Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение молекулярно-генетических основ предрасположенности к рассеянному склерозу: анализ ассоциаций с полиморфными маркерами генов-кандидатов

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Изучение молекулярно-генетических основ предрасположенности к рассеянному склерозу: анализ ассоциаций с полиморфными маркерами генов-кандидатов"

На правах рукописи

БИКМЕЕВА АННА МИХАЙЛОВНА

ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСНОВ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАССЕЯННОМУ СКЛЕРОЗУ: АНАЛИЗ АССОЦИАЦИЙ С ПОЛИМОРФНЫМИ МАРКЕРАМИ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ

03.00.15.-генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2004

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

Научные руководители: доктор биологических наук,

Мустафина Ольга Евгеньевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Спицын Виктор Алексеевич

доктор биологических наук, профессор Горбунова Валентина Юрьевна

Ведущая организация: ФГУП «ГосНИИгенетика»

Защита диссертации состоится «Лл!_» июня 2004 г. в II часов на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.133.01 при Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, г. Уфа, проспект. Октября, д. 69.

. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского научного центра РАН.

. Автореферат разослан << мая 2004 г.

Ученый секретарь

Регионального диссертационного совета

{ Гималов Ф.Р.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рассеянный склероз (PC) - представляет собой хроническое заболевание центральной нервной системы (ЦНС), которое характеризуется разрушением миелина и образованием бляшек в белом веществе головного и спинного мозга. Данное заболевание представляет собой серьезную медико-социальную проблему, так как поражает и приводит к ранней инвали-дизации молодых трудоспособных людей. Среди населения, проживающего в разных регионах мира заболеваемость PC неодинакова. Выделяют зоны высокого (более 50 случаев на 100 000 населения), среднего (от 10 до 50 случаев на 100 000 населения) и низкого уровня (менее 10 случаев на 100 000 населения) заболеваемости PC (Lauer К., 1989). Среди населения северной и центральной части Европы, северных районов США, юга Канады, юга Австралии и Новой Зеландии данное заболевание широко распространено. В то же время, в популяциях некоторых народов до сих пор не встречались случаи заболевания PC, в частности в популяции эскимосов и других представителей малых народов Севера, у таджиков, у аборигенов Австралии (Гусев Е., 1997). На территории нашего государства выделяют зоны с высоким и средним уровнями распространенности заболевания. В республике Башкортостан (РБ) на 2003 год усредненный показатель распространенности PC составил 31,14 случаев на 100 000 населения (Бахтиярова К., 2003).

Клиническую картину и особенности течения PC впервые описал в 1856 г. французский невропатолог J.-M. Charcot, он же выделил это заболевание в отдельную нозологическую форму. Несмотря на длительную историю изучения PC, до сих пор существуют проблемы в понимании этиологии и патогенеза этого заболевания, что значительно затрудняет разработку системы профилактических мер, поиск эффективных методов лечения и не позволяет прогнозировать течение и исход заболевания. В настоящее время признана точка зрения, согласно которой PC является многофакторным заболеванием, т.е. его развитие

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

зависит от генетических факторов и факторов внешней среды (инфекционные возбудители, географические, токсические, социальные, травматические и диетические факторы). Значимость наследственной предрасположенности к PC подтверждают результаты семейных исследований. В семьях больных отмечается более высокая встречаемость PC, чем в популяции в целом (Compston A., 1992; Sadovnik A., 1988), и величина относительного риска заболевания для родственников больных PC в 20-50 раз выше, чем в популяции в среднем (Far-ral M., 1996). Также о значимости генетических факторов в развитии PC свидетельствуют результаты исследований с использованием близнецового метода. Показано, что риск конкордантности по PC у монозиготных близнецов выше, чем у дизиготных (25-30% и 3%, соответственно) (Ebers G., 1986).

В настоящий момент предложено около 100 генов-кандидатов PC (httpV/wwwucsfedu/msdb/r ms candidate genes htm П. Согласно одной из наиболее обоснованных теорий патогенеза PC, ведущую роль в разрушении миелина играет воспалительный процесс, связанный с аутоиммунными реакциями. В связи с этим, большинство генетических исследований направлены на поиск ассоциаций между PC и полиморфными аллелями кандидатных генов, которые регулируют иммунный ответ, либо продукцию миелина. Вместе с тем, в ряде работ показано, что аутоиммунные реакции - это всего лишь один из путей приводящий к патологическим изменениям, и что, разные пути могут преобладать при различных клинических формах PC (Судомоина М., 2000). Результаты проведения полного геномного сканирования с использованием более 300 маркеров свидетельствуют о существовании, по крайней мере, нескольких генов, расположенных на 14-ти хромосомах (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11, 14, 17, 18, 19, X-хромасомах) (Ebers G., 1996; Broadley S., 2001; Coraddu R, 2001; Haines J., 1996; Kuokkanen S., 1997; Sawcer S., 1996). К ним относятся гены главного комплекса гистовместимоти (ГКГ), или системы HLA, гены цитокинов и их рецепторов, гены иммуноглобулинов и белков системы комплемента, гены Т-клеточного рецептора и компонентов миелиновой оболочки аксона (Бойко А., 1995; Судо-моина М., 2000; Feakess R., 2000; Giordano М., 2002; Oksenberg J., 1993; Reboul

J., 2000). Результаты ассоциативных исследований по изучению PC неоднозначны. Они выполнены на выборках из популяций разных этносов, относящихся к европеоидным, монголоидным и негроидным группам народностей. Один из выводов таких исследований состоит в том, что молекулярно-генетический анализ данного заболевания необходимо проводить в разных регионах мира с учетом этнической принадлежности.

В этнических группах, проживающих на территории РБ, молекулярно-генетические исследования PC не проводились. Учитывая достаточно высокую частоту PC в данном регионе, проведение таких исследований является особенно актуальным.

В связи со сказанным выше были определены цели и задачи исследования. Цель работы: Изучить молекулярно-генетические основы предрасположенность к рассеянному склерозу по полиморфным маркерам ряда генов-кандидатов в популяции татар. Задачи исследования:

1. В выборке больных рассеянного склероза и в группе сравнения провести типирование по:

- десяти специфичностям гена БКБ1 (HLA класса II),

- полиморфным маркерам генов

* фактора некроза опухолей (Т№А) (HLA класс III),

* интерлейкина-1 бетта (И-1Б),

* антагониста рецептора интерлейкина-1 (И-1ЕА),

* ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ),

* аполипопротеина Е (АРОЕ).

2. Провести анализ ассоциаций перечисленных полиморфных маркеров с риском рассеянного склероза с учетом типа течения, тяжести и симптомов дебюта заболевания.

Научная новизна исследования: Впервые в республике Башкортостан (РБ) создана коллекция ДНК больных PC. Впервые в популяции татар РБ прсн ведено типирование по специфичностям гена БКБ1 (ИЬА класса II), получены

статистические оценки частот аллелей и генотипов по полиморфному маркеру (микросателлиту) гена локализованного в локусе фактора некроза опу-

холей в области ИЬЛ класса ///, а так же маркеров генов кластера 1Ь-1. Впервые в популяции татар изучена наследственная предрасположенность к РС по семи полиморфным маркерам генов ЖЛ-системы, Я,-7-семейства, АСЕ и АРОЕ. Установлено, что с риском РС ассоциированы полиморфные маркеры генов DRBU TNFЛ. Генотипы и аллели генов TNFЛ, DRB1, АРОЕ, 1Ь-1 (-51^^) определяют предрасположенность к клиническим особенностям заболевания.

Научно-практическая значимость работы. Результаты исследования имеют значение для развития общетеоретических представлений о природе РС. Они могут быть использованы в системе медико-генетического консультирования с целью определения шансов развития РС, прогноза формы и тяжести заболевания. Результаты исследования могут быть использованы в различных областях науки: в биохимии, в генетике, в медицине, и могут быть рекомендованы для использования в учебно-методическом процессе в ВУЗах.

Положения, выносимые на защиту.

1. Полиморфные маркеры генов ЫЬД-системы (DRB1 и Т^Л), АРОЕ ассоциированы с риском РС.

2. Полиморфный маркер гена TNFЛ ассоциирован с ремитирующим и вторично-прогрессирующим, маркер гена DRB1 - с вторично-прогрессирующим типом течения РС.

3. Полиморфный маркер гена АРОЕ ассоциирован с высокой степенью ин-валидизации больных РС.

4. Полиморфные маркеры генов АРОЕ, TNFЛ и 1Ь-1 ассоциированы с различными вариантами дебюта рассеянного склероза.

Апробация диссертации. Материалы диссертационной работы были представлены на: международной конференции «Геном человека» (Ванкувер, Канада, 2000), международной конференции по гемореологии (Ярославль, 2001), 5-ой Балканском симпозиуме по генетике человека (София, 2002), Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической

генетики» (Москва, 2003), Всероссийском рабочем совещании «Организация помощи больным рассеянным склерозом» (Томск, 2003), международном конгрессе «Европейско-американская школа судебной генетики и клинический курс по передовой молекулярной и клеточной медицине» (Загреб, Хорватия, 2003), 8-ой ежегодной международной конференции «Геном человека» (Кан-кун, Мексика, 2003), международной конференции «Биомедицинское применение биотехнологии» (Гавана, Куба, 2003), международной конференции «Геном человека» (Берлин, Германия, 2004), 3-м съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития» (Москва, 2004), 9-ая Всероссийская научная конференция «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2004), Европейская конференция по Генетике человека (Мюнхен, Германия, 2004).

' Публикации. По материалам исследования опубликовано 11 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 165 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 270 источников (32 работы отечественных и 243 работы зарубежных авторов). Диссертация иллюстрирована 36 таблицами и 24 рисунками и дополнена приложением (56 стр., 36 табл.).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Материалы исследования. Материалом исследования служили образцы ДНК, полученные из цельной венозной крови.

Контрольная группа была сформирована из доноров Республиканской станции переливания крови г. Уфы в возрасте от 15 до 57 лет (средний возраст 38.79+9.33), неродственных между собой, без признаков РС и других неврологических заболеваний. Численность группы составила 227 человек.

В выборку больных были отобраны неродственные между собой пациенты в возрасте от 18 до 72 лет (средний возраст 42.31±9.96), с достоверным диагнозом PC по критериям McDonald (McDonald, 2001), проходившие курс лечения в Республиканской клинической больнице г. Уфы (всего 131 человек). Средняя длительность заболевания составила 13.36±10.55 лет (от 1 до 35 лет); средний возраст начала заболевания - 28.94±8.92 (от 14 до 49 лет). На каждого больного путем опроса и анализа истории болезни была заполнена анкета, включающая в себя паспортные данные больного, возраст начала, тип течения заболевания. Принято выделять первично-прогрессирующее (ПП), вторично-прогрессирующее (ВП), ремитирующее (РМ) течение заболевания. Варианты дебюта заболевания подразделяют по симптомам нарушения чувствительности (НЧ), координации (НК), функций тазовых органов (НТ), зрения (НЗ), симптомам поражения пирамидного пути (НП), черепно-мозговых нервов (НЧМ) и по поли-системну началу (ПОЛИ). Тяжесть состояния больных определяется по расширенной шкале степени инвалидности (Expanded Disability Status Scale - EDSS) от 1.0 до 9.5 (Kurtzke J.F., 1983). Пограничное значение EDSS=6 соответствует уровню, начиная с которого, пациенты теряют способность самостоятельно передвигаться. Значение EDSS=6 служит показанием для назначения определенных терапевтических процедур.

Все лица контрольной группы и группы пациентов PC по этнической принадлежности были татарами. Для выяснения этнической принадлежности проводили индивидуальный опрос с уточнением национальности по обеим родительским линиям до 3-го поколения.

Методы исследования. ДНК получали из 10 мл цельной венозной крови методом фенольно-хлороформной экстрации (Johns M, 1989). Анализ генетического полиморфизма осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), или ПЦР с последующим рестрикционным анализом; перечень ампли-фицированных локусов, последовательности праймеров, размеры амплифици-рованных фрагментов и рестриктазы представлены в табл. 1. При типировании специфичностей гена DRB1 использовались наборы реакционных смесей фир-

мы «ДНК-Технология». Разделение фрагментов ДНК проводили при помощи электрофореза в полиакриламидном и агарозном гелях с последующим окрашиванием геля раствором бромистого этидия и визуализацией в УФ-свете. Длину тандемных микросателлитных динуклеотидных повторов (CA/TG)n ло-куса TNFA определяли с использованием высокоразрешающего электрофореза в 10% денатурирующем полиакриламидном.геле с последующим радиоавто-графированием.

Статистическая обработка полученных результатов исследования. Для

проверки соответствия эмпирического распределения частот генотипов теоретически, ожидаемому равновесному распределению Харди-Вайнберга использовали модифицированный критерий Х2(Р), определяемый с помощью программы RxC по алгоритму, описанному D.Roff и P. Bentzen (Roff P., 1989). При попарном сравнении частот генотипов и аллелей в группах больных и здоровых лиц использовался двусторонний критерий Фишера. Доверительные интервалы частот аллелей и генотипов рассчитывали на основе точной формулы с использованием F-распределения (Животовский Л.А., 1984). Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя соотношения шансов odds ratio (OR) (Bland J., 2000). В целом для статистического анализа результатов исследования использован пакет программ "Statistica for Windows 5.0" (StatSoft), программное обеспечение MS Excel 98 (Microsoft) и компьютерная программа RxC (Rows x Columns) (RofFP.,1989).

Результаты и обсуждение

Анализ ассоциаций специфичностей гена DRB1 с риском рассеянного склероза

Распределение частот специфичностей гена DRB1 в контрольной группе и группе больных представлено на рис.1 и на рис.2 (у женщин и у мужчин, соответственно). В группе больных женщин не выявлена специфичность DRB1 *13 (0% по сравнению с 6.89 % в контрольной группе, Р=0.008). Соответственно показатель относительного риска PC у женщин с данной специфичностью

Таблица 1.

Тип полиморфизма, последовательность праймеров и номенклатура аллелей анализируемых ДНК-локусов.

Ген (ОМ1М), хромосомная локализация Полиморфюм (локализация) Праймеры (рестриктаза) Аллели или специфичности (размер фрагментов, П.О.) Ссылка

1 2 3 4 5

АРОЕ (107741) 19д13.2 А^158Суц Суз112А^ (экзон 4) 5'-AGA TGC GGG САС GGC TGT ТСА AGG А -3' 5'-ССС TCG CGA GCC CCG GCC TGG ТАС АС -3' (Hhal) АРОЕ*2 (91, 83), АРОЕ*3 (91,48) АРОЕ*4 (91,72) (Hixson J., 1990)

АСЕ (106180) 14ч 11.2 //£> А1и (шггрои 16) 5'-CTG GAG АСС ACT ССС АТС СТГ ТСТ-3' 5'-GAT GTG GCC АТС АСА ТТС GTC AGA Т-3' ЛС£*/(490) АСЕ*Б{ 192) (Lee Y., 2002)

И-1В (147420) 2ч14 -511Т/С (промотор) 5'-GCC TGA АСС CTG CAT АСС GT-3' 5'-GCC ААТ AGC CCG ССС TGT СТ-3' (Aval) 1Ь-1В (~511)*С (88+67) 11^1В(-511)*Т( 155) (Kato S., 2001)

И-1В (147420) 2ч14 +3954 С/Т (экзон 5) 5'-GTT GTC ATG AGA CTT TGA CC-3' 5'-TTC AGT TCA TAT GGA CCA GA-3' (TaqI) 1Ь-1В*Е1 (135+114) 1Ь-1В*Е2 (249) (ChenW., 2001)

(147676) 2ql4.2 ШТЯ (2-6 копий 86 -членного повтора, (интрои 2) 5'-CTC AGC AAC ACT CCT AT-3' 5'-TCC TGG TCT GCA GGT AA-3' 1Ь-1ЯА*1 (410) 1Ь-1ЯА*Н (240) 1Ь-Ш*Ш (500) 1Ь-1М*1У (325) 595) (ChenW., 2001)

БКВ1 (142857) 6р21.3 специфичности НЬА-ОЯ 011В1*01 (117) ИкВ1*02 (66) ОПВ1*2(15) (205) (Alexeev L„ 1995)

Продолжение таблицы 1.

1 2 3 4 5

ПЦР выполнена с использованием праймеров, входящих в состав наборов реакционных смесей фирмы «ДНК-Технология». DRB1 *2(I6) (209) DRB1*3(17) (17) DRB 1*3(18) (57) DRB1 *04 (126) DRBl*5(ll) (73) DRB 1*5(12) (80) DRB 1*6(13) (220+150) DRB1 *6(14) (46) DRB1*07 (75) DRB1*08 (94) DRB1 *09 (188) DRB1*10 (53)

TNFA (191160) 6р21.3 (CA/TG)n число динуклеотидных повторов от 1 до 13 IR1 5'-GCA СТС CAG ССТ AGG CCA CAG А-3' IR3 5'-САС AGG AAG ССТ TTA AAG GTC GTC-3' IR4 5'-CCT СТС ТСС CCTGCA АСА CAC A-3' IR5 5'-GTG TGT GTT GCA GGG GAG AGA G-3' TNFA*1 (98) TNFA*2 (100) TNFA* 3(102) 7NFA*4(W) TNFA*5 (106) TNFA*6(m) TNFA*7 (110) TNFA*8 (112) TNFA*9 (114) TNFA*10(U6) TNFA* 11(11%) TNFA* 12 (120) TNFA*13 (122) (Nedospasov S., 1991)

СЬецифичность

DRB 1*9 DRB 1*8 DRB 1*7 DRB 1*6(14) DRB 1*6(13) DRB1 *5(12) DRB1*5(11) DRB 1*4 DRB1*3(18) DRB 1*3(17) DRB 1*2(16) DRB 1*2(15) DRB1*1

5'

1 1 1

Г 1 - ....

■ больные □ контроль

10

15

20

25 %.

Рис. 1. Частоты специфичностей гена DRB1 в группах женщин, здоровых и больных PC

составил 0.04 (С1=0.002-0.86). Согласно данным литературы в популяции шведов, и исландцев специфичность DRB1 *б(13) маркирует пониженный риск PC (Haegert D.G., 1993; Lord D., 1990). В группе больных PC мужчин по сравнению с контрольной группой отмечена сравнительно большая частота специфичности DRB1*2(15+16) (30.30% против с 16.21%, Р=0.075). Это наблюдение согласуется с известными данными о связи PC со специфичностью DR2, особенно её подгруппы DR15 в популяциях народов европеоидной группы (Бойко А., 1995; Giordano M., 2002). В то же время в настоящем исследовании показано, что в группе больных PC с ВП отмечена большая частота специфичности DRB1 *08 (9.21% против 2.29% в контрольной группе, Р=0.034). Значение относительного риска по DRBl*08 составляет 4.31 (С1=1.08-18.19). Установлено, что между группой больных PC и контрольной группой существуют различия по частоте генотипа DRBl*01/*07; в группе больных данный генотип не встречается, в то время как среди здоровых лиц его частота составляет 8.04% (Р=0.019). Риск PC по данному генотипу составляет 0.05 (С1=О.ООЗ-1.О6).

Специфичность

БЯВ1 *9 . БИВ! *8'

ОМ 1*6(14) ИМ 1*6(13) БЯВ1*5(12) ЛИВ 1*5(11) йКВ1*4 ЬНВ1*3(18) ' БИВ 1*3 (17) ПКВ1*2(15+16) ВШ*1

^^^^ 1 ■ больные □ контроль

^мамГЭ 1

1

О 5 10 15 20 25 30 35 °/о

Рис. 2. Частоты специфичностей гена БКБ1 в группах мужчин, здоровых и больных PC

Анализ ассоциаций микросателлита гена ТИ¥Л с риском рассеянного склероза

. Распределение частот аллелей микросателлита гена ТМ¥Л представлено на рис.3 и на рис.4 (у женщин и у мужчин, соответственно). Установлено, что по частотам аллелей микросателлита гена ТМ¥Л наблюдаются достоверные различия в связи с половой принадлежностью: в группе мужчин по сравнению с группой женщин повышена частота аллеля ТМ¥Л*4 (5.08% относительно 0.5.7%, Р=0.022).

В популяции татар у женщин пониженный риск РС соотносится с аллелем Т№Л*7. Частота аллеля ТМ¥Л*7 среди больных составляет 7.75%, тогда как в контрольной группе - 17.24% (Р=0.032; 0Я=0.40, С1=0.18-0.88). Аллель ТМ¥Л*4 не ассоциирован с ПП типом течением РС, но наблюдается его связь с РМ и ВП течением, т.е. с «щадящими» типами течения заболевания/У больных с РМ

Аллель

тыга*В

ТИРА* 12 ТЫРА*11 ТЫРА*10 ШРА*9 ШРА*8 ШРА*7 ШРА*б ТИРА*5 ТНРА*4 ТЫРА*3 ШРА*2 ПГРА*1

15

20

•р" 1 ■ все больные □ контроль

\

\ш

; ;

: -

I

%

0 5 10

Рис.3. Частоты аллелей микросателлита гена ТМ¥Л в группах женщин, здоровых и больных PC

типом течения частота данного аллеля составила 22.22% по сравнению с 0.57% в контрольной группе (Р=0.0005), соответственно относительный риск такого варианта заболевания равен 49.42 (С1=5.16-472.73). В группе больных с ВП типом течения аллель ТМ¥Л*4 встречается с частотой 7.57% по сравнению с 0.57% (Р=0.009), значение относительного риска в данном случае составило 14.18 (С1=1.58—123.80). Относительный риск PC у носителей аллеля ТМ¥Л*4 ниже в группе больных с показателем EDSS ¿6 (частота - 7.14%), чем у больных со слабой тяжестью PC (EDSS < 6) (частота аллеля 11.66%). Величины относительного риска составляют 13.30 (С1=1.35—121.69) и 22.84 (С1=2.72-186.94),

Рис. 4. Частоты аллелей по полиморфному маркеру (микросателлит) гена ТМ¥Л в группах мужчин, здоровых и больных PC

соответственно. Относительный риск PC с нарушениями зрения в дебюте заболевания повышен у женщин с аллелем ТМ¥Л *4 (18.42% по сравнению с 0.57% в контрольной группе; Р=0.0005; OR=39.06, И=4.64-328.69) и понижен у пациенток с аллелем Т№Л*7 (0% и 17.24%, Р=0.012; OR=0.06, а=0.00-1.02). В 35.39% случаев у больных наблюдается дебют с симптомами нарушения пирамидного пути. Обнаружено, что у женщин данный вариант дебюта ассоциирован с аллелем ТМ¥Л*б (6.89% по сравнению с 20.69% в контрольной группе; Р=0.027; OR=0.28, И=0.08-0.88). Относительный риск PC с ремитирующим течением ассоциирован с аллелем Т№Л*2: частота в группе больных (38.88%) выше, чем в контрольной группе (16.66%; Р=0.047), и значение относительного риска равно 3.18 (С1=1.01-9.86).

Выявлено, что частота аллеля ТМ¥Л*3 в группе больных мужчин с полисистемным началом составляет 15.38% по сравнению с 2.11% в контрольной группе (Р=0.004). Относительный риск PC у мужчин с полисистемным вариантом дебюта у носителей аллеля ТМ¥Л*3 составляет 8.40 (С1= 1.73—39.83).

Анализ ассоциаций полиморфных маркеров (-511Т/С) и (+3954С/Т) гена 1Ь-1В с риском рассеянного склероза.

В группе сравнения частоты генотипов и аллелей по полиморфному маркеру (- 511Т/С) гена 1Ь-1В составляют: 46.99% (*С/*7), 31.93% (*С/*С), 21.08% (*7У*7); 55.42% (*С) и 44.58% (*7) (рис.5). Выявлено повышение частоты генотипа *Т/*Т в группе больных с нарушением зрения в дебюте заболевания (38.46% по сравнению с 21.08% в контрольной группе; Р=0.036). Величина показателя относительного риска варианта дебюта для носителей генотипа 1Ь-1В *Т/*Травна 2.33 (С1= 1.11-4.92) (рис. 5). Не обнаружено ассоциаций с типом течения и тяжестью заболевания. Однако в отдельных работах показано, что аллель 1Ь-1В*ТВ популяциях европейцев соотносится с более ранним достижением стойкой инвалидности с выраженными проблемами в передвижении, т.е. с тяжестью заболевания (Feakess И., 2000; O.H., 2000; Schrijver H.M.,

1999; SciaccaF.L., 1999). Поскольку генотип 1Ь-1В*Т1*Тассоциирован с увели-

Рис. 5. Частоты генотипов полиморфизма (-511Т/С) гена 1Ь1В в группах больных PC и здоровых.

чением продукции IL1-ß (Nemetz A., 2001; Santtila S., 1998), можно полагать, что в основе наблюдаемых ассоциаций с PC, скорее всего, лежит корреляция между данным полиморфизмом и уровнем секреции цитокина.

Частоты аллелей IL-1B *Е1 ИIL-1B *Е2 полиморфного маркера (+3954С/Т) гена IL-1B в контрольной группе составляют 76.21% и 23.79%, соответственно; частоты генотипов составляют 58.15% (*Е1/*Е1), 36.12% (*Е1/*Е2) и 5.73% (*Е2/*Е2). Не обнаружено достоверных отличий по частотам генотипов и аллелей между группами больных и здоровых лиц. Таким образом, в популяции татар полиморфизм (+3954С/Г) гена IL1B не ассоциирован с PC.

Анализ ассоциаций минисателлита гена 1L-1RA с риском рассеянного склероза.

• Частоты генотипов по полиморфному минисателлиту гена 1L-1RA в контрольной группе составляют: 50.56% (*//*/), 35.95% (*1/*1Г), 8.98% (*Ш*Щ, 0.56% (*11/*ПГ), 2.24% (*1/*11Г), 1.68% <*I/*IV)\ частоты аллелей: 70.50% (*/), 27. 24% (*11), 1.40 (*ПГ), 0.84% (*1У). Выборка больных по частотам генотпов и аллелей не отличалась от контрольной группы. Таким образом, гена 1L-1RA VNTR полиморфизм гена JL-1RA в популяции татар с риском PC не ассоциирован.

Анализ ассоциаций полиморфного маркера I/D гена АСЕ с риском рассеянного склероза.

В группе сравнения частоты генотипов и аллелей по полиморфному маркеру.///) гена АСЕ следующее: 14.78% (*//♦/), 59.11% (*I/*D), 26.11% (*D/*D) и 44.33% (*/), 55.67% (*D). Установлено, что в сыворотке крови у больных PC

концентрация АСЕ повышена. Изменение активности АСЕ коррелирует с изменениями, фиксируемыми при магнитнорезонансной томографии (Coraddu F., 1998). Фермент вовлечен а в обмен нейропептидов, регуляцию иммунных и воспалительных реакций и оказывает влияние на состояние гематоэнцефаличе-ского барьера (Елисеева Ю., 2001). Полиморфизм I/D гена АСЕ ассоциирован с

с уровнем фермента в крови (Rigat В., 1990). Однако нами не обнаружено достоверных различий между группами больных и здоровых лиц при сравнении по частотам генотипов и аллелей, следовательно, в популяции татар полиморфный маркер 1/Б гена АСЕ с риском ГО не ассоциирован.

Анализ ассоциаций полиморфных маркеров в кодонах 112 и 158 гена АРОЕ с риском рассеянного склероза.

Частоты аллелей АРОЕ*2, АРОЕ*3, АРОЕ*4 в контрольной группе составляют 6.30%, 80.88%, 12.81%; частоты генотипов АРОЕ*2/*3, АРОЕ*2/*4 АРОЕ*3/*3, АРОЕ*3/*4, АРОЕ*4/*4 составляют 11.76%, 0.84, 64.28%, 21.42 и 1.68%, соответственно (рис.6).

% 80

1-1 —

■

01 а-» ■ш ¿¿ПТ

ОЕ*2/*2 ПЕ*2/*3 QE*2/*4 ОЕ*3/*3 Л Е*3/*4 И Е*4/*4

контроль

больные EDSS 6 и более

Рис.6. Частоты генотипов по полиморфным локусам гена АРОЕ в группах больных и здоровых лиц.

• Установлено, что риск РС с нарушениями координации в дебюте заболевания повышен с связи с генотипом АРОЕ*2/*4 (Р=0.009; <Ж=9.83, С1=1.49-79.75) и аллелем АРОЕЧ (Р=0.012; 011=2.04, С1=0.16-3.57) и понижен по алле-лю АРОЕ*3 (Р=0.013; (Ж=0.53, С1=0.32-0.87). У лиц с генотипом АРОЕ*2/*4 повышен риск РС с полисистемным началом (Р=0.003; (Ж= 12.42, С1=1.86-101.69) и риск РС с нарушениями пирамидного пути (Р=0.015; СЖ=8.90,

CI=1.35-71.99).' Риск PC с высокой степенью инвалидности повышен у носителей генотипа АРОЕ*4/*4 (Р=0.049; OR=4.97, С1=1.00-24.44). В популяциях разных народов изучались ассоциации полиморфных маркеров гена АРОЕ с PC. Более тяжелое течение PC у больных с аллелем АРОЕ*4 отмечено в популяциях англичан, евреев, немцев (Chapman J., 2001; Evangelou N., 1999; Fazekas F., 2001).

Результаты проведенного исследования позволяют сделать следующие выводы.

ВЫВОДЫ

1. Впервые в популяции татар (республика Башкортостан) охарактеризован полиморфизм генов-кандидатов PC: DRB1 (10 специфичностей, HLA класс II), TNFA ( VNTR, HLA класс III), ACE (I/D), АРОЕ (112 Cys ¡Arg и 158 Arg ¡Oys), IL-1B (-511T/C), IL-1B (+3954 C/T), IL1RA (VNTR). Показано, что в популяции татар предрасположенность к PC формируется в связи с полиморфизмом четырех генов (DRB1, TNFA, АРОЕ и IL-1B).

2. Обнаружено, что с рассеянным склерозом у женщин ассоциированы специфичности является маркером пониженного риска PC, а специфичность DRB1 *08 маркером повышенного риска PC с вторично-прогрессирующим течением.

3. Установлено, у женщин повышенный риск заболевания с ремиттирующем типом течения соотносится с аллелями а риск заболевания с вторично прогрессирующем типом течения — с аллелем TNFA *4; риск заболевания понижен в связи с аллелем TNFA *7 независимо от типа тичения.

4. Выявлено, что риск заболевания с более сильной степенью инвалидизации повышен у носителей генотипа независимо от их- половой принадлежности.

5. Показано, что с вариантами дебюта рассеянного склероза ассоциированы полиморфные маркеры генов

5.1. Маркерами повышенного риска PC с нарушения зрения в дебюте у женщин являются генотип IL-1B*T/*Tи аллель TNFA*4, а маркером пониженного риска - аллель TNFA*7. У мужчин маркером повышенного риска PC с нарушениями зрения в дебюте является генотип IL-1B*T/*T.

5.2. Установлено, что у женщин риск PC с симптомами нарушения пирамидного тракта в дебюте заболевания понижен в связи с аллелем TNFA *6.

5.3. С полисистемным началом PC ассоциированы полиморфные маркеры генов TNFA и АРОЕ: аллель TNFA*3 маркирует пониженный риск полисистемного дебюта заболевания у мужчин, генотип АРОЕ*2/*4 маркирует повышенный риск полисистемного начала и у мужчин и у женщин.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мустафина О.Е., Туктарова И.А., Бикмеева A.M.. Насибуллин Т.Р., Хуснут-динова Э.К. Исследование инсерционно-делеционного полиморфизма гена ан-гиотензин-превращающего фермента в популяциях Волго-Уральского региона // Генетика. - 2001. Т. 37. №3. С. 426-431.

2. Мустафина О.Е., Туктарова И.А., Бикмеева А.М.. Насибуллин Т.Р., Хуснут-динова Э.К. Исследование полиморфизма гена аполипопротеина Е в популяциях Волго-Уральского региона // Генетика. - 2001. Т. 37. №4. С. 558-563.

3. Мустафина О.Е., Шагисултанова Е.И., Насибуллин Т.Р., Туктарова И.А., Бикмеева A.M., Полюдова О.Н., Хуснутдинова Э.К. Полиморфизм 27-членных тандемных повторов гена эндотелиальной синтазы окиси азота: исследование в популяциях Волго-Уральского региона и анализ ассоциаций с инфарктом миокарда и эссенциальной гипертензией у жителей Башкортостана // Генетика. — 2001. Т. 37. №5. С. 668-674.

4. Бикмеева A.M.. Мустафина О.Е., Туктарова И.А., Бахтиярова К.З., Магжанов Р.В., Хуснутдинова Э.К. Анализ ассоциаций генетического полиморфизма апо-липопротеина Е с риском развития рассеянного склероза // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической генетики». Москва. 2003. С. 405

5. Бикмеева A.M.. Мустафина О.Е., Туктарова И.А., Бахтиярова К.З., Магжанов Р.В., Ворончихина С.А., Хуснутдинова Э.К. Анализ ассоциаций полиморфизма гена аполипопротеина Е с риском рассеянного склероза // Материалы Всероссийского рабочего совещания «Организация. помощи больным рассеянным склерозом». Томск. 2003. С. 67-70.

6. Авзалетдинова Д.Ш., Бикмеева A.M. Полиморфизм гена DRB1 и риск развития сахарного диабета первого типа у татар Башкортостана // Тезисы докладов 9-ой Всероссийской научно-практической конференции. «Молодые ученые в медицине». Казань. 2004. С. 115.

7. Бикмеева A.M.. Мустафина О.Е., Туктарова И.А., Бахтиярова К.З., Магжанов Р.В., Хуснутдинова Э.К. Анализ ассоциаций генетического полиморфизма аполипопротеина Е с риском развития рассеянного склероза // Материалы 3-го съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития». Москва. 2004.

8. A.M. Bikmeveva. O.E. Mustafina, LA. Tuktarova, K.Z. Bakhtiyarova, O.O. Favo-rova, M.A. Sudomoina, E.K. Khusnutdinova. DNA typing in Tatar patients with multiple sclerosis (ДНК-типирование у татар больных рассеянным склерозом) // Human Genome Meeting. Cancun. 2003. Abst. No. P-22.

9. A.M. Bikmeeva. O.E. Mustafina, K.Z. Bahtyarova, R.V. Magjanov, L.I. Volkova, D. Sh. Khamzina-Karimova, G.H. Tulakova, E.K. Khusnutdinova. Association ofthe interleukin-1 genetic polymorphism and multiple sclerosis risk. (Ассоциация генетического полиморфизма интерлейкина 1 с риском рассеянного склероза) // European-American School in Forensic Genetics and Mayo Clinic Course in Advanced Molecular and Cellular Medicine. Zagreb. 2003. M9. P.77.

10.A.M. Bikmeeva. O.E. Mustafina, K.Z. Bahtyarova, S.A. Voronchihina, D. Sh. Khamzina-Karimova, G.H. Tulakova, R.V. Magjanov, E.K. Khusnutdinova. Association of interleukin-1 genotype with multiple sclerosis susceptibility (Ассоциация генотипа интерлейкина-1 с восприимчивостью к рассеянному склерозу) // Biotechnology. Havana 2003. Imm-7. P.56.

11. Anna Bikmeeva, Olga Mustafina, Klara Bahtyarova, Rim Magjanov, Elza Khusnutdinova. Association of the APOE genetic polymorphism and multiple sclerosis risk. (Ассоциация полиморфизма гена АРОЕ с риском рассеянного склероза) // Human Genome Meeting. Berlin. Germany. 2004. Poster Abstr. No. 258.

Список сокращений и условных обозначений

ВП - вторично-прогрессирующее течение

НЗ - зрительные нарушения

НК - нарушения координации

НП - поражение пирамидного пути

НТ - нарушение функций тазовых органов

НЧ - нарушения чувствительности

НЧМ - нарушения черепно-мозговых нервов

ПОЛИ - полисистемное начало

ПП - первично-прогрессирующее течение

РМ - ремиттирующее течение

PC - рассеянный склероз

АСЕ - ангиотензин-превращающий фермент

АРОЕ - аполипопротеин Е

EDS S - расширенная шкала степени инвалидности

HLA - антигены лейкоцитов человека

IL-1B — интерлейкин-1 бетта

IL- 1RA — антегонист рецептора интерлейкина-1

TNFA - фактор некроза опухолей

CI - (confidence interval) - 95% доверительный интервал OR - (odds ratio) показатель соотношения шансов

БИКМЕЕВА АННА МИХАИЛОВНА

ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ОСНОВ

ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К РАССЕЯННОМУ СКЛЕРОЗУ: АНАЛИЗ АССОЦИАЦИЙ С ПОЛИМОРФНЫМИ МАРКЕРАМИ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ

03.00.15-генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 19.05.2004 Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 1/16. Усл.-печ. л. 1,5. Уч.-изд. 1,7. Тираж 100 экз. Заказ № 300.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, Башкирский государственный медицинский университет

04*13842

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бикмеева, Анна Михайловна

'J*

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные положения современной концепции этиологии и патогенеза рассеянного склероза

1.2. Генетические факторы риска рассеянного склероза

1.3. Полиморфизм генов-кандидатов рассеянного склероза

1.3.1 Полиморфизм генов главного комплекса гистосовместимости

1.3.2. Полиморфизм генов фактора некроза опухолей ig 1.3.3. Полиморфизм генов цитокинового комплекса IL-

1.3.4. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента

1.3.5. Полиморфизм гена аполипопротеина Е

Глава 2. МАТЕРР1АЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАЬ1ИЯ

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Выделение ДНК из венозной крови человека

2.2.2. Амплификация полиморфных участков Д1Ж

2.2.3. Электрофорез амплифицированных фрагментов ДНК. j^^ 2.3. Статистический анализ результатов исследования

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНРШ

3.1. Анализ ассоциаций полиморфизма гена DRB1 HLA класса II с ^ рассеянным склерозом

3.2. Анализ ассоциаций микросателлита гена фактора некроза опухолей-а с рассеянным склерозом

3.3. Анализ ассоциаций полиморфного маркера (— С/Т) гена интерлейкина —1 [3 с рассеянным склерозом

3.4. Анализ ассоциаций полиморфного маркера/+ЗР5^ С/Т? гена интерлейкина — (3 с рассеянным склерозом

3.5. Анализ ассоциаций минисателлита гена антагониста рецептора инI* терлейкина— с рассеянным склерозом '4* 3.6. Анализ ассоциаций полиморфного маркера I/D гена ангиотензинпревращающего фермента с рассеянным склерозом

3.7. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров в кодонах и гена алипопротеина Е с рассеянным склерозом

Глава 4. ОБСУЖДЕНР1Е РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение молекулярно-генетических основ предрасположенности к рассеянному склерозу: анализ ассоциаций с полиморфными маркерами генов-кандидатов"

Актуальность проблемы. Рассеянный склероз (PG) — представляет собой хроническое заболевание центральной нервной системы (ЦНС), которое характеризуется разрущением миелина и образованием бляшек в белом веществе головного и спинного мозга. Данное заболевание представляет собой серьезную медико-социальную проблему, так как поражает и приводит к ранней инвалидизации молодых трудоспособных людей. Среди населения, проживающего в разных регионах мира, заболеваемость PC неодинакова.Выделяют зоны высокого (более 50 случаев на 100 000 населения), среднего (от 10 до 50 случаев на 100 000 населения) и низкого уровней (менее 10 случаев на 100 ОООнаселения) заболеваемости PC [174]. Среди населения северной и центральной части Европы, северных районов США, юга Канады, юга Австралии и Новой Зеландии данное заболевание щироко распространено. В то же время, в популяциях некоторых народов до сих пор не встречались случаи заболевания PC, в частности, в популяциях эскимосов и других представителей малых народов Севера, у таджиков, у аборигенов Австралии [7].На территории нашего государства выделяют зоны с высоким и средним уровнями распространенности заболевания. В республике Башкортостан (РБ) на 2003 год усредненный показатель распространенности: PC составил 31,14 случаев на 100 000 населения [3].Клиническую картину и особенности течения PC впервые описал в 1856 г. французский невропатолог J.-M. Charcot; он же выделил это заболевание в отдельную нозологическую форму. Несмотря на длительную историю изучения PC, до сих пор существуют проблемы в понимании этиологиии патогенеза этого заболевания, что значительно затрудняет разработку системы: профилактических мер, поиск эффективных методов лечения и не позволяет прогнозировать течение и исход заболевания. В настоящее время признана точка зрения, согласно которой PC является многофакторным заболеванием, т.е. его развитие зависит от генетических факторов и факторов '«' <ti леванием, т.е. его развитие зависит от генетических факторов и факторов внешней среды (инфекционные возбудители, географические, токсические, социальные, травматические и диетические факторы). Значимость наследственной предрасположенности к PG подтверждают результаты семейных исследований. В семьях больных отмечается более высокая встречаемость PG, чем в популяции в.целом, и величина относительного риска заболевания.для родственников больных в 20-50 раз выше, чем в популяции в среднем [72, 98, 230]. Также о значимости генетических факторов в развитии PG свидетельствуют результаты исследований с использованием близнецового метода. Показано, что риск конкордантности по PG у монозиготных близнецов выше, чем у дизиготных (25-30% и 3%, соответственно) [85].В настоящий момент предложено около 100 генов-кандидатов PG [197].. Goглacнo одной из наиболее обоснованных теорий патогенеза PG, ведущую роль в разрушении миелина играет воспалительный процесс, связанный с аутоиммунными реакциями; В связи с этим, большинство генетических иссле. дований направлены на поиск ассоциаций между PC и полиморфными аллелями кандидатных генов; которые регулируют иммунный ответ либо продукцию миелина. Вместе с.тем, в ряде работ показано, что аутоиммунные реакции - это всего лишь один из путей приводящий к патологическим изменениям, и что разные пути могут преобладать при различных клинических формах PG [27]. Результаты полного геномного сканирования с использованием более 300 маркеров свидетельствуют о существовании, по крайней мере, нескольких генов, расположенных на 14-ти хромосомах (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,.10, 11, 14, 17, 18, 19, X) [54, 76, 86, 127, 169, 236]. К ним относятся гены главного комплекса гистовместимоти (ГКГ), или системы HLA, гены цитокинов и их рецепторов, гены иммуноглобулинов и белков системы комплемента, гены Т-клеточного рецептора и компонентов миелиновой оболочки аксона [4, 27, 103, 120, 211, 222]. Результаты ассоциативных исследований по изучению PG неоднозначны. Они выполнены на выборках из популяций разных этносов, относящихся к европеоидным, монголоидным и негроидным группам народностей. Один из выводов таких исследований состоит в том, (V что молекулярно-генетический анализ данного заболевания необходимо проводить в разных регионах мира с учетом этнической принадлежности.В-этнических группах, проживающих на территории РБ, молекулярногенетические исследования PG не проводились. Учитывая достаточно высокую частоту PC в данном регионе, проведение таких исследований является особенно актуальным.В связи со сказанным выше были определены цели и задачи исследования.Цель работы: изучить молекулярно-генетические основы предрасполо.^; женность к рассеянному склерозу по полиморфным маркерам ряда геновкандидатов в популяции татар.Задачи исследования: 1. В выборке больных рассеянного склероза и в группе сравнения провести типирование по: - десяти специфичностям гена DRB1 (HLA класса II), - полиморфным маркерам генов * фактора некроза опухолей (TNFA) (HLА класс III), * интерлейкина-1 бета (IL-IB), ,^ 1 * антагониста рецептора интерлейкина-1 {IL-1RA), * ангиотензин-превращающего фермента (^GE),. * аполипопротеина Е{АРОЕ).2. Провести анализ ассоциаций перечисленных полиморфных маркеров с риском рассеянного склероза с учетом типа течения, тяжести и симптомов дебюта заболевания.Научная новизна исследования: Впервые в республике Башкортостан (РБ) создана коллекция Д1Ж больных PC. Впервые в популяции татар РБ проведено типирование по специфичностям гена DRB1 {HLA класса 11), получены статистические оценки частот аллелей и генотипов по полиморфному маркеру (микросателлиту) гена TNFA, локализованного в локусе фактора некрозе опухолей в области HLA класса III, а так же маркеров генов кластера ' ^ IL-1. Впервые в популяции татар изучена наследственная предрасположенность к PC по семи полиморфным маркерам: генов HLA-системы, IL-1семейства, АСЕ тл АРОЕ. Установлено, что с риском PC ассоциированы полиморфные маркеры генов D^B7, r / /F^. Специфичности гена £)/?5/, аллели микросателлита гспа TNFA, аллели и генотипы полиморфных маркеров генов АРОЕ (112 и 158) и Я,-/ (-511Т/С) определяют предрасположенность к клиническим особенностям заболевания.Научно-практическая значимость работы. Результаты исследования имеют значение: для развития общетеоретических представлений о природе i<^ VC. Они могут быть использованы в системе медико-генетического консультирования с целью определения шансов развития PC, прогнозаформы и тяжести заболевания. Результаты исследования могут быть использованы в различных областях науки (в биохимии, в генетике,, в медицине) и могут быть рекомендованы для использования в учебно-методическом процессе в ВУЗах.Положения, выносимые на защиту.1. Полиморфные маркеры генов НЬА-системы {DRB1 и TNFA), АРОЕ ассоциированы с риском PC. «, 2. Полиморфный; маркер гена TNFA ассоциирован с ремитирующим и; вторично-прогрессирующим, маркер гена DRBI — с вторичнопрогрессирующим типом течения PC.3. Полиморфный маркер гена .4РО£ ассоциирован с высокой степенью инвалидизации больных PG.4. Полиморфные маркеры генов АРОЕ, TNFA и IL-I ассоциированы с различными вариантами дебюта рассеянного склероза.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Бикмеева, Анна Михайловна

г.. Впервые в популяции татар; (республика Башкортостан) охарактеризован полиморфизм генов-кандидатов PC: DRB1 (10 специфичностей, HLA класс II), TNFA {VNTR, HLA класс III), АСЕ (I/D), АРОЕ (112 CysUrg: и 158 ArglCys), IL-IB (-511T/Q, IL-1B (+3954 С/Т), IL1RA{VNTR). Показано, что в популяции татар, предрасположенность к PC формируется в связи с поли морфизмом четырех генов (JDRBl, TNFA, АРОЕ VLIL-1B).2. Обнаружено, что с рассеянным склерозом у женщин ассоциированы спе цифичности DRB1 *6(13) wDRBl *08 гена DRB1. Специфичность DRB1'^6(13) является маркером пониженного риска PC, а специфичность DRB1*08 марке ром повышенного риска PC с вторично-прогрессирующим течением.3. Установлено, у женщин повышенный риск заболевания с ремиттирующем> типом течения соотносится с аллелями TNFA *2 и TNFA *4, а риск заболева ния с вторично прогрессирующем типом течения - с аляелем.TNFA*4; риск: заболевания понижен в связи с аллелем ГЛ7*!<4*7 независимо от типа течения.4. Выявлено, что риск заболевания с более сильной степенью инвалидизации повышен у носителей генотипа'АРОЕ*4/*4 независимо от их половой при надлежности.5. Показано,.что с вариантами дебюта рассеянного склероза ассоциированы полиморфные маркеры генов^Р(9£', TNFAwIL-lB:

5.1. Маркерами повышенного риска PC с нарушения зрения в дебюте у жен щин являются генотип /Z,-/5 *77*7' и алпеяь TNFA * ,^ а маркером пониженно го риска - аллель TNFA*7. У мужчин маркером повышенного риска PC с на рушениями зрения в дебюте является генотип IL-1B*T/*T.5.2. Установлено, что у женщин риск PC с симптомами нарушения пирамид ного тракта в дебюте заболевания понижен в связи с аллелем TNFA *6.5.3. С полисистемным началом PC ассоциированы полиморфные маркеры генов TNFA и АРОЕ: аллель TNFA *3 маркирует пониженный риск полисис темного дебюта заболевания у мужчин, генотип АРОЕ*2/*4 маркирует по вышенный риск полисистемного начала и у мужчин и у женщин.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бикмеева, Анна Михайловна, Уфа

1. Бойко А.Н., Фаворова О.О. Рассеянный склероз: молекулярные и клеточные механизмы. // Молекулярная биология.- 1995.—Т. 29.— т- 727-749.,

2. Борисова НА., Качемаев В.П. Экологические ситуации• и демиелини- зирующие заболевания.// Материалы Пленума правления Российского общества неврологов.- Иркутск.- 1992. С - 37-38.

3. Еращенков Н.И., Роговер А.Б., ВейнА.М: и др: Некоторые вопросы; распределения множественного склероза. // Клин. Мед.- I960.— 6—12.

4. Гусев Е.И., Дёмина Т.Л., Бойко А.Н. Рассеянный склероз. — Москва. «Нефть и газ». 1997. « 8. Гусев Е.И1, Бойко А.Н. Демиелинизирующие заболевания центральной нервной системы // Consilium-Medicum. 2000. V. 2. '•ф ^

5. Гусев Е.И,, Бойко А.Н., Судомоина М.А., Фаворова О.О. Клиническая генетика рассеянного склероза. // Журнал неврологии и психиатрии. 2001. №9. 61-67.

6. Елисеева Ю.Е. Ангиотензин-превращающий фермент, его физиологическая роль // Вопросы медицинской химии. - 2001. - № 1.

7. Животовский Л.А. Популяционная биометрия. М.: Наука. - 1984.- 184.

8. Завалишин И.А., Захарова М.Н. Рассеянный склероз: современные аспекты этиологии и патогенеза // Рассеянный склероз. — 2003. — № 2. -С. 10-17.

9. Заграрова Т.А., Фаворова О.О. Исследование роли цитокинов при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите и рассеянном склерозе. // Иммунология. -1999. -Т.5. -G. 9-13.

10. Коненков В;И.' Медицинская и экологическая иммуногенетика. Новосибирск.: СО РАМН. - 1999.

11. Метелев Н.И. Семейный рассеянный склероз. // Врачебное дело, — 1987.-Т.Ю.-С. 105-106.

12. Мустафина О.Е. Анализ предрасположенности к сердечно-сосудистым; заболеваниям • у городских жителей по показателям липидного гомео-стаза крови и полиморфизму генов-кандидатов. // Дис. на соискание степени доктора биол. наук. - Уфа, 2004,

13. Недоспасов А., Удалова И.А., Смирнова Ю.Б. и др. Генетический полиморфизм локуса генома человека, содержащего гены факторов некроза опухолей: этнические различия распределения частот аллелей., // Докл. Акад.Наук. - 1993. - Т. 331. - 504-508.

14. Пашенков М.В., Пинегин Б.В., Линк X. и др. Дендритныеклетки и их роль при воспалении в центральной нервной системе // Рассеянный склероз. - 2003: - № 2. - 39-44.

15. Рассеянный склероз. Под ред. И.Д. Столярова^Б.А. Осетрова..Практическое руководство. - СПб. - ЭЛБИ-СПб. - 2002.

16. Спирин Н.Н., Качура Д.А., Качура А.Н. и др. Влияние экологических факторов на заболеваемость и распространенность рассеянного склеро-^ за // Рассеянный склероз. -2003. - № 2 . - 111-113.

17. Судомоина М.А., Бойко А.Н., Демина Т.Л. Связь рассеянного склероза* в русской популяции с аллелями reuaDRBl главного комплекса гисто-совместимости. // Молекулярная биология. - 1998: — Т. 32. - №'2. - ^' 291-296.

18. Хидиятова И.М., Ишмухаметова А. Т., Лукманова Г. И. и др. Анализ распределения специфичностей гена HLA—DRB1 в популяциях Волго-Уральского региона. // Молекулярная генетика. - 2004: — Т.4. — 1—5.

19. Шагисултанова Е, И. Изучение полиморфных ДНК-локусов как потенциальных генетических факторов риска инфаркта миокарда. // Дисс. на соискание степени канд. мед. наук. -Уфа. —2002. — 19—24.

20. Alberts M.J., Graffagnino С, McClenny , et al. АроЕ genotype and survival form intracerebral hemorrhage. // Lancet. - 1995. — V. 346. - P. 575.

21. Agundez, J. A., Arroyo, R., Ledesma, et al. Frequency of CYP2D6 allelic variants in multiple sclerosis. // Acta Neurol. Scand. -1995 -V. 92. — P. 464-467.

22. Alexeev L., Boldyreva M., Trofimov D. et al;// Eur. Immunogenetics. — 1995.-V. 22.-P. 99.

23. Allen M., Sandberg-Wollheim M., Sjogen K., et al. Association of susceptibility to MS in Sweden with HLA сЫъ \l DRB1 and D ^ 5 / alleles. // Hum Immunol. - 1994. - V. 39. P. 41-48.

24. Amirzargar A., Mytilineos J,, Yousefipour A., et al. HLA class II (DRBl, DQAl andDQBJ) associated genetic susceptibility in Iranian MS patients. // Eur J Immunogenet. - 1998. - V. 25. - P. 297-301.

25. Andersson G., Svensson A.-C., Setterblad N. et al. Retroelements in the human м н е class II region. // TIG. -1998. - V.14. - P. 109-114. ' i l ^

26. Arendt Т., Schindler C , Bruckner M.K., et al; Plastic neuronal remodeling in patients with Alzheimer's disease carrying apolipoprotein 84 allele. // J. Neurosci. - 1997. - V.17. - P. 516-529.

27. Ashavaid Т., Shalia K., Nair K., et al. ACE and ATIR gene polymoфhisms and hypertension in Indian population. // J. Clin. Lab. Anal. - 2000. - V.14. P. 230-237.

28. Bauer H.J. Multiple sclerosis in Europe. // J Neurol. - 1987. - V. 234. -P . 195-206.

30. Beck J., Rondol R., Catinof L. et al. Increased production of interferon gamma // Acta Neurol. Scand. - 1988. -V. 78. - P. 318-323.

31. Begovich A.B., McClure G.R., Suraj V.C. et al. Polymorphism, recombination, and linkage disequilibrium within the HLA class 1Г region. // The Journal of Immunology. - 1992. - V. 148. - P. 249-258.

32. Bell J.L, Lathrop M. Multiple loci for MS. // Nature Genetics. - 1996. - V. 1 3 . - P . 377-378.

34. Bikmeyeva A;B., Mustafina O.E., Tuktarova LA. et al. DNA typing in Tatar patients with multiple sclerosis.// Human Genome Meeting. - 2003. -Poster m abstract No: 22.-P. 52. m <^ 'Ш'

35. Blakemore А., Watson P., Weetman A. et al. Association of Graves' disease with an allele of the interleukin-1 receptor antagonist gene. // Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. - 1995. - V. 80. - P. 111-115.

36. Bland J. M., Altman D.G. The odds ratio. //BMJ. - 2000. - V. 320. - P. 1468.

37. Boiko A.N., Gusev E.I., Sudomoina M.A. et al. Association and linkage of juvenile MS with HLA-DR2 (15) in Russians. // Neurology. - 2002. - V. 58. - P . 658-660.

38. Breslow J. Apolipoprotein genetic variation and human disease // Physiol. Rev. - 1988. - V. 68. - P. 85-132.

39. Broadley S.A., Sawcer S.J., D'Alfonso., et al. A genome screen for MS in Italian families. // Genet Immun. - 2001. - V . 2. P.205-210.

40. Brosnan C.F., Cannella В., Battistini L. et al. Cytokine localization in multiple sclerosis lesions: correlation with adhesion molecule expression and reactive nitrogen species. // Neurology. - 1995. - V. 45. — P. 16-21.

41. Caballero A., Alves-Leon S., Papais-Awarenga Rl, et al. DQB 1*0602 confers genetic susceptibility to MS in Afro Brazilians. // Tissue Antigens. -1999. - V . 54. - P . 524-256.

42. Cambien F., Alhenc-Gelas F., Herbeth B. e ta l . Familial resemblance of plasma angiotensin-converting enzyme level: the Nancy study. //Am. J. Hum. Genet. - 1988; - V. 43. - P. 774-780.

43. Cambien F., Poirier O., Lecerf L.et al. Deletion polymorphism in the gene for angiotensin converting enzyme is a potent risk factor for myocardial infarction. //Circulation. - 1994. - V. 359 . -P : 641-644.