Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Селекция высокоэффективных штаммов RHIZOBIUM LEGUnUNOSARUM BIOVAR VICIAE и анализ их взаимодействия с различными сортами гороха

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Селекция высокоэффективных штаммов RHIZOBIUM LEGUnUNOSARUM BIOVAR VICIAE и анализ их взаимодействия с различными сортами гороха"

всероссийский научно-исследовательский институт

сельскохозяйственной микробиологии

расхн

На правах рукописи

ФЕСЕНКО

Алексей Николаевич

СЕЛЕКЦИЯ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ ШТАММОВ ГШНОВШМ ЬЕ01Ш1М08А1ШМ ВЮУАЯ У1С1АЕ И АНАЛИЗ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С РАЗЛИЧНЫМИ СОРТАМИ ГОРОХА

Специальность: 03.00.07 — Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

санкт-петербург 1993

Диссертационная работа выполнена п лаборатории генетики и селекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии (г. Санкт-Петербург).

Научный руководитель — доктор биологических наук, профессор Б. В. Снмаров.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

К. В. Квитко; кандидат биологических наук Л. Н. Паромскская.

Ведущее учреждение — Российский государственный педагогический университет имени Герцена.

Зсццита диссертации состоится « ^ ъ ¿"-/¿^Л^' 1993 ;.

б у "час. на заседании Специализированного совета К..020.26.01 по присуждению ученой степени кандидата биологических паук во Всероссийском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной микробиологии по адресу: 189620, г. Санкт-Петербург—Пушкип-8, шоссе Подбельского, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « » 1993 г.

Ученый секретарь /2

За

Специализированного совета, ¿2

кандидат биологических наук ' А. Н. Зарецкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Горох - ведущая зернобобовая культура России, занимающая около 3 млн га. Для ряда регионов России (Нечерноземная зона, Запвдная и Восточная Сибирь, Урал и др.) это практически единственный источник богатого белком зерна местного производства. К сожалению, нйграгянизация, являющаяся важным прие-мои повышения урожайности и питательной ценности других бобовых культур, на горохе малоэффективна (Кожвияков, Доросинский, 1989). Это обусловлено рядом причин! недостаточной эффективностью имевшихся Производственных штаммов, широким распространением "спонтанных" клубеньковых бактерий гороха, конкурирующих со штаммзми-ино-лянтами за образование клубеньков, невысоким потенциалом азотфик-сации имеющихся сортов гороха.

В связи с этим целью настоящей работы было совершенствование методов аналитической селекции И. 1е£ит1повал1п\* и выделение высокоэффективных конкурентоспособных штаммов клубеньковых бактерия, комплементарных к перспективным сортам гороха.

Задачи нашей работы состояли в следующемг

1. изучить симбиогические свойства штаммов К.1е{£ит1повагш, выделенных из почв Орловской и Ленинградской областей, с целью выявления связи происхождения ттаммой с их с {«биотической активностью, '

2. отработать прямые и косвенные методы определения конкурентоспособности штаммов ВЛе^шйгювагит,

3. проанализировать взаимосвязь симбиотических Признаков й.1е~ 2ига1позаг\лп с цель» выявления наилучших критериев для селекции эффективных штаммов этих бактерий,

4. изучить сортовую специфичность эффективных штаммов ЯЛе^и-т1поеагит и проанализировать вклады генотипов микро- и макросимбй-онта, а также внешних условий* в определение симбиотических признаков растений гороха,

5. выделить штаммы клубеньковых бактерий, пригодные для инокулЯции перспективных сортов гороха в производственных условиях, а также сорта гороха, вйсокоотэывчивые на инокуляцию.

Научная новизна. Проанализирован вклад генотипов партнеров и внешних условий в определение симбиотических признаков гороха.

Показано, что эффективность симбиоза в большей мере зависит от генотипа макросимбиоита, чем азотфиксирующая активность Сакте-

*здесь и далее для краткости используется традиционная таксономия рода юигоМит: Н.Ле£ит1посагит - клубеньковые бактерии гороха.

рий в клубеньках. Установлено, что Берцовая продуктивность в основном определяется генотипом растений , тогда как генотип ризобий оказиваег достоверно большее влияние яа уделыюв содержание азота в зерне.

Установлено, что нэдлучши критерием г^фекгавности клубеньковых бактерий гороха в вегетациошшх опытах является накопление аьота б растениях, которой б больабй степени зависит от генотипа ризсбий, чем масса растений гороха.

Разработай щитай што,д определения конкурентоспособности активных штампов риэобий гороха по внешнему виду клубеньков при совместной инокуляции с неактивные штаммом-тестером 50.

Практическая апач^иость■ Выделены 9 перспективных штаммов, достоверно посьшгащцх урожаи зерна гороха (на 4,8 - 10,02) и накоплений в ней азота (на 7,3 - 12,5%). Шташ 62, депонированный в коллекции НйШ с.-х. микробиологии под номером 1076, признан по результатам 3-летнего изучашш в Географической сети опытов с кит-рагнисы перспектаьш» для производетвошого использования.

Ъгшьлен сорт'Зубр, сочетащий высокую отзывчивость на шоку-(прибавка урезал зерна - 7,8%) о высокой урожайностью.

Виделен нопктюмшй шташ 50 (депонированный в коллекции ВНШ с.-х. микробиологии под цоыарои 1075), пригодный для экспресс-ака-ли ¿а конкурентоспособности риаобжй гороха как косвенным (по продуктивности растении), так и прямим (по внешнему^виду клубеньков) методам;!.

Предложена схема аналитической селекции эффективных штаммов клубенькошх бактерий гороха.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доло»ены на 6 Всесоюзном Баховоком коллоквиума (г. Кобулети, 1980 г.), на 2 Всесоюзной конфереш^ин СОИСЛФ (г. Калуга, 1991 г.), на 8 Восточно-Европейском симпозиуме "l<itгogeníix-92" (г. Саратов, 1992 г.).

Публикации. По материалам работы опубликовано 4 статьи. .

Объем работа. Диссертация состоит из введения, обзора литера-тури, экспериментальной части, состоящей из 4 глав, заключения, выводов и списка литературы..Материалы диссертации изложены на 126 страницах машинописного текста, содержат 33 таблицы и 10 рисунков. Список литературы включает 145 наименований, в том числе 76 иност-раншх работ.

Мятериэяд и методы исследований.

Исследования проводили d 1985-1991 гг в лабораториях микробиологии ВНИИ зернобобовых и крулнгап культур (г.Орел) и генетики и селекции микроорганизмов ВШИ с.-х. микробиологии (г.Санкт-Петербург) .

Объектом исследования были прсизводсгветтые штаммы клубеньковых бактерий гороха, полученные из коллекция ВНИИСХМ (245а, 250я), й также выделенные кемзг штамм« r.leguminoBarum.

Вегетационные опыты проводили по общепринятой методике (Жур-^ бицкий, 1?б8). Повторносгь опытов 3-4-кратлая. Семена при посеве инокулировали суспензиями испытуемых штаммов, выращенных не бобовой агаре, из расчета -1,2 х 106 шюток/семя. Эффективность штаммов определяли по урожаю сухой надземной массы растений и накоплению в ней азота.

Поле№9 опыты проводили по общепринятой методике (Доспехов, 1968). Размещение делянок рендомизированноэ, повторность 4-кратная, учетная площадь делянок 22 м2. При посева семена инокулирова-ли суспензиями испытуемых штаммов ризобий, выращенных на бобовом агаре, из расчета 1,0-1,6 х 10ь клеток на семя. Эффективность симбиоза определяли по урохаю зерна гороха и накоплению в нем азота. Удельное содержание азота в сухой массе и зерне гороха определяли по методу Кьельдзля.

Штаммы риз оби?, выделяли из крупных розовых клубеньков гороха, вики и кормовых бобов по общепринятой методике ■ (Методические рекомендации по получению новых штаммов клубеньковых бактерий и оценке их эффективности, 1979). Антибиотипоустойчивые мутанты ризобий получали путем высева суспензии клеток (1,2-1,5 х 10® кл/мл) на чаш«! Петри с бобовам агаром, в который добавляли- 500 мкг/н-стрептомицинз или 60 ыкг/мл рифампицина. ' ■

Конкурентную способность исследуемых штаммов определяли резистентным методом с использованием стрептомицинустойчивых мутантов,' а также методом совместной инокуляции с неактивным штаммом-тестером (Amarger, 1981).

Аэотфиксируюцув активность растений- определяли по скорости редукции ацетилена (Hardy е.а., 1968).

Для статистической обработки данных использовали стандартные методы дисперсионного и корреляционного.анализа, анализа парамет-

ров генеральной совокупности, а таюне ^критерий Стъюдента и критерий знаков (Лакин, 1980).

Результаты исследований и обсуждение.

1. Анализ сиыбиотических свойств клубеньковых бактерий гороха в вегетационных опытах.

Для проведения целенаправленного отбора эффективных штаммов И. 1е£шп1гшБагш из природных популяций необходимо знать, в какой мере почвенно-ктшатические условия и генотип растения-хозяина влияют на сиибиотическую эффективность вадвляешх шташов. С этой целью мы изучили в вегетационных опытах сиыбиотические свойства большой группы штаммов К. 1е^ит1поБапш, выделенных из почв Орловской и Ленинградской областей и из клубеньков различных растений-хозяев, входящих в группу перекрестной инокуляции гороха.

Установлено, что штаммы К.1е£шп1повагш>, выделенные из сильнокислых вновь освоешшх почв Ленинградской области, по эффективности симбиоза с горохом значительно уступают штамма«, выделенным из более богатых слабокислых окультуренных почв Орловской области (табл.)). Различий в эффективности штаммов, выделенных из клубеньков различных бобовых растений из почв Орловской области, выявить не удалось. Так из 294 шташов, выделанных из клубеньков гороха, производственный шташ 250а по массе инокулированных растений достоверно превзошло 3,1—1,01из 33 штаммов, выделенных из клубеньков вики - 9,1-5,01 эи из 52 штаммов, выделенных из кормовых бобов - 5,8-3,24%. По величине общего накопления азота'в растениях доля

Таблица 1. Эффективность симбиоза с горохом штаммов К. 1е£Шп1побагт, выделенных из различных регионов России.

Происхождение шташов Выделено Штаммов X штатов, которые достоверно превышают штамм 250а по

нитроге-назноЯ активности массе растений накоплению вэота в ■ растениях

Орловская область 379 13 (3—1,74 4,0-1,01 9,0*1,47

Ленинградская область 22 0 0 0

Штамш из смеси почв ВО. 6,3-2,72 8,8-3,17 18,7±4,36

Всего изучено штаммов 481 11,4-1,45 4,6-0,96 ю,г±1,38

о

Для оценки конкурентоспособности ризобий гороха в полевых условиях мы применили резистентный метод. При сравнении конкурентоспособности различны* типов антибиотикоустойчивых мутантов ризобий гороха установлено, что стрептоиицинустойчивые мутанты высокоэффективного штамма 52 более конкурентоспособны, чем рифампицинус-тойчивые (средняя конкурентоспособность этих групп мутантов составила 43,1 и 27,3%, соответственно). Таким образом, для оценки конкурентоспособности Я. 1её^цп1повагип! в полевых опытах удобнее использовать стрептоиицинустойчивые мутанты этих бактерий.

4. Специфичность взаимодействия перспективных штаммов ИЛе^и-ш1поеагиш с различными сортами гороха в вегетационных опытах.

Основной целью селекции эффективных штаммов КЛе^^шйповагит является выделение штаммов, образующих эффективный симбиоз с широким набором генетически неродственных сортов гороха, используемых в производственных условиях. В связи с этим мы изучили в 5 независимых вегетационных опытах эффективность симбиоза II перспективных штаммов И.1е§доп1побагшп с 7 сортами гороха различного типа использования. В результате проведенных исследований были выделены штаммы 20 и 52, образующие эффективный симбиоз с рядом широко возделываемых в России сортов гороха (табл.6).

При проведении селекции растений и бактерий на повышение эффективности бобово-ризобиального симбиоза большое значение имеет изучение относительного вклада их генотипов в определение симбио-тических признаков. С этой целью мы по результатам дисперсионного анализа проведенных опытов вычислили относительный вклад генотипов сортов гороха и штаммов ризобий в общее варьирование показателей активности симбиоза, условно принимаемое за 100%.

Анализ полученных данных (рис.1) показал, что вклад генотипов сортов растений в определение показателей эффективности симбиоза (масса растений и накопление в ней азота) более чем вдвое превосходит вклад генотипов штаммов ризобий. В то же время роль партнеров в определении азотфиксируэдей активности клубеньков приблизительно одинакова. Таким образом, эффективность образуемого симбиоза, по-видимому, более жестко контролируется генотипом растений, чем азотфиксируюцая активность бактерий в клубеньках.

Взаимодействие "сорт-штамм" в проведенных опытах оказало на эффективность симбиоза значительно меньшее влияние, чем аддитивные

-ю-

Таблица 6. Сортовая специфичность перспективных штаммов клубень- ' новых бактерии гороха.

Штамм ' Прибавка урожая сухой массы растений (%) при

инокуляции сортов гороха

Ульяновский 68 ' Смарагд Орловчашш Среднее по штаммам

3 20,6 16,6 28,0* 21,7*

19 ' 18,5 18,0 31,0* 22,5*

20 24,8* 18,5* 29,5* 24,3*

52 28,1* 21,0* 38,5* ' 29,2*

М500 46,9* 8,2 10,0 21,7*

Среднее по сортам 27,8 16,5 27,4 -

Контроль б/и, г/сосуд С, 35 4,28 4,00

'прибавка к контролю без инокуляции достоверна (Р0<0,05) Значения НСР05 составили (г/сосуд;! по фактору "сорт" - 0,318; по фактору "штамм" - 0,449| для взаимодействия "сорт-штамм" - 0,778.

действия генотипов партнеров (рис.1), что свидетельствует о возможности подбора.штаммов ЯЛе^^тАповагшп, вступающих в эффективный симбиоз с широким спектром генетически неродственных сортов гороха, хотя и не исключает необходимости учета специфичности, проявляемой этими сортами при взаимодействии с различными штаммами ри-зобий.

5. Анализ влияния генотипов партнеров и внешних условий на эффективность симбиоза.

Для сопоставления влияния генотипов партнеров и внешних условий на симбиотические признаки гороха в вегетационных и полевых опытах мы применили следующий подход» результаты тех опытов, где одинаковые комбинации штаммов испытквались на одном и том же сорте гороха, мы обработали методой двухфакторного дисперсионного анализа, принимая за первый фактор условия проведения опытов, а за второй - генотип ризобий. Аналогичным образом мы обработали данные полевых опытов по изучению симбиотической активности 12 перспективных сортов гороха (1989-1991 гг).

Анализ полученных данных показал (рис.2), что наибольшее влияние на эффективность симбиоза в проведенных опытах оказали уело-

Рисунок I. Влияние генотипов партнеров на симбиотические признаки гороха в вегетационных огштах.

А М N

53,4%

1,8% гг,4%

17,4%

сорта

- взаимодействие "сорт-штами"

48,9%

5,4% 14,9%

30,8%

46,256

8,8% 13,4%

31,6%

штаммы

- "неконтролируемые" факторы

А - нитрогеназная (Сз^-редуктазная) активность; М - сухая масса растений; N - общее накопление азота в растениях.

вия выращивания инокулированных растений (определяющие 53,3-64,0% общего варьирования показателей эффективности симбиоза в вегетационных, опытах и 69,1-80,5% их варьирования в полевых опытах).

Поскольку вегетационные опыты ш проводили по единой методике , различия между ними в основном сводились к различиям в интенсивности солнечной радиации и температуры воздуха в период вегетации растений. Изучение влияния метеоусловий на эффективность инокуляции гороха в вегетационных опытах показало, что суша эффективных температур и продолжительность солнечного сияния за период вегетации растений проявляют достоверную положительную корреляцию с эффективностью симбиоза (табл.7).

Сопоставление влияния генотипов микро- и макросимбионтов на эффективность симбиоза показало (рис.2), что штаммы риэобкй оказывали наибольшее влияние на удельное содержание азота в зерне гороха

Рисунок 2. Вклад генотипов симбионтов и условий вегетации растений в определение симбиотических признаков гороха.

- К N (общий) А

Штаммы ризобий (17 вегетационных опытов)

Штаммы ризобий (9 'полевых опытов)

Сорта растений (3 полевых опыта)

24,2% 64,0%

17,5*

80,53

2,0% 3,0%

69,1 %

27,9%

генотип симбионта и его' взаимодействие с внешними условиями

"неконтролируемые" . фактор!

24,1% 53,3%

22,6% 26,2%

61,3%

12,5% 3,9%

68,4%

27,7%

■г—I—■

41 ,9% 25,5%

33.6Х 43,1%

33,7%

23,2%

52,0% 48,0%

внешние условия

М - масса растений (зерна) в вегетационных (полевых) опытах; N(общий) - общее накопление' азота в растениях (зерне) в вегетационных (полевых) опытах; А - нитрогеназная активность растений (удельное содержание азота в зерне) в вегетационных (полевых) опытах.

Таблица 7. Влияние метеорологических условий в период вегетации гороха на эффективность штамма 250а в вегетационных опытах.

Величина прибавки от Коэффициенты корреляции, полученные

инокуляции (по отноше- при сопоставлении признаков с

нию к контролю б/и) -

суммой эффектна- продолжительностью них температур солнечного сияния

по массе растений +0,560** +0,511*

по накоплению азота +0,557** +0,421

в растениях

Корреляция статистически значима при: *Р0<0,05; **'Р0<0,01.

(определяли 23,2% общего варьирования этого признака), тогда как их роль в определении урожая зерна била незначительной (2% общего варьирования). Генотипы сортов гороха, напротив, играли существенную роль в определении урояая зерна, но не влипли на содержание в ней азота (рис.2).

Заключение.

Полученные резулвтаты позволяют сделать вывод, что для повышения эффективности бобово-ризобиального симбиоза необходимо проведение координированной селекции растения-хозяина и клубеньковых бактерий, включающей селекцию активных штаммов И. 1е££шп1по8агшп, фиксирующих максимальное количество атмосферного азота, и отбор сортов гороха, способных наиболее полно реализовать фиксированный бактериями азот в форме урожая зерна. На основании выявленных закономерностей предлагается схема аналитической селекции эффективных штаммов ризобий гороха (рис.3), включающая выделение штаммов И.leguпlinoвaготl из природных популяций ризобий, изучение их эффективности и конкурентоспособности в вегетационных и полевых опытах (в качестве основного критерия эффективности штаммов на первых этапах селекции используется их влияние на накопление азота в урожае), а также анализ сортовой специфичности перспективных штаммов в полевых опытах, что позволит не только отобрать "полиспецифичные" штаммы ризобий, но и выявить сорта гороха, проявляющие высокую отзывчивость на инокуляцию данными штаммами.

Рисунок 3. Селекция высокоэффективных штаимов й Ле£ш1повагит.

1-й этап. Выделение 300-400 штаммов ризобий из клубеньков гороха, вики и кормовых бобов.

2-кратная проверка эффективности выделенных штаммов в вегетационных опытах нч 1-2 широкоряйонироввшшх сортах гороха. Отбраковка малоэффективных штаммов.

2-й этап. Экспресс-тестирование конкурентоспособности перспективных штаммов в вегетационных опытах (методом Лмарже и по внешнему виду клубеньков)

Дополнительная 2-3-крэтная проверка эффективности перспективных штаммов в вегетяшшнных опытах на 2-3 широкорайонированных сортах гороха.

Отбор высокоэффективных конкурентоспособных штаммов.

• '1

3-й-этап. 3-кратная проверка эффективности перспективных штаммов в полевых опытах. Отбор высокоэффективных штаммов.-

4-й этап. Анализ сортовой специфичности перспективны штаммов в полевых опытах (3-кратная проверка)

Анализ конкурентоспособности перспективных штаммов в полевах опытах (прямыми методами)

Отбор "полиспецифичных" высококонкурентоспособных штаммов

Производственные и конкурсные ^испытания.

ВЫВОДЫ.

I: В вегетационных опытах изучена эффективность 481 штамма й. 1 е^ипйповагш!. Штампы ЙЛе^шНповагит, выделенные из слабокислых окультуренных почв Орловской области, более эффективны в симбиозе с горохом, чем штаммы, выделенные из сильнокислнх вновь освоенных почв Ленинградской области.

2. Выявлены 9 высокоэффективных штаммов, достоверно повышающих урожай зерна гороха (на 4,8-10,0%) и накопление в ном азота (на 7,3-12,5%), в той числе штаммы 52 и 417,повышающие в произ-

ьодствешшх условиях урожай зерна гороха на 16,6-50,0% и 27,0%, соответственно.

Способность рнзобий увеличивать накопление азота в растениях в вегетадасшшх. опит ах достоверно коррелирует с их способностъй пошли&ть зерновую продуктивность гороха в полевых опытах.

3. Азотфнксирумцая активность рнзобий недостаточно четко коррелирует с их симбиотической эффективностью (величина коэффициента корреляции между азотфиксирущей активностью штаммов И.1е^п1пова-гиш н их эффективностью в вегетационных и полевых опытах равна 0,21-0,047 и 0,13^0,104, соответственно), что свидетельствует о нецелесообразности использования ее в качестве единственного критерия эффективности штаммов Я. 1е^ип1повагип1.

4. Генотип клубеньковых бактерий оказывает достоверно большее влияние на накопление азота в растениях гороха, чем на их массу (в вегетационных опытах определяет 36% и £7% общего варьирования этих признаков, соответственно). В полепил опытах штаммы Й.1е£ит1.-повагиш контролируют 25% общего варьирования величины удельного содержат!« азота в зерне и лишь 9% варьирования массы зерна.

5. Эффективность симбиоза гороха с клубеньковыми бактериями в значительной мера зависит от условий вегетации растений.,В вегетационных опытах выявлена корреляция эффективности симбиоза с продолжительностью солнечного сияния н суммой эффективных температур в период вегетации растений (г=0,51^0»203 и 0,56^0,196, соответственно).

6. Анализ взаимодействия 7 сортов гороха и 11 штаммов ш1повагиш в 5 независимых вегетационных опытах показал, что вклад генотипов макросимбионта в определение урожая сухой массы инокули-рованшх растений и накопления в ней азота выше, чем вклад геноти-

, пов. микросимбионта. В определении азотфинсирующей активности клубеньков, образуемых на корнях гороха, роль симбиотических партнеров одинакова. Фактор взаимодействия "сорт-штамм"- играет значительно меньшую роль в определении симбиотических признаков, чем аддитивный действия генотипов партнеров

7. Выявлен неэффективный штамм 50, с использованием которого проанализирована конкурентоспособность 52 активных штаммов ДЛеви-тШоепгшл и выявлена группа из 32 штаммов (в том числе высокоэффективный штамм 52), достоверно превосходящих по конкурентоспосскЗ-

ностн производственный штамм 250а. Установлено, что стрептомицин-устойчивые мутанты R.legumlnosarun) более конкурентоспособны, чем рифампицинустойчивыэ, и могут быть использованы для изучения конкурентоспособности перспективных штаммов клубеньковых бактерий гороха в полевых условиях.

8. В результате анализа симбйотической активности 12 сортов гороха в полевых опытах выявлен сорт Зубр, сочетающий высокую отзывчивость на инокуляцию (прибавка урожая зерна - 7,82) с высокой, урожайностью (в среднем за 3 года - 47,9 ц/га). В проведенных опытах генотипы сортов гороха контролировали 27,9% варьирования массы зерна, но не влияли на содержание в нем азота.

9. Предложена схема селекции аффективных штаммов R.legumino-sarum, включающая отбор висококкурент осп ос обкых штаммов ризобий, фиксирующих наибольшее количество атмосферного азота в вегетационных и полевых опытах, и подбор рортов гороха, способных с высокой эффективностью использовать фиксируемый бактериями азот для увеличения урожая зерна.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Орлова И.Ф., Фесенко А.Н., Орлов В.П. Оценка конкурентоспособности Rhisobium legimtinosarum (Pisum). Доклады ВЛСХНИЛ, 1991, N II, С.27-32.

2. Орлова И.Ф., Фесенко А.Н. Эффективность штаммов клубеньковых бактерий гороха в вегетационных и полевых опытах. Тезисы докладов 2 конференции СОИСАФ, 1991, с.45-46.

3. Provorov N., Saimnasaróv U., Tanriverdlev Т., Fesenko A., Simarov B. Comparative inputs oí plant and bacterial genotypes into determination of efficiency in legi|i)e-rhizobiunr symbiosis. Proceedings of the в**1 Eastern Europe symposium on biological nitrogen fixation NITROGEfffIX-92. Saratov, 22-26 September 1992.

4. Фесенко A.H., Орлова И.Ф. Полиморфизм местных популяций Rhieobium leguminosaruin Орловской области. Бюл. НТИ ВНИИ зернобобовых и крупяных культур, 1993, М 40, с.38-41.

.РТЛ.Ъип.ВИР.Зак.ЗОХ.Тд^ЛСда. 23,04.93.