Роль комплекса полиморфных маркеров в характеристике генетического потенциала свиней

Адаменко, Владимир Аркадьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль комплекса полиморфных маркеров в характеристике генетического потенциала свиней
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Роль комплекса полиморфных маркеров в характеристике генетического потенциала свиней"

На правах рукописи

АДАМЕНКО ВЛАДИМИР АРКАДЬЕВИЧ

РОЛЬ КОМПЛЕКСА ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ В ХАРАКТЕРИСТИКЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА СВИНЕЙ

Специальность: 03.00.23 - БИОТЕХНОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы - 2005

Работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики Всероссийского государственного научно-исследовательского института животноводства.

Научный руководитель: Научный консультант:

Официальные оппоненты: Ведущее учреждение:

доктор биологических наук, профессор Зиновьева Наталия Анатольевна кандидат биологических наук Шавырина Клавдия Михайловна

доктор биологических наук, профессор Шихов Игорь Яковлевич; доктор биологических наук, профессор Фомичев Юрий Павлович.

Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина (МГАВМиБ).

Защита диссертации состоится 20 декабря 2005 года, в 10 часов, на заседании диссертационного совета Д006.013.01 при учреждении Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства (ВИЖ).

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, пос.

Дубровицы, ВИЖ, тел./факс (0967)651101

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан« »ноября 2005 года.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современное свиноводство, как в нашей стране, так и за рубежом развивается и совершенствуется на основе достижений науки и техники. Ведомственная целевая программа «Развитие свиноводства в Российской Федерации на период 2006-2010 годов и до 2015 года» наряду с использованием передовых энергосберегающих, ресурсосберегающих и экологически безопасных технологий предусматривает внедрение эффективных селекционно-генетических и биологических методов совершенствования лучших отечественных и зарубежных пород и линий свиней. Признавая ведущую роль традиционных методов разведения, следует отметить, что использование только классической селекции уже не может обеспечить должного уровня эффективности селекционно-племенной работы ¡Эрнст Л.К., 2005}.

Создание высокоспециализированных линий свиней, обладающих повышенными продуктивными и потребительскими качествами, в настоящее время невозможно без использования современных достижений в области генетики животных. Ведущие зарубежные компании (PIC International Group, JSR Fanning Group, Cotswold Pig Development Company, Rattlerow Seghers и ряд других) для совершенствования линий свиней широко используют новые подходы, основанные на применении генетических маркеров признаков продуктивности. Маркирование признаков на уровне генотипа в дополнение к традиционным классическим методам селекции позволяет значительно повысить эффективность селекционно-племенной работы и достигнуть желаемого результата уже в течение нескольких генераций /Зиновьева и др., 2005/. Именно такие свиньи отвечают требованиям современного рынка. Таким образом, маркерная селекция представляет собой интегрированный подход, тесно связанный с целями производства и рынка.

Несмотря на обширные зарубежные данные о преимуществах использования генетических маркеров в селекции, имеется лишь незначительная информация о результатах их практического использования в качестве дополнительных критериев оценки животных, разводимых в сельскохозяйственных предприятиях в России. В этой связи, возникает необходимость в проведении исследований, направленных на изучение роли комплексной системы маркерной оценки свиней с применением иммуногенетических, цитогенетических и ДНК-маркеров.

Использование такой системы в дополнение к традиционным методам оценки и отбора животных по фенотипу позволит повысить эффективность селекционно-племенной работы со свиньями различных пород.

Цель и задачи исследований. Исходя из изложенной выше актуальности, целью работы явилось изучение роли комплекса генетических маркеров (иммуногенетических, цитогенетических и ДНК-маркеров) в характеристике генетического потенциала свиней на примере ООО «Троснянский бекон» Орловской области. Для достижения цели работы нами были поставлены и решены следующие задачи:

1. Дать характеристику племенного поголовья свиней по иммуногенетическим маркерам 10 локусов групп крови.

2. Изучить роль цитогенетических ^ ¿¡ЭДцгве критерия оценки воспроизводительных качеств xpj ков. БИБД иотек

СПетыАгрг^ 0» Щ «к

3 Изумить роль показателя состояния акросомы в сперматозоидах как критерия оценки качества спермы и прогнозирования воспроизводительных качеств хряков

4. Выполнить исследования частот встречаемости аллелей и генотипов некоторых ДНК-маркеров признаков продуктивности у свиней различных породных групп.

5. Изучить биологические и продуктивные качества свиней в зависимости от генотипов животных и типов подборов по ДНК-маркерам.

Научная новизна. Впервые предложено использование и оценена роль комплекса генетических маркеров (иммуно-, цито- и ДНК-маркеры) в характеристике генетического потенциала свиней. Изучен уровень спонтанной хромосомной изменчивости у хряков-производителей и проведены исследования влияния доли хромосомных аберраций на воспроизводительные качества хряков. Выполнены исследования влияния состояния акросомы в сперматозоидах на воспроизводительные качества хряков. Установлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов маркерных генов у свиней различных породных групп. Изучено влияние маркерных генотипов на биологические и продуктивные качества свиней

Практическая ценность работы. Показана потенциальная роль цитогенетических маркеров в качестве критерия оценки воспроизводительных качеств хряков Экспериментально обоснована возможность использования показателя состояния акросомы в сперматозоидах как критерия оценки оплодотворяющей способности спермы и прогнозирования воспроизводительных качеств хряков. Установлено достоверное влияние генотипов некоторых ДНК-маркеров на биологические и продуктивные качества свиней Предложена схема построения маркерных профилей свиней как элемент обоснования селекционной стратегии. Предложены научно и экспериментально обоснованные подходы к разработке программ внедрения маркерной селекции в сельхозпредприятиях.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», п. Дубровицы, ВИЖ, 2004 г.; на международной научно-практической конференции «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», п Дубровицы, ВИЖ, 2004 г; на международной конференции «Развитие ключевых направлений сельскохозяйственных наук в Казахстане: селекция, биотехнология, генетические ресурсы», г. Астана, 2004 г.; на научно-техническом совете Администрации Орловской области, г Орел, 2004 г.; на международной конференции по свиноводству, г. Одесса, 2005 г.; на научной конференции БСХА, г. Минск, 2005 г.; на научной конференции Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ, 2005 г.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Иммуногенетические профили свиней различных породных групп, разводимых в ООО «Троснянский бекон».

• Влияние повышенного уровня спонтанной хромосомной изменчивости на воспроизводительные качества хряков.

• Доля сперматозоидов с визуализируемыми акросомами как критерий оценки качества спермы и прогнозирования воспроизводительных качеств хряков.

• Распределение частот встречаемости аллелей и генотипов некоторых маркерных генов как критерий характеристики генофонда свиней различных породных групп.

• Влияние генотипов некоторых ДНК-маркеров на биологические и продуктивные качества свиней.

• Научно и экспериментально обоснованные подходы к разработке программ внедрения маркерной селекции в предприятии.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. 3 статьи в рецензируемых журналах.

Структура и объем работы. Диссертация написана на 116 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа содержит 43 таблицы и 16 рисунков. Список литературы включает 104 источника, в том числе 34 на иностранном языке.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Краткая характеристика предприятия.

Исследования выполнялись в ООО «Троснянский бекон», лаборатории иммуногенетиш ЗАО «Агро-Индустрия» Орловской области, в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ по схеме, представленной на рисунке 1.

В состав ЗАО «Агро-Индустрия» входят ООО «Троснянский бекон» - маточный репродуктор, ООО «Покровский свинокомплекс» - предприятие по получению трехпородного откормочного гибридного молодняка и ООО «Русское поле» -предприятие по заключительному откорму свиней. ООО «Троснянский бекон» (4258 га пашни) с производственной мощностью 10000 станкомест (до 30 тыс. голов молодняка в год) является ведущим производителем свинины в Орловской области, дающим около 3 тыс. тонн свинины (около 50% от ее валового производства). В объединении функционирует сертифицированная МСХ РФ иммуногенетическая лаборатория (Лицензия № 3925), которая проводит работы по генетическому тестированию достоверности происхождения племенных животных в области, а также осуществляет подбор пар с учетом иммуногенетической совместимости.

В 2003 году в ООО «Троснянский бекон» из Канады были завезены чистопородные свинки и хрячки пород дюрок, йоркшир и ландрас. В настоящее время получена первая генерация чистопородных животных. Генетический потенциал свиней канадской селекции значителен: энергия роста 1,3-1,8 кг в сутки на откорме при затратах на 3-2,8 кг сухого корма 1 кг прироста. Убойный выход реализуемого молодняка составляет 72-75 %, выход мяса в туше - 60-65%. Животные характеризуются отличным развитием: хряки по данным бонитировки в 12 мес. имеют живую массу 180-240 кг, длину туловища 170-195 см и толщину шпика - 9-20 мм.

Рис 1 Схема исследований.

Породные группы свиней, разводимые в ООО «Троснянский бекон»

Свиньи канадской селекции

Свиньи отечественной селекции

Ландрас

Дюрок Йоркшир Ландрас Дюрок Йоркшир

Крупная белая

Помеси

Отбор проб ткани, крови и первичная пробоподготовка

"г~

Анализ ДНК-маркеров

I I I

Анализ генетической структуры популяций -1

Анализ систем групп крови

-С

Цитогенетический анализ

Карио-типиро-вание

Изучение соматических аберраций

Оценка генетической структуры стада

Анализ частоты хромосомныхаберраций

Анализ состояния акросомы

Анализ воспроизво дительных качеств

Отбор животных и подбор родительских пар с учетом генотипов по маркерам

1 ......1 "' ■ —

Анализ продуктивности свиней в зависимости от типа подбора с учетом маркерного генотипа

Анализ роли генетических маркеров как критериев оценки генетического потенциала свиней

2.2. Животные.

В исследованиях участвовали 8 групп свиней различных пород: ландрас канадской селении (п-28); дюрок канадской селекции (п=34); йоркшир канадской селекции (п=54); ландрас отечественной селекции (п=11); дюрок отечественной селекции (п=5); йоркшир отечественной селекции (п=13); крупная белая отечественной селекции (п=18); помесные свиньи отечественной селекции, полученные ротационным скрещиванием свиней пород ландрас, дюрок, йоркшир и крупная белая (п=100);

2.3. Методы исследований.

Исследования иммуногенетических маркеров проводились по 20 эритроцитарным антигенам 10 систем групп крови согласно инструкции «Сыворотки иммуноспецифические для определения групп крови свиней» ¡2001].

Цитогенетические исследования проводили на хряках породы йоркшир. Были исследованы половозрелые хряки в количестве 10 голов, а также потомство 3 хряков в количестве б голов. Приготовление и анализ препаратов хромосом выполнялись по методикам, разработанным в отделе биотехнологии ВИЖ [Кленовицкий и др., 2005}. В зависимости от наличия хромосомных аберраций животные подразделялись на группы с высоким и низким уровнем соматических аберраций. В каждой из групп изучались воспроизводительные качества хряков.

Исследования состояния акросом сперматозоидов проводили на 19 хряках, в том числе 5 хряках породы йоркшир, 8 хряках породы дюрок и 6 хряках породы ландрас канадской селекции. Подсчет количества сперматозоидов с видимыми акросомами осуществляли под световым микроскопом.

Выделение ДНК, постановку ПЦР и анализ полиморфизма ДНК-маркеров выполняли по методикам Центра биотехнологии ВИЖ. В качестве маркеров были выбраны следующие: ген рианодинового рецептора (Ryr1), обуславливающий чувствительность свиней к стрессам; гены эстрогеновго рецептора (ESR), бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) и коактиватора 1 стероидных гормонов (NCOA1), влияющие на многоплодие свиноматок; ген рецептора Е. Coli (ECR F18 I FUT1), связанный с устойчивостью поросят к послеотьемной диарее; ген гамма-субъединицы протеинкиназы A (PRKAG3, RN-ген), влияющий на мясные качества свиней. Исходя из результатов тестирования по ДНК-маркерам, формировали группы животных с различными генотипами, в которых изучали биологические и продуктивные качества свиней в зависимости от генотипов по ДНК-маркерам и типов подбора.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам [Меркурьева и др., 1991].

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

В ходе исследований нами были предложены, научно и экспериментально обоснованы отдельные элементы комплексной системы маркерной оценки свиней, очерчен спектр маркеров, требующих первоочередного внедрения в селекционные программы и дана оценка роли каждого из маркеров в характеристике и повышении генетического потенциала продуктивности племенных свиней.

3.1. Изучение роли иммуногенетических маркеров.

Результаты исследования полиморфизма эритроцитарных антигенов у свиней трех пород канадской селекции суммированы в таблице 1

Табл. 1 Концентрация аллелей эритроцитарных антигенов у основного поголовья свиней канадской селекции._____

Локус, Частоты аллелей Локус, Частоты аллелей

аллели дюрок йоркшир ландрас аллели дюрок йоркшир ландрас

Число голов 34 51 27 Число голов 34 51 L 27

АР 0,270 0,015 0,025 Gа 0,195 0,0651 0,0

А 0,730 _0,985 0,975 Gb 0,805 0,935 1,0

В" 0,480 0,990 0,930 На 0,310 0,150 0,230

Вь 0,520 0,010 0,070 Нь 0,0 0,025 0,0

D' 0,090 0,055 0,0 Н 0,690 0,825 0,770

Db 0,910 0,945 1,0 К* 0,440 0,315 0,415

Е »«а 0,075 0,215 0,0 Кь 0,280 0,400 0,365

Е aef 0,0 0,015 0,0 К 0,280 ПГ285 0,220

Е de9 0,330 0,440 0,160 La 0,780 0,015 0,165

Е dbg 0,415 0,185 0,465 Lb 0,220 0,985 0,835

Е def 0,180 0,145 0,375 Md 0,265 0,160 0,190

Fa 0,360 0,0 0,430 М 0,735 0,840 0,810

Fb 0,640 1,0 0,570

Как показано в таблице 1, изучаемые группы свиней существенно различаются по аплелям групп крови Так, у свиней породы ландрас не обнаружены аллели Da, Еаеэ, Еае(, Ga и Нь, в то время как у свиней породы дюрок отсутствовали аллели Еае( и Нь, а у животных породы йоркшир - аллель Fa Среди исследованных групп свиней наиболее обособленными по локусу L групп крови были свиньи породы дюрок. Частота встречаемости аллеля La у них была выше по сравнению с другими породами и составляла 0,780 по сравнению с 0,015 и 0,165 у свиней пород йоркшир и ландрас, соответственно.

Анализ полученных данных показывает, что свиньи породы ландрас отличаются высокой концентрацией аллеля Edef, что характерно для свиней мясного направления продуктивности. Вместе с тем, у свиней породы дюрок отмечена невысокая концентрация данного аллеля Отличительной особенностью свиней породы йоркшир является высокая концентрация аллелей Еаев и Еое0.

Как показано в таблице 2, основная масса животных исследованных групп характеризовалась относительно высоким уровнем гомозиготное™ в интервале 0,60,8. Однако, если у свиней пород йоркшир и ландрас не было выявлено особей, имеющих уровень гомозиготности 0,5 и менее, то свиньи породы дюрок оказались менее гомогенными На долю животных с уровнем гомозиготности 0,5 и менее приходилось 47% от общего числа исследованных животных.

Учитывая, что существуют противоречивые данные о связи уровня гомозиготности с показателями продуктивности, нами проводятся подборы пар с целью поддержания в потомстве среднего уровня гомозиготности

Табл. 2. Уровень гомозиготности (УГ) у основного поголовья свиней канадской селекции, %._

УГ Породы свиней

йоркшир дюрок ландрас

хряки- евино матки всего хряки- евино матки всего хряки евино матки всего

1,0 0 14,63 11,76 0 0 0 0 0 0

0,9 40,00 12,20 17,65 0 0 0 28,57 21,05 23,08

0,8 40,00 48,78 47,06 6,67 5,26 5,88 14,29 31,58 26,92

0,7 10,00 19,51 17,65 13,33 15,79 14,71 14,29 47,37 38,46

0,6 10,00 4,88 5,88 33,33 31,58 32,35 42,85 0 11,54

0,5 0 0 0 20,00 26,32 23,53 0 0 0

0,4 0 0 0 6,67 5,26 5,88 0 0 0

0,3 0 0 0 13,33 10,53 11,77 0 0 0

0,2 0 0 0 0 5,26 2,94 0 0 0

0,1 0 0 0 6,67 0 2,94 0 0 0

3.2. Изучение роли цитогенетических и акросомальных маркеров.

На следующем этапе выполнения работы нами были проведены исследования на клеточном уровне (лимфоциты крови и сперматозоиды), направленные на научное обоснование целесообразности использования цитогенетических и акросомальных маркеров в комплексной системе маркерной оценки свиней.

3.2.1. Уровень спонтанной хромосомной изменчивости как критерий оценки воспроизводительных качеств хряков.

Проведенные цитогенетические исследования исходных хряков-производителей породы йоркшир канадской селекции не выявили ни одного случая конституциональных нарушений кариотипа, а также отклонений в хромосомной формуле пола. Однако у большинства исходных хряков был обнаружен повышенный уровень клеток, несущих хромосомные аберрации: доля клеток с аберрациями варьировала от 0,0 до 31,9% и составляла в среднем 20,5±3,3%. В том числе частота встречаемости клеток с транслокациями варьировала от 0,0 до 7,4% и составляла в среднем 3,4±0,8. Хромосомные аберрации были представлены транслокациями, хроматидными делециями и разрывами. Кроме того, были выявлены клетки с полиплоидным набором хромосом.

Было установлено, что повышенный уровень хромосомной нестабильности оказывал заметное влияние на воспроизводительные и продуктивные качества хряков (табл. 3). Так, многоплодие свиноматок, осемененных спермой хряков с уровнем хромосомных аберраций более 20% (в среднем 23,8±1,4), было на 1,9 поросенка больше по сравнению с этим показателем у свиноматок, осемененных спермой хряков с уровнем хромосомных аберраций менее 20% (в среднем 14,8±3,9). Аналогичная тенденция отрицательного влияния повышенной доли хромосомных аберраций на воспроизводительные качества хряков сохранялась и по другим показателям: молочности (-5,6 кг), количеству поросят к отъему (-0,7 голов) и массе гнезда к отъему (-10,0 кг).

Табл. 3. Анализ воспроизводительных качеств хряков в зависимости от уровня спонтанной изменчивости б лимфоцитах крови. _

Группа хряков Число отцов, гол. П родукгивность свиноматок

Многоплодие, гол. Молочность, кг Отъем, 35 дн.

Кол-во, гол. Масса гнезда, кг

Более 20% клеток с аберрациями (в среднем 23,8±1,4) 4 8,2±0,6* 33,9±1,8 6,8±0,6 49,3±4,0*

20% и менее клеток с аберрациями (в среднем 14,8*3,9) 4 10,1±0,3* 39,5±3,3 7,5±1,0 59,3±2,1*

Разница достоверна, р<0,05.

Таким образом, цитогенетические маркеры можно рассматривать в качестве одного из методов прогнозирования и оценки воспроизводительных качеств хряков.

Вместе с тем, следует отметить, что повышенная частота встречаемости лимфоцитов, несущих хромосомные аберрации, оказывает существенное влияние на воспроизводство стада в целом только в случае наследования повышенного уровня хромосомной нестабильности. Нами было установлено, что уровень спонтанной изменчивости в потомстве хряков, несущих высокую долю клеток с аберрациями, был существенно ниже. Во всех трех исследованных парах «отец - потомки» он снизился: с 27,5 до 15,0%, с 25,5 до 2,0% и с 21,4 до 5,0%. Доля клеток, несущих хромосомные аберрации, в поколении потомков варьировала у индивидуальных особей от 2 до 20% и составляла в среднем 6,1%, что было в 4,1 раза меньше по сравнению со средним уровнем хромосомной нестабильности, выявленным у отцов (24,8%). Таким образом, повышенный уровень хромосомных аберраций у исходных хряков породы йоркшир канадской селекции, по всей видимости, в меньшей степени затронул половые клетки.

3.2.2. Состояние акросомы как критерий оценки и прогнозирования воспроизводительных качеств хряков.

С целью выявления влияния доли сперматозоидов с сохраненными акросомами (А-сперматозоидов) на воспроизводительные качества хряков-производителей нами был проведен анализ этого показателя в образцах свежевзятой спермы (1), спермы после разбавления (2) и после хранения в течение 24 часов (3) при температуре +4°С, а так же выполнены корреляционные исследования.

Было установлено, что доля А-сперматозоидов в свежевзятой сперме варьировала от 35% до 64%. Добавление разбавителей и 24-часовое хранение спермы в большинстве случаев приводили к снижению доли А-сперматозоидов, соответственно, до 33-61 и 21-64%.

Как проиллюстрировано на рисунке 2, нами была установлена четкая тенденция снижения эффективности осеменения с уменьшением доли А-сперматозоидов в эякуляте. Наиболее целесообразным является использование для осеменения спермы хряков, содержащей 50% и более сперматозоидов с визуализируемыми акросомами. В этом случае эффективность осеменения была в 2,2 раза выше по сравнению с группой животных, осемененных спермой хряков,

содержащей менее 50% спермиев с акросомами Существенных различий в многоплодии свиноматок и количестве живых поросят в зависимости от доли спермиев с акросомами выявлено не было (табл. 4).

Рис. 2. Эффективность осеменения свиноматок в зависимости от доли сперматозоидов с акросомами ^свежая неразбавленная сперма).

60 и более 50 и более 40 и более менее 40 Доля сперматозоидов с акросомами, %

Табл. 4. Воспроизводительные качества хряков в зависимости от доли сперматозоидов с визуализируемыми акросомами (свежевзятая сперма).

Доля сперматозоидов с акросомами, % Осеменено свиноматок, гол Опоросилось свиноматок, гол Эффективность осеменения, % Многоплодие, гол I Число живых поросят, гол

50 и более 32 22 68,8+8,2* 8,95+0,55 8,29+0,66

менее 50 22 7 31,8+9,9* 9,29±1,13 8,50+1,12

'разница достоверна (р<0,01).

Анализ эффективности осеменения свиноматок в зависимости от доли А-сперматозоидов в сперме хряков после ее разбавления выявил аналогичную зависимость (табл. 5). Эффективность осеменения свиноматок спермой хряков, несущих 50% и более сперматозоидов с акросомами в разбавленной сперме, составила 73,7±10,1%, что было в 1,7 раза выше по сравнению с величиной данного показателя в группе свиноматок, осемененных спермой хряков, содержащей менее 50% А-сперматозоидов.

Таким образом, показатель доли сперматозоидов, несущих визуализируемые акросомы в сперме хряков-производителей (свежеполученной и разбавленной), можно использовать в качестве дополнительного критерия оценки качества разбавителей и прогнозирования эффективности осеменения свиноматок.

Табл 5 Воспроизводительные качества хряков в зависимости от доли сперматозоидов с визуализируемыми акросомами (разбавленная сперма).

Доля сперматозоидов с акросомами, %* Осеменено свиноматок, гол Опоросилось свиноматок, гол Эффективность осеменения, % Многоплодие, гол Число живых поросят, гол

50 и более 19 14 73,7+10,1" 8,93+0,82 8,69+0,80

менее 50 35 15 42,9+8,4** 9,13+0,58 8,00*0,81

* среднее по двум разбавителям; ** разница достоверна (р<0,01).

3.3. Изучение роли некоторых ДНК-маркеров биологических и продуктивных качеств свиней.

На первом этапе исследований в каждой из породных групп свиней были определены генотипы животных по ДНК-маркерам, рассчитаны частоты встречаемости генотипов и аллелей, дана характеристика генетической структуры изучаемых групп. На втором этапе был проведен подбор родительских пар с учетом генотипа по некоторым ДНК-маркерам. На третьем этапе были выполнены корреляционные исследования с целью установления связи генотипов некоторых ДНК-маркеров с уровнем проявления признаков продуктивности свиней. На основании полученных результатов нами была дана оценка роли каждого из изучаемых маркеров и предложена комплексная программа оценки свиней на основе ДНК-маркеров.

3.3.1. Ген рианодинового рецептора Яуг1 • главный ген, обуславливающий чувствительность свиней к стрессам.

Исследование свиней по вариантам главного гена, обуславливающего чувствительность свиней к стрессам - рианодинового рецептора (ИуП), не выявило наличия аллеля п, как среди свиней отечественной селекции пород дюрок (п=5), йоркшир (п=13), ландрас (п=11), крупная белая (п=18) и помесных свиней (п=100), так и среди чистопородных свиней канадской селекции пород дюрок (п=34), йоркшир (п=28) и ландрас (п=54).

Таким образом, все протестированное поголовье свиней ООО «Троснянский бекон» имеет генотип NN. является стрессустойчивым и свободным от стресс-чувствительного аллеля п (неносители), и поэтому может быть без ограничений использовано в разведении. Независимо от стрессовой чувствительности партнеров по спариванию, в потомстве данных животных не ожидается проявления стрессовой чувствительности. С целью исключения появпения в стаде стрессчувствительного аллеля п необходимо проведение ДНК-диагностики гена Яуг1 у всех животных, вводимых в стадо из вне.

3.3.2. Маркеры многоплодия свиноматок.

В ходе выполнения работы нами были проведены исследования полиморфизма трех ДНК-маркеров многоплодия свиноматок - генов эстрогенового рецептора (ЕЗЯ), бета-субъединицы фолликуло-стимулирующего гормона (РБНВ) и

А1-коактиватора ядерных рецепторов (МСОА1), изучено их влияние на многоплодие свиноматок различных пород, оценена роль и предложены критерии использования каждого из них в программах, направленных на повышение многоплодия свиноматок.

3.3.2.1. Ген эстрогенового рецептора (ЕЗД).

Изучение полиморфизма гена эстрогенного рецептора у свиней различных групп выявило следующие частоты встречаемости аллелей и генотипов (табл. 6).

Табл. 6. Частоты встречаемости аллелей и генотипов гена ЕБЯ у свиней различных породных групп._

Порода Число Частоты встречаемости

голов генотипы аллели

АА АВ ВВ А В

Свиньи отечественной селекции

Дюрок отечеств. 5 0,400 0,600 0,000 0,700 0,300

Йоркшир отечеств. 13 0,385 0,615 0,000 0,692 0,308

Ландрас отечеств. 11 0,364 0,545 0,091 0,636 0,364

Крупная белая 18 0,389 0,556 0,055 0,750 0,250

Помесные свиньи 100 0,550 0,370 0,080 0,785 0,215

Свиньи канадской селекции

Дюрок канадский 34 1 0 0 1 0

Йоркшир канадский 28 1 0 0 1 0

Ландрас канадский 54 1 0 0 1 0

Частоты встречаемости желательных генотипов и аллеля выделены жирным шрифтом.

Как следует из данных таблицы 6, желательный с точки зрения многоплодия аллель В гена ЕЭЯ был выявлен только у свиней отечественной селекции с частотой встречаемости от 0,215 до 0,364. Доля животных с генотипом ВВ составляла 0-9,1 %.

Анализ многоплодия помесных свиней в первом опоросе не выявил превосходства свиноматок с генотипом ВВ (п=3) над животными с генотипом АА (п=30) и показал лишь незначительное превосходство свиноматок с генотипом АВ (п=22): +0,24 поросенка. Во втором опоросе различия между генотипами АВ-АА и ВВ-АА были более существенны и составляли, соответственно, 1,60 и 1,90 поросенка. В среднем по двум опоросам, свиноматки с генотипами ВВ и АВ превосходили животных с генотипом АА, соответственно, на 0,51 и 1,01 поросенка на опорос.

Изучение влияния генотипов по гену ЕЭЯ на многоплодие свиноматок породы йоркшир не выявило заметных различий. Так, свиноматки с генотипом АА (п=4) имели среднее многопподие по первому опоросу 9,75±1,49, в то время как свиноматки с генотипом АВ (п=5) - 9,80±0,86. Отсутствие заметных различий можно объяснить, с одной стороны, отсутствием в выборке животных с генотипом ВВ, с другой стороны, небольшим числом животных в группе.

Анализ многоплодия свиноматок породы ландрас отечественной селекции в зависимости от генотипа по гену ЕБЯ показал, что по результатам первого опороса животные с генотипом АА (п=4) имели среднее многоплодие 9,75±0,75, а животные с генотипом АВ (п=5) -10,75±0,76 поросенка на опорос.

Превосходство свиноматок крупной белой породы с генотипом АВ (п=8) над животными с генотипом АА 9п=6) составляло 0,38 поросенка на опорос. Во втором опоросе различия меходу генотипами были более существенны и составляли 4,00 поросенка на опорос. В среднем по двум опоросам, свиноматки с генотипом АВ превосходили животных с генотипом АА на 1,88 поросенка на опорос (р<0,05).

Приведенные данные свидетельствуют о том, что ген эстрогенового рецептора может быть использован для оценки и последующего отбора свиней отечественной селекции различных пород, обладающих повышенным многоплодием.

Гомогенность групп свиней канадской селекции по гену ЕЭЯ (см. табл. 6) требует использования в оценке генетического потенциала многоплодия в этих фуппах свиней других генетических маркеров.

3.3.2.2. Ген бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (Р8НВ).

Распределение частот встречаемости генотипов гена Р8НВ у свиней различных пород, разводимых в ООО «Троснянский бекон» суммировано в таблице 7.

Табл. 1. Распределение частот встречаемости генотипов гена РвНВ у свиней различных породных групп.__

Порода Число голов Частоты встречаемости генотипов

АА АВ ВВ

Свиньи отечественной селекции

Дюрок отечеств. 5 0 0 1,000

Йоркшир отечеств. 13 0 0 1,000

Ландрас отечеств. 11 0 0 1,000

Крупная белая 18 0 0,055 0,945

Свиньи канадской селекции

Дюрок канадский 34 0,03 0,235 0,735

Йоркшир канадский 54 0 0,111 0,889

Ландрас канадский 28 0,071 0,179 0,750

Желательный генотип и частоты его встречаемости выделены жирным шрифтом.

Как следует из данных таблицы 7, три из четырех исследованных породных групп свиней отечественной селекции (дюрок, ландрас, йоркшир) оказались гомогенными по гену РЭИВ и все несли желательный генотип ВВ. Частота встречаемости желательного генотипа ВВ у свиней аналогичных пород канадской селекции варьировала от 73,5% у свиней породы дюрок до 88,9% у свиней породы йоркшир, а доля желательного аллеля В составляла в зависимости от породы от 0,839 у свиней породы ландрас до 0,944% - у породы йоркшир. У свиней крупной белой породы на долю животных с гомозиготным генотипом ВВ приходилось 94,5% при частоте встречаемости аллеля В 0,972.

Анализ влияния генотипов гена РЭИВ на многоплодие свиноматок пород дюрок и йоркшир показал стойкое положительное влияние аллеля В гена РЭНВ, как на число поросят при рождении, так и на число живых поросят (табл. 8).

Табп 8. Многоплодие свиней пород дюрок и йоркшир канадской селекции в зависимости от генотипа по гену Ё5НВ (1-й опорос)._

Сравниваемые Разница в показателях

генотипы Дюрок канадский Йоркшир канадский

Число поросят Число живых Число поросят Число живых

при рождении поросят при рождении поросят

ВВкАВ* +1,89 +1,96 +0,31 +0,30

ВВкАВ" +2,17 +2,36 +1,47 +2,25

* с учетом генотипа по ЕвЯ (все свиноматки имеют генотип АД);

" с учетом генотипов по ЕвЙ и ЫС0А1 (все свиноматки имеют генотипы АА/А1А1, соответственно).

Меньшие различия между генотипами у свиней породы йоркшир могут быть обусловлены обратным действием аллелей других маркеров многоплодия. Подтверждением данной гипотезы служит тот факт, что в случае генетической однородности изучаемых групп по другим маркерам многоплодия - ЕЗИ и МСОА1 (все животные имеют генотипы АА/А1А1) различия в многоплодии свиноматок с разными генотипами по РЭНВ были более существенны.

Хотя полученные нами результаты, несомненно, требуют подтверждения на большем поголовье животных, уже сейчас можно рекомендовать использование данного маркера в практике для повышения генетического потенциала многоплодия пород и линий животных, в первую очередь, в стадах, в которых отсутствует желательный аллель В гена ЕЭЯ или его частота очень низкая (свиньи зарубежных пород, а также свиньи мясных и беконных пород отечественной селекции), а также в стадах, в которых максимальный генетический потенциал многоплодия с использованием гена ЕЭЯ уже достигнут.

3.3.2.3. Ген коактиватора 1 ядерных рецепторов (ЫСОА1).

В рамках выполнения работы нами были изучены частоты встречаемости аллелей и генотипов еще одного потенциального маркера многоплодия - гена коактиватора 1 ядерных рецепторов (!МСОА1). Анализ показал относительно высокие частоты встречаемости желательного генотипа А1А1 - от 78,6% у свиней породы ландрас до 91,2% у свиней породы дюрок (табл. 9) при частоте встречаемости аллеля А1 - от 0,88 у свиней породы ландрас до 0,96 у свиней породы дюрок.

Табл. 9. Распределение частот встречаемости генотипов гена ЫСОА1 у свиней канадской селекции различных породных групп._

Порода Число голов Частоты встречаемости генотипов

А1А1 | А1А2 А2А2

Свиньи канадской селекции

Дюрок канадский 34 0,912 0,088 0,000

Йоркшир канадский 54 0,833 0,130 0,037

Ландрас канадский 28 0,786 0,179 0,035

Желательный генотип и частоты его встречаемости выделены жирным шрифтом.

Анализ влияния генотипов маркера МЮА1 на многоплодие свиноматок породы йоркшир показал превосходство свиноматок с генотипом А1А1 над животными с гетерозиготным генотипом на 1,0 поросенок на опорос. Различия в пользу генотипа А1А! сохранялись и по другим показателям собственной продуктивности свиноматок: числу живых поросят (+1,32), числу поросят в возрасте 21 дн. (+0,96), числу поросят к отъему в возрасте 45 дн. (+0,65) (табл. 10).

Табл. 10. Многоплодие свиноматок трех пород канадской селекции в зависимости от генотипа по ЫСОА1 (1-й опорос)._

Сравниваемые генотипы Разница в показателях многоплодия (число поросят)

при рождении живых поросят в 21 день к отъему

А1А1 КА1А2* +1,00 +1,32 +0,96 +0,65

А1А1 к А1А2" +1,48 +2,10" +2,19"' +1,90*"

желательный аллель выделен жирным шрифтом; * с учетом генотипа по ESR (все свиноматки имеют генотип АА); " с учетом генотипов по ESR и FSHB (все свиноматки имеют генотипы АА/А1А1); разница между генотипами достоверна (р<0,05).

Исследование влияния генотипов гена NCOA1 на фоне одинаковых генотипов по генам ESR / FSHB (все свиноматки имели генотипы АА / ВВ) на многоплодие показало еще более существенные различия (табл. 10).

Полученные данные свидетельствуют, что проведение ДНК-диагностики выбранных нами маркеров ESR, FSHB и NCOA1 служит реальным рычагом повышения многоплодия свиноматок в программах разведения свиней различных пород. Выбор спектра маркеров многоплодия свиноматок определяется породным составом стада, а также частотами встречаемости желательных генотипов каждого из маркеров в стаде.

3.3.3. Ген рецептора Е. coli F18 (ECR F18 / FUT1) - генетический маркер устойчивости к колибактериозу.

С целью выявления генетического потенциала устойчивости поросят к лослеотъемной диарее нами были выполнены исследования частот встречаемости генотипов соответствующего ДНК-маркера - гена ECR F18 / FUT1 у свиней различных породных групп (табл. 11).

Как показано в таблице 11, частота желательного генотипа АА в исследованных группах сильно варьировала: у свиней канадской селекции - от 7,4% у породы йоркшир до 29,4% у породы дюрок, а у свиней отечественной селекции - от 0,0% у свиней породы дюрок до 18,2% у свиней породы ландрас. Частота встречаемости аллеля А варьировала от 25,5% у помесных свиней отечественной селекции до 44,1% у свиней породы дюрок канадской селекции.

В целом популяция свиней ООО «Троснянский бекон» характеризуется высокими частотами встречаемости, как желательного генотипа АА, так и аллеля А, что обеспечивает достаточное количество желаемого исходного материала и является хорошей предпосылкой для селекции линий свиней, обладающих повышенной устойчивостью к послеотъемной диарее.

Табл 11. Распределение частот встречаемости генотипов гена ECR F1B/FUT1 у свиней канадской селекции различных породных групп._

Порода Число голов Частоты встречаемости генотипов

АА AG GG

Свиньи отечественной селекции

Дюрок отечеств. 5 0,000 0,600 0,400

Йоркшир отечеств. 13 0,154 0,461 0,385

Ландрас отечеств. 11 0,182 0,454 0,364

Крупная белая 18 0,111 0,500 0,389

Помесные свиньи 100 0,090 0,330 0,580

Свиньи канадской селекции

Дюрок канадский 34 0,294 0,294 0,412

Йоркшир канадский 54 0,074 0,407 0,519

Ландрас канадский 28 0,107 0,393 0,500

Поскольку наличие в генотипе свиней аллеля G гена ECR F18 / FUT1 связано с заболеваемостью поросят колибактериозом, а, следовательно, их выбытием, определяющую роль играет изучение такого показателя, как сохранность.

Анализ генотипов родительских пар по гену ECR F18 / FUT1 выявил ряд возможных комбинаций, которые в зависимости от ожидаемого по закону Менделя распределения генотипов потомства были сгруппированы в 5 групп (обозначены от 1 до 5) в порядке уменьшения потенциальной генетической устойчивости поросят к колибактериозу и, как следствие, снижения сохранности.

Как показано в таблице 12, тип подбора родительских пар с учетом генотипа по гену ECR F18 / FUT1 оказывает определенное влияние на показатели продуктивности свиноматок. Сопоставляя сохранность поросят в группах с потенциальной максимальной (группа 1) и минимальной (группа 5) устойчивостью поросят к послеотъемной диарее, следует отметить различия в пользу группы 1 : +2,5% в 21 день и +8,9% в 45 дней.

Табл. 12. Сохранность поросят канадской селекции в зависимости от типа подбора родительских пар с учетом генотипа по гену

ECR F18/FUT1.

Группа Число опоросов, п Тип подбора Ожидаемые генотипы потомства Сохранность

в 21 дн„ % в 45 дн., %

1 7 АА х AG, AG х АА 50% АА, 50% AG 82,6±4,8 82,6+4,8

2 12 AG х AG 25% АА, 50% AG, 25% GG 84,8±4,9 82,4+5,0

3 13 АА х GG, GG X АА 100% AG 76,0±5,5 72,8±6,1

4 22 AG x GG, GG x AG 50% AG, 50% GG 83,2±3,6 81,5±3,6

5 22 GGxGG 100%GG 80,1 ±5,8 73,7±4,6

Суммируя, можно заключить, что ген ECR F18 / FUT1 является потенциальным генетическим маркером, влияющим на сохранность поросят. С целью повышения сохранности поросят, мы рекомендуем внедрение в сельхозпредприятиях ДНК-

диагностики маркера ECR F18 / FUT1 у основных хряков и свиноматок с целью последующего подбора пар с учетом генотипа по данному гену. При этом, для повышения эффективности свиноводства при подборе следует отдавать предпочтение животным, несущим в своем генотипе аллель А, нивелируя пары с сочетанием генотипов GG х GG.

3.3.4. Ген гамма-субъединицы протеинкиназы A (PRKAG, RN-ген) как маркер мясных качеств свиней.

Известно, что предпочтительными с точки зрения селекции аллелями RN-гена являются 52G, 1991 и 200R. В ходе выполнения диссертационной работы нами были выполнены исследования полиморфизма RN-гена в этих позициях (табл. 13).

Табл. 13. Частоты встречаемости желательного генотипа 52ва/19911/200ЯЯ гена РЙРКАв у свиней различных породных групп._

Группа свиней Число голов Генотип 52GG/19911/200R R

п %

Дюрок отечеств. 5 0 0,0

Дюрок канадский 34 3 8,8

Йоркшир отечеств. 13 2 15,4

Йоркшир канадский 54 2 3,7

Ландрас отечеств. 11 2 18,2

Ландрас канадский 28 1 3,6

Крупная белая 18 1 5,6

Максимальными частотами желательного генотипа 5260/199И/200НЯ характеризовались свиньи пород йоркшир (15,4%) и ландрас (18,2%) отечественной селекции, что было значительно выше по сравнению со свиньями аналогичных пород канадской селекции (соответственно, 3,7 и 4,6%). У свиней породы дюрок отмечалась обратная зависимость. Доля желательного генотипа у свиней породы дюрок канадской селекции составляла 8,8%, в то время как у свиней отечественной селекции желательный генотип вообще выявлен не был. У свиней крупной белой породы желательный генотип встречался с частотой 5,6%.

Таким образом, проведенные нами исследования выявили существенные различия в частотах аллелей и генотипов ЯМ-гена между свиньями отечественной и канадской селекции. Если у свиней породы дюрок значительно большей долей желательного аллеля и генотипа характеризовались свиньи канадской селекции, то у свиней пород ландрас и йоркшир более высокие доли желательных аллелей и генотипов отмечались у свиней отечественной селекции.

Учитывая относительно низкие частоты встречаемости желательных генотипов RN-гeнa у свиней канадской селекции, разводимых в ООО «Троснянский бекон», нами запланировано поэтапное внедрение оценки и отбора животных по данному маркеру. На первом этапе, следует проводить отбор животных, несущих желательный генотип вв в позиции 52 ЯЫ-гена без учета генотипа в позиции 199. На втором этапе, когда все хряки будут иметь желательный генотип вв ПЫ-гена, следует приступать к отбору животных, учитывая в качестве дополнительного критерия генотип в позиции 199 ЯЫ-гена.

3.3.5. Характеристика свиней по комплексу ДНК-маркеров.

Приведенные выше данные о распределении частот встречаемости аллелей и генотипов некоторых ДНК-маркеров признаков продуктивности у свиней различных породных фупп, разводимых в ООО «Троснянский бекон», а так же о влиянии генотипов маркерных генов на продуктивность показывают потенциальную возможность использования изучаемых маркеров в разведении и селекции свиней. Однако выбор стратегии внедрения маркерной селекции во многом зависит от комплексных генотипов животных стада по ДНК-маркерам.

В таблицах 14,15 суммированы данные о частотах встречаемости желательных генотипов и аллелей у исследуемых групп свиней.

Табл. 14. Частоты встречаемости желательных генотипов изучаемых ДНК-маркеров признаков продуктивности у свиней._

Группа Частота встречаемости желательного генотипа

Число голов I ОС о ш СЕ СО ш РЭИВ 1МСОА1 ГГО-ген

52 199 200

Желательный генотип NN АА ВВ ВВ А1А1 вв II НИ

Дюрок отечес. 5 1,000 0,000 0,000 1,000 0,000 0,000 1,000

Дюрок канад. 34 1,000 0,294 0,000 0,735 0,912 0,618 0,147 1,000

Йоркшир отеч. 13 1,000 0,154 0,000 1,000 0,231 0,385 1,000

Йоркшир канад. 54 1,000 0,074 0,000 0,463 0,689 0,130 0,056 1,000

Ландрас отечес. 11 1,000 0,167 0,167 1,000 0,417 0,250 1,000

Ландрас канад. 28 1,000 0,107 0,000 0,893 0,786 0,500 0,071 1,000

Крупная белая 18 1,000 0,111 0,056 0,944 0,222 0,167 1,000

Помесн. свиньи 100 1,000 0,090 0,550

Табл. 15. Частоты встречаемости желательных аллелей изучаемых ДНК-маркеров признаков продуктивности у свиней. ________

Группа Частота встречаемости желательного генотипа

Число голов 1" ОС о ш ос со ш РБНВ МСОА1

52 199 200

Желательный аллель N А В В А1 б 1 Я

Дюрок отечес. 5 1,000 0,300 0,300 1,000 0,300 0,200 1,000

Дюрок канад. 34 1,000 0,441 0,000 0,853 0,956 0,779 0,426 1,000

Йоркшир отеч. 13 1,000 0,385 0,308 1,000 0,577 0,654 1,000

Йоркшир канад. 54 1,000 0,278 0,000 0,519 0,767 0,444 0,306 1,000

Ландрас отечес. 11 1,000 0,375 0,875 1,000 0,583 0,458 1,000

Ландрас канад. 28 1,000 0,304 0,000 1,000 0,875 0,714 0,232 1,000

Крупная белая 18 1,000 0,361 0,250 0,972 0,472 0,361 1,000

Помесн. свиньи 100 1,000 0,255 0,785

Анализируя данные, представленные в таблицах 14 и 15, следует отметить относительно низкие частоты встречаемости желательных генотипов ряда маркерных генов, что не позволяет рекомендовать их одновременное использование в селекции. В этой связи, при разработке стратегии использования ДНК-маркеров в качестве дополнительных критериев оценки животных необходимо планировать их поэтапное внедрение.

Учитывая относительно высокие частоты встречаемости желательных генотипов и аллелей по маркеру устойчивости к колибактериозу (ECR F18 / FUT1) и по маркерам многоплодия FSHB и NCOA1 на первом этапе внедрения следует рекомендовать отбор ремонтных хрячков и свинок с учетом генотипов по этим трем маркерам без учета генотипов животных по RN-гену.

Для разработки селекционной стратегии нами предлагается построение маркерных профилей свиней, в которых отражены генотипы животных по ДНК-маркерам. При этом группировку животных осуществляют, исходя из генотипов животных по ДНК-маркерам, внедрение которых в селекционные программы запланировано на первом этапе (в данном случае ECR F18 / FUT1).

Маркерные профили хряков и свиноматок с желательными и промежуточными генотипами по гену ECR F18 / FUT1 на примере породы дюрок канадской селекции показаны в таблице 16.

Как показано в таблице 16, размер выборки животных для дальнейшего воспроизводства сужается с увеличением количества маркеров, используемых для отбора (границы выборки выделены жирной линией). Так, например, из 11 протестированных хрячков породы дюрок канадской селекции, 7 голов несут желательный генотип по гену ECR F18 / FUT1, что составляет 64%. Расширяя спектр маркеров за счет учета генотипов животных по маркерам многоплодия FSHB и NCOA1, мы снижаем число животных с желательными маркерными генотипами до 6 голов (55%), а число хрячков, несущих желательные генотипы и по RN-гену в позициях 52 и 199, снижается, соответственно, до 4 (36%) и 1 (9%) головы.

Аналогичная картина наблюдается и при анализе маркерного профиля свиноматок породы дюрок канадской селекции. С вовлечением в оценку животных большего числа маркеров доля животных, несущих желательные генотипы снижается (табл. 16).

Построение маркерных профилей свиней позволяет планировать так называемую «жесткость» отбора. «Жесткий» отбор по маркерам предусматривает использование в дальнейшем воспроизводстве только животных, несущих желательные генотипы. При «мягком» отборе в воспроизводстве используются животные, имеющие промежуточные (гетерозиготные) генотипы.

Анализируя данные, представленные в таблице 16, можно сделать вывод, что для хряков породы дюрок может быть рекомендовано проведение «жесткого» отбора по генам ECR F18 / FUT1, FSHB и NCOA1, в то время как для свиноматок породы дюрок целесообразно использовать «мягкий» отбор по вышеназванным генам.

Результаты сравнительного анализа маркерных профилей свиней канадской селекции схематично представлены на рисунке 3.

Табл 16. Маркерный профиль выборки хряков и свиноматок породы дюрок канадской селекции, отобранной для воспроизводства.

Исходное число голов: хрячки -11, свинки - 23

РБНВ N00 ЯМ-ген

А1 200 52 199

вв А1А1 яя 66 II

вв А1А1 № ее IV

вв А1А1 ЯЯ ее IV

вв А1А1 ЯЯ ее

вв А1А1 ЯЯ

АВ А1А1 ЯЯ ей IV

вв А1А1 ЯЯ IV

АВ А1А1 ЯЯ

1514 4540 св NN АА |

1503 4521 св NN АА

1515 8625 св NN АА

1480 4511 св NN Ав |

1485 4695 св NN АО

1481 4552 св NN Ав

1513 2785 св NN Ав |

1490 8623 св NN Ав

1468 4513 св NN АС

1486 2682 св NN Ав

1508 4531 св NN Ав |

вв А1А1 ЯЯ ее Н

ВВ А1А1 ЯЯ № ее

ВВ А1А2 ЯЯ

ВВ А1А1 ЯЯ

вв А1А1 ЯЯ ее

вв А1А1 ЯЯ I ее I IV |

86 А1А1 ЯЯ ИВ

АВ А1А1 йя 66 IV

АВ А1А1 ЯЯ Об IV

А1А1 ЯЯ ее IV

■ желательный генотип;

- промежуточный генотип;

- нежелательный генотип

- группа животных, рекомендуемая для дальнейшего воспроизводства «Жесткий» отбор).

] - группа животных, рекомендуемая для дальнейшего воспроизводства («Мягкий» отбор).

Приведенные на рисунке 3 маркерные профили свиней помогают разрабатывать стратегию внедрения оценки животных по ДНК-маркерам в разведение и селекцию свиней В случае если в предприятии в качестве первоочередной стоит задача повышения многоплодия свиноматок, то аналогичные профили выстраивают для животных, имеющих желательные и промежуточные генотипы по ДНК-маркерам, влияющим на многоплодие свиноматок

Рис. 3. Сравнительный анализ маркерных профилей свиней канадской селекции в зависимости от генотипа по гену ECR F18/FUT1 (АА и AA+AG).

Дюрок (хряки)

П)П мроо) ECR FSHB NOOAI Ю(Я) Wi(19?

Йоркшир (хряки)

vt mm ЕСТ FSHB HCQA1 (ЯМ ЯИ(199

Ландрас (хряки)

Яут1 RN(200) ECR fS№ NCCA! ГЦ (Si ПК(!99

Дюрок (свиноматки)

Ryrl mm ECR FSW NCOAI ПВД SN(tS?

Йоркшир (свиноматки)

%rl №(ХЦ ECR FSW NC0A1 ИКМ fW(l»

Ландрас (свиноматки)

Ryri mm ecr fsw ncoai тя mm

Ось ординат - доля животных с желательными генотипами, %

Ось абсцисс -ДНК-маркер.

Генотип по ECR F18 í FUT1: АА - желательный, AA+AG- промежуточный.

Следует особо подчеркнуть, что рекомендуемые нами методы оценки свиней по ДНК-маркерам следует использовать только в качестве дополнительных критериев к классическим методам оценки и отбора животных по фенотипу. Только после проведения отбора животных по комплексу фенотипических показателей, следует принимать во внимание их маркерный генотип.

4. ВЫВОДЫ.

1. Выявлены существенные различия в аллелофонде свиней трех пород канадской селекции, разводимых в ООО «Троснянский бекон», по 10 локусам групп крови У свиней породы ландрас не обнаружены аллели Оа, Е аеэ, Еае(, ва, Нв то время как у свиней породы дюрок отсутствуют аплели Еае( и На у свиней породы йоркшир - аллель Установлено, что 53,3-76,9% свиней исследованных групп характеризовалась уровнем гомозиготности в интервале 0,6-0,8 Показана необходимость увеличения генетического разнообразия по эритроцитарным антигенам.

2. Анализ уровня соматических хромосомных аберраций у хряков породы йоркшир показал, что в среднем 20,5±3,3% лимфоцитов крови несли аберрации хромосом Установлено, что многоплодие свиноматок, осемененных спермой хряков с уровнем аберраций более 20% (в среднем 23,8±1,4), было на 1,9 поросенка больше по сравнению с этим показателем у свиноматок, осемененных спермой хряков с уровнем аберраций менее 20% (в среднем 14,8+3,9) (р<0,05). Аналогичная тенденция проявлялась и по другим показателям продуктивности свиноматок: молочности (-5,6 кг), количеству поросят к отъему (-0,7 голов) и массе гнезда к отъему (-10,0 кг).

3 Выявлено достоверное влияние доли сперматозоидов с визуализируемыми акросомами на эффективность осеменения свиноматок. При использовании для осеменения спермы хряков, содержащей более 50% А-сперматозоидов в неразбавленной сперме, эффективность осеменения была в 2,2 раза выше по сравнению с группой животных, осемененных спермой хряков, содержащей менее 50% спермиев с акросомами - соответственно, 68,8+8,2 и 31,8+9,9% (р<0,01). При использовании в качестве критерия доли А-сперматозоидов в сперме после разбавления эффективность осеменения в группах различалась в 1,7 раза и составляла, соответственно, 73,7+10,1 и 42,9±8,4% (р<0,01).

4. Установлено, что изучаемое поголовье свиней, как отечественной селекции пород дюрок (п=5), йоркшир (п=13), ландрас (п=11), крупная белая (п=18) и их помесей (п=100), так и канадской селекции пород дюрок (п=34), йоркшир (п=28) и ландрас (п=54) имеет генотип NN гена Яуг1 и является стрессустойчивым.

5. Выявлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов гена эстрогенового рецептора (ЕБЯ) у свиней отечественной и канадской селекции Если у свиней отечественной селекции рв=0,215-0,364, то свиньи канадской селекции оказались гомогенными по данному гену (рв=0,0) По результатам анализа двух опоросов установлено достоверное превосходство помесных свиноматок с генотипами ВВ и АВ гена ЕБЯ над животными с генотипом АА, соответственно, на 0,51 и 1,01 поросенка на опорос, и свиноматок крупной белой породы с генотипом АВ над животными с генотипом АА - на 1,88 поросенка на опорос (р<0,05).

6 Показана гомогенность групп свиней отечественной селекции пород дюрок, ландрас, йоркшир по гену Р8НВ - бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (рв=1,0). Доля животных с генотипом ВВ у свиней аналогичных пород канадской селекции варьировала от 73,5% у свиней породы дюрок до 88,9% у свиней

породы йоркшир (рв=0,839-0,944). У свиней крупной белой породы на долю животных с генотипом ВВ приходилось 94,5% (рв=0,972). Выявлено превосходство свиноматок пород йоркшир и дюрок с генотипами ВВ гена FSHB над животными с генотипом АА по многоплодию, соответственно, на 0,31 и 1,96 поросенка на опрос.

7. Анализ полиморфизма гена коакгиватора А1 ядерных рецепторов (NCOA1) у свиней канадской селекции показал, что на долю животных с желательным генотипом А1А1 приходилось от 78,6% у свиней породы ландрас до 91,2% у свиней породы дюрок (pai=0,875-0,956). Установлено превосходство свиноматок породы йоркшир с генотипом А1А1 над животными с генотипом А1А2 по многоплодию на 1,00 поросенка на опорос.

8. Изучен генофонд свиней по гену рецептора Е. Coli (ECR F18/FUT1). Частота встречаемости желательного генотипа АА варьировала у свиней канадской селекции от 7,4% у породы йоркшир до 29,4% у породы дюрок, а у свиней отечественной селекции - от 0,0% у породы дюрок до 18,2% у породы ландрас. Показано, что сохранность поросят в группе с типом подбора родительских пар АА х AG и AG х АА, была выше на 2,5% в 21 день и на 8,9% в 45 дней по сравнению с группой поросят, полученных при подборе по типу GG х GG.

9. Популяционно-генетические исследования полиморфизма гена PRKAG3 (RN-гена) показали, что максимальными частотами встречаемости желательного генотипа 52GG/199H/200RR характеризовались свиньи пород йоркшир (15,4%) и ландрас (18,2%) отечественной селекции, что было значительно выше по сравнению со свиньями аналогичных пород канадской селекции (соответственно, 3,7 и 4,6%). У свиней породы дюрок отмечалась обратная зависимость (соответственно, 8,8 и 0,0%). У свиней крупной белой породы желательный генотип встречался с частотой 5,6%.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Сельхозпредприятиям, занимающимся разведением и селекцией свиней, с целью повышения эффективности селекционно-племенной работы рекомендуем использовать в качестве дополнительных критериев при отборе и подборе свиней комплексную систему маркерной оценки на основе применения цитогенетических, иммуногенетических и ДНК-маркеров.

2. С целью оптимального выбора стратегии внедрения маркерной селекции в предприятии рекомендуем построение индивидуальных маркерных профилей свиней по предложенной нами схеме.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Адаменко В.А. Генотипирование свиней ООО «Троснянский бекон» по гену ß-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) как маркера плодовитости свиней // Материалы международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», Дубровицы, ВИЖ, 2004, с. 30-34.

2 Адаменко В.А., Шавырина К М , Зиновьева Н А Характеристика популяции свинец ООО «Троснянский бекон» Орловской области по генетическим маркерам // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», научные труды ВИЖ, 2004, вып. 62, Т 2, с. 7-12.

3. Коновалова E.H., Адаменко В.А., Шавырина K.M., Зиновьева Н.А Изучение полиморфизма гена рецептора Е Coli F18 / FUT1 и его влияние на хозяйственно-полезные признаки свиней II Сборник трудов международной конференции «Развитие ключевых направлений сельскохозяйственных наук в Казахстане' селекция, биотехнология, генетические ресурсы», 2004, Т. 2, с 81-86

4. Адаменко В.А., Лобан H.A., Шейко Р И. Эффективность разведения свиней канадской селекции // Сборник материалов 12 международной конференции по свиноводству, Одесса, 15-17 сентября 2005 г.

5. Адаменко В.А., Лобан Н А , Шейко Р И Опыт разведения и эффективность использования свиней пород' йоркшир, дюрок и ландрас канадской селекции II Сборник материалов научной конференции БСХА, Минск, 16-17 июня 2005 г.

6. Зиновьева Н.А, Шавырина K.M., Адаменко В.А,, Енин Ю М., Гуденко Н.Д. Оценка животных по генетическим маркерам // Промышленное и племенное свиноводство, 2005, № 2, с 18-20

7 Зиновьева H.A., Серов В.М., Шавырина КМ, Адаменко В.А. Внедрение системы маркерной селекции в свиноводство Орловской области // Животноводство России, 2005, с 28-30.

8. Адаменко В.А., Зиновьева НА, Лобан H.A., Шейко Р.И. Генетический статус, развитие и продуктивность свиней канадской селекции II Промышленное и племенное свиноводство, 2005, № 4, с. 22-25.

Издательство РУЦ ЭБТЖ 142132 Московская обл., Подольский р-н, п. Дубровицы Тел. 8 (27) 651424,651407

Сдано в набор 16.11.2005. Подписано в печать 16.11.2005 Заказ № 29. Печ. л. 1,1. Тираж 100 экз.

»2374t

РНБ Русский фонд

2006-4 24962

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Адаменко, Владимир Аркадьевич

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Генетические маркеры и их использование в 9 свиноводстве

2.2. Иммуногенетические маркеры в свиноводстве

2.3. ДНК-маркеры.

2.3.1. Ген риандодинового рецептора, Ryrl.

2.3.2. Гены, влияющие на многоплодие свиноматок.

2.3.2.1. Эстрогеновый рецептор (ESR).

2.3.2.2. Бета-субъединица фолликулостимулирующего 24 гормона (FSHB).

2.3.2.3. Коактиватор А1 ядерных рецепторов (NCOA1).

2.3.3. Генетические маркеры мясной продуктивности 27 свиней

2.3.3.1. Гамма-субъединица протеинкиназы A (PRKAG3, RN- 2 8 ген).

2.4. Цитогенетические маркеры в свиноводстве 33 2.5 Методы оценки спермы у животных 36 2.6. Заключение

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Краткая характеристика предприятия

3.2. Животные

3.3. Методы исследований

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Изучение роли иммуногенетических маркеров.

4.2. Изучение роли цитогенетических и акросомальных 54 ^ маркеров.

4.2.1. Уровень спонтанной хромосомной изменчивости 55 как критерий оценки воспроизводительных качеств хряков.

4.2.2. Состояние акросомы как критерий оценки и 63 прогнозирования воспроизводительных качеств хряков.

4.3. Изучение роли некоторых ДНК-маркеров признаков 69 ^ продуктивности свиней.

4.3.1. Ген рианодинового рецептора Ryrl - главный ген, 70 обуславливающий чувствительность свиней к стрессам

4.3.2. Гены, влияющие на многоплодие свиноматок 70 4.3.2.1. Ген эстрогенового рецептора (ESR) t 4.3.2.2. Ген бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB)

4.3.2.3. Ген коактиватора 1 ядерных рецепторов (NCOA1)

4.3.3. Ген рецептора Е. Coli F18 (ECR F18 / FUT1) - 82 генетический маркер устойчивости к колибактериозу

4.3.4. Ген гамма-субъединицы протеинкиназы A (PRPKAG, 90 RN-ген) как маркер мясных качеств свиней.

4.3.5. Характеристика свиней по комплексу ДНК-маркеров

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль комплекса полиморфных маркеров в характеристике генетического потенциала свиней"

Актуальность темы.

Современное свиноводство, как в нашей стране, так и за рубежом развивается и совершенствуется на основе достижений науки и техники.

Ведомственная целевая программа «Развитие свиноводства в Российской Федерации на период 2006-2010 годов и до 2015 года» наряду с использованием передовых энергосберегающих, ресурсосберегающих и экологически безопасных технологий предусматривает внедрение эффективных селекционно-генетических и биологических методов совершенствования лучших отечественных и зарубежных пород и линий свиней. Признавая ведущую роль традиционных методов разведения, следует отметить, что использование только классической селекции уже не может обеспечить должного уровня эффективности селекционно-племенной работы [Эрнст Л.К., 2005].

Создание высокоспециализированных линий свиней, обладающих повышенными продуктивными и потребительскими качествами, в настоящее время невозможно без использования современных достижений в области генетики животных. Ведущие зарубежные компании (PIC International Group, JSR Farming Group, Cotswold Pig Development Company, Rattlerow Seghers и ряд других) для совершенствования линий свиней широко используют новые подходы, основанные на применении генетических маркеров признаков продуктивности. Маркирование признаков на уровне генотипа в дополнение к традиционным классическим методам селекции позволяет значительно повысить эффективность селекционно-племенной работы и достигнуть желаемого результата уже в течение нескольких генераций [Зиновьева и др., 2005]. Именно такие свиньи отвечают требованиям современного рынка. Таким образом, маркерная селекция представляет собой интегрированный подход, тесно связанный с целями производства и рынка.

Несмотря на обширные зарубежные данные о преимуществах использования генетических маркеров в селекции, имеется лишь незначительная информация о результатах их практического использования в качестве дополнительных критериев оценки животных, разводимых в сельскохозяйственных предприятиях в России. В этой связи, возникает необходимость в проведении исследований, направленных на изучение роли комплексной системы маркерной оценки животных, в частности свиней, с использованием иммуногенетических, цитогенетических и ДНК-маркеров.

Цель и задачи исследований.

Исходя из изложенной выше актуальности, целью работы явилось изучение роли комплекса генетических маркеров (иммуно-генетических, цитогенетических и ДНК-маркеров) в характеристике генетического потенциала свиней на примере ООО «Троснянский бекон» Орловской области. Для достижения цели работы нами были поставлены и решены следующие задачи:

1. Дать характеристику племенного поголовья свиней по иммуногенетическим маркерам 10 локусов групп крови.

2. Изучить роль цитогенетических маркеров в качестве критерия оценки воспроизводительных качеств хряков.

3. Изучить роль показателя состояния акросомы в сперматозоидах как критерия оценки качества спермы и прогнозирования воспроизводительных качеств хряков.

Научная новизна.

Впервые предложено использование и оценена роль комплекса генетических маркеров (иммуно-, цито- и ДНК-маркеры) в характеристике генетического потенциала свиней. Изучен уровень спонтанной хромосомной изменчивости у хряков-производителей и проведены исследования влияния доли хромосомных аберраций на воспроизводительные качества хряков. Выполнены исследования влияния состояния акросомы в сперматозоидах на воспроизводительные качества хряков. Установлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов маркерных генов у свиней различных породных групп. Изучено влияние маркерных генотипов на биологические и продуктивные качества свиней.

Практическая ценность работы.

Показана потенциальная роль цитогенетических маркеров в качестве критерия оценки воспроизводительных качеств хряков. Экспериментально обоснована возможность использования показателя состояния акросомы в сперматозоидах как критерия оценки оплодотворяющей способности спермы и прогнозирования воспроизводительных качеств хряков. Установлено достоверное влияние генотипов некоторых ДНК-маркеров на биологические и продуктивные качества свиней. Предложена схема построения маркерных профилей свиней как элемент обоснования селекционной стратегии. Предложены научно и экспериментально обоснованные подходы к разработке программ внедрения маркерной селекции в сельхозпредприятиях.

Апробация работы.

Материалы диссертации были доложены и обсуждены

• на международной научной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных», п. Дубровицы, ВИЖ, 2004 г.,

• на международной научно-практической конференции «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», п. Дубровицы, ВИЖ, 2004 г.,

• на международной конференции «Развитие ключевых направлений сельскохозяйственных наук в Казахстане: селекция, биотехнология, генетические ресурсы», г. Астана, 2004 г.,

• на научно-техническом совете Администрации Орловской области, г. Орел, 2004.

• на международной конференции по свиноводству, г. Одесса, 2005 г.,

• на научной конференции БСХА, г. Минск, 2005 г.,

• на научной конференции Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ, 2005 г.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Иммуногенетические профили свиней различных породных групп, разводимых в ООО «Троснянский бекон».

• Влияние повышенного уровня спонтанной хромосомной изменчивости на воспроизводительные качества хряков.

• Влияние генотипов некоторых ДНК-маркеров на биологические и продуктивные качества свиней.

Публикации результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в т.ч. 3 статьи в журналах, рекомендованных бюллетенем ВАК.

Структура и объем работы.

Диссертация написана на 116 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа содержит 43 таблицы и 16 рисунков. Список литературы включает 104 источника, в том числе 34 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Адаменко, Владимир Аркадьевич

5. ВЫВОДЫ.

1. Выявлены существенные различия в аллелофонде свиней трех пород канадской селекции, разводимых в ООО «Троснянский бекон», по 10 локусам групп крови. У свиней породы ландрас не обнаружены аллели Dа, Е aeg, Еaef, Gа, Н ь, в то время как у свиней породы дюрок отсутствуют аллели Е aef и Н ь, а у свиней породы йоркшир - аллель Fa. Установлено, что 53,3-76,9% свиней исследованных групп характеризовалась уровнем гомозиготности в интервале 0,6-0,8. Показана необходимость увеличения генетического разнообразия по эритроцитарным антигенам.

2. Анализ уровня соматических хромосомных аберраций у хряков породы йоркшир показал, что в среднем 20,5+3,3% лимфоцитов крови несли аберрации хромосом. Установлено, что многоплодие свиноматок, осемененных спермой хряков с уровнем аберраций более 20% (в среднем 23,8±1,4), было на 1,9 поросенка больше по сравнению с этим показателем у свиноматок, осемененных спермой хряков с уровнем аберраций менее 20% (в среднем 14,8+3,9) (р<0,05). Аналогичная тенденция проявлялась и по другим показателям продуктивности свиноматок: молочности (-5,6 кг), количеству поросят к отъему (-0,7 голов) и массе гнезда к отъему (-10,0 кг).

3. Выявлено достоверное влияние доли сперматозоидов с визуализируемыми акросомами на эффективность осеменения свиноматок. При использовании для осеменения спермы хряков, содержащей более 50% А-сперматозоидов в неразбавленной сперме, эффективность осеменения была в 2,2 раза выше по сравнению с группой животных, осемененных спермой хряков, содержащей менее 50% спермиев с акросомами -соответственно, 68,8+8,2 и 31,8±9,9% (р<0,01). При использовании в качестве критерия доли А-сперматозоидов в сперме после разбавления эффективность осеменения в группах различалась в 1,7 раза и составляла, соответственно, 73,7+10,1 и 42,9+8,4% (р<0,01).

4. Установлено, что изучаемое поголовье свиней, как отечественной селекции пород дюрок (п=5), йоркшир (п=13), ландрас (п=11), крупная белая (п=18) и их помесей (п=100), так и канадской селекции пород дюрок (п=34), йоркшир (п=28) и ландрас (п=54) имеет генотип NN гена Ryrl и является стрессустойчивым.

5. Выявлены различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов гена эстрогенового рецептора (ESR) у свиней отечественной и канадской селекции. Если у свиней отечественной селекции рв=0,215-0,364, то свиньи канадской селекции оказались гомогенными по данному гену (рв=0,0). По результатам анализа двух опоросов установлено достоверное превосходство помесных свиноматок с генотипами ВВ и АВ гена ESR над животными с генотипом АА, соответственно, на 0,51 и 1,01 поросенка на опорос, и свиноматок крупной белой породы с генотипом АВ над животными с генотипом АА - на 1,88 поросенка на опорос (р<0,05).

6. Показана гомогенность групп свиней отечественной селекции пород дюрок, ландрас, йоркшир по гену FSHB - бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (рв-1,0). Доля животных с генотипом ВВ у свиней аналогичных пород канадской селекции варьировала от 73,5% у свиней породы дюрок до 88,9% у свиней породы йоркшир (рв=0,839-0,944). У свиней крупной белой породы на долю животных с генотипом ВВ приходилось 94,5% (рв=0,972). Выявлено превосходство свиноматок пород йоркшир и дюрок с генотипами ВВ гена FSHB над животными с генотипом АА по многоплодию, соответственно, на 0,31 и 1,96 поросенка на опрос.

7. Анализ полиморфизма гена коактиватора А1 ядерных рецепторов (NCOA1) у свиней канадской селекции показал, что на долю животных с желательным генотипом А1А1 приходилось от 78,6% у свиней породы ландрас до 91,2% у свиней породы дюрок (pAi=0,875-0,956). Установлено превосходство свиноматок породы йоркшир с генотипом А1А1 над животными с генотипом А1А2 по многоплодию на 1,00 поросенка на опорос.

9. Популяционно-генетические исследования полиморфизма гена PRKAG3 (RN-гена) показали, что максимальными частотами встречаемости желательного генотипа 52GG/199II/200RR характеризовались свиньи пород йоркшир (15,4%) и ландрас (18,2%) отечественной селекции, что было значительно выше по сравнению со свиньями аналогичных пород канадской селекции (соответственно, 3,7 и 4,6%). У свиней породы дюрок отмечалась обратная зависимость (соответственно, 8,8 и 0,0%). У свиней крупной белой породы желательный генотип встречался с частотой 5,6%.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

2.6. Заключение. --------

Свиноводство на современном этапе, как в нашей стране, так и за рубежом развивается и совершенствуется на основе достижений науки и техники.

Идентификация генетических маркеров локусов количественных признаков сельскохозяйственных животных делает возможным оценку истинного генетического потенциала животных без учета влияния факторов внешней среды.

Внедрение в практику современных достижений иммуногенетики, молекулярной генетики и цитогенетики позволяет поднять селекцию на более высокий качественный уровень за счет нивелирования факторов, снижающих эффективность применения селекционных методов.

3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Краткая характеристика предприятия.

Исследования выполнялись в ООО «Троснянский бекон», лаборатории иммуногенетики ЗАО «Агро-Индустрия» Орловской области, в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики ВИЖ по схеме, представленной на рисунке 1.

ЗАО «Агро-Индустрия» является одним из перспективных сельскохозяйственных предприятий Орловской области. В состав ЗАО «Агро-Индустрия» входят ООО «Троснянский бекон» - маточный репродуктор, ООО «Покровский свинокомплекс» - предприятие по получению трехпородного откормочного гибридного молодняка и ООО «Русское поле» - предприятие по заключительному откорму свиней.

ООО «Троснянский бекон» (4258 га пашни) с производственной мощностью 10000 станкомест (до 30 тыс. голов молодняка в год) является ведущим производителем свинины в Орловской области, дающим около 3 тыс. тонн свинины, что составляет около 50% от ее валового производства. Маточный репродуктор при работе с чистопородными животными ведет продажу чистопородного и гибридного племенного молодняка и обеспечивает ООО «Покровский свинокомплекс» двухпородными гибридными свиноматками.

В объединении функционирует сертифицированная МСХ РФ иммуногенетическая лаборатория (Лицензия № 3925), которая осуществляет работы по генетическому тестированию достоверности происхождения племенных животных в области, а также осуществляет подбор пар с учетом иммуногенетической совместимости в селекционных и товарных стадах свиней.

В 2003 году в ООО «Троснянский бекон» из Канады были завезены чистопородные свинки и хряки трех пород: дюрок, йоркшир и ландрас. В настоящее время получена первая генерация чистопородных животных. Используемые на станции искусственного осеменения хряки и ремонтный молодняк только чистопородные. Генетический потенциал свиней канадской селекции значителен: энергия роста 1,3-1,8 кг в сутки на откорме при затратах на 3-2,8 кг сухого корма 1 кг прироста. Убойный выход реализуемого молодняка составляет 72-75 %, выход мяса в туше - 60-65%. Животные характеризуются отличным развитием: хряки по данным бонитировки в 12 мес. имеют живую массу 180-240 кг, длину туловища 170195 см и толщину шпика - 9-20 мм.

3.2. Животные.

Материалом исследований 8 групп свиней различных пород, разводимых в ООО «Троснянский бекон»:

1) свиньи породы ландрас канадской селекции (п=28);

2) свиньи породы дюрок канадской селекции (п=34);

3) свиньи породы йоркшир канадской селекции (п=54);

4) свиньи породы ландрас отечественной селекции (n=l 1);

5) свиньи породы дюрок отечественной селекции (п=5);

6) свиньи породы йоркшир отечественной селекции (п=13);

7) свиньи крупной белой породы отечественной селекции (п=18);

8) четырехпородные помесные свиньи отечественной селекции, полученные ротационным скрещиванием свиней четырех пород: ландрас, дюрок, йоркшир, крупная белая (п=100);

Порода йоркшир канадской селекции представляет собой группу свиней выдающихся качеств: животные характеризуются крупными размерами, крепкой конституцией, высоким многоплодием, высокой скороспелостью и хорошими мясными качествами. Животные соответствуют требованиям породы: живая масса свиноматок - 230-250 кг; длина туловища - 160-170 см: многоплодие 9,4-10,6; молочность - 48-52; живая масса хряков - 300-350 кг; длина туловища - 175-180 см; конверсия корма составляет 3,7-3,9 к.ед.; возраст достижения массы 100 кг - 182 дня; Толщина шпика над 6-7 грудным позвонком в 100 кг - 1,8-2,0 см.

Разводимые линии - Сателлит, Спикер, Спартак Семейства - Флора, Фауна, Фасоль.

Используется как материнская основа при работе на мясной гибрид, а также для чистопородного разведения.

По данным племенного учета на 01.01.2005 г. животные породы йоркшир характеризовались следующими показателями: выход поросят на 100 основных свиноматок - 2966; выход поросят от 100 основных свиноматок - 1928; получено поросят на опорос от основных свиноматок -10,6; получено поросят на опорос от проверяемых свиноматок - 9,4; получено опоросов от одной основной свиноматки 1,82.

Порода ландрас канадской селекции отличается высокой скоростью роста и конверсией корма, длинной выравненной тушей с тонким слоем шпика, хорошо развитой филейной частью. Матки многоплодны, характеризуются высокой продуктивностью и хорошими материнскими качествами. Животные соответствуют требованиям породы: живая масса свиноматок - 230-240 кг; длина туловища - 168-172 см.; многоплодие - 9,310,7; молочность - 50-52; живая масса хряков - 270-300 кг; длина туловища -180-182 см; конверсия корма составляет - 3,6 к.ед.; среднесуточный прирост - 700-780 г.; возраст достижения массы 100 кг - 180 дней; толщина шпика над 6-7 грудным позвонком в 100 кг - 1,1-1,5 см.

Используются при получении мясного гибрида в качестве отцовской породы, а также для чистопородного разведения.

По данным племенного учета на 01.01.2005 г. животные породы ландрас характеризовались следующими показателями: выход поросят на 100 основных свиноматок - 3449; выход поросят от 100 основных свиноматок -2326; получено поросят на опорос от основных свиноматок - 10,7; получено поросят на опорос от проверяемых свиноматок - 9,3; получено опоросов от одной основной свиноматки 2,16.

Разводимые линии - Лидер, Ландыш, Лимон, Ливень., семейства -Ласка, Легенда, Лора.

Порода дюрок канадской селекции представлена животными крупных размеров рыжей масти с оттенками от светло-золотистой до темно-коричневой. Свиньи крепкой конституции с хорошими адаптивными качествами. Отличаются крепким телосложением, длинным туловищем, аркообразной спиной, своеобразными свислыми, хорошо выполненными окороками. Обладают высокой скороспелостью и хорошими мясными качествами. Животные соответствуют требованиям породы: живая масса свиноматок - 260-280 кг; длина туловища - 162-165 см.; многоплодие - 9,010,2; молочность - 42-50; живая масса хряков - 270-300 кг; длина туловища -180-182 см.; конверсия корма составляет - 3,6 к.ед.; среднесуточный прирост - 700-800 г.; возраст достижения массы 100 кг - 170-180 дней; толщина шпика над 6-7 грудным позвонком в 100 кг - 1,5-2,0 см.

Используются в схеме для получения мясного гибрида на финале, а также для чистопородного разведения.

По данным племенного учета на 01.01.2005 г. животные породы дюрок характеризовались следующими показателями: выход поросят на 100 основных свиноматок - 3096; выход поросят от 100 основных свиноматок -2094; получено поросят на опорос от основных свиноматок - 10,2; получено поросят на опорос от проверяемых свиноматок - 9,0; получено опоросов от одной основной свиноматки 2,06.

Разводимые линии - Апельсин, Анис. Семейства - Акула, Акация.

Подбор маток и хряков производили с использованием в качестве дополнительного критерия генотипы животных по генетическим маркерам.

Рис. 1. Схема исследований.

Породные группы свиней, разводимые в ООО «Троснянский бекон» 1

Свиньи канадской селекции I

Свиньи отечественной селекции

Ландрас

-IZZ

Дюрок 1

Йоркшир I

Ландрас

Дюрок Йоркшир Крупная белая Помеси I

Отбор проб ткани, крови и первичная пробоподготовка

Анализ ДНК-маркеров I I

ТТЛ

ОС

ОС о

ОС со

GQ (Л

О О I

Анализ систем групп крови I I

Цитогенетический анализ

Анализ генетической структуры популяций -1 I I В Н I I К I I I I м I I

Карио-типиро-вание

Оценка генетической структуры стада Г

Изучение соматических аберраций I I

Анализ частоты хромосомныхаберраций

Анализ состояния акросомы

Анализ воспроизво дительных качеств J

Отбор животных и подбор родительских пар с учетом генотипов по маркерам

Анализ продуктивности свиней в зависимости от типа подбора с учетом маркерного генотипа I

Анализ роли генетических маркеров как критериев оценки генетического потенциала свиней

3.3. Методы исследований.

В качестве генетических маркеров в исследованиях были использованы иммуно-, цито- и молекулярно-генетические маркеры.

С целью сравнительного анализа свиней отечественной селекции пород крупная белая, дюрок, ландрас и йоркшир, разводимых в ООО «Троснянский бекон», и чистопородных племенных свиней пород дюрок, ландрас и йоркшир канадской селекции от животных отбирали пробы крови или ткани (ушной выщип). При взятии проб крови в качестве антикоагулянта использовали гепарин. При взятии проб кожи и длительной ее транспортировке в качестве консерванта использовали 96% этиловый спирт.

Цитогенетические исследования проводили на свиньях породы йоркшир. В экспериментах были использованы половозрелые хряки в количестве 10 голов, а также потомство 3 хряков в количестве 6 голов. Приготовление и анализ препаратов хромосом выполнялись по методикам, разработанным в отделе биотехнологии ВИЖ [Кленовицкий и др., 2005].

В зависимости от наличия хромосомных аберраций животные подразделялись на группы с высоким и низким уровнем соматических аберраций. В каждой из групп изучались воспроизводительные и продуктивные качества хряков.

С целью изучения наследования уровня хромосомных аберраций были выполнены исследования потомства хряков, характеризующихся высоким уровнем хромосомных аберраций в лимфоцитах крови.

Исследования состояния акросом спермиев проводили на 19 хряках, в том числе 5 хряках породы йоркшир, 8 хряках породы дюрок и 6 хряках породы ландрас канадской селекции, разводимых в ООО «Троснянский бекон».

Подсчет количества сперматозоидов с видимыми акросомами (А-сперматозоидов) осуществляли под световым микроскопом. Долю А-сперматозоидов рассчитывали как отношение числа А-сперматозоидов к общему числу сперматозоидов на препарате, выраженное в процентах.

Выделение ДНК и постановку ПЦР проводили согласно «Методическим рекомендациям по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве» [Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Эрнст JI.K. и др., 1998]. Анализ полиморфизма ДНК-маркеров выполняли по методикам отдела биотехнологии ВИЖ. В качестве маркеров выбраны следующие: ген рианодинового рецептора, обуславливающий чувствительность свиней к стрессам (Ryrl); гены эстрогеновго рецептора (ESR), бета-субъединицы фолликулостимулирующего гормона (FSHB) и коактиватора 1 стероидных гормонов (NCOA1), влияющие на плодовитость свиней, ген рецептора Е. Coli (ECR F18 / FUT1), связанный с устойчивостью поросят к послеотъемной диарее, и ген гамма-субъединицы протеинкиназы A (PRKAG3, RN-ген), влияющий на мясные качества свиней.

Анализ генетических маркеров проводили методом ПЦР с последующим гидролизом образующихся фрагментов соответствующими рестрикционными эндонуклеазами (ПЦР-ПДРФ). Анализ образующихся фрагментов проводили методом электрофореза в агарозном геле с добавления бромистого димидия. Визуализацию фрагментов в ультрафиолетовом свете и документацию результатов осуществляли с помощью цифровой видеокамеры и программного обеспечения BioTestD.

Исходя из результатов тестирования по ДНК-маркерам, были сформированы группы животных с различными генотипами и изучены воспроизводительные и продуктивные качества свиней в зависимости от генотипа по ДНК-маркерам и типов подбора.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам [Меркурьева и др., 1991]. Расчет средних значений (X) и стандартных отклонению (ст) в выборках вели с использованием программы

Microsoft Excel. Стандартное отклонение для признаков, выраженных в процентах, находили по формуле a=V(p*q), где р и q - частоты встречаемости признаков, выраженные в процентах. Ошибку средней находили по формуле Mx=cy/Vn, где п - число значений признака. Достоверность разницы между признаками определяли на основании сравнения коэффициента достоверности (Td) с коэффициентами по таблице Стьюдента.

4. Результаты и обсуждение.

В результате проведенных в ходе выполнения диссертационной работы исследований нами были предложены и на примере ООО «Троснянский бекон» Орловской области научно и экспериментально обоснованы основные элементы комплексной системы оценки свиней по генетическим маркерам, очерчен спектр генетических маркеров для внедрения в селекционные программы со свиньями различных пород и дана оценки роли каждого из маркеров в характеристике и повышении генетического потенциала продуктивности племенных животных.

4.1. Изучение роли иммуногенетических маркеров.

Одной из основных задач свинокомплекса ООО "Троснянский бекон" является поддержание генетического разнообразия по эритроцитарным антигенам. В этой связи, в лаборатории иммуногенетики, созданной на базе ЗАО "Агро-Индустрия", создается база данных, необходимая для принятия оптимальных решений при ведении селекционной работы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Адаменко, Владимир Аркадьевич, п. Дубровицы

1. Адаменко В.А., Лобан Н.А., Шейко Р.И. Опыт разведения и эффективность использования свиней пород: йоркшир, дюрок и ландрас канадской селекции // Сборник материалов научной конференции БСХА, Минск, 16-17 июня 2005 г., с. 1-4.

2. Адаменко В.А., Лобан Н.А., Шейко Р.И. Эффективность разведения свиней канадской селекции // Сборник материалов 12 международной конференции по свиноводству, Одесса, 15-17 сентября 2005 г., с. 1-5.

3. Ананин В.Н. Технология и методы разведения свиней на малых фермах с использованием генетических маркеров // Дисс. канд. с.-х. наук., Лесные Поляны, Московская область, 1999, 106 с.

4. Балацкий В.Н., Метлицкая Е.И., Биндюг А.А. ДНК типирование стресс-чувствительности и распространение мутантного аллеля RYR- гена в популяции свиней полтавской мясной породы // Тез. докл. Межд. конференции "ДНК-технологии", Киев, 1997, с. 12-13.

5. Безенко С. П. О направлении иммуногенетики в селекции свиней // Свиноводство, 1982, № 5, с. 25-26.

6. Виноградов В.Н. Роль отраслевой науки в решении проблем производства свинины. // Матер. Межд. научн. конференции "Перспективы увеличения производства свинины на основе ресурсосберегающих технологий», Россия, Москва, 2005, с. 45-54.

7. Гладырь Е.А., Зиновьева Н.А., Попов А.Н. и др. Методические рекомендации по определению вариантов каппа-казеина и бета-лактоглобулина крупного рогатого скота методом ПЦР-ПДРФ анализа // Дубровицы, ВИЖ, 2001, 15 с.

8. Глазко В. И. ДНК-технологии животных // Киев, 1997, с. 25.

9. Глазко В. И. Проблемы использования ДНК-технологий у животных // Сельскохозяйственная биология, 1998, № 4, с. 33-42.

10. Глазко В. И., Глазко Г. В. Русско-англо-украинский толковый словарь по прикладной генетике, ДНК-технологии и биоинформатике // Киев: Нора-принт, 2000, 464 с.

11. Государственная программа "Генетическая экспертиза племенной продукции (материала) в Российской Федерации" на 1998- 2005 гг. // Москва, 1998, 17 с.

12. Джапаридзе С.Т. Цитогенетический контроль хряков производителей при селекции на многоплодие. // Дисс. канд. биол. наук, Новосибирск, 1988, 25 с.

13. Завада А. Н. Изучение спонтанной изменчивости кариотипа свиней в связи с ранней оценкой их собственной продуктивности // Дисс. канд. биол. наук., Дубровицы, 1987, 134 с.

14. Завада А. Н. Хромосомный анализ и возможность его использования в селекционной работе. // Юб. сб. ВНИИплем «Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве», 1997, с. 279-301.

15. Завада А. Н., Кленовицкий П. М. О характере возникновения хромосомных аномалий у свиней // Тез. докл. межд. научно-практической конференции "Повышение эффективности ведения свиноводства", Быково, 1999, с. 168-169.

16. Завада А.Н. Структурные особенности хромосом свиней цивильской породы // Тез. докл. 3 межд, конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных", Киев, 1999, с. 92-93.

17. Завада А.Н., Новиков А.А. Цитогенетическая характеристика свиней цивильской породы // Тез. докл. 3 межд. конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных", Киев, 1999, с. 93-94.

18. Зарецкая Ю. М. Клиническая иммуногенетика // М.: Медицина, 1983,208 с.

19. Зиновьева Н.А. Молекулярно-генетические маркеры в свиноводстве // Сборник материалов III международной научно-практической конференции

20. Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России», научные труды ВИЖ, 2005, вып. 63, Т. 2, с. 151-154.

21. Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А., Эрнст JI.K., Брем Г. Введение в молекулярную генную диагностику сельскохозяйственных животных // ВИЖ, 2002, 112 с.

22. Зиновьева Н. А., Попов А. Н., Эрнст JI. К. и др. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве // Дубровицы, 1998, 47 с.

23. Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А., Костюнина О.В., Шавырина К.М., Кунаева Е.К. ДНК-маркеры как рычаг повышения многоплодия свиней // Промышленное и племенное свиноводство, 2005, № 5, с. 18-21.

24. Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Эрнст Л.К. и др. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве // Дубровицы, ВИЖ, 1998, 47 с.

25. Зиновьева Н.А., Шавырина К.М., Адаменко В.А., Енин Ю.М., Гуденко Н.Д. Оценка животных по генетическим маркерам // Промышленное и племенное свиноводство, 2005, № 2, с 18-20.

26. Калашникова Л.А., Дунин И.М., Глазко В.И. Селекция XXI века: использование ДНК технологий // ВНИИплем, 2000, 31 с.

27. Капанадзе Г.Д. Продуктивные качества свиней крупной белой породы различных генотипов с разной стрессустойчивостью // Дис. канд. с.-х. наук, Москва, 2003, 104 с.

28. Кленовицкий П. М., Моисейкина J1. Т., Марзанов Н. С. Цитогенетика сельскохозяйственных животных// Элиста, 1999, 141 с.

29. Ковалюк Н.В. Использование в селекции свиней генетических маркеров стрессустойчивости и многоплодия // Автореф. дис. канд. биол. наук, Краснодар, 2002, 26 с.

30. Козин И.Е. Совершенствование способов селекции и разведения свиней в условиях Чувашии с использованием генетических маркеров // Дис. канд. с.-х. наук, Лесные Поляны, Московская область, 2001, 89 с.

31. Зб.Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия // М.: Мир, 2000, с. 122.

32. Коновалова Е.Н., Гладырь Е.А., Лобан Н.А., Шмаков Ю.И., Зиновьева Н.А. Полиморфизм гена рецептора Е. coli у свиней // Доклады РАСХН, 2003, № 6, с. 25-27.

33. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика // Дисс. докт. биол. наук, Дубровицы, 1982, 475 с.

34. Костюнина О.В., Зиновьева Н.А. Разработка систем анализа некоторых ДНК-маркеров мясной продуктивности свиней // Материалы международной научно конференции, 2005, Чимкент, Казахстан.

35. Лобан Н.А., Василюк О.Я., Зиновьева Н.А., Гладырь Е.А. оценка стрессоустойчивости свиней различными методами // Вестник аграрной науки Причерноморья, 2002b, Вып. 3 (17), с. 146-150.

36. Марзанов Н.С., Фролкин Д.А., Зиновьева Н.А., Попов А.Н., Данилин А.В., Брем Г. RYRl-ген у свиней отечественных и зарубежных пород // Доклады РАСХН, 2001, № 1, с. 34-36.

37. Марзанов Н., Филатов А., Данилин А., Попкова Л., Хуан Лу Шен Генетические маркеры в селекции свиней // Свиноводство, 2005, № 2, с. 2-4.

38. Меркурьева Е. К. Биометрия в селекции и генетики сельскохозяйственных животных // М.: Колос, 1970, 423 с.

39. Меркурьева Е.А. и др. Генетика // М.: Агропромиздат, 1991.

40. Методические рекомендации по проведению иммуногенетического анализа при разведении свиней // Москва, 1986.

41. Методы исследований в иммунологии // под ред. Лефковитса И., Перниса Б., М.: Мир, 1981, 485 с.

42. Михайлова М. Селекция на мясные качества свиней // Свиноводство, 2002, №1, с. 8-10.

43. Новиков А.А. Генетические аспекты повышения эффективности селекции в свиноводстве. // Автореф. дисс. докт. биол. наук, Лесные Поляны, 1996.

44. Новиков А.А. Романенко Н.И., Семак М.С. Иммуногенетические маркеры и их использование в селекции.// Москва, ВНИИплем, 1997, с. 265-279.

45. Новиков А.А., Романенко Н.И., Ананин В.Н., Бусарева С.Н. Использование генетических маркеров для контроля направленности селекционных процессов // Тез. докл. 3 межд. конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных", Киев, 1999, с. 109.

46. Панченко А.И. Влияние иммуногенетических показателей и условий содержания на воспроизводительные качества свиноматок // Дис. канд. с.-х. наук, Дубровицы, 1985, 136 с.

47. Ведомственная целевая программа: «Развитие свиноводства в Российской Федерации на период 2006-2010 годов и до 2015 года» // Москва, ФГНУ «Росинформагротех», 2005, 80 с.

48. Рыжова Н.В., Калашникова Л.А. Скрининг RYR-гена свиней скороспелой мясной породы // Сборник материалов международной научной конференции «Молекулярно-генетические маркеры животных», Киев, 1999, с. 2122.

49. Рыжова Н.В., Калашникова Л.А. ДНК-диагностика стрессчувствительности свиней скороспелой мясной породы Диагностика полиморфных вариантов RYRl-гена. // Вестник РАСХН, 2000, № 1, с. 68-71.

50. Рыжова Н.В., Калашникова Л.А., Новиков А.А. Частота встречаемости мутантного аллеля RYRl-гена в популяциях свиней крупной белой породы // Доклады РАСХН, 2001, N 6, С. 31-35

51. Сердюк Г.Н."Иммуногенетика свиней: теория и практика", Санкт-Петербург, 2002,390 с.

52. Сердюк Г.Н. Силин Ю.В., Берникова Н.Н., Куценко Н.Н. Иммуногенетический контроль в селекционной практике // Зоотехния, № 10, 2000, с. 8.

53. Сухова Н.О., Дмитриева Г.Л., Набродова Н.М. Методические рекомендации «Использование иммуногенетического анализа в племенном свиноводстве» // Новосибирск, 1987, 47с.

54. Сыворотки иммуноспецифические для определения групп крови свиней (Технические условия, наставление и инструкция по изготовлению, контролю и применению) // ВИЖ , 2001, 24 с.

55. Соколовская И.И., Ойвадис Р., Абилов А.И., Усман Белко Туре. О значении акросомы в оценке семени самцов // Сельское хозяйство Таджикистана, 1982, №6, с. 38-40.

56. Тихонов В. Н. Иммуногенетика и биохимический полиморфизм домашних и диких свиней // Новосибирск: Наука, 1991, 301 с.

57. Тихонов В. Н. Использование групп крови при селекции животных // М.: Колос, 1967, 391 с.

58. Фролкин Д.А. Скрининг гена злокачественного гипертермического синдрома (MHS) у свиней // Автореф. канд. дисс., ВИЖ, 2000.

59. Фьюденберг X., Пинк Дж.,Стайте Д., Ан-Чуан Ванг. Введение в иммуногенетику // М: Мир, 1975, 224 с.

60. Шавырина К.М., Новгородов А.А. "Тестирование свиней по эритроцитарным антигенам", Школа-практикум "Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных", ВИЖ, 2002, с. 72-78.

61. Юдина О.П. Комплексная оценка генетического статуса и продуктивные качества свиней на индивидуальном и популяционном уровнях// Дис. канд. биол. наук, Лесные Поляны, Московская обл., 2002, 132 с.

62. Andersson L. Identification and characterization of AMPKg3 mutations in the pig // Biochemical Society Transactions, 2003, 31,1, 232-235.

63. Andersson-Eklund L., Marklund L., Lundstrom K., Haley C.S., Andersson K., Hansson I., Moller M., Andersson L. Mapping quantitative trait loci for carcass and meat quality traits in a wild boar x Large White intercross // J Anim Sci., 1998, 76, 694700.

64. De Koning D.J., Janss L.L.J., Van Arendonk J.A.M., Van Oers P.A.M., Groenen M.A.M. Mapping major genes affecting meat quality in meishan cross breds using standard linkage sofrware // Proc. 6th World Cong. Genet. Appl. Livest. Prod., 1998, 26,410.

65. Estrade M., Vignon X., Rock E., Monin G. Glycogen Hyperaccumulation in White Muscle Fibres of RN- Carrier Pigs A Biochemical and Ultrastructural Study // Сотр. Biochem. Physiol., 1993, 104B, 321-326.

66. Estrade M, Ayoub S, Talmant A, Monin G. Enzyme activities of glycogen metabolism and mitochondrial characteristics in muscles of RN- carrier pigs (Sus scrofa domesticus) // Comp Biochem Physiol Biochem Mol Biol., 1994, 108, 3, 295-301.

67. Fujii J., Otsu K., Zorzato F., De Leon S., Khanna V.K., Weiler J.E., O'Brien P.J., Maclennan D.H. Identification of a mutation in porcine ryanodine receptor associated with malignant hyperthermia // Science, 1991, 253, 448-451.

68. Geldermann H., Muller E., Beeckmann P., Knorr C., Yue G., Moser G. Mapping of quantitative trait loci by means of marker genes in F2 generations of wild boar Pietrain and Meishan pigs // J Anim Breed Genet., 1996, 113, 381-387.

69. Hirai Т., Takikawa H., Kato Y. The gene for the beta subunit of porcine FSH: absence of consensus oestrogen-responsive element and presence of retroposons // J. of Molecular Endocrinology, 1990, 5, 2, 147-158

70. Leo C., Chen J.D. The SRC family of nuclear receptor coactivators // Gene, 2000, 245, 1-11.

71. Le Roy P, Naveau J., Elsen J.M., Sellier P. Evidence for a new major gene influencing meat quality in pigs // Genet. Res, 1990, 55, 33-40.

72. Li N., Zhao Y.F., Xiao L. et al. Candidate gene approach for identification of genetic loci controlling litter size in swine // Proc 6th World Congress Quatitative Genetics of Livestock, 1998, 26, 183-186.

73. Looft C., Reinsch N., Rudat I., Kalm E. Mapping the porcine RN genetic chromosome 15 // Genet. Sel. Evol., 1996, 28, 437-442.

74. Mariani P, Lundstrom K, Gustafsson U, Enfalt AC, Juneja RK, Andersson L. A major locus (RN) affecting muscle glycogen content is located on pig chromosome 15// Mamm Genome, 1996, 7, 1, 52-54.

75. Messer L., Wang L., Legault C. et al. Mapping and investigation of candidate genes for litter size in French Large White pigs // Anim. Genet., 1996b, 27 (Suppl. 2), 114.

76. Messer L., Wang L., Yelich J. et al. Linkage mapping of the retinoic acid receptor-gamma gene to porcine chromosome 5 // Anim. Genet., 1996a, 27, 175-177.

77. Messer L., Wang L., Yelich J. et al. Linkage mapping of the retinol-binding protein 4 (RBP4) gene to porcine chromosome 14 // Mamm. Genome, 1996c, 7, 396.

78. McLaren D. G., Bovey M. Genetic influences on reproductive performance // Vet Clin North Am Food Anim Pract., 192, 8, 3, 435-459.

79. Nephew K.P., Ray S., Hlaing M., Ahluwalia A., Wu S.D., Long X., Hyder S.M., Bigsby R.M. Expression of estrogen receptor coactivators in the rat uterus // Biol. Reprod., 2000, 63, 361-367.

80. Nezer C., Moreau L., Brouwers В., Coppieters W., Dettilleux J., Hanset R., Karim L., Kvasz A., Leroy P., Georges M. An imprinted QTL with major effect on muscle mass and fat deposition maps to the IGF2 locus in pigs // Nat. Genet., 1999, 21, 155-156.

81. Rothschild M.F., Jacobson C., Vaske D. et al. The estrogen receptor locus is associated with a major gene influencing litter size in pigs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1996, 93, 201-205.

82. Rothschild M.F., Jacobson C., Vaske D. et al. The estrogen receptor locus is associated with a major gene influencing litter size in pigs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1996, 93,201-205.

83. Rothschild M.F., Messer L., Day A. et al. Investigation of the retinol-binding protein 4 (RBP4) gene as a candidate gene for increased litter size in pigs // Mamm. Genome, 2000, 11,75-77.

84. Rothschild M.F., Plastow G.S. Advances in pig genomics and industry applications // AgBiotechNet 1999, 1, ABN 007

85. Rothschild M.F., Tuggle C.K., Messer L.A., Yu T.-P. Genes and genetic markers for improved reproductive traits in animals // United States Patent, 1999, 5 939 264.

86. Spencer Т.Е., Jenster G., Burcin M.M., Allis C.D., Zhou J., Mizzen C.A., McKenna N.J., Onate S.A., Tsai S.Y., Tsai M-J., Malley B.W. Steroid receptor coactivator one is a histone acetyltransferase // Nature, 1997, 389, 194-198.

87. Vincent, A.L., Short Т.Н., Eckardt G.R. et al. The prolactin gene receptor is associated with increased litter size in pigs // Proc 6th World Congress Quatitative Genetics of Livestock, 1998, 27, 15-18.

Информация о работе

Адаменко, Владимир Аркадьевич
кандидата биологических наук
п. Дубровицы, 2005
ВАК 03.00.23

Диссертация

Роль комплекса полиморфных маркеров в характеристике генетического потенциала свиней - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы