Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Разработка комплекса фито- и пробиотикотерапии для фармакокоррекции процессов пищеварения у лошадей
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Разработка комплекса фито- и пробиотикотерапии для фармакокоррекции процессов пищеварения у лошадей"

На правах рукописи

БАШКИРОВА АННА АЛЕКСАНДРОВНА

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА ФИТО - И ПРОБИОТИКОТЕРАПИИ ДЛЯ ФАРМАКОКОРРЕКЦИИ ПРОЦЕССОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ У

ЛОШАДЕЙ

06.02.03. — ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

I о МАР 2013

Москва - 2013

005051034

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Данилевская Наталья Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор, заведующий научно-исследовательской лабораторией иммунобиотехнологии ФГБОУ ВПО МГАВМиБ Мирзаев Микаель Нурбагандович

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник ФГБУ ВГНКИ Бондаренко Владимир Олегович

Ведущая организация:

Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФЦГРБ-ВНИВИ)

г. В /ТчЕ

Защита диссертации состоится «'О» апреля 2013 г. в !_± часов на заседании диссертационного совета Д220.042.05 при ФГБОУ ВПО МГАВМиБ по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23, тел. 8(495) 377-9383.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Автореферат разослан хАА&.^О-2013 года и размещён на сайте http://vak.ed.gov.ru

Учёный секретарь

диссертационного совета УУ^иМ^*^ ' ВолчковаЛА.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В крупных городах, включая Москву, содержится большое количество лошадей, которые используются в конных подразделениях полиции для охраны общественного порядка, проходят тренинг и испытания на ипподромах, участвуют в конноспортивных состязаниях в КСК. Животные подвергаются воздействию неблагоприятных факторов при транспортировке, участии в различных мероприятиях соответственно направлению эксплуатации, что не может не сказаться на состоянии их здоровья. Частые травмы с последующей терапией ГК препаратами, антибиотиками, НПВС изменяют микробиоценоз кишечника (Н.В. Данилевская, В.В. Субботин, 2003). Ограниченный контакт лошадей с естественными источниками нормальной микрофлоры (почвой, растениями), а в некоторых случаях - ограниченный моцион, усугубляют дисбиотические расстройства, что негативно сказывается на физиологических и метаболических функциях, а также на биохимических и иммунных реакциях организма (В.В. Субботин, 1991; Т.В. Панин, 2002; Г.А. Ноздрин, 2005; А.В. Андреева, 2010). Проблемой является и то, что интенсивные мышечные нагрузки при тренинге лошадей влияют на функциональное состояние ЖКТ: в кишечнике замедляется перистальтика, вследствие чего снижается скорость кровообращения, ухудшается процесс всасывания питательных веществ и снижается аппетит (Б.А. Никулин, И.И. Родионова, 2011).

В связи с этим перспективным является применение пробиотических и растительных препаратов с целью фармакокоррекции состояния лошадей (М.И. Рабинович, 1987; В.В. Субботин, Н.В. Данилевская, 1998; Н.В. Данилевская, Т.К. Ливанова, 2002; К.С. Маловастый с соавт., 2007). В последние годы опубликовано много исследований о том, что препараты, содержащие лакго- и бифидофлору, нормализуют пищеварение и газообразование, стимулируют иммунитет (Б.В. Тараканов, 2000; Е.В. Зин-ченко, А.Н. Панин, 2000; Е.В. Малик, 2004; А.В. Андреева, P.P. Заварзина, 2009). Известно и благотворное влияние БАВ корня одуванчика лекарственного на пищеварительную систему: корни и трава как горечь возбуждают аппетит и улучшают деятельность ЖКТ, обладают желчегонным и лёгким слабительным действием при атонических запорах (V. Ferguson, 2002). Помимо оказываемых эффектов, корень одуванчика лекарственного содержит до 24% полисахарида инулина, относящегося к пребиоти-

3

кам, которые благотворно влияют на общее состояние организма за счёт избирательной стимуляции роста и/или метаболической активности одной или нескольких групп бактерий, обитающих в кишечнике (М.И- Рабинович, 1987).

Учитывая, что влияние пробиотических препаратов на работоспособность и общее состояние лошадей различных пород, содержащихся в условиях города, при различных направлениях эксплуатации изучено мало, как недостаточно сведений о возможностях сочетанного применения пробиотиков с фитопрепаратами, данная тема представляется весьма актуальной.

Целью работы являлась разработка комплекса фито - и пробиотикотерапии для фармакокоррекции процессов пищеварения у лошадей при эксплуатации в условиях города. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространенность заболеваний ЖКТ у лошадей различных пород и возраста при их эксплуатации в условиях конного полка полиции;

2. Оценить эффективность профилактического применения пробиотика «Лактобифа-дол» и его сочетанного использования с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) в условиях конного подразделения полиции;

3. Выявить фармакологические эффекты пробиотика «Лактобифадол» и его комплекса с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) при нарушениях функций ЖКТ у лошадей в условиях 1-го ОПП ГУ МВД России по г. Москве;

4. Оценить влияние пробиотика «Лактобифадол» на клиническое состояние, гематологические показатели, а также биохимические показатели сыворотки крови лошадей в условиях ипподромного тренинга в период относительного покоя;

5. Изучить влияние пробиотика «Лактобифадол» на клинический статус, гематологические показатели, биохимические показатели и содержание кортизола, эстрадиола и тестостерона в сыворотке крови лошадей после стандартной маховой нагрузки.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение фармакологических эффектов при применении пробиотика «Лактобифадол» и его сочетанном применении с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) на клинически здоровых лошадях и на животных с расстройством пищеварения орловской рысистой и ганноверской пород, несущих ежедневную службу в городе в условиях конного полка полиции.

В условиях ЦМИ установлено влияние пробиотика «Лакгобифадол» на клиническое состояние, морфологические показатели крови и биохимические показатели сыворотки крови клинически здоровых лошадей русской рысистой породы в состоянии относительного покоя и после маховой работы. Впервые определена динамика корти-зола, тестостерона и эстрадиола в сыворотке крови жеребцов после интенсивной мышечной нагрузки на фоне пробиотика «Лакгобифадол».

Практическая значимость. Предложена и опробована схема совместного применения пробиотика «Лакгобифадол» и порошка корня одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) с целью профилактики и лечения нарушений работы ЖКТ, связанных с особенностями содержания животных в условиях города.

Предложена и опробована оптимальная схема применения пробиотика «Лакгобифадол» лошадям русской рысистой породы, несущим ежедневную нагрузку иппо-дромного тренинга.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Научное обоснование необходимости пробиотикотерапии на основе изучения заболеваемости лошадей, содержащихся и эксплуатирующихся в городе, в зависимости от возраста, породы и времени года.

2. Эффективность применения пробиотика «Лакгобифадол» и пробиотика совместно с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) с профилактической и лечебной целью лошадям в условиях конно-патрульной службы;

3. Влияние пробиотика «Лакгобифадол» на физиолого-биохимические показатели лошадей русской рысистой породы в условиях ипподромного тренинга в период относительного покоя и после маховой нагрузки;

4. Результаты научного обоснования внедрения в ветеринарную практику пробиотика «Лакгобифадол» и его комбинации с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) лошадям при различных направлениях эксплуатации.

Апробация результатов исследований. Основные положения и результаты диссертационной работы представлены, опубликованы и одобрены на: Международной научной конференции по патофизиологии животных, посвящённой 90-летию кафедры патологической физиологии ФГОУ ВПО «СПбГАВМ», СПб, (2011 г.); Международных научно-практических конференциях: «Инновационные технологии производства

и переработки сельскохозяйственной продукции», Владикавказ, (2011 г.); «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе», Кострома, (2012 г.); «Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии», Москва, (2012 г.); И Международном конгрессе ветеринарных фармакологов, посвященном 80-летию заслуженного деятеля науки РФ, профессора В.Д. Соколова «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», СПб, (2012 г.); Фармакологической научной конференции, посвящённой 90-летию академика М.И. Рабинович, Троицк, (2012 г.), на межкафедральном совещании сотрудников ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Публикации. По результатам собственных исследований с 2009-2012 г.г. опубликовано 11 научных статей, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 130 страницах компьютерного текста и включают введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы (180 источников, в т.ч. 40 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 31 рисунком и 35 таблицами, имеет приложения.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа проводилась в 2009-2012 г.г. на кафедре фармакологии и токсикологии имени И.Е. Мозгова ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. Научно-производственные эксперименты проведены на базе ЦМИ и 1-го ОПП ГУ МВД России по г. Москве. Использовано 146 голов лошадей орловской рысистой, русской рысистой, ганноверской, тра-кененской, будённовской пород (табл.1).

Первое экспериментальное исследование проводили в 2010 г. в 1-ом ОПП ГУ МВД России по г. Москве, на 80-ти лошадях - меринах, от 3 до 13 лет ганноверской, орловской рысистой, будённовской и тракененской пород. Осуществляли ежедневный клинический осмотр животных по общепринятой методике (А. Линёва, 2001; Т. Пэворд, М. Пэворд, 2005).

Провели ретроспективный анализ заболеваемости лошадей на глубину 3-х лет (с 2007-2010 г.г.) по журналам регистрации больных животных (форма № 1-вет).

Для диспансеризации были отобраны 10 животных. Исследования крови проводили в «Центре молекулярной диагностики» при ФГУ «ВГНКИ» на автоматическом

6

Таблица 1 - Схема научных и научно-производственных опытов

1 Экспериментальное исследование, место проведения, год Срок наблюдения Группы, количество животных

1 Анализ заболеваемости лошадей и ретроспективные исследования на глубину 3-х лет, 1-ый ОПП ГУ МВД России по г. Москве, 2010 г. 1 год п = 80

2 Изучение профилактической эффективности пробио-тика и пробиотика в комплексе с растительной добавкой, 1-ый ОПП ГУ МВД России по г. Москве, 2011г. 60 сут. Группы животных, доза (сут.)

1-ая опытная, п — 6 2-ая опытная, п = 6 контр., п = 6

"Лактобифадол", 12,5 г + Корень одуванчика лекарственного, 25 г "Лактобифадол", 12,5г

3 Изучение лечебной эффективности пробиотика и пробиотика в комплексе с растительной добавкой, 1-ый ОПП ГУ МВД России по г. Москве, 2011 г. 60 сут. 1-ая опытная, п = 6 2-ая опытная, п = 6 контр., п = 6

"Лактобифадол", 25 г + Корень одуванчика лекарственного, 25 г "Лактобифадол", 25 г

4 Изучение физиолого-биохимических показателей рысаков в период относительного покоя в условиях тренинга на фоне пробиотика, ЦМИ, 2011 г. 120 сут. Группы животных, доза (сут.)

1-ая опытная, п = 6 2-ая опытная, п = 6 контр., п = 6

"Лактобифадол", 25 г "Лактобифадол", 50 г -

5 Изучение физиолого-биохимических показателей рысаков после маховой работы на фоне пробиотика, ЦМИ, 2011г. 120 сут. опытная, п = 6 контрольная, п = 6 -

«Лактобифадол», 25 г - -

биохимическом анализаторе Olympus AU400, расширенный гематологический анализ - на гематологическом анализаторе PCE-90Vet по стандартной методике (E.H. Бурмистров, 2005; Д. Мейер, Дж. Харви, 2007; М.А. Медведева, 2009).

Экспериментальное исследование по изучению профилактической эффективности пробиотика и пробиотика в комплексе с растительной добавкой проводили в 1-ом ОПП ГУ МВД России по г. Москве в марте-апреле 2011 г. По принципу пар-аналогов сформировали 3 группы клинически здоровых лошадей ганноверской и орловской рысистой пород в возрасте 5-10 лет (п=6). Лошади 1-ой опытной группы ежедневно в течение месяца получали «Лактобифадол» в дозе 12,5 г (форма на отрубях) на голову совместно с порошком корня одуванчика лекарственного (25 г в сутки). Пробиотик «Лактобифадол» содержит в 1 г не менее 80 млн. живых клеток бифидобакгерий (В. adolescentis) и 1 млн. живых лактобактерий (L. acidophilum), включает незаменимые аминокислоты, органические кислоты, витамины, микроэлементы, другие БАБ. Животные 2-ой опытной группы получали только пробиотик в той же дозе, и 3-я группа была контрольной. Корень одуванчика запаривали вместе с кашей, после её остывания до 40°С добавляли пробиотик. В ходе эксперимента осуществляли ежедневный клинический осмотр животных. До эксперимента (фон) и через месяц были определены морфологические и биохимические показатели крови в условиях ветеринарной лаборатории «АРТВЕТ». Количество эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина и лейкоцитарную формулу определяли на автоматическом гематологическом анализаторе NIHON KOHDEN Celltac ОХ по стандартному протоколу (E.H. Бурмистров, 2005; В.Д. Риган с соавт., 2008). Определение общего белка, альбумина, общего и прямого билирубина, АЛТ, ACT, ЩФ, ГГТ, КФК, мочевины, креатинина, кальция и фосфора проводили по стандартному протоколу на полуавтоматическом биохимическом анализаторе Stat Fax 1904 Plus (E.H. Бурмистров, 2005; Д. Мейер, Дж. Харви, 2007; М.А. Медведева, 2009). В сыворотке крови лошадей до начала и на 30-ые сутки эксперимента методом ИФА был определён уровень кортизола на анализаторе Stat Fax 3200 (Д. Мейер, Дж. Харви, 2007). Была проведена оценка параметров ДПН сыворотки крови животных натензиометре ВРА-1Р (С.Ю. Зайцев и др., 2009).

Для изучения лечебной эффективности пробиотика «Лактобифадол» и пробиотика совместно с корнем одуванчика лекарственного на организм лошадей с клиническими

проявлениями нарушения пищеварения в условиях 1-го ОПП ГУ МВД России по г. Москве по принципу пар-аналогов сформировали 3 группы лошадей ганноверской и орловской рысистой пород в возрасте 5-10 лет (п=6). Лошади 1-ой опытной группы ежедневно в течение месяца получали «Лакгобифадол» в лечебной дозе 25 г на голову совместно с корнем одуванчика лекарственного (25 г/сут.). Животные 2-ой опытной группы получали только пробиотик (25 г/сут.), 3-я группа была контрольной. Проводили клинические, гематологические исследования и биохимические исследования сыворотки крови, микроскопическое исследование кала на определение переваримости - наличия нейтральных жиров и углеводов (М.А. Медведева, 2009).

Для оценки влияния пробиотика «Лакгобифадол» на организм рысистых лошадей в период относительного покоя в условиях тренинга на ЦМИ по принципу пар-аналогов сформировали 3 группы лошадей русской рысистой породы в возрасте 2-5 лет (п=6). Лошади 1-ой опытной группы получали в течение трёх месяцев пробиотик «Лакгобифадол» в количестве 25 г на голову в сутки, лошади 2-ой опытной группы получали пробиотик в течение трёх месяцев в дозе 50 г на голову в сутки. Лошади 3-ей группы служили контролем. В начале эксперимента и через три месяца проводили клинические, гематологические исследования и биохимические исследования сыворотки крови по описанным выше методикам. Взятие крови у животных проводили в период относительного покоя (в выходной день).

Для изучения влияния «Лактобифадола» на организм рысаков после выполнения маховой работы в условиях ЦМИ по принципу пар-аналогов сформировали 2 группы лошадей русской рысистой породы в возрасте 2-5 лет (п=6). Лошади опытной группы получали пробиотик в течение трёх месяцев в количестве 25 г в сутки, вторая группа животных была контрольной. В ходе эксперимента осуществляли ежедневный клинический осмотр лошадей. В начале эксперимента и через три месяца определяли морфологические и биохимические показатели крови по описанным выше методикам. Взятие крови у лошадей проводили сразу после выполнения стандартной нагрузки (мах). Расширенный гематологический анализ проводили в условиях ветеринарной лаборатории «АРТВЕТ» на автоматическом анализаторе NIHON KOHDEN Celltac ОХ по стандартному протоколу. Определение общего белка, альбумина, глюкозы, общего и прямого билирубина, амилазы, АЛТ, ACT, ЩФ, ГТТ, КФК, ЛДГ, холестерина,

9

триглицеридов, мочевины, креатинина, кальция и фосфора проводили на полуавтоматическом биохимическом анализаторе Stat Fax 1904 Plus. В начале и в конце эксперимента определяли уровень кортизола, эстрадиола и тестостерона методом ИФА на анализаторе Stat Fax 3200. При анализе результатов использовали данные средних значений морфологических и биохимических показателей крови, установленных в лаборатории «АРТВЕТ». Обработку данных проводили на компьютере с помощью программы «Microsoft Excel». Оценивали достоверность различий средних выборок по t-критерию Стъюдента (H.A. Плохинский, 1980; Е.К. Меркурьева, 1983).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1. Анализ заболеваемости лошадей в 1-ом ОПП ГУ МВД России по г. Москве

В ходе анализа данных о заболеваемости лошадей в 1-ом ОПП ГУ МВД России по г. Москве за период с 2007 г. по 2010 г., посезонно, выявили 193 случая заболеваний. Нарушения в работе ЖКТ: снижение аппетита, метеоризм, диарея, атонические запоры, копрофагия, развитие симптомокомплекса колик составили 49% от общего числа заболевших животных за исследуемый период; аллергические реакции в виде «крапивницы» - 21% соответственно. Заболевания дыхательной системы с бронхо-лёгочным синдромом выявили в 35 случаях (18%). Обменные нарушения, сопровождающиеся алопециями, хрупкостью и ломкостью копытного рога, нарушением целостности волосяного покрова, перхотью, отмечены у 11% лошадей от общего числа заболевших животных за исследуемый период. Анализ показал, что среди внутренних незаразных болезней наиболее часто встречаются заболевания ЖКТ. Причём чаще всего - у лошадей орловской рысистой и ганноверской пород (27% и 26% соответственно), старше 5-ти лет.

Гематологические исследования и биохимические исследования сыворотки крови показали, что все параметры крови не выходили за пределы референтных значений. Стоит отметить, что в условиях конного полка эксплуатация лошадей с целью охраны общественного порядка в городе происходит в основном в возрасте от 3 до 13 лет. В связи с этим в группы для дальнейшего изучения профилактической и лечебной эффективности пробиотика и его комплекса с растительной добавкой были подобраны животные среднего возраста (5-10 лет) орловской рысистой и ганноверской пород.

3.2. Профилактическая эффективность пробиотпка и его комплекса с корнем одуванчика лекарственного при применении лошадям

Результаты клинических, гематологических исследований, а также биохимических исследований сыворотки крови свидетельствовали об отсутствии аллергических и токсических воздействий на организм животных при использовании пробиотика «Лактобифадол» как в монорежиме, так и в сочетании с порошком корня одуванчика лекарственного. Статистически значимых изменений гематологических показателей не установлено. По результатам биохимических исследований у лошадей всех групп до начала исследований были повышены по сравнению с нормой уровни общего и прямого билирубина, ACT, что мы связываем с сезонным кормовым фактором. После месячного курса пробиотика и пробиотика совместно с корнем одуванчика лекарственного уровень общего билирубина в сыворотке крови лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп статистически значимо снизился по отношению к фоновым показателям на 68% (Р<0,01) и 64% (Р<0,001) соответственно, в контрольной группе в меньшей степени - на 53% (Р<0,05) (рис.1). Схожая тенденция отмечена в динамике прямого билирубина: статистически значимое снижение у лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп на 81% (Р<0,01) и 73% (Р<0,01) соответственно, в меньшей степени - в крови животных контрольной группы (на 62% (Р<0,05)). Установлена тенденция к понижению уровня ACT, АЛТ, ЩФ и ГТТ в сыворотке крови лошадей опытных групп по сравнению с фоновыми показателями. Данные изменения были более существенны в группе лошадей, которым проводили фармакокоррекцию с применением растительной добавки, что, вероятно, связано с пребиотическим и желчегонным действием БАВ корня одуванчика лекарственного. На момент окончания наблюдений было отмечено снижение уровня мочевины в сыворотке крови животных 1-ой и 2-ой опытных групп по отношению к фоновым показателям на 11% и 22% (Р<0,001) соответственно и на 2% в крови лошадей 3-ей контрольной группы. Это согласуется с данными об использовании азота корма в метаболизме бифидо- и лактобакгерий, что приводит к снижению концентрации мочевины в сыворотке крови (Б.А. Шендеров, 1998).

Содержание кортизола у всех животных было в пределах референтных значений, достоверных различий не установлено. Параметры ДПН сыворотки крови на фоне пробиотика и пробиотика совместно с растительной добавкой также статистически

11

значимо не изменялись. Из результатов эксперимента видно, что комплексное применение «Лактобифадола» с корнем одуванчика лекарственного оказывает благотворное влияние на организм лошадей за счёт оптимизации биохимических показателей сыворотки крови.

Билирубин общий

Б

110«. 90% 70% 50% 30%

Билирубин прямой

— Ш |

81 ц!

Ш ш ! §1

ш п Ж 1 | | гая _

ЯШ | ■

| До 1 После | | опыта | опыта ] 1-ая опытная | группа | До \ После опыта ! опыта 2-ая опытная группа До 1 После 3-я контрольная [ группа

В

105% 100% 95% 90% 85% 80% 75%

Мочевина

1 -ая опытная группа

1-ая опытная группа

3-я контрольная группа

После опыта

После опыта

До : После опыта | опыта

Рисунок 1 - Биохимические показатели сыворотки крови лошадей (% к фоновому уровню): А - динамика общего билирубина; Б - динамика прямого билирубина;

В - динамика мочевины 3.3. Лечебная эффективность пробиотика и его комплекса с корнем одуванчика лекарственного при нарушениях пищеварения у лошадей Применение «Лактобифадола» как в монорежиме, так и совместно с корнем одуванчика лекарственного лошадям с расстройством работы ЖКТ привело к повышению аппетита, нормализации пищеварения и газообразования, уменьшению явлений копрофагии. На фоне стабилизации пищеварения и нормализации обмена веществ повысилась работоспособность, улучшилось состояние волосяного покрова и копытного рога. У лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп нормализовались объём, консистенция, цвет и запах фекалий, уменьшилось количество непереваренных веществ. По результатам микроскопии кала в исследуемых образцах обнаруживалось незначительное количество непереваримой клетчатки, у животных контрольной группы, наобо-

12

рот, было отмечено большое количество непереваримой, переваримой клетчатки и крахмальных зёрен разной степени переваривания.

Гематологические исследования свидетельствовали о статистически значимом (Р<0,01) по сравнению с фоном повышении числа эритроцитов в крови лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп на 16% и 18%, уровня гемоглобина - на 22% (Р<0,001) и 22% (Р<0,01) соответственно, что может говорить о благотворном влиянии пробиотика на гемопоэз (табл. 2). Отмечен достоверный рост количества лимфоцитов (Р<0,05) в крови лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп - на 16% и 14% на фоне снижения числа лейкоцитов на 27% (Р<0,001) и 28% (Р<0,01) соответственно, что может свидетельствовать об улучшении иммунного статуса животных и снижении выраженности воспалительного процесса. Биохимическое исследование выявило статистически значимый рост уровня общего белка в крови лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп - на 10% (Р<0,01) и 12% (Р<0,05) по сравнению с фоновым уровнем и повышение содержания альбумина - на 39% (Р<0,01) и 39% (Р<0,001) соответственно. Было отмечено достоверное по сравнению с фоновым уровнем снижение концентрации общего и прямого билирубина, АЛТ, ACT, ЩФ и 111 в сыворотке крови лошадей, получавших «Лакто-бифадол» и пробиотик в комплексе с растительной добавкой. Следует отметить, что в крови животных, получавших помимо пробиотика корень одуванчика лекарственного, данные изменения были более существенны. У лошадей контрольной группы по сравнению с первоначальным уровнем динамика показателей была незначительна и недостоверна. Было установлено статистически значимое снижение уровня мочевины в сыворотке крови животных опытных групп по отношению к первоначальным показателям на фоне его повышения в крови лошадей контрольной группы. Полученные результаты согласуются с исследованиями Б.А. Шендерова (1998), Е.В. Зинченко, А.Н. Панина (2000), Е.В. Малик (2004), В.В. Субботина (2006), Н.В. Данилевской (2007), A.B. Андреевой (2010), Л.В. Клетиковой (2010) и многих других о влиянии пробиотических препаратов на клинические и биохимические показатели крови животных.

3.4. Физиолого-биохимические показатели рысистых лошадей в период относительного покоя в условиях тренинга на фоне пробиотика

Клинические наблюдения показали, что у лошадей, которые ежедневно в течение

13

Таблица 2 - Гематологические показатели и биохимические показатели сыворотки крови лошадей при применении пробиотика «Лактобифадол» и пробиотика в комплексе с корнем одуванчика лекарственного с лечебной целью, n=6, М±т

Показатели Норма 1-ая опытная группа 2-ая опытная группа 3-я контрольная группа

До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта

Эритроциты, хЮ12/л 7,5-11 7,77±0,25 9,05±0,32" 8,2±0,13 9,67±0,33" 8,08±0,4 8,29±0,25

Гемоглобин, г/л 110-160 114,17±2,25 139±2,48*" 116,33±4,89 141,67±2,84" 113,17±5,29 114±3,51

Лейкоциты, хЮ9/л 6-11 11,26±0,38 8,12±0,34*" 10,83±0,54 7,95±0,34" 11,37±0,38 10,25±0,47

Лимфоциты, % 25-44 37,17±1,40 43±1,36* 36,33±1,80 41,5±1,09* 39,17±1,95 37,67±5,08

Общий белок, г/л 57-79 65,50±1,35 71,83±1,43" 63,17±1,64 70,83±2,27* 62,67±1,15 63,00±0,94

Альбумин, г/л 25,3-41 27,02±1,52 37,50±1,16"" 25,92±1,37 36,00±2,06" 27,25±1,51 26,58±1,08

Билирубин общ., мкмоль/л 5,4-51,4 29,40±1,62 18,87±0,42*" 28,15±1,78 20,73±0,89** 32,72±3,58 30,30±1,00

Билирубин прям., мкмоль/л 0-11 5,97±0,63 4,33±0,31* 6,17±0,51 4,82±0,36 6,03±0,57 5,55±0,44

АЛТ, Ед./л 2,7-23 19,95±1,18 9,07±0,91*" 18,92±0,75 9,78±0,99*" 21,18±1,02 17,10±1,21*

ACT, Ед./л 115-287 205,17±2,70 200,83±2,64 203,03±5,10 200,48±0,60 209,85±2,58 210,25±0,69

ЩФ, Ед./л 70,1-226,8 254,50±9,39 214,83±3,50" 268,67± 10,39 234,17±2,37" 251,50±7,00 248,67±7,52

ГГТ, Ед./л 5-30 16,78±0,54 13,25±0,87" 14,20±1,91 11,97±0,30 14,82±1,57 16,02±1,67

Примечание:' Р<0,05; " Р<0,01; "" Р<0,001 по / критерию при сравнении с исходным уровнем

трёх месяцев с кормом получали пробиотик «Лактобифадол», заметно повысился аппетит. В течение всего срока наблюдений не возникало каких-либо отклонений от физиологической нормы. Показатели температуры, пульса, дыхания также не выходили за пределы нормы.

Гематологическое исследование выявило статистически значимый по сравнению с фоновыми значениями рост числа лимфоцитов (Р<0,001) в крови лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп - на 65% и 48% соответственно, что согласуется с результатами, полученными в предыдущих экспериментах. У животных контрольной группы изменения были незначительны и недостоверны.

В ходе биохимического исследования сыворотки крови лошадей установили, что уровни ферментов АСТ, КФК и ЩФ были завышены или находились на верхней границе нормы. Полученные результаты согласуются с исследованиями Г.Ф. Сергиенко и др. (2011), в которых отмечено, что содержание клеточных (индикаторных) ферментов в сыворотке крови спортивных лошадей превышает нормальное содержание этих же ферментов в крови животных, не несущих ежедневных мышечных нагрузок. Это связано с особенностями физиологии и биохимии лошадей и глубокими метаболическими перестройками с повышением мембранной проницаемости при интенсивных физических нагрузках (И.И. Волков, 1986; Б.А. Никулин, И.И. Родионова, 2011). Спустя три месяца после начала экспериментальных исследований, содержание вышеуказанных ферментов в сыворотке крови животных опытных групп либо снижалось по сравнению с фоновым уровнем либо незначительно возрастало, в то время как в крови лошадей контрольной группы наблюдалось повышение их концентраций. Так, например, было отмечено снижение концентрации АСТ по сравнению с фоном в сыворотке крови лошадей 1-ой и 2-ой опытных групп на 21% и 30% и повышение'на 10% в крови животных контрольной группы (рис. 2). Уровень ЩФ снизился на 8% в крови лошадей 1-ой группы, повысился на 4% в сыворотке крови животных 2-ой группы, и вырос в крови лошадей контрольной группы - на 22%.

Таким образом, проведённый эксперимент свидетельствовал о благоприятном воздействии «Лакгобифадола» на физиолого-биохимический статус лошадей как в дозе 25 г, так и в дозе 50 г, достоверной разницы в проявленных эффектах от изученных доз пробиотика выявлено не было.

ЩФ

ACT

Да После До i После опыта ! опыта опыта опыта

1-ая опытная группа

2-ая опытная группа

3-я контрольная группа

Рисунок 2 - Биохимические показатели крови лошадей (% к фоновому уровню): А - динамика ЩФ; Б - динамика ACT 3.5. Физиолого-биохимические показатели рысистых лошадей после маховой работы на фоне пробиотика

В условиях ипподрома применение пробиотика «Лактобифадол» привело к улучшению аппетита, как отмечено и повышение работоспособности лошадей по сравнению с животными контрольной группы. При сравнении резвостных способностей лошадей опытной и контрольной групп между собой было отмечено, что в начале эксперимента лошади опытной группы были «тише» контрольной, но к моменту окончания наблюдений они прогрессировали значительно сильнее. Так, по сравнению с резвостными показателями на момент начала эксперимента резвость лошадей возросла в опытной группе на 4% - с 142,02±3,53 сек. в начале периода наблюдений до 136,58±3,21 сек. в конце эксперимента и на 1% в контрольной группе - с 133,09±3,24 сек. до 131,73±2,37 сек. соответственно. Показатели температуры, пульса, дыхания не выходили за пределы физиологической нормы.

Гематологические исследования не выявили статистически значимых изменений показателей. В ходе биохимических исследований сыворотки крови лошадей в начале опытного периода была установлена повышенная концентрация ферментов ACT, ЩФ, КФК и ЛДГ, как и в предыдущем эксперименте (табл. 3). В конце периода наблюдений в крови животных опытной группы наблюдалось снижение концентрация ЩФ, КФК и ЛДГ по сравнению с фоном на 5%, 22% и 16% (Р<0,05) соответственно. Установлено снижение уровня мочевины на 7% и повышение глюкозы на 4% в сыворотке крови лошадей опытной группы по сравнению с показателями на момент начала эксперимента, в то время как в крови животных контрольной группы наблюдалась

обратная тенденция в динамике вышеуказанных показателей крови.

16

Таблица 3 - Биохимические показатели сыворотки крови лошадей, n=6, М±т

Показатели Опытная группа Контрольная группа

До опыта После опыта До опыта После опыта

Билирубин общ., мкмоль/л 27,85±2,25 21,39±2,56 28,68±3,67 23,90±3,10

Билирубин прям., мкмоль/л 9,42±1,51 6,09±0,20* 10,22±2,39 7,13±1,21

ЩФ, Ед./л 417,00±32,45 396,№35,07 441,67±52,60 478,83±56,15

ГГТ, Ед./л 30,20±9,01 31,37±9,51 30,23±7,90 59,58±18,38

КФК, Ед./л 581,33±76,44 454,67±61,78 442,83±27,35 452,67±30,85

ЛДГ, Ед./л 1193,00±50,98 1004,00±58,50' 1143,00±77,48 1032,67±77,68

Примечание:' Р<0,05;" Р<0,01; "* Р<0,001 по /-критерию при сравнении с исходным уровнем

В эксперименте отмечен достоверный рост концентрации кортизола после стандартной маховой работы в крови жеребцов опытной и контрольной групп на 68% (Р<0,001) и 172% (Р<0,01) соответственно по сравнению с фоновыми значениями (рис. 3). Это может быть следствием того, что в ходе адаптации к тренировкам у рысаков происходит развитие функциональных возможностей системы гипофиз - кора надпочечников, что выражается в способности секретировать большие количества кортизола и поддерживать концентрацию этого гормона в крови на высоком уровне (М.Ю. Алексеев, М.А. Леонова, 1990; Б.А. Никулин, 2011). Отмечено, что в результате жизнедеятельности лакго- и бифидобакгерий уровень кортизола в крови рысаков возрастает в меньшей степени, чем в контроле, тем самым обеспечивая оптимальные условия функционирования организма во время мышечной работы. Содержание эст-радиола в конце опытного периода статистически значимо снизилось в сыворотке крови лошадей опытной и контрольной групп на 95% (Р<0,001) и 90% (Р<0,01) соответственно, в то время как уровень тестостерона незначительно повысился. Это согласуется с данными литературы о том, что с ростом тренировочного стажа повышение уровня андрогенов в крови рысистых лошадей сопровождается снижением концентрации эстрогенов (М.Ю. Алексеев, 1977). Однонаправленность и равнозначность происходящих в организме лошадей изменений содержания эстрадиола и тестостерона в сыворотке крови после маховой работы свидетельствует о преобладании тренировочного эффекта над влиянием препарата.

Таким образом, в ходе исследования крови рысаков после маховой работы было отмечено, что применение «Лактобифадола» приводит к меньшим по сравнению контролем колебаниям биохимических показателей (ACT, ЩФ, КФК, ЛДГ) и уровня кортизола в сыворотке крови, высвобождающихся в больших количествах при интенсивных мышечных нагрузках.

А

120%

Эстрздиол

До опыта После опыта Опытная группа

До опыта росла опыта|

Контрольная группа j

Тестостерон

В

300% 250% 200% 150%

Кортизол

I

До опыта |[Тосле опыта| До опыта После опыта Опытная группа \ Контрольная группа

Рисунок 3 - Содержание гормонов в сыворотке крови лошадей (% к фоновому уровню): А - динамика эстрадиола; Б - динамика тестостерона; В - динамика кортизола

4. ВЫВОДЫ

1. Совместное применение пробиотика «Лактобифадол» и порошка корня одуванчика лекарственного обеспечивает фармакокоррекцию процессов пищеварения, оптимизацию гематологических показателей и биохимических показателей сыворотки крови у лошадей различных пород и возраста при эксплуатации в условиях города.

2. При эксплуатации лошадей в условиях города нарушения работы ЖКТ составляют до 49% от общего числа заболеваний, наиболее подвержены им лошади орловской рысистой и ганноверской пород старше 5-ти лет.

3. Профилактическое применение пробиотика «Лактобифадол» в монорежиме и совместно с корнем одуванчика лекарственного не приводит к развитию аллергиче-

18

ских и токсических проявлений в рекомендуемых дозах. Оптимизация уровней билирубина, ACT, АЛТ, ЩФ, ГТТ в большей степени проявляется при совместном применении корня одуванчика лекарственного и пробиотика «Лакгобифадол».

4. Применение пробиотика «Лакгобифадол» и пробиотика в комплексе с корнем одуванчика лекарственного лошадям при нарушениях работы пищеварительного тракта обеспечивает выраженный лечебный эффект, который проявляется в улучшении клинических показателей (повышается аппетит, нормализуется пищеварение, что подтверждают копрологические исследования, улучшается состояние волосяного покрова и копытного рога), повышении уровня гемоглобина на 21%, числа эритроцитов - на 13%-15%, лимфоцитов - на 16%-14% при снижении количества лейкоцитов - на 18%-17% соответственно от первоначальных показателей.

5. Установлено, что при применении пробиотика «Лакгобифадол» и пробиотика совместно с корнем одуванчика лекарственного лошадям с нарушениями работы ЖКТ в сыворотке крови животных повышается уровень общего белка на 9%-11%, альбумина - на 41% и снижается концентрация мочевины - на 38%-39% соответственно. Гепатопротекторное действие комплекса выражается в статистически значимом по сравнению с фоном снижении и нормализации содержания общего и прямого билирубина, АЛТ, ACT, ЩФ и ГТТ.

6. Исследования физиолого-биохимических показателей рысистых лошадей как в состоянии относительного покоя, так и после маховой нагрузки свидетельствуют о благотворном влиянии пробиотика «Лакгобифадол» на их организм в сравнении с лошадьми контрольной группы, что проявляется в повышении аппетита и лучшем прогрессе резвостных способностей, а также в оптимизации содержания внутриклеточных (индикаторных) ферментов ACT, ЩФ, КФК и ЛДГ, концентрация которых значительно возрастает при интенсивной мышечной работе.

7. Отмечено, что применение пробиотика «Лакгобифадол» уменьшает колебания уровня кортизола в сыворотке крови рысистых лошадей на фоне интенсивного тренинга, так, по сравнению с фоновыми значениями концентрация кортизола достоверно возрастает в сыворотке крови животных опытной группы на 68% и на 172% в сыворотке крови лошадей контрольной группы. В то время как на содержание эстрадио-ла и тестостерона в сыворотке крови рысаков влияния препарата не отмечено.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Применение пробиотика «Лакгобифадол» и корня одуванчика лекарственного лошадям приводит к повышению аппетита, улучшению клинического состояния животных, способствует нормализации гематологических показателей и биохимических показателей сыворотки крови, оказывает гепатопротекгорное действие. Схема может быть рекомендована как с профилактической, так и с лечебной целью при нарушении пищеварительных процессов в ЖКТ. Результаты эксперимента по применению пробиотика «Лакгобифадол» и корня одуванчика лекарственного внедрены и используются в 1-ом ОПП ГУ МВД России по г. Москве.

2. Применение «Лактобифадола» лошадям русской рысистой породы, несущих нагрузку шшодромного тренинга, приводит к повышению аппетита, работоспособности животных, нормализации физиолого-биохимического статуса. Оптимальная доза пробиотика «Лакгобифадол» - 25 г, увеличение дозы не вызывает статистически значимых изменений морфологических и биохимических показателей крови. Результаты по применению «Лактобифадола» при интенсивном тренинге и испытаниях рысаков разного возраста внедрены и используются на ЦМИ.

3. Разработаны и утверждены методические рекомендации «Разработка комплекса фито - и пробиотикотерапии для фармакокоррекции процессов пищеварения у лошадей» (Рассмотрены и одобрены научно-методическим советом ФГБОУ ВПО МГАВМиБ протокол № 2 от 21.01.1 Зг.).

4. Результаты проведённых исследований могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по курсу ветеринарной фармакологии и токсикологии для студентов ФВМ и ВБФ ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ I. Статьи в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК

Минобрнауки РФ

1. Башкирова, A.A. Влияние пробиотика и порошка корня одуванчика лекарственного на физиолого-биохимическое состояние здоровых лошадей, используемых в системе конных патрулей полиции в условиях города / A.A. Башкирова, Н.В. Данилевская // Ветеринария и кормление. - 2012. - №2. - С. 24-26.

20

2. Башкирова, A.A. Изучение влияния пробиотика «Лакгобифадол» на показатели крови лошадей, проходящих тренинг и испытания / A.A. Башкирова // Коневодство и конный спорт. -2012. - №4. - С. 15-17.

3. Башкирова, A.A. Коррекция процессов пищеварения с применением расти-тельно-пробиотических препаратов у лошадей / A.A. Башкирова // Проблемы биологии продуктивных животных. - 2012. - №3. - С. 97-103.

II. Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях

4. Башкирова, A.A. Об актуальности фармакокоррекции физиолого-биохимических функций у лошадей, содержащихся в условиях города / A.A. Башкирова // Матер, межд. науч. конф. по патофизиологии животных, посвященной 90-летию кафедры патологической физиологии ФГОУ ВПО «СПбГАВМ» / СПб., 2011. -С. 9-10.

5. Башкирова, A.A. Влияние пробиотика «Лакгобифадол» на адаптацию к заводскому тренингу жеребят рысистых пород / A.A. Башкирова, М.С. Вертикова // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: сб. науч. тр. молодых учёных / ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - М., 2011. - Вып.7. - С. 182-186.

6. Башкирова, A.A. Реакция иммунозащитных сил организма молодых лошадей на физические нагрузки различной интенсивности в период адаптации к заводскому тренингу / A.A. Башкирова, O.A. Гусева, Е.Ю. Наумова // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: сб. науч. тр. молодых учёных / ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - М.,

2011.-Вып.7.-С. 215-219.

7. Башкирова, A.A. Опыт применения пробиотика «Лакгобифадол» в коннозаводстве / A.A. Башкирова // Инновационные технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции: матер, межд. науч.-пракг. конф. / Владикавказ,

2012.-С. 12-13.

8. Башкирова, A.A. Влияние совместного применения пробиотика «Лакгобифадол» и корня одуванчика лекарственного на физиолого-биохимические показатели лошадей, содержащихся в условиях города / A.A. Башкирова // Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе: сб. статей 63-й межд. науч.-пракг. конф. / КГСХА. - Кострома, 2012. - С. 62-64.

9. Башкирова, A.A. Изучение влияния пробиотика на реактивность рысистых лошадей с помощью кожной гистаминовой пробы / A.A. Башкирова, Н.В. Данилевская // Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии: матер. 2-го межд. контр, вет. фармакологов, посвященного восьмидесятилетию заслуженного деятеля науки РФ, проф. В.Д. Соколова / СПб., 2012. - С. 44-46.

10. Башкирова, A.A. Влияние пробиотика на биохимические показатели крови, характеризующие состояние печени лошадей, содержащихся в условиях города / A.A. Башкирова, E.H. Зарудная, H.A. Довженко // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: сб. науч. тр. молодых учёных / ФГОУ ВПО МГАВМиБ. - М., 2012. -Вып.8. - С. 9-13.

11. Башкирова, A.A. Влияние растительно-пробиотической добавки на клинические, гематологические и биохимические показатели крови лошадей / A.A. Башкирова, Н.В. Данилевская // Матер, фарм. науч. конф., посвящённой 90-летию академика М.И. Рабинович: сб. науч. тр. / Троицк, 2012. - С.52-56.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ:

1-ый ОПП ГУ МВД России по г. Москве - 1-ый оперативный полк полиции ГУ МВД

России по г. Москве;

АЛТ - аланинаминотрансфераза;

ACT - аспартатаминотрансфераза;

БАВ - биологически активные вещества;

i l l - гамма - глутамилтрансфераза;

ГК - глюкокортикоиды;

ДПН - динамическое поверхностное натяжение;

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КСК - конноспортивный комплекс;

КФК - креатинфосфокиназа;

ЛДГ - лакгатдегидрогеназа;

НПВС - нестероидные противовоспалительные средства; ПАВ - поверхностно-активные вещества; ЦМИ - Центральный Московский ипподром; ЩФ - щелочная фосфатаза.

Отпечатано в ООО «Издательство Спутник+» ПД № 1-00007 от 26.09.2000 г. Подписано в печать 04.03.2013 г. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,5 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Башкирова, Анна Александровна, Москва

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

04201355441

На правах рукописи

Башкирова Анна Александровна РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСА ФИТО - И ПРОБИОТИКОТЕРАПИИ ДЛЯ ФАРМАКОКОРРЕКЦИИ ПРОЦЕССОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ У

ЛОШАДЕЙ

06.02.03. - ветеринарная фармакология с токсикологией

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Данилевская Н.В.

Москва-2013

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..............................................................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................9

1.1. Особенности микробиоценоза пищеварительной системы лошади........9

1.2. Физиологическое значение кишечной микрофлоры для организма животного...............................................................................................................11

1.3. Концепция применения пробиотиков в коневодстве..............................14

1.4. Применение фитотерапии в коневодстве.................................................24

1.5. Заключение по обзору литературы............................................................28

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................................................29

2.1. Материалы и методы...................................................................................29

2.2. Результаты собственных исследований....................................................39

2.2.1. Анализ заболеваемости лошадей в 1-ом ОПП ГУ МВД России по г. Москве.................................................................................................................39

2.2.2. Профилактическая эффективность пробиотика и его комплекса с корнем одуванчика лекарственного при применении лошадям...................46

2.2.3. Лечебная эффективность пробиотика и его комплекса с корнем одуванчика лекарственного при нарушениях пищеварения у лошадей......59

2.2.4. Физиолого-биохимические показатели рысистых лошадей в период относительного покоя в условиях тренинга на фоне пробиотика................73

2.2.5. Физиолого-биохимические показатели рысистых лошадей после маховой работы на фоне пробиотика...............................................................84

2.3. Обсуждение результатов собственных исследований............................93

3. ВЫВОДЫ.......................................................................................................110

4. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ..............................................................................................112

5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ............................................................................113

6. ПРИЛОЖЕНИЯ............................................................................................131

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ:

1-ый ОПП ГУ МВД России по г. Москве - 1-ый оперативный полк полиции

ГУ МВД России по г. Москве;

АКТГ - адренокортикотропный гормон;

AJIT - аланинаминотрансфераза;

ACT - аспартатаминотрансфераза;

БАВ - биологически активные вещества;

ГГТ — гамма - глутамилтрансфераза;

ГК - глюкокортикоиды;

ДПН - динамическое поверхностное натяжение;

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КСК - конноспортивный комплекс;

КФК - креатинфосфокиназа;

ЛДГ - лактатдегидрогеназа;

Н11ВС - нестероидные противовоспалительные средства; ПАВ - поверхностно-активные вещества; ЦМИ — Центральный Московский ипподром; ЩФ - щелочная фосфатаза.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В крупных городах, включая Москву, содержится большое количество лошадей, которые используются в конных подразделениях полиции для охраны общественного порядка, проходят тренинг и испытания на ипподромах, участвуют в конноспортивных состязаниях в КСК и др. Ежедневно животные подвергаются стрессовому воздействию при транспортировке и участии в различных мероприятиях соответственно направлению их эксплуатации [23, 88, 152, 157, 163, 164]. Снижение неспецифической резистентности и устойчивости организма к действию неблагоприятных факторов окружающей среды, и, как следствие, возникновение дисбаланса кишечной микрофлоры с преобладанием условно-патогенных бактерий - частый итог содержания лошадей в условиях города [37, 43, 79, 139, 172].

Особенности содержания, кормления и использования лошадей в городских условиях не могут не сказаться на состоянии здоровья животных. Частые травмы с последующей терапией ГК препаратами, антибиотиками, НПВС изменяют постоянство микрофлоры кишечника и её сбалансированность, что определённым образом влияет на гомеостаз организма и его функциональное состояние [13, 31, 171, 144]. Ограниченный контакт лошадей с естественными источниками нормальной микрофлоры (почвой, растениями), а в некоторых случаях - отсутствие достаточного моциона, усугубляют дис-биотические расстройства, что негативно сказывается на физиологических и метаболических функциях, а также на биохимических и иммунных реакциях организма [33, 34, 37, 79]. Проблемой является и то, что интенсивные мышечные нагрузки при тренинге лошадей влияют на функциональное состояние ЖКТ: в кишечнике замедляется перистальтика, вследствие чего снижается скорость кровообращения, ухудшается процесс всасывания питательных веществ и снижается аппетит [77, 78].

В связи с этим вполне обоснованным является применение пробиоти-ческих и растительных препаратов, оказывающих благотворное влияние на

работу ЖКТ, с целью фармакокоррекции состояния лошадей [2, 26, 36, 54].

4

В последние годы опубликовано много исследований о том, что препараты, содержащие лакто- и бифидофлору, нормализуют пищеварение и газообразование, стимулируют иммунитет [17, 58, 82, 83, 126, 127, 128, 133, 175]. Известно и благотворное влияние БАВ корня одуванчика лекарственного на пищеварительную систему: корни и трава как горечь возбуждают аппетит и улучшают деятельность ЖКТ, обладают желчегонным и лёгким слабительным действием при атонических запорах. Помимо оказываемых эффектов, корень одуванчика лекарственного содержит до 24% полисахарида инулина, относящегося к пребиотикам, которые благотворно влияют на общее состояние организма за счёт избирательной стимуляции роста и/или метаболической активности одной или нескольких групп бактерий, обитающих в кишечнике [92].

Учитывая, что влияние пробиотических препаратов на работоспособность и общее состояние лошадей различных пород, содержащихся в условиях города, при различных направлениях эксплуатации изучено мало, как недостаточно сведений о возможностях сочетанного применения пробиотиков с фитопрепаратами, данная тема представляется весьма актуальной.

Целью работы являлась разработка комплекса фито - и пробиотикоте-рапии для фармакокоррекции процессов пищеварения у лошадей при эксплуатации в условиях города. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространённость заболеваний ЖКТ у лошадей различных пород и возраста при их эксплуатации в условиях конного полка полиции;

2. Оценить эффективность профилактического применения пробиотика «Лактобифадол» и его сочетанного использования с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) в условиях конного подразделения полиции;

3. Выявить фармакологические эффекты пробиотика «Лактобифадол» и его комплекса с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) при

нарушениях функций ЖКТ у лошадей в условиях 1-го OiJLLI ГУ МВД России

5

по г. Москве;

4. Оценить влияние пробиотика «Лактобифадол» на клиническое состояние, гематологические показатели, а также биохимические показатели сыворотки крови лошадей в условиях ипподромного тренинга в период относительного покоя;

5. Изучить влияние пробиотика «Лактобифадол» на клинический статус, гематологические показатели, биохимические показатели и содержание кор-тизола, эстрадиола и тестостерона в сыворотке крови лошадей после стандартной маховой нагрузки.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение фармакологических эффектов при применении пробиотика «Лактобифадол» и его сочетанном применении с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) на клинически здоровых лошадях и на животных с расстройством пищеварения орловской рысистой и ганноверской пород, несущих ежедневную службу в городе в условиях конного полка полиции.

В условиях ЦМИ установлено влияние пробиотика «Лактобифадол» на клиническое состояние, морфологические показатели крови и биохимические показатели сыворотки крови клинически здоровых лошадей русской рысистой породы в состоянии относительного покоя и после маховой работы. Впервые определена динамика кортизола, тестостерона и эстрадиола в сыворотке крови жеребцов после интенсивной мышечной нагрузки на фоне пробиотика «Лактобифадол».

Практическая значимость. Предложена и опробована схема совместного применения пробиотика «Лактобифадол» и порошка корня одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) с целью профилактики и лечения нарушений работы ЖКТ, связанных с особенностями содержания животных в условиях города.

Предложена и опробована оптимальная схема применения пробиотика «Лактобифадол» лошадям русской рысистой породы, несущим ежедневную нагрузку ипподромного тренинга.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Научное обоснование необходимости пробиотикотерапии на основе изучения заболеваемости лошадей, содержащихся и эксплуатирующихся в городе, в зависимости от возраста, породы и времени года.

2. Эффективность применения пробиотика «Лактобифадол» и пробиотика совместно с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) с профилактической и лечебной целью лошадям в условиях конно-патрульной службы;

3. Влияние пробиотика «Лактобифадол» на физиолого-биохимические показатели лошадей русской рысистой породы в условиях ипподромного тренинга в период относительного покоя и после маховой нагрузки;

4. Результаты научного обоснования внедрения в ветеринарную практику пробиотика «Лактобифадол» и его комбинации с корнем одуванчика лекарственного (Taraxacum officinale) лошадям при различных направлениях эксплуатации.

Апробация результатов исследований. Основные положения и результаты диссертационной работы представлены, опубликованы и одобрены на: Международной научной конференции по патофизиологии животных, посвящённой 90-летию кафедры патологической физиологии ФГОУ ВПО «СПбГАВМ», СПб, (2011 г.); Международных научно-практических конференциях: «Инновационные технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции», Владикавказ, (2011 г.); «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе», Кострома, (2012 г.); «Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии», Москва, (2012 г.); II Международном конгрессе ветеринарных фармакологов, посвященном 80-летию заслуженного деятеля науки РФ, профессора В.Д. Соколова «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», СПб, (2012 г.); Фармакологической научной конференции, посвящённой 90-летию академика М.И. Рабинович, Троицк, (2012 г.), на межкафедральном совещании сотрудников ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Публикации. По результатам собственных исследований с 2009-2012 г.г. опубликовано 11 научных статей, в том числе 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 130 страницах компьютерного текста и включают введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы (180 источников, в т.ч. 40 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 31 рисунком и 35 таблицами, имеет приложения.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Особенности микробиоценоза пищеварительной системы лошади

Основа рациона любой лошади состоит из растительной пищи, богатой как растворимыми, так и нерастворимыми углеводами. Легкопереваримые углеводы, такие как простые сахара и крахмал, в определённых условиях быстро расщепляются амилолитическими ферментами пищеварительного тракта, в форме моносахаридов проходят стенку кишечника и всасываются в кровь. Труднопереваримые корма, в состав которых входит большое количество клетчатки, не могут полностью перевариваться за счёт пищеварительных ферментов. Основной гидролиз целлюлозы осуществляется микрофлорой толстого кишечника до образования органических кислот, которые после всасывания принимают участие в обмене веществ [22, 89].

ЖКТ взрослого животного содержит комплекс микроорганизмов разных видов, которые формируют определённый микробиологический фон, характерный для каждого вида хозяина. Все микроорганизмы существуют в состоянии динамического равновесия и относительного симбиоза. В этой популяции присутствует более 1000 видов бактерий, взаимодействующих друг с другом и организмом животного [42, 82, 83, 89, 160, 169]. При этом в составе микрофлоры пищеварительного тракта существуют потенциально патогенные микроорганизмы, но экологический баланс здесь таков, что они остаются в безопасном для организма количестве. Но при нарушении микробной экосистемы изменяется баланс бактерий в кишечнике и условно-патогенные микроорганизмы становятся доминирующими, в результате развивается дис-бактериоз и возникает ассоциативное заболевание [84, 86, 121, 135, 154, 156].

В.М. Покровский, Г.Ф. Коротько (2007) предлагают подразделять микрофлору кишечника на три группы: 1 -ая - главная (составляют 90% от всех микробов); 2-ая - сопутствующая (10%); 3-я - остаточная (менее 1%). Микроорганизмы, связанные со слизистой оболочкой кишечника, относятся к му-козной микрофлоре - М-микрофлоре, а локализованные в полости кишечника

- к полостной - П-микрофлоре. М-микрофлора прикрепляется только к определенным рецепторам слизистой оболочки ЖКТ, число которых ограничено. Таким образом, М-микрофлора повышает колонизационную резистентность кишечника, препятствуя пенетрации слизистой оболочки патогенными и условно-патогенными микроорганизмами и конкурируя с ними за взаимодействие с рецепторами эпителиальных клеток слизистой оболочки кишечника [42, 59, 89].

По данным многих источников литературы в микроэкологии пищеварительного тракта чрезвычайно важны сроки заселения его отдельными микроорганизмами. Условно-патогенные и патогенные бактерии с высокой адге-зивностыо, первыми попавшие в полость ЖКТ животного сразу после рождения, в течение нескольких часов могут занимать свободные экониши и образовывать М-микрофлору кишечника. У таких животных в 100% случаев развиваются заболевания ЖКТ [80, 86, 121, 130, 133, 137, 155]. Бактерии -пробионты обеспечивают опережающее заселение кишечника новорожденных животных нормальной микрофлорой и создают биологический барьер, преграждающий доступ к ней патогенных и условно-патогенных бактерий, то есть создают колонизационную резистентность [50, 51, 141, 146].

Резидентная микрофлора пищеварительного тракта животных качественно однотипна, отмечают лишь разное количество микроорганизмов того или иного рода в различных отделах ЖКТ [82, 86]. Учитывая данные клинических и микробиологических исследований, а также доминирующее положение бифидофлоры в кишечнике здоровых животных, многие авторы считают, что представители Bifidobacterium - основная таксономическая группа микрофлоры пищеварительного тракта, являющаяся показателем здоровья макроорганизма, его колонизационной резистентности. Так, при дисбакте-риозе из ЖКТ первой исчезает бифидофлора, то есть патологические сдвиги в организме напрямую зависят от элиминации Bifidobacterium. С исчезновением последних снижается иммунобиологическая активность организма из-

за нарушений процессов пищеварения, всасывания и всех видов обмена, сни-

10

жается усвоение железа, кальция и др. [42, 84, 131, 133, 155, 169].

В работах многих учёных показано, что Lactobacillus - доминирующие компоненты микрофлоры верхних отделов ЖКТ взрослых здоровых животных различных видов [38, 42, 86, 179]. Среди видов Lactobacillus, в большей или меньшей степени характерных для кишечного тракта большинства животных, встречаются - L. acidophilum, L. fermentum и L. salivarus, L. casei и L. plantarum - встречаются реже. Согласно исследованиям К. Fey, H.Sasse (1996) и некоторых других авторов в пищеварительном тракте лошадей по сравнению с другими группами микроорганизмов также наиболее высок удельный вес Lactobacillus. Lactobacillus spp. доминируют в двенадцатиперстной кишке и на протяжении всего тонкого кишечника. В толстом кишечнике преобладают бифидобактерии, лактобациллы, энтерококки, стрептококки, облигат-ные анаэробы. Один грамм нормальных фекалий лошадей содержит 105 КОЕ Lactobacillus, Ю3КОЕ Clostridia, от 106 до 108 КОЕ Enterococcus, от 105 до 106

о с

КОЕ Enterobacteria и от 10 до 10 КОЕ анаэробных бацилл. Е. Coli и стрептококки распространены от двенадцатиперстной до подвздошной кишки. На представителей Acinetobacter spp., Staphylococcus spp., коринеморфных бактерий приходится ЮбКОЕ [38, 42, 86, 121, 133, 135, 173, 179].

1.2. Физиологическое значение кишечной микрофлоры для организма

животного

В пищеварительном тракте бактерии, адгезируясь на слизистой оболочке кишечника, осуществляют защитную функцию от проникновения патогенных, условно-патогенных микроорганизмов и токсин