Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Регуляция биологической функции Т-лимфоцитов небелковым фактором лимфоидной ткани

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Регуляция биологической функции Т-лимфоцитов небелковым фактором лимфоидной ткани"

ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНСКОЙ ССР

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ им. А. А. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи

ОЛЕЙ НИК Борис Власович

УДК 612.438.018:612.418:612.112.94:612.017.12

РЕГУЛЯЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ФУНКЦИИ Т'ЛИМФОЦИТОВ НЕБЕЛКОВЫМ ФАКТОРОМ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ

03.00.13 — физиология человека и животных

Ай

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

С* К ЦК*. V £8

КИЕВ-1989

Работа вьполнена в Киевском научно-исследовательском институте эндокринологии и обмена веществ МЗ УССР.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Н.М.Бережная

доктор биологических наук И.Н.Алексеева

член-корреспондент АМН СССР, профессор

Г.Ы.Бугенко

Ведущая организация: Киевский государственный институт усовершенствования врачей МЗ СССР. '

Защита диссертации состоится "___1989 г.

в __ часов на заседании специализированного совета Д 016.15.0]

Института физиологии им. A.A.Богомольца АН УССР по'адресу: 252024, Киев, ул. Богомольца, 4.

.С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физиологии им. А.А.Богомольца.

Автореферат разослан "_" _1969 г.

Ученый секретарь специализированного совета

доктор-биологических наук З.А.Сорокина-Марина

'Ч - I -

_ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИС1ЖА PABOTU

Актуальность проблемы. Постоянство внутренней среди организш в значительной степени определяется состоянием лимфоидной системы: уровнем лимфоцитопоэза и набором репертуара иммуноксмпетентных клеток.

Лимфоцитопоэз и его регуляция представляются малоизученными разделами кроветворения. К настоящему времени нет ясности в вопросе о факторах, контролирующих размножение различных популяций Т-кле-ток. В последнее время первостепенное значение в обеспечении роста и развития лимфоидных клеток стали'придавать факторам микроокружения (А.Я.Фриденштейн, *1984; В.Н.Старостин и соавт., 1984). Поэтому поиск этих факторов занимает особое место.-

Как известно, очищенные полипептидные тимические гормоны, способствующие дифференцировке, не обладают митогеннш действием . (И.А.Безвершенко, 1978,1978а; В.А.Малыжев, 1982; H.atepien et kl., 1982;P.Andrews et al., 1985; Chen Wei yeng et aX., 1985) и не восполняют пула Т-лимфоцитов в организме, а также не обеспечивают полного восстановления врожденных гаи индуцированных форм иммунодефицита ( R.Hcmg, 1986).

Последствия неонатальной тимэктомии могут быть устранены имплантацией сингенного тимуса либо введением его грубых экстрактов (G.Thurman et aX. ,1975; M.Pesic, 1987). Однако заключение имплантируемого тимуса в непроницаемую для клеток камеру приводит лишь к восстановлению иммунологической реактивности ( R.Levey et aX., 1963). Такая же закономерность наблюдается у неонатально тимэктомирован-ных животных во время беременности (Б.В.Попов и соавт., 1976; D.Osoba, 1965).

Из этого следует, что факторы тимуса, регулирующие пролиферацию тимоцитов, проявляют свое действие внутри вилочковой железы и, вероятно, не покидают её (D.Osoba, 1965;Р.Мас СцХХасй,1977). Их

образование не связано с эпителиальными, клетками тимуса (E.ffakeal et al., 1975; F.Loor,L.Haag, 1977).

Вероятными регуляторами размножения клеток в тимусе, по современны» представлениям, являются небелковый (И.А.Безвершенко и соавт.', 1972,1974; И.А.Безвершенко и соавт., 1987; Д.А.Костадинов, 1973) и -пептидный ( 0.Söder, 1985) факторы микроокружения.

Ведущая роль тимуса в обеспечении постоянства Т-клеточного состава организма, особенно в молодом возрасте, не вызывает сомнения, однако процесс Т-лимфоцитопоэза присущ .и другим лимфоидным органам, и в первую очередь селезенке. Действительно, у неонатально тимэкто-мированных и генетически бестимусных мышей сохраняется фенотипиче-ская и функциональная дифференцировка Т-клеток (М.Г.Михна и соавт; , 1985; А.А.Ярилин, 1986 ; Chen Wei Peng et al., 1984; H.Mac Donald et al.',' 1986; Q.Randes,M.Palladino, 1986).

Источником Т-клеток в селезенке могут быть предшественники Т-лимфоцитов, мигрировавшие из костного мозга, а также образующиеся в самой селезенке (J.Kadish.R.Basöh, 1976). Под воздействием циркулирующих полипептидных факторов тимуса-- СТФ (ii.i'ardenne.J.-F.Bach,

1984) и ¿у -тимозина (О.Chen et.al., 1984), à также фактора, образующегося в тимусе и селезенке - ^-тимозина (в.Ногеокег, 1984), полипептида спленина (T.Audhya et al., 1984) и, возможно, небелкового фактора сёлезенки (Т.К.Валуева и соавт., 1983) селезе-

V

ночные предшествекники Т-лимфоцитов могут дифференцироваться в Т-клетки.

У взрослых животных в процессе инволюции тимуса местом генерации Т-лимфоцитов становятся периферические лимфоидные органы. Митогенные факторы вилочко.вой железы, продуцируемые Т-лимфоцитами, действуют непосредственно в Т-клеточном микроокружении, т.е. ко-роткодистантны (И.А.Безвершенко, 1981). Поэтому следует ожидать, что подобные факторы продуцируются также в селезенке. Выделение

такого фактора, изучение его физико-химических свойств и механизма действия является назревшей задачей иммунологии.

Регуляторная роль лимфоидной системы и ее факторов распространяется и на соматические клетки. Концепция о единой гомеостатиче-ской роли лимфоидной ткани в организме включает как иммунологическую, так и трофическую ее функции в широком понимании этого термина (К.Г.Хрущев, 1945; А.Г.Бабаева и соавт., 1969; Г.Я.Свет-Молдавский и соавт., 1974; С.Соботка, И.Шимек, 1983; А.Г.Бабаева, 1985; А.Н.Чередеев и соавт., I9B8;M.mskin,R.Prehn, 1975; D.Green, T.Wegmann, 1986)." .

Механизмы морфогенетического влияния лимфоидной системы на ¡к лимфоидные клетки остаются неизвестными, но совершенно очевидно,, что это сложный многокомпонентный процесс, включающий либо прямое взаимодействие лимфоцита и соматической клетки, или опосредованное растворимыми факторами, а возможно, и действием антител. Особая роль в этом плане принадлежит Т-клеточным митогенам, обусловливающим накопление эффекторных клеток иммунной системы. Специфические мембранные структуры активированных Т-лимфоцитов могут восполнять функции этого вида клеток. Актуальность познания роли небелкового митогенногб фактора Т-лимфоцитов и их мембранной структуры в регуляции иммунной и морфогенетической функций предопределили эйдачи настоящей работы.

Исследования, представленные в диссертации, были начаты в 1966 г., когда сведения о гормонах и факторах- лимфоидной системы были еще немногочисленны, химическая природа их неизвестна. А используемый в практике отечественного здравоохранения препарат "спленин" представляющий собой дихлорэтановую вытяжку из селезенки, не.имел научно обоснованной концепции его активного начала и механизма ■ биологического действия..

Цель работы. Выделение и изучение биологической активности не-белко'вого фактора микроокружения Т-лимфоцитов селезенки, сопоставление его е таковым из тимуса, установление механизмов их влияния на пролиферацию, иммунологическую и гепатотропнуга функции Т-лимфо-• цитов, а также роли мембраны тимоцитов в механизме их действия.

Задачи.

1. Провести комплексное изучение особенностей биологического действия препарата "спленин" у здоровых животных И при некоторых, видах экспериментальной патологии.

2. Выделить из спленина активный фактор, изучить его физико-химические свойства, митогенное, иммуномодулирувщее и гепатотропное действие.

3. Провести сравнительное изучение биологических и химических свойств небелкового фактора спленина и тимуса.

4. Изучить роль тимоцитов и их мембранной структуры в реализации механизма действия небелковых факторов тимуса и селезенки.

Диссертация выполнялась в соответствии с планами научно-исследовательских работ в лабораториях экспериментачыюй фармакотерапии и молекулярных механизмов иммунитета (руководитель - доктор мед. наук И.А.Безвершенко) Киевского научно-исследов.ателъского института эндокринологии и обмена веществ МЗ УССР.

Научная новизна.

I. Установлены ранее неизвестные свойства спленина стимулирс- ■ вать пролиферацию тимоцитов и предшественников Т-лимфоцитов в селезенке, усиливать желчеотделительную функции печени у нормальных животных, подавлять развитие аллергического внутрипеченочного хо-лестаза, предотвращать структурно-функциональные изменения в печени при дробном общем рентгеновском облучении, способствовать восстановлению патологически измененной печени.

1-. _ — ^

2. Впорвие вццьл«.-н из сплетши »к-белк.шый фтлр, отшл-ст.*! -ний за биологичесиув активность препарата. Основное свойство фактора заключается в индукции пролиферации Т-лимфоцитов в селезенке и тимусе и связанной с ней стимуляцией хеллерной, супрессорной и ге-патотропной функций Т-лим^оцитои.

3. По физшсо-химическии свойствам и биологическому действию небелковый фактор спЛенина аналогичен таковому из тимуса.

4. Впервые установлено, что иммуномодулируищее и гспатотрогшог;

действие небелковых факторов тимуса и спленина опосредуется тимо-

цитами, в частности отделяемыми ими фрагментами плазматических мем-t

б ран.

5. Мембранная структура тимоцитов (фрагменты плазматических мембран) способна функционально восполнять дефицит Т-супрессоров при осуществлении Т-лимфоцитами иммунологической и гепатотропной функций. Полученные сведения создают предпосылки для создания им-мунокорригируицих препаратов нового типа.

Теоретическая и практическая значимость работы.

1. Обнаружение в спленине небелкового фактора, обладающего' мнтогенным действием в отношении Т-лимфоцитов, позволяет отнести селезенку, наряду с тимусом, к органам активного антигеннеэависи-мого лимфэцитопоээа в организме, обеспечивающим физиологическую и репаративную регенерацию Т-клеток, и экспериментально обосновывает возможность его использования для восстановления лимфоцитопоэза при пострадиационной и глюкокортикоидной лимфоцитопеиигас.

2. Стимуляция небелковым фактором спленина образования хелпер-ш.к и супрессорных клеток открывает возможность его применения в качестве иммуномодулятора для подавления аллергических реакций немедленного типа при одновременной стимуляции защитное функций организма и восстановительных процессов в печени. Нуклеоэидная при-

рода фактора позволяет длительное его применение без риска аллерги-эации"организма.

4. Выделение из спленина активного фактора и установление его биологических свойств позволяет разработать объективные и адекватные способы тестирования препарата и изучить его химическую природу

5. Наличие в препарате "Вилозен" фактора, обладающего гепато-тропным действием, позволяет расширить показания к его применению, в частности при токсическом поражении печени.

■6. Химическая и функциональная идентичность активных факторов спленина и вилозена открывает практическую возможность использования бычьей селезенки в качестве сырья для производства препарата, аналогичного вилозену.

7. Установление иммуномодулирутацего и гепатотропного механизмов действия факторов тимуса и селезенки, опосредованных слущиваю-щимися .<; Т-лимфоцитов фрагментами плазматических мембран, открывает принципиально новый путь целенаправленной регуляции гомеостаза.

Реализация результатов исследования. По теме диссертации опуб- . ликовано 33 работы, в том числе 16 статей и 17 тезисов. Получено 6 удостоверений на рационализаторские предложения.

Результаты работы по тестированию небелковых факторов лимфоидной ткани вошли в материалы, представленные в Фармкомитет СССР при •внедрении в практику здравоохранения препарата "Вилозен".

Полученные данные о небелковом факторе спленина внедрены в цикле лекций по аллергологии на кафедре аллергологии Киевского государственного института усовершенствования врачей.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях Киевского НИИ эндокринологии и обмена веществ МЗ УССР (1967-1986), Республиканской научной конференции "Роль нервной системы в возникновении патологических процессов и .

их компенсации" (Ивано-Франковск, 1972), УН Европейской конференции по сравнительной эндокринологии (Будапешт, 1973), Республиканской научной конференции "Механизм действия гормонов" (Киев, 1975), • II съезде эндокринологов УССР (Киев, 1977), 1У Всесоюзном биохимическом съезде (Ленинград, 1979), 1У международном съезде иммунологов (Пария, 1980) ,ХШ Всесоюзной конференции "Фундаментальные проб лемы гастроэнтерологии" (Киев, 1981), III Всесоюзном симпозиуме "Физиология иммунного гомеостаза" (Ленинград, 1962), 1У Украинском биохимическом съезде (Днепропетровск, 1982), III съезде эндокринологов УССР (Винница, 1982), Всесоюзной конференции "Системно-анти-»

системная регуляция в норме и патологии" (Киев, 1982), Республиканской конференции "Коррекция нарушений иммунологической реактивности" (Ивано-Франковск, 1983), Республиканской конференции "Механизмы им-муностимуляции" (Киев, 1985), 1У Всесоюзном симпозиуме "Нейро-гумо-ральная регуляция иммунного гомеостаза" (Суздаль, 1986), У Укран-ском биохимическом съезде (Ивано-Франковск, 1987), 1У съезде эндокринологов УССР (Львов, 1987), У1 республиканской конференции "Актуальные вопросы иммунотерапии" (Ворошиловград, 1988).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 313 страницах машинописи и состоит из введения, 3 глав обзора-литературы,. главы, характеризующей материал и методы исследования, 4 глав с описанием результатов собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 313 источников отечественной и 393 источника иностранной литературы. Работа иллюстрирована 52 таблицами и 9 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования. Для достижения поставленных задач было использовано 1989 половозрелых (преимущественно самцов) животных, 1508 из них составляли -крысы линии Вистар, 475 - мыши

- l< -

линий ИлЬН/с и CDA, а б беппородшк сбак.

Снленэктомип у miiuicR и крыс проводили пил о^ирш-я-i наркозом, Селезенку извлекали чср«\э разрез брюшной стенки в энига-глралыюй области.

Об Ш!Тонсипюсти образования лимфоцитов у гивошнх судили по изменениям абсолютной и относительной м.мссн лим^идн''* органов и содержанию в них клеток, а также но скорости сшитая в исследуемьк клочках нуклеиновых кислот (включение меченого предшественника в Д11К). Суспензия тимоцитов и спленоцитов lio b х 10'Умл инкубировали в силикониэировалш!х пробирках при 37 °С с мкКи 3Л-тимидина в течение 4 часов. Затем клетки о car,дали на миллшорових фильтрах и радиоактивность подсчитывали на сциш илляционном счетчике Mark ill.

Действиеманогрэммошд количеств наделенного фактора на пролиферацию спленоцитов исследовали в культуре ил витро. Результаты оценивали радиометрическим методом. Суспензию клеток культивировали в планшетах для иммунологических исследований в среде KiT.il -164?, забуференной 0,025 М Через с добавлением 5 "¡0 телячьей эмбриональ-

г

ной сыворотки, 20 мМ глутамина и 5 х 10 " М 2~неркпгноэтунола л течение 72 часов в 10 £ атмосфере COg. За 4 часа до прекращении культивирования в пробп вносили '^Н-тимчдин. Радиоактивность проб, осацценш.к ТХУ.на миллппоропчх фильтра*, иросчитнвчли на ецинтип-ляционном счетчике Mark III .

Критерием синтеза ДНК в печени слуги.лп mtieitcMtw.i-rrb включения 3Н-тимидина ин випо. Исследуем»-« крисам па I час до д'т.чпитлцич внутрибрюиинно вводили 3Н-тнмидин в количестве 0,G мкКн па I г массы тела. Радиоактивность гомогенатор печени, cw,"»»"-'* ТХУ на фильтрах, просчитывали на емвтчикп 1зосар-300 (СШЛ).

Развитие гуморального иммунитета у п>-яоП in ти»\угэгчч1еит<И4 антиген (оритроцмти бчрпт) »'?;,"">п >п Г>- О ««-.к», (TV'-i'pavi

внутрибрюшишой сенсибилизации животных 0,2 мл 20 % суспензии клеток. Количество клеток-антителопродуцентов к эритроцитам барана оценивали на основании спектрофотометрического определения степени их гемолиза при инкубации с клетками селезенки сенсибилизированных мышей ( и.31шраоп,3.0о22о, 1979). Величины экстинции при 413 нм пропорциональны количеству антителообразующих клеток, определяемых по Ерне.

Локальную продукцию 1вВ-антител в органах дыхания у крыс индуцировали путем интраназального закапывания (по 0,05 мл в каждый носовой ход) стандартного аллергена пыльцы амброзии спустя 30-40 мин после инстилляцйи в носовые ходы по 0,5 мл 0,1 % раствора гистаминн (Э.В.Гюллинг, Л.А.Дюговская, 1980).

• Общую аллергизацию мышей индуцировали одноразовым или двукратным внутрибрюшинным введением 1-5 мкг аллергена совместно с 5 мг свежеприготовленной гидроокиси алюминия. В качестве аллергена использовали яичный альбумин и белковый экстракт свиных аскарид, приготовленный и хроматографически очищенный в лаборатории.

0 содержании!^- антител в органах дыхания судили по проценту дегрануляции тучных клеток, наступившей в результате взаимодействия аллергена амброзии с ^В-антителами, присоединившимися к рецепторам тучных клеток в процессе их инкубации с гомогенатом соответствующего- органа (Л.А.Дюговская, 1977).

Содержание циркулирующих^В- антител у сенсибилизированных мышей в крови определяли в реакции пассивной кожной анафилаксии через 24 часа после введения испытуем!« сывороток (и.чга-^аЬе ,Х,0\га-гу. 1977).

Антигенспецифический ( к аскаридному белку) связывающий фактор выделяли из лизированных тимоцитов сенсибилизированных мышей методом аффинной хроматографии ('1'.Та<1а et а!., 1973). Аскарид-

- ю -

ный антиген иммобилизировали на ВГСН-активированной сефарозе 4В. IgE- связывающий фактор элюировали СД)1 н раствором HCl, pH 2,0, и контролировали спектрофотометрически при 280 нм. После лиофилиэации IgE-связьгоающий фактор использовали для подавления IgE -антитело-образования у сенсибилизированных животных.

Плазматические мембраны тимоцитов получали после механического разрушения клеток в гомогенизаторе (стекло-тефяон) и поел едущего осаждения безъядерной суспензии в градиенте сахарозы ( R.Kornfeld et al., 1974) или путем слущивания живыми тимоцитами в инкубационную без сывороточную среду при их прогревании в течение I часа при 45 °С или 2 часов при 37 °С (И.А.Безвершенко и соавт., 1979). В последнем методе клетки осаждали центрифугированием, надосадочную жидкость подвергали диализу .и лиофилизировали. Полученные фрагменты плазматических мембран пересчитывали на количество белка или на число использованных для выделения клеток. Маркером плазматических мембран служила активность 5-нуклеотидазы. 0 гетерогенности препаратов плазматических мембран судили по данным гель-электрофореза.

Для трансплантации.использовали сингенные тимоциты от животных одинакового с реципиентами пола и возраста. Клетки вьщеляли в среде 199 путем измельчения стромы тимуса и продавливания клеток через : металлическую сетку. Дважды отмытые клетки суспендировали до нуж-' ной концентрации в среде 199 и трансплантировали внутривенно крысам с токсическим гепатитом и мышам с гипериммуноглобулинемией Е.

Активацию тимоцитов осуществляли путем одночасовой инкубации

с

; суспензии клеток, содержащей 5 х 10 /мл среды 199, с 5 мкг небелкового фактора на I мл при 37 °С. Затем клетки дважды отмывали средой и суспендировали для трансплантации.

Активность 5-нуклеотидазы ( R.Michel,JiHawthorne, 1965) и ацетилхолинэстеразы ( G.Eliman, 1951) различных по зрелости популя-

ций тимоцитов изучали после разделения клеток б градиенте фиколл-урографина со ступенями плотности 1,055, 1,065, 1,071, 1,077 и 1,095. Разделение осуществляли 20-минутным центрифугированием при 400 в•

Изучение влияния факторов лимфоидной ткани на восстановительные процессы в патологически измененной печени у крыс проводили на модели токсического гепатита, аллергического внутрипеченочного холе-стаза, а также после общего рентгеновского облучения.'

Экспериментальный токсический гепатит вызывали 5-кратным через день внутримышечным введением четьгреххлористого углерода в дозе 0,5 мл на 100 г массы тела, разведенного пополам косточковым маслом Внутрипеченочный 'аллергический холестаз индуцировали путем 10. дневного введения внутрь анаболического стероида неробола (17<£-ме-тиландростандиен-1,4-ол-Г^-0Н-3) в дозе 2 мг на Ю0*'г массы тела в виде крахмальной суспензии.

Общее рентгеновское облучение крыс и мышей осуществляли на аппаратуре РУМ-Н при напряжении 250кВ, силе тока 15 мА, фильтры -0,5 мм Си и I мм А1, кожно-фокусное расстояние 50 см, мощность дозы бОР/мин. . .

Желчеотделительную функцию печени- у собак изучали в хронических опытах на животных с желчепузырнодуоденальными фистульными трубками (П.С.Лященко, 1975). Резиновый клапан одностороннего действия, вмонтированный в фистульной трубке^ предотвращал забрасыва- -. ние содержимого кишечника в желчный пузырь и 'обеспечивал энтёроге-патический круговорот желчи вне эксперимента. В желчи.собак, наряду с общим количеством секрета, определяли содержание солей желчных кислот (Л.М.Кульберг, М.Е.Маляревская, 1951), билирубина и холестерина. ■

Функциональное состояние печени оценивали бромсульфофталеино-вым (БС$) тестом (з.Кааег^а1,Е.??1аие, 1924) в нашей модификации

дл я крис.

После фиксации крыс в спинном положении в хвостовую или дор-?яльную вену penia вводили 5 % раствор БСФ из расчета 0,2 мл на ТОО г массы тела. Через 5 и 20 мин соответственно из левой и правой '• наружных яремных вен брали по 0,5-0,6 мл крови. Клетки осаждали центрифугированием. Концентрацию БСФ в плазме определяли спектро-фотометрией при 575 нм. Разница концентраций красителя в крови за исследуемый промежуток времени свидетельствует о скорости его поглощения печенью и в ражается коэффициентом очищения ( O'Lawera et al.,1949) либо в процентах, принимая концентрацию БСФ в плазме при первом взятии крови за 100 %.

Жепчеотделительную и экскреторную функцию печени у крыс изучали в остром опыте под барбамиловым наркозом в условиях поддержания у животных оптимальной теш ера туры тела. Крыс фиксировали в станочках из органического стекла с овальным 190 х 60 мм отверстием и располагали спиной на терморегулируемой подстилке. Продольным разрезом (1-2 см) в эпигастральной области вскрывали брюшную полость и в общий желчный проток вставляли полиэтиленовую трубку диаметром I мм. Желчь собирали почасово 6-8 часов в заранее взвешенные пробирки. Секреция желчи в мг/мин на 100 г массы тела служила показателем интенсивности желчеотделительного процесса.

С целью определения экскреторной и связывающей функций печени час спустя от начала сбора желчи крысам внутривенно вводили 5 % рпствор БСФ из расчета 5 мг на 100 г массы тела. Экскрецию красителя с желчью определяли на протяжении 2 часов: первый час разделяли на 30-минутные периоды. Количество БСФ в желчи определяли спектро-фотометрией при 575 нм, соотношение свободного и парных соединений красителя с глутатионом, цистеииил-глицинсм и цистопном - хроматографией ( В,Combes efc ni,, J9"5).

Содержание низкоспиновой окисленной формы цитохрома Р-450 определяли методом электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Сйектры ЭПР печени^ регистрировали на радиоспектрометре "Вариан-Е-109" (США) и выражали в относительных единицах.

Концентрациюшикогена в гомогенатах печени определяли при помощи антронового реактива ( Н.Carrol et al.,1956), липидое - гравиметрическим методом ( J.Polch, et al., 1957), белки по O.Lowry et al., (1951). Спектры поглощения в ультрафиолетовой области записывали на спектрофотометре "spekord. Ш-40" (ГДР). Содержание сульфгидрильных групп определяли при помощи 5,5-дитиобис-2-нитробензойной кислоты по освобождению тионитрофенильного аниона с максимумом поглощения при 412 нм ( 0.£¡llman, 1959; J.Sedlak, 1970), а также методом ашери-метрического титрования ( R.Benesch et al., 1955). Глутатион определяли с нитропруссидным реактивом ( R.ßrunert,Р.Phillips., 1951).

Перекисное окисление липидов плазматических мембран моделировали путем инкубации суспензии эритроцитов с раствором витамина Д£ (В.Б.Спиричев, Н.В.Блажеевич, 1968).

Для морфологических исследований ткань печени фиксировали в нейтральном 10 % формалине, срезы окрашивали гематоксилин-эозином.

Результаты исследований обработаны методами вариационной статистики (Н.Бейли, 1962). Статистическую значимость различий (Р) оценивали по таблице Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение.

I. Ввделение и изучение активного начала спленина.

Способ получения небелкового фактора спленина (НФС).

Изучение влияния спленина- на лимфоидную систему у крыс обнаружило его способность увеличивать на 44,0 % массу селезенки и 44,3 % тимуса. Этот факт послужил предположением о наличии в спленине ми-тогенного вещества. Оценивая его в плане биологической значимости

составных компонентов спленина, представленных Е.Б.Нечаевой (1978), мы сосредоточили внимание на нуклеиновых кислотах и их метаболитах. Значительное содержание их в составе спленина связано не только с высокой пролиферативной активностью в селезенке, но и с процессами аутолиза, которому подвергается ткань органа при производстве препарата. Обнаружение у ряда пуриновых производных митогенных и имму-номодулирующих свойств (А.ГКДмитренко, 1985; М. C^oodman,w.*eiglвl 1982; <1.Наас1еп а1., 1984; С.Реп^.М.РареиШс, 1986) предопределило наш поиск и ввделение из спленина веществ этого класса.

Для вццеления НФС использовали дихлорэтановый экстракт селезенки - полупродукт спленина, который высушивали в ротационном испарителе при 37 °С. Липиды и органические кислоты из сухого вещества экстрагировали бензолом. Активный фактор вццеляли путем осаждения ионами ртути (И.А.Безвершенко, 1978). Для этого к 5 % водному раствору экстракта (рН 4,0) при постоянном перемешивании постепенно добавляли 20% раствор уксуснокислой ртути до полного осаждения нерастворимого материала, осадок отделяли фильтрованием. Затем рН фильтра подводили до 6,0. и повторяли осаждение. Вновь полученный осадок ресуспендировали в слабощелочной воде и освобождались от ионов ртути путем пропускания через раствор сероводорода. Образовавшийся черный осадок ( HgS) отфильтровывали. Из фильтрата при рН 2,0 газообразным азотом вытесняли сероводород и раствор высушивали. Полученный 'фактор - белый аморфный порошок без запаха - хорошо растворим в воде, уксусной кислоте, нерастворим в этаноле. Спектр поглощения раствора НФС.в 0,01,М фосфатном буфере,- рН 7,0, в ультрафиолетовой зоне достигает максимума при 264 год и характерен для нуклеозидов и их оснований.

Изучение биологической активности выделенного фактора было начато с решения вопроса возможного его отношения к лимфоцитообра-

зованию в организме и системе ин витро.

Исследование лимфоцитотропного. действия НФС.

Мышам линии СВА внутрибрюшинно в течение 3 дней вводили по 10 мкг НФС. Влияние фактора на массу тимуса, селезенки и количество в них клеток определяли на 12-й день опыта.

Установлено, что НФС обладает свойством увеличивать массу лим-фоидных органов. Относительная масса.тимуса у опытных животных составляла 18,3 + 1,2 мг/10 г массы тела, а селезенки - 45,1 + 1,2 мг/ДО г массы тела при 10,7 ± 0,57 и 39,9 ± 1,92 мг/10 г соответственно в контроле. Параллельно увеличению массы лимфоидных органов увеличивается в них содержание клеток - в тимусе на 99,2 %, в селезенке на 46 %.

Однонаправленность изменений в тимусе и селезенке позволяет предположить, что фактор стимулирует пролиферацию предшественников Т-лимфоцитов. Однако как показали исследования с включением 3Н-ти-мидина в ДНК лимфоцитов, лимфоцитозстимулирующий эффект НФС ин виво проявляется в обоих органах не одновременно. Обнаружено, что спустя 18 часов после однократного введения крысам по 250 и 500 мкг НФС включение метки в спленоциты ин витро повышается более чем в 2 раза, поглощение 3Н-тимидина тимоцитами несколько снижается. Вместе с тем, в бессывороточной культуре тимоцитов нансграммовые количества НФС через 3 часа инкубации оказывают выраженное митогенное действие. Достоверным включение 3Н -тимидина установлено при даесении 31,25 нг НФС в I мл культуры, содержащей 5 х I06 клеток, и сохраняется после 8-кратного увеличения дозы фактора.

Лимфоцитотропное действие НФС проявляется и в 72-часовой культуре спленоцитов. Включение меченого тимидина наблюдается при внесении 62,5 нг фактора'на 5 х 10® клеток на мл, максимум стимуляции включения метки достигается при 2ЕО нг НФС в мл. Становится очевид-

ным, что НФС непосредственно влияет на клетки селезенки. А поэтому усиление пролиферативных процессов в этом органе при воздействии НФС ин виво обусловлено митозом Т-клеток селезенки, а не притоком делящихся клеток из тимуса.

Принадлежность НФС к естественным низкомолекулярным соединениям предполагает его быструю инактивацию. В действительности эффективность фактора в организме сохраняется 10 и более дней. Это обстоятельство позволяет предположить, что влияние НФС на клетки, подобно действию лектинов (Кон А, ФГА) опосредовано через ИЛ-2. Однако в культуре клеток активация спленоцитов и тимоцитов (включение эН-тимидина) после добавления фактора происходит раньше, чем при воздействии лектинами, индуцируицими образование ИЛ-2. Аналогичный эффект на тимоциты оказывает небелковый фактор тимуса, действие которого осуществляется без участия аденилатциклазной системы и в отсутствие Са^+ (И.А.Вёзвершенко и соавт., 1972; Д.А.Констандинов, 1973).

Есть основания полагать, что НФС в первые часы контакта с Т-клетками селезенки и тимуса оказывает прямое митогенное действие, однако в последующие часы активации Т-лимфоцитов, вероятно, требуется участие ИЛ-2. •

Реальность прямого пути активации Т-лимфоцитов доказана в культуре клеток, очищенных от моноцитов (т.е. без участия интер-лейкина I) при воздействии ионофором Са^+ А 23187. Моноклональные антитела против рецептора к ИЛ-2 не предотвращают бласттрансформа-цию, вызванную внесением А 23187 в первые часы наблюдения (о.Коге1;-аку вt й1., 1983; Н.ОоИвг е! а1., 1987).

Обнаруженный феномен прямой активации Т-лимфоцитов НФС открывает перспективу его использования и в тех случаях, при которых способность моноцитов к ответу на митогены окажется сниженной.

Полученные результаты в совокупности позволяют заключить, что НФС обладает тропностью к Т-лимфоцитам или их предшественникам как в селезенке, так и в тимусе, и является специфическим их митогеном прямого и опосредованного действия. Реальность существования мито-генного фактора в спленине и селезенке подтверждается исследованиями О.А.Дадаян, К.П.Сарницкого (1986), А.А.Костандинова, Б.Б.Фукса (1973). Наличие аналогичного низкомолекулярного митогенного фактора, устойчивого к действию протеолитических ферментов и нуклеаз в тимусе (И.А.Безвершенко и соавт., 1972,1974,1987; Д.А.Конетандинов,

1973) свидетельствует о том, что восполнение пула Т-лимфоцитов осу*

ществляется как в тимусе, так и в селезенке и регулируется митоген-ным фактором небелковой природы.

Нуклеозидная природа вццеленного фактора позволяет отнеси! его к продуктам азотистых оснований и их производных, высокая активность которых присуща среде микроокружения Т-лимфоцитов.

Эффективность ШС при экспериментальных лимфоцитопениях.

Результаты представленных исследований имеют не только теоретическое, но и прикладное значение. Лимфоцитотропный эффект НФС представляется перспективным при лечении лимфоцитопенических состояний. Возможность такого использования фактора установлена нами на моделях пострадиационной и стероидной лимфоцитопений.

У. сублетально облученных мышей СВА. уже в первые дни после радиационного воздействия развивается лейкопения и снижается содержание гемоглобина в крови. Введение животным в первые 3 дня после облучения внутрибрюшинно по 5 мкг на животное ШС ускоряет восстановление числа лейкоцитов в крови,и к 21-му дню их количество нормализуется, Увеличение лимфоидних клеток в периферической крови опытных мышей отмечается со 2-го дня после облучения. Содержание гемоглобина в крови облученных мышей, получавших НФС, почти нрираз-

ниаалось к показателям интактных животных, у. контрольных мшей его содержание оставалось пониженным и на 21-й день.

Таким образом, при остром лучевом поражении организма НФС способствует восстановлению лимфоцитообразования и предупреждает снижение уровня гемоглобина в крови. Поеледнее обстоятельство свидетельствует и о вероятном влиянии фактора на красный росток крови.

Лимфоцитопоэз у мышей со стероидной лимфоцитопенией, обусловленной внутрибрюшинным введением животным 1,2 мг суспензии гидрокортизона, исследовали на 9-й день после 3-дневного введения по 5 мкг ШС. Воздействие гидрокортизоном приводило к инволюции тимуса и селезенки, масса которых соответственно составляла 38,7 и 64,3 % от массы органов интактных животных, количество клеток снижалось на 50 и 31,7 К этому сроку у опытных мышей масса исследуемых лимфоидных органов и содержание в них клеток приравнивались к показателям здоровых животных.

Результаты проведенных исследований позволяют заключить, что НФС играет важную роль как в физиологической, так и репаративной регенерации Т-лимфоцитов и заслуживает внимания как возможное фар-макотерапевтическое средство.

Роль НФС в формировании иммунологической активности лимфоцитов.

Стимулируемое НФС увеличение функционально активных Т-клеток отражается на развитии гуморальных иммунных реакций. Немногочисленные данные о влиянии спленина на иммуногенез носят противоречивый характер (С.С.Дячёнко и соавт., 1973; С.С.Дяченко, Н.А.Караванская, 1974; А.В.Шевченко, С.В.Покровская, 1980; В.Ф.Чеботарев и соавт., . 1982). Доминирует мнение, что отленин оказывает влияние на иммунные процессы, однако фактор, ответственный за реализацию эффектов, неизвестен. .

Установлено, uto премедикация мышей СВА НФС (3 дня по 10 мкг.

-гена животное) за 5 дней до сенсибилизации эритроцитами барана досто-

п

верно повышает до 11,1 + 0,25 х 10 количество спленоцитов (в контроле 7,88 ¿0,16 х 10' на орган) и на 64 % (Р / 0,001) - содержание антителообразующих клеток в селезенке. Максимум стимуляции приходится на 5-7-е сутки после сенсибилизации. Очевидно, стимуляция антн-телообразования на тимусзависимый антиген под влиянием НФС опосредована увеличением числа Т-хелперов.

Возможность образования неспецифических Т-супрессоров в процессе митогенного действия НФС была доказана на моделях немедленной аллергии у крыс и мышей при местной и общей сенсибилизации животных.

т

Как известно, спленин угнетает аллергические реакции (А.Ф.Захарова и соавт., 1976; С.В.Покровская, 1982).

При интраназальной премедикации крыс НФС за 35 мин до нанесения животным на слизистую носа аллергена пыльцы амброзии количество реагинов, определяемых через 48 часов в тесте дегрануляции базо-фшгов, в слизистой носовой полости было в 2,19 раза ниже, чем в контроле (Р 0,01), в слизистой трахеи - в 2,5 раза (Р [_ 0,001) и в легких - в 3,3 раза (Р / 0,001). Применение эквт хлентного количества раствора дихлорэтанового экстракта селезенки не оказывало влияния на развитие местной аллергической реакции.

При общей внутрибрюшинной аллергизации мышей линии ВАЬВ/о аскаридным антигеном-применение НФС, по данным реакции пассивной кожной анафилаксии, было эффективным при введении его за 3 дня до сенсибилизации, а также при одновременном назначен!;.-! с аллергеном. Введение фактора в более поздние сроки, не оказывало угнетающего влияния на развитие аллергической реакции.

В аналогичных условиях тождественный результат получен при применении небелкового фактора тимуса (Н1Т). Угнетение продукции 1£Ё- антител отмечалось при введении НФТ за 3 дня до сенсибилизации

мышей аскаридным антигеном и в условиях одновременного применения фактора с аллергеном.

У мышей с экспериментальной Е-гипериммуноглобулинемией НФС.не оказывал влияния на .уровень антител этого класса. Трансплантация

гу

•чким животным 2 х 10 интактных сингенных тимоцитов в 2,75 раза снижает уровень антител в крови (Р / 0,02). Такое же количество сингенных тимоцитов, активированных ин витро НФС, снижает уровень циркулирующих 1бЕ- антител у сенсибилизированных животных в 8 раз (Р/0,001).

Становится очевидным, что НФС, обусловливающий противоаллергическое действие спленина, подобно ФГА и Кон А (Р.В.Петров и соавт., 1979; Б.Д.Брондз, 1980;«^Кпарр,В.Рово1г, 1980; З.Зт1Ш et а!., 1984) и НФТ (И.А.Безвершенко, 1978; И.А.Безвершенко и соавт., 1977, 1978) как митоген стимулирует образование антигеннезависимых Т-клеток-супрессоров. Действие индуцируемых фактором супрессоров проявляется в продуктивную фазу иммунного ответа. Непосредственного влияния на секрецию антител фактор, вероятно, не оказывает.

Антигенспецифический фактор тимуса, подавлйющий продукцию антител (т.Тадя е* а1 1973), полученный методом аффинной хроматографии на колонке с иммобилизированным аллергеном, в условиях ак-тибации супрессорной активности Т-лимфоцитов НФС у сенсибилизированных мышей не образуется. • ■

Поскольку подавление продукции антител у сенсибилизированных мышей опосредовано стимуляцией Т-лимфоцитов-супрессоров,' о чем свидетельствуют опыты с переносом тимоцитов, активированных НФС, последний может быть использован для регуляцииз^е- антитело-генеза в организме без риска повреждения гемопоэза, присущего им-мунодепрсссайтам других классов.

' Такил образом, НФС является эффективным средством регуляции

IgE- антителогенеза, определяет противоаллергическое действие спле-пина и как самостоятельный препарат может найти применение в клинической практике.Преимущество его заключается в относительной химической гомогенности, отсутствии антигенности и возможности наружного применения в виде орошений на слизистые обйлочки дыхательных путей.

Суммируя полученные результаты, мы считаем, что уровень пролиферации Т-клеточной популяции в целом.является важным механизмом регуляции интенсивности иммунных реакций, и это явление может быть использовано для направленного изменения иммунного ответа «да в экспериментальных, так й клинических условиях. Для достижения этой цели НФС, как и НФТ, является весьма эффективнымтк специфический и естественный митогённый фактор Т-лимфоцитов. Применение фактора представляется целесообразны!'« во многих случаях иммунодефицита, развивающегося в результате нарушения процессов пролиферации Т-клеток, а также'в качестве иммунодепрессора при аллергических и аутоиммунных заболеваниях.

2. Действие спленина и не'белковых факторов отленина и тимуса на функциональное состояние печени.

Влияние спленина на функциональное состояние печени у нормальных животных.

В связи с разделяемым рядом авторов (Г.К.Хрущев, 1945; А.Г.Бабаева, 1973,1985; Г.Я.Свет-Моздавский и соавт., 1974; В.Т.Аитонен-ко, 1982; И.Ф.Колпащикова, 1982; А.Н.Чередеев и соавт., 1988;и.Р11в-kin E.Prshn, 1975; d.Green,T.Wegmann, 1986) представлением, что лим^оидная система, наряду с иммунной функцией, оказывает трофическое действие на органы и системы организма, а также, учитывая тесную анатомическую и функциональную взаимосвязь селезенки и печени (Л.Н.Геллер, I9G4; М.Е.Комахидзс, 1971; Л.М.Гольбсрг, 1977), представлялось цгл»сообразнш исследовать, какую роль в зтом лзаи-

- 22 -

модействии могут играть активные факторы селезенки.

Одним из показателей функциональной связи между селезенкой и печенью служила активность секреторной функции печени. Наблюдения ряда авторов (Н.А.Пчелина, 1927; Я.В.Янковская, 1949 и др.) о снижении секреторной функции печени в ранние сроки после спленэктомии подтверждают адекватность такого подхода.

В исследованиях на собаках с желчнопузырнодуоденальными фисту- ■ лами при 3,5-часовом наблюдении было установлено, что как подкожное, так и внутривенное введение спленина усиливает секреторную и экскреторную функции печени. Внутривенное введение препарата было более эффективным.

Секреция желчи после подкожного введения 2 мл спленина увеличивается на 36,7 %, а после внутривенного - на 77,1 %. Выделение холестерина за опытный период после подкожного введения спленина увеличивается на 17,2 %, после внутривенного - на 60,2 %, .желчных кислот - на 12,4 и 76,7 % соответственно. Экскреция билирубина с желчью на 84,5 % превышала контрольные показатели в опытах, при подкожном применении спленина и на 372,3 % - при его внутривенном введении.

Стимуляция секреции желчи после введения спленина обнаружена также у крыс. У наркотизированных барбамилом животных с канюлиро-ванн1лл желчным протоком после 14-дневного введения спленина секреция желчи повышалась до 6,2 + 0,55 мг/мин/ЮО г массы тела при 5,0 ,± 0,51 в контроле (Р / 0,05), секреция солей желчных кислот составляла 1,9 + 0,01 мг/час/100 г массы тела, в контроле - 1,29 + ^ 0,009 (Р ¡_ 0,05), изменения в экскреции билирубина были недосто- ' верными.

Проявление холеретического действия спленина у собак вскоре после введения препарата свидетельствует о возможном непосредствен-

ном его влиянии на паренхиму печени либо опосредованном активацией функции коры надпочечников (С.Г.Гасанов и соавт., 1981; И.Ф.Лабунец, Ю.А.Гриневич, 1987;н.Вевес1отвк1 et а1., 1981,1985). Так, гидрокортизон стимулирует желчеотделительную функцию печени (Н.П.Скакун, 1960; П.С.Лященко, 1972). Продолжительное введение спленина сказы-, вается и на протеиногенезе в печени.

Данные о роли спленина в регуляции белкового состава сыворотки крови неоднозначны (Г.К.Валуева, Н.С.Кузнецова, 1963; И.И.Африканов, А.П.Ильиных, 1975). Исследования функциональных групп белков, в частности содержания реактивных тиолов, обеспечивающих протыкание многих жизненных процессов, в том числе и клеточного деления (Д.Мэ-зия, 1963; И.А.Алов, 1969), показали, что после 6-кратного введения крысам спленина достоверно повышается уровень суммарных сульфгид-рильных групп в печени и составляет 2,46 ±0,09 мкМ на 100 мг сырой ткани при 2,05 + 0,06 мкМ/100 мг сырой ткани у контрольных животных. Изменения обусловлены увеличением количества белковосвязанных ЗН-групп. Уровень общих небелковых ЗН -групп увеличивается незначительно, лишь концентрация глутатиона была достоверно выше (151,6 + 8,1 мг/100 г сырой ткани в опыте при 121,5 ± 3,4 мг/100 г сырой ткани в контроле). Содержание сульфгидрильных групп в почках, скелетных мышцах и мозге крыс после введения спленина не изменялось.

Спленэктомия, наоборот, приводит к снижению еульфгидрилъннх групп в печени мышей с 2,35 + 0,06 мкМ/100 мг сырой ткани у интакт-ных животных до 1,97 + 0,07 мкМ/100 мг сырой ткани после удаления селезенки. Эти изменения обусловлены снижением реактивности тиолов белков.

Таким образом, увеличение содержания белковосвязанных сульфгидрильных групп в печени при воздействии спленином, вероятно, является отражением усиления протеиногенеза и пролиферативньк процессов в органе.

Влияние слленина на функциональное состояние печени при экспериментальном ее повреждении. •

Эффективность слленина в клинике при гепатитах и циррозах печени (Н.Н.Аплетоэа, 1963; В.Н.Згжебловская, А.Н.Блавдзевич, 1964, ' 1965; А.А.Вержховская, 1066) послужила предпосылкой для изучения механизма его действия на ряде моделей поражения органа.

Применение слленина у крыс при воспроизведении экспериментального токсического гепатита в виде премедикаций перед введением гепатотропного яда, при одновременном введении препарата с ток-лом, а также после затравки животных обнаружило его терапевтическую эффективность только на фоне развившегося токсического поражения печени. Шестикратное введение животным с токсическим гепатитом слленина полностью восстанавливает способность печени поглощать ЕСФ из крови, а у некоторых животных она превышала исходные показатели. У здоровых животных препарат не влиял на скорость очищения крови от красителя.

Элиминация БСФ из крови при абсолютной специфичности аю поглощения гепатоцитами ( С.К1ааввеп,а.И.аа, 1982) зависит от скорости доставки красителя к пек ми, количества протекающей через синусоиды печени крови, интенсивности поглощения красителя печеночными клетками и экскреции его в желчные пути (Л.Вгаиег,Е.Реааои1, 1950; В.СошЬеа, О^аквХит, 1962). СС1^ повреждает большинство упомянутых механизмов и, в первую очередь, целостность гепатоцитов (А.Ф.Блюгер и соавт., 1962; И.В.Шуст, 1967; С.М.Дроговоз, 1971; М.Н.Ханин, Т.Г.Манкус, 1973).

Обнаруженные эффекты не определяют конкретную точку приложения слленина, _однако позволяют предположить, что препарат повышает функциональную активность печени путем стимуляции ропаративной ре-гснерацш*. Введение слленина затравленным животнш уменьшает содрр-- липид'Н! .. печени до 14,4 + 1,35 г,р при 17,88 + 0,93 г,: в

контроле (Р £ 0,05), уровень гликогена увеличивается до 1292 ± 180 иг%, в контроле - 497,72 + 84,4 мг$ (Р ¡_ 0,01). Концентрация белка и глутатиона не изменяется. Секреция желчи после лечения спленином превышала показатели штатных животных - 6,9 ± 0,2 мг/мин/ЮО г массы тела при 4,9 + 0,028 мг/мин/ЮО г массы тела в контроле (Р / 0,001). Восстанавливалась и экскреция БСФ с желчью. За первые 30 мин наблюдения с желчью опытных животных выводилось столько же красителя, как и у интактных, и несколько меньше на протяжении второго получаса. За второй час опыта у животных всех групп экскрети-ровалось практически одинаковое количество БСФ. Всего за два часа наблюдений у опытных животных с желчью выводилось лишь на 14,5 % БСФ меньше, чем у интактных животных (Р 7 0,05). Однако соотношение парных соединений красителя в желчи оставалось на уровне показателей контрольных животных. Угнетение комплексообраэования БСФ с глу-татионом при повышенном содержании последнего в печени крыс с токсическим гепатитом, вероятно, связано со снижением активности фермента конъюгации - глутатион-з-арилтрансферазы (в.Оаиа е* а1., 1973). Непрямым подтверждением этого предположения является низкий уровень белка в печени.

Восстановление спленином большинства исследуемых показателей функционального состояния-печени у крыс с токсическим гепатитом убеждает нас в гепатотропном действии препарата.

Наряду с этим следует отметить, что эффективность спленина при токсическом гепатите у крыс зависит от дозы препарата. Увеличение эффективной (0,25 мл/100 г массы тела) дозы препарата в 2,5 раза явно усугубляет течение патологического процесса в печени. Задержка ЕСФ в крови увеличивается до 30,7 + 3,06 % при 18,4 I,39% в контроле (Р ¡_ 0,001). Экскреция красителя за первые 30 мин наблюдения в мг/100 г массы тела составляет 1,97 ¿'0,25, в контроле -

- 26 - ■

2,83 + 0,31 (Р / 0,001), секреция солей желчных кислот в мг/час на " 100 г иассы тела составляет в опыте 1,56 + 0,08, в контроле - 2,09 +'0,06 (Р / 0,001).

Следовательно, несмотря на полную безвредность спленина для здоровых животных (В.П.Комиссаренко, 1961),- завышение доз препарата при некоторых заболеваниях может усугублять течение патологического процесса. Этот факт обусловливает необходимость дифференцированного подхода к подбору доз спленина в клинической практике.

Роль кортикостероидной регуляции восстановительных процессов

в печени при ее поражении СС1^.

Одним из механизмов терапевтического действия спленина на печень, как упоминалось выше, может быть стимуляция препаратом глю-кокортикоидной функции надпочечников (Т.К.Валуева, Н.С.Кузнецова, 1963; С.Г.Гасанов и соавт., 1981; Н.Ф.Лабунец, Ю.А.Гриневич, 1987; Н.Веве<1оУ8к1 вt а1,, 1985). Поэтому было изучено влияние различных "доз гидрокортизона на,восстановление функции печени при токсическом ее поражении.

Токсическое действие СС1^ на организм сопровождается угнетением функции коры надпочечников и приводит к кортикостероидной недостаточности (Н.Ф.Колпащикова, 1970), которая усиливает деструктивные процессы и ослабляет репаративные возможности паренхимы печени (Г.С.Якобсон, 1971).

Шестикратное введение крысам с токсическим гепатитом по 4 мг/кг гидрокортизона способствовало более быстрому восстановлению поглотительной функции печени - скорость элиминации БСФ Из крови достигала уровня здоровых животных. Вшалогичных условиях введение^ по 12 мг/кг гидрокортизона лечебного эффекта не оказывало.

Нормализация поглотительной функции печени у крыс с токсическим гепатитом после введения 4 мг/кг гидрокортизона свидетельствует, что препарат в мальве дозах оказывает протииовоспалительное

действие, обеспечивает восстановление протеиногенной и гликогенооб-разовательной функций печени (М.С.Лейтес, Г.Т.Павлов, 1958; С.М.Лей-тес, Г.С.Якушева, 1959), усиливает ее регенерационнуго способность (Н.В.Щуст, 1967), а также стимулирует родоначалъные кроветворные клетки (О.О.Ромашко и соавт., 1979).

Приводимые аргументы позволяют усматривать в механизме действия гидрокортизона при токсическом гепатите два возможных пути -непосредственное влияние на паренхиму печени и опосредованное через стимуляцию лимфоидной системы.

Подавление спленином развития аллергического внутрипбаночного

холестаза.

Возможность участия аллергических реакций немедленного типа в генезе патологических изменений в печени была предпосылкой для изучения роли спленина в развитии аллергического внутрипеченочного холестаза. Развитие последнего часто является следствием длительного применения андрогенных гормонов и их синтетических производных (3.А.Бондарь, 1969; Ф.И.Комаров, В.В.Щедрунов, 1970; Н.Н.Волков, 1972 и др.), а его аллергическая природа установлена недавно (¥.¡Игорем а1., 1986).

Моделируемый путем скармливания неробола (10 мг/кг) внутрипе-ченочный холестаз у крыс характеризуется угнетением секреторной, экскреторной и поглотительной функций печени. Метаболизм БСФ в печени при этом не изменяется. Введение неробола приводит также к опустошению лимфоидных органов у крыс - существенно уменьшается масса тимуса, на 32,5 % снижается его клеточность.

Сочетанное применение с нероболом экстракта селезенки спленина снижает его побочное действие - ослабляет негативное влияние неробола на секрецию, желчи, солей желчных кислот и полностью предупреждает нарушение элиминации и экскреции ЕС$.

Однако воздействие спленином оказалось недостаточн'-™ при ин-

- аддукции аллергического холестаза у крыс метилтестостероном (5 мг/кг), холестатическое действие которого сильнее неробола.

Рассматривая монооксигеназную систему организма как одну из определяющих в развитии аллергических реакций (И.Е.Ковалев, О.Ю.Полевая, 1985), мы воспользовались классическим ее индуктором - фенобарбиталом с целью подавления развития аллергического холестаза. Оказалось, что стимуляция цитохрома Р-450 фенобарбиталом повышает толерантность крыс к холестатическому действию метилтестостерона. Секреторная и экскреторная функции печени животных, получавших одновременно с метилтестостероном фенобарбитал, была такой же, как и у интактных животных. Отмечалась лишь незначительная задержка элиминации БСФ из крови.

Нам представляется, что в условиях проведенных экспериментов, согласно концепции Н.Е.Ковалева и О.Ю.Полевой (1981,1985), продолжительное введение больших доз неробола или метилтестостерона перекрывает метаболические возможности оксигеназной системы. В результате лекарственное вещество биотрансформируется частично либо вовсе не изменяется. Это приводит к неферментативному синтезу коньюги-рованных антигенов в самом организме. Роль ranтена вшолняет введенный андроген или его метаболит; а роль носителя - макромолекулы организма.(белки). Коньюгированный антиген индуцирует синтез антител, специфически связывающих опасные для клеток химические соединения. При этом, наряду с нормальным иммунным ответом на антиген, возникают условия для развития аллергических реакций немедленного типа. Одной из возможных причин их возникновения может быть опустошающее действие на тимус больших доз неробола и метилтестостерона, и, в первую очередь, на образование Т-клеток-супрессоров, обладающих высокой цитохромоксидазной активностью (А."В.Караулов и соавт., 1984) и способностью угнетать образование igE -антител (И.С.Гущин

- 29 -

и соавт., 1982; Г.В.Порадин и соавт., 1982 и др.).

При аллергических реакциях снижается уровень цитохрома Р-450 в микросомальной фракции печени (И.Е.Ковалев и соавт., 1982). Его количество резко понижено после взрослой тимэктомии, а такжо у бестимусных мышей (А.В.Караулов и соавт., 1902; А.Н.Саприн и соавт., 1982). Индукторы пролиферации Т-лимфюцитов (Кон А и ФГА) в 5-6 раз повышают содержание цитохрома Р-450 в этих клетках (А.Н.Саприн и соавт., 1982).

Спленин, оказывая мнтогенный эффект, усиливает образование Т-клеток-супрессоров, подазляющих продукцию 1{5Е -антител, и, вероятно, тем самым обогащает организм субпопуляцией Т-клеток с высокой активностью цитохрома Р-450. Логично предположить, что при этом увеличивается цитохромоксидазная активность в микросомах печени и других тканей организма. В этом убеждают полученные нами дашые о снижении на 34 % содержания цитохрома Р-450 в печени спдэнэктомировпл--ных животных и его восстановлении после стимуляции иммунной системы небелковым фактором спленина.

Становится очевидным, что развитие внутрипеченочпого аллергического холестаза зависит не только от состояния иммунной, не и ци-тохромоксидазной системы. Экстракт селезенки спленин и его небелковый фактор представляются эффективным инструментом регуляции кпк иммунной, так и монооксидазной систем, и могут определять состоять-1 обезвреживающей функции печени.

Влияние спленина на функциональное-состояние печени облуч'-и-

ных животных.

Среди факторов воздействия на иммунную систьчу организма особое место занимает ионизирующая рпдипцип. Последствием с? влиянии ягляетсл нарушение и функции печени (В.А.Р.'УУШча ч соавт., 1956; Н.Я.Д.'ябко, 1902; Н.П.Скмкун, С.М.Дрогопо.-., 1370; Г.К.ГН-аллот, 1971). Улу-'ш-чип се Д'-яттльнооти в эти-; улонтгж.ч-шю дост.ги»

введением спленина (В.И.Гузь и соавт., 1960; В.П.Комиссаренко, 1961; Л.И.Кореневский и соавт., 1964,1973). В поисках возможного механизма действия препарата мы исследовали влияние спленина на секреторную, поглотительную и экскреторную функции печени у крыс после дробного (100 Р) семидневного рентгеновского облучения.

Характерными изменениями у крыс после облучения были снижение скорости элиминации ЕСФ ¡. крови и усиление секреции желчи, в метаболизме красителя наблюдалось уменьшение его парных соединений с глутатионом и увеличение конъюгации с цистеинилглицином и цистеином.

Введение животным после каждого сеанса облучения спленина предотвращало снижение элиминации ЕСФ из крови при одновременном повышении секреции желчи. Изменения в образовании парных соединений БСФ' были несущественны. . ..

Особого .'внимания заслуживает восстановление спленином содержания небелковых тиоловых соединений, в печени.

По данным морфологических исследований, в печени облученных животных, получавших .спленйн, в отличие ог контрольных:, дистрофические изменения выражены слабо - отчетливо.определяется Трабеку-лярность долек, и структура гепатоцитов близка к норме.

Изложенные факты позволяют заключить, что'спленйн предотвращает возникновение морфо-функциснальных изменений в печени при общем дробном рентгеновском облучении, и являются экспериментальным обоснованием клинического применения препарата при лучевой терапии. Действие препарата, по-видимому, обусловлено его способностью поддерживать в организме относительное постоянство субпопуляционного состава Т-лимфоцитов.

Влияние спленина на перекисное окисление липидов.'

Исследовали влияние спленина на образование одного из патогенетических факторов поражения печени при воздействии СС1^ и ионизи-

рующей радиации - порекисей липидов - в модельных условиях (В.Б.Спи-ричев, 1975). Было обнаружено угнетающее действие препарата на индуцируемое витамином Д£ развитие свободнорадикальных процессов в мембранах эритроцитов. Антйперекисное действие спленина находилось в прямой зависимости от количества внесенного в инкубащоннуго среду препарата. Это обстоятельство позволяет предположить, что угнетение спленином свободнорадикальных процессов в мембранах эритроцитов, как и их стабилизация при механическом повреждении (Е.Б.Нечаева,

1978), осуществляется липидной фракцией препарата и в условиях при-

1

менения на целостном организме, вероятно, существенной роли не играет.

Роль небелковых факторов селезенки и.тимуса в функциональном

восстановлении печени при.экспериментальном гепатите.

На основании приведенных доказательств влияния спленина на ряд функций печени у нормальных животных, а также их восстановление при некоторых, формах экспериментального поражения органа была изучена роль HIC в реализации восстановительных процессов при экспериментальном токсическом гепатите..

Шестидневное введение крысам с пораженной CCI^ печенью по 100 мг на 100 г массы тела 1ЙС восстанавливало интенсивность желчеот-делительного процесса с 4,77 ± 0,21 мг/мин/100 г массы тела до 6,3 + 0,23 мг/мин/100 г массы тела (Р ¿ 0,001). Экскреция БСФ с желчью в течение первого получасового периода наблюдения почти в два, раза превышала показатели контрольных животных (Р ¿ 0,001). За вторую половину часа с желчью опытных животных выделялось.несколько мень- ■ ше красителя, чем у контрольных животных. За второй час экскреция красителя у опытных крыс была достоверно выше, чем в группе контрольных тавотных (Р [_ 0,001).

■ Принимая митогенноо действие небелковых факторов спленина и

тимуса иа Т-лимфоциты за основу их биологического действия на организм, в том числе и на пораженную печень, представлялось целесообразным определить роль трансплантированных сингенных тимоцитов в воспроизведении гепатотропного действия изучаемых факторов.

Через V дней после трансплантации крысам с экспериментальным токсическим гепатитом 20 х 10^ интактных сингенных тимоцитов интенсивность секреции желчи восстанавливалась, однако не достигала уровня интактных животных. Экскреторная функция печени оставалась пониженной в первый час экскреторного процесса и сохранялась на уровне контрольных животных в течение второго часа экскреции.

Трансплантация в этих условиях взвеси активированных ин витро НФТ сингенных тимоцитов приводит на 8-й день к полному восстановлению изучаемых функциональных показателей печени. Секреция желчи в этой группе крыс не только восстанавливалась, но и имела тенденцию к превышению показателей интактных животных. Такую же закономерность наблюдали при определении экскреции красителя в желчь.

Таким образом, трансплантация тимоцитов здоровых доноров животным с экспериментальным токсическим гепатитом значительно усиливает восстановительные процессы в поврежденной печени, что согласуется с данными И.Ф.Колпащиковой (1979). Полное восстановление секреторной и экскреторной функций печени отмечалось у реципиентов, получавших тимоциты, активированные НФТ. Это позволяет заключить, что Т-лимфоцитам принадлежит решающая роль в процессах восстановления функции печени при токсическом гепатите.

Исследование пролиферативных процессов в печени здоровых крыс спустя 18 часов после введения НФС обнаружило дозоэависимое повышение включения 3Н-тимидина в нуклеиновые кислоты клеток органа. Запаздывание в проявлении митогенисго действия фактора на клетки печени свидетельствует о возможной опосредованности его механизма.

Д-.-кяэат^льотв прямого действия -'актера на пр-.>п1!-}',рптирнч'> ир-ч«"":': в печени пека не получено.

Таким образом, небелковые факторы, получен»"«? !>з спленина и тимуса и обл?дяпци<? мит^грцщм, т"/унсмедулирур|щим и ггпятотртрн-'« дс üctbhom, представляется п^рчюктирнши сродетвчмн для фармак-ло - • пг'согой коррекции нарушенного гомоослаза при рдаунодефицитн'-гс состояниях н заболеваниях печени. Идентичность фпзико-хичпчпеких свойств и биологического действия небелковых факторов спленина и тимуса позволяют характеризовать их как небелковый фактор лит/фе'.'д-Н"й ТКаНИ.

3. Роль фрагментов плазматических мембран тиноцитов в реализа-1ЩИ супрессорной и гепа-готропной функций небеткокпго фяктч-ра личфеидной ткани.

Во взаимодействии оффекторшя клеток иммунной системы существенная роль принадлежит Функциональным структурам Т-клеточите -ран. Их активность проявляется но только в состав" плазматических мембран клеток, но и при свободной циркуляции г. кропи в качостпо р'туляторш.-х молекул (ff.Fridraan ot al., 1981). Количество и пктип-ность Фзик!11!ональн!'х молркул момбр»жнмс структур суп^стрг-нно изгоняются при воздействии на Т-лимфоциты митогеиами. Их роль как компонента плазматической мембраны била игсл»допана при рассмотри«™ механизма действия нс-белР-опего фактора лнмфоидной ткани на мад«-лв -■'ллергги не.медленного т:па, а так*'? при вждориттоллыгоч токсическим гт'.ап'те.

¡¡¡■..рпп-ос-П'^-чее эгсу ''рар;ч1тел'.-ное и^учени» плазматических т;<*мбран, получ' нчнх пр<-ппр/пига»г» путем после мг.^чнлисского pi.apy-

Kt'-TuK и мгТ'-.н"" ог,тт1'"»"т'п с тнмонитст при J!3 °С в прочее--с; J--'->'-eiie¡i i"-'.1 "vh г за';,-?-Ч" пнем "зiíе'сни'-'Гем раег>->р" !:г, --'U' '''Ч-' ni.'<y!i'!M, г i;: V!' "' • H'-jl' ■■•"-

дукта, содержат меньше белка, а по активности маркерного фермента 5-нуклеотидазы приравниваются таковш, полученным препаративным путем.

. Максимальная активность 5!-нуклеотидазы установлена в плазматических мембранах наименее плотной популяции тимоцитов.

Установлено также, что активность ацетилхолинэстер&зы присуща только Т-клеточной популяции лимфоцитов и пропорциональна степени зрелости клеток. Больше половины ее клеточной активности обнаруживается в мембранной структуре. Повышение энэиматической активности в спленоцитах под влиянием НФТ указывает на роль митогена в созревании Т-клеток.

Таким образом, активность 5-нуклеотидазы и аце тилхолинэстеразы фрагментов плазматических мембран являются не только их маркерами, но и критерием физиологической зрелости Т-лимфоцитов.

Внутривенное введение животным с токсическим гепатитом фрагментов плазматических мембран тимоцитов, снятых нагреванием в бессыво-

Р

роточной среде с 5 х 10 клеток, воспроизводит в те же сроки действие небелкового фактора лимфоидной ткани по восстановлению секреторной и экскреторной функций печени. Функциональной структурой плазматической мембраны тимоцитов, опосредующей ее гепатотропное действие, по нашим представлениям, являются Рс^-Р. Их количество в снятых нагреванием плазматических мембранах может быть достаточно высоким, т.к. они обнаруживаются на 25 % клеток тимуса ( A.Basten et al., 1975). При воздействии небелковых митогенов лимфоидных органов количество несущих Рс^-Р клеток значительно увеличивается за ^ счет образования субпопуляции Т-супрессоров. В этих-условиях не исключена возможность свободной циркуляции Fc^-Р в крови в форме активньх молекул.

Возможная экспрессия циркулирующих Pcj-P на клетках печени

после внутривенного введения животным с токсическим гепатитом фрагментов плазматических мембран создает условия для образования на их поверхности с Fc -Р комплексов антиген-антитело. Вновь образованные комплексы, вероятно, осуществляют стимуляцию пролиферации клеток печени (А.Г.Бабаева, 1985; B.Morgan et al., 1986) и тем самым способствуют восстановлению ее -структурно-функциональной целостности, нарушенной введением гепатотоксина.

Введение фрагментов плазматических мембран тимоцитов сенсибилизированным аскаридным антигеном мышамвАХВ/С в количестве, соответ-й

ствуицем 10 тимоцитов, .уже через 6 дней приводит к 10-кратному снижению уровня igB -антител в плазме крови. Угнетение IgE- антите-лообразования, по нашим представлениям, в первую очередь связано с образованием неспецифических Т-клеток-супрессоров в результате экспрессии поступивших с фрагментами мембран Рс^-Р на циркулирующих • Т-клетках организма.

Кроме того, ypoBeHblgE- антител.в крови лимитируется содержанием IgE- связывающего фактора. Его продукция зависит от Т-лимфоци-

I

тов и опосредуется растворимыми факторами, освобождаемыми активированными митогенами Т-клеткями. Большая 4acTbIgE- связывающего фактора имеет В-клеточное и моноцитарное происхождение ( G.Deple-spesse et al., 1987) и содержит общие антигенные детерминанты с

( T.Klsaki et al., 1987; T.lfakayima et al., 1987). Это обстоятельство свидетельствует об их структурной и функциональной схожести.

Учитывая упомянутые новые данные литературы, га предполагаем следующий механизм подавления продукции IgE- антител небелковчм фактором лкмфоидной ткани. Стимулированные фактором пред>;гетр°!нч!~ ки Т-лто«£оцчтоп в процессе пролиферации и диффсренцкровки, наряду

с сбрапопт'ием носпчкфгрчясдх Т-кл^ток-супрессоров. отд-лг«т йгу-

•i. i-, J«MC'HUP>*JIVUÍ обетование igg-еня-лшг.а.ще^о фактора (экспрессии на лимфоцичах, макрофагах и моноцитах.

Посредством Fcj-P осуществляется связывание циркулирующих анштол, а ьоэмоуно, и угнетениеДвЕ- антителогеиеза. Стимулируемый шпчн-еном Т-лимфоцитарный фактор - индуктор образования и экспрессии Рсу-Р, вероятно, является растворимым компонентом отделяемых нагреванием фрагментов плазматической мембраны тимоцитов. Введение его в составе плазматических мембран сенсибилизированным аскарид-ньн антигеном животным стимулирует вышеизложенные процессы, приводящие к cBranaaHiiHlgE- антител.

Полученные результаты позволяют заключить, что гепатотрошюе и ишуномодулируклцее действие небелкового фактора лимфоидной ткани опосредовано функциональными молекулами плазматических мембран Т-лимфпцитов. Их регуляторная роль распространяется как на лимфоид-ньо, так и нелиыфоидные клетки. Возможность замены функции Т-Лимфо-Г|И1ов фрагментами их мембранных структур формирует предшсылки для создания иымунокорригирующих средств нового типа - препаратов специфических мембранных структур, свойственных отдельным популяциям лимфоцитов - и использования их для направленной иммунокоррекции дефицита той или иной клеточной субпопуляции.

вывода

1. Активным началом спЛенина, ответственным за его лимфоцито-тропное и гепатотропное действие, является фактор непетидной природы, обладающий митогенной активностью но отношению к спленоцитам и ишоцптам. Этот фактор веделен из сп Ленина.

2. По физико-химическим свойствам и биологическому действию небелковый фактор спленина, контролирующий пролиферацию Т-лимфоци-тоь, аналогичен фактору, полученному из тимуса, что свидетельствует с независимости активации митогенной активности Т-лимфоцитов в ти-

мусе и селезенке.

3. Фактор обладает способностью усиливать в организме,продукцию igG— антител и подавлять образование иммуноглобулинов класса Е, что обусловлено стимуляцией хелперной и супрессорной функций Т-лим-

фоцитов.

4. Непептидный фактор спленина стимулирует синтез ДОК в'печени здоровых и цитохрома Р-450 у слленэктомированных животных, а также ускоряет восстановление секреторно-экскреторной функции печени при экспериментальном токсическом гепатите.

5. Гепатотропное действие негнтгидного футора, выделенного из спленина, опосредовано Т-лимфоцитами, в частности отделяемыми ими фрагментами плазматических мембран.

6. Супрессорное действие фактора на синтез1вВ- антител воспроизводится отделяемыми от Т-лимфощ1Тов фрагментами плазматических мембран.

7. ïàKTep устраняет лимфоцитопению, обусловленную воздействием рентгеновских лучей и введением болыниз доз глгскокортикоидов, а также предупреждает нарушение структуры и функции печени у облучен-Н'ТС животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИИЮВАННИХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние спленина на очищение крови от брсмсульфофталеина при экспериментальном токсическом гепатите.// Bortроен эндокринологии и обмена веществ. В.I.-Киев.-1970.-С.75-77 (соавт. А.В.Шевченко).

2. Методика оценки функции печени у крыс бромсульфофталеиновш методом.// Вопросы эндокринологии и обмена веществ. В.1.-Киеч.-1Э70. -C.I00-II0.

3. Вплигз спленТну на сульфг1дрильн1 групп печ1нки та селез1нки.// Ло1ел.т/рн.ЛН yFCP.-I97I.-T-2.-С.222-224 (соавт. А.Я.Месточкина, Л.М.Кончякевская, Т.В.Якубович).

- 38 - ■ . •

4. Вплив спленектомН на bmIct сульфг1дрильних труп б1лк1в I неб1л-кових т1олових сполук печ1нки ыишей. // Допов1д1 АН УРСР.-1972.-№б. -6.454-456 (соавт. А.В.Шевченко, А.Я.Местечкина, Л.М.Калинекая, Т.В.Якубович).

5. Влияние спленэктомии и спленина на содержание тиолов в печени. // Роль нервной системы в возникновении патологических процессов и их компенсации. -Ивано-Франковск.-1972.-СЛ40-141 (соавт. А.В.Шевченко).

6. Role of spleen factors In regulation of thiols level in liver. //7conferense of Europ. compar.endocrinol.,Abatr.,Budapest,1973,

P.92 ( соавт. A•V.Shevchenko)

7. Вплив спленГну на секрец1ю жовч1 та II х1м1чний склад у собак.// Ф1з1ол.журн.АН УРСР.-1974.-№б.-С.763-767 (соавт. й.С.Лященко).

8. Спленин в восстановлении экспериментального поражения печени.// Механизм действия гормонов.-Киев.-1975.-С.82-83. .

9. Новые данные о биологическом действии спленина.// Механизм действия гормонов..-Киев.-1975.-C.I20-I2I (соавт. А.В.Шевченко, В.И.Кравченко, И.И.Дроздович, Н.М.Дорошенко, В.Н.Демченко, Ю.В.Ткачук).

10. Снижение спленином побочного холестатического действия неробола у крыс.//Рукопись деп.-ВИНИТИ 18.X.1976. -№4036-77 (соавт. А.В.Шевченко, Н.М.Дорошенко, Т.В.Якубович).

11. Новые данные о биологическом действии спленина.// Эндокринология. -В.6.-Киев.-1976.-СЛ16-122 (соавт. А.В.Шевченко, В.И.Кравченко, И.И.Дроздович, Н.М.Дорошенко, В.Н.Демченко, Ю.В.Ткачук).

12. Влияние спленина на уровень тиоловых групп в некоторых органах ^ и тканях в норме и при экспериментальном гепатите.// Эндокринология. -В.7.-Киев.-1977.-С.60-64 (еоавт. Я.Г.Бальон),

13. Сравнительная оценка противовоспалительной активности спленина • и гидрокортизона при экспериментальном гепатите. // Тез.докл.II

- 39 -

съезда эндокринологов УССР. -Киев.1977.-С.57-58.

14. Некоторые особенности влияния гидрокортизона.на поглощение печенью бромсульфофталеина и содержание в ней глутатиона при экспериментальном гепатите.//. Фармакология и токсикология.-В.13.-Киев.-1978.-С.22-26.

15. Влияние спленина на обмен и- экскрецию бромсульфофталеина и секрецию желчи у крыс с токсическим гепатитом.// Физиол.журн.АН УССР.

-1978.-№1.-С.52-56.

16. Изучение рецепторов тимоцитов, ответственных за розеткообразо-вание.// Доклады АН УССР,.-Сер. Б.-1979.-С. 454-45? (соавт. И.А. Безвершенко, Л.М.Быкова, А.Л.Синельникова).

17. Выделение и свойства рецепторов плазматической мембраны тимоцитов.// Тез.докл.1У Всесоюзн.биохим.съезда.-Л.-1979.-С. 87 (соавт. И.А.Безвершенко, М.Г.Бойко, Л.М.Быкова, А.Л.Синельникова).

18. Рецепторы тимоцитов крысы, реагирующие с IgC и аутологичными эритроцита*™.//'4 Internat.congr.imWunol.,Abstr.tTaris-1980 (соавт. И.А.Безвершенко, М.Г.Бойко, Л.М.Быкова).

19. Побочное действие на печень препаратов андрогенного. ряда и его коррекция.// Тез.докл.13 Всесоюзн.конфер.-Киев.-1981.-С.185-186 (соавт. Н.Н.Кошель).

20. Взаимоотношения отделимых рецепторов тимоцитов, распознающих IgO и Н-2 детерминанты аутологичных клеток.// Молекулярная биология.-С.52-54 (соавт. И.А.Безвершенко, М.Г.Бойко, Л.М.Быкова, А.Л.Синельникова).

21. Активность 5-нуклеотидазы при воздействии факторами тимуса.// Матер.докл.III Всесоюзн.симпоз. "Регуляция иммунного гомеостаза". -Л.-1982.-С.273-274 (соавт. М.Г.Бойко, М.М.Гойдаш, А.А.Тарасова, И.А.Безвершенко).

22. Активн1сть 5-нуклеотидази I швидкГсть включения 3Н-тин1дину в

ДНК тиыоцит1в plaiiol щ1льност1. // Теаи 1У Укр.б1ох1м.з'1эду.-Киев. -1982.-С.125-126 (соавт. И.А.Безвершенко, П.М.Халявко, А.А.Тарасова).

23. Антиокислительная активность экстракта селезенки.// Тез.докл.

III съезда эндокринологов УССР. -Киев.-1982.-С.65 (соавт. H.H.Кошель).

24. Отбор тимоцитов, богатых 5-нуклеотидазой, при воздействии гидрокортизона.// Доклады АН УССР.-Сер.Б'.-1982.-ÍÍ6.-С.65-6? (соавт.

.И.А.Безвершенко, А.А.Тарасова).

25. Восстановление некоторых функций печени тимоцитами, стимулированными неполипептидным фактором вилочковой железы.// Системно-антисистемная регуляция в норме и патологии.-Киев.-1983.-С.I09-II0.

26. Обнаружение в дихлорэтановом экстракте селезенки митогенного фактора, подавляющего продукцию реагинов.// Тез.докл.5 Реслубл. кснфер.по аллергологии.-Киев-Ивано-Франковск.-1983.-C.I6I.

27. Активность отделяемой от клеток 5-нуклеотидазы в тимоцитах различной плотности.// Цитология.-1983.-И.-С.I06-II0 (соавт. А.А.Тарасова, И.А.Безвершенко).

28. Имцуномодулирующее и гепатотропное действие небелковых факторов лимфяидной ткани.// Механизмы иммуностимуляции./ Тез.докл.-Киев.-1985.-С.176-177 (соавт. М.М.Гойдаш, И.А.Безвершенко).

29. Небелковый фактор спленина.// Доклады АН УССР.-Сер.Б.-1985-JÍO.-C.70-72 (соавт. В.П.Комиссаренко, И.А.Безвершенко).

30. Небелковый фактор селезенки.// Регуляция иммунного гомеостаза./ Тез .докл. 1У Всесоюзн. симп .-JI.-I986. -С. 152-154.

31. 1мунолог1чна I троф1чна функцП фрагмент1в плазматично1 мембра-ни тимоцит1в.// Тез .доп.У Укр.б1ох1м.з'1зду.-Киев..-1987.-Ч.2;-С. 125-126 (соавт. М.М.Гойдаш, Л.В.Богданович).

32. Иммуномодулирующий фактор спленина.// Тез.докл.4 съезда эндокринологов УССР.-Киев.-1987.-С.272-273.

33. 1кшунофармакологически'й подход к модуляции образования IgE антител. //Тез .докл.6 Респ .конфер./ Актуальные вопросы 'иммунотерапии. -Ворошиловград.-1988.-С.147-148 (соавт. Л.М.Сквирская).