Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка рецептуры и оптимизация биотехнологических процессов производства липосомальных косметических средств

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка рецептуры и оптимизация биотехнологических процессов производства липосомальных косметических средств"

На правахрукописи

Носенко Мария Александровна

РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ И ОПТИМИЗАЦИЯ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРОИЗВОДСТВА ЛИПОСОМАЛЬНЫХ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ (на примере крема для проблемной кожи)

03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь - 2004

Работа выполнена в Ставропольском научно-производственном объединении «Пульс»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

профессор Кузякова Л.М.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Дударь Ю.А., кандидат биологических наук, доцент Виноградская СЕ.

Ведущая организация: Пятигорская государственная

фармацевтическая академия

Защита состоится 7 июля 2004 года в 10 часов на заседании регионального диссертационного совета ДМ 212.256.04 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009 г. Ставрополь, ул. Пушкина 1, корпус 2, аудитория 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета (355009 г. Ставрополь, ул. Пушкина 1, корпус 1).

Автореферат разослан «4» июня 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совет доктор биологических наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Современный рынок насыщен различными формами лекарственных, лечебно-профилактических и косметических средств, предназначенных для ухода за проблемной кожей лица, склонной к проявлениям акне и постакне. В арсенале врачей, лечащих угревую болезнь, значительный процент занимают симптоматические средства, например, антибиотики для лечения воспаления, вызванного микроорганизмами или спиртовые составы для удаления излишков кожного сала. Однако, микрофлора кожного покрова постепенно становится резистентной к антибиотику, спирт пересушивает кожу, а удаление кожного сала неизбежно сопровождается растворением части эпидермальных липидов, нарушая целостность липидного барьера кожи. Решением этой проблемы занимались такие ученые, как Аравийская Е.Р. (1999), Полонская Н.И. (2002), Марголина А.А. (2003)., Shaw J.C. (2002) и др.

Ярко выраженной чертой современных косметических средств является их лечебно-профилактическая направленность. С этой целью в рецептурах используют как синтезированное, так и природное сырье. Современные исследования таких ученых, как Корсун В.Ф. (1995), Кубано-вой А.А. (1999), Степановой Э.Ф. (1999), Кузяковой Л.М. (2002), Зайки-ной О.Э. (2003), Эрнандес Е.И. (2003), Senda M.L. (1999), Takeda J. (1999), подтверждают, что альтернативой раздражающим кожу синтезированным добавкам являются растительные экстракты. Они действуют сравнительно медленно, но эффективно и обладают широким спектром биологической активности: Однако экспериментальных данных о подтверждении синергизма действия лекарственного растительного сырья (ЛРС) для лечения или профилактики акне недостаточно.

Решение проблемы целенаправленной доставки биологически активных веществ (БАВ) лекарственных растений к клетке-мишени зависит от нахождения оптимальной системы инкапсулирования. Использование транспортных свойств и тропности липосом в косметологии и медицине имеет ряд преимуществ по сравнению с применением соединений в ин-тактном виде, что изучено учеными Бергельсоном Л.Д. (1982), Закрев-ским В.И. (1990), Барсуковым Л.И. (1998), Афанасьевым Е.Н. (1999), Ефременко В.И. (1999), Швец В.И. (1999), Lasic D.D. (1999), Jizomoto H. (1989), Lasic D.D. (1999), и другими.

Отсутствие единого научно-методического подхода к разработке составов косметических средств, экспериментальной оценке биологической активности и безопасности ингредиентов данных препаратов, разрозненность данных об оптимизации технологического процесса экстра-

« : ' • M .-f A

- •• Сй

гирования лекарственного растительного сырья (ЛРС) в производстве липосомальных средств и определило задачи, связанные с созданием методического подхода к разработке рецептуры и совершенствованию биотехнологии конструирования трансдермальных косметических средств лечебно-профилактической направленности.

В связи с вышеизложенным, разработка липосомального крема для проблемной кожи с использованием методов биомоделирования, построения моделей экологической опасности, определения степени биологической активности каждого из действующих компонентов рецептуры весьма актуальна.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования является разработка рецептуры фи-токомплекса на основе биомоделирования и оптимизация биотехнологии оригинального липосомального лечебно-профилактического средства для проблемной кожи.

Для достижения поставленной цели следовало решить следующие задачи:

- изучить современное состояние вопроса применения экстрактов лекарственных трав в составе трансдермальных косметических средств для ухода за проблемной кожей;

- подобрать адекватные высокочувствительные биомодели для выявления степени биологической активности экстрактов отдельных лекарственных трав и провести первичный скрининг количественного соотношения лекарственных трав в составе фитокомплекса;

- используя тест-культуры Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus, подобрать оптимальное соотношение липидов растительного и животного происхождения для получения липосом и состав лекарственных трав, входящих в фитокомпозицию, обладающую противовоспалительным и ранозаживляющим действиями;

- оптимизировать технологический процесс экстракции биологически активных веществ с целью комплексного использования растительного сырья;

- выбрать оптимальные экстрагенты, позволяющие наиболее полно извлечь комплекс биологически активных компонентов требуемого спектра терапевтического воздействия;

- совершенствовать биотехнологические процессы получения липо-сомальных косметических препаратов, разработать НД;

- провести фармакологический скрининг для выявления биологической активности разработанного препарата.

Научная новизна работы. Усовершенствована биотехнология ли-посомальных лечебно-профилактических препаратов. Разработан оригинальный крем «Альпика» для проблемной кожи.

Впервые обоснована возможность применения в качестве биомоделей Paramecium caudatwn и Staphylococcus aureus для разработки рецептуры косметического средства. Установлено оптимальное процентное соотношение (90:10%%) фосфолипидов (ФЛ) растительного и животного происхождения, используемых в качестве сырья для получения липосо-мальных препаратов наружного применения. Доказано, что фитокомпо-зиция, в которой содержание комплекса «шалфей-календула» по отношению к комплексу «ромашка-зверобой-крапива» составляет 4:1, обладает наиболее выраженным бактерицидным действием как в интактной, так и в липосомальной форме.

Разработаны основные технологические стадии получения трансдермального препарата для проблемной кожи в производственных условиях, оптимизирован процесс получения экстрактов БАВ лекарственных растений. В производстве липосомальных фитопрепаратов предложена комплексная многоступенчатая экстракция растительного сырья: первичная хлороформная с получением продукта для производства липо-сомальных кремов и гелей, вторичная водно-спиртовая - с получением полупродукта для производства липидных тонизирующих препаратов и завершающая водная - с получением полупродукта для производства увлажняющих средств. Экономический эффект от внедрения малоотходной технологии экстрагирования выражается в увеличении выхода готового продукта на 15-17%%.

В ходе фармакологического скрининга получены данные о выраженном ранозаживляющем и противовоспалительном действии разработанного крема, что подтверждает возможность применения в качестве биомоделей Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus для определения качественного и количественного состава фито-композиции косметических препаратах. Доказана эффективность липосомального крема для проблемной кожи в сравнении с кремом, содержащим БАВ ЛРС в интактной форме.

Впервые предложена методика и принципиальная схема разработки и изучения липосомальных косметических препаратов для проблемной кожи, что позволило усовершенствовать научно-методические подходы к производству лечебно-профилактических средств для наружного применения.

Получены положительные решения о выдаче двух патентов на изобретение РФ (№2003104254/15 от 27.04.2004 и №2003104255/15 от 19.05.2004).

Практическая ценность и результаты внедрения.

Данная работа выполнялась по заказу НПО «Пульс». г.Ставрополь, производящего липосомальные лечебно-косметические препараты.

Разработаны и утверждены НД на липосомальный крем «Альпи-ка» для проблемной кожи, в т.ч. Опытно - промышленный регламент (№04 от 2004г.), ТУ 9158-015-1020704-04. НД может быть использована для соответствующего целевого назначения на предприятиях, производящих трансдермальные косметические препараты.

Крем «Альпика» прошел технологическую производственную апробацию, имеет санитарно-эпидемиологическое заключение и сертификат соответствия и в настоящее время выпускается в производственном объеме.

Отдельные теоретические положения работы и результаты экспериментальных исследований внедрены в работу Центра красоты и здоровья «Альпика» г. Ставрополь (Акты №№ 2,7 от 25.03.04). Испытания эффективности липосомалыюго крема показали наличие планируемого терапевтического воздействия крема на кожу, склонную к воспалительным процессам (Акты апробации от 21.03.04 и от 28.03.04).

Разработанные методические рекомендации по применению методов биомоделирования для изучения фармакологической активности веществ и программа учебной практики по дисциплине специализации "Физиология человека и животных" внедрены в учебный процесс кафедры анатомии, физиологии и гигиены человека Ставропольского Госуниверситета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Применение принципов биомоделирования позволяет разработать рецептуру лечебно-профилактического косметического средства с заданным терапевтическим эффектом.

2. Результаты экспериментальной оценки фармакологической активности фитокомплекса лекарственных трав в липосомальной форме свидетельствуют о целесообразности введения его в качестве биологически активного компонента в состав косметического средства.

3.Оптимизация процесса экстрагирования позволяет получить экономический эффект от внедрения малоотходной технологии.

4.Липосомальный лечебно-профилактический крем для проблемной кожи может использоваться для ухода за кожей, склонной к воспалительным заболеваниям, явлениям акне и постакне.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены на Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2003» (Пущино, 2003), Международной .научно-практической конференции «Биоресурсы, биотехнологии, инновации юга России» (Пятигорск, 2003), IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке» (Москва, 2003), Межрегиональной конференции, посвященной 80-летию ИАДржевецкой «Физиологические проблемы адаптации» (Ставрополь, 2003), 58-й и 59-й Межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003, 2004), Международной конференции «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2004).

За высокое качество и эффективность применения липосомаль-ный крем "Альпика" для проблемной кожи награжден в 2003 г. серебряной медалью III Московского Международного Салона инноваций и инвестиций.

По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, главы обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследований, двух глав собственных исследований, заключения, общих выводов, списка литературы, включающего 149 наименований, в т.ч. 70 источников иностранных авторов и приложения, содержит 21 рисунок и 10 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В ходе работы использовались объекты исследования и вспомогательные вещества, которые соответствовали по качественным показателям и количественному содержанию требованиям основных нормативных документов (ГФ СССР X и XI изд. доп., отдельных фармакопейных статей, ГОСТам, ОСТам и ТУ).

' В качестве биологических моделей использовали:

- для подбора количественного соотношения сырья - культуру Paramecium caudatum из коллекции простейших Краснодарского НИИ.

- при изучении бактерицидного и/или бактериостатического действия веществ и количественного подбора соотношения ЛРС - референтный штамм Staphylococcus aureus 209 P.

- в опытах по изучению гистологических и фармакологических характеристик эффективности действия сконструированного липосомаль-ного лечебно-профилактического средства - нелинейных белых крыс самок массой 170-180 г. из питомников Пятигорской фармакадемии.

В качестве основных методов исследования использовались биологические и физико-химические методы: определения бактери-цидной/бактериостатической активности; степени токсичности и собственной активности; тензометрической оценки ранозаживляю-щего действия; онкометрической оценки воспаления; методы микробиологического контроля безопасности косметической продукции; методы стандартизации.

Биотехнология оригинального лечебно-профилактического крема для ухода за проблемной кожей.

В процессе разработки фитокомплекса (ФК) лекарственных трав получили экспериментальное подтверждение синергстического эффекта лекарственных трав в комплексе, подобранном для конкретного терапевтического воздействия (табл.1).

Для подбора количественного содержания лекарственных трав в составе фитокомплекса изучались различные варианты их соотношения: ФК №1 - все лекарственные растения взяты в равных частях; ФК №2 -отношение шалфея и календулы к комплексу «ромашка-зверобой-крапива» 2:1; ФК №3 - шалфей и календула тю отношению к другим составляющим взяты в количестве 4:1; ФК №4 - содержание шалфея и календулы к остальным составило 8:1. Критерием биологической активности явилось различие в концентрации живых парамеций в опытной и контрольной пробах, величина пороговой концентрации, вызывающей изменения этологических параметров. В качестве контроля использовали солевую среду Л.К. Лозина-Лозинского (NaCl - 0,01%, КС1 - 0,001%, СаС12-0,001%, MgCl2-0,001%, NaHC03 - 0,002%, пептон -0,061%,дистиллированная вода-до 100%).

Биологически активными в направлении биостатического эффекта оказались экстракты зверобоя, календулы, шалфея и ФК лекарственных трав, в которых процентное соотношение доминирующего ЛРС - шалфея и календулы составило к остальному ЛРС 4:1 и 8:1.

Таблица 1.

Результаты оценки биологической активности экстрактов лекарственных трав

Объект исследования Химический состав природных соединений Крите! )ии биологической активности

Порогов, концентрация Темп размножения Размер и форма клеток (мкм) Характер движения

1 2 3 4 5 6

Контроль Солевая среда, петон - >20 90-100 удлинена Активны

Ромашка (цветки) Флавоноиды, тритерпен. соединения, органическ. кислоты, каротин 1,0-103 >30 90-200 эллипсоид Активны

Зверобой (трава) Флавоноиды дубилы I. вещества, орг. кислоты 1,010-' >10 50-80 округлые Замедление дви-жен.

Шалфей (трава) Тритерпенов. соединен.,танины, сапонины, фенилкарбоновые к-ты 1,0- 1СГ1 >20 50-80 округлые Замедление движем.

Крапива (листья) Гликозиды, органическ. кислоты, каротиноиаы 1,0-10-' >30 90-200 эллипсоид Активны

Календула (цветки) Тригерпеновые соедин., флавоноиды, гликозиды, дубильные вещества 1,010-' >10 50-80 округлые Замедление движем.

Фитоком-плекс№1 Комплекс биологически активных соединений 1,010-' >20 50-80 округлые Замедл. движен.

Фитоком-плекс №2 Комплекс биологически активных соединений 1,0-lCT1 >20 50-80 округлые Замедл. движем.

Фитоком-плекс№3 Комплекс биологически активных соединений 1,010"' >10 50-80 округлые Замедл. движен.

Фитоком-плекс №4 Комплекс биологически активных соединений 1,010-' >10 50-80 округлые Замедл. движен.

Изучение синергизма действия трав в фитокомплексе позволило подобрать оптимальное количественное соотношение ЛРС, обладающего бактерицидным и бактериостатическим действием и подтвердить данные, полученные в ходе экспериментов на биомодели Paramecium cauda-tum. Бактерицидную и бактериостатическую активность экстрактов в интактной и липосомальной форме изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Сведения о биостатической активности фитокомплекса №3 подтверждены экспериментально с использованием в качестве биомодели культуры Staphylococcus aureus (табл.2).

Таблица 2.

Показатели бактерицидной и бактериостатаческой активности масляных экстрактов лекарственных трав.

Масляные экстракты лекарственных трав Количество КОЕ стафилококка при высеве из разведений экстрактов Количество КОЕ стафилококка при высеве из контроля:

ц 12 1:4 1:8 1:16 132 1:64 1:128 Экстракта Рост куль туры

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Зверобой - - 2x10' 10* 10* Зх1(У 24x10" 24x10? - "Ь X п <ч

Календула - - 2x10* вхЮ2 5x10* 9х1(У 24x10" 24х109 -

Крапива - 10» 5x10* 7Х105 3x10' 2,5x10" 2,5x10" 2,5x10" -

Ромашка - - 8x10* 10» 2,5x10" 2,5x10" 24x10" 2,5x10" -

Шалфей - - - 10' 5x10* 2,5x10" 2,5x10" 24x10" -

Сбор№1 - - 104 3x10" 5x10* 2,5x10" 24x10" 2,5x10" -

Сбор №2 - - 2x10* 5Х101 3x10' 2,5x10" 24x10" 24x10?

Сбор№3 - - - ЗхЮ2 5Х103 24x10" 24x10" 2^x10" -

Сбор №4 - - ЗхЮ2 5x10* 3x10' 24x10" 24x10" 24x10"

Примечание: - КОЕ — колониеобразующие единицы;

(-) — отсутствие роста микрофлоры.

Согласно полученным и данным, интактные экстракты шалфея и сбора №3 в разведениях 1:2 - 1:8 проявили наибольшую активность в отношении стафилококка.

Следующим шагом в изучении активности экстрактов лекарственных трав стало определение минимальной ингибирующей концентрации и бактериостатического действия экстрактов в липосомальной форме, которые изучались также в представленных ранее процентных соотношениях составляющих лекарственных растений (табл.3).

Как следует из таблицы, ФК, в котором содержание комплекса доминирующих трав «шалфей-календула» по отношению к комплексу «ромашка-зверобой-крапива» составляет 4:1, обладает наиболее выраженным бактерицидным действием в липосомальной форме.

Таблица 3.

Определение бактерицидной и бактериостатической активности липосомальной формы экстрактов лекарственных трав.

Липо-сомаль- ная форма экстрактов Количество КОЕ стафилококка при высеве из разведений экстрактов Количество КОЕ стафилококка при высеве из контроля:

Ц И -2 1:4 1:8 1:16 132 1:64 1:128 Экстракта Рост культуры

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

ФК №1 - - - 8 3x10' 5x10' 1,8x10" 1,8x10" - 1,8x10®

ФК №2 - - - 2 7x10* 3x10" 1,8x10" 1,8x10' -

ФК №3 - - - - 8 2x10" 1,8x10" 1,8x10' -

ФК№4 - - - 2 9x10? 4x10s 1,8x10^ 1,8x10"

Примечание: - КОЕ - колониеобразукмцие единицы;

(-) — отсутствие роста микрофлоры.

Системой транспорта БАВ в креме являются липосомы. В качестве сырья для производства липосом использовали фосфолипиды фосфати-дов — отходов производства подсолнечного масла и мозга КРС.

Подтверждение целесообразности выбранного процентного соотношения животного и растительного сырья 90:10%% получено в ходе серии опытов с использованием тест-культуры Paramecium caudatum (рис.1 .).

_Степень разведет» эмульсии_

—♦— Смесь ФЛ 90 10-«—Смесь ФЛ 70.30-*-Смесь ФЛ 50 5( —Животные Ф Л —*— Контроль

Рис.1. Характеристика биологической активностилипосомальных

эмульсий.

Липосомальная эмульсия из смеси ФЛ 90:10%% оказалась биологически активной и нетоксичной, так как количество живых особей парамеций оставалось неизменным начиная с концентрации 10"2, а заметное стимулирующее размножение парамеций действие проявилось до разведения 10 . Для липосом из ФЛ животного происхождения токсичными оказались разведения от до , а стимулирующее размножение парамеций действие проявилось с увеличением разведения до 10"7.

На основании проведенных исследований составлена блок-схема основных технологических процессов (ТП) получения липосомального крема на основе разработанной фитокомпозиции (рис.2). Предложена многоступенчатая комплексная экстракция ФК с поочередным применением экстрагентов: хлороформа - водно-спиртового раствора - водного раствора, что позволило расширить ассортимент и увеличить выход продукции на 15-17%%.

ТП ! 1 В дошивание измельчение лекарственных трав

ТП 1 2 Приготовление растворов экстрагентов

ТП 1 1 Многоступенчатая, комллек сная экстртьция фито ЬАВ

ТП 2 I 11рмгоговление раствора фосфолипидов

ТП 22 Приготовление к стерилизация физ раствора

ТП 3 1 Набухание гелеобразователя

ТП 32 Заг> щенне гелеобразователя

ТП 33 Фильтрация

ТП 34 Приготовление раствора консервантов эмульгаторов

ТП 41 Смешивание компонентов основы и липосомальной суспешии

ТП

Получение фитоэкстрастов

ПО

Получение обедненных отходов лекарственных трав

тп.:

Получение липосомалыюй суспензии

»ТП. 3

ПО

Улавливание легколетучих веществ

Приготовление основы крем»

ТП 4

Механические потерн

Получение липосомального крема

Механические потери

Фасовка и упаковка готовой протукиин

Механические потерн

Готовая продукция На склад и карантинное хранение

Рис 2 Блок-схема основных технологических стадий производства липосомального крема для проблемной кожи.

Замкнутый цикл улавливания и возвращения в технологический процесс таких веществ, как хлороформ, этанол и вода значительно улучшает экологическую обстановку и увеличивает экономическую рентабельность производства на 9— 11%.

Оптимизация технологического процесса экстрагирования ЛРС позволила расширить ассортимент полупродуктов для производства тонизирующих и увлажняющих косметических средств. Доказано с использованием тест-культуры Staphylococcus aureus, что экстракты фитоком-плексов ЛРС, прошедшие предварительное экстрагирование, обладают бактерицидными свойствами (рис.3).

разведения экстрактов

Рис.3. Сравнительная характеристика биологической активности экстрактов.

Установлено, что водно-спиртовой экстракт сбора, прошедшего предварительную хлороформную экстракцию (сбор №2) по степени биологической активности в отношении тест-культуры Staphylococcus aureus превосходил активность 40% этилового спирта, взятого для сравнения. Бактерицидная активность сбора №2 проявилась до разведения 1:32, для спиртового раствора бактерицидная активность проявилась до разведения 1:16. Водно-спиртовой экстракт ЛРС, не подвергавшийся предварительной экстракции хлороформом (сбор №1), проявил активность до разведения 1:62. Таким образом, доказано, что водно-спиртовые экстракты обедненных ФК могут включаться в состав тонизирующих липидных косметических средств, что представляется экономически целесообразным.

Липидные везикулы для транспортирования БАВ в кожный покров получали методом «обращения фаз», поскольку он дает возможность включения в липосомы как гидрофильных, так и гидрофобных веществ,

технологичен и доступен в производственных условиях. Использование хлороформа в качестве экстрагента обеспечивает полноту извлечения определенной группы БАВ, асептичность технологических процессов получения липосом и экстрактов БАВ лекарственных растений.

Фармакологические испытания лечебно-профилактического крема для проблемной кожи.

Оценку ранозаживляющего действия проводили по характеру клинического течения (наличие нагноения, времени полного отторжения струпа, времени и динамики полного срастания краев раны) на 5, 10 и 15 дни наблюдения (табл.4).

Таблица 4.

Показатели ранозаживляющего действия крема «Альпика» для проблемной кожи

Исследуемый объект Средний линейный размер раны, мм

Исходный размер Через 5 суток Через 10 суток Через 15 суток

1 2 3 4 5

Контроль 25±1,5 23,4±2,2 18,3 ±1,6 7,1 ±1,3

Липосомальный крем «Альпика» 25±1,0 21,1 ±1,3 Р>0,05 10,2± 1,8 Р<0,05 0 £<0,001

Крем с фито-комплексом в интактной форме 25±1,0 23,8±1,1 Р>0,05 16,7±1,2 Р>0,05 4,3±1,1 Р>0,05

В группе животных, получавших липосомальный крем «Альпика» заживление ран происходило более интенсивно, размеры ран составляли 25±1,0; 21,1 ±1,3; 10,2± 1,8 и 0 мм соответственно срокам наблюдения, причем начиная с 10 суток от начала эксперимента различия в размерах ран были статистически достоверны (на 10 день Р<0,05, на 15 день Р<0,001).

В ходе онкометрического изучения противовоспалительного действия разработанного крема на лабораторных животных получены достоверные данные об эффективности его применения (рис.4).

Объем, мл 2,5

2

1,5

1

0,5 0

Исход ный объем лап 1 2 3 24

Время, ч.

О Контроль О липосомальный крем □ "ингакгный" крем

Рис.4. Показатели определения противовоспалительной активности кремов.

Как видно из рисунка, в группе животных, получавших липосомальный крем «Альпика» уже через 1 час после введения каолина наблюдалось статистически достоверное снижение нарастания отека по отношению к контрольной группе и составило 1,23± 0,07 (Р<0,05). Показатели объема лапок на 2, 3 и 24 часы эксперимента в данной группе животных были также статистически достоверны и соответственно составляли 1,46± 0,07; 1,49± 0,05 и 1,27± 0,08 мл. Интактный крем не оказал статистически достоверного влияния на развитие отека во времени.

Таким образом, установлено, что противовоспалительное и раноза-живляющее действие разработанного крема «Альпика» значительно эффективнее, чем у крема без липосом с таким же качественным и количественным составом лекарственных растений.

. При проведении испытаний на добровольцах доказано отсутствие кожно-раздражающего и аллергизирующего действия разработанного косметического средства. Получены данные о регрессе папуло-пустулезных высыпаний, уменьшении эритемы и отека в процессе применения крема у лиц, страдаю -щих проявлениями воспалительных заболеваний кожи.

Применяя универсальный метод конструирования препаратов на основе липосом, экономичные технологии и определенный набор БАВ с изученными и экспериментально подтвержденными свойствами, следуя принципам биотехнологии при конструировании препаратов, нами разработаны методические рекомендации по разработке и изучению липо-сомальных косметических препаратов для проблемной кожи (рис.5).

На первой стадии разработки биотехнологии конструирования липо-сомальных фитопрепаратов необходимы маркетинговые исследования,

патентный поиск и анализ литературных данных о научных разработках и применяемых сырьевых объектах.

Вторая стадия процесса разработки биотехнологии складывается из следующих этапов:

- выбора метода производства липосомальных препаратов;

- выбора сырья для конструирования липосом, в том числе, с учетом экономической целесообразности;

- выбора компонентов основы с условием сохранения показателей эффективности каждого отдельно взятого составляющего;

- подбора лекарственных трав для фитоэкстрактов с использованием методов биомоделирования.

Рис.5. Принципиальная схема разработки и изучениялипосомальныхкосметических препаратов.

После получения и стандартизации продукции проводятся скрининго-вые исследования с целью усовершенствования биотехнологических процессов производства и повышения качества косметического препарата.

Таким образом, авторами предложена методика и принципиальная схема разработки и изучения липосомальных косметических препаратов для проблемной кожи, что позволило усовершенствовать и обобщить научно-методические подходы к производству соответствующих лечебно-профилактических средств для наружного применения.

Выводы:

1. Впервые обоснован выбор биомоделей Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus для скрининга биологической активности сырья при конструировании липосом и количественном подборе соотношения лекарственных трав в составе косметического средства для проблемной кожи. Экспериментально доказано, что фитокомпозиция, в которой содержание лекарственных трав шалфея и календулы по отношению к ЛРС ромашка-зверобой-крапива составляет 4:1, обладает наиболее выраженным бактерицидным действием как в интактной, так и в липосомальной форме. Установлено, что процентное соотношение ФЛ растительного и животного происхождения 90:10 %% является оптимальным для конструирования липосом.

2. Оптимизирован процесс получения экстрактов БАВ лекарственных растений. В производстве липосомальных препаратов предложена малоотходная многоступенчатая переработка фитокомплекса, увеличивающая спектр извлечения БАВ из ЛРС и расширяющая ассортимент липидных препаратов. Экономический эффект от внедрения данной технологии выразился в увеличении выхода готового продукта на 15-17%.

3. Разработана биотехнология оригинального лечебно-профилактического крема «Альпика» для проблемной кожи. Доказано, что ранозаживляющее и противовоспалительное действие липосомаль-ного крема выше в сравнении с кремом, содержащим аналогичный фито-комплекс в интактной форме.

4. Разработаны и утверждены нормативные документы на липосомаль-ный лечебно-профилактический крем для проблемной кожи «Альпика. Качество продукции подтверждено санитарно-эпидемиологическим заключением и сертификатом соответствия.

5. Впервые предложена методика и принципиальная схема разработки и изучения липосомальных косметических препаратов для проблемной кожи, что позволило усовершенствовать и обобщить научно-методические подходы к производству соответствующих лечебно-профилактических средств для наружного применения.

Опубликованные статьи.

1. Носенко М.А Разработка состава липосомальных фитопрепаратов для проблемной кожи //ГУ - СтавЦНТИ, 2002.

2. Носенко М.А. Экспериментальный подбор компонентов для конструирования лечебно-профилактических препаратов по уходу за проблемной кожей лица // Материалы межрегиональной конференции «Физиологические проблемы адаптации», посвященной 80-летию И.А. Држевецкой. - Ставрополь, 2003. - С. 117-119.

3.Кузякова Л.М., Носенко М.А. Изучение степени токсичности и собственной биологической активности липосомальных эмульсий // Материалы ГУ-ой международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке». - М., 2003. - С.358.

4. Носенко М.А. Подбор реагентов для экстракции биологически активных веществ из лекарственных трав // Материалы ГУ-ой международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке». - М., 2003. - С.460-461.

5. Умнов А.В., Носенко М.А. Разработка состава липосомальных фитопрепаратов для ухода за проблемной кожей// Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск, 2003.- С. 162-164.

6. Носенко М.А. Подбор лекарственных трав для конструирования косметического противовоспалительного средства// Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». -Пятигорск, 2003.- С.343-345.

7.Кузякова Л.М., Носенко М.А. Исследования фитокомплекса лекарственных трав для практической реализации в косметологии // Материалы международной научно-практической конференции «Биоресурсы, биотехнологии, инновации юга России».- Пятигорск, 2003.- С.249-252.

8. Носенко М.А. Совершенствование биотехнологии конструирования липосомальных лечебно-профилактических косметических средств // Материалы семинара-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2003». - Пущино, 2003.- С.29-31.

9. Носенко М.А. Комплексный подход к изучению эффективности лечебно-профилактических косметических средств для проблемной ко-" жи// Материалы международной конференции «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины»,-Астрахань, 2004.-С. 204-206.

10. Кузякова Л.М., Носенко М.А. Изучение антимикробной активности и микробиологической чистоты препаратов на основе лекарственного растительного сырья// Материалы 59-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». -Пятигорск, 2004.- С.289-290.

Изд. лиц.серия ИД № 05975 от 03.10.2001 Подписано в печать 2.06.2004

Формат 60x84 1/16 Усл.печ.л. 1,16 Уч.-изд.л. 0,89

Бумага офсетная Тираж 100 экз. Заказ 117

Отпечатано в Издательско-полиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета. 355009, Ставрополь, ул.Пушкина, 1.

1 48 82

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Носенко, Мария Александровна

Введение

Глава 1. Искусственные фосфолипидные конструкции -липосомы. Перспективы применения биологически активных веществ растительного происхождения в липосомальной форме (обзор литературы)

1.1. Общие представления о свойствах липосом.

1.2. Тенденции применения липидных компонентов в технологии получения лечебно-профилактических 19 косметических средств.

1.3. Основные механизмы действия липосом на клеточном уровне.

1.4. Особенности развития и проявления воспалительных процессов в коже.

1.5. Проницаемость кожи. Особенности проницаемости патологически измененной кожи.

1.6. Современный подход к разработке биотехнологии лечебно-профилактических косметических средств для ухода 40 за кожей, склонной к воспалительным процессам.

1.7. Применение растительного сырья в лечебно -профилактических и косметических средствах.

1.8. Обзор основных методов экстракции биологически активных веществ из растительного сырья.

1.9. Перспективы экспериментальной оценки безопасности и степени биологической активности фитокомплексов.

Глава 2. Материалы и методы исследований. 56 2.1. Материалы исследований.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Физико-химические методы стандартизации.

2.2.2. Биологические методы исследований.

2.3. Методы статистической обработки материала.

Глава 3. Разработка рецептуры и оптимизация биотехнологии лечебно - профилактического крема для ухода за проблемной 67 кожей (результаты собственных исследований).

3.1. Выбор сырьевых источников и технологии липосом.

3.2. Выбор лекарственного растительного сырья и технологии экстрагирования биологически активных веществ.

3.3. Выбор биологической модели для подбора фитокомпонентов в процессе конструирования липосомальных 75 средств.

3.4. Микробиологическое изучение препаратов из лекарственных трав в интактной и липосомальной форме.

3.5. Изучение бактерицидной и бактериостатической активности экстрактов лекарственных трав и фитокомплексов 87 в интактной и липосомальной форме.

3.6. Оптимизация процессов экстрагирования биологически ^ активных веществ растительного происхождения.

3.7. Усовершенствование биотехнологии липосомального лечебно-профилактического крема для ухода за проблемной 93 кожей, склонной к воспалительным процессам.

3.7.1. Разработка состава лечебно-профилактического ^ косметического средства для проблемной кожи.

3.7.2. Усовершенствование технологического процесса экстракции биологически активных веществ растительного 99 происхождения.

Глава 4. Фармакологические испытания липосомального крема для проблемной кожи {результаты собственных исследовании).

4.1. Экспериментальное изучение ранозаживляющего действия липосомального крема «Альпика».

4.2. Изучение противовоспалительного действия крема «Альпика».

4.3. Стандартизация лечебно-профилактического липосомального крема для проблемной кожи. 4.3.1. Результаты испытаний эффективности липосомального крема «Альпика» для проблемной кожи.

4.4. Разработка методического подхода к созданию косметических препаратов с заданным спектром действия. Заключение 127 Выводы 131 Список литературы

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

БАВ - биологически активные вещества

ФК - фитокомплекс

MOB - малые одноламеллярные везикулы

БОВ - большие одноламеллярные везикулы

ФЛ - фосфолипиды

ФЛВ - фосфолипидные везикулы

OJT - общие липиды

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ЖЭ - жировая эмульсия

ЖК - жирные кислоты

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

МИК - минимальная ингибирующая концентрация

КМАФАнМ - количество мезофильных анаэробных и факультативноанаэробных микробов

ТСХ - тонкослойная хроматография

КРС - крупный рогатый скот

ДМСО - диметилсульфоксид

ПАВ - поверхностно активные вещества

ОБТК - отдел биологического и технического контроля

НД - нормативная документация

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка рецептуры и оптимизация биотехнологических процессов производства липосомальных косметических средств"

Актуальность. Современный рынок насыщен различными формами щ лекарственных, лечебно-профилактических и косметических средств, предназначенных для ухода за проблемной кожей лица, склонной к проявлениям акне и постакне. В арсенале врачей, лечащих угревую болезнь, значительный процент занимают симптоматические средства, например, антибиотики для лечения воспаления, вызванного микроорганизмами или спиртовые составы для удаления излишков кожного сала. Однако, микрофлора кожного покрова постепенно становится резистентной к антибиотику, спирт пересушивает кожу, а удаление кожного сала неизбежно сопровождается растворением части эпидермальных липидов, нарушая целостность липидного барьера кожи. Решением этой проблемы занимались такие ученые, как Аравийская Е.Р. (1999), Полонская Н.И.(2002), Марголина A.A. (2003)., Shaw J.C. (2002) и др.

Ярко выраженной чертой современных косметических средств является их лечебно-профилактическая направленность. С этой целью в рецептурах используют как синтезированное, так и природное сырье. Современные исследования таких ученых, как Корсун В.Ф. (1995), Кубановой A.A. (1999), Степановой Э.Ф. (1999), Кузяковой Л.М. (2002), Зайкиной О.Э. (2003), Эрнандес Е.И. (2003), Senda M.L. (1999), Takeda J. (1999), подтверждают, что альтернативой раздражающим кожу синтезированным добавкам являются растительные экстракты. Они действуют сравнительно медленно, но эффективно и обладают широким спектром биологической активности. Однако экспериментальных данных о подтверждении синергизма действия лекарственного растительного сырья (JIPC) для лечения или профилактики акне недостаточно.

А Решение проблемы целенаправленной доставки биологически активных веществ (БАВ) лекарственных растений к клетке-мишени зависит от нахождения оптимальной системы инкапсулирования. Использование транспортных свойств и тропности липосом в косметологии и медицине имеет ряд преимуществ по сравнению с применением соединений в интактном виде, что изучено учеными Бергельсоном Л.Д. (1982), Закревским В.И. (1990), Барсуковым Л.И. (1998), Афанасьевым Е.Щ1999), Ефременко В.И. (1999), Швец В.И. (1999), Lasic D.D. (1999), Jizomoto Н. (1989), Lasic D.D. (1999), и другими.

Отсутствие единого научно-методического подхода к разработке составов косметических средств, экспериментальной оценке биологической активности и безопасности ингредиентов данных препаратов, разрозненность данных об оптимизации технологического процесса экстрагирования растительного сырья в производстве липосомальных средств и определило задачи, связанные с созданием методического подхода к разработке рецептуры и совершенствованию биотехнологии конструирования трансдермальных косметических средств лечебно-профилактической направленности.

В связи с вышеизложенным, разработка липосомального крема для проблемной кожи с использованием методов биомоделирования, построения моделей экологической опасности, определения степени биологической активности каждого из действующих компонентов рецептуры весьма актуальна.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования является разработка рецептуры фитокомплекса на основе биомоделирования и оптимизация биотехнологии оригинального липосомального лечебно-профилактического средства для проблемной кожи.

Для достижения поставленной цели следовало решить следующие задачи: изучить современное состояние вопроса применения экстрактов лекарственных трав в составе трансдермальных косметических средств для ухода за проблемной кожей; подобрать адекватные высокочувствительные биомодели для выявления степени биологической активности экстрактов отдельных лекарственных трав и провести первичный скрининг количественного соотношения лекарственных трав в составе фитокомплекса; используя тест-культуры Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus, подобрать оптимальное соотношение липидов растительного и животного происхождения для получения липосом и состав лекарственных трав, входящих в фитокомпозицию, обладающую противовоспалительным и ранозаживляющим действиями; оптимизировать технологический процесс экстракции биологически активных веществ с целью комплексного использования растительного сырья; выбрать оптимальные экстрагенты, позволяющие наиболее полно извлечь комплекс биологически активных компонентов требуемого спектра терапевтического воздействия; совершенствовать биотехнологические процессы получения липосомальных косметических препаратов, разработать НД; провести фармакологический скрининг для выявления биологической активности разработанного препарата.

Научная новизна работы.

Усовершенствована биотехнология липосомальных лечебно-профилактических препаратов. Разработан оригинальный крем «Альпика» для проблемной кожи.

Впервые обоснована возможность применения в качестве биомоделей Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus для разработки рецептуры косметического средства. Установлено оптимальное процентное соотношение (90:10%%) фосфолипидов (ФЛ) растительного и животного происхождения, используемых в качестве сырья для получения липосомальных препаратов наружного применения. Доказано, что фитокомпозиция, в которой содержание комплекса шалфей-календула по отношению к комплексу ромашка-зверобой-крапива составляет 4:1, обладает наиболее выраженным бактерицидным действием как в интактной, так и в липосомальной форме.

Разработаны основные технологические стадии получения трансдермального препарата для проблемной кожи в производственных условиях, оптимизирован процесс получения экстрактов БАВ лекарственных растений. В производстве липосомальных фитопрепаратов предложена комплексная многоступенчатая экстракция растительного сырья: первичная хлороформная с получением продукта для производства липосомальных кремов и гелей, вторичная водно-спиртовая - с получением полупродукта для производства липидных тонизирующих препаратов и завершающая водная - с получением полупродукта для производства увлажняющих средств. Экономический эффект от внедрения малоотходной технологии экстрагирования выражается в увеличении выхода готового продукта на 15-17%%.

В ходе фармакологического скрининга получены данные о выраженном ранозаживляющем и противовоспалительном действии разработанного крема, что подтверждает возможность применения в качестве биомоделей Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus для определения качественного и количественного состава фитокомпозиции косметических препаратах. Доказана эффективность липосомального крема для проблемной кожи в сравнении с кремом, содержащим БАВ ЛРС в интактной форме.

Впервые предложена методика и принципиальная схема разработки и изучения липосомальных косметических препаратов для проблемной кожи, что позволило усовершенствовать научно-методические подходы к производству лечебно-профилактических средств для наружного применения.

Получены положительные решения о выдаче двух патентов на изобретение РФ (№2003104254/15 от 27.04.2004 и №2003104255/15 от 19.05.2004). •

Практическая ценность и результаты внедрения.

Данная работа выполнялась по заказу НПО «Пульс» г.Ставрополь, производящего липосомальные лечебно-косметические препараты. Разработаны и утверждены НД на липосомальный крем «Альпика» для проблемной кожи, в т.ч. Опытно - промышленный регламент (№04 от 2004г.), ТУ 9158-015-1020704-04. НД может быть использована для соответствующего целевого назначения на предприятиях, производящих трансдермальные косметические препараты.

Крем «Альпика» прошел технологическую производственную апробацию, имеет санитарно-эпидемиологическое заключение и сертификат соответствия и в настоящее время выпускается в производственном объеме.

Отдельные теоретические положения работы и результаты Ф экспериментальных исследований внедрены в работу Центра красоты и здоровья «Альпика» г. Ставрополь (Акты №№ 2,7 от 25.03.04). Испытания эффективности липосомального крема показали наличие планируемого терапевтического воздействия крема на кожу, склонную к воспалительным процессам (Акты апробации от 21.03.04 и от 28.03.04).

Разработанные методические рекомендации по применению методов биомоделирования для изучения фармакологической активности веществ и программа учебной практики по дисциплине специализации "Физиология человека и животных" внедрены в учебный процесс кафедры анатомии, физиологии и гигиены человека Ставропольского Госуниверситета.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Применение принципов биомоделирования позволяет разработать рецептуру лечебно-профилактического косметического средства с заданным терапевтическим эффектом.

2. Результаты экспериментальной оценки фармакологической активности фитокомплекса лекарственных трав в липосомальной форме свидетельствуют о целесообразности введения его в качестве биологически активного компонента в состав косметического средства.

3. Оптимизация процесса экстрагирования позволяет получить экономический эффект от внедрения малоотходной технологии.

4. Липосомальный лечебно-профилактический крем для проблемной кожи может использоваться для ухода за кожей, склонной к воспалительным заболеваниям, явлениям акне и постакне.

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертационной работы доложены на Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2003» (Пущино, 2003), Международной научно-практической конференции «Биоресурсы, биотехнологии, инновации юга России» (Пятигорск, 2003), IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке» (М., 2003), Межрегиональной конференции, посвященной 80-летию И.А.Држевецкой «Физиологические проблемы адаптации» (Ставрополь, 2003), 58-й и 59-й Межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003, 2004), Международной конференции «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2004).

За высокое качество и эффективность применения липосомальный крем "Альпика" для проблемной кожи награжден в 2003г. серебряной медалью III Московского Международного Салона инноваций и инвестиций. По теме диссертации опубликовано 10 работ. Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, главы обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследований, двух глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 149 наименований, в т.ч. 70 источников иностранных авторов и приложения, содержит 21 рисунок и 10 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Носенко, Мария Александровна

ВЫВОДЫ:

1. Впервые обоснован выбор биомоделей Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus для скрининга биологической активности сырья при конструировании липосом и количественном подборе соотношения лекарственных трав в составе косметического средства для проблемной кожи. Экспериментально доказано, что фитокомпозиция, в которой содержание лекарственных трав шалфея и календулы по отношению к JIPC ромашка-зверобой-крапива составляет 4:1, обладает наиболее выраженным бактерицидным действием как в интактной, так и в липосомальной форме. Установлено, что процентное соотношение ФЛ растительного и животного происхождения 90:10 %% является оптимальным для конструирования липосом.

2. Оптимизирован процесс получения экстрактов БАВ лекарственных растений. В производстве липосомальных препаратов предложена малоотходная многоступенчатая переработка фитокомплекса, увеличивающая спектр извлечения БАВ из JIPC и расширяющая ассортимент липидных препаратов. Экономический эффект от внедрения данной технологии выразился в увеличении выхода готового продукта на 15-17%.

3. Разработана биотехнология оригинального лечебно-профилактического крема «Альпика» для проблемной кожи. Доказано, что ранозаживляющее и противовоспалительное действие липосомального крема выше в сравнении с кремом, содержащим аналогичный фитокомплекс в интактной форме.

4. Разработаны и утверждены нормативные документы на липосомальный лечебно-профилактический крем для проблемной кожи «Альпика. Качество продукции подтверждено санитарно-эпидемиологическим заключением и сертификатом соответствия.

5. Впервые предложена методика и принципиальная схема разработки и изучения липосомальных косметических препаратов для проблемной кожи, что позволило усовершенствовать и обобщить научно-методические подходы к производству соответствующих лечебно-профилактических средств для наружного применения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе отражен процесс разработки и внедрения в производство косметического средства для ухода за проблемной кожей лица, склонной к воспалительным заболеваниям.

Ярко выраженной чертой современного косметического производства является его лечебно-профилактическая направленность, в особенности при создании средств и рецептур, активно воздействующих на кожу. С этой целью в рецептурах используют как синтезированное, так и растительное сырье. Фитотерапия и фитопрофилактика сегодня все шире и прочнее внедряются в медицинскую практику.

Проблемами рационального использования отдельных лекарственных растений занимались такие ученые, как Соколова К.Я., Соловьева И.В., Соколов С.Я., Замотаев И.П. Об эффективности применения фитокомпозиций также достаточно сведений (Корсун В.Ф., Ситкевич А.Е., Ефимов В.В.). Однако авторами не встречено исследований, касающихся обоснования процентного соотношения входящих в фитокомплекс лекарственных трав, о сохранении синергизма действия в зависимости от количественного содержания компонентов в фитокомплексе.

Отечественное производство лечебной косметики находится в настоящее время на стадии становления. Требуются разработки оригинальных рецептур новых трансдермальных средств, отработка новых подходов к проведению стандартизации и клинических испытаний, создание новых биотехнологий, повышающих эффективность лечебно-косметических препаратов, нахождение путей оптимизации основных технологических процессов, определение оптимальных технологических параметров в производственных условиях.

Решению этих проблем и посвящены настоящие исследования.

Проанализированные литературные сведения, в основном, касаются современных взглядов на проблемную кожу и проблемы ее проницаемости, теоретических вопросов применения растительного сырья в косметическом производстве, путей инкапсулирования БАВ, строения и функций липосом, теоретических основ способов получения липидных везикул различными методами.

Перспективным и недостаточно исследованным направлением, исходя из проанализированных литературных данных, являются: экспериментальный подбор лекарственных растений в комплекс, сохраняющий, с одной стороны, индивидуальные качества БАВ растений, а с другой стороны - синергизм действия фитокомплекса; нахождение метода инкапсулирования подобранного комплекса растительных БАВ, его пролонгированность и локальность действия, наличие искомого терапевтического эффекта.

Вместе с тем, с нашей точки зрения, недостаточно освещены вопросы биотехнологии с точки зрения экспериментальной оценки биологической активности и безопасности разрабатываемого средства. Об актуальности поиска универсальной биологической модели для оценки токсичности, изучения фармакологической активности различных соединений свидетельствует значительное число публикаций. Однако широкой апробации, тем более в биотехнологическом процессе конструирования препаратов, эти скрининговые исследования не получили. Построение модели экологических опасностей с помощью простой биомодели также представляет научный интерес. Применение биомоделирования в технологических исследованиях привело авторов к созданию методического подхода к поэтапной разработке и конструированию высокоэффективного косметического средства лечебно-профилактической направленности.

В процессе конструирования косметических средств лечебно-профилактического назначения авторами получено практическое (экспериментальное) подтверждение синергетического эффекта лекарственных трав в комплексе, подобранном для конкретного терапевтического воздействия.

Определение оптимального объема исследований при доклиническом изучении безопасности препаратов растительного происхождения проводится только для медицинских средств, в том числе наружного применения. Однако авторами проведены экспериментальные исследования степени биологической активности и безопасности для многокомпонентных фитокомплексов, входящих в качестве биологически активного компонента в косметическое средство. При этом каждое из входящих в фитокомплекс лекарственное растение было изучено отдельно в свете искомого терапевтического эффекта в интактной, а затем в липосомальной форме.

В данной работе усовершенствованы научно - методические подходы к конструированию липосомальных лечебно-профилактических косметических средств для ухода за проблемной кожей.

Разработан состав липосомального лечебно - профилактического средства с заданным спектром действия. При этом на основе биомоделирования фармацевтической активности лекарственных трав с использованием в качестве биомоделей культур клеток Paramecium caudatum и Staphylococcus aureus подобрано оптимальное количественное соотношение входящих в фитокомплекс лекарственных трав;

Для производства липосом обоснована целесообразность применения метода обращения фаз. В качестве сырья предложено использовать смесь растительных и животных фосфолипидов в соотношении 9:1, в отличие от ранее применяемого 7:3. Доказано, что при данном соотношении липосомальная эмульсия не обладает токсическим эффектом по отношению к организму, качество липосом не ухудшается, а экономическая рентабельность производства увеличивается на 3-5%.

Разработаны основные технологические стадии получения липосомального препарата в производственных условиях, оптимизирован процесс получения экстрактов БАВ лекарственных растений. Данная разработка увеличивает экономическую рентабельность производства на 9 — 11%.

Охарактеризованные этапы технологического процесса производства липосомальных фитопрепаратов свидетельствуют об их доступности, простоте эксплуатации, экологичности и экономической рентабельности. Определены методы стандартизации липосомального лечебно-косметического средства. С помощью органолептических методов определены такие показатели, как внешний вид, цвет и запах. Установлено, что разработанный оригинальный липосомальный крем «Альпика» для проблемной кожи по качеству, микробиологической чистоте, содержанию тяжелых металлов соответствуют требованиям СанПиН 1.2.681-97 и ГОСТ 26927-86. Доказано отсутствие его кожно-раздражающего и аллергизирующего действия. Получены данные о регрессе папуло-пустулезных высыпаний, уменьшении эритемы и отека в процессе применения липосомального крема у лиц, страдающих проявлениями воспалительных заболеваний кожи.

Доказано, что противовоспалительное и ранозаживляющее действие липосомального крема «Альпика» значительно эффективнее, чем у крема без липосом с таким же качественным и количественным составом трав.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Носенко, Мария Александровна, Ставрополь

1. Азарков, А.Ф., Стихии, В.А., Черкасов, O.A. Диосгенин из Allium nutans и Allium cernuum // Химия природных соединений. 1983. - №5. — С. 1315.

2. Алавердиева, С. Т. Антиоксидантный баланс в косметических средствах // Косметика и медицина. 1999. - № 1. - С. 11 -15.

3. Антонов, В.Ф., Вознесенский С.А. Биологические мембраны. Структура, свойства. М.: Гуманит. Изд. Центр ВЛАДОС, 1999. - С. 8-31.

4. Апоян, К.А., Мелконян, М.С. К методике изучения противовоспалительных средств местного действия. Экспериментальная и клиническая медицина. М. 1986. С. 432-456.

5. Аравийская, Е.Р., Красносельских, Т.В., Соколовский. Е.В. Акне. Методы лечения. М.: Медицина, 1999. - С. 68-110.

6. Аркт, Я. Основа косметических средств как система доставки активных ингредиентов // Косметика и медицина. 2001. - № 6. - С. 23-29.

7. Балабьян, В.Ю. Разработка системы скрининга лекарственных веществ антиоксидантного и мембраностимулирующего действия: Автореф. дис. . канд. фармац. наук. М., 1998. - 22 с.

8. Барсуков, Л.И. Липосомы // Биология. 1998. - 34с.

9. Ю.Бергельсон, Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука, 1982. 80с.

10. Богдаш, A.C. Популяция одноклеточных организмов как модель интегральной оценки воздействия вредных факторов // Тез. докл.всесоюзн. конгр. «Реконструктивно-восстановительные и новые методы лечения в клинике». М., 1989. - С. 12-13.

11. Бурковский, И.В. Основы экологии свободноживущих инфузорий: Автореф. дис. . д-ра биол. наук. М.,1986. - 43 с.

12. Василенко, И.А., Краснопольский, Ю.М., Степанов, А.Е., Швец, В.И. Проблемы и перспективы производства фосфолипидов // Химико-формацевтический журнал М., 1998.- 32с.

13. Н.Васильева И.С., Пасешниченко В.А., Гусева А.Р. Стероидные сапонины из корневищ диоскореи кавказской ОюБсогеа саисаБюа // Прикладная биохимия и микробиология. 1984.- №3. - С. 130-136.

14. Владимиров, Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252с.

15. Волкова, О.В., Елецкий, Ю.К. Основы гистологии и гистологической техники. М.: Медицина, 1982.- 304с.

16. Геннис, Р. Биомембраны. Молекулярная структура и функции / пер. с англ. М.: Мир, 1997. 622с.

17. Горбунова, Т.А. Лечение растениями: Рецептурный справочник. М.: Изд-во АиФ, 1994.-303с.

18. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. Вып.2 / МЗ СССР. 11-е изд., доп. -М.: Медицина, 1989. - 400с.

19. Гусакова, С.Д., Степаненко, Г.А., Асимбекова, Д.Т. Липиды некоторых лекарственных растений // Растительные ресурсы. 1983. Т.19, вып.4.- С. 444-445.

20. Ефременко, В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине). Ставрополь: Б.и., 1999. - 236 с.

21. Закревский, В.И. Изучение протективных свойств антигенсодержащих липосом различного липидного состава при чуме // Вестн. АМН СССР. -1990.-№ 8.-С. 41-44.

22. Использование в клинической медицине липосомальных форм лекарственных препаратов / В.Ф. Антонов, Ю.А. Князев, Ю.М. Машковский и др. // Совр. медицина. — 1983. № 5. - С. 59-63.

23. Калантаевская, К.А. Морфология и физиология кожи человека. К.: Здоровья, 1972. - 267с.

24. Капитанов А.Б., Изменение структурно-функциональных свойств плазматических мембран клеток микоплазмы с возрастом культуры. Автореф. Дисс. Д-ра мед.наук. Киев: Институт геронтологии АМН СССР, 1991.

25. Коренман, И.М. Экстракция органических веществ: Учеб. Пособие. Горький: Изд-во Горьк. Ун-та, 1973. С.20-34.

26. Королев. Ю.Ф. Себорея и угри. Минск: Беларусь, 1972. - 144с.

27. Корсун, В.Ф., Ситкевич, А.Е., Ефимов, В.В. Лечение кожных болезней препаратами растительного происхождения: Справочник. Минск: Беларусь. 1995.-383с.

28. Красильников А.П. Справочник по антисептике. Минск: Высшая школа, 1995. С.109-285.

29. Краснопольский Ю.М., Степанов А.Е., Швец В.И. Некоторые аспекты технологии получения липосомальных форм лекарственных препаратов // Химико-фармацевтический журнал. 1999. №10,- С.20-23.

30. Крейтис, М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975. - С. 258-286.

31. Кубанова, A.A., Федорова, В.Н., Богатырева, И.И. Новый подход к клинической оценке парфюмерно-косметической продукции // «Биологически-активные вещества и новые продукты в косметике», Тез. докл. междунар. конф. М., 1996. - С. 62.

32. Кудрин, А.Н., Ананин, В.В., Баланьян, В.Ю. Система экспресс-методов интегральной оценки биологической активности индивидуальных и комплексных препаратов на биологических объектах // Рос. хим. журн. -1997.-Т. 41.- С. 25.

33. Кудрин, А.Н., Каторгина, Н.Ф. Об адренергическом механизме координированных движений ресничек парамеций // Актуальные проблемы фармакологии и фармации. М., 1971. - С. 133-141.

34. Кузнецова, М.А., Рыбарчук, И.З. Фармакогнозия. М.: Медицина, 1993. -445с.

35. Кузякова, Л.М. Липосомы в медикаментозном преодолении клеточных и анатомических барьеров // Фармация на современном этапе проблемы и достижения: Сб. науч. трудов / НИИФ. - 2000. - Т. 39. - С. 70-77.

36. Кузякова, Л.М. Медикаментозное преодоление анатомических и клеточных барьеров с помощью липосом: Монография / Л.М. Кузякова, В.И. Ефременко. Ставрополь: Б.и., 2000. - 169 с.

37. Кузякова, Л.М. Методологические подходы и разработка технологии липосомальных лекарственных и лечебно-профилактических препаратов: Дис. . д-ра фарм. наук. Пятигорск: Б.и., 2000. - 326 с.

38. Кучеренко, Н.Е., Васильев, А.Н. Липиды. Киев: Вища шк. Головное изд-во, 1985.-247 с.

39. Ленцнер, A.A., Ленцнер, Х.П. Актуальные проблемы микроэкологии человека // Аутофлора человека в норме и патологии и ее коррекция. -Горький: ГМИ им. С.М. Кирова, 1998.- 115с.

40. Липосомы в биологических системах / Под ред. Г. Грегориадиса, А. Аллисона, М.: Медицина, 1983. - 384 с.

41. Липосомы и перспективы их использования в прикладной иммунологии / Г.С. Власов, В.Ф. Салов, В.П. Торчилин и др. // ЖМЭИ. 1982. - N 8. - С. 12-19.

42. Майорова, A.B., Алексеев, К.В., Суслина, С.Н. Специфическая активность новых дерматологических препаратов арники. Материалы научно-практ. конф. «Актуальные вопросы косметологии». СПб, 2000.

43. Марголина, A.A., Эрнандес Е.И., Зайкина, О.Э. Новая косметология. -Издат. дом «Косметика и медицина». М. - 2000. - 204 с.

44. Марголина, A.A., Эрнандес, Е.И. Возможности косметологии в лечении акне // Косметика и медицина. 2003. №1. - С. 38-45.

45. Марголис, Л.Б., Бергельсон, Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками М.: Наука, 1986. - 240 с.

46. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Пособие по фармакотерапии в 2-х ч. Вильнюс, 1994.

47. Мельянцева, Л.П., Крейнес, В.М., Шраер, Т.И. Влияние продуктов перекисного окисления липосомальных липидов на антибактериальную активность липосом // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 37, № 11.- С. 8-10.

48. Методические рекомендации по иммобилизации в липосомы веществ различной природы, стерилизации и стабилизации липосом: Утв. МЗ РФ 06.04.2000г. / В.И. Ефременко, Т.В. Таран, Л.М. Кузякова и др. -Ставрополь: Б.и., 2000. 46 с.

49. Мичник, О.В., Степанова, Э.Ф., Гладышев, В.В. Исследование реологических свойств мазей, содержащих различные фитокомплексы // Фармация. 1993. - Т. 1. - С. 21-24.

50. Молчанов, Г.И. Интенсивная обработка лекарственного сырья. М.: Медицина, 1981.-205 с.

51. Несытова, Н.Ю., Палева, Н.С., Ильина, Е.В. Тенденции в развитии исследований в области липосом (Обзор патентной литературы) // Вестн. АМН СССР. 1990. - № 6. - С. 8-19.

52. Николаев, А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2001.- 496 с.

53. Нобл, У.К. Микробиология кожи человека: Пер. с англ.- М.: Медицина, 1986.-493с.57.0сто, Марк Дж. Липосомы // В мире науки. 1987. -№3. С.71-77.

54. Панюшин. С.К., Рудаков, И.А., Чубатова, С.А. Биологически активные добавки для комплексного использования в косметической дерматологии // Материалы IV Международного симпозиума «Биологически активные добавки к пище: XXI век». М., 2000,- 185с.

55. Пат. 2020923 РФ, МПК 5 А61К7/00. Крем для кожи лица / Вайнберг Ю.П., Каплина Э.Н. (РФ). 6 с.

56. Пат. 2040268 РФ, МПК 6 А61К35/78. Способ получения биологически-активного экстракта / Хомова Г.В., Гусакова С.Д., Глушенкова А.И. и др. (РФ).-13 с.

57. Пат. 2053763 РФ, МПК 6 А61К7/48. Биологически-активная добавка для косметических изделий / Некрасова В.Б., Курыгина В.Г., Никитина Т.В. и др. (РФ). 7 с.

58. Пат. 2141312 РФ, МПК 6 А61К7/48. Косметическое средство для ухода за кожей лица / Кузякова Л.М., Ефременко В.И., Умнов A.B. (РФ).- 6 с.

59. Пастушенков, Л.В., Лесновская, Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии. В 2-х ч. С-Пб., 1995.

60. Петрухина А.Т. «Флавоноидосодержащие растения, используемые в косметике» // Косметика и медицина, 2003.№3.- С. 46-54.

61. Полонская, Н.И. Угревая болезнь: классификация, патогенез, лечение // Косметика и медицина. 2002. №4. - С.77-81.

62. Посте, Д. Взаимодействие липидных везикул (липосом) с клетками в культуре и их использование как переносчиков лекарств и макромолекул.- M.: Медицина, 1983.-С. 107-155.

63. Приготовление липосом, содержащих биологически активные вещества: Метод, рек. / В.И. Закревский, В.И. Ефременко, В.А. Мельников и др. — Волгоград: Б.и., 1982. 23 с.

64. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под редакцией В.П.Фисенко. Москва.-2000г.-С. 18-22.

65. Саатов, Т.С., Исаев, Э.И. Бурханов, С.А. Аутологичные липосомы // Вестн. АМН СССР. 1990. - № 8. - С. 47-50.

66. Серов, В.В., Пауков, B.C. Воспаление: Руководство для врачей. М.: Медицина, 1995.

67. Сернов, J1.H., Гацура, В.В. Элементы экспериментальной фармакологии.- М.-2000г. -351с.

68. Справочник по врачебной косметике / Б.Т. Глухенький, Т.А. Багмет, Ю.А. Байко и др.; Под ред. Б.Т. Глухенького. К.: Здоровъя, 1989. - 304с.

69. Суколин, Г.И. Себорейный дерматит: новое в этиологии илечении // Русс, мед. журн. 1998. №6.- С.382-384.

70. Торчилин, В.П., Смирнов, В.Н. Направленный транспорт лекарств с помощью липосом // Укр. биохим. журн. 1984. - Т. 56, № 3. - С. 339345.

71. Умнов, А.В. Экспериментальное определение оптимальной концентрации фитолипосом в составе противоожогового геля // «Человек и лекарство», Материалы IX Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». -М., 2002.-С. 711.

72. Ципоркина, И.В. Практическая косметология для всех. Лучшие методики. СПб: Питер, 2002. - 224 с.

73. Чернух, A.M. Кожа. М.: Медицина, 1982. С. 196-229.

74. Aekermann, H.-W., Dibow, M.S. Viriuses of procariotes // V.l. Generalproperties of bacteriofages. CRC Press Boca Raton Fl. 1987. P. 151-154.

75. Alving, C.R., Richards, R.L. Liposomes / Ed M.J. Ostro. New York, 1983. -P.209.

76. Arct, J., Gronwald, M., Kasiura, K. //Magazine. 200. - Vol.14. - P. 179.

77. Arnold, J. A simple procedure for preparation of REV-liposomes // Pharmazie. 1985. - Vol. 40, № 11. - P. 808 - 809.

78. Arsic, I., Vidovic, S., Vuleta, G. Influence of lipisimes on the stability of vitamin A incorporated in polyacrylate hydrogel. Int. J. Cos.Scient.- 1999. P.-219-225.

79. Ashady R. Microspheres, Microcapsules and liposomes. Citrus Books, London, 1999, vol.1, chapter 10, pp. 279-322.

80. Bachhawat, B.K. Biresh Chandra Guha Memorial Lecture 1984. Liposome technology // Proc. Indian Nat. Sci. Acad. - 1985. - Vol.51, N 4. - P. 639-648.

81. Bangham, A.D., Horn, R.W. Negative Staining of Phospholipids and their Structured Modification by Surface Agents as Observed in the Electron Microscope //J. Mol. Biol. 1964. - Vol. 8. - P. 660-668.

82. Bangham, A.D., Standish, M.M., Watkins, J.S. Diffusion of Univa-lent Ions Across the Lamelae of Swollen Phospholipids // Ibid. 1965. - Vol.13. - P. 238-252.

83. Barsukov, L. I., Bergelson, L.D. Topological asymmetry of phospholipids in membranes //Science. 1977. - Vol. 197. - P. 224 - 230.

84. Batzri, S., Korn, E.D. Single bilayer liposomes prepared without sonication // Biochim. etbiophys. acta. 1973. - Vol.298. - P. 1015-1019.

85. Bermudez, M., Martinez, S., Mora, M. Search for a suitable liposomal formulation to encapsulate the tuberculostatics rifampicin, isoniazide and ofloxacin // J. Liposome Res. 1996.- Vol. 6, № 1. - P. 221-222.

86. Breisblatt, W., Ohki, S. Membranes // J. Membr. Biol. 1975. - Vol.23. - P. 385.

87. Buettner, G. R. Ascorbate autoxidation in the presence of iron and copper chelates // Free Radic Res Commun. 1986. - №1(6). - P. 349 - 353.

88. Cevc, G. Transferosomes, liposomes, and other lipid suspensios on the scin. Crit. Rev in: Therapeutical Drug Carrier Systems, 1996.- P.257-388.

89. Dijkstra, J., Ryan, J.L., Szoka, F.S. A procedure for the efficient incorporation of wild-type lipopolysaccharide into iposomes for use in immunological studies // J. Immunol. Meth. 1988. - Vol.114, №1-2. - P. 197-205.

90. Enoch, H. G., Fleming, P.G., Strittmatter, P. Cytochrome b5 and cyto-chrome bs reductase phospholipid vesicles. Intervesicles protein transfer and orientation factors in protein interactions //J. Biol. 'Chem. - 1977. - Vol.252. -P. 5656 - 5600.

91. Erismann, F. // Ztschr. f. Biol. 1875. - №11. - P. 1.

92. Eytan, G.'D. Use of liposomes for reconstitution of biological functions // Biochim. et biophys. acta. 1982. - Vol. 694. - P. 185 - 202.

93. Expression of human {alpha} 2-adrenergic receptors in adipose tissue of beta3-adrenergic receptor deficient mice promotes diet-induced obesity / P. Valet, D. Grujic, J. Wade et al. // J. Biol Chem. 2000. - in press.

94. Fountain, M.W., Dees, C., Weete, G.D. Interactions multilamellar phospholipid vesicles with bovine lymphocytes: effects of a tocopherol on lymphocyte blastogenesis // Mol. Immunol. - 1982. -Vol.19, №11. - P. 14911498.

95. Gains, N., Hauser, H. Characterisation of small unilamellar vesicles produced in imsonicated phosphatidic acid and phosphatidylcho-lin-phosphatidic acid dispersions by pH adjustment // Biochim. Et biophys. acta. -1983.-Vol. 731.-P. 31 -39.

96. Gregoriadis, G., Putnamn, D., Louis, L. Comparative effect and fate of non-entrapped and liposome-entrapped neuraminidase injected into rats // Biochem. J. 1974. - Vol. 140. - P. 323-330.

97. Hauser, C. Biochim. Biophis. Res. Commun. 1971. - 45. - P. 1049.

98. Hock, D, Stohr, M. // Histochemistry. 1977. - Vol.52. - P. 97 - 103.

99. Honeywell-Nguyen, P., De Graaff, A. Chemical stability of liposome components. Biochem. Biophys. Acta 2002; p. 130-140.

100. Igarashi, O., Yonekawa, Y., Fujiyama Fujihara., Y. Synergistic action of vitamin E and vitamin C in vivo using a new mutant of Wis-tar - strain rats, ODS, unable to synthesize vitamin C // J Nutr Sei Vitaminol (Tokyo). - 1991. - 37(4). - P. 359 - 369.

101. Imbert, D., Wickett, R. Topical delivery with liposomes. Cosmet. Toilet. -1998.- P. 32-34.

102. Investigation of the inside-outside distribution, intermembrane exchange and transbilayer movement of sonicated vesicles by shift reagent NMR / L.I. Barsukov, A.V. Victorov, I.A. Vasilenko et al. // Biochim. et biophys. Acta. -1980.-598.-P. 153 168.

103. Jagawa, Y., Racher, E. Partial resolution of the enzymes catalyzing oxidative phosphorylation // J. Biol. Chem. 1971. - Vol.246. - P. 5477 - 5487.

104. Jendrasiak, G.L., Jagawa, Y., Racher, E. The hydration of phospholipids // Biochem. et Biophis. acta. 1974. - Vol.337 - P. 79-91.

105. Jizomoto, H., Kanaoka, E., Hirano, K. Encapsulation of drugs bylyiphilized, empty dipalmitoylphosphatidylcholine liposomes // Chem. and Pharm. Bull. 1989. - Vol. 37, № 7. p. 1895-1898.

106. Kantor, H.L., Prestegard, J.H. Fusion of phosphatidylcholine bilayer vesicles. Role of free fatty acids // Biochemistry. 1978. - Vol. 17. - P. 3592 -3597.

107. Kim, S., Marlin, G. Preparation of cell- size unilamellar liposomes with high captured volume and defined size distribution // Biochim. et biophys acta. 1981.-Vol. 646.-P. 1 -9.

108. Kudrin, A.V. Research of selenium containing substances that regulated the rhytm of the heart // lakuzaigaku. 1993. - Vol. 53, №9. - P. 14-19.

109. Krinsky, N.I., Deneke, S.M. Interaction of oxygen and oxyradi-cals with carotenoids // J. Natl Cancer Inst. 1982. - 69(1). - P. 205 - 210.

110. Lasic, D.D. Liposomes from physics to application // Pharmacol. Ther. -1999.- 14(2).- P. 18-24.

111. Love, W.G., Amos, N., Williams, B.D. High performance liquid chromatographic analysis of liposome stability // J. Microencapsul. 1990. -Vol. 7, № l.-P. 105-112.

112. Magee, W.E., Goff, C.W., Schoknecht J. et al // J. Cell Biol. 1994. -Vol. 63. - P. 492 - 504.

113. Mantle, D., Gok M.A., Lennard T.W. Adverse and beneficial effects of plant extracts on skin and skin disorders // Eur. Journal Derrmatology, 2002.-№6.- P.- 57-60.

114. Mauriege, P. Regional and gender variations in adipose tissue lipolysis in response to weight loss // J. Lipid Res. 1999. - 40(9). - P. 1559-1571.

115. Medda, S. Glycoside-bearing liposomal delivery systems againts macrophage-associated disorders involving Mycobacterium leprae and Mycobacterium tuberculosis // Indian J. Biochem. and Biophys. 1995. - Vol. 32, №3.-P. 147-151.

116. Miller, A., Herbarth, O., Wiessner, A.// Zentralb. Hyg. und Umweltmed.- 1995.-№4 c.340).

117. Mowri, H.O., Nojima, S., Inoue, R. Effect of lipid composition of liposomes on their sensitivity to peroxidation // J. Biochem. 1984. -Vol. 95, №2.-P. 551-558.

118. Müller, R., Hildebrand, G. Pharmazeutische Technologie Moderne Arzneiformen, WVG Stuttgart, 1999.№2.- P.38-48.

119. Lee, K.-S. Advances in Polymer Science Drug Delivery Systems, vol. Springer Berlin, 2002. P.-45-118.

120. Nakagawa, X., Nojima, S., Inoue, R. Transfer of steroids and a tocopheol between liposomal membranes // J. Biochem. 1980. - Vol. 87, №2. - P. 497-502.

121. Papahadjopoulos, D. Membrane fusion. N. Y.: Elsevier: North-Holland Biomedical Press, 1978. - 765 p.

122. Papahadjopoulos, D., Poste, G., Schaeffer, B.E. // Biochim. Biophys. acta. 1973. - Vol.323. - P. 23-4 2.

123. Papahadjopoulos D., Poste G., Schaeffer B.E. et al. // J. Bio-chim. Biophys. acta. 1974. - Vol. 352. - P. 10.

124. Poste, G., Papahadjopoulos D., In: Methods in Cell Biology // Ed. D. M. Prescott. Academic Press, New York. 1976. - Vol. 14. - P. 23 - 32.

125. Poste, G., Nicolson, G.L. In Membrane Fusion // Cell Surface Reviews. North Holland, Amsterdam. - 1978. - Vol. 5. - P. 305-365.

126. Raschke, T., Huschka, C., Schmalfuß, W. at al. Kolloidale Trägersysteme fur die dermale Applikation, Kosmetische Medizin, I, P.- 3441,2002.

127. Rosignoli, C., Nicolas, J.C., Jormad, F., Michel, S. Involvement of SREBP pathway in the mode of action of androgens in sebaceous glands in vivo. Exp. Dermatol 2003.- P.48-59.

128. Sada, E., Terashima, M. Entrapment of an ion-dependent enzyme into reverse-phase evaporation vesicles//Biotechnol. and Bioeng. 1988. - Vol. 32, № 6. - P. 826-830.

129. Senda, M.L, Takeda, J., Abe, S., Nakamura, T. Plant and Cell Physiol. -1999.-Vol. 20.-P. 1441.

130. Shaw, J.C. Acne effect of hormones on pathogenesis and management // Clinical Dermatology, 2002. №2.- P.23-30.

131. Schreier, H., Boustra, J. Liposomes and niosomes as topical drag carriers. J. Control Rel. 1999. -P. 1-15.

132. Spiclin, P., Gasperlin, M. Ascorbil palmitat stability in different colloidal carrier systems. Proceedings from 4th World Meeting ADRIFTELF/APG/APV, Florence, 2002.- p.441 -442.

133. Spruit, D., Malten, K.E. Dermatológica (Basel). 1969. - 5. - P. 418.

134. Storm, G., Crommelin, D. Liposomes: Quo vadis? PSTT. 1998.-P.19-31.

135. Studies on membrane fusion. I. Interaction of pure phospholipid membranes and the effect of myristic acid, lysolecithin, protein and DMSO / D. Papahadjopoulos, S. Hui, J.W. Vail et al. // Bio-chem. Et biophys. acta. -1976.-Vol. 448.-P. 245 -264.

136. Studies on membrane fusion. II. Introduction of fusion in pure phospholipid membranes by calcium ions and other divalent metals / D. Papahadjopoulos, W.J. Vail, W.A. Pangborn et al. // Biochim. et biophys. acta. 1976. - Vol. 448. - P. 265 - 283.

137. Stüttgen G. In: Die normale und pathologische Physiologie der Haut. Jena, 1965.

138. Sweeney T.M., Downing D.T. // J. Invest. Derm. 1997. - 55. - P. 2135.

139. Tanaka, K., Takeda, T., Fujii, K. // Chem. Pharm. Bull. 1998.- 39.-P.256-260.

140. The analysis to the biomonitoring// Ricci Nicola, Banchetti Rosalba// J. Eucaryot Microbiology. 1996. №1.- c.24).

141. Tholon, L., Branka, J.-E., Wajsman, J. Encapsulation technologies applied to retinoids. Proceedings from the 21st IFSCC congress, Berlin, 2000: 497-506.