Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка технологии изготовления и применения иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии изготовления и применения иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров"

¡1111111111111111111!!

□03447403

На правах рукописи

ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ТЕСТА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БЕРЕМЕННОСТИ И БЕСПЛОДИЯ КОРОВ

03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

о 2 ОКТ 2008

Ульяновск - 2008

Рабога выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

БАГМАНОВ МИНЕРЕИС АЛИУЛЛОВИЧ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор, академик РАСХН

ДЕГТЯРЁВ ВЛАДИМИР ПАВЛОВИЧ

доктор биологических наук, профессор ГЕНИНГ ТАТЬЯНА ПЕТРОВНА

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Чувашская государственная

сельскохозяйственная академия»

Защита состоится «24» октября 2008 года в Ю00 ч на заседании диссертационного совета Д 220.065 01 при ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу. 432980, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; тел. 44-30-58.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Автореферат разослан «23» сентября 2008 г.

Ученый секретарь *—-_

диссертационного совета Пыхтина Лидия Андреевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время существует ряд методов диагностики беременности. Эти методы неравноценны и отличаются рядом особенностей, большей или меньшей специфичностью и достоверностью. Они в разной степени сложны по технике выполнения и отличаются, друг от друга также по времени наступления реакции, что, без сомнения, имеет большое практическое значение (А М Семиволос, 1999; В В. Рудеико, 2000; Г.П. Дюльгер и др., 2003)

Из лабораторных методов диагностики, наиболее ценными являются радиоиммунологический (РИА) и иммуноферментный (ИФА) анализ, которые позволяют определять в биологических жидкостях (плазма, сыворотка, моча, ам-ниотическая жидкость и т. п.) количественное содержание гормонов-регуляторов репродуктивной функции (ДИ. Санагурскгш и dp, 1990; А.И. Сер-гиенко, 1991; Г Н. Бурдов и др., 2001;О.Н. Преображенский, 2003; W.F. Cleere, 1981, S Degl hmocenti, P. Pollidori, 1988; R. Lombarddli et al, ¡988; KL. Nebel, 1988).

К сожалению, внедрение методов РИА и ИФА до настоящего времени не получило повсеместного распространения, что связано со сложностью организации специализированной лаборатории и дефицитом методической литературы по использованию результатов анализа в клинической практике.

В медицине широкое применение получили тесты на беременность, основанные на определении в моче или сыворотке крови хорионического гонадо-тропина - гормона, продуцируемого хорионом уже с первых дней после имплантации зародыша Тесты отличаются высокой воспроизводимостью результатов анализа, достоверностью, диагностической точностью и простотой исполнения. Диагностическая эффективность составляет до 98 % (С В Зяблицев и др., 2003).

Несмотря на значительный объем информации, накопленный в медицине, ветеринарная наука на данный момент не располагает достаточными сведениями о гормональном фоне беременности, и в частности, уровне хориониче-

ского гонадотропина в организме животных в различные физиологические периоды и стадии беременности. Изучение данного вопроса позволит дополнить информацию о течении родового процесса у животных. Кроме того, актуальными являются исследования по разработке метода определения беременности у крупного рогатого скота, основанного на индикации хорионического гонадотропина в различных биологических жидкостях.

Цели и задачи исследований. Цель исследований - разработка технологии иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров, основанной на качественном определении плацентарного гормона — хорионического гонадотропина.

Поставленная цель решалась следующими задачами:

- провести мониторинг данных по диагностике беременности и бесплодия коров в животноводческих хозяйствах Ульяновской области;

- изучить уровень хорионического гонадотропина у коров на разных сроках беременности и у бесплодных животных;

- разработать технологию изготовления и применения иммунологического теста для определения беременности и бесплодия коров;

- изучить диагностическую эффективность разработанного метода и определить экономическую целесообразность его применения.

Научная новизна работы. Впервые получены данные об уровне хорионического гонадотропина в организме коров в различные сроки стельности.

Разработана технология изготовления и применения иммунологического тес га для определения беременности и бесплодия коров, не имеющего аналогов в ветеринарии. Получены данные о его диагностической эффективности. Новизна полученных данных подтверждена патентом на изобретение № 2298791 от 10 мая 2007г. «Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок».

Практическая ценность. Разработан и прошел производственную апробацию экспресс-метод, позволяющий в условиях животноводческих ферм в

достаточно короткие сроки и с высокой степенью достоверности устанавливать или исключать беременность коров

Обоснованные научно-практические результаты вошли в основу следующих нормативно-технических документов:

- Временное наставление но применению одностадийного иммунологического теста па беременность и бесплодие коров (утверждено Управлением ветеринарии Ульяновской области от « 30 » мая 2008 г.);

- Технические условия «Одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров» (ТУ 03-00-06) на опытную партию (согласованы Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждены ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.);

- Инструкция по изготовлению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров (согласована Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждена ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г).

Основные положения, выносимые на защиту:

- применяемые в животноводческих хозяйствах Ульяновской области методы диагностики беременности и бесплодия коров не позволяют осуществлять эффективный контроль за воспроизводством стада крупного рогатого скота;

- получены данные, свидетельствующие об уровне хорионического гона-дотропина на разных сроках беременности коров;

- разработана технология изготовления и применения одностадийного иммунологического теста для определения беременности и бесплодия коров,

- производственные испытания установили высокую диагностическую точность и экономическую эффективность разработанного иммунологического метода определения беременности и бесплодия коров.

Апробация материалов исследований. Основные материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных отчетных научно-теоретических и методических конференциях профессорско-преподаь гтелъекото состава, научных сотрудн шов и аспирантов Ульяновской

ГСХА с 2004 по 2007 г.г. и представлялись на следующих научных конференциях:

- межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых Приволжского Федерального округа «Молодые ученые в решении региональных проблем АПК» (Самара, 2005);

- международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных в изменившихся условиях системы хозяйствования и экологии» (Ульяновск, 2005);

- всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие АПК - региональный опыт, проблемы, перспективы» (Ульяновск, 2005);

- международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, ВНИИВИПФиТ, 2005);

- международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008)

Результаты научных исследований по разработке технологии иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров включены в Реестр научных разработок Ульяновской ГСХА и отмечены призовыми местами региональных конкурсов:

- первое место в областном конкурсе «Лучший инновационный проект», приоритетное направление «Сельское хозяйство» (Ульяновск, 2007);

- третье место в областном конкурсе «Лучшее техническое решение, изобретение, полезная модель по итогам 2006 года» в номинации «Агрономия, медицина, ветеринария» (Ульяновск, 2007)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 7 научных статей, из которых 2-й изданиях, входящих в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых

должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора и кандидата наук».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 111 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Работа иллюстрирована 10 таблицами, 2 диаграммами и 10 рисунками. Список использованной литературы включает 175 источников, из которых 77 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в период 2003-2007 гг. в научно-консультативных центрах «Терапевт» и «Акушер» Ульяновской ГСХА и в животноводческих хозяйствах Ульяновской области.

Анализ ситуации по диагностике стельности и бесплодия в животноводческих хозяйствах региона осуществляли на основании данных статистической отчетности, предоставленных Управлением ветеринарии Ульяновской области.

Материалом для исследований явились:

- самки кролика (п = 6);

- коровы черно-пестрой породы стельные, бесплодные и после отела (п=360).

Концентрацию хорионического гонадотропина в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа при помощи набора реагентов для иммуноферментного определения хорионического гонадотропина

В основу разработанного метода диагностики стельности и бесплодия коров была положена модифицированная реакция ализариновых суспензионных ашшел - РАСА (В М Никитин, 1977).

Для иммунизации кролика с целью получения иммунной сыворотки (антисыворотки) использовали препарат хорионический гонадотропин для инъек-

ций с удельной активностью 1000 МЕ/л, стерильный, изготовленный ФГУП «Московский эндокринный завод» (ХГЧ).

Титр гипериммунной диагностической сыворотки определяли в реакции агглютинации (Груббер, Дурхам, 1896)

Изучение диагностической эффективности разработанного метода проводили в животноводческих хозяйствах Ульяновской области (ФГУП «Учебно-опытное хозяйство Ульяновской ГСХА», ООО СХП УЗМВ «Волжан-ка»Ульяновского района, ООО «Агро-Н» Новоспасского района).

Полученные цифровые данные лабораторных исследований обрабатывали методом вариационной статистики на ПК с использованием программы «Microsoft Exel». Достоверность сравнимых показателей определялась по критерию Стьюдента.

При оценки эффективности разработанного метода, определяли величину процента несовпадений по формулам, предложенные А. Г. Неждановым и А М. Смирновым (1977)

Степень соответствия в процентах при постановке диагноза на наличие или отсутствие беременности рассчитывали по формулам Г.П. Дюлъгер и др. (2003).

Ущерб, причиненный бесплодием коров, определяли по методике Департамента Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (Ю.Е Шо-рохин, И.Н. Никитин, ПА Чулков, ВФ Воскобойник, 1997) и научных документов кафедры организации и экономики ветеринарного дела ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (И.Н.Никитин, В А. Апалькин, 2006).

Расчет экономической эффективности профилактических мероприятий проводили по методике И.Н. Никитина (1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Анализ ситуации по диагностика стельности и бесплодия коров в животноводческих хозяйствах Ульяновской области

Анализ данных по результатам диагностических исследований на беременность и бесплодие коров, полученных в рамках гинекологической диспансеризации за период с 2004 по 2007 т.г. и предоставленных Управлением ветеринарии Ульяновской области приведен в таблице 1.

Таблица 1 - Сведения о диагностических исследованиях на беременность маточного поголовья крупного рогатого скота по районам Ульяновской области за период 2004 - 2007 г.г.

№ п/п Наименование районов Количество маточного поголовья Результаты ректального исследования

стельные бесплодные

гол. % гол. %

1. Базарно-Сызганский 4417 3303 74,78 1114 25,2

2. Барышский 9396 7241 77,06 2155 22,94

3. Вешкаймский 6428 5400 84,01 1028 15,99

4. Инзенский 4974 3348 67,41 1626 32,67

5. Карсунский 407 252 61,92 155 38,08

6. Кузоватовский 4623 4060 87,82 563 12,18

7. Майнский 8540 6207 72,68 2333 27,32

8. Мелекесский 16265 13183 81,05 3082 18,95

9. Николаевский 5815 5531 95,12 284 4,88

10. Новомалыклинский 1420 1296 91,27 1 124 8,73 16,87

11. Павловский 806 670 83,13 г~ 136

12 Радищевский 5641 4637 82,20 1004 17,80

13. Сенгилеевский 7712 5925 76,83 1787 23,17

14. Ст. Кулаткинский 2906 2804 96,49 102 3,51

15. Ст. Майнский 5000 4234 84,68 766 15,32

16. Сурский 4696 3900 83,05 796 16,95

17. Терснгульский ИЗО 980 86,73 150 13,27

18. Ульяновский 15808 12372 78,26 3436 21,74

19. Цильнинский 7871 7190 91,35 681 8.65

20. Чердаклинский 7236 6537 90,34 699 9,66

21 Новоспасский 4441 3595 80,95 846 19,05

ВСЕГО по области 125532 103665 82,6 21867 17,4

Как видно из представленных данных, проведенным в соответствующие сроки ректальным исследованием, беременность подтверждается в среднем по области в 82,6 % случаев, соответственно количество бесплодных коров составляет 17,4 % от предполагаемого стельных.

Колебания показателя выявленных бесплодных животных в различных районах Ульяновской области составляют от 3,51 до 38,08 %. Такой значительный разброс в цифрах свидетельствует о ряде факторов, имеющих место в ряде хозяйств, а именно низкая квалификация врачей, осеменаторов, недостаточный контроль за состоянием маточного поголовья, приводящий к позднему выявлению бесплодных животных.

Изучение концентрации хорионнческого гопадотропина у коров

Содержание плацентарного гонадотропина в крови было изучено у 54 коров на разных сроках стельности и 6-ти бесплодных животных.

Исследуемые животные принадлежали ФГУП «Учебно-опытное хозяйство Ульяновской ГСХА».

Результаты исследований по изучению содержания хорионического гонадотропина в сыворотке крови коров представлены в диаграмме 1.

Как показали результаты наших исследований, в крови стельных коров установлено наличие хорионического гонадотропина. При этом уровень гормона менялся в зависимости от срока беременности. Так, среднее содержание за первый месяц стельности составило 4,6±0,83 МЕ/л. В течение второго месяца стельности концентрация держалась на уровне 4,1 - 5,0 МЕ/л (средний показатель - 4,47±0,15 МЕ/л). В последующий месяц наблюдалось увеличение количества ХГ до уровня 8,4±1,36 МЕ/л В дальнейшем зарегистрировано снижение уровня гормона до 6,2±0,21 МЕ/л в четыре месяца и 4,47±0,48 МЕ/л в пятимесячный срок беременности. Начиная с пятого месяца, отмечено изменения содержание гормона, выраженные в увеличении его концентрации до 5,92±0,21 МЕ/л. В дальнейшем количество хориогонина сохранялось на уровне 5,68±0,12 МЕ/л.

8,12

4,47

6,2

5,92 5,68

cfe-

--3,3—

1 мес 2 мес 3 мес 4 мес 5 мес 6 мес 7 мес 8 мес 9 мес сроки стельности

Диаграмма 1 - Содержание хориогонина в сыворотке крови стельных коров

С седьмого месяца стельности концентрация постепенно снижалась и перед отелом зафиксирован показатель 3,30А0,19 МЕ/л. В пробах сыворотки от бесплодных коров хорионический гонадотропин не обнаруживался.

Следовательно, качественное и количественное определение хориониче-ского гонадотропина может служить основанием для диагностики стельности у коров.

Разработка технологии изготовления иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров

Изысканию и разработке эффективных методов определения бесплодия и беременности у животных уделяется большое внимание, так как от этого во многом зависит своевременное осуществление мероприятий по профилактике бесплодия (А.Г. Нежданов, A.M. Силаев, 1977).

Наиболее перспективным является направление по разработке метода, обладающего высокой диагностической точностью, простотой в исполнении и низкой стоимостью.

Исходя из этого, перед нами была поставлена задача - разработать иммунологический экспресс - тест для качественного определения хорионического гонадотропина, аналогичный бытовым тестам на беременность, применяемым в медицине.

Разработанная технология изготовления диагностику»« включает три эта-

па:

1. Иммунизация кролика с целью получения гипериммунной сыворотки.

2. Мечение специфических антихориогонин - антител индикатором;

3. Контроль качества препарата (рис. 1).

Получение гипериммунной сыворотки

36 дней

Мечение антихориогонин антител

20,5 часов

Иммунизация 5-ти кратно с 7-ми дневными интервалами (29 дней)

Забор крови методом тотального обескровливания (через 7 дней после последней инъекции)

Определение титра гипериммук-ной сыворотки

Получение суспензии мелкодисперсных частиц ализарина (4 часа 45 минут)

Адсорбция антихориогонин антител на частицах индикатора ализарина (15 часов 45 минут)

Контроль качества препарата

Определение органолептических, физических свойств (цвет, запах, консистенция)

Изучение иммунологической специфичности

Рисунок 1 - Технология изготовления одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров

Разработанный препарат получил условное название «Одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров»

Контроль качества препарата осуществляли в соответствии с разработанной нормативно - технической документацией (ТУ, Инструкция по изготовлению).

Изучение диагностической эффективности одностадийного иммуноло! нческого теста на беременность и бесплодие коров

Апробацию одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров проводили в животноводческих хозяйствах Ульяновской области. Всего было обследовано 300 животных.

Постановка реакции осуществлялась следующим образом. В пробирки с пробами исследуемым материалом (сыворотка крови или моча) (5 мл) вносили по 2-4 капли (0,1 мл) тест - реактива. Содержимое пробирки перемешали вращательными движениями до его однородного окрашивания (10-15 сек). Затем пробы сыворотка крови помещали в термостат (на 6 часов), а пробы мочи оставляли на 1 час при комнатной температуре

Учет реакции осуществлялся визуально.

Читка реакции с сывороткой крови:

о положительная реакция - просветление содержимого пробирки и выпадение обильного осадка оранжевого цвета;

о отрицательная реакция - содержимое пробирки сохраняло гомогенную консистенцию с частичным выпадением осадка серого цвета.

Читка реакции с мочой:

о положительная реакция - содержимое пробирки окрашивалось в фиолетовый цвет, в последующем выпадение обильного осадка сиреневого или фиолетового цвета с просветлением надосадочной жидкости;

о отрицательная реакция - содержимое пробирки сохраняло изначальный оранжевый цвет и гомогенную консистенцию.

Результаты экспресс - диагностики сопоставляли с данными журнала учета искусственного осеменения и отелов и данными ректального исследования.

Анализ результатов апробации теста приведен в таблице 2 и диаграмме 2.

Таблица 2 - Результаты испытания одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров в животноводческих хозяйствах Ульяновской области

Наименование хозяйства Количество животных, гол Диагностическая точность в различные сроки после осеменения

1 месяц, % 2 месяц, % 3 месяца и более, %

ФГУП «Учебно-опытное хозяйство Ульяновской ГСХА» 110 96,0

ООО СХПУЗМВ «Волжанка» Ульяновского района 115 66,7 96,8 98,3

ООО «Агро-Н» Новоспасского района 75 71,4 92,3 97,7

Анализируя данные производственной апробации препарата «Одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров» в разных хозяйствах можно отметить следующее:

- диагностическая эффективность экспресс - метода при диагностике беременности у животных 1-ого месяца стельности в среднем находилась в пределах от 66,7 до 71,4%. При этом степень соответствия составляла от 75,0 до 87,5%;

96,8

98,3

96

71,4

'66,7

1 месяц

2 месяц

3 месяца и более

" максимальная эффективность " ■ минимальная эффективность

Диаграмма 2 - Диагностическая эффективность одностадийного иммунологического теста тест на беременность и бесплодие коров

- точность экспресс - метода во 2-й месяц стельности колебалась от 92,3 до 96,0%. В данном случае соответствие колебалось от 90,0 до 98,5%;

- наиболее высокая точность определения беременности у животных в 3 месяца и в более поздние сроки стельности составляла от 96,0 до 98,3%. Степень соответствия в этой группе от 96,1 до 99,2%.

Нами установлено, что за анализируемые годы оказались бесплодными 21867 коров, что составляет 17,4% общего исследованного поголовья дойных коров Ульяновской области. Наибольший удельный вес бесплодных коров (3238%) было в Инзенском и Карсунском районах. За 4 года хозяйствам области бесплодные коровы причинили ущерб в сумме 26,2 млн. рублей, в том числе за один год - по 6,56 млн. рублей. Значительный ущерб от бесплодия коров составлял в Ульяновском районе (4,1 млн. руб.), Мелекесском (3,7 млн. руб.), Майнском (2,8 млн. руб.) и Барышском (2,6 млн. руб.). Более низкие показатели экономического ущерба были получены в Теренгульском районе (180 тыс. руб.), Карсунском (186 тыс. руб.), Ст. Кулаткииском (122,4 тыс. руб.), Новома-лыклинском (148,8 тыс. руб.), в которых имелось наименьшее поголовье мо-

Экономическо« обоснование результатов исследования

лочных коров, хотя процент бесплодных коров в этих районах достаточно большой. Удельная величина экономического ущерба, причиненного бесплодием коров, колебалась в пределах от 42,1 руб. (Ст. Кулаткинском районе) до 457 руб. (Карсунском районе) и в среднем составила 209 руб.

Затраты при стандартном способе диагностики беременности и бесплодия в расчете на одну корову составили 60 руб. (утвержденная расценка на ректальное исследование коров, установлена ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана»).

Подготовка одной пробы на беременность и бесплодие экспресс-методом составляет 14,23 руб., что слагается из затрат на изготовление препарата и проведение теста.

При использовании нового метода диагностики бесплодия сокращается число бесплодных коров с 17,4% до 8,5%. За счет этого уменьшается ущерб в расчете на одну корову (209 руб. /17,4% х 8,5%) и составляет 102,1 руб.

Экономический анализ внедрения иммунологического метода для диагностики беременности коров в Ульяновской области показал, что за 4 года можно получить экономический эффект в сумме 19,16 млн. руб., в том числе за год - 4,79 млн. руб. В сельских районах области сумма экономического эффекта колеблется в пределах от 113,9 тыс. руб. (в Карсунском районе) до 2,83 млн. руб. (в Ульяновском районе). Во всех районах экономическая эффективность диагностики беременности и бесплодия коров достаточно высокая Она колеблется в пределах от 5,32 руб. до 19,67 руб. в расчете на каждый рубль затрат и в среднем по области составляет 10,73 руб.

Таким образом, внедрение иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров позволяет сократить значительные экономические потери сельскохозяйственных товара производителей и получить высокий экономический эффект.

выводы

1. Традиционные методы диагностики беременности, применяемые в хозяйствах Ульяновской области, не позволяют осуществлять эффективный мониторинг воспроизводства крупного рогатого скота. При этом проведенным в соответствующие сроки ректальным исследованием беременность подтверждается в среднем по области в 82,6 % случаев, соответственно количество бесплодных коров составляет 17,4% от предполагаемо стельных

2. Анализ крови коров в разных физиологических состояниях: беременных (на протяжении всего периода) и бесплодных, свидетельствует о том, что содержание хорионического гонадотропина в сыворотке крови коров в течение всего периода стельности колеблется от 3,30+0,19 до 8,42±1,36 МЕ/л в то время как у бесплодных животных гормон не обнаруживается. Максимальная концентрация хо-риогонина приходится на 3 месяц стельности и составляет 8,42±1,36 МЕ/л.

3 Разработана технология изготовления одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодия коров, основанного на качественном определении хорионического гонадотропина.

4. Производственные испытания установили высокую диагностическую точность разработанного иммунологического метода, которая составила при определении беременности коров 1-ого месяца после осеменения от 66,7 до 71,4%, в срок 2 месяца стельности - от 92,3 до 96%, в срок 3 и более поздние сроки стельности - от 96,0 до 98,3%. Разработанный метод диагностики стельности прост в исполнении, нетрудоемок и может быть успешно использован в производственных условиях.

6. Использование иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров позволяет сократить значительные экономические потери сельскохозяйственных товаропроизводителей и получить высокий экономический эффект, составляющий в среднем по региону 10,73 рублей на рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для диагностики беременности и бесплодия коров рекомендуется использовать разработанный в Ульяновской ГСХА одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров, регламентируемый следующими нормативно-техническими документами:

1. «Временным наставлением по применению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров»» (утверждено Управлением ветеринарии Ульяновской области от « 30 » мая 2008 г.);

2. Техническими условиями «Одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров» (ТУ 03-00-06) на опытную партию (согласованы Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждены ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.);

3. «Инструкцией по изготовлению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров» (в порядке широких производственных испытаний в период 2004 - 2007 г.г.) (согласована Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждена ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.).

4. Патентом на изобретение № 2298791 от 10 мая 2007г. <сМетод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок».

Основные положения диссертации опубликованы в следующих работах:

1. Богданова М.А. Ранняя диагностика беременности у крупного рогатого скота / М.А. Багманов, М.А. Богданова, И.И. Богданов II Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых Приволжского Федерального округа «Молодые ученые в решении региональных проблем АПК». - Самара: «Самарская ГСХА». - 2005. - С. 173-175.

2. Богданова М.А. Иммунологический метод диагностики стельности коров / М.А. Богданова, М.А. Багманов, И.И. Богданов // Материалы международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных в изменившихся условиях системы хозяйствования и экологии». - Ульяновск: «Ульяновская ГСХА». - 2005. -Т.2. - С. 149-152.

3. Богданова М.А. Усовершенствование методов ранней диагностики стельности коров / М.А. Богданова, М.А. Багманов, И.И. Богданов // Материалы всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие АПК - региональный опыт, проблемы, перспективы». - Ульяновск: «Ульяновская ГСХА». -2005.-4.5.-С. 294-296.

4. Богданова МЛ. Эффективность экспресс - диагностики и бесплодия коров / М.А. Богданова, М.А. Багманов, И.И. Богданов // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных». - Воронеж: ВНИИВИПФиТ. - 2005, -с. 33-36.

5. Богданова М.А. Иммунологический [ест для определения беременности и бесплодия коров / М.А. Багманов, М.А. Богданова, И.И. Богданов // Научные разработки и научно-консультативные услуги Ульяновской ГСХА: информационно-справочный указатель. - Ульяновск: «Ульяновская ГСХА». - 2007. - С 54-55.

6. Богданова М А. Результаты испытания нового метода диагностики стельности / М.А Богданова, М.А. Багманов, И.И. Богданов // Ветеринарная патология. -М.: Ветеринарный консультант. - 2007, - №3. - С. 39-41.

7. Богданова М.А. Эффективность нового метода лабораторной диагностики стельности / М.А. Богданова, М.А. Багманов, И.И. Богданов // Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА. - Ульяновск- «Ульяновская ГСХА».-2008.-Т.З.-С. 16-19.

8. Богданова М.А Изучение концентрации хорионического гонадотропина у стельных и бесплодных коров/ М.А. Багманов, М.А. Богданова, И.И Богданов // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана -Казань: «КГАВМим.НЭ. Баумана».-2008 - Т.191.-С 32-35.

9. Богданова М.А Методические рекомендации по лабораторной диагностике беременности и бесплодия коров / М.А. Багманов, М.А. Богданова, И.И. Богданов // Ульяновск- «Ульяновская ГСХА». - 2008. - 14 с.

10 Богданова М.А. Патент на изобретение № 2298791 Россия. Метод иммунологической диагностики т бесплодия коров и телок / Багманов М.А., Богданов ИИ., (Россия). - №2005106491/15; Заявлено 09 03 2005; Опубл. 20.08.2006,Бюл. № 13.-5 с.

Подписано в печать 22.09.2008 г. Формат 60x841/16 Бумага типографская. №1 Ризограф УГСХА.

Усл.печ.л. 1,0 Заказ 158. Тираж 100 экз. 432980, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Богданова, Марина Анатольевна

1. ВВЕДЕНИЕ .4

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Гормональный статус крупного рогатого скота в период стельности.10

2.2. Хорионический гонадотропин (характеристика, биологическое значение).18

2.3. Методы диагностики беременности и бесплодия коров.21

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы и методы исследований.".38

3.2. Результаты собственных исследований

3.2.1. Анализ ситуации по диагностике стельности и бесплодия коров в животноводческих хозяйствах Ульяновской области.42

3.2.2. Изучение концентрации хорионического гонадотропина у коров.44

3.2.3. Разработка технологии изготовления иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров.48

3.2.4. Изучение диагностической эффективности одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров.53

3.2.5. Статистическая оценка эффективности иммунологического метода диагностики беременности бесплодия коров.62

3.2.6. Экономическое обоснование результатов исследования

3.2.6.1. Расчет экономического ущерба, причиненного бесплодием коров в Ульяновской области.65

3.2.6.2. Учет затрат на диагностику беременности и бесплодия коров стандартным и новым способами.67

3.2.6.3. Определение экономической эффективности профилактики бесплодия коров за счет ранней его диагностики с использованием иммунологического теста.69

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии изготовления и применения иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров"

1.1 Актуальность темы

Интенсивное повышение продуктивности крупного рогатого скота зависит от условий кормления, содержания и правильной организации работы по воспроизводству.

Успешное осуществление мероприятий по борьбе с бесплодием коров на каждой животноводческой ферме немыслимо без строгого ветеринарно-зоотехнического контроля, позволяющего планировать на протяжении календарного года запуск, роды, осеменение животных и текущую внутри-фермскую работу; своевременно пополнять стадо молодняком, квалифицированно проводить выбраковку животных, непригодных к воспроизводству и т.д. Достижение этих целей возможно на основе регулярных диагностических исследований на беременность и бесплодие, а также ежедневного учета в маточном стаде основных групп животных: беременных, в послеродовом периоде, осемененных, но не проверенных на стельность и бесплодных.

В сегодняшний день существует ряд методов диагностики беременности. Эти методы неравноценны и отличаются рядом особенностей, большей или меньшей специфичностью и достоверностью. Они в разной степени сложны по технике выполнения и отличаются, друг от друга также по времени наступления реакции, что, без сомнения, имеет большое практическое значение (Е.И. Кватер, 1967; А.Н. Ахмадеев, 1969; К. Братанов, 1984; A.M. Семиволос, 1999; В.В. Руденко, 2000; Г.П. Дюльгер и др., 2003).

Из лабораторных, ценным диагностическим методом исследования являются радиоиммунологический (РИА) и иммуноферментный (ИФА) анализ, которые позволяют определять в биологических жидкостях (плазма, сыворотка, моча, амниотическая жидкость и т. п.) количественное содержание гормонов-регуляторов репродуктивной функции (Д.И. Санагурский и др., 1990; А.И. Сергиенко, 1991; О.Н. Преображенский, 2003; S. Degl Innocenti, P. Pollidori, 1988; R. Lombardelli et al., 1988; R.L. Nebel, 1988).

Путем внедрения технологии ранней диагностики беременности сельскохозяйственных животных методом ИФА можно избежать от 10 до 40 % экономических потерь от яловости Г.Н. Бурдов и др. (2001).

К сожалению, внедрение методов РИА и ИФА до настоящего времени не получило повсеместного распространения, что связано со сложностью организации специализированной лаборатории и дефицитом методической литературы по использованию результатов анализа в клинической практике.

В настоящее время разработаны методы определения содержания гормонов в крови, околоплодных водах, экскреции их с мочой. Рассматриваются значение гормонов, участвующих в развитии и поддержании беременности (плацентарный лактоген, эстрогены, прогестерон, тестостерон, кортизол, пролактин) (H.S. Choi et al. 1987; D. Tainturier, M. Zaied, 1989).

В медицине широкое применение получили тесты на беременность, основанные на определении в моче или сыворотке крови хорионического го-надотропина — гормона, продуцируемого хорионом уже с первых дней после имплантации зародыша. Тесты отличаются высокой воспроизводимостью результатов анализа, достоверностью, диагностической точностью и простотой исполнения. Диагностическая эффективность составляет до 98 % (С.В. Зяб-лицев и др., 2003).

При нормальном течении беременности ХГЧ появляется в моче на 5-7 сутки после зачатия. Концентрация гормона к этому сроку составляет 50 и более мМЕ/мл. Наивысшего уровня (до 200 МЕ/мл) уровень ХГЧ в моче беременной достигает в I триместре. ХГЧ определяется и в моче небеременных здоровых женщин, однако, его уровень не превышает 15 мМЕ/мл.

Чувствительность теста ХГ составляет 50 мМЕ/мл, что делает возможным выявление беременности в течение первой-второй недели после зачатия.

Диагностическая точность метода составляет 98 % (С.В. Зяблицев и др., 2003).

Несмотря на значительный объем информации, накопленный в медицине, ветеринарная наука на данный момент не располагает достаточными сведениями о гормональном фоне беременности, и в частности, уровне хо-рионического гонадотропина в организме животных в различные физиологические периоды и стадии беременности. Изучение данного вопроса позволит дополнить информацию о течении родового процесса у животных. Кроме того, актуальными являются исследования по разработке метода определения беременности у крупного рогатого скота, основанного на индикации хорио-нического гонадотропина в различных биологических жидкостях.

1.2 Цели и задачи исследований

Цель исследований - разработка технологии иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров, основанной на качественном определении плацентарного гормона - хорионического гонадотропина.

Поставленная цель решалась следующими задачами:

- провести мониторинг данных по диагностике беременности и бесплодия коров в животноводческих хозяйствах Ульяновской области;

- изучить уровень хорионического гонадотропина у коров на разных сроках беременности и у бесплодных животных;

- разработать технологию изготовления и применения иммунологического теста для определения беременности и бесплодия коров;

- изучить диагностическую эффективность разработанного метода и определить экономическую целесообразность его применения.

1.3 Научная новизна работы

Впервые получены данные об уровне хорионического гонадотропина в организме коров в различные сроки стельности.

Разработана технология изготовления и применения иммунологического теста для определения беременности и бесплодия коров, не имеющего аналогов в ветеринарии. Получены данные о его диагностической эффективности. Новизна полученных данных подтверждена патентом на изобретение № 2298791 от 10 мая 2007г. «Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок».

1.4 Практическая ценность

Разработан и прошел производственную апробацию экспресс-метод, позволяющий в условиях животноводческих ферм в достаточно короткие сроки и с высокой степенью достоверности устанавливать или исключать беременность коров.

Обоснованные научно-практические результаты вошли в основу следующих нормативно-технических документов:

- Временное наставление по применению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров (утверждено Управлением ветеринарии Ульяновской области от « 30 » мая 2008 г.);

- Технические условия «Одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров» (ТУ 03-00-06) на опытную партию (согласованы Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждены ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.);

- Инструкция по изготовлению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров (согласована Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждена ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.).

1.5 Основные положения, выносимые на защиту

- применяемые в животноводческих хозяйствах Ульяновской области методы диагностики беременности и бесплодия коров не позволяют осуществлять эффективный контроль за воспроизводством стада крупного рогатого скота;

- получены данные, свидетельствующие об уровне хорионического го-надотропина на разных сроках беременности коров;

- разработана технология изготовления и применения одностадийного иммунологического теста для определения беременности и бесплодия коров;

- производственные испытания установили высокую диагностическую точность и экономическую эффективность разработанного иммунологического метода определения беременности и бесплодия коров.

1.6 Апробация материалов исследований

Основные материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных отчетных научно-теоретических и методических конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Ульяновской ГСХА с 2004 по 2007 г.г. и представлялись на следующих научных конференциях:

- межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых Приволжского Федерального округа «Молодые ученые в решении региональных проблем АПК» (Самара, 2005);

- международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных в изменившихся условиях системы хозяйствования и экологии» (Ульяновск, 2005);

- всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие АПК - региональный опыт, проблемы, перспективы» (Ульяновск, 2005);

- международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, ВНИИВИПФиТ, 2005);

- международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования», посвященной 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008).

Результаты научных исследований по разработке технологии иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров включены в Реестр научных разработок Ульяновской ГСХА и отмечены призовыми местами региональных конкурсов:

- первое место в областном конкурсе «Лучший инновационный проект», приоритетное направление «Сельское хозяйство» (Ульяновск, 2007);

- третье место в областном конкурсе «Лучшее техническое решение, изобретение, полезная модель по итогам 2006 года» в номинации «Агрономия, медицина, ветеринария» (Ульяновск, 2007).

1.7 Публикации

По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 7 научных статей, из которых 2 - в изданиях, входящих в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора и кандидата наук».

1.8 Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 111 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы и приложения.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Богданова, Марина Анатольевна

5 ВЫВОДЫ

1. Традиционные методы диагностики беременности, применяемые в хозяйствах Ульяновской области, не позволяют осуществлять эффективный мониторинг воспроизводства крупного рогатого скота. При этом проведенным в соответствующие сроки ректальным исследованием беременность подтверждается в среднем по области в 82,6 % случаев, соответственно количество бесплодных коров составляет 17,4 % от предполагаемо стельных.

2. Анализ крови коров в разных физиологических состояниях: беременных (на протяжении всего периода) и бесплодных, свидетельствует о том, что содержание хорионического гонадотропина в сыворотке крови коров в течение всего периода стельности колеблется от 3,30±0,19 до 8,42±1,36 МЕ/л в то время как у бесплодных животных гормон не обнаруживается. Максимальная концентрация хориогонина приходится на 3 месяц стельности и составляет 8,42±1,36 МЕ/л.

3. Разработана технология изготовления одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодия коров, основанного на качественном определении хорионического гонадотропина.

4. Производственные испытания установили высокую диагностическую точность разработанного иммунологического метода, которая составила при определении беременности коров 1-ого месяца после осеменения от 66,7 до 71,4%, в срок 2 месяца стельности - от 92,3 до 96,8%, в срок 3 и более поздние сроки стельности - от 96,0 до 98,3%. Разработанный метод диагностики стельности прост в исполнении, нетрудоемок и может быть успешно использован в производственных условиях.

5. Использование иммунологического теста для диагностики беременности и бесплодия коров позволяет сократить значительные экономические потери сельскохозяйственных товара производителей и получить высокий экономический эффект, составляющий в среднем по региону 10,73 рублей на рубль затрат.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для диагностики беременности и бесплодия коров рекомендуется использовать разработанный в Ульяновской ГСХА одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров, регламентируемый следующими нормативно-техническими документами:

1.«Временным наставлением по применению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров»» (утверждено Управлением ветеринарии Ульяновской области от « 30 » мая 2008 г.);

2. Техническими условиями «Одностадийный иммунологический тест на беременность и бесплодие коров» (ТУ 03-00-06) на опытную партию (согласованы Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждены ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.);

3. «Инструкцией по изготовлению одностадийного иммунологического теста на беременность и бесплодие коров» (в порядке широких производственных испытаний в период 2004 - 2007 г.г.) (согласована Управлением ветеринарии Ульяновской области и утверждена ректором ФГОУ ВПО «Ульяновская ГСХА» от « 15 » мая 2008 г.).

4. Патентом на изобретение № 2298791 от 10 мая 2007г. «Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Богданова, Марина Анатольевна, Ульяновск

1. Амарбаев, А.-Ш-М. Биологическая стимуляция функции воспроизводства у коров / А.-Ш-М. Амарбаев, Б.Х. Аббасов Алма-Ата: Наука, 1982. - С. 26-29.

2. Афанасьева, А.И. Влияние уровня гормонов на продуктивные показатели коров красной степной породы при разной структуре рациона / А.И. Афанасьева, В.Г. Огуй, С.А. Галдак // Зоотехния. 2007. - №8. - С. 17-18.

3. Ахмадеев, А.Н. Некоторые методы диагностики беременности и бесплодия и их практическое значение в организации воспроизводства скота / А.Н. Ахмадеев: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Казань, 1969. - 24с.

4. Багманов, М.А. Роль микробного фактора в этиологии гинекологических болезней коров, их профилактика и терапия / М.А. Багманов: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Казань, 1998, - 44 с.

5. Бакл, Дж. Гормоны животных / Дж. Бакл. М.: Мир, 1986. - 88 с.

6. Бек, У. "Хорионический гонадотропин" 2006 http://gynaecolog.webarena. ru/endocrinology/endocrinology (5 Сентября 2007).

7. Белов, Ф.В. Применение радиоиммунологического метода определения прогестерона в молоке и сыворотке крови для ранней диагностики стельности коров / Ф.В. Белов, А.С. Косенко, Г.Г. Козлов. М.: Изд.-во MB А им. К.И. Скрябина, 1988. - 27 с.

8. Братанов, К. Теория и практика воспроизведения животных / К. Братанов, X. Бальбеж, 3. Вежник и др. М.: Колос, 1984. - 272 с.

9. Бриль, Э.Е. Гормоны и воспроизводство крупного рогатого скота / Э.Е. Бриль. Минск: Ураджай, 1979. - 86 с.

10. Бурдов, Г.Н. Ранняя диагностика стельности методом ИФА / Г.Н. Бур-дов, Е.И. Марасинская, С.А. Селезнев, Е.А. Загрегина // Ветеринарный врач. 2001. —№3. - С. 30-31.

11. Власов, С.А. Фетоплацентарная недостаточность / С.А. Власов. Воронеж, 2001.-С. 60-69.

12. Говалло, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло. М.: Медицина, 1987.-С. 155-165.

13. Гордон, А. Контроль воспроизводства сельскохозяйственных животных / А. Гордон. М.: Агропромиздат, 1988. - 415 с.

14. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих / Пер. с англ. / Под. Ред. Остина К. и Шорта Р. М., 1987. - 305 с.

15. Дегтярев, В.П. Метод изолированного рога матки у жвачных / В.П. Дегтярев // Известия Академии наук Казахской ССР. Алма-Ата, 1967. - № 6.-С. 81-83.

16. Дегтярев, В.П. Этиопатогенез и коррекция нарушений репродукции у коров / В.П. Дегтярев, К.В. Леонов, А.И. Клименко, И.М. Дунин // Методические рекомендации. Москва, 2006 - 15 с.

17. Димитриев, В.Б. Концентрация прогестерона в крови коров в цикле и при беременности / В.Б. Димитриев, Т.Е. Пономарева // Бюл. ВНИИРГЖ. -1974. -Вып.З. С. 40 -43.

18. Димитров, Д.Я. Хориальный гонадотропин человека / Д.Я. Димитров /Пер. с болг. И.П. Папазовой. -М.: Медицина, 1979. 143 с.

19. Дюльгер, Г.П. Ультразвуковая диагностика ранних сроков беременности и бесплодия у коров / Г.П. Дюльгер, И.В. Огородникова, П.А. Ёлкин // Ветеринар. 2003.-№3.-С. 14-17.

20. Животков, Х.И. Определение стельности у коров / Х.И. Животков. -М.: Колос, 1965. 61 с.

21. Журбенко, A.M. Гормоны и продуктивность животных / A.M. Журбенко. Киев: Урожай, 1983. - 128 с.

22. Завадовская, Е.В. Гормональный метод диагностики стельности у коров / Е.В. Завадовская // Проблемы зоотехнической эндокринологии. 1935. - Т. 2. - С. 28-47.

23. Зверева, Г.В. Гормональные взаимодействия в процессе восстановления эстрального цикла у коров в послеродовый период / Г.В. Зверева, А.Т. Лебедев, Б.В. Липинский и др. // Доклады ВАСХНИЛ. 1981. - №1. - С. 3336.

24. Зипер, А.Ф. Воспроизводство и селекция сельскохозяйственных животных / А.Ф. Зипер. М.: Издательство ACT. - 2004. - 77 с.

25. Зяблицев, С.В., Яковлева, Э.Б., Арбузова, С.В., Сорокатая, Э.В., Никоненко, М.И. «Гормонодиагностика патологии беременности» 2003 http://www.primer.ru (20 июня 2004).

26. Ибрагимов, Э.К. Определение стельности и причин яловости коров / Э.К. Ибрагимов. Фрунзе: Киргизгосиздат, 1964. - 47 с.

27. Карпов, В.А. Акушерство и гинекология мелких домашних животных / В.А. Карпов. -М.: Росагропромиздат, 1990. 288 с.

28. Кватер, Е.И. Гормональная диагностика и терапия в акушерстве и гинекологии / Е.И. Кватер. М.: Медицина, 1967. - С. 176-178.

29. Киршенблат, Я.Д. Практикум по эндокринологии / Киршенблат Я.Д. — М.: Высшая школа, 1969. С. 220 - 233.

30. Клопов, М.И. Гормоны. Строение, биологическая роль и взаимосвязь с хозяйственными показателями сельскохозяйственной птицы и крупного рогатого скота / М.И. Клопов, Л.Ю. Киселев, В.Т. Чеботарев. М., 1983. - С. 16-59.

31. Коляков, Я.Е. Ветеринарная иммунология / Коляков Я.Е. М.: Агро-промиздат, 1986. - С. 238-239.

32. Коноплев, В.В. Диагностика беременности и бесплодия у коров / В.В. Коноплев. Челябинск: Южно-Уральское кн. изд., 1968. - 74 с.

33. Корчак, Г.К. Ранне розшзнавания Тшьност1 i неплщнос™ KopiB / Г.К. Корчак. Киев: Держсшьгоспвидав УРСР, 1959. - 90 с.

34. Крупко А.Я. Гормональные методы диагностики беременности / А.Я. Крупко. Л.: Медиз, 1956. - С. 17-39.

35. Кънчев, Л. Радиоиммунен метод за диагностика на ранната беремен-ност и функционалната активност на яичниците / Л. Кънчев // Ветер. Сб. — 1988.-Вып. 86. -№3. С. 38-39.

36. Леонов, К.В. Возможность коррекции репродуктивной функции у коров при различных состояниях естественной резистентности / К.В. Леонов: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Москва: МГАВМиБ, 2005, - 42 с.

37. Лободин, К.А. Плацента активное начало препарат для коррекции воспроизводительной функции коров / К.А. Лободин // Ветеринария. - 2006. -№7. -С.38-41.

38. Логвинов, Д.Д. Беременность и роды у коров / Д.Д. Логвинов. — М.: Урожай, 1975.-240 с.

39. Методика Департамента Министерства сельского хозяйства Российской Федерации / Ю.Е. Шорохин, И.Н. Никитин, П.А. Чулков, В.Ф. Воско-бойник.-М, 1997.-20 с.

40. Муруев, А.В. Гормональный статус молочных коров / А.В. Муруев, Г.А. Кононов, Г.С. Степанов, М.Е. Коган // Ветеринария. 1985. - №7. — С. 47-48.

41. Мышкин, Н.Ф. Определение небеременного состояния у коров / Н.Ф. Мышкин. М.: Новая деревня, 1925. - 26 с.

42. Мышкин, Н.Ф. Диагностика беременности и бесплодия сельскохозяйственных животных / Н.Ф. Мышкин. М. - Л, 1929. - 55 с.

43. Мышкин, Н.Ф. Диагностика беременности и бесплодия сельскохозяйственных животных / Н.Ф. Мышкин. М. — Л, 1930. - 40 с.

44. Мышкин, Н.Ф. Наружные методы определения беременности сельскохозяйственных животных / Н.Ф. Мышкин. М.: Сельхозгиз, 1936. - 38 с.

45. Мышкин, Н.Ф. Акушерство и гинекология сельскохозяйственных животных / Н.Ф. Мышкин. М.: Сельхозгиз, 1937. - 456 с.

46. Мышкин, Н.Ф. Наружные методы определения беременности сельскохозяйственных животных / Н.Ф. Мышкин. М.: Сельхозгиз, 1938. - 23 с.

47. Мышкин, Н.Ф. О необходимости пересмотра клинического исследования животных / Н.Ф. Мышкин // Ветеринария. 1943. - №7. - С. 27-30.

48. Назаров, А.Т. Введение в клиническую биохимию плаценты / А.Т. Назаров, А.Н. Чен. Алма-Ата, 1984. - С. 101.

49. Научные документы кафедры организации и экономики ветеринарного дела ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» / И.Н. Никитин, В.А. Апалькин. М, 2006. - 8 с.

50. Нежданов, А.Г. Гормональные изменения в организме коров во время беременности, родов в норме и при акушерской патологии / А.Г. Нежданов, С.А. Власов // Сельскохозяйственная биология. — 1987. — №6. С. 94-99.

51. Нежданов, А.Г. Содержание прогестерона и эстрадиола в крови стельных коров / А.Г. Нежданов, С.А. Власов, Т. Пикалова // Ветеринария. — 1989. № 9. - С. 47-49.

52. Нежданов, А.Г. Эндокринная функция яичников и щитовидной железы у коров после родов / А.Г. Нежданов, К.А. Лободин // Ветеринария. 2005. -№3. - С. 36

53. Нежданов А.Г. Электрометрический метод в диагностике беременности и бесплодия у коров / А.Г. Нежданов, A.M. Силаев // Ветеринария. -1977. № 10.-С. 82-83.

54. Нежданов А.Г. Гормональная регуляция яичников в течение полового цикла / А.Г. Нежданов, Н.А. Соловьев // Ветеринария. 1986. - №4. - С. 5658.

55. Никитин, И.Н. Организация и экономика ветеринарного дела / И.Н. Никитин. -М.: ВЛАДОС, 1999. 382 с.

56. Никитин, В.М. Справочник серологических реакций / В.М. Никитин. — Кишинев: Штиница, 1977. -208 с.

57. Обыденнов, В.А. Гормоны в жизни животных / В.А. Обыденное. М.: Колос, 1965.-207 с.

58. Падучева, А.Л. Гормональные препараты в животноводстве / А.Л. Па-дучева. М., Россельхозиздат, 1979. - 231 с.

59. Паршин, А.А. Гормоны. Применение гормональных препаратов в ветеринарии. Вятская государственная сельскохозяйственная академия / А.А. Паршин, И.Г. Конопельцев, А.Ф. Сапожников. Киров, 1998. - С. 103-105.

60. Петров, A.M. Динамика основных иммунологических параметров телят-трансплантантов / A.M. Петров, Е.С. Воронин, М.М. Серых. М.: МГАВМиБ, 1999.-184 с.

61. Петров, В.А. Основы электропунктурной рефлексотерапии крупного рогатого скота / В.А. Петров, В.Ф. Мусиенко, А.А. Иванников. Су-мы:Казацкий вал, 1997. - С. 53-54.

62. Пивко, Ю. Формирование эмбрионов коров в доимплантационных стадиях при стимуляции гонадотропными гормонами / Ю. Пивко, В. Копеч-ны, А. Овчинников // Сельскохозяйственная биология. 1989. - № 4. - С. 3036.

63. Плахотин, М.В. Иглотерапия в ветеринарии / М.В, Плахотин. — М.: Колос, 1966.-264 с.

64. Пономарева, Т.Е. Некоторые особенности гормональной функции желтого тела у коров / Т.Е. Пономарева: Автореф. дис. . кан. биол. наук. — Л., 1981.-11 с.

65. Попков, В.П. Электродиагностика стельности коров / В.П. Попков // Ветеринария. 1965. - №11. - С. 30-31.

66. Преображенский, О.П. Современные методы диагностики и бесплодия животных / О.П. Преображенский // Ветеринария. 2003. - № 7. - С. 32-33.

67. Радченков, В.П. Определение гормонов в крови молодняка крупного рогатого скота и его гормональный статус / В.П. Радченков, Е.В. Бутров и др. //Методическое указание. Боровск, 1980.— С. 17-18.

68. Резников, А.Г. Методы определения гормонов / А.Г. Резников. — Киев: Наук думка, 1980. С. 110-111.

69. Романова, Н.Г. Эндокринная система. Гормоны и адаптация. Учебное пособие для студентов высших учебных заведений / Н.Г. Романова, И.М. Воронин. Тамбов: Из-во ТГУ им. Г.Р. Державина; ТРО Вольного эконом, общества России, 2003. - 135 с.

70. Руденко, В.В. Разработка моделей и алгоритмов автоматизированной диагностики ранних сроков беременности животных /В.В. Руденко: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Курск, 2000. - 18 с.

71. Савченко, О.Н. Гормоны яичника и гонадотропные гормоны / О.Н. Савченко // Медицина. Л., 1967. - 269 с.

72. Семиволос, A.M. Радиоэлектронные способы коррекции сократительной функции матки и диагностики беременности у коров / A.M. Семиволос: Автореф. дис. . докт. вет. наук. — Воронеж, 1999. — 46 с.

73. Сергиенко, А.И. Гормоны и воспроизводительная функция сельскохозяйственных животных / А.И. Сергиенко. М.: ВНИИТЭИагропром, 1991. — 36 с.

74. Серых, М.М. Основы молекулярной эндокринологии / М.М. Серых, В.В. Зайцев, Н.А. Кленова, A.M. Петров, В.Г. Подковкин, М.Ю.Языков. -Самара, 2004. 144 с.

75. Сидер, А.Х. Клинико-морфологические показатели репродуктивных органов при ранней экспресс диагностики беременности методом УЗИ у коров, кобыл и овец / А.Х. Сидер: Автореф. дис. . канд. вет. наук. М., 2000. -20с.

76. Соколов, Н.И. Определение беременности сельскохозяйственных животных / Н.И. Соколов. Л.: Колос, 1971. - 46 с.

77. Соколовская, И.И. Иммунология воспроизведения животных / И.И. Соколовская, В.К. Милованов. -М.: Колос, 1981. С. 198-210.

78. Солопаева, И.М. Хорионический гонадотропин в биологии и медицине / И.М. Солопаева. Н. Новгород: Изд-во ННГУ им. Н.И. Лобачевского, 2000. -С. 15-21.

79. Солопаева, И.М. «Роль хорионического гонадотропина в структурно-функциональном обеспечении онтогенеза млекопитающих в норме и патологии» 2003 http://www.medicum.nnov.ru (12 мая 2007).

80. Солопаева, И.М. Проблемы нейрогормональной метаболистической регуляции иммунной системы в клинике / И.М. Солопаева, Н.И. Шарова //Сб. научных трудов. -ГМИ. Горький, 1988. - С. 91-97.

81. Солсбери, Г.У. Теория и практика искусственного осеменения коров в США / Г.У. Солсбери, Н.Л.Ван-Демарк / Пер. с англ. Березневой О.А. М.: Колос, 1966.-С. 14-16.

82. Сорокин, В.И. Концентрация прогестерона у помесных телок при беременности / В.И. Сорокин, В.Н. Доронин // Современные методы совершенствования мясного скота: Сб. научных трудов— Воронежского СХИ, 1984.-С. 64-69.

83. Спрингович, Н.О. Ранняя диагностика стельности по содержанию прогестерона в молоке и крови / Н.О. Спрингович // Молочное и мясное скотоводство. 1979. - №12. - С. 40.

84. Студенцов, А.П. Клинические методы диагностики беременности сельскохозяйственных животных / А.П. Студенцов. — Казань, Таткнигоиздат. 1947.-102 с.

85. Студенцов, А.П. Диагностика беременности и бесплодия сельскохозяйственных животных / А.П. Студенцов. М.: Сельхозгиз, 1949. - 131 с.

86. Студенцов, А.П. Диагностика беременности и бесплодия сельскохозяйственных животных / А.П. Студенцов. М.: Сельхозгиз, 1950. - 134 с.

87. Студенцов, А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология / А.П. Студенцов. М.: Сельхозгиз, 1953. - 502 с.

88. Студенцов, А.П. Клиническая диагностика беременности и бесплодия коров / А.П. Студенцов. Казань, Таткнигоиздат, 1961. - 33 с.

89. Сысоев, А.А. Физиология сельскохозяйственных животных / А.А. Сысоев. -М.: Колос, 1980. 148 с.

90. Сысоев, А.А. Метод ускоренного воспроизводства породного скота / А.А. Сысоев, М.П. Рязанский. Курск: Курское книжное издательство, 1963. -С. 86-101.

91. Тарасевич, А.Ю. Бесплодие сельскохозяйственных животных / А.Ю. Тарасевич. М. Сельхозгиз, 1936. - 316 с.

92. Флегматов, Н.А. Опыт использования самцов биостимуляторов в борьбе с яловостью и бесплодием коров и телок / Н.А. Флегматов, B.C. Ши-пилов // Повышение плодовитости с.-х. животных: Сб. научных трудов - М.: Сельзозгиз, 1959.-С. 14-29.

93. Хомин, С.П. Роль прогестерона в реализации процессов размножения и его применения при бесплодии коров и телок / С.П. Хомин: Автореф. дис. . докт. вет. наук. Львов, 1985.-33 с.

94. Цирельников, Н.И. Гистофизиология плаценты человека / Н.И. Ци-рельников. Новосибирск: Наука, 1980. - С. 94-99.

95. Цондек, Б. Гормоны яичника и передней доли гипофиза / Б. Цондек / Пер. с нем. П. А. Бунд ером и А. Л. Падучевой. М.: Сельхозгиз, 1938. - 417 с.

96. Шипилов, B.C. Физиологические основы профилактики бесплодия коров / B.C. Шипилов. М.: Колос, 1977. - 338 с.

97. Юдаев, Н.А. Биохимия гормонов и гормональной регуляции / Н.А. Юдаев, С.А. Афиногенова, А.А. Булатов и др. М.: Наука, 1976. - С. 77- 84.

98. Antol, Т. Az inszeminalas idujen velt tejmintak alasconu vagy magas pro-geszteronarteke es a vemhessles kuzutti kapesolat vizsgalata szarvasmarhaalloma93nykkan / Т. Antol, S. Faluhelyi, I. Shabo // Magyar allatow Lapia, 1988. V. 43. -№9.-P. 539-541.

99. Antol, T. Tehenk inszeminosa idejen es azt kuvetto 21, hapon vett te-jmintoc prodeszterontartalma valomint a vemhessles kuzutti usszefiigges vizsgo-lata / T. Antol, I. Shabo // Magyar allatow Lapia, 1989. V. 44. - №4. - P. 221224.

100. Arnstadt, K.I. Enzyme-immunoassay for determination of progesterone in milk from cows / K.I. Arnstadt, W.F. Cleere // J. Reprod. Fert., 1981. V.62, - P. 173-180.

101. Badtram, G.A. Factors influencing the accuracy of early pregnancy detection in cattle by real time ultrasound of uterus / G.A. Badtram, J.D. Gaine, C.B. Thomas, W.T.K. Bosu // Theriogtnology, 1991. V. 35. - P. 1153-1167.

102. Chaffaux, S. Transrectal real-time ultrasound scanning for diagnosing pregnancy and for monitoring embryonic mortality in dairy cattle / S. Chaffaux, G.N.S. Reddy, F. Valon, M. Thibier // Anim. Repr. Sci, 1986. V. 10. - P. 193200.

103. Chaffaux, S. Evoluation de 1'image echographique du produit de conception chez la vache / S. Chaffaux, F. Valon, J. Martinez // Bull. Vet. Fr, 1982.-V. 55.-P. 213-221.

104. Choi, H.S. Pregnancy diagnosis in sows by estimation of oestrogens in blood, urine or faeces /H.S. Choi, E. Kiesenhofen, H. Gantner // Anim. Reprod. Sci, 1987.-V. 15, -№3. P. 209-216.

105. Choma, J. Rektalna palpacia a progesteronovy test pri skorey diagnostike gravidity / J. Choma, J. Elecko, A. Jusikova // Zb. ved. Prac. Ustavu Exper. Veter. Med. U Kosiciach, 1988. №5.-S. 151-157.

106. Cing, J. Cambgidge veterinary sciences Cambridge. Ovuchech TM: bovine fertility diagnostics technical manual / J. Cing. Cambridge, 1987. - 33 p.

107. Cowie, A.T. Pregnancy diagnosis tests: A review, Commonwealth Agr. Bur. Joint Pub / A.T. Cowie. Edinburgh, 1948. - 13 p.

108. Curran, S. Ultrasound appearance of the bovine conceptus from days 10 through 20 / S. Curran, R.A. Pierson, O.J. Ginther // J. Am. Vet. Assoc., 1986. -Vol. 189.-P. 1295-1302.

109. Darling, G. Seguential changes in plasma progesterone in the cow during the oestrous cycle, pregnence, parturition and post-partum / G. Darling // Canad. J. Anim. Sci, 1972. V. 52. - №4. - P. 645-658.

110. Degl Innocenti, S. La diagnosi di gravidanza nelte pecore / S. Degl Innocenti, P. Pollidori // Inform, zootecn, 1988. V. 35. - №5. - P. 80-83.

111. Edvist, L.E. Peripheral plasma levels of oestrogens and progesterone during late bovine pregnancy / L.E. Edvist, L. Ekman, B. Gustafsson // Acta Endocr. (Copenh.), 1973.-V.72.-P. 81-88.

112. Elsalsser, F. Der Progesterontest ein Beispill fur die Entwicktung hormo-nalea diagnostisher und progrostisher Verhatren fur die Tierproduktion / F. Elsals-ser, D. Smidt // Landssanforsch. Volkendore, 1988. -Bd. 39. -№4. S. 217-223.

113. Erb, R.E. Hormone induced lactation in the cow. IV. Relationships between lactational performance and hormone concentrations in blood plasma / R.E. Erb, P.V. Malven, E.L. Monk, T.A. Milet // J. Dairy Sci, 1976. V.59. - P. 14201428.

114. Esslemont, D. Pregnancy testing gets thumbs-up / D. Esslemont // Livestock Farming, 1982. V. 20, - №7. - P. 40.

115. Etches, R. A methods of diagnising pregnancy early using the concentration of progesterone in milk / R. Etches, E. Gowan // Notes on Agr, 1981. V. 17. -23 p.

116. Ford, S.P. Uterine blood flow of cows during the oestrus cycle and early pregnancy: effect of the conceptis on the uterine blood / S.P. Ford, J.R. Chenault, S. E. Enchternkamp // Supply. J. Reprod. Fert, 1979. №56. - P. 53-62.

117. Glencross, R.G. Concentrations of oestradiol-17p, oestrone and progesterone in jugular venous plasma of cows during the oestrous cycle and early pregnancy / R.G. Glencross, J.B. Munro, B.E. Senior et al. // Acta. Endocr., 1973. -№73.-P. 374.

118. Grega, T. Oznaczanie poziomu progesterone w mleku jako nainowsza me-toda diagnozovania ciazy u krow / T. Grega // Przeglad hodowlany, 1977. V. 45. -№18.-P. 16-17.

119. Gunzler, O. Praktishe Erfahrungen mit der Progesteron-bestimmung in der Milch zur Erfassung der Fertilitatszustad bei Kuh / O. Gunzler, L. Korndurfer, H. Lonoff//Tier. Uns., 1975.-Bd. 30.-№3. S. 111-118.

120. Hackett, A.J. Use oil enzyme-linked immunosorbent assay ior measurement oil bovine serum and milk progesterone without extraction / A.J. Hackett // J. Dairy Sc, 1986.-V. 69.-№3.-P. 818-824.

121. Hansel, W. Ovulation control in cattle / W. Hansel, W.E. Beal // Anim. Reprod. В ARC Symp, 1979. P. 91-110.

122. Hanzen C. Use of transrectal B-mode ultrasound imaging in ' bovine pregnancy diagnosis / C. Hanzen, B. Delsaux // Vet. Rec., 1987. V. 121. - P. 200202.

123. Hariadi, M. Ussing milk progesterone to study reproductive activity in dairy cows calving in different seasons / M. Hariadi, G.J. Sowyer, P.E. Williamson // Anim. Prod. Australia, 1989. №17. - P. 202-205.

124. Hasur, F. Detection of gonadotropin in rabbit blastocyst before implantation / F. Hasur, B. Saxsend // Science, 1974. V. 183. - №4149. - P.424-445.

125. Hearp, R.B. Metabolic clearance rate production and mammary uptake and metabolism of progesteron in cows / R.B. Hearp, A. Henville, J.L. Linsell // J. Endocrinol., 1975. № 66. - P. 239-247.

126. Henricks, D.M. Plasma estrogen and progesteron levels in cows prior to and during estrus / D.M. Henricks, J.F. Dickey, J.R. Hill // Endokrinol, 1971. -№89.-P. 1350-1355.

127. Henricks, D.M., Serum luteinizing hormone and plasma progesterone levels during the estrous cycle and early pregnancy in cows / D.M. Henricks, J.F. Dickey, G.D. Niswender//Biol. Reprod., 1970. №2. - P. 346-351.

128. Hoffman, В. Determination of progesterone in milk applied for pregnancy diagnosis in the cow / B. Hoffman, R .Hamburger, O. Gunzler et al. // Therio-genology, 1974. №2. - P. 21-26.

129. Hoffman, B. Fertility control in cattle by determining progesterone in milk and milk-fat / B. Hoffman E. Tattenberger, W. Hollwich // Control of reproduction in the cows. Galway, C.E.C., Luxemburg, 1978. P. 562-575.

130. Holf, J.A. Lack of honadotropic activity in the rabbit blastocyst prior to implantation / J.A. Holf, W.F. Heise, S.M. Wilson et al. // Endocrynology, 1976. -Vol. 98.-№4.-P. 904-909.

131. Huff, B.B. Metabolism in vitro of acetate and certain steroids by rabbit blastocysts / B.B. Huff, K.B. Fik-hes // J. Reprod. Fertil, 1966. Vol.11. - №1. -P. 57-63.

132. Hughes, E.A. Practical uses of ultrasound in earli pregnancy in cattle / E.A. Hughes, D.A.R. Davies // Vet. Rec, 1989. V. 124. - P. 456-458.

133. Hytten, E. The physiology of human pregnancy, 2 Auf, Blakwell / E. Hyt-ten, J. Leitch. Oxford, 1971. - P. 75-80.

134. Ivkov, V. Use of ultrasound in dairy cattle reproduction / V. Ivkov, S. Veselinovic, G. Mickovski et al. // Proc. 12 th Int. Cong. Anim. Reprod. & Al., 1992.-V. l.-P. 141-143.

135. Jacgout, R. Hormones and liver metabolism in the foetus / R. Jacgout // Proc.2 and Intern. Congr. Endocrin. Experta Medica Foundat. Series, 1964. V. 83.-P. 790-793.

136. Karagiannidis, A.K. Factors affecting the accuracy of early pregnancy diagnosis in by RIA of progesterone in milk / A.K. Karagiannidis // Bull. Hellen. Veter. Med. Soc, 1990. -V. 41, -№2. P. 84-99.

137. Kato, K. Enzyme immunoassay in rapid progress / K. Kato, Y. Hamagu-chy, S. Okawa et al.// Lancet, 1977. №8001. - P. 40.

138. Kocsky, L. A szarvasmarha vemhessegenek korai megallapitasa rectalis vizsgalattal / L. Kocsky // Magyar allatorv. Lapja, 1981. Roc. 36, - № 5. - S. 339-342.

139. Lamond, D.R. The role of the bovine practitioner in synchronisation and twinning in the cattle / D.R. Lamond // Bovine Practit., 1973. №8. - P. 2-8.

140. Lombardelli, R. La determinazione radioimmunologica del progesterone / R. Lombardelli, G. Pallavicini, G. Bertoni // Selez. Veter., 1988. An. 29, - №5. -P. 839-849.

141. Lukaszewska, J. Corpus luteum maintenance during early pregnancy in the cow / J. Lukaszewska, W. Hansel // J. Rprod. Fert., 1980. V.59, - P. 485-493.

142. Manetti, O. Dal latte la diagnosi di gravidanzi a 22 diorni / O. Manetti // Informatore zootecnico, 1979. Vol. 26. - № 6. - P. 15-16.

143. Mckerns, K.W. Structure and function of the gonadotropins / K.W. Mckerns. New York: Plenum press, 1978. - 628-p.

144. Moore, N.W. The control of time of oestrus and ovulation and the induction of superovulation in cattle / N.W. Moore // Austr. J.Agric.Res., 1975. №26 -P. 295-304.

145. Nebel, R.L. On-farm milk progesteron tests / R.L. Nebel // J. Dairy. Sci, 1988.-Vol. 71.- №6.-P. 1682-1690.

146. Ormsettero, S. J. Metoder for drektighetsundersokelse av vare husdyr / S. J. Ormsettero // Nor. veterenaetid sskr., 1988. - V. 100, - №2. - P. 103-111.

147. Pennington, J.A. Pregnancy diagnosis in dairy cattle by progesterone concentration in mile / J.A. Pennington, L. Spahrs, J.R. Lodge // J. Dairy. Sci, 1976. -№59.-P. 15-28.

148. Pierson, R.A. Uitrasography for detection of pregnancy and stuudi of embryonic development in heifers / R.A. Pierson, O.J. Ginther // Theriogenology, 1984.-V. 22.-P. 225-233.

149. Pope, G.S. Progesterone levels in the systemic plasma of pregnant, cycling and ovariectomized cows / G.S. Pope, S.K. Gupta, I.B. Munro // J. Reprod. Fert., 1969.-V. 20.-P. 369-381.

150. Rahim Abdel, S.F.A. Clinical application of milk progesterone in the diagnosis of subfertility in suckled cows / S.F.A. Rahim Abdel, B.G. Lowman, D.W. Deas // Vet. Rec, 1980. V. 106. - P. 28-30.

151. Rendel, R.D. Reproductive steroids in the bovine VI. Changes and interrelationships from 0 to 260 days of pregnancy / R.D. Rendel, R.E. Erb // J. Anim. Sci, 1971.-V. 33.-115 p.

152. Robinson, N.A. Effect of treatment with progesteron on pregnancy role and plasma concentrations of progezterone in Holstein cows / N.A. Robinson, K.E. Leslie, P.S. Walton // J. Dairy. Sci, 1989. V. 72. - №1. - P.202-207.

153. Robinson, R. Estrone concentrations in the peripheral blood of pregnant cows / R. Robinson, R.D. Baker, P.A. Anastassiadis, R.H. Common // J. Dairy Sci, 1970.-V. 53.-P. 1592-1595.

154. Scenci, O. Early bovine, porcine and equine pregnancy diagnosis with a battery operated portable ultrasonic scanner / O. Scenci // Proc. 12th Int. Cong. Anim. Reprod. & Al, 1992.-V. l.-P. 168-170.

155. Schoetz, R. Zur Pathologie und Therapie der Sterilitat der weiblichen Haustiere / R. Schoetz. Berlin, 1927. - 127 s.

156. Seldek, J. Is EIA competition of RIA? / J. Seldek // Radiochem. Radianol. Lett, 1978. V. 34. - №24. - P. 125-134.

157. Shemesh, M. Improvement of early pregnancy diagnosis based on milk progesterone by the use of prosesun mpregnated vaginal sponges / M. Shemesh // Theriogenology, 1981.-V. 15. -№5.-P. 459-462.

158. Simmer, H.A. In Biology of Gestazion / H.A. Simmer. -New York, 1968. -Bd. 1.-290 p.

159. Smith, V.G. Bovine serum, oestrogens, progestins and glucocorticoids during late pregnancy / V.G. Smith, L.A. Edgerton, H.D. Hafs, E.M. Convey // J. Anim. Sci, 1973. V. 36. - 391 p.

160. Stabenfeldt, G. H. Peripheral plasma progesterone levels in the cow during pregnancy and parturition / G. H. Stabenfeldt, B.I. Osburn, L.L. Ewing // Am. J. Physiol, 1970.-V. 218.-P. 571-575.

161. Sutherland, E. On the biological role of cyclic AMP / E. Sutherland // J. Amer. Med. Assoc., 1970.-V. 214. -№ 7. P. 1281-1289.

162. Tainturier, D. Diagnostic de gestation chez la vache allaitante par / D. Tainturier, I. Andre, V. Gibbert // Rev. Med. veter., 1987. V. 138. - №1. - p. 619 -623.

163. Tainturier, D. Prophylaxie de la non deliverance chez la vache par un analogue de la Pg F2a le luprostiol / D. Tainturier, M. Zaied // Rev. Med. veter., 1989. V. 140.-№10.-P. 899-901.

164. Takacs, T. A vemhesseg korai kimutatasa a tej progeszteronszintje alapjan / T. Takacs, A. Balogh, F. Ditroi, I. Resti // Magyar allatorv. Lapja, 1986. V. 41. -№10.-P. 585-589.

165. Wagner, W.C. Hormonal mechanism controlling parturition / W.C. Wagner, F.M. Thompson, L.E. Evans, E.C.I. Molokwu // J. Anim. Sci, 1974. V. 39. -P. 39-54.

166. Willemse, A.H. Early pregnancy diagnosis in cattle by means of transrectal real time ultrasound scanning of the uterus / A.H. Willemse, M.A.M. Taverne // Current Top. Med. Anim. Sci, 1989. V. 51. - P. 67-72.

167. Wisnicky W., Casida L.E. A manual method for diagnosis of pregnancy in cattle. / W. Wisnicky, L.E. Casida // J. Am. Vet. Mtd. Assoc., 1948. V. 113. - P. 451-452.