Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Регуляция биосинтеза лимфотоксинов α и β в клетках периферической крови и в перевиваемых культурах Т-лимфоцитов человека

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бойченко, Вероника Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

РЕГУЛЯЦИЯ БИОСИНТЕЗА ЛИМФОТОКСИНОВ.

1.1. Биосинтез растворимого и мембрано-связанного лимфотоксинов при активации лимфоцитов и природных киллеров.

1.2. Факторы транскрипции, участвующие в регуляции синтеза лимфотоксинов в покоящихся и активированных лимфоцитах.

1.3. Иммуносупрессант CsA - регулятор внутриклеточной передачи сигнала и экспрессии генов в лимфоцитах.

1.4. Генетическая инактивация лимфотоксинов или их рецепторов приводит к нарушению структуры и функции вторичных лимфоидных тканей.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Регуляция биосинтеза лимфотоксинов α и β в клетках периферической крови и в перевиваемых культурах Т-лимфоцитов человека"

Лимфотоксины занимают особое место в семействе фактора некроза опухолей (TNF) (Locksley et al., 2001). Родоначальник семейства, TNF, был впервые охарактеризован в 1975 г. в качестве фактора, вызывающего некроз эпителиальных опухолей (Carswell et al., 1975), и клонирован в 1984 году (Pennica et al., 1984). Лимфотоксин-альфа (LTa) был впервые охарактеризован как цитотоксический фактор Т-лимфоцитов более 30 лет назад (Ruddle and Waksman, 1967; Kolb and Granger, 1968), однако близкое родство двух белков выяснилось только в 1984 г, после клонирования (одновременно с TNF) кДНК лимфотоксина (Gray et al., 1984; Aggarwal et al., 1985; Pennica et al., 1984; Aggarwal et al., 1984). До открытия LTp в 1993 г (Browning et al., 1993) LTa считали функциональным гомологом TNF и называли TNF(3. Подобно растворимой форме TNF, не имеющий трансмембранного домена LTa играет важную роль в клеточном иммунном ответе, воспалительных реакциях (Ruddle et al., 1987; Sacca et al., 1995; Kratz et al., 1996), а также, возможно, в синдроме септического шока (Sriskandan et al., 1996). Было обнаружено, что LTa способен привлекать нейтрофилы в очаг респираторного воспаления, индуцировать фагоцитоз, и обладает способностью индуцировать защиту от микроорганизмов, таких как Plasmodium falciparum, Haemophilus influenzae, Mycobacterium tuberculosis (Zhang et al., 1992; Tan et al., 1995; Smith et al., 1994; Gruss, 1996; Orlinick and Chao, 1998; Roach etal., 2001). В настоящее время показано, что, по крайней мере частично, провоспалительную роль LTa можно объяснить тем, что он вызывает активацию некоторых хемокинов (RANTES, IP-10, МСР-1, BLC, SLC, ELC) и молекул клеточной адгезии (VCAM, ICAM, E-selectin, MAdCAM-1) в эндотелиальных клетках (Cuff et al., 1999b; Cuff et al., 1998a; Ngo et al., 1999a; Hjelmstrom et al., 2000; Luther et al., 2000). Основной биологической функцией LTp является запуск развития лимфоидных тканей в эмбриогенезе и регуляция формирования структур, ответственных за созревание первичного и вторичного гуморального ответа у взрослых мышей (Chaplin and Fu, 1998; Ngo et al., 1999a), имеются также данные об особой роли LTa в этих процессах (Cuff et al., 1999b).

Два гена лимфотоксина, LTa и LTP, находятся на небольшом расстоянии друг от друга и от гена TNF в составе генов главного комплекса гистосовместимости (МНС) на хромосоме 6 человека (Рис. 1А) и хромосоме 17 мыши (Nedospasov et al., 1986) (Kuprash et al., 1994; Nedospasov et al., 1986; Browning et al., 1993; Lawton et al., 1995). В отличие от остальных цитокинов семейства TNF, которые представляют собой трансмембранные гликопротеины II типа (Locksley et al., 2001), LTa не имеет трансмембранного домена. Подобно другим членам семейства, функционирующим в виде тримеров, LTa входит в состав трех различных комплексов: растворимого LTa3, взаимодействущего с обоими рецепторами TNF (TNFRp55 и TNFRp75), и двух мембрано-связанных - основного, LTaiP2, взаимодействующего со специфическим LT(3R, и минорного, LTa2pi, взаимодействующего, вероятно, с TNFRp55 (Androlewicz et al., 1992; Browning et al., 1995; Browning et al., 1997). Недавно было показано, что растворимый гомотример LTa3 взаимодействует также с рецептором HVEM (Mauri et al., 1998). Взаимодействие лигандов, образуемых продуктами генов лимфотоксинов, с различными рецепторами семейства TNF схематически представлено на РисЛВ. Основным источником лимфотоксинов являются Т-, В- лимфоциты и природные киллеры (Ruddle, 1992; Ware et al., 1995), хотя другие клетки также могут экспрессировать лимфотоксины. В настоящее время механизмы внутриклеточной регуляции экспрессии лимфотоксина изучены А

LT(3 TNFa LTa

I 11 И-d-H-ffl—CM-o

1 kb В

Эффекторная клетка i.I I I

TNFa

LTa3 LTa,p2

GHT LTa2pj

TNFRp75

A * *

TNFRp55

LTpR

4 HVEM

Клетка-мишень

Рис. 1. А. Структура локуса TNF человека. В. Взаимодействие некоторых лигандов и рецепторов семейства TNF. недостаточно. В литературе описаны результаты опытов in vitro по регуляции промоторов обоих генов (Kuprash et al., 1996; Worm and Geha, 1994; Worm et al., 1998). Показано, что форболовые эфиры активируют экспрессию поверхностного и секретируемого лимфотоксина в перевиваемых клеточных линиях и первичных клетках человека и мыши, что предполагает участие в активации экспрессии лимфотоксинов РКС (Ferreri et al., 1992; Millet and Ruddle, 1994; Paul et al., 1990; Pauletal., 1993; Androlewicz et al., 1992; Browning et al., 1995; Browning et al., 1997; Ware et al., 1992; Liu and Heckman, 1998). Экспрессия лимфотоксинов активируется в ТЫ лимфоцитах и NK-клетках вместе с другими цитокинами раннего иммунного ответа, такими, как IL-2, у-интерферон, что свидетельствует об их важной роли в регуляции иммунных процессов организма человека и мыши.

Одним из подходов к изучению регуляции биосинтеза цитокинов в лимфоцитах представляется применение форболовых эфиров совместно с кальциевыми ионофорами для активации клеток. Такая активация имитирует взаимодействие комплекса Т- или В-клеточного рецептора лимфоцитов с антигеном, представленным в комплексе с МНС антигенпрезентирующими клетками. Данная работа представляет собой использование такой системы в изучении биосинтеза лимфотоксинов. LTa и LTp при активации форболовым эфиром совместно с кальциевым ионофором, либо антителами к CD3 совместно с антителами к CD28, образуют основной LTP2ai и минорный LTPia2 гетеротри мерные комплексы на поверхности лимфоцитов и NK-клеток человека, а также секретируют ЦГаз (Browning et al., 1995; Browning et al., 1997). В данной работе мы исследовали координацию экспрессии генов LTa и LTp, образующих эти функционально различные комплексы, в клетках периферической крови человека и в перевиваемых культурах Т-лимфоцитов, а также влияние иммуносупрессанта CsA на биосинтез белков LTa и LTp.

Работа была выполнена в 1996-2001 годах в Лаборатории молекулярной иммунологии Института молекулярной биологии им. В.А.Энгельгардта РАН и в Лаборатории молекулярной иммунологии Института физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ; часть экспериментов была выполнена в Отделе молекулярной биологии Института биологии клетки Университета г. Тюбинген, Германия. Финансирование осуществлялось в рамках Российской государственной программы «Геном человека» и гранта фонда «Фольксваген», Германия.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Бойченко, Вероника Евгеньевна

выводы

1. Лимфотоксин Р синтезируется конститутивно в клетках периферической крови, в то время как в перевиваемых культурах Т-лимфоцитов его экспрессия является активируемой.

2. Во всех исследованных клетках биосинтез лимфотоксина а является активируемым. Тем самым активация экспрессии LTa представляет собой критическую стадию формирования всех известных форм лимфотоксиновых лигандов.

3. Иммуносупрессант CsA ингибирует активируемую комбинацией РМА и иономицина экспрессию LTa как на уровне транскрипции, так и на уровне синтеза белка, но не влияет на экспрессию LTp.

4. Обнаружено два транскрипта гена лимфотоксина Р человека во всех исследованных типах экспрессирующих LTp клеток. Продукт альтернативного сплайсинга кодирует биологически неактивный укороченный вариант LTp. Регуляция альтернативного сплайсинга LTP в периферических лимфоцитах человека зависит от синтеза белка de novo.

5. Получена и охарактеризована панель высокоспецифических антисывороток против лимфотоксинов человека и мыши, способных детектировать экспрессию лимфотоксинов а и Р в эукариотических клетках.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает свою искреннюю признательность Сергею Артуровичу Недоспасову за постановку задачи, постоянное внимание и заботу о выполнении и оформлении настоящей работы, ценные обсуждения результатов, а также за предоставление всех возможных условий для её успешного выполнения.

Я благодарю Дмитрия Владимировича Купраша за повседневную помощь в освоении компьютерных программ, ценные технические рекомендации по выполнению экспериментов, помощь в подготовке текстов научных работ к печати и обсуждение полученных результатов.

Я выражаю свою глубокую и искреннюю признательность Марии Андреевне Лагарьковой за дружеское участие и удовольствие, которое неизменно приносила наша совместная экспериментальная деятельность по поиску новых раковых антигенов, а также за первое прочтение и ценные замечания, высказанные по содержанию диссертации.

Я благодарю Альфреда Нордхейма за заботу и теплый прием в его институте в г. Тюбинген, ценные обсуждения и помощь в интерпретации полученных результатов.

Я благодарю Андреаса Рюльмана за дружеское участие и интерес к данной работе, обсуждения результатов и обучение некоторым методикам.

Я благодарю Регину Лазаревну Турецкую за ценные научные обсуждения, моральную поддержку и организационную помощь.

Я выражаю свою искреннюю признательность Нэнси Райе, Джеффри Браунингу, Владимиру Сергеевичу Прасолову, Вячеславу Григорьевичу Коробко предоставившим уникальные реагенты для выполнения данной работы.

Отдельное спасибо Рафаелу Шаэновичу Казаряну за организационную помощь.

Я благодарна сотрудникам, аспирантам и студентам Лаборатории молекулярной иммунологии: Алексею Туманову, Екатерине Королевой, Станиславу Рыбцову,Ульяне Кашкаровой, Анатолию Рубцову, и Екатерине Васиной за приятную и дружескую атмосферу в лаборатории.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бойченко, Вероника Евгеньевна, Москва

1. Aggarwal, В.В., Henzel, W.J., Moffat, В., Kohr, W.J., and Harkins, R.N. (1985). Primary structure of human lymphotoxin derived from 1788 lymphoblastoid cell line. J.Biol.Chem. 260, 2334-2344.

2. Aggarwal, B.B., Moffat, В., and Harkins, R.N. (1984). Human lymphotoxin. Production by a lymphoblastoid cell line, purification, and initial characterization. J Biol Chem 259, 686-691.

3. Aggarwal, B.B. and Natarajan, K. (1996). Tumor necrosis factors: developments during the last decade. Eur.Cytokine.Netw. 7, 93-124.

4. Androlewicz, M.J., Browning, J.L., and Ware, C.F. (1992). Lymphotoxin is expressed as a heteromeric complex with a distinct 33-kDa glycoprotein on the surface of an activated human T cell hybridoma. J.Biol.Chem. 267, 2542-2547.

5. Aoki, Y. and Kao, P.N. (1997). Cyclosporin A-sensitive calcium signaling represses NFkappaB activation in human bronchial epithelial cells and enhances NFkappaB activation in Jurkat T-cells. Biochem Biophys Res Commun 234, 424-431.

6. Azam, M., Lee, C., Strehlow, I., and Schindler, C. (1997). Functionally distinct isoforms of STAT5 are generated by protein processing. Immunity 6, 691 -701.

7. Baeuerle, P.A. and Henkel, T. (1994). Function and activation of NF-kappa В in the immune system. Annu.Rev.Immunol. 12, 141-179.

8. Baggiolini, M. (1998). Chemokines and leukocyte traffic. Nature 392, 565-568.

9. Baggiolini, M., Dewald, В., and Moser, B. (1997). Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol 15, 675-705.

10. Baldwin, A.S., Jr. (1996). The NF-kappa В and I kappa В proteins: new discoveries and insights. Annu.Rev.Immunol. 14,649-83.

11. Barton, K., Muthusamy, N., Fischer, C., Ting, C.N., Walunas, T.L., Lanier, L.L., and Leiden, J.M. (1998). The Ets-1 transcription factor is required for the development of natural killer cells in mice. Immunity. 9, 555-563.

12. Bassuk, A.G. and Leiden, J.M. (1997). The role of Ets transcription factors in the development and function of the mammalian immune system. Adv Immunol 64, 65-104.

13. Bierer, B.E., Somers, P.K., Wandless, T.J., Burakoff, S.J., and Schreiber, S.L. (1990). Probing immunosuppressant action with a nonnatural immunophilin ligand. Science 250, 556-559.

14. Boothby, M.R., Mora, A.L., Scherer, D.C., Brockman, J.A., and Ballard, D.W. (1997). Perturbation of the T lymphocyte lineage in transgenic mice expressing a constitutive repressor of nuclear factor (NF)-kappaB. J Exp Med 185, 1897-1907.

15. Borel, J.F., Feurer, C., Gubler, H.U., and Stahelin, H. (1994). Biological effects of cyclosporin A: a new antilymphocytic agent. 1976 classical article. Agents Actions 43, 179-186.

16. Browning, J.L., Androlewicz, M.J., and Ware, C.F. (1991). Lymphotoxin and an associated 33-kDa glycoprotein are expressed on the surface of an activated human T cell hybridoma. J.Immunol. 147, 1230-1237.

17. Butcher, E.C. and Picker, L.J. (1996). Lymphocyte homing and homeostasis. Science 272, 60-66.

18. Carr, M.W., Roth, S.J., Luther, E., Rose, S.S., and Springer, T.A. (1994). Monocyte chemoattractant protein 1 acts as a T-lymphocyte chemoattractant. Proc Natl Acad Sci U S A 91, 3652-3656.

19. Carswell, E.A., Old, L.J., Kassel, R.L., Green, S., Fiore, N., and Williamson, B. (1975). An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors. Proc Natl Acad Sci U S A 72, 3666-3670.

20. Chaplin, D.D. and Fu, Y. (1998). Cytokine regulation of secondary lymphoid organ development. Curr.Opin.Immunol. 10, 289-297.

21. Chomczynski, P. and Sacchi, N. (1987). Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal.Biochem. 162, 156-159.

22. Church, G.M. and Gilbert, W. (1984). Genomic sequencing. Proc Natl Acad Sci U S A 81, 1991-1995.

23. Clipstone, N.A. and Crabtree, G.R. (1992b). Identification of calcineurin as a key signalling enzyme in T-lymphocyte activation. Nature 357, 695-697.

24. Collins, T.L., Deckert, M., and Altman, A. (1997). Views on Vav. Immunol Today 18, 221-225.

25. Copeland, N.G., Gilbert, D.J., Schindler, C., Zhong, Z., Wen, Z., Darnell, J.E.J., Mui, A.L., Miyajima, A., Quelle, F.W., and Ihle, J.N. (1995). Distribution of the mammalian Stat gene family in mouse chromosomes. Genomics 29, 225-228.

26. Crowe, P.D., VanArsdale, T.L., Walter, B.N., Ware, C.F., Hession, C., Ehrenfels, В., Browning, J.L., Din, W.S., Goodwin, R.G., and Smith, C.A. (1994). A lymphotoxin-beta-specific receptor. Science 264, 707-710.

27. Cyster, J.G. (1999). Chemokines and cell migration in secondary lymphoid organs. Science 286, 2098-2102.

28. Cyster, J.G. and Goodnow, C.C. (1997). Tuning antigen receptor signaling by CD22: integrating cues from antigens and the microenvironment. Immunity 6, 509-517.

29. Eicher, D.M., Tan, Т.Н., Rice, N.R., O'Shea, J.J., and Kennedy, I.C. (1994). Expression of v-src in T cells correlates with nuclear expression of NF-kappa B. J.Immunol. 152, 2710-2719.

30. English, B.K., Weaver, W.M., and Wilson, C.B. (1991). Differential regulation of lymphotoxin and tumor necrosis factor genes in human T lymphocytes. J Biol Chem 266, 7108-7113.

31. Esslinger, C.W., Wilson, A., Sordat, В., Beermann, F., and Jongeneel, C.V. (1997). Abnormal T lymphocyte development induced by targeted overexpression of IkappaB alpha. J Immunol 158, 5075-5078.

32. Ettinger, R., Mebius, R., Browning, J.L., Michie, S.A., van Tuijl, S., Kraal, G., van Ewijk, W., and McDevitt, H.O. (1998). Effects of tumor necrosis factor and lymphotoxin on peripheral lymphoid tissue development. Int.Immunol. 10, 727-741.

33. Ferreri, N.R., Sarr, Т., Askenase, P.W., and Ruddle, N.H. (1992). Molecular regulation of tumor necrosis factor-alpha and lymphotoxin production in T cells. Inhibition by prostaglandin E2. J.Biol.Chem. 267, 9443-9449.

34. Flanagan, W.M., Corthesy, В., Bram, R.J., and Crabtree, G.R. (1991). Nuclear association of a T-cell transcription factor blocked by FK-506 and cyclosporin A. Nature 352, 803-807.

35. Force, W.R., Walter, B.N., Hession, C., Tizard, R., Kozak, C.A., Browning, J.L., and Ware, C.F. (1995). Mouse lymphotoxin-beta receptor. Molecular genetics, ligand binding, and expression. J.Immunol. 155 , 5280-5288.

36. Forster, R., Mattis, A.E., Kremmer, E., Wolf, E., Brem, G., and Lipp, M. (1996). A putative chemokine receptor, BLR1, directs В cell migration to defined lymphoid organs and specific anatomic compartments of the spleen. Cell 87, 1037-1047.

37. Forster, R., Schubel, A., Breitfeld, D., Kremmer, E., Renner-Muller, I., Wolf, E., and Lipp, M. (1999). CCR7 coordinates the primary immune response by establishing functional microenvironments in secondary lymphoid organs. Cell 99, 23-33.

38. Frantz, В., Nordby, E.C., Bren, G., Steffan, N., Paya, C.V., Kincaid, R.L., Tocci, M.J., O'Keefe, S.J., and O'Neill, E.A. (1994). Calcineurin acts in synergy with PMA to inactivate I kappa B/MAD3, an inhibitor ofNF-kappa В. EMBO J 13, 861-870.

39. Fu, Y.X. and Chaplin, D.D. (1999). Development and maturation of secondary lymphoid tissues. Annu.Rev.Immunol. /7,399-433.

40. Fu, Y.X., Huang, G., Wang, Y., and Chaplin, D.D. (1998). В lymphocytes induce the formation of follicular dendritic cell clusters in a lymphotoxin alpha-dependent fashion. J.Exp.Med. 187, 1009-1018.

41. Fu, Y.X., Molina, H., Matsumoto, M., Huang, G., Min, J., and Chaplin, D.D. (1997). Lymphotoxin-alpha (LTalpha) supports development of splenic follicular structure that is required for IgG responses. J.Exp.Med. 185, 2111-2120.

42. Futterer, A., Mink, K., Luz, A., Kosco-Vilbois, M.H., and Pfeffer, K. (1998). The lymphotoxin beta receptor controls organogenesis and affinity maturation in peripheral lymphoid tissues. Immunity. 9, 59-70.

43. Ghosh, S., May, M.J., and Kopp, E.B. (1998). NF-kappa В and Rel proteins: evolutionarily conserved mediators of immune responses. Annu.Rev.Immunol. 16:22560, 225-260.

44. Goldfeld, A.E., McCaffrey, P.G., Strominger, J.L., and Rao, A. (1993). Identification of a novel cyclosporin-sensitive element in the human tumor necrosis factor alpha gene promoter. J.Exp.Med. 178, 1365-1379.

45. Goldfeld, A.E., Tsai, E., Kincaid, R., Belshaw, P.J., Schrieber, S.L., Strominger, J.L., and Rao, A. (1994). Calcineurin mediates human tumor necrosis factor alpha gene induction in stimulated T and В cells. J.Exp.Med. 180, 763-768.

46. Golovkina, T.V., Shlomchik, M., Hannum, L., and Chervonsky, A. (1999). Organogenic role of В lymphocytes in mucosal immunity. Science 286, 1965-1968.

47. Gonzalez, M., Mackay, F., Browning, J.L., Kosco-Vilbois, M.H., and Noelle, R.J. (1998). The sequential role of lymphotoxin and В cells in the development of splenic follicles. J.Exp.Med. 187, 997-1007.

48. Gramaglia, I., Mauri, D.N., Miner, K.T., Ware, C.F., and Croft, M. (1999). Lymphotoxin alphabeta is expressed on recently activated naive and Thl-like CD4 cells but is down-regulated by IL-4 during Th2 differentiation. J Immunol 162, 1333-1338.

49. Granelli-Piperno, A., Keane, M., and Steinman, R.M. (1988). Evidence that cyclosporine inhibits cell-mediated immunity primarily at the level of the T lymphocyte rather than the accessory cell. Transplantation 46, 53S-60S.

50. Gruss, H.J. (1996). Molecular, structural, and biological characteristics of the tumor necrosis factor ligand superfamily. Int.J.Clin.Lab.Res. 26, 143-159.

51. Gunn, M.D., Kyuwa, S., Tam, C., Kakiuchi, Т., Matsuzawa, A., Williams, L.T., and Nakano, H. (1999b). Mice Lacking Expression of Secondary Lymphoid Organ Chemokine Have Defects in Lymphocyte Homing and Dendritic Cell Localization. J Exp Med 189, 451-460.

52. Han, C.W., Imamura, M., Hashino, S., Zhu, X., Tanaka, J., Imai, K., Matsudaira, Т., and Asano, S. (1995). Differential effects of the immunosuppressants cyclosporin A, FK506 and KM2210 on cytokine gene expression. Bone Marrow Transplant 15,133-739.

53. Herold, K.C., Lancki, D.W., Dunn, D.E., Arai, K., and Fitch, F.W. (1986). Activation of lymphokine genes during stimulation of cloned T cells. Eur J Immunol 16, 1533-1538.

54. Hjelmstrom, P., Fjell, J., Nakagawa, Т., Sacca, R., Cuff, C.A., and Ruddle, N.H. (2000). Lymphoid Tissue Homing Chemokines Are Expressed in Chronic Inflammation. Am J Pathol 156, 1133-1138.

55. Jain, J., McCaffrey, P.G., Miner, Z., Kerppola, Т.К., Lambert, J.N., Verdine, G.L., Curran, Т., and Rao, A. (1993). The T-cell transcription factor NFATp is a substrate for calcineurin and interacts with Fos and Jun. Nature 365, 352-355.

56. John, S., Robbins, C.M., and Leonard, W.J. (1996). An IL-2 response element in the human IL-2 receptor alpha chain promoter is a composite element that binds Stat5, Elf-1, HMG-I(Y) and a GATA family protein. EMBO J 75,5627-5635.

57. Kalli, K., Huntoon, C., Bell, M., and McKean, D.J. (1998). Mechanism responsible for T-cell antigen receptor- and CD28- or interleukin 1 (IL-1) receptor-initiated regulation of IL-2 gene expression byNF-kappaB. Mol Cell Biol 18, 3140-3148.

58. Kaplan, M.H., Schindler, U., Smiley, S.T., and Grusby, M.J. (1996). Stat6 is required for mediating responses to IL-4 and for development of Th2 cells. Immunity 4, 313-319.

59. Karin, M. (1995). The regulation of AP-1 activity by mitogen-activated protein kinases. J Biol Chem 270, 16483-16486.

60. Karin, M. and Delhase, M. (1998). JNK or IKK, AP-1 or NF-kappaB, which are the targets for MEK kinase 1 action? Proc Natl Acad Sci U S A 95, 9067-9069.

61. Klee, C.B., Draetta, G.F., and Hubbard, M.J. (1988). Calcineurin. Adv Enzymol Relat Areas Mol Biol 61, 149-200.

62. Kolb, W.P. and Granger, G.A. (1968). Lymphocyte in vitro cytotoxicity: characterization of human lymphotoxin. Proc Natl Acad Sci U S A 61, 1250-1255.

63. Koni, P.A. and Flavell, R.A. (1998). A role for tumor necrosis factor receptor type 1 in gut- associated lymphoid tissue development: genetic evidence of synergism with lymphotoxin beta. J.Exp.Med. 187, 1977-1983.

64. Koni, P.A., Sacca, R., Lawton, P., Browning, J.L., Ruddle, N.H., and Flavell, R.A. (1997). Distinct roles in lymphoid organogenesis for lymphotoxins alpha and beta revealed in lymphotoxin beta-deficient mice. Immunity. 6, 491-500.

65. Kopp, E.B. and Ghosh, S. (1995). NF-kappa В and rel proteins in innate immunity. Adv Immunol 58, 1-27.

66. Korobko, V.G., Boichenko, V.E., Kuprash, D.V., Turetskaia, R.L., and Nedospasov, S.A. (1999). Heterologous expression of murine lymphotoxins in Escherichia coli and preparation of antibodies. Bioorg.Khim. 25, 270-274.

67. Kratz, A., Campos-Neto, A., Hanson, M.S., and Ruddle, N.H. (1996). Chronic inflammation caused by lymphotoxin is lymphoid neogenesis. J.Exp.Med. 183, 14611472.

68. Kuo, C.T. and Leiden, J.M. (1999). Transcriptional regulation of T lymphocyte development and function. Annu Rev Immunol 17 , 149-187.

69. Mapara, M.Y., Bargou, R.C., Beck, C., Heilig, В., Dorken, В., and Moldenhauer, G. (1994). Lymphotoxin-alpha/betaheterodimer is expressed on leukemic hairy cells and activated human В lymphocytes. Int J Cancer 58, 248-253.

70. Matsuda, S. and Koyasu, S. (2000). Mechanisms of action of cyclosporine. Immunopharmacology 47, 119-125.

71. Matsuda, S., Moriguchi, Т., Koyasu, S., and Nishida, E. (1998). T lymphocyte activation signals for interleukin-2 production involve activation of MKK6-p38 and MKK7-SAPK/JNK signaling pathways sensitive to cyclosporin A. J Biol Chem 273, 1237812382.

72. Matsumoto, M., Fu, Y.X., Molina, H., and Chaplin, D.D. (1997). Lymphotoxin-alpha-deficient and TNF receptor-I-deficient mice define developmental and functional characteristics of germinal centers. Immunol.Rev. 156:137-44, 137-144.

73. Mattila, P.S., Ullman, K.S., Fiering, S., Emmel, E.A., McCutcheon, M., Crabtree, G.R., and Herzenberg, L.A. (1990). The actions of cyclosporin A and FK506 suggest a novel step in the activation of T lymphocytes. EMBO J 9, 4425-4433.

74. May, M.J. and Ghosh, S. Signal transduction through NF-kappa B.

75. McCaffrey, P.G., Goldfeld, A.E., and Rao, A. (1994). The role of NFATp in cyclosporin A-sensitive tumor necrosis factor-alpha gene transcription. J.Biol.Chem. 269, 3044530450.

76. Metcalfe, S., Alexander, D., and Turner, J. (1994). FK506 and cyclosporin A each inhibit antigen-specific signaling in the T cell line 171 in the absence of a calcium signal. Cell Immunol 158, 46-58.

77. Millet, I. and Ruddle, N.H. (1994). Differential regulation of lymphotoxin (LT), lymphotoxin-beta (LT-beta), and TNF-alpha in murine T cell clones activated through the TCR. J.Immunol. 152, 4336-4346.

78. Montgomery, R.I., Warner, M.S., Lum, B.J., and Spear, P.G. (1996). Herpes simplex virus-1 entry into cells mediated by a novel member of the TNF/NGF receptor family. Cell 87, 427-436.

79. Nair, A.P., Hahn, S., Banholzer, R., Hirsch, H.H., and Moroni, C. (1994). Cyclosporin A inhibits growth of autocrine tumour cell lines by destabilizing interleukin-3 mRNA. Nature 369, 239-242.

80. Neumann, В., Luz, A., Pfeffer, K., and Holzmann, B. (1996). Defective Peyer's patch organogenesis in mice lacking the 55-kD receptor for tumor necrosis factor. J.Exp.Med. 184, 259-264.

81. Neville, L.F., Mathiak, G., and Bagasra, O. (1997). The immunobiology of interferon-gamma inducible protein 10 kD (IP-10): a novel, pleiotropic member of the C-X-C chemokine superfamily. Cytokine Growth Factor Rev 8, 207-219.

82. Ngo, V.N., Tang, H.L., and Cyster, J.G. (1998). Epstein-Barr virus-induced molecule 1 ligand chemokine is expressed by dendritic cells in lymphoid tissues and strongly attracts naive T cells and activated В cells. J Exp Med 188, 181-191.

83. Nishikawa, S., Honda, K., Hashi, H., and Yoshida, H. (1998). Peyer's patch organogenesis as a programmed inflammation: a hypothetical model. Cytokine Growth Factor Rev 9, 213-220.

84. O'Keefe, S.J., Tamura, J., Kincaid, R.L., Tocci, M.J., and O'Neill, E.A. (1992). FK-506-and CsA-sensitive activation of the interleukin-2 promoter by calcineurin. Nature 357, 692-694.

85. Orlinick, J.R. and Chao, M.V. (1998). TNF-related ligands and their receptors. Cell Signal. 10, 543-551.

86. Paul, N.L., Lenardo, M.J., Novak, K.D., Sarr, Т., Tang, W.L., and Ruddle, N.H. (1990). Lymphotoxin activation by human T-cell leukemia virus type I- infected cell lines: role for NF-kappa B. J.Virol. 64, 5412-5419.

87. Paul, N.L., Millet, I., and Ruddle, N.H. (1993). The lymphotoxin promoter is stimulated by HTLV-I tax activation of NF-kappa В in human T-cell lines. Cytokine. 5, 372-378.

88. Picarella, D.E., Kratz, A., Li, C.B., Ruddle, N.H., and Flavell, R.A. (1992). Insulitis in transgenic mice expressing tumor necrosis factor beta (lymphotoxin) in the pancreas. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89, 10036-10040.

89. Rao, A., Luo, C., and Hogan, P.G. (1997). Transcription factors of the NFAT family: regulation and function. Annu.Rev.Immunol. 15:707-47,1Q1-1A1.

90. Reed, J.C, Abidi, A.H., Alpers, J.D., Hoover, R.G., Robb, R.J., and Nowell, P.C. (1986). Effect of cyclosporin A and dexamethasone on interleukin 2 receptor gene expression. J Immunol 137, 150-154.

91. Rennert, P.D., Browning, J.L., Mebius, R., Mackay, F., and Hochman, P.S. (1996). Surface lymphotoxin alpha/beta complex is required for the development of peripheral lymphoid organs. J.Exp.Med. 184, 1999-2006.

92. Rennert, P.D., James, D., Mackay, F., Browning, J.L., and Hochman, P.S. (1998). Lymph node genesis is induced by signaling through the lymphotoxin beta receptor. Immunity. 9, 71-79.

93. Rincon, M. and Flavell, R.A. (1994). AP-1 transcriptional activity requires both T-cell receptor-mediated and co-stimulatory signals in primary T lymphocytes. EMBO J 13, 4370-4381.

94. Roach, D.R., Briscoe, H., Saunders, В., France, M.P., Riminton, S., and Britton, W.J. (2001). Secreted Lymphotoxin-alpha Is Essential for the Control of an Intracellular Bacterial Infection. J Exp Med 193, 239-246.

95. Rollins, В.J., Walz, A., and Baggiolini, M. (1991). Recombinant human MCP-l/JE induces chemotaxis, calcium flux, and the respiratory burst in human monocytes. Blood 78, 1112-1116.

96. Ruddle, N.H. (1992). Tumor necrosis factor (TNF-alpha) and lymphotoxin (TNF-beta). Curr.Opin.Immunol. 4, 327-332.

97. Ruddle, N.H., Li, C.B., Tang, W.L, Gray, P.W., and McGrath, K.M. (1987). Lymphotoxin: cloning, regulation and mechanism of killing. Ciba.Found.Symp. 131, 6482.

98. Ruddle, N.H. and Waksman, B.H. (1967). Cytotoxic effect of lymphocyte-antigen interaction in delayed hypersensitivity. Science 157, 1060-1062.

99. Ruhlmann, A. and Nordheim, A. (1997). Effects of the immunosuppressive drugs CsA and FK506 on intracellular signalling and gene regulation. Immunobiology 198, 192206.

100. Sacca, R., Kratz, A., Campos-Neto, A., Hanson, M.S., and Ruddle, N.H. (1995). Lymphotoxin: from chronic inflammation to lymphoid organs. J.Inflamm. 47, 81-84.

101. Sale, E.M., Atkinson, P.G., and Sale, G.J. (1995). Requirement of MAP kinase for differentiation of fibroblasts to adipocytes, for insulin activation of p90 S6 kinase and for insulin or serum stimulation of DNA synthesis. EMBO J 14, 674-684.

102. Schandene, L., Alonso-Vega, C., Willems, F., Gerard, C., Delvaux, A., Velu, Т., Devos, R., de Boer, M., and Goldman, M. (1994). B7/CD28-dependent IL-5 production by human resting T cells is inhibited by IL-10. J Immunol 152, 4368-4374.

103. Schindler, C. and Darnell, J.E.J. (1995). Transcriptional responses to polypeptide ligands: the JAK-STAT pathway. Annu Rev Biochem 64, 621 -651.

104. Schreiber, S.L. (1991). Chemistry and biology of the immunophilins and their immunosuppressive ligands. Science 251, 283-287.

105. Shakhov, A.N., Lyakhov, I.G., Tumanov, A.V., Rubtsov, A.V., Drutskaya, L.N., Marino, M.W., and Nedospasov, S.A. (2000). Gene profiling approach in the analysis of lymphotoxin and TNF deficiencies. J Leukoc Biol 68, 151-157.

106. Shenolikar, S. (1994). Protein serine/threonine phosphatases—new avenues for cell regulation. Annu Rev Cell Biol 10, 55-86.

107. Shibasaki, F., Price, E.R., Milan, D., and McKeon, F. (1996). Role of kinases and the phosphatase calcineurin in the nuclear shuttling of transcription factor NF-AT4. Nature 382, 370-373.

108. Smith, C.A., Farrah, Т., and Goodwin, R.G. (1994). The TNF receptor superfamily of cellular and viral proteins: activation, costimulation, and death. Cell 76, 959-962.

109. Springer, T.A. (1994). Traffic signals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration: the multistep paradigm. Cell 76, 301-314.

110. Sriskandan, S., Moyes, D., and Cohen, J. (1996). Detection of circulating bacterial superantigen and lymphotoxin-alpha in patients with streptococcal toxic-shock syndrome. Lancet 348, 1315-1316.

111. Stocklin, E., Wissler, M., Gouilleux, F., and Groner, B. (1996). Functional interactions between Stat5 and the glucocorticoid receptor. Nature 383, 726-728.

112. Stowers, A., Prescott, N., Cooper, J., Takacs, В., Stueber, D., Kennedy, P., and Saul, A. (1995). Immunogenicity of recombinant Plasmodium falciparum rhoptry associated proteins 1 and 2. Parasite Immunol 17, 631-642.

113. Su, В., Jacinto, E., Hibi, M., Kallunki, Т., Karin, M., and Ben-Neriah, Y. (1994). JNK is involved in signal integration during costimulation of T lymphocytes. Cell 77, 727-736.

114. Svensson, U., Hoist, E., and Sundler, R. (1995). Cyclosporin-sensitive expression of cytokine mRNA in mouse macrophages responding to bacteria. Mol Immunol 32, 157165.

115. Takeda, К., Tanaka, Т., Shi, W., Matsumoto, M., Minami, M., Kashiwamura, S., Nakanishi, K., Yoshida, N., Kishimoto, Т., and Akira, S. (1996). Essential role of Stat6 in IL-4 signalling. Nature 380, 627-630.

116. Tan, A.M., Ferrante, A., Goh, D.H., Roberton, D.M., and Cripps, A.W. (1995). Activation of the neutrophil bactericidal activity for nontypable Haemophilus influenzae by tumor necrosis factor and lymphotoxin. Pediatr Res 37, 155-159.

117. Tsai, E.Y., Jain, J., Pesavento, P.A., Rao, A., and Goldfeld, A.E. (1996). Tumor necrosis factor alpha gene regulation in activated T cells involves ATF-2/Jun and NFATp. Mol.Cell Biol. 16, 459-467.

118. Wang, D., Stravopodis, D., Teglund, S., Kitazawa, J., and Ihle, J.N. (1996). Naturally occurring dominant negative variants of Stat5. Mol Cell Biol 16, 6141-6148.

119. Ware, C.F., Crowe, P.D., Grayson, M.H., Androlewicz, M.J., and Browning, J.L. (1992). Expression of surface lymphotoxin and tumor necrosis factor on activated T, B, and natural killer cells. J.Immunol. 149, 3881-3888.

120. Ware, C.F., VanArsdale, T.L., Crowe, P.D., and Browning, J.L. (1995). The ligands and receptors of the lymphotoxin system. Curr.Top.Microbiol.Immunol. 198, 175-218.

121. Warzocha, K., Renard, N., Chariot, C, Bienvenu, J., Coiffier, В., and Salles, G. (1997). Identification of two lymphotoxin beta isoforms expressed in human lymphoid cell lines and non-Hodgkin's lymphomas. Biochem Biophys Res Commun 238, 273-276.

122. Weih, F., Durham, S.K., Barton, D.S, Sha, W.C., Baltimore, D., and Bravo, R. (1996). Both multiorgan inflammation and myeloid hyperplasia in RelB- deficient mice are T cell dependent. J.Immunol. 157, 3974-3979.

123. Williams, C.M. and Coleman, J.W. (1995). Induced expression of mRNA for IL-5, IL-6, TNF-alpha, MIP-2 and IFN-gamma in immunologically activated rat peritoneal mast cells: inhibition by dexamethasone and cyclosporin A. Immunology 86, 244-249.

124. Williams, M.B. and Butcher, E.C. (1997). Homing of naive and memory T lymphocyte subsets to Peyer's patches, lymph nodes, and spleen. J Immunol 159, 1746-1752.

125. Worm, M. and Geha, R.S. (1994). CD40 ligation induces lymphotoxin alpha gene expression in human В cells. Int.Immunol. 6, 1883-1890.

126. Worm, M.M., Tsytsykova, A., and Geha, R.S. (1998). CD40 ligation and IL-4 use different mechanisms of transcriptional activation of the human lymphotoxin alpha promoter in В cells. Eur.J.Immunol. 28, 901-906.

127. Wu, J., Katzav, S., and Weiss, A. (1995). A functional T-cell receptor signaling pathway is required for p95vav activity. Mol Cell Biol 15, 4337-4346.

128. Wyss, A. and Moroni, C. (2000). Calcium-dependent and oncogenic IL-3 mRNA stabilization can be distinguished pharmacologically and by sequence requirements in the 3'UTR. Growth Factors 18, 109-118.

129. Yoshida, H., Honda, К., Shinkura, R., Adachi, S., Nishikawa, S., Maki, K., Ikuta, K., and Nishikawa, S.I. (1999). IL-7 receptor alpha+ CD3(-) cells in the embryonic intestine induces the organizing center of Peyer's patches. Int Immunol 11, 643-655.

130. Yoshimura, Т., Robinson, E.A., Tanaka, S., Appella, E., Kuratsu, J., and Leonard, E.J. (1989). Purification and amino acid analysis of two human glioma-derived monocyte chemoattractants. J Exp Med 169, 1449-1459.

131. Zhang, J.H., Ferrante, A., Arrigo, A.P., and Dayer, J.M. (1992). Neutrophil stimulation and priming by direct contact with activated human T lymphocytes. J Immunol 148, 177181.

132. Zlotnik, A., Morales, J., and Hedrick, J.A. (1999). Recent advances in chemokines and chemokine receptors. Crit Rev Immunol 19, 1-47.

133. Zlotnik, A. and Yoshie, O. (2000). Chemokines: a new classification system and their role in immunity. Immunity 12, 121-127.