Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль Heliobacter pylori в патогенезе онкологических заболеваний желудочно-кишечного тракта

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Роль Heliobacter pylori в патогенезе онкологических заболеваний желудочно-кишечного тракта"

На правах рукописи

ргз оД 1 2 ФЕВ 2004

ИСАЕВА Гузель Шавхатовна

РОЛЬ HELICOBACTER PYLORI В ПАТОГЕНЕЗЕ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

03.00.07 - Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена в Казанском государственном медицинском

университете

Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель -

доктор медицинских наук профессор Поздеев O.K.

Официальные оппоненты: >

доктор медицинских наук профессор Королюк Александр Михайлович, доктор медицинских наук Кафтырева Лидия Алексеевна.

Ведущее учреждение - Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи РАМН.

Защита диссертации состоится " /ffi' февраля 2004 года в часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.08 при Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, дом 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова.

Автореферат разослан « /с » января 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор

Пастушенков Владимир Леонидович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние десятилетия рост онкологических заболеваний сохраняет свою динамику, и проблема лечения и профилактики болезней злокачественного роста стоит достаточно остро. В структуре злокачественных болезней рак желудка (РЖ) занимает одно из ведущих мест. Ежегодно во всем мире регистрируют 798 тысяч новых случаев, и каждый год они становятся причиной смерти 628 тысяч человек (Аксель Е.М., Давыдов М.И., Ушакова Т.И., 2001). Наряду с некоторыми государствами Юго-Восточной Азии, Южной Америки и Европы, Российскую Федерацию относят к странам с наиболее высоким показателем случаев РЖ, где регистрируют более 30 случаев на 100 тыс. населения (Aspinaü R.J. et al, 2002). При этом в РФ РЖ устойчиво занимает второе место среди прочих онкологических заболеваний (Мерабишвшш В.М., 2001; Чиссов В.И., Дарьялова СЛ. и др., 2000).

Известно, что РЖ практически никогда не возникает на фоне неизмененной слизистой. Ему предшествуют процессы, обозначаемые как предраковые (Серов В.В., Пальцев М.А., 1998). Поэтому основу профилактики злокачественных заболеваний желудка может составить своевременная диагностика и коррекция изменений слизистой оболочки желудка (СОЖ), вовлеченных в этапы канцерогенеза по схеме Correa Р. (1995): хроническое воспаление -» кишечная метаплазия дисплазия —> рак.

Как известно, развита« РЖ предшествует хронический атрофический гастрит, в этиологии которого важную роль играет персистенция Helicobacter pylori, что' приводит к прогрессированию патологических изменений в СОЖ. Установлено, что у лиц, инфицированных Н. pylori, РЖ встречают в 4-8 раз чаще, чем у здоровых, что послужило одним из аргументов в пользу доказательства канцерогенности бактерий (Eurogast Study Group, 1993; АруинЛ.И., 1994; Forman D., 1996). Установление связи между инфицированностью Н. pylori и РЖ дало основание Международному агентству

по изучению рака отнести его -.к канцерогенам I группы (IARC, 1994). Эпидемиологические исследования, показали, что в развитых странах Н. pylori инфицирован каждый третий, а в развивающихся практически каждый взрослый человек. Однако у исследователей закономерно возникает вопрос, почему при такой высокой инфицированное™ онкология развивается далеко не у каждого человека? (АруинЛ.И., 1997). Очевидно, что для возникновения неопластических процессов только микробной колонизации СОЖ явно недостаточно. Возможно, что условиями для их развития являются эндогенные факторы: генетические особенности, иммунный статус организма (Е.М. El-Omar et al., 2000; Кононов A.B., 2003); экзогенные факторы: характер питания, стрессы, социально- экономические условия (Correa Р., 2000; You W.C. et al., 2000; Zaridze D. et al., 2000; Siman D.H. et al. 2001; Brenner H. et al., 2002), а также давность и степень инфицирования вирулентными штаммами Н. Pylori (Forman D., 2000). Бактерии не синтезируют веществ, обладающих прямым мутагенным действием, но некоторые ферменты и токсины, можно рассматривать как пусковые механизмы для развития патологических процессов, приводящих к раку (Parsonnet J. et al., 1997; Домарадский И.В., 2001). Последние исследования показывают, что Н. pylori непосредственно способствует повреждению эпителиальных клеток посредством выработки цитотоксинов VacA и CagA (Бондаренко В.М., 2001; Бондаренко В.М., Червинец В.М., Воробьев A.A., 2003). Риск развития РЖ больше у лиц, инфицированных штаммами Н. pylori, образующих CagA и VacA (Crabtree J.E. е.а.,1993; Blaser M.J. e.a., 1995).

Данные литературы об обратимости последовательности желудочного канцерогенеза: атрофический гастрит —> кишечная метаплазия -> дисплазия слизистой оболочки желудка также очень противоречивы (Meining A. et al., 2001). Часть авторов склоняется к выводу о необратимости данной последовательности, а элиминация Н. pylori, возможно, приводит к замедлению её развития (Feldman R.A., 2001; Valle J., Gisbert J.P., 2001), другая часть исследований свидетельствует об обратном (Ковалева Н.Б. и соавт., 2002; Кашин C.B., Надежны A.C., 2003; Крылова И.В. и соавт., 2003).

Вышеуказанное свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения роли Н. pylori в патогенезе онкологических заболеваний желудочно-кишечного тракта и совершенствования методов их профилактики.

Цель исследования. Определить значимость инфицирования Н. pylori в развитии злокачественных опухолей желудка.

Задачи исследования:

1. Выявить частоту инфицирования. Н. pylori у больных с предраковыми состояниями и онкологическими заболеваниями желудка

2. Изучить гистологическую картину морфологических изменений СОЖ при очаговой патологии желудка

3. Определить вирулентность и адгезивность штаммов Н. pylori, выделенных от больных с очаговой патологией желудка

4. Исследовать возможность обратимости морфологических изменений СОЖ после элиминации Н. pylori

5. Изучить возможность длительного сохранения штаммов Н. pylori.

Научная новизна. Разработаны методики определения вирулентных свойств Н. pylori в пробе с красителями Романовского-Гимзы и изучения адгезивности в реакции прямой гемагглютинации с эритроцитами барана в присутствии D-маннозы. Впервые предложено использование выявленных адгезивных свойств Н. pylori в качестве маркера вирулентности данного микроорганизма. Выявлена высокая частота инфицирования Н. pylori, сочетающаяся с высокой степенью обсемененности СОЖ, у больных воспалительными и неопластическими заболеваниями. Разработан алгоритм

повторного обследования больных очаговой патологией желудка комплексным методом. Впервые разработана методика длительного сохранения Н. pylori при -20° С в специальной консервирующей смеси.

Практическая значимость. Доказана зависимость развития очаговой патологии, имеющей различный злокачественный потенциал, от частоты, степени обсемененности вирулентными штаммами Н. pylori.

Предложен алгоритм повторного обследования больных очаговой патологией желудка комплексным методом, включающим бактериоскопический, бактериологический, биохимический, гистологический методы исследования с целью определения эффективности эрадикационной терапии и возможного регресса морфологических изменений эпителия СОЖ.

Предложены доступные методики определения вирулентности и адгезивности выделенных штаммов Н. pylori. Предложена сахарозо-желатиновая среда в буферном растворе для консервирования штаммов Н. pylori при -20° С.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в работу бактериологической лаборатории Казанской государственной медицинской академии МЗ РФ, в работу клинического онкологического диспансера МЗ РТ, в учебный процесс кафедр микробиологии Казанского государственного медицинского университета и Казанской государственной медицинской академии МЗ РФ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Большинство форм очаговой патологии желудка ассоциировано с колонизацией Н. pylori.

2. Тяжесть морфологических изменений СО Ж зависит от степени вирулентности штаммов Н. pylori.

3. Адгезивность Н. pylori, выявленная в реакции D-маннозонезавнсимой гемагтлютинаини (МНГА), является маркером вирулентности.

4. Эрадикация Н. pylori может приводить к регрессу морфологических изменений преимущественно на начальных стадиях канцерогенеза.

5. Возможно длительное сохранение штаммов Н. pylori при -20° С в специальной консервирующей смеси.

Апробация материалов работы. Основные положения диссертации доложены на юбилейной конференции, посвященной 55-летию онкологической

4-

службы Тюменской области (Тюмень, 2001); на VIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов (Москва, 2002); на научно-практических конференциях молодых ученых (Казань, 2002; 2003); на X научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань, 2002); на VI КАНТовской научно-практической конференции «Проблемы человека в современном обществе» (Казань, 2003); на юбилейной научной конференции с международным участием «Современная микробиология - клинической медицин!; и эпидемиологии» (Санкт-Петербург, 2003); на VI Международном симпозиуме «Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori» (Екатеринбург, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, получен патент на изобретение.

Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов

исследования, раздела собственных исследований, включающего три главы, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, содержащего 36 отечественных и 201 зарубежных источников, приложений. Материалы диссертации изложены на 110 страницах машинописного текста, иллюстрированы 12 таблицами, 12 рисунками. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обследовано 226 больных в возрасте от 20 до 80 лет, обратившихся в эндоскопический центр Республиканского клинического онкологического диспансера МЗ РТ с целью эндоскопического исследования верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Среди них мужчин - 93 (41,2%), женщин - 133 (58,8%). Средний возраст больных составил 58,4 года. Всем пациентам проводили диагностическую ФЭГДС, при этом у 196 больных были выявлены патологические изменения СОЖ. Для удобства мы их объединили термином «очаговые изменения СОЖ» и распределили в следующие основные группы:

1. Полипы:

а) аденоматозные - 28 пациентов;

б) гиперпластические- 55 пациентов.

2. Эрозии - 42 пациента, среди них поверхностные - 8 пациентов, воспалительно-гиперпластические - 34 пациента.

3. Очаговые гипертрофии СОЖ - 35 пациентов.

4. Рак желудка - 36 пациентов.

Контрольную группу составили 30 пациентов с диагностированным поверхностным гастритом, у которых отсутствовала очаговая патология.

Лабораторные исследования были проведены на базе кафедры микробиологии КГМА МЗ РФ и гистологической лаборатории КОД МЗ РТ.

Материалом для исследования являлись биоптаты, полученные при ФЭГДС. Гистологическое исследование биоптатов из патологических участков было проведено путем микроскопии препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону. Морфологически оценивали изменения СОЖ в виде хронического воспаления и атрофии, воспалительной гиперплазии, кишечной метаплазии, дисплазии, аденокарциномы и перстневидно-клеточного рака.

Для выделения Н. pylori биоптаты (2 го области патологии и 2 из прилегающей визуально неизмененной слизистой) доставляли в лабораторию в транспортной тиогликолевой среде в течение 6 часов. Для обнаружения Н. pylori использовали комплексный метод, включающий бактериоскопический (микроскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Граму и фуксином), биохимический (уреазный тест), бактериологический (выделение и идентификация культур Н. pylori с последующим подсчетом количества выросших колоний при пересчете на мл) методы исследования. Вирулентность выделенных штаммов определяли по способности воспринимать краситель Романовского-Гимзы. Для изучения адгезивных свойств применяли реакцию прямой гемагглютинации на стекле с эритроцитами человека, лошади и барана в присутствии D-маннозы.

При диагностировании морфологических изменений (хроническое воспаление, гиперплазия, кишечная метаплазия, дисплазия) в сочетании с инфицированием Н. pylori пациентам был назначен курс эрадикационной терапии (амоксициллин - 0,5 г 3 раза в день, фуразолидон - 0,1 г 2 раза в день, де-нол - 240 мг 2 раза в день в течение 7 дней), эффективность которой оценивали через 3-6-12 недель после окончания курса комплексным методом.

Статистическая обработка материала осуществлена с помощью программ «Excel» и «Statistica 6.0» с установлением средней арифметической, средней ошибки, определением достоверности по критерию Стьюдента и определением связи между качественными показателями по критерию Крамера и критерию достоверности хи-квадрат.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При изучении гистологической картины слизистой оболочки желудка в области патологии были обнаружены морфологические изменения в виде хронического воспаления и атрофии— в 49 случаях, гиперплазии— в 36 случаях, кишечной метаплазии— в 48 случаях, дисплазии— в 29 случаях, аденокарциномы — в 30 и перстневидно-клеточного рака — в 5 случаях.

Тяжесть морфологических изменений на этапах желудочного канцерогенеза: хроническое воспаление —► атрофия —> кишечная метаплазия —» дисплазия —> рак коррелировала с высокой частотой инфицирования Н. pylori. Бактерии обнаружены у 87,8±4,7% пациентов с хроническим воспалением и атрофией СОЖ; у 63,3+8,0% лиц с гиперплазией; у 70,8+6,6% пациентов с кишечной метаплазией; у 86,2±6,4% обследованных с дисплазией и у 70,5±7,8% больных РЖ. При этом в контроле бактерии обнаруживали только у 46,7±9,1% обследованных лиц (р<0,05).

Полученные нами результаты позволяют предположить возможное участие бактерий в развитии очаговых заболеваний, имеющих различный злокачественный потенциал. В частности, бактерии в биоптатах СОЖ были обнаружены у 72,217,5% пациентов с аденоматозными полипами; у 61,8+6,6% обследованных лиц с гиперпластическими полипами; у 90,1±4,61% пациентов с эрозиями; у 80,0±6,8% обследованных с очаговыми гипертрофиями и у 72,2±7,5% больных РЖ. Что было достоверно выше, чем в группе пациентов с поверхностным гастритом (46,7±9,1% ) без морфологических изменений, служившей контролем (р<0,05).

Высокая частота обнаружения бактерий сочеталась с высокой степенью обсемененности Н. pylori СОЖ. Более того, при аденокарциноме и перстневидно-клеточном раке высокую степень обсемененности (104-105 КОЕ/мл) выявляли достоверно чаще — в 52,9+9,99% случаях, чем на стадиях

канцерогенеза, где в большинстве биоптатов (48,0+9,9% - 60,0+9,8%) наблюдали умеренную (103 КОЕ/мл) обсемененность СОЖ. Полученные результаты позволили предположить наличие прямой связи между тяжестью морфологических изменений и степенью обсемененности Н. pylori СОЖ.

От больных с различной очаговой патологией слизистой оболочки желудка было выделено 146 штаммов Н. pylori. Нами была изучена вирулентность выделенных штаммов в пробе с анилиновыми красителями и адгезивность в реакции гемагглютинации в присутствии D- маннозы.

Известно, что одним из признаков проявления вирулентных свойств является высокая скорость размножения в организме хозяина, о чем свидетельствует наличие множества юных клеток в популяции. В их цитоплазме накапливается большое количество рибонуклеотидов, обуславливающих высокую базофилию клеток и способность к выраженной адсорбции анилиновых красителей. Этот феномен связывают с большей активностью дыхательных ферментов у вирулентных штаммов (Григорьева Л.В., Корчак Г.И., Малахова Л. А., 1992).

Проведенные исследования способности выделенных штаммов бактерий адсорбировать краситель Романовского-Гимзы показали, что их вирулентность коррелировала со степенью тяжести патологий на последовательных этапах канцерогенеза. В наших исследованиях при предраковых состояниях СОЖ и РЖ преимущественно выделяли штаммы Н. pylori, отличающиеся интенсивным включением красителя (84,2±5,9% и 95,2+4,7% соответственно), по сравнению со штаммами, выделенными от больных с хроническими воспалениями и гиперплазиями слизистой (54,9±б,98%) (р<0,001). Таким образом, можно говорить о прямой зависимости тяжести морфологических изменений от степени вирулентности Н. pylori.

Обнаруженное нами снижение вирулентных свойств вплоть до их потери ранее вирулентными штаммами Н. pylori при каждом последующем пересеве свидетельствует о зависимости этой пробы от условий и длительности

культивирования. Субкультивированнк 30 выделенных культур Н. pylori на эритрит-агаре показало прогрессивное сокращение роста с увеличением пассажей. Большинство культур (27) прекратили рост между 2-3 пассажами. С каждым пассажем происходило уменьшение зоны газонного роста и размеров колоний до точечных. В мазках-отпечатках преобладали инволюционные кокковидной формы палочки. При рекультивировании изолятов Н. pylori мы отмечали изменения не только морфологических и культуральных свойств, но и вирулентности. При изучении вирулентности субкультивированных культур в пробе с красителем Романовского - Гимзы мы наблюдали менее выраженную окраску, чем у свежевыделенных штаммов: от светло-синего и светло-зеленого цвета до бесцветного, что соответствует слабой степени и авирулентности. При этом колониям Н. pylori требовался более длительный срок для включения красителя (более 15 минут). Таким образом, мы предлагаем проводить исследование вирулентности в пробе с анилиновыми красителями только свежевыделенных штаммов, изолированных из биоптата, без дополнительных пересевов для предупреждения ложноогрицательных результатов.

Известно, что способность колонизировать различные виды эпителия связана с адгезией бактерий на чувствительных клетках. У большинства грамотрицательных бактерий способность прикрепляться к различным эпнтелиям связана с наличием фимбрий различных типов. Наиболее часто их различают по способности агглютинировать эритроциты. В частности, авирулентные штаммы патогенных бактерий несут только маннозочувствительные фимбрии. В отличие от них, вирулентные штаммы способны к МНГА, что положено в основу дифференцирования адгезинов (Каральник Б.Г., Сарбасова Ш.И., Укбаева Т.Д., 1990).

Нами была изучена способность выделенных штаммов H.pylori адгезнровать к различным эритроцитам в присутствии D-маннозы. Адгезивность составила 71,7+2,75%. Наиболее активно бактерии адгезировали к эритроцитам

барана и к эритроцитам человека (82,8+4,96%" и' 76,6±4,1%), реже— к эритроцитам лошади (60,6+4,8%) (р<0,01). Но при постановке МНГА с эритроцитами человека необходимо учитывать тропизм, присущий Н. pylori к клеткам человека (Boren Т. et al., 1993). Поэтому для изучения гемагглютинирующих свойств Н. pylori предпочтительно применение эритроцитов барана.

Проведенное нами исследование показало, что в зависимости от гистологического статуса патологического процесса, от 54,7±7,7% до 83,0+5,2% изолятов Н. pylori были способны к МНГА. Штаммы Н. pylori, выделенные от больных с предраковыми состояниями СОЖ (кишечная метаплазия, дисплазия) и злокачественными изменениями, ад тезировали достоверно чаще (83,0±5,2% и 80,7±4,1%) , чем штаммы, выделенные от больных, имеющих изменения эпителия желудка на начальных стадиях канцерогенеза (хроническое воспаление, атрофия, гиперплазия) — в 60,1+4,41% случаях (р<0,001). Таким образом, можно говорить о наличии выраженной связи между МНГА микроорганизма и тяжестью морфологических, изменений СОЖ.

Между пробой с включением анилиновых красителей и МНГА нами была обнаружена выраженная, статистически достоверная связь (х2=85, КК=0,56; р<0,01). Наличие у выделенных штаммов Н. pylori фимбрий обоего типа, а также способности включать краситель Романовского-Гимзы может косвенно свидетельствовать об его возможной роли в развитии морфологических изменений эпителия СОЖ. Мы предлагаем использовать выявленную МНГА в качестве маркера вирулентности штаммов Н. pylori.

Несмотря на большое количество исследований биологических свойств Н. pylori возможность его длительного сохранения остается проблематичной. Существующие методы консервирования H.pylori включают лиофилизацию культур либо их глубокую заморозку (Ansorg R. et al.,1991; Spengler A., Gross А., Kaltwasser H.,1992; ShahamatM. et al., 1992; Liaw S.J. et al., 1998), что требует наличия специального оборудования, часто недоступного для рядовых

бактериологических лабораторий. Мы изучили возможность длительного сохранения Н. pylori при - 20 °С в модифицированной нами среде МНИИЭМ имени Г.Н. Габричевского, предложенной для сохранения возбудителей коклюша и паракокпюша (Инструкция по бактериологическому и серологическому исследованиям при коклюше и паракоклюше, 1983). Для зашиты клеток Н. pylori от отрицательного воздействия низких температур мы использовали криопротекторы двух типов: желатин, который легко переходит через клеточную мембрану и обеспечивает внутри- и внеклеточную защиту, и сахарозу, обеспечивающую защитное действие на наружной поверхности мембраны. Длительность сохранения Н. pylori в сахарозо - желатиновой среде при -20 °С составила один год с частотой рекультивирования равной 90%. Наиболее оптимальной средой для повторного культивирования стал эритрит-агар с добавлением амфотерицина В, необходимого для подавления роста плесневых грибов.

Повторно было обследовано 111 больных. После курса специфической терапии Н. pylori не обнаруживали в биоптатах СОЖ у 93 больных. Морфологические изменения подверглись регрессии преимущественно на начальных этапах канцерогенеза: хроническое воспаление— в 31 случае, гиперплазия— в 15, кишечная метаплазия— в 13 случаях. У 16 больных тяжелые патологические изменения в виде атрофии, кишечной метаплазии, дисплазии сохранились. Этой группе больных была рекомендована эндоскопическая санация очаговой патологии с дальнейшим динамическим наблюдением. Эффективность эрадикационной терапии, согласно Российским рекомендациям по диагностике и лечению Н. pylori - инфекции, необходимо оценивать через 3-6 недель после окончания курса (Лапина Т.Л., 1999). Но, по результатам наших исследований, за этот период морфологические изменения не успевают подвергнуться обратному развитию, хотя этого срока достаточно для оценки эффективности этиотропного лечения. Мы предлагаем проводить контрольное обследование не ранее 3 месяцев после завершения курса эрадикационной терапии с применением комплексного метода, включающего

бактериологический, бактериоскопический, биохимический и гистологический методы.

Несмотря на изученность морфологии и морфогенеза очаговых изменений в виде очаговых гипертрофии, полипов, эрозий, этиологические факторы и механизмы из возникновения не ло конца ясны (Аруин Л.И., Ильиченко A.A., 1982; Ивашкин В.Т., Баранская Е.Т., 2001; Debongnie J.C., 1999; Kachiwagi Н., 2003). Исследования прилегающей к области патологии СОЖ свидетельствуют, что эта очаговая патология развивается на фоне хронического хеликобактерного гастрита с умеренной степенью обсемененности (102-103 КОЕ/мл). Изучение связи между очаговыми морфологическими изменениями и инфицированностью вирулентными Н. pylori позволило сделать вывод о зависимости большинства из них от колонизации этими микроорганизмами. Обратимость морфологических изменений после элиминации Н. pylori может свидетельствовать об его участии в хронизации патологического процесса.

ВЫВОДЫ.

1. Выявлена высокая частота инфицированности Н. pylori у больных с хроническими воспалительными и неопластическими заболеваниями. Очаговые поражения СОЖ в 61,8-90,1% случаев ассоциированы с Н. pylori.

2. Хроническая H.pylori - инфекция может служить одним из факторов, приводящим к малигнизации желудка, причем особое значение может иметь не только факт инфицирования, но и степень обсемененности СОЖ этим микроорганизмом.

3. Тяжесть морфологических изменений находится в прямой зависимости от вирулентности штаммов Н. pylori. Адгезивность, выявленная в реакции МНГА, является маркером вирулентности штаммов Н. pylori, выделенных от больных с этапах канцерогенеза.

4. Проведение антибактериальной терапии приводит к регрессу морфологических изменений преимущественно на начальных этапах канцерогенеза, а в ряде случаев, и предраковых состояний (кишечной метаплазии).

5. Разработанные и внедренные в практику методы определения вирулентности

H. pylori в пробе с анилиновыми красителями и алгезивности в реакции МНГА являются доступными для бактериологических лабораторий.

6 Предложенный метод длительного хранения штаммов Н. pylori в специальной консервирующей смеси при - 20 °С является безопасным, эффективным и доступным для практического здравоохранения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

I. Предложена методика определения вирулентных свойств свежевыделенных штаммов Н. pylori в пробе с красителем Романовского - Гимзы и изучения их адгезивности в реакции гемагглютинаиии с эритроцитами барана в присутствии D-маннозы.

2. Рекомендовано проведение эрадикационного лечения больным с очаговой патологией желудка в виде аденомагозных и гиперпластических полипов, поверхностных и воспалительно-гиперпластических эрозий, очаговых гипертрофии, ассоциированных с Н. pylori - инфекцией, с различными морфологическими изменениями СОЖ в связи с возможностью их полной или частичной регрессии.

3. Предложен алгоритм повторного обследования больных с очаговой патологией комплексным методом, включающим бактериоскопический, бактериологический, биохимический и гистологический методы, не ранее 3 месяцев после эрадикационного лечения с целью установления его эффективности.

4. Разработана методика консервирования штаммов Н. pylori длительностью до года в сахарозо-желатиновой среде в морозильной камере при -20 °С.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K., Муравьева Е.В., Самигуллин М.Ф. Сравнение эффективности различных методов обнаружения Helicobacter pylori у больных с новообразованиями желудка. // Материалы юбилейной конференции, посвященной 55-летию онкологической службы Тюменской области.— Тюмень, —2001, —С.52.

2. Исаева Г.Ш., Поздеев ОК., Муравьева Е.В., Самигуллин М.Ф. Частота выделения Helicobacter pylori у больных раком и полипами желудка. // Материалы юбилейной конференции, посвященной 55-летию онкологической службы Тюменской области. — Тюмень. — 2001. — С. 116-117

3. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K., Муравьева Е.В., Самигуллин М.Ф. Выделение Helicobacter pylori у больных с очаговой патологией слизистой желудка. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов. — Москва. — 2002. — С. 180-181.

4. Морозова Л.Г., Исаева Г.Ш., Поздеев O.K., Лапшина Г.Н. Маркеры вирулентности Helicobacter pylori, выделенных от больных с различной патологией желудка и двенадцатиперстной кишки. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов. — Москва. — 2002. — С.204-205.

5. Исаева Г.Ш., Муравьева Е.В., Морозова Л.Г. Helicobacter pylori у больных с различными изменениями эпителия желудка. // Научно-практическая конференция молодых ученых. — Казань — 2002. — С.25-27.

6. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K., Муравьева Е.В., Самигуллин М.Ф. Helicobacter pylori и предраковые изменения слизистой оболочки желудка. // Материалы X

научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения». — Казань — 2002. — С.55-58.

7. Исаева Г.Ш. Лечение хеликобактерной инфекции - основа первичной профилактики рака желудка. // Материалы шестой КАНТовской научно-пракггической конференции «Проблемы человека в современном обществе». -Казань.-2003.-С.71-73.

8. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K., Клюшина Л.В. Инфицированность Helicobacter pylori при различных морфологических изменениях эпителия желудка. // Материалы юбилейной научной конференции с международным участием «Современная микробиология - клинической медицине и эпидемиологии». -Санкт-Петербург. — 2003. - С.56-58.

9.Исаева Г.Ш., Морозова Л.Г. Устойчивость штаммов Helicobacter pylori, выделенных от больных с очаговой патологией желудка, к антибактериальным препаратам. // Научно-практическая конференция молодых ученых. — Казань. — 2003. —С.46-48.

10. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K. Адгезивность штаммов Helicobacter pylori, выделенных от больных с различными морфологическими изменениями эпителия желудка. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2003. - №3 (приложение №19). - Том XIII. - С.38.

11. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K. Роль Helicobacter pylori в патогенезе злокачественных трансформаций эпителия слизистой оболочки желудка. // Каз. мед. журнал. — 2003. — №6. — С.437-443.

12. Исаева Г.Ш., Поздеев O.K. «Консервирование культур Helicobacter pylori», патент на изобретение №2003119649. Российское агентство по патентам и товарным знакам.

Подписано в печать iS.tnX/h

Объем i пл._Тираж -¡ОС экз.

Формат 60x84 '/, Заказ № у/г

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6