Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Участие липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I в механизмах внутриклеточной регуляции и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия
Автореферат диссертации по теме "Участие липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I в механизмах внутриклеточной регуляции и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки"
На правахрукописи
СУМЕНКОВА ДИНА ВАЛЕРЬЕВНА
УЧАСТИЕ ЛИПОПРОТЕИНОВ высокой плотности и АПОЛИПОПРОТЕИНА А-1В МЕХАНИЗМАХ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ РЕГУЛЯЦИИ И НАПРАВЛЕННОМ ТРАНСПОРТЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В КЛЕТКИ
03.01.04 - биохимия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
- 9 ДЕК 2010
Новосибирск - 2010
004616251
Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН, г. Новосибирск
Научные консультанты:
академик РАМН Панин Лев Евгеньевич
доктор медицинских наук, профессор Поляков Лев Михайлович
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Селятицкая Вера Георгиевна
доктор медицинских наук,
профессор Цырендоржиев Дондок Дамдинович
доктор медицинских наук,
профессор Кузьменко Дмитрий Иванович
Ведущая организация:
Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики СО РАМН
Защита состоится декабря 2010 года в 10 часов на заседании
диссертационного совета Д 001.034.01 в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН по адресу: 630117, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2 Тел.: (383) 333 54 81; факс: (383) 333 67 58
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН
Автореферат разослан 20 ноября 2010 г.
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук
Русских Г.С.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Липопротеины плазмы крови в функциональном отношении представляют собой, как известно, транспортную систему для биологически активных веществ различной химической природы. Кроме липидов липопротеины могут связывать и транспортировать, в том числе и через цитоплазматическую мембрану, жирорастворимые витамины [Glevidence В.А., Bieri J.G., 1993; Панин JI.E. и др., 1997; Balazs Z. et al., 2004], стероидные соединения [Панин JI.E. и др., 1988; Meng Q.H. et al., 1999; Khalil A. et al., 2000], тиреоидные гормоны [Benvenga S. et al., 1991; Поляков Л.М., 1998], ксенобиотики [Поляков JI.M. и др., 1992; Woofter R.T., Ramsdell J.S., 2007], включая лекарственные препараты [Lou В. et al., 2005; Lacko A.G. et al., 2007; Feng M. et al., 2008] и эндотоксин [Ulevitch R. J. et al., 1981; Massamiri T. et al., 1997].
Главную роль при взаимодействии биологически активных веществ с липопротеинами играют белковые компоненты - аполипопротеины, а клеточный захват их осуществляется посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Многолетние научные исследования сотрудников НИИ биохимии СО РАМН и данные литературы позволяют сделать вывод о преимущественном участии липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) и их основного белкового компонента - аполипопротеина A-I (апоА-1), - в связывании и транспорте биологически активных соединений. Так, именно ЛПВП с высоким сродством связывают стероидные гормоны и ксенобиотики, играя роль их активной транспортной формы в организме [Панин Л.Е. и др., 1992; Поляков Л.М. и др., 1992]. Показана способность ЛПВП осуществлять транспорт противоопухолевых лекарственных препаратов [Kader A., Pater А., 2002]. В серии работ изучена способность апоА-I транспортировать малые интерферирующие РНК против вируса гепатита С в гепатоциты через SR-Bl-рецепторный путь [Kim S.I. et al., 2009; Lee H. et al., 2009]. Отмечено участие апоА-I в переносе олигонуклеотидов через гемато-энцефалический барьер [Kratzer I. et al., 2007].
Следует отметить, что проблема направленного транспорта является одной из центральных в современной медицинской биотехнологии. Химическая природа липо(апо)протеинов, способность их проникать в клетки обусловливают преимущества данных соединений как высокоэффективных природных переносчиков. Использование липо(апо)протеинов в качестве транспортной формы лекарственных препаратов и генетического материала может повысить эффективность лечения ряда заболеваний.
Роль липопротеинов плазмы крови не ограничивается выполнением транспортной функции. Известно, что липопротеины и их белковые компоненты участвуют в регуляции многих метаболических процессов. Так, ЛПВП и апоА-I осуществляют регуляцию обмена холестерина в клетках при участии мембранных белков АВСА1 и SR-BI [Zannis V.l. et al., 2006]. Липопротеины разных классов оказывают влияние на функцию эндокринной системы, в частности, принимают участие в регуляции стероидогенеза [Панин Л.Е., Поляков Л.М., 1979; Temel R.E. et al., 1997; Travert С. et al., 2000], синтеза тироксина [Бернштейн Л.М. и др., 1982] и инсулина [Панин Л.Е. и др., 1994]. Описано влияние липо(апо)протеинов на структурно-функциональные свойства митохондрий [Панин Л.Е. и др., 1991]. Показана роль липопротеинов и их белковых компонентов в регуляции углеводного обмена [Третьякова Т.А., Поляков Л.М., 1979; Панин Л.Е. и др., 1990].
Обнаружен лизосомотропный эффект ЛПВП и их белкового компонента [Панин Л.Е., 1987], отмечены антимикробные [Agawa Y. et al., 1991; Tada N. et al., 1993] и противовирусные свойства апоА-I [Srinivas R.V. et al., 1990; Owens B.J. et al., 1990; Панин Л.Е. и др., 2003]. Известно кардиопротекторное, антиоксидантное и противовоспалительное действие ЛПВП, апоА-I и их синтетических миметиков [Ma J. et al., 2004; Gupta Н. et al., 2005; Navab M. et al., 2007; Gomaraschi M. et al., 2008]. В то же время ЛПВП в силу сложности своего строения и состава могут оказывать прооксидантный и провоспалительный эффекты [Van Lenten B.J. et al., 2001].
Имеются данные о способности ЛПВП усиливать пролиферацию опухолевых клеток [Rotheneder М. et al., 1989; Favre G. et al., 1993]. Напротив, липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и их основной белковый компонент аполипопротеин Е (апоЕ) ингибируют деление клеток, включая опухолевые [Vogel Т. et al., 1994; Рака L. et al., 1999; Moore Z.W. et al., 2005].
Особый интерес для изучения механизмов регуляции внутриклеточного метаболизма представляет взаимодействие липопротеинов и гормонов. Отмечено, что стимулирующий эффект эстрадиола на клеточный рост карциномы грудной железы проявляется только в присутствии ЛПВП [Jozan S. et al., 1985]. Показан кооперативный эффект в действии гидрокортизона, адреналина и ЛПВП, в основе которого лежит лизосомозависимая активация хроматина, приводящая к индукции синтеза РНК и белка в переживающих срезах печени крыс [Панин Л.Е., 1990].
Исследования, проведенные сотрудниками НИИ биохимии СО РАМН под руководством академика РАМН Л.Е.Панина, позволяют утверждать, что липо(апо)протеины играют важную роль в структурно-функциональной
организации хроматина эукариот, поддерживая его транскрипционную активность. В частности, в ядрах клеток различных тканей крыс была обнаружена апоА-1-иммунореактивность. Наиболее высокой она оказалась в транскрипционно активном хроматине и ядерном матриксе [Панин Л.Е.и др., 1992, 2000]. В серии работ института на различных моделях была показана способность ЛПВП и апоА-1 в комплексе со стероидными гормонами усиливать процессы биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в клетках различных тканей организма [Панин Л.Е. и др., 1987, 2001-2003, 2007]. Механизм этого явления связан с образованием биологически активного комплекса апоА-1-стероидный гормон при участии макрофагов и его специфическим взаимодействием с ДНК с последующей инициацией транскрипции генов [Панин Л.Е., 1998; Гимаутдинова О.И. и др., 2002; Панин Л.Е. и др., 2002, 2006, 2008]. Предполагается, что данный механизм лежит в основе регуляции процессов пролиферации [Панин Л.Е., 2002].
Участие липо(апо)протеинов в регуляции генетического аппарата клетки подтверждают и данные других авторов. Так, на эндотелиальных клетках показана способность ЛПВП ингибировать экспрессию факторов адгезии [Ashby D.T. et al., 1998; Kontush A. et al., 2003; Gomaraschi M. et al., 2008], сфингозинкиназы [Xia P. et al., 1999], ядерного фактора NF-кВ [Park S.H.et al., 2003] и, наоборот, стимулировать экспрессию циклооксигеназы, трансформирующего фактора роста [Norata G.D. et al., 2004, 2005]. В опухолевых клетках ЛПВП повышали скорость образования мРНК апоА-1 [Monge J.C. et al., 1989]. АпоА-1 и его синтетический пептид стимулировали экспрессию плацентарного лакгогена в культуре трофобластов человека [Handwerger S., et al., 1995].
Несмотря на представленные в литературе результаты исследований по изучению транспортной и регуляторной роли липо(апо)протеинов плазмы крови, многие вопросы в этой области остаются открытыми. В частности, окончательно невыяснены механизмы регуляции метаболических процессов с участием липо(апо)протеинов. Недостаточно работ по изучению возможности использования липо(апо)протеинов в качестве транспортной формы лекарственных препаратов для повышении эффективности лечения ряда заболеваний. Отсутствуют данные о способности липо(апо)протеинов осуществлять направленный транспорт генетического материала в ядра клеток для коррекции функции поврежденных генов.
Цель исследования: изучить роль липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I в механизмах регуляции внутриклеточного метаболизма и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки эукариот.
Задачи исследования:
1. Изучить процессы комплексообразования липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I с биологически активными веществами различной природы: стероидными гормонами, полисахаридами, лекарственными препаратами и исследовать способность аполипопротеина A-I осуществлять направленный транспорт биологически активных веществ в клетки эукариот.
2. Выяснить роль липопротеинов высокой плотности в комплексе со стероидными гормонами в регуляции процессов биосинтеза белка в опухолевых клетках.
3. Изучить роль аполипопротеина A-I в комплексе со стероидными гормонами и аполипопротеина Е в регуляции биосинтетических процессов в клетке.
4. Выяснить влияние липопротеинов высокой плотности и их комплексов с полисахаридами на продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-ip.
5. Исследовать эффективность использования липопротеинов высокой плотности в качестве транспортной формы противоопухолевого лекарственного препарата рубомицина.
6. Изучить возможность использования аполипопротеина A-I в качестве транспортной формы противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида.
7. Оценить возможность использования аполипопротеина A-I в качестве транспортной формы генетического материала в ядра эукариотических клеток.
Научная новизна работы. На изолированных гепатоцитах крыс методами флуоресцентной микроскопии и спектрофлуориметрии показан рецептор-опосредованный эндоцитоз апоА-I с последующей транслокацией белка в ядерный аппарат клетки. Показана способность апоА-I повышать эффективность внутриклеточного транспорта биологически активных веществ различной природы.
Впервые показано взаимодействие апоА-I с генетическим материалом с использованием в качестве модели эукариотического вектора с встроенным геном флуоресцирующего белка GFP. В опытах in vitro и in vivo методами
флуоресцентной микроскопии и спектрофлуориметрии показана способность апоА-I осуществлять транспорт генетического материала в ядра клеток (гепатоциты) с последующей экспрессией транспортируемого гена и синтезом флуоресцирующего бежа в цитоплазме.
В работе обнаружена способность липопротеинов плазмы крови связывать и транспортировать свободные нуклеиновые кислоты. Показано относительное содержание внеклеточной ДНК в составе различных фракций липопротеинов. Наибольшее содержание внеклеточной ДНК отмечено в составе ЛПВП.
На модели асцитной карциномы Эрлиха показано участие ЛПВП и стероидных гормонов (кортизол, прогестерон) в механизме опухолевого роста, которое заключается в усилении скорости биосинтеза белка. В сокультуре опухолевых клеток подтвержден открытый ранее в НИИ биохимии СО РАМН механизм регуляции процессов пролиферации и клеточного роста, в котором важную роль играют макрофаги.
Показано участие макрофагов в метаболической деградации ЛПВП. Обнаружено, что опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженной способностью к поглощению и метаболической деградации белкового компонента ЛПВП. Отмечено стимулирующее влияние стероидных гормонов на поглощение ЛПВП макрофагами, более выраженное для опухоль-ассоциированных клеток.
Впервые на культуре гепатоцитов крыс выявлена биологическая активность комплексов апоА-I с женскими половыми гормонами. Показано повышение скорости синтеза белка под влиянием эстриола и эстрадиола, которое значительно усиливалось в присутствии апоА-I. Отмечено, что комплекс апоА-I с эстроном также усиливал синтез белка, в то время как свободный гормон не обладал индуцирующим влиянием. Впервые показана способность комплекса апоА-I с прегненолоном повышать скорость биосинтеза ДНК и белка в культуре гепатоцитов.
Обнаружена активация гликолигаческого звена углеводного обмена в изолированных гепатоцитах крыс под влиянием комплекса апоА-I с тетрагидрокортизолом, биологическая активность которого в отношении процессов биосинтеза белка и нуклеиновых кислот была показана ранее в работах НИИ биохимии СО РАМН.
На культуре гепатоцитов, клеток асцитной НА-1 гепатомы и карциномы Эрлиха впервые установлена разнонаправленность эффектов ЛПВП/апоА-I в комплексе со стероидными гормонами и ЛПОНП/апоЕ в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот. Показана способность ЛПОНП и апоЕ снижать скорость биосинтеза белка и нуклеиновых кислот и
подавлять стимулирующий эффект биологически активных комплексов апоА-1 со стероидными гормонами.
Обнаружение разнонаправленное™ эффектов ЛПОНП/апоЕ и ЛПВП/апоА-1 раскрывает механизм регуляции опухолевого роста с участием макрофагов, который обусловлен способностью макрофагов, с одной стороны, поглощать ЛПВП и стероидные гормоны с образованием биологически активного комплекса, усиливающего биосинтез белка и нуклеиновых кислот, а с другой стороны, синтезировать и секретировать апоЕ, обладающий антипролиферативной активностью. Показано, что опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженным содержанием апоЕ.
Впервые методом флуоресцентной микроскопии показана возможность транспорта ЛПС в гепатоциты с использованием в качестве переносчика апоА-1. Результаты свидетельствуют о способности гепатоцитов участвовать в метаболической деградации эндотоксина при поглощении его в комплексе с ЛПВП и апоА-1. Путь нейтрализации ЛПС без участия макрофагов можно рассматривать как альтернативный, позволяющий снизить интенсивность воспалительного ответа. Показана способность ЛПВП ингибировать продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1Р перитонеальными макрофагами мышей.
На культуре клеток НА-1 гепатомы показана эффективность использования ЛПВП в качестве средства адресной доставки противоопухолевых лекарственных препаратов на примере рубомицина. На частицах ЛПВП обнаружены места связывания для препарата с различной степенью аффинитета. Показано повышение эффективности поглощения рубомицина опухолевыми клетками при использовании ЛПВП в качестве переносчика, обусловленное рецептор-опосредованным эндоцитозом. Отмечено увеличение цитотоксического эффекта препарата в комплексе с ЛПВП при снижении его терапевтических доз. Показана селективность воздействия препарата в комплексе с ЛПВП, более выраженная по отношению к опухолевым клеткам.
Впервые проведено исследование возможности использования апоА-1 в качестве лизосомотропного агента и средства внутриклеточной доставки противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида. Обнаружен высокий аффинитет изониазида к апоА-1. Показана способность апоА-1 повышать свободную активность ферментов лизосом на фоне антимикобактериальной терапии. Отмечен противовоспалительный эффект апоА-1.
Теоретическая и практическая значимость работы. Решение поставленных в диссертации задач является важным этапом в изучении транспортной и регуляторной роли липопротеинов плазмы крови и их белковых компонентов. Внесен важный вклад в понимание механизмов проникновения биологически активных веществ в клетку в составе липопротеиновых комплексов. Результаты исследования свидетельствуют о том, что транспортируемые липопротеинами соединения проникают в клетку посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Изучение роли липопротеинов в регуляции пролиферации и клеточного роста имеет важное теоретическое значение для понимания молекулярных механизмов межклеточных взаимодействий в норме и в условиях опухолевого роста и может служить основой для повышения эффективности лечения онкологических больных. Совокупность полученных фактов свидетельствует о перспективности использования ЛПВП и апоА-I в качестве транспортных форм для биологически активных веществ и лекарственных препаратов как в эксперименте, так и в клинике. Результаты работы показывают перспективность дальнейшего изучения использования апоА-I в качестве транспортной формы генетического материала при решении проблем генотерапии и генокоррекции.
Положения, выносимые на защиту:
1. ЛПВП в комплексе со стероидными гормонами усиливают процессы биосинтеза белка в опухолевых клетках при участии макрофагов. Опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженной способностью к поглощению и метаболической деградации белкового компонента ЛПВП. Стероидные гормоны оказывают стимулирующее влияние на поглощение и метаболическую деградацию ЛПВП.
2. Комплексы апоА-I со стероидными гормонами обладают высокой биологической активностью: усиливают процессы биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в изолированных гепатоцитах и повышают активность гликолитического звена углеводного обмена.
3. ЛПВПУапоА-1 в комплексе со стероидными гормонами и ЛПОНП/апоЕ характеризуются разнонаправленностью эффектов в регуляции процессов биосинтеза белка и нуклеиновых кислот.
4. ЛПВП и апоА-I являются эффективной формой для направленного транспорта в клетки различных лекарственных средств: цитостатиков, противотуберкулезных и гормональных препаратов.
5. АпоА-I проникает в ядерный аппарат гепатоцитов и может использоваться в качестве средства адресной доставки генетического материала с последующей экспрессией транспортируемого гена.
Апробация результатов исследования. Материалы диссертации докладывались на I Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (19-23 сентября 2005 г, Сочи), V конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (19-22 мая 2008 г, Москва), Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная онкология» (1-3 октября 2008 г, Новосибирск), Российской научно-практической конференции с международным участием «Современная онкология: достижения и перспективы развития» (10-11 сентября 2009 г, Томск), EASL Special Conference on NAFLD/NASH and Related Metabolic Disease (24-26 сентября 2009 г, Болонья, Италия), IV Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (27-29 октября 2009 г, Новосибирск) и были представлены на III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (7-9 ноября 2007 г, Новосибирск), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (11-15 мая 2008 г, Новосибирск), II Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (29-31 октября 2008 г, Кишинев, Молдова), 1st Annual World Congress of Regenerative Medicine & Stem Cell (2-4 декабря 2008 г, Гуанджой, Китай), Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (12-16 апреля 2010 г, Москва), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» (18-19 марта 2010 г, Новосибирск).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 27 научных работ, из них 12 статей в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 281 странице машинописного текста и структурированы по разделам: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение результатов исследований. Диссертация включает 66 рисунков и 21 таблицу. Список цитируемой литературы состоит из 510 источников, из них 422 на иностранном языке.
Автор выражает глубокую благодарность за консультативную помощь и поддержку на всех этапах выполнения работы академику РАМН Панину Льву Евгеньевичу и профессору Полякову Льву Михайловичу, а также всем коллегам, принимавшим участие в исследованиях.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В работе использовались здоровые лабораторные животные: половозрелые крысы-самцы Wistar массой 180-200 г, 3-х месячные мыши-самцы СВА и A/Sn массой 20-23 г (виварий СО РАМН, Новосибирск), а также животные с моделью опухолевого роста: мыши-самцы A/Sn с асцитной НА-1 гепатомой и мыши-самцы СВА с асцитной карциномой Эрлиха (Институт цитологии и генетики СО РАМН, Новосибирск). Содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (приложение к приказу Министерства высшего и среднего специального образования СССР № 742 от 13.11.1984).
Поставленные задачи исследования решались с использованием модельных систем in vitro (культура гепатоцитов и непаренхимных клеток печени крыс, асцитных опухолевых клеток, перитонеальных макрофагов здоровых мышей и опухоль-ассоциированных макрофагов мышей с моделью опухолевого роста) и in vivo (туберкулезное воспаление).
Выделение асцитных клеток проводили в лог-фазе опухолевого роста на 10 день после прививки опухоли. Монослойные культуры клеток выращивали по общепринятой технологии и в соответствии с рекомендациями, представленными в литературе [Уголев А.Т. и др., 1985; Фрешни Р., 1989].
Модель туберкулезного воспаления воспроизводили на мышах линии СВА путем однократного интраперитонеального введения 0,5 мг вакцины БЦЖ в 1 мл физиологического раствора [Шкурупий В.А., 2007]. Адекватность модели тестировали через 14 дней по морфологической оценке патологических изменений в паренхиматозных органах, характерных для туберкулезного воспаления.
Для изучения способности апоА-I осуществлять внутриклеточный транспорт генетического материала в качестве экспериментальной модели использовали эукариотический вектор pE-GAG со встроенным геном флуоресцирующего белка GFP Aequoria Victoria, синтезированный в лаборатории генной инженерии НИИ биохимии СО РАМН под руководством профессора А.Б.Беклемишева.
Основные методы, используемые в работе
1. Выделение липопротеинов плазмы крови методом изоплотностного ультрацентрифугирования [Hatch F.T., Lees R.S., 1968].
2. Выделение аполипопротеинов методом гель-фильтрации [Herbert P.N, et al., 1973].
3. Диск-электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия [Laemmli U.K., 1970].
4. Электрофорез в 1% геле агарозы [Остерман JI.A., 1981].
5. Иммуноэлектроблотгинг [Tovey Е., Baldo А., 1987; Lin R.C., 1986].
6. Денситометрическая обработка электрофореграмм и иммуноблоттов с помощью компьютерной программы TotalLab.
7. Выделение плазматических мембран [Невилл Д., 1979].
8. Выделение и культивирование клеток животных: перитонеальных макрофагов, асцитных опухолевых клеток и опухоль-ассоциированных макрофагов мышей [Хант С., 1990], гепатоцитов и непаренхимных клеток печени крыс [Seglen Р., 1976].
9. Выделение фракции лизосом из гомогената печени [De Duve Ch., 1963].
Ю.Определение содержания белка с использованием в качестве стандарта
бычьего сывороточного альбумина [Lowry О.Н. et al., 1951].
11.Оценка скорости биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре клеток по включению радиоактивной метки [Шаткин А., 1972].
12. Определение содержания лактата энзиматическим методом [Howell B.F., 1980].
13.Определение содержания ИЛ-ip методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческой тест-системы.
14.0пределение активности ферментов лизосом: катепсина D с использованием в качестве субстрата азоказеина [Wiederanders В., Oelke В., 1984], кислой фосфатазы с использованием в качестве субстрата p-глицерофосфата натрия [De Duve Ch. et al., 1955; Fiske C., Subbarow Y., 1925] и хитотриозидазы с использованием флуоресцентного субстрата 4-метилумбеллиферил-
триацетилхитотриозида [Czartoryska В. et al., 1998].
15.Определение внеклеточной ДНК методом спектрофлуориметрии с использованием флуоресцентного красителя Хёхст 33258 [Morozkin E.S.etal., 2003].
16.Оценка апоптоза методом спектрофлуориметрии и флуоресцентной микроскопии с использованием в качестве флуорофора Хёхст 33258 [Maciorowski Z. et al., 1998; Данченко Е.О., 2001].
17.Изучение взаимодействия липо(апо)протеинов с биологически активными веществами различной природы методом гель-фильтрации и методом тушения триптофановой флуоресценции с расчетом константы ассоциации и количества мест связывания [Attalah N.A., Lata G.F., 1968].
18.Флуорохромирование с использованием флуоресцеинизотиоцианата [HidakaH. et al., 1999].
19.Морфологические методы с использованием световой и электронной микроскопии.
20. Статистическая обработка результатов исследований методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Изучение транспорта аполипопротеина A-I в ядра клеток
Для доказательства участия апоА-I в механизмах внутриклеточной регуляции и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки эукариот нами был использован хроматографически очищенный белок (рис. 1), меченный флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ).
МгДА -
67 «Да _ 43 кДа _
30 кДа - .
14,4 кДа
Рис. 1. Электрофореграмма хроматографической очистки апоА-1, выделенного из суммарных белков ЛПВП. Диск-электрофорез в 12,5% ПААГ с
1 - белки-стандарты; 2 - суммарные белки ЛПВП; 3-9 - стадии очистки апоА-1.
Методом флуоресцентной микроскопии и спектрофлуориметрии показано связывание меченого апоА-I с рецепторным аппаратом цитоплазматических мембран изолированных гепатоцитов, а также его интернализация в цитоплазму и ядро. Исследования проводили в режиме флуоресцентного анализа на микроскопе Axiolmager Z1 «Zeiss» с использованием цифровой камеры AxioCam MRc и программного обеспечения AxioVision V. 4.5. Анализ спектров флуоресценции лизатов клеток проводили на спектрофлуориметре RF-5301 PC «Shimadzu».
Поглощение белка клетками зависело от времени инкубации и температурных условий. Выраженное накопление апоА-1-ФИТЦ в ядрах гепатоцитов наблюдалось уже через 30 минут инкубации при 37°С (рис. 2А). Через 1 - 2 ч интенсивность флуоресценции ядер снижалась, а цитоплазмы увеличивалась. Эти данные согласуются с полученными ранее результатами иммуноферментного анализа, которые показали присутствие апоА-I в транскрипционно активном хроматине, ядерном матриксе и фракции кислых негистоновых белков [Панин JI.E. и др., 1992, 2000].
А Б
Рис. 2. А. Накопление апоА-1-ФИТЦ в ядрах изолированных гепатоцитов крыс через 30 минут инкубации при 37°С (ув. х200). Б. Флуоресцентная микроскопия гепатоцитов крыс после инкубации с апоА-1-ФИТЦ при 4°С (ув. х200).
При 4°С взаимодействие рецептор-лиганд на поверхности клеточной мембраны ограничивается, как известно, связыванием без последующей интернализации. Инкубация гепатоцитов при 4°С в течение 30 мин показала связывание апоА-1-ФИТЦ с клеточной мембраной без интернализации, что выражалось в равномерном свечении меченого белка на поверхности мембраны (рис. 2Б). При этом спектрофлуориметрический анализ клеточных лизатов показал снижение общей интенсивности флуоресценции на 64% по сравнению с результатами, полученными при инкубации клеток в условиях 37°С.
Обнаруженное нами связывание апоА-1 с цитоплазматическими мембранами гепатоцитов носило специфический характер. Спектрофлуориметрическое исследование лизатов клеток показало, что даже 10-кратный избыток немеченого апоА-1 приводит к снижению интенсивности флуоресценции на 29% (рис. 3).
Рис. 3. Интенсивность флуоресценции лизатов гепатоцитов после инкубации с апоА-1-ФИТЦ:
1 - без добавления немеченого апоА-1;
2 - в присутствии 10-кратного избытка немеченого апоА-1.
517.5 Wavelength (nm)
Поглощение клетками апоА-1-ФИТЦ происходило путем рецептор-опосредованного эндоцитоза: флуоресцентные методы анализа показали отсутствие свечения гепатоцитов после их предварительной обработки 0,25% раствором трипсина. Методом иммуноэлектроблоттинга нами был обнаружен белок-рецептор, связывающий апоА-1 в качестве лиганда, с молекулярной массой 100-120 кДа, что может соответствовать рецепторам НВР для ЛПВП и апоА-1 на поверхности мембран гепатоцитов [Hidaka Н., Fidge N., 1992; Matsumoto A. et al., 1997].
Изучение роли ЛПВП в комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтеза белка в опухолевых клетках
Ранее в НИИ биохимии СО РАМН на тканевых и клеточных культурах печени, а также клетках асцитной НА-1 гепатомы был описан кооперативный эффект ЛПВП и кортизола в регуляции процессов пролиферации и клеточного роста при участии макрофагов [Панин Л.Е., 1987; Усынин И.Ф. и др., 1995; Панин Л.Е., Хощенко О.М., 2003]. В наших экспериментах показана важная роль ЛПВП в комплексе с кортизолом и прогестероном в регуляции биосинтеза белка в клетках асцитной карциномы Эрлиха при участии макрофагов.
Образование комплекса ЛПВП-прогестерон мы показали методом тушения триптофановой флуоресценции с расчетом константы ассоциации, которая составила 4,47х106 М"1. Образование комплекса ЛПВП-кортизол было показано ранее [Панин Л.Е. и др., 1992].
ЛПВП добавляли в количестве 1 мг белка на 1 мл среды инкубации, стероидные гормоны - 4хЮ6М"'. Присутствие ЛПВП и кортизола в культуре клеток асцитной карциномы, 30-40% которых составляют макрофаги, приводило к увеличению скорости биосинтеза белка в опухолевых клетках по сравнению с контролем на 15%, а по сравнению с культурой клеток карциномы, свободной от макрофагов, на 29% (табл. 1).
Таблица 1. Скорость биосинтеза белка в культуре клеток асцитной карциномы Эрлиха при участии опухоль-ассоциированных макрофагов, комплекса ЛПВП-кортизол и аполипопротеина Е
Экспериментальные группы Имп/мин х 10~7мг белка М ± ш, п=6
1 .Клетки карциномы с макрофагами (сокультура) 816,12± 14,31
2.Сокультура + ЛПВП-кортизол 937,21 ± 35,43 '
3.Сокультура + апоЕ + ЛПВП-кортизол 733,22 ± 28,35 *#
4.Клетки карциномы без макрофагов + ЛПВП-кортизол 728,13 ± 20,52 ' *
* - р < 0,05 по сравнению с группой 1; # - р < 0,05 по сравнению с группой 2.
Добавление ЛПВП и прогестерона приводило к повышению скорости биосинтеза белка в опухолевых клетках на 15% по сравнению с контролем и на 23% по сравнению с культурой клеток карциномы без макрофагов (табл.2).
Таблица 2. Скорость биосинтеза белка в культуре клеток асцитной карциномы Эрлиха при участии опухоль-ассоциированных макрофагов, комплекса ЛПВП-прогестерон и аполипопротеина Е
Экспериментальные группы Имп/мин х 10^/мг белка М ± ш, п=6
1.Клетки карциномы с макрофагами (сокультура) 762,43 ± 34,22
2.Сокультура + ЛПВП-прогестерон 876,77 ± 47,90 *
3.Сокультура + апоЕ +ЛПВП-прогестерон 760,49 ±64,14"
4.Клетки карциномы без макрофагов + ЛПВП-прогестерон 712,42 ±48,91 "
* - р < 0,05 по сравнению с группой 1; # - р < 0,05 по сравнению с группой 2.
Полученные нами результаты свидетельствуют о важной роли ЛПВП, стероидных гормонов, а также макрофагов в усилении биосинтеза белка в опухолевых клетках и подтверждают открытый ранее механизм участия этих клеток в регуляции экспрессии генов. Ключевая роль макрофагов заключается в поглощении ЛПВП и стероидных гормонов с последующей дезинтеграцией липопротеиновых частиц, восстановлением Д4-3-кетогруппа А-кольца стероидных гормонов и формированием биологически активного комплекса апоА-1-стероидный гормон [Панин Л.Е., 1998, 2002].
На клетках асцитной НА-1 гепатомы мышей мы показали, что у опухоль-ассоциированных макрофагов способность поглощать ЛПВП и подвергать их метаболической деградации выражена в значительно меньшей степени. Изучение белкового спектра макрофагов мышей после их инкубации с ЛПВП, выделенных из плазмы крови человека, выявило наличие банда, соответствующего по молекулярной массе и иммунохимическим характеристикам апоА-1 человека (рис. 4).
Рис. 4. Оценка поглощения и метаболической деградации белкового компонента ЛПВП плазмы крови человека перитонеальными макрофагами мышей: А - результаты диск-электрофореза лизата клеток в 12,5% ПААГ с Ds-Na:
1 - опухоль-ассоциированные макрофаги;
2 - опухоль-ассоциированные макрофаги + ЛПВП;
3 - апоА-1 (стандарт);
4 - макрофаги здоровых мышей + ЛПВП:
5 - макрофаги здоровых мышей;
Б - данные иммуноэлектроблоттинга с использованием антител к апоА-1 человека:
1 - апоА-1 (стандарт);
2 - макрофаги здоровых мышей + ЛПВП;
3 — макрофаги здоровых мышей + ЛПВП-кортизол;
4 - опухоль-ассоциированные макрофаги + ЛПВП:
5 - опухоль-ассоциированные макрофаги + ЛПВП-кортизол.
Кроме основной формы апоА-1 идентифицированы продукты его метаболической деградации с молекулярными массами от 26 до 6 кДа (рис. 4Б). Денситометрический анализ данных иммуноблотта показал, что способность опухоль-ассоциированных макрофагов поглощать ЛПВП снижена почти в 2 раза по сравнению с перитонеальными макрофагами здоровых животных. Но, как оказалось, присутствие стероидных гормонов в среде инкубации оказывает стимулирующее влияние на данный процесс и более выраженное в отношении опухолевых клеток. В частности, добавление кортизола увеличивало поглощение ЛПВП макрофагами здоровых мышей в 1,6 раза, а опухоль-ассоциированными макрофагами - в 2,2 раза.
Одним из факторов, участвующих в регуляции биосинтеза белка, в том числе в опухолевых клетках, может быть апоЕ, обладающий антипролиферативной активностью. Отмечено, что содержание апоЕ составляет 10-25% от общего секретируемого макрофагами белка [\Verb /. е! а1., 1986]. Однако, как показали наши исследования на модели асцитной НА-1 гепатомы, в спектре внутриклеточных белков опухоль-ассоциированных макрофагов количество апоЕ снижено по сравнению с макрофагами здоровых мышей (рис. 5).
1 2 3
• апоЕ
Рис. 5. Электрофореграмма внутриклеточных белков перитонеальных макрофагов мышей. Диск-электрофорез в 12,5% ПААГ с 08-Ыа:
1 - опухоль-ассоциированные макрофаги;
2 - макрофаги здоровых мышей;
3 - белки ЛПОНП.
Иммуноэлектроблоттинг и денситометрический анализ результатов показали снижение содержания апоЕ в дегликозилированной проформе (рис. 6), что может свидетельствовать о нарушении посттрансляционной модификации данного белка в опухоль-ассоциированных макрофагах.
Рис. 6. Анализ внутриклеточного содержания апоЕ в перитонеальных макрофагах мышей в норме и в условиях опухолевого роста:
А - данные иммуноэлектроблоттинга с использованием специфических апоЕ-антител: 1 - опухоль-ассоциированные макрофаги; 2 -макрофаги здоровых мышей: банд 1 - гликозилированная форма; банд 2 - дегликозилированная проформа; Б - денситометрия бандов апоЕ-иммунореактивности: 1 - банд 1; 2 — банд 2
Учитывая данный факт, а также способность апоЕ оказывать антипролиферативный эффект, мы изучили влияние экзогенного апоЕ на скорость биосинтеза белка в опухолевых клетках при стимуляции процесса ЛПВП в комплексе со стероидными гормонами. Добавление хроматографически очищенного апоЕ (рис. 7) в концентрации 10 мкг/мл среды к клеткам асцитной карциномы Эрлиха за 24 ч до стимулирующего воздействия комплекса ЛПВП-стероидный гормон приводило к снижению скорости биосинтеза белка (табл. 1, 2) и подавлению кооперативного эффекта ЛПВП и стероидных гормонов.
94 к Да 67 кДа — 43 кДа — ЗОкДа — 14,4 кДа
Рис. 7. Электрофореграмма хроматографической очистки апоЕ, выделенного из суммарных белков ЛПОНП. Диск-электрофорез в 12,5% ПААГ с С^-На:
1 - низкомолекулярные белки-стандарты; 2 - суммарные белки ЛПОНП: 3-9 - стадии очистки апоЕ.
Разнонаправленность эффектов апоЕ и ЛПВП в комплексе со стероидными гормонами была подтверждена и на модели асцитной НА-1 гепатомы с использованием апоЕ-содержащих ЛПОНП.
Полученные результаты позволяют рассматривать роль макрофагов в регуляции опухолевого роста с позиции как ингибирующей, так и стимулирующей активности. На наш взгляд, это зависит от того, какая программа реализуется в большей степени: подавления белкового синтеза в опухолевых клетках под влиянием апоЕ или поглощения макрофагами ЛПВП и стероидных гормонов с образованием биологически активного комплекса апоА-1-стероидный гормон, усиливающего биосинтез белка в опухолевых клетках.
Изучение роли апоА-1 в комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтетических процессов в гепатоцитах
Как было показано ранее и подтверждено в наших последующих исследованиях, кооперативный эффект ЛПВП и стероидных гормонов в отношении процессов пролиферации и клеточного роста осуществляется при участии макрофагов и связан с образованием биологически активного комплекса апоА-1-стероидный гормон. Так, в ряде работ показана способность комплексов апоА-1 с тетрагидрокортизолом (апоА-1-ТГК), андростероном, дегидроэпиандростероном усиливать процессы биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в нормальных и опухолевых клетках [Панин Л.Е. и др., 2001,2007].
Молекулярный механизм биологической активности комплексов связан с их взаимодействием с сайтами ДНК, имеющими структуру (ОСС)п-повторов, и последующей инициацией транскрипции генов [Панин Л.Е. и др., 2002, 2006]. Показано, что в активации экспрессии генов принципиально важную роль играет восстановленная 3-кетогруппа кольца А стероидных гормонов, которая в макрофагах восстанавливается при участии а- и р-редуктаз. Появление ОН-группы в положении 3 кольца А приводит к возможности взаимодействия гормона с азотистыми основаниями ДНК посредством образования водородных связей. Именно это обстоятельство и определило выбор гормонов в настоящем исследовании.
На изолированных гепатоцитах крыс была обнаружена высокая биологическая активность комплексов апоА-1 с женскими половыми гормонами и прегненолоном. Образование комплексов подтверждено нами методами гель-фильтрации и тушения триптофановой флуоресценции с расчетом констант ассоциации. Так, для комплекса апоА-1-прегненолон
константа связывания составила 0,45х10б М"1. Комплексы для оценки биологической активности готовили, руководствуясь результатами исследования их связывания с апоА-1 и в соответствии с данными по изучению влияния комплекса апоА-1-ТГК на стуктуру ДНК [Гимаутдинова О.И., 2002]. Смесь белка и гормонов выдерживали в молярном соотношении 1:2 в фосфатном солевом буфере (рН 7,4) при комнатной температуре в течение 30 мин. Концентрация апоА-1 в среде инкубации клеток составляла 60 мкг/мл, гормонов —
В присутствии апоА-1 анаболический эффект эстрадиола и эстриола повышался на 40%. Комплекс апоА-1 с эстроном увеличивал скорость биосинтеза белка в гепатоцитах на 33% при отсутствии стимулирующего влияния свободного гормона (табл. 3).
Таблица 3. Скорость биосинтеза белка в культуре гепатоцитов крыс под влиянием комплексов апоА-1 с женскими половыми гормонами
Экспериментальная группа Имп/мин /мг бежа М ± т, п=6
апоА-1-эстрадиол 4972 ±135 *
эстрадиол 3525 ± 82 *
апоА-1-эстриол 6532±116 *
эстриол 4637 ±105*
апоА-1-эстрон 3966 ±108 #
эстрон 2988 ± 67
апоА-1 2876±121
интактный контроль 2975 ±144
* - р < 0,05 по сравнению с интактным контролем;
# - р < 0,05 по сравнению со свободным гормоном.
Важную роль ОН-группы в положении 3 кольца А стероидных гормонов подтверждают результаты изучения биологической активности комплексов апоА-1 с прегненолоном и прогестероном. Только комплекс апоА-1-прегненолон оказывал стимулирующее влияние на биосинтетические процессы в изолированных гепатоцитах крыс: в 2 раза усиливал скорость синтеза белка (табл. 4), в 1,6 раза - скорость синтеза ДНК (табл. 5). Комплекс апоА-1-прогестерон не вызывал достоверных изменений синтеза белка, также как прегненолон и прогестерон в отсутствии белка-переносчика. Следует отметить, что и апоА-1 без участия гормонов также не проявлял стимулирующего эффекта.
Таблица 4. Скорость биосинтеза белка в культуре гепатоцитов крыс под влиянием комплексов апоА-1 с прогестероном и прегненолоном
Экспериментальная группа Имп/мин /мг белка М ± ш, п=6
контроль 57606 ±2762
апоА-1 50405 ±1446 *
прогестерон 64815 ± 968 *
прешенолон 57730 ±1267*
апоА-1 -прогестерон 64055 ±1415 *
апоА-1-прегненолон 112089 ±1560*
* - р < 0,05 по сравнению с контролем;
# - р < 0,05 по сравнению с комплексом апоА-1-прегненолон.
Таблица 5. Скорость биосинтеза ДНК в культуре гепатоцитов крыс под влиянием комплекса апоА-1 с прегненолоном и апоЕ-содержащих ЛПОНП
Экспериментальная группа Имп/мин /мг белка М ± ш, п=6
контроль 648 ± 46
апоА-1-прегненолон 1046 ±75 *
ЛПОНП + апоА-1-прегненолон 498 ± 59 *
ЛПОНП 343 ± 43 *
* - р < 0,05 по сравнению с контролем;
# - р < 0,05 по сравнению с комплексом апоА-1-прегненолон.
Как известно, анаболические процессы в клетке требуют энергетических затрат. Резонно предположить, что повышение интенсивности процессов биосинтеза белка и нуклеиновых кислот под влиянием комплексов апоА-1 со стероидными гормонами будет сопряжено с активацией энергетического обмена. Действительно, присутствие комплекса апоА-1-ТГК в среде инкубации гепатоцитов повышало поглощение 14С-глюкозы на 52% (р<0,05) по сравнению с контрольными клетками. Это сопровождалось значительным накоплением лактата в среде кондиционирования: 0,77±0,05 мг/дл против 0,18±0,02 мг/дл в контроле (р<0,001). Полученные результаты свидетельствуют об активации гликолитического звена энергетического обмена в изолированных гепатоцитах под влиянием комплекса апоА-1-ТГК.
Отмеченная нами выше разноналравленность эффектов ЛПОНП/апоЕ и ЛПВП в комплексе со стероидными гормонами в опухолевых клетках была показана и в культуре интактных клеток. Так, апоЕ, добавленный в среду инкубации нормальных гепатоцитов (10 мкг/мл) за 24 ч до стимулирующего воздействия комплекса апоА-1-ТГК, полностью снимал эффект последнего в отношении стимуляции процессов биосинтеза РНК и белка. А скорость синтеза ДНК была даже в 1,6 раза ниже, чем в контроле. Примечательно, что апоЕ-содержащие ЛПОНП проявляли более выраженный ингибирующий эффект и снижали данный показатель в 3 раза (табл. 6). При стимуляции биосинтеза ДНК комплексом апоА-1-прегненолон ЛПОНП также оказывали ингибирующее действие и снижали скорость синтеза в 2 раза (табл.5).
Таблица 6. Скорость биосинтеза ДНК в культуре гепатоцитов крыс под влиянием комплекса апоА-1-ТГК и апоЕ-содержащих ЛПОНП
Экспериментальная группа Имп/мин /мг белка М ± ш, п=6
контроль 1343 ±74
апоА-1-ТГК 1985 ± 104 *
ЛПОНП + апоА-1-ТГК 420 ± 30 *
ЛПОНП 424 ± 28 *s
апоЕ + апоА-1-ТГК 803 ± 48 *
апоЕ 862 ± 70 *
* - р < 0,05 по сравнению с контролем;
# - р < 0,05 по сравнению с комплексом апоА-1-ТГК; $ - р < 0,05 по сравнению с апоЕ.
Влияние ЛПВП и их комплексов с полисахаридами на продукцию интерлейкина-ip
Известно, что липопротеины наряду с липополисахаридсвязывающим белком могут являться переносчиками полисахаридов в плазме крови, играя при этом важную роль в механизме противовоспалительной защиты организма (van Lenten B.J. et al., 1986; Ma J. et al., 2004; Gupta H. et al., 2005; Викторов A.B., Юркив B.A., 2006). Показано взаимодействие липополисахарида (ЛПС) с ЛПВП [Ulevitch R. J. et al., 1981]. В связывании эндотоксина принимает участие апоА-I [Massamiri Т. et al., 1997].
В нашей работе методами тушения триптофановой флуоресценции и электрофореза в геле агарозы показано связывание ЛПВП и апоА-I с
полисахаридами бактериального (ЛПС из Escherichia coli) и дрожжевого происхождения (карбоксиметилированный и сульфоэтилированный гликаны из клеточной стенки Basidiomycetes и Oomycetes).
Патологический эффект полисахаридов опосредуется, как известно, через секреторные продукты макрофагов - провоспалительные цитокины, одним из которых является ИЛ-ip. Известно также, что воспаление может играть важную роль в развитии опухолевого процесса. Показана способность ИЛ-ip повышать метастатический потенциал опухоли [Elaraj D.M. et al., 2006]. На культуре опухоль-ассоциированных макрофагов мышей с асцитной НА-1 гепатомой нами показано, что липопротеины снижают продукцию ИЛ-ip макрофагами: ЛПНП - в 2 раза, ЛПВП - в 8 раз по сравнению с контролем. Обнаруженный факт согласуется с данными литературы в отношении Т-лимфоцитов здоровых животных [Нука N. et al., 2001]. Сочетанное добавление липопротеинов с кортизолом усиливало противовоспалительное действие: комплекс ЛПВП-кортизол оказывал аддитивный эффект (рис. 8).
Считается, что связанный с липопротеинами ЛПС не способен вызвать полноценной активации макрофагов (Feingold K.R. et al., 1995). В наших экспериментах при добавлении полисахаридов в комплексе с липопротеинами содержание ИЛ-ip было ниже в 2 - 4 раза по сравнению с контролем. При этом более выраженный эффект отмечен для комплексов с ЛПВП.
Рис. 8. Содержание ИЛ-lß (пг/мл) в опухоль-ассоциированных макрофагах мышей
с асцитной НА-1 гепатомой под влиянием липопротеинов, кортизола и ЛПС из Е.
coli: 1 - контроль; 2 - ЛПВП; 3-ЛПНП; 4 - кортизол; 5 - ЛПВП-кортизол;
6 - ЛПС; 7 - ЛПВП-ЛПС;
а-р < 0,05 по сравнению с контролем;
b - р < 0,05 по сравнению с соответствующей группой, но без ЛПВП.
На изолированных гепатоцитах крыс с использованием метода флуоресцентной микроскопии нами показана способность апоА-1 транспортировать ЛПС в клетку (рис. 9).
А Б
Рис. 9. Флуоресцентная микроскопия изолированных гепатоцитов крыс после инкубации с ФИТЦ-меченным ЛПС из E.coli в присутствии апоА-I в качестве переносчика (А) и без него (Б).
Спектрофлуориметрический анализ подтвердил результаты микроскопии. Интенсивность флуоресценции лизата гепатоцитов после инкубации с ФИТЦ-меченным ЛПС в комплексе с апоА-I составила 83 у.ед., а без белка-переносчика - на уровне фоновой флуоресценции клеток (рис. 10).
100,000т
Рис. 10. Интенсивность флуоресценции лизатов гепатоцитов крыс после инкубации с ЛПС-ФИТЦ:
1 - в присутствии апоА-1 в качестве переносчика;
2 - без апоА-1.
0,000
505,0 527,5 550,0
Wavelength (nm)
Считается, что эндотоксин напрямую не взаимодействует с гепатоцитами в связи с отсутствием соответствующих рецепторов, в частности, С014. В комплексе с апоА-1 ЛПС способен проникать в гепатоциты путем рецептор-опосредованного эндоцитоза. Данный факт указывает на способность гепатоцитов участвовать в метаболической деградации ЛПС, минуя макрофаги. Такой путь нейтрализации эндотоксина
можно рассматривать как альтернативный, позволяющий снизить интенсивность воспалительного ответа. Ключевую роль в реализации этого пути играют липопротеины и их белковые компоненты, участвующие в образовании комплексов с полисахаридами. Целесообразность образования комплексов состоит в создании дополнительных путей проникновения полисахаридов в клетку при участии специфических рецепторов для липопротеинов.
Эффективность использования ЛПВП в качестве транспортной формы противоопухолевого лекарственного препарата рубомицина
Отсутствие специфичности действия большинства противоопухолевых лекарственных препаратов в отношении опухолевых клеток является одной из проблем онкотерапии. Противоопухолевый препарат проникает в равной степени и в здоровые клетки, оказывая свое поражающее действие на организм в целом. Решение проблемы возможно путем использования адресных переносчиков лекарственных средств, среди которых могут быть липопротеины плазмы крови.
Связывание ЛПВП с рубомицином мы изучали методом тушения триптофановой флуоресценции, а также равновесного диализа с последующей флуориметрией в соответствии со спектральными характеристиками рубомицина. Тушение триптофановой флуоресценции составило 27-55%. На частицах ЛПВП обнаружено около 60 мест связывания, из них 20 - с более высоким аффинитетом. О связывании свидетельствует также увеличение электрофоретической подвижности комплекса ЛПВП с рубомицином в 1,5 раза по сравнению с контролем в геле 1% агарозы (рис. 11). Коэффициент подвижности комплекса составил 0,36 против 0,23 в контроле.
Рис. 11. Электрофоретическая подвижность ЛПВП и комплекса ЛПВП-рубомицин в геле 1% агарозы:
1 -я дорожка - ЛПВП;
2-я дорожка - ЛПВП-рубомицин.
На культуре клеток аецитной НА-1 гепатомы бьшо показано, что поглощение комплекса ЛПВП-рубомицин происходит путем рецептор-опосредованного эндоцитоза и является специфическим. Спектрофлуориметрия клеточных лизатов показала, что уже 5-кратный избыток нативных ЛПВП приводит к снижению интенсивности флуоресценции на 20%, а 10-кратный - на 60%. Эффективность поглощения препарата опухолевыми клетками в составе комплекса была в 1,6 раза выше по сравнению с контролем (р<0,05).
Поглощение комплекса изучали и на культуре гепатоцитов здоровых крыс. Оказалось, что интенсивность флуоресценции рубомицина в лизате опухолевых клеток в 1,7 раза выше, чем в гепатоцитах (р<0,05). Обнаруженный факт позволяет сделать предположение об адресной доставке препарата в опухолевые клетки в составе комплекса с ЛПВП. Возможно, клетки гепатомы имеют большее количество рецепторов для ЛПВП или более высокую их аффинность.
Цитотоксический эффект комплекса оценивали методом спектрофлуориметрии и флуоресцентной микроскопии с использованием красителя Хёхст 33258. Используемый метод, согласно данным литературы, позволяет выявить начальные стадии апоптоза [МасюголуБкг Ъ. й а1., 1998]. Клетки НА-1 гепатомы инкубировали в течение 24 ч в присутствии свободного препарата и препарата в составе комплекса с ЛПВП в концентрациях 1, 3 и 6 мкг/мл. Спектрофлуориметрический анализ показал, что цитотоксичность рубомицина имеет дозозависимый характер и наиболее выражена при использования его в составе комплекса с ЛПВП при концентрации препарата 1 и 3 мкг/мл. С увеличением дозы различия в формах применения нивелировались. Результаты флуоресцентной микроскопии с расчетом количества апоптотических клеток представлены в табл. 7.
Таблица 7. Количество апоптотических клеток НА-1 гепатомы (% от общего числа) после влияния рубомицина и его комплекса с ЛПВП
Показатель Рубомицин, мкг/мл ЛПВП-рубомицин, мкг/мл
1 3 6 1 3 6
% клеток 4,7 14 44,2 16 36,7 63,2
Эффективность использования апоА-1 в качестве транспортной формы противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида
Методом тушения триптофановой флуоресценции мы показали способность апоА-1 связывать изониазид. Максимальное тушение при полном насыщении связывающих мест составило 77% (рис. 12). При этом форма спектров не изменялась, а максимальный сдвиг составил 1-3 нм, что можно объяснить конформационными перестройками белкового компонента после взаимодействия с лигандом. Количество мест связывания составило 70.
S 200,00!
Рис. 12. Тушение триптофановой флуоресценции апоА-1 при титровании изониазидом:
1 - исходная величина флуоресценции; 2-4 - величины флуоресценции после добавления аликвот изониазида.
350,0 400,0
Wavelength (run)
Эффективность применения апоА-1 на фоне антимикобактериальной терапии с использованием изониазида изучали на модели БЦЖ-индуцированного туберкулезного воспаления у мышей. Лечение животных начинали через 14 дней после инфицирования и проводили в течение 30 дней. АпоА-1 (200 мкг) и изониазид (14 мг/кг) вводили интраперитонеально 2 раза в неделю в 1 мл физиологического раствора. Экспериментальные животные были разделены на 4 группы: 1) БЦЖ-инфицированные нелеченые животные (контроль); 2) БЦЖ-инфицированные, леченые изониазидом животные; 3) БЦЖ-инфицированные животные, которым вводили комплекс апоА-1-изониазид; 4) здоровые животные, которым внутрибрюшинно вводили 1 мл физиологического раствора (интакгаый контроль).
Анализ активности лизосомальных ферментов (табл. 8) в печени БЦЖ-инфицированных мышей показал, что общая активность катепсина D во второй и третьей экспериментальных группах снижена в 1,5 раза по
сравнению с контрольными группами. Свободная активность фермента у леченых изониазидом животных была в 2 раза ниже относительно контрольных групп. Введение апоА-1 в сочетании с изониазидом приводило к увеличению свободной активности катепсина О. Данный показатель превышал таковой у интакгных животных в 1,4 раза.
Общая активность кислой фосфатазы на фоне лечения не отличалась от контрольных 1рупп. Свободная активность фермента в группах леченых животных была снижена по сравнению с интактным контролем, но существенно превосходила данный показатель у животных без лечения. Следует отметить, что в группе с введением апоА-1 свободная активность фермента была в 1,3 раза выше по сравнению с группой без апоА-1.
Активность хитотриозидазы в сыворотке крови БЦЖ-инфицированных мышей превосходила интактный контроль в 3,4 раза. На фоне лечения активность фермента снижалась и в большей степени при введении препарата в комплексе с апоА-1. Считается, что источником поступления в кровь данного фермента могут являться активированные макрофаги, а уровень его активности отражает интенсивность воспалительного процесса [Короленко Т.А. и др., 2000].
Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о способности апоА-1 повышать свободную активность лизосомальных ферментов в печени мышей с БЦЖ-индуцированным туберкулезным воспалением на фоне антимикобактериальной терапии. Лизосомотропный эффект ЛПВП и их белковых компонентов был отмечен ранее на переживающих срезах печени крыс [Панин Л.Е., 1987]. Учитывая способность микобактерии нарушать функции лизосомального аппарата [Уег§пе I. й а1., 2005], можно предположить, что повышение свободной активности гидролаз при туберкулезном воспалении является благоприятным фактором, направленным на уничтожение и элиминацию возбудителя. Кроме того, полученные данные демонстрируют способность апоА-1 оказывать противовоспалительный эффект.
Экспериментальные исследования на культуре перитонеальных макрофагов мышей с использованием апоА-1, меченного коллоидным золотом, обнаружили его способность связываться с клеточной стенкой микобактерии. Такое взаимодействие может привести к образованию ионных каналов и, возможно, сквозных пор в клеточной стенке. Данный факт является отражением антимикробных свойств апоА-1, описанных в литературе для Е. соИ и различных видов стафилококков [А§а\уа У. й а1., 1991; ТаёаЫ. й а1., 1993].
Таблица 8. Активность ферментов лизосом у мышей с БЦЖ-индуцированным туберкулезным воспалением на антимикобактериальной терапии с введением комплекса апоА-1-изониазид (М±ш, п=6)
Группа Катепсин D, у.ед./ч на 1 мг белка Кислая фосфатаза, мкмоль Р, /мин на 1 г белка Хитотриозидаза, нмоль MUF/мл в час
свободная общая свободная общая
Контроль 0,143 ±0,012 0,679 ± 0,042 1,628 ±0,261* 10,385 ± 0,424 1035,1 ±65,66*
Изониазид 0,075 ± 0,002 *s 0,374 ± 0,022*$ 2,75 ±0,073 *$ 10,68 ± 0,69 576,5 ±24,65 *$
АпоА-1-изониазид 0,208 ±0,016* *$ 0,376 ±0,05** 3,515 ±0,202**5 11,53 ±0,53 447,8 ± 46,14 $
Интактный контроль 0,147 ±0,011 0,569 ±0,026 4,65 ±0,19 12,78 ± 0,78 306,4 ±44,39
*- р<0,05 по сравнению с интактным контролем; # - р<0,05 по сравнению с группой 2 (изониазид); $ - р<0,05по сравнению с контролем (нелеченые животные).
Использование апоА-I в качестве транспортной формы генетического материала в клетки эукариот
Обнаруженная способность апоА-I попадать в ядерный аппарат позволила нам использовать данный белок в качестве транспортного средства для адресной доставки генетического материала непосредственно в ядра клеток. С этой целью в качестве экспериментальной модели был выбран эукариотический вектор со встроенным геном флуоресцирующего белка GFP Aequoria Victoria, в промоторную часть которого были встроены цис-элементы типа CC(GCC)n для получения его транспортной формы с апоА-1 (Панин JI.E. и др., 2002).
Связывание апоА-I с вектором было показано методом тушения триптофановой флуоресценции. Добавление вектора к белку приводило к снижению интенсивности свечения и выраженному изменению характера спектра со сдвигом максимума флуоресценции, что свидетельствует об образовании комплекса (рис. 13).
900 -
длины волн,ни
Рис. 13. Спектры триптофановой флуоресценции: 1 - апоА-1; 2 - апоА-1 + эукариотический вектор рЕ-ОЛС].
Анализ экспрессии гена, трансфицированного в ядра гепатоцитов с помощью апоА-1, проводили методом флуоресцентной микроскопии и спектрофлуориметрии. Через 3 ч инкубации гепатоцитов с комплексом апоА-1-вектор было показано накопление флуоресцирующего белка в цитоплазматическом компартменте (рис. 14А). Полученный результат
говорит о доставке гена GFP с помощью апоА-I в ядро с последующей его экспрессией и синтезом на основе мРНК специфического белка в цитоплазме. Экспрессии вектора и накопления флуоресцирующего белка в отсутствии переносчика не наблюдалось. Спектрофлуориметрический анализ лизатов клеток подтвердил полученные результаты.
Данные результаты получили подтверждение и на модели in vivo. Через 3 ч после введение комплекса апоА-I с вектором в хвостовую вену крыс было отмечено накопление флуоресцирующего белка в цитоплазме гепатоцитов (рис. 14Б). Это говорит о том, что произошла трансфекция гена GFP в ядра клеток с последующим синтезом соответствующего белка.
Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о реальной возможности использования апоА-I в качестве средства адресной доставки целевых генов в клетки эукариот для решения различных биотехнологических задач в условиях эксперимента, а также в клинике для генокоррекции и генотерапии.
А Б
Рис. 14. Накопление флуоресцирующего белка GFP в цитоплазме гепатоцитов крыс. Ген флуоресцирующего белка доставлен в ядерный аппарат клеток с использованием в качестве переносчика апоА-1:
А. Модель in vitro (ув. х400). Б. Модель in vivo (ув. х200).
Возможность использования липо(апо)протеинов как переносчиков генетического материала подтверждают и полученные нами результаты по изучению способности липопротеинов связывать и транспортировать внеклеточную ДНК (вкДНК) в плазме крови человека и животных. С использованием специфического для ДНК флуоресцентного красителя Хёхст 33258 показано, что 11-13% внеклеточной ДНК в плазме крови циркулирует в составе липопротеиновых комплексов, из них 7-8% — в составе ЛПВП.
выводы
1. ЛПВП в комплексе с кортизолом и прогестероном повышают скорость биосинтеза белка в клетках асцитной карциномы Эр лиха при участии опухоль-ассоциированных макрофагов.
2. Показано участие макрофагов в метаболической деградации ЛПВП. Опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженной способностью к поглощению и метаболической деградации белкового компонента ЛПВП. Кортизол оказывает стимулирующее влияние на эти процессы, более выраженное для опухоль-ассоциированных клеток.
3. АпоА-1 в комплексе с женскими половыми гормонами и прегненолоном стимулирует процессы биосинтеза белка и ДНК в изолированных гепатоцитах крыс.
4. Комплекс апоА-I с тетрагидрокортизолом, усиливая процессы биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в изолированных гепатоцитах, повышает интенсивность поглощения глюкозы клетками и накопление лактата, что свидетельствует об активации гликолитического звена углеводного обмена.
5. На культуре гепатоцитов, клеток асцитной НА-1 гепатомы и карциномы Эрлиха установлена разнонаправленность эффектов ЛПОНП/апоЕ и ЛПВП/апоА-I в комплексе со стероидными гормонами в регуляции процессов биосинтеза белка и нуклеиновых кислот. ЛПОНП и апоЕ снижали скорость биосинтеза белка и нуклеиновых кислот и подавляли стимулирующий эффект комплексов апоА-I со стероидными гормонами.
6. Методами флуоресцентного анализа показан транспорт ЛПС в гепатоциты с использованием в качестве переносчика апоА-1.
7. ЛПВП и ЛПНП ингибировали продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1р опухоль-ассоциированными макрофагами мышей с асцитной НА-1 гепатомой. Наиболее выраженный эффект отмечен для ЛПВП и их комплексов с кортизолом. Ингибирующий эффект проявлялся и при стимуляции макрофагов комплексами ЛПВП с полисахаридами бактериального и дрожжевого происхождения.
8. ЛПВП являются эффективной транспортной формой для противоопухолевого лекарственного препарата рубомицина. На частицах ЛПВП обнаружено ~ 60 мест связывания для препарата. Использование ЛПВП в качестве переносчика повышает эффективность транспорта рубомицина в клетки асцитной НА-1
гепатомы и его цитотоксичность при снижении дозировки преимущественно в отношении опухолевых клеток.
9. АпоА-1 может служить эффективной транспортной формой для противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида. На молекуле апоА-I обнаружено ~ 70 мест связывания для препарата. Использование апоА-I на фоне антимикобактериальной терапии повышает свободную активность ферментов лизосом в печени (катепсина D и кислой фосфатазы).
Ю.Липопротеины способны транспортировать внеклеточные ДНК в плазме крови. Показано, что 11-13% внеклеточной ДНК в плазме крови циркулирует в составе липопротеиновых комплексов, из них 7-8% - в составе ЛПВП.
11.На модели эукариотического вектора pE-GAG со встроенным геном флуоресцирующего белка GFP Aequoria Victoria в экспериментах in vitro и in vivo показана способность апоА-I выступать в качестве транспортной формы генетического материала в клетку с последующей экспрессией транспортируемого гена и накоплением флуоресцирующего белка в цитоплазме.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Поляков Л.М., Зуева Т.В., Суменкова Д.В., Русских Г.С., Панин Л.Е. Влияние тетрагидрокортизола на поглощение и метаболическую деградацию белкового компонента липопротеинов плазмы крови перитонеальными макрофагами мышей в норме и в условиях опухолевого роста // Научные труды I Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека». Сочи, 2005.-С. 112.
2. Суменкова Д.В., Князев P.A., Гуща P.C., Поляков Л.М., Панин Л.Е. Влияние комплекса тетрагидрокортизола с аполипопротеином A-I на метаболические характеристики изолированных гепатоцитов крыс // Научные труды I Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека». Сочи, 2005. - С. 216.
3. Панин Л.Е., Князев P.A., Суменкова Д.В., Гуща P.C., Поляков Л.М. Роль аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре гепатоцитов крыс // Бюллетень СО РАМН. - 2007. - № 1. - С. 63-66.
4. Поляков Л.М., Зуева Т.В., Суменкова Д.В., Панин Л.Е. Роль липопротеинов плазмы крови в связывании полисахаридов бактериального и дрожжевого происхождения // Бюллетень СО РАМН. - 2007. - № 1. - С. 67 - 70.
5. Русских Г.С., Суменкова Д.В., Поляков JI.M., Зуева Т.В. Роль макрофагов в поглощении и метаболической деградации белкового компонента липопротеинов высокой плотности // Бюллетень СО РАМН. - 2007. - № 5. -С. 45-48.
6. Поляков JI.M., Суменкова Д.В., Русских Г.С., Усынин И.Ф., Зуева Т.В. Метаболическая деградация белкового и липидного компонента липопротеинов низкой плотности резидентными макрофагами // Бюллетень СО РАМН. - 2007. - № 5. - С. 49 - 52.
7. Суменкова Д.В., Князев P.A., Поляков JI.M., Панин JI.E. Влияние комплексов аполипопротеина A-I со стероидными гормонами на биосинтез белка в культуре гепатоцитов крыс // Сибирский консилиум. - 2007. - Т. 62, №7. - С. 78. Материалы III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов». Новосибирск, 2007.
8. Панин JI.E., Князев P.A., Суменкова Д.В., Поляков JI.M. Влияние комплексов аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом и прегненолоном на биосинтез белка в культуре гепатоцитов крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Т. 144, № 9. - С. 264 - 266.
9. Панин JI.E., Суменкова Д.В., Князев P.A., Поляков JI.M. Взаимодействие аполипопротеинов A-I и Е в регуляции биосинтеза ДНК, РНК и белка в культуре гепатоцитов крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2007.-Т. 144,№ 12.-С. 629-631.
10. Суменкова Д.В., Поляков Л.М., Князев P.A., Панин Л.Е. Аполипопротеин А-I как средство направленного транспорта биологически активных веществ и генетического материала в клетки эукариот // Материалы IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. Новосибирск, 2008.-С. 348.
И. Суменкова Д.В., Князев P.A., Поляков Л.М. Роль макрофагов в регуляции биосинтеза белка в опухолевых клетках // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2008. - JY° 6 (Приложение). - С. 420. Материалы V конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Москва, 2008.
12.Князев P.A., Суменкова Д.В., Поляков Л.М. Роль аполипопротеинов A-I и Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в гепатоцитах крыс // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2008. - № 6 (Приложение). - С. 198 - 199. Материалы V конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Москва, 2008.
И.Поляков JI.M., Суменкова Д.В., Князев Р.А., Панин Л.Е. Влияние липопротеинов плазмы крови на содержание ИЛ-ip в макрофагах мышей с асцитной НА-1 гепатомой // Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная онкология». Новосибирск, 2008. С. 150-151.
14. Поляков Л.М., Суменкова Д.В., Князев Р.А., Панин Л.Е. Влияние комплексов липопротеинов плазмы крови с полисахаридами на содержание ИЛ-ip в макрофагах мышей с асцитной НА-1 гепатомой // Научные труды II Съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека». Молдова, Кишинев, 2008. - С. 157.
15.Polyakov L., Panin L., Sumenkova D., Knyazev R., Usynin I. Effect of complexes corticosteroids with apolipoprotein A-I on protein synthesis in primary culture of hepatocytes // Proceedings of 1st Annual World Congress of Regenerative Medicine & Stem Cell. China, Guangzhou, 2008.
16. Панин Л.E., Поляков Л.М., Усынин И.Ф., Суменкова Д.В., Князев Р.А. Влияние кортикостероидов в комплексе с аполипопротеином A-I на биосинтез белка в культуре гепатоцитов // Проблемы эндокринологии. -2009. - Т. 55, № 3. - С. 45 - 47.
17.Поляков Л.М., Суменкова Д.В., Панин Л.Е. Влияние липопротеинов плазмы крови и их комплексов с полисахаридами на содержание ИЛ-ip в макрофагах мышей с асцитной НА-1 гепатомой // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009. - Т. 147, № 4. - С. 499 - 451.
18.Суменкова Д.В., Князев Р.А., Гуща Р.С., Поляков Л.М. Панин Л.Е. Влияние комплекса аполипопротеина A-I с тетрагидрокортизолом на биосинтез белка и поглощение глюкозы гепатоцитами крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2009. - Т. 147, № 8. - С. 173 - 175.
19.Суменкова Д.В., Поляков Л.М., Князев Р.А., Панин Л.Е. Метаболические характеристики опухоль-ассоциированных макрофагов и их роль в регуляции опухолевого роста // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием «Современная онкология: достижения и перспективы развития». Томск, 2009. - С. 188 - 189.
20.Sumenkova D.V., Polyakov L.M., Panin L.E. Defence properties of high-density lipoproteins of blood plasma: potential protective effect in the development of metabolic diseases // Proceedings of the EASL Special Conference on NAFLD/NASH and Related Metabolic Disease. Italy, Bologna, 2009. - P. 209.
21.Суменкова Д.В., Поляков Л.М. Связывание эндотоксина липопротеинами высокой плотности как защитно-приспособительная реакция организма // Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции
«Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов». Новосибирск, 2009. - С. 248 - 249.
22.Суменкова Д.В., Князев P.A., Поляков JI.M., Панин JI.E. Роль макрофагов в регуляции биосинтеза белка в клетках асцитной карциномы Эрлиха // Сибирский онкологический журнал. - 2010. - Т. 38, № 2. - С. 30 - 34.
23.Суменкова Д.В., Князев P.A., Поляков Л.М., Панин Л.Е. Влияние липопротеинов и стероидных гормонов на биосинтез белка в клетках асцитной карциномы Эрлиха // Бюллетень СО РАМН. - 2010. — Т. 30, № 2. -С. 44-48.
24.Суменкова Д.В., Поляков Л.М., Панин Л.Е. Аполипопротеин A-I как транспортная форма противотуберкулезных лекарственных препаратов // Материалы Российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2010.
25.Суменкова Д.В., Поляков Л.М., Панин Л.Е. Влияние аполипопротеина A-I в комплексе с изониазидом на активность лизосомальных ферментов у мышей с БЦЖ-индуцированным туберкулезным воспалением // Труды II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов». Новосибирск, 2010. - С. 342 - 345.
26.Суменкова Д.В. Липопротеины плазмы крови как транспортная форма внеклеточной ДНК // 11 Конгресс молодых ученых с международным участием «Науки о человеке». Томск, 2010.
27.PoIyakov L.M., Sumenkova D.V., Knyazev R.A., Panin L.E. The analysis of interaction lipoproteins and steroid hormones // Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical Chemistry. - 2010. - № 4. - P. 350 - 353.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Ало - аполипопротеин
вкДНК - внеклеточная дезоксирибонукпеиновая кислота
ИЛ-1Р - интерлейкин-1р
ЛПВП - липопротеины высокой плотности
ЛГТНП - липопротеины низкой плотности
ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности
ЛПС - липополисахарид
ПААГ - полиакриламидный гель
ТГК - тетрагидрокортизол
ФИТЦ - флуоресцеинизотиоцианат
Р, - неорганический фосфат
МиБ - 4-метилумбеллиферон
Соискатель
Технический редактор Е.Г.Соколова
Подписано в печать 17.11.2010 Формат 60x84/16. Бумага офсет № 1. Гарнитура Тайме Печ.л. 2,0. Тираж 100. Зак. № 85 ИНГГСО РАН, О ИТ, 630090, Новосибирск, пр-тАк. Коптюга, 3
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Суменкова, Дина Валерьевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общие представления о липопротеинах плазмы крови
1.2. Липопротеины высокой плотности: структура и свойства
1.3. Аполипопротеин А-І: структура и свойства
1.4. Метаболизм липопротеинов высокой плотности
1.5. Рецепторы и белки, связывающие липопротеины высокой плотности
1.6. Регуляторная и транспортная роль липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-І
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Используемые реактивы и оборудование
2.3. Экспериментальные модели
2.3.1. Культура клеток
2.3.2. Модель туберкулезного воспаления
2.4. Препаративные процедуры
2.4.1. Выделение липопротеинов плазмы крови
2.4.2. Выделение аполипопротеинов
2.4.3. Получение сыворотки крови
2.4.4. Выделение клеток животных
2.4.4.1. Изолирование и фракционирование клеток печени
2.4.4.2. Выделение перитонеальных макрофагов
2.4.4.3. Выделение асцитных опухолевых клеток и опухоль-ассоциированных макрофагов
2.4.4.4. Оценка чистоты клеточных фракций, подсчет клеток и определение их жизнеспособности
2.4.5. Получение гомогената ткани печени и выделение фракции лизосом
2.4.6. Выделение плазматических мембран
2.5. Биохимические методы
2.5.1. Определение содержания белка
2.5.2. Оценка скорости биосинтеза белка и нуклеиновых кислот
2.5.3. Определение содержания лактата
2.5.4. Определение содержания ИЛ-1р
2.5.5. Определение активности ферментов лизосом
2.5.5.1. Определение активности катепсина О
2.5.5.2. Определение активности кислой фосфатазы
2.5.5.3. Определение активности хитотриозидазы
2.5.6. Определение внеклеточной ДНК
2.5.7. Оценка апоптоза
2.5.8. Флуорохромирование апоА-1 и его лигандов
2.5.9. Изучение белкового спектра: электрофорез в полиакриламидном геле и иммуноэлектроблоттинг
2.5.10. Изучение взаимодействия липопротеинов и их белковых компонентов с лигандами
2.5.10.1. Тушение триптофановой флуоресценции
2.5.10.2. Электрофорез в геле агарозы
2.5.10.3. Гель-фильтрация
2.5.10.4. Равновесный диализ
2.6. Морфологические методы
2.7. Статистические методы обработки результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Изучение транспорта аполипопротеина А-1 в ядра клеток
3.2. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с биологически активными веществами различной природы
3.2.1. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 со стероидными гормонами
3.2.2. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с полисахаридами
3.2.3. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с лекарственными препаратами
3.2.4. Анализ взаимодействия липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 с генетическим материалом
3.3. Роль липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-1 в комплексе со стероиднымигормонами в регуляции биосинтетических процессов в нормальных и опухолевых клетках. Конкурентный эффект, аполипопротеина-Е
3.3.1. Роль липопротеинов высокой плотности в комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтеза белка в нормальных и опухолевых клетках
3.3.2. Роль аполипопротеина А-1 в комплексе со стероидными гормонами в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в гепатоцитах
3.4. Влияние липопротеинов высокой плотности* и их комплексов с полисахаридами на продукцию интерлейкина-1р
3.5. Эффективность использования липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I в качестве транспортной формы лекарственных препаратов
3.5.1. Эффективность использования липопротеинов высокой плотности в качестве транспортной формы противоопухолевого лекарственного препарата рубомицина
3.5.2. Эффективность использования аполипопротеина A-I в качестве транспортной формы противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида
3.6. Использование аполипопротеина A-I в качестве транспортной формы генетического материала в клетки эукариот
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
Введение Диссертация по биологии, на тему "Участие липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина A-I в механизмах внутриклеточной регуляции и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки"
Актуальность проблемы. Липопротеины плазмы крови в функциональном отношении представляют собой, как- известно, транспортную систему для биологически активных веществ различной химической природы. Кроме липидов липопротеины могут связывать и транспортировать, в том числе и через цитоплазматическую мембрану, жирорастворимые витамины [Glevidence В.A., Bieri J.G., 1993; Панин Л.Е. и др., 1997; Balazs Z. et al., 2004]; стероидные соединения [Панин Л1Е. и др., 1988; Meng Q.H. et al., 1999; Khalil A. et al., 2000], тиреоидные гормоны* [Benvenga S. et al, 1989, 1991; Поляков JI.M., 1998], ксенобиотики [Поляков JI.M. и др., 1992; Woofter R.T., Ramsdell J.S., 2007]; включая-лекарственные; препараты [Rensen P.C. et al., 2001; Lou.-В. et al., 2005; Lacko A.G. et al., 2007; Feng M. et all, 2008] и эндотоксин [Ulevitch R. J. et ah, 1981; Massamiri T. et al., 1997]. . ' Главную роль при взаимодействии биологически активных веществ с липопротеинами играют белковые компоненты — аполипопротеины, а клеточный захват их осуществляется посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Многолетние: научные исследования сотрудников; НИИ биохимии СО РАМН и данные литературы позволяют сделать вывод о преимущественном участии липопротеинов высокой плотности (J111BH) и их основного белкового компонента - аполипопротеина A-I (апоА-1), — в связывании- и: транспорте биологически активных соединений. Так, именно ЛПВП с высоким' сродством связывают стероидные гормоны и ксенобиотики;. играя< роль их активной транспортной формы в организме [Панин Л.Е. и др:, 1992; Поляков Л.М. и др:, 1992]. Показана способность ЛПВП осуществлять транспорт некоторых противоопухолевых лекарственных препаратов [Kader A., Pater А., 2002]. В серии работ изучена способность апоА-I транспортировать малые интерферирующие РНК против вируса гепатита С в гепатоциты через SR-Bl-рецепторный путь [Kim S.I. et al., 2009; Lee №. et al., 2009]. Отмечено участие апоА-I в переносе олигонуклеотидов через гемато-энцефалический барьер [Kratzer I. et al., 2007].
Следует отметить, что проблема направленного транспорта является одной из центральных в современной медицинской биотехнологии. • Химическая природа липо(апо)протеинов, способность их проникать в клетки обусловливают преимущества данных соединений как высокоэффективных природных переносчиков. Использование липо(апо)протеинов в качестве транспортной формы лекарственных препаратов и генетического материала может повысить эффективность лечения ряда заболеваний.
Роль липопротеинов плазмы крови не ограничивается выполнением транспортной функции. Известно, что липопротеины и их белковые-компоненты участвуют в регуляции с многих метаболических процессов. Так, ЛПВП и апоА-I осуществляют регуляцию обмена холестерина в клетках при участии мембранных белков- ABGA1 и SR-BL [Zannis У.Г. ' et ab, 2006; Торховская Т.И. и др., 2006]. Липопротеины разных классов! оказывают влияние на функцию эндокринной^ системы, в частности, принимают участие в регуляции стероидогенеза [Панин JI.E., Поляков Л:М>, 1979; TemeMLE. et al., 1997; Travert С. et al., 2000], синтеза тироксина [Бернштейн JI.M. и др., 1982] и инсулина [Панин JT.E. и др., 1994]. Описано влияние липо(апо)протеинов на, структурно-функциональные свойства митохондрий [Панин JI.E. и др., 1982, 1991]. Показана роль липопротеинов и их белковых компонентов в регуляции углеводного обмена [Панин JI.E. и др., 1990].
Обнаружен лизосомотропный эффект апоА-I [Панин JI.E., 1987], отмечены его антимикробные [Agawa Y. et al., 1991; Tada N. et al., 1993] и противовирусные свойства- [Srinivas R.V. et al., 1990; Owens В J. et al., 1990; Панин JI.E. и др., 2002]. Известно кардиопротекторное, антиоксидантное и противовоспалительное действие ЛПВП, апоА-I и их синтетических миметиков [Ma J. et al., 2004; Gupta Н. et al., 2005; Navab M. et al., 2007; 8
Gomaraschi M>. et al., 2008]. В' то же время ЛПВП в силу сложности своего строения и состава могут оказывать прооксидантный и провоспалительный эффекты [Van Lenten BJ. et al., 2001].
Имеются данные о способности ЛПВП усиливать пролиферацию опухолевых клеток [Favre G. et al., 1989, 1993; Rotheneder M. et al., 1989]. Напротив, липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП) и их основной белковый компонент аполипопротеин Е (апоЕ) ингибируют деление клеток, включая опухолевые [Vogel Т. et al., 1994; Рака L. et al., 1999; Moore Z.W. et al., 2005].
Особый интерес для изучения механизмов регуляции внутриклеточного метаболизма представляет взаимодействие липопротеинов и гормонов. Отмечено, что стимулирующий эффект эстрадиола на клеточный рост карциномы грудной железы проявляется-только в присутствии ЛПВП [Jozan S. et al., 1985]. Показан, кооперативный эффект в< действии гидрокортизона, адреналина и ЛПВП, в основе которого лежит лизосомозависимая активация хроматина; приводящая к, индукции синтеза РНК и белка в переживающих срезах печени крыс [Панин Л.Е., 1987; 1990].
Исследования; проведенные сотрудниками НИИ биохимии СО РАМН под руководством академика РАМН Л.Е.Панина, позволяют утверждать, что липо(апо)протеины играют важную^ роль в структурно-функциональной организации хроматина эукариот, поддерживая его транскрипционную активность. В частности, в ядрах клеток различных тканей крыс была обнаружена апоА-1-иммунореактивность. Наиболее высокой она оказалась в транскрипционно активном хроматине и ядерном матриксе [Панин Л.Е.и др., 1992, 2000]. В серии работ института на различных моделях была показана способность ЛПВП- и апоА-I в комплексе со стероидными гормонами усиливать процессы биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в клетках различных тканей организма [Панин Л.Е. и др., 1987, 2001, 2002, 2003, 2007]. Механизм этого явления связан с образованием биологически активного комплекса апоА-1-стероидный гормон при участии макрофагов и его 9 специфическим взаимодействием с ДНК с последующей инициацией транскрипции генов [Панин Л.Е., 1998; Гимаутдинова О.И. и др., 2002; Панин Л.Е. и др., 2002, 2006, 2008]. Предполагается, что данный механизм лежит в основе регуляции процессов пролиферации [Панин Л.Е., 2002]".
Участие липо(апо)протеинов в регуляции генетического аппарата клетки подтверждают данные других авторов. Так, показана способность ЛПВП ингибировать экспрессию факторов адгезии в эндотелиальных клетках [Ashby D.T. et al., 1998; Kontush A. et al., 2003; Gomaraschi M. et al., 2008]. При этом более выраженным эффектом обладала апоА-1-богатая фракция ЛПВПз. Отмечено ингибирующее влияние ЛПВП на регуляцию экспрессии сфингозинкиназы [Xia> Р. et al., 1999] и активности ядерного фактора NF-кВ [Park S.H.et al., 2003]. В эндотелиальных клетках ЛПВП стимулировали экспрессию циклооксигеназы, трансформирующего, фактора роста [Norata G.D. et ah, 2004, 2005]. В опухолевых клетках ЛПВП повышали скорость образования-мРНК апоА-Г [Monge J.C. et al., 1989]. АпоА-I и его синтетический пептид стимулировали экспрессию плацентарного лактогена в культуре трофобластов человека [Handwerger S., et al., 1995].
Несмотря на представленные в литературе результаты исследований по изучению транспортной и- регуляторной роли липо(апо)протеинов плазмы крови, многие вопросы в этой области остаются открытыми В частности, окончательно невыяснены механизмы регуляции метаболических процессов с участием липо(апо)протеинов. Недостаточно работ по изучению возможности использования липо(апо)протеинов в качестве транспортной формы лекарственных препаратов'для повышении эффективности лечения ряда заболеваний. Отсутствуют данные о способности липо(апо)протеинов осуществлять направленный транспорт генетического' материала в ядра клеток для коррекции функции поврежденных генов.
Цель исследования: изучить роль липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-І в механизмах регуляции внутриклеточного метаболизма и направленном транспорте биологически активных веществ в клетки эукариот.
Задачи исследования:
1. Изучить процессы комплексообразования липопротеинов высокой плотности и аполипопротеина А-І с биологически активными веществами различной природы: стероидными гормонами, полисахаридами, лекарственными препаратами и исследовать способность аполипопротеина А-І осуществлять направленный транспорт биологически активных веществ в клетки эукариот.
2. Выяснить роль липопротеинов высокой плотности в комплексе со стероидными гормонами в регуляции процессов биосинтеза белка в опухолевых клетках.
3. Изучить роль аполипопротеина А-І в комплексе со стероидными гормонами и аполипопротеина Е в регуляции биосинтетических процессов в клетке.
4. Выяснить влияние липопротеинов высокой плотности и их комплексов с полисахаридами на продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-ір.
5. Исследовать эффективность использования липопротеинов высокой плотности в качестве транспортной формы противоопухолевого лекарственного препарата рубомицина.
6. Изучить возможность использования аполипопротеина А-І в качестве транспортной формы противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида.
7. Оценить возможность использования аполипопротеина А-І в качестве транспортной формы генетического материала в ядра эукариотических клеток.
Научная^ новизна- работы. На- изолированных гепатоцитах крыс методами флуоресцентной микроскопии и спектрофлуориметрии показан рецептор-опосредованный- эндоцитоз апоА-1 с последующей транслокацией белка> в ядерный аппарат клетки. Показана способность апоА-1 повышать эффективность внутриклеточного транспорта биологически активных веществ различной природы.
Впервые показано взаимодействие апоА-1 с генетическим материалом с использованием в качестве модели эукариотического вектора с встроенным геном, флуоресцирующего белка GFP. В опытах in vitro и in vivo методами флуоресцентной микроскопии и спектрофлуориметрии показана способность апоА-1 осуществлять транспорт генетического материала в ядра клеток (гепатоциты) с последующей экспрессией- транспортируемого гена и синтезом! флуоресцирующего белка в цитоплазме.
В работе обнаружена* способность липопротеинов* плазмы, крови f связывать, и транспортировать свободные нуклеиновые кислоты. Показано относительное содержание внеклеточной ДНК в составе различных фракций липопротеинов. Наибольшее содержание внеклеточной ДНК отмечено в составе ЛПВП.'
На модели асцитной. карциномы, Эрлиха' показано участие ЛПВП и стероидных гормонов* (кортизол, прогестерон)* в механизме опухолевого роста, которое заключается в усилении скорости биосинтеза белка. В сокультуре опухолевых клеток подтвержден: открытый ранее в НИИ биохимии« СО PAMHs механизм регуляции процессов пролиферации и клеточного роста, в котором важную роль играют макрофаги.
Показано участие макрофагов в метаболической деградации ЛПВП. Обнаружено, что опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженной способностью^ к поглощению и метаболической деградации белкового компонента ЛПВП. Отмечено' стимулирующее влияние стероидных гормонов на поглощение ЛПВП макрофагами, более выраженное дляюпухоль-ассоциированных клеток.
Впервые на культуре гепатоцитов крыс выявлена биологическая активность комплексов апоА-1 с женскими половыми гормонами. Показано повышение скорости синтеза белка под влиянием эстриола и эстрадиола, которое значительно усиливалось в присутствии апоА-1. Отмечено, что комплекс апоА-1 с эстроном также усиливал синтез белка, в то время как свободный гормон не обладал индуцирующим влиянием. Впервые показана способность комплекса апоА-1 с прегненолоном повышать скорость биосинтеза ДНК и белка в культуре гепатоцитов.
Обнаружена активация гликолитического звена углеводного обмена в изолированных гепатоцитах крыс под влиянием комплекса апоА-1 с тетрагидрокортизолом, биологическая активность которого в отношении процессов биосинтеза белка и нуклеиновых кислот была показана ранее в работах НИИ биохимии СО РАМН.
На культуре гепатоцитов, клеток асцитной НА-1 гепатомы и карциномы Эрлиха впервые установлена разнонаправленность эффектов ЛПВП/апоА-1 в* комплексе со стероидными гормонами и ЛПОНП/апоЕ в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот. Показана способность ЛПОНП иапоЕ снижать .скорость биосинтеза белка и нуклеиновых кислот и подавлять стимулирующий^ эффект биологически активных комплексов апоА-1 со стероидными гормонами.
Обнаружение разнонаправленности эффектов ЛПОНП/апоЕ и ЛПВП/апоА-1 раскрывает механизм регуляции опухолевого роста с участием макрофагов, который обусловлен способностью макрофагов, с одной стороны, поглощать ЛПВП и стероидные гормоны с образованием биологически активного комплекса, усиливающего биосинтез белка и нуклеиновых кислот, а с другой' стороны, синтезировать и секретировать апоЕ, обладающий антипролиферативной активностью. Показано, что опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженным содержанием апоЕ.
Впервые методом флуоресцентной микроскопии показана возможность транспорта ЛПС в гепатоциты с использованием в качестве переносчика апоА-1. Результаты свидетельствуют о способности гепатоцитов участвовать в метаболической деградации эндотоксина при поглощении его в комплексе с ЛПВП и апоА-1. Путь нейтрализации ЛПС без участия макрофагов можно рассматривать как альтернативный, позволяющий снизить интенсивность воспалительного ответа. Показана способность ЛПВП ингибировать продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1(3 перитонеальными макрофагами мышей.
На культуре клеток НА-1 гепатомы показана эффективность использования ЛПВП в качестве средства адресной доставки противоопухолевых лекарственных препаратов на примере рубомицина. На частицах ЛПВП обнаружены места связывания для препарата с различной степенью аффинитета. Показано повышение эффективности поглощения рубомицина опухолевыми клетками при использовании ЛПВП в качестве переносчика, обусловленное рецептор-опосредованным эндоцитозом. Отмечено увеличение цитотоксического эффекта препарата в комплексе с ЛПВП при снижении его терапевтических доз. Показана селективность воздействия препарата в комплексе с ЛПВП, более выраженная по 1 отношению к опухолевым клеткам.
Впервые проведено исследование возможности использования апоА-1 в качестве лизосомотропного агента и средства внутриклеточной доставки противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида. Обнаружен высокий аффинитет изониазида к апоА-1. Показана способность апоА-1 повышать свободную активность ферментов лизосом на фоне антимикобактериальной терапии. Отмечен противовоспалительный эффект апоА-1.
Теоретическая и практическая значимость работы. Рёшение поставленных в диссертации задач является важным этапом в изучении транспортной и регуляторной роли липопротеинов- плазмы» крови- и их белковых компонентов. Внесен важный вклад в понимание механизмов * проникновения биологически активных веществ в клетку в составе липопротеиновых комплексов. Результаты исследования свидетельствуют о том, что транспортируемые липопротеинами соединения проникают в клетку посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза. Изучение роли липопротеинов в регуляции пролиферации и клеточного роста имеет важное теоретическое значение для понимания молекулярных механизмов межклеточных взаимодействий в норме и в условиях опухолевого > роста и может служить« основой для повышения эффективности лечения онкологических больных.
Совокупность полученных фактов свидетельствует о перспективности использования ЛПВП и апоА-1 в качестве транспортных форм для биологически активных веществ и лекарственных препаратов, как в эксперименте, так и в клинике. Результаты работьт показывают перспективность дальнейшего, изучения' использования апоА-1 в качестве транспортной формы генетического материала при решении проблем генотерапии и генокоррекции.
Положения, выносимые на защиту:
1. ЛПВП в комплексе со стероидными гормонами усиливают процессы биосинтеза белка вг опухолевых клетках при участии макрофагов. Опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженной способностью к поглощению и метаболической деградации- белкового компонента ЛПВП: Стероидные гормоны оказывают стимулирующее влияние на поглощение и метаболическую деградацию ЛПВП:
2. Комплексы. апоА-1 со стероидными гормонами обладают высокой биологической активностью: усиливают процессы биосинтеза белка, и нуклеиновых кислот Br изолированных гепатоцитах и повышают активность гликолитического звена углеводного обмена:
3. ЛИВП/апоА-I в комплексе со стероидными гормонами и ЛПОНП/апоЕ характеризуются < разнонаправленностью эффектов в регуляции процессов биосинтеза белка и нуклеиновых кислот.
4. ЛПВП и anoÄ-I являются эффективной формой для направленного транспорта в клетки различных лекарственных средств: цитостатиков, противотуберкулезных и гормональных препаратов.
5. АпоА-1 проникает в ядерный аппарат гепатоцитов- и может использоваться в качестве средства адресной доставки генетического материала с последующей экспрессиештранспортируемого тена.
Апробация: результатов; исследования. Материалы диссертации докладывались, на I Съезде физиологов СНГ «Физиология- и здоровье человека»-(19-23 сентября*; 2005 г, Сочи)- V конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (19-22 мая 2008 г, Москва),. Всероссийской конференции; с: международным участием «Молекулярная онкология» (1-3 октября 2008 г, Новосибирск), Российской? научно-практической конференции* с международным« участием «Современная онкология: достижения и перспективы развития» (10-11 сентября 2009 г, Томск); EASL Special Conférence on NAFLD/NASH and Related Metabolic Disease (24-26 ^ сентября 2009 г, Болонья, Италия), IV Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты; компенсаторноприспособительных процессов» (27-29 октября; 2009 г, Новосибирск)-и были представлены на III Всероссийской- научно-практической конференции с международным участием; «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (7-9 ноября 2007 г, Новосибирск), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов; (11-15 мая 2008 г, Новосибирск), II Съезде физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (29-31 октября 2008 г, Кишинев, Молдова), Iя Arnual World Congress of Regenerative Medicine & Stern Cell (2-4 декабря 2008 г, Гуанджой, Китай), Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (12-16' апреля 2010 г, Москва), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» (18-19 марта 2010 г, Новосибирск).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 27 научных работ, из них 12 статей в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.
Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Суменкова, Дина Валерьевна
выводы
1. ЛПВП в комплексе с кортизолом и прогестероном повышают скорость биосинтеза-белка в клетках асцитной карциномы Эрлиха при участии опухоль-ассоциированных макрофагов.
2. Показано участие макрофагов в метаболической деградации ЛПВП. Опухоль-ассоциированные макрофаги отличаются сниженной способностью к поглощению и метаболической деградации белкового компонента ЛПВП. Кортизол оказывает стимулирующее влияние на эти процессы, более выраженное для опухоль-ассоциированных клеток.
3. АпоА-1 в комплексе с женскими половыми гормонами и прегненолоном стимулирует процессы биосинтеза белка и ДНК в изолированных гепатоцитах крыс.
4. Комплекс апоА-1 с тетрагидрокортизолом, усиливая процессы биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в изолированных гепатоцитах, повышает интенсивность поглощения глюкозы клетками и накопление лактата, что свидетельствует об активации гликолитического звена углеводного обмена.
5. На культуре гепатоцитов, клеток асцитной НА-1 гепатомы и карциномы Эрлиха установлена разнонаправленность эффектов ЛПОНП/апоЕ и ЛПВП/апоА-1 в комплексе со стероидными гормонами в регуляции процессов биосинтеза белка и^ нуклеиновых, кислот. ЛПОНП и апоЕ снижали скорость биосинтеза белка и нуклеиновых кислот и подавляли стимулирующий эффект комплексов апоА-1 со стероидными гормонами.
6. Методами флуоресцентного анализа показан транспорт ЛПС в гепатоциты с использованием в качестве переносчика апоА-1.
7. ЛПВП и ЛПНП ингибировали продукцию провоспалительного цитокина ИЛ-1Р опухоль-ассоциированными макрофагами мышей с асцитной НА-1 гепатомой. Наиболее выраженный эффект отмечен для
218
ЛПВП и их комплексов с кортизолом. Ингибирующий эффект проявлялся и при стимуляции« макрофагов комплексами ЛПВП с полисахаридами бактериального и дрожжевого происхождения.
8. ЛПВП являются эффективной транспортной формой для противоопухолевого лекарственного препарата рубомицина. На частицах ЛПВП обнаружено ~ 60 мест связывания для препарата. Использование ЛПВП в качестве переносчика повышает эффективность транспорта рубомицина в клетки асцитной НА-1 гепатомы и его цитотоксичность при снижении дозировки преимущественно в отношении опухолевых клеток.
9. АпоА-I может служить эффективной транспортной формой для противотуберкулезного лекарственного препарата изониазида. На молекуле апоА-I обнаружено ~ 70 мест связывания для препарата. j
Использование апоА-I на фоне антимикобактериальной терапии повышает свободную активность ферментов лизосом в печени (катепсина D и кислой фосфатазы).
Ю.Липопротеины способны транспортировать внеклеточные ДНК в плазме крови. Показано, что 11-13% внеклеточной ДНК в плазме крови циркулирует в составе липопротеиновых комплексов, из них 7-8% — в составе ЛПВП.
11.На модели эукариотического вектора pE-GAG со встроенным геном флуоресцирующего белка GFP Aequoria Victoria в экспериментах in vitro и in vivo показана способность апоА-I выступать в качестве транспортной формы генетического материала в клетку с последующей экспрессией транспортируемого гена и накоплением флуоресцирующего белка в цитоплазме.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Суменкова, Дина Валерьевна, Новосибирск
1. Баранов O.K., Савина М.А. Иммуногенетика липопротеинов -Новосибирск: Наука. 1988. - 128 с.
2. Беляев Н.Д., Будкер В.Г., Горохова O.E., Соколов A.B. Mg 2+-зависимое взаимодействие ДНК с эукариотическими клетками // Молекулярная биология. 1988. - Т. 22. - С. 1667 - 1672.
3. Бельченко Д.И. Значение ß-липопротеидной фракции сыворотки крови лихорадящих животных в регуляции гексокиназной активности тканей // Вопросы медицинской химии. 1967. - Т. 13, № 5. - С. 539 - 543.
4. Бернштейн Л.М., Саатов Т.С., Саипов Д., Абдукаюмова М.Х., Дильман В.М. Влияние липопротеидов сыворотки крови человека на некоторые показатели тиреоидной функции крыс // Проблемы эндокринологии. — 1982. Т. 28, № 3. - С. 72 - 76.
5. Викторов A.B., Юркив В.А. Связывание липополисахарида и комплексов липополисахарида с сывороточными липопротеинами низкой плотности с макрофагами печени // Биомедицинская химия. — 2006.-Т. 52, № 1.-С. 36-43.
6. Вольский H.H., Персиянова В.О., Гребенщиков А.Ю., Козлов В.А. Участие АКМ в индуцированном глюкокортикоидами апоптозе тимоцитов мыши // Иммунология. — 1998. — № 5. — С. 44 — 46.
7. П.Гичев Ю.П., Граудиня Ж.11: Культура;ткани печени в гепатологии. — Новосибирск: Наука СО. 1986. 86 с.
8. Данченко Е.О. Влияние препаратов желчных кислот на,биосинтез:ДНК,, апоптоз-и некроз гепатоцитов- in vitro II Вопросы- медицинской;химии. — 2001. — Т. 47, № 2. С. 30 - 37. '
9. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник; биохимика: / Пер. с англ. М.: Мир. - 1991. - С. 464 - 465.
10. Ильин В~С., Титова F.B: О зависимости тормозящих гексокиназу свойств Р-липопротеидной фракции плазмы от кортизона и инсулина // Вопросы медицинской химии. 1956. - Т. 11, № 4. - С. 243 — 251.
11. Kapp Ян. Макрофаги: обзор ультраструктуры и функции. М.: Медицина. - 1978. - 189 с.
12. Климов А.Н. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. — Санкт-Петербург. 1999. - 512 с.
13. Короленко Т.А., Жанаева С .Я., Фаламеева О.Ф., Каледин В.И., Филюшина Е.Е., Бузуева H.H., Пауль Г.А. Хитотриозидаза как маркер стимуляции макрофагов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - Т. 130, № 10. - С. 391 - 394.
14. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии. — М.: Мир. — 1986.-496 с.
15. Лакин Г.Ф. Биометрия / Учеб. пособие для биология, спец. ВУЗов. — М.: Высшая школа. — 1980. — 293 с.
16. Лактионов П.П., Рыкова Е.Ю., Крепкий Д.В., Брыксин A.B., Власов В.В. Взаимодействие олигонуклеотидов с белками барьерных жидкостей // Биохимия. — 1997. Т. 62.-С. 716 - 723.
17. Маурер Г. Разработка химически-определенных бессывороточных сред для клеток млекопитающих // В кн.: Культура животных клеток. Методы / Пер. с англ. под ред. Р. Фрешни. М.: Мир. - 1989. - С.27-55.
18. Панин Л.Е. Молекулярные механизмы регуляции клеточной пролиферации и опухолевого роста // Бюллетень СО РАМН. — 2002. — № 2. С. 8 - 14.
19. Панин JI.E. Роль кооперативного эффекта липопротеинов и гормонов в регуляции лизосомального аппарата клеток // Вопросы медицинской химии. 1987. - Т. 33, № 5. - С. 96 - 102.
20. О.Панин Л.Е. Явление стимуляции резидентными макрофагами биосинтеза белка в паренхимных клетках органов и тканей // Бюллетень СО РАМН. 1998. - № 3. - С. 11 - 23.
21. Панин Л.Е., Атучина Н.В., Третьякова Т.А. Кооперативный эффект глюкокортикоидов, адреналина и ЛПВП в регуляции активности гексокиназы печени //Проблемы эндокринологии—1990.-№ 2.-С.83-86.,
22. Панин Л.Е., Биушкина Н.Г., Поляков Л.М. Количественная характеристика, взаимодействия липопротеинов сыворотки, крови со стероидными гормонами // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1992. - Т. 112. - С. 34 - 36.,
23. Панин Л.Е., Клейменова Е.Ю. Роль аполипопротеина A-I, стероидных гормонов и их комплексов в регуляции биосинтеза белка и ДНК в лимфоцитах селезенки // Иммунология. — 2002. № 4. — С. 206 — 208.
24. Панин Л.Е., Костина Н.Е. Взаимодействие аполипопротеина A-L человека и оболочечных белков ВИЧ-1 с нативным и рекомбинантным рецептором CD4 // Вопросы,вирусологии. 2003. - Т. 48, № 1.-С.24-26.
25. Панин Л.Е., Костина Н.Е., Проняева Т.Р. Взаимное влияние оболочечных белков ВИЧ-1 и аполипопротеина А-1 на синтез белка и ДНК Т-лимфоцитами человека // Иммунология. — 2003. — Т. 24, № 4. -С. 203 204.
26. Панин Л.Е., Кузьменко Д.И., Колпаков А.Р. Роль липопротеидов крови в адаптивной перестройке митохондриального аппарата печени крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1982. - Т. 94. -С. 50-52.
27. Панин Л.Е., Куницын В.Г., Поляков Л.М. Механизмы взаимодействия тетрагидрокортизола- и> его комплекса с аполипопротеином А-1 с регуляторными цис-элементами ДНК вида СС(ОСС)5 / ОС(СОО)5 // Биофизика. 2008. - Т. 53, № 1. - С. 42 - 47.
28. Панин Л.Е., Останина Л.С., Атучина Н.В. Иммунохимический анализ общих антигенных детерминант в молекуле инсулина и апопротеина В // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1994. — Т. 68, №9.-С. 258-261.
29. Панин Л.Е., Поляков Л.М. Изучение взаимоотношений между глюкокортикоидной функцией коры надпочечников и липопротеидами сыворотки крови // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1976. - № 10. - е. 1202 - 1204.
30. Панин Л.Е., Поляков Л.М. Механизм регуляции стероидогенеза в надпочечниках липопротеидами сыворотки крови // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины—1979.-Т. 88, № 9.-С.267-269.
31. Панин J1.E., Поляков JI.M., Колосова Н.Г., Русских Г.С., Потеряева О.Н. Распределение токоферола и аполипопротеин-А-1-иммунореактивности в хроматине печени крыс // Биологические мембраны. 1997. - Т. 14, № 5. - С. 512 - 519.
32. Панин JI.E., Поляков JI.M., Розуменко A.A., Биушкина Н.Г. Транспорт стероидных гормонов липопротеидами сыворотки крови // Вопросы медицинской химии. 1988. - № 5. - С. 56 - 58.
33. Панин JI.E., Поляков JI.M., Кузьменко А.П., Потеряева О.Н., Скрыль Г.Ш. Обнаружение апопротеин A-1-иммунореактивности в хроматине ядер гепатоцитов крыс // Биохимия. 1992. — Т. 57, № 6. — С. 826 — 831.
34. Панин JI.E., Русских Г.С., Поляков JI.M. Обнаружение иммунореактивности к- аполипопротеинам' A-Ij В и Е в ядрах клеток тканей крыс // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 12. - С. 1684 - 1689.
35. Панин JI.E., Свечникова И.Г., Маянская Н:Н. Роль плазменных липопротеидов высокой плотности как модуляторов специфического гормонального эффекта гидрокортизона // Вопросы медицинской химии. 1990. - Т. 36, № 3. - С. 60 - 62.
36. Панин JI.E., Тузиков Ф.В., Тузикова H.A., Поляков JI.M. Особенности взаимодействия комплексов кортизол-аполипопротеин A-I и тетрагидрокортизол-аполипопротеин A-I с эукариотической ДНК // Молекулярная биология. 2006. -Т. 40, № 2. - С. 300 - 309.
37. Панин JI.E., Усынин И.Ф., Поляков JI.M. Поглощение йодированных липопротеидов плазмы крови субпопуляциями гепатоцитов исинусоидными клетками печени крыс // Вопросы медицинской химии. -1986.-Т. 32, №4. -С. 106-110.
38. Панин JIIE., Усынин И.Ф., Харьковский A.B., Потеряева О.Н. Влияние липопротеинов высокою плотности и гидрокортизона на продукцию аполипопротеина Е клетками Купфера // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1998.-Т.126, № 7.-С.43-45.
39. Панин JI.E., Усынин И.Ф., Харьковский A.B., Трубицына О.М. Роль клеток Купфера в регуляции биосинтеза белка в гепатоцитах // Вопросы медицинской химии. 1994. - Т. 40, № 4. - С. 6 — 8.
40. Панин JI.E., Филатова,Т.Г. О кооперативном эффекте гидрокортизона, адреналина и липопротеидов высокой плотности в регуляции активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени // Проблемы эндокринологии. 1986. - № 4. - С. 69 - 71.
41. Панин JI:E., Хощенко О.М. Роль.резидентных макрофагов в регуляции биосинтеза ДНК и белка в клетках асцитной гепатомы мышей линии НА-1 // Вопросы онкологии. 2003. - Т. 49. - С. 472 - 475.
42. Панин Л.Е., Хощенко- О.М., Поляков Л.М. Влияние стероидных гормонов в. комплексе с аполипопротеином A-I на биосинтез ДНК и белка в клетках асцитной гепатомы НА-1 // Вопросы онкологии. — 2007. Т. 53, № 5. - С. 562 - 565.
43. Панин. Л.Е., Хощенко О.М., Усынин.И.Ф. Роль аполипопротеина A-I в активации биосинтеза' белка и ДНК в гепатоцитах под влиянием стероидных гормонов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2001.-Т. 131, №-1.- С. 63-65.
44. Панин Л.Е., Часовских М.И., Поляков Л.М. Характеристика связывания и транспорта. бенз(а)пирена с липопротеидами сыворотки крови // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1991. -Т. 111, № 1.-С. 31-33.
45. Голяков Л.М. Липопротеины плазмы крови: транспортная система для биологически активных веществ и ксенобиотиков. Дис. . д.м.н. — Новосибирск. — 1996. 277 с.
46. Поляков Л.М. Липопротеины плазмы крови: транспортная система для ксенобиотиков и биологически активных веществ // Бюллетень СО РАМН. 19981 - № 41- С. 23.
47. Г1оляков Л.М., Панин Л.Е. Поглощение липопротеидов плазмы крови стероидпродуцирующими органами у крыс // Проблемы-эндокринологии. 1985. - Т. 31, № 4, - С. 72 -75.
48. Поляков Л.М., Панин Л.Е. Внутриклеточное распределение меченых липопротеидов в тканях крыс при физической.нагрузке // Цитология. -1991.-Т. 33.-С. 32 -37.
49. Поляков Л.М., Панин Л;Е. Липопротеинова регуляция метаболических процессов // Успехи современной биологии. — 2000. — Т. 120, № 3. — Gl 265-272. . . ■ ' . ' . '
50. Поляков JI.M., Панин Л.Е., Войцеховская Е.Э. Поглощение и внутриклеточное распределение липопротеидов в надпочечниках крыспри физической нагрузке // Проблемы: эндокринологии; — 1984. Т. 30. -С. 60-63.
51. Поляков Л.М., Потеряева О.Н., Панин Л.Е. Определение апопротеина А-Г методом иммуноферментного анализа // Вопросы, мед. химии. — 1991. — Т. 37, № 1. С. 89 - 92.
52. Поляков Л.М., Часовских М.И., Панин Л.Е. Липопротеины — уникальная транспортная система для ксенобиотиков и биологически активных веществ // Успехи современной биологии — 1992. — Т. 112, № 4.-С. 601 -608.
53. Рыкова Е.Ю., Скворцова Т.Э., Хоффман А.Л., Тамкович С.Н., Стариков
54. A.B., Брызгунов O.E., Пермякова В.И., Варнеке Е., Шакиель Г., Власов
55. B.В., Лактионов П.П. Циркулирующие внеклеточные ДНК и РНК крови в диагностике опухолей молочной железы // Биомедицинская химия. 2008. - Т. 54, №1. - С. 94 - 103.
56. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. — М.: Наука. — 1984. — 240 с.
57. Свечникова И.Г. Роль кооперативного эффекта глюкокортикоидов и липопротеидов высокой плотности в активации хроматина печени крыс при стрессе. Автореферат дис. . к.б.н. — Новосибирск. 1993. - 23 с.
58. Тамкович С.Н., Власов В.В:, Лактионов П.П. Циркулирующие ДНК крови и их использование в медицинской диагностике // Молекулярная биология. 2008. - Т. 42, № 1. - С. 12 - 23.
59. Уголев А.Т., Лукьянова Л.Д., Дудченко A.M. Получение изолированных гепатоцитов и общие характеристики их функционально-метаболического статуса // В кн.: Гепатоцит: функционально-метаболические свойства. — М.: Наука. — 1985. —С.9-30.
60. Усынин И.Ф. Роль макрофагов в регуляции метаболических процессов в печени при функциональном напряжении организма. Автореферат дис. . д.б.н. — Новосибирск. — 1999. — 40 с.
61. Усынин И.Ф. Метод получения паренхимных клеток печени // Новые методы научных исследований в клинической и экспериментальноймедицине / Под ред. В.П. Лозового. Новосибирск: СО АМН. - 1980. -С. 96-98.
62. Усынин И.Ф., Панин Л.Е., Харьковский A.B., Горячева М.В. Роль непаренхимных клеток печени в активации синтеза белка в гепатоцитах при стимуляции системы мононуклеарных фагоцитов // Биохимия. 1995. - Т. 60, № 4. - С. 541 - 550.
63. Фибих X., Клейст X. Определение аффинности антител // В кн.: Иммунологические методы / Пер. с нем. под ред. Г. Фримеля. — М.: Медицина. 1987. - С.44 - 48.
64. Фрешни Р. Принципы стерильной работы и ведение клеток в культуре // В кн.: Культура животных клеток. Методы / Пер. с англ. под ред. Р. Фрешни. М.: Мир. - 1989. - С.10 - 26.
65. Хант С. Выделение лимфоцитов и вспомогательных клеток // В кн.: Лимфоциты: методы / Пер. с англ. под ред. Дж. Клауса. М.: Мир. -1990.-С. 15-68.
66. Шаменков Д. А., Петров* В.Е., Аляутдин Р.Н. Влияние аполипопротеинов на транспорт даларгина через гематоэнцефалический барьер // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. - Т. 142, № 12. - С. 659 - 662.
67. Шаткин А. Определение содержания РНК, ДНК и белка с помощью меченых предшественников и последующего химического фракционирования // В кн.: Методы вирусологии и молекулярной биологии. М.: Мир. - 1972. - С. 190 - 193.
68. Шкурупий В.А. Туберкулезный гранулематоз. Цитофизиология и адресная терапия. М.: РАМН. - 2007. - 536 с.
69. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. — М.: Наука. 1977.-419 с.
70. Юдаев Н.А., Афиногенова С.А., Крехова М.А. Биохимия гормонов и гормональной регуляции. М.: «Наука». 1976. - С. 171 - 227.
71. Acton S., Rigotti A., Landschulz К.Т., Xu S., Hobbs H.H., Krieger M. Identification of scavenger receptor SR-BI as a high density lipoprotein receptor // Science. 1996. - Vol. 271. - P. 518-520.
72. Acton S.L., Kozarsky K.F., Rigotti A. The HDL receptor SR-BI: A new therapeutic target for atherosclerosis? // Mol. Med. Today. 1999. - Vol. 5. -P. 518-524.
73. Alaupovic P. The nomenclature of serum lipoproteins // Amer. Assoc. Bioanalysis. 1978. - V. 4. - P. 1 - 3.
74. Anderson N.G. The mass isolation of whole cells from rat liver. Science. -1953.-Vol. 117.-P. 627-628.
75. Anderson D.W., Nichols A.V., Forte T.M., Lindgren F.T. (1977) Particle distribution of human serum high density lipoproteins // Biochim. Biophys. Acta. 1977. - Vol. 493. - P. 55 - 68.
76. Andrews K.L., Moore X.L., Chin-Dusting J.P. Anti-atherogenic effects of high-density lipoprotein on nitric oxide synthesis in the endothelium // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2010. - Vol. 37 (7). - P. 736 - 742.
77. Arakawa R., Yokoyama S. Helical apolipoproteins stabilize ATP-binding cassette transporter A1 by protecting it from thiol protease-mediated degradation // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277 (25). - P. 22426 - 22429.
78. Aronson N.N.Jr., Dennis P.A., Dunn B.A. Metabolism of leupeptin and its effect on autophagy in the perfused rat liver // Acta biol. Med. Germ. -1981. -Bd. 40 (10-11). S. 1531 - 1538.
79. Asztalos B.F., Sloop C.H., Wong L., Roheim P.S. (1993) Two-dimensional electrophoresis of plasma lipoproteins: recognition of new apo A-I-containing subpopulations // Biochim. Biophys. Acta. 1993. - Vol. 1169.-P. 291 -300.
80. Attalah; N.A., Lata G.F. Steroid-protein interactions studied by fluorescence quenching // Biochem. Biophys. Acta. 1968. - V. 168. (2). -P. 321 -333.
81. Attie A.D., Kastelein J:P., Hayden M.R. Pivotal role of ABCA1 in reverse cholesterol transport influencing HDL levels and susceptibility to atherosclerosis // J. Lipid. Res. 2001. - Vol. 42 (11). - P. 1717 - 1726.
82. Barbaras R., Grimaldi, Negrel P. R., Ailhaud G. Characterization of high-density lipoprotein binding and cholesterol efflux in cultured mouse adipose cells // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - Vol. 888. - P. 143 - 156.
83. Barrett A.J., Heath M.F. Lysosomal enzymes // In: Lysosomes: a laboratory handbook / Eds. J.T.Dingle. Amsterdam-London: North Holland. - 1972. - P. 46 - 135.
84. Barter P.J., Nicholls S., Rye K.A., Anantharamaiah G.M., Navab M., Fogelman A.M. Antiinflammatory properties of HDL // Circ. Res. — 2004. — Vol. 95 (8). P. 764 - 772.
85. Basu S.K., Goldstein J.L., Brown* M.S. Independent pathways for secretion of cholesterol and apolipoprotein E by macrophages // Science. — 1983. Vol. 219 (4586). - P. 871 - 873.
86. Behrens W.A., Madere R. Transport of a-and y-tocopherol in human plasma lipoproteins // Nutrition Research. 1985. — Vol. 5 (2). — P. 167-174.
87. Beisiegel U., Weber W., Bengtsson-Olivecrona G. Lipoprotein lipase enhances the binding of chylomicrons to low density lipoprotein receptor-related protein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - Vol. 88. - P. 8342 -8346.
88. Benvenga S., Cahnmann H.J., Gregg R., Robbins J. Binding of thyroxine to human plasma low density lipoproteins though specific interaction with apoB-100 // Biochimie. 1989. - Vol. 71. - P. 263 - 268.
89. Benvenga S., Cahnmann H.J., Gregg R., Robbins J. The thyroxine-binding site of human apolipoprotein A-I location in the N-terminal domain //Endocrinology. 1991.-Vol. 128.-P. 547-552.
90. Berry M.N., Friend D.S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells // J. Cell Biol. 1969. - Vol. 43. - P. 506 - 520.
91. Biesbroeck R., Oram J. F., Albers J. J., Bierman E. L. Specific high affinity binding of high density lipoprotein to cultured human skin fibroblasts and arterial smooth muscle cells // J. Clin. Invest. — 1983. — Vol. 71.-P. 525-539.
92. Bingle L., Brown N.J., Lewis C.E. The role of tumor-associated macrophages in tumor progression: implications for new anticancer therapies // J. Pathol. 2002. - Vol. 196. - P. 254 - 265.
93. Bocharov A.V., Vishnyakova T.G., Baranova I.N., Patterson A.P., Eggerman T.L. Characterization of a 95 kDa high affinity human- high density lipoprotein-binding protein // Biochemistry. 2001. - Vol. 40 (14). -P. 4407-4416.
94. Boisfer E., Stengel D., Pastier D., Laplaud P.M., Dousset N., Ninio E., Kalopissis A.D. Antioxidant properties of HDL in- transgenic mice overexpressing human-apolipoprotein A-II // J. Lipid. Res. 2002. - Vol. 43.-P. 732-741.
95. Bojanovski D., Gregg R.E., Ghiselli G., Schaefer E.J., Light J.A., Brewer H.B. Jr. Human apolipoprotein A-I isoprotein metabolism: proapoA-I conversion to mature apoA-I // J. Lipid. Res. 1985. — Vol. 26 (2). - P. 185- 193.
96. Borhani D.W., Rogers D.P., Engler. J.A., Brouillette* C.G. Crystal* structure of truncated human apolipoprotein A-I suggests a lipid-bound conformation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1997. Vol. 94 (23). - P. 12291 - 12296.
97. Bornstein J. Insulin-reversible inhibition of glucose utilization by serum lipoprotein fractions // J. Biol. Chem. 1953. — Vol. 205. —P.513-519.
98. Bowry V.W., Stanley K.K., Stacker R. High density lipoprotein is the major carrier of lipid hydroperoxides'in» human blood plasma from fasting donors // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1992. - Vol. 89. - P. 10316 -10320.
99. Brissette L., Noel S. P. The effects of human low and high density lipoproteins on the binding of rat intermediate density lipoproteins to rat liver membranes // J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261. - P. 6847 - 6852.
100. Brodeur M.R.,,Luangrath V., Bourret G., Falstrault L., Brissette L. Physiological importance of SR-BI in the in vivo metabolism of human
101. HDL and LDL in male and female mice // J. Lipid. Res. 2005. - Vol. 46 (4).-P. 687-696.
102. Brown M.S., Goldstein J.L. Receptor-mediated endocytosis: insights from the lipoprotein receptor system // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1979.- Vol. 76 (7). P. 3330 - 3337.
103. Breslow J.L. Apolipoprotein genetic variation and human disease// Physiol. Rev.- 1988. Vol. 68. - P. 85 - 132.
104. Burger D;, Dayer J.M. High-density lipoprotein-associated; apolipoprotein A-I: the missing link between infection; and' chronic inflammation? // Autoimmun. Rev. -2002:- Vol: 1. P. Ill - 117.
105. Calabresi L.,.Gomaraschi M;, Franceschini G! Endothelial ¡protection by high-density lipoproteins: from bench to bedside // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.-2003.-Vol. 23.-P. 1724-1731.
106. Cardona P.J., Ruiz-Manzano J. On the nature of Mycobacterium tuberculosis-latent bacilli // Eur. Respir. J. 2004.- Vol. 24 (6). - P. 1044 -1051.
107. Carson M. RIBBONS 2.0. // J: Appl. Ciystallogr. 1991. - Vol. 24. -P. 958-961.
108. Cavelier C., Lorenzi I., Rohrer L., von Eckardstein A. Lipid efflux by the ATP-binding cassette transporters ABCA1 and ABCG1 // Biochim. Biophys. Acta. 2006. - Vol. 1761 (7). - P. 655 - 666.
109. Chapman M!J. Lipoproteins and the liver (author's transl) // Gastroenterol. Clin. Biol. 1982. - Vol. 6 (5). - P. 482 - 499.
110. Chapman M.J., Goldstein S., Lagrange D., Laplaud P.M. A density gradient ultracentrifugal procedure for the isolation of the major lipoprotein classes from human serum // J. Lipid. Res. 1981. - Vol. 22. - P. 339 — 358.
111. Cheing M. Characterization and distribution* of HDL subpopulations // Proc. of Workshop on Lipoprotein Heterogeneity / Ed. By K. Lippel. -Bethesda: NIHPubl. 1987. - Vol. 2646 (87). - P. 341 - 349.
112. Chen Y. I., Kraemer F. B., Reaven G. M. Identification of specific high density lipoprotein-binding sites in rat testis and regulation of binding by human chorionic gonadotropin // J1. Biol. Chem. 1980. - Vol. 255. — P. 9162-9167.
113. Chen W., Silver D.L., Smith J.D., Tall A.R. Scavenger receptor-BI inhibits ATP-binding cassette transporter 1-mediated cholesterol efflux in macrophages // Ji Biol. Chem. 2000. - Vol. 275 (40). - P. 30794 - 30800.
114. Chung H., Randolph A., Reardon I., Heinrikson R. The covalent structure of apoA-I from canine high density lipoproteins // J. Biol. Chem. -1982. Vol. 257 (6). - P. 2961 - 2967.
115. Cockerill G. W., Rye K., Gamble R. R., Vadas M. A., Barter P. J. High-density lipoproteins inhibit cytokine-induced expression of endothelial cell adhesion molecules // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. — 1995. — Vol. 15.-P. 1987- 1994.
116. Connelly P.W., Draganov D., Maguire G.F. Paraoxonase-1 does not reduce or modify oxidation of phospholipids by peroxynitrite // Free Radic. Biol. Med. 2005. - Vol. 38. - P. 164 - 174.
117. Connelly M.A., Williams D.L. SR-BI and cholesterol uptake into steroidogenic cells // Trends. Endocrinol. Metab. 2003. - Vol. 14 (10). - P. 467 - 472.
118. Connelly M.A., Williams D.L. SR-BI and HDL cholesteryl ester metabolism // Endocr: Res. 2004. - Vol; 30 (4). - P. 697 - 703.
119. Corvilain B. Lipoprotein metabolism // Rev. Med. Brux. 1997. - ; " ; Vol. 18 (1). - P. 3 -9: !
120. Coussens L.M., Werb Z. Inflammation and cancer // Nature. — 20021 — . Vol. 420 (6917). P. 860 - 867. ':
121. Culver K.W. Gene Therapy: A Handbook for Physicians. N.Y. May Ann Liebert Inc. Publ. 1994. - 117 p.
122. Czartoryska B., Tylki-Szymanska A., Gorska D. Serum chitotriosidase activity in Gaucher patients on enzyme replacement therapy // Clin. Biochem. 1998. - Vol. 31 (5). - P. 417 - 420.
123. Darbon J.M., Tournier J.F., Tauber J.P., Bayard' F. Possible role of protein. phosphorylation in: the mitogenic effect of high density lipoproteins on cultured vascular endothelial cells // J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261 (17).- P. 8002-8008. '
124. Davidsson P., Hulthe Ji, Fagerberg B., Camejo G. Proteomics of apolipoproteins and associated proteins from plasma high-density lipoproteins // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2010. - Vol. 30 (2). - P. 156- 163.
125. Dean M., Hamon Y., Chimini G. The human ATP-binding cassette
126. ABC) transporter superfamily // J: Lipid. Res. 2001. - Vol. 42 (7). - P.1 ' i ■ ' . ■ • '1007- 1017.
127. De Duve Ch., Pressman B.C., Gianetto R., Wattiaux R., Appelmans F. Tissue fractionation studies. 6. Intracellular distribution patterns of enzymes in rat-liver tissue // Biochem. Ji- 1955. Vol. 60 (4). - P. 604 - 617.
128. De Duve Ch. General properties of lysosomes. The lysosomes concept // Giba foundation symposium on lysosomes /'Eds. A.V. de Reuck, M.P. Cameron. London. — 1963. — P. 1—31.'' : ■ ' '■ ' '' ■' '238V'
129. Deguchi H., Fernandez J.A., Hackeng T.M., Banka C.L., Griffin J.H. Cardiolipin is a normal component of human plasma lipoproteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. Vol. 97. - P. 1743 - 1748.
130. Deretic V., Vergne I., Chua J., Master S., Singh S.B., Fazio J.A., Kyei G. Endosomal membrane traffic: convergence point targeted by Mycobacterium tuberculosis and HIV // Cell Microbiol. 2004. - Vol. 6 (11).-P. 999-1009.
131. Desanctis J.B., Blanca I., Bianco N.E. Effects of different lipoproteins on the proliferative response of interleukin-2-activated T lymphocytes and large granular lymphocytes // Clin. Sci. 1995. - Vol. 89. - P. 511 - 519.
132. Desanctis J.B., Blanca I., Bianco N.E. Secretion of cytokines by natural killer cells primed with interleukin-2 and stimulated with different lipoproteins // Immunology. 1997. - V. 90. - P. 526 - 533.
133. De Smidt P.C., van Berkel T.J. LDL-mediated drug targeting // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 1990. - Vol. 7 (2). - P. 99 - 120.
134. Dodson R. E., Shapiro D. J. Vigilin, a ubiquitous protein with 14 K homology domains, is the estrogen-inducible vitellogenin mRNA 3'-untranslated region-binding protein // J. Biol. Chem. 1997. — Vol. 272. - P. 12249- 12252.
135. Draganov D.I., Teiber J.F., Speelman A., Osawa Y., Sunahara R., La Du B.N. Human paraoxonases (PON1, PON2, and PON3) are lactonaseswith overlapping and distinct substrate specificities // J. Lipid. Res. 2005. -Vol. 46.-P. 1239- 1247.
136. Duriez P., Fruchart J.C. High-density lipoprotein subclasses and apolipoprotein A-I // Clin. Chim. Acta. 1999. - Vol. 286. - P. 97 - 114.
137. Eisenberg S. High density lipoprotein metabolism // J. Lipid. Res. -1984.-Vol. 25 (10).-P. 1017- 1058.
138. Emancipator K., Csako G., Elin R.J. In vitro inactivation of bacterial endotoxin by human lipoproteins and apolipoproteins // Infect. Immun. -1992. Vol. 60 (2). - P. 596 -601.
139. Feig J.E., Shamir R., Fisher E.A. Atheroprotective effects of HDL: beyond^reverse cholesterol-transport // Gurr. Drug .Targets. 2008. - Vol. 9 (3).-P. 196-203.
140. Feingold K.R., Funk J.L., Moser A.II., Shigenada J.K., Rapp J.H., Grunfeld C. Role for circulating lipoproteins in protection from endotoxin toxicity // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63 (5). - P. 2041 2046.
141. Feng M:, Cai Q., Shi X., Huang 1-І., Zhou P., Guo X. Recombinant high-density lipoprotein complex as a targeting system of nosiheptide to liver cells M J; Drug Target. 2008. -Vol. 16 (6).-P. 502- 508:
142. Fenton M.J., Golenbock D.T. LPS-binding proteins and receptors // J. of Leukocyte Biol. 1998: - Vol. 64^ - P: 25 - 31.
143. Fidge N.H. High density lipoprotein receptors, binding proteins, and ligands // J. Lipid. Res. 1999. - Vol. 40 (2). - P. 187 - 201.
144. Fidge N., Kagami A., O'Connor M. Identification of a high density lipoprotein binding protein from adrenocortical membranes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985. - Vol. 129. - P. 759 - 765.
145. Firestone R.A. Low-density lipoprotein as a vehicle for targeting antitumor compounds to cancer cells // Bioconjug. Chem. 1994. - Vol. 5 (2).-P. 105-113.
146. Fiske C.H., Subbarow Y. The colorimetric determination of phosphorus // J. Biol. Chem. 1925. - Vol. 66 (2). - P. 375 - 400.
147. Fluiter K., van Berkel T.J. Scavenger receptor B1 (SR-B1) substrates inhibit the selective uptake of high-density-lipoprotein cholesteryl esters by rat parenchymal liver cells // Biochem. J. 1997. - Vol. 326. - P. 515-519.
148. Fox E. S., Thomas P., Broitman S. A. Uptake and modification of I-lipopolysaccharide by isolated rat Kupffer cells // Hepatology. — 1988. -Vol. 8.-P. 1550-1554.
149. Fox E. S., Thomas P., Broitman S. A. Clearance of gut-derived endotoxins by the liver. Release and modification of 3H, 14C-lipopolysaccharide by isolated'rat1 Kupffer cells // Gastroenterology. — 1989. -Vol. 96.-P. 456-461.
150. Frank P.G., Marcel Y.L. Apolipoprotein A-I: structure-function' relationships // J. Lipid. Res. 2000. -Vol.41 (6). - P. 853 - 872.
151. Freudenberg M. A., Kleine B., Galanos C. The fate of lipopolysaccharide in, rats: evidence: for chemical alteration in the molecule // Rev. Infect. Dis. 1984. - Vol. 6.- P: 483 - 487.
152. Glomset J.A. The plasma lecithins: cholesterol acyltransferase reaction //J. Lipid. Res. 1968. - Vol. 9 (2). - P. 155 - 167.
153. Gordon J.I., Smith D.P., Andy R., Alpers D.H., Schonfeld G., Strauss A.W. The primary translation product of rat intestinal apolipoprotein A-I mRNA is an unusual preproprotein // J. Biol. Chem. 1982. - Vol. 257 (2). -P. 971-978.
154. Goti D., Hammer A., Galla H.J., Malle E., Sattler W. Uptake of lipoprotein-associated a-tocopherol by primary porcine brain capillary endothelial cells // Neurochem. 2000. - Vol. 74 (4). - P. 1374 - 1383.
155. Graham D. L., Oram J. F. Identification and characterization of a high density lipoprotein-binding protein in cell membranes by ligand blotting // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 7439 - 7442.
156. Griffin J.H., Kojima K., Banka C.L., Curtiss L.K., Fernandez J.A. High density lipoprotein enhancement of anticoagulant activities of plasma protein S and activated protein C // J. Clin. Invest. 1999. - Vol. 103 (2). -P. 219-227.
157. Gwynne J.T., Mahaffee D., Brewer H.B. Jr, Ney R.L. Adrenal cholesterol uptake from plasma: lipoproteins: regulation by corticotrophin // Proc. NatL Acad. Sei. U S A. 1976; - Vol. 73 (12).-P. 4329- 4333.
158. Hahn S.E., Parkes J.G., Goldberg D.M. Apolipoprotein synthesis and secretion in HepG2 cells effects of monensin and; cycloheximidine // Biochem. Cell. Biol. 1992. - Vol. 70. - P. 1339 - 1346.
159. Hamalainen M;,.Lilja R., Kankaanranta H., Moilanen E. Inhibition of iNOSi expression and NO production by anti-inflammatory steroids. Reversal by histone deacctylase inhibitors // Pulm. Pharmacol. Ther. 2008. -Vol.21 (2).-P. 331 -339. .
160. Hamilton R.L, Moorehouse A., Havel R.J. Isolation and properties of nascent lipoproteins from highly purified1 rat hepatocytic Goldgi fractions // J. Lipid. Res. 1991.-Vol. 32.-P. 529-543.
161. Hardardottir I., Grunfeld C., Feingold K.R. Effects of endotoxin on lipid metabolism // Biochem. Soc. Trans. 1995. - Vol. 23 (4). - P. 1013 -1018.
162. Hatch F.T., Less R.S. Practical method for plasma lipoprotein analysis // Adv. Lipid Res. 1968. - Vol. 6. - P. 2 - 68.
163. Hajduk S.L., Moore D.R., Vasudevacharya J., Siqueira H., Torri A.F., Tytler E.M., Esko J.D. Lysis of Trypanosoma brucei by a toxic subspecies of human high density lipoprotein // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 5210-5217.
164. Hayashi M., Abe-Dohmae S., Okazaki M., Ueda K., Yokoyama S. Heterogeneity of highs density lipoprotein generated by ABCA1 and ABCA7 //J. Lipid. Res. -2005. Vol. 46 (8). - P. 1703 - 1711.
165. Herbert P.N., Shulman R.S., Levy R.I., Fredrickson-D.S. Fractionation of the C-apoproteins from human plasma very low density lipoproteins // J. Biol. Chem. 1973". - Vol: 248 (14). - P. 4941 - 4946.
166. Hersberger M:, von Eckardstein A. Modulation of high-density lipoprotein cholesterol/ metabolism andi reverse cholesterol transport // Handb. Exp. Pharmacol. 2005. - Vol. 170. - P. 537 - 561.
167. Hidaka H., Fidge N. Affinity purification-of the hepatic high-density lipoprotein receptor identifies two acidic glycoproteins and,enables further characterization of their, binding properties // Biochem J. — 1992. Vol. 284 (l).-P: 161-167.
168. Hidaka H., Hidaka E., Tozuka M., Nakayama J., Katsuyama T., Fidge N. The identification of specific high density lipoprotein binding3 sites on human blood monocytes using fluorescence-labeled ligand // J. Lipid. Res. — 1999.-Vol. 40 (6).-P. 1131-1139.
169. Ho Y.Y., Deckelbaum R.J., Chen Y., Vogel T., Talmage D.A. Apolipoprotein E inhibits serum-stimulated cell proliferation and enhances246serum-independent cell proliferation // J. Biol. Chem. 2001. — Vol. 276 (46).-P. 43455 - 43462.
170. Hoch S.O. DNA-binding domains, of fibronectin probed using Western blots // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1982. - Vol. 106 (4). -P. 1353- 1358.
171. Hodgson C.P. The vector Void in gene therapy // Biotechnology. -1995. Vol. 13. - P. 222 - 225.
172. Hong R. Thymocyte-macrophage roles in autoimmune diseases // Arthritis Rheum. 1977. - Vol. 20 (2). - P. 419 - 427.
173. Howard R.B., Christensen A.K., Gibbs F.A., Pesch L.A. The enzymatic preparation of isolated intact parenchymal »cells from rat liver // J. Cell Biol. 1967. - Vol. 35 (3). - P. 675 - 684.
174. Howell B.F. Kinetic methods, for detecting inhibitors in NADH for NADH-dependent enzymes // Methods Enzymol. 1980: - Vol.66.-P:55-62.
175. Hussain M.M., Zanni E., Kelly M., Zannis V. Synthesis, modification, and flotation properties of rat hepatocyte apolipoproteins // Biochim. Biophys. Acta. 1989. - Vol. 1001. - P. 90 - 101.
176. Hynds S.A., Welsh J., Stewart JM., Jack A., Soukop M., McArdle C.S., Caiman K.C., Packard C.J., Shepherd J. Low-density lipoprotein metabolism in mice with soft tissue tumours // Biochim. Biophys. Acta. — 1984. Vol. 795 (3). - P. 589 - 595.
177. James R.W., Deakin S.P. The importance of high-density lipoproteins for paraoxonase-1 secretion, stability, and activity // Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol. 37. - P. 1986 - 1994.
178. Ji Y., Jian B., Wang N., Sun Y., Moya M.L., Phillips M.C., Rothblat G.H., Swaney J.B., Tall A.R. Scavenger receptor BI promotes high- density lipoprotein-mediated cellular cholesterol efflux // J. Biol. Chem. 1997. -Vol. 272 (34). - P. 20982 - 20985.
179. Johnson W.J., Mahlberg F.H., Rothblat G.H., Phillips M.C. Cholesterol transport between cells and high-density lipoproteins // Biochim. Biophys. Acta. 1991. - Vol. 1085 (3). - P. 273-298.
180. Jonas A., Kezdy K.E., Wald J.H. Defined apolipoprotein* A-I conformations in reconstituted high density lipoprotein discs // J. of Biol. Chemistry. 1989. - Vol. 264 (9). - P. 4818-4824.
181. Jones M.K., Anantharamaiah G.M., Segrest J.P. Computer programs to identify and classify amphipathic alpha helical domains // J. Lipid. Res. -1992. Vol. 33 (2). - P. 287 - 296.
182. Kader A., Davis P.J., Kara M., Liu H. Drug targeting using low density lipoprotein (LDL): physicochemical factors affecting drug loading into LDL particles // J. Control. Release. 1998. - Vol. 55 (2-3). - P. 231 -243.
183. Kader A., Pater A. Loading anticancer drugs into HDL as well as LDL has little affect on properties of complexes and enhances cytotoxicity to human carcinoma cells // J. Control Release. 2002.-Vol.80(l-3).-P.29-44.
184. Kambouris A.M., Roach P.D., Calvert G.D., Nestel P.J. Retroendocytosis of high density lipoproteins by human hepatoma cell line, HepG2 // Arteriosclerosis. 1990. - Vol. 10. - P. 582 - 590.
185. Karlsson H., Leanderson P., Tagesson C., Lindahl M. Lipoproteomics II: mapping of proteins in high-density lipoprotein using two-dimensional gel'electrophoresis and mass spectrometry // Proteomics. — 2005. — Vol. 5. — P. 1431 1445.
186. Kawano K., Qin S., Vieu C., Collet X., Jiang X.C. Role of hepatic lipase and scavenger receptor BI in clearing phospholipid/free cholesterol-rich lipoproteins in PLTP-deficient mice // Biochim. Biophys. Acta. 2002. -Vol. 1583 (2).-P. 133- 140.
187. Kay M.A., Liu D., Hoogerbrugge P.M.4 Gene Therapy // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94. - P. 12744 - 12746.
188. Kim W.S., Elliott D.A., Kockx M., Kritharides L., Rye K.A., Jans D.A., Garner B. Analysis of apolipoprotein E nuclear localization using green fluorescent protein and biotinylation approaches // Biochem J. — 2008. -Vol. 409(3).-P. 701 -709.
189. Kim S.I., Shin D., Lee H., Ahn B.Y., Yoon Y., Kim M. Targeted delivery of siRNA against hepatitis C virus by apolipoprotein A-I bound cationic liposomes // J. Hepatol. 2009. - Vol. 50 (3). - P. 479 - 488.
190. Kim S.I., Shin D., Choi T.H., Lee J.C., Cheon G.J., Kim K.Y., Park M., Kim M. Systemic and specific delivery of small interfering RNAs to the liver mediated by apolipoprotein A-I // Mol. Ther. 2007. - Vol. 15 (6). - P. 1145- 1152.
191. Kiss R.S., Marie J., Marcel Y.L. Lipid efflux in human and mouse macrophagic cells: evidence for differential regulation of phospholipid and cholesterol efflux // J. Lipid. Res. 2005. - Vol. 46 (9). - P. 1877 - 1887.
192. Kostner K. Neue: suche nachsISBN/ISSN// J. fur. Kardiologie. 2002. -B. 9. --S. 328-331. ;
193. Kotite L., Zhang L.I I., Yu Z., Burlingame A.L., Havel R.J. Human apoC-IV: isolation; characterization, and immunochemical quantification; in plasma and plasma lipoproteins // J. Lipid Res. — 2003; — Vol. 44. — P. 1387-1394.
194. Kurata 11., Matsumoto A. rFhe family of HDL receptor // Nippon. Rinsho. 1999; - Vol. 57 (12). — P. 2704— 2710. ;• ■ 25i
195. Kwon Y.G., Min J.K., Kim K.M., Lee D.J., Billiar T.R., Kim Y.M. Sphingosine 1-phosphate protects human umbilical vein endothelial cells from serum-deprived apoptosis by nitric oxide production // J. Biol. Ghem. -2001.-Vol. 276.-P. 10627-10633.
196. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. - Vol. 227. - P. 680 - 685.
197. Lacko A.G., Nair M., Prokai L., McConathy W.J. Prospects and challenges of the development of lipoprotein-based formulations for anticancer drugs // Expert. Opin. Drug. Deliv. 2007. - Vol. 4 (6). - P!665-675.
198. Law S.W., Lackner K.J., Fojo S.S., Hobpattonkar, A'., Monpe J.C., Brewer H.B. Characteristics of human lipoproteins isolated' by selected-affinity immunosorbtion of apoA-I //Adv. Exp. Med. Biol. — 1989. Vol. 201.-P. 151-162.
199. Lee H., Kim S.I., Shin D., Yoon Y., Choi T.H., Cheon G.J., Kim M. Hepatic siRNA deliveiy using recombinant human» apolipoprotein A-I in mice // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2009. - Vol.378(2).-P. 192-196.
200. Lee J.Y., Parks J.S. ATP-binding cassette transporter A1 and its role in HDL formation // Curr. Opin. Lipidol. 2005. - Vol. 16 (1). - P. 19 - 25.
201. Lenz M., Miehe W.P., Vahrenwald F., Bruchelt G., Schweizer P., Girgert R. Cholesterol based antineoplastic strategies // Anticancer Res.1997.-Vol. 17(2A).-PI 1143-1146.
202. Lewis C., Murdoch C. Macrophage responses to hypoxia: implications for tumor progression and anti-cancer therapies // Am. J. Pathol. 2005. -Vol. 167(3).-P. 627-634.
203. Lewis G.F., Rader D.J. New insights into the regulation of HDL metabolism and reverse cholesterol transport // Circ. Res. 2005. - Vol. 96 (12).-P. 1221-1232.
204. Lehrer R.I., Lichtenstein A.K., Ganz T. Defensins: antimicrobial and cytotoxic peptides of mammalian cells // Annu. Rev. Immunol. 1993. — Vol. 11.-P. 105-128.
205. Lestavel S., Fruchart J.C. Lipoprotein receptors // Cell. Mol. Biol. -1994. Vol. 40 (4). - P. 461 - 481.
206. Liao X.L., Lou B., Ma J., Wu M.P. Neutrophils activation can be diminished by apolipoprotein A-I // Life Sci. 2005. - Vol. 77 (3). - P. 325 -335.
207. Liao W., Rudling M., Angelin B. Endotoxin suppresses mouse hepatic low-density lipoprotein-receptor expression via a pathway independent of the toll-like receptor 4 // Hepatology. 1999. - Vol. 30 (5). - P. 1252 -1256.
208. Lichtenstein A., Ganz T., Selsted M.E., Lehrer R.I. In vitro tumor cell cytolysis mediated by peptide defensins of human and rabbit granulocytes // Blood. 1986. - Vol. 68 (6). - P. 1407 - 1410.
209. Lin R.C. Quantification of apolipoprotein in rat serum and in cultured rat hepatocytes by enzyme linked immunosorbent assay // Anal. Biochemistry. 1986. - Vol. 154 (1). - P. 316 - 326.
210. Lin W.W., Karin M. A cytokine-mediated link between innate immunity, inflammation and cancer // J. Clin. Invest. — 2007. Vol. 117 (5). -P. 1175-1183.
211. Liu S., Khemlani L.S., Shapiro R.A., Johnson M.L., Liu K., Geller D.A., Watkins S.C.," Goyert S.M., Billiar T.R. Expression of CD14 by hepatocytes: upregulation by cytokines during endotoxemia // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66 (11). - P. 5089 - 5098.
212. Lou B., Liao X.L., Wu M.P., Cheng P.F., Yin C.Y., Fei Z. High-density lipoprotein as a potential for delivery of a lipophilic antitumoral drug into hepatoma cells // World J. Gastroenterol. 2005. - Vol. 11 (7).- P.954-959.
213. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. — 1951.-Vol. 193.-P. 265-275.
214. Luchi M., Munford R.S. Binding, internalization, and deacylation of bacterial lipopolysaccharide by human neutrophils // J. Immunol. — 1993. — Vol. 151.-P. 959-969.
215. Lundberg B. Assembly of prednimustine low-density-lipoprotein. complexes and their cytotoxic activity in tissue culture // Cancer Chemother. Pharmacol. 1992. - Vol. 29 (3). - P. 241 - 247.
216. Lund-Katz S., Phillips M.C. High density lipoprotein structure-function and role in reverse cholesterol transport // Subcell Biochem. — 2010. Vol. 51. - P. 183 - 227.
217. Lusis A.J. Genetic factors affecting blood lipoproteins: the candidate gene approach // J. Lipid. Res. 1988. Vol. 29 (4). - P. 397 - 429.
218. Lutton C., Fidge N. H. Distribution of high density lipoprotein binding proteins among various tissues in the rat // C. R. Acad. Sci. — 1994. — Vol. 317.-P. 731 -735.
219. Ma J., Liao X.L., Lou B., Wu M.P. Role of apolipoprotein A-I in protecting against endotoxin toxicity // Acta. Biochim. Biophys. Sin. (Shanghai). 2004. - Vol. 36 (6). - P. 419 - 424.
220. Macdonald J., Galley H.F., Webster N.R. Oxidative stress and gene expression in sepsis // British J. of Anaesthesia. — 2003. — Vol. 90 (2). — P. 221-232.
221. Macheboeuf M.A. Recherches sur les phosphoaminolipides et les sterides du plasma et du serum sanguinis // C.R. Acad. Sci. — 1929. Vol. 188. - P. 109-111.
222. Mahley R.W., Innerarity T.L., Rail S.C., Weisgraber K.H. Plasma lipoprotein: apolipoprotein structure and function // J. Lipid. Res. — 1984. -Vol. 25.-P. 1277- 1294.
223. Marcel Y.L., Kiss R.S. Structure-function relationships of apolipoprotein A-I: a flexible protein with dynamic lipid associations // Curr. Opin. Lipidol. 2003. -Vol. 14 (2).-P. 151-157.
224. Martinez L.O., Jacquet S., Tercé F., Collet X., Perret B., Barbaras R. New insight on the molecular mechanisms of high-density lipoprotein cellular interactions // Cell. Mol. Life. Sci. 2004. - Vol. 61 (18). - P. 2343 -2360.
225. Massamiri T., Tobias P.S., Curtiss L.K. Structural determinants for the interaction of lipopolysaccharide binding protein with purified high density lipoproteins: role of apolipoprotein A-I // J. Lipid. Res. — 1997. — Vol. 38 (3).-P. 516-525.
226. Mathai D., Fidge N. H:, Tozuka M., Mitchell; A. Simvastatin and cholestyramine treatment reduces the level of expression of high density lipoprotein binding proteins in rat liver // Arteriosclerosis. — 1990. — Vol. 10. -P. 1045- 1050.
227. Mendez A.J., Oram J.F., Bierman E.L. Protein kinase C as a mediator of high density lipoprotein receptor-dependent efflux of intracellular cholesterol // J. Biol. Chem. 1991. -Vol. 266 (16). P. 10104 - 10111.
228. Meng- Q.H., Bergeron J., Sparks D.L., Marcel Y.L. Role of apolipoprotein A-I in cholesterol transfer between lipoproteins. Evidence for. involvement of specific apoA-I domains //J. Biol. Chem.,- 1995. Vol. 270 (15).-P. 8588-8596.
229. Meng Q.H., Calabresi L., Fruchart J.C., Marcel Y.L. Apolipoprotein A-I domains involved in the activation of lecithin: cholesterol acyltransferase. Importance'of the central domain// J. Biol. Chem. 1993 . -Vol. 268 (23). - P. 16966 - 16973.
230. Milochevitchii C., Khalil A. Study of the paraoxonase and- platelet-activating factor acetylhydrolase activities with", aging // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty. Acids. 2001'. - Vol: 65 (5-6). - P. 241 - 246.
231. Miyata M., Smith J.D. Apolipoprotein E allele-specific antioxidant activity and effects omcytotoxicity by oxidative insults and amyloid peptides // Nat. Genet. 1996. - Vol. 14. - P. 55 - 61.
232. Mizutani.T., Sonoda, Y., Minegishi T., Wakabayashi K., Miyamoto K. Cloning, characterization, and cellular distribution of rat scavenger receptor class B type I (SRBI) in the ovary // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997.-- Vol. 234. --499 505.
233. Moestrup S.K., Kozyraki R. Cubilin, a high-density lipoprotein receptor//Curr. Opin. Lipidol. — 2000. Vol. 11 (2): - P. 133 - 140.
234. Monge J.C., Hoeg J.M., Law S.W., Brewer H.B. Effect of low density lipoproteins, high-density lipoproteins, and cholesterol: on apolipoprotein A-I rnRNÄun Hep G2cells // FEBS^Letfc 1989:-Vol: 243 (2):- PI 213-217. ,
235. Moore Z:W., I lui- D.Y., Moore Z.W. Apolipoprotein E inhibition of vascular hyperplasia and neointima formation-requires inducible nitric oxide synthase // J. Lipid Res. 2005. - Vol. 46 (10): - P. 2083 - 2090.
236. Morozkin E.S., Laktionov PIP., Rykova? E.Y., Vlassov V.V. Fluorometric quantification of RNA and DNA in solutions containing- both* nucleic acids // Anal. Biochem. 2003. - Vol. 322. - P. 48 - 50:
237. Munford .R.S.,, Hall-G.L. Purification of acyloxyacyl hydrolase, a leukocyte enzyme that removes secondary acyl chains from bacterial lipopolysaccharides //JLBiol. Ghem. 1989:-Vol. 264.-P. 15613-15619.
238. Nanjee M.N., Brinton E.A. Very small apolipoprotein A-I-containing particles from human plasma: isolation and quantification by highperformance size-exclusion chromatography // Clin. Chem. 2000. - Vol. 46.-P. 207-223.
239. Nanjee M., Miller N. The very high density lipoprotein fraction of rabbit plasma is rich in tissue-derived cholesterol // Biochim. Biophys. Acta. -1991.-Vol. 1086 (2).-P. 241 -244.
240. Navab M., Anantharamaiah G.M., Reddy S.T., Hama S., Hough G., Grijalva V.R., Yu N., Ansell B.J., Datta G., Garber D.W., Fogelman A.M. Apolipoprotein A-I mimetic peptides // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. -2005.-Vol. 25 (7).-P. 1325- 1331.
241. Nolte R.T., Atkinson D. Conformational analysis of apolipoprotein AI and E-3 based on primary sequence and circular dichroism // Biophys. J. -1992. Vol. 63 (5). - P. 1221 - 1239.
242. Noor R., Shuaib U., Wang C.X., Todd K., Ghani U., Schwindt B., Shuaib A. High-density lipoprotein cholesterol regulates endothelial» progenitor cells by increasing eNOS and preventing apoptosis //Atherosclerosis. 2007. - Vol. 192 (1). - P. 92 - 99.
243. Norata G.D., Callegari E., Marchesi M., Chiesa G., Eriksson P., Catapano A.L. High-density lipoproteins induce transforming growth factor-2 expression in endothelial cells // Circulation. 2005. - Vol. 111. - P. 2805 -2811.
244. Norata G.D., Catapano A.L. Molecular mechanisms responsible for the antiinflammatory and protective effect of HDL on the endothelium // Vase. Health. Risk. Manag. 2005. - Vol. 1 (2). - P. 119 - 129.
245. Oikawa S., Mendez A.J., Oram J.F., Bierman E.L., Cheung M.C. Effects of high density lipoproteins particles containing apoA-I, with or without apoA-II, on intracellular cholesterol efflux // Biochim. Biophys. Acta. 1993. - Vol. 1165. - P. 327 - 334.
246. Oram J.F. HDL apolipoproteins and ABCA1: partners in the removal of excess cellular cholesterol // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2003. — Vol. 23 (5).-P. 720-727.
247. Oram J.F., Brinton E.A., Bierman E.L. Regulation of high density lipoprotein receptor activity in cultured human skin fibroblasts and human arterial smooth muscle cells // J. Clin. Invest. 1983. - Vol. 72 (5). - P. 1611-1621.
248. Oram J.F., Lawn R.M., Garvin M.R., Wade D.P. ABCA1 is the cAMP-inducible apolipoprotein receptor that mediates cholesterol secretion from macrophages // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275 (44). - P. 34508 -34511.
249. Oram J.F., Lawn R.M. ABCA1. The gatekeeper for eliminating excess tissue cholesterol // J. Lipid. Res. 2001. - Vol. 42 (8). - P.l 173 - 1179.
250. Ostos M.A., Conconi M., Vergnes L., Baroukh N., Ribalta J., Girona J., Caillaud J.M., Ochoa A., Zakin M.M. Antioxidative and antiatherosclerotic effects of human apolipoprotein A-IV in apolipoprotein
251. E-deficient mice // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol: — 2001. Vol. 21. - P. 1023 - 1028;
252. Pepe M:G. Curtiss L.K. Apolipoprotein E is a biologically active constituent of the normal immunoregulatory lipoprotein, LDL-In // J. Immunol. 1986. Vol.136 (10). - P. 3716 - 3723.
253. Pittman R. C., Knecht T. P., Rosenbaum M. S., Taylor C. A. Jr. A nonendocytotic mechanism for the selective uptake of high density lipoprotein-associated cholesterol esters // J. Biol. Chem. 1987. — Vol. 262. -P. 2443-2450.
254. Poncin J.E., Martial J.A., Gielen J.E. Cloning and structure analysis of the rat apolipoprotein A-I cDNA // Eur. J. Biochem. 1984. - Vol. 140 (3). -P. 493-498.
255. Porn M.I., Akerman K.E., Slotte J.P. High-density lipoproteins induce a rapid and transient release of Ca2+ in cultured fibroblasts // Biochem. J. -1991. Vol. 279 (1). - P. 29 - 33.
256. Prehn T. An immune reaction may be necessary for cancer development // Theor. Biol, and Med. Modeling. 2006. - Vol. 3 (6). - P. 10-21.
257. Provost P.R., Lavallee B., Belanger A. Transfer of dehydroepiandrosterone- and pregnenalone-fatty acid esters between human lipoproteins // Clin. Endocrinol. Metab. 1997. - V. 82 (1). - P. 182 - 187.
258. Qui Z., Hyman B.T., Rebeck G.W. Apolipoprotein E receptors mediate neurite outgrowth through activation of p44/42 mitogen-activated protein kinase in primary neurons // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279 (33). -P. 34948-34956.
259. Qureshi S.T., Gros P., Malo D. Host resistance to infection: genetic control of lipopolysaccharide responsiveness by TOLL-like receptor genes // Trends Genet. 1999. - V. 15. - P. 91 - 294.
260. Radu A., Moldovan N. 4-Hydroxynonenal reduces junctional communication between endothelial cells in culture // Experimental Cell Research.- 1991.-Vol. 196.-P. 121— 1-26.
261. Raffai R.L., Loeb S.M., Weisgraber- K.H. Apolipoprotein E promotes the regression of atherosclerosis independently of lowering plasma cholesterol levels // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. — 2005. Vol. 25: — P. 436-441.
262. Rahim A.T., Miyazaki A., Morino Y., Horiuchi S. Biochemical demonstration of endocytosis and subsequent resecretion of high-density lipoprotein by rat peritoneal macrophages // Biochim. Biophys. Acta. -1991.-Vol1. 1082 (2).-P. 195-203.
263. Rajan V.P., Menon K.M. Metabolism of high-density lipoproteins in cultured rat luteal cells // Biochim. Biophys. Acta. 1987. - Vol. 921 (1). -P. 25-37.
264. Rees D., Sloane T., Jessup W., Dean R.T., Kritharides L. Apolipoprotein A-I stimulates secretion of apolipoprotein E by foam cell macrophages // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274 (39). - P. 27925 - 27933.
265. Rensen P.C., de Vrueh R.L., Kuiper J., Bijsterbosch M.K., Biessen E.A., van Berkel T.J. Recombinant lipoproteins lipoprotein-like lipidparticles for drug targeting // Adv. Drug Deliv. Rev. 2001. - Vol. 47 (2-3). -P. 251-276.
266. Rezaee F., Casetta B., Levels J.H., Speijer D., Meijers J.C. Proteomic analysis of high-density lipoprotein // Proteomics.-2006.-Vol.6.-P.721-730.
267. Rigotti A., Trigatti B., Babitt J'., Penman- M:, Xu S., Krieger M. Scavenger receptor BI a cell* surface receptor for high density lipoprotein // Curr. Opin. Lipidol. 1997. - Vol. 8 (3). - P. 181-188.
268. Rothblat G.H., de la Llera-Moya M., Atger V., Kellner-Weibel G., Williams D.L., Phillips M.C. Cell cholesterol efflux: integration of old and new observations provides new insights // J. Lipid. Res. 1999. - Vol. 40 (5).-P. 781-796.
269. Rye K.A., Barter P.J. Formation and metabolism of prebeta-migrating, lipid-poor apolipoprotein A-I // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2004. -Vol. 24(3).-P. 421-428.
270. Saito H., Dhanasekaran P., Nguyen D., Deridder E., Holvoet P., Lund-Katz S., Phillips M.C. Alpha-helix formation is required for high affinity binding of human apolipoprotein A-I to lipids // J. Biol. Chem. 2004. -Vol. 279 (20). - P. 20974 - 20981.
271. Samadi-Baboli M., Favre G., Canal P., Soula G. Low density lipoprotein for cytotoxic drug targeting: improved activity of elliptinium derivative against B16 melanoma in mice // Br. J. Cancer. — 1993. Vol. 68 (2).-P. 319-326.
272. Sampietro T., Bigazzi F., Dal Pino B., Fusaro S., Greco F., Tuoni M., Bionda A. Increased plasma C-reactive protein in familialhypoalphalipoproteinemia: a proinflammatory condition? // Circulation. -2002.-Vol. 105.-P. 11-14.
273. Sánchez S.A., Tricerri M.A., Ossato G., Gratton E. Lipid packing determines protein-membrane interactions: challenges for apolipoprotein A-I and high density lipoproteins // Biochim. Biophys. Acta. 2010. - Vol. 1798 (7).-P. 1399- 1408.
274. Sandula J., Kogan G., Kacurakova M., Machova E. Microbial (1—>3)-(3-D glucans, their preparation, physico-chemical characterization and immunomodulatory activity // Carbohydr. Polym. 1999. - Vol. 38. - P. 247-253.
275. Sato M., Ogihara K., Sawahata R., Sekikawa K., Kitani H. Impaired LPS-induced signaling in microglia overexpressing the Wiskott-Aldrich syndrome protein N-terminal domain // International Immunology. 2010. -Vol. 19 (8). - P. 901-911.
276. Sawyer N.J., Troop R.S. Observation on the role of the RES in the metabolism of adrenocortical steroids // Steroids.-l 963 .-Vol.2 — P. 213-227.
277. Schmitz G., Langmann T., Heimerl S. Role of ABCG1 and other ABCG family members in lipid metabolism // J. Lipid Res. 2001. — Vol. 42 (10).-P. 1513- 1520.
278. Schonfeld G., Krul E.S. Immunologic approaches to lipoprotein structure // J. Lipid. Res. 1986. - Vol. 27 (6). - P. 583 - 601.
279. Schroder N.W., Schumann R.R. Non-LPS targets and actions of LPS binding protein (LBP) // J. Endotoxin Res. 2005. - Vol. 11 (4). - P. 237 -242.
280. Schumann R.R., Zweigner J. A novel acute-phase marker: lipopolysaccharide binding protein (LBP) // Clin. Chem. Lab. Med. 1999. -Vol. 37-P. 271 -274.
281. Seglen P. Preparation of isolated rat liver cells // Meth. Cell Biol. -1976.-Vol.13-P. 29-83.
282. Shaw J.M., Shaw K.V., Yanovich S., Iwanik M., Futch W.S., Rosowsky A., Schook L.B. Delivery of lipophilic drugs using lipoproteins // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1987. - Vol. 507. - P. 252 - 271.
283. Sherman C.B., Peterson S.J., Frishman W.H. Apolipoprotein A-I mimetic peptides: a potential new therapy for the prevention of atherosclerosis // Cardiol. Rev. 2010. - Vol. 18 (3). - P. 141 - 147.
284. Shoulders C.C., Kornblihtt A.R., Munro B.S., Baralle F.E. Gene structure of human apolipoprotein A1 // Nucleic Acids Res. 1983. - Vol. 11 (9).-P. 2827-2837.
285. Shu H.P., Nicols A.V. Uptake of lipophilic carcinogens by plasma lipoproteins. Structure-activity studies // Biochim. Biophys. Acta. — 1981. — Vol. 665.-P. 376 — 384.
286. Smith K.T., Shepherd A.J., Boyd- J.E., Lees J.M. Gene delivery systems for use in gene therapy: an overview of quality assurance and safety issues // Gene therapy. 1996. - Vol. 3. - P. 190 - 200.
287. Srinivas R.V., Birkedal B., Owens R.J., Anantharamaiah G.M., Segrest J.P., Compans R.W. Antiviral effects of apolipoprotein A-I and.its synthetic amphipathic peptide analogs // Virology. — 1990. Vol. 176 (1). — P. 48-57.
288. Steinbrecher Urs.P. Role of superoxide in endothelial-cell modification of low-density lipoproteins // Biochimica et Biophysica Acta. — 1988.-Vol. 959.-P. 20-30.
289. Stoffel W. Synthesis, transport, and processing of apolipoproteins of high density lipoproteins // J. Lipid. Res. 1984. - Vol. 25 (13). - P. 1586 -1592.
290. Sugano M., Tsuchida K., Makino N. (2000) High-density lipoproteins protect endothelial cells from tumor necrosis factor-induced apoptosis // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 272. - P. 872 - 876.
291. Suganuma M., Okabe S., Kurusu M., Iida N., Ohshima S., Saeki Y., Kishimoto T., Fujiki H. Discrete roles of cytokines, TNF-a, IL-1, IL-6 in tumor promotion and cell transformation // Int. J. Oncol. 2002. - Vol. 20. -P. 131-136.
292. Swaminathan R., Butt A.N. Circulating nucleic acids in plasma and serum // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006. - Vol. 1075. - P. 1 - 9.
293. Swaney J.B., Braithwaite F., Eder H.A. Characterization of the apolipoproteins of rat plasma lipoproteins // Biochemistry. — 1977. Vol. 16 (2).-P. 271 -278.
294. Tada N., Sakamoto T., Kagami A., Mochizuki K., Kurosaka K. Antimicrobial activity of lipoprotein particles containing apolipoprotein A-I //Mol. And Cell. Biochem.- 1993.- Vol. 119.-P. 171-178.
295. Taipale J., Beachy P.A. The Hedgehog and Wnt signalling pathways in cancer//Nature.-2001.-Vol. 411. (6835).-P. 349-354.
296. Tall A.R. Cholesterol efflux pathways and other potential mechanisms involved in the athero-protective effect of high density lipoproteins // J. Intern. Med. 2008. - Vol. 263 (3). - P. 256 - 273.
297. Tanaka M. Effects of membrane structure on apolipoprotein A-I binding to lipid // Yakugaku Zasshi. 2007. - Vol. 127 (11). - P. 1843 -1849.
298. Tarugi P., Reggiani D., Ottaviani E., Ferrari S., Tiozzo R., Calandra S. Plasma lipoproteins, tissue cholesterol' overload, and skeletal muscle apolipoprotein A-I synthesis in the developing chick // J. Lipid. Res. 1989. -Vol. 30(1).-P. 9-22.
299. Thomas C., Nijenhuis A.M., Dontje B. et al. Tumoricidal response of liver macrophages isolated, from rats bearing liver metastases of colon adenocarcinoma // J. Leukocyte Biol. 1995. - Vol. 57 (4). - P. 617 - 623.
300. Tobias P.S., Soldau K., Ulevitch R.J. Identification of a lipid A binding site in the acute phase reactant lipopolysaccharide binding protein // J. Biol. Chem. 1989. -V. 264. - P. 10867-10871.
301. Tovey E., Baldo A. Comparison of semi-dry add« conventional tankbuffer electrotransfer of proteins from poliacrilamide gels to nitrocellulose membranes // Electrophoresis. 1987. - Vol. 8. - P. 384 - 387.
302. Tozuka M., Fidge N. H. Purification and characterization of two high density lipoprotein binding proteins from rat and human» liver // Biochem. J. 1989.-Vol. 261.-P. 239-244.
303. Travert C., Fofana M., Carreau S., Le Goff D. Rat Leydig cells use apolipoprotein E depleted high density lipoprotein to regulate testosterone production // Mol. Cell. Biochem. 2000:- Vol. 213 (1-2). - P. 51 - 59.
304. Triau J.E., Arbetter J., Schaefer E.J. Impaired hepatocyte binding, uptake and degradation of glucosylated low-density lipoproteins // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - Vol. 877. - P. 359 - 365.
305. Tricerri M.A., Toledo J.D., Sanchez S.A., Hazlett T.L., Gratton E., Jonas A., Garda H.A. Visualization and analysis of apolipoprotein A-I interaction with binary phospholipid bilayers // J. Lipid. Res. 2005. — Vol. 46 (4).-P. 669-678.
306. Trigatti B., Covey S., Rizvi A. Scavenger receptor class B type I in high-density lipoprotein metabolism, atherosclerosis and heart disease: lessons from gene-targeted mice // Biochem. Soc. Trans. 2004. - Vol. 32. -P. 116-120.
307. Trigatti B.L., Krieger M., Rigotti A. Influence of the HDL receptor SR-BI on lipoprotein metabolism and atherosclerosis // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.-2003.-Vol. 23(10).-P. 1732- 1738.
308. Trigatti B., Rigotti A. Scavenger receptor class B type I (SR-BI) and high-density lipoprotein metabolism: recent lessons from genetically manipulated mice // Int. J. Tissue React. 2000. - Vol. 22 (2-3). - P. 29-37.
309. Trougakos I.P., Lourda M., Agiostratidou G., Kletsas D., Gonos E.S. Differential effects of clusterin/apolipoprotein J on cellular growth and survival // Free Radic. Biol. Med. 2005. - Vol. 38. - P. 436 - 449.
310. Ulevitch R.J., Tobias P.S. Receptor-dependent mechanisms of cell stimulation by bacterial endotoxin //Annu. Rev. Immunol. — 1995. — Vol. 13. -P. 437-457.
311. Van Amersfoort E.S., Van Berkel T.J., Kuiper J. Receptors, mediators, and mechanisms involved in bacterial sepsis and septic shock // Clin. Microbiol. Rev. 2003. - Vol. 16 (3). - P. 379 - 414.
312. Van Bossuyt H., De Zanger R. B., Wisse E. Cellular and subcellulardistribution of injected lipopolysaccharide in rat liver and.its inactivation by bile salts // J. Hepatol. 1988. - Vol. 7. - P. 325 - 337.
313. Van Bossuyt H., Wisse E. Cultured Kupffer cells, isolated from human and rat liver biopsies, ingest endotoxin // J. Hepatol. 1988. - Vol. 7 (l).-P. 45-56.
314. Van Hooft F.M., van Tol-A. Discrepancies in the catabolic pathways^ of human and rat high-density lipoprotein1 apolipoprotein^ A-Ii in the rat // Eur. J. Clin. Invest. 1985. - Vol. 15 (6). - P. 395 - 402.
315. Van Lenten B.J., Fogelman A.M., Haberland M.E., Edwards P.A. The role of lipoproteins and receptor-mediated endocytosis in the transport of bacterial lipopolysaccharide // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - Vol. 83 (8).-P. 2704-2708.
316. Van Lenten B.J., Navab M., Shih D., Fogelman A.M., Lusis A.J. The role of high-density lipoproteins in oxidation and inflammation // Trends. Cardiovasc. Med. 2001. - Vol. 11 (3-4).-P. 155-161.
317. Van Lenten B.J., Wagner A.C., Anantharamaiah G.M., Navab M., R'eddy S.T., Buga G.M., Fogelman A.M. Apolipoprotein A-It mimetic peptides // Curr. Atheroscler. Rep. 2009. - Vol: 11 (1). - P. 52 - 57.
318. Van Lenten B.J., Wagner A.C., Nayak D.P., Hama S., Navab M., Fogelman A.M. High-density lipoprotein loses its anti-inflammatory properties during acute influenza a infection // Circulation. — 2001. -Vol.103 (18).-P. 2283-2288.
319. Van Schravendijk M.R., Dwek R.A. Interaction of Clq with DNA // Mol. Immunol. 1982. - Vol. 19 (9). - P. 1179 - 1187.
320. Vaughan A.M., Oram J.F. ABCG1 redistributes cell cholesterol to domains removable by high density lipoprotein but not by lipid-depleted apolipoproteins // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280. - P. 30150 - 30157.
321. Vergne I., Chua J., Lee H.H., Lucas M., Belisle J., Deretic V. Mechanism of phagolysosome biogenesis block by viable Mycobacterium tuberculosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2005. Vol. 102 (11). - P. 4033 -4038.
322. Wadham C., Albanese N., Roberts J., Wang L., Bagley C.J., Gamble J.R., Rye K.A., Barter P.J., Vadas M.A., Xia P. High-density lipoproteins neutralize C-reactive protein proinflammatory activity // Circulation. 2004. -Vol. 109 (17).-P. 2116-2122.
323. Wang N., Lan D., Chen W., Matsuura F., Tall A.R. ATP-binding cassette transporters G1 and G4 mediate cellular cholesterol efflux to high-density lipoproteins // Proc. Natl: Acad: Sci. USA. 2004. - Vol. 101. - P. 9774 - 9779.
324. Wang N., Silver D.L., Costet P., Tall A.R. Specific binding of ApoA-I, enhanced cholesterol efflux, and altered plasma membrane morphology in cells expressing ABC1 // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275 (42). - P. 33053 -33058.
325. Wang N., Silver D.L., Thiele C., Tall A.R. ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) functions as a cholesterol efflux regulatory protein // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276 (26). - P. 23742 - 23747.
326. Wiederanders B., Oelke .B. Accumulation of inactive cathepsin D in old rats //Mech; Ageing Dev. 1984: - Vol. 24 (3). -P. 265 -271.
327. Wool G.D., Reardon C.A., Getz G.S. Apolipoprotein« A-I. mimetic peptide helix number and helix linker influence potentially anti-atherogenic properties//L Lipid: Res: 2008: - Vol. 49 (6): - P: 1268 - 1-283;
328. Zannis V.L, Chroni'A., Krieger Mi Role apoA-I, ABCAlyLGAT, and\ SR-BI in the biogenesis of HDL II J. Mol. Med. 2006. - Vol. 84 (4).-P.276 -294.
329. Zhang Q., Liu L., Zheng X.Y. Protective roles of HDL, apoA-I and mimetic peptide on endothelial function: through endothelial cells and endothelial progenitor cells // Int. J. Cardiol. 2009. - Vol. 133 (3). - P. 286 -292.
330. Zheng H., Kiss R.S., Franklin V., Wang M.D., Haidar B., Marcel Y.L. ApoA-I lipidation in primary mouse hepatocytes. Separate controls for phospholipid and cholesterol transfers // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280 (22).-P. 21612-21621.
331. Zorich N.L., Kézdy K.E., Jonas A. Properties of discoidal complexes of human apolipoprotein A-I with phosphatidylcholines containing various fatty acid chains // Biochim. Biophys. Acta. 1987.-Vol. 91 (2).-P.181-189.
332. Zou S., Magura C.E., Hurley W.L. Heparin-binding properties of lactoferrin and lysozyme // Comp. Biochem. Physiol. B. 1992. - Vol. 103 (4).-P. 889-895.
-
Суменкова, Дина Валерьевна
-
доктора биологических наук
-
Новосибирск, 2010
-
ВАК 03.01.04
- Роль липопротеинов и их комплексов со стероидными гормонами в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в опухолевых клетках
- Роль аполипопротеина А-1 и аполипопротеина Е в регуляции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот в культуре нормальных и опухолевых гепатоцитов
- Реконструированные липопротеины плазмы крови
- Роль макрофагов в метаболизме липопротеинов плазмы крови в норме и в условиях опухолевого роста
- Структурно-функциональные свойства эритроцитарных мембран при дислипопротеинемиях
