Репаративная регенерация кожи после механической травмы и способы ее коррекции (экспериментальное исследование)

Ланичева, Альбина Хамитовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Репаративная регенерация кожи после механической травмы и способы ее коррекции (экспериментальное исследование)
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Репаративная регенерация кожи после механической травмы и способы ее коррекции (экспериментальное исследование)"

На правах рукописи

Ланичева Альбина Хамитовна

РЕПАРАТИВНАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ КОЖИ ПОСЛЕ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЫ И СПОСОБЫ ЕЕ КОРРЕКЦИИ (экспериментальное исследование)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 14.03.01 - анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 2 п£Н 2010

Тюмень -2010

004616174

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава

доктор медицинских наук, профессор Семченко Валерий Васильевич

доктор медицинских наук, профессор Мурзабаев Хасан Хамзович

доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки РФ, профессор Бычков Виталий Григорьевич ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Росздрава

доктор медицинских наук, профессор Машак Александр Николаевич ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Росздрава

ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Росздрава

Защита диссертации состоится «_»_2010 г. в __часов на

заседании диссертационного совета Д 208.101.02 при ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Росздрава (625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинской академия» Росздрава (625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 54).

Автореферат разослан «_»_2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Механическое повреждение кожи - неизбежное следствие практически любой травмы, часто встречается, значительно варьирует по тяжести и площади контакта с травмирующим фактором, имеет большое значение для исхода посттравматического восстановления организма, а часто и социальной реабилитации пострадавших (Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1990; Мурзабаев Х.Х., 2002; Бычков В.Г., 2009).

Значение исследования раневого процесса в коже связано не только с ростом стихийных бедствий, производственных и бытовых травм, автокатастроф, военных действий, но и с необходимостью привлечения современных высокоинформативных методов изучения его патогенеза, в том числе механизмов компенсаторно-восстановительной реорганизации цито- и гистоархитектоники составляющих компонентов кожи, взаимоотношения ее дренажно-детоксикационной системы и пролиферативной активности эпителиальных, эн-дотелиальных клеток, клеток соединительной ткани и крови на разных этапах замещения дефекта, формирования соответствующих гистионов (Мурзабаев Х.Х., 2004; Чепурненко М.Н., 2007; Ноздрин В.И. и др., 2009; Одинцова И.А., 2010; Данилов Р.К., 2010).

Структурно-функциональные механизмы заживления раны кожи после повреждающего механического воздействия хорошо изучены. По данным литературы, раневой процесс в коже рассматривается как реализация потенциально возможных адаптивных механизмов комплекса тканей организма в рамках взаимодействующей системы гистиона. Однако широко обсуждаемая концепция о гистионе позволяет по-новому оценить фазность течения раневого процесса с учетом взаимоотношения клеток различных дифферонов в гистионе и его последующей трансформации при заживлении раны (Одинцова И.А., 2003; Ноздрин В.И. и др., 2006; Чепурненко М.Н., 2007; Данилов Р.К., 2010; Соловьев Г.С. и др., 2010; Иатап^о Т. а а1., 2009; Ми^аит Е.Ь. е1 а1., 2009).

При изучении гистофизиологии кожи после повреждения большое значение, как и в других органах (Сапин М.Р., 1995, 2001; Машак А.Н. и др., 2010; Стадников А.А., 2008, 2010) играет определение состояния ее дренажно-детоксикационной функции. Поэтому исследование раневого процесса, как своеобразной системы, которая зарождается, формируется, функционирует и подвергается регрессу, со всеми сопровождающими эти изменения системными и межсистемными взаимоотношениями, несомненно, позволит получить новые научные данные.

Таким образом, вопросы нормализации (протезирования) дренажно-детоксикационной функции кожи и целенаправленной коррекции пролиферативной активности ее недифференцированных клеток, как основы регенерации кожного дефекта, изучены недостаточно, и их расшифровка имеет существенное теоретическое и прикладное значение для усовершенствования тактики и разработки способов локального консервативного лечения механической травмы кожи.

В связи с вышеизложенным, считаем целесообразным проведение сравнительного морфометрического и иммуноморфологического изучения деструктивных и репаративных изменений кожи в динамике постгравматического периода при воздействии мази «Редецил» (на основе ретинола и метилурацила) (Ноздрин В.И. и др., 2009) и неспецифическом воздействии на раневой процесс сорбента СУМС-1, который обеспечивает локальную нормализацию дренажно-детоксикационной функции любой микроциркуляторной системы (Бородин Ю. И. и др., 1997; Бгатова Н.Г1., Новоселов., 2000; Семченко Л.Ю. и др., 2002).

Цель работы. Выяснить закономерности репаративной регенерации кожи после механического повреждения и обосновать способы целенаправленной коррекции раневого процесса.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное анатомическое и гистологическое морфомет-рическое исследование пространственной реорганизации различных отделов и компонентов кожи в норме и после механического повреждения.

2. Выявить особенности деструктивных и компенсаторно-восстановительных изменений основных клеточных дифферонов перинекроти-ческой зоны кожи и ее микроциркуляторного русла в динамике посттравматического периода.

3. Определить влияние раздельного и сочетанного применения сорбента СУМС-1 и мази Редецил на ремоделирование кожи: микроциркуляторного русла, гисто- и цитоархитектоники основных клеточных дифферонов в поегграв-матическом периоде.

Новизна исследования. В эксперименте с использованием комплекса гистологических, иммуногистохимических, морфометрических методов и системного статистического анализа получены новые количественные данные об изменении структурно-функционального состояния и гистофизиологии различных клеточных дифферонов и функциональных гистионов кожи в динамике восстановительного периода после ее механического повреждения. Установлено, что после повреждения кожи изменяется отношение толщины слоев, объемных долей коллагеновых волокон, эпителиальных клеток волосяных влагалищ, микрососудов, межклеточного пространства. Увеличение толщины эпидермиса в 4,4 раза и численной плотности его клеток в 1,2 раза сопровождается увеличением индекса пролиферации базальных клеток эпидермиса в 5,6 раза (до 88,6±12,2%) по сравнению с контролем. Выявлены особенности количественных изменений, структурного взаимодействия всех типов клеток перинекроти-ческой зоны кожи в динамике деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов, показана роль дивергенции в репаративном гистогенезе. Обоснована возможность целенаправленной коррекции раневого процесса кожи с помощью сорбента СУМС-1 и мази Редецил. Выявлено, что сорбент СУМС-1 и мазь Редецил имеют различные временные интервалы оптимального воздействия на раневой процесс. Максимальный эффект сорбента достигается в фазу активного воспалительного процесса (1-3 сут), а мази Редецил - на фоне активации механизмов репаративного гистогенеза (7-14 сут).

Теоретическое и практическое значение работы. С помощью современных иммуногистохимических и морфометрических методов исследования проведена более глубокая детализация структурно-функционального состояния всех клеточных и неклеточных компонентов кожи в динамике раневого процесса. Количественная оценка результатов иммуногистохимического выявления миоидных клеток в эпидермисе и дерме позволила уточнить роль дивергенции в посттравматическом гистогенезе кожи. Выявленные особенности динамики деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов кожи в посттравматическом периоде при протезировании дренажно-детоксикационной функции кожи и стимуляции пролиферативной активности камбиальных клеток позволили понять особенности пространственных структурных изменений кожи, формирования воспалительного и регенерационного гистионов на различных этапах заживления раны в зависимости от характера воздействия в по-стгравматическом периоде.

Полученные данные послужат базой для дальнейшего изучения закономерностей регенерации кожи после ее механического повреждения, а также целенаправленного поиска способов коррекции раневого процесса. Результаты настоящего исследования и теоретические положения, разработанные на их основе, могут быть использованы в преподавании на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии, патологической физиологии, анатомии человека высших медицинских учебных заведений при изучении вопросов морфологии и функционирования кожи в условиях нормы и после механического повреждения.

Внедрение полученных результатов. Данные об особенностях регенерации кожи после механической травмы в эксперименте и возможных путей их коррекции внедрены в курс лекций, практических занятий и научно-исследовательскую работу кафедр гистологии, анатомии человека и патологической физиологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. После механического повреждения кожи бедра белых крыс в перинек-ротической зоне происходит фазная анатомогистологическая пространственная реорганизация ее отделов, обусловленная комплексом взаимосвязанных изменений относительного объема эпидермиса, волосяных влагалищ, дермы, интер-стициальных пространств, микрососудов и различных клеточных дифферонов.

2. Активизация и реализация структурно-функциональных механизмов репаративного гистогенеза после механического повреждения сопровождается взаимосвязанными изменениями эпителиального, фибробластического, макро-фагального и эндотелиального дифферонов, активацией механизмов дивергенции, в результате которых увеличивается общая масса клеток, количество основного вещества соединительной ткани, формируется неоангиогенез, усиливается внутри- и междифферонная гетероморфия, появляются специализированные миоэпителиальные и миофибробластические клетки с последующей адап-

тивной пространственной перестройкой межклеточных и междифферонных взаимоотношений.

3. Стимуляция дренажно-детоксикационной функции кожи с помощью сорбента СУМС-1 и пролиферативной активности камбиальных клеток кожи с помощью мази Редецил ускоряет процесс трансформации гистиона фазы воспаления в регенерационный гистион и сокращает длительность репаративного гистогенеза.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан с международным участием «Медицинская наука, 2009», посвященной году Поддержки и развития молодежных инициатив, Дню медицинского работника (Уфа, 2009); конференции ученых Республики Башкортостан с международным участием «Научный прорыв, 2009», посвященной году Поддержки и развития молодежных инициатив, Дню республики (Уфа, 2009); на «II Сибирском ветеринарном конгрессе», посвященной актуальным вопросам ветеринарной медицины (Новосибирск, 2010); научной конференции «Вопросы морфологии XXI века», посвященной 80-летию со дня рождения А.А.Клишова (Санкт-Петербург, 2010); на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы медицинской науки», посвященной 1000-летию Ярославля (Ярославль, 2010), на X Конгрессе международной ассоциации морфологов (Ярославль, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из них в изданиях перечня ВАК - 3.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Содержание диссертации изложено на 158 страницах машинописного текста, фактические данные иллюстрированы 58 рисунками, 7 таблицами и схемой. Указатель литературы включает 200 источников, из них иностранных - 100. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 1.1. Экспериментальная модель

Эксперимент проведен на 150 половозрелых беспородных белых крысах в соответствии с международными рекомендациями по использованию животных в биологических и медицинских исследованиях (1986), международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (1989), методическими рекомендациями «Деонтология медико-биологического эксперимента» (1987). Условия содержания и кормления экспериментальных животных соответствует «Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник», утвержденных приказами МЗ СССР № 1045 от 6.04.73 г, №1179 от 10.10.83 г. Все животные содержались в стандартных условиях вивария с учетом требований к работе с экспериментальными животными (Лоскутова З.Ф., 1980).

Механическую травму кожи бедра белой крысы вызывали с помощью специальной установки, разработанной Х.Х. Мурзабаевым и И.Г. Кашаповым (2001).

Группы формировались из общего потока травмированных животных путем рандомизации с помощью случайных чисел: 1) группа I - контрольные животные (п=5); 2) группа II - основная группа с механической травмой без лечения (п=30); 3) группа III - механическая травма + мазь Редецил (п=25); 4) группа IV -механическая травма + СУМС-1 (п=25); 5) группа V - механическая травма + комбинированное использование мази Редецил и СУМС-1 (п=25).

1.2. Методы исследования

Забой животных производили под эфирным наркозом путем декапитации. Для морфологического исследования брали участок кожи бедра размером 0,5x1,5 см, через 6 часов, 1, 3, 7, 14 и 25 сут после травмы для всех групп животных. Образцы кожи фиксировали в 10% нейтральном растворе формалина на фосфатном буфере фирмы ООО «Биовитрум» (Санкт-Петербург). Материал заливали в парафин по общепринятой методике (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996; Семченко В.В. и др., 2006). На ротационном микротоме LaboCut 4055 (фирма Slee, Германия) с помощью одноразовых микротомных лезвий А35 (фирма Feather, Япония) готовили фронтальные срезы кожи толщиной 4-5 мкм на различных уровнях перинекротической зоны. Срезы размещали на стандартных по толщине предметных стеклах фирмы Menzel - Glaster (Германия), окрашивали гематоксилином и эозином, азуром и по Ван-Гизону. После окраски срезы заключали в канадский бальзам и покрывали стандартными покровными стеклами. Микрофотосъемку гистологических препаратов проводили на микроскопе Axio Scope 40 (Carl Zeiss) и Axio Star (Carl Zeiss) с встроенным TV-адаптером и цифровой видеокамерой Carl Zeiss Imager, AI, окуляр W-PI 10х / 23, объективы: Achroplan 20x / 0,45, Achroplan 40x / 0,60, Achroplan 63x / 0,80, Achroplan ЮОх/1,25 oil.

С помощью программы ImageJ 1.44h проводили морфометрическую оценку эпидермиса, дермы, гиподермы, волосяных влагалищ, сальных желез, сосудов микроциркуляторного русла, коллагеновых волокон и интерстициального пространства. Определяли толщину эпидермиса, дермы, особенности распределения волос, размеры клеток, их численную плотность в единице измерения и относительный объем основных компонентов кожи (Автандилов Г.Г., 1980).

Иммуногистохимические методы. Для более детального изучения клеточной пролиферации и дифференцировки использовали иммуногистохимические методы окраски с помощью меченых моноклональных антител. Выявляли следующие белки: 1) CD-68 (макрофаги), 2) CD-34 (эндотелиальные клетки сосудов), 3) СК-14 (эпителиальные клетки), 4) Со1-4 (базальная мембрана эпителия) и 5) Ki-67 (маркер ядер активно пролиферирующих клеток).

Постановку иммуногистохимического окрашивания осуществляли согласно рекомендациям фирмы-производителя. Визуализацию результатов проводили с использованием системы детекции Ultra Vision ONE Detection System HRP Polymer. Инкубировали с хромогеном - DAV Plus Substrate System. Срезы докрашивали гематоксилином Майера и заключали в БиоМаунт-среду. Для оценки качества реакции использовали стекла с позитивным контролем для каждого из антигенов (фирма Labvision, США). Характер иммуногистохимических реакций оценивали визуально в баллах с учетом интенсивности окраски и процента окрашенных клеток. При оценке экспрессии Ki-67 рассчитали индекс пролиферации (lKi-67) по формуле: 1 = (n+/N)xl00%, где п+ - число меченых ядер, N - общее число ядер в базальном и шиповатом слоях в поле зрения микроскопа. Подсчеты производили в 20-23 полях зрения среза при различных увеличениях (Mitselou A. et al., 2003).

Цитохимические методы. В мазках периферической крови цитохимическими методами в лейкоцитах определяли: 1) активность миелопероксидазы -бензидиновый метод по Грехем- Кнолли (Карпшценко А.И., 1998); 2) активность щелочной фосфатазы - реакция азосочетания в модификации А.Г. Ми-хеева (1970); 3) активность кислой фосфатазы - реакция одновременного азосочетания по A. Goldberg, Т. Barka (1962).

1.3. Статистический анализ

Системный статистический анализ проводили при помощи программ Sta-tistica for Windows (Версия 6.0, StatSoft, Inc.) (Боровиков В., 2001; Реброва О.Ю., 2002). Различия между независимыми выборками определяли с помощью двухвыборочного критерия Манна-Уитни, Колмогорова-Смирнова и дисперсионного анализа ANOVA Краскела-Уоллиса. Для категориальных переменных применяли критерий-х2, точный критерий Фишера. Степень связи между двумя переменными устанавливали с помощью корреляции Спирмена. Нулевая гипотеза отвергалась, а альтернативная принималась при /><0,05, мощность статистического исследования была в пределах 0,70-0,90.

Все исследования выполнены лично автором на базе Башкирского государственного медицинского университета (кафедра гистологии, зав.каф. про-

фессор Х.Х. Мурзабаев) и гистологической лаборатории с электронной микроскопией ГНУ ВНИИБТЖ СО РАСХН (руководитель - профессор В.В.Семченко). Статистическая обработка морфометрического материала проведена при консультативной помощи д.м.н. С.С.Степанова.

II. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

2.1. Репаративная регенерация кожи после механического повреждения

В настоящем исследовании придерживались традиционного для отечественной морфологии методологического подхода, требующего изучения всех уровней структурно-функциональной организации органа и ткани в норме и после экспериментального воздействия.

Динамика изменений показателей, характеризующих анатомо-физиологическое состояние перинекротической зоны кожи и парный сравнительный анализ с контролем и между сроками исследования показаны в таблице 1. После травмы изменялось соотношение толщины слоев кожи, объемных долей коллагена, эпителиальных клеток волосяных влагалищ, микрососудов, межклеточного пространства. Увеличение толщины эпидермиса в 4,4 раза, численной плотности его клеток в 1,2 раза сопровождалось увеличением индекса пролиферации базальных клеток эпидермиса в 5,6 раза по сравнению с контролем.

Через 6 ч, 1 и 3 сут после травмы происходило утолщение дермы соответственно на 15,9, 19,5 и 17,2% в сравнении с контролем. При этом объемная плотность коллагеновых волокон, сальных желез, эпителия волосяных влагалищ и численная плотность фибробластов статистически достоверно уменьшалась. В большей степени изменялась объемная плотность коллагеновых волокон (на 34,8%). В норме межклеточное пространство составляло 6,9% (95% ДИ - 4-9%), а поле травмы - 20% (95% ДИ - 15-25%). Все это с высокой степенью достоверности свидетельствовало о том, что в течение 3 сут после травмы пространственные анатомические изменения обусловлены увеличением объемной плотности межклеточного пространства дермы. Последнее в раннем периоде (6 ч и 1 сут) сопровождалось уменьшением объемной плотности сосудов дермы на 60% и ее увеличением в гиподерме на 59,6%.

Через 3 сут объемная плотность сосудов дермы возрастала на 146,7% по сравнению с предыдущим сроком и на 86,7% превышала контрольное значение. При этом объемная плотность сосудов гиподермы снижалась и превышала контрольный уровень только на 22,9%.

Таблица 1

Морфометрические показатели перинекротической зоны кожи контрольной и основной группы_

Показатель Контроль Основная группа, посттравматический период

6ч 1 сут 3 сут 7 сут 14 сут

Толщина эпидермиса, мкм 14,6±1,6 16,6±3,5 25,3±6,2* 35,8±2,5**л 63,7±5,6***АЛ 31,7±4,4**ААА

Численная плотность клеток в эпидермисе 18519± 17723± 17990± 20955± 21565± 17115±

(тангенциальный срез), на 1 мм2 2520 3700 3950 2250*л 1930* 2220А

Индекс пролиферации клеток базального слоя эпидермиса, %, ДИ 13,5-19,6 28,4-34,8* 32,5-42,4* 43,2-48,5*л 88,5-98,8*А 50,4-56,8*л

Толщина дермы, мкм 585±125 678±107* 699±114* 686±212* 614±105* 597±125л

Толщина гиподермы, мкм 265±86 272±75 258±71 268±101 289±82 245±67

Объемная плотность коллагена, % 65,5±7,0 46,2±4,8* 42,7±6,2* 48,8±9,4* 78,8±7,0*лл 74,4±5,8*

Объемная плотность эластических волокон, % 3,1±1,5 2,2±0,6* 2,5±0,8* 3,3±1,2 3,6±0,9 3,0±1,7

Объемная плотность сальных желез, % 8,9±2,8 7,3±1,2* 7,1±0,9* 6,9±0,8* 7,2±0,7* 6,9±1,3*

Объемная плотность эпителия волосяных влагалищ, % 22,6±7,6 21,8±4,4 16,4±1,7*А 21,5±4,2*л 35^4,8**™ 28,8±6,2*л

Объемная плотность гемососудов в дерме, % 1,5±0,5 0,6±0,2* 0,5±0,4* 2,8±0,4*лл 3,4±0,4** 1,8±0,6А

Объемная плотность гемососудов в гиподерме, % 5,84±1,2## 7,98±1,3* 9,32±1,8**А 7,18±2,1*л 5,14±1,1л 5,96±2,5

Численная плотность фибробластов, на 1 мм2 420±60 370±72* 330±50* 385±75А 655±78**ААА 510±72*л

Угол наклона волос, градусы, ДИ 60-68 72-83* 74-86* 76-88* 50-110*л 30-120*

Расстояние между волосами кожи, мкм 163±22 172±29 208±28**л 365±38**ЛА 314±22** 263±29*л

Характер распределения волос Г, С Г, С Г, С Г, А Г, А Г, А

Численная плотность волос, на 1 мм2 66,7±7,8 62,5±6,3 54,2±7,1*л 45,2±6,8*л 52,5±8,9*А 51,5±9,2*

Примечание. * - различия статистически значимы в сравнении с контролем при ^0,05, ** - при р<0,01 и *** - при/?<0,001; Л - различия статистически значимы в сравнении с предыдущим сроком при р<0,05, АА - при р<0,01 и ААА - при р<0,001. ## - различия статистически значимы в сравнении с дермой при р<0,01 (критерий Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни для парных сравнений независимых выборок. Г - гексагональное, С - симметричное, А - асимметричное, ДИ - доверительный интервал.

Через 7 сут объемная плотность сосудов дермы превосходила контрольный уровень на 126,7%, а в гиподерме определялась на уровне контроля. Объемная плотность интерстициального пространства уменьшалась, а коллагено-вых волокон, волосяных влагалищ и численная плотность фибробластов увеличивалась и сохранялась на высоком уровне через 14 сут после травмы. Восстановление объемной плотности сосудов в дерме происходило через 14 сут после травмы.

2.2. Иммуноморфологическая характеристика кожи после механического повреждения

С позиции клеточно-дифферонной организации тканей эпидермис кожи крыс в норме можно рассматривать как систему взаимодействующих дифферо-нов: эпителиоцитов, внутриэпидермальных макрофагов, меланоцитов. Эпите-лиоциты являлись ведущим клеточным диффероном, который определял структуру и функцию эпидермиса (табл. 2).

Таблица 2

Морфометрические показатели клеток эпидермиса кожи контрольной группы

Слой Показатель,

Площадь ядра (Бя), мкм Площадь цитоплазмы (8ц), мкм Ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО), у.е.

Базальный слой 19,1±1,5 8,30±0,95 2,3±0,34

Шиповатый слой 16,9±0,84* 9,39±0,46* 1,8±0,09*

Зернистый слой 12,8±0,97***л 13,47±1,57**ЛЛ 0,95±0,08***лл

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с клетками базальиого слоя при /КО,05, ** - при /КО,01, ** - при /><0,001; л - различия статистически значимы в сравнении с клетками шиповатого слоя при /КО,05, ** - при /КО,01. М±$ - среднее стандартное отклонение (критерий Колмогорова-Смирнова).

Таблица 3

Относительное содержание элементов соединительной ткани в дерме кожи __контрольной группы__

Клетки Расстояние от базальной мембраны эпидермиса

50-150 мкм 250-350 мкм

Фибробласты, % 74,8 (66,12-82,8) 4,0(1,6-9,8)*

Фиброциты, % 15,2 (9,7-23,8) 93,2 (86,5-96,7)*

Макрофаги, % 4,3 (1,7-10,2) 2,8 (0,9-8,2)

Тканевые базофилы (тучные клетки), % 2,6 (0,83-7,8) 0

Лимфоциты, % 2,2 (0,64-7,3) 0

Гранулоциты,% 0,9 (0,15-5,3) 0

Примечание: * - различия между уровнями дермы статистически значимы (сравнение 95% доверительных интервалов пропорции).

Общая численная плотность клеток дермы в коже у животных контрольной группы варьировала в пределах 1050-1320 на 1 мм2 (95% ДИ средней). Распределение клеток зависило от уровня глубины дермы, однако везде преобладали фибробласты (табл. 3).

Таким образом, в коже контрольной группы белых крыс ведущими диф-феронами являлись эпителиоцитарный и фибробластический. Иммуногистохи-мическое исследование показало, что степень выраженности междифферонной гетероморфии в эпителии кожи контрольной группы животных следует оценить как очень низкую. Подавляющее большинство клеток в нем принадлежало к одному клеточному дифферону - эпителиоцитам (кератиноцитам). Представители неэпителиальных клеточных дифферонов (миоидные клетки, макрофаги) встречались крайне редко. С другой стороны, выраженность внутридифферон-ной гетероморфии основного клеточного дифферона эпителия кожи была достаточно высока в связи с тем, что выявлялись клетки, находящиеся на разных стадиях дифференцировки и отличающиеся степенью пролиферативной активности.

По данным иммуногистохимического анализа, в рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи контрольной группы животных междифферонная ге-тероморфия тканевых элементов достаточно высока за счет различных клеточных дифферонов - фибробластического, макрофагального, эндотелиального. Количественно преобладающим являлся фибробластический дифферон, его внутридифферонную гетероморфию можно оценить как умеренную в связи с тем, что верифицировались юные, функционально мало активные клетки и зрелые фибробласты. Тем не менее, функциональная (анализ экспрессии Со1-4) и пролиферативная (анализ экспрессии Ю-67) активность различных клеточных дифферонов в дерме и гиподерме низкая. Миоидных фибробластов не обнаружено.

В течение 1 сут после травмы клетки системы крови и соединительной ткани формировали гистион фазы воспаления. Ведущими клеточными диффе-ронами этого гистиона являлись нейтрофильные гранулоциты, тучные клетки и эндотелиоциты кровеносных сосудов (табл. 3).

Через 3 сут лейкоцитарный вал инфильтрата расширялся до 450-500 мкм. В дерме перинекротической зоны раны снижалась доля нейтрофилов, тканевых базофилов, а мононуклеаров возрастала (табл. 4).

Таким образом, через 3 сут формировался гранулоцитарно-макрофагальный гистион. Увеличивалась относительная доля мононуклеарных лейкоцитов, преимущественно макрофагов, и уменьшалась доля нейтрофиль-ных лейкоцитов - происходила трансформация раннего гистиона фазы воспаления в поздний гистион фазы воспаления (эндотелиально-тучноклеточно-макрофагальный), в котором ведущими элементами становились макрофаги.

Формирование регенерационного гистиона (через 7-14 сут) происходило на фоне интенсивного образования межклеточного вещества, неоангиогенеза в грануляционной ткани, миграции и деления эпителиоцитов. За фазой воспаления следовал репаративный гистогенез, который включал несколько этапов: 1)

активация и пролиферация камбиальных элементов (через 3 сут) 2) их диффе-ренцировка (3-7 сут)и 3) адаптация тканевых элементов к новым условиям существования (7-14 сут). Появлялись единичные делящиеся клетки, малодиффе-ренцированные фибробласты. Часто вблизи них локализовались макрофаги, которые вместе с фибробластами составляли ведущее звено регенерационного гистиона.

Таблица 4

Содержание различных типов клеток в дерме перинекротической зоны после

механической травмы (95% доверительный интервал пропорции)

Время после травмы Клеточный состав, %

Нейтрофилы Тучные клетки Макрофаги Фибробласты, эндотелиоциты

6ч 40,2-52,4 0,3-5,9 0,002-3,8 39,2-58,5

1 сут 54,6-71,2 у 2=4,3; ¿>=0,04* 1,6-9,9 2,7-12,3 Х2=4,0; р=0,04* 19,9-37,2 Х.2=8,6; р=0,004*

3 сут 12,6-28,0 Х2=36,8; £=0,0001* 1,0-8,4 49,5-68,4 Х2=62,5; /7=0,0001* 12,2-27,3 Х2=1,8;р=0,17

7 сут 0,4-6,7 Х2=14,3; р=0,0002* 1,6-9,9 23,1-41,0 Х2=И,6; £>=0,0001* 53,1-71,7 Х2=38,8; /7=0,0001 *

14 сут - 0,054,6 13,0-28,4 Х2=3,0; р=0,08 70,9-86,5 Х,2=6,2; £>=0,01*

25 сут - 0,2-5,5 4,2-15,1 Х2=4,6; р=0,03* 84,3-95,5 Х,2=4,6; р=0,03*

Примечание. * - различия статистически значимы в сравнении с предыдущим сроком при р<0,05 (критерий /2). Жирным шрифтом отмечено максимальное значение (95% доверительный интервал) для данного типа клеток в посттравматическом периоде. С каждого срока анализировали по

100 полей зрения (Об. хЮО).

Результаты гистологического, иммуногистохимического и морфометри-ческого исследования кожи в посттравматическом периоде свидетельствовали о том, что в перинекротической зоне происходило усиление внутри- и междиф-феронной гетероморфии эпидермиса и дермы. Так, на 3-й сут после механического повреждения в эпидермисе и дерме с помощью маркера на СБ-34 отчетливо выявлялись миоидные клетки. В эпидермисе содержание этих клеток варьировало в пределах 5-50% (95% ДИ). Эти миоэпителиоциты обеспечивали контракцию раны в первые дни после нарушения целостности кожи. Максимальное количество миоидных эпителйоцитов в эпидермисе выявлялось через 3 и 7 сут после травмы, миодных фибробластов - через 7 сут. Следовательно, после травмы клетки паранекротической зоны проявляли всю широту своих потенций, дифференцируясь для выполнения более разнообразных, чем в норме, функций. Это проявлялось в гетероморфии, гетерохронии и гетерокинезе тканевых элементов.

После травмы во всех слоях эпидермиса появлялись макрофаги. Максимальное количество внутриэпителиальных макрофагов в эпидермисе было через 7 сут, а через 14 сут их количество существенно уменьшалось. В перинек-ротической зоне максимальное количество СО-68-позитивных клеток обнаруживалось на границе с некротически поврежденной тканью. По мере усиления восстановительных процессов количество макрофагов уменьшалось.

Все вышеизложенное свидетельствовало о возрастании междифферрон-ной гетероморфии в эпидермисе и дерме кожи после ее механического повреждения. Однако в посттравматическом периоде происходил рост и внутридиффе-ронной гетероморфии. Прежде всего, это касалось популяции эпителиальных клеток эпидермиса. Особенно наглядно усиление внутридифферонной гетероморфии демонстрировалось с помощью специфических иммунных меток - Кь 67 иСК-14.

По данным морфометрического анализа иммуногистохимических препаратов перинекротической зоны кожи, относительное содержание Кь67-позитивных клеток в эпидермисе существенно отличалось в течение всего периода наблюдения. Через 6 ч после травмы экспрессия Ю-67 была очень низкой, маркер выявлялся виде отдельных гранул, индекс пролиферации составлял 22,4±6,8% (преобладали слабо прокрашенные клетки), а через 1, 3 и 7 сут отмечалось прогрессивное усиление экспрессии белка Ю-67 и рост индекса пролиферации (1 сут - 28,2±3,9%; 3 сут - 41,5±5,7%; 7 сут - 88,6±12,2%), что свидетельствовало о компенсаторном увеличении количества пролиферирующих клеток базального слоя эпидермиса.

Через 6 ч маркер экспрессии Кь67 локально выявлялся в отдельных клетках базального слоя эпидермиса. Через 1, 3, 7 сут плотность меченых клеток прогрессивно возрастала в эпидермисе, а через 3,7 сут и в дерме. В дерме метка к Кь67 определялась в стенке сосудов, волосяных влагалищах и существенно реже в фибробластах, макрофагах.

Иммунопозитивные пролиферирующие клетки в эпидермисе распределялись по-разному: выявлялись либо диффузно, либо неравномерно в виде очагов в базальном слое. Неравномерность пролиферативной активности базальных клеток в большей степени обнаружена через 1 и 3 сут после повреждения. Именно за счет очаговой активации базальных клеток средний индекс пролиферации через 3 сут был ниже, чем через 7 сут после травмы. В очагах пролиферации ее индекс через 3 сут не отличался от такового через 7 сут.

Эпителиальные клетки с высоким уровнем связывания маркера к Кь67 выявлялись не только в базальном слое, но в шиповатом и зернистом слоях. Это свидетельствовало о том, что изменялись взаимоотношения процессов пролиферации, миграции и дифференцировки эпителиальных клеток эпидермиса. Клетки начинали мигрировать в фазе пролиферации, а их созревание происходило в вышележащих слоях.

Ядра базальных эпителиоцитов из плоских/овальных превращались в круглые. Часть Кь67-позитивных клеток располагалась без закономерной ориентации и утрачивала структурную связь с базалыюй мембраной.

Все это свидетельствовало о возрастании внутридифферонной гетеро-морфии, гетерохронии и гетеротопии созревания клеток. Вполне вероятно, что длительное сохранение подобного положения пролиферирующих клеток может неблагоприятно сказываться на гистоархитектонике эпидермиса в посттравматическом периоде.

Установлено, что через 7 сут после травмы существенно увеличивалось количество маркера к Кл-67 в дерме. Наибольшая пролиферативная активность выявлена в популяции клеток волосяных влагалищах, существенно меньше в эндотелиальных клетках и сальных железах. В волосяных влагалищах экспрессия Кл-67 значительно различалась - от очень высокой до слабой. Больше всего активно пролиферирующих клеток было в наружных волосяных влагалищах. Уже через 6 ч после травмы количество Кл-67-позитивных клеток в этих образованиях кожи существенно увеличивалось, достигая максимума через 1-3 сут и превосходило таковое в эпидермисе.

Вторым по мощности экспрессии Кт-67 был пул эндотелиальных клеток микрососудов, входящих в грануляционную ткань. Максимальное число Кд-67-иммунопозитивных эндотелиальных клеток выявлялось через 3 и 7 сут после повреждения в период наибольшего образования сосудов в грануляционной ткани.

Другие источники пролиферирующих клеток кожи значительно уступали выше приведенным дифферонам по количеству маркера к Кл-67. Так, в сальных железах выявлялись лишь единичные клетки, которые нельзя рассматривать как значимый камбиальный пул, способный внести существенный вклад в восстановление цито- и гистоархитектоники кожи.

Через 3 сут после механического повреждения кожи в эпидермисе и субэ-пидермальной области дермы перинекротической зоны с помощью маркера к Со1-4 выявлялись группы активных клеток эпителиального и фибробластиче-ского дифферонов, которым принадлежала ведущая роль в реларативном гистогенезе эпидермиса и соединительной ткани. Они продуцировали коллаген IV типа, обеспечивая архитектонику базальной мембраны эпителиия и грануляционной соединительной ткани. Количество маркера к Со1-4 и клеток, его содержащих, в ходе подготовки к репаративному гистогенезу увеличивалось в первые 3-е сут после травмы, а через 7 сут количество иммунопозитивного материала уменьшаюсь, особенно в эпителиоцитах.

Изменение общего количества клеток эпидермиса, волосяных влагалищ, количества их слоев и пространственной организации (гистоархитектоники) в динамике посттравматического периода хорошо прослеживалось при иммуно-гистохимической верификации кератина (СК-14).

Сразу после повреждения в эпителии краев раны подвергались деструкции и слущивались роговые, зернистые и шиповатые клетки. Эпидермис представлял собой тонкую полоску клеток в 1-2 ряда. Небольшое количество клеток было характерно и для волосяных влагалищ. После травмы отмечалась гетерогенность формы и размеров клеток внутри эпителиального дифферона эпидер-

миса, которая увеличивалась в процессе заживления раны. Содержание маркера к СК-14 в клетках глубоких и поверхностных слоев различалось.

Через 3 сут после травмы по мере удаления от места повреждения, количество слоев сохранившихся эпителиоцитов возрастало. Край эпителия приобретал форму уплощенного клина, лишенного роговых чешуек. Деструкция эпидермиса наблюдалась от края раны до ближайшей волосяной воронки, так что граница изменений поверхностного эпителия часто проходила но наружному волосяному влагалищу. Эпидермис на большом протяжении вокруг раны был гипертрофирован.

Камбиальные клетки наружного волосяного влагалища изменяли направление с циркулярного на вытянутое к поверхности кожи и мигрировали в направлении раневого дефекта. Включение камбиальных клеток эпителия волосяного влагалища в состав поверхностного эпителия сопровождалось его разрыхлением. Этот процесс наблюдался на значительном удалении от края раны, вследствие чего происходила гипертрофия эпидермиса и в дистальных участках перинекротической области.

В удаленной от места повреждения части перинекротической области ба-зальные клетки были распластаны по набухшей базальной мембране и сохраняли с ней тесный контакт. Наиболее резко изменения выражены в эпидермисе на границе с зоной первичного посттравматического некроза. При этом клетки имели плоскую форму и располагались над фибрином.

Через 3 и 7 сут после травмы отмечалась гипертрофия эпителия наружных волосяных влагалищ. Большое число клеток с высоким уровнем пролифе-ративной активности (маркер на Кь67) выявлялось в покровном эпителии и в эпителии волосяных фолликулов. Новообразованный эпителиальный пласт эпидермиса формировался вследствие смещения на поверхность раны клеток эпидермиса из соседних участков кожи.

Эпителиальный регенерат имел ряд особенностей. Через 3 сут в нем отсутствовала вертикальная анизоморфия клеток. Все образующие его эпителио-циты были дифференцированы и имели уплощенную форму. Через 7 сут появлялась вертикальная анизоморфия клеток, которая усиливалась в более отдаленном периоде. Через 14 сут после травмы большая часть раны была эпители-зирована. Эпителий вступал в тесный контакт с тонкостенными кровеносными сосудами грануляционной ткани. Клетки эпителия имели высокую пролифера-тивную активность. Процесс регенерации эпидермиса распространялся вместе с грануляционной тканью.

Через 25 сут после механического повреждения кожи эпителизация раны полностью завершалась, а в эпителиальном регенерате восстанавливалась структура ведущего дифферона эпителиоцитов.

Таким образом, данные иммуногистохимического и морфометрического исследования свидетельствовали о том, что сразу после повреждения в эпителии краев раны погибали и слущивались дифференцированные роговые чешуйки, зернистые и шиповатые клетки. Сохранившие жизнеспособность базальные эпителиоциты перинекротической области в ответ на повреждение ускоренно

пролиферировали в нескольких направлениях, проявляя признаки выраженной гетероморфии и гетерокинеза. Одни из них распластывались по поверхности раны и переходили в состояние пара кератоза, другие превращались в сократимые миоидные эпителиоциты. Часть эпителиоцитов обеспечивала сохранение целостности эпителиального пласта путем усиления механической функции. В последующие сроки происходила гипертрофия эпителия по краю раны, преимущественно за счет смещения в нее интенсивно пролиферирующих камбиальных клеток наружных волосяных влагалищ.

Иммуногистоархитектоника кожи в проксимальных и дистальных участках перинекротической зоны отличалась незначительно (табл. 5). Экспрессия изученных белков выражена ярче в дистальных участках, дальше от зоны некроза.

Таблица 5

Оценка иммуногистохимических реакций в динамике раневого процесса

животных группы II в проксимальных и дистальных участках __ перинекротической зоны_

Белок Контроль Основная группа, носттравматический период

6 ч | 1 сут | 3 сут | 7 сут | 14 сут

Проксимальные участки (0-200 мкм)

СО-34 + + + + +++* +*

СО-68 - - +* +++* ++ +*

Со1-4 - - ++* +++* ++

СК-14 ++ ++ +++* +++ +++

Кл-67 + - ++* +++* +++ ++*

Дистальные участки (250-500 мкм)

СО-34 + - + ++* +++* ++

СБ-68 - - + +++* ++* +*

Со1-4 - + + ++* +++* ++*

СК-14 ++ ++ +4 +++* +++ +++

К1-67 + + ++ +++* +++ ++*

Примечание. * - различия статистически значимы по сравнению с предыдущим сроком (критерий %2 с поправкой Иетса). (-) - отсутствие экспрессии, (+) - низкая экспрессия, (++) - умеренная экспрессия, (+++) - высокая экспрессия.

По данным анализа пролиферативной активности установлено, что число функционально активных и гиперактивных клеток увеличивалось по мере удаления от раневого канала (рис. 1).

-о— Проктимпльные -«-Дпстальные участки

1и0 - -.......- - ------- — .............

8 16

О !

контр йч 1 <уг 3 ОТ * сут 14 от !

Рис. 1. Число клеток (95% доверительный интервал) с высоким уровнем (+++) экспрессии 67 в ядрах эпителиальных клеток базалыюго слоя эпидермиса кожи бедра белых крыс группы II в различных участках (0-200 мкм и 250-500 мкм) от границы некроза и перинекротической зоны. * -различия статистически значимы в сравнении с предыдущим сроком, л - различия статистически значимы между проксимальными (0-200 мкм) и дистальными (250-500 мкм) участками перинекроти-чесой зоны.

Между уровнем экспрессии различных изученных белков выявлены статистически значимые положительные корреляционные связи. Наиболее сильные связи отмечены между уровнем экспресии Кл-67 и СК-14 (г=0,85,р<0,001), £¡-67 и Со1-4 (г=0,72, /><0,01), СО-34 и Кл-67 (г=0,76, /?<0,01), СО-68 и СБ-34 (г=0,65, /?<0,05). Это свидетельствовало о зависимости числа функционально зрелых клеток от пролиферативной активности камбиальных клеток, а также о зависимости количества макрофагов от плотности микрососудистой сети дермы.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что анализ иммуногисто-архитектоники кожи существенно детализирует оценку течения репаративного гистогенеза поврежденной кожи, что способствует поиску методов влияния на системноорганное структурно-функциональное восстановление кожи как органа после ее механического повреждения.

2.3. Сравнительная иммуноморфологическая характеристика раневого процесса кожи при различных способах его коррекции

Использование СУМС-1 оказывало нормализующее влияние на структурные показатели, характеризующие лимфо- и гемомикроциркуляцию. Сорбент уменьшал объемную долю сосудов микроциркуляторного русла и интер-стициального пространства (рис. 2). Это свидетельствовало об увеличении сброса жидкой части крови из гемокапилляров в терминальные отделы лимфатической системы (тканевые каналы и лимфатические капилляры) с последующей ее сорбцией. Локальное использование СУМС-1 способствовало более быстрому переходу альтеративных и эксудативных реакций к продуктивным и ре-паративным процессам в зоне механической раны кожи.

Рис. 2. Объемная доля сосудов микроциркуляторного русла (А) и интерстициального пространства (Б) в леринекротической зоне кожи животных группы (! (без сорбента) и IV (сорбент) в посттравматическом периоде. * - различия между группами статистически значимы при р<0,05 и ** -при £><0,01 (критерий Манна-Уитни и Колмогорова-Смирнова).

Применение мази Редецил приводило к более быстрому очищению раны от некротического содержимого, статистически значимому эффекту стимуляции процесса регенерации кожи (маркер СК-14), усилению пролиферации камбиальных клеток кожи в эпидермисе и наружных волосяных влагалищах (содержание Кл-67-позитивных клеток эпидермиса выше, ¿><0,01, критерий Манна-Уитни) начиная с 3-х сут, подавлению процессов кератинизации и стимуляции ангиогенеза через 7 сут (маркер СБ-34). В более раннем периоде (6 ч, 1 сут), на фоне выраженных процессов деструкции, потенциальные возможности регенерации поврежденной кожи реализовались слабо. Редецил стимулировал процесс заживления раны и существенно увеличивал меж- и внутридифферонную гетероморфию эпителиального и фибробластического дифферонов. При использовании мази уже через 14 сут происходило закрытие центрального дефекта, а без нее эгштелизация раны завершалась на 5-10 сут позже. Комбинированное локальное использование сорбента СУМС-1 и мази Редецил обеспечивало интенсивное заживление раны за счет сочетания процесса ее ускоренного очищения и стимуляции пролиферативной активности клеток ведущих дифферонов кожи.

Таким образом, при анализе результатов иммуногистохимического и морфометрического изучения уровня экспрессии белков СК-14 и Кл-67 в зоне механического повреждения кожи белых крыс получены новые данные об особенностях временного влияния на пролиферативную активность камбиальных клеток эпидермиса и волосяных фолликулов сорбента СУМС-1 и мази Редецил. В условиях нарушения дренажно-детоксикационной функции кожи после ее механического повреждения значительно снижались возможности активации репаративных механизмов, направленных на стимуляцию деления клеток. Вероятно, только после нормализации микроциркуляторных процессов в тканях кожи (в частности, с помощью сорбентов) становилось возможным эффективная целенаправленная специфическая коррекция восстановления популяции эпителиальных клеток эпидермиса и волосяных фолликулов. Стимулирующий

эффект мази максимально полно реализовался в условиях активации репара-тивного гистогенеза (7-14 сут).

Выявленные иммуногистохимические различия особенности структурно-функционального ремоделирования кожи с позиции ее клеточно-дифферонной организации позволяют рассматривать восстановительные процессы в эпидермисе как подвижную открытую систему взаимодействующих дифферонов, состояние которых может целенаправленно изменяться с помощью протезирования дренажно-детоксикационной функции кожи и стимуляции процессов пролиферации и дифференцировки камбиальных клеток.

ВЫВОДЫ

1. После механического повреждения кожи в перинекротической зоне происходит фазная анатомогистологическая пространственная реорганизация ее отделов и структурных компонентов: изменяется толщина эпидермиса и дермы, объемная доля межклеточного пространства, коллагена, интерстиция, эпителиальных клеток волосяных влагалищ, микрососудов, активируются механизмы репаративного гистогенеза. Увеличение толщины эпидермиса в 4,4 раза и численной плотности эпителиоцитов в 1,2 раза сопровождается ростом индекса пролиферации базальных клеток эпителиального пласта в 5,6 раза по сравнению с контролем.

2. Активация механизмов репаративного гистогенеза заключается в стохастически связанных гистофизиологических изменениях эпителиального, фибробластического, макрофагального и эндотелиального дифферонов, вследствие которых возрастает общая масса клеток, объем основного вещества соединительной ткани дермы, микрососудов, гетерохронная внутри- и междиф-феронная гетероморфия, резко увеличивается количество специализированных миоэпителиальных и миофибробластических клеток, усиливается синтез основного компонента базальных мембран - коллагена IV типа.

3. Пролиферативная активность камбиальных клеток дифферонов регене-рационного гистиона характеризуется высокой степенью гетерохронии и гете-роморфии. В эпидермисе экспрессия ядерного белка К¡-67 через 6 ч после травмы очень низкая (маркер выявляется в виде отдельных гранул, индекс пролиферации составляет 22,4±6,8%), а через 1, 3 и 7 сут экспрессия белка прогрессивно усиливается и растет индекс пролиферации (соответственно до 28,2±3,9, 41,5±5,7 и 88,6±12,2%). Максимальная пролиферативная активность клеток в дерме отмечается через 3 и 7 сут.

4. Структурно-функциональная пространственная реорганизация межклеточных взаимоотношений в эпидермисе и дерме после травмы сопровождается усилением дивергенции направлений дифференцировки камбиальных клеток. В перинекротической зоне значительно увеличивается количество миоидных эпителиоцитов и фибробластов, которые в совокупности составляют эффективную провизорную сократительную систему раны. Содержание миоэпителиоцитов колеблется в пределах 5-50%, с максимальным количеством через 3 и 7 сут.

Наибольшее содержание (3-15%) миоидных фибробластов определяется через 7 сут после травмы.

5. Местное использование СУМС-I в ностгравматическом периоде оказывает нормализующее влияние на структурно-функциональное состояние дре-нажно-детоксикационной системы кожи (уменьшается объем интерстициально-го пространства и сосудов дермы). Применение мази Редецил стимулирует пролиферацию камбиальных клеток в эпидермисе, наружных волосяных влагалищах и дерме кожи, стимулирует ангиогенез. Максимальный эффект сорбента достигается в фазу воспаления (через 1-3 сут), а мази Редецил - на фоне активации механизмов реиаративного гистогенеза (через 7-14 сут). Наиболее эффективное влияние на процессы репаративного гистогенеза достигается при комбинированном последовательном использовании сорбента СУМС-1 и мази Редецил.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные результаты целесообразно использовать в учебном процессе при обсуждении общих вопросов гистологии, гистологических аспектов ре-паративной регенерации кожи.

2. Данные о процессах реактивности и регенерации тканей кожи после механического повреждения могут быть использованы в качестве обоснования клинической аппробации местного применения препаратов, обладающих угле-родминеральносорбирующими свойствами и мазевых средств, содержащих ме-тилурацил и ретинола пальмитат, стимулирующих пролиферативную активность и дифференцировку камбиальных клеток кожи в ностгравматическом периоде.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ланичева А.Х. Реактивность периферической крови при заживлении кожной огнестрельной раны / А.Х. Ланичева, Х.Х. Мурзабаев // Материалы республиканской конференции молодых ученых республики Башкортостан с международным участием «Медицинская наука - 2009», Уфа, 2009. - С. 170-175.

2. Ланичева А.Х. Активность щелочной фосфатазы и миелопероксидазы периферической крови при заживлении кожной огнестрельной раны / А.Х. Ланичева, Х.Х. Мурзабаев, Р.Т. Сулайманова // «Научный прорыв - 2009» Сборник научных трудов конференции молодых ученых республики Башкортостан с международным участием, Уфа, 2009. - С. 10-13.

3. Ланичева А.Х. Анализ активности ферментов лейкоцитов периферической крови при заживлении кожной огнестрельной рапы / А.Х. Ланичева, Х.Х. Мурзабаев, Р.Т. Сулайманова // «Вопросы Морфологии XXI века» Сборник научных трудов. К 80-летию со дня рождения профессора A.A. Клишова. Выпуск 2, Санкт-Петербург, 2010. - С.138-142.

4. Ланичева А.Х. Влияние местного использования углеродминерального сорбента при механическом повреждении кожи белых крыс на рану и общее состояние организма / А.Х. Ланичева, В.В. Семченко, H.A. Никитушкина, М.В.

Лопуцкий // «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» Материалы II Сибирского ветеринарного конгресса 25-26 февраля 2010 года. Новосибирск, 2010. - С.255-256.

5. Ланичева А.Х. Структурные механизмы регуляции заживления механической травмы кожи белых крыс при использовании ретиноидной мази после огнестрельной травмы / А.Х. Ланичева, В.В. Семченко, H.A. Никитушкина, М.В. Лопуцкий // «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» Материалы II сибирского ветеринарного конгресса 25-26 февраля 2010 года/ Новосибирск, 2010. - С.257-258.

6. Лопуцкий М.В. Структурные изменения клеточных дифферонов кожи при травматическом повреждении и их коррекция стволовыми клетками пупо-винной крови / М.В. Лопуцкий, А.Х. Ланичева, В.В. Семченко, H.A. Никитушкина // «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» Материалы II Сибирского ветеринарного конгресса 25-26 февраля 2010 года/ Новосибирск, 2010. -С.261-262.

7*. Ланичева А.Х. Характеристика процессов регенерационного гистогенеза при заживлении кожной огнестрельной раны / А.Х. Ланичева, Х.Х. Мурза-баев, Р.Т. Сулайманова // Морфология. - 2010. - Т. 137, №4. - 2010. - С.110-111.

8*. Ланичева А.Х. Иммуногистохимическая характеристика динамики раневого процесса после механической травмы кожи белой крысы и экспериментальное обоснование перспективных направлений его коррекции / А.Х. Ланичева // Медицинский вестник Башкортостана. - 2010. - Т. 5, № 3. - С. 100104.

9*. Ланичева А.Х. Иммуногистохимическое исследование реактивно-репаративных изменений в сосочковом слое кожи при огнестрельной травме / А.Х. Ланичева, В.В. Семченко, H.A. Никитушкина, М.В. Лопуцкий // Морфология.-2010.-Т. 137, №4.-С. 111.

10*. Семченко В.В. Морфофункциональная характеристика миоидных клеток кожи белых крыс после высококинетического механического повреждения (иммуногистохимическое и морфомегрическое исследование) / В.В. Семченко, А.Х. Ланичева, С.С. Степанов, A.A. Ресенчук // Морфологические ведомости.-2010,-№3.-С. 59-63.

* публикации в издательствах, рекомендованных ВАК.

Ланичева Альбина Хамитовна

Репаратнвная регенерация кожи после механической травмы и способы ее коррекции (экспериментальное исследование)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 14.03.01 - анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 09.11.2010 Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 '/|6. Усл.-печ. л. 1,4. Уч.-изд. л. 1,4. Тираж 100 экз. Заказ № 100.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет Росздрава»

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Ланичева, Альбина Хамитовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

КОЖИ В НОРМЕ И ПРИ МЕХАНИЧЕСКОМ ПОВРЕЖДЕНИИ.

1.1. Современные проблемы (современное состояние представления о 9 структуре кожи.

1.2. Механическое повреждение и характеристика раневого процесса при 11 заживлении кожной раны.

1.3 Регенерация тканей кожи и источники ее посттравматической регене- 13 рации.

1.4 Реактивность организма на травму.

1.5. Методы коррекции раневого процесса.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Дизайн исследования.

2.2. Экспериментальная модель и серии исследования.

2.3. Методы исследования.

2.4. Статистический анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 3. АНАТОМО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОЖИ 34 БЕЛОЙ КРЫСЫ В НОРМЕ И ПОСЛЕ МЕХАНИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ.

3.1. Светооптическая обзорная и морфометрическая характеристика кожи в 34 норме и динамике раневого процесса.

3.2. Иммуногистохимическая характеристика динамики раневого процесса

3.3. Системный ответ организма белой крысы на механическое повреждение кожи бедра.

Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ИММУНОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАК- 97 ТЕРИСТИКА РАНЕВОГО ПРОЦЕССА КОЖИ БЕЛОЙ КРЫСЫ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ЕГО КОРРЕКЦИИ.

4.1. Протезирование дренажно-детоксикационной системы поврежденной кожи сорбентом СУМС

4.2. Активация процесса регенерации поврежденной кожи с помощью мази 101 «Ретинол+Метилурацил».:.

4.3. Сравнительный анализ влияния на интенсивность пролиферации эпи- 102 телиальных клеток в перинекротической зоне сорбента, мази «Ретинол+Метилурацил» и их сочетания.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Репаративная регенерация кожи после механической травмы и способы ее коррекции (экспериментальное исследование)"

Значение исследования раневого процесса в коже связано не только с ростом стихийных бедствий, производственных и бытовых травм, автокатастроф, военных действий, но и с множеством вопросов его патогенеза, в том числе механизмов компенсаторно-восстановительной реорганизации цито- и гистоархитектони-ки составляющих компонентов кожи, взаимоотношения ее дренажно-детоксикационной системы и пролиферативной активности эпителиальных, эндо-телиальных клеток, клеток соединительной ткани и крови на разных этапах замещения дефекта, формирования соответствующих гистионов (Мурзабаев Х.Х., 2002; Одинцова И.А., 2004; Ноздрин В.И. и др., 2006; Чепурненко М.Н., 2007; Полеско И.В и др., 2010). Структурно-функциональные механизмы заживления раны кожи после повреждающего механического воздействия хорошо изучены. По данным литературы, раневой процесс в коже рассматривается как реализация потенциально возможных адаптивных механизмов комплекса тканей организма в рамках взаимодействующей системы гистиона. Широко обсуждаемая концепция о гистионе позволяет по-новому оценить фазность течения раневого процесса с учетом взаимоотношения клеток различных дифферонов в гистионе и его последующей трансформации при заживлении раны (Одинцова И.А., 2003; Чепурненко М.Н., 2007; НататоЮ Т. й а1., 2009; ЫиБзЬаит ЕХ. et а1., 2009).

При изучении гистофизиологии кожи после повреждения большое значение, как и в других органах (Бородин Ю. И. и др., 1997), вероятно, играет определение состояния ее дренажно-детоксикационной функции (Колпаков М.А. и др., 2000)

Поэтому изучение раневого процесса, как своеобразной системы, которая зарождается, формируется, функционирует и подвергается регрессу, со всеми сопровождающими эти изменения системными и межсистемными взаимоотношениями, несомненно, позволит получить новые научные данные.

Таким образом, проблемы нормализации (протезирования) дренажно-детоксикационной функции кожи и целенаправленной коррекции пролифератив-ной активности ее недифференцированных клеток, как основы регенерации кожного дефекта, не изучены и на наш взгляд имеют теоретическое и прикладное значение для усовершенствования тактики локального консервативного лечения механической травмы кожи.

В связи с вышеизложенным, мы считаем целесообразным проведение сравнительного иммуноморфологического изучения поврежденной кожи в динамике естественного посттравматического периода, при специфическом воздействии на ядерные рецепторы (мазь «Редецил» на основе ретинола и метилурацила) (Нозд-рин В.И. и др., 2006) и неспецифическом воздействии на раневой процесс сорбента СУМС-1, который обеспечивает локальное протезирование дренажно-детоксикационной функции любой микроциркуляторной системы (Бородин Ю.И. и др., 1997; Бгатова Н.П., Новоселов Я.Б., 2000).

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное анатомическое и гистологическое морфометриче-ское исследование пространственной реорганизации различных отделов и компонентов кожи в норме и после механического повреждения.

2. Выявить особенности деструктивных и компенсаторно-восстановительных изменений основных клеточных дифферонов перинекротической зоны кожи и ее микроциркуляторного русла в динамике посттравматического периода.

3. Определить влияние раздельного и сочетанного применения сорбента СУМС-1 и мази Редецил на ремоделирование кожи: микроциркуляторного русла, гисто- и цитоархитектоники ее основных клеточных дифферонов в посттравматическом периоде.

Новизна исследования. В эксперименте с использованием комплекса гистологических, иммуногистохимических, морфометрических методов и системного статистического анализа получены новые количественные данные об изменении структурно-функционального состояния и гистофизиологии различных клеточных дифферонов и функциональных гистионов кожи белых крыс в динамике восстановительного периода после ее высококинетического механического повреждения. Установлено, что после повреждения кожи изменяется отношение толщины слоев, объемных долей коллагеновых волокон, эпителиальных клеток волосяных влагалищ, микрососудов, межклеточного пространства. Увеличение толщины эпидермиса в 4,4 раза и численной плотности его клеток в 1,2 раза сопровождается увеличением индекса пролиферации базальных клеток эпидермиса в 5,6 раза (до 88,6±12,2%) по сравнению с контролем. Найдены особенности количественных изменений, структурного взаимодействия всех типов клеток перинекротической зоны кожи в динамике деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов, показана роль дивергенции в посттравматическом гистогенезе. Обоснована возможность целенаправленной коррекции раневого процесса кожи с помощью сорбента СУМС-1 и мази Редецил. Выявлено, что сорбент СУМС-1 и мазь Редецил имеют различные временные интервалы оптимального воздействия на раневой процесс. Максимальный эффект сорбента достигается в фазу активного воспалительного процесса (1-3 сут), а мази Редецил - на фоне активации механизмов реге-нарационного гистогенеза.

Теоретическое и практическое значение работы. Выявлены особенности деструктивных и компенсаторно-восстановительных процессов кожи в посттравматическом периоде у экспериментальных животных с естественным течением раневого процесса, при протезировании дренажно-детоксикационной функции кожи и стимуляции пролиферативной активности клеток. Выявлены различия формирования воспалительного и регенерационного гистионов на различных этапах заживления раны в зависимости от характера воздействия в посттравматическом периоде.

Полученные данные послужат фундаментальной базой для дальнейшего изучения закономерностей регенерации кожи после ее механического повреждения, а также целенаправленного поиска способов коррекции раневого процесса. Фактические данные настоящего исследования и теоретические положения, разработанные на их основе, могут быть использованы в преподавании на кафедрах гистологии, патологической физиологии высших медицинских учебных заведений при изучении вопросов морфологии и функционирования кожи в условиях нормы и после механического повреждения.

Внедрение полученных результатов. Результаты исследования структурно-функциональных изменений кожи после механической травмы и способы их коррекции внедрены в курс лекций и практических занятий, а также научно-исследовательскую работу кафедры гистологии БГМУ.

Новые данные о патогенезе посттравматического нарушения и восстановления кожи внедрены в курс лекций, практических занятий и научно-исследовательскую работу кафедры патофизиологии БГМУ, кафедры нормальной физиологии БГМУ, кафедры морфологии человека и животных БашГосУниверситета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. После механического повреждения кожи в перинекротической зоне происходит фазная анатомогистологическая пространственная реорганизация ее отделов, обусловленная комплексом взаимосвязанных изменений относительного объема эпидермиса, волосяных влагалищ, дермы, интерстициальных пространств, микрососудов и различных клеточных дифферонов.

2. Активизация и реализация структурно-функциональных механизмов репа-ративного гистогенеза после механического повреждения сопровождается.взаимосвязанными изменениями эпителиального, фибробластического, макрофагаль-ного и эндотелиального дифферонов, активацией механизмов дивергенции, в результате которых увеличивается общая масса клеток, количество основного вещества соединительной ткани, формируется неоангиогенез, усиливается внутри- и междифферонная гетероморфия, появляются специализированные миоэпители-альные и миофибробластические клетки с последующей адаптивной пространственной перестройкой межклеточных и междифферонных взаимоотношений. 7

3. Стимуляция дренажно-детоксикационной функции кожи с помощью сорбента СУМС-1 и пролиферативной активности камбиальных клеток кожи с помощью сорбента СУМС-1 мази Редецил ускоряет процесс трансформации гис-тиона фазы воспаления в регенерационный гистион и сокращает длительность репаративного гистогенеза.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан с международным участием «Медицинская наука, 2009», посвященной году Поддержки и развития молодежных инициатив, Дню медицинского работника (Уфа, 2009); конференции ученых Республики Башкортостан с международным участием «Научный прорыв, 2009», посвященной году Поддержки и развития молодежных инициатив, Дню республики (Уфа, 2009); на «II Сибирском ветеринарном конгрессе», посвященной актуальным вопросам ветеринарной медицины (Новосибирск, 2010); научной конференции «Вопросы морфологии XXI века», выпуск 2, посвященной 80-летию со дня рождения А.А.Клишова (Санкт-Петербург, 2010); на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы медицинской науки», посвященной 1000-летию Ярославля (Ярославль, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из них в изданиях перечня ВАК - 4.

Объем и структура диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания методик исследования, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Общий объем диссертации составляет 156 страниц, фактические данные иллюстрированы 58 рисунками, 7 таблицами и схемой. Указатель литературы включает 258 источников, из них иностранных - 117. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Ланичева, Альбина Хамитовна

выводы

1. После механического повреждения кожи в перинекротической зоне происходит фазная анатомогистологическая пространственная реорганизация ее отделов и структурных компонентов: изменяется толщина эпидермиса и дермы, объемная доля межклеточного пространства, коллагена, интерстиция, эпителиальных клеток волосяных влагалищ, микрососудов, активируются механизмы репаратив-ного гистогенеза. Увеличение толщины эпидермиса в 4,4 раза и численной плотности эпителиоцитов в 1,2 раза сопровождается ростом индекса пролиферации базальных клеток эпителиального пласта в 5,6 раза по сравнению с контролем.

2. Активация механизмов репаративного гистогенеза заключается в стохастически связанных гистофизиологических измененияхэпителиального, фибробла-стического, макрофагального и эндотелиального дифферонов, вследствие которых возрастает общая число клеток, объем основного вещества соединительной ткани дермы, микрососудов, гетерохронная внутри- и междифферонная гетеро-морфия, резко увеличивается количество основного компонента базальных мембран - коллагена IV типа.

3.Пролиферативная активность камбиальных клеток дифферонов репаративного гистиона характеризуется высокой степенью гетерохронии и гетероморфии. В эпидермисе экспрессия ядерного белка Кл-67 через 6 ч после травмы очень низкая (маркер выявлялся в виде отдельных гранул, индекс пролиферации 22,4±6,8%), а через 1, 3 и 7 сут экспрессия белка прогрессивно усиливается и растет индекс пролиферации (соответственно до 28,2±3,9, 41,5±5,7 и 88,6±12,2%). Максимальная пролиферативная активность клеток в дерме отмечается через 3 и 7 сут.

5 Местное использование СУМС-1 в посттравматическом периоде оказывает нормализующее влияние на структурно-функциональное состояние дренажно-детоксикационной системы кожи (уменьшается объем интерстициального пространства и сосудов дермы). Применение мази Редецил стимулирует пролиферацию камбиальных клеток в эпидермисе, наружных волосяных влагалищах и дерме кожи, стимулирует ангиогенез. Максимальный эффект сорбента достигается в фазу воспаления (через 1-3 сут), а мази Редецил - на фоне активации механизмов репаративного гистогенеза (через 7-14 сут). Наиболее эффективное влияние на процессы репаративного гистогенеза достигается при комбинированном последовательном использовании сорбента СУМС-1 и мази Редецил.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные результаты целесообразно использовать в учебном процессе при обсуждении общих вопросов гистологии, гистологических аспектов репара-тивной регенерации кожи.

2. Данные о процессах реактивности и регенерации тканей кожи после механического повреждения могут быть использованы в качестве обоснования для клинической аппробации местного применения препаратов, обладающих угле-родминеральносорбирующими свойствами и мазевых средств, содержащих мети-лурацил и ретинола пальмитат, стимулирующих пролиферативную активность и дифференцировку клеток кожи в посттравматическом периоде.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Ланичева, Альбина Хамитовна, Тюмень

1. Автандилов, Г.Г. Введение в количественную патологическую морфологию / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1980. - 216 с.

2. Агеев, А.К. Патологическая анатомия боевых поражений и их осложнений /

3. A.К. Агеев, A.B. Асеев, Н.И. Голыптейн. JL: ВМедА, 1965. - 181 с.

4. Акимов, В.Г. Патология кожи / В.Г. Акимов, В.И. Альбанова, И.И. Богатырева и др. М.: Медицина, 1992. - 322 с.

5. Алмазов, В. А. Влияние продуктов секреции мононуклеарных фа гоцитов на пролиферативную активность соединительнотканных клеток /

6. B.А. Алмазов, Н.Б. Козьмин, М.А. Кулик // Бюллетень экспери ментальной биологии и медицины. 1984. — Т. 97, № 3. - С. 347 - 349.

7. Альбанова, В.И. Изучение клинической эффективности ретиноевой мази при обычных и розовых угрях и других дерматозах / В.И Альбанова// В сб. Рети-ноиды. Изд. АО «Ретиноиды», М., 1997, вып. 4. С. 47-50.

8. Аничков, H.H. Морфология заживления ран / H.H. Аничков, К.Г. Волкова, В.Г. Гаршин. М.: Медицина, 1951. - 123 с.

9. Афанасьев, Ю.И. Витамин А регулирующий фактор процессов гистогенеза /Ю.И Афанасьев, В.И Ноздрин, О.И Михайлов // Успехи современной биологии. - 1990. - Т. 110, № 3(6). - С. 410-418.

10. Афанасьев, Ю.И. Кожа и ее производные / Ю.И. Афанасьев, B.JI. Горячки-на. М.: ММА им. И.М. Сеченова, 1996. - 52 с.

11. Афанасьев, Ю.И. Популяционно-клеточные аспекты механизма действия витамина А /Ю.И. Афанасьев, В.И. Ноздрин, О.И. Михайлов // Успехи современной биологии. 1983. - Т. 95, № 3. - С. 368-372.

12. Бабаева, А.Г. Регенерация. Факты и перспективы / А.Г. Бабаева. -М.: Медицина, 2009. С. 189-193.

13. Банин, В.В. Роль перицитов в механизме новообразования сосу дов регенерирующей соединительной ткани / В.В. Банин // Морфология. -2004.-Т. 125, № 1.-С. 45-50.

14. Бгатова, Н.П., Новоселов Я.Б. Использование биологически активныхпищевых добавок на основе природных минералов для детоксикации организма. — »

15. Новосибирск, 2000. -240 с.

16. Берлин, Л.Б. Морфология кожи после ожогов и свободной пересадки / Л.Б. Берлин. Л.: Медицина, 1966. - 222 с.

17. Бородин, Ю.И. Лимфатическая система и лимфотропные средства./ Ю.И Бородин, А.В Ефремов , А.А Зыков , В.Н Горчаков . // Новосибирск. - 1997. — 136 с.

18. Быков, В.Л. Развитие и гетерогенность тучных клеток / В.Л. Быков // Морфология. 2000. - Т. 117, № 2. - С. 86-92.

19. Васильева, Г.И. Цитокины общая система гомеостатической регуляции клеточных функций / Г.И. Васильева, И.А. Иванова, С.Ю. Тюкавкина //Цитология.-2001.-Т. 43,№ 12.-С. 1101-1111.

20. Волков, Ю.Т. Клеточные иммуноморфологические аспекты механизма действия биологически активных форм витамина А / Ю.Т. Волков// Автореферат дисс. канд. мед. наук. М., 1995, 24 с.

21. Волков, Ю.Т. 13-цис-ретиноевая кислота как средство лечения акне/ Ю.Т. Волков, В.И. Ноздрин // Альманах «Ретиноиды». М.: Изд. ФНПП «Ретиноиды», 1997в.-Вып. 4.-С. 32-45.

22. Габриэлян, Н.И. Средние молекулы как уремические токсины / Н.И Габ-риэлян, В.И Липатова // Лаб. дело. ~ 1984. №3. - С. 138-140.

23. Таланкина, Е.И. Морфологические особенности репарации химического ожога желудка в зависимости от характера лечения /Е.И. Таланкина, Т.П. Пинчук, К.К. Ильяшенко, Е.И. Ермаченкова// Российский медицинский журнал. -№3,2010.-С. 9-11.

24. Гололобов, В.Г. Стволовые стромальные клетки и остеобласти-ческий клеточный дифферон / В.Г. Гололобов, Р.В. Деев // Морфология. -2003.-Т. 123, № 1.-С. 9-19.

25. Гирголав, С.С. Огнестрельная рана / С.С. Гирголав. JL: ВМедА, 1956. -330 с.

26. Графова, Г.Я. Цитоархитектоника эпидермиса и эпидермально-пролиферативные единицы (ЭПЕ) / Г.Я. Графова // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1982. - Т. 82, вып. 4. — С. 73 - 85.

27. Графова, Г.Я. О гистотопографических особенностях структуры эпидер-мального регенерата / Г.Я. Графова // Морфология раневого процесса. СПб.: ВМедА, 1992.-С. 14.

28. Графова, Г.Я. Регенерация эпидермиса после огнестрельного ра нения кожи / Г.Я. Графова // Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей. Труды ВМедА. Т.257. -СПб., 2004.-С. 68-76.

29. Гузев, К.С. Новые отечественные лекарственные средства с ретиноидами / К.С Гузев, В.И Ноздрин. М.: Изд-во ФНПП «Ретиноиды», 2003. - С. 112.

30. Гузев, К.С. Экспериментальные подходы к выбору лекарственной формы ретиноидов. / К.С Гузев, Ю.П Архапчев, В.И Ноздрин // В сб. Ретиноиды. Изд. АО «Ретиноиды», М., 1997, вып. 5. С.53-54.

31. Гузев, К.С. Исследование устойчивости масляного раствора ретинола пальмитата при высокой температуре / К.С Гузев, JI.H Поляченко // Фармация. -2000, №5-6.-С. 21-23.

32. Давыдовский, И.В. Огнестрельная рана человека. Морфологиче ский и общепатологический анализ / И.В. Давыдовский. М.: Изд-во АМН СССР, 1952.-468 с.

33. Данилов, P.K. Морфофункционапьные особенности регенерации соединительной ткани дермы крыс после огнестрельного повреждения / Р.К. Данилов, Ю.К. Хилова, С.Э. Русакова // Морфология. 1997. - Т. 111, №1 .-С. 70-74.

34. Данилов, Р.К. Морфофункциональная характеристика клеточной гибели в эпидермисе при огнестрельном повреждении кожи крыс в эксперименте / Р.К. Данилов, Х.Х. Мурзабаев, Г.Я. Графова // Морфология. -2001. Т. 5, №5. - С. 7175.

35. Данилов, Р.К. Регенерация кожи / Р.К. Данилов, Г.Я. Графова // Руководство по гистологии. Т.2. СПб.: СпецЛит, 2001. - С. 45 - 52.

36. Данилов, Р.К. Экспериментально гистологический анализ гистогенеза и1регенерации тканей (некоторые итоги XX века и перспективы дальнейших исследований) / Р.К. Данилов, Т.Г. Боровая, Н.Д. Клочков //Морфология. 2000а. - Т.118, вып. 4.-С. 7-16.

37. Диагностика и лечение ранений / Под ред. Ю.Г. Шапошникова. М.: Медицина, 1984.-343 с.

38. Душейко, A.A. Витамин А: обмен и функции / A.A. Душейко. Киев: Наукова Думка, 1989. - С. 285-288.

39. Дыбан, А.П. Стволовые клетки в экспериментальной и клинической медицине / А.П. Дыбан, П.А. Дыбан // Медицинский академический журнал. 2002. -Т. 2, №3.-С. 3-24.

40. Ершова, Т.В. Влияние условий формирования соединительной ткани в процессе посттравматической регенерации кожи у крыс на адгезивные свойства клеток эпидермиса / Т.В. Ершова, П.П. Иванищук // Цитология. 1992. - Т. 34, № 6.-С. 101-106.

41. Ефимов, Е.А. Посттравматическая регенерация кожи / Е.А. Ефимов. — М.: Медицина,-1975.

42. Ефимов, Е.А. Характеристика полноты регенерации кожи / Е.А. Ефимов // Морфология. 2000. -№ 3. - С. 45.

43. Ефимов, Е.А. Кожа / Е.А. Ефимов // Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / Под ред. Д.С. Саркисова. -»

44. М.: Медицина, 1987. С. 84 - 100

45. Жучков, С.А. Влияние 13-цис-ретиноевой кислоты на пролиферацию и дифференцировку кератиноцитов крыс /С.А. Жучков: Автореф. канд. мед. наук. М.,2007. 22-23 с.

46. Заварзин, A.A. Избранные труды / A.A. Заварзин. М. - JL: Изд-во АН СССР, 1953.-718 с.

47. Зелинский, Г.А., Никишкин И.А., Пленин А.Е. Биохимические аспекты влияния витаминов на процессы старения / Г.А Зелинский, И.А Никишкин, А.Е Пленин. Минск, Наука и техника, 1979. - С. 160-165.

48. Зимина, И.В. Кожа как иммунный орган: клеточные элементы и цитоки-ны / И.В. Зимина, Ю.М. Лопухин, В.Я. Арион. //Иммунология. 1994. - № 1. — С. 8-13.

49. Иванова, И.А. Ретинола пальмитат в лечении генерализованных кератозов / И.А Иванова, Ю.П Архапчев, Ю.Т Волков // Альманах «Ретиноиды». М.: Изд. ФНПП «Ретиноиды», 1999. - Вып. 7. - С. 38 - 42.

50. Кадилов, Е.В. Гистологическая и гистохимическая характеристика регенерации некоторых органов млекопитающих при ее стимуляции / Е.В Кадилов, А.А Овсепян, А.А Ханин // В сб. Регуляторные механизмы регенерации. — М.:г

51. Медицина, 1973.-С. 145-159.

52. Кадилов, Е.В. Применение тканевых экстрактов по В.П. Филатову при посттравматической регенерации некоторых органов млекопитающих / Е.В. Кадилов// В сб.: Тканевая терапия по В.П. Филатову. Одесса, 1977. - С. 73 — 75.

53. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции воспаления и иммунитета / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина // Иммунология. —1995.-№3.-С. 30-44.t •

54. Кирик, О.В. Маркеры пролиферации, применяемые в гистологических исследованиях / О.В. Кирик, Г.В. Безнин , Д.Э. Коржевский. // Морфология. -2009. Т. 136, №6. -С. 95-100.

55. Клишов, A.A. Гистогенез и регенерация тканей / A.A. Клишов. -JI.: Медицина, 1984:-232 с.

56. Клишов, A.A. Клеточно-дифферонная организация тканей и проблема заживления ран / А. А. Клишов,Т.Я. Графова, B.F. Гололобов и др.-'// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии.-1990. Т. 98, вып. 4. - С. 5-23.

57. Клочков, Н.Д. Гистион как элементарная морфофункциоиальная единица / Н.Д. Клочков // Морфология. 1997. - Т. 112, № 5. - С. 87 - 88.

58. Кнорре, А.Г. Эмбриональный гистогенез (морфологические очерки) / А.Г. Кнорре. Л.: Медицина, 1971. - 432 с.

59. Кожа/Под ред. A.M. Чернуха, Е.П. Фролова. М;: Медицина, 1982.

60. КоЛокольчикова, Е.Г. Некоторые закономерности физиологической и ре-паративной регенерации соединительнотканной основы кожи / Е.Г. Колокольчи-кова, Ю.А. Амирасланов // Архив патологии. 1994. - Т.56, № 5, — С. 34-39.

61. Колпаков, М.А. Сравнительная эффективность сорбентов СУМС-1 и эн-теросгеля при экспериментальном хроническом токсическом гепатите/ М.А. Колпаков, Ю.В. Башкирова, М.С Любарский// Вестник Российской АМН. -1999,№4, С. 10-13.

62. Кондашевская, M.B. Тучные клетки и гепарин ключевые звенья в адаптивных и патологических процессах/ М.В. Кондашевская// Вестник Российской АМН. - 2010,№6, - С. 49-55.

63. Конь, И.Я. Биохимические механизмы действия витамина А./ И .Я. Конь // Автореф дисс докт. мед. наук. М., 1987, 45 с.

64. Крутых, Е.Г. Особенности строения кожи крыс в условиях воздействия дегтя березового / Е.Г. Крутых// Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва 2008. -С. 14-18.

65. Куприянов, В.В. Ангиогенез: образование, рост и развитие кровеносных сосудов / В.В. Куприянов, В.А. Миронов, A.A. Миронов, О.Ю. Турина. М.: НИО "Квартет", 1993.-201 с.

66. Кузин, М.И. Патогенез раневого процесса // В кн.: Раны и раневая инфекция под ред. М.И. Кузина, Б.М.Костюченкова. М.: Медицина, 1990.-С. 90-124.

67. Лидак, М.Ю. Витамин А и синтетические ретиноиды в иммунологии и онкологии 7 М.Ю Лидак, К.Л Плецитый. // Зинатне, Рига, 1984. — 126с.

68. Лоскутова, З.Ф.Виварий./З.Ф. Лоскутова//-М.: Медицина, 1980. 93с.

69. Ляшенко A.A. К вопросу о систематизации цитокинов / A.A. Ляшенко, В.Ю.Уваров // Успехи, современной биологии. 2001. - Т. 121, № 6. - С.589 - 603

70. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. — Новосибирск: Наука, 1983. 254 с.

71. Маянский, Д.Н. Хроническое воспаление / Д.Н. Маянский. М.: Медицина, 1985.-208 с.

72. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С.Саркисова, Ю.Л.Перова М.: Медицина, 1996. 544 с.

73. Михайлов, И.Н. Структура и функции эпидермиса / И.Н. Ми хайлов. М.: Медицина, 1979.- 240 с.

74. Мгосеев, А.Г. Модификация одновременного азосочетания для выявления щелочной фосфатазы в лейкоцитах крови и костного мозга // Материалы 3-й городской научно-практической конференции врачей г.Кемерово. Кемерово, 1970.-С.112-114.

75. Мурзабаев, Х.Х. Способ дозированной передачи кинетической энергии снаряда повреждаемым тканям / Х.Х. Мурзабаев, И.Г. Кашапов // Морфология. -2001. Т. 120, № 6. - С. 83-84.

76. Гистогенез и регенерация тканей. Труды ВМедА. Т.257. СПб., 2004. - С. 121-131.

77. Мяделец, О.Д. Основы частной гистологии / О.Д Мяделец М.: Медицинская книга. Н.Новгород: Изд. НГМА, 2002. - 373 с.

78. Мяделец, О.Д. Пролиферация, дифференцировка и апоптоз кератиноци-тов эпидермиса при посттравматической регенерации кожи у крыс с различнойреактивностью / О.Д. Мяделец // Онтогенез. 1995. - №1. - С. 54-61. »

79. Мяделец, О.Д. Функциональная морфология и общая патология кожи / О.Д. Мяделец, В.П. Адаскевич.//- Витебск, 1997. 269 с.

80. Ноздрин, В.И. Гистофармакологические исследования кожи: наш опыт./ В.И. Ноздрин.// -М.: Ретиноиды, 2006. 376с.

81. Ноздрин, В.И. Гистофизиология кожи. / В.И. Ноздрин, С.А. Барашкова, В.В Семченко //- Омск, 2008. 280 с.

82. Ноздрин, В.И. Влияние ретиноидов на эпителий кожи в эксперименте / В.И. Ноздрин// Альманах «Ретиноиды». М.: «Ретиноиды», 1997. - Вып. 5. - С. 65-69.

83. Ноздрин, В.И. Иммуноморфологические аспекты действия витамина А / В.И Ноздрин, В.М Земсков, Ю.Т Волков.// М.: «Ретиноиды», 2004. - 104 с.

84. Ноздрин, В.И. Кожа и ее производные / В.И Ноздрин, С.А Барашкова, В.В Семченко // Учебное пособие. Омск-Орел: Изд. Омск, 2005. - С. 192.

85. Ноздрин, В.И. Морфогенетические свойства ретиноидов / В.И. Ноздрин // Морфология, 1996. № 2. - С. 76.

86. Ноздрин, В.И. Морфогенетический аспект действия на кожу дегтя березового очищенного / В.И Ноздрин, Т.А Белоусова, А.С Кинзирский // Морфология. 2004. - Т. 126, № 5. - С. 56 - 60.

87. Ноздрин, В.И. Морфологические аспекты дерматотропного действия ме-тилурацила в условиях накожного применения / В.И Ноздрин, Т.А Белоусова, А.Н Яцковский // Морфология. 2002. - Т. 121, № 5. - С. 74-78.

88. Ноздрин, В.И. Фармакологические свойства биологически активных форм витамина А / В.И Ноздрин, Ю.Т Волков // Альманах «Ретиноиды». М.: Изд. ФНПП «Ретиноиды». - 1995. - Вып. 2. - С.12-35.

89. Ноздрин, В.И. Морфогенетический подход к лечению угрей ретиноидами / В.И Ноздрин, В.И Альбанова, Л.Н Сазыкина. М.: Изд. ЗАО ФНПП «Ретиноиды», 2005.-С. 127.

90. Одйнцова, И.А. Закономерности процессов регенерационного гистогенеза в кожно-мышечной ране // Анатомия и военная медицина. СПб.: ВМедА, 2003. -С. 41-43.

91. Одинцова, И.А. Гистологические критерии заживления кожно-мышечной раны в эксперименте / И.А. Одинцова // Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей. Труды ВМедА. Т.257. СПб., 2004.-С. 88-93.

92. Одинцова, И.А. Закономерности процессов регенерационного гистогенеза в кожно-мышечной ране / И.А. Одинцова // Анатомия и военная медицина. — СПб.: ВМеДА, 2003. С. 41-43.

93. Определение активности миелопероксидазы / Медицинские лабораторные технологии. Под ред А.И Карпищенко. — Спб.: «Интермедика», 1998. 300 с.

94. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, A.A. Иванов М.: Медицина, 1995. - 224 с.

95. Парамонов, Б.А. Современные возможности и перспективы развития методов восстановления кожного покрова у тяжелобольных: Ав-тореф. дис. д-ра мед. наук / Б.А. Парамонов СПб.: ВМедА, 1997. - 38с.

96. Парамонов, Б.А. Ожоги: Руководство для врачей / Б.А. Парамо нов, .Я.О. Порембский, В.Г. Яблонский. СПб.: СпецЛит, 2000. - 464 с.

97. Правоторов, Г.В. Гистофизиология органных макрофагов / Г.В. Правоторов, В.Д. Новиков. Новосибирск, 1996. - 118 с.

98. Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей / Под ред. М.И. Кузина, Б.М. Костюченка. -М.: Медицина, 1990. 591 с.

99. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва М., Медиа-Сфера, 2002.-305 с

100. Репин, B.C. Эмбриональная стволовая клетка / B.C. Репин // Успехи физиологических наук. 2001. - Т. 32, № 1. — С. 3 - 18.

101. Руководство по изучению кожного покрова млекопитающих / Под ред. В.Е. Соколова, Р.П. Женевской. -М.: Наука, 1988. 280 с.

102. Рябов, Г.А. Синдромы критических состояний / Г.А. Рябов — М.: Медицина, 1994.-368 с.

103. Саркисов, Д.С. Грануляционная ткань // БМЭ. -3-е изд. 1977. - Т. 6.-С. 1206-1211.

104. Саркисов, Д.С. Регенерация и ее клиническое значение. М.: Медицина, 1970. -284 с.

105. Семченко, В.В. Гистологическая техника / В.В Семченко, С.А Барашко-ва, В.И Ноздрин, В.Н Артемьев. Учебное пособие. - 3-е изд. доп. и перераб. -Омск, 2003.-152 с.

106. Сергеев, A.B. Влияние природных метаболитов витамина А и их 4-оксопроизводных на образование специфических цитотоксических Т-лимфоцитов /А.В Сергеев, Г.И Самохвалов, В.Р Еникеев//Вопр.мед.химии, 1983—№1.-С.76-81.

107. Серов, В.В. Воспаление / В.В. Серов, B.C. Пауков. М.: Медицина, 1995.-640 с.

108. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. -М.: Медицина, 1981.-312 с.

109. Сидорин, B.C. Патоморфология раневых инфекций: Пособие для врачей / B.C. Сидорин. СПб., 2002. - 47 с.

110. Скрипкин, Ю.К. Кожа орган иммунной системы / Ю.К Скрипкин, Е.М Лезвинская //Вестник дерматологии и венерологии, 1989. - № 10. - С. 14-18.

111. Сосудистый эндотелий / Под ред. В.В. Куприянова, И.И. Бобрика, Я.Л. Караганова. Киев: Здоров'я, 1986. — 248 с.

112. Спиричев, В.В. Биологическая роль жирорастворимых витаминов/ В.В

113. Спиричев, И.Я Конь //Итоги науки и техники. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1989. -№37.-С. 16-200.

114. Сухих, Т.Г. Мезенхимальные стволовые клетки / Т.Г. Сухих, В.В. Малайцев, И.М. Богданова, И.В. Дубровина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - Т. 133, №2.-С. 124-131.

115. Терских, В.В. Эпидермальные кератиноциты человека и животных: Проблемы культивирования и трансплантации /В.В. Терских, A.B.

116. Васильев. М.: Наука, 1995. - 104 с.

117. Упоров, A.B. Сравнительное изучение пролиферации (по выявлению антигена Ki-67) и активности ядрышковых организаторов клеток рака молочной железы/ А.В Упоров, Е.В Цырлина, К.М Пожарисский.// Вопросы онкологии. -СПБ, 1998.- Т. 44, N 3. С. 316-324.

118. Ушакова, Т.А. Глюкокортикостероиды при термической травме./Т.А. Ушакова, М.Г. Крутиков, Ю.И. Ларионов, B.C. Демидова, A.A. Алексе-ев//Российский медицинский журнал. 2009. - №2. - С. 17-20.

119. Фриденштейн, А.Я. Гистогенетические отношения между фибробласта-ми и гистиоцитами // Арх. анат. — 1974. Т. 6, вып.4. - С. 5-17.

120. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворного микроокружения./ А.Я Фриденштейн, ЕА. Лурия // М., 1980. - 216 с.

121. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворного микроокружения / А.Я. Фриденштейн. -М.: Медицина, 1980.

122. Хилова, Ю.К. Взаимодействия клеточных дифферонов при ре-генерационном гистогенезе соединительной ткани / Ю.К. Хилова // Гисто генез и регенерация. Л.: ВМедА, 1986. - С.73

123. Хилова, Ю.К. Междифферонная и внутридифферонная гетеро-морфия соединительной ткани кожи после огнестрельного повреждения / Ю.К. Хилова // Экспериментально-гистологический анализ соединитель ных тканей и крови. СПб.: ВМедА, 1999. - 78с.

124. Хилова, Ю.К. Отсроченная гибель клеток и парабиоз фиб-робластов; кожи после огнестрельного повреждения/Ю.К. Хилова//Гис тогенез и регенерация тканей:Мат.науч.конф.-СПб.:ВМедА,1995.-С.8-9.

125. Хилова, Ю.К. Кожа как орган иммунной системы / Ю.К. Хилова, Р.К. Данилов // Руководство по гистологии. Т.2. СПб.: СпецЛит, 2001. - С. 22-28.I

126. Хлопин, Н.Г. Общебиологические и экспериментальные основы гистологии. М.: 1946 . - 492 с.

127. Хрущов, Н.Г. Гистогенез соединительной ткани / Н.Г. Хрущов. М.:1. Наука, 1976.-118 с. »

128. Чепурненко, М.Н. Морфологическая характеристика каней кожи в реге-нерационном гистогенезе при механической травме в эксперименте: Автореф. дис. канд. биол. наук. — СПб., 2007. — 17 с.

129. Чертков, И.Л. Нормальное кроветворение: стволовая кроветворная клетка // Гематол. и трансфузол. 1993. — № 4. - С. 3-4.

130. Чумасов, Е.И. Изменения фибробластов грануляционной ткани при заживлении огнестрельных ран / Е.И. Чумасов, Г.А. Камков, В.М. Шипилов и др. //Военно-медицинский журнал. 1986. — № 4. - С. 16-19.

131. Шапошников, Ю.Г. Патогенез огнестрельных ран и принципы их хирургического лечения / Ю.Г. Шапошников, Б.Я. Рудаков // Хирургия. 1986. - № 6.-С. 7-13.

132. Щепеткин, И.А. Полипептидные факторы роста / И.А. Щепет-кин // Успехи современной биологии. 1994. — Т. 114, № 4. - С 454 - 466.

133. Шехтер, А.Б. Воспаление, адаптивная регенерация и дисрегенерация (анализ межклеточных взаимодействий) /А.Б. Шехтер, В. В. Серов // Архив патологии. 1991. - Т. 53, № 7. - С. 7-15.

134. Шубникова, Е.А. Эпителиальные ткани / Е.А. Шубникова. М.:Изд.1. МГУ, 1996.-250 с. »

135. Щелкунов, С.И. Основные принципы клеточной дифференцировки / С И. Щелкунов. М.: Медицина, 1977. - 255 с.

136. Щербаков, В.И. Макрофаги: новая функция росторегулирующая / В.И. Щербаков. - Успехи соврем, биол. - 1990. - Т. 111, № 9. - С. 106-119.

137. Юрина, H.A. Кожа и ее производные / H.A. Юрина, А.И. Радостина. — М.: Изд. РУДН, 1996. 58 с.

138. Юрина, H.A. Функциональная гетерогенность и взаимодействия клеток соединительной ткани / H.A. Юрина, А.И. Радостина. М.: Изд.РУДН, 1990. - 226 с.

139. Afanasyev Yu.I. The influence of retinoid acid on blood erythrocyte and Leukocyte aggregation / Yu.I. Afanasyev, O.I. Mikhailov, V.l. Nozdrin. et al // In: Immunol. Abstracts, 1987. -V. 12, N4. P. 51.

140. Allen J. Physicochemical characterization and differentiation of the components of the cutaneous basement membrane zone / J.Allen, K. Schömberg, F. Wojna-rowska // Brit. J. Dermatol. 1997. - Vol. 137, No.6. - P. 907 - 915.

141. Anderson G.G. Determining tissue of origin for metastatic cancers: metaanalysis and literature review of immunohistochemistiy performance / G.G. Anderson, L.M. Weiss,// Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2010. - V. 18, N1. - P.3-8.

142. Astaldi M. The glycogen content of the cells of lymphatic leukemia./ M. Astaldi, L. Verga. // Acta haematol. 1957. Vol. 17, № 3. - P. 129-136.

143. Bagnato A. Identification of the ET (A) receptor that mediate endotelin induced autocrin proliferation of normal human keratinocyres /А. Bagnato, A. Venuti, V. Dicastro // Biochem. Res. Communic. 1995. - Vol. 209, No. 1. - P. 80 - 86

144. Barnett J.B. Evaluating macrophages in immunotoxicity testing / J.B. Barnett, K.M. Brundage.// Methods Mol Biol. 2010. - V.598. - P.75-94.

145. Beer H. Expression and function of keratinocyte growth factor and activin in skin morphogenesis and cutaneous wound repair / H. Beer, M. Gass-mann, B. Munz et al. // J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2000. - V. 5, № 1 .-P. 34-39.

146. Bertelli A. Wound healing: the present and the future development of the research // Int. J. Tissue React. 1988. - Vol. 10, No.6. - P. 387 - 388.

147. Beyer T. Fibroblast growth factor 22 and its potential role during skin development and.repair / T. Beyer, S. Werner, C. Dickson, R. Grose // Exp.Cell. Res. 2003. - V. 287, № 2. - P. 228 - 236.

148. Bilbo P. Epidermal migration studies with a living skin eguivatent / P. Bilbo, G. Gree, H. Hastings // J. Cell. Biol. 1990. - Vol. Ill, №5, pt 2. - P. 441.

149. Bickenbach J. Identification and selection of epidermal stem cells / J. Bickenbach, D. Roop // J. Invest. Dermatol. 1996. - V. 106. - P. 806.

150. Bobrow M. Catalyzed reporter deposition, a novel method of signal amplification : Amplication to immunoassays / M. Bobrow // J. Immunol. Meth.-1989.-Vol.l25.-P.279-285.

151. Bone R.C. Immunologic dissonance: a continuing evolution in our understanding of the systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and multiple organ dysfunction syndrome (MODS) / R.C. Bone // Ann. Intern. Med. 1996. - V.125, N 8. -P. 680-687.

152. Bone R.C. Sepsis, the sepsis syndrome, multi-organ failure: a plain for comparable definitions / R.C. Bone // Ann. Internet, med. 1991. -V. 114, N 4. - P. 332333.

153. Bone R.C. The sepsis syndrome. Definition and general approach to management/R.C. Bone // Clin. Chest. Med. 1996. -V.17, N2. - P. 175-181.

154. Botchkarev V. Hair cycle dependent plasticity of skin and hair fol licle innervation in normal murine skin / V. Botchkarev, S. Eichmuller, S. Jo hansson, R. Paus // J. Сотр. Neurol. 1997. - V. 386. - P. 379 - 395.

155. Braun-Falco M. Molecular diagnosis in dermatopathology: what makes sense, and what doesn't / M. Braun-Falco, W. Schempp, W. Weyers, // Exp Dermatol. — 2009.-V. 18, N1.-P. 12-23.

156. Braverman I.M. The cutaneus microcirculation: ultrastructure and microana-tomical organization / I.M. Braverman // Microcirculation 1997. Vol. 4, No.3. — P. 329 - 340.

157. Burt С Injuiy visits to hospital emergency department: United States, 19921995 / C. Burt//Vital. Health. Stat. 1998. -V. 131.-P. 1 -76.

158. Carlson B.M.: Карлсон Б.М. Регенерация: пер. с англ. -М.: Наука, 1986. -212с.

159. Chakraborty P. G-protein-mediated signaling and its control in macrophages and mammalian cells / P. Chakraborty.// Crit. Rev. Microbiol. 2001.- Vol .27,№ l.-P . 1-8.

160. Chandler L. Matrix-enabled gene transfer for cutaneous wound re pair / L. Chandler, D. Gu, C. Ma // Wound Repair Regen. 2000. - V. 8, №> 6. - P. 473 - 479

161. Chedid M. Regulation of keratinocyte growt factor gene expression by interleukin 1/ M .Chedid, J.S. Rubin, K.G. Csaky, S.A. Aoronson. // J. Biol. Chem., 1994, i

162. Apr. 8; 269(14). P. 10753-10757.

163. Chen B. Localization and regulation of pregnancy-associated plasma protein a expression in healing human skin / B. Chen, K. Leiferman, M. Pittelk./Clin.EndocrinolMetab-2003.-.88. №9. P. 4465 4471.

164. Clark R.A. Regulation of fibroplasia in cutaneous wound repair /R.A.Clark //Am. J. Med. Sci. 1993. - Vol. 306, № 1. - P. 42-48.

165. Clark B. Biology of bone marrow stroma / B. Clark, A. Keating // Ann. NY Acad. Sci. 1995. - V. 29. - P. 70 - 7

166. Costarelis G. Label-retaing cells reside in the bulge area of pilose-baceous unit: Implication for follicular stem cells, hair cycle and skin carcinogenesis / G. Costarelis, T. Sun, R. Lavker // Cell. 1990. - V. 61. - P. 1329 -1337.

167. Curti A. Dendritic cell differentiation from hematopoietic CD34+ progenitor cells /A. Curti, M. Fogli, M. Ratta, G. Biasco, S. Tura, R.M. Lemoli // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. 2001. - Vol. 15, № 7; -P, 49-52.

168. Danilenko D. Preclinical and early clinical development of kerati nocyte growth factor, an epithelial-specific tissue growth factor / D. Danilenko // Toxicol. Pathol. 1999. - V. 27, № 1. - P. 64 - 71.

169. Dang C. Decreased expression of fibroblast and keratinocyte growth factor isoforms and receptors during scarless repair / C. Dang, S. Beanes, C. Soo et al. //Plast. Reconstr. Surg. 2003. - V. Ill, № 6. - P. 1969 - 1979

170. Desborough J.P. The stress response to trauma and surgery/ J.P. Desborough // Br.J.Anaesth. 2000. - V.85. - P. 109-117.

171. Descamps V. Skin an ideal target for gene therapy /V. Descamps // Presse medicale. - 1995. - Vol. 24, No.19. - 882 - 884.

172. Detmar M. Keratinocytederived vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) is a potent mitogen for dermal microvascular endothelial cells / M. Detmar, K.T. Yeo, J.A. Nagy // J. Invest Dermatol. 1995. - Vol. 105, No. 1. - P. 44-50.

173. Eckert R. Molecular biology of keratinocyte differentiation / R. Eckert, E. Rorke. // Environ. Health. Perspect. 1989, № 80. - P. 109-116.

174. Eckert R. The epidermis: genesis on genesis off / R. Eckert, J. Crish, E. Banks, J. Welter // J. Invest. Dermatol. - 1997. - V. 109. - P. 501 -509.

175. Eyden В. Electron microscopy in the study of myofibroblastic le sions / B. Eyden // Semin. Diagn. Pathol. 2003. - V. 20, № 1 . - P. 13 - 24.

176. Escribano L.M. Endogenous peroxidase activity in human cutaneus and adenoidal mast cells /L.M. Escribano // J. Histochem. Cytochem.-1987.-Vol.35.-P.213-220.

177. Finger E. Кожа как защитный орган // Wien klin. Woch. — №14. P. 1927 Цит по ж. «Врачебное дело. - Харьков, 1927. - № 14 - 15. - С. 1101.»

178. Flaig M.J. Immunohistochemical and molecular-pathologic investigations in dermatohistology / M.J. Flaig, U. Puchta, C.A. Sander// Hautarzt. 2007. - V. 58, N9. -P.753-759.

179. Fontana A. Interleukin 1/ A. Fontana, St. Bodmer, H. Frei // Schweiz. med. Wochenscher. 1985. -Vol. 115, №41.-P. 1424-1428.

180. Froidevaux C. Macrophage migration inhibitory factor and innate immune resposes to bacterial infections /С. Froidevaux, T. Roger, C. Martin, M.P. Glauser, T. Calandra. // Crit. care med. 2001. - Vol. 29, № 7 (Suppl).-P. 13-15.

181. Fuchs E. Regulation of terminal differentiation of cultured human keratinocytes by vitamin A / E. Fuchs, H. Green // Cell 1981. - Vol. 25, No.3. - P. - 617 -625.

182. Galkowska H. Expression of apoptosis- and cell cycle-related pro teins in epidermis of venous leg and diabetic foot ulcers / H. Galkowska, W. 01-szewsk, U. Wojewodzka et al. // Surgery. 2003.-V. 134, № 2.-P. 213-220.

183. Gejer G. / Гайер Г. Электронная гистохимия М.: Изд-во "Мир", 1974. -287 с.

184. Giguere V Identification of a receptor for the morfogen retinoic acid / V. Gi-guere, E.S. Ong, P. Segui//Nature, 1987. -V. 330. P. 624.

185. Goldberg A. Acid Phosphatase activity in human blood cells./A Goldberg, T.Barka // Nature. 1962. - Vol. 195. - p. 287-299.

186. Grando S. Biological functions of keratinocyte cholinergic recep tors / S. Grando //J. Investig. Dermatol.Symp.Proc.-1997.-V. 2,№ 1.-P.41 -48.

187. Grazul-Bilska A. Wound healing. The role of growth factors / A. Grazul-Bilska, M. Johnson, J. Bilski et al. // Drugs Today (Bare). 2003. - V. 39, № 10. - P. 787-800.

188. Grechem-Knolli. Определение активности миелопероксидазы // В кн.: Справочник. Медицинские лабораторные технологии. Т. l./Под ред. А.И. Карпи-щенко. СПб.: "Интермедика", 1998. - С. 300.

189. Grizzle W.E. Special symposium: fixation and tissue processing models /W.E Grizzle // Biotech Histochem. 2009. - V.84, N5. - P. 185-193.

190. Haake A.R. Cell death by apoptosis in epidermal biology / A.R. Haake, R.R. Polakowska. //J. Invest Dermatol. 1993. - Vol. 101, No.2. - P. 107 - 112.

191. Hamamoto T. Immunohistochemical analysis of cyclooxygenase-2 induction during wound healing in dog skin/ T.Hamamoto, A. Yabuki., O. Yamato // Res Vet Sci. 2009. - V.87, N3. - P.349-354.

192. Hashimoto K. Regulation of keratinocyte function by growth fac »tors / K. Hashimoto // J. Dermatol. Sci. 2000. - V. 24, Suppl. 1. - P. 46 - 50.

193. Но Т., Byrne P.J. Evaluation and initial management of the patient with facial skin cancer // Facial Plast Surg Clin North Am. 2009. - V. 17, N3. - P. 301-307.

194. Hoppe H.J. Collectins soluble proteins containing collagenous regions and lectin domains - and their roles in innate immunity/ H.J. Hoppe, K.V. Reid // Protein Sci. - 1994. - V. 3, N 8. - P. 1143-1158.

195. Higham M. Development of a stable chemically defined surface for the culture of human keratinocytes under serum-free conditions for clinicaluse / M. Higham, R. Dawson, M. Szabo et al. // Tissue Eng. 2003. - V. 9, № »5. P. 919-930.

196. Hubner G. Strong induction of acivin expression after injury suggests an important-role of activin in wound repair/ G. Hubner, Q. ITu, H .Smola , S. Werner// Dev. Biol. 1996. - Vol. 173, № 2. - P. 490-498.

197. Huuhtanen R.L. Comparison of the Ki-67 score and S-phase fraction as prognostic variables in soft-tissue sarcoma / R.L. Huuhtanen, C.P. Blomqvist, T.A. Wik-lund.// Br J Cancer. 1999. - V. 79, N 5/6. - P. 945-951.

198. Ikai K. Immunohistochemical localization of lipocortins in normal and psoriatic human skin / K. Ikai, Shimizu, Ando // Arch. Dermatol. Res. 1993. - Vol. 285, No.5.-P. 296-299.

199. Jeh J. Effect of hypophysectomy on the proliferation differentiation of rats bone marrow stromal cells / J. Jeh, J. Evans, M. Chen, J. Aloia // Amer. J. Physiol. 1999. - V. 276, N 1. - P. 34 - 42.

200. Jetten A. Epidermal differentiation and squamous metaplasia: from stem cell to cell death / A. Jetten, L. Beth // J. Dermatol. 1997. - V. 24. - P. 711 -725.

201. Julliet D. Mechanics and regulation of keratinocyte migration / D .Julliet, Y. Sarret, C. Sfamm // Med. Scien. 1993. - Vol.9, No.4. - P. 403 -411.

202. Karr Y.: Kapp Я. Макрофаги: Обзор ультраструктуры и функции: пер. с англ. -М.: Медицина, 1978. 188 с.

203. Kautsky M. Retinoic acid regulates oral epithelial differentiation by two mechanisms/ M. Kautsky, P. Fleckman, B.A. Dale // J. Invest. Dermatol, 1995. -104, N2. -P. 224-230.'

204. Kohler G. Continious cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity/ G .Kohler, C. Milstein // Nature. 1975. - V. 256. - P. 495-497.

205. Kopan R. The use of retinoic acid to probe the relation between hyperprolife-ration- associated keratins and cell proliferation in normal and malignant epidermal cells / R. Kopan, E. Fuchs // J. Cell Biol. 1989. - Vol. 109, No. 1. - P. 295 - 307.

206. Kopan R. Retinoids as important regulations of terminal didderentiation: examination keratin in individual epidermal cells at various stages of keratinization/ R. Kopan, G. Traska, E. Fuchs. // J. Cell Biol. 1987. - Vol. 105, No.l. - P. 427 - 440.

207. Kost G.J. New whole blood and their impact on cardiac an critical care / G.J. Kost // Crit Rev Clin Lab Sci. 1993. - V. 30. - P. 153-202.

208. Kuznetsov S. Circulating skeletal stem cells / S. Kuznetsov, M. Mankani, S. Gronthos et-al. // J. Cell Biol. 2001. - V. 153, N5.-P. 1133 -1139.

209. Lansdown A. Calcium: a potential central regulator in wound healing in the skin / A. Lansdown // Wound Repair Regen. 2002. - V. 10, №5.-P. 271-285

210. Lee D.A. Nonmelanoma skin cancer / D.A. Lee, SJ. Miller // Facial Plast Surg Clin North Am. 2009. - V.17, N3. - P. 309-324.

211. Leslie C.C. Production of growth factor activity for fibroblasts by human monocyte-derived macrophages / C.C. Leslie, R.A. Musson, D.M. Henson // J. Leu-kocyt. Biol. 1984. - Vol. 36. - P. 143-159.

212. Li J. Angiogenesis in wound repair: angiogenic growth factors and the extracellular matrix / J. Li, Y. Zhang, R. Kirsner // Microsc. Res. Tech. -2003.-V. 6, №1.- P. 107- 114

213. Lush C.W. Microvascular dysfunction in sepsis / C.W. Lush, P.R. Kvietys // Microcirculation. 2000. - V.7. - P.83-101.

214. Marcs S. C. Bone cell biology: the regulation of development, structure and function in the skeleton / S. C. Marcs, S. N. Popoff. // Am. J. Anat. 1988. - V. 183, N 1.-P.1-44.

215. Marcs V. Differential diagnosis by laboratory medicine / V. Marcs //2002 Springer Verlag pp. 234 240.

216. Martin P. Wound healing aiming for perfect skin regeneration / P. Martin // Science. - 1997. - V. 276. - P. 75 - 81.

217. Martines-Romares L. Macrophage membrane molecules: markers of tissue differentiation and heterogeneity / L. Martines-Romares, N. Piatt, A. McKnight et al. // Immunology. 1996. - V. 195. - P. 407 - 416.

218. McCauley R. Differential inhibition of human basal keratinocyte growth to silver sulfadiazine and mafenide acetate / R. McCauley, Y. Li, B. Poole et al. // Surg. Res. 1992. - V. 52, № 3. - P. 276 - 285.

219. McPherson J.M. The utility of collagen-based vehicles in delivery of growth factors for hard and soft tissue wound repair/ J.M. McPherson // Clin. Mater. 1992. -Vol. 9, №3-4.-P. 225-234.

220. Mitev V. Signal transduction in keratinocytes / V. Mitev, L. Miteva // Exp. Dermatol. 1999. - V. 8, № 2. - P. 96 -108

221. Montagna W. The structure and function of skin. Second edition/ W. Montag-na // New York London: Academ. Press, 1962. - 454 p.

222. Moriguchi S. High dietary vitamin A (retinol palmitate) and cellular immune functions in mice /S. Moriguchi, L. Werner, R.R. Watson.// Immunology, 1985. V. 56.-P. 169-177.

223. Movat H. The inflammatory reaction / H. Movat // Amsterdam New York -Oxford - Elsevier. - 1985. - 365 p.

224. Münz B. Differential expression of the calpactin I subunits annexin II and pi 1 in cultured keratinocytes and during wound repair / B. Münz, V. Gerke, Gillitzer, S. Werner // J. Invest. Dermatol. 1997. - V. 108, № 3. -P. 307-312.

225. Nussbaum E.L. Effects of low intensity laser irradiation during healing of skin lesions in the rat / E.L. Nussbaum, T. Mazzulli, K.P. Pritzker. et al. // Lasers Surg Med. 2009. - V.41, N5. - P.372-381.

226. Oike Y. Angiopoietin-related growth factor (AGF) promotes epi dermal proliferation, remodeling, and regeneration / Y. Oike, K. Yasunaga, Y. Ito et al. // Proc. Natl. Acad. Sei USA. 2003. - V. 100, № 16. - P. 9494 -9499.

227. Perkins W. The effect of treatment with 13-cis-etinoic acid on the metabolic burst of peripheral blood neutrophils from patients with acne./ W. Perkins, K.V. Crocket, M.B Hodgins // Br. J. Dermatol., 1991. Vol. 124, №5. P. 429 432.

228. Personelle J. Injection of all-trans retinoic cid for treatment of thin wrinkles/J. Personelle, S. De-Campos, R. Ruiz, de O. et al // Aestetic Plast Surg. 1997. - Vol. 21, No.3. - P. 196-204.

229. Raife T. Keratinocyte-specific expression of human thrombomodulin in transgenic mice: effects on epidermal differentiation and cutaneous wound healing / T. Raife, D. Lager, J. Peterson et al. //J. Investig. Med. -1998.-V. 46,№4.-P. 127- 133.

230. Rixen D. "Sepsis/SIRS," physiologic classification, severity stratification, elation to cytokine elaboration and outcome prediction in posttrauma critical llness / D. Rixen, J.H. Siegel, H.P. Friedman // J. Trauma. 1996. - V. 41, N 4. - P. 581-598. .

231. Salamon G.D. The local effects of Ca-hectin/Tumor Necrosis Factor on Wound Heoling/ G.D. Salamon, A. Kasid, D.T. Cromack .// Ann. Surg. 1991.-Vol. 214, №2.-P. 175-180.

232. Scapini P. The neutrophil as a cellular source of chemokines / P. Scapini, J.A. Lapinet-Vera, S. Gasperini, F. Calzetti, M. Cassatella. // Immu- nol.Rev.-2000.-Vol. 177.P. 195-203.

233. Schmid P. TGF-beta s and TGF-beta type II receptor in human epi dermis: differential expression in acute and chronic skin wounds / P. Schmid, D. Cox, G. Bilbeetal.//J.Pathol. -1993.-V. 171, № 3. P, 191 - 197.

234. Schneider T. Measuring stem cell frequency in epidermis: a quan titative in vivo functional assay for long-term repopulating cells / T. Schneider, C. Barland, A. Alex et al. // Proc. Natl .Acad. Sci. USA. 2003. - V. 100, № 20.- P. 11412-11417.

235. Tenaud I. In vitro modulation of keratinocyte wound healing in-tegrins by zinc, copper and manganese / I. Tenaud, I. Sainte-Marie, O. Jumbou et al. // Br. J. Dermatol. 1999. - V. 140, № 1. - p. 26 - 34.

236. Tonnesen M. Angiogenesis in wound healing / M. Tonnesen, X. Feng, R. Clark// J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2000. - V. 5, № 1. - P. 40 - 46.

237. Turnbull A.V. Regulation of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis by cytokines: actions and mechanism of action. /A.V. Turnbull, C.L. Rivier //Physiol Rev. 79 (1): 1-71. PMID 9922367.

238. Voel G. Fly development genes lead to immune find / G. Voel // Science. -1998. V.281. - P. 1942-1944.

239. Waikel R. Deregulated expression of c-Myc depletes epidermal stem cells / R. Waikel, Y. Kawachi, P. Waikel et al.// Nat. Genet. 2001. - V. 8, №2.- P. 165- 168.

240. Waldorf H. Wound healing / H. Waldorf, J. Fewkes // Adv. Dermatol.-1995.-V. 10.-P. 77-96.

241. Wasserman J. Update on mmunohistochemical methods relevant to dermato-pathology /J. Wasserman, J. Maddox, M. Racz, V. Petronic-Rosic // Arch Pathol Lab. -2009.-V. 133, N7.-P. 1053-1061.

242. Watt F. Epidermal stem cells: markers, patterning and the control of stem cell fate / F. Watt // Philos. Trans. R. Soc. Lond. Biol. Sci. 1998. - V. 353, № 1370.-P. 831-837

243. Werner S. Paracrine regulation of keratinocyte proliferation and differentiatoin / S. Werner, H. Smola // Trends.Cell Biol. 2001. - V. 11, № 4. -P. 143 - 146.

244. Wu L. Keratinocyte growth factor induces granulation tissue in ischemic dermal wounds. Importance of epithelial-mesenchymal cell interac tions / L. Wu, G. Pierce, R. Galiano, T. Mustoe // Arch.Surg. -1996. V. 131, № 6. - P. 660 - 666.

245. Zhang G.J. Apoptotic index correlates to bcl-2 and p53 protein expression, histological grade and prognosis in invasive breast cancers /G.J Zhang, I Kimijima, R Abe. et al // Anticancer Res. 1998. - V. 18. - P. 1989-1998.

Информация о работе

Ланичева, Альбина Хамитовна
кандидата медицинских наук
Тюмень, 2010
ВАК 03.03.04

Диссертация

Репаративная регенерация кожи после механической травмы и способы ее коррекции (экспериментальное исследование) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы