Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Реактивность и пластичность тканей конъюнктивы в условиях замещения ее дефектов консервированным аллоперикардом (нейробиологические аспекты)

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Реактивность и пластичность тканей конъюнктивы в условиях замещения ее дефектов консервированным аллоперикардом (нейробиологические аспекты)"

003168573

На правах рукописи

ГОРБУНОВ Алексей Александрович

РЕАКТИВНОСТЬ И ПЛАСТИЧНОСТЬ ТКАНЕЙ КОНЪЮНКТИВЫ В УСЛОВИЯХ ЗАМЕЩЕНИЯ ЕЕ ДЕФЕКТОВ КОНСЕРВИРОВАННЫМ АЛЛОПЕРИКАРДОМ (НЕЙРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ)

03 00 25 Гистология, цитология, клеточная биология 14 00 08 Глазные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

о 6 !.. . . ¿'¿ио

Саранск - 2008

003168579

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и Оренбургском филиале Федерального государственного учреждения «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» имени академика С Н Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи»

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор Стадников Александр Абрамович

Заслуженный врач РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Канюков Владимир Николаевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Ямщиков Николай Васильевич

доктор медицинских наук,

профессор Петухов Валерий Матвеевич

Ведущая организация. Государственное образовательное

учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « 23 » мая 2008 года в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 212117 01 в Мордовском государственном университете им Н П Огарева по адресу 430000 Россия, г Саранск, ул Большевистская, 68

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им НП Огарева» 430000 Россия, г Саранск, ул Большевистская, 68

Автореферат разослан « » апреля 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, Балашов Владимир Павлович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Развитие производственных технологий и неблагоприятные факторы внешней среды увеличивают с каждым годом число случаев патогенных воздействий на орган зрения, включая травматические повреждения его переднего отдела у людей всех возрастных групп (С В Логвинов с соавт, 2006, А А Жданкина, 2006)

Это обстоятельство, в свою очередь, приводит к необходимости лечебной коррекции различного рода повреждений вспомогательного аппарата глаза, в том числе с использованием методов офтальмохирургии, включающих разнообразные способы пластического замещения дефектов конъюнктивы с использованием трансплантационных материалов и объектов

Пластические операции с применением ауто- и аллогенных тканей конъюнктивы, роговицы, слизистой оболочки ротовой полости, теноновой оболочки, амниона, твердой мозговой оболочки, аорты, капсулы почки широко практикуются офтальмологами для закрытия дефектов фиброзной оболочки глазного яблока (В Д Кукса, 1966, ОД Морозова, 1971, ГА Макеева, 1983, ВЫ Канюков с соавт, 1995, 1996,2001,2005,2006)

Основными недостатками аутотрансплантации являются ограниченная возможность забора тканей и неизбежность дополнительной травмы, сопровождающей эту манипуляцию (П П Коваленко, 1976, Э Р Мулдашев с соавт, 1978) Главным препятствием для масштабного использования аллотрансплантатов является реакция тканевой несовместимости по типу иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису пересаженной ткани с последующим грубым рубцеванием (К Е Seiffert, 1967, 1970, J С Tauro et al, 1991, ЭР Мулдашев, 1994) В случаях использования ксеногенных тканей реакция тканевой несовместимости протекает острее, чем при аллотрансплантации и принимает характер острого иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису трансплантата (J С Tauro et al, 1991, С А Муслимов, 2000) Таким образом, при алло- и ксенотрансплантации основным фактором, влияющим на результаты операций, является антигенная активность тканей трансплантата При пересадке консервированных тканей выраженной иммунной реакции не наблюдается, а трансплантаты с различной скоростью замещаются новообразованной тканью или инкапсулируются в зависимости от метода консервации (С А Муслимов, 2000)

В настоящее время ткани перикарда алло- и ксеногенного происхождения широко используются в сердечно-сосудистой хирургии в качестве пластического материала Получены положительные результаты при применении трансплантатов из перикарда крупного рогатого скота в офтальмологии для хирургического лечения инволюционной хориоретинальной макулодистрофии

Вместе с тем до сих пор нет данных о результатах специальных исследований биологических свойств перикарда и поврежденной конъюнктивы при взаимодействиях тканевых структур в условиях замещения дефектов Остаются открытыми вопросы возможности использования в офтальмологии консервированной ткани трупного перикарда для пластики обширных дефектов различного генеза С другой стороны, по данным ряда авторов, гипоталамические нонапептиды (окситоцин, вазопрессин) позитивно влияют на репарацию тканей различного генеза (А А Стадников, 1995, 1999, 2001) Однако их роль в репаративных гистогенезах тканей глазного яблока, в том числе условиях заместительной трансплантации, не изучалась

Цель исследования экспериментально-морфологическое и нейробиологическое обоснование целесообразности использования консервированного трупного перикарда для замещения обширных дефектов конъюнктивы Задачи исследования

1 Выявить структурно-функциональные изменения эпителия и соединительной ткани конъюнктивы в условиях ее механической травмы

2 Исследовать особенности морфофункциональной реорганизации тканей поврежденной конъюнктивы в условиях замещения дефекта трансплантатом из консервированного трупного перикарда

3 Определить роль гипоталамических нейрогормонов в процессах репаративных гистогенезов конъюнктивы

Научная новизна

Впервые экспериментально - гистологически, включая ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ, изучены структурно-функциональные изменения в аспекте восстановительных процессов эпителия и соединительной ткани конъюнктивы в условиях механической травмы, а также установлены особенности морфофункциональной реорганизации тканей поврежденной конъюнктивы в условиях замещения дефекта трансплантатом из консервированного трупного перикарда, в том числе при местном

воздействии окситоцина Впервые дана оценка влияния гипоталамических нонапептидных нейрогормонов на репаративные гистогенезы конъюнктивы, индуцированные перикардиальным аллотрансплантатом

Практическая значимость

Полученные данные о структурно-функциональных изменениях тканей конъюнктивы в условиях механической травмы, а также о тканевых превращениях консервированного трупного перикарда позволили разработать новый методический подход к оптимизации замещения ее раневых дефектов, основанный на применении консервированного трупного перикарда с использованием нейроэндокринных факторов стимуляции репаративных гистогенезов, что существенно для офтальмохирургии

Основные положения, выносимые на защиту:

1 В условиях травматических повреждений слизистой оболочки конъюнктивы экспериментальных животных отработаны гистологические, ультраструктурные и иммуноцитохимические (р53, Ьс1-2) критерии оценки течения репаративных гистогенезов

2 Дисрегенераторный характер посттравматического воспаления тканей конъюнктивы сопряжен с рассинхронизацией секреторного цикла нонапептидергических гипоталамических ядер, включая блокировку высвобождения нейропептидов на уровне аксовазальных комплексов нейрогипофиза

3 Пластическое замещение дефектов конъюнктивы трупным перикардом оптимизирует ход репаративных процессов, обеспечивая фиксацию трансплантата соединительнотканными элементами

4 Включение с лечебной целью окситоцина в условиях трансплантации трупного перикарда оказывает эффект модификации репаративных гистогенезов (уменьшение экспрессии проапоптических генов, формирование органотипического регенерата)

Внедрение результатов исследования

Полученные данные по морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы, а также в условиях замещения слизистой оболочки перикардом с использованием нейрогормонов, служат теоретическим обоснованием для использования данного биоматериала с целью хирургической коррекции патологии переднего отдела глаза, его вспомогательного аппарата в условиях офтальмохирургических клиник

Согласно этим новым данным возможна разработка эффективных методов хирургического лечения посттравматических дефектов слизистой оболочки конъюнктивы

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на IV научно-практической конференции «Новые технологии микрохирургии глаза» г Оренбург, 1995, научно - практической конференции «Пластическая хирургия придаточного аппарата глаза и орбиты» Москва, 1996, научно -практической конференции «Брошевские чтения» г Самара, 1997, научно - практической конференции «Хфурпчне лжування та реабиитащя хворих з офтальмолопчною патолопэю» г Кшв, 2004, VII Всероссийской конференции «Нейроэндокринология-2005» С -Петербург, 2005, IV ЕвроАзиатской конференции по офтальмохирургии, г Екатеринбург, 2006 (диплом за лучший стендовый доклад), диплом лауреата премии Правительства Оренбургской области в сфере науки и техники (за экспериментально - гистологическое изучение биотрансплантатов в офтальмохирургии) г Оренбург, 2007

По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для опубликования основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук Получен 1 патент РФ на изобретение

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы Работа иллюстрирована 9 таблицами, 28 рисунками Список литературы содержит 183 источника, в том числе 56 иностранных Диссертация изложена на русском языке

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

На первом этапе проведено морфологическое изучение трупного перикарда на светооптическом и ультраструктурном уровнях Материалом служили 10 объектов перикарда, полученных у трупов мужского пола Одновременно производился забор 10 мл крови для обследования на наличие ВИЧ, сифилиса, НВБ и ВГС-антигенов Транспортировка донорского материала производилась в специальных контейнерах с 0,2% раствором тимола

В отделении заготовки и консервации трупных тканей, осуществлялась их первичная обработка, после этого ткани подвергали обработке в 0,2% растворе тимола и хранили при температуре +2 +4С, с последующей ежедневной (в течение 3-х дней) заменой раствора Через 10 дней, при отрицательных результатах бактериологического контроля материала, осуществляли дальнейшие экспериментально-гистологические исследования

В предыдущих исследованиях была показана высокая механическая прочность подобных материалов для проведения биопластики (В Н Канюков, А А Стадников, О М Трубина, 2001)

На втором этапе проводилось изучение особенностей морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и перикардиального трансплантата при механической травме, в том числе в _ условиях экзогенного введения окситоцина, а так же морфофункционального состояния гипоталамо - гипофизарной нонапептидергической нейросекреторной системы

Эксперименты проведены на 40 половозрелых кроликах - самцах породы ЗсЫшсЬИа массой 3,-3,5 кг в соответствии с положением Федерального Закона «О защите животных от жестокого обращения», введенным в действие 01 01 1997 г и с четким соблюдением правил и требований Приказа МЗ СССР (№755 от 12 08 1987 г), регламентирующих обеспечение принципов гуманного обращения с животными

В первой серии (10 животных) после трехкратной обработки конъюнктивальной полости 0,25% раствором левомицетина и 3% раствором колларгола под местной анестезией инокаина участок конъюнктивы диаметром 6 мм маркировали с помощью трепана и иссекали в полном объеме до склеральной части глазного яблока Швы на образованный дефект не накладывались В послеоперационном периоде ежедневно 3 раза в день в конъюнктивальную полость инстиллировали 0,25% раствор левомицетина

Во второй серии (10 животных), при аналогичной (как в первой серии) постановке эксперимента, в область коньюнктивального дефекта ежедневно вводили окситоцин («OXYTOCINUM», 5МЕ/мл, фирмы «Gedeon Richter») и 0,25% раствор левомицетина по 2 капли 3 раза в день в течение всего срока наблюдения

В третьей серии (10 животных) сформированный дефект конъюнктивы закрывали трансплантатом, изготовленным из трупного перикарда, выкроенного по форме и размеру дефекта слизистой оболочки (диаметром 6 мм) Затем перикардиальный трансплантат фиксировали к конъюнктиве узловыми швами Neyion 8-0 В послеоперационном периоде ежедневно 3 раза в день в коньюнктивальную полость инсталлировали 0,25% раствор левомицетина

В четвертой серии (10 животных), при аналогичной (как в третьей серии) постановке эксперимента, в зону коньюнктивального дефекта, замещенного трупным перикардом, ежедневно вводили окситоцин («OXYTOCINUM», 5МЕ/мл, фирмы «Gedeon Richter») и 0,25% раствор левомицетина по 2 капли 3 раза в день в течение всего срока наблюдения Всех экспериментальных животных декапитировали в условиях передозировки эфирного наркоза через 3, 7, 14 и 30 сут от начала опыта Объектом морфологических исследований служили конъюнктива (в том числе в условиях замещения трупным перикардом), супраоптические, паравентрикулярные ядра гипоталамуса и нейрогипофиз

Для светооптического исследования трансплантационный материал, а также эксцизивные фрагменты участков конъюнктивы фиксировали в 10% водном охлажденном t°+4°C растворе нейтрального формалина или спирт - формоле После стандартной гистологической проводки материал заливали в парафин-целлоидин Приготовление серийных срезов толщиной 5-6 мкм осуществляли на ротационном микротоме Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином, перйодатом К и реактивом Шиффа, метиловым зеленым и пиронином «Ж» по Браше с последующим анализом и микрофотографированием гистопрепаратов при помощи цифровой фотокамеры 01ympus-C160 Гистохимические реакции сопровождали соответствующими энзиматическими контролями (Э Пирс, 1962)

Для морфофункциональной оценки парных супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса данный материал фиксировали в течение 1 сут в жидкости Буэна и заливали в парафин после стандартной процедуры обезвоживания В последующем серийные фронтальные парафинные срезы (5-6 мкм) окрашивали паральдегид-фуксином по Гомори для выявления нейросекрета с докраской галлоцианином по Эйнарсону (К JI Лилли, 1969) 8

Для цитологической оценки крупноклеточных ядер гипоталамуса в каждом из них определяли соотношение различных типов нейросекреторных клеток При этом оценивали процентное соотношение типов секреторных нейронов и их аксонов на уровне нейрогипофиза

Для электронно - микроскопического исследования материал (кадаверный перикард, кусочки конъюнктивы, фрагменты гипоталамуса, нейрогипофиза) фиксировали в охлажденном (t°+4°C) 2,5% растворе глютарового альдегида, приготовленного на S-коллединовом буфере (рН=7,3) Постфиксацию проводили в четырехокиси осмия (G Millonig, 1961) В дальнейшем объекты обезвоживали при комнатной температуре в серии спиртов или ацетона возрастающей крепости (50°-100°), после чего их заключили в смолу ЭПОН-812 или Аралдит Полимеризацию объектов проводили при t°+60°C (в течение 3-х суток) С каждого блока на ультратоме УМТП-4 получали полутонкие срезы (1 мкм), которые окрашивали метиленовым синим и основным фуксином (Sato et Shamoto, 1973) Полутонкие срезы использовали для предварительной визуализации и при подготовке блоков к прицельной заточке, необходимой для изготовления ультратонких срезов (40-60 нм) на ультратоме LKB-5 (Sweden-Bromma)

Ультратонкие серебристые и бледно-золотистые срезы подвергали двойному контрастированию в насыщенном растворе уранилацетата при t°+37°C в течение 30 мин и цитрате свинца по Reynolds (1963) Изучение ультратонких срезов и их фотографирование производили на электронном микроскопе ЭМВ 100АК при увеличении от ><8 000 до *40 000 с последующим их фотографированием и морфометрическим анализом

Для иммуноцитохимического исследования материал (фрагменты конъюнктивы экспериментальных животных) фиксировали в 12% растворе нейтрального формалина и заливали в парафин В дальнейшем на парафиновых гистосрезах проводили двухэтапные реакции по идентификации белка-маркера апоптоза - р53 и антиапоптического белка bcl-2

На первом этапе депарафинированные срезы подвергали высокотемпературной обработке и инкубации с первыми (специфическими) моноклональными антителами (фирма «Дако», Дания) в рабочем разведении 1 50 Для визуализации позитивного (р53) иммунного окрашивания клеток применяли стрептавидин-биотиновый пероксидазный метод с последующим докрашиванием ядер гематоксилином Майера

Параллельно для определения внутриядерной фрагментации ДНК использовали набор реактивов «Apoptag Plus Peroxidaze in Situ Apoptosis

Detection Kit» (фирма «lntergin», Канада) с докрашиванием ядер клеток 0,5% раствором метиленового зеленого на 0,1 М ацетатном буфере

На втором этапе осуществляли инкубацию гистосрезов с моноклональными антителами bcl-2 и авидин-биотин-пероксидазным комплексом с последующим выявлением пероксидазы диамин-бензидином Подготовленные таким образом гистологические срезы докрашивали квасцовым гематоксилином и заключали в канадский бальзам Подсчет р53 и bcl-2 позитивных клеток производили методом их визуализации в каждом гистологическом срезе (при стандартном увеличении *900, не менее 200 клеток) в соответствии с рекомендациями А А Жданкиной (2006)

Полученные результаты исследования статистически анализировали по t-критериям Стьюдента, используя программу «Статистика R» В отдельных случаях для установления достоверности различий был дополнительно использован непараметрический критерий Вилкоксона с достоверностью более 95% (р<0,05) Репрезентативность выборки устанавливали методом аккумулированных средних величин (Э Ташке, 1980, Г Г Автандилов, 1991)

Результаты исследований и их обсуждение

Гистологическое исследование донорского материала (перикард человека) показало, что он образован мощной пластинкой плотной неоформленной соединительной ткани толщиной 1,2-4,3 мм Свободная поверхность перикарда была покрыта однослойным плоским эпителием (мезотелием) с признаками локальной десквамации тех клеток, которые имели признаки деструктивных изменений В соединительнотканной основе перикарда можно было четко различить поверхностный слой толстых коллагеновых волокон, слой эластических волокон, глубокий слой тонких коллагеновых фибрилл и глубокий коллагеново-эластический слой Последний, как правило, составлял 50% всей толщины перикарда Следует отметить весьма плотный характер соединений между пучками соединительнотканных волокон (и их пучков) Ультраструктурный анализ показал, что данные пучки состоят из микрофибрилл, различимых в электронном микроскопе в виде слабоизвилистых нитей В своей совокупности они формировали более толстые пучки, поперечно исчерченных структур толщиной 80-100 нм Эти волокнистые компоненты складывались в пучки коллагеновых волокон толщиной до 260-280 мкм Эластические волокна в перикарде более тонкие и они широко анастомозировали друг с другом Расположение пучков коллагеновых и эластических волокон в перикарде неупорядоченное (чаще всего волнообразно)

Таким образом, совокупность проведенных нами светооптических и электронномикроскопических исследований трупного перикарда позволила сделать вывод о том, что его гистоструктура в основном близка к стромальным элементам конъюнктивы глаза Важно, что при этом тканевая и клеточная организация трансплантата существенно не нарушалась в процессе использованной нами его технологической заготовки

Исходя из целей и задач офтальмохирургии, мы провели исследование кадаверного перикарда с точки зрения возможностей физического (механического) моделирования его формы, адекватного задачам трансплантации При этом особо важными являются аспекты максимально щадящего воздействия на гистоструктуру донорских тканей и сохранение их адаптивных, компенсаторно-приспособительных свойств, обеспечивающих эффективность приживления

Морфологическая оценка гистоструктур осуществлялась по степени дискомплексации волокнистых компонентов аллоперикарда Было установлено, что наименьшие отклонения в структуре волокнистых компартментов перикардиального трансплантата имели место при использовании лазерной технологии

Гистологический анализ раневых дефектов у экспериментальных животных (на светооптическом и ультраструктурном уровнях) позволил нам установить и ряд реактивных изменений эпителиальных, соединительнотканных структур, сосудов микроциркуляторного русла

Так, в ранние сроки (1-3 сут) развивалась выраженная первичная альтерация тканей Повреждающее действие внутриклеточных лизосомальных ферментов значительно усиливало процессы протеолиза, липолиза и гидролиза клеточных элементов, которые в свою очередь являются ведущими гуморальными факторами воспаления Они оказывали выраженное влияние на транссосудистую экссудацию и эмиграцию лейкоцитов, форменных элементов крови за счет расширения микроциркуляторных сосудов, увеличения количества функционирующих гемокапилляров и повышения кровенаполнения в раневой области Характерной особенностью ранних сроков эксперимента являлся выраженный стаз форменных элементов крови, как правило, возникающий в сосудах венозной части микроциркуляторного русла (из-за резкого повышения сосудистой проницаемости и нарастающей экссудации плазмы и форменных элементов крови) При этом эритроциты образовывали «монетные столбики», в просвете микрососуда образовывалась сплошная масса - «сладж»

В последующем в раневой зоне усиливались процессы выраженной экссудации, обусловленной повышением проницаемости

микроциркуляторного русла вследствие существенного изменения эндотелиоцитов (их внутриклеточный отек, расширение канальцев эндоплазматического ретикулума, деконденсация хроматина ядра, возрастание численности ею поровых комплексов, значительное возрастание количества пиноцитозных пузырьков) В состав экссудата входила плазма крови, форменные элементы и разрушенные ткани По своему составу он носил серозно-фибринозный, полиморфноклеточный и геморрагический характер

Клеточные реакции на «поле воспаления», связанные с локомоцией, протекали этапно Так, наиболее ранней отмечена эмиграция нейтрофильных и эозинофильных гранулоцитов (первые 3-е сут эксперимента) Мононуклеарная же эмиграция в ткани конъюнктивы (моноцитов, лимфоцш ов) происходила на стадии 7 сут опыта

Воспалительная венозная гиперемия обеспечивала усиленную миграцию в зону раневого дефекта макрофагов моноцитарного генеза Фибриноген экссудата постепенно превращался в фибрин, нити которого образовывали фибринную гемостатическую пробку

Следует заметить, что экссудативный процесс сопровождался выраженным отеком стромальных элементов конъюнктивы и ее краевого эпителия с повышенным отложением фибрина, что в более поздние сроки наблюдений приводил к избыточному разрастанию рубцовой соединительной ткани, появление которой существенно нарушало микроциркуляцию в раневой области с последующим ишемическим повреждением клеточных и тканевых структур

Развитие грануляционной (малодифференцированной) соединительной ткани быстро начиналось с 7 сут опыта, претерпевая морфофункциональную дифференцировку Этот процесс характеризовался прогрессивным уменьшением числа микрососудов (гемокапилляров, артериол, венул) и ряда клеточных элементов (макрофагов, тучных клеток, малодифференцированных фибробласгов), имеющих важное значение для оптимального хода репаративных гистогенезов

Ограничение регенерационных возможностей эпителиальных структур конъюнктивы при ее травматическом повреждении мы связываем с существенным нарушением эпителио-соединительнотканных корреляций предполагающих в качестве условия для репарации покровных эпителиев наличие подстилающей малодифференцированной соединительной ткани (НГ Хлопин, 1946, Ф М Лазаренко 1959 А Г Бабаева, ЕА Зотиков, 1987, РК Данилов, 2006) Поэтому мобилизация камбиальных эпителионитов в ходе наших экспериментов адекватно не реализовалась вследствие быстро наступающего 12

склерозирования стромальных элементов конъюнктивы С другой стороны, полученные нами светооптические и электронномикроскопические данные, свидетельствуют о том, что травматическое повреждение тканей конъюнктивы приводит к развитию комплекса реакций с вовлечением всех структурных уровней организации живой системы

Было выявлено, что в развивающейся соединительной ткани раневого дефекта конъюнктивы на 15-е сут опыта число меченных на белок р53 фибробластов было в 3,5 раза больше по сравнению с интактными животными, а через 30 сут эксперимента этот показатель был в 4,7 раза выше (в сравнении с контролем) В те же сроки лишь 1,52% фибробластов экспрессировали Ьс1-2 (в контроле этот показатель составил 6,3-7%)

Свегооптичесьое и электронномикроскопическое исследование морфофункционального состояния нонапептидергических

нейросекреторных центров гипоталамуса (супраоптических и паравентрикулярных ядер подбугорья) в условиях раневых дефектов конъюнктивы показало, что на 7 сут эксперимента происходила значительная активизация нейросекреторных клеток супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса по показателям цитологического состояния их ядер, ядрышек и цитоплазмы, сочетаемые с усиленным высвобождением нейросекреторных гранул на уровне аксовазальных контактов нейрогипофиза (увеличение размеров терминалей аксонов нейросекреторных клеток, нарастание численности «светлых» пузырьков, экзоцитозных профилей, просветление аксоплазмы, в которой регистрируются расширенные нейротубулы)

Через 15-30 сут опытов отмечалось выраженное депонирование нейросекрета как в цитоплазме клеток супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса, так и в срединном возвышении гипоталамуса и нейрогипофизе, задержка (блокирование) его высвобождения в общую гемоциркуляцию Это проявлялось скоплением элементарных нонапептидергических секреторных гранул в терминалях аксонов супраоптических и паравентрикулярных гипоталамических ядер (в виде гипертрофированных телец Геринга, распада секреторных гранул в аксоплазме без признаков экзоцитоза и дегенерации терминалей аксонов по «темному типу» При этом отмечены признаки ультраструктурных повреждении митохондрий аксонов нейросекреторных клеток (особенно их крист), эндоплазматического ретикулума, фрагментация нейротубул и нейрофиламентов на фоне резкого возрастания численности липосом и ламеллярных телец

Исходя из этого, мы делаем акцент на том, что в условиях травматических повреждений конъюнктивы (особенно в отдаленные сроки наблюдений, 15-30 сут эксперимента) активизация гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы животных происходила на фоне блокирования высвобождения нейросекрета в их общую гемоциркуляцию, что, безусловно, приводило к дефициту данных адаптивных нейрогормонов в кровотоке

Данное заключение основывается на ультраструктурных исследованиях перикарионов нейросекреторных клеток крупноклеточных ядер гипоталамуса (в эти сроки), которые показали серьезные ультраструктурные повреждения секреторных компартментов клеток (выраженная деструкция митохондрий, дискомплексация канальцев гранулярного эндоплазматического ретикулума, редукция диктиосом пластинчатого комплекса, возрастание численности лизосом, аутофагосом ламеллярных телец и липосом) Следует особо отметить, что одновременно достоверно увеличивалось число пикноморфных (дегенерирующих) нейросереторных клеток с признаками кариопикноза и кариорексиса, вокруг которых сосредотачивались глиальные макрофагальные элементы

Кроме этого в гипоталамусе экспериментальных животных, нами выявлены гистологические изменения, которые, с известной осторожностью, можно трактовать как признаки мелкоочагового энцефалита Так через 15 и 30 сут эксперимента в структурах переднего гипоталамуса на фоне выраженной гиперемии, стаза форменных элементов крови в сосудах микроциркуляции отмечались периваскулярные (главным образом перивенозные) муфты из лимфатических и плазматических клеток, а также микроглиоцитов Как правило, данные процессы наблюдались в местах тех нейросекреторных клеток ядер гипоталамуса, которые претерпевали альтеративные изменения Наблюдаемая при этом пролиферация эндотелия сосудов мелкого калибра, фибриноидное набухание их стенок, микротромбозы сопровождались дистрофией и гибелью нейросекреторных клеток супраоптических и паравентрикулярных ядер Стенка тромбированных сосудов микроциркуляторного русла повергалась деструкции, что создавало морфологическую картину пролиферативно-деструктивного тромбоэндоваскулита

Таким образом, травматическое повреждение конъюнктивы протекают на фоне разбалансировки процессов продукции и высвобождения адаптивных нонапептидергических гуморальных факторов центрального звена нейроэндокринной регуляции, что может, в свою очередь, существенно лимитировать реализацию репаративных 14

генетически детерминированных потенций гистоструктур конъюнктивы, очевидно развивающих в условиях локального энцефалита с выраженными явлениями васкулита

Включение окситоцина в лечебные мероприятия экспериментальных животных позитивно изменило ход репаративных процессов (во все сроки наблюдений) Прежде всего, это касалось характера и течения альтеративной и экссудативной фаз воспаления Так, зона некробиотических и некротических изменений покровного эпителия, желез и стромальных компонентов конъюнктивы у животных, не получавших местно окситоцин, составила через 3 сут 68,8±3,9%, через 15 сут - 66,7±2,8%, а у животных, которым вводился окситоцин, соответственно 52,1±1,7% и 29,9±1,8% Таким образом, зона раневого дефекта конъюнктивы при лечебном воздействии окситоцина достоверно уменьшалась в 1,2-1,7 раза (по сравнению с контролем)

Под влиянием окситоцина (через 3, 7 сут эксперимента) в 2,8-3,4±0,4 раза уменьшалось число сладжированных и тромбированных гемокапилляров Одновременно достоверно возрастало количество клеточных элементов, экспрессирующих ген Ьс1-2, что свидетельствовало о готовности эндотелиоцитов, фибробластов, адвентициальных клеток и покровных эпителиоцитов к вступлению в митоз

Применение окситоцина приводило к активизации васкулогенеза в демаркационных зонах, где при этом активно развивалась малодифференцированная соединительная ткань, которая четко отграничивала некротизированные участки по краям раневых дефектов

Анализ серийных гистопрепаратов и электронограмм показал, что пограничные с участками некроза покровные эпителиоциты и ацинусы желез имели клетки дедифференцированного статуса Для них характерными были крупные ядра с деконденсированным хроматином без видимых покровных комплексов В цитоплазме идентифицированы многочисленные свободные рибосомы (полисомы) Подобные клеточные элементы были обнаружены и через 15 сут опыта в составе эпителиальных пролифератов (островков, погружных тяжей, «конусов» роста)

Следует особо отметить, что в данных условиях (при применении окситоцина) отмечались значительно меньшая деструкция нейтрофильных и эозинофильных гранулоцитов крови [рис 1], достоверно понижались явления кариопикноза и кариорексиса эндотелия сосудов и эпителиоцитов покрова слизистой оболочки конъюнктивы, существенно возрастала численность функционально активных макрофагов [рис 2] Параллельно в эти же сроки увеличивалась численность малодифференцированных фибробластов

Мы еще раз подчеркиваем то обстоятельство, что применение окситоцина приводило к достоверной активизации макрофагов и возрастанию их адгезивных свойств относительно лимфоцитов.

В экспериментальных условиях при введении окситоцина в область посттравматического дефекта конъюнктивы наблюдалось не только его замещение малодифференцированной соединительной тканью, но и корректная (близкая к органотипической) эпителизация. Она происходила наиболее отчетливо в период от 7 до 15 сут и осуществлялась за счет активизации камбиальных клеток (базальных эпителиоцитов покрова конъюнктивы), а также вследствие возрастания репродуктивной активности дедифференцированных эпителиоцитов желез (ацинусов и выводных протоков).

Рис. 1. Деструкция лейкоцитов (%) при лечебной коррекции раневых дефектов конъюнктивы.

Контроль

Окситоцин

ш 3 сутки Ш 7 сутки □ 14 сутки

4 , 3,5 3 2,5 2 1,5 1

0,5 0

□ 3 сутки В 7 сутки

□ 14 сутки

Контроль

Окситоцин

Рис. 2. Количество малодифференцированных фибробластов (%) в

раневом дефекте конъюнктивы

Формирующиеся эпителиальные пролифераты в зоне дефекта вступали (к 15-30 суткам эксперимента) на путь вторичной функциональной дифференцировки с образованием органотипических структур регенерата. Было также показано, что применение окситоцина обеспечивало лучшую (по сравнению с контролем) адаптированность покровного и железистого эпителия к травматическому повреждению (в пограничных с дефектом конъюнктивы зонах) по показателям внутриклеточной регенерации эпителиальных структур и митотической их активности. При этом среди железистых элементов увеличивалась численность аденоцитов с цитохимическими признаками мукоидной секреции, которая, как известно, отражает реализацию генотипически детерминированного механизма одного из эволюционно древнего пути компенсаторной зашиты тканей и органов висцеральных систем при воздействиях на них различных агрессивных и экстремальных факторов. Полученные нами (в данной серии экспериментов) результаты, мы трактуем с позиций устоявшейся концепции эпителиально-

соединительнотканных взаимоотношений, реализуемых на «поле воспаления» (Н Г Хлопин, 1946, Ф М Лазаренко, 1959)

Таким образом, использование окситоцина для лечебной коррекции раневых дефектов конъюнктивы экспериментальных животных (кроликов) создавало адекватные условия для корректной реализации адаптивных и компенсаторных возможностей тканевых и клеточных структур (сосудов микроциркуляции, клеток фибробластического дифферона, макрофагов, покровных и железистых эпителиоцитов)

Экспериментально-гистологическое исследование трансплантации перикарда в зону раневого дефекта конъюнктивы позволило установить, что через 3-е сут эксперимента вокруг пересаженных фрагментов трансплантата развивалась умеренная воспалительная реакция с преобладанием экссудативного компонента с явлениями диапедеза форменных элементов крови (преимущественно гранулоцитов из гемокапилляров конъюнктивы) Некробиотические и некротические изменения трансплантата на этой стадии отсутствовали В периферических его участках мы отмечали незначительную гомогенизацию коллагеновых и эластических волокон, отечность их аморфного матрикса В центральных зонах пересаженных объектов гистоструктура волокнистого каркаса полностью сохранялась

Через 7 сут эксперимента процессы вазодилятации и экссудации в конъюнктиве уменьшались Понижалось число сладжированных гемокапилляров По краю трансплантата образовывались значительные скопления малодифференцированных фибробластов, возникающих из области конъюнктивы Эти процессы значительно нарастали через 15 сут наблюдений В это время в краевой зоне трансплантата формировалась малодифференцированная (грануляционная) соединительная ткань, для которой характерными были многочисленные гемокапилляры, окруженные малодифференцированными адвентициальными клетками и элементами фибробластического дифферона (малодифференцированные клетки, функционально специализированные фибробласты)

При этом новообразованная соединительная ткань, постепенно претерпевающая свою дифференцировку, в последующем замещала краевые участки перикардиалыюго трансплантата, которые подвергались лизированию со стороны макрофагальных элементов В результате этого через 30 сут величина пересаженного в конъюнктиву объекта уменьшалась на 50-60% С другой стороны, общая площадь зоны трансплантации существенно не менялась, поскольку она состоит не только из сохраненной гистоструктуры трансплантированного перикарда, fio и из новообразованной соединительной ткани 18

На 30 сут происходила тотальная морфофункциональная дифференцировка пролиферирующих фибробластов и активный коллагеногенез, приводящий к образованию рубцовой соединительной ткани, инкапсулирующей оставшуюся часть перикардиального трансплантата Можно высказать суждение о том, что замещение посттравматического дефекта конъюнктивы перикардом кадавера все-таки не обеспечивает должное поддержание продуктивной фазы воспаления (в аспекте образования малодифференцированной соединительной ткани в трансплантационном ложе), что, в свою очередь, ограничивает реализацию органотипического гистогенеза в зоне раневого дефекта Поэтому трансплантируемый перикард, подвергаясь постепенному лизированию, лишь инкапсулируется m situ При этом фиксация его гистоструктур обеспечивается плотной неоформленной соединительной тканью

По своей светооптической и ультраструктурной характеристике образующаяся на месте перикардиального трансплантата соединительная ткань в основном соответствует таковой, свойственной стромальному компонент^' конъюнктивы В этой связи мы формулируем положение о том, что используемый нами трансплантационный материал, может быть использован для коррекции механических (опорных) свойств поврежденной конъюнктивы (по критериям гистологической оценки ее фиброархитектоники) Однако, в данных моделируемых нами условиях, не реализуется в полной мере весь диапазон репаративных гистобластических и органотипических возможностей конъюнктивы (особенно это касается репаративной регенерации ее покровных и железистых эпителиальных структур) Данное заключение базируется на том, что тканеспецифическая трансформация перикардиального трансплантата не создавала адекватных условий для полноценной регенерации всех характерных тканевых элементов конъюнктивы и особенно ее эпителиальных гистоструктур

В серии опытов, когда в зону трансплантированного перикарда вводили окситоцин, мы получили результаты, отличающиеся от описанных выше Прежде всего, это касалось динамики структурно -функциональных изменений соединительной ткани конъюнктивы Так до 15 - 30 сут опыта и в краевой зоне трансплантата определялась малодифференцированная соединительная ткань, содержащая клетки фибробластического ряда (молодые фибробласты, миофибробласты) В ней происходили процессы активного васкулогенеза Численность клеток эпителия, форменных элементов крови с признаками деструкции была в 2,7 - 3,2 раза ниже, по сравнению с предыдущей серией экспериментов [табл 1]

Таблица 1

Гистологическая и цитологическая характеристика конъюнктивы кроликов в условиях замещения ее дефектов аллоперикардом (стадия 30 сут)

Показатели (%) Без введения окситоцина С введением окситоцина

Деструкция эпителиоцитов (по краю трансплантата) 68,1±5,5 47,1 ±2,1

Фибробласты - 4,7±0,6

Фиброциты 21,4±2,4 8,7±0,9

Малодифференцированные и пролиферирующие эпителиоциты (по краю трансплантата) - 5,7±0,4

Эндотелиоциты, меченные Ьс1-2 - 2,7±0,1

Фибробласты, меченные Ьс1-2 - 1,9±0,1

С другой стороны, формирование в области перикардиального трансплантата малодифференцированной соединительной ткани (и пролонгированной по срокам поздних наблюдений) обеспечило возникновение не только оптимальной эпителизации раневых дефектов конъюнктивы, но и появления погружных эпителиальных пролифератов, которые по своему фенотипу соответствуют закладке производных покровного эпителия, в частности желез

Следует особо подчеркнуть то обстоятельство, что возникающие в данных условиях эксперимента эпителиальные структуры конъюнктивы, покрывающие раневой дефект, имели в своем составе значительное число клеток мукоидного типа, что, отражая органотипический характер регенерата, свидетельствовало о его способности реализовать свои защитные потенции

Таким образом, позитивное влияние окситоцина на пролиферативную фазу воспаления выразилось в создании адекватных условий развития и пролонгированного существования грануляционной соединительной ткани по краю трансплантата, обеспечивающими ткане-и органотипическую дифференцировку эпителиального регенерата

Обращает на себя внимание то, что при использовании окситоцина усиливался гетероморфизм эпителиальных и соединительнотканных клеток В краевой зоне трансплантата регистрировались клетки с

признаками торможения вхождения в апоптоз (по показателям экспрессии синтеза белка Ьс1-2) камбиальные и дифференцирующиеся клеточные формы В данных условиях мы обнаружили не только слабо выраженный фибриллогенез, но и признаки лизиса коллагеновых волокон, осуществляемый макрофагами

При использовании окситоцина мы установили, что на всех стадиях эксперимента фибробласты носили чрезвычайно гетероморфный характер. Даже через 15 сут (в отличие от контрольной серии) большинство таких клеток имели крупные ядра с деконденсированным хроматином, расширенными поровыми комплексами В популяции фибробластов (на данном этапе опытов) мы всегда четко идентифицировали

1 малодифференцированные фибробласты (малых размеров клетки, округлой либо овальной формы с крупным светлым ядром, узким ободком цитоплазмы с высоким содержанием свободных рибосом, но слабым развитием мембранных ультраструктур),

2 юные фибробласты - клетки, синтезирующие коллагеновые волокна и аморфный матрикс, сохраняющие экспрессию гена Ьс1-2 и митотическую способность,

3 зрелые, функционально активные клеточные формы, имеющие крупные ядра с 1 -2 ядрышками нуклеалонемного характера и хорошо развитые органеллы синтеза и экструзии (шероховатый эндоплазматический ретикулум, пластинчатый комплекс Гольджи),

4 миофибробласты - клетки, содержащие в своей цитоплазме пучки сократительных миофиламентов,

5 фиброциты - клетки отросчатой формы с кариопикнозом и редуцированной цитоплазмой

В своей совокупности эти факты свидетельствуют о том, что включение окситоцина в лечебные мероприятия существенно отграничивает развитие некробиотических (и некротических) процессов раневой области конъюнктивы и позитивно сказывается на развитии лролиферативной фазы посттравматического воспаления, что согласуется с результатами ряда работ, посвященных изучению позитивных эффектов окситоцина на репаративные гистогенезы (А В Климушкина, 2003, Е А Шеина, 2004, Б А Стадников, 2005)

В целом, полученные данные при применении окситоцина в эксперименте, позволили нам обосновать целесообразность включения данного гипоталамического нейропептида в комплекс лечебных мероприятий, направленных на оптимизацию офтальмохирургических воздействий, касающихся лечения раневых дефектов конъюнктивы, в том числе с применением методических подходов трансплантологии

выводы

1 На основе разработанной экспериментальной модели травматического повреждения конъюнктивы установлены особенности реактивных, адаптивных и репаративных потенций клеточных и тканевых структур конъюнктивы, свидетельствующие о нарушении эпителиально - соединительнотканных отношений и о лимитировании регенераторных возможностей эпителиальных и соединительнотканных структур конъюнктивы при ее травме

2 В условиях травматического повреждения конъюнктивы одним из ведущих факторов лимитирования репаративных возможностей ее клеточных и тканевых структур являются морфофункциональные сдвиги в гипоталамо - гипофизарной нейросекреторной системы, проявляющиеся на стадиях 14 - 30 сут эксперимента в форме блокировки высвобождения гипоталамических нейропептидов через аксовазальные контакты в нейрогипофизе

3 Морфофункциональная характеристика очага повреждения конъюнктивы в условиях пластики ее дефекта образующийся на месте перикардиального трансплантата соединительнотканный регенерат может обеспечивать коррекцию механических (опорных) свойств поврежденной органной структуры

4 Местное применение окситоцина у животных с травматическим повреждением конъюнктивы повышает возможности реализации адаптивных и компенсаторных возможностей тканевых и клеточных структур конъюнктивы На фоне введения окситоцина обеспечивается сохранение целостности и пространственного расположения структур конъюнктивы (сосуды микроциркуляторного русла, клетки фибробластического дифферона, макрофаги) и уменьшаются явления некроза клеточных элементов, тромбоза сосудов и очаговой деструкции тканей

5 Использование в эксперименте на животных с лечебной целью окситоцина в условиях заместительной пластики раневых дефектов конъюнктивы трансплантатом перикарда оптимизирует фазы воспаления, уменьшает клеточную гибель эпителиоцитов, фибробластов, эндотелиоцитов и способствуют формированию регенерата, близкого по гистологическому строению к органотипическому

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 В научно - исследовательской работе и клинических испытаниях необходимо учитывать, что гистологическая, ультраструктурная и биомеханическая характеристики перикардиального трансплантата кадавера, консервированного и заготовленного по лазерной технологии, соответствуют фиброархитектонике стромальных структур слизистой оболочки конъюнктивы экспериментальных животных (кроликов) и могут быть использованы в заместительной хирургии раневых дефектов конъюнктивы

На основе экспериментально - гистологической модели раневых дефектов с использованием аллоперикарда и окситоцина может проводиться разработка эффективных технологий хирургического лечения раневых дефектов конъюнктивы

Полученные в результате эксперимента данные по гистологическим и ультраструктурным особенностям образующегося на месте перикардиального трансплантата соединительнотканного регенерата гисто- и органотипического характера могут служить теоретической основой для разработки направленного воздействия на репаративный гистогенез, позволяющего обеспечить коррекцию механических (опорных) свойств поврежденной конъюнктивы, а также прогнозировать и контролировать полученные клинические результаты

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Издания рекомендованные ВАК

1 Некоторые аспекты реорганизации тканей глаза в условиях экспериментального моделирования и замещения дефектов различными аллотрансплантатами / соав В Н Канюков, А А Стадников, Е А Щербакова, О М. Трубина // Морфология -2006 Т 129 -№4 -С.59

2 Хирургическая коррекция дефектов конъюнктивы различными видами аллотрансплантатов / соав В Н Канюков, А А Стадников, ЕА Щербакова//Морфология -2006 -Т130 - №5 -С 49

3 Морфологические и иммуноцитологические исследования реорганизации тканей конъюнктивы при замещении ее различными видами аллотрансплантатов в эксперименте / соав В Н Канюков, А А Стадников Е А Ломухина // Вестник Оренбургского Государственного Университета - Оренбург, 2006 - №11(61) -С 137-140

4 Репаративные гистогенезы тканей глаза в условиях экспериментального моделирования дефектов и их замещения / соав В Н Канюков, А А Стадников Е А Ломухина // Морфология -2007 -т 131 - №3 -С73

5 Морфологические изменения конъюнктивы при ее травматизации (Нейробиологические аспекты) / соав Е А Ломухина // Вестник Российского Государственного медицинского университета - 2008 -№2(61) -С 277-278

Прочие издания

6 Альтернативные материалы для пластики конъюнктивы / соав В Н Канюков, А А Стадников // Материалы IV науч -практич конф «Новые технологии микрохирургии глаза» - Оренбург, 1995, -С 87-88

7 Способ пластики коньюнктивы придаточного аппарата глаза и орбиты / соав В Н Канюков, О М Трубина // Материалы науч -практической конференции «Пластическая хирургия придаточного аппарата глаза и орбиты» - Москва, 1996,-С 75-76

Способ моделирования трансплантатов при частичном или полном замещении конъюнктивы / соав В Н Канюков, О М Трубина, А Д Мурашов, и др (всего 4 человека) // Матер докладов науч практ конференции онкологов «Актуальные вопросы теоретической и клинической онкологии»- Оренбург, 1996 -С 93-95 Перспективные направления алло(гомо)пластики в офтальмомикрохирургии / соав В Н Канюков, А А Стадников, О М Трубина // Брошевские чтения Тезисы Всероссийской науч -практ конф-Самара, 1997-С 143-144

10 Комплексная разработка биотрансплантатов в офтальмологии / соав В Н Канюков, А А Стадников, О М Трубина // Мат науково- практ конф «Хфурпчне лшування та реабиптащя хворих з офтальмолопчною патолопэю» - Кшв, 2004 - С 135-137 1 Реактивность и пластичность тканей конъюнктивы в условиях ее механической травматизации и экзогенного введения окситоцина / соав В Н Канюков, А А Стадников // Мат VII Всеросс конф «Нейроэндокринология-2005» - С -Петербург, 2005 - С 166-167

12 Особенности морфофункциональной реорганизации тканей конъюнктивы и роговицы при экспериментальном моделировании дефекта и замещении его различными видами аллотрансплантатов / соав В Н Канюков, А А Стадников, А А Горбунов // Матер науч совещ «Актуальные проблемы учения о тканях» - СПб, 2006 -С 50-51

13 Значение программированной гибели клеток (апоптоза) в процессах гистогенезов и цитодифференцировки / соав В Н Канюков, А А Стадников Е А Ломухина // Вестник Оренбургского Государственного Университета - Оренбург, 2007 -№(78) - С 163-165

14 Морфологические исследования применения различных видов аллотрансплантатов для целей офтальмохирургии / соав В Н Канюков, А А Стадников, О М Трубина, Р М Подопригора, Б А Ломухина, А Н Казенное // Вестник Оренбургского Государственного Университета - Оренбург, 2007 - №(78) -С 114-118

15 Пат 2113196 Российская Федерация, Российское агентство по патентам и товарным знакам (Роспатент) Способ пластики конъюнктивы/ Канюков В Н , Горбунов А А , Трубина О М., заявитель и патентообладатель Оренбургский филиал Акционерного общества закрытого типа Межрегиональный научно - технический комплекс «Микрохирургия глаза» - № 95105076, заявл 05 04 95, зарег 20 06 98

о/

Подписан в печать 04 2008 г Формат 60 x 84/16 Уел печ л 1,5 Тираж 100 экз 460044, г Оренбург, ул Советская, 19 Оренбургский государственный педагогический университет

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Горбунов, Алексей Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава IКЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

РЕАКТИВНОСТИ И ПЛАСТИЧНОСТИ ТКАНЕЙ КОНЪЮНКТИВЫ В УСЛОВИЯХ ОФТАЛЬМОТРАНСПЛАНТОЛОГИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Социальные и медицинские аспекты ( офтальмотрансплантологии. ( I >

1.2 Морфология повреждений и реактивности тканей глаза.

1.3 Методы и средства стимуляции регенерации.

1.4 Виды трансплантационных материалов, используемых в офтальмохирургии переднего отдела глаза.

Глава II МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Гистологическая и биомеханическая характеристики кадаверного перикарда.

3.2 Экспериментально-гистологическая оценка реактивности и пластичности тканей конъюнктивы в условиях ее травматизации.

3.3. Структурно-функциональная характеристика нонапептидергической нейросекреторной системы гипоталамуса кроликов при травматических повреждениях конъюнктивы.

3.4 Морфологические исследования раневого дефекта конъюнктивы в условиях местного применения окситоцина.

3.5 Морфофункциональная характеристика репаративных гистогенезов конъюнктивы при аллотрансплантации перикарда, в том числе в условиях экзогенного введения окситоцина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Реактивность и пластичность тканей конъюнктивы в условиях замещения ее дефектов консервированным аллоперикардом (нейробиологические аспекты)"

Актуальность темы

С каждым годом растет функциональная нагрузка на зрительный анализатор людей всех возрастных групп. При этом увеличивается число случаев патогенных воздействий на орган зрения, включая травматические повреждения его переднего отдела, что связано с развитием производственных технологий и неблагоприятными факторами внешней среды (С.В. Логвинов с соавт., 2006; А.А. Жданкина, 2006).

Это обстоятельство, в свою очередь, приводит к необходимости лечебной коррекции различного рода повреждений вспомогательного аппарата глаза, в том числе с использованием методов офтальмохирургии, включающих разнообразные способы пластического замещения дефектов конъюнктивы с использованием трансплантационных материалов и объектов.

Пластические операции с применением ауто- и аллогенных тканей конъюнктивы, роговицы, слизистой оболочки ротовой полости, теноновой оболочки, амниона, твердой мозговой оболочки, аорты, капсулы почки широко практикуются офтальмологами для закрытия дефектов фиброзной оболочки глазного яблока (В .Д. Кукса, 1966; О.Д.Морозова, 1971; Г.А.Макеева, 1983; В.Н. Канюков с соавт., 1995, 1996, 2001,2&05, 2006).

Основными недостатками аутотрансплантации являются ограниченная возможность забора тканей ■ и неизбежность дополнительной травмы, сопровождающей эту манипуляцию (П.П. Коваленко, 1976; Э.Р. Мулдашев с соавт., 1978). Главным препятствием для масштабного использования аллотрансплантатов является реакция тканевой несовместимости по типу иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису пересаженной ткани с последующим грубым рубцеванием (К.Е. Seiffert, 1967, 1970; J.C. Tauro et al., 1991; Э.Р. Мулдашев, 1994). В случаях использования ксеногенных тканей реакция тканевой несовместимости протекает острее, чем при аллотрансплантации и принимает характер острого иммунного воспаления, приводящего к быстрому лизису трансплантата (J.C. Tauro et al., 1991; С.А. Муслимов, 2000). Таким образом, при алло- и ксенотрансплантации основным фактором, влияющим на результаты операций, является антигенная активность тканей трансплантата. При пересадке консервированных тканей выраженной иммунной реакции не наблюдается, а трансплантаты с различной скоростью замещаются новообразованной тканью или инкапсулируются в зависимости от метода консервации (С.А. Муслимов, 2000).

В настоящее время ткани перикарда ауто-, алло- и ксеногенного происхождения широко используются в сердечно-сосудистой хирургии в качестве пластического материала. Получены положительные результаты при применении трансплантатов из перикарда крупного рогатого скота в офтальмологии для хирургического лечения инволюционной хориоретинальной макулодистрофии.

Вместе с тем до сих пор нет данных о результатах специальных исследований биологических свойств перикарда и поврежденной конъюнктивы при взаимодействиях тканевых структур в условиях замещения дефектов аллотрансплантатом из консервированного трупного перикарда. Остаются открытыми вопросы возможности использования в офтальмологии консервированной ткани трупного перикарда для пластики обширных дефектов различного генеза. С другой стороны, по данным ряда авторов, гипоталамические нонапептиды (окситоцин, вазопрессин) позитивно влияют на репарацию тканей различного генеза (А.А. Стадников, 1995, 1999, 2001). Однако их роль в репаративных гистогенезах тканей глазного яблока, в том числе условиях заместительной трансплантации, не изучалась.

Цель исследования - экспериментально-морфологическое и нейробиологическое обоснование целесообразности использования консервированного трупного перикарда для замещения обширных дефектов конъюнктивы.

Для реализации этой цели поставлены следующие задачи:

1. Выявить структурно-функциональные изменения эпителия и соединительной ткани конъюнктивы в условиях ее механической травмы.

2. Исследовать особенности морфофункциональной реорганизации тканей поврежденной конъюнктивы в условиях, замещения дефекта аллотрансплантатом из консервированного трупного перикарда.

3. Определить роль гипоталамических нейрогормонов в процессах репаративных гистогенезов конъюнктивы.

Научная новизна исследования

Впервые экспериментально - гистологически, включая ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ, изучены структурно-функциональные изменения в аспекте восстановительных процессов эпителия и соединительной ткани конъюнктивы в условиях механической травмы, а также установлены особенности морфофункциональной реорганизации тканей поврежденной конъюнктивы в условиях замещения дефекта аллотрансплантатом из консервированного трупного перикарда, в том числе при местном воздействии окситоцина. Впервые дана оценка влияния гипоталамических нонапептидных нейрогормонов на репаративные гистогенезы конъюнктивы, индуцированные перикардиальным аллотрансплантатом.

Практическая значимость работы

Полученные данные о структурно-функциональных изменениях тканей конъюнктивы в условиях механической травмы, а также о тканевых превращениях консервированного трупного перикарда позволили разработать новый методический подход к оптимизации замещения её раневых дефектов, основанный на применении консервированного трупного перикарда с использованием нейроэндокринных факторов стимуляции репаративных гистогенезов, что существенно для офтальмохирургии.

Внедрение результатов исследования

Полученные данные по морфофункциональной реорганизации 1 тканей конъюнктивы, а также в условиях замещения слизистой оболочки перикардом с использованием нейрогормонов, служат теоретическим обоснованием для использования данного биоматериала с целью хирургической коррекции патологии переднего отдела глаза, его вспомогательного аппарата в условиях офтальмохирургических клиник.

Согласно этим новым данным возможна разработка эффективных методов хирургического лечения посттравматических дефектов слизистой оболочки конъюнктивы.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В условиях травматических повреждений слизистой оболочки конъюнктивы экспериментальных животных отработаны гистологические, ультраструктурные и иммуноцитохимические (р53, bcl-2) критерии оценки течения репаративных гистогенезов.

2. Дисрегенераторный характер посттравматического воспаления тканей конъюнктивы сопряжен с рассинхронизацией секреторного цикла нонапептидергических гипоталамических ядер, включая блокировку высвобождения нейропептидов на уровне аксовазальных комплексов нейрогипофиза.

3. Пластическое замещение дефектов конъюнктивы аллоперикардом оптимизирует ход репаративных процессов, обеспечивая фиксацию трансплантата соединительнотканными элементами.

4. Включение с лечебной целью* окситоцина в условиях трансплантации аллоперикарда оказывает эффект модификации репаративных гистогенезов (уменьшение экспрессии проапоптических генов, формирование органотипического регенерата).

Апробация работы и-публикации результатов исследования ■ Материалы диссертации представлены и обсуждены на IV научно-практической-конференции «Новые технологии микрохирургии глаза» г. Оренбург, 1995; научно - практической конференции «Пластическая хирургия придаточного аппарата глаза и орбиты» Москва, 1996; научно - практической конференции «Брошевские чтения» г. Самара, 1997; научно - практической конференции «Xipypri4He лшування та реабиптащя хворих з офтальмолопчною патолопэю» г. Кшв, 2004; VII Всероссийской конференции «Нейроэндокринология-2005» С.-Петербург, 2005; IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии, г. Екатеринбург, 2006 (диплом за лучший стендовый доклад); диплом лауреата премии Правительства Оренбургской области в сфере науки и техники (за экспериментально — гистологическое изучение биотрансплантатов в офтальмохирургии) г. Оренбург, 2007.

По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, из них 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для опубликования основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук. Получен 1 патент РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 9 таблицами, 28 рисунками. Список литературы содержит 183 источника, в том числе 56 иностранных. Диссертация изложена на русском языке.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Горбунов, Алексей Александрович

выводы

1. На основе разработанной экспериментальной модели травматического повреждения конъюнктивы установлены особенности реактивных, адаптивных и репаративных потенций клеточных и тканевых структур конъюнктивы, свидетельствующие о нарушении эпителиально - соединительнотканных отношений и о лимитировании регенераторных возможностей эпителиальных и соединительнотканных структур конъюнктивы при ее травме.

2. В условиях травматического повреждения конъюнктивы одним из ведущих факторов лимитирования репаративных возможностей ее клеточных и тканевых структур являются морфофункциональные сдвиги в гипоталамо — гипофизарной нейросекреторной системы, проявляющиеся на стадиях 14 - 30 суток эксперимента в. форме блокировки высвобождения гипоталамических нейропептидов через аксовазальные контакты в нейрогипофизе.

3. Морфофункциональная характеристика очага повреждения конъюнктивы в условиях пластики ее дефекта образующийся на месте перикардиального трансплантата соединительнотканный регенерат может обеспечивать коррекцию механических (опорных) свойств поврежденной органной структуры.

4. Местное применение окситоцина у животных с травматическим повреждением конъюнктивы повышает возможности реализации адаптивных и компенсаторных возможностей тканевых и клеточных структур конъюнктивы. На фоне введения окситоцина обеспечивается сохранение целостности и пространственного расположения структур конъюнктивы (сосуды микроциркуляторного русла, клетки фибробластического дифферона, макрофаги) и уменьшаются явления некроза клеточных элементов, тромбоза сосудов и очаговой деструкции тканей.

5. Использование в эксперименте на животных с лечебной целью окситоцина в условиях заместительной пластики раневых дефектов конъюнктивы трансплантатом перикарда оптимизирует фазы воспаления, уменьшает клеточную гибель эпителиоцитов, фибробластов, эндотелиоцитов и способствуют формированию регенерата, близкого по гистологическому строению к органотипическому.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В научно — исследовательской работе и клинических испытаниях необходимо учитывать, что гистологическая, ультраструктурная и биомеханическая характеристики перикардиального трансплантата кадавера, консервированного и заготовленного по лазерной технологии, соответствуют фиброархитектонике стромальных структур слизистой оболочки конъюнктивы экспериментальных животных (кроликов) и могут быть использованы в заместительной хирургии раневых дефектов конъюнктивы.

2. На основе экспериментально - гистологической модели раневых дефектов с использованием аллоперикарда и окситоцина может проводиться разработка эффективных технологий хирургического лечения раневых дефектов конъюнктивы.

3. Полученные в результате эксперимента данные по гистологическим и ультраструктурным особенностям образующегося на месте перикардиального трансплантата соединительнотканного регенерата гисто- и органотипического характера могут служить теоретической основой для разработки направленного воздействия на репаративный гистогенез, позволяющего обеспечить коррекцию механических (опорных) свойств поврежденной конъюнктивы, а также прогнозировать и контролировать полученные клинические результаты.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Горбунов, Алексей Александрович, Саранск

1. Абрамова, И. А. Эффективность применения амниотической мембраны с целью конъюнктивальной пластики в эксперименте / И.А. Абрамова // Тезисы докладов V1.I съезда офтальмологов России. - М, 2005. - С.632.

2. Аветисов, Э.С. Справочник по офтальмологии / Э.С. Аветисов. М., 1978.-376с.

3. Аветисян, А.Б. Применение нового ксенотрансплантата в хирургии слезных путей / А.Б. Аветисян // Тезисы докладов VIII съезда офтальмологов России. М., 2005. — С.632.

4. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г. Автандилов. — М.: Медицина, 1991. 186с.

5. Адо, А.А. Расстройство кровообращения и микроциркуляции в воспаленной ткани / А.А. Адо, Н.А. Клименко // Патологическая физиология. Томск, 1994. - С.162-164.

6. Антонова, Е.И. Апоптоз некрозные соотношения* в клеточных культурах гепатоцитов позвоночных животных после тепловой нагрузки / Е.И. Антонова, 0.3. Мкртчан // Сб. научн. тр. 7 й Всерос.конф. по патологии клетки. М.: Изд - во ГУНИИМЧ РАМН, 2005. -С.11-13.

7. Арено, Ю.Э. Некоторые эндокринные механизмы регуляции репаративной регенерации соединительной ткани / Ю.Э. Арено, Т.Ю. Торпас // Тканевая биология. Тарту, 1976. - С.35-38.

8. Бабаева, А.Г. Иммунологические механизмы регуляции восстановительных процессов / А.Г. Бабаева. М.: Медицина, 1972. -159с.

9. Бабаева, А.Г. Иммунология процессов адаптивного роста, пролиферации и их нарушений / А.Г. Бабаева, Е.А. Зотиков. М.: Наука, 1987. - 207с.

10. Барков, В.Н. Экспериментально-морфологическое обоснование применения нейропептида и деминерализованного клеточного матрикса при лечении больных с кистами челюстей: Автореф. дис.канд. мед. наук. Оренбург, 2004. - 19с.

11. Бедило, В.Я. Результаты. внутрироговичной пересадки различных тканей в эксперименте / В.Я. Бедило, А.Г. Носов, В.И. Тарабукин // Вестн. офтальмол. 1980. - Т.96. - №2. - С.44-47.

12. Беляев, B.C. Трансплантология в современной офтальмологии / B.C. Беляев, А.А. Каспаров // Вестн. офтальмол. 1982. - Т.98. - №6. - С.39-47.

13. Богомолова, Н.В. Явления апоптоза в раковых опухолях / Н.В. Богомолова, Н.Г. Гаджиханова // Сб. научн. тр. 7 й Всерос. конф. по патологии клетки. М.: Изд - во ГУНИИМЧ РАМН, 2005. - С.25-26.

14. Бухарин, О.В. Гормоны задней доли гипофиза окситоцин и вазопрессин как медиаторы иммуногенеза / О.В. Бухарин // Морфогенез и регенерация покровных и железистых эпителиев в онтогенезе и в условиях эксперимента. Оренбург. - 1981. - С.59-64.

15. Веремеенко, К.Н. Ферменты протеолиза, и их ингибиторы в медицинской практике / К.Н. Веремеенко. — Киев: Здоровье, 1971. -226с.

16. Волкова, И.Е. Аутопластика при формировании конъюнктивальной культи / И.Е. Волкова, С.Б. Протопопов, JI.M. Кукош // Тезисы докладов VIII съезда офтальмологов России. М., 2005. - С.638.

17. Воронцова, М.А. Физиология регенерации / М.А.Воронцова, Л.Д. Лиознер. М.: Советская наука, 1955.- 408с.

18. Гилязева, З.А. Экспериментальное обоснование применения препарата керакол при щелочных ожогах роговой оболочки /

19. З.А. Гилязева, Р.И. Еникеев // Современ. аспекты клинич. офтальмол.: Сб. научн. тр. Уфа, 1992. С.35-38.

20. Горбанева, Г.А. Экспериментально-клиническое обоснование целесообразности применения пробиотика и окситоцина в лечении острого гнойного верхнечелюстного синуита: Автореф. дисс.канд. мед. наук. — Оренбург, 2006. — 22с.

21. Грабовой, А.И. Иннервация раневых регенератов кожи в различные периоды онтогенеза / А.И. Грабовой, Г.Б. Костинский // Врачебное дело. 1987. - №12. - С.62-64.

22. Гриневич, В.В. Экстрагипоталамические нонапептидергические нейросекреторные клетки в головном мозге крыс /В.В. Гриневич // Докл. РАН. 2000. - Т.351. - №6. - С.689-692.

23. Гундорова, Р.А. Актуальные проблемы глазного травматизма / Р.А. Гундорова, B.C. Гришина // Вестник офтальмологии. 1985. -Т.101. - №5. - С.З.

24. Гундорова, Р.А. Травмы глаза / Р.А. Гундорова, А.А. Малаев, A.M. Южаков. М.: Медицина, 1986. - 368с.

25. Гундорова, Р.А. Новые приоритетные направления в проблеме глазного травматизма / Р.А. Гундорова, А.В. Степанов // Вестник офтальмологии. 1999. - Т.115. - №2. - С.3-5.

26. Давыдовский, И. В. Общая патология человека / И.В. Давыдовский. М.: Медицина, 1969. - 611с.

27. Даниличев, В.Ф. Опыт применения полимеров в офтальмохирургии / В.Ф. Даниличев, Н.А. Ушаков // Офтальмологический журнал. — 1992. №2. - С.75-77.

28. Данилов, Р.К. Учение о камбиальности тканей как гистогенетическая основа для познания механизмов раневого процесса // Матер, научн. совещ. С-Петербург: Изд-во ВМА, 2006. -С.40-43

29. Дисковидный трансплантат из перикарда крупного рогатого скота для лечения прогрессирующей миопии / Ю.А. Чеглаков, А.Ц. Лясковик, П.Г. Юрик, Т.В. Мельникова // Сб.: Международный симпозиум. Медицина и охрана здоровья. Тюмень. - 1997. - С.159.

30. Дубинская, A.M. Применение хитина и его производных в фармации / A.M. Дубинская, А.Е. Добротворский // Химико-фармацевтический журнал. 1989. - №5. - С.623-628.

31. Дыгай, A.M. Воспаление и гемопоэз / A.M. Дыгай, Н.А. Клименко. -Томск: Изд-во Том. Ун-та, 1992. 276с.

32. Ефимов, Е.А. Закономерности полноты посттравматических регенераций кожи / Е.А. Ефимов // Арх. патол. 1995. - Т.57. - №2.-С.85-87.

33. Жданкина, А.А. Морфофункциональные изменения сетчатки глаза при фотоповреждении на фоне аллоксанового диабета и их коррекция асковертином: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Томск, 2006. - 22с.

34. Заварзин; А.А. Избранные труды / А.А. Заварзин-// М.-Л.- АНСССР, 1953.-4т.-716с.

35. Заварзин, А.А. (мл.) Основы сравнительной гистологии / А.А. Заварзин // Л: Изд-во ЛГУ, 1986. 400с.

36. Зайкова, М.В. Результаты экстрасклеральной аллопластики с консервацией тимолом при высокой прогрессирующей близорукости / М.В. Зайкова, Е.Н. Марков // Вестник офтальмологии. 1982. -Т.98. - №4. - С.30-34.

37. Зайкова, М.В. Применение аллоамниона при высокой прогрессирующей близорукости / М.В. Зайкова, А.И. Лялин // Вестник офтальмологии. 1983. - Т.99. - №1. - С.32-34.

38. Иммамалиев, А.С. Биологическая оценка трансплантируемых тканей/А.С. Иммамалиев. М., 1975. - С. 111-119.S

39. Канюков, В.Н. Аллотрансплантация аортой в пластической хирургии* / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина. М.: Медицина, 2001. - 128с.

40. Канюков, В.Н. Биологическое и экспериментально-гистологическое обоснование новых технологий в офтальмохирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина. М.: Медицина, 2005. - 160с.

41. Канюков, В.Н. Экспериментально-гистологическое изучение биотрансплантатов в офтальмохирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, О.М. Трубина" // Тезисы докладов VIII съезда офтальмологов России. М., 2005. - С.647-648.

42. Канюков, В.Н. Экспериментально-гистологические и клинические аспекты реконструктивной офтальмохирургии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников. Оренбург, 2006. - 128с.

43. Каспаров; А.А. Использование консервативной амниотической мембраны для реконструкции поверхности переднего отрезка глазного яблока / А.А. Каспаров // Вестник офтальмологии. 2001. -Т.117. - №3. - С.45-47.

44. Клеточно-дифферонная организация тканей и проблема заживления ран / А.А. Клишов, Т.Я. Графова, Ю.К. Халилова и др. // Морфология. 1990. - Т.98. - Вып.4. - С.5-23.

45. Клишов, А.А. Еистогенетические аспекты проблем регенерации / А.А. Клишов // Архив анатомии, гистол. и эмбриол.- 1981. — Т.80. -№2. С.84-89.

46. Коваленко, П.П. Пересадка тканей и органов / П.П. Коваленко. -Ростов-на-Дону, 1976. 48с.

47. Копылов, Н.В. Реакция тканей глаза на введение взвесей гомохряща и талька в теноново пространство / Н.В. Копылов, Ю.А. Кудачков // Офтальмологический журнал. 1990. - №7. - С.433-434.

48. Краснов, М.М. Применение силиконовых имплантатов у больных со стойкой эпиферой / М.М. Краснов // Вестник офтальмологии. -1992. Т.108. - №2. - С.20-22.

49. Кузин, М.И. Раны и раневая инфекция / М.И. Кузин, Б.М. Костюченок. М.: Медицина, 1990. - 591с.

50. Кукса, В.Д. Периферическая послойная пересадка роговой оболочки: Автореф. дис. канд. мед. наук. Одесса, 1966. - 19с.

51. Курлаев, П.П. Роль факторов бактериальной персистенции в патогенезе, прогнозировании и обосновании выбора метода лечения больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей: Автореф. дис.доктор, мед. наук. Оренбург, 2001. - 30с.

52. Кусень, С.И. Молекулярные механизмы в действии полипептидных факторов роста / С.И. Кусень, Р.С. Стойка М.: Наука, 1985. -236с.

53. Лазаренко, Ф.М. Закономерности роста и превращения тканей и органов в условиях культивирования их в организме / Ф.М. Лазаренко. -М.: Медгиз, 1959. -400с.

54. Лебехов, П.И. Прободные ранения глаз / П.И. Лебехов. -Ленинград: Медицина, 1974. 165с.

55. Лилли, Р.Д. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р.Д. Лилли. М.: Изд-во «Мир», 1969. - 646с.

56. Машковцев, В.М. Аллантоиспластика при первичной хирургической обработке ран склеры / В.М. Машковцев,

57. Н.А. Арефьева, A.JI. Зайцев // Материалы IV Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии. Екатеринбург. - 2006. -С. 120121.

58. Маянский, Д.Н. Воспаление и регенерация, каналы связи / Д.Н. Маянский // Современные проблемы регенерации. Йошкар-Ола. - 1982. - С.127-135.

59. Морозова, О.Д. Роговично-конъюнктивальная пластика в хирургическом лечении симблефарона и рецидивирующего птеригиума / О.Д. Морозова // Вестн. офтальмологии. 1971. - Т.87. - №2. - С.24-27.

60. Морфологические изменения клеточных элементов сетчатки глаза при длительном низкоинтенсивном световом воздействии / С.В. Логвинов, Е.Ю. Варакута, А.В. Потапов, Е.П. Михуля // Бюлл. Сибирской мед. 2006. - №2. - С.31-36.

61. Морфологические принципы аллотрансплантации тканей / Э.Р. Мулдашев, В.У. Галимова, К.А. Захваткина и др. // III Всероссийский пленум проблемной комиссии по трансплантацииорганов и тканей. — Пермь. 1987. - С.73-75.

62. Морфофункциональные зоны тканевого ложа трансплантата / Р.Т. Нигматуллин, В.У. Галимова, Р.С. Минигазимов и др. // Морфология. 2000. - Т.117. - №3.- С.88.

63. Мулдашев, Э.Р. Сосудисто-тканевые взаимоотношения при гиперпластических процессах конъюнктивы. Микроциркуляция внорме и патологии / Э.Р. Мулдашев, Р.Т. Нигматуллин // Сб. научн. тр. Уфа. - 1977. - T.XXV. - С.71.

64. Мулдашев, Э.Р. Применение гомотрансплантатов твердой мозговой оболочки для пластики век / Э.Р. Мулдашев // Тезисы докладов VI съезда офтальмологов УССР. Одесса - 1978'. - С.59.

65. Мулдашев, Э.Р. Аллотрансплантаты для офтальмохирургии / Э.Р. Мулдашев, С.А. Муслимов, А.Ю Салихов. Уфа, 1987. - 30с.

66. Мулдашев, Э.Р. Теоретические и прикладные аспекты создания аллотрансплантатов серии «Alloplant»: Автореф. дис.доктор, мед. наук.-СПб., 1994.-40с.

67. Муслимов, С.А. Микроциркуляторное русло конъюнктивы глазного яблока в норме и при экспериментальной аллопластике: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Ярославль, 1984. - 20с.

68. Муслимов, С.А. Морфологические аспекты регенеративной хирургии / С.А. Муслимов. Уфа: Башкортостан, 2000. - 166с.

69. Мхадхби, Б.М. Микроциркуляция бульбарной конъюнктивы: Автореф. дис. канд. мед. наук. Томск, 1997 - 47с.

70. Мышкина, JI.A. Хитин, хитозан: получение, свойства, применение / Л.А. Мышкина, В.В. Луценко, А.Ю. Низовский // М.: ВНИИСЭНТИ. 1991. - В.4. - С.36.

71. Нарушение физиологических параметров организма (перекисное окисление липидов и микроциркуляция) при носоглазничной травме и их методы коррекции / И.М. Библина, В.Ф. Почерняева,

72. С.Б. Бесшапочный, В.В. Лобурец // Вести, отоларингол. 1991. - №5. - С.25-31.

73. Некоторые пути подбора новых аллотрансплантатов для офтальмохирургии / Э.Р. Мулдашев, А.Г. Габбасов, Р.Т. Нугматуллин и др. // Актуальные вопросы пересадки органов и тканей. Москва. - 1978. - С.21-22.

74. Неробеев, А.И. Восстановление тканей головы и шеи /

75. A.И; Неробеев.-М.: Медицина, 1988. -272с.

76. Нигматуллин, Р.Т. Морфологические аспекты соединительнотканных аллотрансплантатов: Автореф. дис. доктор: мед. наук. — Новосибирск, 1997. 49с.

77. Нифонтова, Т.П. Пластические операции после удаления раковых новообразований век по материалам глазной клиники, за* 5 лет / Т.П.Нифонтова // Вопросы восстановительной хирургии. 1991. -С.34-36.

78. Новиков, B.C. Иммунофизиология экстремальных состояний /

79. B.C. Новиков. Сиб.: Наука, 1996. - 172с.

80. О применение углеродных имплантантов в офтальмохирургии / Р.А. Гундорова, В.П. Быков, Е.Н. Вериго и др. // Офтальмологический журнал. 1992,- №2.-С.77-79.

81. Оценка иммуномодулирующего действия профеталя при экспериментальном проникающем ранении глаза / Т.В. Гаврилова, Р.Р. Файзрахманов, М.В. Черешнева, Ю.И. Шилов // Матер.IV ЕвроАзиатской конфер. по офтальмохирургии. Екатеринбург, 2006.• С.114-115.

82. Первичная аллопластика конъюнктивы глазного яблока при ожогах глаз / Э.Р. Мулдашев, А.Ю. Салихов, Р.Т. Булатов и др. // Тез конфер. «Современные средства первой помощи и методы лечения ожоговой болезни». -М. 1986. - С.332-333.

83. Перспективный донорский материал для реконструкции в офтальмологии / В.Н. Канюков, А.А. Стадников, В.И. Коптев и др. // Труды Оренбургского межобластного офтальмоонкологического центра. Оренбург, 1996. - С.49-51.

84. Петроявский, А.В. Исследование кровообращение переднего сегмента глаза, его клиническое значение: Автореф. дисс.докт. мед. наук. М., 2004. - 46с.

85. Пирс, Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная / Э. Пирс. М.: ИЛ, 1962.-956с.

86. Поленов, А.Л. Нейроэндокринология / А.Л. Поленов. СПб: ч:1, кн.1 1993.-229с.

87. Поленов, А.Л. Гипоталамо-гипофизарный нейроэндокринный комплекс / А.Л. Поленов, М.С. Константинова, П.Е. Горлов. // Нейроэндокринология СПб: ч.П, 1994. -С.139-186.

88. Прохватилов, Г.И. Микрохирургия челюстно-лицевой области / Г.И. Прохватилов. С-Пб.: «Нордмед-Издат», 1998. - 164с.

89. Пэттен, Б.М. Руководство по эмбриологии человека / Б.М. Пэттен. -М.: Медицина, 1959. -460с.

90. Родионов, О.В. Неоваскулогенез при гетеротонической трансплантации консервированного аллосухожилия / О.В. Родионов, Р.Т. Булатов // Микроциркуляторное русло в норме и эксперименте. -Уфа. 1986.-С.96.

91. Роль биомеханических свойств аллотрансплантатов в репаративной регенерации соединительных структур / Р.Т. Нигматуллин,

92. Э.Р. Мулдашев, С.А. Муслимов, Р.Н. Еникеев и др. // Управление морфогенезом тканей и органов в процессе адаптации. — Иркутск. -1981. -С.71.

93. Роль исследования микроциркуляции бульбарной конъюнктивы в оценке тяжести развития заболевания при синдроме длительного-сдавления / Р.А. Ованесян, В.О. Галикян, Л.Ф. Шердукалова,

94. B.Д. Арутюнян // Кровообращение. 1990. - Т.23. - №1.- С.50-52.

95. Рубинчик, Л.Д. Результаты имплантации силиконовых шаров в орбиту / Л.Д. Рубинчик, Л.Е. Краснов // Вестник офтальмологии. -1973. Т.89. - №4. - С.40-42.

96. Серов, В.В. Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология) / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. М.: Медицина, 1981. -312с.

97. Сивожелезов, К.Г. Комплексное лечение гнойно-воспалительных заболеваний пальцев и кисти: Автореф. дис.канд. мед. наук. -Самара, 2005. 30с.

98. Смолянникова, В.А. Новые данные по проблеме гистогенеза опухолей соединительной ткани . / В.А. Смолянникова, Д.С. Саркисов, А.А. Пальцын // Архив патологии. 1984. — №3.1. C.39-43.

99. Стадников, А.А. Нейробиологические аспекты регуляции репаративных гистогенезов / А.А. Стадников // Морфология. 1995. -Т.108. - №2. - С.16-19.

100. Стадников, А.А. Гипоталамические факторы регуляции процессов роста, пролиферации и цитодифференцировки эпителия аденогипофиза / А.А. Стадников. Екатеринбург: УрОРАН, 1999. -140с.

101. Стадников, А.А. Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействиях про- и эукариот. Структурно-функциональные аспекты / А. А. Стадников. Екатеринбург, 2001. - 244с.

102. Стадников, А.А. Гипоталамические нейропептиды как факторы регуляции взаимодействий про- и эукариотических клеток в организме млекопитающих / А.А. Стадников, Н.Н. Шевлюк, А.Н. Козлова//Морфология. -2007. Т. 131. - №3. -С.94-96.

103. Стадников, Б.А. Клинико-экспериментальное обоснование применения нейропептидов и гиалуроновой кислоты в комплексном лечении осложнений острого панкреатита: Автореф. дис.доктор, мед. наук. Оренбург, 2005. - 34с.

104. Стручилов, В.А. Хирургическая коррекция глазницы и конъюнктивальной полости у больных с травмой средней зоны лица и анофтальмическим синдромом / В.А. Стручилов // Вопросы стоматологии. 1998. - С.284-285.

105. Ш.Суркова, В.К. Новый трансплантат для иридопластики / В.К. Суркова, Г.А. Никова, С.А. Лобанов // Вестник офтальмологии. 1998. - Т.114. - №2 .- С.23-27.

106. Сухих, Г.Т. Трансплантация фетальных клеток в медицине: настоящее и будущее / Г.Т. Сухих // Трансплантация фетальных клеток и тканей: Сб. научн. тр. М. - 1998. - С.33-40.

107. Ташке, Э. Количественный морфометрический анализ клеток и тканей / Э. Ташке. Бухарест: Изд-во АН Соц. Респ. Румыния, 1980. -240с.

108. Фаизов, Т.Т. Сочетанная черепно-мозговая травма, патогенетическое лечение и его обоснования (клинико-морфоэкспериментальное исследование): Автореф. дисс. докт. мед. наук.-М. 1998.-40с.

109. Фасенко, В.В. Морфологическая характеристика отличий ожоговых ран от термических. Методика и практика судебной медицины / В.В. Фасенко, H.JI. Сивцова // Сб. науч. Тр. Укр. Ин-та усоверш. Врачей. Харьков. - 1990. - С.60-63.

110. Филатова, И.А. Пластические операции в офтальмохирургии с использованием углеродных имплантатов: Автореф. дисс. докт. мед. наук. М. - 1994. - 38с.

111. Филатова, И.А. Одномоментная пластика конъюнктивальной полости век у пациентов с боевыми повреждениями / И.А. Филатова //Боевые повреждения органа зрения. 1999. - С.47-48.

112. Филатова, И.А. Особенности имплантации карботекстима-М в пластической офтальмохирургии / И.А. Филатова // Клиническая офтальмология. 2001. - Т.2. - №3. - С. 107-110.

113. Хлопин, Н.Г. Общебиологические и экспериментальные основы гистологии / Н.Г. Хлопин. -М.: Изд-во АНСССР, 1946. 490с.

114. Хорошилова Маслова, И.П. Механизм регуляции заживления проникающих ранений роговицы с помощью естественного комплекса цитокинов / И.П. Хорошилова - Маслова // Вестник офтальмологии. - 1995. - Т. 111. - №4. - С. 14-19.

115. Хорошилова — Маслова, И.П. Возможное использование аутоконъюнктивы как пластического материала в хирургическом лечении патологии роговицы / И.П. Хорошилова Маслова // Актуальные вопросы офтальмологии. - 2000. - 4.2. - С. 149-150.

116. Ченцова, Е.В. Система патогенетически обоснованного лечения ожоговой травмы глаза: Автореф. дисс. докт. мед. наук. М., 1996. -36с.

117. Шеина, Е.А. Экспериментальное обоснование местного применения окситоцина1 и антибиотика в лечении острого деструктивного панкреатита: Автореф. дисс.канд. мед. наук. — Оренбург, 2004. — 20с:

118. Шумаков, В.И. Трансплантация органов и тканей / В.И. Шумаков, П.П. Коваленко // Тез. Докл. VII Всесоюзн. конфер. по пересадке органов и тканей. Ростов-на-Дону. - 1976. - С.200-201.

119. Южаков, A.M. Статистический анализ глазных заболеваний и инвалидности по РСФСР / A.M. Южаков, А.Г. Травкин, О.А.Киселева, Л.М.Мазурова // Вестник офтальмологии. 1991. -Т.107. - №2. - С.5-7.

120. Юрина, Н.А. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани / Н.А. Юрина, А.И. Радостина. -М.: Изд-во УДН, 1990. 332с.

121. Ярилин, А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме / А.А. Ярилин // Патол. физиол. и эксп. терапия 1996. -№2. - С.38-48.

122. Barns, N.C. Airway hyperrespons veneus and inflammation / N.C. Barns, J.F. Costello // Brit. Med. Bull. 1986. - Vol.236. - №2. p.445-459.

123. Baumgarten, C.R. Kallikrein Kinin system and inflammatory reaction / C.R. Baumgarten // Allergologie. - 1989. - Vol.12. - №3 - P.248-254.

124. Bazan, H.E. Amitogen activated proteinkinase (MAP- Kinase) cascade is simulated by plateled activating factor (PAF) in corneal epithelium / H.E. Bazan, L. Varner // Curr. Eye Res. - 1997. - Vol.l6(4). - №2. - P. 372-379.

125. Bhattacharya, S.K. Central modulation of peripheral inflammation / S.K. Bhattacharya, G. Gupta // Ind. J. Exp. Biol. 1988. - Vol.26. - №2. -P.77-84.

126. Burka, J.F. Hiatamine as modulator of airway hyperreactivity / J.F. Burka // Can. J. Phisiol. Pharmacol. 1987. - Vol.65. - №3. - P.434.

127. Cavailon, J.M. Actualite physiopatologique. Interleucines et inflammation J.M. Cavailon // Sem. Hop. Paris. 1990. - Vol.66. - №16. -P.882-888.

128. Cejkova, J. Enzyme histochemistry of corneal wound healing / J. Cejkova // Histology and Histopathology. 1998. - Vol.13. - №2. -P.553-564.

129. Comparison of bovine collagen xenografts to autografts in the rabbit / J.C. Tauro, J.R. Parsons, J. Ricci et al. // Clin. Orthop. 1991. - Vol.266. -№4. -P.271-284.

130. Ferriera, S.H. Postaglandis pain and inflammation / S.H. Ferriera // Agents action. 1986. - Vol.19. - №4. -P.91-98.

131. Higgs, G.A. Prostaglandis and the leucatriens as inflammation mediators / G.A. Higgs, J.A. Salmon,// Br. Med. Bull. 1987. - Vol.43. - №2. -P.285-296.

132. Higgs, J.A. The role eicosanoids in inflammation / J.A. Higgs // Prog. Lipid. Res. 1986. - Vol.25. - №1-4. - P.555-561.

133. Hirschelmann, R. Oxygen- free radicals and inflammation / R. Hirschelmann // Wiss. Beitr. M.- Luter—univ. Halle-Wittenburg. -1987.-№100.-P.82-94.

134. Hurley, J.V. Acute inflammation / J.V. Hurley // 2-nd ed. Edinburgh etc.: ChurchilMivingstone, 1983. - 157p.

135. Implantation of PHEMA keratoprotheses after alkali burns in rabbit eyes / C.R. Hicks, S. Vijayasekaran, T.V. Chirila et al. // Cornea. 1998. -Vol.17. - №3. - P.301-308.

136. Influence of different chemical crosslinking treatments on the properties os bovine pericardium and collagen / E. Jorde- Herrero, P. Fernandez, J. Turnay et al. // Biomaterials. 1999. - Vol.20. - №6. - P.539-545.

137. Inone, M. The effect of hyaluronic acid on-corneal cell proliferation / M. Inone, C. Katakami // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1993. - Vol.50. -№7. -P.2313-2315.

138. Ishisaka, T. Relese of histamine and arachidonate from mast cells induced^ by glycosilati on enchancing factor and bradikinin / T. Ishisaka, M. Iwata; K. Ishisaka // J. Immunol. 1985. - Vol.134. - №3. - P. 18801887.

139. Jose, P.J. Complementderived peptide mediators of inflammation / P.J. Jose // Brit. Med. Bull. 1987. - Vol.43. - №2. - P.336-349.

140. Korecky, Е.А. Antimetabolite interaction with epidermal growth factor / E.A. Korecky, D.S. Rootman // Ciirr. Eye Res. 1996. - Vol. 15(3) - №7. -P.247-253.

141. Krompecher, J. Uber die Regulationsmoglichkeit der Differenzierung von stitzgeweber / J. Krompecher // Zb. Lek. Fak. Kosice. 1976. -Vol.19.-№34.-P.19-26.

142. Langer, B. Free radicals, ischemia and inflammation / B. Langer // Rev. Raul. Med. 1986. - Vol.104. - №6. - P.305-310.

143. Levine, J.D. The peripheral nervous system and the inflammatory process / J.D. Levine, T.J. Coderre, A.I. Basbaum // Proc. 5-th. World. Pain. Hamburg, 1987. Amsterdam etc. - 1988. - P.33-34.

144. Levis, R.A. How are prostaglandins and leukotriens involed' in immunological alterations? / R.A. Levis // J. Trauma. 1984. - Vol.24. -№9. - P.125-128.

145. Malmsten, C.L. Prostaglandins, thronboxanes ans, leucotrienes in inflammation / C.L. Malmsten // Am. J. Med. 1986. - Vol.80. - №48. -P.ll-17.

146. Millonig, G. The advantages of phosphate buffer for 0s04 solutions in fixation / G. Millonig // J.appl.Physics. 1961. - Vol.32. - №6. - P.1637-1638.

147. Movat, H.Z. Inflammatory reactions / H.Z. Movat. Amsterdam. Elsevier. - 1985t-P.l 19-148.

148. Movat, H.Z. The role of histamine and other mediators in microvascular , changes in acute inflammation / H.Z. Movat // Can. J. Physiol.

149. Pharmacol. 1987. - Vol.65. - №3. - P.451-457:

150. Neuropeptides et inflammation: mechamismes presumes de L'inflammation neurogene / Y. Landry, J.G. Bloch, M. Mousli et al. // Pathol. Boil. 1990. - Vol.38. - №1. - P.53-56.

151. Nitrous acid pretreatment of tendon xenografts cross-linked with glutaraldehyde and sterilized with gamma irradiation / K.A. Johnson, G.J. Rogers, S.C.Roe et al. // Biomaterials. 1999. - Vol.20. - №11. -P.1003-1015.

152. Oven, D.A. Inflammation-histamine and 5-hydroxytryphtamine / D.A. Oven // Br. Med. Bull. 1987. - Vol.43. - №5. - P.256-269.

153. Pathobiology of the endothelial cell / H. Nossel, H. Vogel., J. Nilsone et al. // New York: Acad. Press, 1982. 496p.

154. Perianin, A. Substance P primes human neutrophil activation; a mechanism for neutrological regulation of inflammation / A. Perianin, R. Shidermann, B. Malfroy // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. -Vol.161.-№2.-P.520-524.

155. Qin, P. The role of laminin- 5 in TGF alpha / EGF mediated corneal epithelial cell motility / P. Qin, M.A. Kurpakus // Source Experimental Eye Research. 1998. - Vol.66. - №5. - P.569-579.

156. Reynolds, E.S. The use of lead citrate at high pH as an electronopaque stain in electron microscopy / E.S. Reynolds // J.Cell.Biol. 1963. -Vol.17. - №4. -P.203-213.

157. Robinson, D.R. Lipid mediators of inflammation / D.R.Robinson // •Rheum. Dis. Clin. North. Am. 1987. - Vol.13. - №2. - P.385-405.

158. Role of endogenous histamine in postanaphi lactic phase of alleegie inflammation in rats / N. Hirasawa, K. Ohuchi, M. Watanabe, S. Tsurufuji // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1987. - Vol.241. - №3. - P.967-973.

159. Sato, Т. A simple rapid polychrome stain for epoxy-embedded tissue / T. Sato, H. Shamoto // Stain.Technol. 1973. - Vol.48. - №8. -P.223.

160. Schmidt, T. Tarsusplastik mit hondroplast / T. Schmidt, K.P. Leipert, C. Fellboum // Fortschr Ophthalmol. 1991. - Vol.88. - №5. - P.279-282.

161. Seiffert, K.E. Biologische grundlagen der homologen transplantation konservieter bindegewebe / K.E. Seiffert // Springer- Verlag, Berlin et al., 1967. -P.2-3, 58-118.

162. Seiffert, K.E. Biological aspects of collagenous homografts / K.E. Seiffert // Acta otorhinolaryngol. Belg. - 1970. - Vol.24. - №1. -P.27-33.

163. Several mediators appear to interact in neurogenic inflammation / R. Gamse, M. Posch, A. Saria, G. Jancso // Acta Physiol, Hung. 1987. -Vol.69. - №3-4. - P.343-354.

164. Schein, O.D. The use of processed pericardial tissue in anterior ocular segment reconstruction / O.D. Schein // Am. J. Ophthalmol. — 1998. -№125(4).-P.549-552.

165. Shimazaki, J. Amniotic membrane transplantation for ocular in patients with chemical and thermal burns / J. Shimazaki, H.Y. Yang, K. Tsubota // Opthalmol. 1997. - Vol.104. - №12. - P.2068-2076.

166. Sibayan, S.A. The use of processed pericardium in the repair of corneoscleral fistulas / S.A. Sibayan, M.A. Latina // Ophthalmic. Surg. Lasers. -1997. №28(4). -P.334-335.

167. Usuki, Y. The effect of epidermal growth factor on corneal penetrating incision / Y. Usuki, C. Katakami, M. Yamomoto // Nippon. Ganca Gakkai Zasshi. 1995. - Vol.99(ll). - №4. - P.1209-1213.

168. Van Wachem, P.B. Absence of muscle regeneration after implantation of a collagen matrix seeded with myoblasts / P.B. Van Wachem, L.A. Brouwer, M.J. Van Luyn // Biomaterials. 1999. - Vol.20. - №5. -P.419-426.

169. Vrabec, M.P. Subconjunctival fibrosis after conjunctival autograft / M.P. Vrabec, R.W. Weisenthal, S.H. Elsing. Cornea. - 1993. - Vol.12. -№6. - P.181-183.

170. Ward, P.A. Oxygen radicals, inflammation and tissue injury / P.A. Ward, J.S. Warren, K.J. Jonson // Free Redio. Biol, and Med. 1988. - Vol.5. -№5-6.-P.403-408.

171. Weissgold, DJ. Rescue of exposed scleral buckles with cadaveric pericardial patch grafts / D.J. Weissgold, R.H. Millay, T.A. Bochow // Ophthalmology. 2001. - №108(4). - P.753-758.

172. Weissmann, G. Mediators of inflammation / G. Weissmann // N.J., London Plenum Press, 1974. 205p.

173. Williams, K.I. Eicosanoids arid inflammation / K.I. Williams, G.A. Higgis // J. Pathol. 1988. - Vol.156. - №2. - P.101-110.