Новые подходы к диагностике и элиминации Helicobacter Pylori при язвенной патологии желудочно-кишечного тракта

Муфер Консолар

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Новые подходы к диагностике и элиминации Helicobacter Pylori при язвенной патологии желудочно-кишечного тракта
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Новые подходы к диагностике и элиминации Helicobacter Pylori при язвенной патологии желудочно-кишечного тракта"

На правах рукописи

□□3052776

МУФЕРКОНСОЛАР

НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ДИАГНОСТИКЕ И ЭЛИМИНАЦИИ HELICOBACTER PYLORI ПРИ ЯЗВЕННОЙ ПАТОЛОГИИ ЖЕЛУДОЧНО-

КИШЕЧНОГО ТРАКТА

03.00.07 - микробиология 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2007

003052776

Работа выполнена на кафедре микробиологии Казанской государственной медицинской академии МЗ СР РФ

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Поздеев Оскар Кимович доктор биологических наук, профессор Ильинская Ольга Николаевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Госманов Рауис Госманович (зав. каф. микробиологии, вирусологии и иммунологии КГВМА, г. Казань)

доктор биологических наук, профессор Чернов Владислав Моисеевич (зам. директора Казанского института биохимии и биофизики РАН, г. Казань)

Ведущая организация: ФГУП Казанский научно-исследовательский

институт эпидемиологии микробиологии, г. Казань

Защита диссертации состоится «22» марта 2007 г. в 13:00 часов на заседании диссертационного совета Д.212.081.08 при Казанском государственном университете по адресу-. 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, д. 18, главное здание, ауд. 209.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. Н.И Лобачевского Казанского государственного университета

Автореферат разослан «2Ь> февраля 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук З.И.Абрамова

Актуальность: Заболевания, обусловленные Helicobacter pylori, составляют важную медико-социальную проблему современной медицины (Григорьев, 1986). Н. pylori является широко распространённой бактерией, и по разным данным, инфицированность населения варьирует в пределах 60-90% (Cave, 1997). Бактерии выявляют у 80-100% больных хроническим гастритом, у 7080% страдающих язвой желудка, у 90-100% — язвой двенадцатиперстной кишки, а также у 100% пациентов с MALT-лимфомами, у 80-95% с аденокарциномами желудка и у 60% больных с диспепсиями неязвенной этиологии (Moran et al., 1996). Кроме того, ряд авторов предполагает наличие взаимосвязи между инфицированием H.pylori и развитием ишемической болезни сердца (Mendall et al., 1994; Sandifer et al., 1996; Roussos et al., 2003).

До настоящего времени эффективность рекомендованных схем лечения хеликобактериозов варьирует в пределах 65-87%, но в большинстве случаев она зависит от чувствительности бактерий к применяемым антибактериальным препаратам (Brzozowski et al., 2003; Graham et al., 1996). В Европе резистентность Н. pylori к метронидазолу, в среднем, составляет 27% и к кларитромицину 10% (Glupczynski et al., 2001). В США устойчивость к метронидазолу и кларитромицину составляет 25,1% и 12,9% (Duck et al., 2004), а в странах Латинской Америки до 80% штаммов бактерий нечувствительны к метронидазолу (Magalhaes et al., 2002). В странах Азии резистентность хеликобактеров к метронидазолу увеличилось с 22% в 1991 году до 73% в 1995 году (Ling et al., 1996). Также отмечен стремительный рост резистентности Н. pylori к тетрациклину (Ribiero et al., 2004) и по данным Jeng Yih Wu, (2005г) резистентность Н. pylori к тетрациклину достигает 59% в Китае.

В РФ резистентность бактерий к метронидазолу у больных, ранее получавших антихеликобактерную терапию по поводу язвенной болезни, может достигать 100% (Кудрявцева, 1999). Резистентные штаммы Н. pylori значительно труднее поддаются элиминации, что существенно снижает (до 50%) эффективность проводимого лечения и делает его экономически невыгодными (Иваницкий, 1998; Мерабишвили, 2001; Иваников, 2002). С повышением резистентности бактерий связывают рост осложнений гастродуоденальной патологии, и, следовательно, значительное увеличение затрат на лечение, что является не только медицинской, но и социально-экономической проблемой.

При лечении различных гастродуоденальных патологий широко применяют минерализованные воды и озонированные растворы. JI.B. Игнатко и В.В. Швардака (2001) установили, что сульфидная слабоминерализованная вода в дозе 5мл/кг массы тела в комплексной терапии приводит к эрадикации Н. pylori у детей. Еще в 1994 году, Hawrylik и соавторы сообщили об ингибирующем действием бисульфитных и сульфитных катионов на рост H.pylori in vitro. По данным В.А. Максимова и соавт. (1994), озон воздействует на различные звенья патогенеза язвенной болезни; а внутривенное введение озонированного физиологического раствора приводит к эрадикации Н. pylori в 40-60% случаев (Каратаев и соавт., 2001).

Вышеуказанное делает перспективным поиск и внедрение в практику новых доступных подходов к элиминации Н. pylori, направленных на улучшение результатов лечения язвенной гастродуоденальной патологии.

Известно, что «золотым стандартом» бактериологической диагностики хеликобактериозов является выделение возбудителя из биоптатов слизистой (Баженов и соавт., 1990; Аруин, 1993). При этом важным этапом проводимого анализа является выявление уреазы. К настоящему времени предложено множество методик регистрации активности фермента без выделения бактерий, а полученные результаты трактуют как косвенно свидетельствующие о наличии

H.pylori. Тем не менее, все они не свободны от ложноположительных результатов, т.к. на момент исследования в желудке и двенадцатиперстной кишке может присутствовать сопутствующая микрофлора, многие представители способны синтезировать уреазу. Следует отметить, что с аналогичными контаминантами можно столкнуться и при проведении посевов. Этот факт представляется существенно значимым для разработки новых селективных сред и более устойчивых уреазных тестов.

Целью данной работы явилась разработка новых подходов к идентификации и элиминации Я. pylori у пациентов с язвенными поражениями желудка и двенадцатиперстной кишки.

Основные задачи исследования:

1. Изучить влияние озонированной и сульфидной минерализованной воды на культуральные и биохимические свойства Н. pylori in vitro.

2. Разработать новую питательную среду и модифицировать уреазный тест для ускоренного выделения Я pylori.

3. Определить частоту обнаружения Я pylori у пациентов с раком желудка, гастродуоденитами и соответствующими язвенными поражениями в зависимости от пола и возраста больных и установить корреляцию между нею и заболеваемостью гастродуоденального отдела желудочно-кишечного тракта.

4. Определить вирулентные свойства и чувствительность к антибактериальным препаратам штаммов Я. pylori, выделенных от больных язвенной патологии желудка и двенадцатиперстной кишки.

5. Определить частоту повторного обнаружения Я. pylori у прооперированных больных, получавших курсы премедикации и послеоперационной антибактериальной терапии и оценить их эффективность.

6. Изучить возможность длительного сохранения культур Я. pylori.

Научная новизна

Впервые установлено, что озонированная вода концентрация озона 5мкг/мл снижает жизнеспособность Я. pylori in vitro, в том числе за счет ограничения их подвижности, снижения уреазной активности и подавления - роста на плотных средах. Сульфидная минерализованная вода из источника ■I санатория «Чувашия» в различных концентрациях проявляет аналогичные свойства в отношении культур Н. pylori in vitro.

Выявлена корреляция между степенью вирулентности изолятов Я. pylori и тяжестью последовательных патологий слизистой желудка.

Впервые разработан и использован на практике эритрит-сывороточный агар с мочевиной (ЭСАМ) для ускоренной идентификации Я. pylori из клинического материала.

Впервые разработан модифицированный уреазный тест, включающий применение 1% раствора Люголя и фурацилина, для определения уреазной активности Я. pylori в биоптатах.

Предложена методика длительного сохранения выделенных штаммов Я. pylori в консервирующей смеси при -10 °С. Практическая значимость

Новые методы выделения и идентификации Я. pylori, предложенные в работе, значительно облегчают культивирование и идентификацию бактерий, выделенных из клинического материала. Разработанная модификация уреазного теста отличается простотой проведения, доступностью и воспроизводимостью полученных результатов. Положения, выносимые на защиту 1. Озонированная вода в концентрации 5мкг/мл и сульфидная минерализованная вода из источника санатория «Чувашия» в различных концентрациях снижают жизнеспособность Я. pylori in vitro, проявляющуюся ограничением их подвижности, угнетением синтеза уреазы и подавлением роста на плотных средах.

2. Степень тяжести последовательных патологий желудочно-кишечного тракта зависит от степени вирулентности Н. pylori.

3. Возможно длительное хранение изолятов Н. pylori при -10 °С в консервирующей смеси . (сахарозо-желатиновой среде в буферном растворе) на срок до 12 месяцев.

4. Для ускоренной идентификации Н. pylori из клинического материала можно использовать эритрит-сывороточный агар с мочевиной (ЭСАМ) и модифицированный уреазный тест, включающий применение 1% раствора Люголя ифурацилина.

Апробация материалов работы

Основные положения диссертации доложены на 11-ой научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2004); на 13-ой научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2005); на международном симпозиуме «Научные основы обеспечения зашиты животных от экзотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань 2005), на научно-практическом семинаре «Современные возможности выявления Н. pylori и кампилобактерий в лабораторной практике» (Казань 2005).

Публикации. По теме диссертации публиковано 9 научных работ, получен патент на изобретения метода выделения Н. pylori, 2 приоритетные справки на изобретение метода эрадикации Н. pylori и питательной среды для ускоренной идентификации Н. pylori.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, раздела результатов исследований, обсуждения результатов, выводов, приложения к работе и списка литературы. Работа изложена на 116 страницах машинописного текста, включает 10 таблиц, 13 рисунков. Библиография содержит 305 наименование российских и зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Материал: Нами обследовано 304 больных в возрасте от 19 до 84 лет, обращавшихся в три больницы г. Казани республики Татарстан с целью эндоскопического исследования верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Среди них мужчин -197 (64,8%), женщин -107 (35,2%). Материалом для исследования служили биоптаты, полученные при ФЭГДС больных. Тест-штаммы: Escherichia coli 657, Proteus vulgaris 019, Pseudomonas aerugenosa.

Питательные среды и реагенты:

Транспортная полужидкая тиогликолевая среда: питательный бульон 1л, 0,1% агара, 0,5% глюкозы," 0,1% натрия тиогликолата.

КА: агар с экстрактом сердечной мышцы (HIA) (Difco) 40г, ДН20 1л, 12,5 мл дефибринированной крови кролика.

КАА: агар с экстрактом сердечной мышцы (ША) (Difco) 40г, ДН20 1л, 12,5 мл дефибринированной крови кролика, Змг Амфотерицин В. ЭКАА: эритрит агар 36г, ДН2О 1л, 12,5 мл дефибринированной крови кролика, Змг Амфотерицин В.

Clo-тест: " мочевина 10 мг, тетрациклин 10ЕД, феноловый красный 8-10 кристаллов.

Антибактериальные препараты: стандартные диски: Амоксицилин-20мкг; Кларитромицин -15мкг; Ципрофлоксацин -5мкг; Тетрациклин -ЗОмкг; Эритромицин- 15мкг; Цефазолин -ЗОмкт; Цефалотин -ЗОмкг; Цефалексин-ЗОмкг; Фуразидол -ЗОмкг; Метронидазол -ЗОмкг. Культивирование и выделение Н. pylori

Для обнаружения Н. pylori использовали комплексный метод, включающий микроскопию мазков отпечатков, окрашенных по Граму и фуксином, изучения «винтообразной подвижности» в препарате «раздавленная капля» методом фазово-контрастной микроскопии, постановку уреазного теста и бактериологическое выделение, и идентификацию культур Я. pylori с определением степени обсемененности биоптата.

Вирулентность выделенных штаммов определяли по способности воспринимать краситель Романовского-Гимзы по методике, предложенной JI.B. Григорьевой и соавт. (1992) для сальмонелл и эшерихий. Для изучения адгезивных свойств выделенных штаммов Н. pylori применяли реакцию прямой гемагглютинации на стекле в присутствии D-маннозы по методу, предложенному Б.Г Каральником и соавт. (1990) для Citrobacter.

Для определения антибиотикограмм штаммов Я. pylori, выделенных у обследованных лиц, мы использовали диско-диффузионный метод со стандартными дисками антибиотиков и производных имидазола (метронидазол и фуразолидол).

Нами была изучена способность Я. pylori (30 изолятов) к длительному сохранению при -10°С в морозильной камере в модифицированной консервирующей смеси (сахарозо-желатиновая среда в буферно -физиологическом растворе). Через 6-9-12-15-18 месяцев производили медленное размораживание культур при комнатной температуре с последующим высевом на эритрит-агар и кровяной агар (содержащий 10% бараньей крови), дополненные внесением 3 мг амфотерицина В. Изучение влияния минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» и озонированной воды на культуральные и биохимические свойства Н. pylori

Мы исследовали влияние минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» и озонированной воды (концентрация озона 5микрограмм/мл) на жизнеспособность Я. pylori. По химическому составу воду из скважины санатория «Чувашия» относят к высокоминерализованным водам. Для доказательства безопасности приема изучаемой воды исследованы некоторые параметры биохимических синдромов, обусловленных функциональным состоянием печени, в частности показатели синдрома цитолиза гепатоцитов: уровни аланин и аспарагин аминотрансфераз, а также билирубина в крови. Биохимические показатели изучены у волонтеров, принимавших минеральную воду с содержанием сероводорода от 12,5 до 25

1 9

мг/л до 300 мл в сутки. До начала приема изучаемые параметры не отличались от нормы. После окончания курса отмечена тенденция к снижению уровню билирубина и аминотрансфераз, что свидетельствует об отсутствии гепатотоксического действия и адекватности применяемых нами количеств воды. Также установлено, что данная вода соответствует нормативам по микробиологическим показателям (ГОСТ 2761-84).

Для изучения влияния минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» и озонированной воды на Н. pylori были обследованы биоптаты, полученные от 22 пациентов. Биоптаты гомогенизировали в стерильных фарфоровых ступках в 2 мл физиологического раствора.

В мазках из полученной взвеси определили подвижность Н. pylori методом фазово-контрастной микроскопии, используя в опытных вариантах минерализованную сульфидную либо озонированную воду. Контролем служили взвеси бактерий в физиологическом растворе. Определяли уреазную активность в Clo-тесте после инкубирования взвеси микробов 5, 10 и 20 минут в пробирке с 1мл озонированной воды

Затем по 0,5 мл взвеси вносили в пробирки с 1мл минерализованной сульфидной воды (с концентрации H2S 25, 10 и 2,5 мг/л) и озонированной водой. Спустя 30 и 60 минут проводили высевы бактериальной взвеси петлей (0,004 мл эмульсии) на чашки с кровяным агаром. Посевы культивировали в течение 3-5 суток в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С и влажности 98%, как указано выше. После культивирования определяли принадлежность культур к Н. pylori.

Разработка новой питательной среды для ускоренной идентификации Н. pylori.

Для выделения H.pylori из водных источников AJ. Degnan с коллегами (2003) предложили специальную среду, содержащую необходимые ростовые факторы. Ее недостатком является содержание большого набора антибиотиков (полимиксин В, амфотерицин В, ванкомицин, триметоприм и цефсулодин), что сказывается на стоимости. Мы предложили модифицированную среду ЭСАМ

(эритрит сывороточный агар с мочевиной) для выделения хеликобактеров из патологического материала больных. В ее составе были оставлены лишь амфотерицин В и ванкомицин, эритрит агар заменили на обычный агар.

Готовую среду разливали в чашки Петри, куда вносили по 1 капле бактериальной суспензии. В качестве контроля, использовали суточные культуры Р. vulgaris 019 (уреаза-положительный контроль) и E.coli 657 (отрицательный контроль). Культивирование тест-культур проводили в аэробных условиях при температуре 37 °С в течении 24 часов.

Модификация экспресс-теста для определения уреазной активности Я. pylori

(

В 1989 году Б.Д. Старостин и А. В. Петрутик предложили экспресс-метод диагностики инфицированности Н. pylori слизистой оболочки желудка, и предложили уреазный тест с использованием мочевины, тетрациклина и индикатора фенолового красного.

Нами разработана модификация этот метода, заменив тетрациклин на фурацилин, раствор Люголя и хлорамин. Состав тест-систем представлен в таблице 1.

Мы применяли данные тест-системы для определения уреазной активности H.pylori в биоптатах. В качестве контроля, мы использовали суточные культуры Р. vulgaris 019 (положительный контроль) и E.coli 657 (отрицательный контроль). Биоптаты и культуры вносили в пробирки, содержащие по 1мл исследуемого раствора для определения уреазной активности. Пробирки инкубировали 24 часа при 37 °С. После инкубирования учитывали результаты по изменению окраски фенолового красного от исходного до малинового.

Таблица 1.

Состав тестов для определения уреазной активности H.pylori

№ Мочевина Диет. Фенол фурацилин 1% 10% 1%

теста Вода рот раствор ПК раствор IIK раствор хлорамин

1 100мг 40мл 2 капли 10мг — — —

2 100мг 40мл 2 капли — 1мл — —

3 100мг 40мл 2 капли - — 1мл —

4 100мг 40мл 2 капли - - - 1мл

Статистическая обработка: Для вычисления средних величин, средней квадратичной ошибки, критерия достоверности разности средних величин использовали программный пакет Microsoft Office 2000 и Statistica 6.0 for Windows.

Результаты и их обсуждения

По данным П.А. Щербакова (1991) и R. Sitas et al. (1991), Я. pylori выделяют с одинаковой частотой у мужчин и женщин, и частота инфицированности микроорганизмом увеличивается с возрастом. Единичные бактерии могут быть обнаружены на слизистой оболочки желудка у двухмесячных детей, а в возрасте 9 месяцев можно обнаружить случаи выраженной инвазии хеликобакгерами. Среди 5-6-летних детей инфицированность составляет, в среднем, 40-45%, а к 14-15 годам она достигает уровней, характерных для взрослых (65-70%) (Patel et al., 1994). По нашим данным, частота выделения Я. pylori у лиц мужского пола и женского пола не имеет существенных отличий (68,02±4,02% и 67,28±5,52% соответственно) (см. рис.1.). Бактерии чаше всего обнаруживали у лиц от 65 лет и старше —79,42±4%. У лиц от 45 до 64 лет в 68,46±4,07% случаев, от 25 до 44 лет в 56,82±7,5% случаев и у лиц до 24лет только в 39,29±9,2% случаев.

ш частота заболеваемости ■ частота выделения HP

муж жен обшее

пол

Рисунок 1, Частота выделения Н. pylori в зависимости от пола пациентов

Бактерии выявляют у 80-100% больных хроническим гастритом, у 7080% страдающих язвой желудка, у 90-100% — язвой двенадцатиперстной кишки, а также у 100% пациентов с MALT-дямфомами (Alkan et aJ., 1996; Sipponen, 1992; Sipponen et al„ 1999), у 80-95% с аденокарциномами желудка и у 60% больных с диспепсиями неязвенной этиологии (Moran et al., 1996).

Мы установили, что у больных раком желудка частота выделения II. pylori составляет, в среднем, 79,59±5,75%; у больных с язвенной болезнью желудка— 81,25±<5,89% и с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки— 82,35±5,3б%. У пациентов с гастритами частота выделения Н. pylori составляла, в среднем, 60,74±4,72%. Реже Н. pylori выделяли у больных, получивших курс лечения — прооперированных (32,43±7,8%), У пациентов, получивших лечение по схеме А (7-ми дневной курс тройной эрадикационной терапии: кларитромицин (500мг 2 р/сут), Амоксицилин (1000мг 2 р/сут) и омепразол (20мг р/сут)) — 35,29±7,8% и по схеме В (14-ти дневной прием 150мл минерализованной сульфидной воды 3 р/сут) - (35,29±7,8%). (См. рис.2,).

« 60 о

£ 40

то ' 20

79f59 81^25 82£5

" 60,74

• I 1 351 к 1 39 A3 35^9 М.ЗЗ

16," 116,; | L л—— W ш 1 1 3 11 ifi fl 9Г

1 --Л- Li! -4L

В С D E F нозологическая группа

Ш Частота обращения □ частота выделения HP

Рисунок 2.Частота выделения Н. pylori в зависимости от диагноза. А-рак желудка, В -ЯБЖ. С-ЯБДПК, D-гастрит, Е-после операции, F-пациенты, получившие лечение по схеме А, G- пациенты, получившие лечение по схеме В

Выявлена корреляция между степенью обсемененности и тяжести заболевания. У 49 больных со злокачественными опухолями в 61,22±6,9% случаев выявляли высокую степень обсемененности (10-10 КОЕ/биоптат), У больных язвенной болезнью желудка высокую обсемененность обнаружили у 46,87±8,8%, среди страдающих язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки у 43,14±6,9% и среди больных гастритом — у 24,30±4,1% пациентов. Полученные данные указывают на наличие прямой связи между тяжестью патологического процесса, частотой выделения Ы. pylori и степенью обсемененности бактериями.

Известно, что одним Из признаков вирулентных штаммов микроорганизмов является высокая скорость размножения в организме-хозяине, о чем свидетельствует наличие множества юных клеток в популяции. В их цитоплазме накапливается большое количество рибонуклеотидов,

обуславливающих высокую базофилию клеток и способность к выраженной адсорбции анилиновых красителей. Этот феномен связывают с большей активностью дыхательных ферментов у вирулентных штаммов (Григорьева и соавт., 1992).

Проведенные нами исследования способности выделенных штаммов бактерий адсорбировать краситель Романовского-Гимзы показали, что их вирулентность коррелировала со степенью тяжести патологий. Среди изолятов, выделенных от больных раком желудка, 100% штаммов оказались вирулентными. Из них 17 (43,59±7,9%) обладали высокой степенью вирулентности. У больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки до 87,5±6,4% выделенных изолятов были вирулентными. При этом, около 40% проявляли высокую вирулентность. От больных гастритом было выделено 70,8±5,6% вирулентных изолятов, из них 54,35±2,3% обладали низкой степенью вирулентности.

К числу важных факторов патогенности Н. pylori относят фимбриальные и афимбриальные адгезины (Ilver et al., 1998; Gerhard et а1.,1999;Маев и соавт, 2000; Prinz et al., 2003). Известно, что способность колонизировать различные эпителии обусловлена их способностью к адгезии на чувствительных клетках. У большинства грамотрицательных бактерий способность прикрепляться к различным эпителиям обусловлена наличием фимбрий различных типов. Наиболее часто их различают по способности агглютинировать эритроциты. В частности, авирулентные штаммы патогенных бактерий несут только маннозочувствительные фимбрии. В отличие от них вирулентные штаммы способны к D-маннозонезависимой агглютинации эритроцитов, что лежит в основе дифференцирования адгезинов (Каральник и соавт., 1990). Между пробой с включением анилиновых красителей и реакцией гемагглютинации в присутствии D-маннозы нами была обнаружена прямая, статистически достоверная связь (Р < 0,01).

Наши исследования показали, что в зависимости от гистологического статуса патологического процесса от 60% до 84,61% изолятов Н. pylori были

способны к маннозонезависимой агглютинации эритроцитов. Штаммы Я. pylori, выделенные от больных раком желудка, язвенной болезни желудка и язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, адгезировали достоверно чаще (84,61 ±5,8%, 73,07±8,7% и 73,80±6,8%), чем штаммы, выделенные у больных гастритом (60,00±6,1%). Это является подтверждением того, что тяжесть язвенной патологии желудочно-кишечного тракта напрямую зависит от способности Я. pylori прикрепляться к эпителию желудка.

Несмотря на большое количество исследований биологических свойств Я. pylori, возможность длительного его сохранения остается проблематичной. Консервирование выделяемых штаммов бактерий имеет большое значение для ретроспективного изучения его биологических свойств (например, факторов патогенности, чувствительности к антибактериальным препаратам), для создания банка штаммов Н. pylori, циркулирующих в определенных регионах и для обучающих целей. Существующие методы консервирования H.pylori включают лиофилизацию культур либо их глубокую заморозку, что требует наличия специального оборудования, часто недоступного для рядовых бактериологических лабораторий.

Мы изучили возможность длительного сохранения Я. pylori в модифицированной нами среде. Аналогичная среда была предложена МНИИЭМ имени Г.Н. Габричевского для сохранения возбудителей коклюша и паракоклюша при - 20 °С. После хранения выделенных штаммов в модифицированной консервирующей смеси (сахарозо-желатиновая среда в буферно - физиологическом растворе) в течение 6 и 9, месяцев нами было рекультивировано 100% культур, после 12 месяцев — 90%. При сравнительном изучении частоты рекультивирования мы обнаружили снижение высеваемости культур Я. pylori при хранении свыше 12 месяцев.

АГ\

о о

со н

Ä g 20-

о о 10-

* п

S 0-

»30 »30 »ш.

-1 I-1-

6 9 12 15

время сохранения (в месяцы)

Рисунок 3. Частота рекультивирования Н. pylori в зависимости от срока хранения в консервирующей смеси.

У 42 изолятов Н. pylori, выделенных у больных гастродуоденитами, а также с язвенной патологией желудка и двенадцатиперстной кишки, был изучен спектр чувствительности к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом. Изученные штаммы были чувствительны к кларитромицину, амоксицилину и ципрофлоксацину соответственно в 85%, 79% и 90% случаев. Чувствительность к тетрациклину и эритромицину составляет около 65% и 60% соответственно. Наибольшую резистентность бактерии проявляли в отношении метронидазола (32%). Изученные штаммы были абсолютно устойчивыми (100%) к цефазолину, цефалотину и цефалексину.

При изучении свойств штаммов Н. pylori, выделенных после применения антибактериальных препаратов, мы обнаружили следующие изменения: колонии отличали точечные размеры, в мазках-отпечатках преобладали инволюционные кокковидные палочки, ферментативная бактерий была активность снижена. Проба с анилиновыми красителями была отрицательной или слабоположительной, то есть колонии были образованы авирулентными и слабовирулентными штаммами. Таким образом, под воздействием

антибактериальных препаратов произошли модификационные изменения, способствующие длительному выживанию при неблагоприятных условиях.

Таким образом, вопросы эрадикации хеликобактеров остаются весьма актуальными для современной медицины. Предложенные схемы лечения быстро теряют эффективность, что обусловлено ростом резистентности Я. pylori к антибактериальным препаратам.

1 Нами изучено влияние минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» на Н. pylori in vitro. Были обследованы 22 биоптата, полученные от 22 пациентов. Установлено, что минерализованная сульфидная вода из санатория «Чувашия» снижает подвижность Я. pylori in vitro, угнетает рост и снижает уреазную активность бактерий. В опытах при экспозиции материала в течение 30 мин в сульфидной минерализованной воде частота выделения Я. pylori составляет 27,3% при концентрации H2S 25 и 10 мг/л. При концентрации H2S 2,5 мг/л частота выделения Я. pylori составляет 45,5 %. Однако после 60 мин выдержки материала, частота выделения Я. pylori составила 22,7% при концентрации H2S 25 мг/л; 27,3% при концентрации H2S 10 мг/л и 36,4 % при концентрации H2S 2,5 мг/л по сравнению с контролем (72,72%).

Антихеликобактерной эффект минерализованной сульфидной воды вероятно связан с тем, что H2S нейтрализует «защитное аммиачное поле», образующееся вокруг бактерии. Сероводород, являясь слабой кислотой, отдает ион водорода; аммиак, являясь слабым основанием, принимает ион. Протолитическая теория Лоури рассматривает такую реакцию как нейтрализацию протона кислоты основанием. Сероводород при недостатке кислорода окисляется до серы, последняя, имея незавершенный внешний энергетический уровень, может присоединять два электрона и проявлять свойства окислителя. H2S инактивирует ферменты тканевого дыхания хеликобактерий, а как сильный восстановитель вызывает блокаду фермента уреазы.

По данным С. Д. Каратаева (2001) при внутривенном введении

озонированного физиологического раствора на фоне противоязвенной терапии эрадикация Я. pylori было 40-60% и количество рецидивов в течение 3 лет после лечения с применением озона было значительно ниже, чем когда лечение проводилось по традиционной схеме. Установлено, что озон в терапевтических дозах действует как бактерицидное и анальгезирующее средство, а также улучшает метаболические и репаративные процессы (Перетяган и соавт., 2001).

Нами было изучено воздействие на культуральные и биохимические свойства Я. pylori in vitro озонированной воды, концентрация озона в которой составила 5 мкг/мл. Установлено, что Я. pylori теряет подвижность в присутствии озонированной воды. Мы определяли уреазную активность взвеси в Clo-test спустя 5,10 и 20 минут выдерживания взвеси в пробирке с 1мл озонированной воды. Уреазная активность снизилась до нуля через 20 мин культивирования. В опытах по определению влияния озонированной воды на рост Я. pylori in vitro мы установили, что исследуемая вода угнетает рост бактерий. В опытных вариантах частота обнаружения составляет 27,3% после выдержки посевного материала 30 мин в озонированной воде, и 13,6% после выдержки 60 минут, в то время как частота рост колоний Я. pylori в контроле составил 72,72 %.

Проведенные исследования позволяют заключить, что озонированная вода в концентрации 5 мкг/мл снижает жизнеспособность Я. pylori, что выражается в ограничении их подвижности в эмульсии, подавлении уреазной активности и подавлении роста на твердых средах. Так как в подобной концентрации озонированная вода не токсична для макроорганизма, то ее применение имеет определенные перспективы.

Для ускоренной идентификации Я. pylori мы модифицировали метод посева, предложенный A. J. Degnan и соавт. (2002) для выделения Я. pylori из воды. Для этого мы использовали новую модифицированную нами среду ЭСАМ (эритрит-сывороточный агар с мочевиной). Наша среда отличается набором антибиотиков, внесенных для подавления роста сопутствующей микрофлоры при посевах. После посева вокруг колонии Я. pylori

образовывались зоны красного цвета за счет щелочения среды, так как Я. pylori выделяет уреазу, которая расщепляет мочевину до аммиака, и аммиак как щелочь изменяет цвет среды.

Нами также модифицирован экспресс тест для определения уреазной активности Я. pylori, заменив один из его компонентов, а именно тетрациклин на другие антисептики, такие как фурацилин, раствор Люголя и хлорамин. Мы определяли динамику изменения pH предложенных нами тестов, а также их отдельных компонентов, сразу после их приготовления и после 24 часов. Значения pH существенно не изменились, что свидетельствует о надежности предложенных тестов и об исключении ошибок при их использовании. Результаты наших исследований позволили нам прийти к заключению, что в качестве замены тетрациклина лучше всего подходит фурацилин или 1% раствор Люголя.

ВЫВОДЫ

1. Частота выделения Я. pylori у обследованных пациентов (304 человека) с заболеваниями гастродуоденального тракта составила 39% у лиц в возрасте 24 года, 56% у пациентов в возрасте 25-44 года, 68% в возрастной группе 45-64 года и 79% у лиц в вострасте 65 лет и выше.

2. Обнаружение бактерий прямо зависит от тяжести заболевания: чаще их выделяли от больных раком желудка (80% случаев), язвенной болезнью желудка (81%), язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (82%) и гастритом (61%). Зависимости частоты обнаружения Я. pylori от пола пациента не установлено.

3. Установлена корреляция между тяжестью патологии желудочно-кишечного тракта и вирулентными свойствами изолятов бактерий, а также уровнем обсемененности. При раках желудка 100% изолятов были вирулентными, при язвах желудка и двенадцатиперстной кишки — 88% штаммов. У этих пациентов уровни высокой обсемененности (104-105 КОЕ/биоптат) выявляли у 61% пациентов с онкологическими заболеваниями желудка, у 47% больных, страдающих язвами желудка и у 43% с язвами двенадцатиперстной кишки.

4. Выделенные изоляты были чувствительны к кларитромицину, амоксицилину и ципрофлоксацину (85%), тетрациклину (60%) и эритромицину (65%), фурацидолу (40%) и метронидазолу (32%). Все штаммы были абсолютно устойчивы к цефазолину, цефалотину и цефалексину.

5. Проведение антибактериальной терапии значительно снижает уровень обсемененности (до 102-103 КОЕ\ биоптат), приводит к нарушению морфологических и культурапьно-биохимических свойств, снижает скорость роста и вирулентность при рекультивировании.

7. Разработан новый метод упрощенной идентификации Н. pylori, включающий применение эритрит-сывороточного агара с мочевиной; модифицированного уреазного теста с 1% раствором Люголя и фурацилина.

8. Предложен метод длительного сохранения изолятов бактерий (до 12 месяцев) при температуре -10 °С в модифицированной консервирующей смеси на основе сахарозо-желатиновой среды в буферно-физиологическом растворе.

Работы, опубликованные по теме диссертации

1. Исаева Г.Ш. Сохранение и рекултивирование штаммов Helicobacter pylori / Г.Ш. Исаева, К. Муфер. O.K. Поздеев, О.Н. Ильинская И Материалы научной конференции « Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» Казань.- 2004.-С. 43-44.

2. Муфер К. Влияние озонированной воды на Helicobacter pylori in yitro/_K. Муфер, Э. Мукете, O.K. Поздеев, О.Н. Ильинская // Материалы XIII международной научной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение» Казань.-2005.-С.бб-67.

3. Исаева Г.Ш. Динамика морфологических изменений слизистой оболочки желудка у пациентов, инфицированных Helicobacter pylori, под влиянием эрадикационной терапии / Г.Ш. Исаева, Л.Г. Морозова, O.K. Поздеев, Г.Н. Лапшина, К. Муфер // Окружающая среда и здоровье населения: сборник тезисов XI научно-практической конференции Поволжского региона. Казань.- 2004.-С. 22-25.

4- Муфер К. Проблема резистентности Н. pylori к антибиотикам и поиск новых подходов к их элиминации при лечении язвенной патологии желудка и двенадцатиперстной кишки / К. Муфер, O.K. Поздеев // «Человек и окружающая среда» Информационный бюллетень № 3-4 (8990).- Казань.- Март-Апрель 2006г.-С. 28-335. Исаева Г.Ш. Чувствительность клинических изолятов Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам / Г.Ш.Исаева, К. Муфер. О.К.Поздеев // Клиническая микробиология и Антимикробная химиотерапия.- 2005г. -Том 7.-№2. Приложение 1.-С.30-31.

6. Исаева Г.Ш. Возможность длительного сохранения изолятов Helicobacter pylori / Г.ШИсаева, К. Муфер. О.К.Поздеев // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. Внеочередной выпуск 1- 2004г.-С.58-60.

7. Муфер К. Влияние озонированной воды и сульфидной минерализованной воды из источника санатория «Чувашия» на культуральные свойства Helicobacter pylori in vitro/ К. Муфер, Э. Мукете, O.K. Поздеев, М.Ф.

Самигуллин // Материалы XIII научно-практической конференции Поволжского региона « Окружающая среда и здоровье населения» Казань,- 2005.-С. 23-26.

8. Муфер К. Определение антибиотикограмм изолятов Helicobacter pylori, выделенных у больных с язвенной патологией желудка / К. Муфер, Э. Мукете, О.К Поздеев, Г.Ш. Исаева П Материалы ХШ научно-практической конференции Поволжского региона « Окружающая среда и здоровье населения» Казань.- 2005.-С. 26-28.

9. Исаева Г.Ш. Идентификация бактерий у Helicobacter лу/оп'-негативных больных B-клеточной лимфомой желудка / Г.Ш. Исаева, К. Муфер. O.K. Поздеев, Ф. Jlepyc // Материалы международного симпозиума «Научные основы обеспечения зашиты животных от экзотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний». Казань, 2005г.-С.181-185.

10.Патент. Морозова Л.Г. Метод выделения культур Я. pylori / Исаева Г.Ш., Морозова Л.Г., Поздеев O.K., Лапшина Г.Н., Муфер К.// Патент № 2004123018 Российское агентство по патентам и товарным знакам.

11.Приоритетная справка. Самигуллин М.Ф., Симунов ЮЛ., Муфер К.. Добрывашин С.В., Якупов P.P. Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Приоритетная справка по заявке №2005115983 выдана федеральным институтом промышленной собственности 26 Мая 2005г.

12.Приооитетная справка. Исаева Г.Ш., Муфер К.. Поздеев O.K., Мукете Э. Дифференциальная диагностическая среда для выделения Я. pylori. Приоритетная справка по заявке №2006137093 выдана федеральным институтом промышленной собственности 19 Октября 2006г.

Отпечатано в ООО «Печатный двор», г. Казань, ул. Журналистов, 1/16, оф.207

Тел: 272-74-59,541-76-41,541-76-51. Лицензия ПД №7-0215 от 01.11.2001 г. Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 14.02.2007г. Усл. п.л 1,4. Заказ Жя К-6333. Тираж 100 зю. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Муфер Консолар

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.И

1 1. Морфология и фенотипические признаки Я pylori.

1.2. Современные методы индикации и идентификации Я. pylori.

1.3. Патогенез хеликобактериоза.

1.4. Современные методы этиотропной терапии хеликобактериозов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы.

2.2. Культивирование и выделение Я. pylori.

2 3. Изучение вирулентности и адгезивности выделенных изолятов Я. pylori.

2.4. Определение антибиотикограммы выделенных изолятов Я. pylori.

2.5. Рекултивирование и длительное сохранение культур Я. pylori.

2.6. Изучение влияния минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» на культуральные и биохимические свойства Я pylori in vitro.

2.7. Изучение влияния озонированной воды на культуральные и биохимические свойства Я pylori in vitro.

2.8.Разработка новых диагностических методов для ускоренной идентификации Я. pylori.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Общие характеристики выделенных изолятов Я pylori.

3.2. Антибиотикограммы выделенных изолятов Я. pylori.

3.3. Влияния минерализованной сульфидной воды из санатория «Чувашия» и озонированной воды на культуральные и биохимические свойства Я. pylori in vitro.

3 4. Рекултивирование и длительное сохранение культур Н. pylori.

3 5.Новые диагностические методы для ускоренной идентификации Н pylori.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Новые подходы к диагностике и элиминации Helicobacter Pylori при язвенной патологии желудочно-кишечного тракта"

Актуальность: Заболевания, опосредованные инфицированием организма человека Helicobacter pylori, составляют важную медико-социальную проблему современной медицины (Григорьев, 1996). Я pylori является широко распространённой бактерией, и по разным данным, инфицированность населения варьирует в пределах 60-90% (Cave, 1997). В развивающихся странах частота инфицирования Я. pylori составляет от 8090%; в США от 35-40% (Lacy et al., 2001) и в РФ от 71-90% (Reshetnikov et al., 2001). Я pylori выявляют у 80-100% больных хроническим гастритом, у 70-80% страдающих язвой желудка, у 90-100% — язвой двенадцатиперстной кишки, а также у 100% пациентов с MALT-лимфомами (Alkan et al., 1996; Sipponen, 1992; Sipponen et al., 1999), у 80-95% с аденокарциномами желудка (Lord et al., 2000) и у 60% больных с диспепсиями неязвенной этиологии (Moran et al.,1996). Кроме того, ряд авторов предполагает наличие взаимосвязи между инфицированием H.pylori и развитием ишемической болезни сердца (Mendall et al., 1994; Sandifer et al., 1996; Roussos et al., 2003).

Известно, что инфицированность H.pylori в четыре раза повышает риск развития язвенной патологии желудочно-кишечного тракта (Forman,1991, 1996). При этом колонизация бактериями слизистой желудка не всегда вызывает развернутую картину хронического гастрита. Чаще можно наблюдать латентный процесс либо бессимптомное носительство (Haas et al., 1994). Только у 15- 20% лиц инфицированы Я. pylori развивается язвенной патологии желудка и двенадцатиперстной кишки (Anand et al., 1996; Figura, 1996; Blaser, 1998; Lacy et al., 2001).

Следует отметить, что, несмотря на определенные успехи, до настоящего времени эффективность рекомендованных схем лечения хеликобактериозов варьирует в пределах 65-87%, но в большинстве случаев она зависит от чувствительности бактерий к применяемым антибактериальным препаратам (Brzozowski et al., 2003; Graham et al., 1996). Длительный прием препаратов, входящих в схему лечения, часто проводит к развитию резистентности и формированию устойчивых штаммов. В Европе резистентность Я pylori к метронидазолу в среднем составляет 27% и к кларитромицину 10% (Glupczynski et al., 2001). В частности, в странах восточной Европы, резистентность к метронидазолу и к кларитромицину доставляет 40,3% и 10,6% (Boyanova et al., 2002); в Великобритании 59% и 11% (Nicola et al., 2005); и в Голландии 14% и 1% (Janssen et al., 2006). В США резистентность к метронидазолу и кларитромицину составляет 25,1% и 12,9% (Duck et al., 2004) и в странах латинской Америки отмечают до 80% случаев резистентности к метронидазолу (Magalhaes et al., 2002). В странах Азии резистентность хеликобактеров к метронидазолу увеличилось с 22% в 1991 году до 73% в 1995 году (Ling et al., 1996). Отмечено и стремительный рост резистентности Я pylori к тетрациклину (Ribiero et al., 2004) и по иишым Jeng Yih Wu, (2005г) резистентность Я. pylori к тетрациклину достигает 59% в Китае.

В РФ резистентность бактерий к метронидазолу у больных, ранее получавших антихеликобактерную терапию по поводу язвенной болезни, может достигать 100% (Кудрявцева, 1999). Резистентные штаммы Я. pylori значительно труднее поддаются элиминации, что существенно снижает (до 50%) эффективность проводимого лечения и делает его экономически невыгодными (Иваницкий, 1998; Мерабишвили, 2001; Иваников, 2002). С повышением резистентности бактерий связывают рост осложнений 1 астродуоденальной патологии, и, следовательно, значительное увеличение затрат на лечение, что является не только медицинской, но и социально-экономической проблемой.

Минерализованные воды и озон нашли применение при лечении гастродуоденальной патологии. JI. В. Игнатко и В. В. Швардака (2001), отмечали, что сульфидная слабоминерализованная вода в дозе 5 мл/кг массы тела в комплексной терапии приводит к эрадикации Я. pylori у детей. Еще в 1994г, Hawrylik и соавторы сообщили об ингибирующем действием бисульфитных и сульфитных катионов на рост H.pylori in vitro. По данным

В.А. Максимова и соавторы (1994), озон воздействует на различные звенья патогенеза язвенной болезни; и внутривенное введение озонированного физиологического раствора на фоне противоязвенной терапии ведет к эрадикацией Я. pylori в 40-60% случаев (Каратаев , 2001).

Вышеуказанное делает перспективным поиск и внедрение в практику новых доступных подходов к элиминации Я pylori, направленных на улучшение результатов лечения язвенной гастродуоденальной патологии.

Золотым стандартом» бактериологической диагностики хеликобактериозов является выделение возбудителя из биоптатов слизистой (Баженов и соавт., 1990; Аруин, 1993). Важный момент бак. анализа — выявление уреазы, косвенно свидетельствующей о наличии H.pylori. К настоящему времени предложены различные методики. Тем не менее, можно столкнуться с ложноположительными результатами, связанной с ростом в посевах сопутствующей флоры. Этот факт представляет существенно значимой проблему разработки новых селективных сред и более устойчивых уреазных тестов.

Цель: разработать новые подходы к идентификации и элиминации Я pylori у пациентов с язвенными поражениями желудка и двенадцатиперстной кишки.

Задачи исследования: В соответствии с целью перед исследованием были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние озонированной и сульфидной минерализованной воды на культуральные и биохимические свойства Я. pylori in vitro. 2 Разработать новую питательную среду и модифицировать уреазный тест для ускоренного выделения Я. pylori. 3. Определить частоту обнаружения Я pylori у пациентов с раком желудка, гастродуоденитами и соответствующими язвенными поражениями в зависимости от пола и возраста больных и установить корреляцию между нею и заболеваемостью гастродуоденального отдела желудочно-кишечного тракта, t 4. Определить вирулентные свойства и чувствительность к антибактериальным препаратам штаммов Я pylori, выделенных от больных язвенной патологии желудка и двенадцатиперстной кишки.

6. Изучить возможность длительного сохранения культур Я. pylori.

Научная новизна

Впервые установлено, что озонированная вода концентрация озона 5мкг/мл снижает жизнеспособность Я. pylori in vitro, в том числе за счет * ограничения их подвижности, снижения уреазной активности и подавления роста на плотных средах. Сульфидная минерализованная вода из источника санатория «Чувашия» в различных концентрациях проявляет аналогичные свойства в отношении культур Я pylori in vitro.

Выявлена корреляция между степенью вирулентности изолятов Я pylori и тяжестью последовательных патологий слизистой желудка.

Предложена методика длительного сохранения выделенных штаммов Н pylori в консервирующей смеси при -10 °С.

Практическая значимость

Новые методы выделения и идентификации Н. pylori, предложенные в работе, значительно облегчают культивирование и идентификацию бактерий, выделенных из клинического материала. Разработанная модификация уреазного теста отличается простотой проведения, доступностью и воспроизводимостью полученных результатов.

Положения, выносимые на защиту

1. Озонированная вода в концентрации 5мкг/мл и сульфидная минерализованная вода из источника санатория «Чувашия» в различных концентрациях снижают жизнеспособность Н. pylori in vitro, проявляющуюся ограничением их подвижности, угнетением синтеза уреазы и подавлением роста на плотных средах.

3. Возможно длительное хранение изолятов Н. pylori при —10 °С в консервирующей смеси (сахарозо-желатиновой среде в буферном растворе) на срок до 12 месяцев.

Апробация материалов работы

Основные положения диссертации доложены на 11-ой научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2004); на 13-ой научно-практической конференции Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань 2005); на международном симпозиуме «Научные основы обеспечения зашиты животных от экзотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань 2005), на научно-практическом семинаре «Современные возможности выявления Я pylori и кампилобактерий в лабораторной практике» (Казань 2005).

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

История открытия Helicobacter pylori тесно связаны с историей изучения этиологии и патогенеза гастродуоденальной патологии, в первую очередь, язвенных гастрита и дуоденита. Не смотря на то, что по данным молекулярно-генетических исследований, «возраст» Я. pylori не превышает 2500-1 ЮООлет (Achtman, 2001; Falush et al, 2001), в прошлом тысячелетии, постулат Карла Шварца «нет кислоты — нет язвы» был самым достоверным объяснением патогенеза язвенной болезни желудка (Hellstrom, 2006). Впервые идея об инфекционном начале язвенной болезни возникла только в конце XIX века, и неким подтверждением права на ее существование явились находки спиралевидных бактерий в желудке животных и человека; впервые их обнаружили в желудке собак. До 1975 года, появлялись и другие сообщения о находках спиралевидных бактерий в желудке, однако тогда этим сообщениям особого внимания не уделяли (Аруин, 1990).

В 1983 году Б. Маршал и Р. Уоррен выделили из биоптата слизистой желудка больного с антральным гастритом грамотрицательные спиралевидные бактерии (Marshall, Warren, 1984). Р. Уоррен предложил включить их в состав рода Campylobacter под названием С. pyloris (Warren, 1984). Однако детальное изучение бактерий выявило у них существенные морфологические особенности, иной набор жирных кислот клеточной стенке, а так же по отсутствие выраженной гомологии ДНК с прочими кампилобактерами (Marshall, Royce, 1984). В 1989 году для них был организован новый род Helicobacter с одним видом —Н. pylori (Goodwin et al., 1989), название, данное бактериям, отражает их морфологические и экобиологические особенности: in vivo они спиралевидные (helical), in vitro -палочковидные (bacter); кроме того бактерии предпочитают колонизировать пилорический отдел желудка. В настоящее время род Helicobacter насчитывает примерно 30 видов выделяемых от людей и животных. У человека обычно выделяют Я pylori, реже — Я mustelae, Я. felis, Я. muridarum, H.fenneliae, Я. canis, Я. pullorum, Я bizzozeronnii, Я. heilmanii, Я. rappini и Я cinnaedi (Fox, 2002).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Муфер Консолар

выводы

2. Обнаружение бактерий прямо зависит от тяжести заболевания: чаще их выделяли от больных раком желудка (80% случаев), язвенной болезнью желудка (81%), язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (82%) и гастритом (61%). Зависимости частоты обнаружения Я pylori от пола пациента не установлено.

5. Проведение антибактериальной терапии значительно снижает уровень обсемененности (до 102-103 КОЕ\ биоптат), приводит к нарушению морфологических и культурально-биохимических свойств, снижает скорость роста и вирулентность при рекультивировании.

6. Показана перспективность применения минеральной сульфидной (концентрация H2S 25мг/мл) и озонированной (5 мкг озона/мл) воды в качестве альтернативного метода элиминации H.pylori либо включения в качестве дополнительного компонента в этиотропную терапию хеликобактериозов. и 7. Разработан новый метод упрощенной идентификации Н. pylori, включающий применение эритрит-сывороточного агара с мочевиной; модифицированного уреазного теста с 1% раствором Люголя и фурацилина.

8. Предложен метод длительного сохранения изолятов бактерий (до 12 месяцев) при температуре -10 °С в модифицированной ► консервирующей смеси на основе сахарозо-желатиновой среды в буферно-физиологическом растворе. г у

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Муфер Консолар, Казань

1. Аруин Л.И. Helicobacter (Campylobacter) pylori в этиологии и патогенезе гастрита и язвенной болезни / Л.И. Аруин // Архив патологии. - 1990. - Т.52.-№10.-С. 3-8.

2. Аруин Л.И. Helicobacter pylori и рак желудка/ Л.И. Аруин // Архив патологии. 1994. - №3. - С.3-5.

3. Аруин Л.И. Инфекция Helicobacter pylori канцерогенна для человека / Л.И. Аруин // Арх. пат. 1997. - Т.59. - Вып.З. - С.74-78.

4. Аруин Л.И. Хронический гастрит./ Л.И. Аруин, П.Я. Григорьев, В.Я.

5. Исаков, Э.П. Яковенко . Амстердам. - 1993 .-С.151-161.

6. Аруин Л.И. Helicobacter pylori в патогенезе язвенной болезни: что известно и что узнать предстоит? / Л.И. Аруин // Российская группа по изучению Helicobacter pylori. Сессия 5-я: Материелы.-Омск.-1997.-С.З-5.

7. Баженов Л.Г. Изучение антагонистического действия лактобацилл на Helicobacter pylori / Л.Г. Баженов, В.М. Бондаренко, Е.А. Лыкова, Д.К. Огай / / Микробиология 1997. - №3. - С.89-91.

8. Баженов Л.Г. Определение С.pylori у больных с гастродуоденальной патологией/ Л.Г. Баженов, Б.А Саидханов, Н.У. Ходжаева // Лабораторное дело. 1990. - №10. - С.71-73.

9. Баженов Л.Г. Выделение Helicobacter pylori из желудочного сока / Л.Г. Баженов, Н.У. Ходжаева, Р.А Садыков, Б.А. Саидханов // Лаб.дело.I1993. №5. - С.19-22.

10. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерии и их роль в развитии инфекционного процесса /В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии. -1999. №5. - С.34-39.

11. Ю.Бондаренко В.М. «Острова патогенности» бактерий / В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. 2001. - №4. -С.67-74.

12. Бондаренко В.М. Роль персистирующих условно-патогенных бактерий в патогенезе язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки/ В.М.

13. Бондаренко, В.М. Червинец, А.А. Воробьев // Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. 2003. - №4. -С. 11-17.

14. Грацианская А.Н. Инфекция Helicobacter pylori: история изучения и » современные подходы к диагностике, комплексной терапии / А.Н.

15. Грацианская, П.А. Татаринов // Международный журнал мед. практики. -2000.-№7.-С. 19-24.

16. З.Григорьев П.Я. Клинические аспекты пилорического геликобактериоза /П.Я.Григорьев// Леч. врач. 1998. - № 1. - С.5-9.

17. Н.Григорьев П.Я. Диагностика и лечение хронических болезней органов > пищеварения /П.Я.Григорьев, Э.П. Яковенко.-М.-1996.-Стр.5-10.

18. Григорьева Л.В. Метод определение Campylobacter pylori в слизистой оболочки желудка при язвенной болезни и хроническом гастрите/ Л.В. Григорьева, В.А. Исаков, В.М. Розенталь и др.// Лаб. дело. 1989. - № 6. -С.52-54.

19. Григорьева Л.В. Использование красок для выявления факторов патогенности эшерихий и сальмонелл / Л.В. Григорьева, Г.И. Корчак, Л.А. Малахова // Лаб. дело. 1992. - № 2. - С.57-59.

20. Дорофейчук В.Г. Неинвазивные методы диагностики пилорического хеликобактериоза/ В.Г. Дорофейчук, П.П. Потехин, А.Г. Закормерный и др. // Клиническая Лабораторная диагностика.-1997.-№8. -С.42-44.

21. Домарадский И.В. Вопросы патогенности Helicobacter pyloriI И.В. Домарадский // Эпидемиология и инфекционные болезни 2001. - №2. -С.45-47.

22. Домарадский И.В. Молекулярно-биологические основы изменчивости Helicobacter pylori / И.В. Домарадский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунолог.- 2002. -№3. С.79-84.

23. Жебрун А.Б. Диагностика профилактика и лечение заболеваний ассоциированных с Helicobacter pylori -инфекцией (Пособие для врачей) / А.Б. Жебрун, В.А. Александрова, Л.Б. Гончарова, Е.И. Ткаченко. Санкт Петербург. - 2002.

24. Иваников И.О. Воздействие озона на Helicobacter pylori in vitro/И.О. Иваников, Л.В.Кудрявцева, В.А.Исаков, Н.Н.Першина //Педиатрия.-2002.-№2 (Приложение).-С.50.

25. Иваницкий И.О. Проблема преодоления резистентности штаммов Helicobacter pylori / И.О. Иваницкий // В кн.: Материалы 7-й сессии Российской Группы по изучению Helicobacter pylori.-1998,- г., Нижний Новгород, с. 34-36.

26. Исаков В.А. Хеликобактериоз/ В.А. Исаков, И.В. Домарадский.-Медпрактика-М-Москва.-2000.

27. Каральник Б.Г. Стандартизация определения фимбрий (адгезинов) Citrobacter / Б.Г. Каральник, Ш.И. Сарбасова, Т.Д. Укбаева // Лаб. дело. -1990. № 2. - С.46-49.

28. Каратаев С.Д. Озонотерапия хеликобактерзависымых заболеваний / С.Д. Каратаев, В.А. Максимов, А.Л. Чернышев, А.Г.Куликов//Медицинская газета.-2001 .-№20.-С. 10.

29. Ковалева Н.Б. Возможности антихеликобактерной терапии в лечении воспалительных и эрозивно-язвенных заболеваний гастродуоденальной зоны, а также профилактики опухолевых изменений в желудке / Н.Б.

30. Ковалева, Е.В. Гулина, В.Б. Герасимов, С.Ю. Медведева, Г.И. Мосян //

31. Педиатрия: журнал им. Г.Н. Сперанского. 2002. - №2 (приложение). -С.55-59.

32. Кононов А.В. Helicobacter pylori и воспаление: иллюзия решенных проблем / А.В. Кононов // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2003. - №3. - Том XIII (приложение). - С.39-45.

33. Кудрявцева JI.B. Динамика резистентности штаммов Helicobacter pylori к антибиотикам у городского населения в России в 1996-1998 г.г. / JI.B.

34. Кудрявцева, В.А. Исаков, П.Л. Щербаков, И.О. Иванников, В.И. Минаев

35. ПВ кн.: Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии. Ивашкин В.Т., Мегро Ф., Лапина Т.Л. Москва. -Триада-Х. - 1999. - С.191-196.

36. Маев И.В. Helicobacter pylori: эпидемиология, диагностика, основы эрадикационной терапии / И.В. Маев, Е.С. Вьючинова, Е.Г. Лебедева, А.Б. Петухов, О.М. Антоненко, Е.Б. Грищенко // Москва. - 2000. - С.60.

37. Максимова В.А. Лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки методом озонотерапии /В.А. Максимова, С.Д. Каратаев, А.Л. Чернышев, В.А. Зайцев //Тр. 22-й научная конференция .-Смоленск-М.-1994.-С.227-231.

38. Меджиев М.М. Оценка питательной среды для выделения и культивирования Helicobacter pylori / М.М. Меджиев, З.У. Темирханова, Х.М. Алиева, Б.М. Исаханова //Журн. микробиол., эпидемиол., иммунол.- 2000. №2. - С.25-29.

39. Мерабишвили В.М. Рак желудка: эпидемиология, оценка эффективности лечения на популяционном уровне / В.М. Мерабишвили // Практ. онкология. 2001. - №3. -Том 7. - С.3-8.

40. Морозов И.А. Проблемы морфологической диагностики Helicobacter pylori в желудке / И.А.Морозов // Российский журнал гастроэнтерологии,гепатологии и колопроктологии. -1999.-№9(2).-С.46-7.

41. Никитин Ю.П. Распространенность хеликобактериоза в Сибири / Ю.П. Никитин, С.А. Курилевич, К. Гранберг //Вестник Рос. АМН.-1998.-№3.-С. 19-22.

42. Островский И.М. Роль хеликобактериоза в поражении желудка и двенадцатиперстной кишки/ И.М. Островский //Тер. Арх.-1998.-№2.-С.73-76.

43. Старостин Б. Д. Экспресс диагностика и лечение желудочного кампилобактериоза / Б.Д. Старостин, А.В. Петрутик// 4-й Всесоюзный съезд гастроэнтерологов: Материалы. -М.; Л., 1990.-Т.1.-С.581.

44. Щербаков П.Л. Результаты лечения пилорического геликобактериоза у детей с гастродуоденальной патологией / П.Л. Щербаков, Ю.Ф.Лобанов, О.Б. Лыкова// Педиатрия.-1991.-№9.-С.57-59.

45. Achtman М. Helicobacter pylori: molecular and cellular Biology / M. Achtman and S. Suerbaum // Horizon Scientific Press.- 2001.-P.311-321.

46. Alarcon Т. In vitro activity of omeprazole in combination with several antimicrobial agents against clinical aspects of Helicobacter pylori! T. Alarcon, D. Domingo, I. Sanchez// Eur J Clin Microbiol Infect Dis.- 1996.-Vol. 15(12).i P. 937-940.

47. Alkan S. Regression of salivary gland MALT lymphoma after treatment for Helicobacter pylori / S. Alkan, D.S. Karcher, M.A. Newman, P Cohen // Lancet. 1996. - Vol.348. - P.268-269.

48. Anand B.S. Low prevalence of peptic ulcer in normal individuals with Helicobacter pylori infection / B.S. Anand , A. K. Raed, H. M. Malaty et al. //

49. Amer. J. Gastroenterol. 1996. -Vol. 91. - P.l 112-1115.

50. Anke W. Identification and characterization of binding properties of Helicobacter pylori by glycoconjugate arrays / W. Anke, S. Odenbreit, J. Mahdavi, T. Boren, and S. Ruhl // Glycobiology.-2005.-Vol. 15.-№ 7.-P. 700708.

51. Appelmelk B.J. Why Helicobacter pylori has Lewis antigens / B.J. Appelmelk, M.A. Monteiro, S. L. Martin, A. P. Moran, С. M. Vandenbroucke-Grauls // Trends Microbiol. 2000. - Vol.8(12). - P.565-70.

52. Aspinall G. О. O- antigen chains in the lipopolysaccharide of Helicobacter pylori NCTC 11637 / G. O. Aspinall, M.A. Monteiro, H. Pang, E.J. Walsh, A.P. Moran // Carbohydr. Lett. 1994. -Vol.1. - P. 151-156.

53. Atherton J.C. Non-Endoscopic tests in the diagnosis of Helicobacter pylori infections / J.C. Atherton //Alimentary Pharmacology and Therapy.-1997.-Vol. 11 (Suppl. 1 ).P.-11 -20.

54. Bankova V. S. Propolis: recent advances in chemistry and plant origin / V. S. Bankova, S. L. de Castro, M. C. Marcucci // Apidologie.-2000.-Vol. 31.- P. 315.

55. Bassler В. L. How bacteria talk to each other: regulation of gene expression by quorum sensing / B. L. Bassler // Curr. Opin. Microbiol. 1999. Vol.2. -P. 582-587.

56. Baysan A. The use of ozone in dentistry and medicine / A Baysan, E. Lynch //

57. Prim Dent Care.- 2005.-Vol.l2.-P.47-52.

58. Benaissa M. Changes in Helicobacter pylori ultrastructure and antigens during conversion from the bacillary to the coccoid form/M. Benaissa, P. Babin, N. Quellard et al // Infection and immunity.- 1996.-Vol. 64(6).-P. 2331-5.

59. Blaser M. J. Helicobacter pylori and gastric diseases / M. J. Blaser // BMJ.1998.-Vol.316.-P. 219-221.

60. Blaser M. J. Helicobacter pylori: costs of commensalism / M. J. Blaser // Sixth United European Gastroenterology Week.- 1997. Abstracts - on - disk. 01.03.

61. Blaser M. J. Helicobacter pylori genetic diversity and risk of human disease / M. J. Blaser, D. E. Berg // J. Clin. Invest. 2001. - Vol.107. - №7. - P.767-773.

62. Blaser M. J. Helicobacters are indigenous to the human stomach: duodenal ulceration is due to changes in gastric microbiology in the modern era / M. J. Blaser // Gut. 1998. - Vol.43. - P.21-27.

63. Boren T. Attachment of Helicobacter pylori to human gastric epithelium mediated by blood group antigens / T. Boren, P. Falk, K. A. Roth, G. Larson, S. Normark // Science. 1993. - Vol.262. - P. 1892-1895.

64. Boyanova L. The status of antimicrobial resistance of Helicobacter pylori in eastern Europe / L. Boyanova , A. Mentis, M. Gubina, E. Rozynek, G.

65. Brzozowski T. Triple eradication therapy counteracts functional impairment associated with Helicobacter pylori infection in Mongolian gerbils / T.

66. Brzozowski, P.C. Konturek, S. Kwiecien, S. J. Konturek, R. Pajdo et al. // J.

67. Physiology. Pharmacol. 2003. - Vol. 54(1). - P.33-51.

68. Burdock G. A. Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis) / G. A. Burdock // Food Chem. Toxicol. 1998.-Vol. 36.-P. 347363.

69. Burger O. A high molecular mass constituent of cranberry juice inhibits 1 Helicobacter pylori adhesion to human gastric mucus / O. Burger, I. Ofek, M.

70. Tabak, E. I. Weiss, N. Sharon, I. Neeman // FEMS Immunol Med Microbiol.-2000,-Vol. 29.-P. 295-301.

71. Byrd J.C. Inhibition of gastric mucin synthesis by Helicobacter pylori / J.C. Byrd, С. K. Yunker, Q. S. Xu, L. R. Sternberg, R. S. Bresalier // Gastroenterology. 2000. - Vol.118(6). - P. 1072-1079.

72. Cabrita J. Features and trends in Helicobacter pylori antibiotic resistance in Lisbon area, Portugal (1990-1999) / J. Cabrita, M. Oleastro, R. Matos R. et al // J Antimicrob. Chemother. 2000.-Vol.46.-P. 1029-31.

73. Cave D. R. How is Helicobacter pylori transmitted? / D. R. Cave // Gastroenterology. 1997. - Vol. 113 (Suppl.).-P. 9-14.

74. Chan N.W. С. The biosynthesis of Lewis X in Helicobacter pylori / N. W. C. Chan, K. Stangier, R. Sherburne, D.E. Taylor, Y. Zhang, N.J. Dovichi, M.M. Palcic // Glycobiology. 1995. - Vol.5. - P.683-688.

75. Chen G. Apoptosis in gastric epithelial cells is induced by H.pylori andaccompanied by increased expression / G. Chen, E.M. Sordinello, W.G. Ramey et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - Vol.20. - № 239 (2). -P.629-632.

76. Chow W. H. An inverse relation between cagA strains of Helicobacter pylori infection and risk of esophageal and gastric cardia adenocarcinomas / W.H.

77. Chow, M.J. Blaser, W.J. Blot et al. // Cancer Res. 1998. - Vol.58. - P.588-590.

78. Coelho L. G. Latin-American consensus conference on Helicobacter pylori infection / L.G. Coelho, R. Leon-Barua, E. M. M. Quigley et al // Am J Gastroenterol.- 2000.Vol. 95.P.2688-91.

79. Cohen H. Endoscopic methods for the diagnosis of Helicobacter pylori / H. Cohen, L. Laine // Alimentary Pharmacology and Therapy.-1997.-Vol. ll(Suppl.l).P.-3-9.

80. Cole S.P. Characterization of monospecies biofilm formation by Helicobacter pylori / S.P. Cole, J. Harwood, R. Lee et al. // J. of Bacteriology. 2003.- Vol. 186 (10).-P.3124-3132.

81. Costerton J. W. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections / J. W. Costerton, P. S. Stewart, and E. P. Greenberg // Science.-1999.- Vol. 284,-P.1318-1322.

82. Costerton J. W. Microbial biofilms / J. W. Costerton // Annu. Rev. Microbiol.-1995.-Vol. 49.- P. 711-745.

83. Costerton J. W. Bacterial biofilms in nature and disease / J. W. Costerton // Annu. Rev. Microbiol.- 1987. -Vol. 41. -P. 435-464.

84. Costerton J. W. The bacterial glycocalyx in nature and disease / J. W. Costerton, R. T. Irvin., K. J. Cheng //Annu. Rev. Microbiol.-1981.-Vol.35.-P. 299-324.

85. Covacci A. Tyrosine-phosphorylated bacterial proteins. Trojan horses for the host cell / A. Covacci, R. Rappuoli // J. Exp. Medic. 2000. - Vol.l91(4). -P.587-592.i 86.Cover T. L. Purification and characterization of the vacuolating toxin from

86. Helicobacter pylori / T. L. Cover, M. J. Blaser // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 10570-10575.

87. Cover T. L. Divergence of genetic sequences for the vacuolating cytotoxin among Helicobacter pylori strains / T. L. Cover, M. K. R. Tummura, P. Coa, S. A. Thompson, Blaser M. J. // J. Biol. Chem. -1994. Vol.269. - P. 10566-10573.

88. Cowan M. M. Plant products as antimicrobial agents / M. M. Cowan //Clin. Microbiol. Rev. 1999. Vol. 12.-P.564-582.

89. Crabtree E. J. Mechanisms of Helicobacter pylori induced mucosal damage / E.J. Crabtree, N. Figura In: Clinical pharmacology and therapy of Helicobacter pylori infection. Scarpignato C., Bianchi Porro G // Basel: Karger. - 1999.-Vol.ll. - P.21-43.

90. Crabtree J.E. Systemic and mucosal humoral responses to Helicobacter pylori in gastric cancer / J.E. Crabtree, J.I. Wyatt, G.M. Sobala et al. // Gut. 1993. -Vol.34.-P.1339-1343.

91. Cuchi B.E. Evolution of the sensitivity of 235 strains of Helicobacter pylori from 1995 to 1998 and impact of antibiotic treatment / B.E. Cuchi, B.M. Forne, R. S. Quintana et al. // Enferm Infecc Microbiol Clin .-2002.-Vol.-20.-P.157-60.

92. Current European concept in the management of Helicobacter pylori infection. The Maastricht Consensus Report // Gut. 1997. - Vol.41. -№1. - P.8-13.

93. Danesh J. Eradication of Helicobacter pylori and non-ulcer dyspepsia / J. Danesh, R.E. Pounder//Lancet.- 2000.-Vol. 355.-P.766-767.

94. Delany I. The Fur repressor controls transcription of iron-activated and -repressed genes in Helicobacter pylori /1. Delany, G. Spohn, R. Rappuoli and V. Scarlato // Mol. Microbiol.-2001.-Vol. 42.-P.1297-1309.

95. DeLoney C. R. Characterization of an in vitro-selected amoxicillin-resistant strain of Helicobacter pylori / C. R. DeLoney, and N. L. Schiller // Antimicrob. Agents Chemother.-2000.-Vol. 44.-P.3368-3373.

96. OO.Dhaenens I. Identification, characterization and immunogenicity of the lactoferin-binding protein from Helicobacter pylori /1. Dhaenens, F. Szczebara, M.O. Houson // Infection and Immunity.-1997.-Vol.65(2).-P.514-518.

97. Duck W. M. Antimicrobial Resistance Incidence and Risk Factors among Helicobacter p^/on-Infected Persons, United States / W. M. Duck, J. Sobel, J. M. Pruckler et al. // Emerging Infectious Diseases. -2004. Vol. 10(6).

98. Dundon, W. G. Virulence factors of Helicobacter pylori / W. G. Dundon, M. de Bernard and C. Montecucco // Int. J. Med. Microbiol.-2001.-Vol. 290,1. Р.647-658.

99. Dwarakanath A.D. The production of neuraminidase and fucosidase by Helicobacter pylori: their possible relationship to pathogenicity / A.D.

100. Dwarakanath, H. H. Tsai, D. Sunderland, C. A Hart, N. Figura, J.E. Crabtree, J.

101. M. Rhodes // FEMS Immunol Med Microbiol. 1995. - Vol.12. -P.213-216.

102. Eaton K. A. Virulence of coccoid and bacillary forms of Helicobacter pylori in gnotobiotic piglets/ K. A. Eaton, К. M. Makim et al// J Infect Dis.-1995.-Vol. 17 l(2).-P.459-62.

103. Eaton K. A. Essential role of urease in pathogenesis of gastritis induced by » Helicobacter pylori in gnotobiotic piglets / K. A. Eaton, C. L. Brooks, D. R.

104. Morgan, and S. Krakowka // Infect. Immun.-1991.- Vol. 59.-P. 2470-2475.

105. Eaton K.A. Effect of gastric pH on urease-dependent colonization of gnotobiotic piglets of Helicobacter pylori / K.A Eaton., S. Krakowska //Infect Immun. 1994. - Vol.62. - P.3604-3607.

106. Eaton K. A. Colonization of gnotobiotic piglets by Helicobacter pylori deficient in two flagellin genes / K. A. Eaton, S. Suerbaum, C. Josenhans, and S. Krakowka // Infect. Immun.- 1996.-Vol. 64.-P.2445-2448.

107. Edwards D. I. Nitroimidazole drugs—action and resistance mechanisms. Mechanisms of action / D. I. Edwards. // J. Antimicrob. Chemother.-1993.-Vol. 31.-P. 9-20.

108. Elisabet C. HpaA Is Essential for Helicobacter pylori Colonization in Mice / C. Elisabet, N. Johanna, B. Ingrid, L. N. Carol, and S. Ann-Mari. // Infectionand Immunity.- 2006.- Vol. 74, No. 2.-P. 920-926.

109. Ernst F. D. Iron-responsive regulation of the Helicobacter pylori iron-cofactored superoxide dismutase SodB is mediated by Fur / F. D. Ernst, G.

110. Homuth, J. Stoof, U. Mader, B. Waidner, E. J. Kuipers, M. Kist, J. G. Kusters, S. Bereswill, and A. H. van Vliet. // J. Bacteriol.- 2005. -Vol. 187:3687-3692.

111. Ernst P. B. The Immunology of Я pylori from pathogenesis to prevention /Р. B. Ernst, P. Michetti, P.D. Smith eds. // Lippincot-Raven, Philadelphia 1997.

112. Eurogast Study Group. An international association between Helicobacter pylori and gastric cancer // Lancet. 1993. - Vol.341. - P.1359-1362.

113. Evans, D. G. jV-Acetylneuraminyllactose-binding fibrillar hemagglutinin of

114. Campylobacter pylori: a putative colonization factor antigen / D.G. Evans, D. J. Evans, Jr., J. J. Moulds, and D. Y. Graham // Infect. Immun. 1988.-Vol. 56.P.2896-2906.

115. Evans D.J. Characterization of Helicobacter pylori neutrophil activating protein / D.J. Evans, D.G. Evans, T. Takemura et al. // Infect Immun. - 1995. -Vol.63.-P.2213-2220.

116. Fallone C.A. Epidemiology of the antibiotic resistance of Helicobacter pylori in Canada / C.A. Fallone // Canadian Journal of Gastroenterology- 2000.-№14.-P. 879-82.

117. Fan X. Helicobacter pylori urease binds to class II MHC on gastric epithelial cells and induces their apoptosis / X. Fan, H. Gunasena, Z. Cheng, R. Espejo, S.

118. E. Crowe, P. B. Ernst, and V. E. Reyes// Immunology-2000.-Vol. 165.-P. 19181924.

119. Falush D. Recombination and mutation during long-term gastric colonization by Helicobacter pylori: Estimates of clock rates, recombination size and minimal age / D.Falush, C.Kraft, N. Taylor et al. // PNAS- 2001.-Vol 98.-P. 15056-61.

120. Fellenius E. Substituted benzimidazoles inhibit acid secretion by blocking Hl,Kl-ATPase / E. Fellenius, T. Berglindh, G. Sachs, L. Olbe, S. E. Sjostrand, B. Wallmark. //Nature-1981/-Vol.290.-P. 159-161.

121. Figura N. Helicobacter pylori exotoxins and gastroduodenal diseases associated with cytotoxic strain infection / N. Figura// Aliment. Pharmacol. Ther.- 1996.-Vol.10 (Suppl. 4).-P.9-14.

122. Finlay В. B. Common themes in microbial pathogenicity revisited / В. B.

123. Finlay, S. Falkow // Microbiol. Mol. Biol. Rev. -1997. -Vol.61. -P. 136-169.

124. Forman D. Helicobacter pylori and gastric cancer / D. Forman // Scand. J.

125. Gastroenterology. 1996. - Vol.220. - P.23-26.

126. Forman D. The etiology of gastric cancer / D. Forman // I ARC Sci Publ. -1991. P.22-32.

127. Fox J. G. The non-Я pylori helicobacters: their expanding role in gastrointestinal and systemic diseases / J. G. Fox // Gut. -2002. Vol. 50(2).-P.273-83.

128. Fryklund J. Specific labeling of gastric HI, Kl-ATPase by omeprazole / J. Fryklund, K. Gedda and B. Wallmark //Biochem. Pharmacol. 1988.-Vol. 37.-P. 2543-2549.

129. Fukushima K. Characterization of sialosylated Lewis x as new tumor-associated antigen / K. Fukushima, M. Hirota, I. Terasaki, A. Wakisaka, H.Togashi et al. // Cancer Res. 1984. - Vol. 44. - P.5279-5285.

130. Fuqua W. C. Quorum sensing in bacteria: the LuxR/LuxI family of cell density-responsive transcriptional regulators / W. C. Fuqua, S. C. Winans, and E. P. Greenberg//J. Bacteriol. -. 1994.-Vol. 176.-P.269-275.

131. Galan M. V. Oral broccoli sprouts for the treatment of Helicobacter pylori infection: a preliminary report / M.V.Galan, A.A. Kishan, A.L. Silverman. // Dig Dis Sci.- 2004.-Vol. 49.-P.1088-1090.

132. Galmiche A. The N-terminal 34kDa fragment of Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin targets mitochondria and induces cytochrome с release/

133. A. Galmiche, J. Rassow, A. Doye et al.// Embo J.-2000.-Vol. 19(23).-P.6361-70.

134. Gancz H. Iron and pH Homeostasis Intersect at the Level of Fur Regulation in r the Gastric Pathogen Я pylori / H. Gancz, S. Censini and D. Scott Merrell//1.fection and Immunity.- 2006.- Vol. 74(1).-P. 602-614.

135. Gebert B. Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin inhibits T lymphocyte activation / B. Gebert, W. Fischer, E. Weiss, R. Hoffmann, and R. Haas. // Science. 2003.-Vol. 301.- P.1099-1102.

136. Gerhard M. Clinical relevance of Helicobacter pylori gene for blood-group ► antigen-binding adhesin / M. Gerhard, N. Lehn, N. Neumeyer et al. // Proc

137. Natl Acad Sci USA.-1999.-Vol. 96(22).-P.12778-83.

138. Gerrits M. M. Effects of 16S rRNA gene mutations on tetracycline resistance in Helicobacter pylori / M.M. Gerrits, M. Berning, A. H. Van Vliet, E. J. Kuipers, and J. G. Kusters. // Antimicrobial Agents Chemother.-2003.-Vol. 47.-P. 2984-2986.

139. Gerrits M. M. 16S rRNA mutation-mediated tetracycline resistance in Helicobacter pylori / M.M. Gerrits, M. R. De Zoete, N. L. Arents, E. J. Kuipers, and J. G. Kusters// Antimicrobial Agents Chemother.-2002.- Vol. 46.-P. 29963000.

140. Glupczynski Y. European multicentre survey of in vitro antimicrobial resistance in Helicobacter pylori / Y. Glupczynski, F. Megraud, M. Lopez-Brea and L.P. Andersen // European J. Clin Microbiol Infect Dis.- 2001.-Vol. 20.-P. 820-823.

141. Gobert A. P. Cutting edge: urease release by Helicobacter pylori stimulates macrophage inducible nitric oxide synthase / A. P. Gobert, B. D. Mersey, Y. Cheng, D. R. Blumberg, J. C. Newton, and К. T. Wilson // J. Immunol.-2002.-Vol. 168.-P.6002-6006.

142. Goggin P.M. Surface hydrophobicity of gastric mucosa in Helicobacter pylori juice / P.M. Goggin, J. M. Marrero, R. T. Spychal, P.A. Jackson et al. // Scand. J. Gastroenterology. 1992. - Vol.27. - P.1011-1017.

143. Gold В. D. Helicobacter pylori infection in children / B. D. Gold // Current Problems in Pediatrics and Adolescent Health Care.- 2001.-Vol.3l.P.247-66.

144. Goodwin C.S., Transfer of Campylobacter pylori and Campylobacter mustelae to Helicobacter gen.nov. as Helicobacter pylori comb, nov., respectively / C.S. Goodwin, J.A. Armstrong,T. Chilvers et al. // Int. J. Syst. Bact. 1989. -Vol.39. - P.397-405.

145. Graham D.Y. Helicobacter pylori infection in the pathogenesis of duodenal ulcer and gastric cancer / D.Y. Graham // Gastroenterology. 1997. - Vol.113. -P. 15-24.

146. Graham D. Y. Patients, payers, and paradigm shifts: what to do about H.pylori /D.Y. Graham, L. Rabeneck // Am. J. Gastroenterol. 1996. - Vol.91. - P. 188190.

147. Ha N.C. Supramolecular assembly and acid resistance of Helicobacter pylori urease / N.C. Ha, S.T. Oh, J. Y. Sung, K. A. Cha , M. H. Lee, В. H. Oh // Nat Struct Biol.- 2001.-Vol. 8.-P. 505-509.

148. Hawrylik S. J. Bisulfite or Sulfite Inhibits Growth of Helicobacter pylori / S.J. Hawrylik, D.J. Wasilko, S.L. Haskell, T.D. Gootz and S.E. Lee //Journal of

149. Hibi K. Enhanced cellular proliferation and p53 accumulation in gastric mucosa chronically infected with H.pylori / K. Hibi, H. Mutomi, H. Koizumi et al. // Am. J. Clin. Pathol. 1997. - Vol.108. - P.26-34.

150. Higashi H. SHP-2 tyrosine phosphatase as an intracellular target of Helicobacter pylori CagA protein / H. Higashi, R. Tsutsumi, S. Muto, T. Sugiyama, T. Azuma, M. Asaka, and M. Hatakeyama // Science.- 2002. -Vol.295.-P.683-686.

151. Hua J. S. Helicobacter pylori acquisition of metronidazole resistance by natural transformation in vitro / J. S. Hua, P. Y. Zheng, Т. K. Fong et al. //World J Gastroenterol- 1998.-Vol.4.-P.385-7.

152. Jacoby G. A. New mechanisms of bacterial resistance to antimicrobial agents / G. A. Jacoby and G. L. Archer. //N. Engl. J. Med.-1991.-Vol.324.-P.601-612.

153. Jessen R.J. Методы статистических обследований / R.J. Jessen // M. -1985. - C.21-29.

154. Joyce E. A. Evidence for a signaling system in Helicobacter pylori: detection of a luxS-encoded autoinducer / E. A. Joyce, B. L. Basler, A. Wright // J. Bcateriology.-2000.-Vol. 182(13).-P. 3638-43.

155. Kim J. J. Helicobacter pylori impairs DNA mismatch repair in gastric epithelial cells / J. J. Kim, H. Tao, E. Carloni, W. K. Leung, D. Y. Graham et al // Gastroenterology. 2002. - Vol.123. - P.542-553.

156. Krol W. Synergistic effect of ethanolic extract of propolis and antibiotics on the growth of Staphylococcus aureus / W. Krol, S. Scheller, J. Shani, G. Pietsz Z. Czuba // Arzneimittelforschung .- 1993.-Vol.43.- P. 607-609.

157. Kuck D. Vacuolating cytotoxin of Helicobacter pylori induces apoptosis in human gastric epithelial cell line AGS/ D. Kuck, B. Kolmerer, C. Iking-Konert et al./ Infect. Immune.-2001.-Vol. 69(8).-P.5080-7.

158. Kuhler T. Structure-activity relationship of omeprazole and analogues as

159. Helicobacter pylori urease inhibitors / T. Kuhler, J. Fryklund, N.-A. Bergman, J. Weilitz, A. Lee, and H. Larsson // J. Med. Chem.- 1995.-Vol. 38.-P.4906-4916.

160. Lacy В. E. Helicobacter pylori: ulcers and more: the beginning of an era /В. E. Lacy, J. J. Rosemore // Nutr. 2001.-Vol.l31.-P.2789S-93S.

161. Lam S. K. Report of the 1997 Asia Pacific Consensus Conference on the management of Helicobacter pylori infection / S. K. Lam, N.J. Talley // J Gastroenterol Hepatol. 1998.-Vol.13.-P.l-12.

162. Langton S.R. Helicobacter pylori associated phospholipase A2 activity: A factor in peptic ulcer production? / S.R. Langton, S.D. Cesareo // J. Clin. Pathol. 1992 - Vol.45. - P.221-224.

163. Lee W. K. Quantitative effect of LuxS gene inactivation on the fitness of Helicobacter pylori / W. K. Lee, K. Ogura, J. T. Loh, T. L. Cover, D. E. Berg // Applied Environmental Microbiology.-2006.-Vol 72(10).-P. 6615-22.

164. Lezcano I. Ozone inactivation of microorganisms in water. Gram positive Bacteria and yeast / I. Lezcano, R. P. Rey, M.S. Gutierrez, C. Baluja, E.

165. Sanchez // Ozone Sci Eng.- 2001.-Vol.23.-P.l83-187.

166. Lord R. V. Prevalence of Helicobacter pylori infection in 160 patients with Barrett's oesophagus or Barrett's adenocarcinomas / R.V. Lord, DJ. Frommer, S. Inder, D. Tran et al. // Aust. N. Z. J. Surg. 2000. - Vol.70(l). - P.26-33.

167. Lundstrom A. M. HpaA shows variable surface localization but the gene expression is similar in different Helicobacter pylori strains / A. M. Lundstrom, K. Blom, V. Sundaeus, and I. Bolin // Microb. Pathog.- 2001.-Vol. 31.-P.243-253.

168. Mackay W. G. Biofilms in drinking water systems—a possible reservoir for Helicobacter pylori /W. G. Mackay, L. T. Gribbon, M. R. Barer, and D. C. Reid // Water Sci. Technol.-1998.-Vol.38.-P.181-185.

169. Magalhaes P.P. CagA status of Helicobacter pylori infection and p53 gene mutations in gastric adenocarcinomas / P.P. Magalhaes, D. M. Queiroz, A. A. Camargo, A. J. Simpson // Carcinogenesis. 2003. - Vol.24(l). - P. 145.

170. Magalhaes P.P. Helicobacter pylori Primary Resistance to Metronidazole and Clarithromycin in Brazil / P.P. Magalhaes, D. M. Queiroz, D. V. C. Barbosa et al.// Antimicrobial agents and chemotherapy.- 2002.-Vol. 46.- No. 6.- P. 20212023.

171. Mai U. E. H. Surface proteins from Helicobacter pylori exhibit chemotaxis for human leucocytes and are present in gastric mucosa / U. E. H. Mai, G. I. Perez

172. Perez, J. В. Allen, S. M. Wahl and M. J. Blaser et al. // J. Exp. Med. 1992. -Vol.175 -P.517-525.

173. Malfertheiner P. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection—The Maastricht 2-2000 Consensus Report / P Malfertheiner, F Megraud, С O'Morain et al. // Aliment Pharmacol Ther.- 2002.-Vol.16.-P.167-80.

174. Marais A. Microbiology of Helicobacter pyloriI A. Marais, L. Montiero, F. Megraud// Curr Top Microbiol Immunol.- 1999.-Vol.241.-P. 103-22.

175. Markesich D.C. Helicobacter pylori infection does not reduce the viscosity of human gastric mucus gel / D.C. Markesich, B.S. Anand, G.M. Lew, D.Y. Graham // Gut. 1995. - Vol.36. - P.327-329.

176. Marshall B.J. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration / B.J. Marshall, L. R. Warren // Lancet. 1984. -Vol.1(8390).-P.1311-1315.

177. Marshall B.J. Original isolation of Campylobacter pyloridis from human gastric mucosa / B.J. Marshall, H. Royce, D. I. Anner et al. // Microbios. Lett.-1984.- Vol. 25.-P.83-8.

178. Marshall B.J. Rapid urease test in the management of Campylobacter pyloridis-associated gastritis / B.J. Marshall, J. R. Warren, G. J. Francis et al. // American Journal of Gastroenterology.- 1987.-Vol.82.-P.200-10.

179. Megraud F. The treatment of refractory Helicobacter pylori infection / F. Megraud, H. Lamouliatte // Aliment Pharmacol Ther.- 2003.-Vol.17.-P. 133343.

180. Megraud F. Antibiotic susceptibility and resistance / F. Megraud, S. Hazell, Y. Glupczynski// In: Helicobacter pylori: physiology and genetics. Mobley H.L.T., Mendz G.L., Hazell S.L., eds. Washington, DC: ASM Press.- 2001.-P.511-30.

181. Megraud F. H pylori antibiotic resistance: prevalence, importance, and advances in testing. Recent advances in clinical testing / F. Megraud //Gut.-2004.-Vol.53.-P. 1374-1384.

182. Mendall M.A. Childhood living condition and Helicobacter pylori seropositivity in adult life / M.A. Mendall, P.M. Goggin, N. Molineau, J. Levy, T. Toosy, D. Strachan, T.C. Northfield // Lancet. 1992. - Vol.339. - P.896-897.

183. Mendall M.A. Relation of Helicobacter pylori infection and coronary heart disease / M.A. Mendall, P.M. Goggin, N. Molineau, J. Levy, T. Toosy, D. Strachan, A.J. Camm, T.C. Northfield // Br. Heart. J. 1994. - Vol.71. - P.437-439.

184. Merritt J. Mutation of luxS affects biofilm formation in Streptococcus mutans / J. Merritt , F. Qi, S. D. Goodman, M. H. Anderson and W. Shi //Infect. Immun. -2003.-Vol.71 .-P. 1972-1979.

185. Midolo P.D. Bactericidal activity and synergy studies of PPI and antibiotics against Я pylori in vitro/ P.D. Midolo, J.D. Turnidge et al./ J Antimicrob Chemother.-1997.- Vol. 39(3).-P.331-7.

186. Miehlke S. The Helicobacter pylori vacA si, ml genotype and cagA associated with gastric carcinoma in Germany / S. Miehlke, C. Kirsch, K. Agha-Amiri et al. // Int. J. Cancer. 2000. - Vol.87(3). - P.322-327.

187. Miehlke S. Helicobacter pylori vac A, ice A, and cagA status and pattern of gastritis in patients with malignant and benign gastroduodenal disease / S. Miehlke, J. Yu, M. Schuppler et al. // Am. J. Gastroenterol. 2001. - Vol.96(4). - P.1008-1013.

188. Miller M. B. Quorum sensing in bacteria / M. B. Miller, B.L. Bassler // Annu. Rev. Microbiol.- 2001.-Vol. 55.-P. 165-199.

189. Mirzoeva О. K. Antimicrobial action of propolis and some of its components: the effect on growth, membrane potential and motility of bacteria / О. K. Mirzoeva, R. N. Grishanin and P. C. Colder // Microbiol Res.-1997.-Vol. 152.-P. 239-246.

190. Mobley H. L. Molecular biology of microbial ureases / H. L. Mobley, M. D. Island, R. P. Hausinger//Microbiol Rev.- 1995.-Vol. 59.-P. 451-480.

191. Moss S. Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori / S. Moss, J. Calam, B. Agarwal et al. // Gut. 1996. - Vol.38(4). - P.498-501.

192. Murray L. J. Inverse relationship between alcohol consumption and active Helicobacter pylori infection: the Bristol Helicobacter project / L. J. Murray, A. J. Lane, I. M. Harvey, J. L. Donovan, P. Nair, and R. F. Harvey //Am. J.

193. Gastroenterol.-2002.-Vol.97.-P.2750-2755.

194. Nagata К. Potent inhibitory action of the gastric proton pump inhibitor lansoprazole against urease activity of Helicobacter pylori: unique actionselective for H. pylori cells / K. Nagata, H. Satoh, T. Iwahi, T. Shimoyama, and

195. T. Tamura //Antimicrob. Agents Chemother.-1993.-Vol. 37.-P.769-774.

196. Neilsen H. Neutrophil activation by Helicobacter pylori lipopolysaccharide / H. Neilsen, S. Birkholz, L.P. Andersen et al. // J. Infect. Dis. 1994. - Vol.170.- P.21-29.

197. Northfield T.C. Decreased hydrophobicity of gastroduodenal mucosa due to Я pylori infection in humans / T.C. Northfield // In; Helicobacter pylori. Basic Mechanisms to clinical cure. Ed. by R.H.Hunt, G.N.J.Tytgat. Boston-London.- 1994.-P. 139-147.

198. Papadopoulou A. Characterization of protein—polyphenol interactions / A. Papadopoulou, and R. A. Frazier // Trends Food Sci. Technol.-2003.-Vol. 5.-P.186-190.

199. Parsonnet J. Risk for gastric cancer in people with CagA positive or CagA negative Helicobacter pylori infection / J. Parsonnet, G.D. Friedman, N. Orentreich, H. Vogelman I I Gut. 1997. - Vol.40(3). - P.297-301.

200. Parsons H.K. Helicobacter pylori antimicrobial resistance in the United Kingdom: the effect of age, sex and socio-economic status / H.K. Parsons, M.J. Carter, D.S. Sanders et al. //Aliment Pharmacol Ther.-2001 .-Vol. 15.-P. 1473-8.

201. Patel P. Fibrinogen: a link between chronic infection and coronary heart disease (letter) / P. Patel, D. Carrington, D.P. Strachan, E. Leatham, P.M. Goggin, T.C. Northfield, M.A. Mendall // Lancet. 1994. - Vol.343. - P. 16341635.

202. Patel P. Helicobacter pylori infection in childhood: risk factors and effect on growth / P. Patel, M.A. Mendall, S. Khulusi, T.C. Northfield, D.P. Strachan // Br. Med. J. 1994. - Vol.309. - P.l 119-1123.

203. Paul R. Mutations of the Helicobacter pylori genes rdxA and pbpl cause resistance against metronidazole and amoxicillin / R. Paul, S. Postius, K. Melchers and K. P. Schafer // Antimicrob. Agents Chemother.-2001.-Vol.45.-P.962-965.

204. Peek R.M. Helicobacter pylori and gastrointestinal tract adenocarcinomas / R.M. Peek, M.J. Blaser // Nat.Rev. Cancer. 2002. - Vol.2(l). - P.28-37.

205. Penston J.G. Review article: clinical aspects of Helicobacter pylori eradication therapy in peptic ulcer disease / J.G. Penston // Aliment. Pharmacol. Ther. -1996.-Vol.10.-P.469-486.

206. Pesci E. C. Genetic organization and enzymatic activity of a superoxide dismutase from the microaerophilic human pathogen, Helicobacter pylori / E. C. Pesci, and C. L. Pickett // Gene.-1994.-Vol. 143.-P.111-116.

207. Pflock M. Genetic evidence for histidine kinase HP 165 being an acid sensor of Helicobacter pylori / M. Pflock, P. Dietz, J. Schar, and D. Beier// FEMS Microbiol. Lett.-2004.-Vol. 234.-P.51-61.

208. Piotrowski J. Induction of acute gastritis and epithelial apoptosis by Helicobacter pylori lipoposaccharide / J. Piotrowski, E. Piotrowski, D.

209. Skrodzka et al. // Scand. J. Gastroenterology. -1997. Vol.32(3). - P.203-211.

210. Prinz C. Helicobacter pylori virulence factors and host immune response: implications for therapeutic vaccination / C. Prinz, N. Hafsi, P. Volande // Trends Microbiol. 2003. - Vol.11(3). - P.134-138.

211. Queiroz D.M. CagA- positive Helicobacter pylori and risk for developing gastric carcinoma in Brasil / D.M. Queiroz, E.N. Mendes, G.A. Rocha, A.M. Oliveita, C.A. Oliveita et al. // Int. J. Gastroenterol. 1998. - Vol.135. - P.135-139.

212. Ren Z. Coccoid forms of Helicobacter pylori can be viable/Z. Ren, G. Pang, M. Musicka et al. / Microbios.-1999.-Vol.97(388).-P. 153-63.

213. Reshetnikov O.V. Prevalence of Helicobacter pylori infections in the Asian part of Russia /O.V. Reshetnikov , S.S. Kurilovich , C. Granberg , V. M. Haiva // International Journal of Circumpolar Health.- 2001.-Vol. 60(2).-P.249-52.

214. Roussos A. Helicobacter pylori and respiratory diseases: a review / A. Roussos, N. Philippou, K.J. Gourgoulianis // Wordl J. Gastroenterol. 2003. -Vol.9(l). - P.5-8.

215. Sabbi T. Efficacy of non-invasive tests in the diagnosis of Helicobacter pyloriinfections in pediatric patients / T. Sabbi, P. De Angelis, F. Colestro et al. // Archives of Pedriatic and Adolescent Medicine.- 2005.-Vol.l59.P. 238-241.

216. Samra Z. Resistance of Helicobacter pylori isolated in Israel to metronidazole, clarithromycin, tetracycline, amoxicillin and cefixime / Z. Samra, H. Shmuely, Y. Niv et al. // J Antimicrob Chemother.- 2002.-Vol.49.-P. 1023-6.

217. Sandifer Q.D. Association of Helicobacter pylori infection and coronary heart disease. Association may not be causal / Q.D. Sandifer, S. Vuilo, G. Crompton // BMJ. 1996. - Vol.312. - P.251.

218. Santos F. A. Antibacterial activity of Brazilian propolis and fractions against oral anaerobic bacteria / F. A. Santos, E. M. Bastos, M. Uzeda, M. A. Carvalho, L. M. Farias, E. S. Moreira, F. C. Braga // J Ethnopharmacol.-2002.-Vol.80.-P. 1-7.

219. Schmidt H. Pathogenicity Islands in Bacterial Pathogenesis / H. Schmidt and M. Hensel//Clinical Microbiology Reviews.- 2004.- Vol. 17(1).- P.14-56.

220. Schreiber S. The spatial orientation of Helicobacter pylori in the gastric mucus / S. Schreiber, M. Konradt, C. Groll, P. Scheid, G. Hanauer, H.O. Werling, C. Josenhans, and S. Suerbaum //Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.-2004.-Vol. 101.-P. 5024-5029.

221. Schreiber S. In vivo distribution of Helicobacter felis in the gastric mucus of the mouse: experimental method and results / S. Schreiber, M. Stuben, C. Josenhans, P. Scheid , and S. Suerbaum // Infect. Immun.-1999.-Vol.67.-P. 5151-5156.

222. Segal E. D. Characterization of Helicobacter pylori urease mutants / E. D. Segal, J. Shon, L .S. Tompkins // Infect. Immun. 1992. - Vol.60. - P. 18831889.

223. Selbach M. Src is the kinase of the Helicobacter pylori CagA protein in vitro and in vivo /М. Selbach, S. Moese, C. R. Hauck, T. F. Meyer, and S. Backert // J. Biol. Chem.-2002.-Vol.277.-P.6775-6778.

224. Shahamat M. Selected cryopreservatives for long-term storage of Helicobacter pylori at low temperatures / M. Shahamat, C. Paszko-Kolva, U.E.

225. Mai, H. Yamamoto, R.R. Colwell // J.Clin.Pathol. 1992. - Vol.45(8). - P.735-736.

226. She F. F. Virulence of water-induced coccoid Helicobacter pylori and its experimental infection in mice / F. F. She, J. Y. Lin, J. Y. Liu, C. Huang, D. H. Su // World J. Gastroenterol. 2003. - Vol.9(3). - P.56-520.

227. Sherburne R. Helicobacter pylori expresses a complex surface carbohydrate. Lewis X / R. Sherburne, D. E. Taylor // Infect. Immun. 1995. - Vol.63. -P.4565-4568.

228. Sheri P. C. Characterization of Monospecies Biofilm Formation by Helicobacter pylori / P. C. Sheri, J. Harwood, R. Lee, R. She, and D. G. Guiney //Journal of Bacteriology.- 2004.- Vol. 186(10).- P. 3124-3132.

229. Shibata H. CagA status of Helicobacter pylori infection and p53 gene mutations in gastric adenocarcinoma / Shibata A., J. Parsonnet, T.A. Longacre et al. // Carcinogenesis. 2002. - Vol.23 (3). - P.419-424.

230. Sirko A. Plant ureases: roles and regulation / A. Sirko, R. Brodzik// Acta Biochim Pol.- 2000.-Vol.47.-P. 1189-1195.

231. Sipponen P. Helicobacter pylori infection a common worldwide environmental risk factor of gastric cancer? / P. Sipponen I I Endoscopy. - 1992. - Vol.24. - P.424-427.

232. Sipponen P. Гастрит- атрофический гастрит кишечная метаплазия - рак желудка: обратима ли эта последовательность? / P. Sipponen, К. Seppala // Рос. Журнал гастроэнтерол., гепатол., колопрокт. - 1999. - №2. - С.30-35.

233. Sitas R. Helicobacter pylori infection rates in relation to age and social class in population of Welsh men / R. Sitas, D. Forman, J.W. Yarnell, M.L. Burr, P.C. Elwood, S. Pedley, K.J. Marks // Gut. -1991. Vol.32. - P.25-28.

234. Sjostrom J.E. Basis for the Selective Antibacterial Activity In Vitro of Proton Pump Inhibitors against Helicobacter spp. / J.E. Sjostrom, T. Kuhler and H. Larsson //Antimicrobial Agents and Chemotherapy. -1997.- Vol. 41(8).-P. 1797-1801.

235. Slomiany B. L. Glycosulfatase activity in of Helicobacter pylori toward gastric mucin / B. L. Slomiany, V. L. Murty, J. Piotrowski, Y. H. Liau, P. Sundarum, A. Slomiany // Biochem Biophys. Res. Commun. 1992. - Vol.183. - P.506-513.

236. Somal A. N. Susceptibility of Helicobacter pylori to the antibacterial activity of manuka honey / A. N. Somal, К. E. Coley, P. C. Molan and В. M. Hancock. //J. R. Soc. Med.-1994.-Vol.87.-P.9-12.

237. Spengler A. Successful freeze storage and lyophilization for preservation of Helicobacter pylor ./ A. Spengler, A. Gross, H. Kaltwasser // J. Clin. Pathol. -1992. Vol.45(8). - P.737.

238. Suerbaum S. Helicobacter pylori infection / S. Suerbaum and P. Michetti // N. Engl. J. Med.-2002.-Vol.347.-P.l 175-1186.

239. Thompson S. A. Isolation of the Helicobacter pylori recA gene and involvement of the recA region in resistance to low pH / S. A. Thompson, and M. J. Blaser// Infect. Immun.-1995.-Vol. 63.-P.2185-2193.

240. Tiwari S. K. Rapid diagnosis of Helicobacter pylori infections in dyspeptic patients using salivary secretions: a non-invasive approach / S. K. Tiwari, A. A. Khan, K. S. Ahmed et al. // Singapore Med. J.- 2005.-Vol.46(5).-P. 224.

241. Tomb J. F. The complete genome sequence of the gastric pathogen Helicobacter pylori / J. F. Tomb, O. White, A. R. Kerlavage et al. //Nature.-1997,-Vol. 388.-P.539-547.

242. Trieber C.A. Mutations in the 16S rRNA genes of Helicobacter pylori mediateresistance to tetracycline / C.A. Trieber, D. E. Taylor // J Bacteriol- 2002.-Vol.l84.-P.2131-40.

243. Triebling A. T. Severity of Helicobacter induced gastric injury correlates with gastric juice ammonia / A. T. Triebling, M.A. Korsten , J. W. Dlugosz et al. // Dig. Dis. Sci -1991. - Vol.36. - P. 1086-1096.

244. Tsuda M. Genetic transformation in Helicobacter pylori /М. Tsuda, M. Karita, T. Nakazawa // Microbiol. Immunol. 1993. - Vol.37(l). - P.85-89.

245. Vakil N. Helicobacter pylori treatment: a practical approach /N. Vakil //Am. J. Gastroenterology.-2006.-Vol. 101(3).-P. 497-499.

246. Vester B. Macrolide resistance conferred by base substitutions in 23S rRNA / B. Vester, and S. Douthwaite // Antimicrob. Agents Chemother.-2001.-Vol.45.-P.l-12.

247. Vogt K. Influence of omeprazole on urease activity of Helicobacter pylori in vitro/ K. Vogt, H. Hahn // Zentralbl bakteriol.-1993.-Vol. 280 (l-2).-P. 273-8.

248. Warren J. R. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis / J. R. Warren // Lancet. 1984. - Vol.1-P. 1273.

249. Wetkamp J.H. Identification and characterisation of Helicobacter pylori phospholipase activity / J.H. Wetkamp, G.I. Perez-Perez, G. Bode, P. Malferheiner, M.J. Blaser // Int. J. Med. Microbiol. 1993. - Vol.280. - P.l 1-27.

250. Worst D.J. Multiple haem-utilization loci in Helicobacter pylori / D.J. Worst, J. Maaskant, С. M. Vandenbroucke-Grauls, J. G. Kusters // Microbiology.-1999,-Vol. 145.-P. 3681-8.

251. Wotherspoon A. C. Helicobacter pylori associated gastritis and primary B-cell gastric lymphoma / A. C. Wotherspoon, C. Ortiz - Hidalgo, M. R. Falzon, P.G. Isaacson //Lancet. -1991. - Vol.338. - P.l 175-1176.

252. Yan J. Frequencies of the expression of main protein antigens from Helicobacter pylori isolates and production of specific serum antibodies in infected patients/ J. Yan, Y. F. Mao, and Z. X. Shao. // World J. Gastroenterol.-2005.-Vol. 43.-P.450-454.

253. Yoshida N. Mechanisms involved in Helicobacter pylori induced inflammation / N. Yoshida, D.N. Granger D.J. Evans et al. // Gastroenterology. - 1993.- Vol.105. -P.1431-1440.

Информация о работе

Муфер Консолар
кандидата биологических наук
Казань, 2007
ВАК 03.00.07

Диссертация

Новые подходы к диагностике и элиминации Helicobacter Pylori при язвенной патологии желудочно-кишечного тракта - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы