Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка, совершенствование и метрологическое обеспечение методов определения СОЭ и гематокрита крови сельскохозяйственных животных

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка, совершенствование и метрологическое обеспечение методов определения СОЭ и гематокрита крови сельскохозяйственных животных"

р Г 5 ОД

3 ^ V—.*■

КАЗАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ им. Н.Э.БАУМАНА

На правах рукописи

ЗАЙНАШЕВА Гузель Накиповна

РАЗРАБОТКА, СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ И НЕТРОЛОП1ЧЕС1СОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОЭ И ГОШШГНТЛ КРОВИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ИШОПШХ

03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань 1996

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте и в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана.

Научный руководитель: доктор биологических наук

Р.Х.Тукшаитов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Т.Е.Костина

кандидат медицинских наук, А.Л.Сторожев

Ведущая организация - Ветеринарный институт при Омском агроуниверситете

Защита состоится апреля 1996 г. в часов на

заседании диссертационного совета К-120.22.02 в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана (420074, г.Казань, Сибирский тракт, КГАВМ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанской государственной академии ветеринарной медицины им.Н.Э.Баумана.

Автореферат разослан "_2_" марта 1936 г

Ученый секретарь диссертационного Совета, доцент

А.Н.Корнишин

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и гематокрит являются одними из важных гематологических показателей. свидетельствующих о физиологическом состоянии организма животных. СОЭ при одних заболеваниях ( разные формы анемии, туберкулёз, злокачественные образования и др.) повышается, а при других ( гастроэнтерит, недостаточность кровообращения и др.) - понижается ( Кудрявцев A.A., Кудрявцева Л. А., 1974; Голиков А.Н., Базанова Н.У. исоавт., 1980; Смирнов A.M., Конопелько О.Я., Уразаев H.A. и соавт., 1088; и др.).

Значительному изменению подвержен и гематокрит: при крово-потерях, гипергидрозе и дегидратации организма, врождённых пороках сердца ( Тодоров Й., 1969; Мидлишвили Г.Н., .1982; Асламов В.М., Беляев В.Н. и соавт., 1992; и др.). На основе его величины можно судить о количестве гемоглобина и вязкости крови, определять средний объем одного эритроцита и объёмный профиль крови (Шахов А.Г., Подоженко Э.Г. и соавт., 1992; Лысов В.Ф., 1994; Pries А., Newhous D., 1992; Wiener К., 1993; Green А., Hlckton M., 1994; Stephen Е.,1994; и др.).

В связи с большой ролью этих показателей при проведении клинико-гематологических исследований имеется необходимость повышения их достоверности и информативности с учетом видовых особенностей продуктивных животных. Здесь имеется прежде всего в виду установление закономерности изменения СОЭ в зависимости от ряда факторов, дальнейшая разработка и 'соверсенствозашм методов анализа и их метрологическое обеспечение.

Необходимо отметить, что во многих работах осуцесгвлязг измерение пути оседания эритроцитов (ПОЭ) по высоте надосадочпой плазмы, именуя при этом ее скоростью (СОЭ). Поэтому реальная динамика СОЭ крови и её видовые особенности остаются неизученными. Кроме того, приводимые нормативные значения ПОЭ крови по Панчеп-кову для многих видов животных настолько малы (на уровне 0,3-0,8 км), что соизмеримы с погрегаостьи метода и этим существенно ограничивают его применение в ветеринарии.

Значительный научно-практический интерес представляет более глубосое изучение влияния ряда экзогенных факторов па ПОЭ ( Пирогов Л.С., 1952; Маршалкович Д.Б., 1957; Подрабинек П.А., 1958; Бурчинский Г.И., 1962; Головацкий A.C., Головацкая А.Л., 1970;

Тукшаитов Р.Х., Латыпов М.М., 1984-1990; Hung W., 1988; Hawkins D.. Lamwort Т.. 1994; й др. ).

Из эндогенных факторов особо следует выделить гематокрит. Многие авторы полагают наличие зависимости СОЭ от гематокрита (Маточкин М.И., Мясникова Л.Е.. 1969; Морозова В.Т.. 1976; Чижевский А.Л., 1980; и др. ). Между тем получение убедительных данных о высокой корреляционной связи между этими показателями может способствовать определению СОЭ с более высоким уровнем достоверности.

Вышеизложенное свидетельствует о необходимости проведения работ по изысканию более совершенных и ускоренных методов определения СОЭ и гематокрита на основе сравнительного изучения влияния на них разных экзогенных и эндогенных факторов.

Цель исследований. Разработать простые и ускоренные методы определения СОЭ и гематокрита, пригодные для широкой ветеринарной практики и обеспечивающие получение достоверных результатов.

Задачи исследований: 1. Усовершенствовать метод определения СОЭ крови у продуктивных животных - повысить точность измерения и сопоставимость результатов исследования при одновременном уменьшении времени его проведения.

2. Выявить видовые закономерности изменения во времени показателя СОЭ крови крупного рогатого скота, лошадей, овец и свиней, используя усовершенствованный метод.

3. Разработать экспресс-микрометод определения СОЭ крови на основе ее центрифугирования.

4. Разработать метод определения гематокрита в наклонных пипетках.

б. Повысить воспроизводимость показателя СОЭ крови при одновременном измерении его и гематокрита.

Научная новизна. Впервые установлена динамика СОЭ крови по Панченкову у различных видов животных и выявлена ее полифаз-ность; определено максимально-достигаемое значение этого показателя у каждого вида животного и время его проявления.

Выявлены условия повышения воспроизводимости результатов измерения ПОЭ, СОЭ и гематокрита, оптимальные режимы их определения различными методами. Показано, что проведение вышеуказанных гематологических анализов в наклонных пипетках позволяет нормировать результаты измерения, выражая их непосредственно через СОЭ.

Дано научно-практическое обоснование возможности определе-

ния ПОЭ крови на основе ее центрифугирования, обеспечивающего экспресс-анализ микрообъёмов крови.

Впервые показана возможность определения в наклонных пипетках (<р = 60°) наряду с СОЭ гематокрита и использования его значений для нормирования СОЭ крови животных.

Практическая ценность. Усовершенствовано и разработано 3 метода определения ПОЭ и СОЭ крови сельскохозяйственных животных, которые обеспечивают большую воспроизводимость, а следовательно, более высокую их информативность при значительном сокращении времени анализа.

Разработанный метод определения гематокрита отличается простотой, доступностью и возможностью применения результатов анализа для широкого нормирования показаний СОЭ.

Все предложенные методы не требуют специального оборудования и вполне применимы в ветеринарной практике.

fía основе материалов диссертации составлены и утверждены методические углзания " Определение ПОЭ, СОЭ и гематокрита с использованием новых и усовершенствованных методов" (Казань, 1995).

Отдельные результаты вошли в "Рекомендации по математической обработке экспериментального материала при использовании в опытах ограниченного количества животных" (Тукоаитов Р.Х., 1995). Данные, представленные в наших публикациях, используются при проведении занятий со студентами на кафедрах Физиологии и диагностики внутренних болезней животных Казанской государственной академии ветеринарной медицины, а также при выполнении НИР во Всероссийском научно - исследовательском ветеринарном институте.

Научные положения, выносимые на защиту :

- проведённое усовершенствование существующих и разработка новых методов дают возможность получения достоверных данных анализа СОЭ, ПОЭ и гематокрита и выявления закономерностей изменения этих показателей у различных видов животных ;

- разработанные методы анализа крови зффектизны, просты и пригодны для широкой лабораторной практики.

Апробация работы. Основные результаты доложены и одобрены на Республиканских научно-производственных конференциях ( Казань, 1991, 1992, 1994, 1995 ) и на межлабораторном совещании ВНИВИ ( 1996 ).

Публикации. Основные данные исследований приведены в 7 научных работах.

Структура и объём диссертации. Работа состоит ив следующих разделов: введение, обвор литературы, материал и методы исследований, собственные исследования, обсуждение ревультатов, выводы, практические предложения и список литературы.

Диссертация изложена на 167 машинописных страницах, содержит 43 таблицы и 17 рисунков. Список литературы включает 173 источника, в тем числе 42 зарубежных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (ВНИ8И) и в Казанской государственной академии ветеринарной медицины (КГАВМ) в период с 1991 по 1095 годы. Всего проведено 82 серии опытов с кровью 167 клинически здоровых сельскохозяйственных животных : крупного рогатого скота (п=92), овец (п-34) и свиней (п=41). Взятие проб крови у животных осуществляли ив яремной или хвостовой вены в учебном хозяйстве КГАВМ, вивариях КГАВМ и ВНИВИ и в отдельных сериях при убое животных на Казанском мясокомбинате.

Кровь при взятии стабилизировали гепарином в дозе 60 ед/мл, а далее при определении величины ПОЭ разводили 5%-ым раствором цитрата натрия в соотношении 4:1.

Для анализа ПОЗ крови применяли аппарат Панченкова, а для нахождения гематокритного числа - шведский прибор " Целлокрит" и настольную центрифугу ОПН-8. Отсчет ПОЭ осуществляли в мм, а СОЭ в мм/ч. Гематокрит определяли при скорости вращения ротора 8000 об/мин и длительности Б мин.

При установлении ПОЭ в наклонных пипетках использовали специальное, фиксирующее штатив, устройство, обеспечивающее отклонение пипеток от вертикали на 60°. С целью повышения точности анализа ПОЭ и гематокрита (Н) во всех сериях опытов многократно исследовали каждую пробу крови (К-3-5). Все опыты проводили при температуре окружающей среды в пределах 20-24 °С.

Изучение влияния на вариабельность ПОЭ крови разных факторов (качества изготовления пипеток и их подготовки, длительности анализа, уровня заполнения, длительности хранения и др.) осуществляли по Панченкову. В опытах специально использовали кровь

животных как с самыми низкими значениями скорости оседания эритроцитов (крупный рогатый скот и овцы), так и достаточно высокими (свиньи) для того, чтобы охватить диапазон величин ПОЗ крови, присущий многим друг™ видам животных ( козы, собаки, кролики, куры и др. ) .

Первые измерения ПОЭ в вертикальных пипетках начинали через 1-3 ч - при появлении возможности отсчета его показаний и далее продолжали наблюдения в ряде опытов до 24 ч. а в наклонных - на протяжении первых 3-4 ч в связи с высокой в них скоростью седиментации эритроцитов. На основе подученных значений ПОЭ вычисляли СОЭ по формуле:

СОЭ = ПОЭ/Ь, мн/ч

где I- время анализа крови, ч.

По величине коэффициента вариации ПОЭ каждой проон султан о степени влияния того или иного фактора .

С целью дальнейшего выяснения эффективности определения ПОЭ в наклонных пипетках (<? = 60°) наряду с ссиовкмми оп1«?с.»я1 параллельно проводили изучение тех ко проб крови в вертикальны;:'пп-петглх. В последующем сравнивали величины их СУ и определи и коэффициент корреляции между обоими показателями, а т/-г:;:о <:~кцу ними и гсиатокритом.

Разработку экспресс-¡'лкрсметсд а искоренил ПОЭ ссугсстэлядг. на основе центрифугирования крови с испольговзиием ?шкрс(стеглл,7-ров. Осаждали эритроциты при сравнительно нал« оборотах рэтсгл центрифуги ОПН-8 (1, 2, 3 тыс сб/нин) и зкспсзгцнлх (1 - 1Я мин). О величине ПОЭ судили по высоте иодосалочпоп пласт.

Определение гематскрнта в наклонных пипетках осноьивалось на явлении усг.оренного оседания з них эритроцитов. Динамику ПОЭ крови в наклонных пипетках изучат на протяжении 3-5 суток. 3 качестве объекта исследования выбрали кровь крупного рогатого скота и овец, позволяющую выработать единые условия измерэнип гематокрита у многих видов животин;:. Сопоставляя значения П с высотой зритроцитарного столба ( Ь эркт ), обосновали оптшал;.-кое время для определения гематскрита методом наклонения пипг-ток.

Экспериментальные данные статистически обработали на ЭВМ "¡1скра" 1030.11. Вычисляли сроднее срифметичеасое гличеяке СМ).

ошибку репрезентативности (т), коэффициенты вариации (СУ) и корреляции (г), уровень достоверности (Р) и относительную величину среднеквадратической ошибки ( СУ мет.).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Изучение влияния экзогенных факторов на воспроизводимость ПОЭ и СОЭ по Панченкову

Результаты проведенных исследований показывают, что предварительный отбор пипеток, дополнительное 30-минутное их выдерживание в спирте перед использованием и двукратная передозировка гепарина не вызывают достоверных сдвигов показаний ПОЭ (Р>0,05). Однако другие факторы являются причиной повышения или занижения ПОЭ.

Установлено, что при низких абсолютных значениях ПОЭ крови (0,5-1,0 мы), имеющих место у большинства видов животных, основной погрешностью измерения является неточность визуального отсчета уровня надосадочной плазмы, которая даже при тщательном выполнении эксперимента имеет значения на уровне ±20 -30 X.

Кратковременное превышение кровью верхнего контрольного уровня пипетки , обычно имеющее место при ее заправке, ведет к повышению погрешности измерений на ±10-12% .

Неточность установки пипетки в строго вертикальное положение является причиной вариабельности показаний до + 5Х.

Другие факторы, гак колебания диаметра пипетки, соотношения объемов |фови и разбавителя оказывают меньшее влияние на точность этих показателей ( в пределах ±2-4Х) и ими при оценке суммарной погрешности можно пренебречь.

Количественной определение основных слагаемых погрешности позволило по соответствующей формуле рассчитать её суммарную величину, которая оказалась равной ±33 %. Это значение с удовлетворительной точностью совпадает с экспериментальными результатами измерения суммарной погрешности метода и указывает на то, что в работе действительно удалось выявить и изучить основные источники ошибок измерения ПОЭ.

Поскольку метод Неводова отличается от метода Панченкова только использованием большего диаметра пипетки, то установлен-

ные величины погрешности в целом присущи и методу Неводова. Поэ-. тому необходимость их специального изучения отсутствует.

На базе целого ряда серий опытов выявлено, что ошибка измерения определяется абсолютным значением ПОЭ. При атом, чем выше абсолютное значение ПОЗ, тем меньше оказывается уровень среднек-вадратической погрешности метода (СУ мет).

Установлено,что при 3-5-кратном анализе ПОЭ первый отсчет его показаний можно начинать через 2-3 ч у животных, имеющих повышенное значение ПОЭ (свиньи) и черев 4-5 ч - низкое (крупный рогатый скот, овцы и др. ). При этом ошибка опыта не будет превышать ±10 - 15 X. .

Данные рекомендации по выбору времени анализа вполне могут быть использованы при изучении крови многих других видов животных, так как их значения ПОЭ находятся в пределах изученного нами диапазона.

При проведении исследований крови имеет место как случайная, так и систематическая погрешность, требующая аналогичного учета. Выявлено, что её источником в наших опытах является изменение физико-хим!гческих свойств крови, особенно при многочасовом ее хранении.

Показано, что ПОЭ крови крупного рогатого скота и овец претерпевает уменьшение эа 24 ч ее хранения не более чем г 1,1-1,5 раза. В тоже время в опытах на крови евшей получены разноречивые данные. Если в одних сериях опытов ПОЗ крови в течение 24 ч хранения изменяется в приемлемых пределах (в 1,6 раза), то в других - уменьшается значительно (в 5-10 раз). Можно полагать, что такое изменение этого показателя обусловлено несоответствием типа антикоагулянта или его используемой дозы виду животного.

. Данный вопрос требует специального рассмотрения . Вместе с тем Д1Я избежания систематической погрешности более, чем на 20% следует анализ крови свиней начинать не позднее 2-3 ч поело ее эабора, а крови крупного рогатого скота и овец - 8-10 ч.

Выбранный порог систематической погрешности является вполне правомерным, так как он в определенной степени компенсируется использованием в эксперименте наряду с опытной группой и контрольной.

3.2. Динамика ПОЭ и СОЭ крови по Панченкову у разных видов сельскохозяйственных животных

Как выше отмечалось, нередко приводимые в литературе значения являются ПОЭ крови; указываются преимущество для начальных отрезков времени или 24 ч и не пригодны для характеристики полной динамики как ПОЭ, так и СОЭ. В связи с этим возникла необходимость специального изучения закономерности изменения ПОЭ в течение суток у разных видов животных. /

Результаты опытов показали,что значения ПОЭ крови крупного рогатого скота и овец в первый час наблюдения настолько малы, что начальный их отсчет практически осуществил лишь по истечении 2-4 Ч. '

Получено, что зависимость ПОЭ крови крупного рогатого скота и оьец от Бремени наблюдения имеет в целом линейный характер. По ;,!ере увеличения видового абсолютного значения начальной скорости седиментации эритроцитов такал зависимость приобретает, например у свиней, выраженный нелинейный характер.

На основе этих экспериментальных данных были расчетным путем определены в динамике значения СОЭ у разных видов животных, графически представленные на рис. 1. Из него видно, что характер изменения исследуемого показателя во времени значительно определяется видом животного. Если СОЭ крови-лошадей и свиней в большей мере претерпевает изменения в течение суток, особенно в первые часы, то таковая крови крупного рогатого скота и овец характеризуется значительно мер шей абсолютной величиной, которая после достижения максимума остается неизменной. Полифазность этого показателя и его непостоянство изменения во времени в течение первых часов не позволяют результаты представлять в виде СОЭ и требуют выражать данные по-прежнему через ПОЭ. При этом в силу нелинейного характера изменения СОЭ во времени рассчетное определение ПОЭ для 1 шш 24 ч на основе результатов, полученных в других временных интервалах, является неприемлемым.

С целью избежания разночтения литературных данных значения ПОЭ следует приводить с одновременным указанием времени их анализа. Например, полученную величину ПОЭ крови овец, равную 1,6 мм и измеренную через 4 ч, целесообразно представлять в виде 1,6 >.м /4 ч.

г

3.3. Определение ПОЭ, СОЭ и гематокрита в наклонных пипетках

Учитывая необходимость большого времени для анализа крови усовершенствованным методом Панченкова (до 4-5 ч) и все еще невысокую воспроизводимость получаемых при этом данных , в работе были проведены исследования, направленные на дальнейшее совершенствование и научное обоснование ускоренного метода анализа крови в наклонных пипетках.

Для метрологического обоснования метода определения СОЭ крови животных в наклонных пипетках прежде всего была необходимость дальнейшего изучения динамики ПОЭ во времени. Если она у крупного рогатого скота и овец представляет в первые часы кривую, близкую к прямолинейной, то у свиней -- имеет несколько нелинейный характер. Эти данные послужили основой для определения расчетным путем динамики СОЗ крови у разных видов животных, представленной на рис. 2. Как из него следует, СОЭ крупного рогатого скота и овец в первые 10-20 мин быстро возрастает, к 40-60 мин достигает максимума и на протяжении последующих 1,5 ч практически остается постоянной.

СОЭ крови свиней вначале также быстро возрастает, достигает максимума и в пределах 20-40 мин остается постоянной г. последующи 20%-ым спадом к 60 мин. " , .

Наличие систематического сдвига в значениях СОЭ, полученных разными исследователями, позволяет пренебречь в опытах её отклонениями в пределах 20 X. Это открывает возможность в интервале 20-60 мин выражать результаты измерений непосредственно через СОЭ, а время анализа выбирать не фиксированным, а с учетом средней величины седиментации эритроцитов в каждой серии опытов. Значение случайной погрешности в указанном интервале времени отсчета показаний также принимает приемлемые величины (до ±5-10%).

Таким образом, проведенное обоснование' возможности измерения СОЭ в наклонных пипетках создает основу для систематизации материалов публикаций разных авторов.

Для дальнейшего подтверждения правомерности применения метода наклонных пипеток возникла необходимость повышения воспроизводимости метода Панченкова, используемого в качестве контрольного. Это было достигнуто увеличением кратности и времени анализа проб. Получено, что переход от однократного анализа про-

от времени анализа 1 - лошади, 2 -свиньи, 3 - овцы, 4 - крупный рогатый скот

1 - свинья, 2 - овцы, 3 - крупный рогатый скот

бы крови к трехкратному позволяет увеличить коэффициент корреляции между показателями ПОЭ в вертикальных и наклонных пипетках с 0,63-0,72 до 0,87-0,91, а уровень достоверности с Р> 0.05 до Р< 0,001 ( табл.1 ). '

Ив обобщения полученных результатов следует, что в наклонных пипетках (ф = 60°) СОЗ крупного рогатого скота находится в пределах 10-22 мм/ч, овец - 13-21 мм/ч, свиней - 31-54 мы/ч.

Метод наклонных пипеток по скорости проведения анализа и воспроизводимости заметно превосходит усовершенствованный метод Панченкова, однако при его использовании результат, с учетом времени подготовки проб, может быть получен не ранее 40-60 мин и при наличии объема крови не менее 0,10-0.15 мл. В связи с этим была поставлена задача изыскать экспресс- микрометод, результат реализации которого представлен в разделе 3.4.

Наряду с определением ПОЭ в наклонных пипетках было проведено изучение возможности определения в них гематокрита в силу достаточно высокой скорости седиментации эритроцитов. Необходимость таких исследований Еызвана тем, что, согласно литературным источникам в крови человека, искусственно доведенной до нормального значения гематокрита, СОЭ во многих случаях выравнивалась до нормы Бурчинскии Г.И., 1962; Кокер А.Г., 1082 ). При выявлении высокой корреляции между этими показателями может оыть предложен способ нормирования СОЭ на величину отклонения гематокрита от среднего его значения.

Установлено, что при осаждении эритроцитов крови в наклонных пипетках дане с самым низким значением СОЭ (крупный рогатый скот, овцы) имеется возможность определения величины гематокрита через 24 ч по высоте эритроцитарного столба с достаточной точностью. Между значениями эритроцитарного столба (И эрит) в наклонных пипетках, измеренными через 24 ч, и гематокритом (Н), установленным методом центрифугирования, выявлена высокая корреляция (г = 0.95, Р < 0,01-0,001). При этом систематическая погрешность разработанного метода составляет не более 5-7 %, а случайная еще меньше - ±2-ЗХ .

3.4. Разработка экспресс-метода определения ПОЭ в микрообъемах крови на основе ее центрифугирования

В работе была продолжена реализация идеи ускоренного определения скорости оседания эритроцитов крови на основе её центрифугирования при малых ускорениях и экспозициях, в отличие от режимов получения гематокритного числа.

В качестве модели была выбрана кровь овец, 1сак кмеггдая одно из самых низких значений СОЭ. Были изучены зависимости величины ПОЭ от времени центрифугирования при разном числе оборотов. Установлено, что при центрифугировании крови со скоростью 1 тыс об/мин в интервале от 1 до 5 минут оависимость ПОЗ от времени осаждения носит линейный характер. В итоге с у отом ряда метрологически требований пришли к выводу, что очтлиа.лышы режимом для определения ПОЭ |срови животных, имещаз: низкий уровень СОЭ по Паичешсову, является центрифугирование крови при 1 тыс об/шш в течение 2 мин ( табл.З ). Для проведения анализа требуется в 3 раза меньший объем крови и достигается большая точность измерения (±52).

При это!.! с учетом времени, затрачиваемого на подготовку 3-5 проб п отсчет по!изаш;й, необходимо не более 10-15 минут, то есть в <1-5 раз меньше, чем при использовании метода наглолиых пипеток. Следовательно, разработанный метод вполне мо;:;ет быть отнесен к зкспресс-микро.четодам. •

К особенностям данного метода следует отнести потребность в использовании низшоборотщк центрифуг (п < 0.5 тис. об/шш) при проведении анализа ПОЭ крови жизотиых, греющих повышенные его значения, например свиьей.

3.5. Изучение зависимости СОЭ от гематокрита и роли , кратности измерений

Большинство литературных источников дзот такие сведения о влиянии гематокрита на СОЭ, которые могут быть отнесены к качественным.

В работе была поставлена задача изучить зависимость СОЭ крови крупного рогатого скота и овец от величины гематокрита. Для ее успешной рзагпгацик и соответственно снижения ошибки опыта

проводили трехкратный анализ как СОЭ, так и геыатокрита. В результате выявлено наличие высокой корреляции ( табл.2 ) между СОЭ и Н, измеренными в наклонных пипетках ( г-О,89-0,91, Р <0,001 ). Последнее указывает на то, что гематокрит играет большую роль в формировании СОЭ крови.

С целью внесения поправки на колебания гематокрита был рассчитан гематокритный коэффициент СОЭ крови в наклонных пипетках, который оказался равным 4 Х/ед. гематокрита. Кроме того на основе ряда справочных литературных данных определены средние значения гематокрита в норме. Эти величины для лошадей, свиней и кроликов составили 40, крупного рогатого скота - 37 и овец -35%. Приведение значений СОЭ к единому базовому гематокриту каждого животного позволяет уменьшить ошибку репрезентативности и этим повысить уровень достоверности результатов.

Следует отметить, что в работе при решении всех поставленных задач осуществлялся многократный анализ 1саждой пробы. Как видно из данных табл. 1 и 2, применение трехкратного анализа СОЭ и гематокрита позволяет в десятки раз поднять уровень достоверности результатов и соответственно эффективность предлагаемых методов. Данный методический прием успешно может быть использован при проведении многих гематологических исследований.

Полученные результаты и разработанные практические предложения могут способствовать более широкому применению показателей СОЭ и гематокрита в клинической ветеринарной практике.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены видовые закономерности изменения СОЭ крови по Панченкову в течение 24 ч у крупного рогатого скота, овец, свиней и лошадей. При высоких значениях этого показателя (лошади, свиньи) он вначале возрастает во времени, достигает максимума и значительно снижается к концу суток. По мере уменьшения абсолютной величины СОЭ (крупный рогатый скот, овцы) она возрастает во времени до небольшого значения и далее остается постоянной. Определены наиболее высокие показатели СОЭ у лошадей - 125 мм/ч, у свиней - 8-10 мм/ч, крупного рогатого скота и овец - 0,5-0,8 мм/ч.

1. Значения коэффициента корреляции между ПОЭ крови крупного рогатого скота (п=9), измеренными в наклонных (1 ч) и вертикальных пипетках (4-8 ч) при разной кратности анализа проб

Время аналига в вертикальных пипетках, ч Кратность измерения - 1 Кратность измерения - 3

1-я серия 2-я серия

Г Р г р г р

4 0.75 <0,05 0,73 <0,05 0,72 <0,05 0,79 <0,01 0,84 <0,01 0,63 >0,05 0,84 <0,01 0,91 <0,001 0,87 <0,001

6

8

2. Значения коэффициента корреляции между ПОЭ и гематокритом крови крупного рогатого скота (п-9) при разной кратности анализа проб

Положение пипетки Время наблюдения, ч Кратность измерения 1 Кратность измерения - 3

1-я серия 2т я серия

г Р г Р г Р

4 0,51 >0,05 0,40 >0,05 0,65 <0,55

Вертик. 6 0,63 >0,05 0,51 >0,05 0,88 <0,001

8 0,79 <0,01 0,13 >0,05 0,67 <0,05

Наклон-(<? - 60°) 1 3 0,93 0,86 <0,001 <0,01 0,61 0.62 >0,05 >0,05 0,89 0,91 <0,001 <0,001

3. Значения ПОЭ (мм) крови овец при различных режимах центрифугирования

Скорость центриф.. тыс/мин

Время центрифугирования, мин

0.5 1

2

3 -4 ' 5 6 8 12

19 24 28 29 31 35

32 35 ' - 36

38 38

6,5 19 . 24

18 32

14

38

2. Метод определения СОЭ крови в наклонных пипетках (ф -60°) позволяет в 6-8 раз быстрее провести подобное исследование, чем при использовании метода Панченкова.

3. Установленное относительное постоянство скорости оседания эритроцитов в наклонных пипетках в интервале 20-60 мин создает метрологическую основу для сопряжения результатов равных исследователей, выраженных через ПОЭ, путем соответствующего приведения их к СОЭ.

4. Определены нормативные значения СОЭ в наклонных пипетках крови крупного рогатого скота, овец (10-22 мм/ч) и свиней (31-54 мм/ч). Эти показатели охватывают диапазон колебания скорости оседания эритроцитов многих видов животных ( козы, кролики, куры, собаки ).

5. Разработан экспресс-микрометод определения ПОЭ на основе центрифугирования малых объемов крови (0,05 мл). При низкой скорости седиментации эритроцитов ( у овец ) оптимальным рекю/ом их осаждения является 1 тыс об/мин в течение 2 мин.

6. Высота эритроцитарного столба крови животных в наклонных пипетках, измеряемая через 24 ч, достоверно коррелирует со значением гематокрита, определяемого центрифугированием (г » 0,95, Р <0,001) и с достаточной точностью ( ±5-? X ) совпадает с ним по абсолютной величине.

7. Между показателями СОЭ и гематокритом в наклонных пипетках (ф=60°) имеется высокая корреляция (г =0,89-0,91, Р < 0,001), что делает возможным нормирование измеряемых значений СОЭ на величину гематокрита.

8. Применение многократного анализа каждой пробы крови (3-5) при проведении гематологических исследований позволяет существенно повысить уровень достоверности результатов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для получения с удовлетворительной точностью результатов время отсчёта ПОЭ по Панченкову следует выбирать о учётом вида животного. У свиней, имеющих высокое значение ПОЭ, регистрацию показателя можно начинать через 2-3 ч, а у крупного рогатого скота с низкими его значениями - не ранее 4-5 ч. Рекомендуемые

для анализа интервалы времени соответствуют допустимым срокам хранения крови.

2. С целью обеспечения возможности комплексного исследования крови в лабораторных условиях предлагается кровь при ее взятии вначале стабилизировать антикоагудянтом и только непосредственно перед анализом разводить ее по общепринятой методике 5Х-ым раствором цитрата натрия.

3. При исследовании СОЭ крови целесообразно использовать метод наклонных пипеток, осуществляя отсчет показаний в интервале 20-60 мин с последующим вычислением СОЭ.

4. Наряду с СОЭ в наклонных пипетках следует через 24 ч определять величину гематокрита с последующим внесением поправки в СОЭ на величину отклонения гематокрита от базовой величины, используя при этом рассчитанный нами коэффициент, равный 4 Х/ед. гематокрита. В качестве базовых величин рекомендуются значения: 402 - для крови лошадей, свиней и кроликов, 372 - для крови крупного рогатого скота, 35Х - овец.

5. Для повышения достоверности результатов оценку СОЭ (ПОЗ) крови каждой пробы следует проводить на основе 3-кратного её анализа.

Величину ошибки среднего арифметического значения при пятикратном анализе одной пробы крови целесообразно испольэовать для предварительной характеристики уровня погрешности используемых гематологических методов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Эайнашева Г.Н. Оценка воспроизводимости показателя СОЭ в эксперименте // Тез. докл. Респ. научно-произвол, конф. Достижения Казанской ветеринарной школы - в практику животноводства. -Казань: КВИ, 1991. - С.07.

2. Зайнашева Г.Л.- Изучение влияния различных факторов на величину и воспроизводимость СОЭ. Отчет по теме. ВНТИЦ, N гос. регистрации 01910038869, ИНВ. N 02920007729, 1992. - 5 с.

3. Тукшаитов Р.Х., Зайнааева Г.Н. Оценка предварительного отбора капилляров в обеспечении воспроизводимости СОЭ // Те8. докл. научно-прсизй. коиф. Актуальные вопроси ветеринарии и зоотехнии. - Казань: КБИ. 1992, - С.82.

4. Заинашева Г.Н., Тукшаитов Р.Х. К разработке экспресс-анализа СОЭ крови // Тез. докл. научно-произв. конф. по проблемам ветеринарии и животноводства. - Казань: КВИ, 1904. - С.141.

5. Тукшаитов Р.Х., Заинашева Г.Н. Обоснование низкой достоверности показателя СОЭ // Физиологические аспекты ветеринарии и зоотехнии. - Казань: КВИ, 1994. - С.32-34.

6. Заинашева Г.Н. Повышение точности анализа гематологических показателей // Научно-производственная конференция по проблемам ветеринарии и животноводства / Мат. докл. в рамках программы 1-го съезда вет. врачей респ. Татарстан. -Казань: КГАВМ, 1995. - С.136.

7. Тукшаитов Р.Х., Зайнашева Г.Н. Простой спосоо определения гематокрита // Научно-производственная конференция по проблемам ветеринарии и животноводства / Мат. докл. в рамках программы 1-го съезда вет. врачей респ. Татарстан. -Казань: КГАВМ, 1995. -С.135.

Заказ N Подписано в печать Я?.02.96. Формат 60x84

Бумага писчая. Печать офсетная. I п.л. Тираж 100 эк8. Участок офсетной печати КГАВМ. Казань 420074, Казанская государственная академия ветеринарной медицины.