Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Регуляция биологических функций Т-лимфоцитов небелковым фактором лимфоидной ткани

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Регуляция биологических функций Т-лимфоцитов небелковым фактором лимфоидной ткани"



ОРДЕНА ЛЕНИНА АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНСКОЙ ССР /*А>

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ им. А. А. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи

ОЛЕЙНИК Борис Власович

УДК 612.438.018:612.418:612.112.94:612.017.12

РЕГУЛЯЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ФУНКЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ НЕБЕЛКОВЫМ ФАКТОРОМ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ

03.00.13 — физиология человека и животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

-- 'о*. Ло£№г.

КИЕВ —1989

Рабата вьполнена в Киевском научно-исследовательском гаститу-те эндокринологии и обмена веществ ИЗ УССР. - >

" " " Официальные оппоненты: _ - - - ,

доктор медицинских наук, профессор Н.М.Бережная

доктор биологических наук И.Н.Алексеева

член-корреспондент АМН СССР, профессор * . \ Г.М.Бутенко'

Ведущая организация: Киевский'Государственный институт усовершенствования врачей мз СССР:

Защита диссертации состоится __ 1989 г.

в__ часов на заседании специализированного совета Д 016.15.01

Института физиологии им. А.А.Богомольца АН УССР по'адресу: 252024, Киев, ул. Богомольца, 4. „'

С диссертацией можно оэналомиться в библиотеке Института физиологии им. А.А.Богомольца.

Автореферат разослан " "_;_ 1989 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

3.А.Сорокина-Ыарина

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Постоянство внутренней среди сргапизиа и значительной степени определяется состоянием лиы^оидной системы: уровнем лимфоцитопоэза и набором репертуара иммунокошотентных клеток.

Лимфоцитопоэз и его регуляция представляются малоизученными разделами кроветворения. К настоящему времени нет ясности в вопросе о факторах, контролирующих размножение различна популяций Т-кле-ток. В последнее время первостепенное значение б обеспечении роста и развития лимфоидных клеток стали'придавать факторам микроскруже-ния (А.Я.Фриденштейн, *1984; В.Н.Старостин и соавт., 1984). Поэтому поиск этих факторов занимает особое место.-

Как известно, очищенные полип ептидные тимические гормоны, способствующие дифференцировке, не обладают митогеннш действием (И.А.Безвершенко, 1978,1978а; В.А.Малыжев, I9Q2; H.Stepien et al., 1982;P.Andrews et al., 1985; Chen Wei i'eng et al., 1985) и не восполняют пула Т-лимфоцитов в организме, а также не обеспечивают полного восстановления врожденных или индуцированных форм иммунодефицита ( Я.Hong,1986).

Последствия неонатальной тимэктомии могут быть устранены имплантацией сингенного тимуса либо введением его грубых экстрактов (Q.Thurman et al. ,1975; М.Pesió, 1987). Однако заключение имплантируемого тимуса в непроницаемую для клеток камеру приводит лишь к восстановлению иммунологической реактивности ( R.Levey et al., 1963) Такая же закономерность наблюдается у неонатально тимэктомирован-ных животных во время беременности {Б.В.Попов и соавт., 1976; D.Oaoba, 1965).

Из этого следует, что факторы тимуса, регулирующие пролиферацию тимоцитов, проявляют свое действие внутри вилочковой 'железы и, вероятно, не покидают её (D.Oaoba, I965;P.ilac Cullach,I977). Ifx

^разование не связано с эпителиальными клетками тимуса (B.ffaksal et ai., 1Э75 ; ?. boor, L. Haag, 1977).

Вероятными регуляторами размножения клеток в тимусе, по современным представлениям, являются небелковый (И.А.Безвершенко и соавт.', .1972,1974; И.А.Безвершенко и соавт., 1987; Д.А.Ностадинов, 1973) и -пептидный ( O.SSder, 1985) факторы микроокружения.

Ведущая роль тимуса в обеспечении постоянства Т-клеточного состава организма, особенно в молодом возрасте, не вызывает сомнения, однако процесс Т-лимфоцитопоэза присущ и другим лимфоидным органам, и в первую очередь селезенке. Действительно, у неонатально тимзкто-мированных и генетически бестимусных мышей сохраняется фенотипиче-ская и функциональная дифференцировка Т-клеток (М.Г.Михна и соавт:, 1985; А.А.Ярилин, 1986; Chen Vfelieng et al., 1984;R.Mao Donald et al.'; 1986; Q.Randes,M.?alladino, 1986). '

Источником Т-клеток в селезенке могут быть предшественники Т-лимфоцитов, мигрировавшие из костного мозга, а также образующиеся в самой селезенке ( J.Kadieh.R.Basch, 1976). Под воздействием циркулирующих полипептидных факторов тимуса- - СТФ (M.Liardenne.J.-F.Bach,

1984) и оС/-тимозина (G.Chen et-,al., 1984), à также фактора, образующегося в тимусе и селезенке - ^-тимозина (в.Ногескег, 1984), полипептида спленина (T.Audhya et al., 1984) и, возможно, небелкового фактора селезенки (Т.К.Валуева и соавт., 1983) селезеночные предшественники Т-лимфоцитов могут дифференцироваться в Т-клетки.

У взрослых животных в процессе инволюции тимуса местом генерации Т-лимфоцитов становятся периферические лимфоидные органы. Митогенные факторы вилочковой железы, продуцируемые Т-лимфоцитами, действуют непосредственно в Т-клеточном микроокружении, т.е. ко-роткодистантны (И.А.Безвершенко, 1981). Поэтому следует ожидать, что подобные факторы продуцируются также в селезенке. Выделение

такого фактора, изучение его физико-химических свойств и механизма действия является назревшей задачей иммунологии.

Регуляторная роль лимфоидной системы и ее факторов распространяется и на соматические клетки. Концепция о единой гомеостатиче-ской роли лимфоидной ткани в организме включает как иммунологическую, так и трофическую ее функции в широком понимании этого термина (К.Г.Хрущев, 1945; А.Г.Бабаева и соавт., 1969; Г.Я.Свет-Молдавский и соавт., 1974; С.Соботка, И.Шимек, 1983; А.Г.Бабаева, 1985; А.НЛередеев и соавт., I988;M.Pliskin,a.PreJm, 1975; D.Green,

I.Hegmann, 1986).* . "

»

Механизмы морфогенетического влияния лимфоидной системы на »к лимфоидные клетки остаются неизвестными, но совершенно очевидно, что это сложный многокомпонентный процесс, включающий либо прямое взаимодействие лимфоцита и соматической клетки, или опосредованное растворимыми факторами, а возможно, и действием антител. Особая роль в этом плане принадлежит Т-клеточным митогенам, обусловливающим накопление эффекторных клеток иммунной системы. Специфические мембранные структуры активированных Т-лимфоцитов могут восполнять функции этого вида клеток. Актуальность познания роли небелкового митогенного фактора Т-лимфоцитов и их мембранной структуры в регуляции иммунной и ыорфогенетической функций предопределили задачи настоящей работы.

Исследования, представленные в диссертации, были начаты в 1966 г., когда сведения о гормонах и факторах- лимфоидной системы были еще немногочисленны, химическая природа их неизвестна. А используемый в практике отечественного здравоохранения препарат "спленин? представляющий собой дихлорэтановую вытяяку из селезенки, не имел научно обоснованной концепции его активного начала и механизма ■ биологического действия.

Цель работы. Выделение и изучение биологической активности не-белко'вого фактора микроокружения Т-лимфоцитов селезенки, сопоставление его с таковш из тимуса, установление механизмов их влияния на пролиферации, иммунологическую и гепатотропную функции Т-лимфоцитов, а также роли мембраны тимоцитов в механизме их дейстрия.

Задачи.

1. Провести комплексное изучение особенностей биологического действия препарата "спленин" у здоровых животных и при некоторых, видах экспериментальной патологии.

2. Выделить из спЛенина активный фактор, изучить его физико-химические свойства, митогенное, иммуномодулирущее и гепатотропное действие.

3. Провести сравнительное изучение биологических и химических своГютв небелкового фактора спленина и тимуса.

4. Изучить роль тимоцитов и их мембранной структуры в реализации механизма действия небелковых факторов тимуса и селезенки.

Диссертация выполнялась в соответствии с планами научно-исследовательских работ в лабораториях экспериментальной фармакотерапии и молекулярных механизмов иммунитета (руководитель - доктор мед. наук И.А.Безвершенко) Киевского научно-исследовательского института эндокринологии и обмена веществ МЗ УССР.

Научная новизна.

I. Установлены ранее неизвестгше свойства епленина стимулировать пролиферацию тимоцитов и предшественников Т-лнмфоцитов с селезенке, усиливать келчеотделительную функцию печгни у нормальнее животных, подавлять развитие аллергического виутр^шеч >ночного хо-лестаза, предотвращать структурно-функциональные изменения в печени при дробном общем рентгеновском облучении, способствовать восстановлению патологически измененной печени.

2. Влервие вццелеи на сплешша ноболкоьий феисгир, отвстиуьы! -ний за биологическую активность препарата. Основное свойство фактора заключается в индукции пролиферации Т-лимфоцитов.в селезенке и тимусе и связанной с ней стимуляцией хеллерной, суирессорной и ге-патотропной функций Т-лиыфщитои.

3. По физико-химическим свойствам и биологическому действию небелковый фактор сплешша аналогичен тиковому из тимуса.

4. Впервые установлена, что иммуномодулирукицее и гопатотропное действие небелковых факторов тинуса и сплешша опосредуется тимо-

цитами, в частности отделяемыми ими фрагментами плазматических мем-»

б ран.

5. Мембранная структура тимоцитов (фрагменты плазматических мембран) способна функционально восполнять дефицит Т-супрессоров при осуществлении Т-лимфоцитами иммунологической и гепатотропной функций. Полученные сведения создают предпосылки для создания им-мунокорригирующнх препаратов нового типа.

Теоретическая и практическая значимость работы.

1. Обнаружение в спленине небелкового фактора, обладающего' митогенным действием в отношении Т-лимфоцитов, позволяет отнести селезенку, наряду с тимусом, к органам активного антигеннеэависи-мого лимфоцитопозза в организме, обеспечивающим физиологическую и репаративную регенерацию Т-клеток, и экспериментально обосновывает возмочшость его использования для восстановления лимфоцитопозза при пострадиационной и глкжокортикоидной лимфоцитопениях.

2. Стимуляция небелковым фактором сплешша образования хелпер-ных и супрессорных клеток открывает возможность его применения в качестве иммуномодулятора для подавления аллергических .реакций немедленного типа при одновременной стимуляции защитное функций организма и восстановительных процессов в печени. Нуклеозидная при-

рода фактора позволяет длительное его применение без риска аллерги-эацииорганизма.

4. Выделение из спленина активного фактора и установление его биологических свойств позволяет разработать объективные и адекватные способы тестирования препарата и изучить его химическую природу;

5. Наличие в препарате "Вилозен" фактора, обладающего гепато-тропным действием, позволяет расширить показания к его применению, в частности при токсическом поражении печени.

■6. Химическая и функциональная идентичность активных факторов спленина и вилозена открывает практическую возможность использования бычьей селезенки в качестве сырья для производства препарата, аналогичного вилозену.

7. Установление иммуномодулирущего и гепатотропного механизмов действия факторов тимуса и селезенки, опосредованных слущиваю-щимися с Т-лимфоцитов фрагментами плазматических мембран, открывает принципиально новый путь целенаправленной регуляции гомеостаза.

Реализация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 33 работы, в том числе 16 статей и 17 тезисов. Получено 6 удостоверений на рационализаторские предложения.

Результаты работы по тестированию небелковых факторов лимфоид-,ной ткани вошли в материалы, представленные в Фармкомитет СССР при :внедрении в практику здравоохранения препарата "Вилозен".

Полученные данные о небелковом факторе спленина внедрены в цикле лекций по аллергологии на кафедре аллергологии Киевского государственного института усовершенствования врачей.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях Киевского НИИ эндокринологии и обмена веществ МЗ УССР (1967-1985), Республиканской научной конференции ■ "Роль нррвной системы в возникновении патолзгическ'/х процессов и .

их компенсации" (Ивано-Франковск, 1972), УП Европейской конференции по сравнительной эндокринологии (Будапешт, 1973), Республиканской научной конференции "Механизм действия гормонов" (Киев, 1975), II съезде эндокринологов УССР (Киев, 1977), 1У Всесоюзном биохимическом съезде (Ленинград, 1979), 1У международном съезде иммунологов (Пария, 1980) ,ХШ Всесоюзной конференции "Фундаментальные проб лемы гастроэнтерологии" (Киев, 1981), III Всесоюзном симпозиуме "Физиология иммунного гомеостаза" (Ленинград, 1982), 1У Украинском биохимическом съезде (Днепропетровск, 1982), III съезде эндокринологов УССР (Винница, 1982), Всесоюзной конференции "Системно-анти-»

системная регуляция в норме и патологии" (Киев, 1982), Республиканской конференции "Коррекция нарушений иммунологической реактивности" (Ивано-Франковск, 1983), Республиканской конференции "Механизмы им-муностимуляции" (Киев, 1985), 1У Всесоюзном симпозиуме "Нейро-гумо-ральная регуляция иммунного гомеостаза" (Суздаль, 1986), У Укран-ском биохимическом съезде (Ивано-Франковск, 1987), 1У съезде эндокринологов УССР (Львов, 1987), У1 республиканской конференции "Актуальные вопросы иммунотерапии" (Ворошиловград, 1988).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 313 страницах машинописи и состоит из введения, 3 глав обзора-литературы,. главы, характеризующей материал и методы исследования, 4 глав с описанием результатов собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 313 источников отечественной и 393 источника иностранной литературы. Работа иллюстрирована 52 таблицами и 9 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОШ Материал и методы исследования. Для достижения поставленных . задач было использовано 1989 половозрелых (преимуществен^ самцов) животных. 1508 из них составляли крысы линии Вистар, 475 - мили

линий BALB/o и СБА, а также б бсспородшх собак.

Спленоктомию у мншсй и крыс проводили под эффш-м наркозом. Селезенку иэелек'1Л1' через разрез бртнэП стенки р эпигамральной области.

Об интенсивности образования лимфоцитов у г.иноишх судили по изменениям абсолютной и относительной мзеен лим{оид|«к органов и содержании в них клеток, а также по скорости синтеза и исследуемых 'слетках нуклеиновых кислот (включение печеного предшественника в Д!!К). Суспензии тимоцитов и елленоцитоп по 5 х Ю^/мл инкубировали р сшшконизиравапшх пробирках при 37 °С с 0,5 мкКи 3Н-тимидина в течение 4 часов. Затем клетки осаждали на миллипоровых фильтрах и радиоактивность подсчитывали на сцинтилляционном счетчике Mark III .

Действиеняногрзммовых количеств виделенного фактора на пролиферацию спленоцитов исследопали в культуре ин витро. Результаты оценивали радиометрическим методом. Суспензия клеток культивировали в планшетах доя иммунологических исследований в среде RK.il-1040, забуференной 0,025 MHjjfes с добавлением 5 % телячьей эмбриональной сыворотки, 20 мМ глутамина и 5 х 10М 2-меркалтоотанола в течение 72 часов в 10 £ атмосфере С02- За 4 часа до прекращении культивирования в пробы вносили 3Н-тимидин. Радиоактивность проб, осажденных ТХУ.на миллипоровых (¡ильтрах, просчитывали па сцинтилляционном счетчике Mark III .

Критерием синтеза Д!П{ в печени служила интен-л;гн'.>сть включения 3Н-тимидина ин виво. Исследуемым крпсам за I чае до декапитацип рнутрибрюыинно вводили эН-тимидин в количестве 0,5 мсКи на I г массы тела. Радиоактивность гомогенатои печени, огатд'чн»-* TAY на фильтрах, просчитмвали на счетчике ioooap-300 (США).

Развитие гуморального иммунитета у мь-щеП на пдаусзш>иеим<ч1 антиген (эритроциты барана) и;<;/"а.'Ч! in ГН! день цт-ло. едг'окрти! -г.

внутрибрюшшшой сенсибилизагщи животных 0,2 мл 20 % суспензии клеток. Количество клеток-антителопродуцентов к эритроцитам барана сгнивали на основании спектрофотометрического определения степени их гемолиза при инкубации с клетками селезенки сенсибилизированных мышей ( M.Simpaon.S.Gozzo, 1979). Величины зкстинции при 413 нм пропорциональны количеству антителообразутацих клеток, определяем}», по Ерне.

Локальную продукцию XgE-антител в органах дыхания у крыс ин,цу -цировали путем интраназального закапывания (по 0,05 мл в каждый носовой ход) стандартного аллергена пыльцы амброзии спустя 30—Ю мин после инсталляции в носовые ходы по 0,5 мл 0,1 % раствора гистаыина (Э.В.Гюллинг, Л.А.Дюговская, I960).

• Общую аллергизацию мышей индуцировали одноразовым или двукрат -ным внутрибрюшинным введением 1-5 мкг аллергена совместно с 5 ыг свежеприготовленной гидроокиси алюминия. В качестве аллергена использовали яичный альбумин и белковый экстракт свиных искарид, приготовленный и хроматографически очищенный в лаборатории.

0 содержанииХкЕ- антител в органах дыхания судили по проценту дегрануляции тучных клеток, наступившей в результате взаимодействии аллергена амброзии с igB-антителами, присоединившимися к IgB- рецепторам тучных клеток в процессе их инкубации с гомогенатом соответствующего, органа (Л.А.Дюговская, 1977).

Содержание циркулирующихIgE- антител у сенсибилизированных мышей в крови определяли в реакции пассивной кожной анафилаксии через 24 часа после введения испытуемых сывороток (и. vrana t ab е, Z. О v а ry, 1977).

Антигенспецифический ( к аскаридному белку) IgE- связывающий фактор вьщеляли из лизированных тимоцитов сенсибилизириьанних мышей методом аффинной хроматографии ('l'.Tada et al., 1973). Аскарид-

ннй антиген иммобилизировали на ВгСН-активированной сефарозе 4В. IgE-связывающий фактор элгоировали С»01 н раствором HCI, рН 2,0, и контролировали спектрофотометрически при 280 нм. После лиофилизации IgB-связывающий фактор использовали для подавления IgE -антитело-образования у сенсибилизированных животных.

Плазматические мембраны тимоцитов получали после механического разрушения клеток в гомогенизаторе (стекло-тефлон) и последующего осаждения безъядерной суспензии в градиенте сахарозы ( R.Kornfeld et al., 1974) или путем слущивания живыми тимоцитами в инкубационную без сывороточную среду при их прогревании в течение I часа при 45 °С или 2 часов при 37 °С (И.А.Безвершенко и соавт., 1979). В последнем методе клетки осаждали центрифугированием, надосадочную жидкость подвергали, диализу .и лиофилизировали. Полученные фрагменты плазматических мембран пересчитывали на количество белка или на число использованных для ввделения клеток. Маркером плазматических мембран служила активность 5-нуклеотидазы. О гетерогенности препаратов плазматических мембран судили по данным гель-электрофореза.

. Для трансплантации.использовали сингенные тимоциты от животных одинакового с реципиентами пола и возраста. Клетки ввделяли в среде 199 путем измельчения стромы тимуса' и продавливания клеток через металлическую сетку. Дважды отмытые клетки суспендировали до нуж-! ной концентрации в среде 199 и трансплантировали внутривенно кры-; сам с токсическим гепатитом и мышам с гипериммуноглобулинемией Е.

Активацию тимоцитов осуществляли путем одночасовой инкубации , суспензии клеток, содержащей 5.x 10 /мл среды 199, с 5 мкг небелкового фактора на I мл при 37 °С. Затем клетки дважды отмывали средой и суспендировали для трансплантации.

Активность 5-нуклеотидазы ( R.Michel,J.Hawthorne, 1965) и ацетилхолинэстеразы ( a.Ellman,1961) различных по зрелости популя-

ций тимоцитов изучали после разделения клеток 6 градиенте фиколл-урографина со ступенями плотности 1,055, 1,065, 1,071, 1,077 и 1,09а. Разделение осуществляли 20-минутным центрифугированием при 400 g.

Изучение влияния факторов лимфоидной ткани на восстановительные процессы в патологически измененной печени у крыс проводили на модели токсического гепатита, аллергического внутрипёченочного холе-стаза, а также после общего рентгеновского облучения.'

Экспериментальный токсический гепатит вызывали 5-кратным через день внутримышечным введением четыреххлористого углевода в дозе 0,5 мл на 100 г массы тела, разведенного пополам косточковым маслом

Внутрипеченочный 'аллергический холестаз индуцировали путем 10. дневного введения внутрь анаболического стероида неробола (17(С-ые-тиландростандиен-1,4-ол-Г^ -0Н-3) в дозе 2 да на Ю0"г массы тела в виде крахмальной суспензии.

. Общее рентгеновское облучение крыс и мышей осуществляли на аппаратуре РУМ-П при напряжении 250нВ, силе тока 15 мА, фильтры -0,5 мм Си и I мм АI, кожно-фокусное расстояние 50 см, мощность дозы бОР/мин. .

Желчеотделительнув функцию печени у собак изучали в хронических опытах на животных с желчепузырнодуоденальнши фистульными трубками (П.С.Лященко, 1975). Резиновый клапан одностороннего действия, вмонтированный в фистульной трубке^ предотвращал забрасывание содержимого кишечника в желчный пузырь и 'обеспечивал энтероге-патический круговорот желчи вне эксперимента. В желчи собак, наряду с общим количеством секрета, определяли содержание солей желчных кислот (Л.М.Кульберг, М.Е.Маляревская, 1951), билирубина и холестерина . ■

Функциональное состояние печени оценивали бромсульфофталеино-вым (БС1) тестом (s.Rosental,E.White, 1924) в нашей модификации

длч крыс.

Поело фиксации крыс в епшпюм положении в хвостовую или дорсальную вену penis вводили 5 % раствор БСФ из расчета 0,2 мл на 100 г массы тела. Через 5 и 20 мин соответственно из левой и правой ■нзруташх яремных вен брали по 0,5-0,6 мл крови. Клетки осаждали центрифугированием. Концентрацию БСФ в плазме определяли спектро-йотометриеП при 575 нм. Разница концентраций красителя в крови за исследуемый промежуток времени свидетельствует о скорости его поглощения печенью и в ражается коэффициентом очищения ( G'Lawers et sl.,I9'Í9) либо в процентах, принимая концентрацию БСФ в плазме при первом взятии крови за 100 %.

Жслчеотделительную и экскреторную функцию печени у крыс изучали в остром опыте под барбамиловым наркозом в условиях поддержания у животных оптимальной температуры тела. Крыс фиксировали в станочках из органического стекла с овальным 190 х СО мм отверстием и располагали спиной на терморегулируемой подстилке. Продольным разрезом (1-2 см) в эпигастральной области вскрывали брюшную полость и в общий желчный проток вставляли полиэтиленовую трубку диаметром I мм. Желчь собирали почасово 6-8 часов в заранее взвешенные пробирки. Секреция желчи в мг/мин на 100 г массы тела служила показателем интенсивности желчеотделительного процесса.

С целью определения экскреторной и связывающей функций печени час спустя от начала сбора желчи крысам внутривенно вводили 5 % раствор БСФ из расчета 5 мг на 100 г массы тела. Экскрецию красителя с желчью определяли на протяжении 2 часов: первый час разделяли на 30-минутные периоды. Количество БС$ в желчи определяли спектро-({отаметрией при 575 нм, соотношение свободного и парн"х соединений красителя с глутатипнем, ци'-теинил-глицпчом и цистошпм - хремято-

.грацией ( В.Combes efc ni,, .

Содержание низкоотиновой окисленной формы цитохрома Р-450 определяли методом электронного парамагнитного резонанса (ЗПР). Спектры ЭПР печени^регистрировали на радиоспектрометре "Вариан-Е-109" (США) и выражали в относительных единицах.

Концентрациюгаикогена а гомогенатах печени определяли при помощи антронового реактива ( Н.Carrol et al.,1956), лнпидое - гравиметрическим методом ( J.Polch et al., 1957), белки по O.Iiowry et al., (1951). Спектры поглощения в ультрафиолетовой области записывали на спектрофотометре "spekord М-40" (ГДР). Содержание сульфгидрильных групп определяли при помощи 5,5-днтиоби'с-2-нитробензойной кислоты по освобождению тионитрофенильного аниона с максимумом поглощения при 412 нм ( G.Ellman, 1959; J.Sedlak, 1970), а также методом аыпери-метричзского титрования ( R.Banesch at al., 1955). Глутатион определяли с нитропруссидным реактивом ( H.Granert.P.Phlllipa., 1951).

Пзрекисное окисление липадов плазматических мембран моделировали путем инкубации суспензии эритроцитов с раствором витамина Д^ (В.Б.Спиричев, Н.В.Блажеевич, 1968).

Для морфологически исследований ткань печен« фиксировали в нейтральном IÖ % формалине, срезы окрашивали ге.лтоксилин-эозином.

Результаты исследований обработаны метсдьли вариационной статистики (Н.Бейли, 1962). Статистическую значимрсть различий (Р) оценивали по таблице Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение.

I. Выделение и изучение активного начала спленина.

Способ получения небелкового фактора спленика (НФС).

Изучение влияния спленина на лжлфоидную систему у крыс обнаружило его способность увеличивать на 44,0 % массу селезенки и 44,3 % тимуса. Этот факт послужил предположением о наличии в сплешше ми-тогенного вещества. Оценивая его з плана биологической значимости

составных компонентов спленина, представленных Е.Б.Нечаевой (1978), мы сосредоточили внимание на нуклеиновых кислотах и их метаболитах. Значительное содержание их в составе спленина связано не только с высокой пролиферативной активностью в селезенке, но и с процессами аутолиза, которому подвергается ткань органа при производстве препарата. Обнаружение у ряда пуриновых производных митогенных и имму-номодулирующих свойств (А.ГКДмитренко, 1985;м.(5ооашап,*.*е1в1в, 1982; J.Haadвn et а1., 1984; С.Рвп1^,М.гарегп1к, 1986) предопределило наш поиск и выделение из спленина веществ этого класса.

Для въщеления НФС использовали дихлорэтановый экстракт селезенки - полупродукт спленина, который высушивали в ротационном испарителе при 37 °С. Липиды и органические кислоты из сухого вещества экстрагировали бензолом. Активный фактор ввделяли путем осаждения ионами ртути (И.А.Безвершенко, 1978), Для этого к 5 % водному раствору экстракта (рН. 4,0) при постоянном перемешивании постепенно добавляли 20^ раствор уксуснокислой ртути до полного осаждения нерастворимого материала, осадок отделяли фильтрованием. Затем рН фильтра подводили до 6,0 и повторяли осаждение. Вновь полученный осадок ре суспендировали в слабощелочной воде и освобождались от ионов ртути путем пропускания через раствор сероводорода. Образовавшийся черный осадок ( НеБ) отфильтровывали. Из фильтрата при рН 2,0 газообразным азотом вытесняли сероводород и раствор высушивали. Полученный 'фактор - белый аморфный порошок без запаха - хорошо растворим в воде, уксусной кислоте, нерастворим в этаноле. Спектр поглощения раствора НФС.в 0,01,М фосфатном буфере,- рН 7,0, в ультрафиолетовой зоне достигает максимума при 264 нм и характерен для нуклеозидов и их оснований.

Изучение биологической активности вьделенного фактора было начато с решения вопроса возможного его отношения к лймфоцитообра-

- 15 - .

зованию в организме и системе ин витро.

Исследование лимфоцитотропного,действия НФС.

Мышам линии СВА внутрибрюшинно в течение 3 дней вводили по 10 мкг НФС. Влияние фактора на массу тимуса, селезенки и количество в них клеток определяли на 12-й день опыта.

Установлено, что НФС обладает свойством увеличивать массу лим-фоидных органов. Относительная масса .тимуса у опытных животных составляла 18,3 + 1,2 мг/Ю г массы тела, а селезенки - 45,1 + 1,2 мг/ГО г массы тела при 10,7 ±0,57 и 39,9 ± 1,92 мг/Ю г соответственно в контроле. Параллельно увеличению массы лимфоидных органов увеличивается в них содержание клеток - в тимусе на 99,2 %, в селезенке на 46 %.

Однонаправленность изменений в тимусе и селезенке позволяет предположить, что фактор стимулирует пролиферацию предшественников Т-лимфоцитов. Однако как показали исследования с включением 3Н-ти-мидина в ДНК лимфоцитов, лимфоцитозстимулирующий эффект НФС ин виво проявляется в обоих органах не одновременно. Обнаружено, что спустя 18 часов после однократного введения крысам по 250 и 500 мкг НФС включение метки в спленоциты ин витро повышается более чем в 2 раза, поглощение эН-тимидина тимоцитами несколько снижается. Вместе с тем, в бессывороточной культуре тимоцитов нанограммовые количества НФС через 3 часа инкубации оказывают выраженное митогенное действие. Достоверным включение 3Н-тимидина установлено пришесенйи 31,25 иг НФС в I мл культуры, содержащей 5 х 10^ клеток, и сохраняется после 8-кратного увеличения дозы фактора.

Лимфоцитотропное действие НФС проявляется и в 72-часовой культуре спленоцитов. Включение меченого тимидина наблюдается при вне-

А

сении 62,5 нг фактора'на 5 х 10 клеток на мл, максимум стимуляции включения метки достигается при 250 нг НФС в мл. Становится очевид-

ним, что НФС непосредственно влияет на клетки селезенки. А поэтому усиление пролиферативных процессов в этом органе при воздействии НФС ин виво обусловлено митозом Т-клеток селезенки, а не притоком делящихся клеток из тимуса.

Принадлежность НФС к естественным низкомолекулярным соединениям предполагает его быструю инактивацию. В действительности эффективность фактора в организме сохраняется 10 и более дней. Это обстоятельство позволяет предположить, что влияние НФС на клетки, подобно действию лектинов (Кон А, ФГА) опосредовано через ИЛ-2, Однако в культуре клеток активация спленоцитов и тимоцитов (включение 3Н-тимидина) после добавления фактора происходит раньше, чем при воздействии лектинами, индуцирующими образование ИЛ-2. Аналогичный эффект на ткмоциты оказывает небелковый фактор тимуса, действие которого осуществляется без участия аденилатциклазной системы и в отсутствие Са^+ (И.А.Ёёзвершенко и соавт., 1972; Д.А.Константинов, 1973).

Есть основания полагать, что НФС в первые часы контакта с Т-клетками селезенки и тимуса оказывает прямое мигогенное действие, однако в последующие часы активации Т-лимфоцитов, вероятно, требуется участие ИЛ-2. ■

Реальность прямого пути активации Т-лимфоцитов доказана в культуре клеток, очищенных от моноцитов (т.е. без участия интер-лейкина I) при воздействии ионофором Са^+ А 23187. Моноклональные • антитела против рецептора к ИЛ-2 не предотвращают бласттрансформа-цию, вызванную внесением А 23187 в первые часы наблюдения (с.Коге-Ь-гку а1м 1903; Н.ОоПег сЬ о1., 1987).

Обнаруженный феномен прямой активации Т-лимфоцитов НФС открывает перспективу его использования и в тех случаях, при которых способность моноцитов к ответу на митогени окажется сниженной.

Полученные результаты в совокупности позволяют заключить, что ®С обладает тропностью к Т-лимфоцитам или их предшественникам как в селезенке, так и в тимусе, и является специфическим их митогеном прямого и опосредованного действия. Реальность существования мито-генного фактора в спленине и селезенке подтверждается исследованиями О.А.Дадаян, К.П.Сарницкого (1986), А.А.Костандинова, Б.Б.Фукса (1973). Наличие аналогичного низкомолекулярного митогенного фактора, устойчивого к действию протеолитических ферментов и нуклеаз в тимусе (И.А.Безвершенко и соавт., 1972,1974,1987; Д.А.Констандинов,

1973) свидетельствует о том, что восполнение пула Т-лимфоцитов осу*

ществляется как в тимусе, так и в селезенке и регулируется митоген-ным фактором небелковой природы.

Нуклеозидная природа выделенного фактора позволяет отнести его к продуктам азотистых оснований и их производных, высокая активность которых присуща среде микроокружения Т-лимфоцитов.

Эффективность НФС при экспериментальных лимфоцитопениях.

Результаты представленных исследований имеют не только теоретическое, но и прикладное значение. Лимфоцитотропный эффект Н1С представляется перспективным при лечении лимфоцитопенических состояний. Возможность такого использования фактора установлена нами на моделях пострадиационной и стероидной лимфоцитопений.

У. сублетально облученных мышей СВА уже в первые дни после радиационного воздействия развивается лейкопения и снижается содержание гемоглобина в крови. Введение животным в первые 3 дня после облучения внутрибрюшинно по 5 мкг на животное Н1С ускоряет восстановление числа лейкоцитов в крови,и к 21-му дню их количество нормализуется. Увеличение лимфоидных клеток в периферической крови оп ттгнкх мпней отмечаотся с о 2-го дня после облучения. Содержание гемоглобина р крови облученннх мнятй. получавших НЮ, почти ирирав-

нивалось к показателям интактных животных, у контрольных мышей его содержание оставалось пониженным и на 21-й день.

Таким образом, при остром лучевом поражении организма НФС способствует восстановлению лимфоцитообразования и предупреждает снижение уровня гемоглобина в крови. Последнее обстоятельство свидетельствует и о вероятном влиянии фактора на красный росток крови.

Лимфоцитопоэз у мышей со стероидной лимфоцитопенией, обусловленной внутрибрюшинным введением животным 1,2 мг суспензии гидрокортизона, исследовали на 9-й день после 3-дневного введения по 5 мкг НФС. Воздействие гидрокортизоном приводило к инволюции тимуса и селезенки, масса которых соответственно составляла 38,7 и 64,3 % от массы органов интактных животных, количество клеток снижалось на 50 и 31,7 %. К этому сроку у опытных мышей масса исследуемых лимфоидных органов и содержание в них клеток приравнивались к показателям здоровых животных..

Результаты проведенных исследований позволяют заключить, что НФС играет важную роль как в физиологической, так и репаративной регенерации Т-лимфоцитов и заслуживает внимания как возможное фар-макотерапевтическое средство.

Роль НФС в формировании иммунологической активности лимфоцитов.

Стимулируемое НФС увеличение функционально активных Т-клеток отражается на развитии гуморальных иммунных реакций. Немногочисленные данные о влиянии спленина на иммуногенез носят противоречивый характер (С.С.Дячёнко и соавт., 1973; С.С.Дяченко, Н.А.Караванская, 1974; А.В.Шевченко, С.В.Покровская, 1980; В.Ф.Чеботарев и соавт., . 1982). Доминирует мнение, что спленин оказывает влияние на иммунные процессы, однако фактор, ответственный за реализацию эффектов, неизвестен. .

Установлено, что премедикация мышей СВА НФС (3 дня по 10 мкг .

-rana животное) за 5 дней до сенсибилизации эритроцитами барана достоверно повышает до II,I + 0,25 х 10 количество епленoipiroe (в контроле 7,88 + 0,16 х КГ на орган) и на 64 % (Р / 0,001) - содержание антителообразующих клеток в селезенке. Максимум стимуляции приходится на 5-7-е сутки после сенсибилизации. Очевидно, стимуляция анти-телообразования на тимусзависимый антиген под влиянием НФС опосредована увеличением числа Т-хелперов.

Возможность образования неспецифических Т-супрессоров в процессе митогенного действия НФС была доказана на моделях немедленной аллергии у крыс и мышей при местной и общей сенсибилизации животных

т

Как известно, спленин угнетает аллергические реакции (А.Ф.Захарова и соавт., 1976; С.В.Покровская, 1982).

При интраназальной премедикации крыс НФС за 35 мин до нанесения животным на слизистую носа аллергена пыльцы амброзии количество реагинов, определяемых через 48 часов в тесте дегрануляции базо-филов, в слизистой носовой полости было в 2,19 раза ниже, чем в контроле (Р / 0,01), в слизистой трахеи - в 2,5 раза (Р / 0,001) и в легких - в 3,3 раза (Р [_ 0,001). Применение эквиьхиентного количества раствора дихлорэтанового экстракта селезенки не оказывало влияния на развитие местной аллергической реакции.

При общей внутрибрюшинной аллергизации мышей линии BALB/o аскаридным антигеном.применение НФС, по данным реакции пассивной кожной анафилаксии, было эффективным при введении ere за 3 дря до сенсибилизации, а также при одновременном назначении с аллергеном. Введение фактора в более поздние сроки.не оказывало угнетающего влияния на развитие аллергической реакции.

В аналогичных условиях тождественный результат получен при применении небелкового фактора тимуса (HIT). Угнетение продукции IgE- антител отмечалось при введении НФТ за 3 дня до сенсибилизации

мшей аскаридным антигеном и в условиях одновременного применения фактора с аллергеном.

У мышей с экспериментальной Е-гипериммуноглобулинемией НФС не оказывал влияния на.уровень антител этого класса. Трансплантация

п

1Ч!:им животным 2 х 10 интакгных сингенных тимоцитов в 2,75 раза снижает уровень IgE- антител в крови (Р / 0(02). Такое же количество сингенных тимоцитов, активированных ин витро 1SC, снижает уровень циркулирующих IgE- антител у сенсибилизированных животных в 8 раз (Р /0,001).

Становится очевидным, что НФС, обусловливающий противоаллергическое действие спленина, подобно ФГА и Кон А (Р.В.Петров и соавт., 1979; Б.Д.Брондз, I980;W.Knapp,B.Posah, I9B0; s.Smith. 4t а!., 1984) и НФТ (И.А.Без в ершенко, 1978; И.А.Безвершенко и соавт., 1977, 1978) как митоген стимулирует образование антигеннезависимых Т-клеток-супрессоров. Действие индуцируемых фактором супрессоров проявляется в продуктивную фазу иммунного ответа. Непосредственного влияния на секрецию IgE_ антител фактор, вероятно, не оказывает.

Антигенспецифический фактор тимуса, подавляющий продукцию антител (T.Tada et al 1973), полученный методом аффинной хроматографии на колонке с иммобилизированным аллергеном, в условиях активации супрессорной активности Т-лимфюцитов НФС у сенсибилизированных мьгаей не образуется.

Поскольку подавление продукции IgE- антител у сенсибилизированных мышей опосредовано стимуляцией Т-лимфоцитов-супрессоров,' о чем свидетельствуют опыты с переносом тимоцитов, активированных НФС, последний может бьггь использован для регуляции IgE- антитело-генеза в opi анизме без риска повреждения гемопоэза, присущего им-мунодепрессантам других классов.

' Таким образом, Н'1С является эффективным сродством регуляции

IgE- антителогенеза, определяет противоаллергическое действие спленина и как самостоятельный препарат может найти применение в клинической практике.Преимущество его заключается в относительной химической гомогенности, отсутствии антигенности и возможности наружного применения в виде орошений на слизистые обблочки дыхательных путей.

Суммируя полученные результаты, мы считаем, что уровень пролиферации Т-клеточной популяции в целом является важным механизмом регуляции интенсивности иммунных реакций, и это явление может быть использовано для направленного изменения иммунного ответа «ак в экспериментальных, так й клинических условиях. Для достижения этой цели НФС, как и НФТ, является весьма эффективнымтк специфический и естественный митогенный фактор Т-лимфоцитов. Применение фактора представляется целесообразным во многих случаях иммунодефицита, развивающегося в результате нарушения процессов пролиферации Т-клеток, а также'в качестве иммунодепрессора при аллергических и аутоиммунных заболеваниях.

2. Действие спленина и небелковых факторов спленина и тимуса на функциональное состояние печени.

Влияние спленина на функциональное состояние печени у нормальных животных.

В связи с разделяемым рядом авторов (Г.К.Хрущев, 1945; А.Г.Бабаева, 1973,1985; Г.Я.Свет-Моддавский и соавт., 1974; В.Т.Антонен-ко, 1982; И.Ф.Колпащикова, 1982; А.Н.Чередеев и соавт., 1986;н.И.1я-kin R.Prehn, 1975; d.Green,T.ffegraann, 1986) представлением,

что лимфоидная система, наряду с иммунной функцией, оказывает трофическое действие на органы и системы организма, а'также, учитывая тесную анатомическую и функциональную взаимосвязь селезенки и печени (Л.Н.Геллер, 1964; М.Е.Комахидзе, 1971; Л.М.Гольберг, 1977), предст.чзляяось цпл^сообрадиш исследовать, какую рель в этом взая-

- 22 -

модействии могут играть активные факторы селезенки.

Одним из показателей функциональной связи между селезенкой и печенью служила активность секреторной функции печени. Наблюдения ряда авторов (Н.А.Пчелина, 1927; Я.В.Янковская, 1949 и др.) о снижении секреторной функции печени в ранние сроки после спленэктомии подтверждают адекватность такого подхода.

В исследованиях на собаках с желчнопузырнодуоденальными фистулами при 3,5-часовом наблюдении было установлено, что как подкожное, так и внутривенное введение спленина усиливает секреторную и экскреторную функции печени. Внутривенное введение препарата было более эффективным.

Секреция желчи после подкожного введения 2 мл спленина увеличивается на 36,7 %, а после внутривенного - на 77,1 %. Выделение холестерина за опытный период после подкожного введения спленина увеличивается на 17,2 %, после внутривенного - на 60,2 %, .желчных Кислот - на 12,4 и 76,7 % соответственно. Экскреция билирубина с желчью на 84,5 % превышала контрольные показатели в опытах при подкожном применении спленина и на 372,3 % - при его внутривенном введении.

Стимуляция секреции желчи после введения спленина обнаружена также у крыс. У наркотизированных барбамилом животных с канюлиро-ванннм желчным протоком после 14-дневного введения спленина секреция желчи повышалась до 6,2 + 0,55 мг/мин/100 г массы тела при 5,0 ± 0,51 в контроле (Р (_ 0,05), секреция солей желчных кислот составляла 1,9 + 0,01 мг/час/100 г массы тела, в контроле - 1,29 + 0,009 (Р 0,05), изменения в экскреции билирубина били недосто- ■ верными,

Проявление холеретического действия спленина у собак вскоре после введения препарата свидетельствует о возможном непосредствен-

ном его влиянии на паренхиму печени либо опосредованном активацией функции коры надпочечников (С.Г.Гасанов и соавт., 1961; И.Ф.Лабунец, ' Ю.А.Гриневич, 1987;н.Вв0еаотвк1 вt в1., 1981,1985). Так, гидрокортизон стимулирует желчеотделительнуга функцию печени (Н.П.Скакун, 1960; П.С.Лященко, 1972). Продолжительное введение спленина сказывается и на протеиногенезе в печени.

Данные о роли спленина в регуляции белкового состава сыворотки крови неоднозначны (Г.К.Валуева, Н.С.Кузнецова, 1963; И.И.Африканов, А.П.Ильиных, 1975). Исследования функциональных групп белков, в частности содержания реактивных тиолов, обеспечивающих протекание многих жизненных процессов, в том числе и клеточного деления (Д.Мэ-зия, 1963; И.А.Алов, 1969), показали, что после 6-кратного введения крысам спленина достоверно повышается уровень суммарных сульфгид-рильных групп в печени и составляет 2,46 ± 0,09 мкМ на 100 мг сырой ткани при 2,05 + 0,06 мкМ/100 мг сырой ткани у контрольных животных. Изменения обусловлены увеличением количества белковосвязанных ЗН-групп. Уровень общих небелковых ЗН -групп увеличивается незначительно, лишь концентрация глутатиона была достоверно выше (151,6 +■ 8,1 мг/100 г сырой ткани в опыте при 121,5 ± 3,4 мг/Ю0 г сырой ткани в контроле). Содержание сульфгидрильных групп в почках, скелетных мышцах и мозге крыс после введения спленина не изменялось.

Спленэктомия, наоборот, приводит к снижению сульфгидрильных групп в печени мышей с 2,35 + 0,06 мкМ/100 мг сырой ткани у интакт-ных животных до 1,97 +• 0,07 мкМ/100 мг сырой ткани после удаления селезенки. Эти изменения обусловлены снижением реактивности тиолов белков.

Таким образом, увеличение содержания белковосвязянных сульф-гидрильннх групп в печени при воздействии спленином, вероятно, является отражением усиления протеиногелеза и пролифератнрннх процессов в органе.

Влияние enЛенина на функциональное состояние печени при экспериментальном ее повреждении.

Эффективность спленина в клинике при гепатитах и циррозах печени (Н.Н.Аплетова, 1963; В.Н.Згжебловская, А.Н.Блавдзевич, 1964, ' 1965; А.А.Вержховская, 1066) послужила предпосылкой для изучения механизма его действия на ряде моделей поражения органа.

Применение спленина у крыс при воспроизведении экспериментального токсического гепатита CCÍ^ в виде премедикаций перед введением гепатотропного яда, при одновременном введении препарата с ток-лом, а также после затравки животных обнаружило его терапевтиче-ctiyn эффективность только на фоне развившегося токсического поражения печени. Шестикратное введение животным с токсическим гепатитом спленина полностью восстанавливает способность печени поглощать ECI из крови, а у некоторых животных она превышала исходные показатели. У здоровых животных препарат не влиял на скорость очищения крови от красителя.

Элиминация БСЗ> из крови при абсолютной специфичности его поглощения гепатоцитами ( C.Klaas3en,G.Plaa, 1982) зависит от скорости доставки красителя к net..'¡¡и, количества протекающей через синусоиды печени крови, интенсивности поглощения красителя печеночными клетками и экскреции его в желчные пути (R.Brauer,R.Feesotti, 1950; В.Combes, Q.Stakelum, 1962), CCI^ повреждает большинство упомянутых механизмов и, в первую очередь, целостность гепатоцитов (А.Ф.Блюгер и соавт., 1962; И.В.Шуст, 1967; С.М.Дроговоз, 1971; М.Н.Ханин, Т.Г.Манкус, 1973).

Обнаруженные эффекты не определяют конкретную точку прилочсе-ния спленина, однако позволяют предположить, что препарат повышает функциональную активность печени путем стимуляции репаративной регенерации . Bu-дение спленина затравленным жипотнш уменьшает содер-í'iHu липидчр г: пг>ч«ни до 14,4 ± 1,35 г% при 17,88 + 0,93 г," в

контроле (Р / 0,05), уровень гликогена увеличивается до 1252 + 180 иг%, в контроле - 497,72 + 84,4 ж% (Р (_ 0,01). Концентрация белка и глутатиона не изменяется. Секреция желчи после лечения спленином превышала показатели интактных животных - 6,9 ± 0,2 мг/мин/100 г массы тела при 4,9 + 0,028 мг/мкн/100 г массы тела в контроле (Р / 0,001). Восстанавливалась и экскреция БСФ с желчью. За первые 30 мин наблюдения с желчью опытных животных выводилось столько не красителя, как и у интактных, и несколько меньше на протяжении второго получаса. За второй час опыта у животных всех групп экскрети-ровалось практически одинаковое количество БСФ. Всего за два часа наблюдений у опытных животных с желчью выводилось лишь на 14,5 % БСФ меньше, чем у интактных животных (Р 7 0,05). Однако соотношение парных соединений красителя в желчи оставалось на уровне показателей контрольных животных. Угнетение комплексообразования БСФ с глу-татионом при повышенном содержании последнего в печени крыс с токсическим гепатитом, вероятно, связано со снижением активности фермента конъюгации - глутатион-д-арилтрансферазы (р.Ва^а а!., 1973). Непрямым подтверждением этого предположения является низкий уровень белка в печени.

Восстановление спленином большинства исследуемых показателей функционального состояния-печени у крыс с токсическим гепатитом убеждает нас в гепатотропном действии препарата.

Наряду с этим следует отметить, что эффективность спленина при токсическом гепатите у крыс зависит от дозы препарата. Увеличение эффективной (0,25 мл/100 г массы тела) дозы препарата в 2,5 раза явно усугубляет течение патологического процесса в печени. Задержка БСФ в крови увеличивается до 30,7 + 3,06 % при 18,4 ^ 1,39$ в контроле (Р / 0,001). Экскреция красителя за первые 30 мин наблюдения г, иг/100 г масон тела составляет 1,97 + 0,25, в контроле -

- 26 - .

2,83 + 0,31 (Р / 0,001), секреция солей желчных кислот в иг/час на " 100 г иассы тела составляет в опыте 1,56 + 0,08, в контроле - 2,09 + 0,06 (Р / 0,001).

Следовательно, несмотря на полную безвредность спленина для здоровых животных (В.П.Комиссаренко, 1961),- завышение доз препарата при некоторых заболеваниях может усугублять течение патологического процесса. Этот факт обусловливает необходимость дифференцированного подхода к подбору доз спленина в клинической практике.

Роль кортикостероидной регуляции восстановительных процессов

в печени при ее поражении СС1^.

Одним из механизмов терапевтического действия спленина на печень, как упоминалось выше, может быть стимуляция препаратом глю-кокортикоидной функции надпочечников (Т.К.Валуева, Н.С.Кузнецова, 1963; С.Г.Гасанов и соавт., 1981; Н.Ф.Лабунец, Ю.А.Гриневич, 1987; Н.Вевес1оувк1 et а1., 1985). Поэтому было изучено влияние различных "доз гидрокортизона на.восстановление функции печени при токсическом ее поражении.

Токсическое действие на организм сопровождается угнетением функции коры надоочечников и приводит к кортикостероидной недостаточности (Н.Ф.Колпащикова, 1970), которая усиливает деструктивные процессы и ослабляет репаративные возможности паренхимы печени (Г.С.Якобсон, 1971).

Шестикратное введение крысам с токсическим гепатитом по 4 мг/кг гидрокортизона способствовало более быстрому восстановлению поглотительной функции печени - скорость элиминации БСФ из крови достигала уровня здоровых животных, Вшалогичных условиях введение" по 12 мг/кг гидрокортизона лечебного эффекта не оказывало.

Нормализация поглотительной функции печени у крыс с токсическим гепатшом после введения 4 мг/кг гидрокортизона свидетельствует, что препарат в малых дозах оказывает противовоспалительное

действие, обеспечивает восстановление протеиногенной и гликогенооб-раэовательной функций печени (М.С.Лейтес, Г.Т.Павлов, 1958; С.М.Лей-тес, Г.С.Якушева, 1959), усиливает ее регенерационную способность (Н.В.Шуст, 1967), а также стимулирует родоначалъные кроветворные клетки (О.О.Ромашко и соавт., 1979).

Приводимые аргументы позволяют усматривать в механизме действия гидрокортизона при токсическом гепатите два возможных пути -непосредственное влияние на паренхиму печени и опосредованное через стимуляцию лимфоидной системы.

Подавление спленином развития аллергического внутрипоценочного

холестаэа.

- Возможность участия аллергических реакций немедленного типа в генезе патологических изменений в печени была прэдоосылвой для изучения роли спленина в развитии аллергического внутрипеченочного хо-лестаза. Развитие последнего часто является следствием длительного применения андрогенных гормонов и их синтетических производных (3.А.Бондарь, 1969; Ф.И.Комаров, В.В.Щедрунов, 1970; Н.Н.Волков, 1972 и др.), а его аллергическая природа установлена недавно('х.ииго-висЫ ег а1., 1986).

Моделируемый путем скармливания неробола (10 мг/кг) внутрипе-ченочный холестаз у крыс характеризуется угнетением секреторной, экскреторной и поглотительной функций печени. Метаболизм БСФ в печени при этом не изменяется. Введение неробола приводит также к опустошению лимфоидных органов у крыс - существенно уменьшается масса тимуса, на 32,5 % снижается его клеточность.

Сочетанное применение с нероболом экстракта селезенки сцлени-на снижает его побочное действие - ослабляет негативное влияния неробола на секрецию,желчи, солей желчных кислот и полностью предупреждает нарушение элиминации и экскреции БСФ.

Однако воздействие спленином оказалось недостаточна.' при

дукции аллергического холестаза у крыс метилтестостероном (5 мг/кг), холестатическое действие которого сильнее неробола.

Рассматривая монооксигеназнув систему организма как одну из определяющих в развитии аллергических реакций (И.Е.Ковалев, О.Ю.Полазал, 1985), мы воспользовались классическим ее индуктором - фенобарбиталом с целью подавления развития аллергического холестаза. Оказалось, что стимуляция цитохрома Р-450 фенобарбиталом повышает толерантность крыс к холестатическому действию метилтестостерона. Секреторная и экскреторная функции печени животных, получавших одновременно с метилтестостероном фенобарбитал, была такой же, как и у интактных животных. Отмечалась лишь незначительная задержка элиминации БСФ из крови.

Нам представляется, что в условиях проведенных экспериментов, согласно концепции Н.Е.Ковалева и О.Ю.Полевой (1981,1985), продол-нительное введение больших доз неробола или метилтестостерона перекрывает метаболические возможности оксигеназной системы. В результате лекарственное вещество биотрансформируется частично либо вовсе не изменяется. Это приводит к неферментативному синтезу коньюги-рованных антигенов в самом организме. Роль ranтена вьполняет введенный андроген или его метаболит, а роль носителя - макромолекулы организма (белки). Коныогированный антиген индуцирует синтез антител, специфически связывающих опасные для клеток химические соединения. При этом, наряду с нормальным иммунным ответом на антиген, возникают условия для развития аллергических реакций немедленного типа. Одной из возможных причин их возникновения может быть опустошающее действие на тимус больших доз неробола и метилтестостерона, и, в первую очередь, на образование Т-клеток-еупрессоров, обладающих высокой цитохромоксидазной активностью (А.В.Караулов и соавт., 1984) и способностью угнетать образование igg -антител (И.С.Гущин

- 29 -

и соавт., 1982; Г.В.Порадин и соавт., 1982 и др.).

При аллергических реакциях снижается уровень цитохрома Р-4СО в микросомальной фракции печени (И.Е.Ковалев и соавт., 1982). Его количество резко понижено после взрослой тимэктомии, а тэкхе у бестимусных мышей (А.В.Караулов и соапт., 1982; А.Н.Саприн и соавт., 1982). Индукторы пролиферации Т-лимфоцитов (Кон А и £ГА) в 5-6 роз повышают содержание цитохрома Р-450 в этих клетках (А.Н.Саприн и соавт., 1982).

Спленин, оказывая митогенный эффект, усиливает образование Т-клеток-супрессоров, подавляющих продукцию ^Е -антител, и, вероятно, тем самым обогащает организм субпопуляцией Т-клеток с высокой активностью цитохрома Р-450. Логично предположить, что при этом увеличивается цитохромоксидазная активность в микросомах печени и других тканей организма. В этом убеждают полученные нами данные о снижении на 34 % содержания цитохрома Р-450 в печени спл.енэктомирорпл • ных животных и его восстановлении после стимуляции иммунной сип^чч небелковым фактором спленина.

Становится очевидным, что развитие внутрипеченочного аллергического холестаза зависит не только от состояния иммунной, но и П'' тохромоксидазной системы. Экстракт селезенки спленин и его н^еш-п вый фактор представляются эффективным инструментом регуляции кпк иммунной, так и моноокс.идазной систем, и могут определять состоят'" обезвреживающей функции печени.

Влияние спленина на функциональное . состояние печени о^луч1 н-

ш-ж животных.

Среди факторен воздействия на иммунную смет?'-у орг-'тггмч '!<:<>-бос место занимает ионизируется р.одилцип. Послсд'ДИ!гм с» плкяш ' пгллет"я нарушение и функции нссни (В.А.Рг'Д'1""'1 : се.чгт., И./.-..''• Тк->, : Ч.П.Сюис;,'!', С.М.Дрм-:' ¡'Г/С; Г.К.ГР.чТмк-ро,

введением епленина (В.И.Гузь и соавт., 1960; В.П.Комиссаренко, 1961; -Л.И.Кореневекий и соавт., 1964,1973). В поисках возможного механизма действия препарата мы исследовали влияние епленина на секреторную, поглотительную'и экскреторную функции печени у крыс после дробного (100 Р) семидневного рентгеновского облучения.

Характерными изменениями у крыс после облучения были снижение скорости элиминации БСФ крови и усиление секреции желчи, в метаболизме красителя наблюдалось уменьшение его парных соединений с глутатионом и увеличение конъюгации с цистеинилглицином й цистеином.

Введение.животным после каждого сеанса облучения епленина предотвращало снижение элиминации ЕСФ из крови при одновременном повышении секреции желчи. Изменения в образовании парных соединений БСФ' были несущественны.

Особого .^внимания заслуживает восстановление спленином содержания небелковых тиоловых соединений, в печени.

По данным морфологических исследований, в печени облученных животных, получавших спленйн, в отличие от контрольных, дистрофические изменения выражены слабо' - отчетливо. определяется "грабеку-лярность долек, и структура гепатоцитов близка к норме.

Изложенные факты позволяют заключить, что' спленйн предотвращает возникновение морфо-функциональных изменений в печени при общем дробном рентгеновском облучении, и являются экспериментальным обоснованием клинического применения препарата при лучевой терапии. Действие препарата, по-видимому, обусловлено его способностью поддерживать в организме относительное постоянство субпопуляционного состава Т-лимфоцитов. ■ ' . .

Влияние епленина на перекисное окисление лшидов.

Исследовали влияние епленина на образование одного из патоге-• нетических факторов поражения печени при воздействии СС1^ и ионизи-

рующей радиации - пгрекисей липидов - в модельных условиях (В.Б.Спи-ричев, 1975). Было обнаружено угнетающее действие препарата на индуцируемое витамином flg развитие свободнорздикальных процессов в мембранах эритроцитов. Антйперекисное действие спленина находилось в прямой зависимости от количества внесенного в инкубационную среду препарата. Это обстоятельство позволяет предположить, что угнетение спленином свободнорадикальных процессов в мембранах эритроцитов, как и их стабилизация при механическом повреждении (Е.Б.Нечаева,

1978), осуществляется липидной фракцией препарата и в условиях при/

менения на целостном организме, вероятно, существенной роли не играет.

Роль небелковых факторов селезенки и тимуса в функциональном

восстановлении печени при. экспериментальном гепатите.

На основании приведенных доказательств влияния спленина на рдц функций печени у нормальных животных, а также их восстановление при некоторых формах экспериментального поражения органа была изучена роль НФС в реализации восстановительных процессов при экспериментальном токсическом гепатите.'

Шестидневное введение крысам с пораженной CCI^ печенью по 100 мг на 100 г массы тела НФС восстанавливало интенсивность желчеот-делительного процесса с 4,77 + 0,21 мг/мин/100 г массы тела до 6,3 + 0,23 мг/мин/100 г массы тела (Р ¡_ 0,001). Экскреция БСФ с желчью в течение первого получасового периода наблюдения почти в два раза превышала показатели контрольных животных (Р / 0,001). За вторую половину часа с желчью опытных животных выделялось несколько меньше красителя, чем у контрольных животных. За второй час экскреция красителя у опытных крыс была достоверно выше, чем в группе контрольных животных (Р ¿ 0,С01\

■ Принимая г/итогенное действие небелкопых факторов спленина и

тимуса на Т-лимфоциты за основу их биологического действия на организм, в том числе и на пораженную печень, представлялось целесообразным определить роль трансплантированных сингенных тимоцитов в воспроизведении гепатотропного действия изучаемых факторов.

Через 7 дней после трансплантации крысам с экспериментальным токсическим гепатитом 20 х 10^ интактных сингенных тимоцитов интенсивность секреции желчи восстанавливалась, однако не достигала уровня интактных животных. Экскреторная функция печени оставалась пониженной в первый час экскреторного процесса и сохранялась на уровне контрольных животных в течение второго часа экскреции.

Трансплантация в этих условиях взвеси активированных ин витро НФТ сингенных тимоцитов приводит на 8-й день к полному восстановлению изучаемых функциональных показателей печени. Секреция желчи в этой группе крыс не только восстанавливалась, но и имела тенденцию к превышению показателей интактных животных. Такую же закономерность наблюдали при определении экскреции красителя в желчь.

Таким образом, трансплантация тимоцитов здоровых доноров животным с экспериментальным токсическим гепатитом значительно' усиливает восстановительные процессы в поврежденной печени, что согласуется с данными И.Ф.Колпащиковой (1979). Полное восстановление секреторной и экскреторной функций печени отмечалось у реципиентов, получавших тимоциты, активированные НФТ. Это позволяет заключить, что Т-лимфоцитам принадлежит решающая роль в процессах восстановления функции печени при токсическом гепатите.

Исследование пролиферативних процессов в печени здоровых крыс спустя 18 часов после введения НФС обнаружило дозозависимое повышение включения 3Н-тимидина в нуклеиновые кислоты клеток органа. Запаздывание в проявлении митогеннсго действия фактора на клетки печени свидетельствует о возможной опосредованности его механизма.

Д'.-кчззтспьств прямого депгтвил -{чкторя »а прчли^орптирнмг! прочее-:!: п печени пика не получено.

Таким обратом, небелковго факторы, получении'5 из спленкпа и тимуса и оОладящие митогишьад, иммунсмодулпрупщим и г<-ппотроин>»« д' и«;трисм, пр^детасляютсл перепективни.ти средствами /утя ¡¡армяк'."!" • [•цчггкой корретпж нарушенного гомсостяза при иммунодефицита'« состоящих и пабелегаиипх печени. Идентичность физико-химн-^ских сяойстп и биологического действия небелковых. факторов сплишна и •пчлусл позволяют характеризовать их как небелковый фактор лпмфеид-

ткяни.

3. Роль фрагментов плазматических мембран тииоцитоп в реализации супрессорной и гс-патотропной функций небелкового фякт^-ра лимфеидной ткани.

Во взаимодействии оффоктортк клеток иммунной системы гущост-р°нная роль принадлежит функциональным структурам Т-илеточнюс игий -ран. 1!х активность проявляется нп только в состав0 плазматических мембрян клоток, но и ир!1 свободной циркуляции р крови в качестве р(>гулятор»1,к молекул (*.Рг1<!тап е* а1., 1981). Количество и активность Функциональных молекул мембранных структур существенно изменяются при воздействия на Т-лимфоциты митогенями. Их роль как компонента плауматичсско'й мембраны била исследована при рассмотрит! механизма действия нсбепровего фактора лимфоидной ткани на модели я.пергии немедленного тиха, а также пгч эксперимгитядьиоч токсическом гепатите.

Пр'-^'еструг'р'О эгету ерар.чителыюе изу:снип плазматических чс*«?рян, полу« »»«"с препаратирнил путем после механического ря:<ру-кт-ток и ••^-т'-'п.,... гл^щпчгп о И'моцитоп при 45 °С п пр^цс: • • ис и'чг;'."-тп^ц р п.^у *-чгпигя наптопич'^'чгем р-'.с!

!:■ 1 ■ >-• ч г -, '¡-ч" "'ч: ч М'М.С^'И!, СН'.ЧП' >' Ч'С ; : -

дукта, содержат меньше белка, а по активности маркерного фермента 5-нуклеотидазы приравниваются таковьм, полученным препаративным путем.

Максимальная активность 5-нуклеотидазы установлена в плазмати-. ческих мембранах наименее плотной популяции тимоцитов.

Установлено также, что активность ацетилхолинэстеразы присуща только Т-клеточной популяции лимфоцитов и пропорциональна степени зрелости клеток. Больше половины ее клеточной активности обнаруживается в мембранной структуре. Повышение энзиматической активности в спленоцитах под влиянием НФТ указывает на роль ыитогена в созревании Т-клеток.

Таким образом, активность 5-нуклеотидазы и ацетилхолинэстеразы фрагментов плазматических мембран являются не только их маркерами, но и критерием физиологической зрелости Т-лимфоцитов.

Внутривенное введение животным с токсическим гепатитом фрагментов плазматических мембран тимоцитов, снятых нагреванием в бессыво-

д

роточной среде с 5 х 10 клеток, воспроизводит в те же сроки действие небелкового фактора лимфоидной ткани по восстановлению секреторной и экскреторной функций печени. Функциональной структурой плазматической мембраны тимоцитов, опосредующей ее гепатотропное действие, по нашим представлениям, являются Рс^-Р. Их количество в снятых, нагреванием плазматических мембранах может быть достаточно высоким, т.к. они обнаруживаются на 25 % клеток тимуса ( A.Baвten

а1., 1975). При воздействии небелковых митогенов лимфоидных органов количество несущих Рс^-Р клеток значительно увеличивается за ^ счет образования субпопуляции Т-супрессоров. В этих-условиях не исключена возможность свободной'циркуляции Рс^-Р в крови в форме активных молекул.

Возможная экспрессия циркулирующих Рс^-Р на клетках печени

после внутривенного введения животным с токсическим гепатитом фрагментов плазматических мембран создает условия для образования на их поверхности с Рс -Р комплексов антиген-антитело. Вновь образованные комплексы, вероятно, осуществляют стимуладию пролиферации клеток печени (А.Г.Бабаева, 1985; в.Мо^ап et а1., 1986) и тем самым способствуют восстановлению ее -структурно-функциональной целостности,- нарушенной введением гепатотоксина.

Введение фрагментов плазматических мембран тимоцитов сенсибилизированным аскаридНым антигеном мышамВАЬВ/с в количестве, соответствующем 10® тимоцитов, уже через 6 дней приводит к 10-кратному снижению уровня -антител в плазме крови. Угнетение ^Е- антите-лообразования, по нашим представлениям, в первую очередь связано с образованием неспецифических Т-клеток-супрессоров в результате экспрессии поступивших с фрагментами мембран Рс^-Р на циркулирующих ■ Т-клетках организма.

Кроме' того, уровень^в-антител в крови лимитируется содержанием 1бе- связывающего фактора. Его продукция зависит от Т-лимфоци-тов и опосредуется растворимыми факторами, освобождаемыми активированными митогенами Т-клетками. Большая часть связывающего фактора имеет В-клеточное и моноцитарное происхождение ( С.Вер1«-вревае ег а1., 1987) и содержит общие антигенные детерминанты с

( т.К1вак1 et а1., 1987; Т.Лакау1та ег а1., 1987). Это обстоятельство свидетельствует об их структурной и функциональной схожести.

Учитывая упомянутые новые данные литературы, мы предполагаем следующий механизм подавления продукции Х^Е-антител небелковым фэктором лимфоидной ткани. Стимулированные фактором пр<лгл°ств'^!1';'--ки Т-лим1оцитов в процессе пролиферации и диффереиц-.'ровки, леря'У с образованием нестсглфичгскта Т-клетск-супрессоров, отд~лг«т

•»•ор, шадуцирущип образование свяэив&ицего фактора (экспрессии 1;с4--Р) на лимфоцитах, макрофагах и моноцитах.

Посредством Рс,-Р осуществляется связывание циркулирующих антител, а возможно, и угнетение1вВ- антителогенеза. Стимулирует 1й шпогеном Т-лимфоцитарний фактор - индуктор образования и экспрессии Ре^-Р, вероятно, является растворимым компонентом отделяемых нагреванием фрагментов плазматической мембраны тимоцигов. Введение его в составе плазматических мембран сенсибилизированным аскарид-нш антигеном животным стимулирует вышеизложенные процессы, приводящие к связыванию1§Е- антител.

Полученные результаты позволяют заключить, что гелатотрошюе и иымуномодулирующее действие небелкового фактора лимфоидной ткани опосредовано функциональными молекулами плазматических мембран Т-лимфоцитов. Их регуляторная роль распространяется как на лимфоид-нье, так и нелимфоидные клетки. Возможность замены функции Т-Лимфо-Г41Т0В фрагментами их мембранных структур фюрмирует предпосылки для создания иммунокорригирующих средств нового типа - препаратов специфических мембранных структур, свойственных отдельным популяциям лимфоцитов - и использования их для направленной иммунокоррекцпи дефицита той или иной клеточной субпопуляции.

вшода

1. Активным началом спЛенина, ответственным за его лимфоцито-тропное и гепатотропное действие, является фактор непетидной природы, обладающий митогенной активностью по отношению к спленоцитам и тимоцитам. Этот фактор выделен из спленина.

2. По физико-химическим свойствам и биологическому действию небелковый фактор спленина, контролирующий пролиферацию Т-лимф,оци-тов, аналогичен фактору, полученному из тимуса, что свидетельствует о неэаьисимости активации митогенной активности Т-лимфоцитов в ти-

чусо н селезенке.

3. Фактор обладает способностью усиливать в организме.продукцию;^- антител и подавлять образование иммуноглобулинов класса Е, что обусловлено ститлуляцией хелперной и супрессорной функций Т-лим-

'{ОЦИТОР.

4. Непептидный фактор спленина стимулирует синтез ДР1К в'печени здоровых и цитохрома Р-450 у спленэктомированных животных, а также ускоряет восстановление секреторно-экскреторной функции печени при экспериментальном токсическом гепатите.

5. Гепатотропное действие негатгидного фактора, выделенного из спленина, опосредовано Т-лимфоцитами, в частности отделяемыми ими фрагментами плазматических мембран.

6. Супрессорное действие фактора на синтез 1кЕ- антител воспроизводится отделяемыми от Т-лимфоцитов фрагментами плазматических мембран.

7. Фактор устраняет лимфоцитопешгю, обусловленную воздействием рентгеновских лучей и введением больший доз глюкокортикоидов, а также предупреждает нарушение структуры и функции печени у облучеч-тп-х животных.

СПИСОК Р"БОТ, ОПУБЛШОВЛШМХ ПО ТИ-Е ДИССЕРТАЦИИ I. Влияние спленина на отолит крою» от брсмсульфофтплеина иря зкслорим'-нт.олыг'М токсическом гепатите.// Вопросы эндокринологии ч домена ве-у^тп. В. I.-Киев.-1970.-С.75-77 ( соавт. А.В.Шевченко). Р.. Методика оценки функции почени у крмс бромеульфофтялгиновым цп-юдоч.// Г)о!!ро1Ч.! онпекринолстчи и пбтот ре'цеетв. В Л.-К«'»«.-ЕЛО. -С ЛОЯ-7тО.

3. Вчлиг; <-плен!»у на оуц.]г1дрилы:1 групп пт>1нкп п с^лтЛнки.// I!:.Гол.'"урн.ЛИ УГСР.-19"!.-.""2.-С. 222-2Я4 ( сеяпт. А. ¡!.М<,">т<г*"т»->,

4. Вплив спленектомН на bmIct сульфг1дрильних груп б1лк1в I неб1л-кових т1олових сполук печ1нки мишей. // Допов1д1 АН УРСР.-1972.-№5. -G.454-456 (соавт. А.В.Шевченко, А.Я.Местечкина, Л.М.Калинская, Т.В.Якубович).

5. Влияние спленэктомии и спленина на содержание тиолов в печени. // Роль нервной системы в возникновении патологических процессов и их компенсации. -Ивано-Франковск.-1972.-С.I40-I4I (соавт. А.В.Шевченко) .

6. Role of spleen factors in regulation of thiols level in liver. //7conferenee of Europ. compar.endocrinol.,Abstr,,Budapest,1973,

P.92 ( соавт. A.V.Shevchenko)

7. Вплив сплен1ну на секрецГю жовч1 та II х1м1чний склад у собак.// Ф1з1ол.журн.АН yPCP.-I974.-Jf6.-С.763-767 (соавт. Е.С.Лященко).

8. Спленин в восстановлении экспериментального поражения печени.// Механизм действия гормонов.-Киев.-1975.-С.82-83.

9. Новые данные о биологическом действии спленина.// Механизм действия гормонов.,-Киев.-1975.-С.120-121 (соавт. А.В.Шевченко, В.И.Кравченко, И.И.Дроздович, Н.М.Дорошенко, В.Н.Демченко, Ю.В.Ткачук).

10. Снижение спленином побочного холестатического действия неробола у крыс.//Рукопись деп.-ВИНИТИ 18.X.1976. -№4036-77 (соавт. А.В.Шевченко, Н.М.Дорошенко, Т.В.Якубович).

11. Новые данные о биологическом действии спленина.// Эндокринология. -В.6.-Киев.-1976.-0,116-122 (соавт. А.В.Шевченко, В.И.Кравченко, И.И.Дроздович, Н.М.Дорошенко, В.Н.Демченко, Ю.В.Ткачук).

12. Влияние спленина на уровень тиоловых групп в некоторых органах ■ и тканях в норме и при экспериментальном гепатите.// Эндокринология.-В.7.-Киев.-1977.-С.60-64 (еоавт. Я.Г.Бальон).

13. Сравнительная оценка противовоспалительной активности спленина и гидрокортизона при экспериментальном гепатите. // Тез.докл.II

- 39 -

съезда эндокринологов УССР. -Киев.1977.-С.57-58.

14. Некоторые особенности влияния гидрокортизона на поглощение печенью бромсульфофталеина и содержание в ней глутатиона при экспериментальном гепатите.//. Фармакология и токсикология.-B.I3.-Киев.-1978.-С.22-26.

15. Влияние спленина на обмен и- экскрецию бромсульфофталеина и секрецию желчи у крыс с токсическим гепатитом.// Физиол.журн.АН УССР. -1978.-№1.-С.52-56.

16. Изучение рецепторов тимоцитов, ответственных за розеткообразо-вание.// Доклады АН УССР,.-Сер.Б.-1979.■-If-б.-С.454-457 (соавт. И.А. Безвершенко, Л.М.Быкова, А.Л.Синельникова).

17. Вьделение и свойства рецепторов плазматической мембраны тимоцитов.// Тез.доклЛУ Всесоюзн.биохим.съезда.-Л.-1979.-С. 87 (соавт. И.А.Безвершенко, М.Г.Бойко, Л.М.Быкова, А.Л.Синельникова).

18. Рецепторы тимоцитов крысы, ' реагирующие с IgO и аутологичными эритроцитами.//'4 internat.congr.inmunbl.,Abstr.,Paris-I980 (соавт. И.А.Безвершенко, М.Г.Бойко, Л.М.Быкова).

19. Побочное действие на печень препаратов андрогенного. ряда и его коррекция.// Тез.доклЛЗ Всесоюзн.конфер.-Киев.-1981.-С. 185-186 (соавт. Н.Н.Кошель).

20. Взаимоотношения отделимых рецепторов тимоцитов, распознающих igG и Н-2 детерминанты аутологичных клеток.// Молекулярная биология.-С.52-54 (соавт. И.А.Безвершенко, М.Г.Бойко, Л.М.Быкова, А.Л.Синельникова).

21. Активность 5-нуклеотидазы при воздействии факторами тимуса.// Матер.докл.III Всесоюзн.симпоз. "Регуляция иммунного гомеостаза". -Л.-1962.-С.273-274 (соавт. М.Г.Бойко, М.М.Гойдаш, А.А.Тарасова, И.А.Безвершенко).

22. Активн1сть 5-нуклеотидали I швидк1сть включения эН-тим1дину в

ДНК тимоцитГв р1зно1 щ1льност1. // Тези 1У Укр.б1ох1м.з' 1зду.-Киев. -I9Ö2.-С.125-126 (соавт. И.А.Безвершенко, П.М.Халявко, А.А.Тарасова).

23. Антиокислителыгая активность экстракта селезенки.// Тез.докл.

III съезда эндокринологов УССР. -Киев.-1982.-С.65 (соавт. H.H.Кошель).

24. Отбор тимоцитов, богатых 5-нуклеотидазой, при воздействии гидрокортизона.// Доклады АН УССР.-Сер. Б".-1982.-№б.-С.65-67 (соавт. И.А.Безвершенко, А.А.Тарасова).

25. Восстановление некоторых функций печени тиыоцитами, стимулированными неполипептидным фактором вилочковой железы.// Системно-антисистемная регуляция в норме и патологии.-Киев.-1983.-C.I09-II0.

26. Обнаружение в дихлорэтановом экстракте селезенки митогенного фактора, подавляющего продукцию реагинов.// Тез.докл.5 Республ. конфер.по аллерголо гии.-Кие в-Ивано-Франко век.-1903.-С.161.

27. Активность отделяемой от клеток 5'-нуклеотидаэы в тимоцитах различной плотности.// Цитология.-1983.-№1.-С.I06-II0 (соавт. А.А.Тарасова, И.А.Безвершенко).

28. Имыуномодулирушцее и гепатотропное действие небелковых факторов лимфоидной ткани.// Механизмы иммуностимуляции./ Тез.докл.-Киев.-I985.-C.I76-I77 (соавт. М.М.Гойдаш, И.А.Безвершенко).

29. Небелковый фактор спленина.// Доклады АН УССР.-Сер.Б.-1985-)fó.-C.70-72 (соавт. В.П.Комиссаренко, И.А.Безвершенко).

30. Небелковый фактор, селезенки.// Регуляция иммунного гомеостаза./ Тез .докл. 1У Всесоюзн. симп .-Л.-1986.-С. 152-154.

31. 1мунолог1чна I троф1чна функцП фрагмент1в плазыатично1 мембра-ни тимоцитГв.// Тез.доп.У Укр.б1ох1м.з'1зду.-Киев.-1987.-4.2;-С. 125-126 (соавт. М.М.Гойдаш, Л.В.Богданович).

32. Иммуномодулирующий фактор спленина.// Тез.докл.4 съезда эндокринологов УССР.-Киев.-1987.-С.272-273.

33. Иммунофармакологический подход к модуляции образования IgB антител.//'Тез .докл.б Респ.конфер./ Актуальные вопросы иммунотерапии. -Ворошиловград.-1988.-С.147-148 (соавт. Л.М.Сквирская).