Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль 5альфа-дигидротестостерона в регуляции инкреторной и генеративной функции семенников на разных этапах онтогенеза

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль 5альфа-дигидротестостерона в регуляции инкреторной и генеративной функции семенников на разных этапах онтогенеза"

га а?.

ХАРЬКОВСКИЙ 013Ш ГРЗДОЗОГО КРАСНОГО ШШШЕ И ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НЙ&гСЙТЕТ шг.А.К.ГОРЫЕГО

На правах рувошгсЕ

СИДОРОВА Ирина Загаяьевиа РОЛЬ 5оС -ДЙГЙДРО КС ГОСТЕ РОНА В РЕГУЛЯЦИИ ЕНШТШОЙ

а гиератишоё отвдга семейеихоз ал разных этан ах

' ОНТОГЕНЕЗА

03.00.15 - Физиология человека и хвдогвых

АВТОРЕФЕРАТ диссергадяи на соескакие ученой стгденз какдздага биологических наук

Харьков - 1991

Работа выполнена в Харьковском НИИ эндокринологии и хииии гормонов

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор А.И.Гладкова

Официальные оппонента -

доктор биологических наук, профессор Н.И.Панчевко доктор ветеринарных наук, профессор Д.Д.Логвинов

Ведущая организация - НИИ эндокринологии в обмена

веяеств, г.Киев

Зацнта диссертадиа состоится в " чао. ■ /Г "пив. на заседаш/к -ле анализированного совета К 053.06.07. Харьковского государственного университета ( 510077, Харьков, пл.Свободы, 4, ауд. 3-15

С диссертацией аоаяо ознакомиться в Центральной научной библиотеке ХП.

Автореферат разослан

1991 г.

Ученый секретарь ¡(мл«*^-

специализированного совета И.В.Ннкитчеако

ОКДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тепы. Проблема регуляции размножения огаосит-ся к числу наиболее актуальных в теоретической биология.Достяже-ния в данной области непосредственно связаны с карданадьними вопрос aua медицины.животноводства,ветеринарии и постоянно находят прямой и эффективный выход в практику.

3 настоящее время установлено,чю причиной 40-50jS бесплодных браков являхтся нарушения репродуктивной функции у нужчяя /Г.И.Козлов,1986; Й.Ф.Юнда, 1989/.обусловленные различными зндо-кринодатиями¿воспалительными процессами,а гакке крайне высокой чувствительное üb мужских гояад к разнообразный повреждающим факторам,сопровсждавдим человека в процессе его жизнедеятельега /Л.В.Саноцкий.В.Н.Фоменко,1979/.Все аю требует поиска новых,наиболее адекватных схем и методов коррекции,которые возможны только на основе глубокого познания физиологии репродукции,изучения тонких механизмов,включенных в регуляции этого процесса.

Достижения современной эндокринологии,развитие совершенных методов исследования способствовали расширению взглядов на механизм действия андрогенов.вклоченнше в контроль функциональноа активности мужской репродуктивной системы.Первоначальные представления о тестостероне,как главном мужском половом гориояе, сменились концепцией функционального цетаболизца / Bqu11«u « 1970/,согласно которой биологическое'действие тес юс тароиа составляет суммарный эффект самого андрогена и его метаболитов, важное.место среда которых принадлежит З.^-дигидротестостзролу СЦГТ),обладающему по ряду показателей значительно большей ан-дрогенной активностью,чей тестостерон /Кейнуоринг,1979/.Это обусловило появление ряда работ по изучении влияния ДГТ аа различные стороны репродуктивной системы.

В настоящее время ¡установлено,что.ДГТ является активным -андрогенои в.охнопении фетальной дифференциации органов мужской репродуктивной системы / Forest ,1983/.обладавт. трофически» эЗДектоы для семенных пузырьков,зпидидимиса и предстательной аелеэы при половом созревании /'Nenderoth et.al. ,1983; George е-с.а1.,1989/.3становдено значение ДГТ для функциональной активности Простаты / Baulieu ,196В; Eruchovraky.nison .IS68; Bruchowaky ,1972;Е.А.Оиельчеико,1985;Л.В.Паяченхо,1987/ к

выявлены особенности его действия,по сразнеяию с тестостероном, на геном пеюн эюй хелезы /Е.А.0ыел1чеако,1985/.0дзако остается опертым вопрос о значении -восстановленного метаболита те-сюстерона в регуляции функциональной активности гужских гонад /А.И.Гладкова,1938/.Гочно не установлена роль ДГТ б контроле секреции гонадотропииов в период срепубертата / &еогге ег ,15ё9/. Вместе с геи,решение этих вопросов цогло бы способствовать расширении представлений о физиологической роли ДГТ в кужскои организме .внедрению новых методов управления процессом вослроизвод-с тва.

Цель и задачи-работы. Целью данной работы являлось выяснение возрастных особенностей реакции инкреторной и генеративвой функции семенников на 5оС -восстановленный метаболит тестостерона-БзС-дигидротестостероя. -

В соогвегстваи о поставленной целью з ходе исследования решались следущие - конкретные задачи:

1.Изучи» характер секреции половых стероидов семенниками пре- и постпубертатных .кроликов в условиях введения ДГТ.

2.Исследовать функциональную активность сперматозоидов и состояние, герминативного эпителия аяд^огеялзированнше животных.

. .. 3.Изучи», гонадогропн'ую активноа^'гкпофиза кроликов разного возраста* условиях введения различите доз ДГТ. . -

. ^.Сравни» действие 5,^-воссЕавов1енного метаболита и исход- о ного гормона-!» тестостерона па-ивареторную и генеративную функцию семенников-а разные периоды.оятогевеза.......... - .....

Научная новизна. Впервые осуцвсхвлев.сопоставительный ана-лиа влияния ДГТ иа инкреторную и-генеративную, функцию сеиенни-ков.На основании комплексного гормовальвого,иорфоиетрического и цитологического исследования получены доказательства физиологи. ческой роли.ДГ! для функциональной актовое га гонад.Выявлены возрасгяые - особенноети реакция семенников на экзогенный ДГТ.Установлен доз озависимый .эффект-ДГТ на систему.гапофиз-гонады половозрелых кромков.йросдежены разнонаправленные.последствия пре-пубертатяой андрогенизации длн становления.инкреторной и генеративной! фувкшш-сеыенников в процесс е. полового созревания. . .. Теоретическое и практическое зваченде работы. Результаты исследований расиирям представления о механизмах регуляции мул-ской репродукции.Доказано,что ДГТ является маавньш метаболитом тестостерона не только в оуноиении.простата,как это было известно ранее,но а в отнояешм семенников.Б работе наши конкретное

подтверждение данные литературы об участии ДГТ в регуляции гонадо тронной. функции гилофаза-Выявлены доза и длительность введения. ДГТ,сишулируюцие функциональную,активность,системы гипофиз-гонады. Представляется ..возможным использовать полученные данные при разработке гезых схеи леченая гипогонадизиа,особенно-его тес то-стероп-резисгеягиых фори.Материалы могут быть использованы в учеС вых курсах-по обцей и.возрастной физиологии,читаемых.студентан сельскохозяйственных вузов и биологических факультетов университетов и педагогических институтов. . . --На задаст выносятся следующие положения: .....

. Х.Процесс ^¿¿-восстановления тестостерона необходим для нормального функционирования иухсклх-гонад.Характер влияния.ДГТ на инкреторную и генерагивнув..фунЕЦ2и.секеялияов определяется стадией онтогенетического развития. - - .2.В период препубертата 5(¿-восстановленный метаболит.тесто стероаа оказывает эффект не только иа трофику, органов репродуктивной системы,но и играет вахную родь в регуляции секреции.гона дотропиыов по принципу.отрицательной обратной связи,регулируя наступление полового созревания.

З.Дягидротестостерон.в.дозах,близких к физиологический уро! нян.этого гориона,стииулирзет тестикуяярный стерокдогенез у половозрелых кроликов посредствои активации гоаадотропной функции

гипофиза. ...... .

Апробация работы. Материалы диссертации доложены-и.обсуждена на конференциях молодых ученых и специалистов и итоговых конференциях ШИЭ и ХГ /Харьков,1983; 1537; 1989/,ва Республиканской научно-практической иежинстнтутсной конференции молодых ученых педиков /Харьков,1986/,на республиканской симпозиуме •. "Эндокринология кукского бесплодий" /Тбилиси,1983/,на .17 съезде эндокринологов УССР /Львов, 1987/,на 1 Всесоюзной .съезде эндокри нологов /Гаыхен1,1939/,на заседании общества патофизиологов .■ /1990/,на XI съезде Украинского физиологического общества иы. И.П.Павлова Дарьков,1990/. ....

Публикации. По тепе диссертация опубликовано .II работ. Структура и содергание диссертации...Диссертация состоит к: введеная,обзора литературы.материалов и. методов исследования, девяти разделов собственных ваблюдений,заклвченяя,выводов.С1Щ-сок использованной литературы зклачает 63.источника отечественной и 163 источника иностранной .лятературы.Текст диссертации . изложен на 163 страницах «ашнописи .иллюстрирован 19 таблицами и II рисункаш.

Материал и цетоды исследования. Работа выполнена на 198 кро-ликах-самдах породы шиншилла, грех возрастных групп.В первой серии исследований на иэлодых половозрелых кроликах (iras с а тела 2,5 -3,0 кг) изучено влияние ДГТ на инкреторнуа п генератквнуа функции семенников.

Во второй серии исследований попользовали кролики в период становления подовой зрелости (наоса тела 1,4 - 1,7 кг),у которых изучена инкреторная функция семенников в условиях длительного зве-дения малых доз ДГТ.

В третьей серии исследований изучены отдаленные последствия прелубертатной -гидрогенизации для становления инкреторной и генеративной функции семенников (масса животных в начале опыта 0,7 -1,3 кг).

Дигидрозестостеров вводили ваутриишдечло,однократно либо длительно,ежедневно в течение 14 дней,в.двух дозах - 13 мкг/кг (близкой к физиологическим уровням гормона) и 200 икг/кг (условно-терапевтической) в 0,2 - 0,3 ил. косточкового.масла. Действие . ДГТ в некоторых сериях исследований сопоставлялось с действием тестостерона,который вводили в аналогичных дозах.

В качества контроля использованы«.,кролики,получавшие по аналогичным схемам масляный-рас творите ль". . ...

Животные брались в опыт через сутки посла введения гормона (период, максимального накопления экзогенного ДПГ в органах-ыясе- ' нях,,по данным.И.Ю.Алесиной /1987/).либо.через 45 дней (с учетом продолжительности процесса сперматогенеза у кроликов / Henaff, I98I/JL

'.Об инкреторной функции семенников судили по содержанию стероидов в кро£и,оттекаэдей от семенников,хогоруп собирали в острой опыте под тиопектадовыи наркозом по методу Suzuki, Et о /1962/. Из краевой вены уха собирали периферическую кровь.Конценграциа тестостерона,андростендиона,прогестерона,оксцпрогестерона и зет-радиола определяли радиоимаунологическим методом с использованием стандартных наборов отечественного и зарубекного производства. Радиоактивность подсчитывали на счетчиках Нега и Га^иа.

Для оценки фертвльаости после взятия крови у кроликов в ост-рои опыте извлекала придаток сеиензика и готовили суспензию сперматозоидов путей их дозгровавного вымывания - в течение 2 кнут в 2 мл физиологического раствора по методическим рекомендациям Московского НИИ гвгкеиы труда н профзаболеваний Д978/.1!зучали концентрацию сперматозоидов,их подвижность,количество патологи-

ческах форы г показатели,которые,по данным литературы /Р.Б.Капа-надзе ,1977/,наиболее .точно и объективно отражав! процесс сперматогенеза и дают возможность судить о фертидьности.Для гистологических исследований семенники фиксировали в 10% формалине.Гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятым негодикам.Проводили ыорфометраческие исследования генеративных элементов - изучали индекс сперматогенеза,диметр семенных канальцев количество сперыаюгоний.

Для цитологических исследований готовили мазки-отпечатки ткани свекеизвлеченных семенников по меаоду В.И.Шаповал и соавт. - - ■ /1Э88/.На цитологических препаратах'.определяли площадь и периметр ядра сперыатоцитов I порядка с помощью компьютерного цигоанвлиза-. тора "Интеграл-2 Ы1П в лаборатории электронной микроскопии Молдавского НИИ клинической и профилактической медицины.

. .Гояадотропнуы активность гипофиза контрольных и подопытных кроликов определяли методой биологического тестирования / Ьизэт.£, 1950/. ...

Полученные данные подвергнуты статистической обработке по методу Стьюдента-Фишера.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И И ОБСУЗДЕНИЕ

.Возрастные особенности йункционадъной активности семенников контрольных кроликов. В качестве контроля использованы животные, . которым вводилось косточковое иасдо .применяемое в качестве растворителя стероидов;Наии подтверждены данные литературы /-.ЛяЮя е1:.'а1.,1975/ о том,что тестостерон является основным стероидом, . секретируамыы семенниками кролика^Концентрацця этого андрогена в крови семенниковой вены контрольных кроликов репродуктивного возраста (Ь2,31 + 3,72 нМ/л) значительно превышала концентрации, предшественников"- прогестерона (6,82 ± 0,62 нЦ/л),оксипрогесте- • рона (3,68 ± 0,66.н11/л) и андростендиона (1^,36 ± 2,39 нМ/л), а таксе продукта ароматизации - гстрадаола (2,Н + 0,16 нМ/л).В периферической крови половозрелых кроликов самой высокой гакае являлась концентрация тестостерона,коюрая составляла 5,30 + 0,49 лЫ/л. „''...

Суммарное содержание андрогенов (тестостерона.и андростев-дкона) в семенниковой крови половозрелых кроликов составляло 56,67 нЦ/л.

Индекс сперамогенеэа у контрольных кроликов равнялся 3,46 ± С,05.Большинство семенных канальцев у этих дивотных содержало

- 6 -

сперматозоида^Зрелые половые клетки содержались и в придатке се-■ пенника.Их концентрация составляла 95,0 + 8,45 илв/ил .подвижностью обладали 86% половых клеток,что.соответствует данный литературы / Heuaff et.al. ,19В1;Няколов,Григоров,1983/.Количество патологических форы составляло 6,11% от общего количества сперматозоидов.

У препубергатных кроликов концентрация тестостерона з гона-дальной-крови (17,89 + 3,08 bU/л) составляла 40,455 от уровня,наблюдаемого у. взрослых хивотнкх.но также преобладала над содгр^аа:;-еи других горконов,секретируемых семенниками в этоу периоде онтогенеза - прогестерона (13,83 ± 1,18 hü/л) и андростендиона (5,06 + 0,84.нЫ/л).Высокий уровень прогестерона,являодегося предшественником андрогенов ва. д^-пухи отероидогенеза,указывает,по-види-моиу,на резервные возможности тестикулярного андрогенопозза,которые могут быть.реализованы при половом созревании.Считают / p0rti в1;.а1.,1933/,чго.лрезрацеш!е. д^Р в.I7-0H- д^Р. является одной из лимитирущах стадий биосинтеза тестостерона в препубертате.

Ыасса семенников и простаты у препубертатных-кроликов была незначительна. Зрелые подовые Sierra в придатках семенников отсут-схвовади.Судыа 1 я , ¿к раввялась 22,95 вИ/л.. .______. . ..

Концентрация тестостерона. вкрэтя,отгекащей ох семенников кроликов в период полового .созреванип.;(г5,86 $ 1,16 нИ/л) возрас-хада до сравнению с. прелубертатшдга аигоныш,яо имещей место у взрослых.животных не досигала.Уровень- д^Р-составлял 3,60 + 0,69 нМ/л. '.-„ 18,39- + 4,50 н11/л.Сумыа авдрогеяов равнялась 44,25 нЫ/л.Отзоснгбльное"увеличение содержания андрогенов на фоне снижения уровня, д^.можно-раесматривахь как активацию тестику-лярвого сгеровдогевеза у кроликов в этот период онтогенеза.Ускле-. вне аядрогенообразовательной функции.гонад сопровождались увеличением .массы семенников и простаты по сравнению с препубертатны-ин жнвотными.Зрелые половые клетки в зпидидимисе кроликов в период схавовления пологой зрелости не обнаружены.

. .. Инкреторная и генеративная-функция семенников половозрелых кроликов в условиях однократного введения ДГТ. Через сутки после •однократного введения ДГТ в дозе 13 гкг/кг кы не сггнарухили изменений гормонального статуса половозрелых кроликов.Концентрация Г в крови семенниковой вены (35,2d + 5,44 ail/л.) и в облей циркуляции (5,39 i 0,63 вМ/л) достоверно не отличалась от соответствующая 'показагелейукоягрольньгх живохных.Не. отличались от контрольных и уровни гсвадального и циркулирующего д*Р ( 5,33 t

1,24 нЫ/л и 3,30 1 0,59 нЫ/л.соответственно) и 17-0Н- д Р (4,28 + 0,80 нМ/д и 0,97.± 0,19 нИ/л,соответственно). V ■ ~ " Показатели функцйойадьной-активности - эпидидимадьных сперматозоидов (канцентрация.подважность,количество патологических форм),через сутки после однократного введения ДГТ не отличались ' от соответствующих показателей, у контрольных животных.- -. ... - Через 45 дней после введениа-ДК-характер секреции стерои-довсеменниками-не изменялся по сравнению.с контролем.В то хе вре-. ия обнаружено, увеличение. 0,05) количества патологических форм среди эшдидимальных спарматоаондов.-(10,71.±-2,70%.,в опыте и 3,86. ± 0 15% в контроле).Концентрация подовых клеток й их..подвижность 1 3,6055) оставались в.пределах-контрольных, величин. -. йзвес'ано,что .атипичные .сперматозоиды являются продуктом нарушения спериатогенеза.Они возникают из таких герминативных клеток,которые во время стадий.деления не. находятся в оптимальных условиях Д.В.Данилова,1983/.Иродолкительность процесса сперматогенеза. является .величиной постоянной и. видйспецифичной.У кроликов между первым делением определенной-популяции сперыатогоний и выходом .их в виде сперматозоидов в придаток семенника, проходит 40-45 суток / НаваГг е1г.а1.. , 1981/„Нами обнаружено увеличение . количества аномальных сперматозоидов через 45. суток после введения ДГТ,то есть когда.завершился выход в.эпидидимис половых клеток,начало развития которых совпало, с.-гормональным, воздействием. Поскольку.нами не установлены изменения.гормональных показателей у кроликов ни.через 24 часа.после однократного введения ДГТ,ни через-45 дней,мы считаем.возможный предположить,что'.изменения в ■ морфоструктуре^сперматозоидовэнабдвдаеиые-в.условиях введения. ДГТ,возникают вследствие прямого влияния этого андрогена на про-лиферативные .процессы клеток начального этапа сперматогенеза.'. Как.подтверждение прямого,влияния ДГТ.на процесс деления сперва-тогоний можно рассматривать обнаруженное ЗавЬог» - /1975/ связывание, этого метаболита тестостерона спериатогониямй'хрыс. ■

Функциональная активность .семенников .и гонадотропная функция гипофиза половозрелых- кроликов в условиях длительного введе- ' ния ДГТ. в отличие от однократного.длительное.введение ДГТ .при-, вод::ло к изменениям гормональных показателей, как в семенниковой,. так и в периферической крови половозрелых кроликов..;. •'•.'-'.

Через сутки после'14-кратного введения ДГТ.в дозе ХЗ мко/кг : ко;1центрация Т в крови,опекающей от семенников,достоверно воз- 8 - . ■

растала по.сравнению с контролем (73,06 i 6,37 и 52,32 i 4,94 н^/л, соответственно; Р^0,02).Секреция его предшественника -"I7-0H- д Р была.снижена (1,55 + 0,26 hü/д в опыте и 3,54 + 0,55 н!1/л з контроле; Р< 0,01).В периферической крови наблюдалась тенденция к увеличению уровйя Т. Концентрация I7-0H- снизалась достоверно (Р^0,01). •

...Усиление андрогенообразовательной функции семенников происходило на. фоне'невольного увеличения их массы. Наблюдалась тенденция к увеличению массы простаты,являющейся андрогензависимым органом, и гипофиза. . - ...... -..'..........

: Следовательно »ежедневное на протяжении двух: недель введение ДГТ. в малых дозах. (13 мкг/кг). оказывает стиыудируюдее влияние на секрецию тестостерона семенниками половозрелых кроликов.

Под.влиянием Г4-кратного введения ДГТ в дозе 200 икг/кг изменения .гормональных показателей. носили противоположный характер по сравнению с теш! изменениями,которые мы наблюдали после введения малых доз ДГТ.Тан,концентрация Т в крови,оттекающей от семенников, была примерно.вдвое меньше по сравнению а контролем (59,30 + 9,86 и 102,79 i 14,01 н!1/л»соответственно; Р^0,05). В гонадальной крови, была снижена и концентрация дЧ (4,10 + 0,38 нМ/л в опыте против 14,36 1-2,39 Hli/д. в контроле;.Р-£'0,001)»На фоне подавления андрогеаообразовательноЯ функции было повысено содержание (14,17 i 2,94 нЦ/л в опыте и 5,16 + 0,98 нМ/л в контроле; Р<0,02). Наблюдаемые изменения.стероидной продукции дают возможность пред-положить,что данное гормональное воздействие угнетает биосинтез Т на этапе превращения : д*Р в 17-ОН- ¿^Р.ингзбируя активность 17сС -гидрокс.илазы.Снижение андрогенообразовательной функции гонад сопровождалось достоверным уменьшением их массы (Р^ 0,002). .

В суспензии,полученной из придатка семенника кроликов через сутки после, 14-кразного введения ДГТ,мы наблюдали достоверное увеличение количества .морфологически аномальных сперматозоидов.Подоб-. ный эффект наблюдался как у.кроликов.получ'авсих ДГТ з малых дозах, так игу животных,получавших этот андроген в дозе 200 мкг/кг.Концентрация. сперматозоидов и их подвижность не изменялись.В данном эксперимента действие ДГТ было сопоставлено с эффектом хестостеро-наЛс*ааовленЬ,что 1 вызывает более выразенные изменения генеративной функции,чей его 5<*-восстанозленний метаболит,вызывая ас только увеличение количества патологических сперматозоидов,но и изменяя концентрацию половых клеток.Так,если у'.контрольных ^тст-

вьгх она с ославляла 47,33 0 7,08 млн/мл,то у кроликов, получавших Т в дозе 13 «кг/кг.она увеличивалась до 83,43 ± 13,20 млн/ил (Р<. О,05),а при длительной введении в дозе 200 ккт/кг снижалась до 19,17 ± 4,60 млн/мл (Р< 0,01). . .

Для выяснения механизма изменения seeтикулярной функции в условиях введения ДГТ,наыи изучена.гонадозропная активность гипофи-за.Суммарное содержание гонадотропинов а гипофизе кроликов,получавши в течение 14 дней ДГХ в дозе 13 мкг/кг (38,48 ± 3,49 ыг/г) было достоверно выше,чем у контрольных животных (27,99 ± 0,53 иг/г; Р^О ,05).В то же время у кроликов,получавших ДГТ'в дозе "200 мкг/кг этот показатель бьш значительно снижен (9,03 ± 0,48 мг/г; P<0,001)¿

Таким образом,результат нашх исследований подтверждают дан-кие литературы-об участии ДГТ в регуляции секреции гонадотропинов по принципу обратной связл.Наии установлено,что.ДП при введении половозрелыи кроликамок&зьшает дозозавиоимый эффект на'систему гкпефиз-гонады.Длительное введение.ДГТ в дозе 13 мкг/кг,близкое ', к физиологическим уровням этого.гормона,оказываем .рйшулирущев • - ■ влияние на гонадотропную функцию гипофаза.В лятеразуре. имевхся сообщения о стимулирующем влиянии 'ДГТ 'в.. иашос^оэах -ва ' у взрослых самцов крыс / Kit tier et.ailSSI;' breque,<3K)tan.;*,.' 1982; Kar an et.ai¿; ,1984/ и на секрецав IT у кастрированных/обезьян / Abbott «t.al. ,1985/.Увеличение доаыДГТл (200.мет/кг) при- . водит к угнезенйх.секрещпг гонадозрошшов;^ ^еамвй&ий^р'чдавг;*;-; тельной образной связи в.системе гонада-гип'офга.Д tir'■

- Сункцаонадьвая.активность системы гипойиз-г'оназш веполово- -зрелых кроликов д условиях длительного введенияДГТ.'ОбнарУжив--усидение авдрогенообразовательной функции семенников половозрелых • кроликов в условиях длительного введения ДГТ-в малых дозах, обусловленное стимуляцией гонадотропной функции.гипофиза,мы-сочли необходимым исследовать влияние аналогичного воздействия у неполовозрелых животных-

Характер секреции стероидов семенниками неполовозрелых кро- ' леков через сутки после 14-кратного введении.ДП в дозе 13 мкг/кг свидетельствовал о том,«о,в отличие os половозрелых животных, данное воздействие приводило к угнетению инкреторной функции се-иеннкков.Концен'трацвя Т в гонадальной крови (18,40 ± 3,29 иМ/л) была достоверно ниже,чем в контроле (25,86 ±1,16 нЦ/л;Р<0,05). Изменялась и концентрация ¿^А.но.это изменение носило недостоверный характер (12,00. ± 1,92 нМ/л в опыте;.18^9 + 4,50 вМ/л в контроле).При атом небдцдалось повыпение уровня д Р,являющегося

- Ю -

предшественнике« андрогеноз на д^-пути стероидогенеза (5,77 + 0,93 н^/л з опыте против 3,60 ± 0,69 н!!/л з контроле; Р< 0,05).

' Изменения в.содержании стероидов в обцей циркуляции имели ту же направленность,что и в гонадальной крови.

У подопытных кроликов наблюдалось достоверное уменьпение массы гонад.

Суммарное содержание гонадотропинов в гипофизе подопытных кроликов (10,47 ± 0,72 иг/г) имело тенденцию к снижению по сравнению с контрольными животными (15,69 ± 2,56 мг/г).

Таким образом,нами установлено,что система гипофиз-гонады у кроликов.обладает различной чувствительностью к действию ДГТ в разные периоды онюгенеза.В отличие от стимулирующего эффекта у половозрелых животных,14-кратное введение ДГТ в дозе 13 икг/кг неполовозрелым кроликам угнетает гонадотропнузо активность и снижает инкреторную функцию семенников.Полученные результаты согласуются с данными литературы о высокой чувствительности гипоталамо-гипофи-зарной системы к действию андрогенов- у неполовозрелых особей по сравнению с половозрелыми / Fuji! et.al. ,1980;насзе1с,Hostettor 1984; Л. ¡.I.Скородок,О.Н.Савченко, 1984; lossage, Dunkan ,1985; З.И.Бутяев,1989; Теппермен,1989/.-

Высокая чувствительность гипофиза к-действию ДГТ,применяемого даже в. очень малых дозах свидетельствует,что 5<£-восстановленный метаболит тестостерона в период препубертата оказывает эффект не только на трофику органов / Brooks et.al. »1582; '¡ienderoth, 1983; George ,1939/,но и играет вагную роль в регуляции секреции гонадотропинов по принципу отрицательной обратной связи,регулируя наступление полового созревания.

- - Отдаленные последствия препубертатной андрогенизании для становления инкреторной и генеративной -Ьункции евкеииккоз. Изучение влияния ДГТ на становление функциональной активности гонад проведено на кроликах,которым в период препубертата в течение 2 недель вводили ДГТ.Действие этого метаболита сопоставляли с эффектом исходного гормона - тестостерона.Животные брались в опыт через месяц после последней инъекции.Этот период,включая 14 дней гормональной обработки .составил 45 дней,что соответствует продолжительности процесса сперматогенеза у кроликов / Henaf? et.al. ,1981/.

Процесс становления генеративной функции оценивали на основании изучения гистологической структуры семенников и даниих мор;о-метрического анализа таких параметров,как индекс сперматогенеза, диаметр семенных канальце в, количество спермаигоний.

о О

Сперматогенный эпителий контрольных кроликов .интактных'и получавши косточковое масло,был. представлен сперматогониями и спер-матоцитами 1.и II порядка.У кроликов .получавших ДП в дозе 13 мкг,

процесс сперматогенеза не отличался от контроля.Введение ДГТ в дозе 200 ккг/кг.как и тесюстерона в обеих исследуемых дозах,приводило'к появлению в семенных канальцах еще одной,более поздней генерации герминативных клеток - спераатид.Во всех случаях сперматиды наблюдаясь в небольиом количестве и не во всех семенных канальцах. .

Через месяц после длительного введения андрогенов,как тестостерона,так и его Ъск -восстановленного метаболита»наблвдалось достоверное снижение количества сперматогоний,приходящееся на один семенной каналец (Р< 0,01).Уменьшение количества.герминативных клеток различных генераций,в том числе и сперматогоний,в условиях введения андрогенов наблюдали Kennedl et.ai. /1985/, Huang, Bieschlag /1986/, Bansal, .Daviee /1986/. ; . .. ; ..

Уменьшение количества герминативных' клеток.сопровождалось достоверным умевьиевиен диаметра семенных кавальцевЛак,если:у..'. контрольных кивотаых он равнялся 30,48 + 0,48 ыкм^то через, месяц, после введения ДГТ в дозе. 13. мкг/кг - 25,36 ¿ 0,42 мкм (Б*0,001), а в дозе 200 мкг/кг - 26,67 + 0,60 мкм (Р^ 0,001)- У кроликов,-' получавшие тес тостеров .диаметр канальцев равнялся 22,22 ± 0,46 мкм и-21,15 + 0,28 мкм при введении в дозе 13 мет/кг а 200 мкг/кг, соответственно (P-i 0,001). ' .

Кроме того,в семенниках авдрогенизированных кроликов возрастало количество каыальцев,содерз:ацих-только клетки начального . этапа сперматогенеза - спернатогонии,что приводило к достовера<н-му снижению индекса сперматогенеза (Р^О,001).Только у кроликов,-получавши тестостерон в дозе 200 мкг/кг .индекс спе^атргенеза (1,79 + 0,04) не отличался от контроля (1,77. ± 0,02).

- Таким образок«несмотря на то,что введение авдрогенов драпу-бергатним кроликам стимулирует процесс сперматогенеза до уровня сперматгд,количественные показатели,такие как.диаметр семенных канальцев,количество сперматогоний,индекс сперматогенеза,свидетельствуют о неблагоприятных последствиях указанного воздействия на процесс становления генеративной функции .-Гистологически в некоторых герминативных клетках и клетках Сертоли выявляются дистрофические изменения.

Введение препубертатным кроликам ДГТ и тестостерона предо-- 12 -

дшю также к изменениям инкреторной функции гонад.У кроликов,получавши; ДГТ,как в дозе 13 ыкг/кг.таки в дозе 2СО акт/кг.наблюдалось достоверное увеличение концентрат;:! тестостерона в крови семенниковой вены.Такое же явление обнаружено и через месяц после длительного введения тестостерона в дозе 13 икг/кг,з то время как у животных.получавннх этот андроген з дозе 200 мкг/кг,наблюдалось угнетение тесаикулярного стероидогенеза.У кроликов зсех четырех подопытных групп обнаружено уменьшение концентрации эст-радиола в гонадальной крова.Изменения инкреторной функции семенников находили свое отражение в уровне периферического тестостерона. ....

По данным литературы.хроническое воздействие аядрогеаоз з раннем.периоде онтогенеза,которое'может выззагь стойкие изменения, в репродуктивной системе у самцов как на уровне гипоталамус-гипофиз, так и в семенниках / Пасзек.Нс^е^ег - ,1934/,реализуется через сложные иехаяйзмы взаимодействия сперуатогенних клеток,клеток Сертоли.и Лейдага,являющихся основными шпеняаи для гипофизарньк гонадотропинов / РагПпап еъ.а!. ,1Э86/.Не исключено прямое влияние ДГТ на семенники / КешиЗу ■ ,1985/.Обнару-

женное наин усиление инкреторной функции семенников у прелубертат-ных кроликов через аесяц после 1'4-крагаого введения андрогеаоз может являться следствием усиления у зтих животных гонадотропной ' активности гипофиза.наступающего после ее угнетения на начальной стадии эксперимента.Такое'явление в литературе описано для тестостерона -Дадсон к др. ,1986/.Повышенное высвобождение гсаадо-тропинов может возникнуть я при-первичном поражении герминативного эпителия /Н.Т.Старкова,1973/.

выводи

I.Основным стероидои.секретируеицы семенниками кроликов, является тестостерон.Период препубертата у этих жизотных характеризуется относительно высоким содержанием прогестерона в гонадальной крова.В процессе полового созрезания наб л вдается усиление, андрогенообразовательной функции семенников на {сие снижения секреция прогестерона.

2.Одним из факторов,принимающих участие 2 регуляции функциональной активности семенников,является З.х-восстгновленний метаболит тестостерона -■ дигидротесгостерон.Эффект ДГТ различается у.лре- и посгяубертатпых животных.

о .0

З.У половозрелые кроликов однократное введение ДГТ не влияет на тестикулярный стсрокдогевез.В то же время данное воздействие поводит к увеличению количества морфологически аномальных аслозих меток на 45-е сутки исследования,что обусловлено прямым влиянием ДГТ на герминативные клетки начального этапа .сперматогенез*-.

í .1:;:: длительном введении ДГТ проявляет себя как истинный регулятор активности стерокдпродуцкрущих клеток.Через сутки после 14-краиого введения ДГТ в малых дозах (13 мкг/кг) наблюдается стимуляция аядрогенообразовательной функции семенников половозрелых кроликов.Увеличение.дозы андрогена (200 мкг/кг) приводит к угнетению тестикулярного авдрогевопозза.

5.Действие ДГ1 на инкреторную функцию семенников реализуется на уровне гипофиза.Введение половозрелым кроликам этого андро-генав дозах,близких к физиологическим уровням,стимулирует.гоза-догропиув активность гкдсфнза.Длительное введение•ДГТ в больших дсзох сникает содержание суммарных гонадотропинов.. ..

6.Гипотально-гипофизарная система у неполовозрелых кроликов обладает высокой чувствительностью к действию.ДП по принципу , отрицательной обратной связи.В отличие, от половозрелых особей,у .. препубертатных кроликов длительное введение ДГТ в малых дозех вызывает угнетение гонадозродвой функции гипофиза и тестикулярного стерсидогенеза. ... ._...... ..,.-..,.......-

7.Через 30 дней после 14-кратного введения ДГТ у.неполовозрел лих кроликов наблюдается усиление.функциональной активности сис- . темы гипофиз-гонады.У кроликов,получавшее тестостерон в дозе -. 13 ыкг/кг,каблюдается аналогичный эффект.В отдаленные, сроки после ьндрогевкзадии тестостероном в дозе 200 нкг/кг-наблюдается, угнетение гонадотропной активности гипофиза и. инкреторной функции семенников.

Б.Дигядротестостерон.как и исходный гормон - тестостерон, при длительном введении неполовозрелым кроликам стимулирует процесс сперматогенеза до уровня сперматид.Однако через месяц после гормсвадьвой обработки у животных наблюдается снижение индекса сиср1!амгенеза,уменьиевие диаметра семенных канальцев и количества саерматогоний.

половозрелых кроликов экзогенный ДГТ оказывает менее выраженное влияние на генеративную функцию семенников,чем исходите гормонЛерев сутки после. 14-кратв ого введения ДГТ наблюдается увеличение количества патологических форы сперматозоидов.Вве-

дение по аналогичной схеме тестостерона (200 мнг/кг) празодет "ак-ае -л к уненьЕеаиз концентрат1.»! половых клеток и снижению лх по;епж-ности.

Ло теме диссертации опубликованы следуЕ^ие работы:

1. Гладкова А.И.Сидорова И.3« & зозиожности использования дигидротестсстерова в качестве стиаулирувдей терапии при мужском гипогоаадпзме//Эндокринология мужского бесплодия: Материалы II респ.с и-г. оз. -Тбилис и: !1 е цние ре ба ,1983. -С. 40-47.

2. Гладкова А. 1!, .Сидероза И.В. ,Брнндак О.Я. Влияние дигкд-ротьстостерона на инкреторную функцию семенников/ Ред.журн."Дробл. эндокринологии".-Н. ,1985.-5 с.-Дел.а ВИНИТИ 03.01.35,¡15107-85.

3. Сидорова Я.В. Инкреторная функция семенников и функциональная активность сперматозоидов в условиях длительного введения дигидротестостерона//Акгуальике вопросы современной эадокрпноло-гии и иммунологии: Программа и аннотации докл.Респ.науч.-практпч. межинстатутской конф. молодых ученых-медиков,г Ларьков,мал 198С.-Харьков,19В6.-С.2с.

4. Сидорова И.В. Отдаленные последствия введения дигидротес-тостерона для функциональной активности сеаемнпков//Созремсииые проблемы экспериментальной и кляническо:1. эндокринологии: Тез.докл. 1У съезда эндокринологов 1ССР,г.Львов,29 сент.-1 окт.1987.-Киев, 1967.-С. 349.

5. Сидорова И.З. Особенности влияния больиих а малых доз 5^1 -восстановленного метаболита тестостерона за репродуктивную ¿ункцию мужских гоиад//Современиие вопросы репродукюлогии: Тез. докл.юбилейной конф. ,посвяц.30-летию основания института,г.Тбилиси, 1988. -Тбилиси,1988.-С.59.

ь. .'итвияова Л.Б.,Сидероза '.'.Б. Влияине масляного рзство;итс-ля стероидов на репродуктивную функцию мужского и женского орга-низма//Эндокрииология: Респ.межзед.сб.-Киев: Здоровье ,19о9.-Бып. 191С.26-30.

7. Сидорова Я.В. Гипо^иэарно-гонадная функция неполовозрелых кроликов в условиях введения авдрогенов//Гормоиальная регу.-улгля

в норме и при патологии: "атер.обл.науч.кон!.,посзял.7С-летпю основания Харьковского НИК эндокринологии п химик гормонов,г.Харьков, 19-20 дек.1989.-Харькоз,1989.-С.51-53.

8. Сидорова И.В. Влияние дягидрптестостерона на тсстлкул;:;.-кый стероадогснсз "у кроликов разного аэорь-::з//7(:л.док.-.~

юз.съезда эндокринологов,г.Та-кикт,1^-19 ызд ЮЬЗ.-Тс.Х'.-нт:

окна.I939.-C.96.

9. Сидс^ова I.B. ,Зологух1Еа B.U.,Карпенко H.A. Дро значения дкг1дрогесгостероиу для регуляи11 релродукгивно! функцП салц!в 1,ур1з//РозаЕ1ок $1з1олог11 в Укра1нсыс1Я PCP за 1966-1990 рои:: Зб.иатер1ад1в XL; з*1зду Укр.ф1з1ол.т-ва lu. 1.3.Павлова,к. лбркХв, 17-21 вйресня 1990.-Ки1е; Науксва дуцка,19И.Т.2.С.Ц4.

Ю.Гладкова А.К. .Сидорова '.1.В. Последствий андрогсьизааии г прегубертатнои возрасте для инкреторной активности сеиеняика// *ате риалы Е респ.конф. андрологов ,гЛбклкси,окт. 1990.-1С ¡¡ли с и, I990.-C.55-39.

И.Сидорова К.В. »Гладкова А.К. Становление генеративно! функции сеаепняков кроликов в условиях преаубертатноК андрогениза-цлн//1:атер;:али Е респ.конф.авдрологов,гЛбилиси,октЛ990.-Тбили-се,1990.-С.114-117.

Список сокращении: ¿ГТ - 5л-дигидротестостерон

Т - тестостерон

- прогестерон 17-CK- - 17Х-окскпрогес1ерон дЧ - андростендион