Разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов, изучение их эффективности при бруцеллезе животных

Карлова, Мария Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов, изучение их эффективности при бруцеллезе животных
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов, изучение их эффективности при бруцеллезе животных"

На правах рукописи

804605104

КАРЛОВА Мария Юрьевна

РАЗРАБОТКА в- ИЯ-БРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ЭРИТРОЦИТАРНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ, ИЗУЧЕНИЕ ИХ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ ЖИВОТНЫХ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 7 ИЮН 2010

Новосибирск - 2010

004605104

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

старший научный сотрудник Дегтяренко Людмила Владимировна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Храмцов Виктор Викторович,

доктор ветеринарных наук, профессор Салмаков Константин Михайлович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Нижегородская государственная

сельскохозяйственная академия

Защита состоится « 15 » июня 2010 г. в « 11-00 » часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 при ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62.

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «/X » мая 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тел1ы. Бруцеллез относят к числу опасных зооантропоно-зов. За последние годы в ряде регионов РФ осложнилась эпизоотическая ситуация по этой болезпи (Ю.В. Пашкина, 2007; С.К. Димов с соавт., 2009; М.М. Желудков, 2009).

При бруцеллезе животных широкое практическое применение в нашей стране получили, прежде всего, реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК, РДСК), роз бенгал проба (РБП), реакция иммунодиф-фузии (РИД), кольцевая реакция с молоком (KP).

Несмотря на специфичность и чувствительность, эти тесты, по мнению многих исследователей, не выявляют всех инфицированных животных при оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу хозяйств (К. В. Шумилов, 1981; И А Коси-лов, 1999; О.Д. Скляров, 2005; М.П. Альбертан, М.И. Искавдаров, АИ. Федоров, 2006; Н.М. Колычев, М. А. Бажин, B.C. Власенко, 2007 и др.).

В современных условиях происходит дальнейшее разукрупнение животноводческих хозяйств. Развиваются мелкие крестьянские и фермерские хозяйства. В этой связи целесообразно изыскание простых высокочувствительных экспресс-методов, позволяющих проводить не только диагностику бруцеллеза у интактных животных, но и дифференцировать больных от привитых слабоагг-лютиногенными противобруцеллезными вакцинами.

РИГА (реакция непрямой гемагглютанации) при бруцеллезе была внедрена в СССР в медицинскую практику. При этом использовали лиофилизирован-ный эритроцигарный диагностикум, выпускаемый Одесским предприятием по производству бактериальных препаратов, методика изготовления которого была разработана в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи. В ветеринарии этот препарат благодаря разработкам Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ), ФГУ Всероссийского государственного Центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ), Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИЭВСДВ) был принят в СССР к внедрению при бруцеллезе крупного рогатого скота в 1990 году. После распада СССР возникла необходимость разработки в РФ отечественного диагностикума, который возможно бы было применять не только на непрившых животных, но и на иммунизированных слабоагглютиногешшми противобруцеллезными вакцинами. Разработку технологии изготовления S-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов осуществляли С.Г. Хаиров, О.Ю. Юсупов (1979); И.П. Иванов, В.Б. Бельченко (1980); А.П. Красиков (2002) и др., но к началу наших исследований зарегистрированного в РФ S-бруцеллезного эритроцигарного диагностикума для ветеринарных целей не было.

K.M. Салмаков, 1975, 2007; И.П. Никифоров, 1995; A.C. Донченко с соавт., 2003; В.В. Сочнев, 2004; Л.В. Дегтяренко, 2005; A.M. Фомин с соавт., 2009 и др. В частности, с этой целью применяли R-бруцеллезный антиген в РСК.

Сведения о возможности использования РНГА с R-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом для оценки иммунного статуса животных, вакцинированных инагглютиногенными и слабоагглютиногенными противобруцеллез-ными вакцинами, крайне ограничены.

Исходя из вышеизложенного, считаем, что исследования, посвященные разработке S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов для РНГА, являются актуальными.

Цель исследований. Цель исследования - разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов для РНГА, изучение их эффективности при бруцеллезе животных.

Задачи исследования:

-разработать рациональную технологию изготовления S-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучить его эффективность в экспериментальных, производственных условиях на разных видах животных;

-разработать рациональную технологию изготовления R-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучить его эффективность на лабораторных животных и крупном рогатом скоте.

Научная новизна. Разработаны новые биотехнологии изготовления специфичных активных и чувствительных S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов для РНГА.

В экспериментальных и производственных условиях доказана высокая диагностическая значимость новых S- и R- бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов на разных стадиях развития инфекционного и вакцинного процессов.

Доказана более высокая чувствительность сконструированного S-бруцеллезного эригроцитарного диагностикума в сравнении с официальными методами диагностики при исследовании сыворотки крови крупного и мелкого рогатого скота в очагах естественного течения бруцеллезной инфекции.

Разработаны критерии эпизоотической оценки животных с разным иммунным статусом, реагирующих в РНГА с новым S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом, в благополучных и неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах.

Показана возможность использования РНГА с изготовленным S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом при исследовании на бруцеллез сыворотки крови и молока у крупного рогатого скота, реиммунизированно-го слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B.abortus 82, 75/79-АВ, в ранние и отдаленные сроки после прививки (с 30-го дня - молоко, с 60-го - сыворотка крови).

ного диагностикума в РНГА, а также применения указанного теста при дифференциально-диагностических исследованиях крупного рогатого скота на бруцеллез в комплексе с другими средствами и методами.

Практическая и теоретическая значимость работы. Внедрение в ветеринарную практику РНГА с Б-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом позволит более эффективно контролировать эпизоотическую обстановку по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота, своевременно выявлять источники возбудителя инфекции и способствовать ускорению ликвидации болезни.

Разработанный Я-бруцеллезный эритроцстгарный диапюстикум в РНГА позволит контролировать иммунный ответ у крупного рогатого скота, привитого слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов 82, 75/79-АВ, и дифференцировать больных бруцеллезом животных от здоровых, реагирующих на вакцину.

Результаты научных исследований могут быть использованы при изучении патогенеза и иммуногенеза бруцеллеза животных, инфицированных как типичными, так и диссоциированными формами бруцелл.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: второй международной конференции «Актуальные вопросы диагностики болезней животных» (Алматы, 2005), международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005), 5-й межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006), 7-й межрегиональной научно-практической конференции «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала» (Омск, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропо-нозных инфекций» (Омск, 2009).

Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе одна статья - в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования и науки РФ («Ветеринария и кормление»).

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 170 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Диссертация иллюстрирована 26 таблицами, 9 рисунками. Список литературы включает 206 источников, из них 54 - зарубежных.

Внедрение результатов исследований. Результаты исследований использованы для разработки: Инструкции по применению набора для серологической диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), утвержденной Россельхознадзором 25.09.2006 г.; методических рекомендаций «Контроль поствакцинального иммунного ответа у крупного рогатого скота, иммунизированного противобруцеллезными слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов 82, 75/79-АВ», утвержденных

подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» секции инфекционной патологии отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии; методических рекомендации по дифференциальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота, иммунизированного противобру-целлезными вакцинами и по контролю иммунного ответа крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, утвержденных секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области (при Министерстве сельского хозяйства и продовольствия Омской области), прот. №7 от 24.11.2006 г. и прот. №4 от 10.10.2009 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты разработки рациональной технологии изготовления Э-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучения его эффективности в экспериментальных, производственных условиях на разных видах животных;

- результаты разработки рациональной технологии изготовления Я-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучения его эффективности на лабораторных животных, крупном рогатом скоте.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования

Работа выполнена в лаборатории диагностики бруцеллеза Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных в период с 2003 по 2009 годы.

В процессе разработки и апробации эритроцитарных бруцеллезных диаг-ностикумов были исследованы сыворотки крови от 263 морских свинок, 77 кроликов. Производственные испытания новых бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов проведены в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу при обследовании 49266 гол. крупного рогатого скота, 4954 гол. овец и 3834 свиней различных половозрастных групп.

Иммунизацию, заражение подопытных животных, отбор материала для бактериологических исследований, посевы на питательные среды, типизацию выделенных культур проводили по общепринятым методикам.

Для заражения животных применяли вирулентные штаммы В.аЬогШя 54, 99; Агак 1330 (Б-формы бруцелл); В.аЪогШз 16-71, 68-71 (Я-формы бруцелл). При вакцинации животных использовали штаммы В.аЬогШ 82, 75/79-АВ, 19; В.теЮежв Кеу-\.

В качестве диагностических тестов в экспериментах и производственных опытах при исследовании сывороток крови применяли РА пробирочную, РБП, РНГА, РСК с Б- и И-бруцеллезными антигенами, РИД с О-ПС антигеном; при исследовании молока - КР, РНГА с молоком, РАП (реакция агглютинации пластинчатая).

В РНГА испытывали эрипгроцитарные бруцеллезные диагностикумы, изготовленные по разработанным нами методикам.

Активность изготовленных Б- и К-бруцеллезных эритроцитарных диагно-

стикумов определяли в РНГА со стандартным образцом лиофилизированной сыворотки антибруцелла абортус ВГНКИ, стандартной бруцеллезной сывороткой производства ООО «Биоценгр»; гипериммунными S- и R-бруцеллезными кроличьими сыворотками, полученными по схеме ВНИИБТЖ. Для определения диагностических титров S- и R-бруцеллезных эритроцигарных антигенов исследовали сыворотки крови морских свинок, кроликов с разведения 1:10 \t выше, непривитого крупного рогатого скота - с 1:50 и выше, свиней и овец - с 1:25 и выше.

Чувствительность экспериментальных S- и R-бруцеллезных эритроцигарных диагностикумов изучали в опытах на лабораторных животных, а также в неблагополучных по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота хозяйствах Омской области.

Постановку РНГА с испытуемыми S- и R-антигенами осуществляли общепринятым способом на физиологическом растворе.

В РА применяли R-бруцеллезный цветной антиген из «Набора компонентов для серологической дифференциации культур бруцелл», изготовленного во ВНИИБТЖ, в РСК - R-бруцеллезный антиген ВНИИБТЖ-ВГНКИ, сконструированный фенольным способом, полученный из глубокодиссоциированного штамма B.abortus 16/4.

Математическая обработка цифровых данных отдельных экспериментов включала определение средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (т) (А.Т. Усович, П. Т. Лебедев, 1970). Титры антител перевели в числовое выражение логарифмов с основанием 10.

Методики отдельных экспериментов, производственных опытов, шло жены в соответствующих разделах диссертации. Часть исследований выполнена совместно с сотрудниками ВНИИБТЖ (В.Г. Ощепковым, Л.В. Дегтяренко, Г.В. Разницыной, С. А Власовой, Н.Г. Шпак) и Государственного учреждения Омской области «Омской областной ветеринарной лаборатории» (И.Н. Каликиным).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Результаты разработки рациональной технологии изготовления S-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучения его эффективности в экспериментальных, производственных условиях на разных видах животных

2.2.1.1. Отработка методики изготовления S-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума

При изготовлении эритроцитарного антигена использовали эритроциты барана, стабилизацию которых проводили с помощью формалина по методу R. Weinbach (1958) в нашей модификации.

Первоначально апробировали способ получения S-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума по методике Прикаспийского ЗНИВИ (С.Г. Хаиров, 2002), который заключался в экстрагировании антигена из бактериальной мае-

сы штамма В.аЬоНш 19 и обработке суспензии бруцелл 2,0 % вторичным ал-килсуфатом натрия. В качестве детергента авторы применяли моющую жидкость «Прогресс», в состав которой входил ряд поверхностно-активных веществ, в том числе и вторичный алкилсульфат натрия. По данной методике было изготовлено шесть опытных серий 8-эритроцитарных диагаостикумов, из них три серии обладали недостаточной (титр 1:400-1:800) активностью при постановке РИГА с Б-биофабричной бруцеллезной сывороткой (заданный тигр 1:1600).

В этой связи было продолжено изыскание рационального способа изготовления Б-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума.

При изготовлении Б-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума использовали культуру вакцинного штамма В.аЬоПш 19. Антигенное начало извлекали химическим методом, воздействуя на клетки бруцелл поверхностно-анионоактивным веществом из группы первичных алкилсульфатов - додецил-сульфатом натрия. В процессе изыскания Б-бруцеллезного эритроцитарного антигена были апробированы различные параметры времени, температуры, а также концентрации додецилсульфата натрия. Оптимальная доза антигена, изготовленного по разработанному способу, для сенсибилизации опытных серий эритроцитов стабильно составляла 0,25-0,5 мл.

Разработанным нами способом было изготовлено 14 серий Б-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума.

При проверке сроков годности антигены испытывали на специфичность с негативными сыворотками крупного рогатого скота и активность с агглютинирующей бруцеллезной сывороткой ООО «Биоцентр». Эригроцитарные диагностику-мы, изготовленные но разработанной методике, сохраняли активность и специфичность в течение двух лет (срок наблюдения) с условием хранения их при температуре 2 — 6 °С.

Кроме того, провели изыскание оптимальной среды высушивания при лиофилизации Б-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума При этом выяснили, что хорошей растворимостью в физиологическом растворе, специфичностью, активностью обладали бруцеллезные эритроцитарные диагностикумы, при высушивании которых применяли сахарозо-желатиновую среду (Б.И Бланков, Д. Л. Клебанов, 1961).

2.2.1.2. Изучение диагностической ценности РИГА в опытах на лабораторных животных, сенсибилизированных разными штаммами бруцелл

В опыте на 12 кроликах провели сравнительное изучение чувствительности антигенов для РИГА, изготовленных из гомологичных штаммов (В.аЬогШя 19, В.аЬоНив 54, 2?.5ий 1330), которые применяли для заражения и вакцинации животных.

При этом было установлено, что уже на седьмые сутки после вакцинации культурой штамма В.аЬоПш 19 и заражения культурами вирулентных штаммов В.аЪогШэ 54, Я^мм 1330 в организме 100,0 % кроликов происходит биосинтез

специфических бруцеллезных антител, которые регистрируются в РНГА со всеми опытными диагноста кумами, а также в РА и РБП. В РНГА испытуемые антигены имели высокую активность. Более высокой активностью обладал антиген, изготовленный из культуры вирулентного штамма B.abortus 54. Уровень гемагглютининов у отдельных кроликов достигал 1:40920.

Таким образом, чувствительность РНГА не зависела от видовых особенностей культур бруцелл, используемых при изготовлении диагностикума. Однако более высокую активность определили у антигена, эритроциты которого нагружали сенситшюм, извлеченным го вирулентного штамма B.abortus 54. Иными словами, активность антигена, изготовленного разработанным способом, зависит от вирулентных свойств штаммов бруцелл.

Изучение чувствительности РНГА с новым S-бруцеллезным эритроцитар-ным антигеном продолжили при исследовании сывороток крови от 177 морских свинок в трех опытах.

Испытание диагностической ценности РНГА в сравнении с РА, РСК, РБП при сенсибилизации 64 морских свинок бруцеллами видов abortus, suis в опыте № 1 показало, что РНГА имеет высокую чувствительность, так как с её помощью на 30 сутки после заражения и вакцинации установлено 100,0 % животных, положительно реагирующих даже на малые дозы бруцелл (100 м.к.).

В опыте № 2 при исследовании сыворотки крови от 68 морских свинок в отдаленные сроки (150-420 суток) после заражения вирулентным штаммом бруцелл B.abortus 54 (1000 м.к.) чувствительность РНГА с новым S-бруцеллезным эритроцитарным антигеном была высокой: положительно реагировали 95,1 -100,0 % морских свинок.

При исследовании животных из опыта № 3, зараженных вирулентными культурами В.suis 1330, B.abortus 54 и вакцинированных B.melitensis Rev-1 в дозах 100 и 1000 м.к., установили, что гемагглютинины у значительного количества опытных животных обнаруживаются, в отличие от агглютининов, позже, к 21 суткам исследования. При этом только в группе животных, вакцинированных B.melitensis Äev-l малыми дозами (100 м.к.), положительно реагировало 75,0 %, в остальных - 100,0 % морских свинок. РНГА имела стабильные показатели с 30 по 60 сутки исследований животных, когда позитивные результаты имели 100,0 % вакцинированных или зараженных морских свинок, при этом у отдельных животных титр в РНГА достигал 1:20480.

Таким образом, чувствительность РНГА с испытуемым антигеном зависит от стадии развития бруцеллезной инфекции, от биологических свойств штамма (вирулентности) и дозы инфицирующего агента.

2.2.1.3. Результаты испытания РНГА с S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом в производственных условиях

2.2.1.3.1. Результаты изучения специфичности S-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума

Специфичность изготовленных нами опытных партий эритроцитарных

бруцеллезных диагностикумов изучали при исследовании непривитых животных в благополучных по бруцеллезу хозяйствах Омской области.

При этом обследовали 16248 проб сыворотки крови крупного рогатого скота, неиммунизированного противобруцеллёзными вакцинами, из шести хозяйств. Специфичность эритроцитарного бруцеллезного антигена изучали также на других видах животных: 3834 гол. свиней разных половозрастных групп из девяти свиноводческих хозяйств, 4474 гол. овец из трех хозяйств.

Результаты исследований сыворотки крови крупного и мелкого рогатого скота, свиней, непривитых противобруцеллезными вакцинами, показали, что диагностическим тигром РИГА при исследовании крупного рогатого скота целесообразно считать титр 1:100, свиней -1:50, мелкого рогатого скота - 1:25.

2.2.1.3.2. Результаты изучения чувствительности РНГА с ¡5-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом

Изучение диагностической значимости РНГА с Б-бруцеллезным эритроцитарным антигеном проведено при исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота, принадлежащего частному сектору с. Чадск Щербакульского района и ОПХ «Боевое» Исилькульского района Омской области (табл. 1).

Таблица 1 — Результаты исследования сыворотки крови от непривитого противобруцеллезными вакцинами крупного рогатого скота неблагополучных по бруцеллезу стад

№ экспертизы Количество проб Реагировали положительно Совпали показатели РА+РСК с РНГА Дополнительно выявили в РНГА к комплексу РА+РСК+РБП+ РИД

РА+РСК РНГА

абс. % абс. % абс. % абс. %

Э 12 70 12 17,1 15 21,4 12 100,0 3 4,3

ЭЗЗ 53 - - 3 5,7 - - 1 1,9

Э 45 53 1 1,9 3 5,7 1 100,0 2 3,8

Э 53 48 1 2,1 2 4,2 1 100,0 1 2,1

Э38 48 1 2,1 1 2,1 1 100,0 - -

Э 7 57 20 35,1 21 36,8 19 95,0 2 3,5

Э7А 132 32 24,2 31 23,5 31 96,9 - -

Э 9 137 12 8,8 25 18,2 10 83,3 7 5Д

Итого 598 79 13,2 101 16,9 75 94,9 16 2,7

При исследовании 598 гол. крупного рогатого скота, непривигого противобруцеллезными вакцинами, неблагополучных по бруцеллезу стад комплексом РА+РСК было установлено 79 больных бруцеллезом животных (13,2%). Более высокая чувствительность отмечена у РНГА с испытуемым Б-бруцеллезным эритроцитарным антигеном. С её помощью удалось выявить максимальное количество положительно реагирующих - 101 (16,9%). Допол-

шггельно с помощью РНГА к комплексу РА+РСК+РБП+РИД бьшо выделено в разных хозяйствах от 1,9 до 5,3 % положительно реагирующих животных. При этом отмечена высокая степень совпадения положительных результатов РИГА и комплекса РА+РСК+РБП+РИД (83,3-100,0 %). Ценные данные в отношении диагностической эффективности РНГА с испытуемым Б-бруцеллезным эритро-щггарным диагаостикумом получены нами при обследовании мелкого рогатого скота трех неблагополучных по бруцеллезу отар в трех районах Омской области. Установлено диагностическое преимущество РНГА перед комплексом РА+РСК+ РБП+РИД (выделено соответственно 36,9 % и 24,2 % положительно реагирующих).

Из общего количества исследованных проб сыворотки крови (480) с помощью РА+РВП+РСК+РИД диагностировали 120 положительных проб (25,0 %), из них положительные результаты в РСК отмечены в 114 пробах (23,8 %). В РНГА реагировало положительно 177 гол. (36,9 %). Только с помощью этого теста из общего количества животных удалось выявить 57 (11,9 %) реагирующих животных. Дополнительно с помощью Б-бруцеллезного эритро-цитарного диагностикума в РНГА к комплексу РА+РБП+РСК+РИД диагностировали в отдельных отарах от 8,7 до 16,0 % реагирующих животных.

2.2.1.3.3. Результаты испытания РНГА с ¡¡»-бруцеллезным эритроцитарным диагаостикумом при исследовании животных, привитых вакцинами из штаммов 82,75/79 АВ

Далее изучали возможность применения РНГА с новым бруцеллезным эритроцитарным диагаостикумом при исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота, реиммунизированного вакцинами из штаммов В.аЬоПш 82, 75/79-АВ.

При обследовании 20855 гол. крупного рогатого скота, ревакцинированно-го штаммом 82, из благополучных по бруцеллезу хозяйств Омской области предварительно определяли диагностический титр РНГА, сроки исследования животных после иммунизации. При этом установлено, что исследование сыворотки крови крупного рогатого скота в РНГА с разведения 1:200 можно проводить через 60 суток и более после иммунизации вакциной из штамма В.аЬогШэ 82, т.к. гемагглютшшны в тигре 1:200 диагностировали в этот срок у низкого процента животных (0,1 %).

Изучение диагностической эффективности РНГА было продолжено при обследовании крупного рогатого скота, привитого вакцинами из штаммов 82 и 75/79-АВ, в пяти неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах Омской области.

При исследовании 7097 проб сыворотки крови выделено 188 (2,6 %) боль-гак бруцеллезом животных. У 274 (3,9 %) гол. серопозитивные реакции отнесены к поствакцинальным. Животные с поствакцинальными реакциями были оставлены в стадах, чем предотвращен дополнительный экономический ущерб при оздоровлении хозяйств. Комплексом РА+РСК диагностировали максимальное количество положительно реагирующих - 436 (6,1 %), однако в высоких тиграх реагировало только 139 (2,0 %) животных. В РНГА установили 279

положительных проб (3,9 %), из них 167 (2,4 %) - в тигре 1:400 и выше (максимальный титр 1:6400). Все животные с титром гемагглютининов 1:400 и выше были признаны больными бруцеллезом. Достоверность данных РИГА подтверждается совпадением её показаний с комплексом РА+РСК в высоких титрах. Так, из общего количества реагирующих в высоком титре РНГА (167 гол.) в 124 случаях (74,2 %) в сыворотках крови животных были определены Б-агглютинины и комплеменгсвязывающие антитела в высоких концентрациях. Дополнительно с помощью РНГА удалось диагностировать 28 положительно реагирующих животных.

Следующий этап нашей работы был посвящен изучению возможности применения РНГА с молоком при бруцеллезе крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма 82.

При исследовании 641 пробы молока с испытуемым Б-бруцеллезным эрит-роцитарным антигеном от животных из благополучных по бруцеллезу хозяйств через 30-60 суток после иммунизации вакциной из штамма 82 положительный результат в разведении 1:50 диагностировали только у одной коровы (0,2 %), что свидетельствует о специфичности реакции. Результаты КР с молоком, в т.ч. с цельным, а также РАП были отрицательные.

Таким образом, мы установили, что исследование молока в РНГА с новым бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом можно проводить в ранние сроки (через 30 суток) после иммунизации животных. Диагностическим тигром реакции при исследовании молока от коров этой категории хозяйств целесообразно считать разведение молока 1:100, в котором произошла гемагглютинация эритроцитов с оценкой на 3 и 4 креста.

При исследовании молока в РНГА от 1643 коров, иммунизированных вакциной из птгамма 82, из двух неблагополучных по бруцеллезу гуртов выявили более высокую чувствительность испытуемого Б-бруцеллезного эритроцитар-ного диагностикума в сравнении с КР, т.к. в сроки 1-6 месяцев после вакцинации животных в РНГА положительно реагировало 2,4 % коров, в КР-1,9 %. Достоверность показаний РНГА с молоком подтверждают результаты исследования сыворотки крови от этих животных. Так, 68,0 % коров, реагировавших в РНГА, одновременно имели бруцеллезные антитела, выявленные комплексом РА+РСК+РНГА+РИД.

2.2.1.3.4. Изучение эпизоотической опасности животных, положительно реагирующих в РНГА с Я-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом

При изучении вопроса об эпизоотической опасности животных, имеющих позитивные показатели в РНГА, было отобрано восемь коров с различным сочетанием иммунологических реакций, молоком которых инфицировали морских свинок (табл. 2).

Положительный результат биопробы на морских свинках получен у четырех коров (50,0 %), в т.ч. из патологического материала морских свинок были выделены культуры бруцелл.

В результате изучения биологических свойств изолированных от животных культур установлено, что они имели признаки полевых штаммов бруцелл.

Следует ошетить, что животные, от которых были выделены культуры, положительно реагировали в РИГА с сывороткой крови в титрах 1:200-1:3200, РИГА с молоком - 1:100-1:800.

Кроме того, молоко от пяти коров, которые реагировали в РИГА с сывороткой крови в титрах 1:100-1:800 и молоком 1:50-1:800, было исследовано методом ПЦР (полимеразная цепная реакция) в ГУ «ООВЛ». При этом генетический материал микроорганизмов рода Brucella был обнаружен в пяти представленных образцах, что подтверждает достоверность результатов РИГА и доказывает эпизоотическую опасность животных, положительно реагирующих с испытуемым S-бруцеллезным эритроцитарным антигеном.

Таблица 2 - Результаты иммунологических, бактериологических и молекуляр-но-биологических исследований коров, реагировавших положительно в РИГА

№ п/ Район, хозяйство, ферма, Результаты исследования сыворотки крови Результаты исследования молока Результаты биопробы на морских свинках s ftS Р S a 8 а s ®> с ££ 2 PI в еь | 3 я S

п № экспертизы <в РСК РИГА а РИГА РАП I if е выде лева культура я ё® ¡3 Ц ° 5 § я Si 3 в р*

1 Колосовсюш р-н, ф. Кутурлы хорова, экс. 43 50 1:5 1:200 цел. 1:100 + 20 + н/и н/н

2 корова,экс.43 40 1:40 1:1600 1:4 1:400 + 20 + •aim н/и

Омский р-н, ЗАО «Племзавод Ом-

ский»

3 корова № 2027, экс.48 100 1:20 1:3200 1:8 1:800 + 40 + + н/и

Щербакупьскнй р-н, с. Чадскэкс. 18а

4 корова №1 - 120 1:800 1:2 1:100 + - +

5 корова №2 50 1:10 1:800 - 1:50 + - - +

6 корова №3 - 1:10 1:100 - - - - н/и +

7 корова -V4 100 1:80 1:800 1:8 1:800 + 20 + + +

8 корова №5 - 1:10 - - 1:50 - ' - - н/и +

Примечание: н/и - исследования не проводили

Эпизоотическая опасность коров, реагирующих в РИГА с новым Б-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом, доказана при бактериологическом исследовании молока: у животных, из биологического материала которых были выделены культуры полевых штаммов бруцелл, РИГА с сывороткой крови и молоком была положительной в 100,0 % случаев.

2.2.2. Результаты разработки рациональной технологии изготовления R-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучение его эффективности на лабораторных животных, крупном рогатом скоте

2.2.2.1. Изыскание способа изготовления R-бруцеллезного эритроцитарно-го антигена, изучение его активности и специфичности

Для выявления R-бруцеллезных антител в сыворотке крови животных, сенсибилизированных диссоциированными формами бруцелл, сконструировали R-бруцеллезный эритроцитарный диагностикум из глубокодиссоциированного штамма B.abortus 16/4 по разработанной нами методике, отличающейся от биотехнологии изготовления S-бруцеллезного эритроцитарного антигена концентрацией первичного алкилсульфата натрия и другими параметрами.

При определении активности изготовленной опытной партии R-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума установили, что гемагглютини-ны в сыворотке крови кроликов, сенсибилизированных R-формой бруцелл по схеме ВНИИБТЖ, содержались в тигре от 1:1280 до 1:2560.

Специфичность изготовленных серий R-бруцеллезных эритроцитарных антигенов была установлена при постановке РНГА с сыворотками крови от здоровых животных - 20 кроликов, 26 морских свинок и 505 гол. непривитого противобруцеллезными вакцинами крупного рогатого скота из двух благополучных по бруцеллезу хозяйств Омской области. При этом получены отрицательные результаты исследований кроликов и морских свинок в разведениях сыворотки крови 1:10, а крупного рогатого скота - 1:50 как с единым антигеном в РА, РСК, так и с новым испытуемым R-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом для РНГА.

Специфичность R-бруцеллезного эритроцитарного антигена была также подтверждена при исследовании сыворотки крови 10 кроликов, гипериммуни-зированных вакцинным штаммом B.abortus 104 М (S-форма), 8 морских свинок, вакцинированных штаммом B.melitensis Rev-1 (S-форма). При этом во всех пробах были получены отрицательные результаты РНГА с R-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом в разведении сыворотки крови 1:10 и выше.

2.2.2.2. Определение чувствительности R-бруцеллезного эритроцитарного антигена в опыте на морских свинках

Чувствительность R-бруцеллезного эритроцитарного антигена испытывали при исследовании сыворотки крови от 60 морских свинок, которые были иммунизированы или инфицированы подкожно в дозе 1 млрд м.к. RS- (B.abortus 82, B.abortus 75/79-АВ), R-формами бруцелл (B.abortus 16-71, B.abortus 68-71).

Установлено, что биосинтез R-антител в организме животных с помощью РСК можно обнаружить у 58,3-76,9 % животных, сенсибилизированных RS- и R-формами бруцелл, через 15 суток после инокуляции антигенов. Гемагглюти-нины в сыворотки крови морских свинок, иммунизированных или зараженных RS- и R-формами бруцелл, установили на 30 сутки исследования у 20,0-54,5 %

животных, на 60 сутки - у 66,7-100,0 % животных, сенсибилизированных диссоциированными формами бруцелл.

В группах морских свинок, вакцинированных слабоагглюгиногенными штаммами B.abortus 75/79-АВ и 82, во все сроки исследований диагностировали S- и R-комплементсвязывающие антитела.

Чувствительность РИГА с R-бруцеллезным эригроцитарным антигеном почти во всех случаях, за исключением морских свинок, вакцинированных штаммом 82, при исследовании животных была ниже в сравнении с PCIC с R-бруцеллезным диагностнкумом.

2.2.2.3. Изучение диагностической ценности R-бруцеллезного эритроцптарного диагностикума при исследовании крупного рогатого скота, иммунизированного вакцинами из штаммов 82,75/79-АВ в производственных условиях

Изучение диагностической эффективности опытного R-бруцеллёзного антигена для РИГА в сравнении с R-бруцеллезным антигеном для РСК провели в благополучных по бруцеллёзу стадах крупного рогатого скота, иммунизированного вакцинами из штаммов 82, 75/79-АВ.

РИГА оказалась менее чувствительной при изучении биосинтеза R-бруцеллезных антител в организме животных в сравнении с РСК с R-антигеном. С помощью R-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума на протяжении 60 суток удалось обнаружить от 54,0 до 86,4 % реагирующих животных (в титре от 1:50 до 1:400). В РСК с R-ангигеном реагировало 98,0100,0 % гол крупного рогатого скота. В более отдаленные сроки исследования животных (120-360 суток) биосинтез R-гемагглютининов в организме крупного рогатого скота значительно снижался (30,1-15,2% реагирующих), как и R-комплементсвязывающих антител, которые к 360 суткам обнаруживали у 22,0 % животных.

При обследовании молодняка крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма 82, в отдельных хозяйствах количество реагирующих с R-антигенами в РСК через 30 суток после вакцинации колебалось от 37,8 % до 100,0 %, в РИГА - от 29,7 % до 84,6 %, что доказывает целесообразность осуществления контроля поствакцинального иммунного ответа.

Важно отметить, что, несмотря на более низкую чувствительность РНГА в сравнении с РСК, с помощью R-бруцеллезного эритроцитарного антигена РНГА диагностировано дополнительно к РСК с R-ангигеном 3,6% положительно реагирующего крупного рогатого скота, что свидетельствует о целесообразности применения, наряду с РСК, и РНГА с R-бруцеллезным эритроци-тарным антигеном с целью диагностики R-бруцеллезных антител у животных, сенсибилизированных диссоциированными формами бруцелл.

Изучение диагностической ценности РНГА с R-бруцеллезным антигеном продолжили при исследовании 1514 гол. крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, на неблагополучной по бруцеллезу ферме Омской области.

В результате дифференциации реакций на протяжении четырех месяцев исследования сыворотки крови крупного рогатого скота выявлено 54 (3,6 %) больных бруцеллезом животных и 70 (4,6 %) гол. с поствакцинальными реакциями. В РИГА и РСК И-бруцеллезные антитела в сыворотке крови больного бруцеллезом крупного рогатого скота определяли соответственно у 47 (87,0 %) и 44 (81,5 %) гол. С испытуемым Я-бруцеллезным эршроцитарным диагности-кумом в отдельные сроки исследования положительно реагировало 100,0 % животных, что свидетельствует о высокой чувствительности антигена.

При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота с поствакцинальными реакциями показатели РИГА с Ы-бруцеллезным эршроцитарным антигеном уступали РСК с Л-антигеном (соответственно, 80,0 % и 97,1 % положительно реагирующих животных). Однако с помощью РИГА в отдельные сроки исследования статус здоровых удалось подтвердить у всех животных, реагирующих в низких титрах в РА и РСК с единым антигеном.

Таким образом, в экспериментальных и производственных условиях установлено, что диагностическая ценность РИГА с Я-бруцеллезным эршроцитарным антигеном ниже в сравнении с РСК с ^.-антигеном ВНИИБТЖ, но в отдельные сроки исследования она была равнозначной и позволяла дополнительно диагностировать животных с ^бруцеллезными антителами.

3. ВЫВОДЫ

1. Разработанная биотехнология изготовления Б-бруцеллезного эритроци-тарного диагностикума для РИГА, основанная на химическом воздействии первичного алкилсульфата натрия на культуру вакцинного штамма В.аЬоНш 19, позволяет получить активный специфичный и экономичный диагностикум.

2. Чувствительность РИГА с Б-бруцеллезным эршроцитарным антигеном не зависит от видовых особенностей культур бруцелл, используемых при изготовлении диагностикума. Активность антигена зависит от вирулентных свойств штаммов бруцелл, при изготовлении его из вирулентных штаммов бруцелл, в сравнении с вакцинным штаммом, в отдельные сроки исследований она выше в два раза.

3. Лиофильное высушивание Б-бруцеллезного эритроцитарного антигена с применением сахарозо-желатиновой среды позволяет получить специфичный активный антиген, не уступающий в чувствительности нативному препарату.

4. РИГА с Б-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом обладает высокой чувствительностью: в опытах на морских свинках позволяет диагностировать в отдельные сроки исследования до 100,0 % сенсибилизированных бруцеллезными антигенами животных.

В естественных очагах бруцеллеза крупного рогатого скота РИГА выявляет дополнительно к комплексу официальных диагностических тестов до 5,3 % реагирующих животных при высоком проценте совпадений с РА, РСК, РИД, РБП (от 83,3 до 100,0%).

При бруцеллезной инфекции у мелкого рогатого скота РИГА с Б-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом выявляет дополнительно к по-

казаниям официальных тестов до 12,7% реагирующих животных при 100,0% совпадении её показателей с позитивными показаниями РА, РСК, РБП и РИД.

Животные, имеющие в сыворотке крови и молоке S-гемагглютишшы в диагностическом титре, представляют эпизоотическую опасность, что установлено при бактериологических и молекулярно-биологических исследованиях.

5. Исследование сыворотки крови в РИГА с S-бруцеллезным эритроцитар-ным диагностикумом можно проводить у крупного рогатого скота через 2 месяца, а молока через 30 суток и последующие сроки после иммунизации вакцинами из штаммов В.abortus 82 и 75/79-АВ при осуществлении эпизоотического контроля благополучия животных и оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу пунктов.

6. R-бруцеллезный эритроцигарный диагностикум, сконструированный при воздействии на микробные клетки глубокодиссоциированного штамма B.abortus 16/4 первичного алкилсульфата натрия, обладает специфичностью и чувствительностью. При экспериментальном инфицировании морских свинок диссоциированными штаммами бруцелл с помощью R-бруцеллезного эритро-цитарного антигена в РНГА возможно выявить до 100,0 % зараженных животных.

7. РНГА с R-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом позволяет наиболее эффективно осуществлять контроль иммунного ответа у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, через 1-2 месяца после иммунизации и выявляет дополнительно к РСК с R-антигеном от 2,0 до 5,4 % положительно реагирующих животных. При проведении дифференциально-диагностических исследований крупного рогатого скота, привитого вакцинами из штаммов 82 и 75/79-АВ, РНГА с R-антигеном целесообразно применять наряду с РСК с R-бруцеллезным антигеном для определения в сыворотке крови поствакцинальных антител.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Технологии изготовления S- и R-бруцеллезных эритроцитарных антигенов целесообразно использовать в биологической промышленности при производстве диагностических препаратов.

Результаты разработки рациональных схем применения РНГА с новыми S-и R-бруцеллезными эритроцигарными диагностикумами в системах диагностики бруцеллеза животных (в том числе дифференциальной), а также контроля иммунного ответа у крупного рогатого скота, привитого слабоагглютиноген-ными вакцинами, вошедшие в соответствующие инструкцию и рекомендации, необходимо учитывать практическим ветеринарным специалистам и научным сотрудникам при решении проблемы диагностики и специфической профилактики бруцеллеза животных, а также использовать в учебном процессе ветеринарных ВУЗов, учреждениях повышения квалификации ветеринарных врачей.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Карлова, М.Ю. Разработка в- и Я-бруцсллсзных эритроцитарных диагносгикумов, испытание их при бруцеллезе крупного рогатого скота / М.Ю. Карлова, Л.В. Дегтяренко, Г.В. Разницына // Ветеринария и кормление. - 2009. - № 4. - С.4-5.

2. Дегтяренко, Л.В. Новый экспресс-метод диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота / Л.В. Дегтяренко, Г.В. Разницына, С.А. Власова, М.Ю. Борисова // Актуальные вопросы диагностики болезней животных: матер. 2-й ме-ждунар. конф. - Алматы, 2005. - С. 233-235.

3. Дегтяренко, Л.В. Результаты производственного испытания реахции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе крупного рогатого скота / Л.В. Дегтяренко, В.Г. Ощепков, Г.В. Разницына, С.А.Власова, М.Ю. Борисова // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклеидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний: матер, междунар. симпозиума. - Казань, 2005. - 4.2. - С. 121-125.

4. Разницына, Г.В. Сравнительная оценка диагностической ценности серологических тестов при сенсибилизации морских свинок бруделлами / Г.В. Разницына, Л.В. Дегтяренко, М.Ю. Карлова // Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных: сб. науч. тр. - Омск, 2006. -С. 189-194.

5. Дегтяренко, Л.В Испытание 11-бруцеллезных антигенов в экспериментальных условиях / Л.В. Дегтяренко, Г.В. Разницына, Н.Г. Шпак, И.Н. Каликин, М.Ю. Карлова // Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала: матер, межрегион, науч.-практ. конф., посвящ. 180-летию аграрной науки Сибири. - Омск, ВНИИБТЖ, 2008. - С. 111-117.

6. Дегтяренко, Л.В. Диагностическая ценность реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе крупного рогатого скота / Л.В. Дегтяренко, В.Г. Ощепков, Г.В. Разницына, М.Ю. Карлова // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций: матер. Всероссийской науч.-практ. конф. - Омск, ВНИИБТЖ, 2009. - С. 44-47.

7. Карлова, М.Ю. Испытание И-бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе крупного рогатого скота / М.Ю. Карлова, Л.В. Дегтяренко // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций: матер. Всероссийской науч.-практ. конф. - Омск, ВНИИБТЖ, 2009. - С. 62-66.

8. Ощепков, В.Г. Эффективность применения РИГА для оценки крупного рогатого скота при бруцеллезе / В.Г. Ощепков, Л.В. Дегтяренко, Г.В. Разницына, М.Ю. Карлова // Матер, междунар. конф., посвящ. 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадсмии. - Самара, 2009. - С. 316-319.

Подписано в печать 07.05.2010 Формат 60x84/16 Бумага офсетная Оперативный способ печати Уч.-печ. л. 1,25 уч.-изд. Л. 1,25 Тираж 100 экз. Заказ № 82

Полиграфический центр КАН 644050, г. Омск, пр. Мира 34 Тел.: (381-2) 65-47-31 Лицензия ПЛД № 58-47 от 21.04.97 г

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Карлова, Мария Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Серологическая диагностика бруцеллеза животных.

1.1.1. Реакция агглютинации пробирочная (РА).

1.1.2. Роз бенгал проба (РБП).

1.1.3. Реакция связывания комплемента (РСК).

1.1.4. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

1.1.4.1. Способы изготовления S-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов.

1.1.4.2. Способы изготовления R-бруцеллезных антигенов.

1.1.5. Реакция иммунодиффузии (РИД).

1.2. Диагностические тесты с молоком.

1.3. Дифференциальная диагностика больных бруцеллезом животных от иммунизированных противобруцеллезными вакцинами

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов, изучение их эффективности при бруцеллезе животных"

Актуальность темы. Бруцеллез относят к числу опасных зооантропонозов. За последние годы в ряде регионов РФ осложнилась эпизоотическая ситуация по этой болезни (Ю.В. Пашкина, 2007; С.К. Димов с соавт., 2009; М.М. Желудков, 2009).

При бруцеллезе животных широкое практическое применение в нашей стране получили, прежде всего, реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК, РДСК), роз бенгал проба (РБП), реакция иммунодиффузии (РИД), кольцевая реакция с молоком (КР).

Несмотря на специфичность и чувствительность, эти тесты, по мнению многих исследователей, не выявляют всех инфицированных животных при оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу хозяйств (К.В. Шумилов, 1981; И.А. Косилов, 1999; О.Д. Скляров, 2005; М.П. Апьбертян, М.И. Искандаров, А.И. Федоров, 2006; Н.М. Колычев, М.А. Бажин, B.C. Власенко, 2007 и др.).

В современных условиях происходит дальнейшее разукрупнение животноводческих хозяйств. Развиваются мелкие крестьянские и фермерские хозяйства. В этой связи целесообразно изыскание простых высокочувствительных экспресс-методов, позволяющих проводить не только диагностику бруцеллеза у интактных животных, но и дифференцировать больных от привитых слабоагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами.

РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) при бруцеллезе была внедрена в СССР в медицинскую практику. При этом использовали лиофилизированный эритроцитарный диагностикум, выпускаемый Одесским предприятием по производству бактериальных препаратов, методика изготовления которого была разработана в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи. В ветеринарии этот препарат благодаря разработкам Всероссийского научно-исследовательского института бруцеллеза и туберкулеза животных

ВНИИБТЖ), ФГУ Всероссийского государственного Центра качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГУ ВГНКИ), Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИЭВСДВ) был принят в СССР к внедрению при бруцеллезе крупного рогатого скота в 1990 году. После распада СССР возникла необходимость разработки в РФ отечественного диагностикума, который возможно бы было применять не только на непривитых животных, но и на иммунизированных слабоагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами. Разработку технологии изготовления S-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов осуществляли С.Г. Хаиров, О.Ю. Юсупов (1979); И.П. Иванов, В.Б. Бельченко (1980); А.П. Красиков (2002) и др., но к началу наших исследований зарегистрированного в РФ S-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума для ветеринарных целей не было.

О необходимости использования при дифференциальной диагностике бруцеллеза у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, в целях оценки эпизоотической ситуации и контроля качества оздоровления неблагополучных хозяйств не только S-, но и R-диагностикумов, сообщали: К.М. Салмаков, 1975, 2007; И.П. Никифоров, 1995; А.С. Донченко с соавт., 2003; В.В. Сочнев, 2004; Л.В. Дегтяренко, 2005; A.M. Фомин с соавт., 2009 и др. В частности, с этой целью применяли R-бруцеллезный антиген в РСК.

Сведения о возможности использования РНГА с R-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом для оценки иммунного статуса животных, вакцинированных инагглютиногенными и слабоагглютиногенными противобруцеллезными вакцинами, крайне ограничены.

Цель исследований. Цель исследования — разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов для РНГА, изучение их эффективности при бруцеллезе животных.

Задачи исследования:

- разработать рациональную технологию изготовления S-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучить его эффективность в экспериментальных, производственных условиях на разных видах животных;

- разработать рациональную технологию изготовления R-бруцеллезного диагностикума для РНГА и изучить его эффективность на лабораторных животных и крупном рогатом скоте.

Доказана более высокая чувствительность сконструированного S-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума в сравнении с официальными методами диагностики при исследовании сыворотки крови крупного и мелкого рогатого скота в очагах естественного течения бруцеллезной инфекции.

Показана возможность использования РНГА с изготовленным S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом при исследовании на бруцеллез сыворотки крови и молока у крупного рогатого скота, реиммунизированного слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B.abortus 82, 75/79-АВ, в ранние и отдаленные сроки после прививки (с 30-го дня — молоко, с 60-го - сыворотка крови).

Впервые показана целесообразность проведения контроля иммунного ответа у животных, привитых слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов 82, 75/79-АВ, с использованием разработанного R-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума в РНГА, а также применения указанного теста при дифференциально-диагностических исследованиях крупного рогатого скота на бруцеллез в комплексе с другими средствами и методами.

Практическая и теоретическая значимость работы. Внедрение в ветеринарную практику РНГА с S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом позволит более эффективно контролировать эпизоотическую обстановку по бруцеллезу крупного и мелкого рогатого скота, своевременно выявлять источники возбудителя инфекции и способствовать ускорению ликвидации болезни.

Разработанный R-бруцеллезный эритроцитарный диагностикум в РНГА позволит контролировать иммунный ответ у крупного рогатого скота, привитого слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов 82, 75/79-АВ, и дифференцировать больных бруцеллезом животных от здоровых, реагирующих на вакцину.

Апробация полученных результатов. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: второй международной конференции «Актуальные вопросы диагностики болезней животных» (Алматы, 2005), международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005), 5-й межрегиональной научнопрактической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины продуктивных и непродуктивных животных» (Омск, 2006), 7-й межрегиональной научно-практической конференции «Диагностика, лечение и профилактика болезней животных в условиях Сибири и Урала» (Омск, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций» (Омск, 2009).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 170 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Карлова, Мария Юрьевна

4. ВЫВОДЫ

1. Разработанная биотехнология изготовления S-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума для РНГА, основанная на химическом воздействии первичного алкилсульфата натрия на культуру вакцинного штамма B.abortus 19, позволяет получить активный специфичный и экономичный диагностикум.

2. Чувствительность РНГА с S-бруцеллезным эритроцитарным антигеном не зависит от видовых особенностей культур бруцелл, используемых при изготовлении диагностикума. Активность антигена зависит от вирулентных свойств штаммов бруцелл, при изготовлении его из вирулентных штаммов бруцелл, в сравнении с вакцинным штаммом, в отдельные сроки исследований она выше в два раза.

3. Лиофильное высушивание S-бруцеллезного эритроцитарного антигена с применением сахарозо-желатиновой среды позволяет получить специфичный активный антиген, не уступающий в чувствительности нативному препарату.

4. РНГА с S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом обладает высокой чувствительностью: в опытах на морских свинках позволяет диагностировать в отдельные сроки исследования до 100,0% сенсибилизированных бруцеллезными антигенами животных.

В естественных очагах бруцеллеза крупного рогатого скота РНГА выявляет дополнительно к комплексу официальных диагностических тестов до 5,3 % реагирующих животных при высоком проценте совпадений с РА, РСК, РИД, РБП (от 83,3 до 100,0 %).

При бруцеллезной инфекции у мелкого рогатого скота РНГА с S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом выявляет дополнительно к показаниям официальных тестов до 12,7 % реагирующих животных при 100,0 % совпадении ее показателей с позитивными показаниями РА, РСК, РБП и РИД.

Животные, имеющие в сыворотке крови и молоке S-гемагглютинины в диагностическом титре, представляют эпизоотическую опасность, что установлено при бактериологических и молекулярно-биологических исследованиях.

5. Исследование сыворотки крови в РНГА с S-бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом можно проводить у крупного рогатого скота через 2 месяца, а молока через 30 суток и последующие сроки после иммунизации вакцинами из штаммов B.abortus 82 и 75/79-АВ при осуществлении эпизоотического контроля благополучия животных и оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу пунктов.

6. R-бруцеллезный эритроцитарный диагностикум, сконструированный при воздействии на микробные клетки глубокодиссоциированного штамма B.abortus 16/4 первичного алкилсульфата натрия, обладает специфичностью и чувствительностью. При экспериментальном инфицировании морских свинок диссоциированными штаммами бруцелл с помощью R-бруцеллезного эритроцитарного антигена в РНГА возможно выявить до 100,0 % зараженных животных.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты разработки рациональных схем применения РНГА с новыми S- и R-бруцеллезными эритроцитарными диагностикумами в системах диагностики бруцеллеза животных (в том числе дифференциальной), а также контроля иммунного ответа у крупного рогатого скота, привитого слабоагглютиногенными вакцинами, вошедшие в соответствующие инструкцию и рекомендации, необходимо учитывать практическим ветеринарным специалистам и научным сотрудникам при решении проблемы диагностики и специфической профилактики бруцеллеза животных, а также использовать в учебном процессе ветеринарных ВУЗов, учреждениях повышения квалификации ветеринарных врачей.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Карлова, Мария Юрьевна, Омск

1. Абдуллин, Х.Х. Серологическая диагностика бруцеллеза и пути повышения ее эффективности / Х.Х. Абдуллин // Науч. тр. Казанского ордена Ленина государственного ветеринарного института им. И.Э. Баумна. М., 1980 - Т.135. - С. 16-20.

2. Альбертян, М.П. Проблемы профилактики бруцеллеза / М.П. Альбертян, М.И. Искандаров, А.И. Федоров // Ветеринарный консультант. — 2006. -№4. С. 6-8.

3. Алимов, A.M. Оценка иммуногенности ЛПБ-антигена бруцелл / A.M. Алимов, Р.Г. Габидуллина, P.M. Ахмадеев // Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инфекционных болезней животных: сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. Омск, 2003. - С. 178-180.

4. Антонов, Б.И. Реакция иммунодиффузии в агаровом геле (РИД) с О-ПС антигеном ИЭВСиДВ при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота / Б.И. Антонов // Ветеринария. 1994. - № 11. - С. 19-21.

5. Алиев, Э.А. РНГА при диагностике бруцеллеза буйволов и крупного рогатого скота/ Э.А. Алиев // Тр. АзНИВИ.-1984. Т. 30. - С. 12-17.

6. Аракелян, П.К. Использование вакцины B.abortus 19 при бруцеллезе овец / П.К. Аракелян, Е.Б. Барабанова // Ветеринария. 1997. - №4. — С. 18-21.

7. Аракелян, П.К. Значение РИД при диагностике бруцеллеза овец / П.К. Аракелян и др. // Ветеринария. 2004. - №8. - С. 20-24.

8. Артемов, Б.Т. Материалы по диагностике, профилактике и ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота: дис. . канд. вет. наук

9. Артемов. Воронеж, 1969. - 39 с.

10. Аскерова, С.А. Получение, характеристика и применение поли-Б антигена из бруцелл для дифференциации поствакцинальных и постинфекционных антител: дис. . канд. биол. наук / С.А. Аскерова. -Москва, 1988.-22 с.

11. Барамова, Ш.А. Эритроцитарный бруцеллезный антигенный диагностикум, содержащий специфический фаг / Ш.А Барамова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. —2006. № 3. - С. 48-51.

12. Бельченко, В.Б. РНГА для диагностики бруцеллеза телят / В.Б. Бельченко, Н.П. Иванов // Ветеринария. 1973. - №1.- С. 109-112.

13. Бельченко, В.Б. Дифференциация реакций на бруцеллез у больного и иммунизированного скота / В.Б. Бельченко // Ветеринария. 1975. - №3. -С. 42-45.

14. Бланков, Б.И. Применение лиофилизации в микробиологии / Б.И. Бланков, Д.И. Клебанов. М.: Медгиз, 1961. — 262 с.

15. Бутаев, М.К. Диагностика бруцеллеза сельскохозяйственных животных в Узбекистане / М.К. Бутаев, Р.Г. Яраев, Р.А. Исматова, Х.А. Хамдамов // Актуальные вопросы диагностики болезней животных: материалы второй междунар. конф. Алматы, 2005. - С. 44-48.

16. Вершилова, П.А. Бруцеллез (организационно-методические материалы) / П.А. Вершилова. М.: Медицина, 1968. - 239 с.

17. Вершилова, П.А. Изучение диагностической ценности реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, И.Н. Дубровская // Советская медицина. 1969. - №1. - С. 128-130.

18. Вершилова, П.А. Диагностическая оценка реакции непрямойгемагглютинации при бруцеллезе / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева // Бюл. ВИЭВ.- 1971.-Т. 10.-С. 19-23

19. Вершилова, П.А. Патогенез и иммуногенез бруцеллеза / П.А. Вершилова, М.И. Чернышева, Э.Н. Князева. М.: Медицина, 1974. - 275 с.

20. Дегтяренко, JI.B. Изучение диагностической ценности R-антигенов при бруцеллезе в условиях эксперимента / JI.B. Дегтяренко, А.А. Новицкий, М.А. Бажин // Инфекционные болезни животных: сб. науч. работ СибНИВИ. Омск, 1978. - Вып. 32. - С. 23-28.

21. Дегтяренко, JI.B. Изыскание R-антигенов для РСК-РДСК при бруцеллезе крупного рогатого скота и заболевании овец, вызванном Br.ovis, изучение их биологических и физико-химических свойств: автореф. дис. .канд. вет. наук. М.,1977. - 22 с.

22. Деггяренко, JI.B. Дифференциальная диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82 / J1.B. Деггяренко, А.А. Новицкий, Г.В. Разницына, С.А. Власова // Ветеринария. 2002. - № 1. - С. 17-20.

23. Деггяренко, Л.В. Производственное испытание РА пластинчатой с молоком при бруцеллезе крупного рогатого скота / Л.В. Деггяренко // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2003. - №3. - С. 2527.

24. Деггяренко, Л.В. Разработка и совершенствование средств, методов диагностики бруцеллеза животных и инфекционного эпидидимита баранов: автореф. дис. . д-ра вет. наук / Л.В. Деггяренко. -Новосибирск, 2005. 39 с.

25. Димов, К.С. Поствакцинальная диагностика бруцеллеза мелкого рогатого скота при различных схемах специфической профилактики: автореф. дис. .канд. вет. наук / К.С. Димов Новосибирск, 2008. - 17 с.

26. Димов, С.К. Теория и практика управления эпизоотическим процессом бруцеллеза: автореф. дис. . д-ра вет. наук. / С.К. Димов. Новосибирск, 1993. - 45 с.

27. Димов, С.К. Проблемы специфичности показаний РИД с О-ПС-антигеном у животных, привитых противобруцеллезными вакцинами разных типов / С.К. Димов и др. // Материалы междунар. науч.-практич. конф. Гродно, 23-24 октября 1997.- Минск. 1997. - С.96-97.

28. Джупина, С.М. Мониторинг эпизоотической ситуации бруцеллеза в условиях превентивного применения вакцины из штамма 82 на оздоровленных фермах / С.М. Джупина // Диагностика инфекционных болезней животных. Новосибирск, 1993. - С. 3-12.

29. Донченко, А.С. Основные принципы эпизоотологического мониторинга при туберкулезе, бруцеллезе и лейкозе крупного рогатого скота / А.С. Донченко и др. // Вестник сельскохозяйственной науки. 2003. - №3. -С. 27-31.

30. Достай, С.М. Роль схем специфической профилактики в системе контроля эпизоотического процесса бруцеллеза овец / С.М. Достай и др. // Вестник сельскохозяйственной науки. 2003. - №3. - С. 36-38,.

31. Дусейнов, К.Д. О диагностической ценности ускоренной пластинчатой реакции агглютинации с роз-бенгал антигеном / К.Д. Дусейнов, В.И. Москалева // Проблемы инфекц. болезней. Алма-Ата, 1989.-С. 155 -158.

32. Жанбырбаев, М. Сравнительное изучение методов диагностики бруцеллеза животных / М. Жанбырбаев // Материалы междунар. конф. посвящ. 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии. Самара, 2009.-С. 155-158.

33. Желудков, М.М. Бруцеллез в России: современная эпидемиология и лабораторная диагностика: автореф. дис. . д-ра мед. наук / М.М.

34. Желудков. Москва, 2009. - 50 с.

35. Жованик, П.Н. Бруцеллез / П.Н. Жованик. Киев: Урожай, 1975. — 222 с.

36. Иванов, Н.П. Сравнительная эффективность некоторых методов диагностики бруцеллеза: автореф. дис. . канд. вет. наук / Н.П. Иванов. -Фрунзе, 1968. 22 с.

37. Каральник, Б.В. Эритроцитарные диагностикумы / Б.В. Каральник М.: Медицина. - 1976. - С. 162.

38. Касьянов, А.Н. Диагностика бруцеллеза у северных оленей / А.Н. Касьянов // Ветеринария. 1970. - №12. - С. 39-41.

39. Касьянов, И.А. Сравнительное изучение специфичности и чувствительности серологических методов диагностики бруцеллеза северных оленей: дис. .канд. вет. наук / И.А. Касьянов. М., 1980. - 17 с.

40. Колганова, О.А. Эффективность нового метода диагностики бруцеллеза животных / О.А. Колганова, А.И. Кабанцев // Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных. Новосибирск, 1997. - С. 72-78.

41. Колычев, Н.М. Краткий курс ветеринарной микробиологии Часть 1 /

42. Н.М. Колычев, А.А. Васильев. Омск: Изд-во ОмГАУ, 1998. - 430 с.

43. Колычев, Н.М. Зоопатогенные бактерии и меры борьбы с ними: монография / Н.М. Колычев, В.Г. Ощепков. Омск: Изд-во ОмГАУ, 2001. - 632 с.

44. Колычев, Н.М. Иммунология, микробиология, эпизоотология бруцеллеза и туберкулеза животных: монография / Н.М. Колычев, М.А. Бажин, B.C. Власенко. Омск, 2007. - 376 с.

45. Косилов, И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / И.А. Косилов. РПО СО РАСХН. - Новосибирск, 1992. - 261 с.

46. Косилов, И.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / И.А. Косилов, П.К Аракелян, С.К. Димов, А.Г. Хлыстунов. Новосибирск, 1999.-344 с.

47. Красиков, А.П. Изыскание новых методов серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, сенсибилизированного измененными штаммами бруцелл: автореф. дис. .канд. биол. наук. / А.П. Красиков. Новосибирск, 1982. - 19 с.

48. Красиков, А.П. Искусственная регуляция паразито-хозяинных отношений при бруцеллезе животных: монография /А.П. Красиков. -Омск, 2002. С. 270.

49. Кузнецов, М.И. Сравнительная эффективность диагностических методов при оздоровлении от бруцеллеза стад крупного рогатого скота: автореф.дис. .канд. вет. наук. /М.И. Кузнецов. JL, 1972. — 21 с.

50. Лазарев Н.П. Кольцевая реакция с молоком и с сывороткой крови для диагностики бруцеллеза / Н.П. Лазарев // Ветеринария. 1968. - №4. -С. 98-99.

51. Латыпов, Д.Г. Изыскание антигенов для серологической диагностики бруцеллеза: автореф. дис. .канд. вет. наук. / Д.Г. Латыпов. — Казань, 1988. 16 с.

52. Литвиненко, В.В. Сравнение методов выявления носителей бруцелл / В.В. Литвиненко // Ветеринария. 1978. - №6. - С. 50-51.

53. Логинов, Ф.С. Быстрый метод обнаружения бруцеллезных агглютининов в молоке коров / Ф.С. Логинов // Ветеринария. 1978. -№6.-С. 50-51.

54. Малахова, Т.И. РНГА для диагностики бруцеллеза свиней / Т.И. Малахова, Ю. Саморуков, А.И. Климанов // Тр. ВГНКИ. М., 1977. - т. 25. - С. 182-185.

55. Морковина, В.Е. Дифференциальная диагностика сельскохозяйственных животных / В.Е. Морковина, Л.А. Малышева // Материалы науч. произ. конф., 2-3 июля 1996 г. - Волгоград, 1996. - С. 48-49.

56. Морякова, О.И. Рационализация техники постановки кольцевой реакции при массовых исследованиях молока на бруцеллез / О.И. Морякова, А.Н. Касьянов//тр. ВИЭВ. М., 1961. - т. 26. - С. 348-351.

57. Наставление по диагностики бруцеллеза животных / Министерство сельского хозяйства Российской Федерации, Москва, 2004. — 63 с.

58. Назаренко, Е.Г. Эпизоотология бруцеллеза сельскохозяйственных животных в Иркутской области и усовершенствованиепротивоэпизоотических мероприятий: автореф. дис. .канд. вет. наук. / Е.Г. Назаренко. Барнаул, 2009. - 22 с.

59. Наконечный, И. Перекрестные серологические реакции, обусловленные связанным антигеном бруцелл гетерологическими антителами с Yersinia enterocolitica при исследовании на бруцеллез / И. Наконечный / Вет. медицина Украины. 1998. - №10. - С. 20-21.

60. Никифоров, И.П. Живые слабоагглютиногенные вакцины в системе противобруцеллезных мероприятий: автореф. дис. .д-ра вет. наук / И.П. Никифоров. Новосибирск, 1995. - 46 с.

61. Новицкий, А.А. Диагностическая ценность иммунореакций в очаге естественного течения бруцеллеза / А.А. Новицкий, И.А. Косилов // Сб. науч. тр. СибНИВИ. Омск, 1975. - Вып. 22. - С. 23-29.

62. Новицкий, А.А. Результаты испытания некоторых диагностических методов в очаге бруцеллеза крупного рогатого скота / А.А. Новицкий, Л.И. Троицкая // Инфекционные болезни животных: сб. науч. тр. СибНИВИ. Омск, 1978. - Вып. 27. - С. 16-22.

63. Новицкий, А.А. Серологические показатели у коров после иммунизации противобруцеллезными вакцинами по разным схемам и после заражения /А.А. Новицкий, Т.Г. Попова, Н.Н. Маскаев // Бруцеллез с.-х. животных: сб. науч.тр. Омск, 1989. - С. 33-40.

64. Новицкий, А.А. Толерантность в иммунной защите животных / А.А. Новицкий и др. // Петропавловск, 2007. — 257 с.

65. Новицкий, А.А. Изучение значимости методов серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82 / А.А. Новицкий и др. // Инфекционная патология животных: сб. науч. тр. / ВНИИБТЖ. Омск, 2001. - С. 44-50.

66. Объедков, Г.А. Бруцеллез крупного рогатого скота / Г.А. Объедков; Г.А. Карпова. М., 1984. - 63 с.

67. Объедков, Г.А. Основы достижения в изучении патогенеза и иммуногенеза бруцеллеза, совершенствование его диагностики / Г.А.

68. Объедков // Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных: сб. науч.тр. ВАСХНИЛ. Сиб.отд. ВНИИБТЖ. Новосибирск, 1987. - С. 7-11.

69. Огородникова, Т.Н. Значение реакции длительного связывания комплемента (РДСК) в комплексе мероприятий при оздоровлении овец от инфекционного заболевания, вызываемого Brucella Ovis: автореф. дис. . канд. вет. наук / Т.Н. Огородникова. Л., 1974. - 19 с.

70. Орлов, Е.С. Методика изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК и его диагностическая эффективность / Е.С. Орлов, И.А. Хорьков, Е.П. Сапегина, А.Н. Касьянов // Тр. ВИЭВ. 1974. - т.42. -С. 262-267.

71. Парамонова, З.И. Дифференциация культур бруцелл вакцинного штамма 19 от эпизоотических штаммов типа Br.abortus по их резистенции к пенициллину / З.И. Парамонова, К.П. Студенцов // тр. Каз. НИВИ. -1961.-т. 10.-С. 71-74.

72. Пашкина, Ю.В. Эпизоотический надзор и контроль при зоонозах в Поволжском регионе: автореф. дис. . док. вет. наук / Ю.В. Пашкина. -Н. Новгород, 2007. 42 с.

73. Поздеев, К.А. Применение непрямого метода реакции гемагглютинации при диагностике бруцеллеза / К.А. Поздеев, О.А. Игнатьева // Учен.записки Казанского вет. ин-та. 1962. - т. 89. - С. 75-78.

74. Поляков, И.И. К оценке различных методов выделения антигенов из бруцелл для получения эритроцитарных диагностикумов / И.И. Поляков и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1969. С. 77-81.

75. Попова, Т.Г. Быстрый способ купирования бруцеллеза / Т.Г. Попова и др. // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. науч.тр. СО РАСХН. ВНИИБТЖ. Омск, 2005. - С. 197-200.

76. Разумовская, В.В. Совершенствование системы управления эпизоотическим процессом лейкоза и бруцеллеза крупного рогатого скота: автореф. дис. . д-ра. вет. наук. / В.В. Разумовская. Барнаул, 2004.-39 с.

77. Ромахов, В.А. Реакция непрямой гемагглютинации и реакция нейтрализации антител для диагностики инфекционного эпидидимита баранов: автореф. дис. . канд. вет. наук. / В.А. Ромахов. М., 1977. - 19 с.

78. Ромахов, В.А. Применение антигена, обработанного ЭДТА при исследовании на бруцеллез / В.А. Ромахов, B.C. Ефремов, А.Н. Касьянов, Е.А. Тягунина // Ветеринария. 1990. - №3. - С. 25-27.

79. Ромахов, Б.Н. Испытание реакции непрямой гемагглютинации сэритроцитарным антигеном для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота / Б.Н. Ромахов, JI. А. Малышева, В. П. Руденко // Ветеринарная патология. № 1. - 2008. - С. 73-76.

80. Садыков, С.Ж. Диагностическая эффективность реакции непрямой гемагглютинации и реакции нейтрализации антител при бруцеллезе: автореф. дис. . канд. вет. наук. / С.Ж. Садыков М., 1975. - 21 с.

81. Сайдашева, С.Е. Испытание Роз-бенгал пробы при оздоровлении неблагополучного по бруцеллезу хозяйства / С.Е. Сайдашева // Инфекционные и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных в Казахстане. 1980. - С. 15-20.

82. Сакидибиров, О.П. Бруцеллез крупного рогатого скота в Республике Дагестан (особенности эпизоотического процесса, диагностика и профилактика: автореф. дис. . канд. вет. наук. / О.П. Сакидибиров -Ставрополь, 2006. 23 с.

83. Салмаков, К.В. Живая вакцина из штамма 82 / К.В. Салмаков // Ветеринария. 1975. - №7. - С. 43-45.

84. Салмаков, К.М., Изыскание и совершенствование вакцинных препаратов против бруцеллеза / К.М. Салмаков / Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных: сб. науч. работ / ВАСХНИЛ. Новосибирск, 1987. - С. 26-35.

85. Садыков, С.Ж. Диагностическая эффективность реакции непрямой гемагглютинации и реакции нейтрализации антител при бруцеллезе: автореф. дис. . канд. вет. наук. / С.Ж. Садыков М., 1975. - 21 с.

86. Сайдашева, С.Е. Испытание Роз-бенгал пробы при оздоровлении неблагополучного по бруцеллезу хозяйства / С.Е. Сайдашева // Инфекционные и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных в Казахстане. 1980. - С. 15-20. |

87. Сакидибиров, О.П. Бруцеллез крупного рогатого скота в Республике Дагестан (особенности эпизоотического процесса, диагностика и профилактика: автореф. дис. . канд. вет. наук. / О.П. Сакидибиров -Ставрополь, 2006. 23 с.

88. Салмаков, К.В. Живая вакцина из штамма 82 / К.В. Салмаков // Ветеринария. 1975. - №7. - С. 43-45.

89. Салмаков, К.М., Изыскание и совершенствование вакцинных препаратов против бруцеллеза / К.М. Салмаков / Совершенствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных: сб. науч. работ / ВАСХНИЛ. Новосибирск, 1987. - С. 26-35.

90. Скляров, О.Д. Сравнительное изучение методов диагностики бруцеллеза

91. Скляров, О.Д. Сравнительное изучение методов диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота / О.Д. Скляров // Сб. науч. тр. ВГНКИ.- Всерос. Гос. Центр качества и стандартизации лекартв. средств. М. - 2005. т. -65.-С. 182-187.

92. Скляров, О.Д. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики бруцеллеза и кампилобактериоза животных: автореф. дис. . д-ра вет. наук / О.Д. Скляров. Москва - 2006. - 48 с.

93. Сочнев, В.В. Проблемы диагностики бруцеллеза / В.В. Сочпев // Ветеринарный консультант. — 2004. № 23-24. - С. 4-8.

94. Способ получения антигена для реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе: а. с. 828454: М. Кл. А 61 К 39/10 / С.Г. Хаиров, О.Ю. Юсупов №2783873/30-15; 22.06.1979. - 5 с.

95. Способ приготовления диагностикума направленного действия: а. с. 889004: М. Кл. А 61 К 39/44 / В.А. Шамардин, Б.В. Каральник № 291465/28-13; заявл. 28.03.80; опубл. 15.12.81, Бюл. № 46.-3 с.

96. Способ получения бруцеллезного эритроцитарного диагностикума: а. с. 784879: М. Кл. А 61 К 39/10 / Н.П. Иванов, В.Б. Бельченко № 2702203/28-13; заявл. 26.12.78; опубл. 07.12.80, Бюл. №45. - Зс.

97. Способ получения бруцеллезного антигена а. с. 2086258: М. Кл. А 61 К 39/10 / Е.А. Драновская, М.М. Желудков №93020804/14; заявл.2104.1993; опубл. 10.08.1997.

98. Способ получения бруцеллезного антигена а. с. 2252962: М. Кл. А 61 К 39/44 / М.М. Желудков, Н.В. Яшина № 2004101021/13; заявл. 19.01.2004; опубл. 27.05.2005. - 5с.

99. Стеблева, Г.М. Поствакцинальная диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота / Г.М. Стеблева, А.Г. Хлыстунов, В.М. Чекишев, С.К. Димов // Проб. Адаптации с.-х. животных. Новосибирск, 1997 (98). - С. 94-95.

100. Стеблева, Г.М. Влияние техники постановки и учета РИД с О-ПС антигеном на уровень ее диагностической эффективности при бруцеллезе крупного рогатого скота / Г.М. Стеблева // Сб. науч. тр. ВНИИБТЖ. Омск, 2001. - С.82-83.

101. Студенцов К.П. Бруцеллез животных / К.П. Студенцов. Алма-Ата: Кайнар, 1975.-235 с.

102. Султанов, А.А. Лабораторная диагностика бруцеллеза / А.А. Султанов, Ш.А. Барамова, А. Мырзалиев, И. Онищенко // Вестник сельскохозяйственной науки. 2002. - №2. - С.14-16.

103. Суспицын, А.В. Факторы, влияющие на поствакцинальные реакции у крупного рогатого скота благополучных по бруцеллезу стад / А.В. Суспицын и др. // Аграр. наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкортостана Новосибирск, 2003. - С. 153-154.

104. Таран, И.Ф. Исследование РИГА для диагностики бруцеллеза / И.Ф. Таран, В.П. Цыбин // Ветеринария.- 1977.-№3.-С.95-96.

105. Третьяков, Ю.К. Пластинчатая РА с Роз-бенгал антигеном при диагностике бруцеллеза / Ю.К. Третьяков, Н.П. Иванов, В.И. Белобаб // Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями с.-х. в Казахстане. 1979. - т. 18. - С.43-45.

106. Триленко, П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / П.А. Триленко. Л.: Колос, 1976.

107. Уласевич, П.С. Реакция длительного связывания комплемента для диагностики бруцеллеза овец / П.С. Уласевич // Ветеринария, 1961. №12. -С. 15-18.

108. Усманова, Ф.И. О специфичности и чувствительности бруцеллина ВИЭВ при инфекционном эпидидимите баранов / Ф.И. Усманова, П.П. Гаврилов, А.Н. Бжевская // тр. КазНИВИ. 1976. - т. 16. - С. 129-133.

109. Усович, А.Т. Применение математической статистики при обработке экспериментальных данных в ветеринарии / А.Т. Усович, П.Т. Лебедев. -Омск, 1970.-44 с.

110. Файзрахманов, Ш.Р. РИД с О-ПС антигеном у экспериментальновакцинированных и зараженных бруцеллезом животных / Ш.Р. Файзрахманов и др. // Диагностика инфекционных болезней животных. Новосибирск, 1993. - С. 119-124.

111. Фомин, A.M. Новый антиген для дифференциальной диагностики бруцеллеза у животных после прививки живой вакцины из штамма 82 / A.M. Фомин, Д.А. Хузин // Первый Всесоюзный иммунологический съезд, тезисы докладов, Сочи, 1989. М.,1989. - т. 1. - С. 179.

112. Фомин, A.M. Этапы оздоровления Самарской области от бруцеллеза крупного рогатого скота / A.M. Фомин и др. // Материалы междунар. конф., посвящ. 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии. Самара, 2009.-С.516-520.

113. Фримель, X. Основы иммунологии / X. Фриммель, И. Брок. — М., 1986. -254 с.

114. Хаиров, С.Г. Изучение диагностической ценности РНГА при бруцеллезе крупного рогатого скота / С.Г. Хаиров // Сб. науч. тр. Махачкала, 1976. -т. 8.-С. 45-51.

115. Хаиров, С.Г. Испытание РНГА при бруцеллезе / С.Г. Хаиров, О.Ю. Юсупов // Ветеринария. 1989. - №1. - С.60-62.

116. Хаиров, С.Г. Антиген бруцеллезный эритроцитарный для реакции непрямой гемагглютинации: Технология получения, стандартизация, контроль, диагностическая эффективность: дис. .д-ра вет. наук / С.Г. Хаиров-М., 2001.-22 с.

117. Хаиров, С.Г. Высокочувствительный и специфичный метод диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и овец / С.Г. Хаиров, О.Ю. Юсупов // Проблемы ветеринарной медицины в условиях реформирования с.-х. производства. Махачкала, 2003. - С. 49-51.

118. Хасанов, Н.Х. Испытание вакцин из штамма 82 на крупном рогатом скоте / Н.Х. Хасанов, В.В. Кириллин, A.M. Муминов // Науч. тр. Казан, вет. ин-та. Казань, 1980. - т. 135. - С.74-80.

119. Хоч, А.А. Бруцеллез животных в Якутии / А.А. Хоч. — Новосибирск: СО1. РАСХН, 1995.-248 с.

120. Цыбин, Б.П. Итоги изучения диагностических качеств бруцеллезного и туляремийного антигенных эритроцитарных диагностикумов / Б.П. Цыбин, И.Ф.Таран, А.И. Тинкер / Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1975. - №9. - С. 83 - 87.

121. Цыбин, Б.П. К вопросу производства эритроцитарных препаратов для диагностики бруцеллеза / Б.П. Цыбин, И.Э. Таран, С.Г. Хаиров, К.М. Евстафиади // Сб. науч.тр. ДагНИВИ. Махачкала, 1976. - С. 62 - 70.

122. Чекишев, В.М. Дифференциация вакцинированных и больных бруцеллезом животных / В.М. Чекишев и др. // Ветеринария. 1993. -№ 8. - С. 25-29.

123. Чекишев, В.М. Чувствительность и специфичность серологических реакций в сравнении с РИД при диагностике бруцеллеза животных / В.М. Чекишев и др. // Диагностика инфекционных болезней животных. Новосибирск, 1993. - С. 68-73.

124. Чекишев, В.М. Проблемы серологической диагностики бруцеллеза животных / В.М. Чекишев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в России: сб. науч.тр., Сиб. отд-ние. Новосибирск, 1998. - С. 273-283.

125. Черемисин, Г.Г. Проявление иммунологических реакций у животных, ежегодно иммунизированных вакциной из штамма 82 / Г.Г. Черемисин // Ветеринария. 1993. - №7. - С. 21-22.

126. Чернышева, М.И. Оценка чувствительности РНГА и других методов диагностики бруцеллеза / М.И. Чернышева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1969. - №7. - С. 55-58

127. Чернышева, М.И. Сухой эритроцитарный диагностикум для реакциипассивной гемагглютинации и реакции нейтрализации антител при бруцеллезе / М.И. Чернышева и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1975. - №7. - С. 117-118.

128. Чернышева, М.И. Новые методы диагностики зоонозных инфекций / М.И. Чернышева, Г.А. Объедков . Минск: Ураджай, 1982. - С. 120-122.

129. Шестой доклад экспертов по бруцеллезу ФАО-ВОЗ — Женева, 1986. — 120 с.

130. Шумилов, К.В. Единый бруцеллезный антиген для РА, РСК и РДСК / К.В. Шумилов, А.И. Климанов, Т.И. Малахова // Справочник «Вет. препараты». М.: Колос. - 1981. - С. 180-183.

131. Шумилов, К.В. Современные данные об иерсиниозе животных / К.В. Шумилов, Л.П. Мельниченко, В.В. Селиверстов // Ветеринария. 1998. -№5.-С. 7-13.

132. Шумилов, К.В. Реакция непрямой гемагглютинации при диагностике бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота / К.В. Шумилов и др. // Ветеринария. 2007. - №11. - С. 47-48.

133. Alton, G. Development and evaluation of serological tests / Alton G // Bovine brucellesis an International Symposium United States of America, 1977. P. 61-72.

134. Amerault, Т.Е. The heat stability of Brucella agglutinins in Bovine Serum / Т.Е. Amerault, G. Lambert, C.A. Manthel // Am. J.Vet.Res. 1962. - V.23.-P. 1026-1029.

135. Anczykowski, F. Standaryzacia proby piersein iowejz mlekiem (ABR) krow badanych na bruceloze / F. Anczykowski // Med.Vet. 1969. - V. 25. - №9. -P. 341-344.

136. Bokkenheuser, V. Interaction of erythrocytes and endotoxis / V. Bokkenheuser, H.J. Koornhof // Nature, 1959, V.184. P. 109-112.

137. Boyden, S.V. The adsorption of proteins on erythrocytes treated with tannic acid and subsequent hemagglutination by antiprotein sera / S.V. Boyden// J.exp. Med. 1951.-V. 93.-P. 107.

138. Butler, J.E. Synthesis and distribution of immunoglobulins / J.E. Butler // J. Am. Med. Assoc. 1973. - V. 163. - №7. - Ch.2. - P. 795-800.

139. Cantu, A. Epidemialogical study in bovineherd with intermediate prevalence of brucellosis, vaccinated with RB51 and rfbk rough mutant strains of Brucella abortus / A. Cantu et al. // Veterinaria Mexico. 2007. - V. 38. -№2. - C. 197-206.

140. Cedro, V. Un antigeno paru la intradermor reaccion en brucellosis genital ovina a Brucella ovis / V. Cedro et al. // Kongressberichte (Welt-Tiera"rzte Kongress 17, Hannover, 1965). 1965. - V. 1. - P. 635-643.

141. Cetinkaya, B. Evaluation of ummunocomb in comparison with other serological tests in ovine brucellosis / B. Cetinkaya, H. Ongor // Veter. Rec. -2000. V. 147. - №22. - P. 632-634.

142. Corbel, M.I. Assessment of indirect haemagglutination Procedures for the serological diagnosis of bovine Brucellosis / M.I. Corbel, A. Carol // The Britisch.Veter.Jour. 1973. - V. 129. - №5. - P. 480.

143. Cunningham, B. The use of Rose Bengal plate test in animal vaccinated with Brucella К 45/20 A vaccine / Cunningham В., Dolan L. A. // Irish Vet. J.1978. V.32. - № ю. - P. 177-182.

144. Gray, M.D. An evaluation of screening programs for the detection of Brucellosis in dairy herds / M.D. Gray, S.W. Martin // Canad. J. сотр. Med. -1980.-V. 44. №1. - P. 49-61.

145. Diaz, R. Radial immunodiffusion test with a Brucella polysaccharede antigen differentiating infected from vaccinated cattle / R. Diaz, P. Garatea, L.M. Jones//J. Clin. Microb. 1979.-V. 101. - P. 37-41.

146. Erganis, O. Comparison of rose bengal plate test antigens prepared from Brucella abortus, Brucella meletensis and Brucella suis / O. Erganis et al. // Bul.veter.Inst. in Pulawy. 2005. - V. 49. - №2. - P. 165-167.

147. Eshetu Y. Seroprevalence study of brucellosis on dairy cattle in Addis Ababa, Ethiopia / Y. Eshetu // Bull. anim. Health Produkt.in Africa. 2005. -V. 53.-№3.-P. 211-214.

148. Ferguson, G.S. Brucellosis in dairy herds some application of the milk ring test / G.S. Ferguson, A. Robertson // J.Hyg. 1960. - V. 58. - №4. - P. 473-486.

149. Fosgete, G.T. Comparison of serologic tests for defection of brucella in testions in cattle and water buffalo / G.T. Fosgete et al. // Am. S. Veter. Res. 2002-V. 63.- №11.-P. 1598-1605.

150. Guarino, A. Inderect ELTSA for the diagnosis of brucellosis in water buffaloes in Italy / A. Guarino et al. // Veter. Rec. 2001. - V. 149. - №3 - P. 88-90.

151. Haufe, M. Erfahrunfen bei der Brucellose-Sanierung in einem Jiezzuchtgebiet / M. Haufe // Vet.Med. 1970. - V. 25. - №10. - P. 374-377.

152. Heck, F.C. Comparison of serological methods for the detection of Br.abortus antibodies in sera from vaccinated and non-vaccinated cattle / F.C. Heck et al. // J. of Hygiene. 1979. - V. 83. - №3. - P. 491-499.

153. Heremans, J.F. Studies on the immune globulins of human serum / J.F. Heremans, J.P. Vaerman, C. Vaerman//J. Immunol. 1963. - №91. - С. 11-14.

154. Huber, D.Jon Comparison of the results of card Rivanol complement fixation and milk ring tests with the isolation rote of Brucella abortus from cattle / D. Jon Huber, P. Nicoletti // Amm. J. Vet. Res. 1986. - V. 47. - №7. - P. 1529-1531.

155. Jones, L.M. Brucella antigens and serological test results / L.M. Jones // An International Symposium United States of America, R.P/ Crawford and R.Y. Hidalgo. 1977. - P. 21-40.

156. Jones, L.M. Evaluation of radial immunodiffusion test with polysaccharide В antigen for diagnostic of bovine brucellosis / L.M. Jones, D.T. Berman, E. Moreno // J. Clinic.microbiol. 1980. - V. 12. - №6. - P. 753-760.

157. Kerr, W.R. Chronic Brucellosis in the practicing veterinary Surgeon / W.R. Kerr et al. //Vet. Rec. 1966. - №21. - C. 602-605.

158. Kerr, W.R. Laboratory diagnosis of chronic Brucellosis / W.R. Kerr et al. // Lancet. 1966. - №2.-C. 1181-1187.

159. Kostoula, A.G. The evolution of rose bengal test in the laboratory diagnosis of human brucellosis / A.G. Kostoula, M.A. Dalamaga, J. Deska // Mediterr. G.Infec.and Parasit.Doseasis. 1998. - V. 10. - №2. - P.95.

160. Lapski, Z. Trudnosci serologicznej diagnostyki brucelozy bydla / Z. Lapski //

161. Mc Millan, А.Р. Nonspecific reactions to the Brucella abortus SAT (correspondence) / A.P. Mc Millan, R.A. Bell // Vet.Rec.-1985.-V.5.-P.139-142.

162. Megid, J. Immunodifusao em gel de agar com polissacarideos de mevabrana de brucella abortus 9-3 no diagnostico da brucelose bovina / J.Megid, et al. // Arg.brasil. Med. Veter. Zootecn. 1999. - V. 51. - №5. - P. 433-437.

163. Nielsen, K. Diagnosis of bovine brucellosis using a nomogeneous fluorescence polarization assay / K. Nielsen, et al. // Veter. Immonol. Immunopathol. 1998. - V. 66. - №3/4. - P. 321-329.

164. Nielsen, K. Fluorecence polarization assay for the dagnosis of bovine brucellosis adaptation to fild use / K. Nielsen, et al. // Veter. Microbiol. -2001. V. - 80. - iss 2 - P. 163-170.

165. Nielsen, R. Comparative assessment of antibody isotypes to Brucella abortus by primary and secondary binding assay / R. Nielsen, et al. // Prev. Vet. Med. 1984. - V. 2. - P. 197-207.

166. Paulauskas, V. Comparative diagnostic testing of brucellosis in Lithuania / V. Paulauskas, et al. // Veterinaria ir zootechnika. 2005. - T. 32. - №54. - P. 20-25.

167. Pan, J.C. Spectrum of ovine immunoglobulins / J.C. Pan, A.M. Kaplan, R.L. Mortes, MJ. Freeman // Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. 1968. - V. 129. - №3. -P.867-870.

168. Pannwitz, S. Auft reten blut serologischer Brucellose-Reaktionem in einem Mastschweinebestand mit Yersinia-enterocolitica Nfchweis - Fallbericht / S. Pannwitz, Fl. Roost // Tierarztl. Vmsch. - 2001. - Jg. 56. - №6. - S. 306314.

169. Plachett, P. An indirect haemolysis test for bovine brucellosis / P. Plachett // Austral.veter.J. 1976. - V. 52. - №3. - P. 136-140.

170. Patterson, J. Standardization of test-negative cream for Brucella milk ring test/J. Patterson//Amer.J.Veter.Res. 1974. - V.35. - №1. - P. 119-120.

171. Reddin, J.L. Significance of 7S and macroglobulin brucella agglutinins in

172. Human brucellosis / J.L. Reddin, et al. // New Engl. J. Med. 1965. - №272. -C.1263-1266.

173. Renoux, G. Пассивная гемагглютинация (РПГ) / G. Renoux, Ch. Pilet // Материалы Советско-французского симпозиума. M. 1971. - С. 20-23.

174. Rose, J.E. Physicochemical studies on postvaccinal brucella agglutinins in bovine serum / J.E. Rose, M.H. Roephe // Am. J. Vet. Res. 1964. - V. 25. - P. 325.

175. Silva, Junior F.F. Evaluation of the ring test in an epidemiological surveillance of bovine brucellosis in herds and dairies / F.F. Silva Junior et al. // Arg.brasil. Med. Veter. Zootecn. 2007. - V. 9. - №2. - P. 295-300.

176. Sting, R. Erfahruggen mit ein facken ELISA-Testsystemen fuer die Brucellose Serologic bei Rind, Schaf und Ziege / R. Sting, G. Ostmann // Berl u munch. Tierarztl. Wschr. - 2000. - Sg. 113. - №1. - S. 22-28.

177. Vanzini, V.R. Comparison of an indirect ELISA with the Brucella milk ring test for detection of antibodies to brucella abortus in bulk milk samples / V.R. Vanzini, et al. // Veter. Microbiol. 2001. - V. 82. - №1. - P. 55-60.

178. Valette, L. La reaction ELISA dans le diagnostic de la brucellose animale // Rev. Elevage Med.Veter. 1987. - V. 40. - №4. - P. 341-345.

179. Weddell, W. An automatic complement fixation test for Brucella ovis in sheep / W. Weddell //N.L.Vet.J. 1974. - V. 22. - № 1-2. - P. 1-13.

180. Weinbach, R. Die Verwendbarkeit formolbehandelter Erythrocyten ais Antigentrager in der indirecten Haemagglutination / R. Weinbach // Schweiz. Z.allg. Path, 1958. V. 106. - P. 1043.

181. Wells, K.F. Brucellosis eradication in Canada Holstein-Friezan / K.F. Wells // Canad. Vet.J.-1970.-V.32.-№12.-P.26-27.

182. Worthington, R.W. Serology and samen culture for the diagnosis of Brucella ovis infection in chronically infected rams / R.W. Worthington, B.J. Stevenson, G.W. Lisle // Ibid.-1985. V. 33. - №6. - P. 84-86.

Информация о работе

Карлова, Мария Юрьевна
кандидата ветеринарных наук
Омск, 2010
ВАК 06.02.02

Диссертация

Разработка S- и R-бруцеллезных эритроцитарных диагностикумов, изучение их эффективности при бруцеллезе животных - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы