Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка специфической профилактики тенуикольного цистицеркоза овец

ВАК РФ 03.00.20, Гельминтология

Автореферат диссертации по теме "Разработка специфической профилактики тенуикольного цистицеркоза овец"

РОСсМс&АЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫX НАУК

1 о АИР 1995

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛЬМИНТОЛОГИИ имени К.И.СКРЯБИНА

На правах рукописи

ШУМОВА Наталия Сергеевна

РАЗРАБОТКА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ТЕНУИКОЛЬНОГО ЦИСТИЦЕРКОЗА ОВЕЦ

Специальность 03. 00. 20 Гельминтология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва 1995

Работа выполнена в Московской Государственной академии прикладной биотехнологии.

Официальные оппоненты:

доктор биологически* наук, профессор И.И.Бенедиктов, кандидат ветеринарных наук, доцент А.В.Степанов.

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко.

а

Защита диссертации состоится . .М . . 199Ьг.

на заседании диссертационного совета Д - 020.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина ( ВИГИС ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат равасдан . $ / ^¿И&^ТЧ^-...... 1995г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

В.К. Бережно

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Современный уровень науки позволяет вести успешную борьбу против гельминтозных заболеваний с использованием иммунологической реактивности организма животного.

Уже накоплен значительный экспериментальный материал,

характеризующий различные аспекты иммунной реакции хозяина на

антигены гельминтов. Эффехторные механизмы иммунной системы

способствуют разрушению патогенных объектов и удалению их из

органов и тканей хозяина. Ключевыми звеньями иммунитета являются

действие цитотоксических Т-клеток, активация и вовлечение в

иммунный процесс воспалительного механизма с участием макрофагов,

нейтрофилов, тучных клеток, эозинофилов и взаимодействие антиген-

антитело, приводящее к активизации системы комплемента (M.D.

Richard, J.L. Brumley, Q.A. Anderson, 1982, Я.Э. Коляков, 1986, B.K. Бережко, 1994).

При тканевых тениидозах наиболее иммуногенным субстратом при вакцинации животных следует, в первую очередь, считать мигрирующие онкосферы и равнозначно начальные 2 - 3-суточные стадии их развития. Во-первых, малая еще дифференцировка тканей этой стадии развития паразита не будет "перегружать" иммунную систему хозяина лишним количеством антигенных структур. Во-вторых, для оранизма хозяина значительно легче справиться именно с этой стадией развития, когда она cute не достигла места своей локализации и не превратилась в более мощный оранизм, от которого хозяину труднее избавиться. В-третьих, начиная с момента внедрения в кишечную стенку, онкосфера не только механически разрушает ее клетки, но и осуществляет выброс антигенов в виде секретов, способствующих лизису этих клеток и открывающих вход в лимфатические и венозные капилляры (U.E. КоимИикол, 1991).

Профилактика тенуикольного цисгицеркоза " овец путем дегельминтизации собак основных распространителей • среди овцепоголовья - этого заболевания требует больших затрат труда и

средств, так как,,по Ветеринарному законодательству, собак с этой

I

целью необходимо дегельминтизировать каждые 30 - 45 дней-. Антгель минтики же в настоящее время дороги и в хозяйствах их не хватает.

Учитывая повсеместное и широкое распространение тенункольного цистицеркоза в России - по данным разных авторов от 22 (В.Н. Неупокоев, 1984) до 94% (А.С. Мельникова, Р.А. Ахметшина, 1967; А .С. Мельникова, 1974), недостатки существующих методов профилактики, а также современные данные по иммунной реактивности организма хозяина на антигены гельминтов, мы считаем, что разработка специфической профилактики тенункольного цистицеркоза весьма актуальна и сыграет важную роль при подготовке мер профилактики и борьбы с данным гельминтозом.

Цепи и задачи исследований. Целью наших исследований было разработать метод эффективной профилактики тенункольного цистицеркоза в овцеводческих хозяйствах России на основе выработки искусственного иммунитета у животных. Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи:

1. Разработать метод приготовления вакцины против тенункольного цистицеркоза овец из культуры онкосфер Т. Ьус1аи§епа.

2. Изучить протективные свойства этой вакцины при экспериментальном и спонтанном тенуикольном цистицеркозе.

3. Определить оптимальную схему иммунизации.

4. Провести производственные испытания вакцины.

Научная новизна. Впервые разработана вакцина против

тенункольного цистицеркоза. Выяснены ее протективные свойства в

экспериментальных н производственных условиях при тенуикольном цистицеркозе овец.

2

Практическая ценность. Получена эффективная вакцина против тенуикольного цистицеркоза. Разработана оптимальная схема иммунизации животных данной вакциной.

Апробация полученных результатов. Материалы доложены на:

- научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от эхинококкоза и цистицеркоза" (02.10.90);

- Всероссийской научно-производственной конференции (22.09.94).

На защиту выносятся следующие положения;

1. Вакцина против цистицеркоза тенуикольного, ее состав.

2. Протективные свойства вакцины.

3. Результаты экспериментальных и производственных испытаний вакцины.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста, иллюстрирована таблицами, рисунками и приложениями. Состоит из оглавления, введения, обзора литературы ( 43 стр.), материалов и методов, собственных исследований (63 стр.), обсуждения результатов (6 стр.), выводов, сведений о практическом использовании полученных автором научных результатов. Список литературы содержит /73 наименований, в том числе?б иностранных авторов.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследования

Яйца Т. Иус1а^епа мы получали от экспериментальнозараженных собак.

Для заражения Т. hydatigena отбирали собак - самцов в возрасте от 9 месяцев до 1,5 лет, при этом доза скармливаемых сколексов составляла 60 - 80 экземпляров на одно животное.

Перед постановкой собак в опыт их дегельмицтизировали дроицитом в дозе 10 мг/кг массы тела однократно.

Через 10 дней после дегельминтизации собак обследовали методом последовательного промывания и методой Фюлпеборна на наличие яиц гельминтов.

Определение жизнеспособности сколексов осуществляли следующим образом. Цистицерки, собранные с внутренних оранов, скармливали собакам не позже чем через 24 часа после убоя. Извлеченные сколексы помещали в смесь физиологического раствора и свежей желчи крупного рогатого скота или овец в соотношении 1:1.

Затем сколексы помещали в термостат и выдерживали при температуре 36 - 38° С в течение 15 - 20 минут, после чего просматривали под микроскопом. По числу вывернувшихся и подвижных сколексов определяли их жизнеспособность.

Контроль за созреванием Т. hydatigena у собак осуществляли визуальным методом и исследованием фекалий по методу Фюлпеборна. При обнаружении в фекалиях члеников или яиц тений проводили дегельминтизацию бромистоводородным ареколином в дозе 0,004 г/кг маоеы тепа однократно.

Собранные тении, предназначенные для изготовления вакцины против тенуикольного цистицеркоза, сохранялись в физиологическом растворе с добавлением пенициллина 200 ЦЦ/мл и стрептомицина 200 мк/мл со сменой его каждые 24 часа.

Технологический процесс изготовления вакцины выглядит следующим бЬразом:

4

-Яйца тений помещали в желудочный оок и выдерживали в термостате 1,5 - 2 часа при температуре +37 +38° С с периодическим перемешиванием ;

- яйца отделяли от желудочного сока центрифугированием при 1,5-2 тыс.об./мин. в течение 1,5 - 2 минут,

- к осадку яиц добавляли кишечный сок , тщательно перемешивали и выдерживали в термостате в течение 15 -20 минут при температуре +37 +38° С.

- освободившиеся онкосферы отделяли от кишечного сока центрифугированием при 1-1,5 тыс.об./мин. в течение 45 - 60 секунд;

- свободные онкосферы отмывали от кишечного сока в среде культивирования;

- свободные онкосферы помещали в среду культивирования и

переносили в термостат при температуре +37 +38° С на 48 часов;

- через 24 часа культура просматривалась и перемешивалась;

- по истечении 48 часов культивирования производили подсчет процистицерков в 1 мл культуры;

- пересчитывали процистицерки на I дозу (1900 - 2100 экземпляров), добавляли консервант и адъювант;

- готовую вакцину разливали во флаконы

- вакцину исследовали на микробную обсеменённость.

Исследование белкового спектра среды культивирования,

содержащей секреты и экскреты процистицерков тении гидатигенной проводили методом электрофореза в полиакриламидном геле.

Эксперименты по определению протективных свойств вакцины проводились в колхозе "Мечты Ильича" Кашинского района Тверской области йа 112 янятах 3 - 5-месячного возраста, вакцинированных против тенуикольного цистицеркоза описанной выше вакциной и экспериментально и спопталио зараженных этим гельминтозом.

Протективные свойства вакцины оценивались по результатам вскрытия вакцинированных животных, зараженных яйцами тении гидатигенной, а также по показателям крови ягнят. Клиническое исследование крови проводили согласно общепринятым методикам, разделение сыворотки крови на фракции - методом электрофореза в полиакриламидном геле. Эти исследования проводили в лаборатории паразитологии МГАПБ. Содержание иммуноглобулинов определяли методом ELISA. з лаборатории гельминтозов ВИГИС. Микробиологическое исследование проб мышц и внутренних органов проводили согласно ГОСТ 21237 - 75 (1980) в лаборатории

микробиологии МГАПБ.

2.2. Результаты исследований

Методом электрофореза в ПААГе в секреторно-экскреторном антигене Т. hydatigena было обнаружено 9 белковых компонентов, отличающихся по электрофореггической подвижности и интенсивности окраски. В контроле (среде культивирования) при аналогичных условиях режима работы прибора и окраски было обнаружено 8 белковых фракций.

Для определения подвижности и молекулярной массы фракций использовали маркеры.

Фракция секреторно-эксхрегорного антигена, имеющая самую низкую молекулярную массу, приблизительно 16 кД, была наиболее четко окрашена и отсутствовала в контроле.

Всего секреторно-экскреторный антиген Т. hydatigena, по результатам анализа, содержит 9 белковых компонентов, фракция секреторно-экскреторного антигена с молекулярной массой 16 кД

отсутствует в контрольном образце.

6

Из 9 белковых компонентов секреторно-экскрегорного антнгена восьми соответствовали белковые фракции среды культивирования, имеющие аналогичную элезарофоретическую подвижность.

Цистицерки для исследования белкового спектра жидкости цистицерка были получены на Кашинском мясокомбинате (Тверская область) от овец 1 - 2-летнего возраста.

При изучении белкового состава жидкости цистицерка методом электрофореза в полиакриламидном геле было обнаружено шесть белковых фракций: пяти из них соответствовали фракции сыворотки крови овец, имеющие сходную элезарофоретическую подвижность. Фракция жидкости цистицерка, имеющая среднюю электрофоретическую подвижность, молекулярную массу около 22 кД, отсутствовала в сыворотке крови овец.

Эксперименты по определению протективных свойств вакцины

проводились в колхозе "Мечты Ильича" Кашинского района Тверской

области. Животные для экспериментов подбирались по принципу аналогов.

Первый опыт был поставлен на 48 ягнятах 3 - 4-месячного возраста по следующей схеме: животных разделили на 4 группы по 12 ягнят в каждой группе. Животным первой группы ввели по 1 мл (2000) процистицерков на одно введение, животным второй группы надосадочную жидкость (1 мл на введение, что соответствует экскретам и секретам 2000 процистицерков). Животцым третьей группы ввели вакцину целиком (1 мл на одно введение). Животных вакцинировали двукратно с интервалом 21 день. Через 42 дня после последнего введения вакцины провели заражение подопытных животных per os яйцами Т. hydatigena в дозе по 2000 яиц на одно животное. Для контроля таким же образом заразили невакцинированных животных контрольной

7

группы. Через 10 дней после заражения провели убой и осмотр внутренних органов подопытных животных. При этом на легких и печени всего у животных Зй группы было обнаружено в среднем 18 цистицерков, тогда как у животных 1й группы было обнаружено в среднем 82 цистицерка, у животных 2й группы - 66, а у животных контрольной группы в среднем - 531 цистицерк.

Следовательно, наиболее эффективным для профилактики тенуикольного цистицеркоза у овец является введение 2-сугочной культуры процисгицерков вместе с секретами и экскретами.

При исследовании внутренних органов экспериментально зараженных по 2000 яиц Т. hydatigena животных нами было установлено, что при наличии на печени и легких в среднем 531 цистицерка (невакцинированные животные контрольной группы) была значительно выше общая микробная обсемененность - 8,8 х 103 микробных клеток в 1 г проб легких, чем при наличии 18-82 цистицерков у вакцинированных животных - 3, 2 х 103 - 4, 8 х i О3. В пробах легких и печени невакцинированных животных частота обнаружения стафилококков была в 3 - 6 раз выше, было установлено наличие Е. coli, отсутствующей в пробах вакцинированных овец. У 5 животных контрольной группы (41,7%) были обнаружены микроорганизмы в соматических лиыфоузлаХуГгамфоузлы вакцинированных животных были стерильными. Поскольку при миграции онкосферы повреждают стенку кишечника и могут заносить обитающую там микрофлору в органы, полученные данные представляются нам вполне закономерными.

Возможно этим объясняются и данные Н.Ф. Карасева (1987),

который показал, что мясо овец и свиней, инвазированных

тонкошейными цисгицерками, по биохимическим показателям является продуктом более низкого качества и даже может оцениваться как 8

условно годное. Миграция гельминтов в теле хозяина влечет за собой

инокуляцию микробов (Ю.Ф. Петров, 1988).

Итак, иммунизация животных против тенуикольного цистицеркоза

не только предохраняет животных от заболевания этим гельминтозом,

но и как следствие этого предотвращает занос из кишечника

микрофлоры в органы и ткани мигрирующими процистицеркаыи.

Второй опыт был проведен на ягнятах 3,5 - 4,5-месячного возраста.

Животных разделили на 4 группы аналогично опыту №1 и заразили per

os яйцами Т. hydatigena по 50 яиц каждому ягненку. Через 30 даей после

заражения ягнят иммунизировали по описанной выше схеме. Чфез 90

дней после начала эксперимента проведи убой и осмотр подопытных

яршт. При этом было установлено, что введение культуральной

жидкости не оказывает заметного воздействия на уже прижившихся

цистицерков, тоща как 66% ягнят, иммунизированных отмытыми

процистицерками и 66,6% ягнят, иммунизированных цельной вакциной,

были свободны от тенуикольных цистицерков, тоща как в контрольной

группе у всех животных были обнаружены тенуикольные цистицерки;

Сроки и кратность иммунизации были установлены в следующем

опыте: 16 ягнят 4 - 5-месячного возраста были разделены на 5 групп.

Двухсуточную культуру онкосфер Т. hydatigena с консервантом и

адъювантом вводили животным по следующей схеме: lag группа (2

ягненка) - по Г мл (2000 онкосфер) на одно животное однократно; 2ая

группа (3 ягненка) - по 2 мл на одно животное однократно; Зя группа (3

ягненка) - по 1 мл на одно животное двукратно с интервалом 10 дней;

4ая группа (5 ягнят) - по 1 мл двукратно с интервалом 15 дней; 5ая

группа (3 ягненка) - по 1 мл двукратно с интервалом 21 день..

В леший период вакцинированные животные выпасались в общей

отаре. У иммунизированных ягнят изменений клинического состояния на протяжении всего пастбищного периода не отмечалось. 9

В сентябре 1993 года 16 подопытных животных вместе с другими овцами данной отары в количестве 71 головы были доставлены на мясокомбинат г. Кашина, щей был проведен их убой и осмотр.

В результате осмотра цистицеркоз тенуикольный был обнаружен у двух животных: из первой группы -1 голова (50%) и из второй группы - 1 голова (33,3%). Среди невакцинированных овец цистицеркоз тенуикольный был обнаружен у 43 овец (60,1%) с интенсивностью инвазии 2,5 цистицерка на одно животное.

Итак, при сравнении иммуногенных свойств отмытых процисгицерков, надосадочной жидкости 2-суточной культуры процисгицерков и цельной вакцины было установлено, что наибольшей иммуногенностыо обладает цельная вакцина, причем наилучший эффект наблюдается после двукратного введения с интервалом 21 день.

Производственные испытания вакцины проведены нами в Казахстане на 167ягнятах 3 - 5-месячного возраста, которые были иммунизированы двукратно с интервалом 21 день в дозе I мл на 1 введение. По результатам обследования экстенсивность инвазии среди вакцинированных животных составила 1,8Уо, в то время как у невакцинированных овец данной отары она составила 4^1%.

2.2.2. Определение содержания антител в сыворотке крови вакцинированных ягнят С целью определения иммуногенносги вакцины мы исследовали содержание специфических антител в сыворотке крови вакцинированных ягнят. Содержание антител к секреторно-экскрегорному антигену Т. Ьуйа^епа в сыворотке крови у ягнят, вакцинированных отмьггыми процисгицерками (1я группа), надосадочной жидкостью (2я группа) цельной вакциной (Зя группа,

й невахцинированных животных (4я группа, опыт№1) к 21 му дню после первой вакцинации соответственно составило 2,91, 2,75, 3,05 первоначального уровня, у контрольных животных содержание антител практически не изменилось. После повторной вакцинации и после заражения наиболее высокое содержание антител было достигнуто у ягнят Зй группы, иммунизированных цельно^ вакциной - почти в б раз выше первоначального уровня.

Основываясь на динамике специфических иммуноглобулинов и на общем состоянии животного, можно убедительно заключить, что иммунизация ягнят отмытыми процистицеркани, надосадочной жидкостью 2-сугочной культуры процнсгицерков или цельной вакциной позволяет защитить животных от заражения яйцами Т. Иу(1ап§епа. Однако уровень специфических иммуноглобулинов после заражения был значительно выше у ягнят, которым вводили цельную вакцину, что свидетельствует о большей продукции антител плазматическими клетками у этой группы животных, и, следовательно, лучшей защите организма от внедряющихся цисггицерков.

Изменение содержания антител в сыворотке крови зараженных тенуикольным цистицеркозом овец происходил? следующим образом (опыт 2): колебания уровня антител к секреторно-экскреторному антигену Т. Ьуйа^епа были незначительными и недостоверными. К 46му дню после начала эксперимента наблюдалось некоторое увеличение содержания антител к секреторно-экскреторному антигену Т. Ьу<ки§епа у животных 1й и Зй группы от 0,13610,008 дб 0,153 + 0,05В н от 0,102 ± 0,003 до 0,136 + 0,049 соответственно и 0,764 ± 0,016 у животных Зй группы.

Более значительным было колебание уровня антител к ЖЦ.

Исходные показатели содержания антител составляли 1,014 ± 0,011 у животных 1й группы, 1,097 ± 0,063 у животных второй группы и 1,044 ± 0,021 у животных Зй группы. Через 10 дней уровень содержания антител снизился и составил 0,932 ± 0,026; 0,837 ± 0,048 и 0,835 ± 0,015 в 1ой. 2ой и Зй группах соответственно. К 21 му дню оодержание антител в сыворотке крови овец продолжало уменьшаться и составило уже 0,864 ± 0,023; 0,724 ± 0,034 и 0,740 ± 0,034 у животных 1й, 2й и Зй трупп соответственно. Только после повторной вакцинации содержание антител в сыворотке крови овец начало расти и к 46му дню после начала вакцинации составило 1,064 ± 0,03 у животных 1й групы, 0,830 ±0,01 у животных 2й группы и 0,764 + 0,016 у животных Зй группу. У животных контрольной группы содержание антител изменялось незначительно: от 1,067 ±0,013 до 1,058 ±0,017.

При изучении динамики содержания антител после введения животным 2-суточной культуры тении гидатигенной при различных режимах вакцинации (опыт №3) было выявлено следующее: после первого введения вакцины наблюдался подъем содержания антител во всех труппах при всех режимах вакцинации.

Введение большей дозы антигена - по 2 мл (4000 онкосфер) на голову животным 2й группы стимулировало более высокий подъем уровня содержания антител на Юый день - примерно в 2 раза по сравнению с уровнем содержания антител у животных, которым вводили 1 мл (2000

онкосфер). Однако затем содержание антител у животных 2й группы

>

начало снижаться и на 51ый день опустилось почти до исходного уровня (0,116 ± 0,0064). Высокий уровень иммуноглобулинов на 51ый день был у животных 5ой группы: 0,416 ± 0,069 - это примерно в 4 раза выше, чем до введения вакцины. У животных 1й, Зй и 4й групп на 51ый день

содержание иммуноглобулинов составляло 0,102 ± 0,05; 0,171 + 0,0464 и 0,152 + 0,018 соответственно.

С 21 го дня подопытные ягнята выпасались на пастбище в общей отаре. Изменений клинического состояния не наблюдалось. Содержание эритроцитов колебалось от 10,6 + 0,58 х 10'2 /л до 8,4 + 0,17 х 10'2/л. В 1ой группе после выгона на пастбище снизилась резистентность эритроцитов до 0,4 + 0,1 по сравнению с 0,6 + 0,05 до вакцинации. У животных этой группы СОЭ возрасло в 1,5 раза: 3,5 + 1,5 по сравнению с 2,0 до вакцинации.

Немного возросло количество лейкоцитов у животных 5ой группы -До 11,9+ 2,74 х Юб /л через 51 день по сравнению с 9,9 + 0,44 х 10б /л до вакцинации. Увеличение содержания лейкоцитов у этой группы ягнят коррелирует с увеличением содержания иммуноглобулинов.

Итак, как показали указанные выше данные, наилучший профилактический эффект достигается в результате двукратного введения вакцины с интервалом 21 день.

2.2.3. Определение содержания белковых фракций сыворотки крови овец методом электрофореза в полиакрил амидном геле

В сыворотке крови нами выделялось 9 белковых фракций: преальбумины (1я фракция), альбумины (2я фракция), а-гаобулины (Зя фракция), ßi-глобулины (4я фракция), р2-глобулины (5я фракция) и у-гпобулины (б-9я фракции).

Обрабатывая полученные данные на ЭВМ, нам удалось с большой точностью определить фракции сыворотки крови, в которых содержались специфические иммуноглобулины, н вывести уравнения

зависимости содержания белка в этих фракциях после вакцинации и уровнем специфических антител.

По результатам анализа антитепа локализовались в 8й фракции (фракция у-пхобулинов) и 5й (фракция Р2-гпобулинов).

По данным многих авторов в области у-пюбулинов локализуются тяжелые (19S) антитела, к которым относятся иммуноглобулины класса M, а в области Р2-гп°булинов - легкие (7S) антитела, к которым относятся иммуноглобулины класса G (П.Г. Прокопенко, М.И. Равич-Щербо, 1974; Я.Э. Коляков, 1986),

которые синтезируются неодинаково в разные периоды ~поспе вакцинации. В нашем случае содержание 19S антител у животных всех групп на 1 Ой день после первой вакцинации было уже значительно выше исходного уровня, а появление 7S антител наблюдалось в основном с 15го дня после начала вакцинации. Это означав, что после введения противоцисгицеркозной вакцины с начала начинали вырабатываться иммуноглобулины класса M, а появление иммуноглобулинов класса G наблюдалось с !5го дня после вакцинации.

Изменения содержания белка в 8й (фракция у-глобулинов) и 5й (фракция Р2'пх°булинов) белковых фракциях (именно там локализуются специфические, вырабатывающиеся в результате вакцинации, антитела) также показывают большую эффективность двукратной вакцинации животных с интервалом 21 день.

Благодаря двукратной иммунизации овец с этим интервалом предотвращается заражение овец тенуикольным цисгицеркозом при экспериментальном и спонтанном заражении.

Нами были выведены формулы для расчета общего уровня иммуноглобулинов по содержанию фракций белка.

Так, у животных, иммунизированных по схеме: I мл (2000 онкосфер) двукратно с интервалом 21 день содержание специфических иммуноглобулинов можно вычислить по формуле: у = 0,055х + 0,086, где х - содержание белка в 8й фракции. Достоверность рассчитываемых по формуле значений высокая (Р < 0,001).

Основываясь на изменениях количества общего белка, а также содержания белка в 8й и 5й фракциях, так как именно там локализуются специфческие, вырабатывающиеся в результате вакцинации, антитела, можно заключить, что лучший эффект наблюдается при двукратной вакцинации животных с интервалом 21 день. Введение однократно 1 мл вакцины не обеспечивало достаточной стимуляции антителообразова-ния.

Выводы

1. Для изготовления вакцинч претив тенуикольного цисгицеркоза у овец наиболее пригодна начальная стадия развития онкосфер.

2. Наилучший профилактический эффект достигается в результате иммунизации животных дважды культурой 2-суточных процистицерков с интервалом 21 день, при этом установлен самый высокий уровень специфических иммуноглобулинов, что коррелирует с увеличением количества лейкоцитов до 11,9 + 2,74 х 10^/л по сравнению с 0,9 + 0,44 х

л в начале эксперимента.

3. Изменение содержания антител в сыворотке крови вакцинированных ягнят коррелировало (R = 0,98) с изменением содержания белка в 8й фракции (фракция уз-гаобулинов) н в. 5й фракции (фракция Э2-гпобупинов) с высокой степенью достоверности (Р < 0,95).

4. Иммунизация против тенуикольного цисгицеркоза предотвращает обсеменение органов и тканей Е. ooli и снижает обсемененность стафилококками в 3 - 6 раз по сравнению с контрольными животными« _

5. Для предотвращения заболевания овец теуикольным цистицеркозоы целесообразно дважды иммунизировать ягнят с интервалом 21 день двухсуточной культурой процисгицерков Т. Иус1а^епа в дозе 2000 экземпляров на одно введение.

Практические предложения

В неблагополучных по тенуикольному цисгицеркозу хозяйствах необходимо проводить вакцинацию ягнят против тенуикольного цистицеркоза. Вакцинировать ягнят против тенуикольного цистицеркоза необходимо двукратно с интервалом 21 день.

Результаты исследований предлагаем использовать в учебном процессе при лодготовке вегспециалистов, на курсах повышения квалификации и написании учебного материала для вузов и техникумов.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Косминков Н.Е., ЖавнисСЗ., Верховская Г.Л., Черданцева Н.С. Контроль иммуногенносги противоценурозной вакцины на основе изменения протеинограммы сыворотки крови кроликов. Тезисы докладов научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от эхннококкоза и цистицеркоза". М., 1990, С.78-80.

2. Косминков Н.Е., Жавнис. С.Э., Черданцева Н.С. Изменение белковых фракций сыворотки крови ягнят после их иммунизации противоценурозной вакциной. Тезисы докладов научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы оздоровления хозяйств от эхннококкоза и цистицеркоза". М., 1990, С.82-83.

3. Шумова Н.С. Специфическая профилактика тенуикольного

цистицеркоза овец. В сб. "Гигиена, вегсанитария и экология

животноводства", Материалы Всероссийской научно-производственной конференции, г. Чебоксары, 1994, С.488-490.

16