Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка микробиологического метода контроля эффективности антибиотикотерапии тяжелых форм гнойной инфекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка микробиологического метода контроля эффективности антибиотикотерапии тяжелых форм гнойной инфекции"

МССИОВСШ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДАМЯ ки.И.М.СЕЧЕНОЗА

На правах рукописи

РОМАНОВСКАЯ Лили Михаиловна

УД!'. £?Хб- 002.3-078:57.083.3

' РАЗРАБОТКА М1Ж1ШШ0ГПЧЕШГ0 ШОдд ¡Ш'гРОЛЯ Э^ШИВНОСТИ АН'Д] Б1101 ¿1КОХ'ЬРАШИ 'ШВАЛ ¿0?« ГНОЙНОЙ ИИфЕК;.

(Специальность: 03.00.07 - микробиология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата иедицинских наук

чок^н -

Работа выполнена па кафедре микробиологии Московской кодитшсиой акадгиии -ии.П.М.Сеченова.

Научную руководители: Лауреат Государственной прении ССОР, академик АаН СССР, доктор ыодпцчнских на>к, профессор д.А.ВОРОБЬЕВ

доктор ¡.-.ед.щчиски>: наук, профессор А .С-.БУКОВ

О фа nuenzme оппоненты : доктор медицинских наук, профессор и.п.фсшнд доктос Сиологсчсзках наук, профессор Г.И.Е20В

' Ведущая органиэация - 4е:п ральний орда на Левине институт усовершенствования врачей.

SawiTfc диссертации состоится |Г " _ 1992 г.

в _ часов па заседании Специализированного совета

Ш Д.074.05.10 при Московской иедицинокой аке.дяаии :iy.I!.¡,i.Сеченова.

С зиссертациеЛ цопно ознакомиться в библиотеке Московской иедкцкцекой ах-дешш ки.Н .У.Сеченова

Автореферат разослан " " ____ 1992 г.

Учи сг-крятарь Специал:; :>кровьпногс совета, кандидат не д. паук

А.Ю.Миронов

Ста^ гситгциЗ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЮТН

Современная гнойная иь^.-окция у болышх характеризуется увеличением тякести ен течения и быстрым распространенней инфекционного .¡роцесса от ограниченных дс г еперали „печных форм. Это обусловлено возрастанием л ее 'этиологии роля аэробных и анаэробных граиотрицатсяышх игигрооргапкзйся: представителей гооас-вйг'1аоввб » нефгрченгарупшнх с&ктерий- бектерсидов, у.'-'гой-чивых к действию большнночва антибиотиков.

Тяяеоть йнфияциа, вызванных граыотр:'цательниии белтеритя, определяется комплексом свойств патогенности, зключающик токоано-оиразование, ферментативную активность, здгея'.:» -;,я., что клини-чеоки проявляемся быстрый иараоганием оикптоиоз ингокоакоцяя, ка-пиллпротокоикг'с-;, изменеанев точение («ствболпчос-сих процессов и резкий сшиениен защитных оиц ор?ивкзма.

Неоиоч'ря на постол.Чьое внедрение в клиническую практику новых элективных антибиотиков и .хилюпрепервтов лечение больных с гнойво-селтипеокими заболеваниями БЫЗЫБае^' серьезные затруднения. Это во многом определяется отсутствием простнх и инфорузтивнах

экслрзос-тсотол контроля за ядзкватностьи назЕачзсцэя проводи/

ной антибактериальной терапии.

Основой тактики ведении тяге слых больных о гкойкс-ссптичеаки-ии заболеваниям является обязательное назначение коибнйьииЯ антибиотиков мрокого спектра действия. Подбор этих комбинация-, как правило, осуществляется зипирически или с учетом результатов определения чувствительности диско-диф^узионнии и?тодои. При генерализован них уормзх гнойной инфекции в силу гянести состояния больного, связанного с интоксагсоцией организма, ивруавШ1я-г.1 геао,.?ааии-кв и метаболически;: гл^цесеон, оценить адекватное;--

актибиотякотеропии из осковс только клинического течения заболевания в силу отсутствия признаков блогроз по..ояител£Ной динамики не чредставлнетсп вогпожныы. Известные лабораторное методы контроля течения инфекционного процесса (определен;,'« антибиотикочув-опмгсльности, йэриакокииетикн препаратов к др.) трудоемки, их результаты удается учесть на 3-4 день от но-шла исследования. В овя-зи о этим соедание для клиники простого п пн;-орма? ¡виого игтода Кйпгроля ¿Л^сКТ I;лйи йГёр8ШН» ^ллОГОн иёииХО— дик'.Ый.-. С точка зрения требований клиники такой метод должен взвить 'индивидуальные вариабельности фармакокииегики антибактериальных препаратов и соответ тш.е создаваемых в крови уровней антибиотиков степени чувствительно«« возбудителя, поскольку именно это соответствие лег;:г б основе хаииогерапевгического эффекта.

Цель работы. Целью настоящей работи является разработка и внедрение в лабораторную практику ускоренного метода для контроля а прогнозирования эффективности антибактериальной терапии гнойно-воспалительных заболеваний.

Задачи исследования:

1. Определение структуры возбудителей гнойной инфекции ъ многопрофильном стационаре у больных, ранее получавших антибактериальную терапию.

2. Количественное определение микрофлоры, выделенной из различных биосубстратов больных для оценки сякесги гнойно-воспалительных процессов различной локализации.

3. Определение антиоиотикочувотвительнооги возбудителей гиог.яоД индекции, в той числе к препарата» из группы фторхино-

'+, Определение антнбпотикочулс.сыгтельностй выделенной пик-

-роторы методом оерпяных разведен;!»! к »«¡¡.чоглняозуди^а и бегает п

лактаиныи антиоиотикаи при длух никрооишс нагрузках (10 и 10 КОЕ/ьл), чю моделирует гкойно-^ооналиг^льные процессы средне-л тякести и тяжелые формы гнойной инфекции.

5. Изучение кинетики гибели основных возбудителе;: гнойно;; инфекции под действием азлоциллани и карбекнщшшда, а такяе их комбинаций о генташщикон для разработка ох.эд рациональной ак^'И-биотикогерапии.

6. Разработка и внедрение в микробиологическую практику ускоренного метода определения антибактериальной активности сыворотки крови и других биосубстратов больного после 2зеде::;;я ouj аитибиотиког дал оценки и прогнозирования эф^ективностй антибактериальной терапии.

7. Изучение на субклеточной уровне иеханизиа антимикробного действия сыворотки крови больного после введении с ¡.-у оксацн::;:::;!п в отношении тест-штампа staphylococcus аигеиз TVood-'t€.

Научная познана. Впервые были выявлены особенности структур:; возбудителей гнойно-воспалительных заболеваниМ у Сольных, pa::.-; о получавших антибактериальную терапию.

Впервые был разработан дий^оренцировялный подход к опре^Л'.— нию ангибиотикичувствительности апкпоорганпзиоЕ при гнойно-воспалительных заболеваниях средней тяжести и генерализозаняи/ ..орыал гнойной инфекции.

С целью прогнозирования э.&ектизности акгийиог/хотерзп:«;: г,ц-ла изучена кинетика бактерицидного э^екга чнгабиотикоз ;; т/. комбинаций в отнооении основных возбудителей гнойной и «'-¿сади п;;:: различных иикроо'нше нагрузках (105 и Ю' КОЕ/ш;).

- б -

Ргчроботпн и л;-»елр«н ь и*ki«i6hüлогическуи пвакгику '.окоренный !.ш7чд определения аати(.'актеривлььой акгилгпь-ли о^ворогки крови и других: биосуСигратов сольного пссле введения шдогё'кшкон для оценки и liporHui.npoBai.i-T, sfu-jexii^HCCTii ашгаОхотгзигерашш. Метод дает возионноси ьа ос йодов* в пплуча&мьу донных судить о количественно;! чувствительности возбудителя к ани-чнтти'саи и их концсйтраципм б сыиоротке крови' и других биосуботратех больного и на на этой пенсы.; прогчознровягь клиническую эффективность тера-вчи• Прогностическое значеиие -»ти бактериально« титра сыворотки и других биооубстратов больною после взодения антибиотиков варьирует в зависимости от свойств выделенного от данного больного возбудители- Метод пригоден для контроля эффективности ке только tioab-, но и комбинированно!; антибиотикотерапии и позволяет индивидуализировать эту терапио и корректировать ее реиш.

Вперзке не субклеточной уровне был изучен механизм сочетаа-вого антимикробного действия сыворотки крови и оксациллина. В результате связывания антибиотика с белкайи крови и интенсивного от-лохения этих белков на клеточной стенке стафилококков происходит усаленная концентрация препарата на поверхности бактерий и последующее проникновение к иишени. В данном случае белки креви следу-от рассматривать как векторы, доставлявшие антибиотик к бактериальной клетке.

Практическое значение работы. Разработанный метод позволял рекомендовать индивидуальные схемы применения комбинаций гзнта-■.лцина с карбеници длиной та езлоциллиноа при лечении тяжелых в хронических ¿юрц гнойно-воспалительных заболеваний, особенно вы-зкваеиых P.aeruginosa.

Ускоренный метод определения антибактериальной активности

„р»воротки крови и других биосубстратов больного после введ-л ил ему антибиотиков позволил прогнозировать эффективность и корректировать BU-oop лрс-ларатов с учетов значения тмтра для больных с т.'мелшн ¿opi-rativ гнойной инфекции: послеоперационными ослоциснин-Lii!, гнойно-деструктивными процессами в легки};, посттравиатичг.зкп-ь!И осложнениями, сепсисом и пр. Пользуясь эти и методой, в течение двух суток от момента начала антииактериальнол терапии удается установить ее адекватность или быстро провести соответствующе коррекцию. Проведение такого контроля о назначением комбинаций антибиотиков позволило получить терапевтический эффект у 90,2% больных с тяжелыми и хроническими формами гнойной инфекции (до применения метода эффективность составляла 63)4). ч

Проведенные исследования показали необходимость учета вели- • чины посевной дозы при определении антибиотакочувствительности микроорганизмов в зависимости от тяяеоти гнойно-воспалительного процеосе, так как недооценка этой величины является одной из частых причин отрицательных результатов аитибиотикотерапии при генерализованных формах гнойной инфекции.

По результатам исследований разработаны, утверждены Шниатер-ством здравоохранения РСФСР и изданы методические рекомендации по лабораторным методам контроля эффективности антибактериальной терапии.

Внедрение.

Т. Изданы методические рекомендации "лабораторные методы контроля эффективности антибактериальной терапии".

2. Разработанные на основание результатов настоячс-го иссло-лозапил методики внедрены в Московской областной научно-исоледо-ветельском ■клиническом институте яц.Ц.Ф.Влздимирокого к в 9 центральных районных и городских больницей Московской облаоги.

3. Получено 2 удостоверения на рационализаторское предложение по лабораторный катодам контроля эффективности антибактериально:; ¡терапии, а также диплом участника ВДНХ.

Апробачич ьаботк. Материалу диссертационно'/, работы доложены и обсуздени на:

1. Научко-практичеокоя конференции молодых ученых и специалистов • ¡московской области 15.0!?.85 г.

2. Циклународном симпозиуме "Место иллоцина в группе амино-глнкозидкых антибиотиков (Цооква, 22-05.86).

3. 1-й Всесоюзной научной конференции "Актуальные проблемы нозокошельных индекци!: и лекарственной устойчивости цикроорганаз-!-!ов (Минск, 0кт.1586 г.).

•4. Иездународной симпозиуме "Новые возможности лечении воспалительных заболеваний, вызванных услсвно-пагогенныш! микроорганизмам (препарат Таривид") (Москва, 23.10.86).

5. Всесоюзной научной конференции молодых ученнх и студентов -225 лет I м:.2{ (Москва, до::. 1990 г.).

6. Научной конференции кафедры микробиологии (Цосква, 27.10.91).

Публикации. По нагсриалам диссертации опубликовано II работ.

- Структура и ебьец диссертации. Диссертация соотонт из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследогвний, закла-чеш;я, выводов и указателя литературы. Работа изложена на страницах ыааинопиои, иллюстрирована 18 таблицами и 3 рисункаии. Библиографический указател^ содержит 158 источников, в той чк-'ло 68 отечественных и 90 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Представленные в работе материалы основа ны на обследовании 209 больных, находившихся па лечении в урочоги ческоа отделении Московского областного научнэ-псследовательсиого клинического института ш.',5.Ф.Владимирского, 418 больных отделения торакальной хирургии и 3SI больного отделения интенсивной терапии этого ке института. У 256 обследованных больных проводили определеш]е антимикробной активности сыворотки крови и других био-оубстратов после введения ии антибиотиков.

Материалом для проведения бактериологического исследования у больных I группы слупила моча, у больных П группы - иокрота и оодеряимгз плевральной полости и у больных 'Л группы - гной, цереброспинальная жидкость, кровь, мазки из зева и носа.

Исследование проводили согласно общепринятой методике. Идентификацию выделенной грамотряцательнол ыикро^лоры и определение

о

антибиотикочувствительности проводили с поаоцью скоростнол авто-цатизирозаиной системы üs-2 (<гириы "Збботт", CülA). Кинетику гибели бактерий изучали г,а научной модуле этой не сястеиы. Антибактериальную активность сыворотки крови и других биосубстратов определяли согласно собственной методике (рис.1).

Электронноиикроскопичеокое исследование проводили с использование:! электронного ынкрпскопа УЕМ-7А.

Полученные результаты обрабатывали статистически по И.П.Аз-ыарчну и А .А.Воробьеву (1962).

Результаты и" оослуждсние. С цель^ изучения этиологического фактора в развитии уроин.пекций был проведен анализ результате!; бактериологического исследования 717 анализов ночи от ¿09 Сольны/ с острыми и хронически»:! ик;ск:-;'.Я1ги. Выделена ытаик5 раз-

»¡А&ОР'ЛТфтЫИ

ффжтикостпи аж

птегаозд

Больной с гнойной инспекцией

. ¿аОор патологического

матера ала для 6тонолиза

За Вор крови

и других ииссудсп7рато6 после й&гь'ениа аншипиотшай

Д. /Я •щи часоааа.

КулЫгшрП.

. Ьхчасиооя 1 культура.

О

инро5иа& бзбесь Ф До идентисрик&ции и определенна, антибиотика-чувствительности

Церч*

0.5Ь6г.а пост авр-знтемвпь-н от

Ю №(.

«л А*я тэнсспых.

форм гнойной инфекции

<П'1<Х Iй Ш Для ич-рзиции лггаои и

срсЪиаА

фор/ч

гляжз^ти

Ж. Титрование & МПд

д д дд

<УтЛЩЪЯХЪ фм BiCCyrC7T.iT Ой™ КЛЕ-

шггрош биосуесг-й гл ч ми/ерэвг. взвеси

IV. Шёт результатов: за Ьеличину антибактериального титра исследуемого ЪиосуЪстрата принимается последнее раз&едениг с Видимым отсутст&исл роста.

Значение антибактериальной активности оиосубстратод при эсрфекмибнои

диосфитрат Л 14. т и б и. от и. к и.

Аниноглик Пеници.?. Цчфалссп Р1и<ра лпи*^ ЛеЬолиц&т. Малрслиды

Си&сропзха кроНи 71:1281 >1:122 У i-.ll у г-г >1:4/

Желчь ><:32 > Г-32 У V-16 УГ-16 >1-16 >4:16

Моча > С 256 > \'-2йо у 1:8 У 1:52 у 146 —

с су? а г: «ч* >С2 >1:46 > 1:2 >/:2

Л и Л 6 0 г > 1:512 , ::Л2 — >1:64 у 1:32 —

^ичных иикроорганнадав, принадлежащих к 14 видан и их ассоциаций. Наиболее чаото из мочи высевалась Escherichia coli (33,9;S)- Эп-теробектерии выделены в 78,4?5 всех анализов. Нефериентиругавде граиотридательные бактерии высевались в анализов.

Бактериурия, превышающая ГО"5 КОЕ/ил, отмечена соответственно у 2,656% и 27/5 больных о оотрыын, осложненный:! и хронически-ии урологичеокиии инфекциями.

При изучении чувствительности к антнбиотикаи основных возбудителей уроинфекций установлено, что выделенные ытаимы характеризовались мнояеотзенной ангибиотикореэистентноотыэ, за исключением авлоциллина, гснтаиицина и амикацина.

При изучении офлоксацина з сравнении о налидпксоьой кислотой з отношении 289 итамыов полирезистентных знтеробактеряй и псевдо-аонад установлено, что активнооть. первого была достоверно выпе (р< 0,05). Чувствительность энтеробактерий к офлоксацину превышала ЭЧ%. Клиничеокая эффективность офлоксацина такяе значительно превышала таковую налидиксовой киолоты. Отрицательный посев ыочи после куроа лечения офлоксацинои был у 9'i,l% больных острыми уро-инфекцияии. Снижение степени бактериурии было у обследован-

ных больных.

При анализе структуры возбудителей гнойно-септических заболеваний в торакальноа хирургической отделении установлено, что из кокроты и из. содеркииого плевральной полости наиболее чаото высо-валась Klebsie'la spp. (27,3% И 28,7/j).

Количественный анализ выделенной микрофлоры показал, что ъ 2о,6% анализов ыокроты и 43,5/j анализов еодермшох'о плевральной полости степень цикробкоЦ обсемененности превышала 10 KOS/u::.

При изучении олюструктурч возбудителе.'. гнойкод ак^екцаи- ь отделении интенсивно;; терапии установлена, что из различии/ С;:о-

.¡убстратов больных этого отделения преимуцеотваццо выоевалс.оь р.аегие1поеа и другие нзуерментирующие бактерии, а также энте-робактерпи и разнообразна ассоциации микроорганизмов.

Среди больных отделечия интенсивной терапии преобладали больные с тяаелыш! гнойно-вооаалительными процеооаии. Из 3^1 болнгаго диагноз сепсиса был, у 83 человек, перитонит - у 69, гнойно-деструктивные процессы в легких - у 126 человек, посттрав-иатичеокие осложнения - у 58 человек и прочие формы гнойной инфекции - у 25 человек.

Степень обсемененпости мокроты, раневого отделяемого, иазков из зева и носа больных отделения интенсивной терапии превышала 10 КОЕ/ил в 54-/о всех первичных анализов.

• Выделенные знтеробактерии и ацинатобактеры были наиболее чувствительны к аыикацнну, цефотаксиму, генташщину, тогда как и выделенные синегнойные палочки были наиболее чувствительны к ака-кацину.

Чувствительность к пенициллинам широкого спектра действия была изучена у 170 птаинов энтеробактерий и 43 итэьшов поевдомо-над. Определение проводилось методой двукратных серийных разведе-

с п

Ш!й в иясо-пептоннои бульоне при иикробной нагрузке 10 и 10' КОЕ/ыл. Обнаружены значительные различия в активности пеницилли-•нов в отношении энтеробактерий и пзевдоыонад при 100-кратном увеличении внокулюыа. При посевной дозе Ю5 КОЕ/мл ЦПК карбеницилли-на, азлодаллина составляли в орбднеи 2-128 игк/ил, то еоть их значения находилась в пределах терапевтических концентраций, которые создаются при назначении этих антибиотиков по стандартным охеиаи. Такии образок, все штаииы были чувствительны к антибиотикам. При пооеввой дозе Ю7 КОЕ/кл значения МПК были больше 256 . сг/ид. Таким образои, при данной иикробной нагрузке те же штаы-

. au были определены как резяотентные. Проведенные исследования свн-детельитвуют о необходимости учета величины пооевной дезы при определении антибиотиаочувотвнтельности. При степени обоемейенноохи ран, абоцеосов, других оуботрагов - icP КОЕ/'мл выбор антибиотиков для лечения больных может быть осуществлен на оонове диоко-днффу-зионного метода. При оепсиое, генерализованной форме раневой нн-фоклии подбор антибактериальных препаратов может быть осуществлен только по результата« определения МГОС при посевной дозе I07 КОЕ/шь Недоучет величины пооевкой дозы при выявлении антибиотикочувотви-тельнопти является одной из чвотих причин отрицательных результатов анл1биотякогерапии при генерализованных формах гнойной инфек- ■ ции.

С целью коррекции антибиотикотерапин тяжелых йори гнойной инфекции изучалось дейогвие антибиотиков и их комбинаций в динамике, На научной модуле автоматизированной микробиологической системы ш-2 была изучена ksi негика гибели 5 штаммов p.aeruginoua, 5 штаммов Klebsialla в присутствии 64 и 128 цкг/ид карбеницил-лина и аэлоциллина при двух посевных дозах Ю5 и 107 КОЕ/мл. Для , обеих микробных нагрузок возобновление роота микробных популяций воех штаммов наблюдали шоле 6-8 часов контакта о аалоцилланои и 4 чао ев о карбенициллиноц. Типичные кривые кинетики гибела для . поевдомонад представлены на рис.2. При комбинации указанных концентраций карбеницидлина о 2 икг/цл гентаыицина возобновление роота микробов в течение 10 чаоов наблюдения (оредний интервал иезду введение« антибиотиков) не отмечалось.

Для разработки режимов рациональной антибиотикотерапии, прогнозирования ее эффективности необходимо проведение лабораторных исследований двух типов: установление значения ¡Ш/НБК антябио-

Рис.2. Кинетика гибели клегок клиничеокого ятаииа P.aeruginosa 1628,

По оси абоциоо - вреип, по оои ординат -оптическая ш?отвооть; а - аалициллин 64 ихт/ыл + 10"* КОЕ/ил; б - 88лоциллин I2B шсг/ил + 107 КОЕ/ил; в - карбенициллин 64 икг/ыл ± Ю5 КОЕ/ил; г - карбенициллин 64 мкг/ыл + Ю КОЕ/ил; д - карбеиициллиа 128 мкг/..:л + гента-иицин 2 икг/цл + 10 КОЕ/ил; а - контроль роота .P.aeruglnôea > Ю5 КОЕ/ил

тика л отношении выделенного возбудителя и изучение фариакокинетики назначенного препарата. Оба вида исследований неомотря на методическую простоту трудоемки, на их постановку аатрачиваегоя 3 дня и более, поэтому рассчитываемые режимы терапии не воегда адекватны, так как вследствие запаздывания результатов исследования невозможно учаоть быотру») динамику заболевания, включая смну возбудителя. Особенно большие затруднения вкаигвет применение этих катодов при комбинированной аитибиотикотерапиа, где лабораторные /.чпные (при опрэделвнии активнооти ооиетаниЗ в отноше-г нии выделенного возбудителя различными модификациями метода серийных уаБ'иодвчаа) «аото не оозпадают о кли ни ч с о к*' \пл розультата— ми. Это оглзано о тем, что ни один из существующих лабораторных методов не может учесть олонных фармаконииетичеоких и фармакоди-намичеоких превращений компонентов сочетаний антибиотиков в организма больного. В связи о этим иопользуеиыэ при постановке in vitro концентрация антибиотиков в оочотания но отражают истинной фариакоюшетической картины in vivo. Положение уоугубляетоя еще и тем, что отсутствуют проотые и доотупнке методы оценки фармако-кинотики сочетаний антибиотиков в организме больного. Поэтому для прогноза и оценки эффективности проводимой терапии антибиотиками разработана и внедрена в клиническую практику методика, определения антибакгерйальной активности оыворотки крови и.других биооуб-стратов больного пооле ввбдения ему антибйотик&в или их.комбинаций. Метод проот в пополнении, не требу-ет специального- оборудования и материалов, являегоя комплексным, позволяет получать информацию о соответствии чувствительности к антибиотикам выделенного возбудителя значению их концентраций в крови и очагах воспаления.

Объектами исследования олузат: образцы сыворотки крови больного, ночи, цереброспинальная жидкость, яелчь, экссудаты, отбирае-

ине чареа 30 нанут и череа I чаи пооле внутривенного или внутримышечного введения и через 1,5-2 чаоа пооле приема внутрь^Методической основой определения являются двукратные оернйные разведения вспытуеиых материалов г жидких питательных средах (МПБ, Мартеновский бульон, оахарный бульон и т.д.). Число пробирок ряда варьирует ог 6-8 до 15 и устанавливается о учетом фармакокинетики антибиотика. Число разведений определяется предполагаемыми уровнями концентраций антибиотиков в крови при их введении в терапевтических догах. При определении антибактериальной активности субстрата пооле введения сочетаний антибиотиков необходимое число раБведений определяется препаратом, создающий наибольшие концентрации в организме (наприыер, пеннциллинаии при их сочетании о

ашшогликозидами).

Пооле оерийного разведения исслздуемогс материала в пробирках о питательной оредой в какдую пробирку ряда добавляют 0,1 мл макроба-воабудатоля инфекции при величине посевной дозы Ю5 ийи Ю7 КОЕ/ил, соответственно при инфекциях ородией тяжести и тяжелых формах гнойной инфекции. Для приготовления ¿шкробной взвеси используют 3-часозую или 18-чаоовую культуру возбудителя. Результаты учитывают через 18 чаооБ инкубации, при ¿7°С визуально по отсутствий признаков роста с последующим высевом на МПА. Макси-иальное разведение сыворотки и прочих биооуботратов с отсутствиец роста прийииавт за антибактериальный титр сыворотки (биосубстрата) показатель, отражаящЩ антимикробную активность в отношении выделенного возбудителя.

Величина титра колеблется в зависимости от вида возбудителя и его чувствительности к назначаемому антибиотику (комбинациям антибиотиков), свойств последнего. Значения титра тел вь^е, чеи

выше. чувотвитяяьноогь выделенного возбудителя. Установлены цгкся-цальвне значения антибактериального титра сыворотки и других био-оу'богратов поолэ введения больноиу наиболее широко применимых антибиотиков. Совпадение показателей антибактериальной акгпвкооти ' иооледуемых биооубстратов и клинических данных установлено при проведении как комбинированной, так и моноантибиотикотзрапии. При . значениях татра 0-1:4 положительный результат бил отмечен у 48 из 131 Сольного о гнойно-воопалительныии дроцесоаии различной локализации. При значении титра 1:8-1:64 положительный результат был получен у 109 больных о гнойно-воспалительными процессами из 125.

Таким образом, лабораторный иетод оценки эффективности антп-биотикотерапии основан на определении индивидуальных соотношений между величиной УПК антибиотика для выделенных штаммов и его уровнями в крови больного. Пользуясь этим иетодоц, в течение двух оу-Ю!! 01 геаента начала антибактериальной терапии удается установить ее адекзатнооть или быстро пр.овеоги соответствующую коррекцию, включающую увеличение доз антибиотика, прииенеяиэ комбинаций антибиотиков или снону препарата.

Таким образом, разработанный метод позволяет получить количественные данные о чувствительности ишроорганизыов к антибиотика« и концентрации их в крови и субстратах, больного я на основе этого индивидуализировать антибиоюкотерапию, резко повысить ое эффективность, уменьшить ошибки в зыборе антибиотиков при лечении больных с гнойно»! инфекцией.

Учитывая данные литературы о иорфофункцкональных особенностях взаимодействия возбудителя о гуморальными факторами защиты организма, ыы провел:' злентронномикроокопическое изучение механизма антимикробной активности сыворотки крови больного поело введзния

ему антибиотик оз. С этой целью было проведено определен;) е антибактериальном активности сыворотки крови больного пооле введения ему окоациллина в ореднетерапевтической концентрации в отношении тест-шташа золотиотого'стафилококка ИГоой-46. В результате со-четаышго действия оыворотки крови и содераацегоол в ней окоациллина происходила деформация перегородок деления, резкое истончение клеточной отенки и интенсивное образование на ней шиуиогло- . булмшзого покрова. Ногно предположить возможный механизм антибактериального действия комбинации белков крови и антибиотика: в результате связывания антибиотика о белками крови и интенсивного отложения белков на клеточной отенке отафилококка происходит усиленная концентрация препарата на поверхности бактерий и последующее проникновение к иииеда, В данной случае белки крови в виде имиуноглобулинового покрова моано рассматривать как векторы, доставляющее антибиотик я бактериальной клетке.

ВЫВОДЫ

1. Структура возбудителей гнойной инфекции у больных, ранее получавших антибактериальную терапию, завиоит от нозологической формы заболевания и представлена в ооновном энтеробактериями и неферцентирувдиш грамотридательными бактериями, а такие ассовда-цияыи микроорганизмов.

2. У 20-50$ больных о гнойно-воспалительными процессами различной локализации отепень обсемененности баосубстратов превышала Ю5" КОЕ/мл.

3. Возбудителе гнойной инфекции характеризовались множественно". устойчивостью к антибиотикам, за исключением амикацина, цефотаксииа, азвоциллина. Офлоксацвц бьш высокоэффективен при лечении уроинфекциа. Перекрестной устойчивости к этому препарату

- 19 -

у полирозистеитных к антибиотикам штаимоз не обнаружено.

Выяьл: uo s^pasötitioe влияние величины посевной дозы микроорганизмов ни антибактериальную екгивнооть кэро'енициллина и аз-лоциллина при возрастании ивокулука от Ю5 до I07 КОЕ/мл.

5. Изучение кинетики бактерицидного эффекта гектамицина в комбинации с езлоциллииом а карбшшциллиног.; показало достаточную эффективность эсих комбинация при микробной нагрузке 10'' КОЕ/мл.

6. Ийлолзг'Озан»1е ускоренного метода определения антибактериальной активности сыворотки крови и других бносубстратов больного после введения ему антибиотиков для прогнозирования эффективности и коррекции антибактериальной терапии позволяло получить терапевтический эффект у 90,2)5 больных с тякелымл формами гнойной инфекции .

7. На субклеточной уровне изучен механизм комплексного действия сыворотки крозп и окоациллина на бактерии, заключающийся в истончении клеточной стенки и отложении на ней белков сыворотки крови в видо ишуноглобулннового покрова.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лабораторные способы контроля эффективности антибактериальной терапии// Антибиотики и медицинская биотехнология. - 1985. -(S б. - СЛ56-459. (Соавт,: О.С.Трескина, Е.Н.Левина).

2. Клиническое значение результатов определения антибиотикочузст-вятельности возбудителей гнойной инфекции// Тез.докл. Научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Московской области. - И.,1985. - С.65-66. (Соавт.: О.С.Трескина).

3. Особенности акгибиотикотералии тяяелшс форм геойной инфекции

и лабораторные методы оценки ее эффективности// Актуальные вопросы клинической микробиологии. - II.,1985. - С.55-59. Соавт.:

О.С.Треокина.

4. 'Микробиологичеэкие методы исследования при выборе схем енти-биотикотерапии госпитальной инфекции// Актуельныв проблемы нсзокомиалышх инфекций: Tea.докл. 1-й Всесоюз.конф. - Минок, 1986. - C.I46-I47. (Соавт.: Е.й.Ленина, О.С.Трескииа, В.Н.Насонов).

5. Сравнительная антимикробная активность и клиническая эффективность ниподина при лечении гнойно-воспалительных заболеваний// йбото нипоцина в группе аминсглпнозидных антибиотиков: Тез. докл. Ыехдунар.оимпозиуиа. - М.,Т98б. - 0.36-38. (Соаьт.: О.О.Трескиыи, Е.Н.Левина, В.Н.Ньооноь).

6. В#чктивноогь тарнвида при льчоииа гнойной инфекции// Новые возможности в лечении ряда инфекционных заболеваний, вызванных услоьно-патогенныии микроорганизмами: Тез.докл. Междупар.оиипс-виуча. - U,,I986. - С.71-73. (Соавт.: С.С.Трьакина, Е.Н.Дутова, D .11 .Назонов ).

7. Сравнительная активность новых полусинтетичеоких пенициллинов и их сочетаний о гентамвцииои в отношении граыогрицотельных бактерий// Антибиотчкч и медицинская биотехнология. - 1987. -tö II. - С.855-859. (Соавт.: О.С.Треокина, В.Н.Насонов, E.H.Дутова) .

8. Лабораторные методы контроля эффективности антибактериальной терапии: Метод.рекомендации. - Ы.,1987. - IS о. (Соавт.: О.С.Треокана, E.H.Левине).

9. Характеристика микрофлоры «очи больных о уроинфзкциями// Актуальные проблемы клинической микробиологии. - M,,I989. - С.116--119. (Соавт.: К Л'.Савицкая, Л.З.Окала,'в.Н.Наооноэ, Е.Н.Дутова).