Роль эритропоэтина в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии

Мещерякова, Марина Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль эритропоэтина в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль эритропоэтина в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии"

На правах рукописи

МЕЩЕРЯКОВА Мария Владимировна

РОЛЬ ЭРИТРОПОЭТИНА В РЕГУЛЯЦИИ ПРОЦЕССОВ КЛЕТОЧНОГО ОБНОВЛЕНИЯ В МНОГОСЛОЙНОМ ПЛОСКОМ ЭПИТЕЛИИ

03.00.13 - физиология 14.00.15 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курган - 2009

1 в И ЮМ 2009

003472521

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»

Научные руководители:

академик РАМН, профессор, д.м.н. Захаров Юрий Михайлович; профессор, д.м.н. Куренков Евгений Леонидович.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Соловьев Владимир Сергеевич; доктор медицинских наук, Щудло Михаил Моисеевич

Ведущая организация:

ГУ «Институт иммунологии и физиологии УрО РАН», г. Екатеринбург

Защита диссертации состоится «30» июня 2009 г. в // часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций ДМ 208.079.01, созданного при- Федеральном государственном учреждении науки «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» имени академика Г.А. Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» по адресу. 640014, г. Курган, ул. М. Ульяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждения науки «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» имени академика Г.А. Илизарова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи».

Автореферат разослан «¿с/» 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В традиционном представлении, сложившемся в физиологии к концу XX века, эритропоэтин является гемопоэтическим гормоном, ответственным за пролиферацию, дифференциацию и угнетение апоптоза в чувствительных к нему клетках кроветворной ткани. Чувствительность клеток к эритропо-этину определяется наличием на мембране этих клеток эритропоэтиновых рецепторов.

Продукция эритропоэтина у человека осуществляется главным образом перитубулярными и тубулярными клетками почек (Kurtz А. et al., 1988). Однако 10-15% эритропоэтина плазмы крови имеет внепочечное происхождение (Рябов С.И., Шостка Г.Д., 1985; Erslev A.J. et al., 1980).

В работах последних 20 лет появились данные о синтезе эритропоэтина и экспрессии эритропоэтиновых рецепторов гепатоцитами, окружающими венозные сосуды печени, печеночными макрофагами, ядросодержащими эритроидными клетками костного мозга (Захаров Ю.М., 2007; Eckardt K.U., Bauer С, 1989), клетками центральной нервной системы (Захаров Ю.М., 2007), в тканях женской репродуктивной системы (молочные железы, матка), плаценте, эмбриональных тканях (Conrad K.P. et al., 1996; Benyo D.F., Conrad K.P., 1999; Sasaki R. et al., 2000; Yasuda Y. et al., 2001; Erbayraktar S. et al., 2003; Farrell F., Lee A., 2004). При этом активация функции клеток вызывает усиление продукции эритропоэтина и экспрессии его иРНК, что происходит в клетках молочной железы в период лактации, клетках эпителия эндометрия при смене фаз менструального цикла (Yasuda Y. et al., 1998; Juul S.E. et al., 2000; Yasuda Y. et al., 2001; Yokomizo R. et al., 2002), при цервикальной интра-эпителиальной неоплазии (Acs G. et al., 2003), в опухолевой ткани органов женской репродуктивной системы (Acs G. et al., 2002, 2004; Farrell F., Lee A., 2004; McBroom J.W. et al., 2005; Yasuda Y. et al, 2002).

Действие эритропоэтина на некроветворные эритропоэтин-чувствительные ткани так же, как и на кроветворную, проявляется активацией в них антиапоптозных программ и процессов клеточной пролиферации (Захаров Ю.М., 2007).

Многослойный плоский эпителий шейки матки относится к самообновляющимся тканям организма человека, в которых постоянно идет процесс физиологической регенерации (Leblond С.Р, 1956; Baserga А, 1962; Bertalanfly F.D., Lau С, 1962). У женщин репродуктивного возраста эпителиальный пласт экзоцервикса подвергается постоянным изменениям путем пролиферации, созревания, десквамации и полностью замещается новой популяцией клеток каждые 4-5 дней (Krantz К.Е, 1962). В традиционном представлении регуляция данного процесса осуществляется половыми гормонами, гормонами гипофиза и ростовыми факторами. Однако, в современной

литературе отсутствуют данные о роли эритропоэтина в регуляции данных процессов.

Принимая во внимание вышеизложенное, целью данной работы стало исследование физиологической роли эритропоэтина в процессах клеточного обновления эпителиальных тканей, в частности - многослойного плоского эпителия шейки матки.

Цель исследования:

исследовать роль эритропоэтина, как содержащегося в плазме крови, так и экспрессирующегося в эпителиальном пласте экзоцервикса, в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии шейки матки.

Задачи исследования:

1. Исследовать уровень плазменного эритропоэтина и содержание ре-тикулоцитов в крови у здоровых женщин с неизмененной шейкой матки, женщин с хроническим цервицитом, цервикальными интра-эпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени, имеющих нормальные показатели периферической красной крови.

2. Исследовать экспрессию эритропоэтина и маркеров клеточного обновления (bcl-2, р53 и ki-67) в многослойном плоском эпителии экзоцервикса у данных групп обследованных женщин.

3. Установить физиологическую роль эритропоэтина плазмы крови и его внутритканевой продукции клетками экзоцервикального эпителия в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии шейки матки.

Научная новизна

Впервые исследован уровень эритропоэтина в плазме крови у женщин репродуктивного периода жизни с нормальными показателями периферической красной крови, с неизмененной шейкой матки и страдающих хроническим цервицитом и цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени.

Впервые исследована взаимосвязь уровня эритропоэтина в плазме крови и его экспрессии в многослойном плоском эпителии шейки матки в норме, при хроническом цервиците и цервикальных интраэпителиаль-ных неоплазиях 1 и 2 степени с характером изменений активности маркеров клеточного обновления в экзоцервикальном эпителиальном пласте.

Установлено ауто- и паракринное влияние эритропоэтина на клетки эпителиального пласта экзоцервикса с активацией в нем антиапоптозных программ.

Практическая значимость работы

Полученные нами результаты дополняют имевшиеся ранее в физиологии и клинической медицине знания о неэритропоэтических функциях эри-тропоэтина, его способности активировать антиапоптозные программы в чувствительных к нему клетках. Воздействуя на клетки многослойного плоского эпителия экзоцервикса, эритропоэтин оказывает влияние на процессы клеточного обновления в эпителиальном пласте, изменяя в конечном итоге их направленность в сторону активации антиапоптозных программ и усиления клеточной пролиферации.

Внедрение результатов

Основные положения работы используются в научно-педагогической деятельности кафедр нормальной физиологии, патологической анатомии и акушерства и гинекологии №1 ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава». Результаты работы включены в Отчет ЮУНЦ РАМН (2008 г.), утвержденный Бюро отделения медико-биологических наук РАМН 09.12.2008 г.

Апробация

Результаты исследований были доложены и обсуждены на VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (г. Челябинск, май 2008 г.), на Международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (г. Тюмень, июнь 2008 г.), на VI симпозиуме «Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний» (г. Москва, январь 2009 г.), на научных конференциях кафедры нормальной физиологии Челябинской государственной медицинской академии (2007, 2008, 2009 гг.).

Работа поддержана грантом губернатора Челябинской области по результатам регионального конкурса научных проектов Российского гуманитарного научного фонда и регионального конкурса научных проектов «Молодежный грант - 2006».

Основные положения, выносимые на защиту

1. У женщин репродуктивного периода жизни с нормальными показателями периферической красной крови имеются различия в уровне эритропоэтина плазмы крови и выраженности ретикулоцитарной реакции костного мозга, сочетающиеся с различными состояниями экзоцервикса: неизмененная шейка матки, хронический цервицит, цер-викальная интраэпителиальная неоплазия 1 и 2 степени.

2. По мере появления и усиления воспалительно-дисрегенераторных (хронический цервицит) и неопластических (цервикальная интраэпи-

телиальная неоплазия 1 и 2 степени) изменений в многослойном плоском эпителии шейки матки в экзоцервикальном эпителиальном пласте нарастает экспрессия эритропоэтина, сочетаясь с усилением экспрессии антиапоптозного фактора bcl-2, проапоптозного белка р53 и маркера клеточной пролиферации ki-67.

3. Эритропоэтин, оказывая ауто- и паракринное влияние на клетки многослойного плоского эпителия шейки матки, активирует реализацию антиапоптозных программ в эпителиальном пласте экзоцервикса.

Публикации

По теме работы опубликовано 7 научных статей, в том числе 2 - в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав, содержащих полученные результаты и их обсуждение, заключения, выводов, списка литературы. Библиография представлена 273 источниками, из которых 65 отечественных и 208 зарубежных. Работа иллюстрирована 31 рисунком и 12 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Исследование проводилось на базе МУЗ Городской клинической больницы №6 г. Челябинска (главный врач - И.А. Скорик), кафедр нормальной физиологии и патологической анатомии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава», а также на базе проблемной научно-исследовательской лаборатории экспериментальной и клинической физиологии системы крови, иммунитета и цитогенетики Южно-уральского научного центра Российской академии медицинских наук (директор - академик РАМН, профессор, д.м.н. Ю.М. Захаров).

Нами были обследованы 52 женщины репродуктивного периода жизни от 18 до 49 лет (30,67±9,4), с сохраненной менструальной функцией, вне беременности и периода лактации, имевшие показатели периферической крови в пределах возрастной нормы (Рябов С.И., 1963; Ярустов-ская Л.Э. и др., 1969).

Из 52 пациенток 20 женщин считали себя здоровыми и были обследованы в рамках программы диспансерного наблюдения. Остальные 32 женщины наблюдались по поводу хронических воспалительных заболеваний органов женской репродуктивной системы (хронический эндометрит, хронический сальпингит, хронический сальпингоофорит) и возник-

шего на их фоне бесплодия. Среди указанных 32 женщин у 18 имела место стадия ремиссии имеющегося заболевания, и каких-либо жалоб на момент обследования они не предъявляли. Остальные 14 из 32 жаловались на кровянистые выделения из половых путей, причем 4 из них на момент обследования отмечали наличие тянущих болей внизу живота, что было связано с обострением хронического воспалительного процесса.

Всем обследуемым проводилось общее гинекологическое исследование, а также расширенная кольпоскопия с прицельной биопсией шейки матки для проведения гистологического исследования. При расширенной кольпоскопии использовались общепринятые для данного метода исследования критерии оценки состоянии экзоцервикса (Василевская JI.H., 1986; Прилепская В.Н. и др., 2001; Бауэр Г., 2002; Коханевич Е.В. и др., 2004); проводилась проба с 3% уксусной кислотой и проба Шиллера. По результатам расширенной кольпоскопии осуществлялся выбор наиболее измененного участка экзоцервикса для проведения прицельной биопсии и дальнейшего гистологического исследования биоптатов с использованием общепринятых морфологических критериев диагностики хронического цервицита и цервикальных интраэпителиальных неоплазий 1 и 2 степени (Яковлева И.А., Кукутэ Б.Г., 1979; Хмельницкий O.K., 2000).

Для проведения гистологического исследования полученные фрагменты слизистой оболочки шейки матки фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина и заливались в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм, полученные с каждого парафинового блока, после предварительного депарафинирования окрашивались гематоксилином и эозином для проведения обзорной микроскопии.

Для углубленного морфологического исследования биоптатов использовался метод иммуногистохимического анализа с применением мо-ноклональных антител к исследуемому антигену. В клетках многослойного плоского эпителия шейки матки методом иммуногистохимии определяли экспрессию эритропоэтина, используя в качестве первичных специфических антител моноклональные антитела к эритропоэтину (Еро (N-19): sc-1310, Santa Cruz Biotechnology, Inc., California, U.S.A.). С целью изучения активности процессов пролиферации и апоптоза в эпителии экзоцервикса исследовали экспрессию маркеров клеточного обновления bcl-2, р53 и ki-67, используя в качестве первичных антител моноклональные антитела к р53 («Novocastra», RTU-p53-D07, United Kingdom), bcl-2 («Novocastra», RTU-bcl-2, United Kingdom), ki-67 («Novocastra», RTU-Ki-67-MM1, United Kingdom). В качестве вторичных антител и визуализирующей системы применяли соответствующий набор детекции (Peroxidase Detection System, Novocastra, United Kingdom).

Для оценки результатов иммуногистохимической реакции использовали морфометрический метод (Автандилов Г.Г., 1994). Оценку экспрес-

сии эритроиоэтина и bcl-2 проводили путем подсчета количества клеток, имеющих в цитоплазме преципитаты коричневого цвета, на 1000 клеток эпителия экзоцервикса. Результаты иммуногистохимической реакции для р53 и ki-67 оценивали путем подсчета количества клеток с окрашенными в коричневый цвет ядрами на 1000 клеток эпителия экзоцервикса. Районы параллельно произведенных срезов одних и тех же участков биоптатов сопоставляли по экспрессии указанных маркеров с целью определения пространственного расположения исследуемых клеток в пласте многослойного плоского цервикального эпителия.

С целью выяснения направленности изменений процессов клеточного обновления нами были введены и рассчитаны следующие индексы соотношения: p53/bcl-2 (соотношение процессов про- и антиапоптоза) и ki-67/p53 (соотношение процессов клеточной пролиферации и проапоптоза).

У всех обследуемых стандартными методами оценивались уровень эритроцитов, гемоглобина, цветовой показатель, морфология мазка крови; определялось количество и степень зрелости ретикулоцитов по Гельмейеру, рассчитывалось абсолютное количество ретикулоцитов в 1 ммЗ крови, определялось содержание эритропоэтина в 1 мл плазмы крови методом иммуно-ферментного анализа с использованием тест-системы ЕРО [Erythropoietin] ELISA [Enzyme-Linked Immunosorbent Assay], Biomerica, Inc. (U.S.A.).

Результаты исследования были обработаны общепринятыми методами описательной статистики с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±т). О достоверности различий показателей сравниваемых групп судили по непараметрическим критериям Краскела-Уоллеса и Манна-Уитни. Различия считались достоверными только при р<0,05. Для ряда переменных рассчитывалась матрица непараметрических коэффициентов корреляции Спирмена с определением статистической значимости (р<0,05; р<0,01).

Все исследования были проведены на основании информированного письменного согласия пациенток, являются разрешенными и не противоречат требованиям Хельсинской декларации.

Обследованные нами женщины в соответствии с отсутствием или характером изменений многослойного плоского эпителия шейки матки и наличия признаков хронического воспаления в строме были разделены на 4 группы: контрольная группа - 11 женщин с неизмененной шейкой матки; 1-я группа - пациентки с хроническим цервицитом (п=14), 2-я -пациентки с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1степени (п=17), 3-я - пациентки с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 2 степени (п=10). Признакам цервикальных интраэпителиальных не-оплазий у всех обследованных всегда сопутствовали кольпоскопические и гистологические признаки, характерные для хронического цервицита той или иной степени выраженности.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

У всех 52 обследованных женщин показатели эритроцитов, гемоглобина, цветового показателя находились в пределах описанной нормы (Козловская Л.В., Мартынова М.А., 1975; Захаров Ю.М., 2003), и статистически достоверных различий между группами обследованных по данным показателям периферической крови мы не обнаружили.

Несмотря на отсутствие достоверных различий в содержании эритроцитов, уровне гемоглобина и значении цветового показателя среди выделенных нами 4 групп обследованных, в группе женщин с цервикаль-ной интраэпителиальиой неоплазией 1 степени и, особенно, в группе с цервикальной интраэпителиальиой неоплазией 2 степени в ретикулоци-тограмме обнаруживалась более оживленная продукция эритроцитов по сравнению с контрольной группой и группой женщин с хроническим цервицитом. Это доказывалось как более высоким уровнем ретикулоци-тов в %о, так и большим количеством ретикулоцитов в 1 мкл крови у женщин, отнесенных к группам с ЦИН 1 и 2 степени, по сравнению с контрольной группой, а также с группой лиц с хроническим цервицитом.

Параллельно с нарастанием уровня ретикулоцитов в периферической крови у пациенток с цервикальными интраэпитслиальными неоплазиями 1 и 2 степени регистрировалось появление в ретикулоцитограмме молодых форм ретикулоцитов II и III степени зрелости, отсутствовавших у лиц контрольной группы и пациенток с хроническим цервицитом (рис. 1).

Норма

ЦИН 1 ЦИН 2

Рис.1. Распределение ретикулоцитов по степени зрелости по Гельмейеру у женщин с неизмененной шейкой матки, хроническим цервицитом и цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени.

Примечание:

по оси ординат - количество ретикулоцитов на 1000 эритроцитов (в %о); * - наличие статистически значимого различия при сравнении с контрольной группой (р < 0,0!); ** - наличие статистически значимого различия между группами с цервикальной интраэпителиальиой неоплазией 1-й степени и цервикальной интраэпителиальиой неоплазией 2-й степени (р < 0,05).

Мы также сравнили показатели периферической красной крови у дополнительно выделенных групп женщин, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями органов женской репродуктивной системы, находящихся в стадии ремиссии и в стадии обострения имеющегося заболевания, предположив, что наличие данных хронических воспалительных заболеваний могло оказать влияние на сравниваемые показатели. Однако, статистически значимых различий в содержании эритроцитов, уровне гемоглобина, значении цветового показателя и количестве ретикулоцитов у здоровых женщин и женщин с хроническими заболеваниями женской репродуктивной системы, различающихся по стадии имеющего заболевания (ремиссия или обострение) не было выявлено.

Учитывая отсутствие статистически значимых отличий в показателях периферической красной крови (содержание эритроцитов, уровень гемоглобина, значение цветового показателя, относительное и абсолютное количество ретикулоцитов) в пределах дополнительно выделенных нами групп, можно сделать вывод, что наличие сопутствующих воспалительных заболеваний органов женской репродуктивной системы не оказывает влияния на состояние периферического отдела эритрона в независимости от стадии воспалительного процесса (ремиссия или обострение), что делает обоснованным сохранение деления обследованных контингентов женщин на основные выделенные нами группы в соответствии с отсутствием или характером изменений многослойного плоского эпителия шейки матки и наличия признаков воспаления в ее строме.

Выше описанные изменения в картине периферической красной крови сочетались у пациенток с различиями в уровне эритропоэтина плазмы крови (рис. 2). Так, в группе с цервикальной интраэпителиальной неопла-зией 1 степени уровень эритропоэтина был в 1,5 (19,3±0,62 мЕд/мл), а в группе с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 2 степени - более чем в 2 раза выше (28,5±1,75 мЕд/мл) по сравнению с контролем (12,64±0,29 мЕд/мл). Напротив, у пациенток, страдающих хроническим цервицитом, у которых в слизистой оболочке экзоцервикса отмечалось избыточное разрастание соединительной ткани (т.е. имел место склероз) и отсутствовали проявления гиперплазии и повышенной митотической активности клеток в структуре эпителиального пласта, обнаруживалось достоверно меньшее, чем у женщин контрольной группы значение уровня эритропоэтина плазмы (8,39±0,45 мЕд/мл).

Так же, как и для показателей периферической красной крови, статистически значимых различий в уровне эритропоэтина в пределах групп в зависимости от наличия сопутствующего заболевания и его стадии выявлено не было.

30 -I 25 20 -15 10 -I 5 0 •

□ ЭПО

Норма ХЦ ЦИН 1 ЦИН 2

Рис. 2. Уровень эритропоэтина в плазме крови (мЕд/мл) у женщин

с неизмененной шейкой матки, хроническим цервицитом и цервикальными интраэпителиальными неоплазиями I и 2 степени.

Примечание:

по оси ординат - содержание эритропоэтина в плазме крови в мЕд/мл; * - наличие статистически значимого различия при сравнении с контрольной группой (р < 0,01); ** - наличие статистически значимого различия при сравнении с показателями группы с хроническим цервицитом показателей групп с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1-й и 2-й степени (р < 0,01);

*** - наличие статистически значимого различия между показателями групп с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1-й и 2-й степени (р < 0,01).

Выявленный нами размах колебаний показателей содержания эритропоэтина в плазме крови обследуемых - от 5,76 мЕд/мл до 39,82 мЕд/мл близок к границам «нормы», определенной другими исследователями (Erslev A.J, Gabuzda T.G, 1985; Miller et al, 1985). Однако, при сравнении выделенных нами основных четырех групп обнаружено большее содержание эритропоэтина и более выраженная ретикулоцитар-ная реакция костного мозга у пациенток с повышенной пролифератив-I ной активностью и явлениями гиперплазии в многослойном плоском эпителии шейки матки.

Анализируя полученные нами результаты, мы предположили, что увеличенное по сравнению с контрольной группой содержание эритропоэтина в плазме крови обследованных нами пациенток с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 и 2 степени может быть следствием его повышенной продукции многослойным плоским эпителием слизистой оболочки шейки матки при данных состояниях. С целью проверки этого предположения мы оценивали с помощью непрямой иммуногисто-химической реакции экспрессию эритропоэтина в экзоцервикальном эпителии (рис. 3), а также сопоставляли уровни эритропоэтина в плазме крови и его присутствия в многослойном плоском эпителии шейки матки у женщин детородного возраста.

Норма

ЦИН 1 ЦИН 2

Рис. 3. Экспрессия эритропоэтина в пласте многослойного плоского эпителия экзоцервикса (на 1000 клеток эпителиального пласта) в норме, при хроническом цервиците и цервикальной интраэпителиальной неоплазии I и 2 степени.

Примечание:

по оси ординат - количество клеток в пласте многослойного плоского эпителия экзоцервикса, экспрессирующих эритропоэтин (на 1000 клеток);

* - наличие статистически значимого различия при сравнении с показателями контрольной группы (р < 0,05);

** - наличие статистически значимого различия между показателями группы с хроническим цервицитом и групп с цервикальной интраэпителиальной неошшией 1-й и 2-й степени (р < 0,01); *** - наличие статистически значимого различия между показателями групп с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1-й и 2-й степени (р < 0,01).

В контрольной группе обследованных число клеток экзоцервикального эпителия, обнаруживших экспрессию эритропоэтина в цитоплазме, составило 149,01 ±9,29 на 1000 эпителиальных клеток; при этом эритропоэтин выявлялся в цитоплазме отдельных клеток базального слоя эпителиального пласта экзоцервикса. В группе с хроническим цервицитом, несмотря на более низкое, по сравнению с контрольной группой, содержание эритропоэтина в плазме крови, число эпителиальных клеток, экспрессирующих эритропоэтин, было несколько больше, чем в контрольной группе, и составило 181,63+4,63 на 1000 эпителиальных клеток; при этом клетки с положительной иммуноги-стохимической реакцией на эритропоэтин располагались в базальном и пара-базальном слоях эпителиального пласта. В группах с цервикальными интра-эпителиальными неоплазиями параллельно с увеличением содержания эритропоэтина в плазме продолжало нарастать число экспрессирующих эритропоэтин клеток в эпителиальном пласте. Так, по сравнению с контрольной группой, их количество было в 1,7 раза больше в группе с ЦИН 1 и в 2,3 раза больше в группе с ЦИН 2, что составило 259,87+4,44 и 342,66+6,18 на 1000 эпителиальных клеток соответственно. Эпителиоциты с положительной им-муногистохимической реакцией на эритропоэтин располагались в более поверхностных слоях эпителиального пласта, занимая от одной трети его толщины при ЦИН 1 до двух третей при ЦИН 2.

Корреляционный анализ не выявил взаимосвязи между уровнем эри-тропоэтина плазмы крови и его экспрессией в экзоцервикальном эпителии. Поэтому высказанная нами гипотеза о возможном поступлении эритропо-этина из ткани шейки матки в кровь при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях нуждается в специальных исследованиях, в которых регистрировалась бы секреция гормона данной тканью.

Мы предположили, что неравные уровни продукции эритропоэтина и его экспрессии в экзоцервикальном эпителии у женщин вышеуказанных групп могли оказать влияние на активность реализации антиапоптозных программ и выраженность процессов клеточной пролиферации в многослойном плоском эпителии шейки матки обследованных. С целью оценки возможного влияния разного уровня воспроизводства эритропоэтина на регуляцию процессов апоптоза и пролиферативную активность в клетках многослойного плоского эпителия шейки матки в биоптатах мы исследовали экспрессию маркеров клеточного обновления (Ьс1-2, р53, кл-67).

Параллельно с усилением экспрессии эритропоэтина в клетках исследованных зон экзоцервикального эпителия во всех группах обследованных обнаруживалась активация антиапоптозных программ, что подтверждалось нарастанием экспрессии Ьс1-2 во всех группах (рис.4).

Норма ХЦ ЦИН 1 ЦИН 2

Рис. 4. Экспрессия Ьс1-2 в пласте многослойного плоского эпителия экзоцервикса (на 1000 клеток) в норме, при хроническом цервиците и цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 и 2 степени.

Примечание:

по оси ординат - количество клеток в пласте многослойного плоского эпителия экзоцервикса, экспрессирующих Ьс1-2 (на 1000 клеток);

* - наличие статистически значимого различия при сравнении с показателями контрольной группы (р < 0,01);

** - наличие статистически значимого различия между показателями группы с хроническим цервицитом и групп с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 -й и 2-й степени (р < 0,01); *** - наличие статистически значимого различия между показателями групп с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1-й и 2-й степени (р < 0,01).

Нарастание экспрессии Ьс1-2 в многослойном плоском эпителии шейки матки по мере прогрессировать в нем неопластических изменений также было описано и другими авторами (Фролова И.И. и др., 2004).

Нами было выявлено, что в экзоцервикальном эпителии также происходит активация и проапоптозных программ, которая проявляется усилением экспрессии белка р53 в клетках многослойного плоского эпителия экзоцервикса по мере появления и прогрессирования неопластических изменений в нем (рис. 5), на что указывают и другие авторы (Фролова И.И. и др., 2004).

250 ■

Норма ХЦ ЦИН1 ЦИН 2 Рис. 5. Экспрессия р53 в пласте многослойного плоского цервикалыюго эпителия (па 1000 клеток) в норме, при хроническом цервиците и цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 и 2 степени.

Примечание:

по оси ординат - количество клеток в пласте многослойного плоского эпителия экзоцервикса, экспрессирующих р53 (на 1000 клеток);

* - наличие статистически значимого различия при сравнении с показателями контрольной группы (р < 0,01);

** - наличие статистически значимого различия между группами с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1-й и 2-й степени (р < 0,01).

Однако, в группе женщин с хроническим цервицитом, где отмечались только дисрегенераторные изменения в эпителиальном пласте экзоцервикса, не было выявлено достоверно значимых отличий в экспрессии белка р53 по сравнению с неизмененной шейкой матки.

Наряду с оценкой интенсивности процессов апоптоза мы оценивали интенсивность процессов клеточной пролиферации. В группах с цервикаль-ными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени отмечалось усиление пролиферативной активности многослойного плоского эпителия экзоцервикса, что подтверждалось достоверным нарастанием экспрессии в экзоцервикальном эпителии маркера клеточной пролиферации к>67, отражающего пул делящихся клеток, в сравнении с контрольной группой. В группе с хроническим цервицитом экспрессия к\-Ы не имела достоверных отличий, по сравнению с контрольной группой (рис. 6).

250 200 -150 -100 -50

□ Ю-67

Норма ХЦ ЦИН1 ЦИН 2 Рис. 6. Экспрессия маркера клеточной пролиферации й-67 в пласте многослойного плоского цервикалыюго эпителия в норме, при хроническом цервиците и цервикалыюй интраэпителиальной неоплазии I и 2 степени.

Примечание:

по оси ординат - количество клеток в пласте многослойного плоского эпителия экзоцервик-са, экспрессирующих к\-61 (на 1000 клеток);

* - наличие статистически значимого различия при сравнении с показателями контрольной группы (р < 0,01);

Таким образом, нами было выявлено, что по мере прогрессирования диерегенераторных и неопластических изменений многослойного плоского эпителия шейки матки происходит не только усиление процессов клеточной пролиферации, но и активация как антиапоптозных, так и проапоптозных программ. С целью выяснения направленности изменений процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии шейки матки нами были введены и рассчитаны следующие индексы соотношения: р53/Ьс]-2 (соотношение процессов про- и антиапоптоза) и кь67/р53 (соотношение процессов клеточной пролиферации и проапоптоза) (таблица 1).

Мы установили, что по мере прогрессирования диерегенераторных и неопластических изменений в многослойном плоском эпителии экзоцервик-са активация антиапоптозных программ происходит с большей интенсивностью, чем активация апоптоза. Это подтверждается более существенным по сравнению с усилением экспрессии р53 нарастанием числа клеток, экспрессирующих Ьс1-2 в многослойном плоском эпителии экзоцсрвикса, что отражается достоверным снижением индекса р53/Ьс1-2 во всех трех группах по сравнению с контрольной. Преобладание процессов клеточной пролиферации над процессами проапоптоза в многослойном плоском эпителии шейки матки было выявлено только при ЦИН 2 (кь67/р53=1,28±0,23) по сравнению с контролем, что подтверждается более существенным нарастанием экспрессии кь67, чем экспрессии р53 в данной группе обследованных.

Таблица 1

Индексы оценки направленности процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии экзоцервикса в норме, при хроническом цервиците и цервикальных интраэпителиальных неоплазиях 1 и 2 степени

(М±ш)

Индексы Контрольная группа Хронический цервицнт Цервикальная интраэпители-альная неоплазия 1 Цервикальная интраэпители-альная неоплазия 2

р53 / bcl-2 1,63 ±0,51 0,71 ±0,09 (*) 0,62 ± 0,06 (*) 0,74 ±0,41 (*)

ki-67 / р53 0,81 ± 0,25 0,81 ±0,22 0,95 ±0,13 1,28 ±0,23 (*)

Примечание: * - наличие статистически значимого различия при сравнении с показателями контрольной группы (р < 0,05).

Эритропоэтин и все определяемые нами маркеры клеточного обновления (Ьс1-2, р53, к!-67) в параллельных срезах биоптатов шейки матки имели одинаковую локализацию в экзоцервиксе у всех обследованных групп. Так, в контрольной группе и группе с хроническим цервицитом клетки с положительной иммуногистохимической реакцией на вышеуказанные маркеры и эритропоэтин располагались в основном в базальном слое многослойного плоского эпителия шейки матки, а в группах обследованных с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 и 2 степени - не только базальном, но и в промежуточном слое эпителиального пласта экзоцервикса, занимая от одной до двух третей его толщины, формируя при этом очаговые скопления. Поэтому, можно полагать, что эритропоэтин и в норме, и при ЦИН 1 и 2 принимает участие в пара- и аутокринной регуляции процессов клеточного обновления в цервикальном многослойном плоском эпителии, усиливая свои регуляторные эффекты при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях. Это подтверждается наличием прямой корреляционной зависимости между экспрессией эритропоэтина и антиапоптознош фактора Ьс1-2 в клетках эпителиального пласта экзоцервикса в группе обследованных с хроническим цервицитом. Вероятно, воздействуя на клетки эпителия экзоцервикса, эритропоэтин активирует в них антиапоптозные программы, что подтверждается нарастанием экспрессии антиапоптозного фактора Ьс1-2 во всех группах обследованных, начиная со стадии хронического цервицита.

По мере прогрессирования неопластических изменений в эпителиальном пласте, начиная со стадии ЦИН 1, нами было зарегистрировано усиление экспрессии маркера пролиферации кь67 по сравнению с контрольной группой. Однако, если в группе с ЦИН 1 усиление процессов клеточной пролиферации компенсируется активацией апоптозных программ, сохраняя значение индекса соотношения процессов клеточной пролиферации и проапоптоза

ki-67/p53 близким к нормальному (характерному для контрольной группы), то при ЦИН 2 значение вышеупомянутого индекса увеличивается более чем в 1,5 раза и зависит только от интенсивности процессов клеточной пролиферации, в то время как в контрольной группе на данный индекс ki-67/p53 оказывают влияние как пролиферативные процессы, так и процессы апоптоза.

Прямых доказательств влияния эритропоэтина на митотическую активность клеток мы не получили, т.к. не выявили зависимости экспрессии ki-67 в эпителиальном пласте экзоцсрвикса ни от экспрессии эритропоэтина в нем, ни от уровня эритропоэтина плазмы крови.

ВЫВОДЫ

1. У женщин репродуктивного периода жизни с нормальными показателями периферической красной крови различия в уровне эритропоэтина плазмы крови сочетаются с характером воспалительно-дисрегенераторных и неопластических изменений в многослойном плоском эпителии экзоцсрвикса: у женщин с неизмененной шейкой матки уровень эритропоэтина в плазме крови был равен 12,64±0,29 мЕд/мл, у женщин с хроническим цер-вицитом - 8,39+0,45 мЕд/мл, у женщин с ЦИН 1 и 2 - 19,3±0,62 мЕд/мл и 28,5±1,75 мЕд/мл соответственно.

2. У женщин с наибольшими уровнями эритропоэтина в плазме крови имеет место выраженная ретикулоцитарная реакция костного мозга, характеризующаяся увеличением общего числа ретикуцоцитов в %о и в 1 мкл периферической крови, а также появлением их молодых форм (ретикулоциты II и III стадии зрелости по Гельмейеру).

3. По сравнению с контрольной группой обследованных, у женщин с хроническим цервицитом экспрессия эритропоэтина в экзоцервикальном эпителиальном пласте была в 1,2 раза выше, у пациенток с ЦИН 1 и 2 - в 1,7 и 2,3 раза соответственно.

4. Эритропоэтин оказывает ауто- и паракринное влияние на клетки многослойного плоского эпителия шейки матки, активируя в них анти-апоптозные программы, что подтверждается нарастающей экспрессией ан-тиапоптозного фактора bcl-2 во всех группах обследованных, по сравнению с контрольной.

5. По мере прогрессирования неопластических изменений в многослойном плоском эпителии шейки матки изменяется направленность процессов клеточного обновления, что проявляется более чем двукратным снижением индекса, отражающего соотношение процессов про- и анти-апопотоза (p53/bcl-2) у женщин с хроническим цервицитом, ЦИН 1 и 2, по сравнению с контрольной группой.

6. У женщин с ЦИН 2 зарегистрировано увеличение индекса, отражающего соотношение процессов клеточной пролиферации и проапоптоза

(ki-67/p53) в 1,5 раза по сравнению с контрольной группой и группами женщин с хроническим цервицитом и ЦИН 1.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мещерякова, М.В. Морфологическая характеристика и морфогенез хронического цервицита и цервикальной интраэпителиальной неоплазии // Конкурс грантов студентов, аспирантов и молодых ученых вузов Челябинской области: сборник рефератов, научно-исследовательских работ аспирантов за 2006 год. - Челябинск: Издательство ЮУрГУ, 2007. - С.38-39.

2. Мещерякова, М.В. О возможной роли эритропоэтина в активации проли-феративных процессов шейки матки у женщин / М.В. Мещерякова, Е.Л. Ку-ренков, Ю.М. Захаров // Известия Челябинского научного центра. - 2007. -Т.38, №4. - С.98-102.

3. Мещерякова, М.В. О возможной роли эритропоэтина в развитии интраэпителиальной неоплазии шейки матки // Материалы VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. - Челябинск: Издательство «Челябинская государственная медицинская академия», 2008. - С.90-92.

4. Мещерякова, М.В. О возможной взаимосвязи гиперплазии многослойного плоского эпителия шейки матки и уровня эритропоэтина в крови у женщин / М.В. Мещерякова, Е.Л. Куренков, Ю.М. Захаров // Морфология. - 2008. -Т.133,№3.-С.73.

5. Мещерякова, М.В. О содержании эритропоэтина в крови у женщин детородного возраста (Может ли репродуктивная ткань быть источником эритропоэтина в плазме крови?) / М.В. Мещерякова, Е.Л. Куренков, Ю.М. Захаров, Б.И. Медведев // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2008. - Т.94, №3. -С.276-283.

6. Мещерякова, М.В. О возможной роли эритропоэтина в регуляции процессов клеточного обновления эпителия экзоцервикса у женщин / М.В. Мещерякова, Ю.М. Захаров // Онкогематология. - 2008. - №4. - С.57.

7. Мещерякова, М.В. О возможном влиянии эритропоэтина на процессы клеточного обновления эпителия экзоцервикса в норме, при хроническом цервиците и цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 и 2 / М.В. Мещерякова, Ю.М. Захаров, Е.Л. Куренков // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2009. - Т.95, №2. - С. 143-152.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ХЦ - хронический цервицит

ЦИН - цервикальная интраэпителиальная неоплазия ЭПО - эритропоэтин

МЕЩЕРЯКОВА Мария Владимировна

РОЛЬ ЭРИТРОПОЭТИНА В РЕГУЛЯЦИИ ПРОЦЕССОВ КЛЕТОЧНОГО ОБНОВЛЕНИЯ В МНОГОСЛОЙНОМ ПЛОСКОМ ЭПИТЕЛИИ

03.00.13 - физиология 14.00.15 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курган - 2009

Отпечатано в мастерской «Верстак». Подписано к печати 18.05.2009. Объем 1,1 п.л. Формат 60x84/16. Заказ № 5. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Мещерякова, Марина Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности строения экзоцервикса.

1.2. Закономерности процессов клеточного обновления в экзоцервиксе

1.3. Цервикальные интраэпителиальные неоплазии: вопросы терминологии и классификации.

1.4. Эритропоэтин и его свойства

1.4.1. Общая характеристика эритропоэтина.

1.4.2. Образование эритропоэтина в организме (традиционные представления о местах его выработки).

1.4.3. Новые данные о местах внепочечной продукции эритропоэтина.

1.4.4. Обсуждение значения для организма продукции эритропоэтина и его рецепторов в некроветворной ткани.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Контингент обследованных.

2.2. Методы исследования

2.2.1. Клинические методы.

2.2.2. Морфологические методы.

2.2.3. Гематологические методы.

2.2.4. Статистические методы.

Глава 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ОБСЛЕДОВАННОГО КОНТИНГЕНТА ЖЕНЩИН В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СОСТОЯНИЯ ЭКЗОЦЕРВИКСА.

Глава 4. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО ОТДЕЛА ЭРИТРОНА И СОДЕРЖАНИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ У ОБСЛЕДОВАННЫХ ЖЕНЩИН.

Глава 5. ЭКСПРЕССИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА И МАРКЕРОВ КЛЕТОЧНОГО ОБНОВЛЕНИЯ В ЭКЗОЦЕРВИКАЛЬНОМ ЭПИТЕЛИИ В НОРМЕ, ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЦЕРВИЦИТЕ И ЦЕРВИКАЛЬНЫХ ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НЕОПЛАЗИЯХ 1 И 2 СТЕПЕНИ.

Глава 6. КОРРЕЛЯЦИОННЫЕ ВЗАИМООТНОШЕНИЯ МЕЖДУ УРОВНЕМ ЭРИТРОПОЭТИНА ПЛАЗМЫ КРОВИ, ЭКСПРЕССИЕЙ

ЭРИТРОПОЭТИНА И МАРКЕРОВ КЛЕТОЧНОГО ОБНОВЛЕНИЯ В МНОГОСЛОЙНОМ ПЛОСКОМ ЭПИТЕЛИИ ЭКЗОЦЕРВИКСА В НОРМЕ, ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЦЕРВИЦИТЕ И ЦЕРВИКАЛЬНЫХ

ИНТРАЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НЕОПЛАЗИЯХ 1 И 2 СТЕПЕНИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль эритропоэтина в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии"

Актуальность проблемы:

В традиционном представлении, сложившемся в физиологии к концу XX века, эритропоэтин является гемопоэтическим гормоном, ответственным за пролиферацию, дифференциацию и угнетение апоптоза в чувствительных к нему клетках кроветворной ткани. Чувствительность клеток к эритропоэтину определяется наличием на мембране этих клеток эритропоэтин овых рецепторов. t

Продукция эритропоэтина у человека осуществляется.главным образом перитубулярными и тубулярными клетками почек. (Kurtz А. et al., 1988). Однако 10-15% эритропоэтина плазмы крови имеет внепочечное происхождение (Рябов С .И., Шостка Г.Д., 1985; Erslev A.J. et al., 1980).

В работах последних 20 лет появились данные о синтезе эритропоэтина и экспрессии эритропоэтиновых рецепторов гепатоцитами, окружающими венозные сосуды печени, печеночными макрофагами, ядросодержащими эритроидными клетками костного мозга (Захаров Ю.М., 2007; Eckardt K.U., Bauer С., 1989), клетками центральной нервной системы (Захаров Ю.М., 2007), в тканях женской репродуктивной системы (молочные железы, матка), плаценте, эмбриональных тканях (Conrad K.P. et al., 1996; Benyo D.F., Conrad K.P., 1999; Sasaki R. et al., 2000; Yasuda Y. et al., 2001; Erbayraktar S. et al., 2003; Farrell F., Lee A., 2004). При этом активация функции клеток вызывает усиление продукции эритропоэтина и экспрессии его иРНК, что происходит в клетках молочной железы в период лактации, клетках эпителия эндометрия при смене фаз менструального цикла (Yasuda Y. et al., 1998; Juul S.E. et al., 2000; Yasuda Y. et al., 2001; Yokomizo R. et al., 2002), при цервикальной интраэпителиальной неоплазии (Acs G. et al., 2003), в опухолевой ткани органов женской репродуктивной*системы (Acs G. et al., 2002, 2004; Farrell F., Lee A., 2004; McBroom JiW. et al., 2005; Yasuda Y. et al., 2002).

Действие эритропоэтина на эритропоэтин-чувствительные ткани, как кроветворную, так и некроветворные, проявляется активацией в них антиапоптозных программ и процессов клеточной пролиферации (Захаров Ю.М., 2007).

Многослойный плоский эпителий шейки матки относится к самообновляющимся тканям организма человека, в которых постоянно идет процесс физиологической регенерации (Leblond С.Р., 1956; Baserga А.} 1962; Bertalanffy F.D., Lau С., 1962). У женщин- репродуктивного периода жизни эпителиальный пласт экзоцервикса подвергается постоянным изменениям путем пролиферации, созревания, десквамации и полностью замещается новой популяцией клеток каждые 4-5 дней (Krantz К.Е., 1962). В традиционном представлении регуляция данного процесса осуществляется половыми гормонами, гормонами гипофиза и ростовыми факторами. Однако, в современной литературе отсутствуют данные о роли эритропоэтина в регуляции данных процессов.

Принимая во внимание вышеизложенное, целью данной работы стало исследование физиологической роли эритропоэтина в процессах клеточного обновления эпителиальных тканей, в частности — многослойного плоского эпителия шейки матки.

Цель исследования: исследовать роль эритропоэтина, как содержащегося в плазме крови, так и экспрессирующегося в эпителиальном пласте экзоцервикса, в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии шейки матки.

Задачи исследования:

1. Исследовать уровень плазменного эритропоэтина и содержание ретикулоцитов в крови у здоровых женщин с неизмененной шейкой матки, женщин с хроническим цервицитом, цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени, имеющих нормальные показатели периферической красной крови.

3. Установить физиологическую роль эритропоэтина плазмы крови и его внутритканевой продукции клетками экзоцервикального эпителия^ в регуляции процессов клеточного обновления в< многослойном, плоском эпителии шейки матки. Научная новизна

Впервые исследован уровень эритропоэтина в плазме крови у женщин репродуктивного периода жизни с нормальными показателями.периферической красной- крови, с неизмененной, шейкой матки и, страдающих хроническим цервицитом и цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени.

Впервые исследована взаимосвязь уровня эритропоэтина в плазме, крови и его экспрессии в многослойном плоском эпителии шейки матки2 в. норме, при хроническом цервиците и цервикальных интраэпителиальных неоплазиях 1 и 2 степени с характером изменений активности маркеров клеточного обновления в ' экзоцервикальном эпителиальном пласте.

Установлено ауто- и паракринное влияние эритропоэтина на, клетки эпителиального пласта экзоцервикса с активацией в нем антиапоптозных программ.

Практическая значимость работы

Полученные нами результаты дополняют имевшиеся ранее в-физиологии и клинической медицине знания о. неэритропоэтических функциях эритропоэтина, его способности активировать антиапоптозные программы в чувствительных к нему клетках. Воздействуя на клетки эпителия экзоцервикса, эритропоэтин оказывает влияние на процессы клеточного обновления в эпителиальном пласте, изменяя в конечном итоге их направленность в сторону активации антиапоптозных программ и усиления клеточной пролиферации; что составляет теоретическую! основу для разработки способов коррекции нарушений процессов клеточного обновления.

Основные положения работы используются в научно-педагогической деятельности кафедр нормальной физиологии, патологической- анатомии- и акушерства и гинекологии №1 ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава». Результаты работы включены в Отчет ЮУНЦ РАМН (2008 г.), утвержденный Бюро отделения медико-биологических наук РАМН 09.12.2008 г.

Апробация работы

Результаты исследований были доложены и обсуждены на VI? итоговой научно-практической. конференции молодых ученых Челябинской^ # . государственной медицинской академии (г. Челябинск, май 2008 г.), на Международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (г. Тюмень, июнь 2008 г.), на VI симпозиуме «Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний» (г. Москва, январь 2009' г.), на научных конференциях кафедры нормальной физиологии Челябинской государственной медицинской академии (2007, 2008, 2009 гг.).

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. У женщин репродуктивного периода жизни с нормальными показателями периферической красной крови имеются различия в уровне эритропоэтина плазмы крови и выраженности ретикулоцитарной реакции костного мозга, сочетающиеся с различными состояниями экзоцервикса: неизмененная шейка- матки, хронический цервицит, цервикальная" интраэпителиальная неоплазия 1 и 2 степени.

2. По мере появления и усиления воспалительно-дисрегенераторных (хронический цервицит) и неопластических (цервикальная интраэпителиальная неоплазия 1 и 2 степени) изменений в многослойном плоском эпителии шейки матки в экзоцервикальном эпителиальном пласте нарастает экспрессия эритропоэтина, сочетаясь с усилением экспрессии антиапоптозного фактора Ьс1-2, проапоптозного белка р53 и маркера клеточной пролиферации 1а-67.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Мещерякова, Марина Владимировна

ВЫВОДЫ

1. У женщин репродуктивного периода жизни с нормальными показателями периферической красной крови различия в уровне эритропоэтина плазмы крови сочетаются с характером воспалительно-дисрегенераторных и неопластических изменений в многослойном плоском эпителии экзоцервикса: у женщин с неизмененной шейкой матки уровень эритропоэтина в плазме крови был равен 12,64±0,29 мЕд/мл, у женщин с хроническим цервицитом — 8,39+0,45 мЕд/мл, у женщин с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени — 19,3±0,62 мЕд/мл и 28,5±1,75 мЕд/мл соответственно.

2. У женщин с наибольшими уровнями эритропоэтина в плазме крови имеет место выраженная ретикулоцитарная реакция костного мозга, характеризующаяся увеличением общего числа ретикулоцитов в %о и. в 1 мкл периферической крови,' а также появлением их молодых форм (ретикулоциты II и III стадии зрелости по Гельмейеру).

3. По сравнению с контрольной группой обследованных, у женщиш с хроническим цервицитом экспрессия эритропоэтина в экзоцервикальном эпителиальном пласте была в 1,2 раза выше, у пациенток с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени - в 1,7 и 2,3 раза соответственно.

4. Эритропоэтин оказывает ауто- и паракринное влияние на клетки многослойного плоского эпителия шейки матки, активируя в них антиапоптозные программы, что подтверждается нарастающей экспрессией антиапоптозного фактора bcl-2 во всех группах обследованных, по сравнению с контрольной.

5. По мере прогрессирования неопластических изменений в многослойном плоском эпителии шейки, матки изменяется направленность процессов клеточного обновления, что проявляется более чем двукратным снижением индекса, отражающего соотношение процессов про- и антиапопотоза (p53/bcl-2) у женщин с хроническим цервицитом и цервикальным интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени, по сравнению с контрольной группой.

6. У женщин с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 2 степени зарегистрировано увеличение индекса, отражающего соотношение процессов клеточной пролиферации и проапоптоза (ki-67/p53) в 1,5 раза по сравнению с контрольной группой и группам женщин с хроническим цервицитом и цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 степени.

109'

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На сегодняшний день в литературе отсутствуют данные о том, может ли многослойный плоский, эпителий шейки матки быть источником эритропоэтина в организме, имеется ли взаимосвязь между уровнем эритропоэтина плазмы крови и его экспрессией в эпителии экзоцервикса в норме и при дисрегенераторных и неопластических изменениях шейки матки, а также может ли эритропоэтин оказывать влияние на регуляцию процессов клеточного обновления в экзоцервикальном эпителии.

Нами было обследовано 52 женщины репродуктивного периода жизни от 18 до 49 лет (30,67±9,4), с сохраненной менструальной функцией, вне беременности и периода лактации, с нормальными показателями периферической красной крови. Обследованные в соответствии с отсутствием или характером изменений многослойного плоского эпителия шейки матки и наличия признаков воспаления в строме были разделены на 4 группы: контрольная группа - 11 женщин с неизмененной шейкой матки; 1-я группа - пациентки с хроническим цервицитом (п=14), 2-я - с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 степени (п=17), 3-я — с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 2 степени (п=10).

У всех обследуемых стандартными методами* оценивались уровень эритроцитов, гемоглобина, цветовой показатель, определялось количество и степень зрелости ретикулоцитов по Гельмейеру, рассчитывалось абсолютное количество ретикулоцитов в 1 мм3 крови, определялось содержание эритропоэтина в 1 мл плазмы крови, определялась экспрессия эритропоэтина и маркеров клеточного обновления (Ьс1-2, р53, кь67) в многослойном плоском эпителии шейки матки.

Показатели эритроцитов, гемоглобина, цветового показателя у всех 52 обследованных женщин находились в пределах возрастной нормы и статистически достоверных различий между группами по данным показателям периферической крови мы не обнаружили. Однако в ретикулоцитограмме обнаружилась более оживленная продукция

I < эритроцитов в группе женщин с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 степени и, особенно, в группе с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 2 степени по сравнению' с контрольной группой и группой женщин с хроническим цервицитом. Также было зафиксировано появление в ретикулоцитограмме отсутствовавших у лиц контрольной группы и группы с хроническим цервицитом молодых форм ретикулоцитов II и III стадии зрелости.

Данные изменения' в картине периферической красной крови сочетались у пациенток с различиями в уровне эритропоэтина плазмы крови. Так, в^ группе с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 степени уровень эритропоэтина был в 1,5 (19,3±2,56 мЕд/мл), а в группе с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 2 степени - более чем в 2 раза выше (28,5±5,54 мЕд/мл) по сравнению с контрольной группой (12,64±0,96 мЕд/мл). Напротив, у женщин, с хроническим цервицитом, у которых в слизистой оболочке экзоцервикса отмечалось избыточное разрастание соединительной ткани (т.е. имел место склероз) и отсутствовали проявления гиперплазии и повышенной митотической активности клеток в структуре эпителиального пласта, обнаруживался наименьший уровень эритропоэтина плазмы (8,39±1,69 мЕд/мл).

Мы показали, что наличие сопутствующей патологии в виде хронических воспалительных заболеваний органов женской репродуктивной системы не оказывает влияния ни на уровень эритропоэтина плазмы, ни на показатели периферической красной крови у женщин, не зависимо от стадии воспалительного процесса (ремиссия или обострение).

Таким образом, нами было обнаружено, что у женщин репродуктивного возраста, имеющих нормальные показатели " периферической красной крови,. разным уровням эритропоэтина плазмыкрови соответствует различная выраженность пролиферативных процессов в эпителии шейки матки, при этом большее содержание эритропоэтина в плазме крови и более выраженная ретикулоцитарная реакция костного мозга

1 < I I имеет место у женщин с повышенной пролиферативной активностью и явлениями неоплазии в. многослойном плоском эпителии шейки матки. Мы I предположили, что увеличенное содержание эритропоэтина в плазме крови! обследованных нами пациенток с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 и 2 степени может быть следствием его повышенной продукции многослойным плоским эпителием слизистой оболочки шейки матки при данных состояниях. С целью проверки этого предположения с помощью непрямой иммуногистохимической реакции мы оценивали экспрессию эритропоэтина в, экзоцервикальном эпителии,, сопоставляя- уровни эритропоэтина в плазме крови и его.* присутствия, в многослойном плоском эпителии шейки матки.

По результатам исследования нами было зафиксировано- усиление экспрессии эритропоэтина в клетках экзоцервикального эпителия по мере нарастания неопластических изменений в многослойном плоском эпителии шейки матки, что сочеталось с повышением уровня эритропоэтина плазмы крови у женщин с цервикальными интраэпителиальными неоплазиями 1 и 2 степени по сравнению с контрольной группой. Данное наше наблюдение о возможности усиления экспрессии эритропоэтина при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях 1 и 2 степени совпадает с данными работы (Асэ О. е1 а1., 2003); в которой установлено усиление экспрессии эритропоэтиновой иРНК в биоптатах экзоцервикса, полученных у женщин с цервикальной интраэпителиальной неоплазией 1 и 2 степени. Однако, у женщин с хроническим цервицитом, у которых уровень эритропоэтина плазмы крови был достоверно ниже, чем у женщин контрольной, группы, также выявлялась незначительно, но достоверно'повышенная по сравнению с неизмененной шейкой' матки экспрессия эритропоэтина в клетках экзоцервикального • эпителия, что, вероятно, обусловлено его повышенным потреблением эпителиальными клетками, находящимися вследствие имеющегося склероза в состоянии гипоксии:

Корреляционный анализ не выявил взаимосвязи между уровнем эритропоэтина плазмы крови и его экспрессией в экзоцервикальном эпителии. Поэтому высказанная нами гипотеза о возможном поступлении эритропоэтина из ткани шейки матки в кровь при цервикальных интраэпителиальных неоплазиях нуждается в специальных исследованиях, в которых регистрировалась бы секреция гормона из ткани.

В то же время в группе обследованных с хроническим цервицитом нами была обнаружена прямая! корреляционная зависимость между экспрессией эритропоэтина и антиапоптозного фактора Ьс1-2 в клетках эпителиального пласта экзоцервикса. Это совпадает с нашим предположением о возможном аутокринном и паракринном влиянии эритропоэтина в отношении чувствительных к нему клеток. Вероятно, воздействуя на клетки эпителия экзоцервикса, эритропоэтин активирует в них антиапоптозные программы; кроме этого, под действием эритропоэтина эпителиоциты сами начинают синтезировать эритропоэтин. По мере прогрессирования дисрегенераторных и неопластических изменений в многослойном плоском эпителии шейки матки параллельно с усилением экспрессии эритропоэтина происходит активация антиапоптозных программ, что подтверждается нарастанием экспрессии антиапоптозного фактора Ьс1-2 во всех группах обследованных, начиная со стадии хронического цервицита.

Активация антиапоптозных программ проявляется более чем двукратным снижением индекса соотношения процессов про- и антиапоптоза (р53/Ьс1-2) по сравнению с контрольной группой, начиная со стадии хронического цервицита. Наличие отрицательной (обратной) связи между вышеупомянутым индексом и уровнем эритропоэтина плазмы крови на стадии цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 степени в известной мере подтверждает выдвинутую нами гипотезу о-влиянии эритропоэтина на процессы клеточного обновления в многослойном плоском эпителий шейки матки.

Активация проапоптозных программ в экзоцервикальном эпителии по мере прогрессирования« неопластических изменений в^ нем происходит с меньшей интенсивностью, чем- антиапоптозных. Усиление* экспрессии проапоптозного белка р53 было зарегистрировано начиная со стадии цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 степени, а его влияние на соотношение процессов про- и антиапоптоза было отмечено только на стадии цервикальной интраэпителиальной неоплазии 2 степени (наличие прямой корреляционной зависимости между экспрессией р53 и индексом р53/Ьс1-2), в ТО'время как между вышеупомянутым индексом р53/Ьс1-2 и экспрессией антиапоптозного фактора Ьс1-2 имела место корреляционная зависимость по типу отрицательной (обратной) связи во всех группах обследованных.

По мере прогрессирования неопластических изменений, в эпителиальном пласте, начиная со стадии цервикальной интраэпителиальной неоплазии 1 степени, нами было зарегистрировано усиление экспрессии маркера пролиферации кь67 по сравнению с контрольной группой. Однако, если в группе цервикальной- интраэпителиальной неоплазией 1 степени усиление процессов' клеточной- пролиферации компенсируется активацией апоптозных программ, сохраняя значение индекса соотношения процессов клеточной пролиферации и апоптоза кь67/р53 близким к нормальному (характерному для контрольной группы), то при цервикальной интраэпителиальной неоплазии 2 степени значение вышеупомянутого индекса увеличивается более чем в 1,5 раза и зависит только от интенсивности процессов клеточной пролиферации, в то время как в контрольной группе на данный индекс кь67/р53 оказывают влияние как пролиферативные процессы, так и процессы апоптоза.

Прямых доказательств влияния эритропоэтина на митотическую активность клеток мы не. получили, т.к. не выявили зависимости экспрессии кь67 в эпителиальном пласте экзоцервикса ни от экспрессии эритропоэтина в, нем, ни от уровня эритропоэтина плазмы крови.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Мещерякова, Марина Владимировна, Курган

1. Автандилов, Г.Г. Основы патологоанатомической практики Текст. / Г.Г. Автандилов -М.: РМАПО, 1994. 512 с.

2. Агол, В.И. Генетически запрограммированная смерть клетки Текст. /

3. B.И. Агол // Соросовский образовательный журнал. 1996. — №6.1. C. 20-24.

4. Аникин, И.В. Играют ли нарушения клеточного деления решающую роль в онкогенезе? Текст. / И.В. Аникин, Г.Б. Плис, А.Ю. Лымаренко //Вопр. онкол.- 1998.-Т.44,№1.-С. 126-130.

5. Аруин, Л.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника Текст. / Л.И. Аруин, Л.Л. Капуллер, В.А. Исаков. — Москва: «Триада-Х», 1998. -483 с.

6. Аруин, Л.И. Апоптоз при патологических процессах в органах пищеварения Текст. / Л.И. Аруин // Клин. мед. 2000. - Т.78, №1. -С. 5-10.

7. Барышников, Ю.Ю. Программированная клеточная смерть (апоптоз) Текст. / Ю.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин // Росс, онкол. журн. -1996.-№1.-С. 58-61.

8. Бауэр, Г. Цветной атлас по кольпоскопии: Пер. с немецкого Текст. / Г. Бауэр. М., 2002. - 287 с.

9. Белушкина, H.H. Молекулярные основы патологии апоптоза Текст. / H.H. Белушкина, С.Е. Северин // Арх. патологии. 2001. - Т.63, вып.1. -С. 58-60.

10. Ю.Василевская, Л.Н. Основы кольпоскопии (Атлас) Текст. / Л.Н. Василевская, М.Л. Винокур -М., 1971. 107 с.

11. П.Епифанова, О.И. Покоящиеся клетки: свойства и функции в организме Текст. / О.И. Епифанова, В.В. Терских, В.А. Полуновский М.: Наука, 1983.- 180 с.

12. Железнов, Б.И. Предраковые изменения шейки матки и эндометрия Текст.' / Б.И. Железнов // Арх. патологии. 1972. - Т.34, вып.5. - С. 3-11.

13. Железнов, Б.И. Опухоли женского полового тракта. Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека Текст. / Б.И. Железнов. -М.: Медицина, 1993.-263 с.

14. Захаров, Ю.М. Лекции по физиологии системы крови> Текст. / Ю.М. Захаров // Медицинский вестник. 2003. - № 3 (115) - 232 с.

15. Захаров, Ю.М. Неэритропоэтические функции эритропоэтина Текст. / Ю.М. Захаров // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова 2007. -Т.93, №6. - С. 592-608.

16. Киселев, В.И. Молекулярные механизмы регуляции гиперпластических процессов Текст.,/ В.И. Киселев, A.A. Ляшенко. — М., 2005. 348 с.

17. Киселев, ФЛ. Вирусы папилломы человека как этиологический фактор рака шейки матки:'значение для практики здравоохранения Текст. / Ф.Л. Киселев // Вопросы вирусологии. 1997. - №6. - С. 248-251.

18. Князькин, И.В. Апоптоз в онкоурологии Текст. / И.В.' Князькин, В.Н. Цыган. СПб.: Наука, 2007. - 240 с.

19. Коган, Е.А. Морфологические и молекулярно-биологические-особенности процессов' кератинизации и апоптоза в плоскоклеточном раке легкого Текст. / Е.А. Коган, Д.А. Угрюмов, Г. Жак // Архив патологии. -2000. -Т.62, вып.З. С. 16-20.

20. Козловская, Л.В. Учебное пособие по клиническим* лабораторным методам исследования (с элементами программирования) Текст. / Л.В. Козловская, М.А. Мартынова // под ред. акад. АМН СССР Е.М. Тареева ипроф. A.B. Сумарокова-М.: Медицина, 1975. — 352 с.

21. Кондриков, Н.И. Современные классификации заболеваний шейки матки Текст. / Н.И. Кондриков// Заболевания шейки матки, влагалища и вульвы. М., 2003. - С. 20-24.

22. Кондриков, Н.И. Классификация заболеваний шейки матки Текст. / Н.И. Кондриков // Генитальные инфекции и патология шейки матки: Клинические лекции. Омск, 2004. - С. 79-85.

23. Копнин, Б.П. Неопластическая клетка: основные свойства и механизмы ее возникновения Текст. / Б.П. Копнин // Практическая онкология. — 2002. Т.З, №4. - С. 229-235.

24. Коханевич, Е.В. Кольпоцервикоскопия (Атлас) Текст. / Е.В. Коханевич, К.П. Ганина, В.В. Суменко Киев: Гидромакс, 2004. - 116 с.

25. Краснопольский, В.И. Патология влагалища' и шейки матки Текст. / В.И. Краснопольский, В.Е. Радзинскищ С.Н. Буянова и др. — М.: Медицина, 1999.-272 с.

26. Лушников, В.Ф. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития'Текст. / В.Ф. Лушников, В.М. Загребин // Архив-патологии: 1987. - Т.49, вып.2. - С. 89-94.

27. Манухин, И.Б. Пролиферативная активность эпителия при плоскоклеточных эпителиальных поражениях шейки матки Текст. / И.Б. Манухин, Г.Н. Минкина. // Журналъ акушерства и женскихъ болезней. 2001. - Т.ХЬХ, вып. 1. - С. 34-36.

28. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники Текст. / Г.А. Меркулов. Л., 1961. - 340 с.

29. Минкина, Г.Н. Плоскоклеточные интраэпителиальные поражения шейки матки: Дис. . д-ра мед. наук Текст. / Г.Н. Минкина. М., 1999.-219 с.

30. Минкина, Г.Н. Предрак шейки матки Текст.' / Г.Н; Минкина, И.Б. Манухин, Франк Г.А. М., 2001. - 112 с.39.0бщая патология человека: Руководство для врачей: В 2 т. Текст. / под1 ред. А.И. Струкова, В.В. Серова, Д.С. Саркисова. М.: Медицина, 1990.-416 с.

31. Прилепская, В.Н. Кольпоскопия (практическое руководство) Текст. / Прилепская В.Н., Роговская С.И., Межевитинова Е.А. М.: МИА, 2001.- 100 с.

32. Программированная клеточная гибель Текст. / под ред. B.C. Новикова. СПб.: Наука, 1996. - 276 с.

33. Ровенский, Ю.А. Клеточные и молекулярные механизмы опухолевой инвазии Текст. / Ю.А. Ровенский // Биохимия. 1998. - Т.63, №9. -С. 1204-1221

34. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека Текст. / под ред. C.B. Петрова, Н.Т. Райхлина. — Казань, 2000.-288 с.

35. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека Текст. / под ред. C.B. Петрова, Н.Т. Райхлина. Казань: Титул, 2003.-456 с.

36. Рябов, С.И. Эритрон и почка Текст. / С.И. Рябов, Г.Д. Шостка М.: Медицина, 1985. - 170 с.

37. Сухих, Г.Т. Апоптоз в гормонально-зависимых тканях репродуктивной системы Текст. / Г.Т. Сухих, М.М. Дементьева, В.Н. Серов и др. // Акушерство и гинекология. 1999. -№5. - С. 12-14.

38. Уманский, С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы Текст. / С.Р. Уманский // Молекулярная биология. 1996. - Т.30, вып.З.-С. 487-502.

39. Франк, Г.А. Антиген ядер пролиферирующих клеток при предраковой патологии шейки матки Текст. / Г.А. Франк, Г.Н. Минкина, Т.В. Симонова, JI.A. Кулагина, А.Н. Петров // Архив патологии 1997. -Т.59, вып.1.-С. 30-33.

40. Франкфурт, О.С. Клеточный цикл в опухолях / О.С. Франкфурт М.: Медицина, 1975. - 172 с.

41. Фролова, И.И. Иммуногистохимические исследования дискератоза и неопластических изменений эктоцервикса при гинекологической патологии Текст. / И.И. Фролова, Г.М. Местергази, В.Е. Радзинский и др. // Архив патологии. 2002. - Т.64, вып.6. — С. 23-26.

42. Хмельницкий, O.K. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболеваний Текст. / O.K. Хмельницкий. СПб., 1994.-480 с.

43. Хмельницкий, O.K. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки матки* Текст. / O.K. Хмельницкий. СПб.: SOTIS, 2000.-336 с.

44. Шубникова Е.А. Эпителиальные ткани Текст. / Е.А. Шубникова — М.: Изд. МГУ, 1996.-250 с.

45. Яковлева, И.А. Эпителий шейки матки в процессе малигнизации Текст. / И.А. Яковлева, А.П. Черный, Э.Р. Ботнарь. Кишинев, 1981. - 128 с.

46. Яковлева, И.А. Морфология и гистогенез дисплазий шейки матки Текст. / И.А. Яковлева, А.П. Черный // Архив патологии. 1989. -Т.51, №6. - С. 32-37.

47. Acs, G. Erythropoietin and erythropoietin receptor expression in human cancer Text. / G. Acs, P. Acs, S.M. Beckwith, R.L. Pitts, E. Clements, K. Wong, A. Verma // Canser Research. -2001. Vol.61, No.9. - P. 3561-3565.

48. Acs, G. Immunohistochemical expression of erythropoietin and erythropoietin receptor in breast carcinoma Text. / G. Acs, P J. Zhang, T.R. Rebbeck, P. Acs, A. Verma // Cancer. 2002. - Vol.5, No.5. - P. 969-981.

49. Acs, G. Hypoxia-inducible signaling in squamous dysplasia and squamous cell carcinoma of the uterine cervix and its potential role in cervical carcinogenesis and tumor progression Text. / G. Acs, P.J. Zhang, C.M.

50. McGrath, P. Acs, J. McBroom^ A. Mohyeldin, S. Liu, H. Lu, A. Verma7/ Am. J. Pathol. -2003 . Vol. 162, No.6. - P. 1789-1806.

51. Acs, G. Prognostic significance of. erythropoietin expression in human endometrial carcinoma Text. / G. Acs, X. Xu, C. Chu, P. Acs, A. Verma // Cancer. 2004. - Vol.100, No: 14. - P. 2376-2386.

52. Adolph, K.W. Analysis of the promoter and transcription start sites of the human thrombospondin 2 gene (THBS2) Text. / K.W. Adolph, D.J. Liska, P. Bornstein// Gene. 1997. - Vol.193, No.l. — P. 5-11.

53. Algeciras-Schimnich, A. Molecular ordering of the initial signaling events of CD95 Text. / A. Algeciras-Schimnich, L. Shen, B.C. Barnhart, A.E. Murmann, J.K. Burkhardt, M.E. Peter // Mol. Cell Biol. 2002. - Vol.22, No.l.-P. 207-220.

54. Anagnostou, A. Erythropoietin has a mitogenic and positive chemotactic effect on endothelial cells Text. / A. Anagnostou, E.S. Lee, N. Kessimian, R. Levinson. M. Steiner // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 1990. - Vol.87. -P. 5978-5982.

55. Anagnostou, A. Erythropoietin receptor mRNA expression in human endothelial cells Text. / A. Anagnostou, Z. Liu, M. Steiner, K. Chin, E.S. Lee, N. Kessimian, C.T. Noguchi // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 1994. -Vol.91, No.9. - P. 3974-3978.

56. Ashkenazi, A. Death receptors: signaling and modulation Text. / A. Ashkenazi, V.M. Dixit//Science. 1998. - Vol.281, No.5381. - P. 1305-1308.

57. Baldauf, J.J. Screening histories of incidence cases of cervical cancer and high grade SIL: A comparison Text. / JiJ. Baldauf, M. Dreyfus, J. Ritter, P. Meyer, E. Philippe // Acta. Cytol. 1997. - Vol.41, No.5. - P. 1431-1438.

58. Baserga A. Renewal of cell populations and its pathology Text. / A. Baserga // Arch. Sei. Med. (Torino). 1962. - Vol.113. - P. 298-312.

59. Beguin, Y. Blunted erythropoietin production and decreased erythropoiesis in early pregnancy Text. / Y. Beguin, G. Lipscei, H. Thoumsin, G. Fillet // Blood. 1991. - Vol.78, No.l. - P. 89-93.

60. Benyo, D.F. Expression of the Erythropoietin Receptor by Trophoblast Cells in the Human Placenta Text. / D.F. Benyo, K.P. Conrad, // Biology of Reproduction. 1999. - Vol. 60, No.4. - P. 861-870.

61. Bertalanffy, F.D. Cell renewal Text. / F.D. Bertalanffy, C. Lau // Int Rev Cytol. 1962. - Vol. 13. - P. 357-366.

62. Bikfalvi, A. Angiogenic factors are hematopoietic growth factors and vice versa Text. / A. Bikfalvi, Z.C. Han // Leukemia. 1994. - Vol.8, No.3. -P. 523-529.

63. Bittorf, T. Activation of STAT5 during EPO-directed suppression apoptosis Text. / T. Bittorf, J. Seiler, B. Lüdtke, T. Büchse, R. Jaster, J. Brock // Cell. Signal. -2000. Vol.12, No.l. - P. 23-30.

64. Blenkinsopp, W.K. Cell proliferation in stratified squamous epithelium in mice Text. / W.K. Blenkinsopp // Exp. Cell Res. 1968. - Vol.50, No.2. -P. 265-276.

65. Boldin, M.P. Involvement of MACH, a novel MORTl/FADD-interacting protease, in Fas/APO-1- and TNF receptor-induced cell death Text. / M.P. Boldin, T.M. Goncharov, Y.V. Goltsev, D. Wallach // Cell. 1996. -Vol.85, No.6.-P. 803-815.

66. Bowen, I. Mitosis and Apoptosis: Matters of life and death Text. / I. Bowen, S. Bowen, A. Jones London, 1998. - 240 p.

67. Broders, A. Carcinoma in situ contrasted with benign penetrating epithelium Text. / A. Broders // JAMA. 1932. - Vol.99. - P. 1670-1674.

68. Brown, D. Monoclonal antibody Ki-67: its use in histopathology Text. / D. Brown, K. Gatter. // Histopathology. 1990. - Vol.17, No.6. - P. 489-503.

69. Bruno, S. Cell cycle dependent expression and stability of the nuclear protein detection by Ki-67 antibody in HL-60 cells Text. / S. Bruno, Z. Darzynkiewicz // Cell. Prolif. 1992. - Vol.25, No.l. - P. 31-40.

70. Brustovetsky, N. Two pathways for tBID-induced cytochrome c release from rat brain mitochondria: BAK- versus BAX-dependence Text. / N. Brustovetsky, J.M. Dubinsky, B. Antonsson, R. Jemmerson // J. Neurochem. -2003.-Vol.84,No.l.-P. 196-207.

71. Bullough, W.S. Mitotic activity in the adult female mouse, Mus musculus L. A study of its relation to the oestrous cycle in normal and abnormal conditions Text. / W.S. Bullough // Phil. Trans. R. Soc. 1946. - Vol.231, No.585.-P. 453-516.

72. Carlini,R.G. Recombinant human erythropoietin stimulates angiogenesis in vitro Text. / R.G. Carlini, A.A. Reyes, M. Rothstein // Kidney Int. 1995. — Vol.47, No.3.-P. 740-745.

73. Caro, J. Biological and immunologic erythropoietin in extract from hypoxic rat kidney and in their glomerular and tubular fractions Text. / J. Caro, A. Erslev // J. Lab. Clin. Med. 1984. - Vol.103, N0.6. - P. 922-931.

74. Chao, D.T. BCL-2 family: regulators of cell death Text. / D.T. Chao, S.J. Korsmeyer // Annu. Rev. Immunol. 1998. - Vol.16. - P. 395-419.

75. Chin, K. Production and processing of erythropoietin receptor transcripts in brain Text. / K. Chin, X. Yu, B. Beleslin-Cokic, C. Liu, K. Shen, H.W. Mohrenweiser, C.T. Noguchi // Brain Res. Mol. Brain Res. 2000. - Vol. 81, No. 1-2.-P. 29-42.

76. Chinnaiyan, A.M. FADD, a novel death domain-containing protein, interacts with the death domain of Fas and initiates apoptosis Text. / A.M. Chinnaiyan, K. O'Rourke, M. Tewari, V.M. Dixit // Cell. 1995. - Vol.81, No.4.-P. 505-512.

77. Cohen, G.M. Key morphological features of apoptosis may occur in the absence of internucleosomal DNA fragmentation Text. / G.M. Cohen, X.M. Sun, R.T. Snowden, D. Dinsdale, D.N. Skilleter // Biochem. J. 1992. -Vol.286 (Pt.2). — P. 331-334.

78. Conrad, K.P. Expression of erythropoietin by the human placenta Text. / K.P. Conrad, D.F. Benyo, A. Westerhausen-Larsen, T.M. Miles // FASEB J. 1996. - Vol.10, No.7. - P. 760-768.

79. Crook, T. Clonal p53 mutation in primary cervical cancer: association with human-papillomavirus-negative tumours Text. / T. Crook, D. Wrede, J.A. Tidy, W.P. Mason, D.J. Evans, K.H. Vousden // Lancet. 1992. - Vol.339, No.8801.-P. 1070-1073.

80. Dameron, K.M. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospodin-1 Text. / K.M. Dameron, O.V. Volpert, M.A. Tainsky, N. Bouck. // Science. 1994. - Vol.265, No.5178. - P. 1582-1584.

81. Darby, I.A. Erythropoietin gene expression in fetal and adult sheep kidney Text. / I.A. Darby, B.A. Evans, P. Fu, G.B. Lim, K.M. Moritz, E.M. Vintour. // Br. J. Haematol. 1995. - Vol.89, No.2. - P. 266-270.

82. Da Silva, J.L. Localization of erythropoietin mRNA in the rat kidney by polymerase chain reaction Text. / J.L. Da Silva, M.L. Schwartzman, A. Goodman, R.D. Levere, N.G. Abraham. // J. Cell Biochem. 1994. -Vol.54, No.2. - P. 239-246.

83. Datta, S.R. Cellular survival: a play in three Akts-Text. / S.R. Datta, A. Brunei, M.E. Greenberg. // Genes Dev. 1999. - Vol.13, No.22. -P. 2905-2927.

84. Degterev, A. A decade of caspases Text. / A. Degterev, M. Boyce, J. Yuan // Oncogene. 2003. - Vol.22, No.53. - P. 8543-8567.

85. Di Leonardo, A. DNA damage triggers a prolonged p53-dependent Gl arrest and long-term induction of Cipl in normal-human fibroblasts Text. / A. Di Leonardo, S.P. Linke, K. Clarkin, G.M. Wahl // Genes Dev. 1994. -Vol.8; No.21.-P. 2540-2551.

86. Eckardt, K.U. Erythropoietin in health and disease Text. / K.U. Eckardt, C. Bauer// Europ. J. Clin. Invest. 1989. - Vol.19, No.2. - P. 117-127.

87. Epstein, F.H. Physiology of renal hypoxia Text. / F.H. Epstein, Y. Agmon, M. Brezis. // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1994. - Vol.718. - P. 72-82.

88. Erslev, A.J. In vitro production of erythropoietin by kidneys perfused with a serum free solution Text. / A.J. Erslev // Blood. 1974. - Vol.44, No.l. -P. 77-85.

89. Erslev, A.J. Renal and extrarenal erythropoietin production in anemic rats Text. / A.J. Erslev, J. Caro, E. Kansu, R. Silver. // Br. J. Haematol. 1980. — Voli45, No. 1. — P. 65-72.

90. Erslev, A.J. Pathophysiology of Blood. 3rd' edition Text. / A.J. Erslev, T.G. Gabuzda. Philadelphia: W.B. Saunders, 1985. - 254 p.122

91. Eskes, R. Bid induces the oligomerization and insertion of Bax into the outermitochondrial membrane Text. / R. Eskes, S. Desagher, B. Antonsson, J:C. Martinou // Mol. Cell Biol. 2000. - Vol.20, No.3. - P. 929-935.

92. Evan, G.I. Apoptosis and the cell cycle Text. / G.I. Evan, L. Brown, M. Whyte, E. Harrington // Curr. Opin. Cell Biol. 1995. - Vol.7, No.6. -P. 825-834.

93. Farrell, F. The erythropoietin receptor and its expression in tumor cells and. other tissues Text. / F. Farrell, A. Lee // Oncologist. 2004. - Vol.9 (Suppl.5). - P. 18-30.i

94. Feinstein, E. The death domain: a module shared by proteins with diverse cellular functions Text. / E. Feinstein, A. Kimchi, D. Wallach, M. Boldin, E. Varfolomeev // Trends Biochem. Sci. 1995. - Vol.20, No.9. - P. 342-344.

95. Feldman^ L. B-lymphocyte-derived burst-promoting activity in pleiotropic erythroid colony-stimulating factor, E-CSF Text. / L. Feldman; J. Fraizier, A. Sytkowski // Exp. Haematol. 1992. - Vol.20, No 10.-P. 1223-1228.

96. Fisher, J.W. The-production of an erythropoietic factor by the in situ perfused kidney Text. / J.W. Fisher, BJ. Birdwell // Acta. Haematol. -1961. Vol.26. - P. 224-232.

97. Fisher, J.W. Pharmacological agents and erythroid colony formation: effects of beta-adrenergic agonists and steroids Text. / J.W. Fisher, Y. Ohno, B. Modder et al. // New York. 1978. - P. 103-117.

98. Fisher, J.W. Erythropoietin (EPO) production by interstitial cells of hypoxic monkey kidneys Text. / J.W. Fisher, S. Koury, T. Ducey, S. Mendel // Br. J. Haematol. 1996. - Vol.95. - P. 27-32.

99. Fisher, J.W Erythropoietin: physiology and pharmacology update Text. / J.W Fisher // Exp. Biol. Med. (Maywood). 2003. - Vol.228, No 1. - P. 1-14.

100. Follen, M. A randomized clinical" trial of 4-hydroxyphenilretinamide for high-grade squamous intraepithelial lesions of the cervix Text. / M. Follen, E.N. Aktinson, D. Schottenfeld, A. Malpica, L. West, S. Lippman, C. Zou,

101. W.N. Hittelman, R. Lotan, W.K. Hong // Clin. Cancer. Res. 2001. - Vol.7, No. 11.-P. 3356-3365.

102. Frandrey, J. In vivo and1 in vitro regulation of erythropoietin mRNA: measurement by competitive polymerase* chain reaction Text. / J. Erandrey, I I.F. Bunn // Blood. 1993. - Vol.81, No.3.- P.617-623.

103. Friedrich, E.R. The normal morphology and ultrastructure of the cervix Text. / E.R. Friedrich // The biology of the cervix / Ed. R.I. Blandau, K. Möghissi. Chicago, 1973 .-P. 79-102.

104. Furuya, H. Apoptosis and cell growth fraction in normal, disp>lastic and neoplastic squamous epithelium of uterine cervix Text. / H. Furuya; H. Yabushita, Mv Noguchi, M. Nakanishi // Nippon: Rinsho. 1996. - Voli54, No.7. - P. 1916-1921.

105. Garcia, J.F. Radioimmunoassay of erythropoietin: circulating levels in normal-and polycythemic human beings Text. / J.F. Garcia, S.N. Ebbe, L. Hollander, H.O. Cutting, M.E. Miller, E.P; Cronkite // J. Labi Clin. Med: -1982. Vol.99, No.5. - P. 624-635.

106. Gibson; U.E. A novel method for real time quantitative RT-PCR Text., / U;e. Gibson, C.A. Heid, P.M. Williams // Genome Res. 1996. - Vol.6, No.10.-P. 995-1001.

107. Goldwasser, E. Radioimmunoassay of Erythropoietin Text. / E. Goldwasser, J.B. Sherwood//Br. J. Haematol: 1981. - Vol.48; No.3. - P. 359-363.

108. Gross, D.M. Effects of prostaglandins A2, E2 and F2 alpha on erythropoietin production Text. / D.M. Gross, J. Brookins, G.D. Fink, J.W. Fisher // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1976. - Vol. 198, No.2. - P. 489-496.

109. C.E. Gillett, R. Camplejohn, R. Dover // J. Pathol. 1990. - Vol.162, No.4. -P. 285-294.

110. Hartwell L.H. Introduction to cell cycle controls Text. / L.H. Hartwell // Cell Cycle Control: A Practical Approach / Ed. by Hutchison C., Glover

111. D.M. Oxford University Press, 1995. - P. 1-15.

112. Heid, C.A. Real time quantitative PCR Text. / C.A. Heid, J. Stevens, K.J. Livak, P.M. Williams // Genome Res. 1996. - Vol.6, No. 10. - P. 986-994.

113. Hengartner, M.O. Apoptosis. Death'cycle and' Swiss army knives Text. / M.O. Hengartner//Nature. 1998. - Vol.391, No.6666. - P. 441-442.

114. Hengartner, M.O. The biochemistry of apoptosis Text. / M.O. Hengartner // Nature. 2000. - Vol.407, No.6805. - P. 770-776.

115. Hofmann, K. The death domain motif found in Fas (Apo-1) and TNF receptor is present in proteins involved in apoptosis and axonal' guidance Text. / K. Hofmann, J. Tschopp // FEBS Lett. 1995. - Vol.371, No.3. -P. 321-323.

116. Huang, D.C. BH3-Only proteins-essential initiators of apoptotic cell death Text. / D.C. Huang, A. Strasser // Cell. 2000. - Vol. 103, No.6. - P. 839-842.

117. Hunt, C.R p53 expression in carcinoma of the cervix Text. / C.R. Hunt, R.J. Hale, C.H. Buckley, J. Hunt // J. Clin. Pathol. 1996. - Vol.49, No. 12. -P. 971-974.

118. Israels, L.G. Apoptosis Text. / L.G. Israels, E.D. Israels // Oncologist. -1999. Vol.4, No.4. - P. 332-339.

119. Jacobson, L.O. Studies on erythropoiesis. VII. Role of the kidney in erythropoiesis Text. / L.O. Jacobson, E. Goldwasser, W. Fried, L.F. Plzak // Trans. Assoc. Am. Physicians. 1957. - Vol.70. - P. 305-317.

120. Jänicke, R.U. Caspase-3 is required for DNA fragmentation and morphological changes associated with apoptosis Text. / R.U. Janicke, M.L. Sprengart, M.R. Wati, A.G. Porter // J. Biol. Chem. 1998. - Vol.273, No.16.-P. 9357-9360.

121. Jelkmann, W. Demonstration of high level of erythropoietin in rat-kidney following hypoxic hypoxia Text. / W. Jelkmann, C. Bauer // Pflugers. Arch. 1981.-Vol.392, No. 1.-P. 34-39.

122. Jelkmann, W. Renal erythropoietin: properties and production Text. / W. Jelkmann // Rev Physiol Biochem Pharmacol. 1986. - Vol. 104. - P. 139-215.

123. Juul, S.E. Immunohistochemical localization of erythropoietin and its receptor in the developing human brain Text. / S.E. Juul, A.T. Yachnis, A.M. Rojiani, R.D. Christensen // Pediatr. Dev. Pathol. 1999. - Vol.2, No.2. - P. 148-158.

124. Juul, S.E. Origin and fate of erythropoietin in human milk Text. / S.E. Juul, Y. Zhao, J.B. Dame, Y. Du, A.D. Hutson, R.D. Christensen // Pediatr. Res. 2000. - Vol.48, No. 5. - P. 660-667.

125. Kastan, M.B. A mammalian cell cycle checkpoint pathway utilizing p53 and GADD45 is defective in ataxia-telangiectasia Text. / M.B. Kastan, Q.

126. Zhan, W.S. el-Deiry, F. Carrier, T. Jacks, W.V. Walsh, B.S. Plunkett, B. Vogelstein, A.J. Fornace // Cell. 1992. - Vol.71, No.4. -P: 587-597.

127. Kerr, J.F. Shrinkage necrosis: a distinct mode of cellular death Text. / J.F. Kerr // J. Pathol. 1971. - Vol.105, No.l. - P: 13-20.

128. Kerr, J.F. Apoptosis: a basic biological'phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics Text. / J.F. Kerr, A.H. Wyllie, A.R. Currie // Br. J. Cancer. 1972. - Vol.26, No.4. - P. 239-257.

129. Kerr, J.F. Apoptosis. Its significance in cancer and cancer therapy Text. / J.F. Kerr, C.M. Winterford, B.V. Harmon // Cancer. 1994. - Vol.73, No.8. -P. 2013-2026.

130. Koury, S.T. Localization of erythropoietin synthesizing cells in murine kidneys by in situ hybridization Text. / S.T. Koury, M.C. Bondurant, M.J. Koury // Blood. 1988. - Vol.71, No.2. - P. 524-527.

131. Koury, S.T. Localization of cells producing erythropoietin in murine liver by in situ hybridization Text. / S.T. Koury, M.C. Bondurant, M.J. Koury, G.L. Semenza // Blood. 1991. - Vol.77, No. 11. - P. 2497-2503.

132. Krantz, K.E. The anatomy of the human cervix, gross and microscopic Text. / K.E. Krantz, W.P. Phillips // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1962. - Vol.97. -P. 551-563.

133. Kuratowska, Z. Studies on the production of erythropoietin by isolated perfused organs Text. / Z. Kuratowska, B. Lewartowski, E. Michalak // Blood. 1961.-Vol.18.-P. 527-534.

134. Kurman, R.J. Tumors of Cervix, Vagina and Vulva: Atlas of Tumor Pathology Text. / R.J. Kurman, H.J. Norris, E. Wilkinson. Bethesda, 1992.-262 p.

135. Kurtz, A. Regulation of erythropoietin production Text. / A. Kurtz, K.U. Eckardt, L. Tannahill, C. Bauer//Contrib. Nephrol. 1988. - Vol.66. - P. 1-16.

136. Kurtz, A. Renal mesangial cell cultures as a model for study of erythropoietin production Text. / A. Kurtz, W. Jelkmann, F. Sinowatz, C. Bauer // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1983. - Vol.80, No.13. - P. 4008-4011.

137. Lacombe, C. The molecular biology of erythropoietin Text. / C. Lacombe, P. Mayeux // Nephrol. Dial. Transplant. 1999. - Vol.14, No.2. - P. 22-28.

138. Lane, D.P. Cancer. p53, guardian of the genome Text. / D.P. Lane // Nature. 1992.-Vol.358, No.6381.-P. 15-16.

139. Lane, S. Human papillomaviruses, p53 and cervical neoplasia Text. / S. Lane, M\ Wells // J Pathol. 1994. - Vol.172, No.4. - P.299-300.

140. Leblond, C.P. Renewal of cell populations Text. / C.P. Leblond, B.E. Walker // Physiol. Rev. 1956. - Vol.36, No.2. - P. 255-276.

141. Lewin, B. Driving the cell cycle: M phase kinase, its partners and substrates Text. / B. Lewin // Cell. 1990. - Vol.61. - P. 743-752.

142. Locksley, R.M. The TNF and TNF receptor superfamilies: integrating mammalian, biology Text. / R.M. Locksley, N. Killeen, M.J. Lenardo // Cell. -2001. Vol. 104; No.4. - P. 487-501.

143. Lowe, S.W. Apoptosis in cancer Text. / W.S. Lowe, A.W. Lin // Carcinogenesis. -2000. Vol.21, No.3. - P. 485-495.

144. Lutter, M. Cardiolipin provides specificity for targeting of tBid to mitochondria Text. / M. Lutter, M. Fang, X. Luo, M. Nishijima, X. Xie, X. Wang // Nat. Cell Biol. 2000. - Vol.2, No. 10. - P. 754-761.

145. Masuda, S. A novel site of erythropoietin production. Oxygen-dependent production in cultured rat astrocytes Text. / S. Masuda, M. Okano, K. Yamagishi, M. Nagao, M. Ueda, R. Sasaki // J. Biol. Chem. 1994. -Vol.269, No.30i-Pl 19488-19493.

146. Masuda, S. Erythropoietic, neurotrophic and angiogenic functions of erythropoietin and regulation of erythropoietin production Text. / S. Masuda, M. Nagao, R. Sasaki // Int. J. Hematol. 1999. - Vol.70, No.l. - P. 1-6.

147. Masuda, S. The oviduct produces erythropoietin in an estrogen- and oxygen-dependent manner Text. / S. Masuda, T. Kobayashi, M. Chikuma, M. Nagao, R. Sasaki // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2000. -Vol.278, N0.6. - P. E1038-E1044.

148. Matsuzaki, S. Expression of estrogen receptor alpha and beta in peritoneal and ovarian endometriosis Text. / S. Matsuzaki, T. Murakami, S. Uehara, M. Canis, H. Sasano, K. Okamura // Fertil. Steril. 2001. - Vol.75, N0.6. -P. 1198-1205.

149. Maxwell, A. Erythropoietin production in kidney tubular cells Text. / A. Maxwell, T. Lappin, C. Johnson, J.M. Bridges, M.G. McGeown // Br. J. Haematol. 1990. - Vol.74, No.4. - P. 535-539.

150. McBroom, J.W. Erythropoietin receptor function and expression in epithelial ovarian carcinoma Text. / J.W. McBroom, G. Acs, G.S. Rose,

151. T.C. Krivak, A. Mohyeldin, A. Verma // Gynecol. Oncol. 2005. - Vol.99, No.3.-P. 571-577.

152. Miller, M.E. Clinical applications of measurement of serum immunoreactive levels of erythropoietin Text. / M.E. Miller, M. Chandra, J.F. Garcia//Ann. N.Y. Acad. Sei. 1985. - Vol.459. - P. 375-381.

153. Mitchell, M.F. The natural history of CIN and management of the abnormal Papanicolaou smear Text. / M.F. Mitchell, D. Schottenfeld. // Cervical cancer and preinvasive neoplasia / Ed. by S.C. Rubin, WJ. Hoskins. -N.Y., 1996.-P. 103-113.

154. Miura, O. Induction of tyrosine phosphorylation by the erythropoietin receptor1 correlates with mitogenesis Text. / O. Miura, A. D'Andrea, D. Kabat, J.N. Ihle // Mol. Cell Biol. 1991. - Vol.11, No. 10. - P. 4895-4902.

155. Mujais, S.K. Erythropoietin is produced by tubular cells of the rat kidney Text. / S.K. Mujais, N. Bery, T.N. Pullman, E. Goldwasser. // Cell Biochem. Biophys. 1999. - Vol.30, No.l. - P. 153-166.

156. Nagata, S. Fas ligand-induced apoptosis Text. / S. Nagata // Annu. Rev. Genet. 1999. - Vol.33. - P. 29-55.

157. Owen-Schaub, L.B. Wild-type human p53 and a temperature-sensitive J mutant induce Fas/APO-1 expression Text. / L.B. Owen-Schaub, W.

158. Zhang, J.C. Cusack, L.S. Angelo, S.M. Santee, T. Fujiwara, J.A. Roth, A.B. Deisseroth, W.W. Zhang, E. Kruzel // Mol: Cell Biol. 1995. - Vol.15, No.6.-P. 3032-3040.

159. Padovan, P. Prognostic value of bcl-2, p53 and Ki-67 in invasive 1 squamous carcinoma of the uterine Text. / P. Padovan, R. Salmaso, M. Marchetti, R. Padovan // Eur. J. Gynaecol. Oncol. 2000. - Vol.21, No.3. -P. 267-272.

160. Pan, G. Caspase-9, Bcl-XL, and Apaf-1 form a ternary complex Text. / G. Pan, K. O'Rourke, V.M. Dixit // J1 Biol: Chem. 1998. - Vol.273, No.10. -P. 5841-5845.

161. Paquette, R.L. Mutations of p53 and human papillomavirus infection in cervical carcinoma Text. / R.L. Paquette, Y.Y. Lee, S.P. Wilczynski, A. Karmakar, M. Kizaki, C.W. Miller, H.P. Koeffler // Cancer. 1993. -Vol.72, No.4. - P. 1272-1280.

162. Poulsen, H.E. Histological typing of female genital tract tumours Text. / H.E. Poulsen, C.W. Taylor, L.H. Sobin // International histological classification of tumors No. 13. — WHO, Geneva, 1975. 89 p.

163. Rapp, L. The papillomavirus E6 proteins Text. / L. Rapp, J.J. Chen // Biochem. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1378, No.l. - P. F1-F19.

164. Reagan, J.W. Dysplasia of uterine cervix Text. / J.W. Reagan, M.J. Hamonic // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1956. - Vol.63, No>6. - P: 1236-1244.

165. Reagan, J.W. The uterine cervix Text. / J.W. Reagan, Y.S. Fu // Principles and practice of surgical pathology / Ed! by S.G. Silverberg. N.Y., 1983. —. Vol.2.-P. 1633-1689.

166. Reed, J.C. Double identity for proteins of the Bcl-2 family Text. / J.C. Reed // Nature. 1997. - Vol.387, No.6635. - P. 773-776.

167. Reed, J.C. Mechanisms of Apoptosis Text., / J.C. Reed // Am. J. Pathol. -2000. Vol.157, No.5. - P. 1415-1430.

168. Rich, I.N. Extrarenal erythropoietin production by macrophages Text. / I:N. Rich, W. Heit, B. Kubanek//Blood. 1982. - Vol.60, No.4. -P.1007-1018.

169. Rich, I.N. Erythropoietin gene expression in vitro and in vivo detected by in situ hybridization Text. / I.N. Rich, C. Vogt, S. Pentz // Blood Cells. -1988. Vol.14, No.2-3. - P. 505-520.

170. Rich, I.N. Erythropoietin is produced in the tubules of the renal cortex Text. / I.N. Rich, G.I. Noe, C.A. Vogt, C. L'emke // Blood. 1990. -Vol.76, No.l.-P. 639A.

171. Rich, I.N. Erythropoietin production: a personal view Text. / I.N. Rich // Exp. Hematol. 1991. - Vol.19; No.9. - P. 985-990.

172. Rich, I.N. The initiation* of the hemopoietic system. The- response of embryonic cells to growth factors and expression of erythropoietin and erythroid-relevant genes during murine development Text. / I.N. Rich, W.

173. Riedel, I. Brackmann, U. Schnappauf, F. Zimmermann, C. Vogt, G. Noe // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1994. - Vol.718. -P. 147-162.

174. Richart, R.M. Colpomicroscopic studies of intraepithelial neoplasia Text. / R.M. Richart// Cancer. 1966. - Vol. 19. -P. 395-405.

175. Richart, R.M. Natural history of cervical intraepithelial neoplasia Text. / R.M. Richart//Clin. Obstet: Gynecol. 1968.- Vol.10.-P. 748-784.

176. Richart, R.M. A modified terminology for cervical intraepithelial neoplasia Text. / R.M. Richart // Obstet. Gynecol. 1990. - Vol.75, No. 1. - P. 131-133.

177. Ruffolo, S.C. BCL-2 selectively interacts with the BID-induced open conformer of BAK, inhibiting BAK auto-oligomerization Text. / S.C. Ruffolo, G.C. Shore // J. Biol. Chem. 2003. -Vol.278, No.27. - P. 25039-25045.

178. Sasaki, R. Erythropoietin: multiple physiological functions and regulation of biosynthesis Text. / R. Sasaki, S. Masuda, M. Nagao // Biosci. Biotechnol. Biochem. -2000. Vol.64, No.9. - P. 1775-1793.

179. Scaffidi, C. Apoptosis signaling in lymphocytes Text. / C. Scaffidi, S. Kirchhoff, P.H. Krammer, M.E. Peter // Curr. Opin. Immunol. 1999. -Vol.11, No.3.-P. 277-285.

180. Schottlander, J., Kermauner F. (Uht. no T.H. Mhhkhhoh c coaBT., 2001).

181. Schuster, S.J. Physiologic regulation and tissue localization of renal erythropoietin mRNA Text. / S.J. Schuster, J.H. Wilson, A.J. Erslev, J. Caro.//Blood. 1987.-Vol.70, No l.-P. 316-318.

182. Schuster, S.J. Cellular sites of extrarenal and renal erythropoietinu production in anaemic rats Text. / S J. Schuster, S.T. Koury, M. B'ohrer, S. Salceda, J. Caro//Br, J. Haematol. 1992. - V.81, No.2. - P. 153-159.

183. Semenza, G.L. Hypoxia, clonal selection, and the role of HIF-1 in tumor progression Text. / G.L. Semenza // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 2000. -Vol.35, No.2.-P. 71-103:

184. Sheets, E.E. Association between cervical neoplasia and apoptosis as detected by in situ nuclear labeling Text. / E.E. Sheets, C.P. Crum, J. Yeh // Gynecol. Oncol. 1996. - Vol.63, No.l. - P. 94-100.

185. Sheets, E.E. The role of apoptosis gynaecological malignancies Text. / E.E. Sheets, J. Yeh//Ann Med. 1997. - Vol.29, No.2. - P. 121-126.

186. Sherr, C.J. The ARF/p53 pathway Text. / C.J. Sherr, J.D. Weber. // Curr. Opin. Genet. Dev. 2000. - Vol. 10, No. 1. - P. 94-99.

187. Shingleton, H:M. Human cervical intraepithelial neoplasia: Fine: structure of dysplasia and carcinoma in situ Text. / H.M. Shingleton, R.M. Richart, J. Wiener, D. Spiro // Cancer Res. 1968. - Vol.28, No.4. -P. 695-706.

188. Silva, M: Erythropoietin can promote erythroid progenitor survival' by repressing apoptosis through'Bcl-XL and Bcl-2 Text. / M. Silva, D. Grillot, A. Benito, C. Richard, G; Nuñez, J:L. Fernández-Luna // Blood. 1996: -Vol.88j No.5. -P: 1576-1582.

189. Smith, D.H. Identification of erythropoietin producing cells in mammalian kidneys by in situ hybridization Text. / D.H. Smith, P.B. Maples, N. Bery, E. Goldwasser. // Blood. 1986. - Vol.68. - P. 170A.

190. Stoppler, M.C. Natural variants of the human: papillomavirus type 16 E6 protein differ in their abilities to alter keratinocytes differentiation and to induce p53 degradation Text. / M.C. Stoppler, K. Ching, H. Stoppler, K.

191. Clancy, R. Schlegel, J. Icenogle // J. Virol. 1996. - Vol.70, No.10. -P. 6987-6993.

192. Suda, T. Molecular cloning and expression of the Fas ligand, a novel member of the tumor necrosis factor family Text. / T. Suda, T. Takahashi, P. Golstein, S. Nagata // Cell. 1993. - Vol.75, No.6. - P. 1169-1178.

193. Swann, M.M. The control of cell division: a review. II. Special mechanisms Text. / Cancer Res. 1958. - Vol.18, No.10. - P. 1118-1160.

194. Tavassoli, F.A. World'Health Organization Classification of Tumours: Pathology and Genetics of Tumours of the Breast and Female Genital Organs' Text. / F.A. Tavassoli, P. Devilee. Lyon, 2003. - 432 p.

195. Taylor, R.C. Apoptosis: controlled demolition at the cellular level Text. / R.C. Taylor, S.P. Cullen, S J. Martin // Nat. Rev. Mol'. Cell Biol. 2008. -Vol.9, No.3. - P. 231-241.

196. Toledo-Cuevas, E.M. La proteina P53 y los oncogenes de papillomavirus humanos en la carcinogenesis del cuello uterino Text. / E.M. Toledo-Cuevas, A. Garcia-Carrancâ // Rev. Invest. Clin. 1996. - Vol.48, No.l. -P. 59-68.

197. Tomei, L.D. Apoptosis: The molecular basis of cell death Text. / L.D. Tomei, F.D. Cope. N.Y., 1991. - 453 p.

198. Twomey, C. Pathways of apoptosis and importance in development Text. / C. Twomey, J.V. McCarthy // J. Cell Mol. Med. 2005. - Vol.9, No.2. -P. 345-359.

199. Vander Heiden, M.G. Bcl-xL prevents cell death following growth factor withdrawal by facilitating mitochondrial ATP/ADP exchange Text. / M.G.

200. Vander Heiden, N.S. Chandel, P.T. Schumacker, C.B. Thompson // Mol. Cell. -1999.- Vol.3, No.2. P. 159-167.

201. Volpert, O. Inhibition- of Prostate Tumor Angiogenesis by the Tumor Suppressor CEACAM1 Text. / O. Volpert, W. Luo, T.J. Liu, V.T. Estrera, C. Logothetis, S.H. Lin // J. Biol. Chem. 2002. - Vol.277, No.38. -P. 35696-35702.

202. Wajant, H. Death receptors Text. / H. Wajant // Essays Biochem. 2003. -Vol.39.-P. 53-71.

203. Walker, B.E. Renewal of cell populations in the female mouse Text. / Am. J. Anat. 1960. - Vol.107. - P. 95-105.

204. Wide, L. Circadian Rhythm of Erythropoietin in Human Serum Text. / L. Wide, C. Bengtsson, G. Birgegard // Br. J. Haematol. 1989. - Vol.72, No.l.-P. 85-90.

205. Wright, T.C. Precancerous lesions of the cervix Text. / T.C. Wright, A.F. Ferenczy, R.J. Kurman // Blaustein's pathology of the female genital tract / Ed. by R J. Kurman N.Y., 1994. - 4th ed. - P. 229-278.

206. Yamaji, R. Brain capillary endothelial cells express two forms,of erythropoietin receptor mRNA Text. / R. Yamaji, T. Okada, M. Moriya, M.

207. Naito, T. Tsuruo, K. Miyatake, Y. Nakano // Eur. J. Biochem. 1996. -Vol.239, No.2. - P. 494-500.

208. Yang, J. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked Text. / J. Yang, X. Liu, K. Bhalla, C.N. Kim, A.M. Ibrado, J. Cai, T.I. Peng, D.P. Jones, X. Wang // Science. 1997. - Vol.275, No.5303.-P. 1129-1132.

209. Yang, X. Autoproteolytic activation of pro-caspases by oligomerization Text. / X. Yang, H.Y. Chang, D. Baltimore // Mol. Cell. 1998. - Vol.1, No.2.-P. 319-325.

210. Yasuda, Y. Estrogen-dependent production of erythropoietin in uterus and its implication in uterine angiogenesis Text. / Y. Yasuda, S. Masuda, M. Chikuma, K. Inoue, M. Nagao, R. Sasaki // J. Biol. Chem. 1998. -Vol.273, No.39. - P. 25381-25387.

211. Yasuda, Y. Expression of erythropoietin in human female reproductive organs Text. / Y. Yasuda, Y. Fujita, T. Musha, H. Tanaka, S. Shiokawa, K. Nakamatsu, S. Mori, T. Matsuo, Y. Nakamura // Ital. J. Anat. Embryol. -2001. Vol.106, No.2. - P. 215-222.

212. Zakharov, Y.M. Influence des surnageants de culture de macrophages provenant des îlots erythroblastiques sur l'erythropoilese du rat Text. / Y.M. Zakharov, M. Prenant // Nouv. Rev. Franc. Hematol. 1983. - Vol.25, No.l.-P. 17-22.

213. Zou, H. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3 Text. / H. Zou, WJ. Henzel, X. Liu, A. Lutschg, X. Wang // Cell. 1997. - Vol.90, No.3.-P. 405-413.

214. Zou, H. An APAF-1.cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9 Text. / H. Zou, Y. Li, X. Liu, X. Wang// J. Biol. Chem. 1999. - Vol.274, No. 17. - P. 11549-11556.

Информация о работе

Мещерякова, Марина Владимировна
кандидата медицинских наук
Курган, 2009
ВАК 03.00.13

Диссертация

Роль эритропоэтина в регуляции процессов клеточного обновления в многослойном плоском эпителии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы