Экспериментально-морфологическое обоснование консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии для выполнения сквозных и послойных кератопластик

Казённов, Алексей Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспериментально-морфологическое обоснование консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии для выполнения сквозных и послойных кератопластик
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Экспериментально-морфологическое обоснование консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии для выполнения сквозных и послойных кератопластик"

00349250 1

На правах рукописи

КАЗЕННОВ Алексей Николаевич

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ КОНСЕРВАЦИИ ТРУПНЫХ ДОНОРСКИХ РОГОВИЦ В УСЛОВИЯХ ВАКУУМА ПРИ ГИПОТЕРМИИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ СКВОЗНЫХ и ПОСЛОЙНЫХ КЕРАТОПЛАСТИК

03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология 14.01.07 Глазные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 5 ФЕ5 2010

Оренбург-2010

003492501

Работа выполнена в Оренбургском филиале Федерального государственного учреждения «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н.Федорова Росмедтехнологии» и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук,

профессор Стадников Александр Абрамович

Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор Канюков Владимир Николаевич доктор медицинских наук, профессор Сазонов Сергей Владимирович доктор медицинских наук Малов Игорь Владимирович Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «¿3» марта 2010 года в часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан « /3» февраля 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Шевлюк Н.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Более 100 лет прошло со дня первой успешной сквозной пересадки роговицы, выполненной Э. Цирмом, однако и в настоящее время наибольшее распространение в области трансплантологии остается за кератопластикой (Плескова A.B., Хватова A.B., 2002). Высокая потребность в кератопластике приводит во всем мире к возрастанию потребности в пластическом материале и в совершенствовании методов его консервации (Каспаров A.A., Магден Ю., 2001; Heck Е., Krachmer J.H., Mannis M.J. Holland E.J., 2005). В связи с возросшим риском опасных инфекций и повышенных требований к качеству трансплантационного материала необходимо полноценное его обследование, требующее дополнительных затрат времени, что, в свою очередь, вызывает необходимость кратковременной консервации с гарантией сохранения жизнеспособности трансплантата (Сурков A.A., 2003).

Как только в трансплантационной хирургии возросли требования к пересаживаемому материалу, возникла необходимость в создании и развитии службы заготовки и консервации донорских тканей. Огромный вклад в создание сегодняшних глазных банков во всем мире внес академик В.П. Филатов. Он создал и возглавил первую специализированную лабораторию консервации тканей при Одесском научно-исследовательском Институте глазных болезней. Им в 1934 году было предложено донорское глазное яблоко хранить в стеклянном сосуде при температуре +2-+4°С.

Существует множество методов консервации роговицы, однако не все они нашли широкое распространение. Один из методов, который продолжают использовать и в настоящее время, заключается в обезвоживании роговичных трансплантатов над силикагелем (Волков В.В., Шиляев В.Г., 1976; Гольфельд Н.Г., 1976). Метод прост и позволяет длительно сохранять трансплантационный материал, однако консервированная роговица лишена жизнеспособности.

Предлагались использовать в качестве консервантов различные жидкие среды. Офтальмологам Мак Кери и Кауфман (1974) удалось создать среду, названную в их честь, которая позволила надежно консервировать роговицу на срок до 96 часов. В последующем появились ее производные с более длительным сроком хранения: Chondroitin Sulphate (Kaufman Н.Е., 1984), К-sol (Lindstrom R.L., 1990), Dexol (Lindstrom R.L, 1990), Optisol (Williams K.A., Coster D.J., 1993), среда Борзенка-Мороз (Борзенок C.A., Мороз З.И., Комах Ю.А. и др., 2002).

Технические достижения к настоящему времени позволили предложить такие методы консервации роговицы как криоконсервация (-196°С) в жидком азоте с использованием различных крио-протекторов (Дронов М.М., 1987; Williams К.А., Muehlberg S.M., Lewis R.F., CosterD.J., 1995), гипербарическая оксигенация при гипотермии (Линник Л.Ф., Подопригора Р.Н., 1976), в вакууме (Канюков В.Н., Подопригора Р.Н., 2006), в том числе контейнеры с наноструктурированным углерод содержащим покрытием (Мусина А.Д., 2006).

До настоящего времени не существует единого мнения относительно наилучшего способа сохранения роговицы человека. Значительное количество существующих методик консервации роговицы свидетельствует об отсутствии совершенных технологий. Следует также отметить недостаточные морфологические обоснования предложенных методик в аспекте изучения диапазона изменчивости ткане- и органоспецифичности консервируемых объектов. Все это стимулирует дальнейший поиск в этом направлении.

Учитывая положительные результаты консервации донорской роговицы путем лиофилизации с последующим прозрачным приживлением послойных трансплантатов (Бордюгова Г.Г., 1980; Илатовская Л.В., 1980), мы сочли целесообразным провести исследования по разработке метода консервации роговицы в вакууме при гипотермии.

Цель исследования: морфофункциональное обоснование возможности использования трупных донорских роговиц, консервируемых в условиях вакуума при гипотермии, для выполнения сквозных и послойных кератопластик.

Задачи:

1. Изучить на светооптическом и ультраструктурном уровнях морфофункциональную характеристику трупных донорских роговиц, консервируемых в условиях вакуума при гипотермии.

2. Определить оптимальные сроки вакуумной консервации донорских роговиц.

3. Провести экспериментально-гистологические исследования биологических свойств трансплантатов (диапазона их гисто- и органотипической реорганизации) в условии культивирования донорского материала по методу Ф.М. Лазаренко.

4. Обосновать возможность применения предложенного способа консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии в клинике для выполнения сквозных и послойных кератопластик.

Научная новизна

Впервые экспериментально-гистологически, включая

ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ, выявлены структурно-функциональные изменения роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии, определен уровень апоптоза в материале, предназначенном для трансплантации в аспекте прогнозирования исходов операций по трансплантации донорских роговиц, консервированных различными способами.

Впервые изучены имплантаты консервированной роговицы (в вакууме при гипотермии) для получения результатов цитофизиологической характеристики пересаживаемых структур, их потенциальных репаративных и индуцирующих возможностей, в условиях культивирования по методу Ф.М. Лазаренко (1959).

Практическая значимость

Разработан альтернативный способ консервации роговицы в условиях вакуума при гипотермии. Исходя из полученных данных о высоких пластических свойствах консервированной роговицы, предлагается использовать для этих целей вакуумную установку, которая эргономична, легка в обращении, экономически выгодна. Возможность хранения роговицы с сохранением ее биопластических свойств позволяет иметь достаточные запасы качественного донорского материала.

Использование для трансплантации качественного донорского материала обеспечивает благополучный исход операции, уменьшает риск послеоперационных осложнений, гарантирует успешное приживление трансплантата.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Структурно-функциональная оценка донорской роговицы, консервированной в вакууме (3-10 сутки) показывает сохранность фенотипических свойств трансплантата, коллагеновых фибрилл, что свидетельствует об устойчивости (толерантности) соединительнотканных структур роговицы к данным условиям консервации.

2. При консервации роговицы наблюдаются явления угнетенного синтеза генов белков (Ьс1-2, р53) и изменения в соотношении их экспрессии, что свидетельствует о нарушениях клеточных циклов, как эпителиоцитов, так и фибробластов.

3. Культивирование фрагментов роговицы, консервированной в вакууме, по методу Ф.М. Лазаренко (1959) показало морфологические признаки, характеризующие механические, прочностные ее характеристики, активизацию клеток фибробластического ряда, что свидетельствует о возможности ремоделирования, которое будет инициировать процессы репаративного гистогенеза соединительной ткани.

4. В своей совокупности полученные результаты обосновывают целесообразность использования роговицы, консервированной в вакууме для послойной кератопластики.

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО «ОрГМА», кафедре медико-биологической техники ГОУ ВПО «ОГУ».

Полученные данные структурно-функциональной характеристики донорской роговицы, консервированной в вакууме, служат теоретическим обоснованием использования данной роговицы для послойной кератопластики в условиях офтальмохирургических отделений и клиник города.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии микрохирургии глаза (актуальные вопросы морфогенеза и регенерации в офтальмохирургии) (Оренбург, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии» (Чебоксары, 2007); VII Западно - Сибирская межрегиональная научно -практическая конференция «Новое в офтальмологии» (Новосибирск, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Высокие технологии в офтальмологии» (Краснодар, 2008); III Всероссийской научной конференции молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Современные технологии лечения заболеваний переднего и заднего сегментов глаза» (Уфа, 2008); Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); Российской научно-практической конференции «Новые технологии микрохирургии глаза (офтальмопатология детского возраста)» (Оренбург, 2008); IV Межрегиональной научно-практической конференции «Метрология и инженерное дело в медико-биологической практике» (Оренбург, 2009); VIII 6

Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Федоровские чиения - 2009» (Москва, 2009), Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы офтальмологии» (Уфа, 2009), Российский общенациональный офтальмологический форум МНИИ ГБ им. Гельмгольца (Москва, 2009), VI съезд анатомов, гистологов и эмбриологов России (Саратов, 2009), Всероссийская научная конференция с международным участием «Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия в XXI веке» (Оренбург, 2009).

По теме диссертации опубликовано 17 научных работ из них 4 в центральной печати рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 30 рисунками, 2 таблицами. Список литературы содержит 220 источников, в том числе 101 иностранных. Диссертация изложена на русском языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы

Общая характеристика объекта исследований

Экспериментальная часть работы состояла из 3-х блоков исследований.

В первом блоке проводилась консервация роговицы свиньи в условиях вакуума при гипотермии (44 роговиц) и в среде Борзенка-Мороз (12 роговиц) в течении 3, 7, 10 и 30 суток.

Во втором блоке проводилось изучение имплантатов роговицы, консервированных в вакууме при гипотермии (24 имплантата) и в среде Борзенка-Мороз (12 имплантатов), в условиях культивирования материала по оригинальной методике Ф.М. Лазаренко (1959). Исследование выполнено на кроликах породы БсЫпБсЬШа.

В третьем блоке проводилась экспериментальная послойная пересадка аллороговицы, консервированной в условиях вакуума при гипотермии (12), на кроликах породы ЗсЫпБсЬШа.

Эксперименты проводили с соблюдением Приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР за №742 от 13.11.1984 Об утверждении Правил проведения работ с использованием

экспериментальных животных и Федеральным законом РФ «О защите животных от жестокого обращения» от 01.12.1999.

Во всех блоках исследования изучение материала проводилось на световом и электронномикроскопическом уровнях.

Консервация роговицы

Основная часть работы по консервации роговицы выполнена на системе, представляющей собой контейнер для хранения материала и вакуумный насос для откачивания воздуха.

Данная система изготовлена фирмой Zepter в Menfi Industria, SpA, Италия, сертификат соответствия № РОСС IT. ME 10.А 07863. Контейнер представляет собой стеклянную ёмкость. Он снабжен специальной сеткой, изготовленной из эластомера. Сетка выполняет не только функцию подставки для размещения ёмкостей с донорскими тканями, но и служит для конденсации влаги из тканей. Максимальное разряжение, которое можно получить при использовании данной системы - 0,5 бар (-0,5 атм.), производительность 630 л/ч. Герметичность ёмкости-контейнера обеспечивается клапаном в центре крышки и силиконовой прокладкой, проходящей по её краю. Крышка универсальна, изготовлена из ударопрочного нетоксичного поликарбоната LEXAN.

Ёмкость практична, безопасна, удобна в обращении, легка, устойчива к нагреванию и холоду, легко моется. Её можно стерилизовать, она интактна к агрессивными химическими веществами.

Для исследования в условиях мясокомбината были взяты свежеэнуклеировнные глаза свиней (56 глаз). Целое глазное яблоко обрабатывалось четырехкратным промыванием в стерильном 0,9% растворе NaCI, затем погружалось в раствор йода поливинилпиролидона, после чего глазное яблоко обрабатывалось 2% тиосульфатом натрия (для нейтрализации) и вновь помещалось в раствор 0,9% NaCI (А.Д. Мусина, 2006). Из глазного яблока иссекали корнеосклеральный диск и помещали на специальной подставке в емкость для хранения материала, где обеспечивался необходимый вакуум (44 объекта).

В контрольном методе, после соответствующей обработки, из целого глазного яблока иссекали корнеосклеральный диск и помещали в емкость со средой Борзенка-Мороз (12 объектов).

Исследуемый материал хранили 3, 7, 10 и 30 суток.

Культивирование по Ф.М. Лазаренко

Для фрагмента работы по культивированию использовалась роговица на стадии консервации 7 суток. Консервированная роговица переносилась в подготовленную чашку Петри с физиологическим раствором. Затем роговица многократно разрезалась и измельчалась изогнутыми глазными ножницами (до размеров около 0,5мм). Полученная 8

липкая кашица слегка промывалась в физрастворе и смешивалась с заранее приготовленным измельченным целлоидином (в соотношении 1:3). У животного-реципиента (половозрелые кролики самцы массой 3,5-4,Окг) на брюшной стенке параллельно белой линии производился разрез кожи в 22,5см. Формировались карманы между фасцией и мышцами брюшной стенки глубиной 2-Зсм. В сформированные карманы производилась имплантация кусочков роговицы с целлоидиновым песочком. У каждого животного было сформировано по 4 имплантата. Имплантаты экстирпировали на 3, 6, 10 и 15 сутки.

Было исследовано 24 имплантата роговицы консервированной в вакууме при гипотермии и 12 имплантатов роговицы консервированной в среде Борзенка-Мороз.

Послойная кератопластика

С целью определения трансплантабельности аплогенных донорских роговиц, консервированных в вакууме при гипотермии, нами были проведены экспериментально-клинические исследования биологического результата приживления послойных трансплантатов аллогенных роговиц у кроликов породы ЗсЫпзсЬШа.

Из свежеэнуклеированных глаз кроликов после соответствующей обработки иссекался корнеосклеральный лоскут и хранился в условиях вакуума при гипотермии. Сроки консервации донорских роговиц составляли 4 и 7 суток.

У кроликов реципиентов при помощи трепана диаметром 8,0мм формировался дефект роговицы на Уг стромы. Из донорской роговицы формировался подобный трансплантат и сажался на место сформированного дефекта, и фиксировался узловыми швами. В послеоперационном периоде ежедневно 4 раза в день в конъюнктивальную полость инсталлировали раствор тобрадекса.

Было выполнено 12 послойных кератопластик с роговицей, консервированной в вакууме при гипотермии, на 12 кроликах. Пересаженные роговицы были подвергнуты структурно-функциональному исследованию на 10 и 30 сутки со дня пересадки. Объектом морфологических исследований служили комплексы: трансплантат роговицы + ложе реципиента.

Светооптическое исследование

Эксцизивные фрагменты участков роговицы фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина. После стандартной гистологической проводки материал заливали в парафин-целлоидин. Приготовление серийных срезов толщиной 5-6 мкм осуществляли на ротационном микротоме. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином

Майера и эозином с последующим анализом и микрофотографированием при помощи цифровой фотокамеры Canon IXUS 800 IS.

Электронно-микроскопическое исследование

Материал фиксировали в охлажденном (t°+4°C) 2,5% растворе глютарового альдегида на S-коллединовом буфере (рН=7,3). Постфиксацию проводили в 1% растворе четырехокиси осмия по Millonig (1961). В дальнейшем кусочки обезвоживали при комнатной температуре в серии спиртов возрастающей крепости (50°-100°) и абсолютном этаноле, после чего заключили в смолу ЭПОН-812 (Уикли, 1975). Полимеризацию объектов проводили при t°+60°C (в течение 3-х суток). С каждого блока на ультратоме УМТП-4 получали полутонкие срезы (1 мкм), которые окрашивали метиленовым синим и основным фуксином по прописи Sato et Shamoto (1973). Полутонкие срезы использовали при подготовке блоков к прицельной заточке, необходимой для изготовления ультратонких срезов (40-60 нм) на ультратоме LKB-5 (Sweden-Bromma).

Ультратонкие срезы подвергали двойному контрастированию в насыщенном растворе уранилацетата при t°+37°C в течение 30 минут и цитрате свинца по Reynolds (1963). Изучение ультратонких срезов и их фотографирование производили на электронном микроскопе ЭМВ I00AK при увеличении от*8 000 до *40 000.

Иммуноцитохимическое исследование

С целью проведения иммуноцитохимического исследования материал (нативная роговица, роговица, консервированная в вакууме и в среде Борзенка-Мороз) фиксировали в 12% растворе нейтрального формалина и заливали в парафин. В дальнейшем на парафиновых гистосрезах проводили двухэтапные реакции по идентификации белка-маркеров апоптоза - р53 и антиапоптического белка bcl-2.

На первом этапе депарафинированные срезы подвергали высокотемпературной обработке и инкубации с первыми (специфическими) моноклональными антителами (фирма «Дако», Дания) в рабочем разведении 1:50. Для визуализации позитивного (р53) иммунного окрашивания клеток применяли стрептавидин-биотиновый пероксидазный метод с последующим докрашиванием ядер гематоксилином Майера.

Параллельно для определения внутриядерной фрагментации ДНК использовали набор реактивов «Apoptag Plus Peroxidaze in Situ Apoptosis Detection Kit» (фирма «Intergin», Канада) с докрашиванием ядер клеток 0,5% раствором метиленового зеленого на 0,1 М ацетатном буфере.

На втором этапе осуществляли инкубацию гистосрезов с моноклональными антителами bcl-2 и авидин-биотин-пероксидазным комплексом с последующим выявлением пероксидазы диамин-бензидином. Подготовленные таким образом гистологические срезы докрашивали 10

квасцовым гематоксилином и заключали в канадский бальзам. Подсчет р53 и bcl-2 позитивных клеток производили методом их визуализации в каждом гистологическом срезе (при стандартном увеличении х900, не менее 200 клеток) в соответствии с рекомендациями A.A. Жданкиной (2006).

Полученные результаты исследования статистически анализировали по t-критериям Стьюдента, используя коммерческую программу Microsoft Excel 5.0а.

Результаты исследований и их обсуждение

Исходя из цели и задач работы, мы провели, прежде всего, изучение гистологической структуры интактной роговицы и роговицы животного, полученных при различных видах консервации. При этом мы делали акцент на установление светооптических и ультраструктурных критериев оценки реактивных и пластических свойств роговицы, исходя из запросов офтальмохирургической практики. С другой стороны, мы не нашли в доступной литературе сведений о структуре роговицы свиньи, что делает полученные нами результаты значимыми для фенотипической (видовой) характеристики данной органотипической структуры, особенно для тех исследователей, которые занимаются экспериментально-гистологическим изучением реактивных и пластических свойств роговицы.

Светооптическая и ультраструктурная характеристика донорских роговиц, консервированных в условиях вакуума

Проведенные исследования показали, что характер гистологической организации роговицы свиньи оказался очень близким к таковой, свойственной человеку. На светооптическом уровне установлено, что донорская роговица свиньи состоит из следующих слоев: передний эпителий (многослойный плоский неороговевающий) (состоит из 4-6 слоев эпителтоцитов - 0,02 мм, а у человека 0,03 мм), передняя базальная мембрана Боумена (гомогенное построение из коллагеновых микрофибрил 0,01 мм), собственное вещество (substantia propria corneae), задняя базальная мембрана Десцимета и задний эпителий (эндотелий).

Собственное вещество роговицы, как правило, состоит из уплотненных плотно упакованных соединительнотканных пластинок, ориентированных параллельно ее поверхности. Каждая пластинка включает в себя совокупность пучков коллагеновых волокон, сцементированных аморфным матриксом. Отдельные пучки скрепляются между собой косо расположенными аналогичными пластинками. Клеточные элементы представлены главным образом фиброцитами и фибробластами.

Помимо этого при светооптическом изучении роговиц донора, приготовленных в условиях консервации в вакууме либо в среде Борзенка-Мороз, было установлено следующее.

Оба способа консервации в основном не приводили к существенным изменениям тканевых и клеточных элементов роговицы с точки зрения их повреждения. Вместе с тем, мы отметили локальное расслоение и частичное разрушение эпителиоцитов переднего эпителия (при консервации в вакууме) при хорошей сохранности собственного вещества роговицы, что подтверждено и электронномикроскопическими данными.

При консервации в среде Борзенка-Мороз многослойный плоский эпителий не повреждается. Однако в межклеточном веществе нами были обнаружены овальные щели, залегающие между пластинками. Подобные структуры описываются в научной литературе как «соковые каналы».

Поскольку данных образований не было отмечено нами у донорского материала до консервации, следует предположить, что их появление в условиях наших исследований отражает возможность рекапитуляции структурной организации роговицы у млекопитающих, при ее использовании в экспериментальных условиях после консервации.

Идентификацию апоптоза в донорской роговице мы проводили по оценке экспрессии синтеза про- и антиапоптотических белков р 53 и bel 2 (табл. 1).

Наши исследования показали, что у эпителиальных и клеток фибробластического ряда роговицы (до консервации) имеет место проапоптотическая доминанта (в большей степени у клеток многослойного плоского ороговевающего эпителия). При этом соотношение между экспрессией синтеза антиапоптотического белка bcl-2 к синтезу р53 было 2,1±0,01, а у фибробластов - 2,6±0,02. Эти данные свидетельствуют о гомеостатической регуляции нормального объема клеточной массы.

При консервации роговицы наблюдаются явления угнетенного синтеза обоих белков и изменения в соотношении экспрессии Ьс1-2/р53, которые утрачивают гомеостатический характер. Это свидетельствовало о нарушениях клеточных циклов, как эпителиоцитов, так и фибробластов. Однако меньшая степень и выраженность подобных нарушений отмечена у эпителиальных клеток (консервация объектов в среде Борзенка-Мороз), и у клеток фибробластического ряда (при консервации в вакууме).

Можно предположить, что совокупность факторов консервации нельзя рассматривать с позиций либо ингибиторов, либо индукторов апоптоза. Тем не менее, полученные факты свидетельствуют о дифференцированной ответной реакции различных клеток роговицы (переднего эпителия или фибробластов). Во всяком случае, следует думать о тканеспецифичности синтеза р53 и bcl-2 в этих клетках, с одной стороны, и большей 12

резистентности к условиям консервации у эпителиоцитов (среда Борзенка-Мороз) и фибробластов (вакуум) с другой (вероятность ошибки в данном исследовании: р<0,05).

Табл.1

Уровень апоптоза по экспрессии про- и антиапоптотических генов белков р 53, bel 2 (%)

Сроки консервации роговицы Эпителий Фибробласты

р53 bel-2 р53 bel-2

Роговица до консервации 11,1%±1,6 23,4%±4,1 6,8%±0,9 17,6%±1,7

Роговица, консервированная в вакууме (3 сут) 0,3%±0,01 1,7%±0,03 0,7%±0,01 2,6%±0,07

Роговица, консервированная в вакууме (10 сут) 0,0 0,0 0,6%±0,01 1,8%±0,06

Роговица, консервированная в среде Борзенка-Мороз (3 сут.) 0,9%±0,02 0,3%±0,01 1,1%±0,01 0,8%±0,03

Роговица, консервированная в среде Борзенка-Мороз (10 сут.) 0,4%±0,01 0,0 0,2%±0,01 0,0

Следует отметить то обстоятельство, что в доступной нам литературе не имеется сведений о влиянии консервации на апоптоз в роговице. Однако важно отметить, что в своей совокупности полученные результаты могут явиться методологической основой для прогнозирования исходов операций по трансплантации донорских роговиц, консервированных различными способами.

Экспериментально-гистологические исследования

биологических свойств роговичных трансплантатов в условиях культивирования in vivo по методу Ф. М. Лазаренко

В целях определения диапазона реактивности и пластичности тканевых и клеточных элементов донорских роговиц, реализуемых в условиях асептического воспаления мы использовали оригинальную методику имплантации органов и тканей (культивирование in vivo) по Ф.М. Лазаренко (1959). Данный способ широко используется оренбургскими гистологами. Также он был успешно применен в офтальмологической практике (применительно к роговице) с целью определения жизнеспособности роговицы консервированной в условиях гипербарической оксигенации (Р.Н. Подопригора, 1985). Однако нами впервые было проведено (с использованием данной методики) глубокое изучение гистоструктуры трансплантатов, их клеточный и межклеточный состав, цитофизиологические характеристики пересаживаемых структур, их потенциальные репаративные и индуцирующие возможности.

В 1-е - 3-е сутки после начала опыта (имплантации) фрагментов донорской роговицы, в тканях реципиента (область под апоневрозом мышц живота кролика) возникает воспалительная реакция.

У реципиента наблюдалась вазодилятация сосудов микроциркуляторного русла, экссудация плазмы крови и миграция лейкоцитов. Отечная жидкость не только окружает имплантаты по поверхности, но и проникает внутрь их, расслаивая целлоидиновые кусочки и измельченные фрагменты роговицы друг от друга. Следует отметить, что, по мнению автора данного экспериментально-гистологического метода, экссудативная жидкость несет в себе определенные факторы, предопределяющие дальнейший ход регрессивных и прогрессивных процессов (Ф.М. Лазаренко, 1959).

К 3 суткам эксперимента по поверхности имплантированного материала, а также по межцеллоидиновым промежуткам, образуется малодифференцированная соединительная ткань, содержащая гемокапилляры, фибробласты, пролиферирующие периваскулярные клетки.

К 5 суткам опыта одновременно с формированием соединительнотканной капсулы имплантатов происходит активное врастание кровеносных капилляров в межцеллоидиновые перегородки.

Таким образом, в организме реципиента создается своеобразная биологическая камера, в которой тканевые элементы донорской роговицы претерпевают ряд последовательных структурных изменений.

В условиях культивирования in vivo фрагментов донорских роговиц, консервированных указанными способами, мы получили сведения, 14

свидетельствующие об иммунологической толерантности организма реципиента к имплантированным объектам (в наблюдаемые нами сроки опытов). Исходя из того факта, что одним из методов коррекции процесса репаративной регенерации является предотвращение или уменьшение реакции биологической тканевой несовместимости на донорские ткани (Хрущев Н.Г., 1982), подобные условия достигаются путем консервации, которая направлена на снижение процессов аутолиза, а также сохраняет структурные и пластические качества консервированного материала.

Электронномикроскопические данные свидетельствуют о дезорганизации стромальных компонентов роговицы, что подтверждается результатами гистохимических исследований (понижение содержания гликозаминогликанов и возрастание нейтральных фракций гликопротеидов).

Анализ гистологических препаратов показал, что при культивировании роговицы, консервированной в среде Борзенка-Мороз на стадии 6-10 суток, происходят деструктивные изменения с передним эпителием, нарастают явления отека и дискомплексации фибриллярных структур собственног вещества роговицы. При этом обнаруживаются полиморфноклеточные локальные инфильтраты в периваскулярных зонах.

В более поздние сроки культивирования (15 суток) на месте данных полиморфноклеточных инфильтратов формируются кистозные полости, расслаивающие соединительнотканные пластинки собственного вещества роговицы, что существенно нарушает прочностные качества материала.

Описанные изменения, имплантированной роговицы можно объяснить активной ее васкуляризацией с последующим развитием периваскулярных воспалительных процессов.

Культивирование фрагментов роговицы, консервированной в вакууме, не показало подобных процессов ее структурной реорганизации. При этом особо важным следует подчеркнуть морфологические признаки, характеризующие механические, ее прочностные характеристики.

С другой стороны следует отметить (особенно 6-10 сутки культивирования) активизацию клеток фибробластического ряда, последнее обстоятельство мы можем расценивать как факт, свидетельствующий о возможности ремоделирования (роговица, консервированная в условиях вакуума), которое возможно будет инициировать процессы репаративного гистогенеза соединительной ткани.

Данное обстоятельство, как известно, указывает на то, что достижение эффективности корригирующего влияния пересаживаемых тканей связано не только с механическим, но и с биостимулирующим воздействием трансплантата на ткани реципиента. При этом особо важное значение имеют гистогенетические особенности совмещаемых тканей (Коваленко П.П., 1976; Клишов A.A., 1984).

Экспериментальное обоснование возможности применения донорских роговиц, консервированных в вакууме при гипотермии, в офтальмохирургической практике

С целью определения трансплантабельности аллогенных донорских роговиц, консервированных в вакууме при гипотермии, нами были проведены экспериментальные исследования биологического результата приживления послойных трансплантатов консервированных аллогенных роговиц у кроликов.

Сроки консервации донорских роговиц составил 4 и 7 суток, а период наблюдения ограничивался 10 и 30 сутками.

Нами провелся анализ послеоперационного течения и результатов биологического приживления послойных трансплантатов 12 роговиц на 12 кроликах.

В послеоперационном периоде отмечалось благоприятное течение. Отек стромы и эпителия разрешался на 2-3 сутки после операции, а воспалительные процессы сохранялись 3-4 дней. Основными видами приживления были прозрачное (8 случаев) и полупрозрачное (3 случая). Отторжение роговичного трансплантата на фоне воспалительного криза отмечалось у 1 кролика при использовании роговицы, консервированной в вакууме 4 суток (табл. 2).

Таблица 2

Результаты послойной кератопластики у кроликов

Вид донорских роговиц Результаты приживления трансплантатов Количество оперированных глаз Срок наблюдения (сутки)

Роговица, консервированная в вакууме 4 суток (п=6) Прозрачное 4 30

Полупрозрачное 1 30

Отторжение 1 10

Роговица, консервированная в вакууме 7 суток (п=6) Прозрачное 4 30

Полупрозрачное 2 30

Отторжение —

При последующем иссечении трансплантата роговицы и его ложа установлено следующее.

Отмечен ареактивный процесс приживления трансплантатов с сохранением их прозрачных свойств.

Осуществляя наблюдения за трансплантатами, мы показали хорошую фиксацию в собственном веществе роговицы реципиента с формированием соединительнотканной капсулы, содержащей функционально-активные фибробласты. Постепенно новообразованная соединительная ткань приобретала фиброархитектонику, свойственную роговичным пластинкам.

Интракорнеальной фиксации трансплантата способствовали процессы миграции фибробластических клеток "ложа" между пучками коллагеновых волокон донорского материала с последующим фибриллогенезом.

Ультраструктурное изучение трансплантата показало хорошую его сохранность без признаков деструкции и дискомплексации клеточных элементов, волокон, аморфного матрикса.

Характер описанных морфологических процессов не зависел от сроков консервации, что доказывало сохранение высоких пластических свойств донорских роговиц, консервированных при гипотермии в вакууме.

Как известно, при лиофилизации, заключающейся в обработке роговицы при температуре -70°С или -196°С с последующей возгонкой из нее в условиях вакуума кристаллов воды изо льда в пар, минуя жидкую фазу, получаем материал, обладающий высокими трансплантационными качествами (Бордюгова Г.Г., 1980; Илатовская JT.B., 1980). Однако, следует отметить, что предлагаемый нами метод консервации в вакууме при гипотермии менее трудоемкий, а также не несет в себе столь существенных финансовых затрат.

ВЫВОДЫ

1.Ha светооптическом и ультраструктурном уровнях доказана хорошая сохранность фибриллярных компонентов донорских роговиц, консервированных в вакууме при гипотермии (3-10 суток), при оптимальном сроке хранения 7 суток.

2. По критериям оценки апоптозной доминанты клеточных элементов роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии или в среде Борзенка-Мороз, прогнозируются биологические свойства эпителия и собственного вещества роговицы, которые могут быть реализованы в условиях трансплантации.

3. Метод культивирования тканей ¡n vivo (Ф.М. Лазаренко, 1959) является эффективным для изучения потенциальных репаративных и

индуцирующих возможностей донорских роговиц, консервируемых в вакууме при гипотермии.

4. В условиях экспериментальной послойной кератопластики получены положительные гистологические и клинические результаты при использовании донорских роговиц консервированных в вакууме при гипотермии.

5. Экспериментально-гистологические исследования по консервации роговицы в условиях вакуума при гипотермии обосновывают возможность применения данного метода для целей офтальмохирургии.

6. Экспериментально-гистологически обоснован альтернативный способ консервации роговицы в условиях низкого вакуума 0.5 атм. при гипотермии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предложенная вакуумная система VACSY для консервации донорской роговицы обеспечивает оптимальное хранение материала, позволяющая увеличение срока консервации, что доказывается экспериментально-гистологическим методом.

2. Рекомендуемая вакуумная система может быть использована для длительного хранения донорских тканей в условиях тканевых банков, а при необходимости для безопасной транспортировки донорского материала.

3.В своей совокупности данный способ консервации роговицы может быть использован для целей офтальмохирургической практики.

4. Данные структурно-функциональной характеристики роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии, необходимо использовать в лекционном процессе и практических занятиях по гистологии в ВУЗах.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Канюков В.Н., Стадников A.A., ТрубинаО.М., Подопригора Р.Н., Казенное А.Н. Гистоструктура роговицы, консервированной в вакууме // Новые технологии в офтальмологии. - Чебоксары. - 2007. - С. 207209.

2. Канюков В.Н., Стадников A.A., ТрубинаО.М., Подопригора Р.Н., Горбунов A.A., Ломухина Е.А., Казенное А.Н. Морфологические исследования применения различных видов аллотрансплантатов для целей офтальмохирургии // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2007. -№12 (78) - С. 114-118.

3. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казенное А.Н. Опыт работы Глазного банка в Оренбургском филиале ФГУ МНТК «МГ» им.акад.С.Н.Федорова Росздрава // Сибирский Консилиум. Медико-фармацевтический журнал. - 2007. - №3 (58) - С. 109-110.

4. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Светооптическое исследование роговицы, консервированной в условиях вакуума при гипотермии Сборник научных статей по материалам международной научно-практической конференции «Современные технологии лечения заболеваний переднего и заднего сегментов глаза». - Уфа, 2008. -С. 164.

5. Казеннов А.Н. «Изучение влияния вакуума на консервацию донорской роговицы» - Актуальные проблемы офтальмологии: III Всероссийская научная конференция молодых ученых - Москва, 2008. - С.30.

6. Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Новые технологии консервации донорских тканей Всероссийская научно-практическая конференция «Высокие технологии в офтальмологии» - Краснодар, 2008. - С. 232235.

7. Канюков В.Н., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н., Яковлева H.A. Экспериментально-гистологический метод в офтальмохирургии как критерий оценки жизнеспособности консервированных тканей роговицы // Морфология. - 2008. - Том 134. - №5. - С. 73.

8. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Экспериментально-гистологические аспекты исследования донорского материала консервированного в условиях вакуума // Вестник Оренбургского государственного университета -2008.-№12.-С. 66-68.

9. Канюков В.Н., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н., Канюков В.И. Технические условия для консервации роговицы IV Межрегиональная научно-практическая конференция - «Метрология и инженерное дело в медико-биологической практике». - Оренбург. 2009. - С. 20-22.

10. Канюков В.Н., Стадников A.A., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Технические характеристики альтернативного способа консервации донорской роговицы в условиях вакуума IV Межрегиональная научно-практическая конференция - «Метрология и инженерное дело в медико-биологической практике». - Оренбург. 2009. - С. 18-20.

11. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Сравнительный анализ результатов культивирования донорской роговицы, консервированной в отечественной среде Борзенка-Мороз и в условиях вакуума при гипотермии. Сборник

научных статей по материалам научно-практической конференции «Актуальные проблемы офтальмологии», посвященной 70-летию заслуженного деятеля науки РФ и РБ, академика АН РБ Азнабаева М.Т.. -Уфа.-2009. С. 269-271.

12. Стадников A.A., Канюков В.Н., Казенное А.Н., Трубина О.М., Подопригора Р.Н. Результаты культивирования по Ф.М. Лазаренко донорской роговицы, консервированной в вакууме - VIII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Федоровские чтения - 2009». - Москва. 2009. - С. 527.

13. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казенное А.Н. Влияние вакуума на биологические и механические свойства роговицы в условиях консервации // Бюллетень СО РАМН. -2009. 4 (138). С. 40-43.

14. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Культивирование по Ф.М. Лазаренко, как способ изучения биологических свойств консервированных роговичных трансплантатов Российский общенациональный офтальмологический форум МНИИ ГБ им. Гельмгольца. - Москва. - 2009. Том 2. - С. 304307.

15. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Горбунов A.A., Казеннов А.Н Структурно-функциональная реорганизация роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии // Морфология. - 2009. - Том 136. - №4. - С. 71.

16. Казеннов А.Н. Исследование морфо-функциональных изменений роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии // Морфологические ведомости. - 2009. - №3. - С 258-259.

17. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н., Казеннов А.Н. Исследование способов консервации роговицы на основе принципов экспериментальной гистологии // Вестник Оренбургского государственного университета - 2009. - №12. - С. 62-64.

Для заметок

Подписано в печать 02.02.2010 г. Усл. печ.л. 13. Тираж 100 экх 460844, г. Оренбург, ул. Советски, 19. Оренбурге ий государственный педагогический университет

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Казённов, Алексей Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 Современные представления о методах консервации роговицы для осуществления кератопластики (Обзор литературы).

1.1 Классификация методов трансплантации, основных методов консервации роговицы и оценки ее жизнеспособности.

1.2. Информативность различных методов оценки жизнеспособности роговицы.

1.3. Преимущества и недостатки основных методов консервации донорской роговицы.

ГЛАВА 2 Материал и методы исследования.

2.1 Общая характеристика объекта исследований.

2.2 Консервация роговицы.

2.3 Культивирование по Ф.М. Лазаренко.

2.4 Послойная кератопластика.

2.5 Светооптическое исследование.

2.6 Электронно-микроскопическое исследование.

2.7 Иммуноцитохимическое исследование.

ГЛАВА 3 Результаты собственных исследований.

3.1 Светооптическая и ультраструктурная характеристика донорских роговиц, консервированных в условиях вакуума.

3.2 Экспериментально-гистологические исследования биологических свойств роговичных трансплантатов в условиях культивирования in vivo по методу Ф. М. Лазаренко.

3.3 О возможности применения донорских роговиц, консервированных в условиях вакуума, для целей офтальмохирургии.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментально-морфологическое обоснование консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии для выполнения сквозных и послойных кератопластик"

Актуальность темы

Существует множество методов консервации роговицы, однако не все они нашли широкое распространение. Один из методов, который продолжают использовать и в настоящее время, заключается в обезвоживании роговичных трансплантатов над силикагелем (Волков В.В., Шиляев В.Г., 1976; Гольфельд Н.Г., 1976). Метод' прост и позволяет длительно сохранять трансплантационный материал, однако консервированная роговица лишена жизнеспособности.

Предлагались использовать в качестве консервантов различные жидкие среды. Офтальмологам Мак Кери и Кауфман (1974) удалось создать среду, названную в их честь, которая позволила надежно консервировать роговицу на срок до 96 часов. В последующем появились ее производные с более длительным сроком хранения: Chondroitin Sulphate (Kaufman Н.Е., 1984), К-sol (Lindstrom R.L., 1990), Dexol (Lindstrom R.L., 1990), Optisol (Williams K.A., Coster D.J., 1993), среда Борзенка-Мороз (Борзенок C.A., Мороз З.И., Комах Ю.А. и др., 2002).

Технические достижения к настоящему времени позволили предложить такие методы консервации роговицы, как криоконсервация (-196°С) в жидком азоте с использованием различных крио-протекторов (Дронов М.М., 1987; Williams К.А., Muehlberg S.M., Lewis R.F., CosterD.J., 1995), гипербарическая оксигенация при гипотермии (Линник Л.Ф., Подопригора Р.Н., 1976), в вакууме (Канюков В.Н.,ра Р.Н., 2006), в том числе контейнеры с наноструктурированным углерод содержащим покрытием (Мусина А.Д., 2006).

Учитывая положительные результаты консервации донорской роговицы путем лиофилизации с последующим прозрачным приживлением послойных трансплантатов (Бордюгова Г.Г., 1980; Илаговская Л.В., 1980), мы сочли целесообразным провести исследования по разработке метода консервации роговицы в вакууме при гипотермии.

Цель исследования - морфофункциональное обоснование возможности использования трупных донорских роговиц, консервируемых в условиях вакуума при гипотермии, для выполнения сквозных и послойных кератопластик.

Для реализации этой цели поставлены следующие задачи:

1. Изучить на светооптическом и ультра структур ном уровнях морфофункциональную характеристику трупных донорских роговиц, консервируемых в условиях вакуума при гипотермии.

2. Определить оптимальные сроки вакуумной консервации донорских роговиц.

Научная новизна исследования Впервые экспериментально-гистологически, включая ультраструктурный и иммуноцитохимический анализы, выявлены структурно-функциональные изменения роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии, определен уровень апоптоза в материале, предназначенном для трансплантации в аспекте прогнозирования исходов операций по трансплантации донорских роговиц, консервированных различными способами.

Впервые изучены имплантаты консервированной роговицы (в вакууме при гипотермии) для получения результатов цитофнзиологической характеристики пересаживаемых структур, их потенциальных репаративных и индуцирующих возможностей, в условиях культивирования по методу Ф.М. Лазаренко (1959).

Практическая значимость работы

Внедрение результатов исследования

Полученные данные морфофункциональной реорганизации роговой оболочки, консервированной в вакууме при гипотермии, служат теоретическим обоснованием возможности использования данного метода в офтальмохирургической практике.

Согласно новым данным по апоптозу и культивированию по методу Ф.М. Лазаренко консервированной роговой оболочки, возможно применение данных методик в клинической практике с целью прогнозирования исходов трансплантации.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Структурно-функциональная оценка донорской роговицы, консервированной в вакууме (3-10 сутки) показывает сохранность фенотипических свойств трансплантата, коллагеновых фибрилл, что свидетельствует об устойчивости (толерантности) соединительнотканных структур роговицы к данным условиям консервации.

2. При консервации роговицы наблюдаются явления угнетенного синтеза генов белков (bcl-2, р53) и изменения в соотношении их экспрессии, что свидетельствует о нарушениях клеточных циклов, как эпителиоцитов, так и фибробластов.

4. В своей совокупности полученные результаты обосновывают целесообразность использования роговицы, консервированной в вакууме, для послойной кератопластики.

Апробация работы и публикации результатов исследования Материалы диссертации представлены и обсуждены на Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии микрохирургии глаза (актуальные вопросы морфогенеза и регенерации в офтальмохирургии)» (Оренбург, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии» (Чебоксары, 2007); VII Западно-Сибирская межрегиональная научно-практическая конференция «Новое в офтальмологии» (Новосибирск, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Высокие технологии в офтальмологии» (Краснодар, 2008); III Всероссийской научной конференции молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Современные технологии лечения заболеваний переднего и заднего сегментов глаза» (Уфа, 2008); Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); Российской научно-практической конференции «Новые технологии микрохирургии глаза (офтальмопатология детского возраста)»

Оренбург, 2008); IV Межрегиональной научно-практической конференции «Метрология и инженерное дело в медико-биологической практике» (Оренбург, 2009); VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Федоровские чтения — 2009» (Москва, 2009), Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы офтальмологии» (Уфа, 2009), Российский общенациональный офтальмологический форум МНИИ ГБ им. Гельмгольца (Москва, 2009), VI съезд анатомов, гистологов и эмбриологов России (Саратов, 2009), Всероссийская научная конференция с международным участием «Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия в XXI веке» (Оренбург, 2009).

По теме диссертации опубликовано 17 научных работ из них 4 в центральной печати рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 2 таблицами, 30 рисунками. Список литературы содержит 220 источников, в том числе 101 иностранных. Диссертация изложена на русском языке.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Казённов, Алексей Николаевич

выводы

1. На светооптическом и ультраструктурном уровнях доказана хорошая сохранность фибриллярных компонентов донорских роговиц, консервированных в вакууме при гипотермии (3-10 суток), при оптимальном сроке хранения 7 суток.

3. Метод культивирования тканей in vivo (Ф.М. Лазаренко, 1959) является эффективным для изучения потенциальных репаративных и индуцирующих возможностей донорских роговиц, консервируемых в вакууме при гипотермии.

6. Экспериментально-гистологически обоснован альтернативный способ консервации роговицы в условиях низкого вакуума 0,5 атм. при гипотермии.

Практические рекомендации

1. Предложенная вакуумная система УАС8У для консервации донорской роговицы обеспечивает оптимальное хранение материала, позволяющая увеличение срока консервации, что доказывается экспериментально-гистологическим методом.

3. В своей совокупности данный способ консервации роговицы может быть использован для целей офтальмохирургической практики.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Казённов, Алексей Николаевич, Оренбург

1. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки // АМН СССР. М.: Медицина, 1979. - 320с.

2. Багров С.Н., Хрущев Н.Г., Киваев A.A. Авторадиографическое исследование включения 3Н-тимидина при сквозном кератопротезировании // Восстановит, хирургия и аллопластика в офтальмологии. М., 1973. - С. 5-8.

3. Баженова М.А. Тканевые культуры консервированной роговицы // Сборник научных работ глазной клиники. Одесса, 1936. - т. 1. - С. 7983.

4. Баженова М.А. Тканевые культуры замороженной роговицы // Мед. журн. 1938.-8.-вып. З.-С. 772-781.

5. Болдырев В.П., Туринцева Г.Г. Изучение роговой оболочки в культуре ткани // Вестник офтальмологии. 1976. - №3. - С. 81 -85.

6. Бордюгова Г.Г. Современные вопросы консервации роговой оболочки // Актуальные вопросы кератопластики. -М., 1976.-С. 10-29.

7. Бордюгова Г.Г., Альсакини A.B. Оценка жизнеспособности консервированной ткани роговой оболочки методом авторадиографии // Травмы глаз. М., 1978. - С. 25-26.

8. Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г. Новые способы консервирования тканей глазного яблока для трансплантации // Мед. реко. М., 1978. - 87с.

9. Бордюгова Г.Г. Система реконструкции переднего отдела глаза. Экспериментально-клинические исследования: Автореф. дис. док. мед. наук. М., 1980.-36с.

10. Борзенок С.А. Медико-биологические аспекты прогнозирования жизнеспособности сквозного трансплантата роговицы: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1995. - 22с.

11. Борзенок С.А. Медико-биологические основы глазного банка ГУ МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова // 13 Рос. ежегодная науч.-практ. конф. «Новые технологии микрохирургии глаза»: Тез. докл. — Оренбург, 2002. С. 14-16.

12. Волков В.В., Шиляев В.Г. Комбинированные повреждения глаз. — Л.: Медицина, 1976.- 160с.

13. Гольдфельд Н.Г. Послойная пересадка обезвоженной роговицы с укреплением трансплантата клеем. -М.: Медицина, 1976. 119с.

14. Горгиладзе Т.У. Пересадка роговицы. Батуми: Сабчота Аджара, 1983. -119с.

15. Гриценко В.И., Белоус A.M. Итоги научно-организационной деятельности института (к 20-летию Института проблем криобиологии и криомедицины АН Украины) // Проблемы криобиологии. 1992. - №1. — С. 3-13.

16. ГундороваР.А., Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г. Реконструктивные операции на глазном яблоке. М.: Медицина, 1983. - 224с.

17. Гундорова P.A., Синельщиков И.В., Вериго E.H. Банк глазных тканей при Московском НИИ глазных болезней им. Гельм гольца // Вестн. Офтальмологии. 1984. - №1. - С. 3-6.

18. Гундорова P.A. Систематизация клиники, диагностики и лечения поражений роговицы при травматической болезни органа зрения // Федоровские чтения 2004. «Новые технологии в лечении заболеваний роговицы». - М., 2004. - С. 94-99.

19. Джавришвили Г.В. Современные аспекты хирургического лечения ожоговых бельм: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 2004.

20. Дронов М.М. О методах оценки структурной целостности и метаболического состояния роговичных криотрансплантатов // Науч. конф. молодых ученых Академии, поев. 60-летию присвоения комсомолу им. В.И. Ленина: Тез. докл. Л., 1984. - С. 89.

21. Дронов М.М., Матвеев В.П., Кулагин A.M. Низкотемпературный банк роговиц. — Кабул, 1985.- 16с.

22. Дронов М.М. Криоконсервация и трансплантация роговицы, создание низкотемпературных (-196°С) роговичных банков в ВС СССР: Автореф. дис. . д-ра мед. наук.— Л., 1987. —38с.

23. Дронов М.М. Руководство по кератопластике. СПб.: Изд-во Полиформ «Влазипресс», 1997.- 130с.

24. Ермаков H.B. Диагностическое и прогностическое значение зеркальной микроскопии эндотелия при трансплантации роговицы: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1989. - 26с.

25. Ермаков Н.В. Микроскопия заднего эпителия роговицы в реконструктивной хирургии переднего отдела глаза // Съезд офтальмологов России, 6-й: Тез. докл. М., 1994. - С. 297.

26. Брошевский Т.И. Пересадка роговицы. Куйбышев, 1961. - 327с.

27. Платовская Л.В. Ультраструктурные изменения роговицы глаза человека при разных способах консервации: Автореф. дис. канд. мед. наук. — М., 1980.-24с.

28. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М. Аллотрансплантация аортой в пластической офтальмохирургии. М.: Медицина, 2001. - 144с.

29. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М. Биологическое и экспериментально-гистологическое обоснование новых технологий в офтальмохирургии. М.: Медицина, 2005. - 160с.

30. Канюков, В.Н. Экспериментально-гистологические и клинические аспекты реконструктивной офтальмохиркргии (новые подходы с позиций доказательной медицины) / В.Н. Канюков, A.A. Стадников // Оренбург, 2006. 128с.

31. Канюков В.Н., Стадников A.A., Трубина О.М., Подопригора Р.Н. Гистологический анализ роговицы, аорты и твердой мозговой оболочки консервированных в вакууме // Вестник Оренбургского государственного университета. -2006. №11 (61). С. 141-143.

32. Каспаров A.A. Хирургическое лечение длительно незаживающих язв роговицы парацентральной локализации // Актуальные проблемы офтальмологии. Баку, 1977. — Ч.П. - С. 333-335.

33. Каспаров A.A., Магден Ю. Криокератопластика и кератопластика в лечении буллезной хронической кератопатии // Вестн. Офтальмологии. -2001. №2.-С. 8-10.

34. Каспаров A.A. Одномоментные реконструктивно-восстановительные вмешательства на базе сквозной кератопластики при комбинированном поражении переднего отдела глаза // Съезд офтальмологов России, 8-й: Тез. докл. М., 2005 - С. 464.

35. Каспарова Е.А. Ранняя диагностика, лазерное и хирургическое лечение кератоконуса: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. -М., 2003. 39с.

36. Клишов A.A. Гистогенез и регенерация тканей. Л.: Медицина. 1984. -220с.

37. Коваленко П.П. Основы трансплантологии // Ростов-на-Дону: Изд-во. Ростовск. Ун-та, 1975. 180с.

38. Коваленко П.П. Пересадка тканей и органов // Ростов-на-Дону, 1976. -48с.

39. КомахЮ.А. Клинико-цитохимические аспекты прогнозирования и профилактики помутнения трансплантата после рекератопластики: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1995. 20с.

40. Копаева В.Г. Жизнеспособность роговичного эпителия и пересадка роговицы // Съезд офтальмологов СССР, 4-й: Материалы. М., 1973. - Т. 1.- С. 465-469.

41. Копаева В.Г. Современные аспекты сквозной субтотальной кератопластики. Автореф. дис. . д-ра мед. наук. - М., 1982. - 38с.

42. Кротова Е.В. Клинико-иммунологические аспекты рекератопластики различными видами донорского материала: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1994.-24с.

43. Кушнир В.Н. Клиника, диагностика, патогенез и лечение заболеваний глаз, ассоциированных с инфицированностыо вирусом гепатита В: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. -М., 2001. — 36с.

44. Лазаренко В.И., Васильев Н.И., Николаева Г.А. Сравнительная морфологическая и гистохимическая характеристика длительно сохраняемых в различных средах конъюнктивы и роговицы глаз человека //Вопросы офтальмологии. Красноярск, 1975.-С. 157-160.

45. Лазаренко, Ф.М. Закономерности роста и превращения тканей и органов в условиях культивирования их в организме / Ф.М. Лазаренко. М.: Медгиз, 1959.-400с.

46. Лекишвили М.В. Вопросы безопасности при изготовлении биологических имплантатов, связанные с вирусными гепатитами В и С // Сб. науч. тр. ГУНЦИТО им. H.H. Приорова. М., 2001. - С. 103-106.

47. Либман Е.С., Шахова Е.В. Слепота и инвалидность по зрению в населении России // Съезд офтальмологов России, 8-й: Материалы. М., 2005. - С. 78-79.

48. Линник Л.Ф., Подопригора Р.Н. Пересадка роговицы, консервированной в оксигипербарической среде // Тез. докл. науч. конфер., посвященной 100-летию со дня рожд. акад. В.П. Филатова. Одесса, 1975. - С. 102.

49. Линник Л.Ф., Подопригора Р.Н. Послойная пересадка роговой оболочки, консервированной в оксигипербарической среде // Вопросы клинической и экспериментальной офтальмологии. Куйбышев, 1976. - С. 54-57.

50. Линник Л.Ф., Подопригора Р.Н. Пластические свойства роговицы, консервированной в условиях гипербарической оксигенации при гипотермии // Тез. докл. Межд. конфер. по кератопластике и кератопротезированию: Одесса, 1978. - С. 98-99.

51. Малов В.М., Яхина Н.М., Брошевская Е.Б. Донорский материал для срочной трансплантации в офтальмохирургии // Боевые повреждения органа зрения: Тез. науч. конф. 21-22 сентября 1999. СПб.: ВМедА, 2001. -С. 175-176.

52. Мальханов В.Б., Азнабаев М.Т. Органные культуры. Уфа, 1998. - 192с.

53. Милютин Е.С. Анализ применения донорских роговичных трансплантатов глазного банка офтальмологической клинической больницы имени Т.И. Брошевского // Боевые повреждения органа зрения: Тез. науч. конф. 21-22 сентября 1999.-СПб.: ВМедА, 2001.-С. 176-178.

54. Мороз З.И. Хирургическое лечение бельм различной этиологии // Съезд офтальмологов России, 8-й: Материалы. М., 2005. - С. 452-453.

55. Мороз З.И., Тахчиди Х.П., Калинников Ю.Ю. и др. Современные аспекты кератопластики // Федоровские чтения — 2004. «Новые технологии в лечении заболеваний роговицы». — М., 2004. С. 280-288.

56. Мусина А.Д. Использование контейнеров и упаковочного материала с углеродсодержащим покрытием для хранения аллогенных трансплантатов: Автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 2006. - 28с.

57. Новиков, B.C. Иммунофизиология экстремальных состояний / B.C. Новиков. Сиб.: Наука, 1996. - 172с.

58. Пат. 2310327 РФ Способ консервации донорских тканей для офтальмохирургии» патент на изобретение / Канюков В.Н.; опубл. 20.11.2007.

59. Перелыгин Н.И. Пересадка замороженной роговой оболочки // Тез. докл. II Всесоюзн. конф. по проблеме тканевой несовместимости консервации и трансплантации органов и тканей. — Одесса, 1961. С. 43-44.

60. Перелыгин Н.И. Пересадка замороженной роговой оболочки // Проблемы гомопластики и аллопластики. — Киев, 1967. С. 305-307.

61. Пири А., Гейнинген Р. Биохимия глаза. М.: Медицина, 1968. - 400с.

62. Попов Г.П. Усовершенствованный метод дегидратации роговичной ткани // Офтальм. журн. 1965. - №1. - С. 25-30.

63. Протасов А.И. Организация длительного хранения донорского материала для целей кератопластики // Тр. Куйбышевского мед. института. — Куйбышев, 1967. Т. 42. - С. 142-146.

64. Пучковская H.A. Послойная пересадка роговицы // Съезд глазных врачей УССР, 3-й: Материалы. Киев, 1959. - С. 224-228.

65. Пучковская H.A. Основы пересадки роговой оболочки // Под редакцией Пучковской H.A. Киев: Изд. Здоровье, 1971. - 277с.

66. Ронкина Т.И. Закономерности возрастных изменений эндотелия роговицы человека в норме и патологии, возможности активации пролиферации эндотелия и их назначение в офтальмологии: Дис. . д-ра мед. наук, в форме науч. доклада. М., 1994. - 48с.

67. Руководство по глазной хирургии // Под ред. M.JI. Краснова, B.C. Беляева. М.: Медицина, 1988. - 624с.

68. Савушкина Н.М. Пересадка роговой оболочки, сохраненной при низких температурах // Вестник Офтальмологии. 1962. - №5. - С. 35-42.

69. Саидов Б.М., Халилова З.Х., Очилов Н.М. Применение консервированного амниона в лечении заболеваний роговицы // Материалы научно-практической конференции «Актуальные вопросы офтальмологии» Уфа, 1994. - С. 86.

70. Саликова, С.П. К вопросу о морфологическом обосновании стадий хронической сердечной недостаточности / С.П. Саликова // Морфология. -2008. Т.134. - №5. - С.78-80.

71. Слонимский А.Ю. Возможности реконструктивной сквозной пересадки роговицы при различной патологии переднего отрезка глаза и подход к решению основных посткератопластических проблем : Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 2004. - 36с.

72. Слонимский Ю.Б., Слонимский А.Ю. Принципы сквозной пересадки роговицы при кератоконусе // Съезд офтальмологов России, 8-й: Материалы. М., 2005. - С. 484.

73. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. С.Пб.: Теза, 1998. - 331с.

74. Стадников, A.A. Нейробиологические аспекты регуляции репаративных гистогенезов / A.A. Стадников // Морфология. — 1995. — Т. 108. №2. — С.16-19.

75. Стадников, A.A. Роль гипоталамических нейропептидов во взаимодействиях про- и эукариот. Структурно-функциональные аспекты / A.A. Стадников. Екатеринбург, 2001. - 244с.

76. Стукалов С.Е. Вопросы тканевой несовместимости при кератопластике // В кн. Проблемы гомопластики и аллопластики. — Киев.: Здоровье, 1967. — С. 281-285.

77. Сухарева Н.И. Послойная кератопластика с использованием не консервированной донорской роговицы и с применением микрохирургической техники: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1986. - 24с.

78. Текари М.Б.С. Использование в эксперименте и в клинике обработанной по новой методике алло- и ксеногенной донорской роговицы при послойной кератопластике: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1993. -24с.

79. Травкин А.Г. Оценка жизнеспособности и некоторых механизмов аутолиза роговицы в процессе ее переживания и консервации: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1974. - 23с.

80. Травкин А.Г. Способ длительной консервации роговицы // Офтальмол. жури. 1976. - С. 305-306.

81. Травкин А.Г., Деревянко В.П., Цыпин А.Б. и др. Клеточные структуры и некоторые физико-химические процессы в консервируемой роговице. -М., 1977.

82. Травкин А.Г. Применение метода хемилюминесценции в проблеме пересадки роговицы // Межд. конф. по кератопластике и кератопротезированию: Материалы. — Одесса, 1978. С. 54-55.

83. Травкин А.Г., Деревянко В.П. Ультраструктурная характеристика некоторых восстановительных процессов при послойной кератопластике // Морфологические основы клинической и экспериментальной офтальмологии. -М., 1978.-С. 110-111.

84. Трансплантология. Руководство // Под ред. В.И. Шумакова. М.: Медицина, 1995; Тула: «Репроникс Лтд», 1995. - 391с.

85. Тринчук В.В. Импедансометрия роговицы глаза. Киев: Здоров'я, 1986. -88с.

86. Федоров С.Н., Копаева В.Г. Роль жизнеспособности эндотелия роговицы при сквозных субтотальных пересадках роговицы // Вести, офтальмол. -1974. №5.-С. 21-26.

87. Федоров С.Н., Ронкина Т.И., ЯвишеваТ.М. Эндотелий роговицы человека. М.: МНТК «Микрохирургия глаза», 1993. - 126с.

88. Федоров С.Н., Мороз З.И., Борзенок С.А., Комах Ю.А. Глазной банк МНТК «Микрохирургия глаза» 1988-1998 // Офтальмохирургия. - 1998. -№4. - С. 54-64.

89. Филатов В.П. Роговица трупа как материал для пересадки // Сов. вестн. офтальмологии. 1934. - №2. - С. 222-224.

90. Филатов В.П., Баженова М.А. Тканевые культуры высушенной роговицы // Труды Одесского мединститута. Одесса, 1936. Т. 1. - вып. 2. -С. 85-89.

91. Филатов В.П., Скородинская В.В. Гетеротраисплантация консервированной роговицы // Научн. матер. Укр. института экспериментальной офтальмологии, 1938.-С. 55-56.

92. Филатов В.П., Баженова М.А. Экспериментальная пересадка сушеной и замороженной роговицы // Вестн. офтальмол. 1940. - №5. - С. 536-542.

93. Филатов В.П., Пучковская H.A. К вопросу о полной (тотальной) пересадке роговицы // Уч. зап. УЭИГБ, 1949. №1. - С. 3-8.

94. Филатов В.П., Мучник С.Р., Ковалев И.Ф. О жизнеспособности и реактивных свойствах изолированной кожи теплокровных, сохраняемой при пониженной температуре // Бюл. экспер. биол. и мед., 1951. №10. — С. 309-313.

95. Филатов В.П. Перспективы дальнейшего развития проблемы пересадки роговой оболочки // Офтальмол. журн. — 1954. №2. - С. 71-74.

96. Фукс Б.Б. О строении и жизнеспособности эндотелия консервированной роговицы // Офтальмол. журн. 1956. - №4. — С. 240242.

97. Хрущев Н.Г. Современные проблемы регенерации // Материал 2-й Всероссийской школы молодых ученых и специалистов по современной проблеме регенерации. Йошкар-Ола, 1982. - С. 159.

98. Цыпин А.Б., Травкин А.Г., Бордюгова Г.Г. Метод хемилюминесценции как критерий оценки жизнеспособности роговичной ткани в процессе ее приживления и консервации // Офтальмол. журн. 1974. - №4. - С. 272275.

99. Чередниченко В.М., Шарлай Т.М. жизнеспособность эндотелия роговицы, консервированной глубоким холодом // Проблемы офтальмологии. Киев: Наук, думка, 1976. - С. 65-66.

100. Черниченко Л.П. Опыт пересадки роговицы, обезвоженной силикогелем // Офтальмол. журн. 1967. - №5. — С. 385-386.

101. Шарлай Т.М. Изучение влияния низких температур (-196°С) и криопротектора (ПЭО-400) на сохранность морфологических и функциональных свойств роговой оболочки человека и некоторых животных: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Одесса, 1977. -20с.

102. Штер, Ф. Гистология / Ф. Штер, В. Меллендорф // М.-Л.: Биомедгиз, 1936.-640с.

103. Шульгина H.С., Никулина Н.Б. Биологические свойства роговой оболочки, консервированной разными методами // Проблемы пересадки роговой оболочки. — Киев: Здоровья, 1966. — С. 268-271.

104. Шумаков В.И., Штенгольд Е.Ш., Онищенко H.A. Консервация органов.- М.: Медицина, 1975. 252с.

105. Шумаков В.И., Онищенко H.A., Кирпаговский В.И. Фармакологическая защита трансплантата. — М.: Медицина, 1983. 232с.

106. Эпштейн М.М. Дыхание свежей и консервированной роговицы // Вестн. офтальмологии. 1950. - т.29. - №4. - С. 22-24.

107. Юрченко Т.Н. Гипотермическая и низкотемпературная консервация роговицы и течение восстановительного периода после трансплантации: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Харьков, 1982. - 37с.

108. Юрченко Т.Н., Веселовская З.Ф. Авторадиографическое исследование регенерации роговицы после криовоздействия // Актуальные вопросы клинической морфологии. Харьков, 1979. — С. 90-91.

109. Юрченко Т.Н., Белоножко А.П., ЖуликоваЕ.П. Активность лактатдегидрогеназы в клетках роговицы при ее гнпотермическом хранении // Офтальмол. Журн. 1982. - №3. - С. 176-179.

110. Юрченко Т.Н., Шарлай Т.М., Волков В.В. и др. Кри о консервация и трансплантация роговицы. Киев: Наук, думка, 1986. - 152с.

111. Явишева Т.М. Морфо-функциональные особенности эндотелия роговицы человека в норме и патологии и отбор донорского материала для кератопластики: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1990. - 24с.

112. Abramo F., Bohnke M., Draeger J. Morphology of the corneal endothelium following preservation in dextran or chondroitin sulfate containing culture media // Fortschr. Ophthalmol. 1990. - Vol. 87. - №3. - P. 234-236.

113. Anderson C. et al. Corneal transplantation using long term cultured material // Acta-ophthalmol. (cepenh). 1986. - Vol. 64. - №1. - P. 93.

114. Barraquer J., Rutilan J. Banco de ojos // Atlas de Microcirugia de la cornea.- Barselona: Scriba, 1982. P. 75-89.

115. Bauer F. Uber die histochemische Funktion der Bowman und Descemet membrane // Biochemistry of the eye. — Basel, 1968. - P. 47-50.

116. Bohnke M. Spendergewebe fur die Keratoplastik // Klin. Mo-natsbl. Augenheikd.- 1991.-Vol. 198.-P. 562-571.

117. Bourne W.M. Endothelial cell survival on transplanted human corneas preserved at 4 °C in 2,5% chondroitin sulfate for one to 13 days // Am. J. Ophthalmol. 1986. - Vol. 102. - №3. P. 382-386.

118. Bourne W.M. The endothelial cell assay method for the evaluation of corneal preservation // The Cornea: Transactions of the World Congress on the Cornea III. New York, 1988. P. 111-114.

119. Bourne W.M., Lindstrom R.L., Dougman D.J. Endothelial cell survival on transplanted human corneas preserved by organ culture with 1.35% chondroitin sulfate // Am. J. Ophthalmol. 1985. - Vol. 100. - P. 789-793.

120. Bourne W.M., Nelson L.R., Hodge D.O. Comparison of three methods for human corneal cryopreservation that utilize dimethyl sulfoxide // Cryobiology. 1999.-Vol. 39. -№1.-P. 47-57.

121. Bourne W.M., Nelson L.R., Maguire L.J. et al. Comparison of Chen medium and Optisol-GS for human corneal preservation at 4°C // Cornea. 2001. — Vol. 20. -№7.-P. 683-686.

122. Buschke W. Studies on experimental corneal storage // Ibid. 1951. — Vol. 34.-№1.-P. 153-164.

123. Busin M., Yau C.W., Avni I., Kaufman H.E. Comparison of K-Sol and M-K medium for cornea storage: Results of penetrating keratoplasty in rabbits // Br. J. Ophthalmol. 1986. - Vol. 70. - №11. - P. 860-863.

124. CachaneM. Eye banking news highlights // EEBA News Letter. -November, 2004.-P. 1.

125. Camposampiero D., Tiso R., Zaneti E. et al. Cornea preservation in culture with bovine serum or chicken ovalbumin // Cornea. 2003. - Vol. 22. - №3, P. 254-258.

126. Canals M., Costa-Vila J., Potau J.M., Merindano M.D., Ruano D. Morphological study of cryopreserved human corneal endothelium // Cells Tissues Organs. 1999. - Vol. 164. - №1. - P. 37-45.

127. Chen C.H., Chen S.C. Efficacy of Chen medium: link to potential for maintaining metabolism and cell proliferation of donor corneas at active states // Cornea. 1998. - Vol. 17. - №2. - P. 247.

128. Corneal surgery. Theory, technique and tissue // ed. by F.S. Brightbill. St. Louise et cet., 1993. - 540p.

129. Dake C.L. et al. Treatment of (recurrent) pterygium oculi by lamellar keratoplasty // Doc. Ophthalmol. 1990. - Vol. 48. - №2. P. 223-230.

130. Davson H. Physiology of the eye. 5 edit. - Edinburgh, London, New York, 1980.-P. 91-115.

131. Directory EEBA, 5 edit. Venice (Italy), 1997. - 221 p.

132. Directory EEBA, 12 edit. Barcelona (Spain), 2004. - 92p.

133. Directory EEBA, 14 edit. Venice (Italy), 2006. - 80p.

134. DoughmanD.J. Prolonged donor preservation in organ culture: long term clinical evaluation // Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 1980. - Vol. 78. - P. 567-628.

135. Doughman D.J. Corneal tissue preservation // Int. Ophthalmol. Clin. 1988. -Vol. 28. — №1. - P. 50-56.

136. Doughman D.J., Van Horn D., Hams J.E. et al. The ultrastructure of human organ-cultures cornea. I. Endotelium // Arch. Ophthalmol. 1974 - Vol. 92. -P. 516-523.

137. Duke-Elder S. Final discussion // Transparency of the cornea. A symposium. Oxford: Blackwell, 1960. - P. 243.

138. Durand L. Correction of severe myopia by refractive lamellar keratoplasty with out freezing // J. Fr. D. Ophthalmol. 1991. - Vol. 14. - №3. - P. 167-175.

139. Edelhauser H.F. Functional survival of cryopreserved corneal tissue // Corneal preservation. Springfield, 1973. - P. 280-286.

140. Edelhauser H.F., Holley G.P., Scott C.W. et al. An evaluation of three eye bank specular microscope systems to compare cell number // Cornea. 1998. — Vol. 17. -№2.-P. 248.

141. EhrlichM.I. et al. Techniques of lamellar keratoplasty // Inter. Ophthalmol. Clin. 1988. - Vol. 13. - №1-2. - P. 24-29.

142. Epstien R.J., Stulting R.D. Corneal neovascularization. Pathogenesis and inhabitation // Cornea. 1987. - Vol. 6. - №4. - P. 250-257.

143. EreinerJ.V., Lass J.H., GlonekT. Ex vivo metabolic analysis of eye bank corneas using phosphorus nuclear magnetic resonance // Arch. Ophthalmol. -1984,- Vol. 102.-P. 1171-1173.

144. EreinerJ.V., Lass J.H., GlonekT. Metabolic status of fresh and eyebank-processed corneas. A Phosphorous nuclear magnetic resonance study // Arch. Ophthalmol.- 1984. Vol. 102.-P. 1676-1677.

145. Farge E.J., Fort R.A., Wilhelmus K.R. et al. Morphologic changes of K-Sol preserved human corneas // Cornea. 1989. - №8. - P. 159-169.

146. Filatov V.P. Transplantation of cornea // Arch. Ophthalmol. 1935. - Vol. 13.-P. 321-347.

147. Geroski D.H., Edelhauser H.F. Evaluation of donor endothelium by physiologic methods // Cornea. 1987. - Vol. 6. - №1. - P. 60-61.

148. HannaC., Sherman J.K. Survival of rabbit corneal cells after the formation and dissolution of intracellular ice // Cryobiology. 1971. - Vol. 8. - №1. - P. 46-73.

149. Harminder S. Dua, Azuaro-Blanco A. Amniotic membrane transplantation // Brit. J. Ophthalmol. 1999. №83. - P. 748-752.

150. HeckE. Structure and Function of Eye Banks // Krachmer J.H., Mannis M.J., Holland E.J. Cornea. Fundamentals, Diagnosis and Management, 2nd Edition. Elsevier-Mosby, 2005. - Vol. 1. - P. 96-100.

151. Herrmann H., Hickman F. Exploratory studies on corneal metabolism // Bull. Johns Hopkins Hosp. 1948. - a. - Vol. 82. - P. 225.

152. Herrmann H., Hickman F. The utilization of ribose and other pentoses by the cornea // Bull. Johns Hopkins Hosp. 1948. - 6. - Vol. 82. - P. 287.

153. Heydenreich A. Mikroskopich-histologische untersuchungsmethoden unter besonderer beriicksichtigung des sehorgans. Leipzig: VebG. Thieme, 1968. -419p.

154. HoefleF.B., Maurice D.M., Sibley R.C. Methods of evaluating corneal donor material // Corneal preservation. Springfield, 1973. - P. 96-108.

155. Hoffmann F., Pahlitzsch T. Predisposing factors in corneal graft rejection // Cornea. 1989.-Vol 8. -№3.-P. 215-219.

156. Hsu J.K.W., Cavanagh H.D., Jester J.V. et al. Changes in corneal endothelial apical junctional protein organization after corneal cold storage // Cornea. -1999. Vol. 18. - №6. - P. 712-720.

157. Hwang D.G. Proliferative Capacity of the Corneal Endothelium // V World Cornea Congress. Washington, DC, 2005. - P. 16.

158. Johnstone E.W., Williams K.A., Lovric V.A. et al. Cryopreservation of rabbit and cat corneas at -18 to -24°C // Cornea. 1992. - Vol. 11. - №3. - P. 211-220.

159. Kaufman H.E., CapellaJ.A., Robins J.E. A study of enzyme activity in corneal repair // Invest. Ophthalmol. 1964. - Vol. 3. - № 1. - P. 34-46.

160. Kaufman H.E., Varnell E.D., KaufmanS. Chondroitin sulfate in a new cornea preservation medium // Am. J. Ophthalmol. 1984. - Vol. 98. - P. 112114.

161. Kaufman H.E., Varnell E.D., Kaufman S. et al. K-Sol corneal preservation // Am. J. Ophthalmol. 1985. - Vol. 100. - №2. - P. 299-304.

162. Kaufman H.E., Beuerman R.W., Steinemann T.L. et al. Optisol corneal storage medium // Arch. Ophthalmol. 1991. - Vol. 109. - P. 864-868.

163. King I.H., Glavan S.B. The preservation of eye tissue // Am. J. Ophthalmol. 1959. - Vol. 47. - №3. P. 303-307.

164. Krachmer J.H., Mannis M.J., Holland E.J. Cornea. Fundomentals, Diagnosis and Management: 2nd Edition. Elsevier-Mosby, 2005. - Vol. 1. - 1409p.

165. Kudo T., Tekahashi G.H. Oxygen consumption of rabbit cadaver cornea // Arch. Ophthalmol. 1967. - Vol. 77. - №1. - P. 88-92.

166. KwokL. Effect of Donor Age on Corneal Swelling // V World Cornea Congress: Program abstracts. Washington, DC, 2005. - P. 16.

167. Laflamme M., Gadgos-Treuss A. Etude experimentale des keratoplasties transpirantis realisees avec discreffons corneas a bassis temperatures // Am. Oculist. Paris, 1972. - Vol. 205. - №8. - P. 887-902.

168. Laflamme M. Valeur compare de 2 techniques de conservatei corneene par graffes de comee chez le lapin // Canad. J. Ophthalmol. 1977. - Vol. 12. -№2.-P. 128-132.

169. Lass J.H., MedcalfS.K., McBride M. et al. Effects of intermediate-term storage on the metabolic status of the cornea: K-Sol versus CSM // Cornea. -1987.-Vol. 6.-№1.-P. 65-66.

170. Lass J.H., GreinerJ.V., McBride M. et al. Effects of intermediate-term storage on corneal metabolism: K-Sol versus CSM // The Cornea: Transactions of the World Congress on the Cornea III. New York, 1988. - P. 73-79.

171. LassJ.H., GreinerJ.V., Reinhart W.J., MedcalfS.K., Glonek T. Phosphatic metabolism and corneal edema // Cornea. 1991. - Vol. 10. - №4. - P. 346353.

172. Leign A.G. Corneal transplantation. Oxford: Blackwell, 1966. - 268p.

173. Lindstrom R.L., Doughman D.J., Van Horn D.L., Dancil D., Harris J.E. A metabolic and electron microscopic study of human organ-cultured cornea // Amer. J. Ophthalmol. 1976. - Vol. 82. - №1. - P. 72-82.

174. Lindstrom R.L. Advances in corneal preservation // Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 1990. - Vol. 87. - P. 555-648.

175. Lovelock I.E. Penetration of lipid protein complexes as a cause of damage by freezing // Proc. Roy. Soc. Ser. Biol. 1957. - Vol. 147. - jY»3. - P. 427-433.

176. Maurice P.M. Cellular membrane activity in the corneal endothelium of the intact eye // Experientia. 1968. - Vol. 24. - №5. - P. 1029-1037.

177. McCareyB.E., Kaufman H.E. Improved corneal storage 11 Invest. Ophthalmol. 1974. — Vol. 13.-P. 165-173.

178. McPherson S.D., Morrison H.M. The use of corneas from frozen whole eyes for emergency keratoplasty // Ibid. 1962. - Vol. 53. - №6. - P. 917-922.

179. MerymahH.T. Cryoprotective agents // Cryobiology. 1971. - Vol. 8. -№2.-P. 173-183.

180. Morel P., Roubi N., Bertrand X. et al. Bacterial contamination of a cornea tissue bank implications for the safety of grafting engineering // Cornea. — 2003.- Vol. 22. №3. - P. 221-225.

181. MullerL.J., PelsE., Gijs F.J.M. The effects of organ-culture on the density of keratocytes and collagen fibers in human corneas // Cornea. 2001. — Vol. 20. -№1.-P. 86-95.

182. Nelson L.R., Hodge D.O., Bourne W.M. In vitro comparison of Chen medium and Optisol-GS medium for human corneal storage // Cornea. — 2000.- Vol. 19. №6. - P. 782-787.

183. Norn M.S. Trypan blue // Acta Ophthalmol. 1967. - Vol. 43. - №2. - P. 380-389.

184. O'Neil P., Mueller F.O., Trevor-Roper P.D. On the preservation of corneal at -196°C for foil thickness homografts in man and dog // Brit. J. Ophthalmol. -1967.-Vol. 51. -№1.-P. 13-30.

185. Pakarinen P. Preservation of the cornea for penetrating keratoplasty: an experimental study // Acta Ophthalmol. 1969. - P. 375.

186. PaurauP., Poliquen J. Un precede pratique de conservation des cornees et des schleres // Bull. Med. Soc. Ophthalmol. 1959. - Vol. 3. - №1. - P. 209212.

187. PaurauP. Experimental and clinical use of uncommon greet material in keratoplasty // The problem of cornea transplantation. — Kiev, 1966. P. 327330.

188. Pera-Cairillo P., Polack F.M. Histochemical changes in endothelium of corneas stored in moist chambers // Arch. Ophthalmol. 1964. - Vol. 72. - №8. -P. 811-816.

189. Polack F.M. Cryopreservation of corneas for penetrating keratoplasty // Am. J. Ophthalmol. 1971. - Vol. 71. - №3. - P. 505-515.

190. Reim M. Metabolism of cornea cultures // Cornea. 1987. - Vol. 6. - №1. -P. 70.

191. Robbins J.E., CapellaJ.A., Kaufman H.E. A study of endothelium in keratoplasty and corneal preservation // Arch. Ophthalmol. 1965. - Vol. 73. -P. 242-247.

192. Sato E.H. Current Status of Corneal Storage // V World Cornea Congress: Program abstracts. Washington, DC, 2005. - P. 16.

193. Schaeffer E.M. Ultrastructural changes in moist chamber corneas // Invest. Ophthalmol. 1963. - Vol. 2. - №2. - P. 272-282.

194. SherrardE.S. Full thickness keratoplasty in the rabbit: an unsatisfactory index of donor integrity // Exp.Eye Res. 1974. - Vol. 18. - №2. - P. 135-142.

195. Sobottka Ventura A.C., Bohnke M. Bacterial lipopolysaccharides in sterile corneal organ-culture media // Cornea. 1999. - Vol. 18. - P. 92-97.

196. Stocker F.W., Eiring A., Georgiade R., Georgiade N. Evaluation of viability of preserved rabbit corneas by tissue culture procedures // Am. J. Ophthalmol. — 1959. Vol. 47. - №4. - P. 773-781.

197. Stocker F. W., Maton M. Long term preservation of donor tissue for corneal grafting // Am. J. Ophthalmol. 1960. - Vol. 49. - №4. - P. 729-740.

198. Stocker F.W., Levenson D., Georgiade N.C. Medium term preservation of corneal tissue for grafting // Arch. Ophthalmol. 1963. - Vol. 70. - №5. - P. 554-557.

199. Stocker F.W., KingE.H., Lucas P.O., Georgiade N. Clinical test for evaluating donor corneas // Ibid. 1970. - №2. - P. 84-89.

200. StoiberJ., RuckhoferJ., Lametschwandtner A. et al. Eurosol versus fetal bovine serum-containing corneal storage medium // Cornea. 2001. - Vol. 20. -№2.-P. 205-209.

201. Tamaki K., Yamaguchi T., Varnell E.D., Kaufman H.E. Histological study of corneas preserved in two new media // Br. J. Ophthalmol. 1987. - Vol. 71. -P. 570-577.

202. Terry M.A., Ousley P.J., Davis R.M. New screening methods for donor eye bank eyes // Cornea. 1999. - Vol. 18. - №3. - P. 372.

203. Terry M.A., Ousley P.J. New screening methods lor donor eye-bank eyes // Cornea. 1999. - Vol. 18. - №4. - P. 430-436.

204. TsubotaK., ChibaK., Laing R.A., Kenyon K.R. Noninvasive metabolic analysis of cultured corneas // Acta Soc. Ophthalmol. Jap. 1988. - Vol. 92. -№8.-P. 1321-1326.

205. Van Horn D.L., SchultzR.O., Edelhauser H.F. Corneal cryopreservation // Am. J. Ophthalmol. 1969. - Vol. 68. - №3. - P. 454-463.

206. Waltman S.R. The cornea // Adler's physiology of the eye (clinical application). 7 edit. - St. Louis, Toronto, London, 1981. - P. 38-62.

207. Williams K.A., Coster D.J. Clinical and experimental aspects of corneal transplantation // Trans. Rev. 1993. - Vol. 7. - P. 44-64.

208. Williams K.A., Muehlberg S.M., Lewis R.F., Coster D.J. The Australian corneal graft registry. 1994 report. - 1995. - 96p.

209. Wilson S.E., Bourne W.M. Corneal preservation // Surv. Ophthalmol. -1989.-Vol. 33.-P. 237-259.

210. Wong S.K., GottschJ.D., Green W.R. et al. The effects of preservation media and increased storage time on graft survival in the cat (ARVO abstract) // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1987. - №28 (suppl.). - P. 29.

Информация о работе

Казённов, Алексей Николаевич
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2010
ВАК 03.03.04

Диссертация

Экспериментально-морфологическое обоснование консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии для выполнения сквозных и послойных кератопластик - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы