Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника

Тарасевич, Алексей Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника"

На правах рукописи

ТАРАСЕВИЧ Алексей Владимирович

Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника.

03.00.07. - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Оренбург-2004

Работа выполнена в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской Академии наук.

Научный руководитель

Доктор медицинских наук, профессор

Усвяцов Борис Яковлевич

Официальные оппоненты

Доктор биологических наук, профессор Доктор медицинских наук, профессор

Карташова Ольга Львовна Каган Юда Давидович

Ведущая организация

Челябинская государственная медицинская академия.

Защита состоится "ЛЗ" 2004 г. в "(0

№

~~ " часов на засе-

дании диссертационного совета Д.208.066.03 в Оренбургской государственной медицинской академии (460014, г. Оренбург, ул. Советская, 6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан 2004 г.

Учёный секретарь диссертационного совета,

Доктор медицинских наук, профессор ^^//^¿//^ Н.В. НЕМЦЕВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Нарушения микробиоценоза кишечника являются широко распространённым состоянием, оказывающим вредное воздействие на здоровье человека. Диагностика и коррекция дисбиозов до настоящего времени представляет значительные трудности (Митрохин С.Д., с соавт., 1997; Шендеров Б.А., 1998; Бондаренко В.М. с соавт., 2003).

В большинстве случаев дисбаланс кишечной микрофлоры сопровождается избыточной колонизацией кишечника энтеробакте-риями и изменением их биологических признаков в сторону повышения экспрессии факторов, направленных на инактивацию эффекторов иммунитета, что увеличивает риск развития эндогенных инфекций (Валышев А.В., 1997; Зыкова Л.С., 1998). Одним из наиболее распространённых и значимых таких факторов персистенции у энте-робактерий является антилизоцимная активность (АЛА) (Бухарин О.В., 1999; Гриценко В.А., 2001).

Необходимо знать причины повышения АЛА энтеробактерий в условиях кишечника, которые до настоящего времени изучены недостаточно. В частности, остаётся открытым вопрос о действии эндогенных факторов желудочно-кишечного тракта (желчь, секрет поджелудочной железы, рН среды, нормальная микрофлора кишечника) на АЛА энтеробактерий.

Недостаточно изучено влияние лечебно-профилактических препаратов (лекарственных растений, пробиотиков, пребиотиков, энтеросорбентов) на АЛА энтеробактерий в условиях действия эндогенных факторов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) человека.

Знание характера действия эндогенных факторов ЖКТ и их регуляторов на способность энтеробактерий к персистенции позволит более эффективно проводить диагностику дисбиоза и рационально осуществлять выбор препаратов для восстановления эубиоза кишечника.

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

Цель исследования. Изучение регуляции антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и на этой основе разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции нарушений микробиоценоза кишечника.

Задачи исследования.

1. Усовершенствовать методы культивирования анаэробов, выделения и идентификации энтеробактерий.

2. Изучить влияние эндогенных факторов ЖКТ на антилизоцимную активность энтеробактерий.

3. Изучить влияние лекарственных средств на антилизоцимную активность энтеробактерий в условиях действия факторов ЖКТ.

4. Разработать рациональные подходы к коррекции нарушений микробиоценоза кишечника.

Положения, выносимые на защиту.

1. Эндогенные факторы желудочно-кишечного тракта (желчь и секрет поджелудочной железы, дефицит бифидобактерий, избыточ-

. ная колонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp.) повышают антилизоцимную активность энте-робактерий при дисбиозе.

2. Установлена возможность регуляции антилизоцимной активности энтеробактерий при дисбиозе с помощью лекарственных препаратов за счёт подавления персистенции возбудителя в условиях желудочно-кишечного тракта либо путём усиления антиперси-стентного действия бифидобактерий и лактобацилл.

Научная новизна- Впервые исследовано действие пищеварительных секретов и основных представителей нормальной микрофлоры кишечника на способность-энтеробактерий к инактивации лизоцима. В эксперименте in vitro выявлено стимулирующее действие дуоденального содержимого на АЛА энтеробактерий, которое обусловлено сочетан-ным действием желчи и панкреатических ферментов.

Обнаружено, что штаммы бифидобактерий и лактобацилл обладают ингибирующим действием в отношении антилизоцимного признака энтеробактерий, а штаммы энтерококков и Clostridium perfringens способны повышать АЛА у данной группы условно-патогенных бактерий. Снижение рН среды! усиливает ингибирующее действие бифидо-

бактерий и лактобацилл и подавляет стимулирующее влияние энтерококков на АЛА энтеробактерий. Выявлено, что сниженное количество бифидобактерий, а также избыточная колонизация толстого кишечника Clostridium perfringens и штаммами энтерококков могут быть причинами повышения персистентного потенциала энтеробактерий при дисбио-зе.

Изучено влияние лекарственных средств на АЛА энтеробактерий в условиях действия эндогенных факторов желудочно-кишечного тракта. Показана возможность модификации АЛА энтеробактерий за счёт изменения рН, сорбции пищеварительных секретов, влияния препаратов на представителей нормальной микрофлоры.

Установлено, что большинство лекарственных растений эффективно подавляют способность энтеробактерий к инактивации лизоцима, причём биологически активные вещества, ответственные за данный эффект, устойчивы к пищеварительным секретам. В условиях проксимальных отделов тонкого кишечника ингибирующее действие лекарственных растений превосходит стимулирующее действие дуоденального содержимого. Ингибирующее действие настоя семени расторогапи сохраняется при его сочетании с пробиотиком "бифилайф" и лактулозой.

Выявлена связь между химическим составом и способностью лекарственных растений подавлять АЛА энтеробактерий. Максимальным эффектом обладали растения, богатые антиоксидантами, аскорбиновой кислотой и дополнительно содержащие в своём составе спирты, стероиды, салицилаты, флавоноидные гликозиды, сапонины (бессмертник, расторопша, солодка, ромашка).

Впервые показана возможность лекарственной регуляции антили-зоцимного признака энтеробактерий в кишечнике за счёт активации ингибирующего действия бифидобактерий и лактобацилл в отношении АЛА энтеробактерий, подавления стимулирующего влияния энтерококков и пищеварительных секретов.

Практическая ценность. Теоретическое значение работы заключается в расширении знаний о роли эндогенных факторов ЖКТ в повышении персистентного потенциала энтеробактерий при нарушении микробной экологии кишечника, что может быть использовано для разработки новых подходов к лекарственной регуляции АЛА энтеробакте-рий в кишечнике при дисбиозах.

Практическое значение исследования определяется тем, что для коррекции микрофлоры кишечника рекомендованы лекарственные растения, пробиотики, пребиотики, энтеросорбенты и их сочетания, отобранные по эффекту ингибирования антилизоцимного признака энтеро-бактерий. Раздел работы по отбору лекарственных растений для коррекции микрофлоры кишечника включён фрагментом в пособие для врачей "Критерии формирования детей и подростков с недифференцированной соединительнотканной дисплазией в группы риска по развитию неинфекционных заболеваний и возможные пути коррекции" (утверждено Учёным советом МЗ РФ 11.03.03).

Внедрён в производство на комбинате детского питания г. Оренбурга кисломолочный продукт "Бифилайф", ингибирующий АЛА энте-робактерий (Акт внедрения от 29.10.2004).

Усовершенствована методика микробиологического исследования фекалий. Разработан и внедрён в практику работы бактериологических лабораторий лечебно-профилактических учреждений г. Оренбурга способ создания безкислородной атмосферы, обогащенной водородом и углекислым газом для культивирования анаэробных микроорганизмов, а также питательная среда и способ первичной дифференциации условно-патогенных энтеробактерий (патент РФ на изобретение №2238314 от 20 октября 2004 года, акт внедрения от 30.10.2004). Это позволило повысить информативность метода без увеличения его трудоёмкости, стоимости и времени исследования. Раздел работы по совершенствованию диагностики дисбиоза кишечника включён фрагментом в учебное пособие "Дисбиоз кишечника: расширение диагностической информативности и профилактической значимости", утверждённое УМО при МЗ РФ 15.12.02.

Апробация работы. Результаты проведённых исследований доложены и обсуждены на Российской научной конференции "Современные аспекты профилактики и ранней диагностики заболеваний у детей" (г. Москва, 1999), Российской научно-практической конференции "Инфекция мочевой системы у детей" (г. Оренбург, 2001), областном совещании врачей-бактериологов (г. Оренбург, 2002), четвёртой Российской научной конференции "Персистенция микроорганизмов" (г. Оренбург, 2003)

Диссертация апробирована на совместном заседании кафедры микробиологии и Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе патент РФ на изобретение и 2 учебно-методических пособия, утверждённых МЗ РФ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 174 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материал и методы, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы, приложение. Указатель литературы включает 88 отечественных и 77 иностранных источника. Иллюстрации представлены 8 таблицами и 29 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. При проведений исследований изучено 492 штамма микроорганизмов, выделенных из фекалий от 221 пациента. Исследование микрофлоры толстого кишечника проводилось в соответствии с методическими рекомендациями "Комплексная диагностика, лечение и профилактика дисбактериоза (дисбиоза) кишечника в клинике внутренних болезней" (М., 1997). Идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, биохимических и антигенных свойств (Биргер М.О., 1982; Покровский В.И., 1985), используя для определения биохимической активности коммерческие диагностические системы "ENTERO-Test 24", STREPTO-Test, ANAERO-Test (Lachema, Чехия). Антилизоцимную активность у выделенных культур определяли известными методами: чашечным (Бухарин О.В. с соавт., 1984), ускоренным чашечным (Соколов В.Ю., 1990), фотометрическим (Бухарин О.В. с соавт., 1997). При исследовании регуляции антилизоцимной активности энтеробактерий изучено действие пищеварительных секретов, основных представителей нормальной микрофлоры кишечника человека, лекарственных средств (лекарственных растений, пробиотиков, энтеро-сорбентов, лактулозы).

Влияние представителей нормальной микрофлоры кишечника на АЛА энтеробактерий было исследовано разработанным методом оценки межмикробных взаимодействий с использованием пар штаммов, выделенных из фекалий одного и того же человека. Суть метода заключается в том, что сокультивирование бактерий осуществляли в анаэробных условиях на поверхности ряда чашек Петри с колумбийским агаром (Columbia agar, Oxoid, Англия), содержащим лизоцим в различных концентрациях. После суточной инкубации при 37°С в выросших колониях проверяли количественное соотношение энтеробактерий к тестируемым культурам, после чего колонии убивали парами хлороформа и заливали вторым слоем питательного агара с тест-культурой для определения АЛА чашечным методом. В контроле вместо смеси штаммов использовали их монокультуры.

При обнаружении изменения величины АЛА в опыте на 20% и более по сравнению с контролем, делали заключение о модифицирующем действии исследуемой культуры на АЛА энтеробактерий.

Статистическая обработка полученных результатов была выполнена с применением стандартных методов вариационной статистики и корреляционного анализа (Е.В. Гублер, А.А. Генкин, 1973) а также компьютерной программы "Microsoft Excel 2003".

Результаты исследования и их обсуждение. Усовершенствована методика микробиологического исследования фекалий. Разработан способ создания атмосферы для культивирования анаэробных бактерий, позволяющий повысить скорость, надёжность и существенно снизить стоимость создания атмосферы, оптимальной для культивирования анаэробных микроорганизмов. Сущность способа основана на том, что удаление кислорода производят путём сочетания откачки воздуха и заполнения вакуума азотом с удалением остатка кислорода за счёт его реакции с водородом на палладиевом катализаторе; водород получают из алюминия и водного раствора гидроокиси натрия; углекислый газ получают внутри анаэробного культиватора из гидрокарбоната натрия и лимонной кислоты, разобщённых до заполнения вакуума азотом за счёт наклонения анаэробного культиватора и соединяющихся в результате его возвращения в горизонтальное положение (рисунок 1).

Рисунок 1. Способ создания атмосферы для культивирования анаэробных микроорганизмов

Была также разработана питательная среда и способ первичной дифференциации условно-патогенных грамотрицательных бактерий, позволяющий существенно упростить и удешевить трудоёмкую и дорогостоящую процедуру идентификации данной группы микроорганизмов. Колонии одновременно отсевают на разработанную среду и агар Симмонса, в результате можно определить продукцию сероводорода, индола, ферментацию маннита и утилизацию цитрата. Данного набора признаков достаточно чтобы идентифицировать до вида Е. coli, P. vulgaris, P. mirabilis и С. freundi, а также отличить оставшиеся виды энте-робактерий от группы неферментирующих грамотрицательных бактерий. Если с помощью разработанной схемы удаётся идентифицировать культуру до вида, отпадает необходимость использования дополнительных тестов, что значительно экономит дорогостоящие реактивы, тест-системы и рабочее время персонала лаборатории. Известно, что на долю Е. coli приходится большинство культур, выделяемых из кишечника, поэтому трудоёмкость и стоимость этапа идентификации энтеро-бактерий при исследовании микрофлоры кишечника снижается существенно (в 2.7 раза).

Было изучено регулирующее действие на АЛА энтеробактерий следующих эндогенных факторов ЖКТ человека:

1. Представители нормальной микрофлоры кишечника

2. Секреты ЖКТ

3. РН

В эксперименте in vitro выявлено ингибирующее действие бифи-добактерий и лактобацилл на АЛА энтеробактерий. Штаммы бифидо-бактерий снижали АЛА Е. coli в 22,2+5,6% случаев; в 33,3+13,6% - у клебсиелл. Распространённость штаммов лактобацилл, снижающих АЛА этих видов энтеробактерий составила соответственно 45,0+11,1% и 50,0+15,8%. Остальные культуры бифидобактерий и лактобацилл обладали индифферентным действием на АЛА энтеробактерий.

Стимулирующее влияние на АЛА энтеробактерий оказывали энтерококки: 53,6+9,4% штаммов энтерококков повышали АЛА у Е. coli, 64,3+12,8% - у клебсиелл, остальные культуры энтерококков не изменяли АЛА энтеробактерий. Гетерогенным было влияние Clostridium perfringens на АЛА Е. coli: 30,0+14,5% штаммов повышали АЛА, 10,0+9,5% культур снижали, а остальные - не изменяли.

Уровень экспрессии АЛА энтеробактерий зависел от количественного содержания в микрофлоре кишечника бифидобактерий, Clostridium perfringens, энтерококков и их свойств.

Сравнение среднего уровня экспрессии АЛА энтеробактерий, выделенных из кишечника пациентов с нормальной бифидофлорой (содержание бифидобактерий 108-1010 КОЕ/мл) и от пациентов с её дефицитом (107 КОЕ/мл и ниже) представлено в таблице 1.

Таблица 1

Средний уровень экспрессии АЛА (мкг/мл) энтеробактерий у пациентов с нормальным и сниженным содержанием бифидобактерий

Исследуемые микроорганизмы Группа с нормальным количеством бифидобактерий (п=49) Группа с дефицитом бифидо-бактерий (п=57) Р

Е. coli с типичными свойствами 1,3±0,1 2,1±0,1 <0.05

Е. coli с гемолитической активностью 1,3±0,2 2,0±0,2 <0.05

Klebsiella spp. 1,4±0,2 2,4±0,1 <0.05

Как видно из таблицы, в группе с нормальным количественным содержанием бифидобактерий в кишечнике средняя АЛА энтеробактерий была достоверно ниже, чем в группе с дефицитом бифидобактерий.

На величину АЛА энтеробактерий в толстом кишечнике оказывало влияние содержание энтерококков и их свойств усиливать АЛА. Результаты сравнения среднего уровня АЛА энтеробактерий, выделенных из кишечника 3 групп пациентов (с нормальным количеством энтерококков, с избыточной колонизацией кишечника энтерококками, не изменяющими АЛА, с избыточной колонизацией кишечника энтерококками, стимулирующими АЛА) представлены на рисунке 2.

Мкг/мл 4 -|

Е. coli Klebsiella spp.

I Нормальное количество энтерококков в кишечнике В Избыточная колонизация кишечника энтерококками, не изменяющими АЛА Щ Избыточная колонизация кишечника энтерококками, стимулирующими АЛА

Рисунок 2. Средний уровень экспрессии АЛА энтеробактерий в зависимости от содержания в кишечнике энтерококков и их свойств.

Обозначения: По оси ординат: величина АЛА, мкг/мл. *-р <0,05

Как видно из рис. 2, средний уровень экспрессии АЛА энтеробактерий, выделенных из фекалий человека с нормальным количеством энтерококков существенно не отличался от данного показателя в группе с избыточной колонизацией кишечника энтерококками, не изменяющими АЛА. Напротив, в группе с избыточной колонизацией кишечника энтерококками, стимулирующими АЛА, средняя величина АЛА существенно превосходила данный показатель в предыдущих двух группах (р<0,05).

У пациентов с увеличенным содержанием Clostridium perfringens в фекалиях средний уровень экспрессии АЛА Е. coli составил 2,6±0,1 мкг/мл, а в группе пациентов с нормальным количеством Clostridium perfringens в кишечнике АЛА Е. coli была ниже - 1,9±0,1 мкг/мл (р<0,05).

Исследование влияния дуоденального содержимого на АЛА энте-робактерий выявило зависимость эффекта от дозы (рисунок 3). В на-тивном виде и в концентрации 25 и 50% содержимое оказывало стимулирующий эффект на АЛА у 93,3% штаммов. Действие более низких концентраций (12,5 и 5%) было разнонаправленным: стимулирующим -соответственно у 50,0% и 0,0% штаммов энтеробактерий, индифферентным - у 40,0 и 80,0%, ингибирующим - у 10,0% и 20,0% штаммов.

Стимулирующее действие дуоденального содержимого обусловлено, в основном, желчью. Под влиянием нативной желчи человека порций В и С наблюдалось усиление АЛА (по сравнению с контролем) у 86,6% исследуемых штаммов энтеробактерий. Препарат "Желчь очищенная сухая" стимулировал АЛА у 83,3% штаммов, панкреатин - у 13,3%. Действие лизоцима на признак было индифферентным. Комбинации "Желчь + панкреатин" и "Желчь + панкреатин + лизоцим" повышали АЛА у 90,0% штаммов энтеробактерий.

При продвижении химуса в дистальном направлении концентрация желчи и пищеварительных ферментов падает за счёт их инактивации индигенной микрофлорой (Куваева И.Б., Ладодо К.С., 1991). В результате в местах естественного обитания энтеробактерий концентрация этих веществ становится ниже порогового уровня, повышающего АЛА. При дисбиозе нарушается процесс биотрансформации пищеварительных секретов, что приводит к значительному увеличению их концентрации в дистальных отделах ЖКТ (Витебский Я.Д., 1990; Куваева И.Б., Ладодо К.С., 1991). Поэтому, стимулирующее действие желчи и пищеварительных ферментов при нарушении их инактивации нормальной микрофлорой может быть одной из причин повышения АЛА энте-робактерий при дисбиозах.

Рисунок 3. Частота изменения антилизоцимной активности

энтеробактерий под влиянием секретов желудочно-кишечного тракта.

Обозначения:

По оси абсцисс: Концентрация препарата

1 - Содержимое 12-перстной кишки (Желчь порции А) В нативном виде

2 - Содержимое 12-перстной кишки 50%

3-Содержимое 12-перстной кишки 25%

4-Содержимое 12-перстной кишки 12,5%

5 - Содержимое 12-перстной кишки 5%

6-Желчь порции В В нативном виде

7-Желчь порции С В нативном виде

8 - Препарат "Желчь очищенная сухая" 5%

9-Препарат "Панкреатин" 1%

10-Лизоцим 10мкг/мл

11 - Препараты "Желчь + панкреатин" 5% + 1%

12 - Препараты "Желчь + панкреатин + лизоцим" 5% + 1%+10мкг/мл

По оси ординат - % штаммов с изменённым уровнем АЛА, по сравнению с контролем.

Существенное влияние на действие дуоденального содержимого, а также представителей нормальной микрофлоры кишечника в отношении АЛА энтеробактерий оказывала рН. При сдвиге рН в кислую сторону частота повышения АЛА энтеробактерий под действием дуоденального содержимого снижалась с 83±6,9% при рН 7,5 до 10,0+5,5% при рН6,5(р<0,05).

При рН 7,5 повышение АЛА энтеробактерий наблюдалось под действием 53,0+9,1% штаммов энтерококков, в то время как при рН 6,5 данным эффектом обладало 20,0+7,3% культур данного рода (р<0,05). При рН 7,5 снижение АЛА энтеробактерий прослеживалось под влиянием 47,0+9,1% штаммов лактобацилл, при рН 6,5 - 70,0+8,4% штаммов (р<0,05).

Таким образом, эндогенные факторы желудочно-кишечного тракта (дефицит бифидобактерий, избыточная колонизация кишечника Clostridium perfringens, штаммами энтерококков, стимулирующих АЛА, желчь) повышают антилизоцимную активность энтеробактерий при дисбиозе.

Полученные сведения о влиянии эндогенных факторов на АЛА энтеробактерий послужили основой для разработки новых подходов к лекарственной регуляции персистентного потенциала энтеробактерий при дисбиозах, путём активации ингибирующего действия бифидобак-терий и лактобацилл в отношении АЛА энтеробактерий, а также предотвращения стимулирующего влияния энтерококков, клостридий и пищеварительных секретов на АЛА энтеробактерий.

При исследовании 36 видов лекарственных растений у 33 из них выявлено ингибирующее влияние на АЛА энтеробактерий. Лекарственные растения по ведущему фармакологическому эффекту были разделены на 3 группы: антимикробные, желчегонные, иммуномодулирую-щие. Среди антимикробных лекарственных растений наибольшей силой антиперсистентного действия обладали ромашка, девясил, солодка, цикорий. Дозозависимый характер действия на признак обнаружен у солодки и смородины, при этом повышение дозы негативно сказывалось на их антиперсистентном действии. У желчегонных растений наиболее эффективно ингибировали АЛА энтеробактерий бессмертник,

расторопша, кукурузные рыльца. Стимулирующее влияние в отношении АЛА энтеробактерий отмечено у укропа и аира. В группе растений с иммуномодулирующим действием эффективно подавляли АЛА энтеробактерий фиалка и липа, укроп повышал способность энтеробактерий к инактивации лизоцима.

Способность лекарственных растений снижать АЛА энтеробакте-рий сохранялось после их последовательной обработки желудочным соком и дуоденальным содержимым. Это означает, что компоненты растений, ответственные за данный эффект, устойчивы к пищеварительным секретам. Кроме того, в условиях проксимальных отделов тонкого кишечника, ингибирующее влияние фитопрепаратов превосходило стимулирующее действие дуоденального содержимого в отношении АЛА энтеробактерий.

Было изучено регулирующее действие на АЛА энтеробактерий пробиотиков нового поколения: "примадофилус бифидус", "флорадо-филус", "бифирастон", "эуфлорин-В", кисломолочные продукты "би-филайф", "нарине", "асМа", "actimel".

Показано, что влияние пробиотиков на АЛА микроорганизмов следует дифференцированно оценивать по действию производственных штаммов и химических компонентов, входящих в состав препарата. Комплексная оценка действия производственных штаммов и химических компонентов пробиотиков выявила, что с максимальной частотой подавление АЛА гемолитических штаммов кишечной палочки и клеб-сиелл (снижение признака у 80% - 100% исследуемых штаммов) оказывали нарине, бифирастон и эуфлорин-В. Снижение АЛА у 50-60% штаммов энтеробактерий наблюдали под действием препаратов: йогурт бифилайф и ас^те!. Низкой частотой ингибирующего действия (снижение АЛА у 20% штаммов) характеризовались кисломолочный продукт

activia. Примадофилус и флорадофилус оказывали подавляющее действие преимущественно в отношении АЛА клебсиелл (40% штаммов). Кисломолочный продукт бифилайф в 30% случаев оказывал ингиби-рующее действие на АЛА гемолитической кишечной палочки и клебсиелл.

Ингибирующее влияние на АЛА энтеробактерий у препарата би-фирастон было обусловлено химическими компонентами, у остальных исследованных пробиотиков - как производственными штаммами, так и химическими компонентами.

Результаты оценки ингибирующего действия пробиотиков на АЛА энтеробактерий in vitro в 72,7% случаев совпадали с результатами клинического применения препаратов. Следовательно, возможен отбор для лечения более эффективных пробиотиков по их действию на АЛА энтеробактерий.

Нейтрализация стимулирующего действия желчи и панкреатических ферментов на АЛА энтеробактерий возможна путём сорбции эндогенных факторов на специфических препаратах. Известно, что связывать желчь способны энтеросорбенты (Шевченко Ю.Н., 2001; Погорельская Л.В., Трякина И.П., 2002), следовательно, за счёт этого возможна нейтрализация её стимулирующего действия на АЛА энтеробак-терий. Результаты опытов показали, что при добавлении энтеросорбен-тов "Смекта" и "Пекто" дуоденальное содержимое не стимулировало АЛА энтеробактерий. В условиях проксимальных отделов тонкого кишечника сорбент "Смекта" снижал АЛА у 20% штаммов Е. coli и у 30% культур клебсиелл. Препарат "Пекто" ингибировал АЛА у 30% штаммов Е. coli.

Снижение рН также может быть одним из подходов к лекарственной регуляции АЛА энтеробактерий при дисбиозах, т.к. в кислой среде существенно ослабляется стимулирующее действие на АЛА энтеробак-терий пищеварительных секретов и энтерококков, усиливается ингиби-рующее действие бифидобактерий и лактобацилл. В этой связи особый интерес представляет лактулоза, т.к. главным эффектом данного препарата является ацидификация содержимого толстого кишечника, бифи-догенное действие и подавление жизнедеятельности условно-патогенных бактерий главным образом клостридий (Ballongue J. et al.,

1997). Результаты экспериментов с лактулозой показали, что данный препарат усиливает ингибирующее действие бифидобактерий и лакто-бацилл на АЛА энтеробактерий. В присутствии лактулозы 85,7+9,4% штаммов бифидобактерий подавляли АЛА аутоштаммов энтеробактерий, в то время как без лактулозы данным эффектом обладали 28,6+12,1% культур бифидобактерий (р<0,05). Частота снижения АЛА энтеробактерий под действием лактобацилл в присутствии лактулозы составила 92,9+6,9%, без неё - 42,9+13,2% (р<0,05). Лактулоза подавляла стимуляцию АЛА энтеробактерий энтерококками: в присутствии данного препарата 10,0+6,7% штаммов энтерококков стимулировали АЛА аутоштаммов энтеробактерий, без лактулозы - 65,0+10,7% (р<0,05). Лактулоза также предотвращала стимулирующее действие дуоденального содержимого на АЛА энтеробактерий: обработка Е. coli нативным дуоденальным содержимым в обычных условиях приводила к повышению АЛА у 90,0+9,5% культур, при добавлении лактулозы в это содержимое и снижении рН до 6,5 стимуляции признака не наблюдалось.

Ингибирующее действие лактулозы наблюдалось и в условиях естественных микробных ассоциаций толстого кишечника: после инкубации фекалий с лактулозой происходило снижение АЛА энтеробактерий в 85,0+7,9% случаев.

Оценивая материал в целом следует отметить два основных момента:

Во-первых, эндогенные факторы желудочно-кишечного тракта (желчь и секрет поджелудочной железы, дефицит бифидобактерий, избыточная колонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp.) повышают антилизоцимную активность энтеробактерий при дисбиозе.

Во-вторых, лекарственные средства оказывают регулирующее влияние на АЛА энтеробактерий в условиях ЖКТ за счёт прямого действия и опосредованного, связанного с изменением рН, сорбцией пищеварительных секретов, повышением антиперсистентных свойств бактерий-симбионтов в кишечнике.

ВЫВОДЫ

1. Разработан способ создания атмосферы для культивирования анаэробных микроорганизмов и питательная среда для первичной идентификации условно-патогенных грамотрицательных бактерий, что позволило снизить трудоёмкость и стоимость микробиологического исследования микрофлоры кишечника.

2. Эндогенные факторы желудочно-кишечного тракта: желчь и панкреатические ферменты; избыточная колонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp., дефицит би-фидобактерий, - способствуют повышению АЛА энтеробактерий при дисбиозах.

3. Снижение рН среды до 6,5 подавляет стимулирующее действие желчи и энтерококков, усиливает ингибирующее влияние бифидо-бактерий и лактобацилл на антилизоцимную активность энтеробак-терий.

4. Лекарственные растения, обладающие антимикробными, желчегонными и иммуномодулирующими свойствами подавляют способность энтеробактерий к инактивации лизоцима. Ингибирующее влияние фитопрепаратов на АЛА энтеробактерий превосходит стимулирующее действие дуоденального содержимого.

5. Выявлена связь между химическим составом и способностью лекарственных растений подавлять АЛА энтеробактерий. Максимальным эффектом обладали растения, богатые антиоксидантами и дополнительно содержащие в своём составе стероиды, флавоноидные гликозиды и салицилаты.

6. Пробиотики (нарине, эуфлорин-В, примадофилус бифидус, флора-дофилус, бифилайф, actimel, activia) ингибируют АЛА энтеробактерий как за счёт действия производственных штаммов, так и за счёт химических компонентов препаратов. Ингибирующее действие би-фирастона обусловлено химическими компонентами препарата.

7. Пребиотик лактулоза эффективно снижает АЛА энтеробактерий за счёт активации ингибирующего действия бифидобактерий и лакто-бацилл, подавления стимулирующего влияния энтерококков и пищеварительных секретов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Тарасевич А.В. Экология и некоторые биологические свойства кло-стридий, обитающих в кишечнике человека /А.В. Тарасевич, Е.В. Летучих //Медицинские аспекты микробной экологии: Сб. науч. тр.- М., 1995.- Вып. 7.- часть 1,- С.32 -39.

2. Этиологическая диагностика пиелонефрита у детей с учетом перси-стентных свойств уропатогенов /Л.С. Зыкова, О.В. Бухарин, А.В. Тарасевич и др. //Нефрология и диализ. - 2001.- № 2.- С.259-264.

3. Бактериально-грибковые ассоциации кишечника в условиях колонизации дрожжеподобными грибами рода Candida /O.B. Бухарин, Н.Б. Перунова, А.В. Тарасевич и др. //Журн. микробиол., эпидеми-ол. и иммунобиол. - 2002. - №5. - С.45-48.

4. Влияние лекарственных растений на антилизоцимную активность микроорганизмов /О.В. Бухарин, О.Е. Челпаченко, А.В. Тарасевич и др. //Антибиотики и химиотерапия. - 2003.- Т.48, №5.- С.11-14.

5. Тарасевич А. В. Влияние секретов желудочно-кишечного тракта на антилизоцимную активность энтеробактерий /А.В. Тарасевич, Б.Я. Усвяцов, Л.С. Зыкова //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2003.-№ 4. С. 78-81.

6. Дисбиоз кишечника. Расширение диагностической информативности и профилактической значимости: Учебное пособие /Оренб. гос. мед. акад., Сост. О.Е. Челпаченко, А.В. Валышев, А.В. Тарасевич и др.- Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2003. - 13с. Утверждено УМОМЗ РФ 15.12.02.

7. Критерии формирования детей и подростков с недифференцированной соединительнотканной дисплазией в группы риска по развитию неинфекционных заболеваний: Пособие для врачей /Оренб. гос. мед. акад., Сост. СЕ. Лебедькова, О.Е. Челпаченко, А.В. Тарасевич и др.- Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2003. - 24с. Утверждено Учёным советом МЗ РФ 11.03.03.

8. Тарасевич А.В. Способ создания бескислородной атмосферы, обогащенной водородом и углекислым газом, для культивирования анаэробных микроорганизмов /А.В. Тарасевич, Л.С.Зыкова, Б.Я. Усвяцов /Патент РФ на изобретение № 2238314, 2004.- Бюл. №29.-10с.

Тарасевич Алексей Владимирович

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Оригинал-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 2000 for Windows. Подписано в печать 17.11.2004. Формат 60x84 1/16. Гарнитура Таймс. Печать оперативная. Усл. печ. л.-1,0. Тираж 100 экз.

125142

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Тарасевич, Алексей Владимирович

Введение.

Глава 1. Регуляция факторов персистенции энтеробактерий как один из путей коррекции микробиоценоза кишечника (Обзор литературы)

1.1 Факторы персистенции энтеробактерий и их роль в развитии дисбиоза кишечника

1.2 Регуляция факторов персистенции энтеробактерий.

1.3 Современные методы диагностики и терапии дисбиоза кишечника.

Глава 2. Материал и методы.

2.1 Исследуемые штаммы.

2.2 Методы исследования микрофлоры толстого кишечника.

2.3 Методы идентификации микроорганизмов.

2.4 Методы определения антилизоцимной активности.

2.5 Методы определения влияния эндогенных факторов желудочно-кишечного тракта на антилизоцимную активность бактерий.

2.6 Исследование влияния лекарственных препаратов на антилизоцимную активность микроорганизмов.

2.7 Статистическая обработка полученных результатов.

Глава 3. Усовершенствование методики исследования микрофлоры желудочно-кишечного тракта

3.1 Усовершенствование методики культивирования анаэробных микроорганизмов

3.2 Усовершенствование методики идентификации условно-патогенных энтеробактерий

Глава 4. Влияние эндогенных факторов ЖКТ на антилизоцимную активность энтеробактерий

4.1 Влияние основных представителей нормальной микрофлоры кишечника на антилизоцимную активность энтеробактерий

4.1.1 Влияние бифидобактерий на антилизоцимную активность энтеробактерий

4.1.2 Влияние энтерококков на антилизоцимную активность энтеробактерий

4.1.3 Влияние Clostridium perfringens на антилизоцимную активность энтеробактерий

4.2 Влияние секретов желудочно-кишечного тракта на антилизоцимную активность энтеробактерий

4.3 Влияние рН на антилизоцимную активность энтеробактерий

Глава 5. Регуляция антилизоцимной активности микроорганизмов лекарственными средствами в условиях действия эндогенных факторов ЖКТ

5.1 Регуляция антилизоцимной активности микроорганизмов лекарственными растениями

5.2 Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий пробиотиками нового поколения

5.3 Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий энтеросорбентами

5.4 Влияние лактулозы на антилизоцимную активность энтеробактерий

Введение Диссертация по биологии, на тему "Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника"

Актуальность проблемы

Нарушения микробиоценоза кишечника являются широко распространённым состоянием, оказывающим вредное воздействие на здоровье человека. Диагностика и коррекция дисбиозов до настоящего времени представляет значительные трудности [11, 12, 39, 81].

В большинстве случаев дисбаланс кишечной микрофлоры сопровождается избыточной колонизацией кишечника энтеробактериями и изменением их биологических признаков в сторону повышения экспрессии факторов, направленных на инактивацию эффекторов иммунитета, что увеличивает риск развития эндогенных инфекций [6, 15, 33]. Одним из наиболее распространённых и значимых таких факторов персистенции у энтеробактерий является антилизоцимная активность (АЛА) [5, 24].

Знание характера действия эндогенных факторов ЖКТ и их регуляторов на способность энтеробактерий к персистенции позволит более эффективно проводить диагностику дисбиоза и рационально осуществлять выбор прегп-ратов для восстановления эубиоза кишечника.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение регуляции антили-зоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и на этой основе разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции нарушений микробиоценоза кишечника.

Для достижения этой цели поставлены следующие задачи.

1. Усовершенствовать методы культивирования анаэробов, вьщеления и идентификации энтеробактерий.

2. Изучить влияние эндогенных факторов ЖКТ на антилизоцимную активность энтеробактерий.

4. Разработать рациональные подходы к коррекции нарушений микробиоценоза кишечника.

Положения, выносимые на защиту

1. Эндогенные факторы желудочно-кишечного тракта (желчь и секрет поджелудочной железы, дефицит бифидобактерий, избыточная колонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp.) повышают антилизоцимную активность энтеробактерий при дис-биозе.

2. Установлена возможность регуляции антилизоцимной активности энтеробактерий при дисбиозе с помощью лекарственных препаратов за счёт подавления персистенции возбудителя в условиях желудочно-кишечного тракта либо путём усиления антиперсистентного действия бифидобактерий и лактобацилл.

Научная новизна

Впервые исследовано действие пищеварительных секретов и основных представителей нормальной микрофлоры кишечника на способность энтеро-бактерий к инактивации лизоцима. В эксперименте in vitro выявлено стимулирующее действие дуоденального содержимого на AJIA энтеробактерий, которое обусловлено сочетанным действием желчи и панкреатических ферментов.

Обнаружено, что штаммы бифидобактерий и лактобацилл обладают инги-бирующим действием в отношении антилизоцимного признака энтеробактерий, а штаммы энтерококков и Clostridium perfringens способны повышать АЛА у данной группы условно-патогенных бактерий. Снижение рН среды усиливает ингибирующее действие бифидобактерий и лактобацилл и подавляет стимулирующее влияние энтерококков на AJIA энтеробактерий. Выявлено, что сниженное количество бифидобактерий, а также избыточная колонизация толстого кишечника Clostridium perfringens и штаммами энтерококков могут быть причинами повышения персистентного потенциала энтеробактерий при ди> биозе.

Изучено влияние лекарственных средств на AJIA энтеробактерий в условиях действия эндогенных факторов желудочно-кишечного тракта. Показана возможность модификации АЛА энтеробактерий за счёт изменения рН, сорбции пищеварительных секретов, влияния препаратов на представителей нормальной микрофлоры.

Установлено, что большинство лекарственных растений эффективно ш-давляют способность энтеробактерий к инактивации лизоцима, причём биологически активные вещества, ответственные за данный эффект, устойчивы к пищеварительным секретам. В условиях проксимальных отделов тонкого кишечника ингибирующее действие лекарственных растений превосходит стимулирующее действие дуоденального содержимого. Ингибирующее действие настоя семени расторопши сохраняется при его сочетании с пробиотиком"би-филайф" и лактулозой.

Выявлена связь между химическим составом и способностью лекарственных растений подавлять АЛА энтеробактерий. Максимальным эффектом обладали растения, богатые антиоксидантами, аскорбиновой кислотой и допелнительно содержащие в своём составе спирты, стероиды, сапицилаты, флаво-ноидные гликозиды, сапонины (бессмертник, расторопша, солодка, ромашка).

Впервые показана возможность лекарственной регуляции антилизоцимно-го признака энтеробактерий в кишечнике за счёт активации ингибирующего действия бифидобактерий и лактобацилл в отношении АЛА энтеробактерий, подавления стимулирующего влияния энтерококков и пищеварительных секретов.

Практическая ценность

Теоретическое значение работы заключается в расширении знаний о роли эндогенных факторов ЖКТ в повышении персистентного потенциала энтеробактерий при нарушении микробной экологии кишечника, что может быть ic-пользовано для разработки новых подходов к лекарственной регуляции АЛА энтеробактерий в кишечнике при дисбиозах.

Практическое значение исследования определяется тем, что для коррекции микрофлоры кишечника рекомендованы лекарственные растения, пробютики, пребиотики, энтеросорбенты и их сочетания, отобранные по эффекту ингибл-рования антилизоцимного признака энтеробактерий. Раздел работы по отбору лекарственных растений для коррекции микрофлоры кишечника включён фрагментом в пособие для врачей "Критерии формирования детей и подростков с недифференцированной соединительнотканной дисплазией в группы риска по развитию неинфекционных заболеваний и возможные пути коррекции" (утверждено Учёным советом МЗ РФ 11.03.03).

Внедрён в производство на комбинате детского питания г. Оренбурга кисломолочный продукт "Бифилайф", ингибирующий АЛА энтеробактерий (Акт внедрения от 29.10.2004).

Усовершенствована методика микробиологического исследования фега-лий. Разработан и внедрён в практику работы бактериологических лабораторий лечебно-профилактических учреждений г. Оренбурга способ создания безки-слородной атмосферы, обогащённой водородом и углекислым газом для культивирования анаэробных микроорганизмов, а также питательная среда и способ первичной дифференциации условно-патогенных энтеробактерий (патент

РФ на изобретение №2238314 от 20 октября 2004 года, акт внедрения от 30.10.2004). Это позволило повысить информативность метода без увеличения его трудоёмкости, стоимости и времени исследования. Раздел работы по совершенствованию диагностики дисбиоза кишечника включён фрагментом в учебное пособие "Дисбиоз кишечника: расширение диагностической инфорш-тивности и профилактической значимости", утверждённое УМО при МЗ РФ 15.12.02.

Апробация работы

Результаты проведённых исследований доложены и обсуждены на Российской научной конференции "Современные аспекты профилактики и ранней диагностики заболеваний у детей" (г. Москва, 1999), Российской научно-практической конференции "Инфекция мочевой системы у детей" (г. Оренбург, 2001), областном совещании врачей-бактериологов (г. Оренбург, 2002), четвёртой Российской научной конференции "Персистенция микроорганизмов" (г. Оренбург, 2003)

Диссертация апробирована на совместном заседании кафедры микробю-логии и Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (2004).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе патент РФ на изобретение и 2 учебно-методических пособия, утверждённых МЗ РФ.

Объём и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Тарасевич, Алексей Владимирович

ВЫВОДЫ

2. Эндогенные факторы желудочно-кишечного тракта: желчь и панкреатические ферменты; избыточная колонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp., дефицит бифидобактерий, -способствуют повышению АЛА энтеробактерий при дисбиозах.

3. Снижение рН среды до 6,5 подавляет стимулирующее действие желчи и энтерококков, усиливает ингибирующее влияние бифидобактерий и лактобацилл на антилизоцимную активность энтеробактерий.

6. Пробиотики (нарине, эуфлорин-В, примадофилус бифидус, фло-радофилус, бифилайф, actimel, activia) ингибируют АЛА энтеробактерий как за счёт действия производственных штаммов, так и за счёт химических компонентов препаратов. Ингибирующее действие бифирастона обусловлено химическими компонентами препарата.

7. Пребиотик лактулоза эффективно снижает АЛА энтеробактерий за счёт активации ингибирующего действия бифидобактерий и лактобацилл, подавления стимулирующего влияния энтерококков и пищеварительных секретов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Важнейшей проблемой здоровья населения в настоящее время являются дисбиозы. Изменения микробиоценоза кишечника оказывают комплексное неблагоприятное воздействие на организм человека, включая нарушение пищеварения, расстройства обмена веществ, развитие иммунопатологии, эндогенной интоксикации и инфекции [7, 79].

Одним из частых и неблагоприятных проявлений дисбиоза является из&>1-точная колонизация кишечника энтеробактериями, сопровождающаяся изменением их биологических свойств в сторону повышения устойчивости к эффекторам иммунитета, что увеличивает риск развития эндогенных инфекций. [15, 33]. Наиболее распространённым и значимым фактором у энтеробактерий является антилизоцимная активность (АЛА) [10, 24]. Учитывая, что лизоцим вносит вклад в обеспечение колонизационной резистентности кишечника [121], АЛА энтеробактерий также может принимать активное участие в патогенезе дисбиоза кишечника.

Перспективным путём коррекции микрофлоры кишечника, а также профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний эндогенного происхождения может быть подавление способности энтеробактерий к деградации лиээ-цима [10, 15,33].

Для решения данной задачи важно знать причины повышения АЛА энтеробактерий при нарушении микробной экологии кишечника, которые до т-стоящего времени изучены недостаточно. В частности, остаётся открытым вопрос о действии эндогенных факторов желудочно-кишечного тракта на экспрессию данного признака энтеробактерий.

Целыо настоящего исследования явилось изучение регуляции аитилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и на этой основе разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции нарушений микробиоценоза кишечника.

Для достижения этой цели поставлены следующие задачи.

1. Усовершенствовать методы культивирования анаэробов, выделения и идентификации энтеробактерий.

2. Изучить влияние эндогенных факторов ЖКТ на антилизоцимную активность энтеробактерий.

4. Разработать рациональные подходы к коррекции нарушений микробш-ценоза кишечника.

При проведении исследований изучено 492 штамма микроорганизмов, выделенных из фекалий от 221 пациента. Исследование микробиоценоза кишечника проводили в соответствии с Методическими рекомендациями «Комплексная диагностика, лечение и профилактика дисбактериоза (дисбиоза) кишечника в клинике внутренних болезней» (М., 1997). Идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, биохимических и антигенных свойств. Антилизоцимную активность у выделенных культур определяли известными методами: чашечным [14], ускоренным чашечным [65], фотометрическим [10]. Полученные данные обработаны с использованием статистических мзтодов.

Исследовано действие основных представителей нормальной микрофлоры кишечника и пищеварительных секретов на способность энтеробактерий к инактивации лизоцима.

Для качественного решения поставленных задач была усовершенствована методика микробиологического исследования фекалий. Коработан способ создания атмосферы для культивирования анаэробных бактерий, позволяющий повысить скорость, надёжность и снизить стоимость создания атмосферы, оптимальной для культивирования анаэробных микроорганизмов (патент РФ на изобретение №2238314 от 20 октября 2004 года). Была также разработана питательная среда и способ первичной дифференциации условно-патогенных грамотрицательных бактерий, позволяющий существенно упростить и удешевить трудоёмкую и дорогостоящую процедуру идентификации данной группы микроорганизмов (получено положительное решение формальной экспертизы по заявке №2003 121074 (022304), приоритет от 08.07.2003).

Было изучено регулирующее действие на АЛА энтеробактерий следующих эндогенных факторов ЖКТ человека:

1. Представители нормальной микрофлоры кишечника

2. Секреты ЖКТ

3. РН

Выявлено ингибирующее действие бифидобактерий и лактобацилл на ан-тилизоцимный признак энтеробактерий. Показано, что за счёт данного эффекта бифидобактерии могут принимать активное участие в регуляции АЛА энтеробактерий в кишечнике, а сниженное количество бифидобактерий в кишечнике является одной из причин повышения АЛА энтеробактерий при дисбиозе. Однако не более 33% штаммов бифидобактерий, обитающих в кишечнике обладают способностью подавлять АЛА энтеробактерий.

Этот факт следует учитывать при коррекции микрофлоры кишечника. Для длительного переживания в кишечнике патогену необходимо преодолеть колонизационную резистентность, которая обеспечивается синергидным действием нормальной микрофлоры и иммунных механизмов хозяина [89], среди которых важное значение имеет лизоцим [121]. Следовательно, АЛА энтеробактерий может повышать их конкурентоспособность в борьбе с индигенными микроорганизмами. Известно, что в большинстве случаев экзогенно введённые бифидобактерии в кишечнике не приживаются и восстановление бифидофлоры происходит за счёт развития собственных штаммов бифидобактерий. Поэтому нельзя исключить, что неспособность аутобифидофлоры подавлять АЛА энтеробактерий является одной из причин низкой эффективности лечения дисбю-зов и частых рецидивов избыточной колонизации кишстника условно-патогенными энтеробактериями.

Штаммы Enterococcus spp. характеризовались гетерогенностью по их влиянию на АЛА: 53% штаммов энтерококков усиливали антилизоцимную защиту кишечной палочки и 66% штаммов - клебсиелл; 3% штаммов энтерококков подавляли АЛА Е. coli; 44% штаммов энтерококков оказывали индифферентное действие на АЛА Е. coli, 34% - клебсиелл. Установлено, что избыточная колонизация кишечника штаммами энтерококков, стимулирующими АЛА, связана с повышением уровня экспрессии данного признака энтеробактерий, в то время как повышенное количество энтерококков с индифферентным действием на АЛА не приводила к данному эффекту.

Другим сдвигом в кишечной микрофлоре, имеющим связь с повышеш!ем персистентного потенциала энтеробактерий, является избыточная колонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens, которые способны повышать АЛА энтеробактерий.

Следовательно, избыточную колонизацию кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp., стимулирующих АЛА энтеробактерий, можно рассматривать в качестве дополнительных микроэкологических критериев неблагополучия в ЖКТ, требующих целенаправленной коррекции.

Среди эндогенных факторов регуляции кишечной микрофлоры большое значение имеют секреты ЖКТ [42, 79]. Одним из веществ, препятствующих избыточной колонизации тонкого кишечника является лизоцим, который в сочетании с желчными кислотами и панкреатическими ферментами эффективно уничтожает грамотрицательные бактерии в проксимальных отделах кишечника. [42] Поэтому знания об особенностях действия секретов ЖКТ на антилизоцимную защиту энтеробактерий важны для понимания причин изменения персистентного потенциала условно-патогенных бактерий при дисбиозах и рационального подхода к их коррекции.

Выявлено стимулирующее действие дуоденального содержимого на АЛА энтеробактерий, которое обусловлено, в основном, желчыо. Панкреатин и лизоцим не влияли на АЛА энтеробактерий, но незначительно усиливали CTiiNty-лирующее действие желчи. При этом действие на АЛА комбинации желчь + панкреатин + лизоцим не отличалось от влияния на признак нативного дуоденального содержимого. Это означает, что доля участия других компонентов дуоденального содержимого в изменении АЛА энтеробактерий, вероятно, ш-значительна. Важно отметить, что дуоденальное содержимое стимулирует АЛА энтеробактерий в концентрациях, которые в норме имеют место только в верхних отделах тонкого кишечника. При продвижении хиг^са в дистальном направлении концентрация желчных кислот и пищеварительных ферментов падает за счёт их инактивации индигенной анаэробной микрофлорой [42]. В результате в местах естественного обитания энтеробактерий концентрация этих веществ, вероятно, становится ниже порогового уровня, повышающего АЛА. При дисбиозе нарушается процесс биотрансформации пищеварительных секретов, что приводит к значительному увеличению их концентрации в детальных отделах ЖКТ (синдром пшерферментоза) [42, 79]. Поэтому, стимулирующее действие желчи и пищеварительных ферментов при нарушении их инактивации нормальной микрофлорой может служить объяснением одной из причин повышения АЛА энтеробактерий при дисбшзах.

Изменение рН в толстом кишечнике часто встречается при нарушении его микробной экологии. Многие лекарственные средства, применяемые для коррекции кишечной микрофлоры, существенно модифицируют кислотно-щелочное состояние дистальных отделов кишечника Поэтому знания об особенностях влияния рН на способность условно-патогенных бактерий к инактивации лизоцима представляются важными для обоснования рациональных подходов к снижению их персистентного потенциала при дисбиозах.

Проведённые исследования показали, что уровень экспрессии АЛА штаммов Е. coli с типичными свойствами, гемолитической кишечной палочки и клебсиелл в слабо кислой среде составил соответственно 2,1, 2,4 и 2,45 мкг/мл; в слабо щелочной среде - соответственно 2,15, 2,4 и 2,5 мкг/мл, т.е. различия оказались не существенными.

В то же время изменение рН существенно влияло на действие дуоденального содержимого. При сдвиге рН в кислую сторону частота повышения АЛА энтеробактерий под действием дуоденального содержимого снижалась с 83±6,9% при рН 7,5 до 10±5,5% при рН 6,5. Вероятно, это связано с тем, что оптимум действия желчи и панкреатических ферментов находится в щелочной среде. Этот факт можно использовать при лечении дисбиозов. В случае необходимости применения средств, стимулирующих секрецию желчи и поджелудочной железы, а также ферментных препаратов, следует их употреблять в сочетании с препаратами, снижающими рН в дистальных отделах кишечника.

Для решения вопроса о целесообразности снижения рН в дистальных отделах кишечника важно знать влияние ацидификации на характер межмикробных взаимодействий, в частности, на действие представителей нормальной микрофлоры кишечника в отношении АЛА энтеробактерий. Получено прямое подтверждение целесообразности такого подхода: сдвиг рН в кислую сторону, усиливал ингибирующее действие штаммов бифидобактерий и лактобацилл на антилизоцимный признак энтеробактерий. Кроме того, в кислой среде большинство штаммов энтерококков утрачивали способность стимулировать АЛА.

Таким образом, повышению персистентного потенциала энтеробактерий при дисбиозе может способствовать дефицит бифидобактерий, избыточная ю-лонизация кишечника штаммами Clostridium perfringens и Enterococcus spp., стимулирующих АЛА, действие желчи и панкреатических ферментов.

Полученные сведения о влиянии эндогенных факторов на АЛА послужили основой для разработки новых подходов к лекарственной регуляции персистентного потенциала энтеробактерий при дисбиозах, путём активации инги-бирующего действия бифидобактерий и лактобацилл в отношении АЛА энтеробактерий, а также предотвращения стимулирующего влияния энтерококков, клостридий и пищеварительных секретов на АЛА энтеробактерий.

Поскольку при нарушении микробной экологии кишечника реально усиление антилизоцимной защиты энтеробактерий за счёт действия желчи и панкреатических ферментов, важен вопрос о возможности нейтрализации этого влияния.

Известно, что связывать желчь способны энтеросорбенты [58,77], следовательно, за счёт этого они могут нейтрализовать её стимулирующее действие на АЛА энтеробактерий. Результаты опытов подтвердили, что данная группа препаратов блокирует стимулирующее действие дуоденального содержимого на AJIA энтеробактерий. Вероятно, это происходит за счёт сорбции компонентов желчи, ответственных за стимуляцию AJIA. Кроме этого, было исследовано влияние самих сорбентов на способность энтеробактерий к инактивации ли-зоцима. Оказалось, что ингибирующим действием на AJIA энтеробактерий обладали препараты "Смекта" и "Пекто". Препарат "Энтеросгель", считающийся одним из лучших синтетических энтеросорбентов [77], стимулировал AJIA у 20% штаммов кишечной палочки и клебсиелл. Среди изученных энтеросорбентов особо следует остановиться на препарате "Пекто", действующим веществом которого является пектин, являющийся природным полимером растительного происхождения. Кроме способности к связыванию желчных кислот пектины обладают свойствами пребиотиков. Пектины не разрушаются пищеварительными секретами, а в дистальных отделах кишечника они подвергаются биотрансформации представителями индигенной микрофлоры при этом обрх-зуются короткоцепочечные жирные кислоты, которые снижают рН кишечника [58, 105, 106, 107]. Кроме того, известна способность пектинов к стимуляции роста бифидобактерий и лактобацилл [81, 146]. Исследования энтеросорбента "Пекто" показали, что под его действием у 50% штаммов энтеробактерий ин-гибировалась способность к инактивации лизоцима.

Снижение рН также может быть одним из подходов к лекарственной регуляции AJIA при дисбиозах, т.к. в кислой среде существенно ослабляется стимулирующее действие на AJIA энтеробактерий пищеварительных секретов и энтерококков, усиливается ингибирующее действие бифидобактерий и лактобацилл. В этой связи, кроме пектина, особый интерес представляет лактулоза, т.к. главным эффектом данного препарата является ацидификация содержимого толстого кишечника, бифидогенное действие и подавление жизнедеятельности условно-патогенных бактерий, главным образом клостридий [89]. Результаты серии экспериментов с лактулозой показали, что данный препарат сам по себе не изменяет AJIA, но активирует ингибирующее действие бифидобактерий и лактобацилл на AJIA энтеробактерий, предотвращает стимуляцию AJIA энтеробактерий энтерококками и, возможно, Clostridium perfringens, нейтрализует стимулирующее действие дуоденального содержимого.

Ингибирующее действие лактулозы проявляется в условиях естественных микробных ассоциаций толстого кишечника, причём наибольшая степень го-давления АЛА энтеробактерий наблюдалась при избыточной колонизации толстого кишечника Clostridium perfringens.

В настоящее время наиболее сложным является вопрос о лекарственной регуляции моторной и секреторной функции ЖКТ при дисбиозах. Достаточно часто при дисбиозе нарушается процесс биотрансформации желчных кислот и пищеварительных ферментов, что приводит к развитию синдрома гиперфер-ментоза толстого кишечника [42]. Поэтому желчегонные, ферментные препараты, а также вещества, стимулирующие перистальтику тонкого кишечника способны усилить это неблагоприятное явление, одним из последствий которого может быть повышение персистентного потенциала энтеробактерий. Кроме того, известна высокая чувствительность бифидобактерий и лактобацилл к желчи, в то время как энтеробактерий и энтерококки к ней резистентны [93]. По этой причине препараты пищеварительных ферментов, вещества, стимулирующие секрецию желчи, секреторную функцию поджелудочной железы, а также моторику тонкого кишечника при дисбиозах следует назначать под контролем персистентных свойств энтеробактерий. Для предотвращения возможного повышения персистентного потенциала энтеробактерий препараты этих групп следует сочетать с энтеросорбентами и лактулозой. Среди сорбентов по совокупности биологических эффектов предпочтительно применение препарата "Пекто".

Другим проявлением дисбаланса кишечной микрофлоры является дислэ-кация энтеробактерий в проксимальные отделы тонкого кишечника, где они в норме отсутствуют. [83]. Это также может способствовать контакту энтеробактерий с пищеварительными секретами в концентрациях, способных стимулировать их АЛА. Для лекарственной регуляции АЛА на уровне проксимальных отделов кишечника требуются подходы, отличающиеся от способов подавления признака в дистальных отделах. В частности, использование лактулозы для этих целей нецелесообразно, так как антиперсистентное действие лактулозы, обусловлено созданием кислой среды, что имеет место только в дистальных отделах кишечника.

Наибольшую перспективу в регуляции персистентных свойств энтеробактерий на уровне верхних отделов кишечника имеют лекарственные растения.

При исследовании 36 видов лекарственных растений выявлено, что 33 из них ингибировали способность энтеробактерий к инактивации лизоцима.

Лекарственные растения по ведущему фармакологическому эффекту были разделены на 3 группы: антимикробные, желчегонные, иммуномодулирующие. Среди антимикробных лекарственных растений наибольшей силой антиперси-стентного действия обладали ромашка, девясил, солодка, цикорий. Дозозави-симый характер действия на признак обнаружен у солодки и смородины, при этом повышения дозы негативно сказывалось на их антиперсистентном действии. У желчегонных растений наиболее эффективно ингибировали АЛА энтеробактерий бессмертник, расторопша, кукурузные рыльца. Стимулирующее влияние в отношении АЛА энтеробактерий отмечено у укропа и аира. В группе растений с иммуномодулирующим действием эффективно подавляли АЛА энтеробактерий фиалка и липа, укроп повышал способность энтеробактерий к инактивации лизоцима.

Выявлена связь способности лекарственных растений подавлять АЛА энтеробактерий с их составом. Установлено, что данный эффект обусловлен сочетанием биологически активных веществ. Максимальным ингибирую-щим действием в отношении АЛА штаммов Е. coli и Klebsiella spp. обладали растения, богатые антиоксидантами, аскорбиновой кислотой и дополнительно содержащие в своём составе спирты, стероиды, салицилаты, флавоноидные гликозиды, сапонины (бессмертник, расторопша, солодка, ромашка)

Способность лекарственных растений снижать АЛА энтеробактерий сохраняется после их последовательной обработки желудочным соком и дуоденальным содержимым. Это означает, что компоненты растений, ответственные за данный эффект, устойчивы к пищеварительным секретам. Кроме того, в условиях проксимальных отделов тонкого кишечника ингибирующее действие лекарственных растений превосходит стимулирующее действие дуоденалыю-го содержимого.

В патогенезе дисбиоза в настоящее время большое значение придаётся транслокации энтеробактерий из кишечника в портальную венозную систему с последующим инфицированием печени, желчных путей и 12-пёрстной кишки. [24] На важность защиты печени при дисбиозах обращают внимание и другие исследователи [39, 58]. В процессе гематогенного инфицирования печени основную роль играет повышение проницаемости слизистой кишечника, причём в повреждении эпителиального барьера могут иметь значение высокотоксичные свободные радикалы и перекисное окисление липидов [90]. В связи с этим одним из наиболее важных лекарственных растений для коррекции микрофлоры кишечника может оказаться расторопша пятнистая, обладающая мощным антиоксидантным, детоксицирующим, мембранопротекторным, гепатопротек-торным, действием [41]. Кроме того, расторопша обладает выраженной способностью к подавлению AJIA энтеробактерий. В комплексной программе биофитокоррекцин дисбиозов препараты на основе расторопши рекомендуют сочетать с пробиотиками и пребиотиками [58]. Результаты наших экспериментов показали, что ингибирующее действие расторопши на AJIA энтеробактерий сохраняется при её сочетании с пробиотиком "бифилайф" и лактулозой, что может послужить ещё одним аргументом в пользу целесообразности их со-четанного применения при дисбиозах.

В последние годы в арсенале препаратов для коррекции микрофлоры кишечника появилось большое количество пробиотиков нового поколения, действие которых на персистентные характеристики бактерий пока не изучгно. В настоящей работе показано, что в действии пробиотиков на АЛА микроорганизмов следует оценивать эффекты биотических (производственные штаммы) и абиотических компонентов. Комплексная оценка действия производственных штаммов и абиотических компонентов пробиотиков (были исследованы примадофилус бифидус, флорадофилус, бифирастон, эуфлорин-В, кисломолочные продукты «бифилайф», «нарине», «activia», «actimel») выявила, что максимальное подавление AJIA кишечной палочки и клебсиелл (снижение признака у 80% - 100% исследуемых штаммов) оказывали нарине, бифирастон и эуфлорин-В. Умеренным ингибирующим действием (снижение АЛА у 5060% штаммов энтеробактерий) обладали йогурт бифилайф и actimel. Слабым ингибирующим действием (снижение АЛА у 20% штаммов) характеризовались кисломолочный продукт activia. Примадофилус и флорадофилус оказывали подавляющее действие преимущественно в отношении АЛА клебсиелл. Кисломолочный продукт бифилайф оказывал умеренное ингибирующее действие на АЛА гемолитической кишечной палочки и клебсиелл, однако в сочетании с лактулозой его ингибирующее действие на АЛА энтеробактерий усиливалось.

Ингибирующее влияние на АЛА энтеробактерий у препарата бифирастон было обусловлено абиотическими компонентами, у пробиотиков "нарине" и "эуфлорин-В" — как производственными штаммами, так и абиотическими компонентами.

Полученные знания о влиянии эндогенных факторов ЖКТ на персистеш-ные свойства энтеробактерий могут быть использованы для совершенствования диагностики и коррекции микроэкологических нарушений кишечника. В частности, гетерогенность энтерококков по характеру их действия на АЛА ai-теробактерий требует дифференцированного подхода к коррекции микрофлэ-ры кишечника при их избыточном количестве. В этом аспекте полезно при обнаружении данного сдвига в микрофлоре определять характер действия энтерококков на АЛА аутоштаммов энтеробактерий. Связь избыточной колонизации кишечника штаммами Clostridium perfringens, повышающими персистент-ный потенциал энтеробактерий, может послужить дополнительным аргументом в пользу важности определения этого показателя при изучении кишечной микрофлоры. Из-за стимулирующего действия пищеварительных секретов желчегонные и ферментные препараты следует применять под контролем АЛА энтеробактерий.

156

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Тарасевич, Алексей Владимирович, Оренбург

1. Антилизоцимная активность менингококков /ОБ. Бухарин, С.Д. Борисов, Ю.В. Езепчук и др. //Журн. микробиол.- 1991.- №7.- С. 17-20.

2. Ардатская М. Д. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения /М.Д. Ардатская, А.В. Дубинин, О.Н. Минушкин //Терапевтический архив.- 2001.- №1.- С.67-72.

3. Бельмер С.В. Антибиотик-ассоциированный дисбактериоз кишечника / С.В. Бельмер //Русск. мед. журн. -2004.- Т. 12, № 3.- С. 148-152.

4. Блинков И.Л. Краткая энциклопедия фитотерапии: справочник по лечебному применению растений/И.Л. Блинков, Т.Д. Киселева, Е.В. ЦветаеваМ.,1998.- 197с.

5. Бондаренко В.М. Роль бактериальной протеазы, деградирующей секреторный иммуноглобулин А, в персистенции клебсиелл /В.М. Бондаренко //Журн. микробиол.- 2000.- №4.- С. 12-16.

6. Бондаренко В.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева//Фарматека.- №7.- 2003.- С.56-63.

7. Бондаренко В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич.- М.: Изд. КМК Scientific Press, 2003.- 220с.

8. Бондаренко В.М. Характеристика плазмиды Klebsiella pneumoniae, несущей маркёры лекарственной устойчивости и антилизоцимной актившсти /В.М. Бондаренко, А.Л. Яблочков, Ю.М. Романова//Журн. микробиол-1988.-№3.- С.28-32.

9. Борисов С.Д. Антилизоцимная активность менингококков и её примеш-ние в диагностике менингококковой инфекции: Автореф. дис. канд. мед. наук/С.Д. Борисов; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1988.- 21с.

10. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий /О.В. Бухарин.- М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 1999.- 366с.

11. Бухарин О.В. Факторы персистенции кишечной микрофлоры при ди> биозе /О.В. Бухарин, А.В. Валышев //Вестн. РАМН.- 1997.- №3.- С. 19-22.

12. Бухарин О.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине /О.В. Бухарин, Н.В. Васильев.- Томск: изд-во Томск ун-та, 1974.- 207с.

13. Бухарин О.В. Бактерионосительство (медико-экологический аспект) / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов.- Екатеринбург: УрО РАН, 1996.- 206с.

14. Бухарин О.В., Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, А.П. Малышкин, Н.В. Немцева //Журн. микробиол.- 1984.- №2,- С.27-28.

15. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на них пробиотиков при дисбиозе кишечника: Автореф. дис. канд. мед наук /А.В. Валышев; Оренбургск. гос. мед. акад.- Оренбург, 1997.-18с.

16. Валышев А.В. Влияние водорастворимых витаминов на антилизоцим-ную активность энтеробактерий / А.В. Валышев, В.А.Кириллов, Д.А. Кириллов //Журн. микробиол.- 2000.- №4.- С.80-82.

17. Валышев А.В. Влияние инулина на биологические свойства энтеробактерий /А.В. Валышев, В.А. Кириллов, Д.А. Кириллов, О.В. Бухарин //Журн. микробиол.- 2000.- №1.- С.79-80.

18. Влияние бифидобактерий на антилизоцимную активность энтеробактерий /А.В. Валышев, Н.Н. Елагина, В.А. Кириллов и др. //Журн. микро-биол.-2000.-№4.-С.77-79.

19. Воробьёва Е.И. Пропионовокислые бактерии в профилактике дисбакте-риозов /Е.И. Воробьёва //Дисбактериоз. Миф или реальность?: Тез. докл. научно-практ. семинара.- М., 2003.- С.8-14.

20. Воронин А. А. Значение энтеросорбентов в комплексном лечении некоторых инфекций, передаваемых половым путём /А.А. Воронин, О.Н. Го-лубева //Сорбционная терапия в акушерстве и гинекологии: Сб. науч. тр.-М., 2001.- С.103-111.

21. Герасимов В.Е. Роль антилизоцимной активности во внутриклеточном паразитировании шигелл: Автореф. дис. канд. мед наук /В.Е. Герасимов; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1989.- 18с.

22. Гриценко В.А. Роль факторов персистенции в биологии и экологии Escherichia coli: Автореф. дис. докт. мед наук / В.А. Гриценко; Орен-бургск. гос. мед. акад.- Оренбург, 2001.- 48с.

23. Громова Г.Г. Микробиологические критерии ранней диагностики пиелонефрита у детей: Автореф. дис. канд. мед. наук / Г.Г. Громова; Орен-бургск. гос. мед. акад.- Оренбург, 1996.-23с.

24. Гублер Е.В. Применение непараметрических кр«риев статистики в медо-ко-биологических исследованияхЕ.В. Гублер, А.А. Генкш.- Л.: Медицина, 1973.- 141с.

25. Дерябин Д.Г. Антилизоцимная активность бактерий как фактор их фаго-резистентности: Автореф. дис. канд. мед наук /Д.Г. Дерябин; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1989.- 20с.

26. Дорошенко Е.В. Ещё раз о дисбактериозе / Е.В. Дорошенко // Поликлиника.- 2003.- №4.- С.39-40.

27. Заикина O.J1. Клиническое значение антилизоцимного признака возбудителей инфекции мочевой системы у детей: Автореф. дис. канд. мед наук / O.J1. Заикина; Оренбургск. гос. мед. акад., Оренбург, 1995.- 25с.

28. Зыкова J1.C. Роль персистентных характеристик микрофлоры в этиолош-ческой диагностике и определении источников инфицирования органов мочевой системы при пиелонефрите у детей первого года жизни /JI.C. Зыкова //Жури, микробиол.- 1997.- №4.- С.98-102.

29. Зыкова JI.C. Этиологическая характеристика пиелонефрита и её значение для экспериментально-клинического обоснования антибактериальной терапии: Автореф. дис. канд. мед наук /JI.C. Зыкова; Чел. гос. мед. ин-т.-Челябинск, 1986.- 22с.

30. Зыкова JI.C. Факторы персистенции уропатогенов в диагностике, прогт-зировании и лечении пиелонефрита у детей: Автореф. дис. докт. мед. наук /JI.C. Зыкова; Оренбургск. гос. мед. акад., Оренбург, 1998 42с.

31. Ильенко JI.H. Оценка эффективности применения сорбента Энтеросгель в комплексном лечении рецидивирующих форм бактериального вашноза /JI.H. Ильенко, Е.В. Иванова //Сорбционная терапия в акушерстве и гинекологии: Сб. науч. работ.- М., 2001.- С.5-14.

32. Ильенко JI.H. Применение препарата Энтеросгель в комплексной терапии воспалительных заболеваний матки и придатков /JI.H. Ильенко, Е.А. Петрович //Сорбционная терапия в акушерстве и гинекологии: Сб. науч. работ.- М., 2001.- С. 15-28.

33. Исследование влияния медикаментов на биологические свойства Clostridium difficile /А.В. Валышев, В.А. Кириллов, А.С. Панков и др. //Журн. микробиол.- 2003.- №4.- С.85-88.

34. Каширская НЛО. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры / Н.Ю. Каширская //Русский медицинский журнал.-2000.-№3.- С. 13-14.

35. Колесов А.П. Анаэробные инфекции в хирургии / А.П. Колесов, А.В. Столбовой, В.И. Кочеровец.- Л.: Медицина, 1989.- 156с.

36. Комплексная диагностика, лечение и профилактика дисбактериоза (дисбиоза) кишечника в клинике внутренних болезней. Методические рекомендации /Сост. С.Д. Митрохин, М.Д. Ардатская, Е.В. Никушкин и др-М, 1997.-45с.

37. Корсун В.Ф. О клиническом использовании масла из семян расторопши / В.Ф. Корсун, В.В. Мартыненко, В.В. Киркин //Практическая фитотерапия.-2001.-№ 4.- С.36-37.

38. Корсун В.Ф. Лечебные свойства масла из расторопши МАРИОЛ-МК /В.Ф. Корсун, В.В. Мартыненко, Б.В. Никулина //Практическая фитотерапия.- 2001.- № 4.- С.37-39.

39. Куваева И.Б. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей: диетическая коррекция /И.Б. Куваева, К.С. Ладодо М.: Медицина, 1991 .-240с.

40. Лебедев В.А. Клиническая эффективность препарата Дюфалак в лечении запоров у беременных /В.А. Лебедев, М.В. Рыбин //Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии.- 2003.- Т.2, №3.- С.94-96.

41. Левин Ю.М. Лечение, оздоровление и профилактика в условиях кризиса экологии организма. Новые принципы и методы / Ю.М. Левин. -М.: Медицина, 1998.-232с.

42. Лосин Е.И. Экспериментальное обоснование комплексной антибактериальной терапии сальмонеллёза: Автореф. дис. канд. мед наук / Е.И. Лосин; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1984.- 15с.

43. Маянский А.Н. Дисбактериозы: иллюзии и реальность /А.Н. Маянский //Педиатрия.- 2000.- N4.- С.80-88.

44. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника. /В.М. Коршунов, Н.Н. Володин, Б.А. Ефимов и др.- М., 1999.- 80с.

45. Минушкин О.Н. Короткоцепочечные жирные кислоты в диагностике печеночной энцефалопатии и оценке эффективности препарата лактулозы (Дюфалака) /О.Н. Минушкин, М.Д. Ардатская, Н.А. Елизарова //Клиническая фармакология и терапия 2001.- №10,- С.9-13.

46. Модифицирующее действие Saccharomyces boulardii на биологические свойства энтеробактерий /Д.А. Кириллов, Н.В. Перунова, О.Е. Челпа-ченко и др. //Журн. микробиол.- 2002.- №4.- С.57-59.

47. Новый метод определения антилактоферриновой активности микроорганизмов / И.В. Валышева, А.В. Валышев, O.JI. Карташова и др. //Журн. микробиол.- 2003.- №4.- С.64-67

48. Особенности биологических свойств условнопатогенных бактерий, определяющих характер дисбиотических нарушений в составе нормальной микрофлоры толстой кишки /JI.A. Леванова, В.А. Алешкин, А.А. Воробьев и др. //Журн. микробиол.- 2002.- №6.- С.48-53.

49. Парфенов А.И. Теоретические и прикладные вопросы дисбактериоза кишечника /А.И. Парфенов, Г.А. Осипов, И.Н. Ручкина //Consilium medi-cum Т.5, N6.- 2003.- Available from: URL: http://www.consilium-medicum.com/media/consilium/0306/328.shtml

50. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз /А.И. Парфенов //Русск. мед. журн. 1998.- Т.6, №18.- Available from: URL: http:// www.rmj.ru / rmj /16/ nl 8/ 2.htm

51. Парфенов О.Г. Опыт санации стафилококковых бактерионосителей на базе санатория-профиллактория УБР ПО "Оренбургнефть" /О.Г. Парфенов, В.А. Гриценко //Персистенция бактерий: Сб. науч. тр.- Куйбышев, 1990.- С.121-124.

52. Пастушенков Л.В. Фгрмакотерапия с оенвами фитотерапии: Учебник / Л.В. Пастушенков, Е.Е. Лесиновская.СПб.: СПХФИ, 1995.- Т.2.- 247с.

53. Перспективы использования пектинов для коррекции кишечной микрофлоры при дисбактериозах /Е.Б. Лазарева, Т.С. Попова, Л.У. Шрамко и др. //Дисбактериозы и эубиотики: Тез. конф.- М., 1996.- с.23.

54. Петровская В.Г. Ранние этапы инфекционного процесса (достижения и проблемы)/В.Г. Петровская, Б.И. Маракуша//Журн. микробиол 1987.-№10.- С. 107-116.

55. Погорельская Л.В. Программа восстановления микрофлоры (биофито-коррекция) и профилактика дисбактериоза: Методические рекомендации /РМАПО; Сост. Л.В. Погорельская, И.П. Трякина.- М., 2002.-3Ос.

56. Погорельская Л.В. Фитотерапия в инфекционной практике Л.В. Погорел»-ская, В.Ф. Корсун, Ю.С. Журавлёв, М.Х. Турнюв.-М., 1998.- 126с.

57. Пономарев СБ. Новая тактика в лечении больных с острыми кишечными инф| циями /СБ.Пономарев,Е.Е. Кубенский //П0ликлшшш.-№3.-С.33-35.

58. Роль персистирующей условно патогенной микрофлоры кишечника при дисбиозе в возникновении заболеваний гепатобилиарной системы / А.В. Валышев, Ф.Г. Гильмутдинов, А.А.Третьяков и др. // Журн. микробиол.-1997.- № 4.- С.87-88.

59. Скиба Н.Э. Сравнильная антигенность различных молочных продуктов /Н.Э. Скиба, ИБ. Гмошинский, МБ. Гмошинская //Пробиотики и пробиотичоекие п дукты в профилактике и лечении наиболее распространённых заболеваний че. ка: тез. конф.М., 1999.-С.46.

60. Соколов В.Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов / В.Ю. Соколов//Персистенция бактерий: Сб. науч. тр.- Куйбышев, 1990.- С.83-93.

61. Соколов В.Ю. Механизм антилизоцимной активности бактерий: Авто-реф. дис. канд. мед наук / В.Ю. Соколов; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1990.-22с.

62. Соколов С.Я. Справочник по лекарственньтрвстениям С Л. Соколов, И.ГТ. Замотаевг X., Основа, 1993.- 447с.

63. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни /JI.A. Леванова, В.А. Алешкин, А.А. Воробьев и др. //Журн. микробиол-2001.- N4.- С.47-50.

64. Сурикова Е.В. Факторы персистенции клебсиелл: Автореф. дис. канд. мед наук/Е.В. Сурикова; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1992.- 22с.

65. Тамм А.О., Метаболиты кишечной микрофлоры в диагностике дисбиоза кишечника/А.О. Тамм, М.П. Вия, М.П. Микельсаар, У.Х. Сийгур // Антибиотики и мед. биотехнол.- 1987.- Т.32, №3.- С.191-195.

66. Урсова Н.И. Дифференцированная тактика использования пробиотиков в коррекции дисбактериозов кишечника у детей / Н.И. Урсова //Consilium medicum. 2004. Т.6, №3.- Available from: URL: http://ww\v.consilium-medicum.com /media/consilium/0403c/l 2.shtml

67. Урсова Н.И. Перспективы применения пробиотиков метаболитного типа в педиатрии /Н.И. Урсова //Consilium Medicum.- 2003.- Т.5, №6. Available from: URL: http://www.consilium-medicum.com/media /consilium/0306c/l 8.shtml

68. Усвяцов Б.Я. Роль лизоцимной и антилизоцимной активности в экологии и патогенности гонококков /Б.Я. Усвяцов, Л.Г. Воронина, Н.Г. Лендер-ман//Персистенция бактерий: Сб. науч. тр.- Куйбышев, 1990.- С. 14-18.

69. Федосеева К.Е. Антилизоцимная активность шигелл и её значение в патогенезе и лечении острой дизентерии: Автореф. дис. канд. мед наук / К.Е. Федосеева; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1985.- 17с.

70. Феклисова Л.В. Отраслевой стандарт и протокол ведения больных с дис-бактериозом кишечника /Л.В. Феклисова //Дисбактериоз. Миф или реальность: Тез. докл. научно-практического семинара М., 2003.-C.3-7.

71. Хавкин А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет /А.И. Хавкин // Русск. мед. журн.-2003.-T.il, №3.-С. 122-126.

72. Хорошилова Н.В. Иммуномодулирующее и лечебное действие пробиотиков /Н.В. Хорошилова //Иммунология.- 2003.- №6.- С.352-356.

73. Шевченко Ю.Н. Препараты сорбционно-дезинтоксикационного действия для медицины /Ю.Н. Шевченко //Сорбционная терапия в акушерстве и гинекологии: Сб. науч. работ М., 2001.- С.5-14.

74. Шеенков Н.В. Роль аитилизоцимной активности бактерий в развитии инфекционного процесса и пути её регуляции: Авторские. канд. мед. наук /Н.В. Шеенков; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1993.-19с.

75. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание: В 3 т. /Б.А. Шендеров.- Т.1.- Микрофлора человека и животных и ее функции.- М.: Грантъ, 1998.- 288 с.

76. Шендеров Б.А Медицинская микробная экология и функциональное питание В 3 т. / Б.А. Шендеров Т.2.- Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и живогных.-М.: Грантъ, 1998.-413 с.

77. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание В 3 т. / Б.А. Шендеров.- Т.З Пробиотики и функциональное питание.- М.: Грантъ, 2001.- 288 с.

78. Швецов С.А. Клиническое значение персистентных характеристик аэробной условно-патогенной микрофлоры у больных холециститом: Автореф. дис. канд. мед наук / С.А. Швецов; Пермск. Гос. мед. ин-т.-Пермь, 1994.-31с.

79. Шульпекова Ю.О. Избыточный бактериальный рост в кишечнике: патогенетические особенности и лечебные подходы / Ю.О. Шульпекова // Русск. мед. журн. 2003. Т. 11, № 5.- С.281 -285.

80. Челпаченко О.Е. Экспериментальное обоснование рациональной терапии пиелонефрита у детей под контролем маркёров персистенции возбудителя: Автореф. дис. канд. мед наук / О.Е. Челпаченко; Чел. гос. мед. ин-т,-Челябинск, 1993.- 19с.

81. Черданцева Г.А. Характеристика биологических свойств энтерококков различного происхождения /Г.А. Черданцева, С.И. Билимова //Журн. микробиол.- 2002.- №4.- С.101 -104.

82. Чернова O.JI. Антилизоцимная активность стафилококков, выделенных при бактерионосительстве: Автореф. дис. канд. биол. наук/ O.JI. Чернова; Чел. гос. мед. ин-т.- Челябинск, 1989.- 17с.

83. Чернохвостова Е.В. Местный иммунитет и микробные IgA-протеазы / Е.В. Чернохвостова//Журн. микробиол.- 1987.- №6.- С. 104-111.

84. Энтеробактерии: руководство для врачей /И.В. Голубева, В.А. Килессо, Б.С. Киселева и др.- М.: Медицина, 1985.- 321с.

85. Ballongue J. Effects of Lactulose and Lactitol on Colonic Microflora and Enzymatic Activity /J. Ballongue, C. Schumann, P. Quignon //Scand. J. Gastroenterol.- 1997.- V.32, Suppl. P.41-44.

86. Berg R.D. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract /R.D. Berg // Adv. Exp. Med. Biol.- 1999.- V.473.- P.l 1-30.

87. Bevins C.L. Defensins and innate host defence of the gastrointestinal tract / C.L. Bevins, E. Martin-Porter, T. Ganz //Gut.- 1999.- V.45.- P.911-915.

88. Bougie D. Effect of propionibacteria supplementation on fecal bifidobacteria and segmental colonic transit time in healthy human subjects / D. Bougie, N. Roland, F. Lebeurrier, P. Arhan //Scand. J. Gastroenterol.- 1999.- V.34.1. P. 144-148.

89. Chinda D. The fermentation of different dietary fibers is associated with fecal Clostridia levels in men / D. Chinda, S. Nakaji, S. Fukuda et al. //J. Nutr. — 2004.- V.134,№.8.- P. 1881-1886.

90. Clostridium ramosum IgA proteinase represents a novel type of metalloen-dopeptidase /К. Kosowska, J. Reinholdt, L.K. Rasmussen et al. //J. Biol. Chem.- 2002.- V. 277.-P.11987-11994.

91. Colonization and immunomodulation by Lactobacillus reuteri ATCC 55730 in the human gastrointestinal tract /N. Valeur, P. Engel, N. Carbajal et al. //Appl. Environ. Microbiol. 2004.- V.70, № 2.- P. 1176-1181.

92. Conley M.E. Intravascular and mucosal immunoglobulin A: two separate but related systems of immune defense? /М.Е. Conley, D.L. Delacroix //Ann. Intern. Med.- 1987.- V.106.- P.892-899.

93. Conneely O.M. Antiinflammatory Activities of Lactoferrin /О.М. Conneely //J. Am. Coll. Nutr.- 2001.- V.20.- P.389S 395S.

94. Coussement P.A. Inulin and oligofructose: safe intakes and legal status / P.A. Coussement//J. Nutr.- 1999.- V.129.Jul. (7 Suppl).- P.1412S-1417S.

95. De Araujo A.N. Lactoferrin and free secretory component of human milk inhibit the adhesion of enteropathogenic Escherichia coli to HeLa cells / A.N. de Araujo, L.G. Giugliano //BMC Microbiol.- 2001.-№1.- P.l-25.

96. Degradation of protease inhibitors, immunoglobulins, and other serum proteins by Serratia protease and its toxicity to fibroblast in culture / A. Molla, K. Matsumoto, I. Oyamada et al. //Infect. Immun.- 1986.- V.53, № 3.- P.522-529.

97. Dietary fiber inhibits the incidence of hepatic metastasis with the anti-oxidant activity and portal scavenging functions /К. Tazawa, K. Yatuzuka, M. Yatu-zuka et al. Шит. Cell.- 1999.- V.12, № 4.- P. 189-196.

98. Dietary fructo-oligosaccharides and inulin decrease resistance of rats to salmonella: protective role of calcium / S.J. Ten Bruggencate, I.M. Bovee-Oudenhoven, M.L. Lettink-Wissink et al. //Gut.- 2004.- V.53, №4.- P.530-535.

99. Differentiation and developmental pathways of uropathogenic Escherichia coli in urinaiy tract pathogenesis / S.S. Justice, C. Hung, J.A. Theriot et al.// Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. -2004.- V.101, №5.- P. 1333-1338.

100. Dongowski G. Effect of pH on the in vitro interactions between bile acids and pectin /G. Dongowski //Z. Lebensm. Unters. Forsch.- 1997,- V.205-. P. 185192.

101. Dongowski G. Influence of pectin structure on the interaction with bile acids under in vitro conditions / G. Dongowski //Z. Lebensm. Unters. Forsch. 1995.-V.201.- P.390-398.

102. Dongowski G. Nutrient Metabolism The Degree of Methylation Influences the Degradation of Pectin in the Intestinal Tract of Rats and In Vitro /G. Dongowski, A. Lorenz, J. Proll //J. Nutr.- 2002.- V.132.- P. 1935-1944.

103. Duggan C. Protective nutrients and functional foods for the gastrointestinal tract /С. Duggan, J. Gannon, W.A. Walker //Am. J. Clinical Nutrition.- 2002.-V.75, №5.- P.789 808.

104. Effect of administration TOS and B. breve 4006 on the human fecal flora / R. Tanaka, H. Takayama, M. Morotomi et al. //Bifidobacteria and microflora.-1983.- N2.- P. 17-24.

105. Ellison R. T. Killing of gram-negative bacteria by lactoferrin and lysozyme / R. T. Ellison, T. J. Giehl //J. Clin. Investig.- 1991.- V.88.- P. 1080-1091.

106. Fahlgren A. Increased expression of antimicrobial peptides and lysozyme in colonic epithelial cells of patients with ulcerative colitis /А. Fahlgren, S. Hammarstrom, A. Danielsson, M.L. Hammarstrom //Clin. Exp. Immunol.-2003.- V.131, №1.- P.90-101.

107. Farnaud S. Lactoferrin a multifunctional protein with antimicrobial properties / S. Farnaud, R.W. Evans //Mol. Immunol.- 2003.- V.40, № 7.- P.395-405.

108. Franz M. Common errors in diagnosis and management of urinary tract infection /М. Franz, W.H. Horl //Pathophysiology and diagnostic techniques Nephrol. Dial. Transplant.- 1999.- V.14.- P.2746-2753.

109. Funfstuck R. Pathogenetic aspects of uncomplicated urinary tract infection: recent advances /R. Funfstuck, J.W. Smith, H. Tschape, G. Stein //Clin. Nephrol.- 1997.- V.47.- P. 13-18.

110. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microflora management for improved gut health /R. Fuller, G.R. Gibson //Clin. Microbiol. Infect.- 1998.- V.4.- P. 477480.

111. Gibson G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics /G.R. Gibson, M.B. Roberfroid //J. Nutr.- 1995.-V.125.- P.1401-1412.

112. Groisman E.A. Pleiotropic Two-Component Regulatory System PhoP-PhoQ /Е. A. Groisman //Journal of Bacteriology.- 2001.- Vol.183, N6.- P. 18351842.

113. Ganz T. Fatal Attraction Evaded: How Pathogenic Bacteria Resist Cationic Polypeptides /Т. Ganz//J. Exp. Med.- 2001.- V.193, №9.- P.31-34.

114. Guina T. A PhoP-regulated outer membrane protease of Salmonella enterica serovar typhimurium promotes resistance to alpha-helical antimicrobial peptides /Т. Guina, E.C. Yi, H. Wang, M. Hackett, S.I. Miller//J. Bacteriol.-2000.- V.182.- P.4077-4086.

115. Gunn J.S. PhoP-PhoQ activates transcription of pmrAB, encoding a two-component regulatory system involved in Salmonella typhimurium antimicrobial peptide resistance /J.S. Gunn, S.I. Miller //J. Bacteriol.- 1996.- V.178, №23.- P.6857-6864.

116. Hancock R.E. The role of antimicrobial peptides in animal defenses /R.E. Hancock, M.G. Scott //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2000.- V.97.- P. 88568861.

117. Hansson H.B. Controlled comparison of nalidixic acid or lactulose with placebo in shigellosis /Н.В. Hansson, G. Barkenius, S. Cronberg, I. Juhlin // Scand. J. Infect. Dis.- 1981.-№13.- P. 191-193.

118. Hecht G. Innate mechanisms of epithelial host defense: spotlight on intestine JG. Hecht//Am. J. Physiol. Cell.- 1999.- V.277, №3.- P.351-358.

119. Human 3-defensin 2 is a salt-sensitive peptide antibiotic expressed in human lung /R. Bals, X. Wang, Z. Wu et al. //J. Clin. Invest.- 1998.- V.102.- P.874-880.

120. Imhof A. Continuous monitoring of oxygen concentrations in several systems for cultivation of anaerobic bacteria / A. Imhof, I. Heinzer //J. Clin. Microbiol.- 1996,- V.34, № 7.- P. 1646-1648.

121. Inactivation of the dlt operon in Staphylococcus aureus confers sensitivity to defensins, protegrins, and other antimicrobial peptides / A. Peschel, M. Otto, R. Jack, H. Kalbacher et al. //J. Biol. Chem.- 1999.- V.274.- P.8405-8410.

122. In vitro growth responses of bifidobacteria and enteropathogens to bovine and human lactoferrin / E.A. Griffiths, L.C. Duffy, F.L. Schanbacher et al. // Dig. Dis. Sci.- 2003.-V.48, №7.- P.1324-1332.

123. Isolation and structural identification of bifidogenic growth stimulator produced by Propionibacterium freudenreichii / H. Mori, Y. Sato, N. Taketomo et al. //J. Dairy Sci.- 1997.- V.80.- P. 1959-1964.

124. King AE. Innate immune defences in the human endometrium /А.Е. King, И.О. Critchley, R.W. Kelly //Reproductive Biology and Endocrinology.-2003.- №1.- P. 116-122.

125. Klaver F.A. Growth and survival of bifidobacteria in milk /F.A. Klaver, F. Kingma, A.M. Weerkamp //Netherlands Milk Dairy.- 1993.- V. 47.- P. 151164.

126. Kurasawa T. Effects of murine lysozyme on lipopolysaccharide-induced biological activities /Т. Kurasawa, K. Takada, N. Ohno, T. Yadomae // FEMS Immunol. Med. Microbiol.- 1996.- V.13, № 4.- P.293-301.

127. Loomes L.M. A proteolytic enzyme secreted by Proteus mirabilis degrades immunoglobulins of the immunoglobulin Al (IgAl), IgA2, and IgG isotypes /L.M. Loomes, B.W. Senior, M.A. Kerr//Infect. Immun.- 1990.- V.58, № 6.-P. 1979-1985.

128. Manual of clinical microbiology /А. Balows, W.J. Hausler, K.L. Herrmann et al.- 5th ed.- Washington, DC. American Society of Clinical Microbiology, 1991.- 1298p.

129. Marteau P. Potential of using lactic acid bacteria for therapy and immuno-modulating in man /Р. Marteau, J.C. Rambaud //FEMS Microbiol. Rev.-1993.- V.12.- P.207-220.

130. Mestecsky J. Intestinal IgA: novel views on its function in the defence of the largest mucosal surface /J. Mestecsky, M. W. Russell, C.O Elson. //Gut.-1999.- V.44,№ 1.- P.2-5.

131. Miller P.M. Evaluation of AnaeroGen system for growth of anaerobic bacteria /Р.Н. Miller, L.S. Wiggs, J.M. Miller//J. Clin. Microbiol.- 1995.- V.33, № 9.-P.2388-2391.

132. Mobley H.L. Virulence determinants of uropathogenic Escherichia coli and Proteus mirabilis /H.L. Mobley, M.D. Island, G. Massad //Kidney. Int.-1994(Suppl.).- V.46.- P.S129-S136.

133. MprF-Mediated Lysinylation of Phospholipids in Staphylococcus aureus Leads to Protection against Oxygen-Independent Neutrophil Killing / S. A. Kristian, M. Durr, J. A. G. Van Strijp et al. //Infect. Immun.- 2003.- V.71, № 1.- P.546 549.

134. Mucosal IgA-Mediated Excretory Immune System In Vivo /J. K. Robinson, T.G. Blanchard, A. D. Levine et al. //Journal of Immunology.- 2001.- V.166.-P.3688-3692.

135. Mulks M. Microbial IgA proteases /М. Mulks //Bacterial Enzymes and Virulence: CRC Press, 1985.- P.81-104.

136. Mutai M. Factors influencing Bacterial Colonization / M. Mutai, Y. Kawai //Recent Advances in Germfree Research.- Tokai Univer. Press, 1981.- P.12-15.

137. Niness K.R. Inulin and oligofructose: what are they? /K.R. Niness //J. Nutr.-1999.- V.129(suppl.).- P.1402S-1406S.

138. Novel IgA protease from Clostridium sp. capable of cleaving IgAl and IgA2 A2m(l) but not IgA2 A2m(2) allotype paraproteins / Y. Fujiyama, K. Kobaya-shi, S. Senda et al. //Immunol.- 1985.- V.134, № 1.- P.573-576.

139. Ohno N., Morrison D.C. Lipopolysaccharide interaction with lysozyme. Binding of lipopolysaccharide to lysozyme and inhibition of lysozyme enzymatic activity /N. Ohno, D.C. Morrison //J. Biol. Chem.- 1989.- V.264, №8.-P.4434-4441.

140. Olano-Martin E. Comparison of the in vitro bifidogenic properties of pectins and pectic-oligosaccharides /Е. Olano-Martin, G.R. Gibson, R.A Rastell //J. Appl. Microbiol.- 2002.- V.93, №3.- P.505-511.

141. Power D. A. Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Bec-ton Dickinson Microbiology Systems /Power D. A., P. J. McCuen.- Cockeys-ville, Md, 1988.- 127p.

142. Proteases in Escherichia coli and Staphylococcus aureus confer reduced susceptibility to lactoferricin В /И. Ulvatne, H.H. Haukland, O. Samuelsen et al. //Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2002.- V.50.- P.461-467.

143. Randomised trial of cranberry-lingonberry juice and Lactobacillus GG drink for the prevention of urinary tract infections in women / T. Kontiokari, K. Sundqvist, M. Nuutinen et al. //BMJ.- 2001.- V.322.- P. 1571.

144. Regulation of lipid A modifications by Salmonella typhimurium virulence genes phoP-phoQ/ L. Guo, K.B. Lim, J.S. Gunn et al. //Science.- 1997.-V.276.- P.250-253.

145. Reid G. Potential Uses of Probiotics in Clinical Practice /G. Reid, J. Jass, M. T. Sebulsky, J.K. McCormick //Clin. Microbiol. Rev.- 2003.- V.16. P.658 -672.

146. Roberfroid M.B. Prebiotics: preferential substrates for specific germs? / M.B. Roberfroid //Am. J. Clin. Nutr.- 2001V.73(suppl.).- P.406S^09S.

147. Role of M cells in intestinal barrier function / T.Kucharzik, N.Lugering, K. Rautenberget al. //Ann. N. Y. Acad. Sci.- 2000.- V.915.- P. 171-183.

148. Role of YadA in resistance to killing of Yersinia enterocolitica by antimicrobial polypeptides of human granulocytes /L.G. Visser, P.S. Hiemstra, M.T. van den Barselaar, et al. //M. Infect. Immun.- 1996.- V.64, №5.- P.1653-1658.

149. Samona A. Effect of yogurt cultures on the survival of bifidobacteria in fermented milk /А. Samona, R.C. Robinson //J. Soc. Dairy Technol.- 1994.-V.47, №2.- 58-60.

150. Schaechter M. Mechanisms of microbial disease. 2nd ed. /М. Schaechter, G. Medoff, B.I. Eisenstein.- Williams and Wilkins,1993.-973p.

151. Scholz-Ahrens K.E. Effects of prebiotics on mineral metabolism / K.E. Scholz-Ahrens, G. Schaafsma, E.G. van den Heuvel, J. Schrezenmeir//Am. J. Clin. Nutr.- 2001.- V.73(suppl.).- P.459S^64S.

152. Schrezenmeir J. Probiotics, prebiotics, and synbiotics approaching a definition /J. Schrezenmeir, M. de Vrese //Am. J. Clin. Nutr.- 2001.- V.73(2 Suppl.).- P.361S-364S.

153. Seip W.F., Atmospheric analysis and redox potentials of culture media in the GasPak System /W.F. Seip, G.L. Evans //J. Clin. Microbiol.- 1980.- V.l 1, № 3.- P.226-233.

154. Takada К. Detoxification of lipopolysaccharide (LPS) by egg white lysozyme /К. Takada, N. Ohno, T. Yadomae //FEMS Immunol. Med. Microbiol.- 1994.-V.9, №4.- P.255-263.

155. Thanassi D. G. Active efflux of bile salts by Escherichia coli /D.G. Thanassi, L.W. Cheng, H. Nikaido //J. Bacterid.- 1997.- V.179.- P.2512-2518.

156. Van der Waaij D. The Immunoregulation of the intestinal flora: experimental investigations on the development and composition of the microflora in normal and thymusless mice /D. Van der Waaij //Microecol. Therapy.- 1984.-V.14.- P.21-24.

Информация о работе

Тарасевич, Алексей Владимирович
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Регуляция антилизоцимной активности энтеробактерий эндогенными факторами желудочно-кишечного тракта и разработка рациональных подходов к диагностике и коррекции дисбиоза кишечника - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы