Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль аполипопротеина А-1 и аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных и опухолевых гепатоцитов

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль аполипопротеина А-1 и аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных и опухолевых гепатоцитов"

□ □ЗС1554Э 1

На правах рукописи

КНЯЗЕВ РОМАН АЛЕКСАНДРОВИЧ

РОЛЬ АПОЛИПОПРОТЕИНА А-1 И АПОЛИПОПРОТЕИНА Е В РЕГУЛЯЦИИ БИОСИНТЕЗА БЕЛКА И НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В КУЛЬТУРЕ НОРМАЛЬНЫХ И ОПУХОЛЕВЫХ ГЕПАТОЦИТОВ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2007

003055491

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте биохимии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научный руководитель: академик РАМН

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор биологический наук, профессор

Панин Лев Евгеньевич

Поляков Лев Михайлович

Колпаков Аркадий Ростиславович Гуляева Людмила Федоровна

Ведущая организация: Государственное учреждение Научный центр клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (Новосибирск)

Защита состоится «^Л-^Г' гоЛ 200Уг. в часов на

заседании диссертационного совета Д 001.034.01 в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2; тел.: 83832-33-54-81).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного учреждения Научно-исследовательского института биохимии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан 2007г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Русских Г. С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Известно, что липопротеины и их белковые компоненты участвуют в регуляции многих метаболических процессов. Среди которых можно выделить следующие. Аполипопротеины апоА-1 и апоЕ осуществляют регуляцию обмена холестерина не только в плазме крови, но и посредством рецепторов внутри клетки за счет активного его выведения с помощью встроенных в мембрану специфических транспортных белков: АТР-связывающего кассетного транспортера (АВСА1) и мембранного рецептора для ЛПВП - скевенджер-рецептора класса В1 (Borst P., Elfehnk R.O., 2002; Wei С. е.а.,2005). Аполипопротеины оказывают влияние на функцию эндокринной системы, в частности, на стероидогенез; апоЕ является одним из регуляторов клеточного иммунитета; аполипопротеины способны связывать и транспортировать в клетку различные по структуре соединения (Поляков Л.М., Панин Л.Е., 2000).

Имеются сообщения о регуляции аполипопротеинами генетического аппарата клетки. Это подтверждается в серии работ Института биохимии СО РАМН под руководством академика РАМН Л.Е. Панина. Действительно, в ядрах гепатоцитов крыс были обнаружены аполипопротеины A-I и Е. Оба белка присутствовали во фракции кислых негистоновых белков, принимающих участие в регуляции экспрессии генов. Оказалось, что аполипопротеин A-I способствует повышению транскрипционной активности хроматина. Были вскрыты и молекулярные механизмы этого процесса. Показано, что аполипопротеин A-I в комплексе с восстановленными формами стероидных гормонов взаимодействует с GC-богатыми участками ДНК. При этом восстановленная А4-3-кето группа A-кольца стероидных гормонов инициирует разрыв в GC-napax водородных связей. В дальнейшем разрыв увеличивается за счет гидрофобного взаимодействия между

азотистыми основаниями и гидрофобными участками аполипопротеина A-I. С образовавшимися одноцепочечными участками ДНК взаимодействует РНК-полимераза, которая и запускает экспрессию генов с последующей активацией биосинтеза белка (Panin L.E. е.а., 1998; 2000).

Другим регуляторным белком является аполипопротеин Е. Он известен, как ингибитор пролиферации некоторых типов клеток, включая опухолевые (Vogel Т. е.а., 1994). Показано, что аполипопротеин Е повышает экспрессию мРНК перлекана, основного протеогликана в семействе гепарансульфатов, который и опосредует антипролиферативный эффект аполипопротеина Е в культуре крысиных и человеческих гладкомышечных клеток аорты (Рака L. е.а., 1999). По данным Хоу и соавторов (2001), аполипопротеин Е ингибировал стимулированную сывороткой пролиферацию эмбриональных фибробластов крыс, при этом в бессывороточной среде аполипопротеин Е увеличивал рост клеток, продлевая Gi-фазу клеточного цикла. Аполипопротеин Е усиливал рост первичных нейронов через сигнальную функцию ЛПНП-подобного рецептора (LRP, lipoprotein receptor-related protein) (Qui Z. е.а., 2004). Отмечена способность аполипопротеина Е ингибировать сосудистую гиперплазию при воспалении, вызванном денудацией эпителия сонных артерий у мышей (Moore, Z.W., Hui D.Y., 2005). Результаты исследования эффекта аполипопротеина Е на клетки человеческой аденокарциномы НТ29 и распределение Р-катенина позволяют предположить, что данный белок участвует в сохранении межклеточных взаимодействий, ингибируя рост опухолевых клеток (Niemi М. е.а. 2002). В дополнение к этому, показано, что аполипопротеин Е снижает экспрессию генов канонического, или зависимого от Р-катенина Wnt-сигнального пути (Caruso А. е.а. 2006), конститутивная активация которого играет важную роль в канцерогенезе (Taipale J. е.а., 2001).

Перечисленные работы о регуляторных эффектах аполипопротеинов А и Е позволили высказать предположение о существовании у этих белков конкурентных взаимоотношений в регуляции процессов внутриклеточной регенерации и пролиферации. В связи с этим, целью настоящего исследования являлось изучение роли аполипопротеинов A-I и Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных и опухолевых гепатоцитов.

Задачи исследования:

1. Изучить процессы комплексообразования липопротеинов со стероидными гормонами и их метаболитами.

2. Изучить влияние комплексов стероидных гормонов и их метаболитов с аполипопротеином A-I на биосинтез белка в культуре гепатоцитов крыс.

3. Изучить роль аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных гепатоцитов и в клетках асцитной гепатомы Эрлиха.

Научная новизна. Методами ультрацентрифугирования, гель-фильтрации и тушения флуоресценции показано, что при образовании комплексов липопротеинов со стероидными гормонами и их метаболитами принимает участие белковый компонент. Основным аполипопротеином, участвующим в процессе комплексообразования является аполипопротеин A-I. Полученные константы ассоциации комплексов белок-лиганд свидетельствуют о достаточно высоком сродстве.

На культуре гепатоцитов крыс показано, что комплексы аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и прегненолоном обладают высокой биологической активностью, усиливая скорость

биосинтеза белка. Принципиально важную роль в этом процессе играет восстановленная Д4-3-кетогруппа кольца А стероидных гормонов.

На культуре гепатоцитов крыс показано, что аполипопротеин Е проявляет конкурентный эффект по отношению к комплексу аполипопротеин A-I-тетрагидрокортизол и снижает увеличение скорости биосинтеза ДНК, РНК и белка, определяемую по включению радиоактивной метки.

Впервые на модели асцитной гепатомы Эрлиха показано, что опухолевые макрофаги играют ключевую роль в образовании биологическиактивных комплексов аполипопротеина A-I со стероидными гормонами, которые в свою очередь увеличивают скорость биосинтеза белка в клетках асцитной гепатомы. Аполипопротеин Е подавлял биологическую активность комплекса, что отражалось в снижении скорости биосинтеза белка. Теоретическая и практическая значимость.

Решение поставленных в диссертации задач является важным этапом в исследовании молекулярных механизмов межклеточных взаимодействий связанных с регуляцией экспрессии генов. Установление характера и степени связывания (аффинитета) липопротеинов со стероидными гормонами и их метаболитами важны для оценки роли изучаемых комплексов в регуляции важнейших внутриклеточных процессов. В результате проведенных исследований, описан неизвестный ранее механизм регуляции биосинтеза ДНК, РНК и белка — процесс, основанный на конкурентных взаимоотношениях между аполипопротеином Е и комплексом аполипопротеином А-1-стероид.

Результаты работы свидетельствуют о том, что макрофаги занимают ключевые позиции в регуляции процессов регенерации и клеточной пролиферации. Эти межклеточные взаимодействия

проявляют себя не только в нормальных тканях, но и в системе -макрофаг-опухолевая клетка. Показано, что в основе этих взаимоотношений также лежит способность макрофагов образовывать биологически активные комплексы восстановленных форм стероидных гомонов с аполипопротеином A-I. Однако способность к синтезу и секреции аполипопротеина Е у них снижена, что имеет принципиальное значение в противоопухолевой защите организма. Понимание тонких механизмов взаимоотношений макрофаг-опухолевая клетка может служить основой для повышения эффективности методов коррекции у онкологических больных.

Положения, выносимые на защиту:

1. Фракции липопротеинов плазмы крови образуют комплексы со стероидными гормонами и их метаболитами за счет белкового компонента. Одним из главных таких белков является аполипопротеин A-I.

2. Скорость биосинтеза белка в гепатоцитах крыс повышается под влиянием комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и с прегненолоном.

3. Аполипопротеин Е подавляет эффекты комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и с прегненолоном в нормальных гепатоцитах и опухолевых клетках асцитной гепатомы Эрлиха.

Апробация материалов диссертации. Материалы диссертационного исследования доложены на I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 работы, из них 2 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 4-х глав, включающих обзор литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения, выводов и списка литературы, включающих 30 отечественных и 172 зарубежных источников. Материалы диссертации изложены на 132 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 16 рисунками. Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Института биохимии СО РАМН.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования были проведены на крысах линии Вистар массой 180200 г, мышах линии СВА массой 15-20 г, полученных из вивария СО РАМН (Новосибирск). Содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 г №755).

В работе использовались следующие методы:

1. Выделение липопротеинов сыворотки крови методом ультрацентрифугирования в растворах KBr (Hatch, Lees, 1968).

2. Делипидирование липопротеинов (Herbert Р., е.а.,1973).

3. Хроматографические методы очистки аполипопротеинов (Herbert Р., е.а., 1973).

4. Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (Laemmli, 1970).

5. Гепатоциты выделяли методом рециркуляторной ферментативной перфузии с использованием 0,03% раствора коллагеназы (Seglen P.O., 1976).

6. В качестве модели опухолевого роста использовалась гепатома Эрлиха (Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск).

7. Анализ взаимодействия триптофансодержащих белков ЛП-фракций со стероидами их метаболитами проводили на спектрофлуориметре MPF-4 «Хитачи» (Япония) при длине волны возбуждения 285 нм и эмиссии в диапазоне от 300 до 600 нм (Лакович Дж., 1986.)

8. Изучение образования комплекса апоА-1-прегненолон проводили методом гель-фильтрации.

9. Константы ассоциации (Касс) были рассчитаны на основании кривых тушения флуоресценции (Attala, Lata 1968).

10.Скорость биосинтеза белка в культуре клеток оценивали по включению 14С-лейцина (Weigand К. е.а., 1974).

11.Скорость биосинтеза РНК в культуре клеток оценивали по включению 3Н-уридина (Шаткин А., 1972).

12.Скорость биосинтеза ДНК в культуре клеток оценивали по включению 3Н-тимидина (Шаткин А., 1972).

Результаты экспериментов обработаны методами вариационной

статистики с использованием t-критерия Стьюдента. При обработке

экспериментальных данных использовали пакет прикладных программ

Microsoft office (США).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Связывание стероидных гормонов и их метаболитов отдельными классами ЛП и их белковыми компонентами, мы изучали с использованием методов ультрацентрифугирования, гель-фильтрации и флуоресцентной спектроскопии.

Полученные методом ультрацентрифугирования данные показали, что связывание меченых стероидов с липопротеиновыми фракциями в целом оказалось на уровне 34-42%. Основная часть метки находилась во фракции белков инфранатанта. Однако нельзя не учитывать и тот факт, что в инфранатанте находится значительная часть аполипопротеинов, не связанных с липидами. Это, так называемый, "свободный пул" аполипопротеинов, который также может вносить свой вклад в связывание стероидов.

Высокая специфичность и чувствительность флуоресцентных методов позволяет их широко применять для анализа взаимодействий типа "рецептор-лиганд". Метод белковой флуоресценции позволяет обнаружить зависимость спектральных характеристик хромофорных групп (триптофанилов) от конформационного состояния молекул белка. Считается, что триптофан является естественной "меткой-репортером", поэтому исследование параметров его флуоресценции дает представление о характере взаимодействий, в частности, при образовании комплексов белок-стероид.

Анализ взаимодействия ЛП со стероидными гормонами показал, что наибольшее снижение флуоресценции было для частиц ЛПВП (5565%). Менее выраженным данный эффект был для ЛПОНП (30-35%) и для ЛПНП (15-20%). При этом форма спектров, их полуширина практически не изменялись.

В частицах ЛПВП основным структурно-функциональным белком является апоА-I. В связи с этим, изучали связывание стероидов хроматографически очищенным апоА-I. На рис. 1. приведены кривые тушения триптофановой флуоресценции апоА-I при образовании комплексов с тетрагидрокортизолом. Тушение составило 29%. На рис. 2. приведены кривые тушения триптофановой флуоресценции апоА-1 при образовании комплексов с прегненолоном. Тушение составило 20%.

Изучение временной зависимости тушения флуоресценции при одномоментном добавлении насыщающих количеств стероидов показало, что полное насыщение связывающих областей ЛП-частиц гормонами происходит уже через 30 мин от начала опыта.

310 320 330 340 350 360 370 длина волны (им)

Рис. 1. Спектры триптофановой флуоресценции апоА-1 при комплексообразовании с тетрагидрокортизолом.

(-) - апоА-1 (исходный спектр);

(.........) - апоА-1 + тетрагидрокортизол (через 60 мин);

г

О -I-1-1-1-1--1-1-

310 320 330 340 350 360 370 длина волны (нм)

Рис. 2. Спектры триптофановой флуоресценции апоА-1 при комплексообразовании с прегненолоном.

(-) - апоА-1 (исходный спектр);

(— ■ — ) - апоА-1 + прегненолон (через 60 мин).

В таблице 1. представлены константы связывания различных стероидов с ЛП фракциями и изолированного апоА-1, полученные на основе кривых тушения триптофановой флуоресценции. Константы ассоциации комплексов белок-лиганд (106 М'1) свидетельствуют о достаточно высоком сродстве, поэтому связывание можно назвать специфическим.

Таблица 1.

Константы ассоциации для комплексов липопротеин-стероид на основании кривых тушения флуоресценции триптофана.

Стероид ЛПОНП ЛПНП ЛПВП АпоА-1

Кортикостерон 0,6x106М"' 0,67х106М"' 3,6хЮ6М'' 0,8x106М"'

Дезокси-кортикостерон 1,02хЮ6М"' 0,14хЮ6М"' 4,0х106М"' 0,3x10бМ"'

Тестостерон 1,2хЮ6М"' 0,27x106М"' 4,8x106М"' 0,7x106М"'

Прогестерон 0,6х10бМ~' 0,64х106М"' 4,4x106М-' 0,5хЮ6М"'

Для изучения комплексообразования апоА-1 с прегненолоном мы исполоьзовали также метод гель-фильтрации. Хроматографию проводили на сефадексе С-25. На колонку одновременно нанесли хроматографически чистый апоА-1 и 14С-прегненолон, при этом белок выходил отдельным пиком без регистрации радиоактивности. Затем инкубация апоА-1 с 14С-прегненолоном на выходе показала присутствие метки во фракции белка. Что подтверждает данные по тушению триптофановой флуоресценции о процессе комплексообразования апоА-1-гормон. Присутствие 1000-кратного избытка немеченого прегненолона практически вытесняло меченый, что также позволяет говорить о специфичности связывания гормон-белок.

Для выяснения закономерностей в регуляции экспрессии генов, связанных с усилением биосинтеза белка, были проведены исследования в двух независимых парах стероидных гормонов. Первая пара представляет гормоны пучковой зоны коры надпочечников. Это кортизол и его восстановленная форма - тетрагидрокортизол. Разница между ними заключается в том, что у последнего гормона Д4-3-кетогруппа А-кольца восстановлена. Гидроксил в 3-м положении тетрагидрокортизола находится в транс-позиции. Вторая пара гормонов - прогестерон и прегненолон. По структуре А-кольца первый гормон полностью соответствует кортизолу, а второй - тетрагидрокортизолу, только оксигруппа в 3-м положении у прегненолона находится в цис-позиции.

Проведены нами исследования показали, что в паре кортизол -тетрагидрокортизол только комплекс апоА-1-тетрагидрокортизол усиливал скорость биосинтеза белка в гепатоцитах по сравнению с контролем (табл. 2). Кортизол, комплекс апоА-1-кортизол и тетрагидрокортизол не вызывали достоверных изменений по сравнению с контролем.

Таблица 2.

Изменение скорости биосинтеза белка в гепатоцитах крыс (М±т)

Условия инкубации Скорость биосинтеза белка, имп/мин на 1 мг белка, (п=5)

Контроль 18016 ±554

АпоА-1 15763±452#

Кортизол 16395±398#

ТГК 15559±433#

АпоА-1 - кортизол 15854 ± 317 #

АпоА-1 - ТГК 32802±1175 *

* - достоверное различие по сравнению с контролем (р < 0,001)

# - достоверное различие по сравнению с комплексом апоА-1-ТГК (р < 0,05)

Результаты в паре прогестерон - прегненолон оказались схожими, биологической активностью обладал комплекс апоА-1-прегненолон, который имеет восстановленную окси группу в А кольце, он значительно усиливал биосинтез белка, тогда как комплекс апоА-1-прогестерон не изменял скорость включения 14С-лейцина по сравнению с контролем (табл. 3). Сами прогестерон и прегненолон также не вызывали достоверных изменений по сравнению с контролем.

Таблица 3.

Изменение скорости биосинтеза белка в гепатоцитах крыс (М±ш)

Условия инкубации Скорость биосинтеза белка, имп/мин на 1 мг белка, (п=6)

Контроль 57606 ±2762

АпоА-1 50405±1446#

Прогестерон 64815±968#

Прегненолон 57730 ±1267 #

АпоА-1 - прогестерон 64055±1415 #

АпоА-1 - прегненолон 112089 ± 1560 *

* - достоверное различие по сравнению с контролем (р < 0,001)

# - достоверное различие по сравнению с комплексом апоА-1- прегненолон (р < 0,001)

Проведенные исследования говорят о том, что в комплексе с апоА-1 биологической активностью обладает не только восстановленная форма кортизола - тетрагидрокортизол, но и соответствующий ему по структуре А-кольца прегненолон. Считаем, что в повышении скорости биосинтеза белка в гепатоцитах принципиально важную роль играет восстановленная Д4-3-кетогруппа стероидных гормонов.

Ранее уже было показано, что комплекс апоА-1 с тетрагидрокортизолм обладает биологической активностью, которая

заключается в усилении экспрессии генов и увеличении скорости биосинтеза ДНК, РНК и белка. Исходя из литературных данных о регуляторных эффектах апоЕ, мы предположили, что этот белок может играть роль отрицательной обратной связи в данном механизме усиления биосинтеза белка и нуклеиновых кислот. Проведенные нами исследования показали, что апоЕ полностью подавлял повышение биосинтеза ДНК, РНК и белка, вызванное действием комплекса апоА-I- ТГК (табл. 4).

Таблица 4.

Изменение скорости биосинтеза ДНК, РНК и белка в гепатоцитах

(М±гп)

Условия икубации Скорость биосинтеза имп/мин на мг белка (п=6)

ДНК РНК Белка

Контроль 1343 ±74 1155 ±52 18016 ± 554

АпоА-1 - ТГК 1985±104 * 2275 ±173 * 32802 ±1175 *

АпоЕ 862 ±70 *# 1134± 131 # 19942 ±2463 #

АпоА-1 - ТГК + апоЕ 803 ±48 *# 1132 ±191# 21823 ± 2292 #

* - достоверное различие по сравнению с контролем (р < 0,01)

# - достоверное различие по сравнению с комплексом апоА-1-ТГК (р< 0,01)

В отсутствии комплекса апоА-1-ТГК в среде инкубации апоЕ не оказывал влияния на биосинтез белка и РНК, но снижал скорость включения меченого тимидина в ДНК в 1,6 раза по сравнению с контролем. Таким образом, между комплексом апоА-1-ТГК и апоЕ существуют конкурентные взаимоотношения. Они проявляются в том, что комплекс апоА-1-ТГК усиливает синтез ДНК, РНК и белка в гепатоцитах, в то время как апоЕ полностью снимает эффект комплекса.

В НИИ биохимии СО РАМН было показано, что клетки Купфера фагоцитируя продукты клеточной деградации, кооперативно с помощью рецептор-опосредованного эндоцитоза захватывают ЛПВПз и стероидные гормоны. ЛПВПз во вторичных лизосомах подвергаются дезинтеграции с образованием апоА-1, а стероидные гормоны восстанавливаются при участии а- и Р-редуктаз с образованием тетрагидросоединений. Полученные продукты образуют биологически активный комплекс, который сначала попадает в интерстициальное пространство, а затем в ядра гепатоцитов, где и усиливает экспрессию генов.

Мы изучали этот процесс на культуре клеток асцитной гепатомы Эрлиха. Полученные данные показали, что добавление ЛПВП и кортизола увеличивала скорость биосинтеза белка в сокультуре клеток асцитной гепатомы и опухолевых макрофагов (табл.5). Добавление ЛПВП и кортизола в культуру без прилипающих клеток не вызывало достоверных изменений по сравнению с контролем. Что подтверждает данные, полученные ранее на нормальных клетках Купфера (Усынин И.Ф. 1996). У нас была задача изучить роль апоЕ в данном механизме, предположительно, он должен играть роль отрицательной обратной связи, снимая биологический эффект комплекса апоА-1-тетрагидрокортизол образованного в макрофагах. Полученные данные показали - апоЕ действительно ингибировал эффект комплекса апоА-1-ТГК (табл. 5).

Таблица 5.

Изменение скорости биосинтеза белка в клетках асцитной гепатомы Эрлиха (М±т)

Условия инкубации Скорость биосинтеза белка, имп/мин х 103 на 1 мг белка, (п=6)

1. Контроль (сокультура) 816 ±14,3

2. Сокультура + ЛПВП + кортизол 937 ± 35,4 *

3. Сокультура + апоЕ + ЛПВП + кортизол 733 ± 28,3* #

4. Клетки асцитной гепатомы + ЛПВП + кортизол 728 ±20,5 * #

* - достоверное различие по сравнению с группой 1 (р < 0,05)

# - достоверное различие по сравнению с группой 2 (р < 0,05)

Мы провели аналогичное исследование еще на одном стероидном гормоне — прогестероне. В макрофагах окси-группа в А кольце прогестерона может восстанавливаться с образованием предшественника прогестерона — прегненолона, который предположительно, образует комплекс с основным компонентом ЛПВП - апоА-1. Этот комплекс и должен усиливать экспрессию генов в клетках гепатомы. Полученные данные показали увеличение скорости биосинтеза белка в сокультуре под действием ЛПВП и прогестерона (табл. 6). Добавление ЛПВП и прогестерона в культуру клеток гепатомы Эрлиха без прилипающих клеток не вызывало эффекта. Инкубация клеток в присутствии ЛПВП, кортизола и апоЕ также не оказывало эффекта на изменение биосинтеза белка.

Таблица 6.

Изменение скорости биосинтеза белка в клетках асцитной гепатомы Эрлиха (М±ш)

Условия инкубации Скорость биосинтеза белка, имп/мин х 103 на 1 мг белка, (п=6)

1. Контроль (сокультура) 762 ± 34,2

2. Сокультура + ЛПВП + прогестерон 877 ± 47,9 *

3. Сокультура + апоЕ + ЛПВП + прогестерон 760 ± 64 #

4. Клетки асцитной гепатомы + ЛПВП + прогестерон 712 ±48,9

* - достоверное различие по сравнению с группой 1 (р < 0,05)

# - достоверное различие по сравнению с группой 2 (р < 0,05)

Таким образом, на культуре асцитной гепатомы Эрлиха было показано, что в процессе образования биологически активного комплекса ключевая роль принадлежит макрофагам, что подтверждается серией работ выполненных в Институте биохимии под руководством академика РАМН Панина Jl. Е. В настоящей работе мы показали, что аполипопротеин Е принимает участие в подавлении биологических эффектов комплекса аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и, предположительно, комплекса аполипопротеина A-I с прегненолоном в культуре клеток асцитной гепатомы Эрлиха.

выводы

1. Липопротеиновые фракции плазмы крови образуют комплексы со стероидными гормонами и их метаболитами за счет белковых компонентов. Одним из главных таких белков является аполипопротеин A-I.

2. Комплексы аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и с прегненолоном обладают высокой биологической активностью, усиливая скорость биосинтеза белка в гепатоцитах крыс.

3. Аполипопротеин Е принимает участие в подавлении эффектов комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и аполипопротеина A-I с прегненолоном в гепатоцитах крыс.

4. На модели асцитной гепатомы Эрлиха показано, что опухолевые макрофаги играют ключевую роль в образовании биологически-активных комплексов аполипопротеина A-I со стероидными гормонами, которые в свою очередь увеличивали скорость биосинтеза белка в клетках асцитной гепатомы.

5. Аполипопротеин Е подавляет биологическую активность комплекса апоА-I, что отражалось в снижении скорости биосинтеза белка в культуре клеток асцитной гепатомы Эрлиха.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Суменкова Д.В., Князев P.A.. Гуща P.C., Поляков Л.М., Панин Л.Е. Влияние комплекса тетрагидрокортизола и аполипопротеина A-I на метаболические характеристики изолированных гепатоцитов// Тез.докл. I Съезда физиологов СНГ. Сочи -2005,-с.216.

2. Поляков Л.М., Князев P.A.. Суменкова Д.В., Панин Л.Е. Анализ взаимодействия липопротеинов и стероидных гормонов// Сибирский Консилиум.-2006.-№7(54).-с.20-24.

3. Панин Л.Е., Князев P.A.. Суменкова Д.В., Гуща P.C., Поляков Л.М. Роль аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре гепатоцитов крыс// Бюллетень Сибирского отделения РАМН.-2007.-123.-№1.-с.63-6б.

Подписано к печати 14 марта 2007 г. Тираж 100 экз. Заказ № 443. Отпечатано "Документ-Сервис", 630090, Новосибирск, Институтская 4/1, тел. 335-66-00

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Князев, Роман Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

L ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Аполипопротеины (общие представления).

1.1.1 Аполипопротеин A-I (структура, метаболизм, свойства).

1.1.2 Аполипопротеин Е (структура, метаболизм, свойства).

1.2. Механизмы поглощения липопротеинов клетками.

1.2.1 В,Е-рецепторы.

1.2.2 Скевенджер-рецепторы для ЛПНП класса А.

1.2.3 ЛПВП-рецепторный путь.

1.2.4 Скэвенджер-рецепторы для ЛПВП класса В1.

1.2.5 АТР-связывающий кассетный транспортер ("АВС-белок").

13 Роль липопротеинов в транспорте гормонов и биологически активных веществ.

П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Структурно-функциональные взаимоотношения клеток печеночного синусоида.

32 Изучение комплексообразования липопротеинов и стероидных гормонов.

33 Изучение влияния комплексов аполипопротеин A-I-тетрагидрокортизол и аполипопротеин A-I-прегненолон на биосинтез белка в культуре гепатоцитов крыс.

3.4 Роль аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных гепатоцитов и в клетках асцитной гепатомы Эрлиха.

IV. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

СПИСОКЛИТЕРАТУРЫ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Апо - аполипопротеин

БСА-бычий сывороточный альбумин

ЛП - липопротеины

ЛПВП - липопротеины высокой плотности ЛПЛ - липопротеинлипаза Л11НП - липопротеины низкой плотности ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности ХМ- хиломикроны

JIXAT - лецитин-холестерин-ацилтрансфераза

МФ - макрофаги

Г1ААГ - полиакриламидный гель

ЭДГА-этилендиаминтетрауксусная кислота

SDS -додецилсульфат натрия

LPS - липополисахарид

SR - скевенджер рецептор

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль аполипопротеина А-1 и аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных и опухолевых гепатоцитов"

Актуальность темы. Известно, что липопротеины и их белковые компоненты участвуют в регуляции многих метаболических процессов. Среди которых можно выделить следующие. Аполипопротеины апоА-1 и апоЕ осуществляют регуляцию обмена холестерина не только в плазме крови, но и посредством рецепторов внутри клетки за счет активного его выведения с помощью встроенных в мембрану специфических транспортных белков: АТР-связывающего кассетного транспортера (АВСА1) и мембранного рецептора для ЛПВП - скевенджер-рецептора класса В1 (Borst P., Elfehnk R.O., 2002; Wei С. е.а.,2005). Аполипопротеины оказывают влияние на функцию эндокринной системы, в частности, на стероидогенез; апоЕ является одним из регуляторов клеточного иммунитета; аполипопротеины способны связывать и транспортировать в клетку различные по структуре соединения (Поляков Л.М., Панин Л.Е., 2000).

Имеются сообщения о регуляции аполипопротеинами генетического аппарата клетки. Это подтверждается в серии работ Института биохимии СО РАМН под руководством академика РАМН JI.E. Панина. Действительно, в ядрах гепатоцитов крыс были обнаружены аполипопротеины A-I и Е. Оба белка присутствовали во фракции кислых негистоновых белков, принимающих участие в регуляции экспрессии генов. Оказалось, что аполипопротеин A-I способствует повышению транскрипционной активности хроматина. Были вскрыты и молекулярные механизмы этого процесса. Показано, что аполипопротеин A-I в комплексе с восстановленными формами стероидных гормонов взаимодействует с GC-богатыми участками ДНК. При этом восстановленная Д4-3-кетогруппа A-кольца стероидных гормонов инициирует разрыв в GC-napax водородных связей. В дальнейшем разрыв увеличивается за счет гидрофобного взаимодействия между азотистыми основаниями и гидрофобными участками аполипопротеина A-I. С образовавшимися одноцепочечными участками ДНК взаимодействует РНК-полимераза, которая и запускает экспрессию генов с последующей активацией биосинтеза белка (Panin L.E. е.а., 1998; 2000).

Другим регуляторным белком является аполипопротеин Е. Он известен, как ингибитор пролиферации некоторых типов клеток, включая опухолевые (Vogel Т. е.а., 1994). Показано, что аполипопротеин Е повышает экспрессию мРНК перлекана, основного протеогликана в семействе гепарансульфатов, который и опосредует антипролиферативный эффект аполипопротеина Е в культуре крысиных и человеческих гладкомышечных клеток аорты (Рака L. е.а., 1999). По данным Хоу и соавторов (2001), аполипопротеин Е ингибировал стимулированную сывороткой пролиферацию эмбриональных фибробластов крыс, при этом в бессывороточной среде аполипопротеин Е увеличивал рост клеток, продлевая Gi-фазу клеточного цикла. Аполипопротеин Е усиливал рост первичных нейронов через сигнальную функцию ЛПНП-подобного рецептора (LRP, lipoprotein receptor-related protein) (Qui Z. е.а., 2004). Отмечена способность аполипопротеина Е ингибировать сосудистую гиперплазию при воспалении, вызванном денудацией эпителия сонных артерий у мышей (Moore, Z.W., Hui D.Y., 2005). Результаты исследования эффекта аполипопротеина Е на клетки человеческой аденокарциномы НТ29 и распределение Р-катенина позволяют предположить, что данный белок участвует в сохранении межклеточных взаимодействий, ингибируя рост опухолевых клеток (Niemi М. е.а. 2002). В дополнение к этому, показано, что аполипопротеин Е снижает экспрессию генов канонического, или зависимого от Р-катенина Wnt-сигнального пути (Caruso А. е.а. 2006), конститутивная активация которого играет важную роль в канцерогенезе (Taipale J. е.а., 2001).

Перечисленные работы о регуляторных эффектах аполипопротеинов А и Е позволили высказать предположение о существовании у этих белков конкурентных взаимоотношений в регуляции процессов внутриклеточной регенерации и пролиферации. В связи с этим, целью настоящего исследования являлось изучение роли аполипопротеинов A-I и Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных и опухолевых гепатоцитов.

Задачи исследования:

1. Изучить процессы комплексообразования липопротеинов со стероидными гормонами и их метаболитами.

2. Изучить влияние комплексов стероидных гормонов и их метаболитов с аполипопротеином A-I на биосинтез белка в культуре гепатоцитов крыс.

3. Изучить роль аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных гепатоцитов и в клетках асцитной гепатомы Эрлиха.

Научная новизна. Методами ультрацентрифугирования, гель-фильтрации и тушения флуоресценции показано, что при образовании комплексов липопротеинов со стероидными гормонами и их метаболитами принимает участие белковый компонент. Основным аполипопротеином, участвующим в процессе комплексообразования является аполипопротеин A-I. Полученные константы ассоциации комплексов белок-лиганд свидетельствуют о достаточно высоком сродстве.

На культуре гепатоцитов крыс показано, что комплексы аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и прегненолоном обладают высокой биологической активностью, усиливая скорость биосинтеза белка. Принципиально важную роль в этом процессе играет восстановленная Д4-3-кетогруппа кольца А стероидных гормонов.

На культуре гепатоцитов крыс показано, что аполипопротеин Е проявляет конкурентный эффект по отношению к комплексу аполипопротеин А-1-тетрагидрокортизол и снижает увеличение скорости биосинтеза ДНК, РНК и белка, определяемую по включению радиоактивной метки.

Впервые на модели асцитной гепатомы Эрлиха показано, что опухолевые макрофаги играют ключевую роль в образовании биологическиактивных комплексов аполипопротеина А-1 со стероидными гормонами, которые в свою очередь увеличивают скорость биосинтеза белка в клетках асцитной гепатомы. Аполипопротеин Е подавлял биологическую активность комплекса, что отражалось в снижении скорости биосинтеза белка. Теоретическая и практическая значимость.

Решение поставленных в диссертации задач является важным этапом в исследовании молекулярных механизмов межклеточных взаимодействий связанных с регуляцией экспрессии генов. Установление характера и степени связывания (аффинитета) липопротеинов со стероидными гормонами и их метаболитами важны для оценки роли изучаемых комплексов в регуляции важнейших внутриклеточных процессов. В результате проведенных исследований, описан неизвестный ранее механизм регуляции биосинтеза ДНК, РНК и белка - процесс, основанный на конкурентных взаимоотношениях между аполипопротеином Е и комплексом аполипопротеином А-1-стероид.

Результаты работы свидетельствуют о том, что макрофаги занимают ключевые позиции в регуляции процессов регенерации и клеточной пролиферации. Эти межклеточные взаимодействия проявляют себя не только в нормальных тканях, но и в системе -макрофаг-опухолевая клетка. Показано, что в основе этих взаимоотношений также лежит способность макрофагов образовывать биологически активные комплексы восстановленных форм стероидных гомонов с аполипопротеином A-I. Однако способность к синтезу и секреции аполипопротеина Е у них снижена, что имеет принципиальное значение в противоопухолевой защите организма. Понимание тонких механизмов взаимоотношений макрофаг-опухолевая клетка может служить основой для повышения эффективности методов коррекции у онкологических больных.

Положения, выносимые на защиту:

1. Фракции липопротеинов плазмы крови образуют комплексы со стероидными гормонами и их метаболитами за счет белкового компонента. Одним из главных таких белков является аполипопротеин A-I.

2. Скорость биосинтеза белка в гепатоцитах крыс повышается под влиянием комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и с прегненолоном.

3. Аполипопротеин Е подавляет эффекты комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и с прегненолоном в нормальных гепатоцитах и опухолевых клетках асцитной гепатомы Эрлиха.

I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Князев, Роман Александрович

Выводы

1. Липопротеиновые фракции плазмы крови образуют комплексы со стероидными гормонами и их метаболитами за счет белковых компонентов. Одним из главных таких белков является аполипопротеин A-I.

2. Комплексы аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и с прегненолоном обладают высокой биологической активностью, усиливая скорость биосинтеза белка в гепатоцитах крыс.

3. Аполипопротеин Е принимает участие в подавлении эффектов комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и аполипопротеина A-I с прегненолоном в гепатоцитах крыс.

4. На модели асцитной гепатомы Эрлиха показано, что опухолевые макрофаги играют ключевую роль в образовании биологически-активных комплексов аполипопротеина A-I со стероидными гормонами, которые в свою очередь увеличивали скорость биосинтеза белка в клетках асцитной гепатомы.

5. Аполипопротеин Е подавляет биологическую активность комплекса, что отражалось в снижении скорости биосинтеза белка в культуре клеток асцитной гепатомы Эрлиха.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Князев, Роман Александрович, Новосибирск

1. Бабичев В.Н. Рецепторы механизмы действия половых гормонов может ли рецептор работать без лиганда?// Проблемы Эндокринологии.-2006.-Т.52.-№1.-С.32-38.

2. Белова Л.А., Оглоблина О.Г., Белов A.A., Кухарчук В.В. Процессы модификации липопротеинов, физиологическая и патогенетическая роль модифицированных липопротеинов// Вопросы медицинской химии.-2000.-Т.46.-№ 1 .-С. 12-19.

3. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 1992.-264с.

4. Климов А.Н. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения// Санкт-Петербург.-1999.-512с.

5. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии// Москва. Мир.-1986.-496с.

6. Лимфоциты. Методы. Под редакцией Дж. Клауса// Москва. Мир.-1990.-С.36-39.

7. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование// Москва, Наука.-1981.-288с.

8. Панин Л.Е., Поляков Л.М. Липопротеиды: состав, структура, свойства// Бюлл. СО АМН СССР.-1987.-№3.-С. 22-30.

9. Панин Л.Е., Биушкина Н.Г., Поляков Л.М. Количественная характеристика взаимодействия липопротеинов сыворотки крови со стероидными гормонами// Бюл. эксп. биол. и мед.-1992.-Т.112.-К7.-С.34-36.

10. Панин Л.Е., Поляков Л.М., Кузьменко А.П., Потеряева О.Н., Скрыль Г.Ш. Обнаружение апопротеина A-1-иммунореактивности в хроматине ядер гепатоцитов крыс// Биохимия .-1992.-Т.57.-№6.-С.-826-832.

11. Панин J1.E., Усынин И.Ф., Харьковский A.B., Трубицина О.М. Роль клеток Купфера в регуляции биосинтеза белка в гепатоцитах // Вопр. мед. хим.-1993 .-Т.40.-№4.-С.6-8.

12. Панин Л.Е., Явление стимуляции резидентными макрофагами биосинтеза белка в паренхимных клетках органов и тканей в процессе регенерации// Бюлл. СО РАМН.-1998.- №3.-С.11-23.

13. Панин Л.Е., Усынин И.Ф., Харьковский A.B., Потеряева О.Н. Влияние липопротеинов высокой плотности и гидрокортизона на продукцию аполипопротеина Е клетками Купфера// Бюлл. эксп. биол. мед.-1998.-Т.126.-№7.-С.43-45.

14. Панин Л.Е., Максимов В.Ф., Коростышевская И.М. Влияние глюкокортиокидов и липопротеинов высокой плотности на активность ядерного аппарата гепатоцитов// Бюлл. экспер. биол. и мед.-1999.-Т.128.-№12.-С.650-653.

15. Панин Л.Е., Русских Г.С., Поляков Л.М. Обнаружение иммунореактивности к аполипопротеинам A-I, В и Е в ядрах клеток тканей крыс// Биохимия.-2000.-Т.65.- В.12,- С.1684-1689.

16. Панин, Л.Е., Хощенко О.М., Усынин И.Ф. Роль аполипопротеина A-I в активации биосинтеза белка и ДНК в гепатоцитах под влиянием стероидных гормонов// Бюл. эксп. биол. и мед. 2001.-Т. 131.- № 1.-С.63 -65.

17. Панин Л.Е., Максимов В.Ф., Хощенко О.М., Коростышевская И.М. Структурно-функциональные изменения в гепатоцитах и клетках

18. Купфера при совместном действии глюкокортикоидов и липопротеинов низкой плотности// Цитология.-2002.-Т.43.-№.12.-С.1150-1158.

19. Панин J1.E., Пахарукова , Гуляева Л.Ф. Роль липопротеинов как транспортных форм ксенобиотиков в индукции ферментов мокросомальной системы// Бюл. Эксп. Биол. Мед.-2002.-Т.132.-№3.-С.289-291.

20. Панин Л.Е., Тузиков Ф.В., Тузикова H.A., Гимаутдинова О.И., Поляков Л.М. Взаимодействие комплекса тетрагидрокортизол-аполипопротеин A-I с эукариотической ДНК и одноцепочечными олигонуклеотидами// Молекулярная биология.-2002.-Т.36.-№ 1 .-С.96-102.

21. Панин Л.Е. Молекулярные механизмы регуляции клеточной пролиферации и опухолевого роста// Бюл. СО РАМН.-2002.-№2.-С. 8-14.

22. Панин Л.Е., Хощенко О.М. Роль резидентных макрофагов в регуляции биосинтеза ДНК и белка в клетках асцитной гепатомы мешей линии A/Sn(A)// Вопросы онкологии.-2003.-Т.49, №4.-С.472-475.

23. Панин Л.Е., Тузиков Ф.В., Тузикова H.A., Поляков Л.М. Особенности взаимодействия комплексов кортизол аполипопротеин A-I и тетрагидрокортизол - аполипопротеин A-I с эукариотической ДНК// Молекулярная биология.-2006.-Т.40.-№2.-С.300-309.

24. Поляков Л.М. Липопротеины плазмы крови: транспортная система для ксенобиотиков и биологически активных веществ// Бюл. СО РАМН,-1998.-T.3.-C.23-29.

25. Поляков Л.М., Панин Л.Е., Аполипопротеин Е: структура и функции// Успехи современной биологии.-1998.-Т.118.-№6.-С.743-753.

26. Поляков Л.М., Панин Л.Е. Липопротеиновая регуляция биологических процессов// Успехи современной биологии.-2000.-Т.120.-С.275-282.

27. Пояков Л.М., Зуева Т.В. Суменкова Д.В., Панин Л.Е. Роль липопротенинов в связывании полисахаридов бактериального идрожжевого происхождения// Бюл. СО РАМН.-2007.-Т.123.-№1.-С.67-70.

28. Шаткин А. Определение содержания РЖ, ДНК, и белка с помощью меченых предшественников и последующего химического фракционирования// В кн.: Методы вирусологии и молекулярной биологии.- Мир, М., 1972.- С. 184-193.

29. Abril E.R., Rybski J.A., Scuderi P., Watson R.R. Beta-carotene stimulates human leukocytes to secrete a novel cytokine// J. Leukoc. Biol.-1989.-V.45(3).-P.255-261.

30. Acton S.L., Kozarsky K.F., Rigotti A. The HDL receptor SR-BI: a new therapeutic target for atherosclerosis?// Mol. Med. Today.-1999.-V.5.-P.518-524.

31. Alaupovic P. Apoliproproteins and lipoproteins// Atherosclerosis.-1971.-V.2.-P. 141-146.

32. Attalah N.A., Lata G.F. Steroid-protein interactions studied by fluorescence quenching// Biochem. Biophys. Acta.-1968.-V.168.-N.2.-P.321-333.

33. Attie A.D., Kastelein J.P., Hayden M.R. Pivotal role of ABCA1 in reverse cholesterol transport influencing HDL levels and susceptibility to atherosclerosis// J. Lipid. Res.-2001.-V.42.- P.1717-1726.

34. Basu S.K., Brown M.S., Ho Y.K., Havel R.J., Goldstein J.L. Mouse macrophages synthesize and secrete a protein resembling apolipoprotein E//Science.-1983.-V.78.- P.7545-7549.

35. Basu S.K., Goldstein J.L., Brown M.S. Independent pathway for secretion of cholesterol and apolipoprotein E by macrophages// Science.-1983 .-V.219.-P. 871 -873.

36. Blanco-Vaca F., Escola-Gil J.C., Martin-Campos J.M., Julve J. Role of apoA-II in lipid metabolism and atherosclerosis: advances in the study of an enigmatic protein// J. Lipid Res.-2001.-V.42(l 1).-P. 1727-1739.

37. Blue M. L., Williams D.L., Zucker D., Alan K.S., Blum C. Apolipoprotein E synthesis in human kidney, adrenal gland and liver// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1983.-V.80.-P.283-287.

38. Bojanovski M., Gregg K.E., Wilson D.M., Brewer H.B. Competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the quantitation of apoprotein A-I using a monoclonal antibody// Clin.Chim.Acta.- 1988.-V.178.- P.159-169

39. Borst P., Elferink R.O. Mammalian ABC transporters in health and disease // Annu. Rev. Biochem.-2002.-V.71.-P.537-592.

40. Brand K., Mackman N., Curtiss L. Interferon-gamma inhibits macrophage apolipoprotein-E production by posttranslational mechanisms// J.Clin.Invest.- 1993.-V.91.-P.2031-2039.

41. Breslow J.L. Human apolipoproteins: molecular biology and genetic variation// Ann.Rev.Biochem.-1985.-V.54.- P.699-727.

42. Breslow J. Apolipoprotein genetic variation and human disease// Physiol.-1988. Rev. 68.-P.85-132.

43. Brewer H.B., Fairwell T., LaRue A., Ronan R. et al. The amino acid sequence of human apo A-I, an apolipoprotein isolated from high density lipoproteins// Biochem.Biophys.Res. Communs.- 1978,- V.80.- N.3.- P.623-630.

44. Brodeur M.R, Luangrath V., Bourret G., Falstrault L., Brissette L. Physiological importance of SR-BI in the in vivo metabolism of human HDL and LDL in male and female mice// J. Lipid. Res.-2005.-V.46.-P.687-696.

45. Brouwer D.A., van Doormaal J.J., Muskiet F.A. Clinical chemistry of common apolipoprotein E isoforms// J. Chromatogr. B. Biomed.-1996.-V.678(l).-P.23-41.

46. Brown M.S., Goldstein J.L. The SREBP pathway: regulation of cholesterol metabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor// Cell.- 1997.-V.89(3).-P.331-40.

47. Calvo C., Ulloa N., Del-Pozo R., Verdugo C. Decreased activation of lecithin:cholesterol acyltrasferase by glycated apolipoprotein A-I// Eur.J.Clin.Chem.and Clin.Biochem.- 1993.-V.31.- P.217-220.

48. Camejo G., Hurt-Camejo E., Rosengren B., Wiklund O., Lopez F., Bondjers G. Modification of cooper-catalized oxidation of low density lipoprotein by proteoglycans and glycosaminoglycans// J.Lipid Res.-1991.-V.32.- P. 1983-1992.

49. Caruso A., Motolese M., Iacovelli L. et al. Inhibition of the canonical Wnt signaling pathway by apolipoprotein E4 in PC 12 cells// J. Neurochem. -2006. Vol.98. - № 2. - P.364 - 371.

50. Cunha G.R., Bigsby R.M., Cooke P.S., Sugimura Y. Stromal-epithelial interactions in adult organs// Cell Differ.-1985.-V.17(3).-P. 137-148.

51. Chapman M.J. Animal lipoproteins: chemistry, structure, and comparative aspects// J.Lipid Res.- 1980.- V.21.-P.789-853.

52. Chen Y., Li R., Wang R., Liu Z. The significance of nuclear factor kappa Bp65 (NF kappa Bp65) expression on the vascular endothelial cells of rectum adenocarcinoma of human// Chinese.-2001.-V.32(2).-P.196-199.

53. Clay M.A., Anantharamaiah G.M., Mistry M.J., Balasubramaniam A., Harmony J.A. Localization of a domain in apolipoprotein E with both cytostatic and cytotoxic activity// Biochemistry.-1995.-34(35).-P. 1114211151.

54. Clay M.A., Pyle D.H., Rye K.A., Barter P.J. Formation of spherical, reconstituted high density lipoproteins containing both apolipoproteins A-I and A-II is mediated by lecithin:cholesterol acyltransferase// J. Biol. Chem.-2000.-V.275.-P.9019-9025.

55. Curtiss L., Edgington T. Identification of a lymphocyte surface receptor for low-density lipoprotein inhibition, an immunoregulatoryspecies of normal plasma low density lipoprotein// J.Clin.Invest.-1978.-V.61.-P.1298-1308.

56. Curtiss L.K., Edgington T.Y. Immunochemical heterogeneity of human plasma high density lipoproteins identification with apolipoprotein A-I specific and A-II specific monoclonal - antibodies// J. Biol. Chem.- 1985.-V.260.- N.5.- P.2982-2993.

57. Davidson N.,Carlos R.,Drewek M.,Parmer T. Apolipoprotein gene expression in the rat is regulated in a tissue-specific manner by thyroid hormone// J.Lipid Res.-1988.-V.29.-P. 1511-1522.

58. Davis C.G., Goldstein J.L., Sudhof T.C., Anderson R.G., Russell D.W., Brown M.S. Acid-dependent ligand dissociation and recycling of LDL receptor mediated by growth factor homology region// Nature.-1987.-V.326(6115).-P.760-765.

59. Diederich W., Orso E., Drobnik W., Schmitz G. Apolipoprotein AI and HDL(3) inhibit spreading of primary human monocytes through a mechanism that involves cholesterol depletion and regulation of CDC42// Atherosclerosis. 2001 .-V. 159(2).-P.313-324.

60. Dean M., Rzhetsky A., Allikmets R. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily// Genome Res. 2001.-V. 11(7).-P.l 156-1166.

61. Drayna D.T.,McLean J.W.,Wion K.L.,Trent J.M.,Drabkin H.A., awn R.M. Human apolipoprotein D gene: gene sequence, chromosome localization, and homology to la-globulin superfamily//DNA.- 1987.-V.6.-P. 199-214.

62. Dyer, C.A.; Curtiss, L.K. A synthetic peptide mimic of plasma apolipoprotein-E that binds the LDL receptor// J. Biol.Chem.-1991.- V.266.-P.22803-22806.

63. Elshourbagy N., Liao W., Mahley R., Taylor J. Apolipoprotein E mRNA in abundant in the brain and adrenals, as well, as the liver, and is present in other peripheral tissues of rats and marmosets// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1985.-V.82.-P.203-207.

64. Farkas M.H., Weisgraber K.H., Shepherd V.L., Linton M.F., Fazio S., Swift L.L. The recycling of apolipoprotein E and its amino-terminal 22 kDa fragment: evidence for multiple redundant pathways// J. Lipid Res.-2004.-V.45.-P. 1546-1554.

65. Fazio S., Babaev V.R., Murray A.B., Hasty A.H., Carter K.J., Gleaves L.A., Atkinson J.B., Linton M.F. Increased atherosclerosis in C57BL/6 mice reconstituted with apolipoprotein E null macrophages// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1997.-V.94.-P.4647-4652.

66. Francke U., Brown M.S., Goldstein J.L. Assigment of the human gene for the low density lipoprotein receptor to chromo-some 19: synteny of a receptor, a ligand, and genetic disease// Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1984.-V.81.- P.2826-2830.

67. Fidge N.H. High density lipoprotein receptors, binding proteins, and ligands// J. Lipid. Res.-1999.-V.40.-P. 187-201.

68. Fong B.S., Grego A.V., Angel A. Hypothyroidism reduces HDL binding to rat liver cells// Atherosclerosis.-1989.-V.79.-N.l. -P. 1-8.

69. Fung W-P.,Howlett G.,Schreiber G. Structure and expression of the rat apolipoprotein E gene// J.Biol.Chem.-1986.-V.-261.-P.13777-13783.

70. Furlaneto C.J., Ribeiro F.P., Hatanaka E., Souza G.M., Cassatella M.A., Campa A. Apolipoproteins A-I and A-II downregulate neutrophil functions//Lipids.-2002.-V.37(9).-P.925-928.

71. Georghiou S., Thompson M., Mukhopadhyay A.K. Melittin-phospholipid interaction: evidence for melittin aggregation// Biochim. Biophys. Acta.- 1981.-V.642(2).-P.429-32.

72. Ginsberg H.N. Lipoprotein physiology// Endocrinol. Metab. Clin. North. Am.-1998.-V.27(3).-P503-519.

73. Glass C.K., Pittman R.C., Civen M., Steinberg D. Uptake of high-density lipoprotein-associated apoprotein A-I and cholesterol ester by 16 tissues of the rat in vivo and by adrenal cells and hepatocytes in vitro// J.Biol.Chem.- 1985.- V.260.-P.744-750.

74. Goldstein J.,Brown M. The low-density lipoprotein pahtway and its relation to atherosclerosis// Annu.Rev.Biochem.- 1977.- V.46.-P.897-930.

75. Gordon J.I., Smith D.P., Andy R., Alpers D.H. et. al. The primary translation product of rat intestinal apolipoprotein AI mRNA is an unusual preprotein// J.Biol.Chem.- 1982.-V.257.- N.2.- P.971-978.

76. Granot E, Eisenberg S. ApoE-3-specific metabolism of human plasma very low density lipoproteins in cultured J-774 macrophages// J. Lipid Res.-1990.-V.31(12).-P. :2133-2139.

77. Greenberg S.M., Rebeck G.W., Vonsattel J.P., Gomez-Isla T., Hyman B.T. Apolipoprotein E epsilon 4 and cerebral hemorrhage associated with amyloid angiopathy// Ann Neurol.-1995.-V.38(2).-P.254-259.

78. Hamilton R., Wong J., Guo L., Krisans S., Havel R. Apolipoprotein E localization in rat hepatocytes by immunogold labeling of cryothinsections // J.Lipid Res.- 1990.- V.31.-P.1589-1603.

79. Hampton RY. Proteolysis and sterol regulation// Annu. Rev. Cell Dev. Biol.-2002.-V.18.-P.345-378.

80. Han J., Mathison J.C., Ulevitch R.J. and Tobias P.S. Lipopolyaccharide (LPS) binding protein, truncated at lie-197, binds LPS but does not transfer LPS to CD 14// J. Biol. Chem.- 1994. -V.269.-P.8172-8175.

81. Handwerger S., Myers S., Richards R. et al. Apolipoprotein A-I stimulates placental lactogen expression by human trophoblast cells // J. Endocrinol. 1995. - Vol.136. - (12). - P.5555 - 5560.

82. Hatch F.T., Less R.S. Practical method for plasma lipoprotein analysis //Adv. Lipid Res.-1968.-V.6.-P.2-68.

83. Hayashi M., Abe-Dohmae S., Okazaki M., Ueda K., Yokoyama S. Heterogeneity of high density lipoprotein generated by ABCA1 and ABCA7 // J. Lipid Res.-2005.-V.46.-P. 1703-1711.

84. Herbert P.N., Shulman R.S., Levy R.I., Fredrickson D.S. Fractionation of the C-apoproteins from human plasma very low density lipoproteins// J. Biol Chem.- 1973 .-V.248(14).-P.4941-4946.

85. Ho Y.Y., Deckelbaum R.J., Chen Y. et al. Apolipoprotein E inhibits serum-stimulated cell proliferation and enhances serum-independent cell proliferation// J. Biol. Chem. 2001. - Vol.276. - № 46. - P.43455 - 43462.

86. Huí D., Harmony J., Innerarity T., Mahley R. Immunoregulatory plasma lipoproteins. Role of apoprotein E and apoprotein B// J.Biol.Chem.-1980.- V.225.- P.l 1775-11781.

87. Hui D.,Innerarity T.,Maley R. Lipoprotein binding to canine hepatocyte membranes. Metabolically distinct apo E and apo-B,E receptors// J. Biol. Chem.-1981.- V.256.- P.-5646-5655.

88. Hussain M., Zanni E., Kelly M., Zannis V.O. Synthesis, modification, and flotation properties of rat hepatocyte apolipoproteins// Biochim. et biophys. acta. 1989.- V.1001.- P.90.

89. Jain R.S., Quarfordt S.H. The carbohydrate content of apolipoprotein E from human very low density lipoproteins// Life Sci.-1979.-V.25(15).-P.1315-1323.

90. Jakel H., Nowak M., Helleboid-Chapman A., Fruchart-Najib J., Fruchart J.C. Is apolipoprotein A5 a novel regulator of triglyceride-rich lipoproteins?// Ann. Med.-2006.-V.38.-№l.-P.2-10.

91. Johnson W.J., Mahlberg F.H., Rothblat G.H., Phillips M.C. Cholesterol transport between cells and high-density lipoproteins// Biochim. Biophys. Acta.-1991.-V.85.-P.273-298.

92. Jonas A.,Steinmetz A.,Churgay L. The number of amphipathic alpha-helical segments of apolipoprotein-A-I, apolipoprotein-E, and apolipoprotein

93. A-IV determines the size and functional properties of their reconstituted lipoprotein particles// J.Biol.Chem.-1993.-V.268. P.1596-1602.

94. Kashyap M.L., Barnhart R.L., Srivastava L.S., Perisutti G et al. Effects on dietary carbohydrate and fat on plasma lipoproteins and apolipoprotein C-II and C-III in healthy men// J. Lipid Res.- 1982.- V.23.-N.6.- P.877-886

95. Kawano K., Qin S., Vieu C., Collet X., Jiang X.C. Role of hepatic lipase and scavenger receptor BI in clearing phospholipid/free cholesterol-rich lipoproteins in PLTP-deficient mice// Biochim. Biophys. Acta.-2002.-V.1583.-P.133-140.

96. Kayden H.,Maschio F., Trabar M. The secretion of apoprotein E by human monocyte-derived macrophages// Arch.Biochem.Biophys.- 1985.-V.239.- P.388-395.

97. Kim M., Nakayama R., Manos P.,Tomlinson J., Choi E., Ny J., Hotlen D. Regulation of apolipoprotein E synthesis andmRNA by diet and hormones//J. Lipid Res.-1989.- V.30.-N.5.-P.663-671.

98. Kiss R.S., McManus D.C., Franklin V., Tan W.L., McKenzie A., Chimini G., Marcel Y.L. The lipidation by hepatocytes of human apolipoprotein A-I occurs by both ABCA1 -dependent and -independent pathways// J. Biol. Chem.-2003.-V.278.-P. 10119-10127.

99. Kiss R.S., Marie J., Marcel Y.L. Lipid efflux in human and mouse macrophagic cells: evidence for differential regulation of phospholipid and cholesterol efflux//J. Lipid Res.-2005.-V.46.-P. 1877-1887.

100. Kujiraoka T., Nanjee M.N., Oka T., Ito M., Nagano M., Cooke C.J., Takahashi S., Olszewski W.L., Wong J.S., Stepanova I.P., Hamilton R.L.,

101. Egashira T., Hattori H., Miller N.E. Effects of intravenous apolipoprotein A-I/phosphatidylcholine discs on LCAT, PLTP, and CETP in plasma and peripheral lymph in humans// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.-2003.-V.23.-P.1653-1659.

102. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4// Nature. -1970.- V.227.-P.680-685.

103. Lee J.Y., Parks J.S. ATP-binding cassette transporter AI and its role in HDL formation// Curr. Opin. Lipidol.-2005.-V.16(l).-P. 19-25.

104. Leszczynski D.E., Schafer R.M. Metabolic conversion of six steroid hormones by human plasma high-density lipoprotein// Biochim. Biophys. Acta.-1991 .-V. 1083(1 ).-P. 18-28.

105. Lewis C.E., Leek R., Harris A., McGee J.O. Cytokine regulation of angiogenesis in breast cancer: the role of tumor-associated macrophages// J. Leukoc. Biol.-1995.-V.57(5).-P.747-751. Review.

106. Lichtor T. Gene expression of apolipoprotein E in human brain tumors// Neurosci. Lett.-1992.-V. 13 8(2).-P.287-290.

107. Lin C.Y., Duan H.W., Mazzone T. Apolipoprotein E-dependent cholesterol efflux from macrophages: kinetic study and divergent mechanisms for endogenous versus exogenous apolipoprotein E// J. Lipid Research.-1999.- V.40.-P. 1618-1626.

108. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent// J. Biol. Chem. -1951. Vol.193. - P.265 - 275.

109. Mahley R.,Angelin B. Type III hyperlipoproteinemia: recent insights into the genetic defect of familial disbetalipoproteinemia// Adv.Intern.Med.-1984.-V.29.-P.385-411.

110. Mahley R.W., Innerarity T.L., Rail S.C., Weisgraber K.H. Plasma lipoprotein: apolipoprotein structure and function// J. Lipid Res.- 1984.-V.25.- N.12.- P. 1277-1294.

111. Major C.D., Wolf B.A. Interleukin-lbeta stimulation of c-Jun NH(2)-terminal kinase activity in insulin-secreting cells: evidence for cytoplasmic restriction// Diabetes.- 2001.-V.50(12).-P.2721-8.

112. Mao S.J.T., Miller J.P., Gotto A.M., Sparrow J.T. The antigenic structure of apolipoprotein A-I in human high density lipoproteins. Radioimmynoassay using surface specific antibodies// J. Biol. Chem.-1980.- V.255.- N.8.- P.3448-3453.

113. Marcel Y.L., Jewer D., Vesina C., Milthorp P. et al. Expression of human apo A-I epitopes in high density lipoprotein and in serum// J.Lipid Res.- 1987.- V.28.- N.7.- P.768-777.

114. Mariash C., Oppenheimer J. Stimulation of malic enzyme formation in hepatocyte culture by metabolites// Metab. Clin. Exp.- 1983.-V.33.- P.545-552.

115. Matsumoto A.,Aburatani H.,Shibasaki Y.,Kodama T.,Takaku F., Itakura H. Cloning and regulation of rat apolipoprotein B mRNA// Biochem.Biophys.Res.Commun.-1987,-V. 142.-P.92-99.

116. Maziere C.,Maziere J.-C., Salmon S., Auclair M., Mora J., Moreau M., Polonovski J. Cyclic AMP decreases LDL catabolism and cholesterol synthesis in the human hepatoma cell line HepG2// Biochem.Biophys.Res.Communs.- 1988,- V.156.-P.424-431.

117. Mazzone, T. Apolipoprotein E secretion by macrophages: its potential physiological functions// Curr. Opin. Lipidol.-1996.-V.7.-P.303-307.

118. Mc Conathy W.J., Alaupovic P. Studies on the isolation and partial characterization of apolipoprotein D and lipoprotein D of human plasma// Biochemistry.-1976.-V. 15(3).-P.515-520.

119. Metzger S., Leff T., Breslow J. Nuclear factors AF-1 and C/EBP bind to the human apoB gene promoter and modulate its transcriptional activity in hepatic cells// J. Biol. Chem.- 1990.-V.265.-P.9978-9983.

120. Meng Q.H., Calabresi L., Fruchart J.C., Marcel Y.L. Apolipoprotein AI domains involved in the activation of lecithin:cholesterol acyltransferase. Importance of the central domain// J. Biol. Chem.- 1993-V.268(23).-P. 1696616973.

121. Moore Z.W., Hui D.Y. Apolipoprotein E inhibition of vascular hyperplasia and neointima formation requires inducible nitric oxide synthase // J. Lipid Res. 2005. - Vol.46. - № 10. - P.2083 - 2090.

122. Morin O., Normand C. Long-term maintenance of hepatocyte functional activity in co-culture: requirements for sinusoidal endothelial cells and dexamethasone// J. Cell Physiol.-1986.-V.129(l).-P.103-110.

123. Mouchel Y, Lefrancois T, Fages C, Tardy M. Apolipoprotein E gene expression in astrocytes: developmental pattern and regulation// Neuroreport.-1995.-V.7(l).-P.205-208.

124. Nathan B.P., Chang K.C., Bellosta S., Brisch E., Ge N., Mahley R.W., Pitas R.E. The inhibitory effect of apolipoprotein E4 on neurite outgrowth is associated with microtubule depolymerization// J. Biol. Chem.-1995.-V.270(34).-P. 19791 -19799.

125. Niemi M., Hakkinen T., Karttunen T.J. et al. Apolipoprotein E and colon cancer. Expression in normal and malignat human intestine and effect on cultured human colonic adenocarcinoma cells// Eur. J. Intern. Med. 2002. - Vol.13. -№ 1.-P.37-43.

126. Nofer J.R., Remaley A.T., Feuerborn R., Wolinnska I., Engel T., von Eckardstein A., Assmann G. Apolipoprotein A-I activates Cdc42 signaling through the ABCA1 transporter// J. Lipid Res.-2006.-V.47.-P.794-803.

127. Nolte R.T., Atkinson D. Conformational analysis of apolipoprotein A-I and E-3 based on primary sequence and circular dichroism// Biophys. J.-1992.-V.63(5).-P. 1221 -39.

128. Oram J.F. Molecular basis of cholesterol homeostasis: lessons from Tangier disease and ABCA1// Trends Mol Med.-2002.-V.8.-P.168-173.

129. Panin L.E., Tuzikov F.V., Tuzikova N.A., Polyakov L.M. Application of the small-angle X-ray scattering technic for estimating structural changes in high density lipoproteins// Memb. and Cell Biol.-1996.-V.10.-N.l.-P.75-82.

130. Panin L.E., Tuzikov F.V., Gimautdinova O.I. Tetrahydrocortisol -apolipoprotein A-I complex specifically interacts with eucaryotic DNA and GCC elements of genes//J. Steroid Biochem. Molecular Biol.-2003. -N.87.-P.-09-318.

131. Panin L. E. Molecular mechanisms of interaction of THC-apoA-I complex with DNA and initiation of transcription// Progress in DNA Research. Nova Science Publishers Inc. N.Y.-2005.-P.1-38.

132. Pedram A, Razandi M, Aitkenhead M, Hughes CC, Levin ER.Integration of the non-genomic and genomic actions of estrogen. Membrane-initiated signaling by steroid to transcription and cell biology// J. Biol. Chem. 2002.-V.277(52).-P.50768-50775.

133. Pepe M.G., Curtiss L.K. Apolipoprotein E is a biologically active constituent of the normal immunoregulatory lipoprotein, LDL-In// J. Immunol.- 1986.-Vol.l36.-№ 10.-P.3716-3723.

134. Phillips M.C., Johnson W.J., Rothblat G.H. Mechanisms and consequences of cellular cholesterol exchange and transfer// Biochim. Biophys. Acta.-1987.-V.24.-P.223-276.

135. Pietras R.J, Szego C.M. Specific binding sites for oestrogen at the outer surfaces of isolated endometrial cells//Nature.- 1977/-V.265(5589).-P.69-72.

136. Pitas R.E., Boyles J.K., Lee S.H., Fossamol D., Mahley R.W. Astrocytes synthetize apolipoprotein E and metabolize apolipoprotein E-containing lipoproteins// Biochim. Biophys. Acta. -1987.- V.917.- P.178-161.

137. Pitas R.E.,Weisgraber K.H.,Boyles J.K.,Lee S.H.,Mahley R.W. Characterization of lipoproteins in human and canine cerebrospinal fluid// Fed.Proc.-1986.-V.45.-P.587.

138. Qui Z., Hyman B.T., Rebeck G.W. Apolipoprotein E receptors mediate neurite outgrowth through activation of p44/42 mitogen-activated protein kinase in primary neurons// J. Biol. Chem. 2004. - Vol.279. - № 33. -P.34948 - 34956.

139. Rajan V.P., Menon K.M. Metabolism of high-density lipoproteins in cultured rat luteal cells// Biochim. Biophys. Acta.-1987.-V.921(l).-P.25-37.

140. Rail S.C., Weisgraber K.H., Mahley R.W. Human apolipoprotein E. The complete aminoacid sequence// J. Biol. Chem.- 1982.-V.257.-P.4171-4178.

141. Reardon C.Q.,Lan Y.F.,Paik Y.K.,Weisgraber K.H., Mahley R., Taylar J.W. expression of the human apolipoprotein E genein cultured mammalian cells//J. Biol. Chem.- 1988.- V.261.-P.9858- 9864.

142. Rensen P.C., van Dijk M.C., Havenaar E.C., Bijsterbosch M.K., Kruijt J.K., van Berkel T.J. Selective liver targeting of antivirals by recombinant chylomicrons~a new therapeutic approach to hepatitis B// Nat. Med.-1995.-V.l(3).-P.221-225.

143. Roberts I.S. The biochemistry and genetics of capsular polysaccharide production in bacteria//Annu. Rev. Microbiol.- 1996. -V.50.-P.285-315.

144. Roheim P.S., Carey M., Forte T., Vega G.L. Apolipoproteinin human cerebrospinal fluid// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1979.- V.76.- N.9.- P.4646-4649.

145. Rothblat G.H., de la Llera-Moya M., Atger V., Kellner-Weibel G., Williams D.L., Phillips M.C. Cell cholesterol efflux: integration of old and new observations provides new insights// J. Lipid. Res.-1999.-V.40.-P.781-796.

146. Rudling M.J., Collins P.V.,Peterson C. Delivery of alcalinomycin A to human glioma cells in vitro by the low-density lipoprotein pathway// Cancer Res.- 1983.- V.43.- P.4600-4605.

147. Schmitz G., Langmann T., Heimerl S. Role of ABCG1 and other ABCG family members in lipid metabolism// J. Lipid. Res.-2001.-V.42.-P.1513-1520.

148. Segal B.M. Glass D.D., Shevach E.M. Cutting Edge: IL-10-producing CD4+ T cells mediate tumor rejection// J. Immunol.- 2002.-V.168(l).-P.l-4.

149. Seglen, P. Preparation of isolated rat liver cells// Meth.Cell Biol. -1976. -Vol.13-P.29 -83.

150. Senault C., Mahlberg F.H., Renaud G., Girard-Globa A., Chacko G.K. Effect of apoprotein cross-linking on the metabolism of human HDL3 in rat// Biochim.Biophys.Acta.- 1990.- V.1046.- P.81-88.

151. Smit J.J., Schinkel A.H., Mol C.A., Majoor D., Mooi W.J., Jongsma A.P., Lincke C.R., Borst P. Tissue distribution of the human MDR3 P-glycoprotein// Lab. Invest.-1994,-V.71.-P.638-649.

152. Somers S.D., Whisnant C.C., Adams D.O. Quantification of the strength of cell-cell adhesion: the capture of tumor cells by activated murine macrophages proceeds through two distinct stages// J. Immunol.-1986.-V. 136(4).-P. 1490-1496.

153. Swaney J.B., Braithwaite F., Eder H.A. Characterization of the apolipoproteins of rat plasma lipoproteins// Biochemistry.- 1977.- V.16.-P.271-278.

154. Swift L.L., Farkas M.H., Major A.S., Valyi-Nagy K., Linton M.F., Fazio S. A recycling pathway for resecretion of internalized apolipoprotein

155. E in liver cells// J. Biol. Chem.- 2001.-V.276.-P.22965-22970.

156. Taipale J., Beachy P.A. The Hedgehog and Wnt signalling pathways incancer// Nature. 2001. - Vol.411. - № 6835. - P.349 - 354.

157. Tarugi P., Reggiani D., Ottaviani E., Ferrari S., Tiozzo R., Calandra S. Plasma lipoproteins, tissue cholesterol overload, and skeletal muscle apolipoprotein A-I synthesis in the developing chick// J. Lipid. Res.-1989.-V.30(l).-P.9-22.

158. Tovar A.R., Torre-Villalvazo I., Ochoa M., Elias A.L., Ortiz V., Aguilar-Salinas C.A., Torres N. Soy protein reduces hepatic lipotoxicity in hyperinsulinemic obese Zucker fa/fa rats// J. Lipid Res.-2005.-V.46(9).-P.1823-1832.

159. Uterman G.,Steinmetz Q.,Weber W. Genetic control of human apolipoprotein E polymorphism: comparison of one- and two-dimensional techniques of isoprotein analysis// Human genetics.-1982.-V.60.- P.344-351.

160. Van t Hooft F.M., Dallinga-Thie G.M., Van Tol A. Leupeptinas a tool the detection of the sites of catabolism of rat highdensity lipoproteinapolipoprotein A-I and E// Biochim. Biophys. Acta.- 1985.- V.834.- N.I.-P.75-84.

161. Van't Hooft F.M., Van Tol A. The sites of degradation of rat high-density lipoprotein apolipoprotein E specifically labeled with 0-4-diazo-3 [ 125-I.iodobenzoil sucrose// Biochem.J.- 1985.- V.226.- P.715-721.

162. Van Tol A., Dallinga-Thie G.M., Van Gent T., Van't Hooft F. Specific saturable binding of rat high-density lipoproteins to rat kidney membranes// Biochim.Biophys.Acta,- 1986.- V.876.- P.340-351.

163. Vogel T., Guo N.H., Guy R. et al Apolipoprotein E: a potent inhibitor of endothelial and tumor cell proliferatin // J. Cell. Biochem. 1994. -Vol.54.-№3.-P.299-305.

164. Wang J., Kitagawa K., Kitado H., Kogishi K., Matsushita T., Hosokawa M., Higuchi K. Regulation of the metabolism of plasma lipoproteins by apolipoprotein A-II// Biochim. Biophys. Acta.-1997.-V. 1345(3).-P.248-258.

165. Wang N., Chen W., Linsel-Nitschke P., Martinez L.O., Agerholm-Larsen B., Silver D.L., Tall A.R. A PEST sequence in ABCA1 regulates degradation by calpain protease and stabilization of ABCA1 by apoA-I// J. Clin. Invest.-2003 .-V. 111 .-P.99-107.

166. Wech P.K., Milne R.W., Milthorp P., Marcel Y. Apolipoprotein A -I from normal human plasma: definition of three distinct antigenic determinants //Biochim.Biophys.Acta.- 1985.-V.835.-N.2.- P.390-401.

167. Weisgraber K.H., Innerarity T.L., Rail S.C., Mahley R.W. Receptor interactions controlling lipoprotein metabolism// Can. J.Biochem. Cell Biol.- 1985.- V.63.- P.898-905.

168. Wernette-Hammmond M.E., Lawer S.J., Corsini A., Walker D., Taylor J.M., Rail S.C. Glycosilation of human apolipoprotein E. The carbohydrate attachment site is threonine 194// J. Biol. Chem.- 1987.- V.264.- P.9094-9101.

169. Williams D., Dawson P., Newman T., Rudel R. Synthesis of apolipoprotein E by peripheral tissues// Ann.N.-Y.Acad.Sci.-1985. V.454.-P.222-229.

170. Yamamoto T., Takahpshi S., Moriwaki Y., Hada T., Higashino K. A newly discovered apolipoprotein B-containing high-density lipoprotein produced bu human hepatoma cells// Biochim. Biophys. Acta.- 1987.-V.922,-P.177-183.

171. Zannis V.I., Just P., Breslow J.L. Human apolipoprotein E isoprotein subclasses are genetically determined// Am.J.Hum.Genet.-1981 .-V.33.-P. 11 -24.

172. Zerbinatti C.V., Mayer L.P., Audet R.G., Dyer C.A. Apolipoprotein E is a putative autocrine regulator of the rat ovarian theca cell compartment// Biol. Reprod. 200l.-V.64(4).-P. 1080-1089

173. Zhao Y., Mazzone T. Transport and processing of endogenously synthesized ApoE on the macrophage cell surface// J. Biol. Chem.- 2000,-V.275.-P.4759-4765.

174. Zheng H, Kiss RS, Franklin V, Wang MD, Haidar B, Marcel YL. ApoA-I lipidation in primary mouse hepatocytes. Separate controls for phospholipid and cholesterol transfers// J. Biol. Chem.-2005.-V.280(22).-P.21612-21621.

175. Zuckerman S.H., Oneal L. Endotoxin and G-M-CSF-mediated down-regulation of macrophage apo E secretion is inhibited by a TNF-specific monoclonal antibody//J.Leukocyte Biology.-1994.-V.55.-P.743-748.