Роль аллельных вариантов генов иммунного ответа в развитии рассеянного склероза

Бабенко, Сергей Андреевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль аллельных вариантов генов иммунного ответа в развитии рассеянного склероза
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Роль аллельных вариантов генов иммунного ответа в развитии рассеянного склероза"

На правах рукописи

БАБЕНКО Сергей Андреевич

РОЛЬ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ИММУННОГО ОТВЕТА В РАЗВИТИИ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2008

003453256

Работа выполнена в Государственном учреждении НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН и ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель: академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Пузырен Валерий Павлович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Назаренко Людмила Павловна

кандидат медицинских наук Цимбалюк Игорь Владимирович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярская государственная медицинская академия имени профессора В.Ф.Войно-Ясенецкого Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Защита диссертации состоится 10 декабря 2008 г. в 10 часов на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 001.045.01 при ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН по адресу: 634050, г. Томск, пер. Кооперативный, д. 5 (актовый зал ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (634050, г. Томск, ул. Набережная р. У шайки, д. 10)

Автореферат разослан « ь » ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук Кучер А.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы:

Рассеянный склероз (PC) - патология с неясным механизмом развития и высокой гетерогенностью клинических проявлений. PC как самостоятельное заболевание был выделен полтора века назад, тогда же были отмечены ключевые моменты патогенеза - обязательное участие иммунной системы и влияние наследственных механизмов на развитие заболевания [Charcot, 1877; Haßer et al, 2005]. Несмотря на значительный рост медицинских знаний за прошедшее время, до сих пор нет полного понимания этиологии и патогенеза этого заболевания. PC и сегодня представляет собой серьезную медико-социальную проблему, приводящую к инвалидизации в молодом возрасте около 0,1% белого населения Земли [Sadovnick, Ebers, 1993; Иерусалимский, 2000; Ebers, 2001; Гусев и др., 2002; Murray, 2006].

За прошедшее время много данных накопилось о гетерогенности PC -разные типы и формы течения болезни, различные иммунопатогенетические механизмы развития, разные генетические профили при заболевании. При этом, задачей исследователей при изучении данной патологии является понимание не только самого механизма развития, но и факторов, определяющих ту или иную форму заболевания, тип течения, клинические и лабораторные особенности заболевания [Бойко, Фаворова, 1995; Гусев и др., 1997; Ebers, 2001; Завалишин, 2004; Frohman etal., 2006].

Значительный вклад в понимание патогенеза PC внесли исследования на модели экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ) и исследование роли системы главного комплекса гистосовместимости (HLA) в развитии болезни. Однако сегодня становится все более ясным, что объяснить патогенез PC только лишь аутоиммунитетом и нарушениями работы системы HLA невозможно [Завалишин, Захарова, 2004; McElroy, Oksenberg, 2008; DeLegge, Smoke, 2008].

Co времени первых близнецовых исследований, доказавших роль наследственных факторов в развитии PC, на исследования в области генетики возлагались значительные надежды в понимании патогенеза заболевания [Baranzini et al, 2002; Hafler et al., 2005; McElroy, Obenberg, 2008]. Однако сегодня все больше ученых сходятся во мнении, что при PC возможность найти и выделить «главный» ген или гены «средней силы» минимальна [Chataway et al, 1998, Sawcer, 2008]. Необходимо отметить, что попытки поиска «главных» генов продолжаются до сих пор, однако большинство находок либо не специфичны для данного заболевания, как, например, гаплотипы HLA или недавно выявленные кластеры рецепторов интерлейкина-2 и 7, либо обладают спорной достоверностью [Schmidt et al, 2007; The International Multiple Sclerosis Genetics Consortium, 2007]. В целом, накопление теоретических знаний и развитие генетических методов исследования все более подтверждает тезис, что только комплексная оценка генетических, эпигенетических и средовых факторов с использованием современных методов генотипирования позволит продвинуться к решению проблемы [Гусев и др., 2001; Baranzini et al, 2002; Ebers, 2008; Sawcer, 2008].

В контексте комплексного исследования патогенеза PC важное место отводится роли генов цитокинов - растворимых регуляторных факторов, наряду с системой HLA определяющих генетический контроль иммунного ответа Щемгша и др., 1997; Noseworthy et al, 2000; Коненков, Смольникова, 2003]. Участие цитокинов разнонаправленного действия в патогенезе PC многократно показано в экспериментальных исследованиях. При этом обсуждается их роль в развитии различных типов заболевания, скорости прогрессирования, интенсивности воспалительной реакции и других важных клинико-патогенетических характеристик PC [Calabresi, 2004].

Значительный интерес представляет собой витамин D - один из немногих средовых факторов, чье влияние на развитие и клинические проявления PC обоснованно и доказано [Ebers, 2008]. Участие витамин D-зависимых механизмов показано в эпидемиологических, кинических и экспериментальных исследованиях [Gardon et al, 2003; Islam et al., 2007; Cutolo, Otsa, 2008]. Наиболее вероятно, что воздействие витамина D на PC обусловлено его иммунорегуляторными свойствами, оказывающими влияние на патогенез болезни [Griffin et al, 2003; Contorna et al, 2004]. Исследование полиморфных вариантов генов, вовлеченных в метаболизм витамина D, актуально при PC с позиций комплексного взгляда на патогенез болезни.

Пель исследования:

Оценить вовлеченность полиморфных вариантов генов-модуляторов иммунного ответа в патогенез и клинический полиморфизм рассеянного склероза.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность полиморфных вариантов генов-модуляторов иммунного ответа (.IL1B, IL1RN, IL12B, IL12RB1, ILIO, TNFA, VDR) у больных PC и здоровых русских Томской области.

2. Провести анализ ассоциации полиморфных маркеров указанных генов с PC и различными типами течения заболевания у мужчин и у женщин.

3. Провести анализ ассоциации изученных полиморфных вариантов с клиническими и лабораторными признаками у больных PC.

4. Сравнить структуру гаметического неравновесия по аллельным вариантам исследуемых генов у больных PC и в группе контроля.

5. Изучить распределение гаплотипов гена VDR у здоровых русских и у больных PC, провести анализ ассоциации гаплотипов VDR с PC.

Научная новизна:

Впервые проведена оценка вовлеченности полиморфных вариантов комплекса генов иммунного ответа в развитие PC, формирование типов его течения, а также клинических и патогенетических особенностей проявления болезни. Впервые выявлена ассоциация аллеля С полиморфного маркера А1188С гена IL12B с рассеянным склерозом и неблагоприятным течением заболевания. Полиморфный вариант С27250Т гена IL12RB1 впервые изучен при

PC. Выявлена ассоциация данного полиморфизма с показателями, характеризующими воспалительный процесс при PC. Впервые при PC проведена оценка роли гаплотипов гена VDR как фактора, предрасполагающего к заболеванию. Исследована частота гаплотипов VDR у русских, установлен рисковый гаплотип (Bft) и протективный (6/7).

Научно-практическая значимость:

Полученные данные об особенностях распределения частот аллелей и генотипов генов иммунного ответа у больных PC лиц дополняют фундаментальные сведения о генетической компоненте этого заболевания. Обнаруженные ассоциации генетических вариантов с самим заболеванием и его патогенетическими признаками служат основой для дальнейшего изучения механизмов воспаления, цитотоксичности и апоптоза в развитии PC. Установленные различия в распределении аллельных вариантов изученных генов у мужчин и женщин дополняют знания о тендерных особенностях возникновения и течения болезни.

С практической точки зрения, приводимая в работе информация может быть использована в генетической эпидемиологии PC. Сведения о связи полиморфных маркеров изученных генов с клиническими и патогенетическими проявлениями PC могут быть использованы для оценки характера течения патологического процесса у больных PC.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфные варианты VNTR IL1RN, А1188С IL12B, G(-308)A TNFA и Т/1 VDR являются одними из факторов риска развития рассеянного склероза у русских; маркеры G(-308)A гена TNF А и T/t гена VDR ассоциированы с PC только в группе мужчин, а маркер А1188С гена IL12B — только в группе женщин.

2. Полиморфные варианты А1188С IL12B и G(-308)A TNFA ассоциированы с показателями клинического течения PC (продолжительность первой ремиссии, степень инвалидизации) и параметрами, характеризующими воспалительный процесс при заболевании (IgG, IgM, СОЭ); с показателями воспаления также ассоциированы варианты VNTR IL1RN (IgG), С27250Т IL12RB1 (IgA, IgM, количество моноцитов), F/f и B/b VDR (IgG, СОЭ, количество CD16+ клеток); полиморфный маркер T/t VDR ассоциирован с количественными признаками, характеризующими воспаление (количество HLA-DR+ клеток), цитотоксичность (количество эозинофилов, показатели НСТ-теста) и апоптоз (количество CD95+ клеток) при рассеянном склерозе.

3. Носители гаплотипа Bft гена VDR имеют повышенный риск развития PC.

Апробация работы:

человека на Севере» (Якутск, 2007), Ежегодной конференции Европейского общества генетики человека (Барселона, Испания, 2008), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы неврологии» (Томск, 2008), межлабораторных научных семинарах ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005, 2007, 2008).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах (из них 2 в журналах списка ВАК), 1 статья в сборнике, 5 тезисов в материалах отечественных конференций, 1 - в зарубежных.

Структура и объем диссертации:

Диссертационная работа изложена на 157 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и приложения. Данные проиллюстрированы 37 рисунками, 36 таблицами. Библиографический указатель включает 320 источников, из них 40 работ отечественных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материалы исследования. Материалом исследования служили образцы ДНК, полученные из цельной венозной крови больных PC. Выборка больных PC была сформирована на базе неврологической клиники и кафедры неврологии и нейрохирургии ГОУ ВПО СибГМУ ФАЗС (зав. кафедрой профессор В.М. Алифирова). Медиана возраста пациентов составляла 33 года для 61-й женщины (66%) и 31-го мужчины (34%). Диагноз устанавливался в соответствии с критериями Макдональда [.McDonald et al, 2000; 2005]. Согласно задачам исследования пациенты были разделены на подгруппы в зависимости от пола и типа течения заболевания. В соответствии с международной классификацией у исследуемых больных выделялись 3 типа течения PC: ремитгирующий (РРС - 63 человека, 69%), вторично-прогрессирующий (ВПРС -11 человек, 12%), первично-прогрессирующий (111IPC - 3 человека, 3,3%) [Rudick et al., 1997]. Случаев прогрессирующего с обострениями PC в нашем исследовании не встречалось. Тип течения болезни у 15 человек (15,7%) был неизвестен.

Степень неврологических расстройств оценивалась с использованием расширенной шкалы инвалидизации Куртцке (Expanded Disability Status Scale -EDSS) с учетом 8 функциональных систем (пирамидная, мозжечковая, стволовая, чувствительная, зрительная, расстройства функции мочевого пузыря и кишечника, церебральная, прочие) [Kurtzke, 1983]. Медиана балла EDSS у обследованных пациентов составила 3,12 (варьировала от 1,5 до 7 баллов).

Пациентам на базе неврологической клиники СибГМУ проводилось общепринятое неврологическое обследование, включавшее, наряду с клиническим осмотром (тип течения, возраст начала, длительность

заболевания, оценка степени инвалидизации, длительность первой ремиссии), исследование общего анализа крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, субпопуляций лейкоцитов, СОЭ), биохимическое исследование крови (общий белок, билирубин, мочевина, креатитин, глюкоза, ACT, АЛТ, уровни кальция и фосфора), исследование развернутого иммунного статуса (уровень иммуноглобулинов А, М, G; показатели фагоцитоза - НСТ-тест, интенсивность фагоцитарной реакции; определение маркеров дифференцировки лейкоцитов методом моноклональных антител - CD3, CD4, CD8, CD 16, CD20, CD25, CD95, HLA-DR; уровни IL-1, IL-2, IL-4, TNFa, IFNy твердофазным иммуноферментным методом).

В качестве контрольной выборки использовали образцы ДНК 113 здоровых русских, случайным образом отобранные из банка ДНК НИИ медицинской генетики СО РАМН, из них 68 женщин (60%), 45 мужчин (40%).

Молекулярно-генетические методы исследования. Выделение ДНК проводили из венозной крови стандартным методом с использованием фенол-хлороформной очистки [Lahiri et al., 1992]. Выделенную ДНК замораживали и хранили при -20°С до проведения эксперимента. Анализ генетического полиморфизма осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Всего исследовано 9 полиморфных вариантов 7 кандидатных генов подверженности к PC (табл. 1). Продукты рестрикции фракционировали в.3% агарозном геле, содержащем бромистый этидий, при напряжении 120V в течение 30 минут и визуализировали в ультрафиолетовом свете.

Статистическая обработка полученных результатов. Распределения генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие ожидаемым при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью точного теста Фишера [Вейр, 1995]. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий с поправкой Йейтса на непрерывность. Ожидаемую гетерозиготность рассчитывали по Nei [Nei, 1987]. Расчеты гаметического неравновесия между парами аллельных вариантов исследованных генов производили по Хилл [Hill, 1974]. Меру неравновесия по сцеплению D' рассчитывали по Левонтину [Животовский, 1983]. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с PC использовали критерий х,2 Пирсона с поправкой Йейтса на непрерывность при числе степеней свободы, равном 1, или точный тест Фишера-Ирвина при ожидаемом числе значений хотя бы в одной из ячеек таблицы сопряженности менее 5. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с количественными, патогенетически значимыми для PC, признаками, проводили сравнение средних значений уровней метрических показателей у носителей разных генотипов с помощью непараметрических тестов Манна-Уитни и Краскала-Уоллиса. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в исследовании принимался равным 0,05.

Таблица 1.

Характеристика исследованных полиморфизмов_

Ген Полиморфизм Локализация в гене Фермент рестрикции Литература, источник

IL1B А1(+3953)А2 экзон 5 Taql Wilkinson et. al, 1999

IL1RN VNTR интрон 2 - Tarlow etal., 1993

IL12B А1188С З'-UTR Taql Hall etal, 2000

IL12RB1 С27250Т З'-UTR Ama871 Takahashiet al, 2005

IL10 С(-592)А промотор Rsal Turner et al, 1997

TNFA G(-308)A промотор Ncol (Bspl9I) Wilson et al, 1992

VDR В/Ъ интрон 10 Bsml (Pctl) Wilkinson etal, 2000 Tajouri etal, 2005

F/f экзон 2 Fold

T/t экзон 9 Taql

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В рамках поиска ассоциаций с PC исследованы полиморфные маркеры пяти генов цитокинов и гена рецептора витамина D (VDR). Учитывая клиническую гетерогенность заболевания, проводился анализ основных типов течения PC - РРС, ППРС и ВПРС. Однако, даже в рамках одного типа течения, клинические и лабораторные проявлений болезни могут быть различными. В соответствие с этим, проводился анализ количественных патогенетических признаков в зависимости от аллельных вариантов исследуемых генов. PC в 2-3 раза чаще встречается среди женщин, чем среди мужчин. Вероятно, это связано с гормональным влиянием на иммунный ответ в процессе развития заболевания [Whitacre, 2001; Matejuk et al, 2002]. Учитывая эту особенность, сравнения частот аллелей и генотипов между здоровыми и больными проводили, в том числе, и отдельно для каждого пола. Исследование было разделено на три части. В первой анализировались полиморфные варианты генов цитокинов с разной направленностью действия на иммунную составляющую патогенеза PC. Во второй была изучена связь маркеров гена VDR с заболеванием. В третьей проводился анализ сцепления полиморфных маркеров исследуемых генов

между собой, а также изучались частоты гаплотипов гена VDR в популяции русских Томской области и в выборке больных, а также их связь с заболеванием.

Полиморфные маркеры генов IL1B, ILIRN, IL12B, 1L12RB1, ILIO, TNFA у больных PC

Частоты генотипов и аллелей полиморфизмов исследуемых генов цитокинов представлены в таблице 2. При расчете соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) было выявлено отклонение по варианту С(-592)Т гена ILIO в контрольной группе за счет избытка гетерозигот.

При сравнении частот аллелей и генотипов между общей группой больных и контрольной выборкой, статистически значимые отличия были выявлены для полиморфизма VNTR гена IL1RN (х2=12,85, р<0,001 для сравнения генотипов) и трансверсии AI 188С гена IL12B (х2=18,23, р<0,001 для сравнения генотипов) (рис. 1, 2). При сравнении больных мужчин и женщин по частотам аллельных вариантов изученных генов статистических различий не обнаружилось. При дифференцированном по полу сравнении случай-контроль различия для ILIRN VNTR оказались достоверными как для мужчин, так и для женщин (х2=6,78, р<0,05 и "/2=6,56, р<0,05, соответственно). Полиморфный маркер A1I88C гена IL12B был ассоциирован с заболеванием только среди женщин (х2=17,27, р=0,001), а в группе больных мужчин ассоциация была найдена для полиморфизма G(-308)A гена TNF А (х2=7,00, р<0,05).

I все а ППРС+ больные ВПРС

□ РРС

■ все

больные 0 мужнины □ женчуны

□ контроль И мужчины вжениуны

Рис. 1. Частоты аллеля 1Ы1Ш*А2 в разных группах больных и контроле (%). Сравнение общей группы больных, а также групп больных с различными типами РС проводили с общей группой контроля (*р<0,001); больных мужчин и женщин сравнивали, соответственно, со здоровыми мужчинами и женщинами (р<0,05).

Таблица 2.

Частоты аллелей й- генотипов генов цитокинов у больных РС и в контрольной группе

Геп Генотипы IL1B Al Al А2 А1 А2 А2 IL1RN А2- А2+ IL10 СС СА АА ILI2B АА АС СС IL12RB1 СС СТ ТТ TNFA GG GA АА

Общая N.O. группа N.E. больных Аллель (п=92) у3 58 25 1 59 23 2 А1=0,839 0,569 42 46 А2=0,330 46 39 7 47 37 8 СЮ,712 0,369 37 47 6 40 40 10 А=0,672 1,739 28 47 10 31 41 13 С=0,606 1,873 66 23 0 67 20 2 G=0,871 1,421

N.O. PPC NE. (п=63) Аллель У2 42 17 1 43 16 2 А1=0,842 0,080 25 36 А2=0,369 31 28 4 32 26 5 С=0,714 0,341 27 31 4 29 27 6 А=0,685 1,303 20 33 8 22 29 10 С=0,598 0,774 46 15 0 47 13 1 G=0,877 0,693

ППРС+ ВПРС . , . Аллель (п-14) у2 10 2 0 10 2 0 А1=0,917 0,340 7 6 А2=0,308 7 6 1 7 6 1 0=0,714 0,012 5 7 1 6 6 2 А=0,654 0,205 4 8 2 6 6 2 С=0,571 0,179 10 4 0 10 4 0 G=0,857 0,035

N.O. Группа NE К?ВТ,Р,Т Аллель (й=ПЗ) 2 70 37 5 70 37 5 А 1=0,790 0,000 83 30 А2=0,177 46 61 5 50 48 12 С=0,683 5,511* 76 32 1 78 29 3 А=0,844 0,437 40 42 14 39 44 13 С=0,635 0,043 73 34 4 73 34 4 G=0,810 0,000

Примечание: N.0., КЕ. — наблюдаемая и ожидаемая численность генотипов; критерий %2 использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому при РХВ. Для гена А2- - отсутствие в

генотипе аллеля А2, А2+ - присутствие данного аллеля в гомо- или гетерозиготном состоянии; *р<0,01.

Аллель А2 полиморфизма VNTR гена IL1RN, частота которого практически в 2 раза выше у больных, чем в контроле (0,330 против 0,177), контролирует повышенную выработку рецепторного антагониста IL-1, равно как аллель А2 полиморфизма А1(+3953)А2 гена IL1B определяет повышенную выработку самого IL-1. В целом, носительство аллелей А1 обоих вариантов определяет нормальную продукцию этих белков и регуляцию функционирования системы IL-1. Повышение частоты аллеля А2 JL1RN у больных PC теоретически должно реализовываться в противовоспалительном эффекте вследствие подавления продукции IL-1, однако существует точка зрения, что при генетически обусловленном перевесе в сторону продукции рецепторного антагониста IL-1 воспалительный процесс принимает затяжной, хронический характер [Симбирцев, 2002; Громова, Симбирцев, 2005]. Заметим, что персистенция воспаления, особенно в стадии ремиссии заболевания, определяет одно из ключевых звеньев патогенеза PC.

Частоты генотипов и аллелей исследуемых вариантов генов кластера IL-1 неодинаковы в различных популяциях мира. Причем, отличия могут быть связаны не только с этнической принадлежностью (мутантные аллели более распространены у европеоидов), но и с местом проживания, даже у одной этнической группы — русских из разных регионов распределение частот аллельных вариантов этих генов неодинаково. Так, аллель IL1RN*A2 практически в два раза чаще встречается у русских, проживающих в Якутии и Санкт-Петербурге, чем у жителеи Томска (0,275; 0,261 и 0,177, соответственно). Русские жители Якутии и Санкт-Петербурга по данному маркеру ближе к финнам (IL1RN*A2=0,2&&), а русские Томской области - к европеоидам Америки (IL1RN*A2=0,115) [Громова, Симбирцев, 2005; Николаева и др., 2006].

Функциональное сходство полиморфизмов А1(+3953)А2 IL1B и VNTR IL1RN позволяет объединить их, и рассмотреть влияние сочетанных генотипов на риск развития PC. Наиболее частое сочетание генотипов у здоровых -отсутствие редких аллелей А2 (44,2 % - собственные данные, 57 % - англичане, 36,2 % - арабы) [Wilkinson etal, 1999; Al-Moundhril etal., 2006]. Аллель IL1RN* A2 наиболее часто встречался в связи с аллелем IL1B*A1 (18,6 % - собственные данные). При оценке отношения шансов (OR) риск развития заболевания у носителей сочетания генотипов IL1RN*A2+/IL1B*A2- был достоверно выше, чем у носителей других генотипов (OR=3,04 (1,52 - 6,11) при р=0,0005). Данное сочетание можно расценивать как генетически обусловлеш1ую девиацию в направлении увеличения выработки рецепторного антагониста IL-1, уровень которого регулируется совместно генами IL1B и IL1RN. Существует мнение, что такая девиация приводит к компенсаторному увеличению выработки еще большего количества IL-1 [Hurme, Santilla, 1998]. Таким образом, у лиц с PC, может быть генетически детерминирован более продолжительный, персистирующий характер воспалительного ответа.

Ассоциация с PC варианта А1188С IL12B представляет интерес в свете основной парадигмы иммунопатогенеза PC - воспаления, обусловленного Txl. Данный ген кодирует активную субъединицу интерлейкина - IL12p40. IL-12 на сегодняшний день считается ключевым поляризующим Тх1-Тх2 цитокином.

'ч

Частота редкого аллеля С оказалась практически в два раза выше у больных PC, чем у здоровых лиц. (%2=15,31, р<0,001). Генотип СС в полтора раза чаще встречался у больных нежели в контроле (%2=18,23, р<0,001) (рис 2). Данные о связи этого полиморфизма с PC немногочисленны и противоречивы. В одном исследовании была выявлена ассоциация между сниженной частотой аллеля С и PC [van Veen et al, 2001], в других - ассоциаций выявлено не было [Hall et al, 2000; Alloza et al, 2002]. Кроме IL-12, известно еще два цитокиновых комплекса, которые используют субъединицу IL12p40 для реализации своих эффектов - это гомодимер р40, считающийся рецепторным антагонистом IL-12 с выраженной противовоспалительной активностью при экспериментальном аллергическом энцефаломиелите (ЭАЭ) и IL-23 - цитокин, тесно связанный в патогенезе PC с IL-12, характеризующийся повышенной экспрессией в очагах демиелинизации [Becher et al, 2002; Li et al., 2007].

■ все ■ все

больные больные

□ РРС ШППРС+ □ мужчины ta мужнины

ВПРС Q женщины □ женены

Рис. 2. Частоты (%) аллеля IL12B*1188С в разных группах больных PC и контроле. Сравнение общей группы больных, а также групп больных с различными типами PC проводили с общей группой контроля (*р<0,001); больных мужчин и женщин сравнивали, соответственно, со здоровыми мужчинами и женщинами (р=0,001 - для сранения женщин, р=0,1 - для сравнения мужчин).

Повышенную частоту аллеля 1188С у больных можно рассмотреть с разных позиций. Так, если принимать во внимание, что у носителей этого аллеля снижена продукция IL-12, можно предполагать функциональную недостаточность системы естественной цитотоксичности, иммунологически многократно отмеченную при PC [Чекнев, 2000]. Если рассматривать антагонистические отношения между IL-12 и гомодимером р40, возможен функциональный перевес в сторону провоспалительной активности в комплексе «IL-12 - гомодимер р40 - IL-23» [Rohowsky-Kochan et al, 1999]. Не

исключено, что межпопуляционные различия модулируют влияние данного полиморфизма на процесс возникновения и течения РС. Примечательно, что в различных популяциях генотип СС, функциональное значение которого столь неоднозначно при РС, встречается с разной частотой. Например, у больных из Ирландии частота этой гомозиготы более чем в 2 раза ниже, чем у русских из Томска (х2=9,712, р=0,008) и почти в 3 раза ниже чем у русских больных, длительно проживающих в Якутии [Hall et al., 2000; Alloza et al., 2002; Николаева и др., 2007]. Не исключено, что из-за межпопуляционных различий в частотах аллельных вариантов, данный полиморфизм по-разному влияет на процесс возникновения и течения РС у лиц разных этнических групп.

Результаты анализа клинико-лабораторных данных в общей группе больных в зависимости от аллельных вариантов генов цитокинов представлены в таблице 3.

Таблица 3.

Зависимость клинических и лабораторных показателей _от генотипов цитокинов_

Ген Количественный признак Генотипы Р

IL1RN (г/л) А2- А2+ 14,20±1,30 10,80±0,92 N=25 N=37 0,04

IL12B Длительность первой ремиссии (годы) АА АС+СС 3,05±0,5б 1,80±0,28 N=28 N=37 0,04

(г/л) АА+АС СС 11,70±0,78 19,10±2,63 N=58 N=4 0,02

1ёМ (г/л) 1,71±0,16 5,93±2,38 N=59 N=4 0,03

IL12RB1 Количество моноцитов(%) СС ст+тт 6,08±0,59 4,18±0,51 N=12 N=28 0,02

1&А (г/л) 3,28±0,57 1,87±0,24 N=11 N=28 0,03

1ёМ (г/л) 3,48±0,84 2,28±0,37 N=11 N=28 0,004

TNFA СОЭ (мм/ч) GG GA 7,70±0,72 11,80±1,41 N=44 N=15 0,01

Примечание: для гена К1К№А2+ - присутствие аллеля А2 в гомо- или гетерозиготном состоянии, А2- - отсутствие такового в генотипе.

Из лабораторных показателей следует выделить более низкий уровень IgG.y больных, носителей аплеля IL1RN*A2 по сравнению с остальными (табл. 3). Иммуноглобулины класса G принимают непосредственное участие в патогенезе PC, составляя большую часть продуцирующихся интратекально иммуноглобулинов [Sesboue et al., 1985]. Ассоциацию данного аллеля с более низким, однако находящемся в пределах физиологической нормы (6,4 - 15,5 г/л) уровнем IgG, в плазме можно объяснить с точки зрения связи между иммунной, нервной и эндокринной системами. Известно, что IL-1 вызывает стимуляцию синтеза гормонов клетками коры надпочечников, что может реализовываться как в механизме отрицательной обратной связи для контроля гиперпродукции цитокинов, так и в модуляции продукции иммуноглобулинов [Симбирцев, 2002]. Анализ параклинических данных в зависимости от генотипов TNF А выявил повышенный уровень СОЭ у носителей генотипа GA по сравнению с носителями генотипа АА (табл. 3). Данные относительно СОЭ неудивительны, поскольку этот показатель напрямую отражает степень выраженности воспалительного процесса, более активно протекающего в присутствие аллеля А TNFA. У носителей редкого аллеля Т полиморфизма С27250Т гена IL12RB1 в общей группе больных оказались достоверно снижены признаки, характеризующие острую фазу воспаления - уровни IgA и IgM, а также количество моноцитов (табл. 3).

При анализе клинических данных обнаружилось, что у носителей аллеля ll$ßC IL12B продолжительность первой ремиссии практически вдвое меньше по сравнению с остальными больными (табл. 3). В ряде исследований показано, что длительность первой ремиссии является одним из прогностических факторов дальнейшего течения болезни, причем, чем она дольше, тем благоприятнее прогноз дальнейшего течения PC [Гусев и др., 1997]. Таким образом, у обследованных больных выявлена ассоциация аллеля С с более активным течением болезни.

При разделении больных по полу, дифференцировано у мужчин, носителей генотипа GA TNFA наблюдалась большая степень инвалидизации (балл EDSS) по сравнению с носителями генотипа GG (4,5±0,84 и 2,9±0,29, р=0,03). Учитывая при этом, что генотип GA достоверно чаще встречался у больных мужчин по сравнению со здоровыми (0,257 против 0,086, соответственно, р<0,05), можно сделать вывод, что в исследуемой

группе больных, полиморфный маркер G(-308)A гена TNFA, связан с риском развития PC у мужчин, но не у женщин. С аллелем (-592)А ILIO у женщин оказались ассоциированы количество CD 16+ клеток (натуральные киллеры) и количество моноцитов. Причем, наличие в генотипе этого аллеля в гомо- или гетерозиготном состоянии приводило к увеличению количества моноцитов (6,00±0,54 против 3,80±0,53, р=0,01) и уменьшению количества натуральных киллеров (0,20±0,03 против 0,30±0,03, р=0,06). Реципрокное изменение количества моноцитов и натуральных киллеров может быть связано с функциональной неполноценностью системы естественной цитотоксичности при PC, а результаты, полученные в зависимости от пола, позволяют предположить, что иммуногенетический фон, на котором развивается заболевание, различен у представителей разного пола.

Полиморфные варианты гена VDR у больных PC

Частоты аллельных вариантов изученных полиморфизмов гена VDR представлены в таблице 4. Отклонение от РХВ наблюдалось в группе больных для варианта T/t (%'- 7,487, р<0,01) за счет недостатка гетерозигот. Подобное же отклонение от РХВ ранее нашли венгерские исследователи при изучении сахарного диабета I типа [Gyorffy et al., 2002]. Причем отклонение в этой работе наблюдалась и у больных, и в контрольной группе, а частота аллеля / в обеих группах была близка к таковой в нашей группе больных PC (0,410 - контроль, 0,450 - больные сахарный диабет, 0,420 - больные PC, собственные данные).

При сравнении распределения частот генотипов и аллелей в выборках больных и здоровых лиц статистически значимые различия наблюдались для Гад-полиморфизма VDR (х2=5,86, р<0,05 для сравнения генотипов). Ассоциация была выявлена у больных PC мужчин (^2=5,67, р<0,05) и не наблюдалась у женщин (у?=2,\6, р=0,34). Ассоциация с PC во всех случаях обусловлена более высоким количеством гомозигот tt у больных по сравнению с контролем (рис. 3). Исключение составляет немногочисленная в нашей выборке группа больных с прогрессирующими типами течения болезни. Здесь генотип tt встречался практически с той же частотой, что и в контроле (14,3% и 11,5%, соответственно). Наши данные согласуются с результатами, недавно полученными в австралийском исследовании [Tajouri et ed., 2005].

□ PPC IППРС+ ВПРС

■ все

больные И мужчины И женщины

□ контроль ü мужчины 0 женшины

Рис. 3. Частоты гомозигот И гена VDR в разных группах больных и контроле (%); *р<0,05 при сравнении случай-контроль, **р=0,05 при сравнении больных мужчин со здоровыми

Таблица 4.

Частоты аллелей и генотипов гена УОЛ у больных РС и в контрольной группе

Ген VDR

Полиморфизм в/ь F/f T/t

Генотипы ВВ вь вь FF Ff ff TT Tt tt

Общая N.O. 19 34 26 23 40 16 36 30 22

группа N.E. 16 39 24 23 39 17 29 43 15

больных Аллель Ь=0,544 F=0,544 t=0,420

(п=92) X2 1,193 0,010 7,487 *

N.O. 15 20 19 15 28 12 25 19 16

РРС N.E. 12 27 16 15 27 12 20 29 11

(п=63) Аллель х2 Ь=0,537 3,14 F=0,527 0,004 t=0,425 6,905 *

ППРС+ ВПРС (п=14) N.O. N.E. Аллель X2 2 2 7 7 Ь=0,577 0,029 4 4 5 5 6 6 F=0,667 0,039 1 1 5 5 7 7 t=0,393 0,006 2 2

Группа контроля (п=113) N.O. N.E. Аллель х2 13 13 47 46 Ь=0,631 0,001 39 40 31 31 45 44 F=0,587 0,001 15 16 49 47 36 40 t=0,393 0,524 11 9

Примечание: см. табл. 2; *р<0,01.

Для всех трех полиморфных вариантов VDR были обнаружены ассоциации с количественными лабораторными признаками PC. Так, у носителей аллеля t среднее количество эозинофилов было в два раза ниже, чем у остальных пациентов (табл. 5). Не смотря на то, что оба показателя укладывались в пределы физиологической нормы (1 - 5%), это обстоятельство заслуживает внимания, учитывая тот факт, что одна из основных функций эозинофилов — детоксикация и фагоцитоз. Цитотоксическое действие белков гранул эозинофилов актуально при PC [Corrigan, Kay, 1996\. Эозинофилы -одни из главных продуцентов IL-4 - одного из ключевых цитокинов Тх2-ответа. Точная роль эозинофилов при PC до конца не ясна, однако исследования близких по патогенезу патологий, в частности оптикомиелита Дэвика, позволяют судить о том, что эта роль может иметь значение в патогенезе болезни [Lucchinetti etal., 2002].

Варианты B/b и F/f в общей группе больных оказались связанными с признаками, характеризующими воспаление. Более редкий аллель В Bsm-полиморфизма был ассоциирован с повышением СОЭ и увеличением количества активированных цитотоксических клеток, экспрессирующих маркер CD16 (табл. 5). Больные, носители более частой гомозиготы FF Fok-полиморфизма, имели более высокий уровень общего IgG в плазме, чем другие пациенты. В ранее опубликованных работах этот генотип был ассоциирован с PC [Whitfieldet al„ 2001; Partridge et al, 2004].

Таблица 5.

Количественные лабораторные признаки в общей группе больных в зависимости от генотипов УОИ

Полиморфизм Признаки Генотипы Р

вв+вь ъь

В/Ь (Bsm) СОЭ (мм/ч) 9,90+0,98 N=39 6,10+0,99 N=16 0,02

CD 16+ (х109/л) 0,30+0,03 N=34 0,20+0,03 N=20 0,03

FF Ff+ff

F/f (Fok) IgG (г/л) 15,10+1,36 N=15 10,80+0,95 N=41 0,01

Количество эозинофилов (%) TT Tt+tt

T/t (Tag) 3,00+0,61 N=22 1,60+0,31 N=34 0,04

При рассмотрении количественных показателей в зависимости от пола, вариант T/t оказался связанным с показателями фагоцитоза у мужчин. Так, данные спонтанного НСТ-теста - простого и надежного метода определения фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов - был в 2 раза выше у носителей генотипов TT и Tt, чем у носителей генотипа tt (20,30+2,81 и 10,0+2,61, соответственно, р=0,05) Данное обстоятельство может

вызывать интерес и с позиций элиминации возможного этиологического фактора болезни, и с позиций фагоцитоза разрушенных белков миелина. Количество моноцитов у мужчин, носителей аллеля b fom-полиморфизма более чем вдвое превышало таковое у гомозигот ВВ (7,00±1,09 и 3,20+0,73, р=0,02).

У женщин, гомо- или гетерозиготных по аллелю t по сравнению с гомозиготами ТТ наблюдалось увеличение количества клеток, экспрессирующих молекулу CD95 (маркер готовности клеток к апоптозу) (0,29±0,04 против 0,29±0,04, р=0,03) и процента клеток, экспрессирующих маркер активации HLA-DR (22,09±2,21 против 15,50±2,53, р=0,05). В группе женщин, имеющих в генотипе аллель Ь, количество CD25+ клеток было практически вдвое ниже, чем у остальных пациенток (0,16+0,03 против 0,27+0,03, р=0,05). CD25 - компонент высокоаффинного рецептора для IL-2 -основного фактора пролиферации лимфоцитов, экспрессирующегося, главным образом, на активных В-клетках. В последнее время В-ответ при PC все более привлекает внимание исследователей. В-лимфоциты часто находят в хронических очагах PC, а в некоторых острых бляшках эти клетки преобладают [Qin et al., 2003]. Найденную в исследовании связь аллеля b у пациенток с PC с экспрессией молекулы CD25 можно расценивать как склонность к активации В-ответа, в том числе у женщин по сравнению с мужчинами.

Гаметическое неравновесие между парами исследуемых признаков.

Влияние гаплотипов VDR на риск развития PC

Как в контроле, так и у больных PC сцепленными между собой оказались варианты T/t и В/b гена VDR. Причем в обеих группах частые аллели Т и В оказались в фазе отталкивания, мера гаметического неравновесия (D) оказалась равной -0,155 для больных (х,2=31,08) и -0,156 для здоровых 0^=41,'78). В этом наши данные согласуются с литературными [Morrison et al, 1994; Uitterlinden et al, 2006]. В группе больных вариант B/b показал связь с полиморфизмом А1188С1L12B (D=0,055, х2=4,511). В контроле маркер А1188С IL12B оказался связан с вариантом G(-308)A TNFA (D=-0,027, 135), a VNTR IL1RN с F/f полиморфизмом VDR (D=0,051, %2=5,923). Выявленные различия формирования пар гаметического неравновесия, вероятно, обусловлены патогенетической значимостью сочетаний полиморфных вариантов при PC.

Довольно высокая степень неравновесия по сцеплению (D'=0,97, Х2= 129,70) между полиморфными вариантами T/t и В/b гена VDR позволила объединить их в гаплотипы. Наиболее часто в выполненном исследовании встречались гаплотипы bFT (31,3%) и bJT(28,1%). Наиболее редкими оказались гаплотипы bft (1,3%) и bFt (0,003%). У больных достоверно чаще встречался гаплотип Bft и реже гаплотип bJT (рис. 4). Таким образом, гаплотип Bft, четвертый по встречаемости (9,9%), оказался ассоциирован с заболеванием (р=0,03). Тем самым, можно предполагать рисковое влияние одного гаплотипа (Bft) и протективное - другого (bfT). Учитывая довольно высокую частоту этих гаплотипов в популяции, данное обстоятельство может иметь значение с точки зрения оценки риска развития PC у индивидуума.

m PC

Ш контроль

bfT

Bft

Рис. 4. Частоты гаплотипов УБЯ у больных РС и в контроле; *р=0,03 при сравнении случай - контроль.

Задачи проведенного исследования включали в себя оценку влияния полиморфных вариантов генов ряда цитокинов и гена рецептора витамина D на развитие PC, его клинические проявления и изменения патогенетически значимых признаков.

Было выявлено, что с риском развития рассеянного склероза в популяции русских Томской области ассоциированы полиморфные маркеры VNTR гена IL1RN, А1188С гена IL12B, G(-308)A гена TNFA и Гад-полиморфизм гена VDR. Причем, для маркера VNTR гена IL1RN показана ассоциация заболевания с высокопродуцирующим аллелем А2 и генотипом А2А2, для варианта А1188С гена IL12B - с низкопродуцирующим аллелем С и генотипом СС, для варианта G(-308)A гена TNFA с аллелем А и генотипом GA, функциональное значение которых спорно, однако большинство данных свидетельствует об ассоциации аллеля А с повышением продукции цитокина [Коненков, Смольникова, 2003; Рыдловская, Симбирцев, 2005]. При этом отмечена дифференциация в ассоциациях изученных полиморфных вариантов с заболеванием в зависимости от пола больного. Так, аллель 1188С IL12B был ассоциирован с PC у женщин, но не у мужчин. В тоже время, в группе мужчин с заболеванием оказался связан аллель (-308)А гена TNFA.

Оценка сочетанных генотипов IL1B и IL1RN выявила достоверное преобладание в группе больных сочетания IL1 RN*A2+/IL1 В*А2- (А2+ -присутствие в генотипе аллеля А2 в гомо- или гетерозиготном состоянии, А2- -отсутствие аллеля А2 в генотипе), что может быть расценено как генетически детерминированный сдвиг в сторону более продолжительного характера воспалительного ответа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследованные полиморфные маркеры имеют влияние на количественные признаки, значимые в патогенезе PC. Показано, что большинство полиморфных вариантов генов цитокинов в разной степени имеют влияние на клинические данные и/или показатели воспаления при PC (гены IL1RN, IL12B, ILI2RB1, TNFA). Для полиморфных маркеров генов ILIRN, ILI2B и TNF А ассоциации с количественными признаками обусловлены теми же аллельными вариантами, что и связь с самим заболеванием. При дифференцировке по полу, оказалось, что полиморфный маркер G(-308)A гена TNFA, ассоциированный с заболеванием только у мужчин, связан с тяжестью болезни также в группе мужчин. Маркер А(-592)С гена ILIO был ассоциирован с показателями цитотоксичности (количество натуральных киллеров) только в группе больных PC женщин. Все три исследованных варианта гена VDR определяли флуктуацию разных количественных признаков при PC. При этом, ассоциированный с заболеванием, аллель t полиморфизма T/t имел наибольшее влияние на показатели цитотоксичности у мужчин (показатели НСТ-теста) и на показатели апоптоза у женщин (экспрессия CD95). В общей группе больных аллель t был связан с количеством эозинофилов в крови. Полиморфизмы F/f и В/Ъ оказывали влияние на показатели воспаления и фагоцитоза. Причем, с увеличением общего IgG оказался ассоциирован генотип FF, предположительно несущий функциональную нагрузку, и в ряде исследований связанный с увеличением продукции белка [Whitfieldet al., 2001].

Оценка влияния гаплотипов VDR на риск возникновения PC проводилась впервые. В группе больных по сравнению с контролем достоверно чаще встречался гаплотип Bft и реже - гаплотип bfT. Проведенный анализ распределения частот гаплотипов VDR в контрольной группе жителей Томска показал, что указанные варианты являются довольно частыми (10% и 28%, соответственно), следовательно, являются перспективными для дальнейшего изучения, а возможно и для использования в клинической практике в качестве генетических предикторов заболевания. Распределение гаплотипов гена VDR среди русских Томской области, согласуется с данными, полученными ранее для европеоидов, а выявленная ассоциация гаплотипа Bft с риском развития PC наиболее близка к ассоцияциям, полученным при изучении остеопороза [Uitterlinden et al., 2006].

Таким образом, было показано участие полиморфных вариантов генов, вовлеченных в иммунный ответ в развитии рассеянного склероза и различных патогенетических и клинических звеньев заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Частоты изученных аллельных вариантов 1L12B А1188С, IL12RB1 С27250Т, ILIO С(-592)А, TNFA G(-308)A, VDR F/f, В/Ъ, T/t у здоровых и больных PC русских находились в границах, согласующихся с данными для европеоидных популяций. Частоты аллелей IL1B*(+3953)A2 и IL1RN*A2 у здоровых русских Томской области были ниже, чем у финнов, а также русских из Санкт-Петербурга и Якутии. Наибольшим уровнем изменчивости характеризовался вариант F/f гена VDR (F=0,587 у

№

здоровых лиц, F=0,544 у больных PC), наименьшим - вариант G(-308)A TNFA (G=0,810 у здоровых лиц, G=0,871 у больных PC).

2. У русских в Томской области с заболеванием ассоциированы следующие полиморфные маркеры: VNTR гена 1L1RN (р<0,001), А1188С гена IL 12В (р<0,001) и Гад-полиморфизм гена VDR (р=0,05). Вариант А1188С1L12B ассоциирован с PC только у женщин. У мужчин с заболеванием ассоциированы маркеры G(-308)A TNFA и T/t VDR (р<0,05).

3. Полиморфные маркеры генов цитокинов ассоциированы с клиническими проявлениями PC и показателями воспаления при заболевании. Вариант А1188С IL12B в общей группе больных связан с продолжительностью первой ремиссии и уровнем IgG. Полиморфные варианты С25750Т IL12RB1, VNTR ILIRNu G(-308)A TNFA показывают связь с показателями воспаления (уровень иммуноглобулинов, СОЭ).

4. Полиморфные варианты T/t, F/f и В/Ъ гена VDR ассоциированы с характеристиками, определяющими воспаление (СОЭ, количество лимфоцитов и эозинофилов), а варианты F/f и В/b также с показателями фагоцитоза и цитотоксичности (показатели НСТ-теста, количество CD 16+ клеток) при PC.

5. Ассоциации с количественными признаками на изучаемой группе больных зависят от пола. Полиморфный маркер А(-592)С гена ILIO у женщин связан с показателями цитотоксичности (количество CD 16+ клеток и моноцитов), а вариант G(-308)A гена TNFA - со степенью инвалидизации у мужчин (бал EDSS). Вариант В/Ъ VDR у женщин ассоциирован с активизацией B-клеток (количество CD25+ клеток), а у мужчин с количеством моноцитов. Полиморфизм T/t VDR у женщин связан с уровнем клеток, эксперессирующих маркер HLA-DR и рецепторы готовности к апоптозу (CD95), а у мужчин с показателями фагоцитоза (НСТ-тест).

6. Как у больных, так и в контрольной выборке наблюдалось неравновесие по сцеплению между полиморфными вариантами В/b и T/t гена VDR (D'=0,97; %=\29,1). В гаметическом неравновесии в группе больных оказались полиморфизмы G(-308)A TNFA и А1188СIL12B, а также VNTR IL1RN и F/f VDR; в контрольной группе полиморфный маркер А1188С IL12B находится в неравновесии с маркером В/b VDR.

7. Носители гаплотипа Bft гена VDR имеют повышенный, а bjT -пониженный риск развития рассеянного склероза (р=0,03 для сравнения случай-контроль). Указанные варианты часты в популяции русских, проживающих в Томской области (10% и 28%, соответственно), а, следовательно, могут иметь практическое значение как предикторы заболевания.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Бабенко С.А., Орлова Ю.Ю., Алифирова В.М., Пузырев В.П. Анализ ассоциации полиморфизмов генов 1L-1 и рецепторного антагониста IL-1 с риском развития рассеянного склероза // Якутский медицинский журнал. -2005. - № 1 (9). Прил. 1. - С. 9-11.

2. Бабенко С.А., Рудко A.A., Орлова Ю.Ю., Алифирова В.М., Пузырев В.П. Ассоциации полиморфизмов генов цитокинов с фенотипом рассеянного склероза в Томской области // Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии. Материалы Российской научной конференции с международным участием. - Курск: КГМУ, 2006. - Том. 1._ -С. 416-419.

3. Алифирова В.М., Орлова Ю.Ю., Бабенко С.А., Рудко A.A., Пузырев В.П. Полиморфизм 1188А/С гена IL12B у больных рассеянным склерозом в Томской области и возможности оценки эффективности иммуномодулирующей терапии // Журнал неврологии и психиатрии им. Корсакова. - 2006. - №3. (Рассеянный склероз. Приложение к журналу). - С. 130-135.

4. Орлова Ю.Ю., Алифирова В.М., Бабенко С.А., Пузырев В.П., Рудко A.A., Чердынцева Н.В. Иммунологические особенности больных рассеянным склерозом и полиморфизм гена антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL1RN) в Сибирском регионе // Сибирский консилиум. - 2006. - Т. 51. - №4. -С. 65-70.

5. Бабенко С.А., Николаева И.А., Орлова Ю.Ю., Алифирова В.М., Пузырев В.П. Ассоциация полиморфных вариантов генов цитокинов (IL1B, IL1RA, IL12, TNFÄ) с рассеянным склерозом в Томской области // Актуальные вопросы охраны здоровья населения Сибири: Материалы ежегодной научно-практической конференции молодых ученых (Красноярск, 1 июня 2006 г.) / Под ред. член-корр. РАМН, проф. Манчука В .Т., проф. Смирновой С.В. - Красноярск, 2006. - С. 17-18.

6. Николаева И.А., Бабенко С.А., Ноговицына А.Н., Пузырев В.П. Ассоциация полиморфизма гена интерлейкина-1 с риском развития рассеянного склероза в Якутии // Бюллетень Сибирского отделения РАМН, приложение к журналу. Материалы 13 конгресса по приполярной медицине. (Новосибирск, 12-16 июня 2006 г.)-С. 139-140.

7. Николаева И.А., Бабенко С.А., Максимова Н.Р., Николаева Т.Я., Пузырев В.П. Анализ ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов с риском развития рассеянного склероза // Молекулярно-клеточные аспекты патологии человека на Севере: Межрегион. Науч.-практ. Конф. (Якутск, июнь 2007). Якутск: ЯНЦ СО РАМН. - 2007. - С. 46.

8. Николаева И.А., Бабенко С.А., Максимова Н.Р., Пузырев В.П. Молекулярно-генетическое исследование рассеянного склероза в республике Саха (Якутия) // Сибирский консилиум. - 2007. — №6 (61). - С. 68-72.

9. Бабенко С.А., Рудко A.A., Орлова Ю.Ю., Алифирова В.М., Пузырев В.П. Полиморфизм гена рецептора витамина D у больных рассеянным склерозом

и здоровых лиц в Томской области // Материалы 3-ей Сибирской %%

межрегиональной научно-практической конференции неврологов «Актуальные вопросы неврологии» (Новосибирск - Томск, 3-5 октября 2007 г.) Сибирский консилиум. - 2007. — №6 (61). - С. 75.

lO.Babenko S., Orlova J., Alifirova V., Pusyrev V. Genetic polymorphisms of IL12B and VDR in association with multiple sclerosis in Russians U European Society of Human Genetics Conference (Barcelona, Spain May 31 - June 3). - 2008. - P. 331

П.Бабенко C.A., Николаева И.А., Орлова Ю.Ю., Алифирова В.М., Пузырев В.П. Межпопуляционный анализ генов-модификаторов иммунного ответа при рассеянном склерозе // Медицинская генетика. - 2008. - Т. 7. - №6 (72). -С. 24-30.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов

PC - рассеянный склероз

РХВ - равновесие Харди-Вайнберга

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

ЦНС - центральная нервная система

ЭАЭ - экспериментальный аллергический энцефаломиелит

CD - cluster of differentiation (маркер дифференцировки иммуноцитов)

EDSS - expanded disability status scale (расширенная шкала инвалидизации)

IL - интерлейкин

IL10 - ген интерлейкина-10

IL12B - ген субъединицы р40 интерлейкина-12

IL12RB1 - ген рецептора интерлейкина-12 Р

IL1RN- ген рецепторного антагониста интерлейкина-1

IL1B - ген Р-субъединицы интерлейкина-1

HLA - human leukocyte antigen (молекулы главного комплекса

гистосовместимости человека)

TNF - tumor necrosis factor (фактор некроза опухоли)

TNFA - ген фактора некроза опухоли а

VDR - ген рецептора к витамину D

VNTR - variable number tandem repeats (вариабельность тринуклеотидных повторов)

1Ъ

ООО «НИП» г. Томск, ул. Советская 47, «Штемпельная мастерская» Тел.: 53-14-70,52-83-10 Заказ 573, Тираж 150 шт.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Бабенко, Сергей Андреевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клинические и эпидемиологические особенности рассеянного склероза.

1.2. Ключевые аспекты этиологии и патогенеза PC.

1.3. Основные стратегии генетического поиска при PC.

1.3.1. Анализ регионов сцепления

1.3.2. Ассоциации генетических маркеров с подверженностью к рассеянному склерозу.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика групп больных и контроля.

2.2. Молекулярно-генетические методы исследования.

2.2.1. Выделение ДНК из лейкоцитов венозной крови.

2.2.2. Определение полиморфизма генов IL1B, IL1RN, IL12B, IL12RB1, ILIO, TNFA, VDR.

2.3. Генетико-статистические методы.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Полиморфизм генов IL1B, IL1RN, IL 12В, IL12RB1, ILIO, TNFA у больных PC.

3.2. Полиморфные варианты гена VDR у больных PC.

3.3. Гаметическое неравновесие между парами исследуемых признаков. Влияние гаплотипов VDR на риск развития PC.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль аллельных вариантов генов иммунного ответа в развитии рассеянного склероза"

Рассеянный склероз (PC) — заболевание с неясным механизмом развития и высокой гетерогенностью клинических проявлений. Как заболевание PC был выделен полтора века назад [Haßer et al., 2005]. Ключевые моменты патогенеза - обязательное участие иммунной системы и влияние наследственных механизмов на развитие заболевания были отмечены Шарко еще в конце XIX века [Charcot, 1877]. Несмотря на значительный рост медицинских знаний за прошедшее время, до сих пор нет полного понимания этиологии и патогенеза этого заболевания. На сегодняшний день PC представляет собой серьезную медико-социальную проблему, приводящую к инвалидизации в молодом возрасте около 0,1 % белого населения Земли [Sadovnick, Ebers, 1993; Ebers, 2001; Murray, 2006].

За прошедшее время накоплено много данных о гетерогенности PC — разные типы и формы течения болезни, различные иммунопатогенетические механизмы развития, разные генетические профили при заболевании. При этом задачей исследователей при изучении данной патологии является понимание не только самого механизма развития, но и факторов, определяющих ту или иную форму заболевания, тип течения, клинические особенности проявления и даже ответ на проводимую терапию [Ebers, 2001; Oin, Duquette, 2003; Заеалшиин, Захарова, 2004; Frohman et ah, 2006; Murray, 2006].

Значительный вклад в изучение патогенеза PC внесли исследования на модели экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ) и исследование роли системы главного комплекса гистосовместимости (HLA) в развитии болезни. Вместе с тем, сегодня становится все более ясным, что объяснить патогенез PC только лишь аутоиммунитетом и нарушениями работы системы HLA невозможно [Бойко, Фаворова, 1995; Chaudhuri, Behau, 2004; McElroy, Obenberg, 2008; DeLegge, Smoke, 2008].

Co времени первых близнецовых исследований, доказавших роль наследственных факторов в развитии PC, генетика этого заболевания остается в фокусе научного интереса многих научных кругов [Гусев и др., 2001; Baranzini et al, 2002; Hafler et al, 2005; McElroy, Oksenberg, 2008]. Однако сегодня все больше ученых сходятся во мнении, что при PC возможность найти и выделить «главный» ген или гены «средней силы» минимальна [Chataway et al, 1998, Sawcer, 2008]. Необходимо отметить, что попытки поиска «главных» генов продолжаются до сих пор, однако большинство находок либо не специфичны для данного заболевания (например, гаплотипы HLA или недавно выявленные кластеры рецепторов интерлейкина-2 и 7) либо обладают спорной достоверностью (например, гены белков миелина или гены многих цитокинов) [Schmidt et al, 2007; The International Multiple Sclerosis Genetics Consortium, 2007]. В целом, накопление теоретических знаний и развитие генетических методов исследования все более подтверждает тезис, что только комплексная оценка генетических, эпигенетических и средовых факторов с использованием современных, мощных методов исследования позволят продвинуться к пониманию патогенеза рассеянного склероза [.Baranzini et al, 2002; Ebers, 2008; Sawcer, 2008; Oksenberg et al., 2008].

В контексте комплексного исследования патогенеза PC важное место отводится роли генов цитокинов - растворимых регуляторных факторов, наряду с системой HLA определяющих генетический контроль иммунного ответа [Заргарова, Фаворова, 1999; Noseworthy et al., 2000; Коненков, Смольникова, 2003]. Участие цитокинов разнонаправленного действия в патогенезе PC многократно показано в экспериментальных исследованиях. При этом обсуждается их роль в развитии различных типов заболевания, скорости прогрессирования, интенсивности воспалительной реакции и других важных клинико-патогенетических характеристик PC [Calabresi, 2004].

Представляет интерес система витамина D — одного из немногих средовых факторов, чье влияние на развитие и протекание PC обосновано и доказано [Ebers, 2008]. Участие витамин D-зависимых механизмов в развитии данной патологии показано в эпидемиологических, клинических и экспериментальных исследованиях [Garcion et al., 2003; Munger et al, 2006; Brown, 2006; Islam et al., 2007; Cutolo, Otsa, 2008]. Наиболее вероятно, что воздействие витамина D на PC обусловлено его иммунорегуляторными свойствами, оказывающими влияние на патогенез болезни [Griffin et al, 2003; Cantorna et al., 2004]. Исследование полиморфных вариантов генов, вовлеченных в метаболизм витамина D, актуально при PC с позиций комплексного взгляда на патогенез болезни. Цель исследования:

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность полиморфных вариантов генов-модуляторов иммунного ответа (ILIB, IL1RN, IL12B, IL12RB1, ILIO, TNFA, VDR) у больных PC и здоровых русских Томской области.

Научная новизна:

Впервые проведена оценка влияния полиморфных вариантов комплекса генов иммунного ответа на риск развития PC, формирования типов его течения, а также клинических и патогенетических особенностей проявления болезни. Впервые выявлена ассоциация аллеля С полиморфного маркера А1188С гена IL12B с рассеянным склерозом и неблагоприятным течением заболевания. Полиморфный вариант С27250Т гена IL12RB1 впервые изучен при PC. Выявлена ассоциация данного полиморфизма с показателями, характеризующими воспалительный процесс при PC. Впервые при PC проведена оценка роли гаплотипов гена VDR как фактора, предрасполагающего к заболеванию. Исследована частота гаплотипов VDR у русских, установлен рисковый гаплотип (Bft) и протективный ibfT). Научно-практическая значимость;

1. Полиморфные варианты VNTRIL1RN, АГ188СIL12B, G(-308)A TNFA и T/t VDR являются одними из факторов риска развития рассеянного склероза у русских; маркеры G(-308)A гена TNFA и T/t гена VDR ассоциированы с PC только в группе мужчин, а маркер AI 188С гена IL12B — только в группе женщин. 1

2. Полиморфные варианты А1188СIL12B и G(-308)A TNFA ассоциированы с показателями клинического течения PC (продолжительность первой ремиссии, степень инвалидизации) и параметрами, характеризующими воспалительный процесс при заболевании (IgG, IgM, СОЭ); с показателями воспаления также ассоциированы варианты VNTR IL1RN (IgG), С27250ТIL12RB1 (IgA, IgM, количество моноцитов), F/fn B/b VDR (IgG, СОЭ, количество CD16+ клеток); полиморфный маркер T/t VDR ассоциирован с количественными признаками, характеризующими воспаление (количество HLA-DR+ клеток), цитотоксичность (количество эозинофилов, показатели НСТ-теста) и апоптоз (количество CD95+ клеток) при рассеянном склерозе. 3. Носители гаплотипа Bft гена VDR имеют повышенный риск развития PC. Апробация работы:

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на IX Всероссийском съезде неврологов (Ярославль, 2006), 13-м конгрессе по приполярной медицине (Новосибирск, 2006), Межрегиональной научно-практической конференции «Молекулярно-клеточные аспекты патологии человека на Севере» (Якутск, 2007), Ежегодной конференции Европейского общества генетики человека (Барселона, Испания, 2008), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы неврологии» (Томск, 2008), межлабораторных научных семинарах ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005, 2007, 2008). Публикации.

По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 5 статей в рецензируемых журналах (из них 2 в журналах списка ВАК), 1 статья в сборнике, 5 тезисов в материалах отечественных конференций, 1 - в зарубежных. 1

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Бабенко, Сергей Андреевич

выводы

1. Частоты изученных аллельных вариантов IL12B А1188С, IL12RB1 С27250Т, ILIO С(-592)А, TNFA G(-308)A, VDR F/f, B/b, T/t у здоровых и больных PC русских находились в границах, согласующихся с данными для европеоидных популяций. Частоты аллелей IL1B*(+3953)A2 и IL1RN*A2 у здоровых русских Томской области были ниже, чем у финнов, а также русских из Санкт-Петербурга и Якутии. Наибольшим уровнем изменчивости характеризовался вариант F/f гена VDR (F=0,587 у здоровых лиц, F=0,544 у больных PC), наименьшим - вариант G(-308)A TNFA (G=0,810 у здоровых лиц, G=0,871 у больных PC).

2. У русских в Томской области с заболеванием ассоциированы следующие полиморфные маркеры: VNTR гена IL1RN (р<0,001), AI 188С гена IL 12В (р<0,001) и Г^-полиморфизм гена VDR (р=0,05). Вариант AI 188СIL12B ассоциирован с PC только у женщин. У мужчин с заболеванием ассоциированы маркеры G(-308)A TNFA и T/t VDR (р<0,05).

3. Полиморфные маркеры генов цитокинов ассоциированы с клиническими проявлениями PC и показателями воспаления при заболевании. Вариант AI 188С IL 12В в общей группе больных связан с продолжительностью первой ремиссии и уровнем IgG. Полиморфные варианты С25750ТIL12RB1, VNTR IL1RN и G(-308)A TNFA показывают связь с показателями воспаления (уровень иммуноглобулинов, СОЭ).

4. Полиморфные варианты T/t, F/f и B/b гена VDR ассоциированы с характеристиками, определяющими воспаление (СОЭ, количество лимфоцитов, количество эозинофилов), а варианты F/f и В/b также с показателями фагоцитоза и цитотоксичности (показатели НСТ-теста, количество CD 16+ клеток) при PC.

5. Ассоциации с количественными признаками на изучаемой группе больных зависят от пола. Полиморфный маркер А(-592)С гена ILIO у женщин связан с показателями цитотоксичности (количество CD 16+ клеток и моноцитов), а вариант G(-308)A гена TNFA — со степенью инвалидизации у мужчин (бал EDSS). Вариант B/b VDR у женщин ассоциирован с активизацией B-клеток (количество CD25+ клеток), а у мужчин с количеством моноцитов. Полиморфизм T/t VDR у женщин связан с уровнем клеток, эксперессирующих маркер HLA-DR и рецепторы готовности к апоптозу (CD95), а у мужчин с показателями фагоцитоза (НСТ-тест).

6. Как у больных, так и в контрольной выборке наблюдалось неравновесие по сцеплению между полиморфными вариантами В/b и T/t гена VDR (D'=0,97; %2=129,7). В гаметическом неравновесии в группе больных оказались полиморфизмы G(-308)A TNFA и А1188С ILJ2B, а также VNTR ILJRN и F/f VDR; в контрольной группе полиморфный маркер А1188С IL12B находится в неравновесии с маркером B/b VDR.

7. Носители гаплотипа Bft гена VDR. имеют повышенный, а 6/Г -пониженный риск развития рассеянного склероза (р=0,03 для сравнения случай-контроль). Указанные варианты часты в популяции русских, проживающих в Томской области (10% и 28%, соответственно), а соответственно, могут иметь практическое значение как предикторы заболевания.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Задачи проведенного исследования включали в себя оценить влияние полиморфных вариантов генов ряда цитокинов и гена рецептора витамина О на развитие РС, его клинические проявления и изменения патогенетически значимых признаков.

Было выявлено, что с риском развития рассеянного склероза в популяции русских Томской области ассоциированы полиморфные маркеры ШТЯ гена 1ЫШ, А1188С гена И12В, 0(-308)А гена ТША и Гад-полиморфизм гена УОЯ. Причем, для маркера УИТЯ гена 1Ь11Ш показана ассоциация заболевания с высокопродуцирующим аллелем А2 и генотипом А2А2, для варианта А1188С гена 1Ы2В - с низкопродуцирующим аллелем С и генотипом СС, для варианта 0(-308)А гена ТЫРА с аллелем А и генотипом СА, функциональное значение которых спорно, однако большинство данных свидетельствует об ассоциации аллеля А с повышением продукции цитокина [Коненков, Смольникова, 2003; Рыдловская, Симбирцев, 2005]. При этом, отмечена дифференциация в ассоциациях изученных полиморфных вариантов с заболеванием в зависимости от пола больного. Так, аллель 1188С 1Ы2В был ассоциирован с РС у женщин, но не у мужчин. В тоже время, в группе мужчин с заболеванием оказался связан полиморфный вариант 308)А гена ТИРА.

Полиморфные маркеры, ассоциированные с РС в настоящем исследовании, изучались при данной патологии и ранее. Полиморфный маркер УИТЯ гена 1Ь1КЫ активно исследовался в связи с РС, однако результаты наблюдений неоднозначны — ряд исследователей находят ассоциации с заболевание, однако большая часть — нет. В целом, результаты данной работы относительно ассоциации УЫТЯ гена 1Ы1Ш с РС согласуются с результатами, полученными ранее [Зсгасса et а1., 1999, 2000; Бскгууег е1 а!., 1999, 2003; Шабалдин и др., 2007]. Также неоднозначны выводы относительно ассоциаций с РС полиморфизма А1188С гена 1Ы2В. Ранее отмечалась связь между сниженной частотой аллеля 1188С и генотипа СС и РС, предполагалось протективное аоздействие генотипа СС на риск развития заболевания [van Veen et al., 2001]. При этом ряд исследователей подобную связь отрицали [Hall et al, 2000; Alloza et al, 2002]. Результаты, полученные нами, напротив, показывают связь между повышенной частотой аллеля 1188C и генотипа СС и риском развития РС, что выглядит неожиданно, но объяснимо с точки зрения неполноценности естественной цитотоксичности при РС. Ассоциация аллеля А полиморфного варианта G(-308)A гена TNFA с риском развития РС у мужчин неудивительна, поскольку аллель А связан с повышением продукции этого провоспалйтельного цитокина. Подобные ассоциации были выявлены и ранее [Не et al, 1995; Ristic et al, 2007], однако деление по полу при поиске ассоциаций рассеянного склероза с данным маркером производилось впервые. Функциональное значение Гад-полиморфизма VDR также оспаривается, при этом, полученные в настоящей работе результаты (ассоциация РС с аллелем t и генотипом tt) схожи с данными, полученными при изучении остеопороза, и согласуются с данными австралийских коллег по PC [Tajouri et al., 2005; Uitterlinden et al, 2006].

Оценка сочетанных генотипов IL1B и IL1RN выявила достоверное преобладание в группе больных сочетания rLlRN*A2+/ILlB*A2- (А2+ -присутствие в генотипе аллеля А2 в гомо- или гетерозиготном состоянии, А2-- отсутствие аллеля А2 в генотипе), что может быть расценено как генетически детерминированный сдвиг в сторону более продолжительного характера воспалительного ответа.

Исследованные полиморфные маркеры имеют влияние на количественные признаки, значимые в патогенезе РС. Признаки были подразделены на четыре группы, включавшие клинические данные (тип течения, степень инвалидизации, длительность первой ремиссии), данные, характеризующие воспалительный процесс (уровни иммуноглобулинов, СОЭ, лейкоцитарная формула), показатели фагоцитоза и цитотоксичности (показатели НСТ-теста, интенсивности фагоцитарной реакции, экспрессия клетками маркеров С016, С025, НЬА-ОЯ), характеристики, определяющие протекание апоптоза (количество С095+ клеток) (рис. 37).

Fok VDR, Bsm VDR

IL12RB1, Taq VDR 1

IL1RN, Щ IL12B, TNFA

IL10 воспаление Цитотоксичностъ фагоцитоз

S Taq VDR апоптоз

Рис 37. Влияние изученных полиморфных вариантов на течение PC

Показано, что большинство полиморфных вариантов генов цитокинов в разной степени имеют влияние на клинические данные и/или показатели воспаления при PC (гены IL1RN, ILJ2B, IL12RBJ, TNFA). Для полиморфных маркеров генов ILIRN, IL12B и TNFA ассоциации с количественными признаками обусловлены теми же аллельными вариантами, что и связь с самим заболеванием. При дифференцировке по полу, оказалось, что полиморфный маркер G(-308)A гена TNFA, ассоциированный с заболеванием только у мужчин, связан с тяжестью болезни также в группе мужчин. Маркер А(-592)С гена ILIO был ассоциирован с показателями цитотоксичности (количество натуральных киллеров) только в группе больных PC женщин.

Все три исследованных варианта гена VDR определяли флуктуацию разных количественных признаков при PC. При этом ассоциированный с заболеванием аллель t полиморфизма T/t имел наибольшее влияние на показатели цитотоксичности у мужчин (показатели НСТ-теста) и на показатели апоптоза у женщин (экспрессия CD95). В общей группе больных аллель t был связан с количеством эозинофилов в крови. Полиморфизмы F/f и В/Ъ оказывали влияние на показатели воспаления и фагоцитоза. Причем, с увеличением общего IgG оказался ассоциирован генотип FF, предположительно несущий функциональную нагрузку, и в ряде исследований связанный с увеличением продукции белка [Whitfield et al., 2001].

Оценка влияния гаплотипов VDR на риск возникновения PC проводилась впервые. В группе больных по сравнению с контролем достоверно чаще встречался гаплотип Bft и реже — гаплотип bfT. Проведенный анализ распределения гаплотипов VDR в контрольной группе жителей Томска показал, что указанные варианты являются довольно частыми (10% и 28%, соответственно), следовательно, являются перспективными для дальнейшего изучения,'а возможно и для использования в клинической практике в качестве генетических предикторов заболевания. Распределение гаплотипов гена VDR среди русских Томской области, согласуется с данными, полученными ранее для европеоидов, а выявленная ассоциация гаплотипа Bft с риском развития PC наиболее близка к ассоцияциям, полученным при изучении остеопороза [TJitterlinden et al, 2006].

Таким образом, было показано возможное влияние полиморфных вариантов генов иммунного ответа как на риск развития рассеянного склероза, так и на различные патогенетические и клинические звенья заболевания.

В целом, проведенная работа вносит дополнительные сведения в механизм иммунопатогенеза PC с позиций внутренних, генетических факторов. Ассоциативные исследования важны при данной патологии и помогают по-новому осмыслить некоторые важные звенья патогенеза заболевания. В то же время, здесь прослеживается и возможный практический выход, например - подбор маркеров предрасположенности к заболеванию. В дальнейшем возможно продолжение работы в стороны разработки панелей маркеров, ассоциированных с различными типами течения РС, а также определяющих ответ на проводимую терапию. I

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Бабенко, Сергей Андреевич, Томск

1. Алтухов Ю.П., Курбатова O.JI. Наследственность человека и окружающая среда / Наследственность человека и окружающая среда.- М.: Наука, 1984. С. 7-34.

2. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях: учеб. Пособие. — М.: ИКЦ «Академкнига», 2003. 431 с.

3. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности». Введение в предиктивную медицину. СПб. : Интермедика, 2000. - 272 с.

4. Бойко А.Н., Фаворова. О.О. Рассеянный склероз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология. 1995. - Т .29. - № 4.- С. 727-749.

5. Бойко А.Н. Внешние и наследственные факторы риска и их роль в этиологии, иммунопатогенезе и клинике рассеянного склероза: автореф. дис. . д-ра мед. наук / А.Н. Бойко. — М. 1997. - 40 с.

6. Вейр Б. Анализ генетических данных. М.: Мир. — 1995. - 400 с.

7. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Перевод с англ. "Практика", Москва. 1999 - 459 с.

8. Громова А.Ю., Симбирцев A.C. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека // Цитокины и воспаление. 2005 - Т. 4 - № 2 - С. 3-12.

9. Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н. Рассеянный склероз. Москва. «Нефть и газ». - 1997.

10. Гусев Е.И., Бойко А.Н., Судомоина М.А., Фаворова О.О. Клиническая генетика рассеянного склероза // Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова. 2001. - №9. - С.61-68.

11. Гусев Е.И., Завалишин И.А., Бойко А.Н. и др. Эпидемиологические характеристики рассеянного склероза в России // Рассеянный склероз: прил. к Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова.— 2002. — Спец. Вып. С. 3-6.

12. Демина Т.Л., Гусев Е.И., Бойко А.Н., Пинегин Б.В. Цитокины в иммунопатогенезе рассеянного склероза // Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова. 1997. - Т. 97. -№ 5. - С. 68-73.

13. Дзюба А.Р., Сорокин Ю.Н. Про- и антиоксидантные механизмы при рассеянном склерозе // Украинский медичний часопис. — 2004. №5 (43).

14. Животовский Л.А. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях / Итоги науки и техники. Серия Общая генетика. Т. 8. Теоретическая и популяционная генетика. -М.: ВИНИТИ. - 1983. - С. 76-104.

15. Завалишин И.А., Захарова М.Н. Рассеянный склероз: основные аспекты патогенеза // Рассеянный склероз и другие демиелинизирующие заболенванияю Под ред. Е.И. Гусева, И.А. Завалишина, А.Н. Бойко. — М.: Миклош, 2004. 540 с. - С.60-74.

16. Заргарова Т.А., Фаворова О.О. Исследование роли цитокиов при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите и рассеянном склерозе // Иммунология. 1999. - N 5. - С. 9-13.

17. Иерусалимский А.П. Эпидемиологические исследования и их роль в изучении рассеяного склероза / А.П. Иерусалимский, H.A. Малкова //

18. Рассеянный склероз. Избранные вопросы теории и практики / под ред. И.А. Завалишина, В.И. Головкина. М. - 2000. - С. 510-536.

19. Клинический анализ лабораторных данных / Чиркин A.A. М.: Мед. лит., 2005.-384 е.: ил.

20. Коненков В.И., Смольникова М.В. Структурные основы и функциональная значимость генов цитокинов человека и их рецепторов // Медицинская иммунология. 2003. - Т.5. - № 1-2. - С. 11-28.

21. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа. - 1990. — 352 с.

22. Минурова А.Р., Оконешникова Л.Т., Попова Т.Е. и др. Клинико -эпидемиологические особенности рассеянного склероза у якутов // Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова. Приложение Рассеянный склероз. 2007. - № 4.- С.14-22.

23. Мустафина O.E., Бахтиярова К.З., Михайлова A.M. и др. Анализ ассоциаций аллельных вариантов генов аполипопротеина е и интерлейкина 1 бета с рассеянным склерозом в этнической группе татар // Генетика. 2008. - Т. 44. - № 3. - С. 407-413.

24. Новицкий В.В., Гольдберг Е.Д. (под'ред.) Патофизиология: учебник для медицинских вузов. — Томск: Из-во ТГУ. 2001. — 716 с.

25. Пузырёв В.П., Степанов В.А. Патологическая анатомия генома. Новосибирск: «Наука». 1997. - 224 с.

26. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Кучер А.Н. Генетическое разнообразие народонаселения и болезни человека. — Томск: Изд-во «Печатная мануфактура». — 2007. — 320 с.

27. Ройт А. Иммунология : пер. с англ / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. -М.:Мир.-2000.-592 с.

28. Рыдловская A.B., Симбирцев A.C. Функциональный полиморфизм гена TNFA и патология // Цитокины и воспаление. — 2005. Т. 4. -№ 3. - С. 4-10.

29. Симбирцев A.C. Цитокины новая система регуляции защитных сил организма // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т. 1. - № 1. - С. 9-16.

30. Судомоина М.А., Фаворова О.О. Поиск генов предрасположенности к рассеянному склерозу. // Молекулярная биология. — 2000. Т. 34. — № 4.-С. 654-670.

31. Фаворова О.О., Алексеев Л.П., Алексеенков А.Д. и др. Роль гена фактора некроза опухолей альфа в наследственной предрасположенности к рассеянному склерозу. // Информационный бюллетень РФФИ. 1996. - Т. 4. - № 4. - С. 679.

32. Фильченков, A.A. Апоптоз и рак / A.A. Фильченков, P.C. Стойка. -Киев.: Морион. 1999. - 184 с.

33. Фрейдин М.Б., Пузырёв В.П., Огородова Л.М., и др. Полиморфизм генов интерлейкинов и их рецепторов: популяционная распространенность и связь с атопической бронхиальной астмой // Генетика. 2002. - Т. 38.-№12.-С. 1710-1718.

34. Чекнев С.Б. Нарушение эндогенной ретрансляции биологического сигнала в механизмах развития рассеянного склероза / В кн.: Рассеянный склероз, избранные вопросы теории и практики. — М. — 2000.-С. 115-147.

35. Шабалдин А.В., Остапцева А.В., Ахматьянова В.Р и др. Полиморфизм гена рецепторного антагониста интерлейкина-1 у пришлого и коренного населения Кемеровской области // Иммунология. 2007. -№ 2. - С. 72-74.

36. Шабалдин А.В., Арефьева Е.Г., Борисов В.И и др. Ассоциация полиморфных вариантов генов семейства интерлейкина-1 с рассеянным склерозом // Иммунология. 2007. - № 5.

37. Adikariyz S.B., Petterssonz A., Soderstrom М. et al. Interleukin-10-Modulated Immature Dendritic Cells Control the Proinflammatory Environment in Multiple Sclerosis // Scandinavian Journal of Immunology. -2004.-V. 59.-P. 600-606. 1

38. Agrawal S., Srivastava R., Sharma B. et al. IL1RN*2 allele of IL-1 receptor antagonist VNTR polymorphism is associated with susceptibility to anklyosing spondylitis in Indian patients // Clin Rheumatol. 2008. - № 27 (5).-P. 573-576.

39. Alloza I. Interleukin-12p40 Polymorphism and Susceptibility to Multiple Sclerosis // Annals of Neurology. 2002. - V. 52. - N 4.

40. Almeras L., Meresse В., Seze J. et al. Interleukin-10 promoter polymorphism in multiple sclerosis: association with disease progression // Eur Cytokine Netw. 2002. - V. 13(2). - P. 200 - 206.

41. Al-Moundhril A.M., Al-Nabhanil M., Al-Bahrani B. et al. Interleukin-lb gene (IL-1B) and interleukin 1 receptor antagonist gene (IL-1RN) polymorphisms and gastric cancer risk in an Omani Arab population // Gastric Cancer. 2006. - V. 9. - P. 284 - 290.

42. Aloisi F., Ria F., Adorini L. Regulation of T cell responses by central nervous system antigen presenting cells: different roles for microglia and astrocytes // Immunology Today. 2000. - V. 3. - P. 141 - 147.

43. Alonsol A., Jick S., Jick H. et al. Antibiotic Use and Risk of Multiple Sclerosis // American Journal of Epidemiology. 2006. -V. 163.-Nil.— P. 997- 1002.

44. Altmann D. Evaluating the Evidence for Multiple Sclerosis as an Autoimmune Disease // Arch Neurol. 2005. - V. 62. - P. 688.

45. American-French Multiple Sclerosis Genetics Group: Kenealy S.J., Babron M.C., Bradford Y. et al. A second-generation genomic screen for multiple sclerosis //Am. J. Hum. Genet. 2004. - V. 75. - P. 1070-1078.

46. Arend W.P. The balance between IL-1 and IL-IRa in disease // Cytokine Growth Factor Rev. 2002. - V. 13. - № 4-5. - P. 323 - 340.

47. Arnett H.A., Mason J., Marino M. et al. TNF alpha promotes proliferation of oligodendrocyte and remyelination // Nat Neurosci. 2001. - V. 4. - P. 1116-1122.

48. Arnson Y., Amital H., Shoenfeld Y. Vitamin D and autoimmunity: new aetiological and therapeutic considerations // Annals of the Rheumatic Diseases. 2007. - V. 66. - P. 1137 - 1142. 1

49. Astermark J., Oldenburg J., Carlson J. et al. Polymorphisms in the TNFA gene and the risk of inhibitor development in patients with hemophilia A // Blood. -2006. V. 108. -N.12. —P. 3739-3745.

50. Bagnoli S., Cellini E., Tedde A. et al. Association of IL10 promoter polymorphism in Italian Alzheimer's disease // Neurosci Lett. 2007. — P. 418(3).-P. 262-265.

51. Balashov K.E., Smith D.R., Khoury J. et al. Increased interleukin 12 production in progressive multiple sclerosis: induction by activated CD4+ T cells via CD40 ligand. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. - V.94. - P. 599 -603.

52. Baranzini S.E., Oksenberg J.R., Hauser S.L. New insights into the genetics of multiple sclerosis // J Rehabil Res Dev. 2002. -V. 39(2). - P. 201-209.

53. Bassuny W.M., Ihara K., Kimura J. et al. Association study between interleukin-12 receptor betal/beta2 genes and type 1 diabetes or asthma in the Japanese population // Immunogenetics. 2003. — V. 55. - P. 189-192.

54. Becker K.G., Simon R.M., Bailey-Wilson J.E. et al. Clustering of non-major histocompatibility complex susceptibility candidate loci in human autoimmune diseases // Trent PNAS. 1998. - V. 95. - P. 9979-9984.

55. Becher B., Durell B.G., Noelle R.J. Experimental autoimmune encephalitis and inflammation in the absence of interleukin-12 // J. Clin. Invest. — 2002. -V. 110.-P. 493-497.

56. Bell J.I., Lathrop M. Multiple loci for MS. // Nature Genetics. 1996. - V. 13.-P. 377-378.

57. Bellamy R., Ruwende C., Corrah T. et al. Assesment of the interleukin 1 gene cluster and other candidate gene polymorphisms in host susceptibility to tuberculosis // Tuberc Lung Dis. 1998. - V. 79. - P. 83 - 89.

58. Bergholdt R., Ghandil P., Johannesen J. et al. Genetic and functional evaluation of an interleukin-12 polymorphism (IDDM18) in families with type 1 diabetes // Journal of Medical Genetics. 2004. - V. 41. - P. 39.

59. Boraska V., Skrabic V., Zeggini E. et al. Family-based analysis of vitamin D receptor gene polymorphisms and type 1 diabetes in the population of South Croatia // J Hum Genet. 2008. - V. 53 (3). - P. 210 - 214.

60. Bornman L., Campbell S.J., Fielding1 K. et al. Vitamin D receptor polymorphisms and susceptibility to tuberculosis in West Africa: A case-control and family study // JID. 2004. - V. 190. - P. 1631 - 1641.

61. Brown S.J. The Role of Vitamin D in Multiple Sclerosis // The Annals of Pharmacotherapy. 2006. - V. 40. - N 6. - P. 115 8 - 1161.

62. Byun E., Caillier S.J., Montalban X. et al. Genome-Wide Pharmacogenomic Analysis of the Response to Interferon Beta Therapy in Multiple Sclerosis // Arch Neurol. 2008. - V. 65 (3). - P. 337 - 344.

63. Calabresi P.A. Cytokines and other inflammatory mediators of axonal injury // Adv. Stud. med. 2004. - V. 4 (4B). - P. 322 - 326.

64. Cantorna M.T., Hayes C.E., DeLuca H.F. l,25-DihydroxyvitaminD3 reversibly blocks the progression of relapsing encephalomyelitis, a model of multiple sclerosis // Proc Natl Acad Sci. 1996. - V. 93. - P. 7861-7864.

65. Cantorna M.T., Maho B.D. Mounting Evidence for Vitamin D as an Environmental Factor Affecting Autoimmune Disease Prevalence // Exp Biol Med.-2004.-V. 229.-P. 1136- 1142.

66. Cantorna M.T., Yan Zhu Vitamin D status, 1,25-dihydroxyvitamin D and the immune system // Am J Clin Nutr. 2004. - V. 80 (suppl). - P. 17171720.

67. Charcot J. Lectures on the diseases of the nervous system. London: New Sydenham Society, 1877.

68. Cargill M., Schrodi S.J., Chang M. et al. A large-scale genetic association study confirms IL12B and leads to the identification of IL23R as psoriasis-risk genes // Am J Hum Genet. 2007. - V. 80(2). - P. 273 - 290.

69. Chataway J., Feakes R., Coraddu F. et al. The genetics of multiple sclerosis: principles, background and updated results of the United Kingdom systematic genome screen//Brain. 1998. - V. 121. -P. 1869- 1887.

70. Chaudhuri A., Behan O. Multiple Sclerosis is not an Autoimmune Disease // Arch Neurol. 2004. - V. 61 (10).-P. 1610-1612.

71. Colin E.M., Uitterlinden A.G., Meurs J. B. J. Interaction between Vitamin D Receptor Genotype and Estrogen Receptor Genotype Influences Vertebral Fracture Risk // The Journal of Clinical'Endocrinology & Metabolism. -2003.-V. 88.-N8.-P. 3777-3784. 1

72. Comabella M., et al. 1998. Elevated interleukin-12 in progressive multiple sclerosis correlates with disease activity and is normalized by pulse cyclophosphamide therapy.//J. Clin. Invest. 1998. -V. 102. - P. 671-678.

73. Compston A. The genetic epidemiology of multiple sclerosis // Phil Trans R Soc Lond. 1999. -V. 354. - P. 1623 - 1634.

74. Compston A. The genetics of multiple sclerosis // J Neurovirol. 2000. - V. 6. - Suppl 2. - P. 5-9.

75. Compston A., Coles A. Multiple sclerosis // Lancet. 2002. - V. 359 (9313).-P. 1221-1231.

76. Cookson S., Constantini P.K., Clare M. et al. Frequency and nature of cytokine gene polymorphisms in type 1 autoimmune hepatitis // Hepatology. 1999.-V. 30.-P. 851 -856.

77. Coraddu F., Sawcer S., D'Alfonso S. et al. a! genome screen for multiple sclerosis in Sardinian multiplex families // Europ. J. Hum. Genet. 2001. -V. 9.-P. 621 -626.

78. Corrigan C.J., Kay A.B. T-ce.]/eosinophil interactions in the induction of asthma // Eur Respir J. 1996. - Suppl 22, - P. 72 - 78.

79. Crawley E., Isenberg D., Woo P., Kay R. Interleukin-10 promoter polymorphism and lupus nephritis: comment on the article by Mok et al. // Arthritis Rheum. 1999. -V. 42. - P. 590 - 593.

80. Cua D.J., Groux H., Hinton D.R. et al. Transgenic interleukin 10 prevents induction of experimental autoimmune encephalomyelitis // J Exp Med. -1999. -V. 189. -P. 1005 1010. 1v

81. Cutolo M., Otsa K. Review: Vitamin D, immunity and lupus // Lupus. -2008.-V. 17.-P. 6-10.

82. Daly A.K., Day C.P., Donaldson P.T. Polymorphisms in Immunoregulatory Genes. // Am J Pharmacogenomics. 2002. - V. 2. - P. 13—23.

83. Datta P., Harbo H.F., Ryder L.P. et al. A follow-up study of Nordic multiple sclerosis candidate gene regions // Multiple Sclerosis. 2007. - V. 13. — N 5.-P. 584-589.

84. Dean G., Elian M. Age at immigration to England of Asian and Caribbean immigrants and the risk of developing multiple sclerosis. // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1997. - V. 63. - P. 565 - 568.

85. DeLegge M.H., Smoke A. Neurodegeneration and Inflammation // Nutrition in Clinical Practice. 2008. - V. 23.-Nl.-P. 35-41.

86. Dunn E., Slims J.E., Nickiin M.J., O'Neill L.A. Annotating genes with potential roles in the immune system: six new members of the IL-1 family. // Trends Immunol. 2001. - V. 22. - P. 533 - 536.

87. Dusso A.S., Brown A.J., Slatopolsky E. Vitamin D // Am J Physiol Renal Physiol. 2005. - V. 289. - P. 8-28.

88. Dyment D., Sadovnick A.D., Ebers G.C. Genetics of multiple sclerosis // Human Molecular Genetics. 1997. - V. 6 (10). - P. 1693 - 1698.

89. Ebers G.C., Sadovnick A.D. The geographic distribution of MS: a review // Neuroepidemiology. 1993. -V. 12. - P. 1 - 5.

90. Ebers G.C., Kukay K., Bulman D.E. et al. A füll genome search in multiple sclerosis // Nat Genet. 1996. - V. 13. - P. 472 - 476.

91. Ebers G.C. Natural history of multiple sclerosis // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2001.-V. 71 (Suppl II).-P. 16-19.

92. Ebers G.C. Environmental factors and multiple sclerosis // Lancet Neurol. -2008. V. 7(3). - P. 268 - 277.

93. Edan G., Madigand M., Merienne M. et al. A focus of multiple sclerosis in Bretagne: HLA markers and evaluation of consanguinity // Rev Neurol. 1991. - V. 147. - P. 595 - 599.

94. Edwards-Smith C.J., Jonsson J.R., Purdie D.M. et al. Interleukin-10 promoter polymorphism predicts initial response of chronic hepatitis C to interferon alfa // Hepatology. 1999. -V. 30. - P. 526 - 530.

95. Farral M. Mapping genetic susceptibility to MS. // Lancet. 1996. - V. 348. -P. 1674-1675.

96. Ferlazzo G., Thomas D., Lin S.L. et al. The abundant NK cells in human secondary lymphoid tissues require activation to express killer cell Ig-like receptors and become cytolytic // J. Immun. 2004. - V. 172. - P. 14551462.

97. Fiorentino D.F., Bond M.W., Mosmann T.R. Two types of mouse T helper cell. IV. Th2 clones secrete a factor that inhibits cytokine production by Thl clones//J Exp Med. 1989.-V. 170.-P. 2081 -2095.

98. Fleming J.O., Cook T.D. Multiple sclerosis and the hygiene hypothesis // Neurology. 2006. - V. 67. - P. 2085-2086.

99. Forte G.I., Ragonese P., Salemi G. et al. Search for Genetic Factors Associated with Susceptibility to Multiple Sclerosis // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006. - V. 1067. - P. 264 - 269.

100. Freidin M.B., Strelis A.K., Rudko A.A, Kolokolova O.V., Puzyrev V.P. Association between the 1188 A/C polymorphism in the human IL12B gene and Thl-mediated infectious diseases // Int J Immunogenet. 2006. V. 33(3).-P. 231-232.

101. Frohman E.M., Filippi M., Stuve O. et al. Characterizing the Mechanisms of Progression in Multiple Sclerosis: Evidence and New Hypotheses for Future Directions // Arch Neurol. -2005. -V. 62. P. 1345 - 1356.

102. Frohman E.M., Racke M.K., Raine C.S. Multiple Sclerosis — The Plaque and Its Pathogenesis // N. Engl. J. Med. 2006. - V. 354. - P. 942 - 955.

103. Fukasawa T., Yabe I., Kikuchi S. et al. Assotiation of vitamin D receptor gene polymorphism with múltiple sclerosis in Japanese // J Neurol Sci. -1999.-V. 166(1).-P. 47-52.

104. GAMES and Transatlantic Multiple Sclerosis Genetics Cooperative. A meta-analysis of whole genome linkage screens in multiple sclerosis // J Neuroimmunol. — 2003. V. 143 (1-2).-P. 39-46.

105. Garcion E. et al. Treatment of experimental autoimmune encephalomyelitis in rat by 1,25-dihydroxyvitamin D3 leads to early effects within the central nervous system // Acta Neuropathol. 2003. - V. 105. - P. 438 - 448.

106. Genain G.P., Abel K., Belmar N. et al. Late complications of immune deviation therapy in a nonhuman primate // Science. 1996. - V. 274. - P. 2054-2057.

107. Gilmore W., Weiner L.P., Correale J. Effect of estradiol on cytokine secretion by proteolipid protein-specific T cell clones isolated from multiple sclerosis patients and normal control subjects // J Immunol. 1997. — V. 158.-P. 446-451.

108. Glas J., Torok H.P., Schneider A. et al. Allele 2 of the Interleukin-1 Receptor Antagonist Gene Is Associated With Early Gastric Cancer // Journal of Clinical Oncology. 2004. - V. 22i L N 23.

109. Gold R., Linington C., Lassmann H. Understanding pathogenesis and therapy of multiple sclerosis via animal models: 70 years of merits and culprits in experimental autoimmune encephalomyelitis research // Brain. -2006.-V. 129.-P. 1953 -1971.

110. Gold S.M., Heesen C. Stress and disease progression in multiple sclerosis and its animal models // Neuroimmunomodulation. 2006. - V. 13 (5-6). -P. 318-326.

111. Goldacre M.J., Abisgold J.D., Yeates D.G.R., Seagroatt V. Risk of multiple sclerosis after head injury: record linkage study // J Neurol Neurosurg Psychiatry. -2006. V. 77.-P. 351 -353.

112. Granieri E. Exogeneous factors in the aetiology of multiple sclerosis // Journal of NeuroVirology. 2000. -V. 6. - Suppl 2. -P.141 -146.

113. Griffin M.D., Xing N., Kumar R. Vitamin D and its analogs as regulators of immune activation and antigen presentation // Annu. Rev. Nutr. — 2003. — V. 23.-P. 117-145.

114. Gruetz G. New insights into the molecular mechanism of interleukin-10-mediated immunosuppression // Journal of Leukocyte Biology. — 2005. V. 77.-P. 3 - 15.

115. Gubler U., Chua A.O., Schoenhaut D.S. et al. Coexpression of two distinct genes is required to generate secreted bioactive cytotoxic lymphocyte maturation factor // Proc. Nat. Acad. Sci. 1991. -V. 88. - P. 4143-4147.

116. Guzowski D. Analysis of Single Nucleotide Polymorphisms in the Promoter Region of Interleukin-10 by Denaturing High-Performance Liquid hromatography // Journal of Biomolecular Techniques. 2005. - V. 16. - P. 154-166. 1

117. Gyorffy B., Vasarhelyi B., Krikovszky D. Gender-specific association of vitamin D receptor polymorphism combinations with type 1 diabetes mellitus // European Journal of Endocrinology. 2002. — V. 147. - P. SOSSOS. 1

118. Hader W.J., Seland T.P., Hader M.B. et al. Occurrence of Multiple Sclerosis in the Hutterites of North America // Can. J. Neurol. Sci. 1996. - Vol. 23. -P. 291-295.

119. Haegert D.G., Galutira D., Murray T.J. et al. Identical twins discordant for multiple sclerosis have a shift in their T-cell receptor repertoires // Clin Exp Immunol.-2003.-V. 134(3).-P. 532-537.

120. Hafler D.A., Slavik J.M., Anderson D.E. et al. Multiple sclerosis // Immunol Rev. 2005.-V. 204. - P. 208-231.

121. Haines J.L., Ter-Minassian M., Bazyk A et al. A complete genomic screen for multiple sclerosis underscores a role for the major histocompatibility complex//Nat Genet. 1996. -V. 3. - P. 469-471.

122. Haines J.L., Terwedow H.A., Burgess K. et al. Linkage of the MHC to familial multiple sclerosis suggests genetic heterogeneity. // Human Molecular Genetics. 1998. - V. 7. - P. 1229 - 1234.

123. Haines J.L., Bradford Y., Garcia M.E. et al. Multiple susceptibility loci for multiple sclerosis // Hum. Molec. Genet. 2002. - V. 11. - P. 2251 - 2256.

124. Hall M.A., McGlinn E., Coakley G. et al. Genetic polymorphism of IL-12 p40 gene in immunemediated disease // Genes Immunity. — 2000. V.l. - P. 219-224.

125. Hansen T., Skytthe A., Stenager E. et al. Concordance for multiple sclerosis in Danish twins: an update of a nationwide study // Multiple Sclerosis. -2005.-V. 11.-N5.-P. 504-510.

126. Hauser S.L. Tumor necrosis factor: immunogenetics and disease. // Ann Neurol. 1995. - V. 38. - P. 702-704.

127. Hawkes C.H. Is multiple sclerosis a sexually transmitted infection? // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2002. - V. 73. - P. 439-443.

128. He B., Navikas V., Lundahl J., Soderstrom M., Hillert J. Tumor necrosis factor alpha-308 alleles in multiple sclerosis and optic neuritis // J. Neuroimmunol. -1995. -V. 63. P. 143 - 147'.

129. Helminen M., Lahdenpohja N., Hurme M. Polymorphism of the interleukin-10 gene is associated with susceptibility to Epstein-Barr virus infection // J Infect Dis. 1999. - V. 180. - P. 496 - 499.

130. Hemmer B., Cepok S., Nessler S., Sommer N. Pathogenesis of multiple sclerosis: an update on immunology // Curr Opin Neurol. 2002. - V. 15(3). -P. 227-231.

131. Hermanowski J., Bouzigon E., Forabosco P. et al. Meta-analysis of genome-wide linkage studies for multiple sclerosis, using an extended GSMA method // Eur J Hum Genet. 2007. - V. 15(6). - P. 703 - 710.

132. Herrera B.M., Cader M.Z., Dyment D.A. et al. Multiple sclerosis susceptibility and the X chromosome // Multiple Sclerosis. 2007. - V. 13. -N7.-P. 856-864.

133. Hill W.G. Estimation of linkage disequilibrium in random mating populations // Hereditary 1974. - V.33. - P. 229 - 479.

134. Hiromatsu Y., Fukutani T., Ichimura M. et al. Interleukin-12B Gene Polymorphism does not Confer Susceptibility to Graves' Ophthalmopathy in Japanese population // Endocrine Journal. 2006. - № 53 (6). - P. 753-759.

135. Holick M.F. Vitamin D Deficiency // N Engl J Med. 2007. - V.357. - P. 266-281.

136. Hurme M., Santtila S. IL-1 receptor antagonist (IL-1RA) plasma levels are co-ordinately regulated by both IL-1RA and IL-1B genes // Eur. J. Immunol. 1998. - V. 28. - P. 2598 - 2602.

137. Huseby E.S., Liggitt D., Brabb T. et al. A pathogenic role for myelin-specific CD8+ T cells in a model for multiple sclerosis // J Exp Med. 2001. -V. 194 (5).-P. 669-676.

138. Inglese M. Multiple Sclerosis: New Insights and Trends // Am J Neuroradiol. 2006. - V. 27. - P. 954-957.

139. Islam T., Gauderman J., Cozen W., Mack T.M. Childhood sun exposure influences risk of multiple sclerosis in monozygotic twins // Neurology. -2007.-V. 69.-P. 381-388. !

140. Kamali-Sarvestani E., Nikseresht A., Aflaki E. et al. TNF-alpha, TNF-beta and IL-4 gene polymorphisms in Iranian patients with multiple sclerosis // Acta Neurol Scand. 2007. - V. 115(3). - P. 161-166.

141. Kantarci O.H., Atkinson E.J., Hebrink D.D. et al. Association of two variants in IL-1 beta and IL-1 receptor antagonist genes with multiple sclerosis // J Neuroimmunol. 2000. - V. 106 (1-2). - P. 220 - 227.

142. Kassiotis G., Kollias G. Uncoupling the proinflammatory from the immunosuppressive properties of tumor necrosis factor (TNF) at the p55

143. TNF receptor level: implication for pathogenesis and therapy of autoimmune demyelination // J. Exp. Med. 2001. - V. 193. - P. 427-434.

144. Kroeger K.M., Carville K.S., Abraham L.J. The -308 tumor necrosis factor-alpha promoter polymorphism effects transcription // Mol Immunol. 1997. -V. 34 (5).-P. 391 -399.

145. Kuokkanen S., Gschwend M., Rioux J.D. et al. Genomewide scan of multiple sclerosis in Finnish multiplex families // Am J Hum Genet. 1997. -V. 61.-P. 1379- 1387.

146. Kurtzke J.F., Bui QH. Multiple sclerosis in a migrant population II. Half-Orientals immigrants in childhood // Trans Am Neurol Assoc. -1977.-V. 102.-P. 88-90.

147. Kurtzke J.F. Rating neurologic impairment in multiple sclerosis: an expanded disability status scale (EDSS) // Neurology. 1983. - V. 33. - P. 1444-1452.

148. Kurtzke J.F. Multiple sclerosis in time and space — geographic clues to cause // Journal of NeuroVirology. 2000. -V. 6. - Suppl 2. - P. 134 - 140.

149. Kusuhara K., Yamamoto K., Okada K. et al. Association of IL12RB1 polymorphisms with susceptibility to and severity of tuberculosis in Japanese: a gene-based association analysis of 21 candidate genes // Int J Immunogenet. 2007. - V. 34(1). - P. 35^14.

150. Landtblom A.M. Epidemiological and radiological aspects of multiple sclerosis / Samhall Klintland, Linkoping, and Linkoping University Press. -1996.

151. Latsi P., Pantelidis P., Vassilakis D. et al. Analysis of IL-12 p40 subunit gene and IFN-y G5644A polymorphisms in Idiopathic Pulmonary Fibrosis // Respiratory Research. 2003. - V. 4.

152. Lauer K. Risk of multiple sclerosis in relation to industrial activities: an ecological study in four European countries // Neuroepidemiology. — 1989. — V.8.-P. 38-42.

153. Lauwerys B.R., Van den Eynde B.J., Houssiau F.A. A single nucleotide polymorphism in the IL-12 receptor betal gene is associated with disease susceptibility in human SLE patients //Annals of the Rheumatic Diseases. -2005. V. 64 (Suppl 3). - P. 349.

154. Li K.C., Wa T.C., Mansur A.H., Britton J. et al. Association between -308 tumour necrosis factor promoter polymorphism and bronchial hyperreactivity in asthma // Clin Exp Allergy. 1999. - V. 29. - P. 12041208.

155. Li K.C., Palotie A., Yuan S. et al. Finding disease candidate genes by liquid association // Genome Biology. 2007. -V. 8.1

156. Li Y., Chu N., Hu A. et al. Increased IL-23pl9 expression in multiple sclerosis lesions and its induction in microglia // Brain. 2007. — V. 130 (2). -P. 490-501.

157. Lindert R.B., Haase C.G., Brehm U. et al. Multiple sclerosis: B- and T-cell responses to the extracellular domain of the myelin oligodendrocyte glycoprotein // Brain. 1999. - V. 122. -!P. 2089 - 2099.

158. Lovas G., Szilagyi N., Majtenyi K. et al. Axonal changes in chronic demyelinated cervical spinal cord plaques // Brain. 2000. - V. 123. - P. 308-317.

159. Lublin F.D., Reigold S.C. Defining the eclinical course of multipe sclerosis: results of an international survey // Neurology. 1996. - V.46. - P.907-911.

160. Lucchinetti C.F., Bruck W., Rodriguez M., Lassmann H. Distinct patterns of multiple sclerosis pathology indicates heterogeneity on pathogenesis // Brain pathology. 1996. -N 6. - P. 259-274.

161. Lucchinetti C.F., Mandler R.N., McGavern D. et al. A role for humoral mechanisms in the pathogenesis of Devic's neuromyelitis optica // Brain. -2002.-V. 12.-N7.-P. 1450-1461. :

162. Luomala M., Lehtimaki Т., Huhtala H. et al. Promoter polymorphism of IL-10 and severity of multiple sclerosis // Acta Neurol Scand. — 2003. V. 108. -P. 396-400.

163. Lurie G., Wilkens L.R., Thompson P.J. Vitamin D Receptor Gene Polymorphisms and Epithelial Ovarian Cancer Risk // Cancer Epidemiology Biomarkers & Prevention. 2007. - V. 16. - P. 2566 - 2571.

164. Lutton D., Winston R., Rodman T.C. Multiple Sclerosis: Etiological Mechanisms and Future Directions // Experimental Biology and Medicine. -2004.-V. 229.-P. 12-20.

165. Mahon B.D., Gordon S.A., Cruz J. et al. Cytokine profile in patients with multiple sclerosis following vitamin D supplementation // J. Neuroimmunol. -2003.-V. 134.-P. 128-132.

166. Mahon B.D., Wittke A., Weaver V., Cantorna M.T. The targets of vitamin D depend on the differentiation and activation status of CD4-positive T cells // J Cell Biochem. 2003. - V.89. - P. 922 - 932.

167. Maimone D., Reder A.T., Gregory S. T-cell lymphokine-induced secretion of cytokines from patients with multiple sclerosis // Cell Immunol. — 1993. — V. 146.-P. 96-106.

168. Makhlouf K., Weiner H.L., Khoury S.J. Increased percentage of IL-12+ monocytes in the blood correlates with the presence of active MRI lesions in MS//J. Neuroimmunol.-2001.-V. 119.-P. 145- 149.

169. Manuel A. Friese and Lars Fugger Autoreactive CD8+ T cells in multiple sclerosis: a new target for therapy? // Brain. 2005. - V. 128. - P. 17471763.

170. Martinez-Forero I., Garcia-Munoz R., Martinez-Pasamar S. et al. IL-10 suppressor activity and ex vivo Trl cell function are impaired in multiple sclerosis // Eur J Immunol. 2008. - V. 38(2). - P. 576 - 586.

171. Martino G., Adorini L., Rieckmann P., Hillert J., Kallmann B., Comi G., Filippi M. Inflammation in multiple sclerosis: the good, the bad, and the complex // Lancet Neurology. 2002. - V. 1. - P. 499 - 509.

172. Martino G. How the brain repairs itself: hew therapeutic strategies in inflammatory and degenerative CNS disorders // Lancet Neurology. 2004. -V. 3.-P. 372-378.

173. Matejuk A., Dwyer J., Zamora A. et al. Evaluation of the effects of 17beta-estradiol (17beta-e2) on gene expression in experimental autoimmune encephalomyelitis using DNA microarray // Endocrinology. 2002. - V. 143. -P. 313 -319.

174. Maurer M., Kruse N., Giess R. et al. Gene polymorphism at position -308 of the tumor necrosis factor alpha promotor is not associated with disease progression in multiple sclerosis patients // J Neurol. 1999. - V. 246. - P.949.954.

175. McCormack R.M., Maxwell A.P., Carson D.J. et al. The IL12B untranslayed region DNA polymorphism is not associated with early-onset type 1 diabetes // Genes and immunity. 2002. - № 3. - P. 433 - 435.

176. McDonald W.I., Compston A., Edan G. et al. Recommended diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines from the international panel on the diagnosis of multiple sclerosis // Ann. Neurol. 2000. - V. 5. - P. 121-127.

177. McElroy J.P., Oksenberg J.R. Multiple sclerosis genetics // Curr Top Microbiol Immunol. 2008. - V. 318. - P. 45-72.

178. Mihailova S., Ivanova M., Mihaylova A. et al. Pro- and anti-inflammatory cytokine gene polymorphism profiles in Bulgarian multiple sclerosis patients // Journal of Neuroimmunology. 2005. - V. 168. - P. 138 - 143.

179. Mikhak B., Hunter D.J., Spiegelman D. Vitamin D receptor (VDR) gene polymorphisms and haplotypes, interactions with plasma 25-hydroxyvitamin D and 1,25-dihydroxyvitamin D, and prostate cancer risk // The Prostate. -2007. V. 67. - N 9. - P. 911 - 923.

180. Mira J.P., Cariou A., Grail F. et al. Association of TNF2, a TNF alpha promoter polymorphism, with septic shock susceptibility and mortality: a multicenter study // JAMA. 1999. - V. 282. -1 P. 561-568.

181. Moore K.W., O'Garra A., de Waal Malefyt R. et al. Interleukin 10 // Annu Rev Immunol. 1993.-V. 11.-P. 165-190.

182. Morahan G., Huang D.X., Ymer S.I. et al. Linkage disequilibrium of a type 1 diabetes susceptibility locus with a regulatory IL12B allele // Nature Genet. -2001. -V. 27. P. 218 -221.

183. Morahan G., Boutlis C.S., Huang D. et al. A promoter polymorphism in the gene encoding interleukin-12 p40 (IL12B) is associated with mortality from cerebral malaria and with reduced nitric oxide production // Genes Immun. -2002.-V. 3.-P. 414-418.

184. Morahan G., Kaur G., Singh M. et al. Association of variants in the IL12B gene with leprosy and tuberculosis // Tissue Antigens. 2007. - V. 69. -Suppl l.-P. 234-236.

185. Morganti-Kossman M.C., Lenzlinger P.M., Hans V. et al. Production of cytokines following brain injury: beneficial and deleterious for the damaged tissue//Mol Psychiatry. 1997. -V. 2. - P. 133 - 136.

186. Morrison N.A., Qi J.C., Tokita A. et al. Prediction of bone density from vitamin D receptor alleles // Nature. 1994. - V. 367. - P. 284 - 287.

187. Moynagh P.N. The interleukin-1 signalling pathway in astrocytes: a key contributor to inflammation in the brain // J Anat, September. 2005. - V. 207(3).-P. 265-269.

188. Muhr K., Vagnes K.S., Maroy T.H. et al. Interleukin-10 promoter polymorphisms in patienta with multiple sclerosis // J Nerol Sci. 2002. -V. 202.-P. 93-97.

189. Munger K.L., Levin L.I., Hollis B.W. et al. Serum 25-hydroxyvitamin D levels and risk of multiple sclerosis // JAMA. 2006. - V. 296. - P. 28322838.

190. Munthe-Kaas M.C., Carlsen K.L., Carlsen K.H. et al. HLA Dr-Dq haplotypes and the TNFA-308 polymorphism: associations with asthma and allergy // Allergy. 2007. - V. 62 (9). - P. 991 - 998.

191. Murray T.J. Diagnosis and treatment of multiple sclerosis // BMJ. 2006. -V. 332.-P. 525-527.

192. Naito M., Miyalci K., Naito T. et al. Association between vitamin D receptor gene haplotypes and chronic periodontitis among Japanese men // Int J Med Sci. 2007. - V. 4. - P. 216 - 222.

193. Navikas V., He B., Link J. Augmented expression of tumour necrosis factor-alpha and lymphotoxin in mononuclear cells in multiple sclerosis and optic neuritis // Brain. 1996. - V. 119.-P. 1213- 1223.

194. Navikas V., Link H. Review: cytokines and the pathogenesis of multiple sclerosis // J Neurosci Res. 1996. - V. 45. - P. 322 - 333.

195. Nei M. Molecular evolutionary genetics. — New York: Columbia University Press, 1987.-580 p.

196. Niino M., Fukazawa T., Yabe I. et al. Vitamin D receptor gene polymorphism in multiple sclerosis and the association with HLA class II alleles // J Neurol Sci. 2000. - V. 177(1). -P. 65 - 71.

197. Niino M., Kikuchi S., Fukazawa T. et al. Genetic polymorphisms of IL-lbeta and IL-1 receptor antagonist in association with multiple sclerosis in Japanese patients // J Neuroimmunol. 2001. - V. 118 (2). - P. 295 - 299.

198. Noseworthy J.H., Lucchinetti C.F., Rodriguez M., Weinshekner B.G. Multiple sclerosis // N. Engl. J. Med. 2000. - V. 343. - P. 938 - 952.

199. Nossal G.J.V. Negative selection of lymphocytes. // Cell. 1994. - V. 76. -P. 229-239.

200. Oksenberg J.R., Baranzini S.E., Sawser S., Hauser S.L. The genetics of multiple sclerosis: SNPs to pathways to pathogenesis // Nature Rev. Genet. -2008.-V. 9.-P. 516-526.

201. Oppmann B., Lesley R., Blom B. et al. Novel pl9 protein engages IL-12p40 to form a cytokine, IL-23, with biological activities similar as well as distinct from IL-12 // Immunity. 2000. - V. 13. - P. 715-725.

202. Ozencia V., Pashenkova M., Kouwenhovena M. et al. IL-12/IL-12R system in multiple sclerosis // Journal of Neuroimmunology. 2001. - V. 114. - P. 242-252.

203. Partridge M., Woolmore J.A., Weatherby S.J.M. et al. Susceptibility and outcome in MS. Associations with polymorphisms in pigmentation-related genes // Neurology. 2004. - V. 62. - P. 2323 - 2325.

204. Peltonen L. Old Suspects Found Guilty The First Genome Profile of Multiple Sclerosis // NEJM. - 2007. - V. 357. - P. 927 - 929.

205. Petereit H.F. Low interleukin-10 production is associated with higher disability and MRI lesion loadin secondary progressive multiple sclerosis // Journal of the Neurological Sciences. 2003. - V. 206. - P. 209 - 214.

206. Pickard C., Mann C., Sinnott P. et al. Interleukin-10 (IL-10) promoter polymorphisms and multiple sclerosis // J Neuroimmunol. 1999. - V. 101. P. 207-210.

207. Pickering M., Cumiskey D., O'Connor J.J. Actions of TNFa on glutamatergic synaptic transmission in the central nervous system // Experimental Physiology. 2005. - V. 90 (5). - P. 663 - 670.

208. Imitola J., Chitnis T., Khoury S.J. Cytokines in multiple sclerosis: from bench to bedside // Pharmacology & Therapeutics. 2005. - V. 106. - P. 163 - 177.

209. Poser C.M. The epidemiology of MS: a general overview. // Ann Neurol.1994.-V. 36.-P. 180- 193.

210. Pozzilli C., Falaschi P., Mainero C. et al. MRI in multiple sclerosis during the menstrual cycle: relationship with sex hormone patterns // Neurology. — 1999.-V. 53.-P. 622-624.

211. Pravica V., Brogan I.J., Hutchinson I.V. Rare polymorphisms in the promoter regions of the human interleukin-12 p35 and interleukin-12 p40 subunit genes // Eur J Immunogenet. 2000. - V. 27. - P. 35 - 36.

212. Probert L., Akassoglou K., Pasparakis M. et al Spontaneous inflammatory demyelinating disease in transgenic mice showing central nervous system-specific expression of tumor necrosis factor alpha // Proc Natl Acad Sci. —1995. V. 92. - P. 11294 - 11298.

213. Provvedini D.M., Tsoukas C.D., Deftos L.J., Manolagas S.C. 1,25-Dihydroxyvitamin D receptors in human leukocytes // Science. 1983. - V. 3221.-P. 1181 - 1183.

214. Qin Y., Duquette P. B-cell immunity in MS // The International MS Journal. — 2003. — V. 10.-P. 110-120.

215. Ramos-Lopes E. Protection from type 1 diabetes by vitamin D receptor haplotypes // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006. - V. 1079. - P. 327-334.

216. Reich D., Patterson N., De Jager P.L., McDonald G.J. et al. A whole-genome admixture scan finds a candidate locus for multiple sclerosis susceptibility // Nature Genet. 2005. - V. 37. - P. 1113 - 1118.

217. Rinker J.R., Trinkaus K., Naismith R., Cross A.H. Higher IgG index found in African Americans versus Caucasians with multiple sclerosis // Neurology. 2007. - V. 69. - P. 68 - 72.

218. Ristic S., Lovrecic L., Starcevic-Cizmarevic N. et al. Tumor necrosis factor-alpha-308 gene polymorphism in Croatian and Slovenian multiple sclerosis patients // Eur Neurol. 2007. - V. 57 (4). - P. 203 - 227.

219. Ristori G., Cannoni S., Stazi M.A. et al. Multiple sclerosis in twins from continental Italy and Sardinia: a nationwide study // Ann. Neurol. 2006. -V. 59. - P. 27-34.

220. Roach E.S. Is Multiple Sclerosis an Autoimmune Disorder? // Arch Neurol. -2004.-V. 61.-P. 1615-1616.

221. Robertson N.P., Fraser M., Deans J. et al. Age adjusted reccurence risks for relatives of patients with multiple sclerosis // Brain. - 1996. - V. 119.-P. 449-455.

222. Rohowsky-Kochan C., Molinarol D., Choudhry A. et al. Impaired interleukin-12 production in multiple sclerosis patients // Multiple Sclerosis. 1999. -V.5.-P. 327-334.

223. Rood M.J., van Krugten M.V., Zanelli E. et al. TNF-308A and HLA-DR3 alleles contribute independently to susceptibility to systemic lupus erythematosus // Arthritis Rheum. 2000. - V. 43. - P. 129 - 134.

224. Rudick R.R., Cohen A.J. et al. Management of multiple sclerosis // New Engl J Med. 1997. -V. 337. -N 22. - P. 1604- 1611.

225. Rumbley C.A., Sugaya H., Zekavat S.A. et al. Activated eosinophils are the major source of Th2-associated cytokines in the schistosome granuloma // J Immunol. 1999. -V. 162. - 1003 - 1009.

226. Sadovnick A.D., Ebers G.C. Epidemiology of multiple sclerosis: a critical overview// Can. J. Neurol. Sei. 1993. -V. 20. -N 1. - P. 17-29.

227. Sadovnick A.D., Ebers G.C., Dyment D.A. et al. Evidence for genetic basis of multiple sclerosis // Lancet. 1996. - V. 347. - P. 1728.

228. Sadovnick A.D., Duquette P., Herrera B., Yee I.M.L., Ebers G.C. Timing-of-birth effect on multiple sclerosis clinical phenotype // Neurology. 2007. -V. 69. - P.60-62.

229. Salemi G., Ragonese P., Aridon P. et al. Is season of birth associated with multiple sclerosis? // Acta Neurologica Scandinavica. 2000. - V. 101. - N 6.-P. 381.

230. Sanchez E., Morales S., Pacol L. et al. Interleukin 12 (IL12B), interleukin 12 receptor (IL12RB1) and interleukin 23 (IL23A) gene polymorphism in systemic lupus erythematosus // Rheumatology. 2005. - V. 44. - P. 1136— 1139.

231. Sarial S., Shokrgozar M.A., Amirzargar A. et al. IL-1, IL-1R and TNFalpha Gene Polymorphisms in Iranian Patients with Multiple Sclerosis // Iran J Allergy Asthma Immunol. 2008. - V. 7(1). - P. 37 - 40.

232. Sawcer S., Jones H.B., Feakes R. et al. A genome screen in multiple sclerosis reveals susceptibility loci on chromosome 6p21 and 17q22 // Nat Genet. 1996. - V. 13. - P. 464 - 468.

233. Sawcer S., Ban M., Maranian M. et al. A high-density screen for linkage in multiple sclerosis // Am J Hum Genet. 2005. - V. 77. - P. 454 - 467.

234. Sawcer S The complex genetics of multiple sclerosis: pitfalls and prospects //Brain.-2008.-P. 1-14.

235. Schadendorf D., Ugurel S., Paschen A. et al. Impact of a functional polymorphism in the IL12B promoter region on survival in patients with malignant melanoma // Journal of Clinical Oncology. 2006. - V. 24. - N 18.-P. 8001.

236. Schrijver H.M., Crusius J.B.A., Uitdehaag B.M.J, et al. Assocoiation of interleukin-ip and interleukin-1 receptor antagonist genes with disease severity in MS. // Neurology. 1999. - V'. 52. - P. 595.

237. Schrijver H.M., van As J., Crusius B.A. et al. Interleukin (IL)-l gene polymorphisms: relevance of disease severity associated alleles with IL-lb and IL-Ira production in multiple sclerosis // Mediators of Inflammation. — 2003.-V. 12(2).-P. 89-94.

238. Schroder M., Meisel C., Buhl K. et al. Different Modes of IL-10 and TGF-fi to inhibit cytokine-dependent IFN-7 production: consequences for reversal of lipopolysaccharide desensitization // J. Immunol. — 2003. — V. 170. P. 5260-5267. ;

239. Schwarz S., Leweling H. Multiple sclerosis and nutrition // Multiple Sclerosis.-2005.-V. 11.-N 1.-P. 24-32.

240. Sciacca F.L., Ferri C., Vandenbroeck K. et al. Relevance of interleukin 1 receptor antagonist intron 2 polymorphism in Italian MS patients // Neurology. 1999.-V. 10.-P. 1896- 1898.

241. Sciacca F.L., Canal N., Grimaldi L.M. Induction of IL-1 receptor antagonist by interferon beta: implication for the treatment, of multiple sclerosis // J Neurovirol. 2000. - V.6. - Suppl 2. - P. 33-37.

242. Seegers D., Zwiers A., Strober W. et al. A TaqI polymorphism in the 3'UTR of the IL-12p40 gene correlates with increased IL-12 secretion // Genes and immunity. 2002. - № 3. - P. 419 - 423.

243. Selmaj R., Raine C. TNF mediates myelin and oligodendrocytes damage in vitro // Ann.Neurol. 1989. -V 23. - P. 339 - 346.

244. Seyhan S., Yavascaoglu I., Kilicarslan H. et al. Association of vitamin D receptor gene Taq I polymorphism with recurrent urolithiasis in children // Int J Urol.'- 2007. V. 14 (12).-P. 1060- 1062.

245. Sheng W.S., Hu S., Ni H.T. et al. TNF-induced chemokine production and apoptosis in human neural precursor cells // Journal of Leukocyte Biology. — 2005. V.78. - P. 1233 - 1241.

246. Shibata Y., Foster L.A., Kurimoto M. et al. Immunoregulatory roles of IL-10 in innate immunity: IL-10 inhibits macrophage production of IFN-t-inducing factors but enhances NK cell production of IFN-7 // J. Immunol. -1998.-V. 161.-P. 4283-4288.

247. Skeie G.O., Pandey J.P., BS, Aarli J.A., Gilhus N.E. TNF A and TNFB Polymorphisms in Myasthenia Gravis // Arch Neurol. 1999. - V.56. - P. 457-461.

248. Schmidt H., Williamson D., Ashley-Koch A. HLA-DR15 Haplotype and Multiple Sclerosis: A HuGE Review // Am J Epidemiol. 2007. -V. 165. -№ 10.-P. 1097-1109.

249. Soldanetal S.S. Dysregulation of IL-10 and IL-12p40 in secondary progressive Multiple sclerosis // Journal of Neuroimmunology. 2004. - V. 146. - P. 209-215.

250. Sotgiu S., Pugliatti M., Fois M.L. et al. Genes, environment, and susceptibility to multiple sclerosis // Neurobiology of Disease. 2004. - V. 17.-P. 131-143.

251. Spach K.M., Nashold F.E., Dittel B.N., Hayes C.E. IL-10 Signaling is essential for 1,25-Dihydroxyvitamin D3 mediated inhibition of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis // J Immunol. - 2006. - V. 177.-P. 6030-6037.

252. Steckley J.L., Dyment D.A., Sadovnick A.D. et al. Canadian collaborative study group. Genetic analysis of vitamin D related genes in Canadian multiple sclerosis // Neurology. 2000. - V. 54. - P. 729 - 732.

253. Stefaniae M., Karner I., Glavas L. et al. Association of Vitamin D Receptor Gene Polymorphism with Susceptibility to Graves Disease in Eastern Croatian Population: Case-control Study // Croat Med J. 2005. - V. 46(4). -P. 639-646.

254. Sun D., Whitaker J.N., Huang Z. et al. Myelin antigen-specific CD8+ T cells are encephalitogenic and produce severe disease in C57BL/6 mice // J Immunol.-2001.-V. 166 (12).-P. 7579-7587.

255. Swank R.L. Treatment of multiple sclerosis with low-fat diet // Arch. Neurol. Psych. 1953.-V. 69.-P. 91-103.

256. Sweeney K., Curtin K., Murtaugh M.A. et al. Haplotype Analysis of Common Vitamin D Receptor Variants and Colon and Rectal Cancers // Cancer Epidemiology Biomarkers & Prevention. 2006. - V. 15. - P. 744749.

257. Tabone T., Morahan G. Definition of polymorphisms in the gene encoding the interleukin-12 receptor B1 subunit: testing linkage disequilibrium with Type I diabetes susceptibility // Genes Immun. 2003. - V.4 - P. 222 - 227.

258. Tagore A., Gonsalkorale W.M., Pravica V.1 et al. Interleukin-10 (IL-10) genotypes in inflammatory bowel disease // Tissue Antigens. 1999. - V. 54.-P. 386-390.

259. Tajouri L., Ovcaric M., Curtain R. et al. Variation in The Vitamin D Receptor Gene is Associated With Multiple Sclerosis in an Australian Population // Journal of Neurogenetics. 2005. - V. 19 (1). - V. 25 - 38.

260. Takahashi N., Akahoshi M., Matsuda A. et al. Association of the IL12RB1 promoter polymorphisms with increased risk of atopic dermatitis and other allergic phenotypes // Human Molecular Genetics. 2005. - V. 14. - N 21.

261. Tanaka A., Quaranta S., Mattalia A. et al. The tumor necrosis factor-alpha promoter correlates with progression of primary biliary cirrhosis // J Hepatol. 1999.-V. 30.-P. 826-829.

262. Tarlow J.K., Blakemore I.F., Lennard A. et al. Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable number of an 86-bp tandem repeat // Human Genetics. 1993. - V. 91. - P. 403 - 404.

263. Thakkinstian A., D'Este C., Attia J. Haplotype analysis of VDR gene polymorphisms: a meta-analysis // Osteoporos Int. 2004. - V. 15 (9). - P. 729-734.

264. The International Multiple Sclerosis Genetics Consortium. Risk alleles for multiple sclerosis identified by a genomewide study // N Engl J Med. -2007.-V. 357.-P. 851 -862.

265. Trinchieri G. Interleukin-12: a proinflammatory cytokine with immunoregulatory functions that bridge innate resistance and antigen-specific adaptive immunity. // Annu Rev Immunol. 1995. - V.13. — P.251— 276.

266. Trinchieri G. Interleukin-12 and the regulation of innate resistance and adaptive immunity // Nature Reviews. 2003. - V. 3. - P. 133 -146.

267. TUMOR NECROSIS FACTOR ALPHA; TNFA // http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/seachchromim.html

268. Turner D.M., Williams D.M., Sankaran D. et al. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter // Eur J Immunogenet. -1997.-V. 24(1).-P. 1-8.

269. Uitterlinden A.G., Fang Y., Van Meurs J.B. et al. Genetics and biology of vitamin D receptor polymorphisms // Gene. 2004. - V. 338(2). - P. 143— 156.

270. Uitterlinden A.G., Ralston S.H., Brandi M.L. et al. The Association between Common Vitamin D Receptor Gene Variations and Osteoporosis: A Participant-Level Meta-Analysis // Ann Intern Med. 2006. - V. 145. - P. 255-264.

271. Ukaji M., Saito Y., Fukushima-Uesaka H. Genetic variations of VDR/NR1I1 encoding vitamin D receptor in a Japanese population // Drug Metab Pharmacokinet. 2007. - V. 22 (6). - P. 462 - 467.

272. Valdivielso J.M., Fernandez E. Vitamin D receptor polymorphisms and diseases // Clin Chim Acta. 2006. - V. 371 (1-2). - P. 1 - 12.

273. Vamvakopoulos J., Green C., Metcalfe S.'Genetic control of IL-lbeta bioactivity through differential regulation of the IL-1 receptor antagonist // Eur J Immunol. 2002. - V. 32(10).-P. 2988-2996.

274. Van Amerongen B.M., Dijkstral C.D., Lips P., Polman C.H. Multiple sclerosis and vitamin D: an update // European Journal of Clinical Nutrition. -2004.-P. 1 15.

275. Van Boxel-Dezaire A.H., Smits M., van Trigt-Hoff S.C. et al. mRNA discriminate between different clinical subtypes in multiple sclerosis // J Neuroimmunol. — 2001. — V. 120 (1-2).-P. 152- 160.

276. Van Veen T., Crusius J.B.A., Schrijver H.M. et al. Interleukin 12p40 genotype plays a role in the susceptibility to multiple, sclerosis. // Ann Neurol. —2001. — V. 50.-P.275.

277. Vishnoi M., Pandey S.N., Choudhury G.et al. Do TNF A -308 G/A and IL6 -174 G/C Gene Polymorphisms Modulate Risk of Gallbladder Cancer in the North Indian Population? // Asian Pac J Cancer Prev. 2007. - V. 8(4). - P. 567-572.

278. Vitale E., Cook S., Sun R. et al. Linkage analysis conditional on HLA status in a large North American pedigree supports the presence of a multiplesclerosis susceptibility locus on chromosome 12pl2 // Hum. Molec. Genet. -2002.-V. 11.-P. 295-300.

279. Vyshkina T., Kalman B. Linkage disequilibrium analyses within chromosome 19p in multiple sclerosis // Multiple Sclerosis. 2008. - SAGE publications http://online.sagepub.com

280. Walley A.J., Aucan C., Kwiatkowski D., Hill A.V.S. Interleukin-1 gene cluster polymorphisms and susceptibility to clinical malaria in a Gambian case-control study // Eur J Hum Genet. 2004. - №12. - P. 132 - 138.

281. Walley K.R., Wattanathum A., Manocha S. et al. Interleukin-10 Haplotype associated with increased mortality in critically ill Patients with Sepsis from pneumonia but not in patients with extrapulmonary sepsis // Chest. 2005. -V. 128.-V. 1690-1698.

282. Wansen K., Pastinen T., Kuokkanen S. et al. Immune system genes in multiple sclerosis: genetic association and linkage analyses on TCR beta, IGH, IFN-gamma and IL-lra/IL-1 beta loci // J. Neuroimmunol. 1997. -V. 79.-P. 29-36.

283. Wasay M., Khatri I., Khealani B., Sheerani M. Multiple sclerosis in Asian Countries // The International MS Journal. 2006. - V.13. - P. 58-65.

284. Waxman S.G. Ion Channels and Neuronal Dysfunction in Multiple Sclerosis //Arch Neurol.-2002.-V. 59.-P. 1377-1380.

285. Werner P., Pitt D., Raine C.S. Glutamate exitotoxicity a mechnism for axonal damage and oligodendrocyte death in multiple sclerosis? // Journal of neural transmission. Suppl. - 2000. - V. 60. - P. 375-385.

286. Whitacre C. Sex differences in autoimmune diseases // Nat Immunol. -2001.-V. 2.-P. 777-780.

287. Whitfield G.K., Remus L.S., Jurutka P.W: et al. Functionally relevant polymorphisms in the human nuclear vitamin D receptor gene // Mol Cell Endocrinol.-2001.-V. 177 (1-2).-P. 145 -159.

288. Wilbur A.K., Kubatko L.S., Hurtado A.M. et al. Vitamin D receptor gene polymorphisms and susceptibility M. tuberculosis in native Paraguayans // Tuberculosis (Edinb). 2007. - V. 87 (4). - P. 329 - 337.

289. Wilkinson R.J., Patel P., Llewelyn M., et al. Influence of polymorphism in the genes for the interleukin (IL)-l receptor antagonist and IL-ip on tuberculosis//J. Exp. Med. 1999.-V. 189.-№ 12.-P. 1863- 1873.

290. Wilkinson R.J., Liewelyn M., Toossi Z., et al. Influence of vitamin D deficiency and vitamin D receptor polymorphisms on tuberculosis among Gujarati Asians in west London: a case-control study // The Lancet. 2000. -V.355.-P. 618-621.

291. Wilier C.J., Dyment D.A., Risch N.J., Sadovnick A.D., Ebers G.C.; The Canadian Collaborative Study Group. Twin concordance and sibling recurrence rates in multiple sclerosis // Proc. Nat. Acad. Sci. — 2003. V. 100.-P. 12877-12882.

292. Wilier С J., Dyment D.A., Sadovnick, A. et al. Timing of birth and risk of multiple sclerosis: population based study // BMJ. -2005. V. 330. - P. 120.

293. Williams L.M., Ricceretti G., Sarma U.et al. Interleukin-10 suppression of myeloid cell activation — a continuing puzzle // Immunology. 2004. — V. 113.-P. 281 -292.

294. Winderchuk D.M. et al. A population-based case-control study of the tumor necrosis factor alpha-308 polymorphism in multiple sclerosis // Neurology. 1997. - V. 49. - P. 626 - 628.

295. Wingerchuk D.M., Lucchinetti C.F., Noseworthy J.H. Multiple sclerosis: current pathophysiological concepts // Laboratory investigation. 2001. - V. 81.-P. 263-281.

296. Wingerchuk D.M., Lesaux J., Rice G.P.A. et al. A pilot study of oral calcitriol (1,25-dihydroxyvitamin D3) for relapsing-remitting multiple sclerosis // J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2005. - V. 76. - P. 1294-1296.

297. Wise L.H., Lanchbury J.S., Lewis C.M. Meta-analysis of genome searches // Ann. Hum. Genet. 1999. -V. 63. - P. 263-272.

298. Yaylim-Eraltan I., Arzu Ergen H., Arikan S. Investigation of the VDR gene polymorphisms association with susceptibility to colorectal cancer // Cell Biochem Funct. 2007. - V. 25(6). - P. 731 - 737.

299. Yeo T.W., De Jager P.L., Gregory S.G. et al. A second major histocompatibility complex susceptibility locus for multiple sclerosis // Ann Neurol. 2007. - V. 61. - P. 228 - 236.

300. Yua L., Yanga M., Zhaoa J. et al. An association between polymorphisms of the interleukin-10 gene promoter and schizophrenia in the Chinese population // Schizophrenia Research. 2004. - V. 71. - P. 179 - 183.

301. Zafra G., Morillo C., Martin J. et al. Polymorphism in the 3' UTR of the IL12B gene is associated with Chagas1 disease cardiomyopathy // Microbes Infect. 2007. - V. 9(9). - P. 1049 - 1052.

302. Zhang G.X., Hei P., Deng L., Linl J. Interleukin-10 gene promoter polymorphisms and their protein production in peritoneal fluid in patients with endometriosis // Molecular Human Reproduction. 2006. - V.12. - P. 1-6.

303. Zmuda J.M., Cauley J.A., Ferrell R.E. Molecular Epidemiology of Vitamin D Receptor Gene Variants // Epidemiol Rev. 2000. - V. 22. - N 2 - P. 203-217.145

Информация о работе

Бабенко, Сергей Андреевич
кандидата медицинских наук
Томск, 2008
ВАК 03.00.15

Диссертация

Роль аллельных вариантов генов иммунного ответа в развитии рассеянного склероза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы