Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка промышленных технологий производства сорбентов и биологически активных препаратов из гидробионтов для ветеринарии и других отраслей народного хозяйства

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка промышленных технологий производства сорбентов и биологически активных препаратов из гидробионтов для ветеринарии и других отраслей народного хозяйства"

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук ФГУП «Щелковский биокомбинат»

Албулов Алексей Иванович

Разработка промышленных технологий производства сорбентов и биологически активных препаратов из гидробионтов для ветеринарии и других отраслей народного хозяйства

03.00.23 - биотехнология

Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук

Щелково - 2004 г.

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук и в ФГУП «Щелковский биокомбинат»

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

доктор технических наук, профессор

Аркадий Алексеевич Денисов

Александр Иванович Мелентьев

Анна Юрьевна Кривова

Ведущая организация

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко РАСХН

Защита состоится 03 июня 2004 года в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности РАСХН.

Адрес: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Биокомбинат, ВНИТИБП.

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности.

Диссертация в виде научного доклада разослана <Ж> М 2004г.

Ученый секретарь диссертационного совета, ^^/уу

кандидат биологических наук (^/¿у/? Ю.Д. Фролов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы. Во второй половине XX столетия в нашей стране активизировались научные изыскания по получению новых иммунобиологических препаратов, разрабатывались качественно новые вакцины, сыворотки, диагностические и лечебные препараты. Быстро увеличивалось поголовье продуктивных животных, происходила концентрация их в сельско-хозяйственных комплексах: Численность крупного рогатого скота в 1965-75 гг. выросла на 25 млн. голов. Особенно актуально стояла проблема нераспространения таких высококонтагиозных инфекционных болезней как ящур, бруцеллез, лептоспироз, пастереллез, чума и многие другие. Так, эпизоотия ящура в 1964-65 гг. принесла экономический ущерб в сумме, исчисляемой сотнями миллионов рублей. В 1973 г. государство вынуждено было закупить во Франции технологию и оборудование по изготовлению надежных противоящурных препаратов в необходимом объеме. Одновременно с пуском производства вакцин возникла актуальная задача удешевить импортную технологию путем использования отечественных ингредиентов, таких как гидроокись алюминия, компоненты питательных сред, ферменты, инактиванты и др.

Проблемы повышения качества сырья и компонентов, используемых в технологиях изготовления биопрепаратов, а также привлечения нетрадиционных видов сырья решались научными коллективами ВНИТИБП, ВГНКИ, ВНИЯИ и биопредприятиями отрасли на протяжении многих лет. Значительный вклад в решение указанных проблем внесли такие ученые и организаторы производства как И.В. Звягин (1976), А.А. Бойко- (1974, 1979), АЛ. Простяков (1972, 1977), И .А. Хорьков (1978), АЛ. Самуйленко (1976, 1984), Н.И. Передереев (1975,1980) и др.

В получении качественных высокоактивных вакцин, несомненно, очень высока роль адсорбентов-абсорбентов, так как эти компоненты пролонгируют срок годности вакцин, стимулируют иммунный ответ организма, депонируют антигены, обеспечиивая высокий уровень антител в крови. Наиболее приемлемым по этим качествам в вакцинологии оказался гель гидроокиси алюминия (ГОА). Вопросыповышения качества этого сорбента и создания новых, более совершенных технологий его получения, являются актуальными при создании новых и усовершенствовании существующих адсорбат-вакцин.

Известно применение гидрогеля алюминия как энтеросорбента в медицине. Получение сорбционно-активного и очищенного геля ГОА открывает возможности его применения для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных. Представляет интерес использование для этих целей полисахарида хитозана, полученного из панциря ракообразных. Хитозан обладает сорбционным эффектом, пленкообразующими, противовоспалительными свойствами и био-деградируемостью, что расширяет области его применения в народном хозяйстве и делает актуальным изучение вопросов его получения и использования.

В технологии получения противовирусных прививочных препаратов важную роль выполняет протеолитический ферментный препарат трипсин, используемый для дезинтеграции клеток, в которых культивируется вирус. Для вакцин ветеринарного назначения качественный трипсин приобретался за рубежом, поэтому крайне важно было разработать и наладить выпуск отечественного препарата, способного заменить импортный. Технология получения трипсина из поджелудочной железы жвачных и свиней была разработана в Латвии, где и осуществлялось его производство. Однако в дальнейшем резко сократилась сырьевая база для получения трипсина; и его выпуск прекратился. Поэтому внимание исследователей было обращено на фермент коллагеназу, выделенный дальневосточными исследователями из гепатопанкреаса крабов (Г.Б. Еляков и др., 1986 г., А.А. Артюков и др., 1989 г.).,Полученный ими комплекс протеолитических энзимов, наряду с коллагенолитическим; проявлял трипсиноподобное действие на субстрат, в связи с чем возник повышенный интерес к нему разработчиков и производителей вакцин, лекарственных средств, пищевых гидролизатов.и других продуктов.

Достаточно эффективным является применение в качестве кормовых добавок отходов рыбного промысла, ракообразных, моллюсков и получаемых из них гидролизатов, бульонов, экстрактов (Т.М. Сафронова, 1993). В частности, представляет интерес изучение влияния на рост и развитие молодняка животных препаратов из мидий, выпускаемых в виде кислотных и ферментативных гидролизатов.

1.2. Цель и задачи исследований. Цель исследований - разработка и внедрение в ветеринарную практику и другие отрасли народного хозяйства высакоэффективных сороентов различного происхождения, а также фер-

ментов и биологически активных веществ, получаемых из гидробионтов, позволяющих повысить качество, снизить себестоимость биопрепаратов различного назначения и расширить область их применения.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

получить новые алюмогели-адсорбенты для противовирусных и проти-вобактериальных вакцин, а также организовать их промышленное изготовление;

разработать физико-химические и биологические тесты для определения адсорбционной активности гелей ГОА по отношению к вирусным и бактерийным антигенам;

изучить условия взаимодействия ящурных антигенов с гидрогелями ГОА, полученными по различным оригинальным методикам, оптимизировать технологию приготовления противоящурных вакцин;

получить высокодисперсный сорбент с повышенным содержанием сухих веществ, обеспечивающий полную сорбцию антигенов вируса ящура в одну фазу культивирования;

разработать и внедрить в производство технические средства для ускоренной очистки гидроокиси алюминия от примесей с целью стандартизации и удешевления готового продукта;

выяснить эффективность использования высокоочищенного геля ГОА при лечении желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных;

разработать методы получения водорастворимых форм хитозана и промышленные технологии их производства для применения в различных областях народного хозяйства;

определить эффективность хитозана и его производных при необходимости выведения из организма животных радионуклидов, тяжелых металлов и токсинов;

установить режимы применения гелевых форм хитозана для энтеросорб-ции при желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят с симптомо-комплексом диареи;

провести испытания хитозана в качестве флокулянта, компонента фитопрепаратов, а также источника биологически активных добавок к пище и лечебно-косметическим композициям;

разработать способы получения коллагеназы с использованием растворов хитозана вместо органических растворителей для очистки фермента от балластных белков;

исследовать свойства коллагеназы из гепатопанкреаса крабов и разработать рекомендации по ее применению в производстве противовирусных вакцин и в пищевой промышленности;

изучить влияние кормовых добавок из морских моллюсков на рост и развитие молодняка сельскохозяйственных животных. Разработать промышленные технологии получения мидийных препаратов и рекомендации по их применению.

1.3. Научная новизна. Впервые разработаны оригинальные способы получения и промышленные технологии изготовления алюмогидрогелей для сорбции антигенов вируса ящура. Применение новых отечественных препаратов-адсорбентов обеспечивает сохранение биологических свойств проти-воящурных вакцин в течение 12 месяцев с момента изготовления. Способы получения ГОА защищены 3 авторскими свидетельствами на изобретения (ах. № 566419 с приор, от 19.03.75г., ах. № 1284025 с приор, от 29.01.84г., ах. № 1341820 с приор, от 28.11.85г.).Разработка новых методов контроля качества алюмогелей позволила комплексно решить проблему взаимодействия сорбентов с вакцинными антигенами и оптимизировать процессы приготовления противоящурных вакцин. Новизна исследований по разработке способов определения адсорбционной активности подтверждена двумя авторскими свидетельствами на изобретения (ах. № 747890 с приор, от 18.01.79г., ах. № 1284026 с приор, от 24.04.84г.).

Предложенные варианты сорбентов и критерии их оценки позволили разработать способ получения противоящурных вакцин (ах. №1284025 с приор, от 01.06.82г.). При этом использованы новые подходы к культивированию вируса ящура, позволившие повысить степень накопления специфических антигенов и исключить стадию концентрирования.

На основании экспериментальных исследований по получению производных хитозана и разработке промышленных технологий их изготовления получены новые данные об этом полисахариде, научно обоснована целесообразность использования его сорбционно-пролонгирующих, противовоспалительных, антацидных и других свойств для терапии и профилактики нарушений липидного обмена, а также некоторых патологических состояний желудочно-кишечного тракта и кожных покровов животных и челове-

ка. Новизна исследований в этих направлениях защищена тремя патентами РФ (№ 2144040 от 07.04.99 г., №2204402 от14.06.01 г., №2215749 от 14.06.01 г.).

Разработан новый способ удаления балластных белков с помощью хито-зана в технологиях получения ферментов из гепатопанкреаса крабов и поджелудочной железы жвачных, который позволил получать протеазы высокого качества в промышленных объемах без применения органических растворителей и солей аммония. Способы получения коллагеназы и трипсина с использованием хитозанового флокулянта защищены патентом РФ (№ 2112036 от 09.10.92 г.), подано 2 заявки на изобретения.

Впервые коллагеназа из печени крабов использована в нашей стране для получения монослоя культур клеток при промышленном производстве противовирусных вакцин для животных и птиц, что позволило отказаться от закупок ферментного препарата трипсина за рубежом.

Разработаны условия применения коллагеназы для ферментной модификации низкосортного мясного сырья с целью повышения его качества и наиболее полного использования коллагенсодержащих белков кожи, сухожилий и хрящей, что позволяет увеличить выход мясной продукции (патент РФ № 2147204 с приор, от 16.06.99г.).

Научно обоснованы схемы применения мидийных препаратов при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы, повышающих скорость роста и уровень естественной резистентности.

1.4. Практическая значимость. Разработан и внедрен в производство противоящурных вакцин новый адъювант-сорбент гель ГОА (ТУ 10-09-9590), что позволило отказаться от закупок этого препарата за рубежом и увеличить объемы изготавливаемых вакцин. Согласно «Временной инструкции по изготовлению трехвалентной противоящурной вакцины из вируса типов АОС, культивируемого на эксплантатах эпителия крупного рогатого скота» (1975), время изготовления вакцины сокращено в 2 раза при проведении сорбции на новом алюмогеле в одну фазу, что позволило увеличить выпуск прививочного препарата и снизить его себестоимость. За 28 лет выпущено и использовано в ветеринарной практике более 900 млн. доз противоящурных вакцин. Для сорбции протективных антигенов приготовлено свыше 1000 тонн высокодисперсного геля ГОА.

Создание новых технологий получения хитозана, мидийных гидролиза-тов и экстрактов, а также организация их промышленного выпуска дали возможность применить:

в ветеринарии - для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных (ТУ9337-008-111734126-01);

в фитотерапии различных заболеваний человека - для пролонгирования и усиления действия экстрактов лекарственных растений (per. удост. Минздрава РФ №00337б.Р.643.10.2001);

в пищевой промышленности — «Хитозан низкомолекулярный пищевой» (сан.-эпидем. закл. Минздрава № 77.99.02.928.Д. 000812.02.04 от 10.02.2004г. совместно с Центром «Биоинженерия» РАН), для получения биологически активных добавок к пище (№001963.Р.О9. 2000; №003375.Р.643.10.2001 совместно с ВНИРО);

в косметике - для получения биологически активныхкомпонентов кремов, бальзамов, гелей, шампуней (сан.-эпид. закл. Госсанэпид. Службы РФ № 77.01.12.923Л.02262.02.3 от 05.02.03; №77.01.12.928.П. 12889.05.2 от 07.05.02.; №77.01.12.928.П. 12891.05.2 от 07.05.02).

Организован промышленный выпуск коллагеназы по экологически чистой оригинальной технологии с целью:

- получения культур клеток при производстве противовирусных вакцин («Временное наставление по применению препарата коллагеназа из гепато-панкреаса крабов для получения культур клеток», утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 25.04.95).

использования в качестве пищевой добавки (гигиен. закл. Минздрава РФ №77.99.9.916.П. 16402.12.00 от 06.12.2000).

- применения в качестве сырья при производстве косметической продукции (сан. эпид. закл. Гассанэпид. Службы РФ №77.01.12.915.П.02263.02.3. от 05.02.03).

- получения пастеризованного пива марки «Хамовническое» (ТУ 9281-00411734126-00).

1.5. Апробация. Основные материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на Всесоюзных, Всероссийских и Международных научно-производственных конференциях: «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов» (Щелково, 1978, 1981, 1987, 1991, 1996, 2003), на семинаре специалистов стран СЭВ

«Разработка и использование новых адъювантов для биотехнологических целей» (Владимир, 1990), на Всероссийской конференции «Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных» (Москва, 1996), на научно - производственной конференции «100 лет Курской биофабрике и агробиологической промышленности России» (Курск,. 1996), на конференции «Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных, посвященной 100-летию открытия вируса ящура» (Владимир, 1997), на межрегиональной конференции «Обеспечение стабилизации АПК в условиях рыночных форм хозяйствования» (Воронеж, 1997), на Международных научно-практических конференциях «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике» (Москва, 1996, 1997,1998), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 70-летию В.А.Першина (Щелково, 1998), на 1 Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицинской экологии» (Орел, 1998), на научных конференциях по фитотерапии и лазеротерапии в современной медицине (Черноголовка, 1997,1999,2000,2002,2004), на У-УГ Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство». (Москва,-1998, 1999), на Международных конференциях «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» (Москва-Щелково, 1999, 2001; С-Петербург, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию ВНИТИ биологической промышленности (Щелково, 2000), на Международной научно-практической конференции «Наука и образование - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке» (Брянск, 2000), на научно-практической конференции «Фитотерапия и здоровье» (Москва, 2000), на УГ Всероссийской научно-практической конференции по квантовой терапии (Москва, 2000), на Всероссийской научно-практической конференции «Разработка и освоение нового поколения лекарственных средств для животных и их применения в ветеринарной практике» (Ставрополь, 2000), на Республиканской научно-практической конференции стоматологов (Уфа, 2000), Российских научно-практических конференциях «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными растительными ресурсами и создание функциональных продуктов» (Москва, 2001, 2003), на Всероссийской научной конференции, посвященной 70-летию ВГНКИ «Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов», (Москва, 2001), на Международных научно-технических конференциях «Пища, экология, человек» (Москва, 2001,2003), на научно-практической конференции

«Эффективность применения биологически активных добавок в различных областях медицины», (Москва, 2001), на V Международной Азиатской конференции по хитин-хитозану (Бангкок, 2002), на VIII съезде Польского хитинового общества (Краков, 2002).

Разработки по материалам диссертационной работы удостоены золотой и бронзовой медалей ВВЦ, 4 медалей «Лауреат ВВЦ» (пост. №10 от 10.07.98; №13 от 23.02.01; №36 от 15.05.02; №105 от 15.05.02), демонстрировались на II Международной выставке «Инновации 99. Технологии живых систем» (Москва, 1999), на VIII выставке «Медицина для Вас» (Москва, 2001), на Международной выставке «Биотехника» (Ганновер, 2001), на II Международной выставке «Планета и здоровье» (Москва, 2001), на выставке «Биотехнологии России» (Берлин, 2001), на Российских агропромышленных выставках «Золотая осень» (Москва, 2002,2003).

1.6. Публикации. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 173 научных статьях, в том числе в 23 авторских свидетельствах и патентах на изобретения РФ, а также освещены в научно-производственных отчетах Государственного Щелковского биокомбината за 1978-89гг., итоговых отчетах НИР и ОКР ВНИТИБП за 1990-2003гг. и в комплектах НТД на разработанные и внедренные препараты.

1.7. Основные положения диссертационной работы, выносимые-на защиту:

1. Разработка технологии получения высокоактивного минерального сорбента гидрогеля алюминия (оптимизация параметров синтеза, очистка от примесей, гидротермальная обработка продукта, механизация, автоматизация и стандартизация), применение которого улучшает качество и сохраняет иммуногенную активность противоящурных вакцин в пределах срока годности.

2. Создание промышленных технологий получения различных форм хито-зана и его производных с заданными свойствами, их сертификация и организация производства с последующим внедрением в сельское хозяйство, медицину, пищевую и косметическую промышленность.

3. Решение проблемы расширения практического применения про-теолитических ферментных препаратов коллагеназы из гепато-панкреаса крабов и трипсина из поджелудочной железы (по оригинальным методикам, удешевляющим и стандартизирующим технологический процесс) в про-

мышленных объемах для производства вакцин, пищевых добавок, напитков и мясных продуктов.

4. Научное обоснование схем использования мидийных препаратов в качестве кормовой добавки при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

1.8. Личный вклад автора заключается в постановке целей и задач исследований, теоретическом и методическом обосновании путей решения поставленных задач, непосредственном выполнении исследований, обобщении результатов, организации апробации и промышленного производства разработанных препаратов.

1.9. Объем и структура научного доклада. Доклад изложен на 59 страницах, содержит I рисунок, 14 таблиц и включает следующие разделы: «Общая характеристика работы», «Материалы и методы», «Результаты исследований», «Выводы», «Практические предложения», «Список работ, опубликованных по теме диссертационного доклада».

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа проводилась в 1978-2003 гг. во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (ВНИТИБП) и в его производственном подразделении — ЗАО «Биопрогресс», а также в ФГУП «Щелковский биокомбинат».

В качестве материала для исследований использованы существующие и разработанные нами сорбенты минерального, животного и растительного происхождения: гидрогели алюминия, хитин - хитозан и его производные, а также фитосорбенты на основе отходов деревопереработки. Биоактивными компонентами из гидробионтов служили коллагенолитические протеиназы из гепато-панкреаса камчатского краба (коллагеназа), гидролизаты и экстракты из мидий и других моллюсков.

Для оценки качества препаратов, применялись общепринятые физико -химические методы исследований: определение сухого остатка при 105°С, рН, содержание неорганических примесей, аминного азота, белка, седиментация и вязкость гелевых растворов. Адсорбционная активность гидроокиси алюминия определялась с помощью белка казеина, красителя конго-рот и по сорбции вируса ящура в РСК, емкость хитозанов и фитосорбов контролировали по адсорбции ионов меди (З.А. Агапова, 1970). Степень деацети-

лирования (СД) и степень замещенния (СЗ) хитозана определяли кондукто-метрическим титрованием, молекулярную массу устанавливали по степени вязкости растворов хитозана с помощью вискозиметра Уббелоде. Степень токсичности хитозана определяли на мышах по общепринятой методике с обработкой результатов по L.Miller, M.Tainter (1944).

Динамику поступления хитозана в различные ткани при введении его мышам per os и его выведение из организма изучали с помощью 3Н - хитозана. В образцах тканей и крови, полученных от животных, определяли радиоактивность с помощью счетчика SL — 40 (Ю.И. Митрохин и др., 1987).

Содержание форменных элементов крови определяли по стандартным методикам (И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов и др., 1985).

Коллагенолитическую активность ферментов из печени крабов выявляли по методу Мандла, протеолитическую активность - по белку казеину (Шоу -Петиколас, 1976).

Терапевтическая и профилактическая активность гелевого хитозана при желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят оценивалась в производственных условиях в хозяйствах Курской, Московской, Брянской и Тульской областей.

Препараты серии фитохитодезов испытывались на лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Разработка и конструирование новых сорбентов, ферментов, гидролиза-тов и других биологически активных веществ проводили на основе принципов доступности, целесообразности и перспективности.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1.Разработка способов получения высокоактивных сорбентов из минерального сырья для использования в биотехнологии и ветеринарной практике.

3.1.1.Разработка способов получения геля гидроокиси алюминия для адсорбат - вакцин. Большой раздел вакцинологии тесно связан с вопросами сорбции культивируемых антигенов на адсорбентах-носителях. Введение специально подобранных минеральных депонентов в культуральные вакцинные препараты позволяет предохранять антигены в их составе от разрушения в течение более года и способствует медленному поступлению антигена в организм после иммунизации животных (принцип «депо»). Другим важным фактором, связанным с использованием адсорбат-вакцин, является создание адъювантного эффекта, повышающего защитные реакции

организма. В качестве адсорбентов-адъювантов бактериальных и вирусных антигенов испытаны такие вещества, как квасцы, бентонит, фосфат и хлорид кальция, фосфат алюминия и другие.

Немецкие ученые К. Вильштеттер (1923) и С. Шмидт (1938) обратили внимание на высокий адсорбционный эффект гидроокиси алюминия, получаемой воздействием щелочных агентов на алюминиевые квасцы. Эти химические соединения, обладая свойствами амфотерного основания, достаточно толерантно воспринимаются живыми организмами, не проявляя высокой токсичности и аллергенности. Такие качества определили их как перспективный депонент для жидких вакцинных препаратов. К 70-м годам прошлого столетия практически все адсорбат-вакцины как медицинского, так и ветеринарного назначения, выпускались с использованием гидроокиси алюминия.

В связи с высокой значимостью адсорбента для сохранности и эффективности вакцин вопросы повышения качества ГОА постоянно находились в сфере внимания ученых-иммунологов, занимающихся разработкой и конструированием адсорбат-вакцин. Особенно большой вклад в развитие этого направления внесли отечественные исследователи А.А. Воробьев (1969), К.В. Мачульская (1970), Е.Е. Никитин и др. (1973).

С 1973 года ученые ВНИТИ биологической промышленности решали проблему улучшения качества отечественного препарата геля гидроокиси алюминия. Острота вопроса усугублялась в связи с закупкой во Франции технологии производства культуральной противоящурной вакцины вместе с комплексом новейшего оборудования для создания средств по эффективной борьбе с постоянной угрозой эпизоотии ящура, приносивших колоссальный экономический ущерб. При этом предусматривалось использование отечественного геля ГОА, так как закупка этого компонента за рубежом оказалась очень дорогостоящей. С этой целью был испытан «Гидрат окиси алюминия», выпуск которого осуществлялся на Ставропольской биофабрике и Алма-Атинском биокомбинате. При испытании отечественного ГОА в составе опытных серий культуральных вакцин ящура было установлено, что полученные препараты оказались нестабильными при хранении и теряли свою иммуногенность.

Как видно из таблицы 1, через 3 месяца хранения установлена потеря иммуногенности контрольных серий вакцин за счет элюции вируса ящура. В связи с этим Главное управление биопромышленности СССР приняло

решение о разработке в короткие сроки технологии нового отечественного геля ГОА для культуральных противоящурных вакцин, обеспечивающего стабильность их свойств в течение 1 года, с последующей организацией крупномасштабного производства этого препарата.

Таблица 1

Динамика иммуногенной активности противоящурных вакцин с различ-

ными гелями ГОА в процессе хранения

Серии вакцин Серии сорбентов (ГОЛ) Иммуногениость /Рс/ на морских свинках*

После изготовления ■ Через 3 мес. Через 6 мес.

№ 130612 № 16 (Ставрополье к. биоф.) 13 3 0

№ 130616 № 03 (Алма-Атинский биокомбинат) 11 4 0

№ 130617 № 0102.13 («Рон-Пулеик», Франция ) 11 9 8

*Иммуногенность - Рс - «потентность» на морских свинках должна быть > 9,0

В 1974-76 гг. нами была разработана оригинальная методика получения высокоактивного гидрогеля ГОА, в основу которой была положена «аммиачная» технология синтеза сорбента путем взаимодействия смеси алюмо-аммонийных квасцов и сернокислого аммония с аммиаком в весовых соотношениях 5,5:2,4:1,0 и температуре синтеза 59 - 60°С.

Таблица 2

Параметры основных технологий получения «аммиачного» геля гидроокиси

алюминия

Технология изготовления гидрогеля алюминия Компоненты и их весовые соотношения Температура синтеза, °С Время синтеза, мин. Краткость промывок от неорг. примесей Режим стабилизации, °С/мии

Лмми-ач. вода 0,050,15% Водопроводная вода Демнне-ралм- ЗОВ. вода

По Вильштетте-ру, 1923 г. Квасцы аммонийные: сульфат аммония: аммиак» 7,7:2^:1,0 58-61 6-10 2 кр. 5 кр. 100/60

По' инструкции, 1971 г. Квасцы калиевые: аммиак=6,0:1,0 58-59 10-15 - 10 кр. 1 кр. -

По способу ВНИТИБП, а.с. Л4 566419; 1977 г. Квасцы аммонийные: сульфат аммония: аммиак « 5,5-2,4.1,0 59-60 4-6 3 кр. бкр. 120/45

Как видно из таблицы 2, предложенное техническое решение (способ

ВНИТИБП) отличается составом компонентов и их соотношением, параметрами синтеза, технологией очистки от неорганических примесей и режимом температурной стабилизации.

В таблице 3 приведены результаты проверки сорбции культурального вируса ящура на новом препарате после 6 и 12 месяцев хранения

Таблица 3

Адсорбционная активность гидрогеля алюминия, полученного по способу

ВНИТИБП, в динамике хранения

Срок Тип культурального вируса ящура 1

хране- А- О С

ния, Разведения геля ГОА, %

мес. 10 > 15 25 ю. 15 25 10. 15 25-

Адсорбционная активность к вирусу ящура в РСК, ед. КСА* (автоанализатор «Техннкон»)

0 190±31 90±16 0 149±37" Ю8±19 0 209±42 140±21. 0-

6 210±26 136±26 0 261±32 121±25 0 220±19 115±31 0

12 240438 129±19 0 272±41• 134±33 0 261±33 161±29 0

*КСА — комплемеитсвязывающая активность несорбированного вируса ящура в на-досадочной жидкости.

Из данных таблицы 3 видно, что адсорбционная активность алюмогеля по отношению к ящурным антигенам сохранялась в течение 12 месяцев хранения.

С новым гелем были изготовлены опытные серии противоящурных вакцин. Динамика защитных свойств этих вакцин в течение года представлена в таблице 4.

Таблица 4

Показатели иммуногенности противоящурных вакцин, изготовленных с

алюмогелем ВНИТИБП, в процессе хранения

Вид контроль- ЛУ*8 №№ Тип- Иммуногеиная активность

ных животных серий■ серий - (штамм) (ИмДи),

геля вак- вируса

ГОА цины. ящура - после и1го- через 6 ме- через 12.

товл. сяцев • месяцев •

Морские свин- 13 5102 О,« 10,0. 8,0 6.0 -

ки (Рс*) 26 5203 Аио 8,5 5,0 3.0

34> 5306 С564 14,0- - -

Крупный рога- 13 5102 0„4 63 - 23

тый скот (Рв**) 26 5203 А550 3,5 - 3,0

37 5306' Сяи 4,6 - 4,0

Рс - количество 50%-ных вакцинных доз морских свинок, содержащихся в одной прививной дозе (1,7 мл).

**Рв - то же для крупного рогатого скота.

Из данных таблицы 4 следует, что иммуногенная активность экспериментальных серий противоящурных вакцин из вируса типов А, О и С, изготовленных с использованием нового геля ГОА, также соответствовала требованиям инструкции в пределах срока годности (12 месяцев). На способ

изготовления сорбента получено авторское свидетельство на изобретение № 566419 с приор, от 15.03.75г.

Таким образом, разработанная нами новая технология получения алюмо-геля в полном объеме обеспечила соответствие препарата по физико-химическим и биологическим свойствам требованиям НТД на трехвалентную противоящурную вакцину.

В 1976 г. на Щелковском биокомбинате был осуществлен промышленный пуск производства по получению вакцин против ящура и одновременно создан цех по изготовлению нового сорбента для этого производства, где успешно была реализована в промышленных объемах предложенная нами технология. Через 2 года объем производимых вакцин увеличился до 60 млн. доз, при этом потребность в геле ГОА составила 70-75 тонн. Для обеспечения выпуска таких количеств сорбента, его стандартизации и улучшения качества были продолжены работы по усовершенствованию технологических параметров получения препарата и технической модернизации его производства.

Исследования проводились в направлении совершенствования реакции синтеза геля ГОА с уточнением количественных соотношений компонентов, температурных и временных режимов проведения процесса. Оптимизация процесса заключалась в следующем: синтез алюмосодержащих калиевых квасцов с аммиаком осуществляется при массовом соотношении (8,6-8,8): 1,0 и температуре 55-72°С в течение 0,5-3,0 мин., с использованием 23,4-23,8%-ного раствора квасцов и 9,5-25,5%-ного раствора аммиака. Новизна этих исследований защищена авторским свидетельством на изобретение № 1284025 с приор, от 24.01.84г.

Для увеличения масштабов производства и стандартизации технологии нами решались вопросы соответствующего аппаратурного обеспечения и эффективной очистки препарата от примесей. Удаление побочных продуктов синтеза геля ГОА, представляющих собой соли аммония, сульфаты, хлориды и др., обычно достигается промывкой продукта 5-10-кратными объемами обессоленной воды с последующим удалением промывной жидкости и примесей методом отстоя, фильтрации, центрифугирования или сепарирования. При промышленном производстве необходимо отделять от осадка десятки тонн промывных вод, не допуская при этом увеличения времени процесса, приводящего к ухудшению структуры сорбента. Метод отстоя с последующей декантацией надосадка с примесями, применявший-

ся ранее, оказался неэффективным из-за длительности процесса (до 10-15 суток) и необходимостью использования большого количества отстойников с мощной системой вентиляции.

Для удаления балластных солевых растворов нами использован метод сепарирования. В технологическую цепь был введен сепаратор шведской фирмы «Альфа - Лаваль», проведено изучение возможности эффективного и безопасного разделения на нем «маточного» раствора А1(ОН)3 с примесями, а также отработана привязка нового узла к общей схеме технологического процесса. Использование на этапе очистки от неорганических примесей принципа сепарирования позволило ускорить процесс и получить мелкодисперсный препарат удовлетворительного качества.

Таблица 5

Влияние способа очистки от балластных солей на качество сорбента

Ч Параметры ^чотмывкии ка-хмства ГОД Метод промывки \ Соотношение объема промывных вод и готового продукта Время промывки, час. Осеааемость через 43 час., % Адсорбционная активность

По казеину, % По конго-роту,*/.

Отстой-декантация 30:1 290,0±40,5 46,0 ±3,4 67,1±1,3 6],5±2,4

Фильтрация 20:1 15,0±3,0 33,0 ±3,0 76,8±1,5 69,1±1,9

Сепарирование 16:1 8,0±1,5 26,5 ±3,6 75,4±2,2 71,0±2,1

Из данных таблицы 5 видно, что сорбенты, очищенные методом сепарирования, по адсорбционным характеристикам с белком казеином и красителем конго-рот идентичны базовому (стандартному) препарату, при этом уменьшен расход деминерализованной воды на 20% и повышена дисперсность частиц, на что указывает снижение показателя оседаемости с 46% до 26,5%.

Эти исследования проведены нами совместно с Ю.В. Деминым, И.А Хорьковым и Н.И. Передереевым (авторское свидетельство № 738399 с приор, от 16.06.77 г.). Механизированная технология очистки гидрогеля была внедрена на Щелковском, а затем на Алма-Атинском биокомбинате, где для этих целей использован отечественный сепаратор марки ВСС-2.

Однако, несмотря на многие преимущества разработанного метода, обработка алюмопрепарата на сепараторах имела такие недостатки, как высокая степень дисперсности за счет разрушения части глобул, высокие требования к квалификации персонала и технике безопасности, а также дороговизна оборудования и сильный шум на рабочем месте.

В дальнейшем А. И. Гуславским с нашим участием была сконструирована специальная фильтрующая центрифуга для сгущения гелевой суспензии (а.с. № 1711391 с приор, от 30.03.90г.), которая позволила проводить процесс без нарушения текстуры геля, однако в остальном недостатки сепараторной обработки не устранялись. Кроме того, доведение этой модели центрифуги до промышленного выпуска требовало больших средств.

Поэтому поиски экономичного и простого способа удаления промывных вод из суспензии геля ГОА продолжались. На базе реактора емкостью 5,0м3 был сконструирован и изготовлен модернизированный вариант нутч-фильтра с фильтрующей перегородкой и щеткой-мешалкой, отработаны условия подачи- промывной жидкости, режимы перемешивания, удаления фильтрата, регенерации фильтр-полотна и др.

Впоследствии фильтрационная установка была сконструирована автономно с увеличенной в 2,5 раза рабочей поверхностью, автоматизированной подачей деминерализованной воды, периодическим перемешиванием суспензии и вакуум-отводом минерализованного фильтрата (рис. 1).

Рис. 1. Установка для очистки алюмогеля от неорганических примесей.

1. Емкость с гелем ГОА 5. Реактор с промывной водой

2. Емкость для фильтрата 6. Распылитель промывной воды

3. Щетка-мешалка 7. Вакуумный рессивер

4. Фильтрующее полотно (бельтинг)

Это технологическое решение признано изобретением (а.с. № 1401808 «Способ очистки геля гидроокиси алюминия», с приор, от 21.02.86г., авторы: Н.Д. Скичко, А.Я. Самуйленко, Ю.В. Демин, А.И. Албулов и др.).

Е.А Орловым, И.И. Дамировым, В.Н. Качаловым с нашим участием была предложена оригинальная конструкция установки для фильтрации геле-вых суспензий (а.с. № 1761209 с приор. 14.05.90г.), однако ее производительность и скорость регенерации оказались значительно ниже требуемых, и в производство была внедрена вышеописанная конструкция, которая до настоящего времени с высокой эффективностью функционирует в условиях Щелковского биокомбината.

3.1.2. Приготовление противоящурных вакцин с высокодисперсным гелеМГОА. Трехвалентная вакцина против ящура производства Щелковского биокомбината зарекомендовала себя в ветеринарной практике страны как одна из самых высокоиммуногенных и безопасных. Это обусловило высокий спрос на нее как у нас в стране, так и в ряде государств Азии и Африки. В связи с этим возникла необходимость увеличения объемов ее производства, что потребовало совершенствования многостадийной технологии изготовления вакцины и аппаратурного обеспечения этого процесса.

Под руководством АЛ. Самуйленко с нашим участием на Щелковском биокомбинате были осуществлены крупномасштабные исследования по выработке новых подходов к вопросам оптимизации режимов культивирования вирусов, их инактивации, сорбции на ГОА-носителе, замене части питательных сред, химреактивов и других компонентов. Н.Д. Скичко (1979, 1985) разработаны технологии получения печеночных и мясных гидролиза-тов с высокими «ростовыми» свойствами и низкой себестоимостью. С нашим участием осуществлена оптимизация режимов распылительной сушки этих препаратов, позволивших сохранить свойства исходных гидролизатов в порошковых формах до 2-3 лет. Применение ферментативно-мышечного гидролизата (ФГМ-С) в питательных средах при культивировании вируса ящура позволило отказаться от импортных компонентов-аналогов получить значительную экономическую выгоду.

Усовершенствование условий культивирования ящурных антигенов проводилось в несколько стадий. Вначале было изучено влияние различных соотношений среды культивирования к субстрату (эпителию языков) и установлено, что максимальное накопление комплементсвязывающего антигена происходит при весовых соотношениях среды и эпителия 1:8. Далеее были проведены испытания по культивированию вируса в одну фазу, в результате которых показано, что наибольшее накопление ящурного антигена достигалось через 18 часов выращивания. При этом «урожай» 1408 антигена

вируса ящура был получен на 18% больше, чем при двухфазном культивировании. Сорбцию инактивированного вируса осуществляли на мелкодисперсном геле ГОА в течение 2 часов при постоянном перемешивании. При этом предел оседаемости геля не должен превышать 4-6% за 24 часа. Данная технология приготовления противоящурной вакцины запатентована (патент № 1081853 с приор, от 01.06.82 г., авторы: А.Я. Самуйленко, Т.А. Шапкина, А.И. Албулов, В.Д. Соколов, В.В. Соболев, Н.Д. Скичко, М.А Казаков, Ю.В. Поляков, А.В. Костина). Введение в состав вакцины высокодисперсного геля ГОА позволило исключить стадии отстаивания и декантации надосадочной жидкости, что сократило время изготовления одной серии моновалентной вакцины на 48 часов.

Нами получен высокодисперсный гидрогель алюминия из алюмокалие-вых или алюмоаммонийных квасцов в соответствии с а.с. № 1284025 с приор, от 24.01.84г. или а.с. № 566419 с приор, от 15.03.75г. с применением сепарирования для очистки от примесей. Получаемые по этим способам сорбенты имеют, величину оседаемости в пределах 2,0 - 7,0%. Через 12 месяцев хранения этот показатель увеличивается незначительно (на 5 -10%), адсорбционная активность гелей ГОА сохраняется в пределах требований инструкции.

Одновременно проведено изучение влияния высокодисперсного геля ГОА на продолжительность активного действия инактивантов в составе вакцины. В таблице 6 представлены результаты определения иммуногенной активности (ИмД50) противоящурных вакцин на морских свинках, полученных с использованием формалина и аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ). Вакцины приготовлены из одного и того же вируса, инактивированного как без геля ГОА, так и с добавлением этого сорбента.

Таблица 6

Влияние гидроокиси алюминия на инактивацию вируса ящура

"" Показатели Вирус инакгивироваиый - Иммуногенная активность (ИмД<о)

Кол-во серий - Формалин Кол-во серий АЭЭИ

Вирус без добавления геля ГОА 3 58,0 ± 23,5 4 94 ±30

Вирус с добавлением геля ГОА 3 62,7 ± 13,5 4 90 ±18

Из данных таблицы 6 видно, что вакцины, приготовленные на основе высокодисперсного геля ГОА и полученные без него, не различаются по иммуногенной активности. Это свидетельствует о том, что гель ГОА не

оказывает влияния на действие инактивантов в составе противоящурных вакцин с сохранением биологической активности.

3.1.3. Разработка способов оценки адсорбционной емкости гидроокиси алюминия. Для изучения влияния изменений технологических параметров на свойства гидрогеля проводили поиск новых и осуществляли усовершенствование существующих методов оценки качества и адсорбционной-активности получаемых модификаций препарата. Существующие способы определения сорбционной емкости с использованием красителя конго-рот и белка казеина не всегда отражают истинные процессы адсорбции вирусов и бактерий в составе вакцин. Поэтому наличие объективной и надежной методики оценки как готового адсорбента, таю и его промежуточных форм, в технологическом процессе крайне необходимо для получения высококачественного продукта. Определение адсорбционных возможностей алюмо-гидрогеля важно также в процессе конструирования и серийного приготовления депонированных вакцин.

При разработке вакцины против гриппа лошадей для установления дозы ГОА и определения оптимальных условий сорбции вирусного антигена Н.Г. Осидзе (1976) применена реакция гемагглютинации (РГА), с помощью которой тестировался несорбировавшийся при заданной концентрации вирус гриппа. Аналогичный подход применялся и при разработке других адсор-бат-вакцин. Однако эти методы, как правило, используются в соответствии с ветеринарно-санитарными требованиями только в местах производства вакцин, что неудобно для разработчиков сорбентов.

Нами совместно с Н.И. Передереевым, И.А. Хорьковым, Н.П. Ивановым и др. разработан «Способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов» (а.с. № 747890 с приор, от 18.01.79 г.), в котором в качестве тест-сорбата использован инактивированный антиген бруцелл. Определение количества несорбированного антигена проводили в реакции длительного связывания комплемента (РДСК) в фугате образцов с различным содержанием А1(ОН)3. Этот метод оказался достаточно точным и может быть использован в условиях производства сорбента, однако длительность приготовления образцов, их автоклавирование с буферами, титрование положительной сыворотки усложняют его применение. Для оптимизации этих процессов совместно с А.Я. Самуйленко и В.А. Стрельниковым проведены исследования по разработке экспресс-метода оценки сорбентов при помощи сапонина, используемого в вакцинах в каче-

стве адъюванта. Водный раствор сапонина смешивали с исследуемым гелем ГОА, центрифугировали и в фугате методом 100%-ного гемолиза определяли гемолитическую активность несорбированного сапонина. За титры основной и контрольной смеси брались те их разведения, в которых произошел полный гемолиз эритроцитов барана. По соотношению величины этих титров определяли в условных единицах степень адсорбционной активности геля. Установлена корреляция показателей сорбционной свойств алю-могелей, полученных в таких тест-системах как РСК («Техникой») и с белком казеином, а также по разработанному экспресс-методу. На основании проведенных исследований предложен простой и экономичный способ оценки качества ГОА (а.с. № 1284026 с приор, от 24.04.84 г.).

Использование сапонина в составе вакцин как адъюванта требует тщательного слежения за его дозировкой и показателями качества каждой используемой серии с тем, чтобы не допустить повышения реактогенности готовых вакцинных препаратов. Снижению токсических свойств сапонина способствует его произвольная сорбция на геле гидроокиси алюминия в прививных дозах вакцин. С целью управления этим процессом с нашим участием разработан «Способ определения токсичности сапонина» (а.с. № 1340913 с приор, от 10.11.85 г.), предусматриваущий взаимодействие сапонина с гелем ГОА в различных концентрациях.

3.1.4. Другие области применения гидрогеля алюминия. Разработаные нами способы получения гидрогелей алюминия дали возможность готовить сорбенты с высокой адсорбционной активностью и требуемой степенью очистки от балластных примесей. Проведенные исследования применяемых в медицине гидрогелей алюминия (альмагель, фосфогель и др.) в сравнении с препаратами, получаемыми по разработанным нами технологиям, позволили сделать вывод об их идентичности по степени чистоты, сорбционной емкости и токсичности. Специалистами Ставропольской биофабрики (Е.Г. Лавченко и др., 1986) были проведены опыты на лабораторных животных и телятах, на основании которых установлена лечебная (90 мг/кг) и профилактическая (50-60 мг/кг живой массы) дозы геля ГОА при желудочно-кишечных заболеваниях неинфекционной этиологии.

С нашим участием проведены широкие производственные опыты в хозяйствах Московской области по применению гелей гидроокиси алюминия производства Щелковского биокомбината для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний 2-5-дневных телят. Установлено, что наи-

больший терапевтический эффект (80%) оказывал алюмогель с адсорбционной активностью по казеину 75-80% (удельная поверхность 350-400 м2/г), применяемый в дозе 1,5-1,7 мл/кг живой массы. Этот способ лечения зарегистрирован как изобретение (а.с. № 1628284 с приор, от 12.03.89 г., авторы: Н.Д. Скичко, А.Я. Самуйленко, А.И. Албулов, В.К. Дубенко).

3.2. Разработка и усовершенствование промышленных технологий изготовления хитозана и препаратов на его основе для практического использования.

Хитин и хитозан - это природные биополимеры полисахаридной природы, получаемые из животных продуктов морского происхождения (крабы, криль, креветки), а также из скелета насекомых. Возросший в последнее десятилетие интерес к этим полисахаридам и их производным связан с многообразием свойств, открывающих возможности их широкого практического использования. Известно около 100 отраслей знаний, где изучается, внедряется или применяется хитозан и его модификации. В России первыми потребителями этого полисахарида стали такие отрасли, как парфюмерно-косметическая промышленность, растениеводство, ветеринария и производство биологически активных добавок к пище.

При этом в каждом случае требуются препараты хитозана с определенными физико-химическими и биологическими свойствами. Поэтому исследования по созданию новых, более совершенных, экономичных и экологически безопасных технологий получения хитозана и его модификаций являются актуальными и имеют важное практическое значение.

3.2.1. Разработка способов получения производных хитозана. В настоящее время известен ряд способов получения хитозана с различной молекулярной массой, степенью деацетилирования, растворимостью в воде и другими заданными свойствами. Рядом авторов разработаны способы получения солевых форм хитозана - сукцината, хлорида, аскорбата и др. (В.П. Быков и др., 1995; Н.Э. Нифантьев и др., 1998). Однако эти технологии предусматривают использование органических растворителей, которые прочно сорбируются на макромолекулах хитозана и для полного удаления их из продукта необходимо использование дополнительных технологических приемов: создание тонких пленок, вакуума и высокой температуры. Применение таких производных хитозана в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности является проблематичным из-за наличия остаточных количеств токсичных органических соединений. В связи с этим стояла задача получения для практического применения ряда производных хитозана с вы-

сокой степенью чистоты готового продукта без использования органических растворителей и с возможностью варьирования природы полиэлектролитного состояния. Были проведены работы по получению натриевой соли сукцината хитозана методом гетерогенного взаимодействия хитозана с янтарным ангидридом. Получаемые в результате реакции натриевая соль сук-цината и динатриевые солевые формы янтарной кислоты обладают высокой биологической активностью (К.В. Лузбаев и др., 1995), что и послужило основанием к исследованиям в этом направлении.

Известно, что макромолекулы хитозана являются полужесткоцепными и во время проведения осаждения, промывки или при изменении концентрации препарата могут образовываться жидкокристаллические растворы, что отрицательно сказывается на реакционной способности и качестве продукта в целом. Поэтому непосредственно перед синтезом важно добиться амор-физации хитозана. По данным С.З. Роговиной и др. (1995), достижение почти полной аморфизации продукта возможно при обработке свежепереосаж-денной суспензии хитозана в механических или кавитационных полях со сдвиговой деформацией. Для такой обработки нами были использованы приемы интенсивного перемешивания с помощью пропеллерных мешалок со скоростью вращения до 600 об/мин, а также высокооборотных дисковых мешалок (1400 об/мин), что позволяло создавать в смесителе необходимые воздействия на рабочие объемы суспензии. Процесс синтеза сукцината хи-тозана проводился путем гетерогенного взаимодействия водной суспензии активированного хитозана и порошковой формы янтарного ангидрида с размером частиц < 100 мкм. Последующая нейтрализация этой смеси 2,5%-ным едким натром до способствовала переводу Н-формы сукцината

хитозана в его натриевую соль. Нейтрализованный продукт фильтровали и подвергали лиофильной или распылительной сушке. Таким образом, в препарате, получаемом по предложенной нами технологии, отсутствуют примеси органической природы и продукты окисления, а высокая степень дисперсности повышает его растворимость в воде, что важно для практического использования сукцината хитозана (получение мазей, кремов, гелей). Новизна предложенного способа получения натриевой соли сукцината хитозана подтверждена патентом РФ на изобретение № 2144040 (приор, от 07.04.98 г.).

На следующем этапе был проведен поиск новых водорастворимых форм препарата путем взаимодействия активированного и аморфизированного

хитозана с неорганическими и органическими кислотами или их ангидридами. Опытным путем установлены оптимальные весовые соотношения участвующих в синтезе компонентов, а также определен состав хитозана, что позволило получить водорастворимые готовые формы, обладающие высокой биологической активностью. Показано, что использование исходного полифракционного полимера определенного состава позволяет готовить водорастворимый хитозан при мольном отношении аминогрупп всех фракций хитозана и неорганической кислоты как аминогрупп всех фракций хитозана и органической кислоты как 1,0:(0,8-1,2), аминогрупп хи-тозана и ангидрида органической кислоты как Полифракционный хитозан при этом получали путем смешивания фракций с различными: характеристиками:

40 - 45% мае - с ММ 80 - 100 кДа и СД 80 -85%; 40 - 45% мае - с ММ 80 - 100 кДа и СД 68 -72%;

6,0 - 7,0 % мае - с ММ < 25 кДа и СД 80 -85%;

7,0 - 8,0% мае - с ММ < 25 кДа и СД 68 -72%;

0,6 - 7,0% мае - с ММ 1 -10 кДа и СД > 55%.

Таким образом, для синтеза водорастворимых форм хитозана исходный продукт берется с молекулярной массой, имеющей предел колебаний от 100 кДа до мономерного звена (глюкозамина), и степенью деацетилирования от 68% до 95% и выше. Аморфизация продукта в виде водной суспензии происходит в кавитационных или механических полях со сдвиговым воздействием, при котором осуществляется контакт суспензии с растворами кислот или их ангидридами. Конечный продукт выделяется из растворов методом распылительной или сублимационной сушки (патент РФ № 2215749 с приор, от 14.06.01 г.).

Благодаря полифракционному составу конечные продукты имеют более широкий спектр биологической активности, а исключение из технологического процесса органических растворителей снижает токсичность и делает их экологически чистыми препаратами. И.Н. Большаковым и СМ. Насибовым (1999) показана более высокая активность водорастворимой формы глутамата хитозана по сравнению с целлюлозой (КМЦ) в связывании липо-полисахаридов клеточных стенок бактерий и снижении общей интоксикации подопытных животных. Глутамат хитозана (хитодез) является катион-ным полиэлектролитом, а Н-формы сукцината хитозата - анионным, что расширяет возможности применения этих водорастворимых форм по отно-

шению к грам-положительной и грам-отрицательной микрофлоре, а также к другим частицам и соединениям, имеющим заряды.

3.2.2. Применение различных модификаций хитозана в составе лечебно-профилактических средств. Хитозан обладает противовоспалительными свойствами и адсорбционной активностью, способностью к геле-образованию и биодеградируемости, имеет полисахаридную основу и низкое содержание примесей, обуславливающее низкий порог токсичности. Эти его свойства давно привлекают внимание исследователей, создающих различные лечебно-профилактические препараты как внутреннего (энте-росорбенты, иммуностимуляторы и др.), так и наружного применения (ра-нозаживляющие, противовоспалительные, пленкообразующие композиции).

3.2.2.1. Применение хитозана в ветеринарной практике. Изучение лечебной и профилактической эффективности хитозана в ветеринарной практике было начато в Санкт-Петербургском ветеринарном институте Э.В. Гущиной (1991). Было установлено, что внутрибрюшинные инъекции 1-2%-ного хитозана приводят к повышению иммунного статуса и снижению отхода поросят.

Иммунологические реакции животных на введение хитозана изучаются во Всероссийском институте животноводства (ВИЖ) и в Брянской сельскохозяйственной академии; радиопротекторный эффект низкомолекулярных фракций полисахарида исследуется в институте биофизики Минздрава РФ и на кафедре радиобиологии Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина (МГАВМБ). Ученые Всероссийского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии (ВНИРО) впервые получили высокоочищенный хитозан пищевого назначения (В.П. Быков и др., 1991).

С целью изучения возможности применения выпускаемого нами хитоза-на и разработанных модификаций для лечения и профилактики заболеваний животных совместно с А.Р. Таировой был проведен комплекс экспериментов по определению его острой и хронической токсичности на мышах. Установлено, что максимально переносимая доза хитозана составила 1600 мг/кг, а профилактическая - 70 мг/кг. Соотношение этих доз - терапевтический индекс - составил 22,8, что указывает на достаточный предел безопасного применения препарата в ветеринарной практике.

В соответствии с методикой определения хронической токсичности хитозан вводили в желудок мышей в течение 6 месяцев с 5-дневными интер-

валами. Показатели содержания гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов в крови, а также гексеналовой пробы, определяющей состояние детоксици-рующей функции печени, в опытной группе не отличались от таковых в контрольной группе

Совместно с Б.А. Комаровым (1999) была изучена динамика распределения хитозана в тканях и органах, а также время выведения его из организма. Подопытным животным лерорально вводили меченый хитозан с последующей регистрацией излучения в органах мышей, убитых в различные сроки. В печени хитозан появлялся уже через 1 минуту, через 3минуты достигал максимума, затем его количество быстро снижалось в течение 15 минут и далее постепенно уменьшалось к 20 часу (в 10 раз). В остальных органах максимальный уровень препарата обнаруживался через 5-15 минут с последующим снижением к 20 часу и постепенным полным выведением из организма.

Таким образом, анализ проведенных исследований показал, что препараты хитозана не обладают токсичностью и способностью кумулироваться в организме. Это позволило рекомендовать его в качестве лечебно-профилактического и иммуностимулирующего средства для молодняка сельскохозяйственных животных.

Первые опыты были проведены в 1995 г. совместно со специалистами Курского облветуправления в хозяйствах Фатежского района на телятах с желудочно-кишечными заболеваниями. Использовали 2-3 % гелевый раствор хитозана с молекулярной массой 300-500 кДа с различными схемами применения. Лечебный эффект наблюдали при введении телятам геля хитозана в дозе 40-60 мл 3-4 раза в день перед кормлением. Курс приема составлял 2-5 дней в зависимости от интенсивности проявления диарейного синдрома. В дальнейшем, после получения разрешения Департамента ветеринарии МСХиП РФ, широкие производственные испытания хитозана были продолжены в хозяйствах Тульской и Московской областей. При этом нами совместно с СМ. Шинкаревым испытывался хитозан с различными качественными характеристиками, оптимизировались схемы лечения и профилактики, а также уточнялась дозировка препарата.

Опыты проводились в КСХП «Приупское» Тульской области (телята) и в СХПК «Заря Подмосковья» Московской области (поросята). Для постановки экспериментов животные были сформированы в три группы: 1 - опытная (лечение), 2 - опытная (профилактика) и 3 - контрольная. В опытах исполь-

зован хитозан в виде 2 % геля с молекулярной массой 380, 150 и 80 кДа.В таблице 7 представлены результаты хозяйственных опытов по применению хитозана для лечения желудочно-кишечных заболеваний.

Таблица 7

Результаты применения хитозана при лечении желудочно-кишечных за-

болеваний телят и поросят

Эффективность Мол. масса хитозана, кДа Кол-во голов Время протекания заболевания, сут. Привесы за время наблюдения (8 сут), кг Примечание

Телята -

Лечебная 380* 29 3*1 4,6*1,2 1гол.- диарея после лечения -

150 23 3*1 4,5*« ,3 1 гол.-диарея после лечения *

80 19 3*1 4,6*1,1 1 гол,-диарея незначительная

Профилактическая 380 22 5,1*1,7

150 16 6,1*1,4

80- 24 - 6,1*1,6

Контроль- - 19 6*2 4,8*1,4 Заболело — Згол. Пало- 1гол.

Поросята

Лечебная 380 13 4*1 2,9*0,8 1 гол.-диарея (после лечения)

150 17 3*1 2,9*1,1 2гол.- диарея (после лечения)

80 И 3*1 3,0*1,0

Профилактическая 380 19 3,1*0,9

150- 10 • _ 3,2*1,0

80- 18 3,2*1,1'

Контроль - - 16 7*2 3,0*1,2 Заболело - 4гол. Пало - 2 гол.

Телятам с явлениями диареи (1 группа) выпаивали 3 раза вдень за 30 минут до кормления по 50 мл препарата с молекулярной массой 380 кДа. На 3-4 сутки состояние у животных нормализовалось, за исключением одного теленка, у которого диарейный синдром полностью не прекратился, но появился аппетит и общее клиническое состояние улучшилось. При применении хитозана с молекулярной массой 150 кДа (2 группа) получены подобные результаты, а эффект от использования препарата с ММ 80 кДа в 3 группе был существенно выше и составил 90 % (10 голов - выздоровело, 1 — признаки угнетения и незначительная диарея).

При диареях у поросят получены сходные результаты лечебного действия хитозана в зависимости от его молекулярной массы, но в целом терапевтический эффект хитозана был несколько ниже, чем у телят.

Анализ сыворотки крови подопытных животных показал, что содержание кальция и резервной щелочи у больных животных было на 12-17 % ниже, чем у животных профилактической и контрольной групп, а показатели общего белка, глобулиновых фракций и гемограммы соответствовали интервалам физиологической нормы.

В последующем гелевый хитозан был применен в хозяйствах нескольких областей РФ в различных сочетаниях с антибиотиками, сульфаниламидами и фитопрепаратами при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний телят различной (в том числе инфекционной) этиологии. В 75-80 % случаев наблюдался синергический эффект и пролонгированное действие этих препаратов, что согласуется с данными ряда отечественных (Э.В. Гущина, 1992, М.И. Рабинович, 1999) и зарубежных (Я. Muzzarelli, 1986, А. Ramisz е! а1, 1999) исследователей.

В опытах по изучению влияния скармливания хитозана на рост молодняка крупного рогатого скота достоверно установлена тенденция к увеличению среднесуточных привесов, о чем свидетельствуют данные таблицы 8.

Таблица 8

Влияние скармливания хитозана и фитохитодеза

на динамику среднесуточных приростов и живой массы телят

Показатель . 1гр.-коитроль 2гр.-хитозан - Згр.-фитохитодез

М* т М± ш М± т

Живая масса в возрасте 30 суток, кг 46,17*0,95 4633*0,88 48,17*1,70

Живая масса в возрасте 64 суток, кг 56,83±0,65 59,00*0,77 57,60*0,68

Среднесуточный прирост за 34 (30-64) суток, г 313,73*27,03 339,96*32,41 294,12*43,62

Живая масса в возрасте 101 суток, кг 75,83*1,01 79,83*1,30* 79,80*0,58*

Среднесуточный прирост за 37 (64-101) суток, г 513,52*32,73 590,09*10,85 600,00*15,76*

Среднесуточный прирост за 71 (30-101) суток, г 417,83*22,02 471,83*14,88 453,52*26,12

• - Р<0,05 по отношению к 1 группе

Применение хитозана и фитохитодеза двумя курсами по 5 дней с интервалом в 16 дней из расчета 6 мг на 1 кг живой массы дважды в день обусловило к 64-суточному возрасту увеличение живой массы на 3,81% и 1,35%, а к 100-суточному - вызвало ее достоверное увеличение на 5,27% и 5,24% по сравнению с контролем. У этих групп телят наблюдалась также оптимизация эритропоэза и стимуляция гуморального звена иммунной защиты.

Антимикробный аспект действия хитозана представляет особый интерес. С целью изучения антибактериальной активности хитозана нами были получены препараты с различной молекулярной массой и степенью деацети-лирования, а в Государственной медицинской академии г. Твери В.М. Чер-винцом и др.(1999) были проведены исследования по определению чувствительности к ним различных штаммов бактерий из биоптатов желудка больных язвенной болезнью. Предварительные данные показали достаточно высокую антимикробную активность хитозана с ММ 260 кДа по отношению к бактериям рода Escherichia, Enterobacter и др., хитозан с ММ 26 кДа был более активен по отношению к бактериям рода Heliobacter. Рост лакто-бацилл не угнетался, что указывает на возможность применения хитозана соместно с пробиотиками для нормализации работы желудочно-кишечного тракта.

32.22. Биологически активные добавки схитозаном и его производными Терапевтический и профилактический эффект от применения хито-зана при различных патологических процессах достаточно известен и продолжает изучаться. В желудочно-кишечном тракте полифракционный хитозан оказывает, прежде всего, энтеросорбционное и детоксицирующее действие за счет своих хелато- и комплексообразующих свойств. Деацетилиро-ванный на 65 - 95% полифракционный N-ацетил- D- глюкозамин имеет в своем составе низкомолекулярные фракции, которые, наряду со средними и высокомолекулярными фрагментами, оказывают пролонгирующий эффект на действие различных лекарственных веществ, в том числе настоев фитосборов. Усиление и пролонгирование лечебного эффекта препаратов из сборов лекарственных трав в сочетании с хитозаном было установлено К.А. Трескуновым и Б.А. Комаровым (1992), которые запатентовали способы терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта, бронхиальной астмы, различных видов инфекций и онкологической патологии с использованием этих препаратов. В дальнейшем с нашим участием были установлены закономерности получения комплекса экстракта сухого сбора лекарственных растений и водорастворимых форм хитозана полифракционного состава. Показано, что растворение приготовленного с прохождением всех стадий активаций хитодеза в экстракте растительного сырья должно проходить при соблюдении соотношения в целевом продукте, равном 1,0:0,6-0,9 (патент РФ № 2204402 с приор, от 14.06.01 г., авторы: Б.А. Комаров, А.И. Албулов, К.А. Трескунов и др.).

Многочисленные публикации о хитозане как полифункциональном соединении, обладающем сорбционными, регенерирующими, липотропными и иммуностимулирующими свойствами, способствовали разработке на его основе серии пищевых добавок с биологической активностью. Вначале появились препараты американского и китайского производства («Хито-сан», «Хиторич», «Хитосорб» и др.), в середине 90-х гг. выпущены первые-отечественные биологически активные добавки (БАД) с хитозаномв качестве основного действующего начала. В Санкт-Петербурге компания«Ли-тораль» представила на рынок хитозан с водорослью фукус. Во ВНИИ рыбного хозяйства и океанографии разработан и тестирован полифракционный хитозан липотропного действия (торговая марка «Хитан»), а также хитозан с ламинарией - «Полихит». Во ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс» нами налажен промышленный выпуск этих добавок, а также рассмотренных выше фитохитодезов. В дальнейшем появился ряд хитозановых препаратов, в состав которых входили также органические кислоты, витамины, экстракты лекарственных растений. Так, Владивостокской фирмой «Силмар» выпущен хитозан с янтарной кислотой, ЗАО «Биополимеры» (г. Партизанск) готовит крусхитозан, ООО «Экко-Плюс» предлагает смесь хитозана с карбок-симетилцеллюлозой.

Выпускаемый нами пищевой низкомолекулярный хитозан вошел в состав препарата «Детокс» фирмы «Новый Камелот», в серию добавок ЗАО «АС-КОМ» («Хитокор», «Детокс-Сил» и др.), 000 «Алкой»(«Хитозан-диет»), а также в состав более 40 видов фитохитодезов.

Появилась серия БАД на основе хвойных экстрактов и хитозана. Компания «Тенториум» производит СО2 — экстракт пихты сибирской «Апихнт», а разработанный Н.Я. Костешей (1993) водный пихтовый препарат «Абисиб» выпускается с гелевой формой хитозана.

Для выполнения требований НТД по бакобсемененности пищевого хито-зана высушенные препараты приходилось подвергать гамма-облучению, что приводило к их окислению и потемнению. Устранение этих недостатков достигается обработкой продукта ультрафиолетовыми лучами с помощью специального устройства (а.с. № 1750621 с приор, от 25.07.90г., авторы: И.И. Дамиров, А.И. Албулов, В.Н. Качалов).

3.2.3. Другие области применения хитозановых препаратов

а) Радиопротекция. В 1960 г. Б.П. Белоусовым предложено использовать хитозан как противолучевое средство, проявляющее эффект при использо-

вании как до, так и после воздействия радиации. Были созданы первые препараты (РС-10 и РС-11), разрешенные к медицинскому применению для лечения пострадавших от воздействия ионизирующего излучения. Однако, из-за плохого качества хитозана их выпуск был вскоре прекращен.

Полученные нами совместно с учеными «Центра Биоинженерии» РАН (В.П. Варламов, К.Г. Скрябин, СВ. Немцев и др., 1999) низкомолекулярные высокоочищенные формы хитозана являются стандартизированными и лишены недостатков вышеприведенных препаратов. При испытании нового полисахарида на лабораторных животных в условиях кафедры радиобиологии МГАВМБ под руководством профессора Н.П. Лысенко получены данные, которые свидетельствуют о том, что мыши, которым внутрибрюшинно вводили препараты хитозана с ММ 5-10 кДа до облучения, оставались клинически здоровыми, а в контроле наблюдали 100 % гибель (Таблица 9).

Таблица 9

Радиопротекторный эффект низкомолекулярного хитозана

(гамма-облучение в дозе 800 бэр)

№ и назначение группы мышей* Время введения хитозана** Фаза болезни Кол-во выживших животных Выживаемость, %

на 9 сутки на 22 сутки на 30 сутки

1- профилактика за 3 дня - 7 7 7 100

2-лечение через 3 дня проявление клинических признаков 7 6 6 86

3-лечение через 9 дней пик заболевания 4 3 3 43

4-лечение через 22 дня стадия разрешения болезни 3 2 2 28,6

5- облучение, контр. - - 3 2 0 0

6- без облучения • - - 7 7 7 100

- в каждую группу входило 7 животных, - хитозан вводили внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг

При введении облученным мышам этого же препарата в дозе 200 мг/кг живой массы, получали положительный эффект (выживаемость составила 86 %), а у животных контрольной группы признаков выздоровления не наблюдалось, что подтверждает лечебное и профилактическое действие предложенного препарата, а также перспективность его применения животным и людям, подвергнутых гамма-облучению в больших дозах.

б) Растениеводство. Было доказано, что хитозан обладает ростостимули-рующим, противобактериальным и противонематодным действием при об-

работке растений (С.Л. Тютерев и др., 1994). Это обстоятельство обусловило создание ряда препаратов на его основе, которые в настоящее время испытаны и внедряются в различных регионах РФ. В условиях ВНИТИБП проведена коррекция параметров технологии и создан производственный участок по изготовлению хитозансодержащего препарата «Нарцисс», разработанного группой компаний «Восток МТД». За три года выпущено и применено в зернопроизводящих и тепличных хозяйствах страны более 140 тонн этого биостимулятора.

Осваивается также технология производства препарата нового поколения «Агрохит», предложенного «Центром Биоинженерии» РАН на основе низкомолекулярного хитозана, получаемого ферментативным гидролизом. За счет высокоактивного действующего начала «Агрохит» является малотоннажным, экономически более перспективным биостимулятором.

в) Консервирование биоматериалов. Пленкообразующие, антибактериальные и антиокислительные свойства получаемых нами различных модификаций хитозана позволили использовать некоторые из них в качестве консервантов пищевых и биологически активных продуктов, а также фруктов и овощей.

Специалистами ряда научных коллективов с нашим участием был модифицирован способ консервирования зернистой икры лососевых и других рыб путем замены токсичного вещества уротропин на пищевой высоко-очищенный хитозан. При этом отработаны оптимальные рабочие концентрации полимера в составе консерванта и проверены сроки сохранности продукта. На способ консервирования икры рыб получен совместный патент РФ № 2170022 с приор, от 24.02.02г., а также организовано промышленное производство нового консерванта, состоящего из хитозана, сорбино-вой кислоты и антимикробного препарата «Антибак».

Совместно с учеными Всероссийского института животноводства (Ю.П. Фомичев, Н.И. Стрекозов и др.) были испытаны различные формы хитозана как компонента среды для глубокого замораживания спермы быков - производителей. Установлено, что введение в лактозо-глицерино-желточную среду сукцината хитозана позволяет снизить биохимические повреждения мембранных структур сперматозоидов в процессе глубокого замораживания и повысить время их выживаемости после оттаивания (патент РФ № 2147204 от 16.06.95г.).

г) Сорбция тяжелых металлов, радионуклидов и бактериальных суспензий. Нами, совместно с СМ. Шннкаревым и А.С. Фоменко проведены исследования по получению хитозанов с высокими адсорбционными свойствами. Было установлено, что полисахарид со степенью деацетилирования от 87 до 97% и ММ от 50 до 250 кДа имеет наиболее высокую сорбционную емкость (до 110 мг/г по Си4"). Активация хитозана по специальной методике также дает повышение емкости сорбента на 10-12%.

В дальнейшем хитозан с оптимальной сорбционной активностью был применен совместно с экстрактами трав в качестве энтеросорбента для лечения диареи молодняка животных и для создания биоактивных добавок к пище, связывающих жиры и снижающих массу тела.

Изучение сорбции тяжелых металлов и радиоактивных элементов проводили совместно с группой ученых Российского университета дружбы народов (Б.А. Величко, Л.А. Шутова и др., 1994). Активированный хитозан проверяли в сравнении с фитосорбентами, полученными на основе древесных опилок и солодовых ростков. Технология получения фитосорбентов, разработанная с нашим участием (патент РФ № 2079359 с приор, от 28.07.95г.), позволяет получать препараты с различной степенью фосфори-рования," соотношением альдегидных, фосфорнокислых и карбоксильных групп, что обуславливает их различную сорбционную активность по отношению к стронцию, цезию, урану, кадмию, кобальту и др. Они имеют высокую сорбционную способность при отсутствии специфической селективности, дают низкую зольность при сжигании (3-5%) и, соответственно, малое количество твердых радиоактивных отходов. Результаты сорбции вышеука-занных-элементов на активированном хитозане были близки к данным по сорбции фитосорбов, что указывает на возможность успешного применения хитозана в условиях техногенного и радиоактивного загрязнения промышленных и бытовых стоков.

Совместно с Н.В. Мельником и др. (1999,2001) хитозан с высокой сорб-ционной активностью был испытан в качестве флокулянта для концентрирования бактериальных суспензий при производстве вакцин против бруцеллеза и пастереллеза. В процессе работы испытаны хитозаны с различной молекулярной массой (оптимум 50-200 кДа) и степенью деацетилирования (оптимум 80-85%), подобраны температурные и временные режимы, а также диапазон рН процесса концентрирования. Показана реальная возможность применения хитозана для осаждения баксуспензий с соблюдением

условий стерильности. При этом из технологии исключаются процессы центрифугирования и ультрафильтрации, и в 1,5-2 раза ускоряется время изготовления вакцин.

3 3. Разработка научно обоснованного способа и промышленной технологии изготовления ферментного препарата коллагеназа из гепато-панкреаса ракообразных. -

3.3.1. Обоснование потребности в протеолитических ферментах. Проблема обеспечения производства противовирусных вакцин качественными ферментами для дезинтеграции клеток решалась биологической промышленностью нашей страны, в основном, за счет закупок этих препаратов за рубежом. В России работы по получению трипсина требуемого качества для дезинтеграции клеток проводились в Новосибирске (НПО «Вектор»), Санкт-Петербурге (ООО «Самсон») и в Московском регионе (ВНИТИБП, ВГНКИ). Сырьем в технологиях получения энзимов служила поджелудочная железа свиней и крупного рогатого скота. Сокращение поголовья животных привело к дефициту сырья для получения трипсина.

В связи с этим мы обратились к альтернативному виду сырья - гепато-панкреасу ракообразных, являющегося отходом крабового промысла. Учеными Тихоокеанского института биоорганической химиии (ТИБОХ) и Тихоокеанского института рыбного хозяйства и океанографии (ТИНРО) Дальневосточного отделения РАН из этого сырья был получен комплекс протео-литических ферментов.

По данным И.Ю. Сахарова и др. (1982) крабовая коллагенолитическая протеиназа содержит до 40% ферментных композиций, действующих трип-синолитически, что обуславливает возможность ее использования вместо коммерческих трипсинов для дезинтеграции клеток при получении моно-слойных культур, интактных клеток и т.п. Протеолитическая активность «ацетонового» порошка дальневосточной коллагеназы (ТИБОХ) приближалась к таковой у некоторых исследуемых образцов коммерческих трипсинов, что указывало на перспективность получаемого из печени крабов препарата.

3.3.2. Разработка, способа получения коллагеназы для биотехнологических целей. Нами была поставлена задача получить ферментный препарат из печени крабов, способный заменить в производстве вакцин импортные коммерческие трипсины, А налит сушрстиуюших технологий из-

готовления коллагеназы показал, что

О О «и

1ия балла-

стных веществ из гомогената печени являются перенасыщение сульфатом аммония, обработка органическими растворителями с последующим центрифугированием, фильтрацией и ультрафильтрацией. Однако, введение в технологию избытка аммонийных солей и спиртов снижает активность ферментов, усложняет процесс и увеличивает его продолжительность.

С целью повышения качества получаемых коллагенолитических протеаз нами испытан ряд таких осадителей-сорбентов, как гидроокиси и хлориды кальция и алюминия, бентониты, хитозан, аэросил и др. Исследования показали, что наиболее приемлемым для экстракции балластных веществ из гомогената гепато-панкреаса крабов оказался кислоторастворимый хитозан. Были проведены опыты по определению условий выделения максимального количества белков, обладающих ферментативной активностью. При этом испытывались полисахариды с отличающимися исходными характеристиками, в систему вводили различные концентрации и объемы раствора хитозана. Полученные результаты показали, что тенденция к увеличению активности выделенного надосадка проявляется при добавлении к гомоге-нату гепато-панкреаса от 30 до 50 г. хитозана с молекулярной массой 150250 кДа на 1 кг печени краба. Технологически приемлемой является 0,5-1,5%-ная концентрация хитозана в 1%-ной уксусной кислоте. Дальнейшее повышение содержания сорбента в смеси увеличивало время процесса отстаивания и фильтрации ферментного раствора, а также снижало выход готового продукта.

Максимальная производительность технологического процесса достигалась при добавлении к гомогенату от 0,8 до 1,0 л раствора хитозана на 1 кг гепатопанкреаса крабов. При этом наилучший контакт балластных веществ с хитозаном имел место при интенсивном перемешивании со скоростью вращения мешалки не менее 180 об/мин: в течение 15-20 мин.

Для выделения коллагенолитической протеиназы использовались ультрафильтрационные сульфоновые полые волокна с диаметром пор 20-30 и 50 ангстрем. Полученную жидкую коллагеназу высушивали лиофильно с предварительным выдерживанием при -35-40°С в течение 24 часов.

При этом изучали влияние введения в систему различных буферных растворов на выход конечного продукта. Установлено, что оптимальную стабилизацию ферментного раствора и улучшение выделения балластных веществ из гомогената обеспечивает трис - буфер с рН 8,0-8,5. При увеличении объемов производства до промышленных масштабов показана возмож-

ность использования в качестве буфера более дешевой смеси бикарбоната натрия с едким натром в соотношении 7:1.

Таким образом, в результате проведенных исследований отработаны оптимальные условия выделения фермента без применения органических растворителей, усовершенствованы методы его крупномасштабной очистки от балластных белков с использованием ультрафильтрации, разработаны режимы сублимационного и распылительного высушивания готового препарата.

На разработанный «Способ получения коллагеназы» получен патент РФ № 2112036 с приор, от 09.10.92 г.

3.3.3. Изучение физико-химических и биологических свойств разработанного ферментного препарата из гепатопанкреасакамчатского краба. Одновременно с отработкой и усовершенствованием технологических процессов изучались физико-химические и биологические показатели качества нового фермента. Апробация опытно-промышленных серий «безацетоновой» коллагеназы была проведена в Институте биологически активных веществ РАН (г. Черноголовка), в лабораториях культур тканей ВГНКИ и ВНИТИБП, на Щелковском биокомбинате, Покровском заводе биопрепаратов, Приволжской, Курской, Ставропольской и Армавирской биофабриках.С использованием разработанных параметров было изготовлено 8 стандартизированных серий коллагеназы. В таблице 10 представлены результаты анализа этих серий в сравнении с трипсином фирмы «Диф-ко».

Таблица 10

Физико-химическая и биологическая характеристика коллагеназы из гепато-

панкреаса крабов для получения культур клеток

Наименование препаратов ■ К-во серий! Внешний вид, цвет, запах Растворимость, мин Протео-литиче-ская активность, ЕД Выход клеток из 1г ткани ПК, млн/г* Урожай клеток, тыс/мл Индекс пролиферации через 48 ч.

Коллагена-за 8 Соответствует НТД 2,0*0,2 116,0*10,8 115,7*4,6 250*30,6 0,62*0,09

Трипсин <^Дифко» (контроль) 3 Соответствует НТД 15,110,2 150,4*9,3 121,8*6,0 268*18,8 0,67*0,1

жизнеспособность клеток в суспензии составляла 90 - 92 %

Приведенные данные свидетельствуют, что физико-химические показатели качества изготовленных нами ферментов соответствуют требования НТД.

В таблице 11 представлены данные, полученные в отделах культур клеток ВНИТИБП и ВГНКИ по подбору рабочих концентраций коллагена-зы на примере дезинтеграции клеток перепелиных эмбрионов (ПЭ). Были исследованы следующие концентрации фермента: 0,125; 0,025; 0,005; 0,001%.

Таблица 11

Влияние концентрации коллагеназы из гепатопанкреаса крабов на эффектив-

ность диспергирования тканей перепелиных эмбрионов

Концентрация Характер де- Результаты

фермента, % загрегации Выход клеток Жизнеспособ- Индекс проли-

ткани из 1 г ткани, ность, % ферации через

млн. 48 час.

0,125 Полная 200,0 96 0,45

0,025 Полная 131,0 96 0,50

0,005 Полная 162,5 97 0,51

0,001 Полная» 33,0 89 0,57

Из данных таблицы 11 видно, что коллагеназа в концентрации от 0,125 до 0,005% обеспечивала равноценный выход из 1 грамма ткани ПЭ и высокую жизнеспособность изолированных клеток, которые, в свою очередь, обладали одинаковыми адгезивными и ростовыми свойствами. Более низкая концентрация фермента в растворе оказалась неэффективной для дезагрегации ткани ПЭ. Полученные данные позволили рекомендовать рабочую концентрацию коллагеназы, которая составила 0,025%.

Исследования коллагеназы для диспергирования тканей животных и птиц в 0,025%-ной концентрации показали, что препарат не токсичен и обладает равноценными с контролем (трипсин «Дифко») диспергирующими свойствами. Выход клеток из 1 г ткани куриных и перепелиных эмбрионов, тестикул быка, почек эмбрионов коров, кошек и собак был практически одинаковым при жизнеспособности изолированных клеток от 83% до 95%. Различий в морфологии опытных и контрольных культур клеток также не установлено.

Была проведена проверка чувствительности первичных и перевиваемых культур клеток, полученных с использованием коллагеназы, к вирусу болезни Ауески, вирусу парагриппа-3, вирусу инфекционного ринотрахеита КРС и парвовирусу собак. Дозы заражения и условия культивирования вирусов были общепринятыми. Полученные данные свидетельствуют о том, что опытные и контрольные первичные и перевиваемые культуры клеток характеризовались равноценной чувствительностью к вирусам.

Показана также пригодность культуры клеток ФЭП, изготовленной с использованием коллагеназы, для репродукции штамма ФС-126 вируса герпеса индеек и изготовления жидкой вакцины против болезни Марека. Установлены высокая сохраняемость клеток (80-86%) и инфекционная активность вируса (67-69%) в вакцине через 12 месяцев хранения препарата в жидком азоте. Сводные сведения по стабильности вакцин отражены в таблице 12.

Таблица 12

Стабильность жидкой вакцины против болезни Марека, изготовленной на

культуре клеток ФЭП с коллагеназой

Наименование фермента Сохранность клеток в вакцине Активность вируса в вакцине

млн/мл % ФОЕ/мл %

Исходная 6 мес. 12 мес. 6 мес. 12 мес, Исходная 6 мес. 12 мес. 6 мес. 12 мес.

Коллагена-га т гепа-топанкреа-са крабов 10-10' 8 10' 8,8-10' 80,0 88,0 1,1-10* 7,6-1 о5 7,5 105 69,0 67,7

Трипсин фирмы «Ферак» (контроль) 1,65-10' 0,88 10' 0,5-10' 51,5 333 6-10' 4-10' 2.9 10* 66,6 8,3

Представленные в таблице 12 данные свидетельствуют о том, что культуры клеток, изготовленные с использованием коллагеназы, характеризуются высокой чувствительностью к модельным вирусам и могут быть рекомендованы для накопления культурального материала в производстве противовирусных препаратов, в том числе вакцины против болезни Марека.

По результатам проведенных исследований Департаментом ветеринарии Минсельпхозрода РФ утверждено 25.04.95 г. «Временное наставление по применению препарата коллагеназы из гепатопанкреаса крабов для получения культур клеток». В 1993 - 2003 гг. реализовано биопредприятиям России свыше 100 кг коллагеназы для использования в технологиях приготовления противовирусных вакцин.

В настоящее время во ВНИТИБП создана промышленная технологическая линия получения коллагеназы производительностью 40-60 кг лио-фильно высушенного фермента в месяц. Возможности сырьевой базы и производственный потенциал позволяют полностью обеспечить отечественные биопредприятия препаратом высокого качества по низким ценам.

3.3.4. Применение коллагеназы в других областях. Попытки применения коллагеназы в пищевой промышленности предпринимаются в течение последних 30 лет. Получены экспериментальные доказательства ее высокоэффективного расщепляющего действия на коллагенсодержащие белки кожи, сухожилий, хрящей и др. Шприцевание раствором фермента мышечной ткани размягчает ее и повышает усвояемость организмом. Преимущества коллагеназы перед другими протеазами, получаемыми из растительного сырья или микробным синтезом, обусловлены наличием в ней коллагеноли-тической, трипси новой, эластазной активностей, что обеспечивает наиболее полное комплексное воздействие на ткани животных. Поэтому применение фермента на мясоперерабатывающих предприятиях позволит повысить выход и качество продукции, а также использовать часть утилизируемого сырья. Предложенная технология и организация выпуска комплекса протеоли-тических энзимов из гепатопанкреаса крабов на производственных площадях ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс» в соизмеримых с потребностями и стабильных объемах дают основания для решения этой задачи.

Нами совместно с М.А. Фроловой дано научное обоснование способам и технологическим режимам применения ферментного препарата коллагена-зы при переработке мясного сырья различного назначения. Изучено влияние на степень протеолиза мяса таких факторов, как концентрация фермента, время обработки, температура процесса, рН среды и др. В лабораторных условиях и на ряде промышленных предприятий (НИИ птицеперерабатывающей промышленности, ООО «Росток», 0 0 0 «Русь-Агро-Люкс» и др.) определены оптимальные режимы обработки таких мясных продуктов, как рубленные полуфабрикаты, ветчина, мясные консервы и др. Коллагеназа может быть использована для биотехнологической модификации низкосортного мясного сырья с высоким содержанием соединительно-тканных белков (обрезь, шкуры, сухожилия, фасции) с целью дальнейшего введения их в состав мясопродуктов различного ассортимента. Были разработаны рекомендации по добавлению коллагеназы в посолочные смеси для сокращения сроков посола мяса и его размягчения. Изучены условия обработки ферментом рыбных тушек судака и окуня для снятия чешуи, что значительно эффективнее и проще механической очистки.

В пивоваренной промышленности широко используются ами-лолитические и протеолитические ферменты для получения низкомолекулярных углеводов и пептидов, повышающих питательную цен-

ность пива и стабилизирующих его, не вызывая образования осадка при хранении. Для этих целей В.Б. Тихонов и И.Ю. Сахаров (1992) предложили применить коллагеназу, полученную из крабов. Нами в промышленных условиях были отработаны концентрации и дозы фермента, выпускаемого ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс». Определено оптимальное время контакта с субстратом, изучена стабильность напитка при хранении его сроком до 68 месяцев. Результаты исследований представлены в таблице 13.

Таблица 13

Сроки хранения пива, стабилизированного коллагеназой

Доза фер- Активность ■ Концентра- Оседаемость Срок хра- Наличие осад-

мента, фермента,- ция фермен- пива, м г/л нения пи- ка *

мл/100 л ЕД/мг та, % ва, мес.

пива

13,0 56,0 1.1 11,0 6,0 отсутствует •

15,0 56,0 1,1 16,0 8,0 отсутствует

18,0 56,0 1,1 17,0 8,0 ет отсутству

С 1996 г. коллагеназа используется в 6 сортах пастеризованного пива, выпускаемого заводом экспериментальных напитков в Хамовниках. На применение фермента в пищевой промышленности нами разработан ком. плект НТД, получено разрешение Госсанэпиднадзора. В настоящее время ведутся работы по внедрению коллагеназы на других пивоваренных предприятиях РФ и ближнего зарубежья.

В 1991 — 94 гг. было проведено изучение действия различных доз фер-. мента на кожные покровы животных и человека с целью введения коллаге-назы в косметические средства. В Институте медицины труда Минздрава РФ представленный нами фермент был проверен на токсичность, изучены его кожно-резорбтивные свойства на опытных животных, отработаны и рекомендованы дозы его введения в состав косметических средств для ухода за кожей. Ряд отечественных предприятий по выпуску парфюмерно-косметической продукции (фирмы «Линда», «Маграв», «Скена+» и др.) разработали и освоили выпуск серии кремов и бальзамов с коллагеназой, обладающих омолаживающим эффектом. Действие коллагеназы на верхние слои эпидермиса проявляется в ускорении отщепления омертвевших клеток, очистке пор и, как следствие, активизации кожного дыхания. Для предотвращения снижения активности коллагеназы в пределах срока годности косметических препаратов и более мягкого воздействия на кожу нами предложено вводить ее в парфюмерную продукцию вместе с водорастворимыми производными хитозана.

Потребление отечественной парфюмерно-косметической промышленностью коллагеназы, производимой ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс», в последние годы стабильно возрастало и к 2002 г. достигло 20-30 кг в год.

3.4. Разработка промышленной технологии получения препаратов из морских моллюсков и испытание их на животных и птице.

В процессе изучения возможностей применения продуктов, полученных из крабов и других ракообразных, нами было обращено внимание на другой класс обитателей Мирового океана - моллюсков, которые также являются мощным источником биологически и фармакологически активных веществ. Наиболее изученными из них являются мидии, относящиеся к роду двустворчатых моллюсков. Мясо мидий служит источником полноценного белка с богатым аминокислотным составом, содержит набор макро- и микроэлементов, витаминов А, С, Д, В12 Широкое применение нашли кислотные и ферментативные гидролизаты мидий, в которых активные начала находятся в свободном, легко усвояемом состоянии — в виде аминокислот, ли-пидных антиоксидантов, меланоидинов. Разработкой и оптимизацией состава мидийных гидролизатов занимались ученые ВНИИ рыбного хозяйства и океанографии (Л.Л. Лагунов, Н.И. Рехина, 1967, М.В. Новикова и др., 1997). Ими получен мидийный гидролизат кислотный лечебно-профилактический (МИГИ-К — ЛП), промышленное производство которого в настоящее время налажено во ВНИТИБП - ЗАО «Биопрогресс». Нами, совместно с А.Н. Королевым, при оптимизации технологического процесса и увеличении масштабов производства разработана экологически чистая закрытая технология получения препарата. При этом были решены вопросы локализации и нейтрализации выбросов, стандартизации препарата и снижения энергозатрат.

Получаемый в процессе гидролиза мидий осадок, названный «Мидиум», был испытан и успешно применен в пушном звероводстве в качестве кормовой добавки, укрепляющей и улучшающей качество шерстного покрова животных (Т.В. Беседина, А.Н. Королев, Л.В. Сысоева и др., 1997). Базируясь на полученных этими авторами данных, совместно с сотрудниками Брянской ГСХА нами проведены исследования по использованию мидий-ного препарата в составе рациона молодняка свиней и птицы. В условиях Щелковской птицефабрики на цыплятах породы «Родонит» проведена серия опытов по выявлению эффективности применения Мидиума.

Таблица 14

Динамика живой массы поросят и цыплят при скармливании __препарата «Мидиум»__

Поросята > Цыплята

1 группа (контроль) 2 группа 3 группа 1 группа (контроль) 2 группа

Возраст 1 сутки 1 сутки 1 сутки 4 суток 4 суток

Живая масса, кг. 0,96±0,01 0,96±0,01 0,96±0,01 0,048±0,007 0,047±0,006

Кол-во жив-х, гол. 29 26. 31 11020 12240

Возраст 30 суток 30 суток 30 суток 26 суток 26 суток

Живая масса, кг. 5,59±0,19 5,72±ОДЗ 5,04±ОДЗ 0,34±0,Ю 037±0,13

Кол-во жив-х, гол. 18 16 22 - -

Возраст 60 суток 60 суток 60 суток - -

Живая масса, кг. 8,82±0Д9 9,73±0,44 9,21*0,40 - -

Кол-во жив-х, гол. 12 16 21 - -

видно из таблицы 14, при ежедневном внесении в кормовой рацион препарата из расчета 1,5г. на 1кг. массы птицы в течение 22 суток наблюдалось повышение сохранности молодняка и увеличение его живой массы. Проведенное Е.В. Крапивиной (2002) изучение гематологических показателей подопытных цыплят позволяет сделать вывод о повышении у них поглотительной функции нейтрофилов периферической крови.

Была поставлена также задача изучить влияние Мидиума на развитие и резистентность молодняка свиней. Для изучения эффективности и установления оптимального режима использования Мидиума поросятам - сосунам применили две схемы скармливания препарата:

1) 30 — дневным животным в течение 10 дней скармливали возрастающие дозы, начиная с 30 до 60 мл/гол.;

2) свиноматкам на 20 сутки после опороса в течение 5 дней давали по 0,5 л. Мидиума, разведенного водой 1:3, затем подсосные поросята получали препарат по первой схеме.

Выживаемость поросят в опытных группах была выше, живая масса превышала таковую у животных контрольной группы на 4,05 и 4,47%. Гематологические показатели крови указывали на повышение функциональной активности нейтрофилов и, следовательно, повышение уровня естественной резистентности организма у поросят при применении препарата по второй схеме.

Полученные рядом авторов положительные результаты от наружного применения мидийного гидролизата в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства, позволили нам рекомендовать его в качестве

биологически активной добавки к таким косметическим средствам, как лосьоны, бальзамы, кремы. Препараты с мидийными компонентами, оказывают репаративное и омолаживающее воздействие на клетки кожи, а наличие меланоидинов задерживает проникновение жесткого ультрафиолетового излучения в глубокие слои эпидермиса (В.Н. Майсурадзе и др., 1987).

Нами разработан способ получения экстракта мидий в виде лиофильно высушенного порошка. Этот препарат сертифицирован и применяется как компонент в косметических композициях, способствующих нормализации обмена веществ в проблемной коже (Л.В. Симонова и др., 1998).

4. ВЫВОДЫ

1. Разработаны новые способы получения и промышленные технологии изготовления минерального адсорбента гидроокиси алюминия для конструирования высокоэффективных противовирусных и противобактерийных вакцин.

2. Научно обоснованы и предложены новые физико - химические и биологические методы контроля активности адсорбентов, применяемых в составе депонированных вакцин.

3. Предложен высокодисперсный 6%-ный гель ГОА для конструирования противоящурных вакцин, позволяющий оптимизировать и сократить технологию двухфазного культивирования вируса ящура типов А, О и С до одной фазы, снизить себестоимость производства и увеличить объемы выпуска препарата в 1,8 раза.

4. Сконструирована, изготовлена и внедрена в технологический процесс изготовления гелей ГОА оригинальная установка для очистки сорбента от неорганических примесей и стандартизации его по физико-химическим параметрам. Использование установки позволило повысить активность препарата за счет ускорения процесса очистки, снизить потери и удешевить готовый продукт.

5. Установлена высокая эффективность применения высокоочищенного геля ГОА в качестве энтеросорбента, на основании чего разработан способ лечения желудочно-кишечных заболеваний неинфекционной этиологии у молодняка сельскохозяйственных животных.

6. Разработаны способы получения и технология промышленного производства водорастворимых форм хитозана для применения в различных областях биотехнологии.

7. Доказана возможность использования хитозана для выведения радионуклидов, тяжелых металлов и токсинов из организма сельскохозяйственных животных.

8. В экспериментальных условиях показана возможность и отработаны условия использования гелевых форм хитозана в качестве энтеросорбента при -желудочно-кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных. Установлено, что эффективность хитозана зависит от его фракционного состава, молекулярной массы и степени чистоты.

9. Комплексные испытания хитозана и его производных в производстве флокулянтов для очистки и концентрирования биосуспензий, изготовлении фитопрепаратов, биологически активных добавок к пище и лечебно-косметических средств позволили выработать рекомендации и утвердить нормативно-техническую документацию по использованию различных модификаций этого биополимера в народном хозяйстве РФ.

10. Разработаны экологически безопасные способы получения и промышленные технологии изготовления коллагенолитических протеаз из гепато-панкреаса крабов с использованием хитозановых композиций вместо органических растворителей.

11. Установлена возможность использования крабовой коллагеназы для дезагрегации тканей животных и доказана эффективность её применения для получения культур клеток. Разработаны и утверждены наставления по использованию коллагеназы в производстве противовирусных вакцин.

12. Дано научное обоснование и разработаны рекомендации по использованию крабовой коллагеназы при получении гидролизатов белков животного происхождения, а также для стабилизации коллоидной устойчивости пива, повышения качества мясных полуфабрикатов и других продуктов питания. Препарат сертифицирован для использования в пищевой промышленности.

13. В производственных условиях показано, что мидийные гидролизаты в составе кормовых рационов стимулируют рост, развитие и уровень естественной резистентности у молодняка сельскохозяйственных животных и птицы.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

По результатам исследований разработана и утверждена в установленном порядке следующая нормативно-техническая документация:

- ТУ 10-09-95-90 «Гель гидроокиси алюминия» (для использования в составе вакцин);

- ТУ 9337-008-111734126-01 «Хитозан» (для лечения и профилактики

желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных

животных);

- ТУ 9289-002-11418234-99 «Хитозан низкомолекулярный пищевой»;

- ТУ 9289-005-11734126-01 «Биологически активная добавка к пище «Фитохитодез-02»;

- ТУ 9339-003-11734126-98 «Сукцинат хитозана - сырье для производства косметической продукции»;

- ТУ 9281-004-11734126-00 «Коллагеназа пищевая»;

- ТУ 9158-002-11734126-96 «Коллагеназа для косметической промышленности»;

- ТУ 9263-006-11734126-99 «Экстракт мидий».

На разработанные препараты в государственных сертифицирующих органах получены наставления по применению, гигиенические и санитарно-эпидемиологические заключения. На производственных площадях ВНИ-ТИБП - ЗАО «Биопрогресс» осуществляется их промышленный выпуск и ведутся исследования по созданию новых биологически активных веществ из гидробионтов, животного и растительного сырья с целью применения их в медицине, ветеринарии, пищевой промышленности, очистке воды и других областях.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Передереев Н.И., Фоменко А.С., Байкиева Н.Г., Албулов А.И., Беляковская Н.И. Способ получения геля гидроокиси алюминия для культуральной про-тивоящурной вакцины. Авт. свид. № 566419, приор, от 19.03.75г., с. 1-7.

2.Демин Ю.В., Хорьков И.А., Передереев Н.И., Албулов А.И.Способ обработки геля гидроокиси алюминия для противоящурной вакцины. Авт. свид. № 738399, приор, от 16.06.77г., с. 1-11.

3.Албулов А.И.Сравнительная оценка физико-химических свойств геля гидроокиси алюминия, полученного различными способами. ЭИ «Передовой научно-производственный опыт в биол. промышл.», М, 1977, № 1-2, с. 4043.

4.Передереев Н.И., Хорьков И.А., Демин Ю.В., Албулов А.И. Гель гидроокиси алюминия для трехвалентной противоящурной вакцины. ЭИ «Передовой научно-производственный опыт в биол. промышл.», М., 1977, № 8, с. 3-6.

5.Передереев Н.И., Албулов А.И., Хорьков И.А., Омиржанов Д.О. Биологические свойства геля гидроокиси аллюминия для культуральной противо-ящурной вакцины. Инф. листок КазНИИНТИ, г.Алма-Ата, 1978, № 453, с.

1-5.

6.Хорьков И.А., Албулов А.И., Передереев Н.И., Омиржанов Д.О. Потент-ность противоящурной вакцины из культурального вируса, сорбированного на геле гидроокиси алюминия отечественного производства. Инф. листок КазНИИНТИ, г. Алма-Ата, 1978, № 462, с. 1-8.

7.Передереев Н.И., Албулов А.И., Омиржанов Д.О. Физико-химическая-ха-рактеристика нового геля гидроокиси алюминия для культуральной проти-воящурной вакцины. Инф. листок КазНИИНТИ, г. Алма-Ата, 1978, № 477, с. 1-6.

8.Хорьков И.А., Албулов А.И., Передереев Н.И., Демин Ю.В. Промышленное производство геля гидроокиси алюминия для трехвалентной противояшур-ной вакцины. Тез. докл. Всесоюзной конф. «Научные основы технол. про-мышл. произв.- ветер, биол. препаратов», г. Щелково, 1978, с. 124-126.

9.Хорьков И.А., Демин Ю.В., Албулов А.И. Механизация промышленных процессов отмывки геля гидроокиси алюминия от неорганических примесей. Тез. докл. Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препаратов», г. Щелково, 1978, с. 126-128.

10.Передереев Н.И., Байкиева Н.Г., Еремец Н.К., Албулов А.И., Митюшина И.П. Влияние способа отмывания алюмогидрогеля от минеральных примесей на его физико-химические и адсорбционные свойства. ЭИ «Передовой науч.-произв. опыт в биол. промышл.»,М., 1979, № 6, с, 10-12.

11 .Передереев Н.И., Хорьков И.А., Албулов А.И., Климова Т.П. Скорость седиментации алюмогидрогелей в связи с активной реакцией и режимом стерилизации в промышленном производстве. ЭИ «Передовой науч.-произв. опыт в биол. промышл.»,М.,1979, № 10, с. 3-7.

12.Передереев Н.И., Хорьков И.А., Иванов Н.П., Задорожный И.Ф., Албулов

A.И., Климова Т.П., Гиллер О.С., Тен В.Б., Асылбеков М.С. Способ определения адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия для биопрепаратов. Авт. свид. № 747890, приор, от 18.01.79г., с. 1-6.

13.Албулов А.И. Биологические и физико-химические свойства алюмогелей и некоторых бактерийных и вирусных антигенов в связи с адсорбцией при изготовлении биопрепаратов. Автореф. диссерт. канд. биол. наук,М., 1980, с. 1-16.

14.Рубан Е.А., Потемкин А.А., Демин Ю.В., А.И. Албулов. Автоматический контроль величины рН при промышленном производстве гидроокиси алюминия для трехвалентной противоящурной вакцины. Тез. докл. Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково, 1981, с. 231-232.

15.Самуйленко АЛ., Шапкина Т.А., Албулов А.И., Соколов В.Д., Соболев

B.В., Скичко Н.Д., Казаков М.А., Поляков Ю.В., Костина А.В. Способ изготовления- противоящурной вакцины. Авт. свид. № 1081853, приор, от 01.06.82г., с.1-12.

16.Самуйленко А.Я., Албулов А.И. Способ получения гидроокиси алюминия для адсорбированных противоящурных вакцин. Авт. свид. № 1284025, приор, от 24.01.84г., с. 1-4.

17.Самуйленко А.Я., Стрельников В А., Албулов А.И. Способ оценки адсорбционной активности геля гидроокиси алюминия для приготовления адсор-

бированных противоящурных вакцин. Авт. свид. № 1284026, приор, от 24.04.84г., с. 1-4.

18.Албулов А. И., Самуйленко А.Я. Способ получения гидроокиси алюминия для противоящурных вакцин. Авт. свид. № 1341820, приор, от 28.11.85г., с. 1-8.

19.Самуйленко А.Я., Шапкина Т.А., Албулов А.И., Стрельников В.А. Способ определения токсичности сапонина. Авт. Свид. № 1340913, приор, от 10.11.85г., с. 1-8.

20.Скичко Н.Д., Морозов Н.И, Албулов А И., Демин Ю.В., Кузовлев А.Р., Петрусенко ВЛ. Способ очистки геля гидроокиси алюминия. Авт. свид. № 1401808, приор, от 21.02.86г., с. 1-11.

21.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Скичко Н.Д., Еремец В.И. Безаммиачный гель гидроокиси алюминия для противоящурных вакцин. Тез. докл. III Все-союз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. пре-пар.»,М., 1987, с. 159-160.

22.Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Скичко Н.Д., Чертов В.М., Моковская Т.Ф., Шмаленко Т.Г., Еремец Н.К. Выбор методов оценки качества гелей гидроокиси алюминия, исполь-зуемых для производства депонированных вакцин. Тез. докл. III Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препар.», М, 1987, с. 157-158.

23.Красуткин С.Н.,. Самуйленко АЛ., Скичко Н.Д., Еремец В.И., Албулов

A.И., Стрельников В.А. Метод оценки качества сорбента при промышленном производстве противоящурных вакцин. ЭИ Передовой науч.-произв. опыт в биологической промышленности,М, 1987, №2, с. 7-8.

24.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Скичко Н.Д. Перспектива использования алюмоаммонийных квасцов при получении геля ГО А для биопрепаратов. Тез. докл. III Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл произв. ветер, биол. препар.», М., 1987, с. 158 - 159.

25.Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Скичко Н.Д., Албулов А.И., Казаков Н.А. Поляков Ю.В., Ольхов В.В. Эффективность трехвалентной концентрированной противоящурной вакцины. Тез. докладов III Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препар.», М., 1987, с. 37-38.

26.Самуйленко А.Я., Скичко Н.Д., Еремец В.И., Албулов А.И., Казаков М.А. Иммуногенные свойства экспериментальных противоящурных вакцин, изготовленных с безаммиачным гелем ГОА. Тез. докл. III Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препар.», М., 1987, с. 33-34.

27.Самуйленко А.Я., Стрельников В.А., Скичко Н.Д., Красуткин С.Н., Еремец

B.И., Албулов А.И. Влияние условий хранения биопрепаратов, содержищих гель гидроокиси алюминия и сапонин, на их безвредность. Тез. докл. III Всесоюз. конф. «Новые основы технол. промыш. произв. ветер, биол. препар.», М„ 1987, с. 161-162.

28.Албулов А.И., Скичко Н.Д, Самуйленко А.Я., Демин Ю.В., Морозов Н.И., Щардин СИ., Кузовлев А.Р., Петрусенко В.Л. Разработка и внедрение установки для очистки геля гидроокиси алюминия от неорганических примесей.

Тез. докл. III Всесоюз. конф. «Новые основы технол. промыш. произв. ветер, биол. препар.», М., 1987, с. 307.

29.Албулов А.И., Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Чертов В.М., Маковская Т.Ф. Закономерности синтеза алюмогидрогелей, используемых в производстве депонированных биопрепаратов. Сб. науч. тр. «Научные основы производства ветеринарных препаратов»,М., 1989, с. 39-43.

30.Стрельников В.А., Еремец В.И., Скичко Н.Д., Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Еремец Н.К. Иммуногенные свойства экспериментальных противо-ящурных вакцин, содержащих гель ГОА различного производства, в динамике хранения. Тез. докл. науч.-теорет. конф. мол. ученых, «Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии», г. Владимир, 1990, с. 69-70.

31 .Самуйленко АЛ., Белоусов В.И., Кузнецов Д.П., Албулов А.И., Романова М.В., Немчинов Н.Н. Использование адъювантов, способов их приготовления, контроля и применения при разработке противоящурных и других вакцин. Тез. семинара специалистов стран-членов СЭВ «Разработка и использование новых адъювантов для биотехнологических целей», г. Владимир, 1990, с. 26-27. .

32.Скичко Н.Д., Самуйленко АЛ., Албулов А.И., Дубенко В.К. Способ лечения диспепсии животных. Авт. свид. № 1628284, приор, от 12.03.90г., с. 1-4.

33.Гуславский А.И., Албулов А.И., Дамиров И.И., Качалов В.Н., Ковальчук Л.И. Центрифуга для сгущения суспензий. Авт. свид. № 1711391, приор, от 30.03.90 г., с. 1-9.

34.Дамиров И.И., Албулов А.И.,. Качалов В.Н., Ковальчук Л.И. Устройство для облучения жидкости ультрафиолетовыми лучами. Авт. свид. № 1750621, приор, от 25.07.90 г., с. 1-10.

35.0рлов Е.А., Дамиров И.И., Албулов А.И., Качалов В.Н., Ковальчук Л.И. Установка для фильтрования суспензий. Авт. свид. № 1761209, приор, от 14.05.90 г., с. 1-6.

36.Аднодворцев М.Ф., Панферова СМ., Гуславский А.И., Школьников Е.Э., Албулов А.И., Качачов В.Н. Использование центробежных насосов в ультрафильтрационной аппаратуре на основе полых волокон. Тез. докл. IV Всесоюз. конф. «Науч. основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препар.», М., 1991, с. 214-215.

37.Албулов А.И., Самуйленко АЛ. К вопросу определения качества вакцинных адсорбентов. Тез. докл. IV Всесоюз. конф. «Научные основы технол. промышл. произв. ветер, биол. препар.», М., 1991, с. 179-180.

38.Майоров А.Ф., Албулов А.И., Самуйленко АЛ. Способ получения колла-геназы. Патент № 2112036, приор, от 09.10.92г., с. 1-10.

39.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Белоусов В.И., Фоменко А.С. Применение хитозана и его производных в составе вакцинных препаратов. Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. «Вирусные болезни сельскохозяйственных животных», г. Владимир, 1995.

40.Величко Б.А., Шутова Л.А., Рыжакова А.А., Фоменко А.С, Албулов А.И. Способ получения сорбентов. Патент №2079359, приор, от 28.07.95г., с. 1-4.

41.Федонин М.Ю., Боресков В.Г., Албулов А.И. Способ производства солено-вареного продукта из говядины. Патент РФ № 2147204, приор, от 16.06.95г., с. 1-6.

42.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фоменко А.С., Соловьев Б.В., Ночевный В.Т., Майоров А.Ф., Тимофеева Е.Л., Маслов Е.В. Использование коллаге-назы из гепатопанкреаса крабов для получения культур клеток. Тез. докл. V Всероссийской конф. «Научные основы техн. промышл. произв. вет. биол. препаратов», г. Щелково, 1996, с. 327-328.

43.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фоменко А.С., Майоров А.Ф., Белоусов В.И., Качалов В.Н. Некоторые практические аспекты использования хито-зана. Тез. докл. V Всероссийск. конф. «Научные основы техн. промышл. произв. вет. биол. препаратов», г. Щелково, 1996, с 333-334.

44.Албулов А.И., Белоусов В.И., Самуйленко А.Я., Фоменко А.С., Мелешко В.Н. Перспективы использования хитозана в производстве вакцин. Тез. докл. V Всероссийск. конф. «Научные основы техн. промышл. произв. вет. биол. препаратов», г. Щелково, 1996, с. 335-336.

45.Костеша Н.Я., Гуслик Е.С., Албулов А.И., Фоменко А.С., Качалов В.Н. Перспективы использования препаратов из хвойных растений в ветеринарной практике. Тез. докл. V Всероссийск. конф. «Научные основы техн. про-мышл. произв. вет. биол. препаратов», г. Щелково, 1996,с. 309. -

46.Величко Б.А., Абрамова Г.В., Шутова Л.А., Рыжакова А.А., Албулов А.И., Фоменко А.С. Некоторые аспекты производства био-и фитосорбентов радионуклидов и тяжелых металлов. Тез. докл. V Всероссийск. конф. «Научные основы техн. промышл. произв. вет. биол. препаратов», г. Щелково, 1996, с. 311-312.

47.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Белоусов В.И., Фоменко А.С. Использование морепродуктов в биологической промышленности. Тез. докл. науч.-произв. конф., посвященной 100-летию Курской биофабрики», г. Курск,

1996, с. 8-9.

48.Албулов А.И., Костеша НЛ. Применение препаратов из хвойных растений для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней молодняка животных Тез. докл. Всероссийск. конф. «Инфекционные болезни молодняка сельскохоз. животных», М., 1996, с. 96-97.

49.Албулов А.И. Применение хитозана и его производных в составе вакцинных препаратов. Тез. докл. Всероссийск. конф. «Инфекционные болезни молодняка сельскохоз. животных», М., 1996, с. 64-65.

50.Симонова Л.В., Пашук Л.К., Албулов А.И., Фоменко А.С. Изучение эффективности некоторых гидробиотнов при использовании в качестве биологически активных добавок в косметических изделиях. Тез. докл. I Международ, науч.-практ. конф. «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике», М., 1996, с. 31-32.

51.Албулов А.И., Самуйленко А.Я. Морепродукты в производстве биопрепаратов. Тез. докл. конф. «Проблемы инфекционной патологии сельскохоз. животных, посвященной 100-летию открытия вируса ящура», Владимир,

1997, с. 68-69.

52.Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Еремец В.И., Казаков М.А. Совершенствование промышленной технологии производства противоящурных вакцин с целью создания ассоциированных биопрепаратов. Тез. докл. конф. «Проблемы инфекционной патологии сельскохоз. животных, посвященной 100-летию открытия вируса ящура», Владимир, 1997, с. 71.

53.Симонова Л.В., Пашук Л.А., Албулов А.И., Фоменко А.С., Бугорский Б.Г. Использование хитозана в составе косметических препаратов. Тез. докл. II Международ, науч.-практ. конф. «Биологически активные вещества и новые продукты в косметике», М., 1997, с. 13-17.

54.Новикова М.В., Албулов А.И., Фоменко А.С. Мидийный гидролизат - биологически активный компонент дерматологических композиций. Тез. докл. II Международ, науч.-практ. конф. «Биологически активные вещества и новые лродукты в косметике», М., 1997, с. 47.

55.Албулов А.И., Новикова М.В. Новые пищевые добавки на основе продуктов морского и растительного происхождения. Ж. «Пищевая и перерабатывающая промышленность», М.,1997, № 4, с. 56-57.

56.Албулов А.И., Маслак А.А., Мащенко Н.И. Разработка иммуностимулирующего препарата из природного сырья. Тез. докл. межрегион, науч.-практич. конф. «Обеспечение стабилизации АПК в условиях рыночных форм хозяйствования», Воронеж, 1997, с. 6-7.

57.Бойков П.А., Комаров Б.А., Албулов А.И., Фролова МЛ., Пилипейко Е.А., Шинкарев СМ., Лукьянова Е.М. Проблема удаления запаха из морепродуктов и пути ее решения. Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. «Научн. основы техн. промышл. производства», М., 1997.

58.Величко Б.А., Албулов А.И., Фоменко А.С, Кузьмененкова А.В. Разработка новой технологии получения фитосорбента широкого спектра действия. Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. «Научн. основы техн. промышл. производства»., 1997.

59.Комаров Б.А., Трескунов К.А., Албулов А.И., Фоменко А.С, Кузьмененко-ва А.В. Лечебно-профилактические препараты на основе хитозана. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 75-летию со дня рождения Чуклова Н.Ф. Щелково, 1998, с. 43/

60.Савелов A.M., Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Качалов В.Н., Кузьмененкова А.В. Применение препарата «Виватон» в ветеринарии. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 75-летию со дня рождения Чуклова Н.Ф. Щелково, 1998, с. 42.

61.Сушков И.В., Чикин В.Н., Албулов А.И., Фролова М.А., Фоменко А.С, Пилипейко Е.А. Использование хитозана в растеневодстве. Тез. докл. Все-российск. науч.-практ. конф., посвященной 75-летию со дня рождения Чуклова Н.Ф. Щелково, 1998, с. 44-45.

62.Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Качалов В.Н., Пи-липейко. Е.А. Препараты из мяса мидий как лечебно-профилактические средства при лечении молодняка сельскохозяйственных животных. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию Першина В. А., г. Щелково, ВНИТИБП, 1998, с. 36-37.

63.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фролова М.А., Фоменко А.С, Шинкарев С М. Использование хитозана в ветеринарии в составе средств для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка сельско-хоз. животных. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию Першина В. А., г. Щелково, ВНИТИБП, 1998, с. 38-39.

64.Албулов А.И., Фролова М.А., Фоменко А.С, Шинкарев СМ., Сладковская Е.В. Использование коллагеназы для повышения качества мясной продук-

ции. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию Першина В.А., г. Щелково, ВНИТИБП, 1998, с. 40-41.

65.Шубина Е.А., Мельник Н.В., Албулов А.И., Фоменко А.С., Шинкарев С. М. Концентрирование бактериальных культур с использованием хитозана и его производных. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 70-летию Першина В. А., г. Щелково, ВНИТИБП, 1998, с. 42-43.

66.Костеша Н.Я., Фролова М.А., Фоменко А.С., Албулов А.И., Трунов A.M., Шинкарев СМ. Экстракт сибирской пихты «Абисиб» - высокоэффективный лечебный адаптоген. Тез. докл. V Российск. национ. конгр. «Человек и лекарство», М., 1998, с.377.

67.Новикова М.В., ФоменкоА.С, Албулов А.И., Фролова М.А., Шинкарев СМ., Трунов A.M. Мидийные гидролизаты — новая высокоэффективная лечебно-профилактическая пищевая добавка. Тез. докл. V Российск. национ. конгр. «Человек и лекарство», М., 1998, с. 390.

68.Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Шинкарев СМ., Комаров Б.А., Енгашев СВ. Хитозан и коллагеназа - биологически активные препараты из морепродуктов в медицине и других отраслях народного хозяйства. Тез. докл. V Российск. национ. конгр: «Человек и лекарство», М., 1998, с. 342.

69.АлбуловА.И., Фролова М.А., Фоменко А.С, Шинкарев СМ. Мидийные препараты — новые продукты в косметике. Тез. докл. III Международ, науч.-практ. конф. «Биологически активные вещества, новые технологии и продукты в косметике», М.,1998, с. 24.

70.Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Шинкарев СМ., Трунов A.M. Новые эффективные лекарственные препараты из сырья природного проис-ходжения. Тез. докл. I Российск. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы медицинской экологии», г. Орел, 1998, с. 11-12.

71.Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Качаюв В.Н., Шинкарев СМ., Трунов A.M. Лечебно-профилактические пищевые добавки из продуктов морского и растительного происхождения. Материалы науч. конф. «Место фитотерапии в совр. медицине», г. Черноголовка, 1999, с. 4-7.

72.Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Албулов А.И., Бирюков А.Г., Иванов B.C., Соловьев Б.В., Моисеев А.В. Потенциальные возможности использования современной биотехнологии в биологической промышленности; Тез. докл. конф., посвящ. 100-летию ВИЭВ. М., 1999.

73.Костеша Н.Я., Дубровский А.К., Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Кузьминенкова А.В., Шинкарев СМ. Производство и контроль медицинских, ветеринарных препаратов, опыт применения и реализации их в странах СНГ. Вольгинский, 1999, с. 21-23.

74.Величко Б.А., Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Качалов В.Н., Шинкарев СМ. Новые высокоэффективные фитосорбенты радионуклидов и тяжелых металлов. Материалы науч. конф. «Место фитотерапии в совр. медицине», г. Черноголовка, 1999, с. 12-14.

75.Костеша Н.Я., Дубровский А.К., Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Кузьмененкова А.В., Шинкарев СМ. Экстракт пихты сибирской «Абисиб» - адаптоген и иммуностимулятор. Материалы науч. конф. «Место фитотерапии в совр. медицине», г. Черноголовка, 1999, с. 21-23.

76.Комаров Б.А., Трескунов КА, Фоменко А.С., Албулов А.И. Почему возрастает интерес к препаратам на основе хитозана? Материалы науч. конф. «Место фитотерапии в совр. медицине», г. Черноголовка, 1999, с. 23 - 25.

77.Новикова М.В., Албулов А.И., Фоменко А.С., Фролова МА, Шинкарев СМ. Мидийный гидролизат (МИГИ - К ЛП) как лечебно-профилактический препарат. Материалы науч. конф. «Место фитотерапии в совр. медицине», г. Черноголовка, 1999, с. 28 - 31.

78.Савелов-Дерябин A.M., Албулов А.И., Фоменко А.С., Фролова М.А., Трунов A.M., Кузьминенкова А.В. Препарат «Виватон» - залог долгой и вечной молодости. Материалы науч. конф. «Место фитотерапии в совр. медицине», г. Черноголовка, 1999, с. 35-37.

79.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фоменко АС., Фролова М.А., Шинкарев СМ., Комаров Б.А. Хитозан - новый препарат для медицины и ветеринарии. Тез. докл. VI Российск. национ. конгр. «Человек и лекарство», М.,1999, с. 379.

80.Боресков В.Г., Тюган И.М., Федонин М.Ю., Албулов А.И. Применение ферментных препаратов гидробионтов в технологии соленых мясных продуктов. Ж. «Мясная индустрия», М.,1999, № 6, с. 46-48.

81.Албулов А.И., Комаров БА, Самуйленко А.Я., Фоменко А.С., Шинкарев СМ. Разработка технологии получения натриевой соли сукцината хитозана. Матер. V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», М. - Щелково, 1999, с. 7-8.

82.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Нифантьев Н.Э., Фоменко А.С, Фролова М.А., Шинкарев СМ. Применение хитозана в ветеринарии для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных. Матер. V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», М. - Щелково, 1999, с. 115-117.

83.Албулов А.И., Симонова Л.В., Фролова М.А., Пилипейко ЕА, Фоменко А. С Перспективы применения хитозана в косметике. Матер. V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», М. - Щелково, 1999, с. 117-119.

84.Мельник Н.В., Скичко Н.Д., Лузан Н.С., Албулов А.И., Тройнин А.С. Сравнительное изучение концентрирования бруцеллезной суспензии из штамма-82 с помощью флокулянтов. Матер. V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», М. - Щелково, 1999, с. 169 - 170.

85.Мельник Н.В., Скичко Н.Д., Шубина ЕА, Пышкина Т.Н., Албулов А.И. Применение хитозана и его производных для концентрирования баксуспен-зий. Матер. V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитоза-на», М. - Щелково, 1999, с. 170 - 172.

86.Ильина А.В., Татаринова Н.Ю., Варламов В.П., Албулов А.И. Низкомолекулярный водорастворимый хитозана. Матер. V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана», М. - Щелково, 1999, с. 270 - 273.

87.Дубровский А.К., Албулов А.И., Фоменко А.С, Яковенко А.С, Манжурин Ф.И. Применение пищевых добавок «Абисиб» и «Хитодез» в комплексном лечении гастроэнтерологических больных. Матер, науч. конф. «Фитотерапия и лазеротерапия в XXI веке», г. Черноголовка, 1999, с. 20-21.

88.Комаров Б.А., Албулов А.И., Белов М.Ю., Самуйленко АЛ., Фоменко А.С., Шинкарев СМ., Трунов A.M. Способ получения натриевой соли сукцината хитозана. Патент № 2144040, приор, от 07.04.99г., с. 1-16.

89.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Фролова М.А., Шинкарев СМ., Пилипей-ко ЕА, Кузьминенкова А.В. Разработка новых лечебно-профилактических препаратов из морепродуктов и растительного сырья. Тез. докл. Всерос-сийск. науч.-практ. конф. «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной практике» Ставрополь, 2000, с. 70-72.

90.Еремец В.И., Самуйленко АЛ., Еремец Н.К., Албулов А.И., Казаков М.А Разработка методов и средств обеспечения качества противоящурных вакцин. Тез. докл. семинара-презентации инновационных науч.-технич. проектов «Биотехнология-2000», Пущино, 2000, с. 52-53.

91JIyina AV., Tikhonov V.E., Albulov A.J., Varlamov V.P. Enzymic preparation of acid free water soluble chitosan. J. «Process Biochimistry»,2000,V.35, №6, p. 563-568.

92.Кузьминенкова А.В., Албулов А.И., Фоменко А.С, Фролова М.А., Костеша НЛ. Разработка нового витаминного и профилактического препарата из хвои ели европейской. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 30-летию ВНИТИБП, г. Щелково,2000, с. 341 -342.

93.Шинкарев СМ., Самуйленко АЛ., Фоменко А.С, Албулов А.И. Результаты изучения сорбционных свойств различных форм хитозана. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 30-летию ВНИТИБП, г. Щелково,2000, с. 331 - 332.

94.Трунов A.M., Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Фролова М.А Применение коллагеназы из гепатопанкреаса камчатского краба в различных отраслях народного хозяйства. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 30-летию ВНИТИБП, г. Щелково,2000, с. 332 - 334.

95.Величко БА, Фоменко А.С, Албулов А.И., Самуйленко АЛ. «Фитосорб -728» для очистки питьевой воды и промышленных стоков. Тез. докл. Все-российск. науч.-практ. конф., посвященной 30-летию ВНИТИБП, г. Щелко-во.2000, с. 334-335.

96.Качалов В.Н., Албулов А.И., Фоменко А.С, Морозов Н.И. Новые технические решения в технологиях производства биологически активных веществ. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф., посвященной 30-летию ВНИ-ТИБП, г. Щелково,2000, с. 336 - 337.

97.Варламов В.П., Ильина А.В., Немцев СВ., Шинкарев СМ., Албулов А.И., Комаров Б.А. Некоторые аспекты химической и ферментативной модификации хитозана. Тез. докл. Всероссийск. науч.-практ. конф.,- посвященной 30-летию ВНИТИБП, г. Щелково,2000, с. 337-338.

98.Пилипейко Е.А., Албулов А.И., Фролова М.А., Новикова М.В. Испытания препарата «Мидиум» в составе рациона кормления цыплят. Тез. докл. Все-российск. науч.-практ. конф., посвященной 30-летию ВНИТИБП, г. Щелко-во,2000,с.339-340.

99.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Фролова М.А., Шинкарев СМ., Пилепей-ко Е.А., Кузьминенкова А.В. Разработка новых лечебно-профилактических препаратов из морепродуктов и растительного сырья. Тез. докл. Всерос-

сийск. науч.-практ. конф. «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной практике», г. Ставрополь,2000, с. 70 - 72.

ЮО.Чаленко Г.И., Герасимова Н.Г., Переход Е.А., Озерецковская О.Л., Ильина А.В., Варламов В.П., Албулов А.И. Производные хитина и хитозана как элиситоры фитоустойчивости картофеля. Ж. «Прикладная биохимия и мик-робиология»,2000, т. 36, № 4, с. 433 - 438.

101.Комаров Б.А., Албулов А.И., Трескунов К.А.,Погорельская Л.В. Некоторые аспекты фитохитодезтерапии и ее развитие. Материалы науч.-практ. конф. «Фитотерапия и здоровье», М.,2000, с. 31-33.

102.Костеша НЛ., Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фоменко А.С., Фролова М.А. Экстракт пихты сибирской «Абисиб» - эффективное фитотерапевти-ческое средство. Материалы науч.-практ. конф. «Фитотерапия и здоровье», М.,2000, с. 33-35.

103.Богатов В.В., Шомина С.А., Червинец В.М., Комаров Б.А., Албулов А.И., Фоменко А.С. Способ лечения периоститов. Сб. статей науч.-практ. конф. стоматологов республики. Уфа,2000, с. 39.

104.Курочкин А.А., Червинец В.М., Комаров Б.А., Албулов А.И., Фоменко А.С. Повышение чувствительности микрофлоры желудка и двенадцатиперстной кишки к низкоинтенсивному лазерному излучению с помощью хито-зана. Сборник статей VI Всероссийск. науч.-практ. конф. по квантовой терапии. М.,2000л с. 107-110.

105.Крапивина Е.В., Иванов В.П., Албулов А.И. и др. Влияние кормового препарата «Мидиум» на резистентность поросят-сосунов. Материалы международ, науч.-практ. и учебно-метод. конф. «Наука и образование - возрождению сельского хозяйства России в XXI веке», Брянск,2000, с. 341-343.

106.Самуйленко С.А., Самуйленко АЛ., Еремец В.И., Рубан Е.А., Яковлев Б.В., Бирюков А.Г., Албулов А.И., Большакова М.В., Васенина Т.И., Дада-сян А.Я. Способ определения токсичности и реактогенности масляных адъювантов и их компонентов. Патент № 2184568, приор, от 19.10.00 г., с. 1-12.

107. Быкова В.М., Варламов В.П., Немцев СВ., Албулов А.И. Способ консервирования икры рыб. Патент № 2170022, приор, от 24.02.00г., с. 1-6.

108.Комаров Б.А., Албулов А.И. Способ получения водорастворимых форм хитозана. Патент № 2215749, приор, от 14.06.01г., с. 1-16.

109.Комаров Б.А, Албулов А.И. Способ получения фитохитодеза. Патент № 2204402, приор, от 14.06.01г., с. 1-12.

110.Еремец В.И., Самуйленко АЛ., Салажов Е.Л., Кругликов Б.А., Еремец Н.К., Албулов А.И., Скичко Н.Д. Совершенствование технологии и методов контроля при изготовлении противоящурных вакцин. «Науковий вкггник национального аграрного университету» Кшв, 2001, № 36, с. 260-263.

111.Лузан Н.С., Скичко Н.Д., Мельник Н.В., Тройнин А.С, Албулов А.И., Шинкарев СМ., Еремец В.И., Фролов Ю.Д. Использование хитозана для осаждения бруцеллезной культуры, штамм 19. Сб. докл. Международ, конф. молодых ученых «Научные основы произв. Ветер, биол препаратов», г. Щелково, 2001, с. 127-129.

112.Шинкарев СМ., Албулов А.И., Фролов Ю.Д., Немцев СВ., Варламов В.П., Зацерковная Е.В., Ершов П.Б. Получение низкомолекулярного хитозана. Сб. докл. Международ, конф. молодых ученых «Научные основы произв. ветер, биол. препаратов», г. Щелково,2001, с. 169-174.

113.Пилипейко Е.А., Албулов А.И., Фролова М.А., Ершов П.Б. К вопросу использования препарата «Мидиум» при выращивании цыплят. Сб. докл. Международ, конф. молодых ученых «Научные основы произв. Ветер, биол. препаратов», г. Щелково, 2001, с. 174-176.

114.Комаров Б.А., Албулов А.И., Трескунов К.А., Погорельская Л.В., Черви-нец В.М. Некоторые проблемы инноваций с хитозансодержащими фитопрепаратами и перспективы исследований. 1-я Российская науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными растительными ресурсами и создания функциональных продуктов», М.,2001, с. 11-13.

115.Трескунов К.А., Комаров Б.А., Албулов А.И. Пролонгирование действия фитопрепаратов и усиление лечебного действия. 1-я Российская науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными растительными ресурсами и создания функциональных продуктов», М.2001, с. 271-272.

116.Крапивина Е.В., Иванов В.П., Албулов А.И., Пилипейко Е.А. Эффективность мидийного гидролизата при выращивании молодняка птицы. Ж. «Доклады академии сельсхозяйсвтенных наук»,2001, №4 с. 34-35.

117.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Варламов В.П., Немцев СВ., Быкова В.М., Трунов A.M. Некоторые аспекты промышленного выпуска и применения хитозана и его производных. Материалы VI Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана», М.,2001, с. 9-11.

118.Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Уша Б.В., Бирюков А.Г., Фролов Ю.Д., Моисеев А.В., Самуйленко С.А., Моисеева Н.А., Зацерковная Е.Б., Ершов П.Б., Шинкарев СМ. Разработка новых технологий и расширение сферы применения биологически активных препаратов (БАП) из гидробионтов. Материалы VI Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана», М.,2001, с. 56.

119.Комаров Б.А., Албулов А.И., Эстрина Г.А., Эстрин Я.И., Шевченко Н.А., Панина Р.И., Костюк Г.В. Исследование хитодеза и фитохитодеза как перспективных биологически активных пищевых добавок. Материалы VI Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитоза-на»,М.,2001, с. 195-198.

120.Крапивина Е.В., Иванов В.П., Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Фролова М.А., Шинкарев СМ. Состояние защитных механизмов поросят при различных способах использования гелевого раствора хитозана. Материалы VI Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитоза-на»,М.,2001, с. 199-200.

121.Мельник Н.В., Скичко Н.Д., Шубина Е.А., Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Шинкарев СМ., Фролова М.А. Применение хитозана для осаждения клеток пастерелл из бульонных культур. Материалы VI Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана»,М.,2001, с. 217-220.

122.Червинец В.М., Бондаренко В.М, Албулов А.И., Комаров Б.А. Антимикробная активность хитозана с разной молекулярной массой. Материалы VI

Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитоза-на»,М.,2001, с. 252-254.

123.Червинец В.М., Смоленская Л.П., Чекесов М.И., Албулов А.И. Опыт лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки хитозаном. Материалы VI Международ, конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хито-зана»,М.,2001, с. 255-258.

124.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фролова М.А., Трунов A.M., Зацерковная Е.Б., Ершов П.Б., Карманова Л.В. Перспективы применения фермента кол-лагеназа, полученного из печени ракообразных. Материалы IV Международ, науч.-технич. конф. «Пища, экология, человек», М., 2001, с.90-91.

125.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Фролов Ю.Д., Ершов П.Б., Зацерковная Е.Б. Хитозан и его производные в пищевой промышленности. Материалы IV Международ, науч.-технич. конф. «Пища, экология, человек», МД 001, с. 108 -109.

126.Крапивина Е.В., Иванов В.П., Старовойтова Н.П., Албулов А.И., Пилипей-ко Е.А. Эффективность использования поросятами биологически активного препарата Мидиум. Ж. «Вестник академии сельскохоз. наук»,2001, №6, с. 67-69.

127.Немцев СВ., Ильина А.В., Шинкарев СМ., Албулов А.И., Варламов В.П. Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана. Ж. «Биотех-нология»,2001, №5, с. 50-51.

128-Ilyina A.V., Gabdrakmanova L.A., Yusupova D.V., Albulov A.I., Varlamov V.P. Chitinolytic complex of Serratia marcescens as the tool in obtaining of low-molecular weight water soluble chitosan. Monograph. «Progress on chemitstri and application ofchitin and its derivatives», Polish Chitin Soc, Lodz, Ed. H Struszczyk,2001, V. 7 p. 57-63.

129.Криштофович В.И., Толстобокое О.Н., Албулов А.И. и др. Биохимические свойства и термостабильность ферментного препарата коллагеназа из гепа-топанкреаса камчатского краба. Материалы 4 Международ, науч.-практ. конф.т «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных», г. Троицк,2001, с. 107.

130.Самуйленко АЛ., Рубан Е.А., Еремец В.И., Албулов А.И., Феоктистов В.И. Выставка-ярмарка «Биотехника-2001». Ж. «Вестник Российской академии сельскохоз. наук», М., 2002, № 1, с. 88.

131.Червинец В.М., Бондаренко В.М., Смоленская Л.П., Албулов А.И. Ацилакт и пищевой хитозан в лечении язвенной болезни. Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитоло-гов,М.,2002, с. 273-274.

132. Албулов А.И., Фролова М.А., Шинкарев СВ. Некоторые аспекты практического применения хитозана и его производных. Ж. «Парафармацевти-ка»,2002, №8, с. 48.

133.Таирова А.Р., Самуйленко А.Я., Албулов А.И. Токсикологическая оценка хитозана из панциря камчатского краба. Ж. «Доклады академии сельскохоз. наук», М.,2002, с. 40-41.

134.Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Фролова М.А. Хитозан в косметике. Монография «Хитин - Хитозан», М.,2002, с.360-363.

135.Албулов А.И., Фролова М.А. Морские водоросли: путь к красоте. Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии»,2002, № 5 (24),с.9.

136.Албулов А.И., Фролова М.А. Хитозан: строение и свойства. Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой химии»,2002, № 1 (20),с.17.

137.Албулов А.И., Фролова М.А. Мидии для красоты и здоровья нашего организма. Ж. «Сырье и упаковка для парфюмерии, косметики и бытовой,химии», 2002, № 6(25), с. 16.

138.Varlamov V.P., Nemtsev S.V., Zueva O.Yu., Khismatulin M.R., Khismatulin R.G., Albulov A.I. Production of chitin ahd chitosan from bees. Advances in chitin science, 5-th Asia Pacific Citin and Chitosan Symposium & Exhibition, Bangkok, 2002, March 13-15 v.5, p.22-24.

139.Немцев СВ., Албулов А.И., Варламов В.П. Современные тенденции в технологии получения хитина и хитозана. Тезисы докладов Первой Международ, конф. «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки»,М.,2002, с. 68-69.

140.Антипова Л.В., Албулов А.И., Донец А.А. Положительное воздействие коллагеназы на структуру мясного сырья. Ж» «Мясная индустрия»,2002, № 2, с. 45-47.

141.Албулов А.И., Фролова М.А., Васильченко О.М. Новое косметическое сырье из морских водорослей. Материалы VII Международ, науч.-практ. конф. «Косметические средства и сырье: эффективность и безопасность»,М.,2002, с. 37-38.

142.Ершов П.Б., Шинкарев СМ., Коржов В.В., Фролова М.А., Албулов А.И. Применение биологически активных добавок из морепродуктов при повышенных физических нагрузках. Сб. докл. Междунар. конф. молодых ученых «Научные основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов». Щелково, 2002, с. 166-168. ,

143.Фомичев Ю.П., Стрекозов Б.А., Албулов А.И., Шинкарев СМ. Способ обработки спермы быка. Патент № 2223718, приор, от 20.03.02г., с. 1-10.

144.Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Фоменко А.С., Фролова МЛ., Ермишина И.Г., Шинкарев СМ. Способ получения трипсина. Положительное решение по заявке на изобретение № 2002134730, приор, от 24.12.02г.

145.Албулов А.И, Самуйленко А.Я., Фролова М.А., Шинкарев СМ. Хитозан как средство лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохоз. животных. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Современные вопросы патологии сельскохоз. животных», г. Минск,2003, с. 33-34.

146.Комаров Б.А., Трескунов К.А., Албулов А.И. Фитохитодезтерапия - становление, развитие и перспективы. Сб. науч. тр. Международ, науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы валеологии, экологии и нетрадиционной медицины», г. ДнепропетровскДООЗ, с. 177-181.

147.Албулов А.И., Шинкарев СМ., Трескунов К.А., Червинец В.М., Комаров Б.А. Фитохитодез-02 - новый сублингвальный хитозансодержащий фитопрепарат. Сб. науч. тр. Международ, науч.-практ. конф. «Актуальные во-

просы валеологии, экологии и нетрадиционной медицины», г. Днепропет-ровск,2003, с. 181-185.

148.Албулов А.И., Фролова М.А. Хитозан: вчера, сегодня, завтра. Материалы VIII Международ, науч.-практ. конф. «Косметические средства и сырье: эффективность и безопасность», М,2003.

149.Масимов Н.А., Лебедько СИ., Албулов А.И., Шинкарев СМ. Клинические признаки и результаты бактериологических исследований при пиодермитах собак. Материалы 11 Московского Международ, ветер, конгресса, М.,2003, с. 14-15.

150.Шубина Е.А., Скичко Н.Д., Мельник Н.В., Ставцева Л.Я., Попова Т.Е., Шегидевич Э.А., Албулов А.И. Применение хитозана для связывания клеточных компонентов пастерелл. Материалы- Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 134-135.

151.Албулов А.И. Разработка промышленных способов получения сорбентов, для биотехнологических целей. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 170174.

152.Албулов А.И., Фролова М.А., Пилипейко Е.А., Крапивина Е.В., Старовойтова Н.П. Влияние препарата «Мидиум» в рационе питания молодняка сельскохозяйственных животных и птицы на гематологические показатели. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв.- ветер; биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 175-178.

153.Албулов А.И., Фролова М.А., Пилипейко Е.А., Крапивина Е.В., Старовойтова Н.П. Эффективность использования препарата «Мидиум» при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 179-182.

154.Шинкарев СМ., Албулов А.И., Самуйленко АЛ., Фролова М.А., Фоменко А.С, Кузнецов П.А. Технологические подходы к стандартизации качества хитозана. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 183-186.

155.Комаров Б.А., Трескунов К.А., Албулов А.И., Погорельская Л.В. Биохимические аспекты действия фитохитодезов. Материалы Международн.науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелко-во,2003, с. 187-191.

156.Трескунов К.А., Комаров Б.А., Горошетченко А.В., Широкова O.K., Игнатьев Ю.Г., Албулов А.И. Клиническая фитология и фитохитодезтерапия, при болезнях органов дыхания. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 191194.

157.Евтихов П.Н., Марушина С.А., Потрехалина Т.А., Албулов А.И., Фролова М.А., Трунов A.M. Сравнительная оценка протеолитической активности ферментных препаратов, получаемых из животного и растительного сырья. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелково,2003, с. 195-198.

158.Дубровский В.И., Дургарян Л.А., Савин СВ., Албулов А.И., Фролов Ю.Д. Применение полихита и хитана в сочетании с тренировками на тренажерах, аквааэробикой в профилактике ожирения. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. Щелко-во,2003, с. 240-241.

159.Дубровский В.И., Ершов П.Б., Албулов А.И. Применение биологически активных добавок и специальных упражнений в комплексной системе подготовки- юных футболистов. Материалы Международ, науч.-практ. конф. «Научные основы произв. ветер, биол. препар.», г. ЩелковоДООЗ, с. 242-243.

160.Албулов А.И., Шинкарев СМ., Самуйленко А.Я., Фролова М.А., Фоменко А.С, Лебедько СИ. Коррекция качества хитозановых. препаратов в про. мышл. условиях. Материалы VII Международ, конф «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана», С-Пб - Репино,2003, с. 9-11.

161.Албулов А.И., Белоусов В.И. Промышленные технологии получения биосорбентов. Материалы VII Международ, конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана», С-Пб - Репино,2003, с. 215-217.

162.Балышева В.И., Аронов Р.Б., Жестерев В.И., Марквичева Е.А., Черняева И.С., Албулов А.И., Шинкарев СМ. Иммобилизация перевиваемых клеток ПСГК-60 и гибридомных клеток 88-3 в альгинатхитозановые микрокапсулы. Материалы VII Международ, конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана»,С-Пб - Репино,2003, с. 224-226.

163.Комаров Б.А., Албулов А.И., Погорельская Л.В., Трескунов К.А. Некоторые биохимические аспекты сублингвальных хитозансодержащих фитопрепаратов. Материалы VII Международ, конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана»,С-Пб - Репино,2003, с. 246-250.

164.Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Еремец В.И., Ершов П.Б. Хитозан в составе биологически активных добавок к пище. Материалы VII Международ, конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана»,С-Пб -Репино,2003, с. 271-272.

165.Жаринов А.И., Евтихов П.Н., Марушина С.А., Албулов А.И. Изучение возможности ферментной модификации мяса кур яйценосной породы. Материалы V Международ, науч.-технич. конф. «Пища, экология, человек», М.,2003, с. 125-126.

166.Немцев СВ., Зуева О.Ю., Хисматуллин М.Р., Варламов В.П., Албулов А.И. Получение хитина и хитозана из медоносных пчел. Ж. «Прикладная биохимия и микробиология», 2004, т.40, № 1, с. 46-50.

167.Албулов А.И., Борода В.А., Крапивина Е.В., Кривопушкина Е.А., Иванов Д.В. Эффективность применения хитозана и фитохитодеза при выращивании телят. Сб. науч. работ «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества», Брянск,2004, с. 276-280.

168.Комаров Б.А., Албулов А.И., Шинкарев СМ., Фоменко А.С Качество хи-тозансодержащих фитопрепаратов для фитохитодезтерапии. Материалы 5 Международ, науч. конф. «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения», г. Черноголовка,2004, с. 279-284.

169.Албулов А.И., Самуйленко А.Я, Фролова М.А. и др. Перспективы применения низкомолекулярных хитозанов в производстве БАД. Материалы 5

Международ, науч. конф. «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения», г. Черноголовка,2004, с. 312-319.

170.Комаров Б.А., Трескунов К.А, Погорельская Л.В., Червинец В.М., Соколова Н.И., Албулов А.И., БуяновскаяС.К., Гамзазаде А.И., Фоменко А.С, Шинкарев СМ. и др. Фитохитодезы и хитозансодержащие фитомази, используемые для профилактики и в комплексном лечении методами фитотерапии. Материалы 5 Международ, науч. конф. «Фитотерапия, биологически. активные вещества естественного происхождения», г. Черноголовка,2004, с. 318-326.

171.Албулов А.И., Крапивина Е.В., Борода. А.В., Талызина ТЛ. Влияние скармливания хитозана и фитохитодеза на резистентность организма телят. Ж. «Достижения науки и техники АПК», 2004, № 3, с. 24-27.

172.Крапивина Е.В., Старовойтова Н.П., Талызина ТЛ., Гамко Л.Н, Албулов А.И. Влияние уровня кормовой добавки «Мидиум» на естественную резистентность и иммунный статус организма у свиней в условиях повышенной < плотности, загрязнения почвы - радиоцезием. Материалы Международной науч.-практ. конф. «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества», Брянск, 2004, с. 241-243.

173. Крапивина Е.В., Старовойтова Н.П., Гамко Л.Н., Иванов В.П., Албулов А.И. Естественная резистентность молодняка свиней при добавке в их рацион «Мидиума».Ж. «Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук»,2004,№4, с. 61-65.

Отпечатано 0 0 0 "Мещера" зак №043 тир 100экз

40229