.Biol. Chem. -2001. Vol. 276, № 17 - P. 13810-13816.
235. Zucker, R.S. Short-term synaptic, plasticity / R.S. Zucker, W.G. Regehr // Annu Rev Physiol. 2002. - V. 64. - P. 355-405.• • • 2+
236. Zucchi, R. The sarcoplasmic reticulum Ca channels/ryanodinereceptor: modulation by endogenous effectors, drugs and deseas states / R. Zucchi., S. Ronca-Testoni // Pharm. Rev. 1997. - Vol. 49. - P. 1-50.
-
Герасимова, Елена Вячеславовна
-
кандидата биологических наук
-
Казань, 2008
-
ВАК 03.00.13
- Роль пресинаптических рианодиновых рецепторов в регуляции кинетики секреции квантов ацетилхолина в нервно-мышечных синапсах на разных стадиях постнатального онтогенеза
- Синхронизация освобождения квантов медиатора как один из механизмов облегчающего действия норадреналина
- Влияние медиаторов воспаления на кратковременную пластичность в нервно-мышечном синапсе
- Роль внутриклеточных Ca2+-буферов в регуляции секреции медиатора
- Механизмы Ca2+-зависимого подавления секреции медиатора в новообразованных нервно-мышечных синапсах мыши
