Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Разработка и обоснование диагностики и лечения животных с хирургическим сепсисом
ВАК РФ 06.02.04, Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства
Автореферат диссертации по теме "Разработка и обоснование диагностики и лечения животных с хирургическим сепсисом"
ПА ^ •
На правах рукописи ЧЕРНИГОВА Светлана Владимировна
РАЗРАБОТКА И ОБОСНОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖИВОТНЫХ С ХИРУРГИЧЕСКИМ СЕПСИСОМ
06.02.04 - ветеринарная хирургия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
2 7 МАР 2014
Санкт-Петербург - 2014 005546416
005546416
Работа выполнена в институте ветеринарной медицины и биотехнологии ФГЪОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина»
Научный консультант:
СТЕКОЛЬНИКОВ Анатолий Александрович,
доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии, заслуженный деятель науки РФ
Официальные оппоненты:
САМОШКИН Игорь Борисович,
доктор ветеринарных наук (06.02.04), профессор,
заслуженный ветеринарный врач РФ,
профессор кафедры анатомии
и гистологии животных
ФГБОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина
РЫЖАКОВ Альберт Валерьевич,
доктор ветеринарных наук (06.02.04), профессор, профессор кафедры внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства ФГБОУ ВПО ВГМХА им. Н.В. Верещагина
ШАКИРОВА Фаииа Владимировна,
доктор ветеринарных наук (06.02.04), доцент, заведующий кафедрой ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО КГАВМ им. Н.Э. Баумана
Ведущая организация
ФГБОУ ВПО «Алтайская государственная сельскохозяйственная академия»
Защита диссертации состоится «19» июня 2014 г. в «11» часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.01 при ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5, тел/факс (812) 388-36-31.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5.
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» http://www.spbgavm.ru и официальном сайте ВАК РФ - http://vak.ed.gov.ru 2014 г.
Автореферат разослан 2014 года
Ученый секретарь
диссертационного совета ,
д.в.н., профессор /С/и^и^; О.В. Крячко
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В настоящее время сепсис по-прежнему остаётся одной из актуальных проблем современной ветеринарной и гуманитарной медицины (A.A. Стекольников, C.B. Чернигова, 2013; Гусев, 2010). Поскольку сепсис чаще встречается при заболеваниях, относящихся по своим этио-патогенетическим признакам к группе хирургических, то в последнее время утвердилось понятие хирургический сепсис, которое рассматривается как самостоятельная проблема (М.В. Гринёв, 2001).
В общей структуре заболеваемости животных хирургический сепсис и его осложнения (полиорганная недостаточность и септический шок) занимают особое место, так как они характеризуются трудностью диагностики и лечения, а также сопровождаются высокой летальностью (А.И. Золотарев, 2008). Летальность животных с системным воспалением колеблется в среднем от 26,6 до 50,0%, а с ин-фекционно-токсическим шоком он превышает 80% (В.Н. Видении, 2008). Процесс лечения животных затрудняет отсутствие единой концепции в понимании механизмов развития этого заболевания (В.Г. Бочоришвили, 1997; Б.Р. Гельфанд, 2004). Высокая вирулентность микроорганизмов, снижение иммунной защиты в организме животных, глубокие нарушения гомеостаза, метаболические, циркуля-торные и функциональные расстройства жизненно важных систем организма и т.д. требуют научного поиска в разработке принципиально новой системы взглядов на диагностику и лечение животных с хирургическим сепсисом (А.И. Золотарев, 2011).
При хирургическом сепсисе непременным условием лечения животных является своевременная и полноценная детоксикационная терапия, направленная на коррекцию и поддержание нарушенных функций органов и систем (L. Pierre, 2006; И.В. Александрова, 2008). В настоящее время большое внимание уделяется эффективности гемосорбции как метода активного удаления из крови различных токсических продуктов путем контакта крови с сорбентом вне организма (A.A. Стекольников, C.B. Чернигова, 2013; H.A. Арсениев, 2000), но до сих пор нет единой точки зрения о роли эфферентных методов детоксикации в лечении животных с хирургическим сепсисом.
Одной из основных причин неудовлетворительных результатов лечения, на наш взгляд, является отсутствие единого понимания развития септического процесса и связанных с ним осложнений (Н.Р. Керимова, 2007). Существующие на сегодняшний день разночтения в методах оценки объективного статуса животных хирургического профиля затрудняют выбор рациональной и эффективной тактики лечения. Необходимо также отметить, что имеющиеся работы, посвященные изучению данной проблемы, не охватывают всего комплекса систем организма, не отслеживают динамику септического процесса и его стадийность, не выстраивают прогноз его развития с ранних сроков патологического процесса.
Учитывая выше изложенное, изучение патогенеза системного воспаления, в частности, хирургического сепсиса, представляет собой фундаментальную проблему, что подтверждает её несомненную актуальность. Данная научная тема напрямую связана с изучением пусковых механизмов патогенеза хирургического сепсиса и развития осложнений (C.B. Петров, 2007). Перечисленные выше факты и теоретические предпосылки определили цель и задачи настоящего исследования.
Цель. Разработать, обосновать и внедрить в клиническую ветеринарную
/"Y
практику алгоритм диагностики и коррекции функционально-метаболических и иммунных нарушений у животных с хирургическим сепсисом.
Исходя из поставленной цели, были определены следующие задачи.
1. Разработать и обосновать способ лечения животных с хирургическим сепсисом.
2. Определить стадии развития системного воспаления при хирургическом сепсисе у животных с выявлением облигатных диагностических критериев.
3. Установить особенности клинического течения, гемодинамических, метаболических и иммунологических нарушений у животных с хирургическим сепсисом.
4. Разработать способ экстракорпоральной детоксикации и технические средства для животных с системным воспалением с обоснованием клинических возможностей и побочных эффектов.
5. Доказать наличие метаболических, иммунологических и гемодинамических взаимосвязей течения хирургического сепсиса при использовании гемо-сорбции и глутоксима.
6. На основании анализа клинико-патофизиологических нарушений со стороны основных органов и систем разработать систему прогнозирования и мониторинга системного воспаления при хирургической инфекции.
7. С учетом закономерностей развития системного воспаления разработать патогенетически обоснованный алгоритм интенсивной терапии животных с хирургическим сепсисом.
Научная новизна работы. С учетом клинико-патофизиологических нарушений разработан способ лечения животных с хирургическим сепсисом (положительное решение на выдачу патента «Способ лечения животных с хирургическим сепсисом», заявка 2012156146 от 24.12.2012 г.).
Проведено комплексное исследование гемостаза, показателей эндотоксикоза, перекисного окисления липидов и иммунного статуса у животных с хирургическим сепсисом.
Изучена частота встречаемости и смертности системного воспаления у отдельных видов животных и разработана классификация хирургического сепсиса с учетом стадий развития патологического процесса.
Разработана балльная оценка клинико-неврологического статуса животных хирургического профиля, позволяющая выявлять сепсис на ранних стадиях развития, обеспечивать своевременное и адекватное начало лечения, возможность проводить статистический учет заболеваемости и летальности, а также позволила объективно оценивать эффективность проводимых лечебных мероприятий с целью их своевременной корректировки.
Разработаны способ экстракорпоральной очистки крови животных (патент № 2363420) и технические средства его обеспечения (патент № 106539, патент № 104450, патент № 132986) с обоснованием режимов, детоксикационных возможностей и побочных эффектов.
Установлена роль нарушения функции антиоксидантной системы и метаболизма пуриновых мононуклеотидов в организме животных с хирургическим сепсисом и выявлены механизмы развития недостаточной обеспеченности тканей глутатионом.
Доказано, что нельзя предупредить развитие полиорганной недостаточности
при хирургическом сепсисе у животиых без адекватной детоксикации. Установлено, что на фоне использования гемосорбции и глутоксима происходит адаптация клеток, тканей и органов животных в ответ на гиперметаболическую эндотоксе-мию и массивное цитокиновое воздействие.
На основании полученных данных о механизмах формирования полиорганной недостаточности при хирургическом сепсисе, предложена новая концепция интенсивного лечения животных с системным воспалением с дифференцированным включением экстракорпоральной и иммунокоррекции и доказана их высокая эффективность.
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана принципиально новая концепция развития системного воспаления и практически обоснована классификация хирургического сепсиса животных, с учетом стадии развития патологического процесса.
Установлено, что внедрение многоуровневой шкалы оценки клинико-неврологического статуса животных хирургического профиля позволяет на ранних сроках септического процесса выделить группы повышенного риска развития данных осложнений и прогнозировать исход заболевания и его летальность. Разработанная балльная оценка позволяет адекватно оценивать состояние животного, сокращать время диагностического поиска, определять подходы к началу проведения интенсивной терапии и оптимизировать выбор тактики лечения животных с хирургическим сепсисом.
Разработанный способ экстракорпоральной очистки крови животных и технические средства, обеспечивающие его выполнение, позволяют корректировать функции антиоксидантной и иммунной систем, а также метаболизм пуриновых мононуклеотидов в организме животных с хирургическим сепсисом, что существенно повышает эффективность проводимой терапии. На основании экспериментальных исследований патогенетически обоснована целесообразность включения в комплексное лечение животных с хирургическим сепсисом метода экстракорпорального очищения крови - гемосорбции и препарата детоксикационного и антиоксидантного действия - глутоксима.
Разработанный алгоритм лечения животных с хирургическим сепсисом позволяет прогнозировать развитие заболевания, оценивать тяжесть состояния животного и проводить мониторинг степени истощения механизмов компенсации для своевременной коррекции проводимых терапевтических мероприятий, что в конечном итоге позволяет снизить летальность и выбраковку высокопродуктивных животных.
Проведенные клинико-экспериментальные исследования позволили улучшить результаты лечения животных с хирургическим сепсисом. На основании результатов научной работы изданы методические рекомендации «Экстракорпоральная гемокоррекция в клинической практике ветеринарной медицины», одобрена Координационным Советом по животноводству и ветеринарии СевероЗападного регионального научного центра Россельхозакадемии, издано учебное пособие, рекомендованное УМО высших учебных заведений РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии. Получены патент № 2363420 «Способ гемосорбции у собак», положительное решение на выдачу патента «Способ лечения животных с хирургическим сепсисом» (заявка 2012156146 от 24.12.2012 г.), патент № 106539 «Устройство для проведения гемосорбции у животных», патент
№ 104450 «Станок для фиксации животных», патент № 132986 «Станок для фиксации мелкого рогатого скота», приоритетная справка на изобретение «Способ лечения животных с острым травматическим остеомиелитом» (заявка 2013104436 от 01.02.2013 г.)
Результаты исследований внедрены в учебный процесс на кафедре оперативной хирургии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, на кафедре диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства Института ветеринарной медицины и биотехнологии ОмГАУ им. П.А. Столыпина, на кафедре хирургии, акушерства и ОВД Ульяновской государственной академии им. П.А. Столыпина, на кафедре внутренних неза-
--------- - разных болезней, хирургии и акушерства Вологодской государственной молочно-
хозяйственной академии им. Н.В. Верещагина, на кафедре внутренних болезней и хирургии Ижевской государственной сельскохозяйственной академии.
Разработанные методики диагностики и лечения животных с хирургическим сепсисом, а также балльная шкала оценки больных животных хирургического профиля внедрены и широко используются в практической деятельности отдела животноводства ГНУ «Сибирский научно-исследовательский институт сельского хозяйства» сибирского отделения Россельхозакадемии, клинической практике центра травматологии и ортопедии «ОмВет» г. Омска, практической работе зонального центра кинологической службы полиции УМВД России по Омской области, ГУ ветеринарии по Омской области, Омского областного центра по профилактике, экспертизе и лечению животных, БУ Омской области «Омская областная ветеринарная лаборатория».
Производственные испытания проходили в условиях центра травматологии и ортопедии «ОмВет» г. Омска, совхоза «Рассвет» Любинского района Омской области, ОПХ «Омское» государственного научного учреждения «Сибирский научно-исследовательский институт сельского хозяйства» Российской академии сельскохозяйственных наук, зонального центра кинологической службы полиции УМВД России по Омской области.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Хирургический сепсис у животных отличается степенью выраженности ответной реакции и сопровождается развитием послеоперационных осложнений, метаболических изменений, полиорганной недостаточности, и условно может быть разделен на три стадии: I стадия — очаг инфекции + ССВР; II стадия - очаг инфекции + ССВР +СПОН; III стадия - очаг инфекции + ССВР + СПОН + СШ.
2. Применение гемосорбции и инфузий глутоксима в комплексной интенсивной терапии животных с хирургическим сепсисом патогенетически обоснованно и позволяет снизить летальность у данной категории пациентов в 2,4 раза.
3. Патогенетически обоснованная система прогноза развития хирургического сепсиса и формирования полиорганной недостаточности информативна и специфична. Мониторинг развития септического процесса и полиорганной недостаточности на ранних сроках заболевания ускоряет принятие алгоритма лечения, повышает качество оказываемой помощи, оптимизирует тактику ведения и подходы к применению средств интенсивной терапии.
Апробация работы. Основные материалы работы доложены, обсуждены и одобрены на научно-практической конференции «Аграрная наука — сельскому хо-
зяйству» (Барнаул, 2007), VII сибирской ветеринарной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2007), 6-ой межрегиональной научно-практической конференции посвященной 85-лётию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Биологические аспекты фундаментальной и прикладной медицины и ветеринарии» (Омск, 2007), XVI, XVII, XVIII Московских международных Конгрессах по болезням мелких домашних животных (Москва, 2008, 2009, 2010), 8-й межрегиональной научно-практической конференции «Патология продуктивных и непродуктивных животных, рыб и птиц» (Омск, 2009), II Сибирском ветеринарном Конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2010), международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Саратов, 2010), международной научно-практической конференции, посвященной памяти выдающегося организатора Сибирской ветеринарной науки А. В. Копырина «Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных» (Омск, 2010), 4-ой международной конференции молодых ученых, посвященной 40-летию Россельхозакадемии «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых» (Краснообск, 2010); международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина домашних животных» (Казань, 2010), X сибирской ветеринарной конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2011), международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной хирургии» (Ульяновск, 2011), международной научно-практической конференции «Евразийская интеграция: роль науки и образования в реализации инновационных программ» (Казахстан, Орал, Уральск, 2012), XI Сибирской ветеринарной конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2012), международной научно-практической конференции «Аграрная наука: современные проблемы и перспективы развития», посвященной 80-летию со дня образования Дагестанского государственного аграрного университета им. М.М.Джамбулатова (Махачкала, 2012), II международной научной телеконференции «Publishing European Applied Sciences: modern approaches in scientific researches» (Германия, Штутгарт, 2013), международной научной конференции по вопросам ветеринарной хирургии «Инновации, достижения в профилактике и лечении хирургических болезней у животных» (Санкт-Петербург, 2013).
Публикации. По результатам исследований опубликовано 40 научных статей, 15 из которых в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации результатов докторских диссертаций, получено 5 патентов РФ, издано 3 учебно-методические работы.
Личный вклад соискателя. Личное участие автора диссертации охватывает все разделы экспериментальных, клинических и производственных исследований. Автором выполнен основной объем исследований, самостоятельно проведен анализ научной литературы и полученных данных, сформулированы основные положения диссертации, составляющие ее новизну и практическую значимость. Разработана и научно обоснована система диагностики и лечения животных с хирургическим сепсисом с применением метода экстракорпоральной очистки крови (гемо-сорбции) и цитопротекторного трипептида - глутоксима. В статьях, опубликованных совместно с А.А. Стекольниковым, Ю.В. Черниговым, С.К.-Р. Байзыхановым, Т.Ш. Кузнецовой основная часть работы выполнена диссертантом. Соавторы не возражают в использовании полученных результатов.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 230 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (результатов исследования, обсуждения результатов и заключения), выводов, практических рекомендаций и приложений. Список литературы включает 393 источника, из них 121 - иностранных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 43 рисунками.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материал и методы. Экспериментальные и клинические исследования были выполнены в период с 2005 по 2013 год в условиях института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина», ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» и центра ветеринарной травматологии и ортопедии «ОмВет» г. Омска. Отдельные исследования проведены в лаборатории резистентности животных ИВМиБ ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина и в центре лабораторной диагностики Омской государственной медицинской академии.
Экспериментальные исследования выполнены на 25 беспородных собаках обоего пола массой 8-12 кг (10,08±0,72 кг). Клинический материал был основан на лечении 67 частных собак, поступавших в ветеринарную клинику с диагнозом «Хирургический сепсис» и 34 продуктивных животных. Продуктивные животные с диагнозом «Хирургический сепсис» были выявлены в совхозе «Рассвет» Любин-ского района Омской области. Исходя из задач исследования, экспериментальный и клинический материал был распределен на 6 серий опытов. Были проведены клинические, морфологические, бактериологические, гематологические, биохимические и гистологические исследования.
В первой серии опытов на беспородных собаках отрабатывали метод толерантной гепаринизации животных (группа 1). Для этого перед гемосорбцией определяли исходное время свертываемости по Ли-Уайту, а затем внутривенно вводили тест-дозу гепарина из расчета 50 ЕД на 1 кг массы. Через 3 и 15 мин после введения гепарина вновь определяли время свертываемости по Ли-Уайту. С учетом полученных трех показателей, характеризующих индивидуальную чувствительность животного к гепарину и способность к элиминации, рассчитывали дозы гепарина, необходимые для создания и поддержания оптимального уровня свертываемости крови.
Во второй серии опытов на беспородных собаках проводили исследования, позволяющие обосновать наиболее адекватные и надежные способы подключения животных к экстракорпоральному контуру (группа 1). Обеспечение сосудистого доступа осуществляли операционными или неоперационными способами. Для этого проводили пункцию периферических вен на передних конечностях, посередине между локтевым и запястным суставами, а также подключение системы гемосорб-ции к магистральным сосудам, обеспечивали по средствам пункции и катетеризации яремной вены. Данная серия экспериментов включала в себя разработку устройств и режимов, обеспечивающих адекватную гемосорбцию у животных.
В третьей серии опытов на частных собаках (группы 2 и 3) изучали влияние перекисного окисления липидов на развитие патогенетически значимых звеньев системного воспаления, развивающихся в организме животных с хирургическим сепсисом. Оценку давали с использованием клинических, биохимических, гемато-
логических методов исследования. Контролем служили клинически здоровые животные.
В четвертой серии опытов на частных собаках изучали влияние провоспали-тельных и противовоспалительных медиаторов на развитие системного воспаления, развивающегося в организме животных с хирургическим сепсисом. Оценку давали с использованием клинических и иммунологических методов исследования (группы 2 и 3). Контролем служили клинически здоровые животные. В пятой серии опытов на частных собаках оценивали эффективность традиционного лечения животных с хирургическим сепсисом (группа 2). С учетом развития патогенетических процессов в организме больных животных, собакам группы 3 помимо традиционного лечения проводили экстракорпоральную очистку крови углеродным гемосорбентом ВНИИТУ-1. Коррекцию нарушений иммунной системы осуществляли модулятором глутоксимом, который вводили подкожно в течение 10 дней. Сравнительную оценку эффективности разработанной схемы лечения собак с хирургическим сепсисом проводили с использованием клинических, биохимических, гематологических, иммунологических методов исследования. Контролем служили клинически здоровые животные.
В шестой серии опытов на продуктивных животных изучали эффективность комплексного лечения хирургического сепсиса. Животным группы 4 проводилось традиционное лечение, а животным групп 5 и 6, помимо традиционного лечения, проводили сеансы гемосорбции (в зависимости от тяжести заболевания от 1 до 3-х сеансов с интервалом 24-48 часов) и в течение 10 дней подкожно вводили имму-номодулятор глутоксим в дозе 3 мг/кг массы тела.
Сравнительная оценка эффективности, разработанной схемы лечения продуктивных животных с хирургическим сепсисом, проводилась с использованием клинических, биохимических, гематологических, иммунологических методов исследования. Контролем служили клинически здоровые животные. Общая схема экспериментально клинических исследований изображена на рис. 1.
Традиционное лечение животных с хирургическим сепсисом включало хирургическую санацию первичного очага инфекции, современную антибактериальную терапию, респираторную, гемодинамическую и нутритивную поддержку, рациональную инфузионнотрансфузионную терапию. Контролем служила группа здоровых животных обоего пола того же возраста.
Для оценки клинического статуса животного и изучения патохимических процессов в организме животных с системным воспалением в крови, определяли содержание гемоглобина — гемоглобинцианидным методом, количество эритроцитов - на полуавтоматическом фотометре с проточной кюветой, общее содержание лейкоцитов путем подсчета в камере Горяева, лейкоцитарную формулу на 100 клеток путем окрашивания мазка по Романовскому-Гимзе, содержание белка биу-ретовым методом, билирубина — по Иендрашеку, креатинина — по Яффе, мочевины — уреазным методом, вещества низкой и средней молекулярной массы по Н.И. Габриэлян и М.Я. Малаховой, олигопептиды методом определения белка по Ло-ури.
Кровь у собак брали натощак утром из лучевой вены, её фракционировали на плазму и эритроциты. Исследования проводили на биохимическом анализаторе-полуавтомате «Микролаб-300». В плазме крови определяли концентрацию моче-
Рисунок 1 - Общая схема экспериментачьно-клинических исследований
вой кислоты, С-реактивного белка - иммуноферментным методом, мочевой кислоты — по Otetea et al. и белка по Lowry et а!.. Из эритроцитов готовили 20% лизат, в котором определяли содержание малонового диальдегида — по И.Д. Стальной и Т.Г. Гаришвилли, определяли активность супероксид-дисмутазы по В.Н. Чумакову и Л.Ф. Осинской, каталазы - по В.Д. Конваю и А.В. Лукошкину, глутатионперок-сидазы - по Paglia & Valentine, глутатион-редуктазы - по Racker, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы — по Ю.Л. Захарьину, содержание глутатиона — по Sedlak & Lindsey.
Оценку иммунного статуса у больных животных с хирургическим сепсисом проводили при помощи стандартизированных методик. Концентрацию IL-ф, IL-6, TNF-a в сыворотке крови определяли методом тверднофазного ИФА (М.П. Гри-шаев, 1998, E.D. Heegaard, 2002) с использованием тест-систем ООО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург). Чувствительность наборов для IL-ip и IL-6 составляла 10 пг/мл, для TNF-a - 20 пг/мл. В его основе лежит образование комплекса «антиген-антитело» на твердой фазе полистирольных планшет и дальнейшая «трансформация» ферментной метки в соответствующий сигнал, регистрируемый с помощью спектрофотометра «Мультискан» (Финляндия).
При выявлении степени эндотоксикоза использовали определение уровня веществ средней и низкой молекулярной массы (ВНСММ) и олигопептидов (ОП) в биологических жидкостях (кровь — артериальная и венозная, эритроциты и плазма, моча) по М.Л. Малаховой при помощи спектрофотометрического метода на аппарате «Genesis» (США).
Для определения показателей, характеризующих систему гемостаза, использовали коагулографические, агрегатометрические, микрокоагуляционные и пробирочные тесты (З.С. Баркаган, АЛ. Момот, 2001). Методы исследования сосудисто-тромбоцитарного (первичного) гемостаза: определение количества тромбоцитов в крови путем подсчета тромбоцитов в камере Горяева с применением в качестве разводящей и гемолизирующей жидкости раствор оксалата аммония.
Материалы исследования, были подвергнуты статистической обработке с использованием параметрических и непараметрических критериев. Накопление, корректировка, систематизация, статистический анализ исходной формации и визуализация полученных результатов проводилась в электронных таблицах «Excel». Биометрический анализ осуществлялся с использованием пакетов STATISTICAL БИОСТАТИСТИКА, возможностей Microsoft Excel. Проверка нормальности распределения производилась с использованием методов Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилки, проверка гипотез о равенстве генеральных дисперсии с помощью критерия Левене. Средние выборочные значения количественных признаков приведены в тексте в виде М±ш, где М — среднее выборочное, m — стандартная ошибка среднего.
2.2. Разработка классификации хирургического сепсиса у животных и балльной оценки клинико-неврологического статуса больных хирургического профиля. На начальном этапе научного исследования мы столкнулись с проблемой отсутствия в ветеринарной хирургии классификации хирургического сепсиса, которая отражала бы степень развития системного воспаления в организме животных. Отсутствие четкого понимания форм и стадий сепсиса не позволяет ветеринарному врачу-клиницислу выявлять сепсис на ранних стадиях, а значит, своевременно выбирать оптимальную тактику лечения животных.
Для решения поставленной задачи, нами была разработана классификация хирургического сепсиса с учетом стадийности развития патологического процесса.
I стадия характеризовалась наличием следующих облигатных (обязательных) диагностических критериев:
1) наличие очага инфекции;
2) вовлечение в воспалительный ответ двух и более систем организма животного, которое характеризовалось наличием синдрома системной воспалительной реакции (ССВР).
Схематично I стадию хирургического сепсиса можно представить: очаг инфекции + ССВР. ССВР регистрировали при наличие гипер- или гипотермии - повышении (понижении) температуры тела животного на 1,5-2°С; тахикардии -учащении частоты сердечных сокращение (ЧСС) в минуту на 30% в сравнении с нормой; учащении частоты дыхания в минуту на 40%; лейкоцитозе (лейкопении) на 50% и более или наличии более 10% палочкоядерных нейтрофилов.
II стадия включала диагностические критерии I стадии хирургического сепсиса в сочетании с полиорганными нарушениями, такими как артериальная гипо-тензия, молочнокислый ацидоз, олигурия, нарушение координации и др. Синдром полиорганной недостаточности (СПОН) регистрировали при нарушениях хотя бы в одной из жизнеобеспечивающих систем: дыхательной, сердечно-сосудистой. Схематично II стадию хирургического сепсиса можно представить как очаг инфекции + ССВР +СПОН.
У животных во II стадии хирургического сепсиса при недостаточности со стороны дыхательной системы применяли искусственную вентиляцию легких, при недостаточности сердечно-сосудистой системы, которая характеризовалась снижением артериального давления, применяли симпатомиметики.
СПОН при хирургическом сепсисе у животных часто характеризовался выраженными нарушениями в системе гемокоагуляции, регистрировали снижение количества тромбоцитов ниже 100х109/л или возрастание фибринолиза свыше 18%. У больных животных отмечали нарушения функции печени, которое характеризовалось повышением содержания билирубина свыше 34 мкмоль/л или активности аминотрансфераз более чем в 2 раза выше по сравнению с контрольными животными. Практически во всех случаях у таких животных регистрировали и нарушение функции почек, что выражалось в повышении концентрации креатинина свыше 0,18 ммоль/л. У отдельных животных наблюдали динамическую кишечная непроходимость, которую мы связываем с нарушением регионарного брыжеечного кровообращения, изменением возбудимости периферического и центрального нервных аппаратов, регулирующих моторную функцию кишечника.
III стадия хирургического сепсиса характеризовалась развитием септического шока (СШ), который выражался в артериальной гипотензии, сохраняющейся, несмотря на адекватную коррекцию гиповолемии, и нарушением перфузии. У больных животных в этой стадии требовалось незамедлительное применение ка-техоламинов (дофамин). Схематично III стадию хирургического сепсиса можно представить: очаг инфекции + ССВР + СПОН + СШ.
У большинства клинических животных летальный исход был обусловлен про-грессированием развитием хирургического сепсиса, септического шока. Данное обстоятельство диктовало необходимость более тщательного подхода к анализу клинико-лабораторных показателей, с целью определения диагностических и про-
Таблица 1 — Балльная оценка клинико-неврологического статуса (КНС) _животных с хирургическим сепсисом_^_
Показатель Баллы
1 2
Кома ареактивная 25
ПОВЕДЕНЧЕСКАЯ Двигательное возбуждение 15
РЕАКЦИЯ Возможность разбудить животное 8
Бодрствование 0
Нормальный 0
Корнеальный Вялый 3
К 3 03 Л о а «О Отсутствует 5
Нормальный 0
Глотательный Вялый 3
§1 Рч Н Отсутствует 5
Реакция зрачка на свет Нормальный 0
Вялый 3
м Э к н Отсутствует 5
Э 8 н О о т Нормальный 0
Реакция на боль Вялый 3
Отсутствует 5
Нормальный 0
Зрение Вялый 3
Отсутствует 5
Полная неподвижность 25
Способность держать голову 20
СОСТОЯНИЕ Способность сидеть 15
ДВИГАТЕЛЬНОМ СФЕРЫ Способность стоять 10
• _____. - - ; Способность ходить пошатываясь _ ...... ... 5 . .
Уверенная походка •■'•• •• •• - ••• ••• ■ 0
Невозможность определить координацию 25
КООРДИНАЦИЯ Выраженная атаксия 20
ДВИЖЕНИИ Умеренная атаксия 10
Нормальные движения 0
ЛОКАЛИЗАЦИЯ ОЧАГА ИНФЕКЦИИ абдоминальная область 25
мышечная ткань 10
костная ткань 5
норма 0
ТЕМПЕРАТУРА ТЕЛА гипотермии на 1,5-2°С от нормы 10
гипертермия на 1,5-2°С от нормы 5
ЧИСЛО СЕРДЕЧНЫХ норма 0
СОКРАЩЕНИИ В МИН. учащение на 30% от нормы 5
ЧАСТОТА ДЫХАНИЯ В норма 0
МИН. учащение на 40% от нормы 5
ЧАСТОТА ДЫХАНИЯ В норма 0
МИН. учащение на 40% от нормы 5
КОЛИЧЕСТВО норма 0
ЛЕИКОЦИТОВ лейкоцитоз на 50% и более от нормы 5
1 2
лейкопения на 50% и более от нормы 5
наличие более10% палочкоядерных нейтро-филов 5
КОЛИЧЕСТВО ТРОМБОЦИТОВ норма 0
ниже 100x10% 10
ФИБРИНОЛИЗ норма 0
свыше 18% 10
СОДЕРЖАНИЯ БИЛИРУБИНА до 33 мкмоль/л 0
34 мкмоль/л и более 10
АКТИВНОСТЬ АМИНОТРАНСФЕРАЗ (АлАТ, АсАТ) норма 0
повышение более чем в 2 раза 10
КОНЦЕНТРАЦИИ КРЕАТИНИНА до 0,17 ммоль/л 0
0,18 ммоль/л и выше 10
ОБЪЁМ ВЫДЕЛЯЕМОЙ МОЧИ норма 0
уменьшение в 2 и более раза 10
ДЕФЕКАЦИЯ регулярный стул 0
стул редкий, сухой, болезненный 5
динамическая кишечная непроходимость 10
гностических критериев органной дисфункции, разработки тестов для своевременного проведения животным патогенетически обоснованной корригирующей терапии. Для оценки клинико-неврологического статуса нами была разработана балльная шкала, позволяющая диагностировать стадию хирургического сепсиса у животных и прогнозировать исход (табл. 1).
Таблица 2 — Частота встречаемости хирургического сепсиса у животных
Нозологическая форма Всего Вид животного Стадия хирургического сепсиса Балльная оценка КНС Частота встречаемости Смертность
г % г %
Акушерско- гинекологические операции 520 Собака I 89±16 104 20,0 2 2,08
II 154±39 12 2,3 5 41,7
Кошка III 195±8 2 0,38 2 100
Проникающее ранение брюшной полости 108 Собака I 64±13 37 34,3 3 8,1
Баран II 148±25 4 3,7 2 50
Переломы костей 127 Собака I 75±16 26 20,5 1 3,8
Энтеротомия 54 Собака I 93±12 18 33,3 4 22,2
Омфалит 146 Теленок I 63±11 64 43,8 4 6,25
Послекастрацион-ные осложнения 86 Теленок I 71±18 38 44,2 5 13,2
Баран II 144±28 12 14,0 7 58,3
Фистульные осложнения 6 Бычок I 56±0 1 16,7 0 0
Клинико-неврологический статус оценивали на основании общей суммы полученных баллов: 0 баллов — клинически здоровое животное; до 50 баллов - вос-
14
паление носит локальный характер, прогноз благоприятный; от 51 до 130 баллов —
I стадия хирургического сепсиса, прогноз благоприятный; от 131 до 180 баллов —
II стадия хирургического сепсиса, прогноз осторожный; от 181 балла и выше — III стадия хирургического сепсиса, прогноз неблагоприятный.
Применяя разработанную классификацию хирургического сепсиса и балльную шкалу оценки клинико-неврологического статуса животных с 2005 по 2013 годы на базе ветеринарной клиники «ОмВет» (г. Омск) и совхоза «Рассвет» Лю-бинского района Омской области была изучена частота встречаемости хирургического сепсиса у отдельных видов животных с различными нозологическими формами, вызвавшими системное воспаление (табл. 2).
Согласно нашим исследованиям было установлено, что у животных сепсис регистрируется в 32,68±4,35 (I стадия), тяжелый сепсис (II стадия) - 6,67±3,69 и септический шок (III стадия) в 0,38% случаев от общей хирургической патологии. Смертность животных составляет в I стадии 9,27±3,03%, во II стадии - 50,0±4,8%, в III стадии доходит до 100%. Выявление животных на ранних сроках развития болезни позволило своевременно начать адекватную комплексную терапию, и сохранить жизнь четвероногим пациентам.
Таким образом, потребность в разработке классификации и балльной оценке клинико-неврологического статуса животных с хирургическим сепсисом обусловлена, прежде всего, необходимостью ранней диагностики и прогнозирования исходов этого заболевания у животных. Методика позволила обеспечивать своевременное и адекватное начало лечения, давала возможность проводить статистический учет заболеваемости и летальности, а также, позволила объективно оценивать эффективность проводимых лечебных мероприятий с целью их своевременной корректировки.
2.3. Патохимические процессы, развивающиеся в организме животных с системным воспалением.
2.3.1 Нарушения пуринового обмена и функции цитокиновой и аитиокси-дантной систем у животных с хирургическим сепсисом
Целью данной серии научного исследования являлось изучение процессов липопероксидации мембранных структур и функциональных изменений в антиок-сидантной и цитокиновой системах у животных с хирургическим сепсисом.
Клиническая часть работы основана на ретроспективном анализе историй болезни собак с хирургическими инфекциями, поступавших в ветеринарный центр травматологии и ортопедии «ОмВет» г. Омска за период с 2005 по 2010 г.г. Исследования крови собак проводили в Центральной научно-исследовательской лаборатории ОмГМА. Для реализации поставленных задач нами было обследовано 53 самки собак различных пород в послеродовой период, из них 18 собакам была проведена операция кесаревосечение, и 15 клинически здоровых самок. Из этих животных было сформировано 2 опытные и 2 контрольные группы. Группа I — клинически здоровые самки собак (п=15), группа II — собаки с физиологическим течением послеродового/послеоперационного периода (п=20), группа III - животные у которых послеродовый/послеоперационный период осложнился острым эндометритом (п=18), группа VI - послеродовый/ послеоперационный период осложнился хирургическим сепсисом (п=15). Возраст животных составил от 4 до 12 лет.
Диагнозы «Послеродовый эндометрит», «Послеродовый сепсис» были вери-
фицированы в соответствии с изменениями функционирования основных систем жизнеобеспечения: кровообращения, дыхания, терморегуляции и системы крови. У животных регулярно проводили клинико-функциональные исследования. В плазме крови определяли содержание интерлейкинов (1Ь-ф, 1Ь-6,1Ь-8, ЮТ-а, 1Ь-4) и общих антиоксидантов - методом иммуноферментного анализа.
При изучении клинического статуса животных с хирургическим сепсисом (группа VI) было установлено, что синдром полиорганной недостаточности выражался нарушением свертывающей системы крови (53,3%), которая характеризовалось гиперкаогуляцией с внутри-сосудистой агрегацией. У животных этой группы отмечали выраженное возбуждение (20,0%), гипертермию постоянного типа (66,7%). У 26,7% животных двигательная активность переходила в ступор. У двух самок (13,3%), несмотря на проведенное лечение, наступило прогрессирование комы с летальным исходом.
У 60,0% собак VI группы регистрировалось тахипное, стойкая тахикардия, жесткое дыхание. У 66,7% — отмечались признаки печеночной недостаточности, в виде геморрагического синдрома с появлением носовых кровотечений, подкожных геморрагий. Острая почечная недостаточность выявлялась у 86,7% собак, характеризующаяся протеинурией, цилиндрурией, снижением клубочковой фильтрации, гематурией. Синдром энтеральной недостаточности у животных с сепсисом после проведенного кесаревосечения проявлялся в 46,7% случаях, который выражался вздутием живота, вялой перистальтикой, нарушением со стороны водно-электролитного обмена.
Исследование процессов перекисного окисления липидов показало, что у собак с физиологическим течением послеродового периода (II группа), по сравнению со здоровыми нещенными животными репродуктивного возраста (I группа), в показателях процессов перекисного окисления липидов, наблюдается тенденция к интенсификации процессов липопереокисления, проявляющаяся в незначительном увеличении содержания в плазме крови гидроперекисей липидов (ГПЛ) (р<0,05), в значимом повышении диенкетонов (ДК) (р<0,01), что привело, при незначительном повышении содержания нейтральных липидов (НЛ), к достоверному повышению величины окислительного индекса (ОИ) (р<0,05).
У животных с гнойно-септическими осложнениями (группа VI) эти процессы значительно выходят за пределы физиологического состояния. Наблюдается выраженная активация процессов перекисного окисления липидов, в сравнении с аналогичными показателями плазмы крови самок I и II групп. Так, содержание нейтральных липидов повышается незначительно, но достоверно значимо по сравнению с показателями I группы (р<0,05). По сравнению с показателями II группы имеет тенденцию к увеличению, но не достигает значимого значения (р>0,05). Содержание гидроперекисей липидов значительно увеличивается, повышается в 5 и 4 раза (р<0,001), в сравнении с животными контрольных групп I и II соответственно. Содержание диенкетонов достоверно повышается в плазме крови у самок с аку-шерско-гинекологическим сепсисом в 11,6 раз (р<0,001) и в 4,5 раза (р<0,001) (сравнение с показателями I и II группы). Соответственно, величина окислительного индекса увеличивается до значения 1,34 (р<0,001) и связана с большим повышением концентрации гидроперекисей липидов относительно нейтральных липидов.
У животных с послеродовым эндометритом (группа III) наблюдается анало-
гичная картина в изменении показателей процессов перекисного окисления липи-дов, по сравнению с данными показателями плазмы крови самок групп I и II. По сравнению с VI группой собак содержание гидроперекисей липидов и диенкетонов ниже в 1,4 и 1,6 раз (р<0,05), при этом величина окислительного индекса, также не достигает значимых изменений (р>0,05).
Чрезмерная активация процесса перекисного окисления липидов при гнойно-септических осложнениях, способствует обвальному росту процессов радикалооб-разования с образованием начальных и конечных продуктов (гидроперекисей липидов, диенкетонов).
Параллельно изменению интенсивности перекисного окисления липидов, происходит изменение активности системы антиоксидантной защиты. Динамика содержания общих антиоксидантов в группах III и IV имеет тенденцию к выраженному снижению, по сравнению с данными I и II групп (р<0,01). Концентрация среднемолекулярных пептидов (СМП) имеет обратную тенденцию, т.е. достоверное повышение (р<0,05 - <0,01), при этом концентрация этого показателя в плазме крови животных группы IV выше, чем в группе III (р<0,05). Следует заметить, что значения общих антиоксидантов и среднемолекулярных пептидов в группах I и II практически находятся на одном уровне и не имеют достоверных изменений (р>0,05).
При исследовании состояния цитокиновой системы выявлено, что у собак с физиологическим течением послеродового периода, по сравнению с группой здоровых самок, в содержании медиаторов в плазме крови IL-lß, IL-6, TNF-a, IL-8 не наблюдается достоверно значимых изменений (р>0,05), содержание IL-4 незначительно повышено (р<0,05). У животных группы IV наблюдается значительная активация провоспалительных цитокинов, содержание IL-lß в плазме крови по сравнению с показателями I и II групп повышается больше, чем в 10 раз (р<0,001). Концентрация IL-6 и TNF-a повышается в плазме крови более, чем в 3 раза (р<0,001). Менее выражено повышается содержание в плазме крови IL-8 (р<0,05). Содержание противовоспалительного цитокина IL-4 имеет обратную тенденцию, т.е. наблюдается его двукратное снижение (р<0,05 - р<0,01), У собак группы III наблюдается аналогичная картина в динамике активности медиаторов по сравнению с данными I и II групп. Относительно показателей плазмы крови самок животных группы IV содержание IL-lß, IL-6 достоверно ниже (р<0,05), а IL-4 выше (Р<0,05).
Таким образом, клинические проявления хирургического сепсиса у собак в послеродовой период весьма разнообразны. Наиболее типичные проявления либо отсутствуют, либо слабо выражены, что объясняется иммунологической ареактив-ностью данного периода. Только комплексная оценка симптомов и данные динамического клинико-лабораторного наблюдения позволяют поставить правильный диагноз.
Гнойно-септические осложнения у самок собак характеризуются сложными патофизиологическими механизмами развития. Выраженные явления системного воспаления связываем с последовательно развивающимися процессами: чрезмерным катаболизмом пуриновых мононуклеотидов, интенсификацией образования перекисных соединений, усиленной инактивацией их в реакциях, сопряженных с использованием глутатиона на фоне недостаточно эффективного восстановления образующегося при этом глутатиондисульфида.
В ответ на интенсивную микробную нагрузку и интоксикацию бактериальными токсинами в организме животных происходит каскад метаболических изменений, характеризующихся развитием явлений оксидативного стресса, высвобождению в большом количестве провоспалительных цитокинов, повреждению эндотелия сосудов, развитию иммунопатологических реакций. Все это, в конечном итоге, приводит к нарушению функционирования на органном, системном, орга-низменном уровне и, в отдельных случаях, к гибели животных.
2.3.2. Состояние системы гемостаза у животных с хирургическим сепсисом
С целью комплексной оценки патологических изменений, происходящих в организме животных с хирургическим сепсисом, нами была изучена система гемостаза при помощи анализа развернутых коагулограмм в двух группах животных. Опытная группа 1 — 16 собак с хирургическим сепсисом II стадии. Группа 2 (контрольная), в неё входили интактные животные в количестве 10 голов. Комплексное лечение животных состояло из антибактериальной и инфузионно-трансфузионной терапии, которое включало санацию септического очага. Декомпенсацию функций органов и систем осуществляли с помощью симптоматической терапии. Исследование проводили через 24 часа после начала лечения, 1-е, 3-е, 7, 10 сутки.
У животных опытной группы 1 наблюдалась тенденция к увеличению агрега-ционной активности и снижению количества тромбоцитов, достигшая максимума на 3-е сутки заболевания, когда количество тромбоцитов составило 144± 10x10% против 219±16х109/л у интактных животных (р<0,05). Изучение времени свертывания крови у животных группы 1 выявило его снижение на 1-е сутки до 395±12 с, а уже на 3-е сутки — увеличение до 477±11 с против 366±14 с (р<0,05) у интактных животных, оставаясь значимо высоким до 10-х суток наблюдения (табл. 3).
Таблица 3 - Динамика показателей развернутой коагулограммы у животных __с хирургическим сепсисом_
Показатели Группы животных Время наблюдения, сутки:
1 3 7 10
Тромбоциты, х109/л 1 162±18 144±10 158±12 188±11
2 216±10 219±16 217±14 217±15
Агрегация, с 1 25±5,0 33±6,1 28±4,4 27±5,7
2 17±6,4 16±5,0 17±3,1 17±4,2
Время свертывания, с 1 395±12 477±11 466±18 438±10
2 377±16 366±14 360£10 354±11
Тромбопластиновое время, с 1 16,3±1,1 16,0±1,4 15,6±0,8 15,3±2,1
2 13,3±0,2 12,8±0,7 13,0±1,0 13,2±3,1
Фибриноген, г/л 1 6,2±0,3 5,8±0,5 6,1±1,1 5,4±0,2
2 2,9±0,1 3,0±1,2 2,5±0,8 2,6±0,6
Тромбин- гепариновое время, с 1 26,22±4,8 23,49±1,6 26,55±2,2 31,24±3,8
2 36,44±3,3 38,6±2,3 37,21±4,0 36,5±1,7
ХИа-зависимый фибринолиз, мин 1 39,6±6,8 37,2±4,7 29,8±3,5 22,4±2,1
2 9,6±0,4 10,1±0,5 9,8±0Д 9,6±0,1
* - р<0,05
Активное парциальное тромбопластиновое время у опытных животных мак-
18
симально увеличивалось на 1-е сутки до 16,3±1,1 с против 13,3±0,2 с (р<0,05) у интактных животных, после чего к 10-м суткам наблюдалось его постепенное снижение.
В опытной группе 1 концентрация фибриногена во все сроки наблюдения была значимо выше показателей интактных животных, достигая максимума на 1-е сутки - 6,2±0,3 г/л против 2,9±0,1г/л (р<0,05). Тромбин-гепариновое время свёртывания у животных этой группы постепенно укорачивалось и достигало минимума на 3-й сутки: 23,49±1,6 с против 38,6±2,3 с (р<0,05) интактных животных. Этот показатель приблизился к исходным значениям только на 10-е сутки наблюдения.
Изучение ХПа-зависимого фибринолиза в группе 1 выявило максимальное его увеличение на 1-е сутки до 39,6±6,8 мин, против 9,6±0,4 мин (р<0,05) у интактных животных, с последующей тенденцией к снижению, но не достигшей исходных значений.
Таким образом, у животных с хирургическим сепсисом происходят значимые изменения в системе свертывания крови и тех ее компонентах, которые транслируют свою активность на другие системы организма и способствуют возникновению и развитию ДВС-синдрома у больных животных.
2.4. Разработка детоксикационной терапии животных с хирургическим сепсисом
Одной из задач исследования явилась разработка способа гемосорбции у животных, т.к. выявленные патохимические изменения, происходящие в организме животных с хирургическим сепсисом, требовали серьезной детоксикационной коррекции, и зачастую, определяли исход болезни.
Одним из условий определяющих эффективность гемосорбции, является адекватная гепаринизация. Для предупреждения осложнений, связанных с гипертермией, нарушением гемодинамики, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием крови и другими изменениями, способными значительно ухудшить течение основного заболевания, мы разработали систему дозированной гепариниза-ции с учетом индивидуальной чувствительности животных к гепарину, что позволило снизить риск возникновения осложнений, и повысить безопасность проведения гемосорбции у собак. Был установлен допустимый предел снижения времени свертываемости крови по Ли-Уайту, который составил 35-40 мин.
Важным этапом проведения экстракорпоральной очистки крови является обеспечение надежного кровенаполнения эксфузионного контура на всем протяжении сеанса гемоперфузии. Обоснование выбора сосудистого доступа для подключения экстракорпорального контура проводили с учетом топографо-анатомических особенностей и анализа возможных осложнений, возникающих при использовании различных доступов к магистральным сосудам у собак.
При разработке методики гемосорбции в условиях эксперимента и клиники использовали доступы к бедренной артерии, наружной яремной вене, вене Сафена, подкожной вене предплечья, которые предусматривали пункцию этих сосудов ва-заканом (№ 16, 18), катетеризацию по способу Сельдингера или вене-/артериосекции. Последний способ применяли при невозможности проведения первых двух (паравазальные гематомы, отеки, спавшиеся вены и артерии при терминальных состояниях).
Анализируя полученные результаты, было установлено, что пункционные ме-
тоды дают в 2 раза меньше осложнений, чем операционные. Они имеют неоспоримые преимущества, выражающиеся в минимизации времени и техники самой процедуры, но в некоторых клинических ситуациях становятся практически не выполнимыми (небольшой калибр сосуда, породная складчатость кожи, сильно развитая подкожная жировая клетчатка, особенности анатомического строения конечностей, расстройства гемодинамики при шоковых состояниях). Оптимальными для подключения больного животного к экстракорпоральной системе являются яремная вена для заполнения контура и поверхностная вена предплечья для возврата крови в организм.
Принципиальная схема сборки экстракорпорального контура ориентирована на применение сорбционной технологии (рис. 2). Она состоит из магистрали подачи и стабилизации крови, массообменного устройства (гемосорбционная колонка), реинфузионной магистрали (рис. 3). Магистраль подачи крови в массообменник собирали из силиконовой трубки (<1=0,5 мм), через У-образный переходник соединяли с флаконом для стабилизации крови, содержащим поддерживающую дозу гепарина.
Рисунок 2 - Схема сборки экстракорпорально- Рисунок 3 — Массообменник с го контура перфузионной насадкой
Непосредственная экстракорпоральная очистка крови проходила в массооб-менном устройстве или гемосорбционной колонке, заполненной гранулированным углеродным материалом (ВНИИТУ-1, г.Омск). Для обеспечения прохождения крови через гемосорбент применяли специальную перфузионную насадку со ще-левидным фильтром, выполненную из медицинской стали. Для обеспечения принудительной перфузии крови через экстракорпоральный контур использовали роликовый насос «Унирол-1».
С целью предотвращения непредвиденных движений со стороны животного перед операцией проводили премедикацию. Для этого вводили подкожно по 1 мл 0,1%-ного раствора атропина сульфата и 1%-ного раствора димедрола, внутривенно - 2%-ный раствор рометара (в объеме 0,1 мл/кг массы тела). Гемодилюцию осуществляли внутривенным введением реополиглюкина в объеме 20 мл на 1 кг массы тела животного, скорость введения составляла 60-80 мл/мин. Однако, применения данного способа с использованием перфузионного роликового насоса для принудительного забора и возврата крови у больного животного ограничивало его
применение в полевых условиях и/или при отсутствии электроэнергии.
Нами было разработано устройства, которое можно было применять, как в полевых, так и в стационарных условиях. Существенным достоинством данного способа было и то, что проводилась катетеризации только одной вены у животного, а один цикл работы устройства обеспечивал двукратную очистку крови (рис. 4).
Принципиальным отличием разработанного устройства для проведения гемо-сорбции у животных является то, что вместо перфузионного роликового насоса применили одноразовый медицинский шприц объемом 20-150 мл. Массобменник представлял собой стеклянный цилиндр, который непосредственно перед применением необходимо заполнить гемосорбентом на 2/з от общего объёма (рис. 5).
Рисунок 5 - Гемосорбционная колонка для очистки крови
ИИ
йййй." ^ шя
Рисунок 4 -Экстракорпоральный контур в сборе
Разработка методики экстракорпоральной очистки крови продиктовала необходимость создания технических средств для обеспечения надежной фиксации продуктивных животных во время гемосорбции. При решении этой задачи нами были разработаны устройства «Станок для фиксации животных» и «Станок для фиксации мелкого рогатого скота».
Таким образом, разработанная нами методика гемосорбции у животных может равноценно применяться как у мелких домашних, так и у продуктивных животных. В совокупности с разработанными техническими средствами она обеспечивает надежную перфузию и адекватную детоксикационную поддержку больных животных.
2.5. Изменение гемостазнологнческого равновесия в динамике комплексной терапии животных с хирургическим сепсисом
Задачей настоящей работы являлось изучение изменений состояния параметров развернутой коагулограммы в процессе выполнения гемосорбции, входящей с состав комплексного подхода в лечении животных с системным воспалением.
В данной серии эксперимента объектом исследования служили 35 собак: 11 животных с проникающим ранением брюшной полости, 11 животных после проведения энтеротомии и 13 собак с костными повреждениями. Объединение в одну группу столь разных по клиническим диагнозам животных было обусловлено развитием у них клинико-лабораторных признаков синдрома эндогенной интоксикации и диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС) крови - процессов одинаковых по своим патогенетическим механизмам.
Животные были в возрасте от 10 месяцев до 12 лет, из них 15 самцов и 20 самок.
У всех животных в комплексное лечение основного заболевания включен курс гемосорбции с использованием гемосорбента ВНИИТУ-1, по разработанной методике. Длительность сеанса составляла от 75 до 120 мин (в среднем 90 мин), перфузия - не менее 1,5-2 объёма циркулирующей крови животного.
Состояние системы гемостаза у животных изучалось с помощью развернутой коагулограммы. Контрольную группу составили 36 клинически здоровых собак, подобранных по принципу аналогов, не получавших медикаментозного лечения, способного влиять на системы гемостаза. Дополнительно проводилось спектрофотометрическое определение концентрации в плазме крови веществ среднемолекулярной массы (ВСММ). Обследование животных проводили до начала гемосорбции (исходное состояние), сразу после окончания инфузионной подготовки (создания изоволемической гемодилюции с реологически активной коррекцией) и введения гепарина и на 20-й и 45-й минутах перфузии, после её окончания (через 5 минут после полного возврата крови животному) и спустя 24 часа после сеанса гемосорбции. Анализировали динамику изменения состояния системы гемостаза собак в течение одного (преимущественно первого) сеанса гемосорбции.
Применяя разработанную балльную шкалу оценки клинико-неврологического статуса больных животных, было установлено, что у животных оперированных в абдоминальной области развился хирургический сепсис I и II стадии, а у 8 собак с костными повреждениями количество баллов было пограничным для перехода локального воспаления в системное.
Исходное состояние системы гемостаза обследованных животных характеризовалось статистически значимым (р<0,05) по сравнению с контролем, различием в количестве кровенных пластинок (снижение их количества и адгезивно-агрегационная дисфункция), увеличением каолин-кефалинового время (ККВ), снижением протромбинового индекса (ПТИ), резким повышением содержания фибриногена и его дериватов — растворимого комплекса мономерфиб-рина (РКМФ), резким снижением активности антикоагулянтного (снижение содержания антитромбина-Ш (АТ-Ш), свободного гепарина и увеличение тромби-нового время) и торможением фибринолитического (по всем проведенным тестам) потенциалов, нарушением посткоагуляционной фазы свертывания крови (снижение активности фибринстабилизирующего фактора и гематокритного числа).
Выше перечисленные результаты свидетельствуют о том, что исходное состояние системы гемостаза у обследованных собак может быть охарактеризовано как первая стадия процесса ДВС крови в сочетании с развитием синдрома экзогенной интоксикации (о чём свидетельствует повышенное содержание ВСММ).
Инфузионная подготовка и гепаринизация для обеспечения гемосорбции у животных оказались весьма значимыми для состояния системы гемостаза. Так были выявлены объективные изменения по сравнению с исходным состоянием системы гемостаза: снижение количества тромбоцитов (именно вследствие гепаринизации): резчайшая гипокоагуляция в 1-й и 2-й фазах свёртывания; признаки присутствия в кровотоке активного тромбина (по показателям содержания (РКМФ), вероятно, вследствие улучшения состояния
микроциркуляции после проведённой предсорбционной инфузионной подготовки; значительное повышение антикоагуляционного потенциала крови (увеличение активности АТ-Ш и свободного гепарина) в сочетании с сохраняющимся торможением фибринолиза (по тестам хагеманзависимого (ХЗФ) и эуглобулинза-висимого (ЭЗФ) факторов) и резким увеличением содержания ВСММ.
Проведение предсорбционной подготовки животных способствовало переходу первой стадии процесса ДВС крови во вторую стадию. К 20-й минуте экстракорпоральной очистки крови отмечали достоверные по сравнению с досорбционным периодом изменения коагулограммы: увеличение количества тромбоцитов и улучшение их функциональной активности (показатель адгезии); сохранение удлинения 1-й и 2-й фаз свертывания крови, вероятно, вследствие прямой сорбции факторов свертывания; некоторое снижение тромбинемии (снижение содержания РКМФ по всем трем пробам за счет их прямой сорбции и уменьшение ТВ) при сохранении высокой концентрации фибриногена; сохранение активации антикоагулянтного потенциала, возможно, за счет улучшения состояния микроциркуляции и прямой сорбции факторов свертывания и резкого торможения активности фибринолитической системы на прежнем уровне.
Установлено, что к 20-й минуте гемосорбции у животных сохраняются признаки второй стадии ДВС крови и явления улучшения состояния микроциркуляции, проявляющиеся в увеличении количества тромбоцитов, концентрации в кровотоке РКМФ и ВСММ, что расценивали, как благоприятное действие экстракорпоральной очистки крови.
При продолжении процедуры гемосорбции (45-я минута перфузии) отличали следующие особенности состояния системы гемостаза: сохранение на прежнем уровне состояния сосудисто-тромбоцитарного гемостаза; достоверная тенденция к ускорению 1-й фазы свёртывания крови; продолжающаяся сорбция фибриногена и его дериватов; дальнейшее повышением активности антикоагулянтного (достоверное повышение содержания свободного гепарина активности АТ-Ш по сравнению с контрольными результатами). В этот период времени, при продолжении перфузии у обследованных животных сохраняются явления второй стадии ДВС крови с менее выраженным значением (по концентрации ВСММ) признаков синдрома экзогенной интоксикации.
Тенденцию к снижению концентрации кровяных пластинок в сочетании с активацией их агрегационной активности и сохранением пшокоагуляционного состояния в 1-ой фазе свёртывания крови отмечали после окончания гемосорбции. В это же время регистрировали снижение активности в кровотоке тромбина, достоверное уменьшение содержания РКМФ (в р-нафтоловой и этаноловой пробах); к некоторому приостановлению повышения антикоагулянтной активности, но с активацией фибринолиза (по тесту ХЗФ) и сохранением при этом торможения эуглобулинового лизиса сгустка, вероятно, вследствие усиления контактной активации при контакте крови с поверхностью гемосорбента ВНИИТУ-1 и сорбции ингибиторов фибринолиза.
Изменения гематокритного числа в процессе экстракорпоральной очистки крови могут быть объяснены эффектом гемодшпоции и влиянием гепарина в сочетании с последующей сорбцией форменных элементов крови на поверхности сорбента. Динамика изменения состояния системы гемостаза спустя 24 часа после сеанса гемосорбции характеризовалась следующими особенностями: практически
полным возвращением сосудисто-тромбоцитарного гемостаза к исходному уровню (за исключением адгезии тромбоцитов); сохранением тенденции к умеренной гипокоагуляции в 1-й фазе свёртывания крови; достоверным снижением практически до нормальных значений (2-4 г/л) концентрации фибриногена по сравнению с показателями всех предыдущих анализов; сохранением присутствия в кровотоке активного тромбина (по концентрации РКМФ в ß-нафтоловой и этаноловой пробах), но с достоверной тенденцией к снижению его содержания (по увеличению ТВ) по сравнению с показателями до гемосорбции; активацией антикоагулянтного потенциала крови (по содержанию свободного гепарина и активности AT-III); сохранением торможения активности фибринолитической системы, но также с достоверной тенденцией к её активации (по параметру ХЗФ) в сочетании со сниженной активностью фибринстабилизирующего фактора системы гемостаза.
Следовательно, вышеописанные изменения в состоянии системы гемостаза можно расценивать как определенный процесс разрешения течения ДВС крови и синдрома экзогенной интоксикации (о чем свидетельствует прогрессивное достоверное снижение концентрации ВСММ во всех пробах после начала гемосорбции у животных).
Таким образом, проведенное исследование показало, что изучение изменения параметров развернутой коагулограммы в динамике сеанса гемосорбции может быть дополнительным способом оценки состояния микроциркуляторного русла, что является существенным дополнением при прогнозировании эффективности использования метода в комплексном лечении животных с системным воспалением.
2.6. Разработка способа лечения животных с хирургическим сепсисом
Основной задачей научной работы являлась разработка и обоснование способа лечения животных с хирургическим сепсисом. Имеющийся способ лечения жи-;.-..,. = вотных с сепсисом, применяемый в ветеринарии (A.B. Лебедев и соавт., 2000), на наш взгляд, является малоэффективным. Недостатком является большой диапазон предлагаемых лекарственных препаратов из различных фармакологических групп без определения чётких показаний к выбору оптимальных. Повышение реактивности организма, за счет применения большого количества витаминов и других лекарственных средств, не может оказывать необходимого терапевтического эффекта, не обеспечивает выведение токсинов из организма, создает дополнительную нагрузку на выделительную систему организма, сохраняет высокую летальность.
Предложенный нами способ лечения животных с хирургическим сепсисом, несомненно, имеет общие признаки с классическим методом, а именно, хирургическая обработка первичного очага (раны); антибиотикотерапия; повышение реактивности организма; устранение обезвоживания; детоксикационная терапия (положительное решение на выдачу патента «Способ лечения животных с хирургическим сепсисом», заявка 2012156146 от 24.12.2012 г.)
Отличительными признаками способа является то, что, во-первых, для нейтрализации и выведения из организма токсинов, устранения обезвоживания, а также профилактики ДВС-синдрома применяли 1-3 сеанса гемосорбции с интервалом 24-48 часов; во-вторых, для повышения реактивности организма 1 раз в 2 дня подкожно вводили иммуномодулятор системного цитопротекторного действия глутиксим в дозе 3 мг/кг массы тела в количестве 10 инъекций; в-третьих, для по-
давления инфекции применяется антибиотик Кобактан внутримышечно в дозе 2 мл на 50 кг массы тела животного ежедневно в течение 7 дней.
Целью изобретения является снижение летальности и повышение эффективности лечения животных с хирургическим сепсисом за счёт подавления микробного фактора, нейтрализации и выведения из организма токсинов, нормализации функциональных нарушений.
Способ лечения животных с хирургическим сепсисом осуществляли следующим образом: в условиях операционной, оснащенной специальным оборудованием и необходимым ассортиментом медикаментов и инфузионных сред, с соблюдением общих правил асептики и антисептики проводили хирургическую санацию первичного септического очага. Одновременно, больному животному внутримышечно вводили антибиотик Кобактан в дозе 2 мл на 50 кг массы тела животного, курс лечения составлял около 7 суток, в зависимости от стадии заболевания.
Одновременно, проводили подготовку к экстракорпоральной очистке крови. Гемосорбцию выполняли согласно разработанного способа (патент № 2363420). Экстракорпоральную очистку крови проводили с интервалом 24-48 часов. Общее количество процедур напрямую зависело от стадии заболевания и степени развития полиорганной недостаточности больного животного и могло составлять от одного до трёх сеансов. Длительность гемосорбции определяли объёмом перфузии через массообменник, которая составляла 1,5-2,5 объёма циркулирующей крови. После завершения сеанса гемосорбции животному подкожно вводили иммуномо-дулятор цитопротекторного действия глутоксим в дозе 3 мг на 1 кг массы тела, препарат назначали 1 раз в 2 дня, общее количество введений составляло 10 инъекций.
Разработанный способ позволил повысить эффективность лечения животных с хирургическим сепсисом и снизить летальность за счёт подавления микробного фактора, нейтрализации и выведения из организма токсинов, нормализации функциональных нарушений.
Согласно разработанной методике, было пролечено 37 частных собак, летальность составила 5,4%, против 13,3% животных, которым проводилась традиционная терапия, что в 2,4 раза ниже. Результаты проведённых исследований позволяют сделать вывод, что использование предложенного способа лечения животных с хирургическим сепсисом является высоко эффективным, и может быть использован в клинической практике.
2.7. Испытание терапевтической эффективности разработанной тактики лечения на продуктивных животных
Лечение продуктивных животных с системным воспалением представляет одну из трудных задач ветеринарной хирургии, а его результаты до настоящего времени мало удовлетворяют хирургов. Учитывая сложность и разнообразие патофизиологических нарушений, происходящих в организме животных при хирургическом сепсисе, лечение данного заболевания проводили комплексно, с учетом этиологии и патогенеза развития болезни.
Данная серия научной работы была посвящена изучению эффективности комплексного лечения хирургического сепсиса у продуктивных животных. Исследования проводились на базе совхоза «Рассвет» Любинского района Омской области. В эксперименте были изучены результаты клинических, биохимических, гематологических, иммунологических исследований 29 телят и 5 баранов у кото-
рых на фоне омфалофлегмоны, омфалита и поелекаетрационных осложнений развился хирургический сепсис, контролем служили клинически здоровые животные (табл. 5).
Животные были разделены на группы. Животным группы 4 проводили традиционную терапию (п=15), а животным групп 5 (п=14) и б (п=5) помимо традиционного лечения проводили сеансы гемосорбции. В зависимости от тяжести заболевания от 1 до 3-х сеансов с интервалом 24-48 часов и в течение 10 дней подкожно вводили иммуномодулятор глутоксим в дозе 3 мг/кг массы тела. Клинико-неврологическое состояние животных оценивали по разработанной шкале и выражали в баллах.
Таблица 5 - Распределение животных по нозологическим формам
Нозологическая причина хирургического сепсиса Общее количество Вид животного Пол Исход
Самец Самка Выздоровление Гибель/ вынужденный убой
Омфалит 6 теленок 4 2 6 0
Омфалофлегмона 5 теленок 0 5 5 0
Послекастрационные осложнения 23 теленок 18 0 15 3
баран 5 0 5 0
Всего 34 27 7 31 3
При первичном осмотре клиническое состояние животных опытных групп выражалось в сильном угнетении. Они в основном лежали, полностью отказывались от корма и воды, регистрировали очень высокую температуру тела (41-41,8°С), лихорадку постоянного типа с минимальными (0,5-0,8°С) суточными колебаниями, учащение пульса, его слабое наполнение, нитевидность, с явлениями патологической аритмии. Сердечный толчок стучащий, дыхание частое, неправильное; конечности холодные. Слизистые оболочки и конъюнктива кирпично-красные или грязно-желтые, с участками кровоизлияний. У животных отмечали признаки кахексии.
Периодически у больных животных наблюдали возбуждение, проявляющееся стремлением беспорядочно двигаться, в лежачем положении производили плавательные движения конечностями, нередко у них развивалось судорожное состояние отдельных частей или всего тела. Возбуждение обычно сменялось депрессией и полным покоем. Кожа у обследованных животных была сухой, собранной в складки, которые долго не расправляются, у некоторых животных регистрировали пролежни (табл. 6).
При микробиологических исследованиях экссудата из септического очага отмечали преобладание грамотрицательной кишечной микрофлоры: Е. coli — 21,6%, Ps. Aeruginosa — 16,4%, Acinetobacter — 16,4%. Грамположительная микрофлора встречали реже, она была представлена Staphylococcus - 16,8%, Enterococci — 4,1 %. У 14,6% животных наблюдали ассоциацию микробных культур. Бактериемия была зарегистрирована у 5,7% животных с хирургическим сепсисом.
Клинические наблюдения за телятами показали, что у животных группы 5 быстрее восстанавливались нарушенные функции организма, что подтверждалось как субъективными, так и объективными критериями.
Таблица б -Динамика клинико-неврологического статуса телят с хирургическим _ сепсисом в разные сроки лечения_
Группы животных Общее количество баллов (сутки наблюдения)
1 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки
Контроль, (п=15) 0 0 0 0
Группа 4, (п= 15) 69±18 74±13 65±10 58±15
Группа 5, (п=14) 71 ± 12 63±10 48±15 35±12
Объективным критерием оценки эффективности применяемой терапии являлось исследование антиоксидантной защиты. Проводимое лечение привело к снижению концентрации мочевой кислоты в плазме крови телят группы 5 до уровня контрольного показателя, которая уменьшилась на 30,9% по сравнению с соответствующим параметром у животных, группы 1 (р<(),01). Содержание малонового диальдегида в эритроцитах животных группы 5 более низкое, чем у телят группы 4 (на 27,7%; р<0,02). Эффект введенного глутатиона обусловлен, на наш взгляд, способностью его предотвращать торможение глутатионредуктазы. Активность последней в эритроцитах телят группы 5 превышает аналогичный показатель у животных, которым не вводился данный препарат, па 84,7% (р<0,05).
У телят, которым вводился глутоксим и проводилась гсмосорбция, отмечается тенденция к уменьшению в эритроцитах активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, этот показатель на 12,1% ниже, чем у телят группы 4. Количество лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов и СОЭ в крови телят, группы 5, через 14 суток после начала лечения превышает аналогичные контрольные показатели соответственно на, 23,2 (р<0.02), 19,1, 143,3 и 131,4% (р<0,001 в трех последних случаях). Полностью нормализуется лишь уровень лимфоцитов и эритроцитов, а количество эозипофилов и базофилов продолжает оставаться не измененным.
Эффект глутоксима и гемосорбции на показатели перекисного окисления выражен и через 21 сутки после начала лечения. Снижение концентрации мочевой кислоты в плазме крови собак группы 4 становится наиболее выраженным за весь период исследования. Она уменьшена по сравнению с ее уровнем у животных группы 4 на 32% (р<0,02) и на 19,6% по отношению к аналогичному контрольному параметру. Это еще один раз подтверждает способность глутоксима тормозить катаболизм пуриновых момонуклеотидов.
Концентрация С-реактивног о белка в плазме крови телят группы 5 снижена на 43,5% по сравнению с аналогичным показателем у животных группы 1 (р<0,001). Она статистически достоверно не отличается от контрольного параметра. В крови телят группы 5 СОЭ, количество лейкоцитов, нейтрофилов, моггоцитов и лимфоцитов ниже соответственно на 44,0, 23,4, 16,2, 58,1 (р<0,001 во всех четырех случаях) и 8,8% (р<0,01). При этом продолжает превышать аналогичные контрольные показатели лишь СОЭ (на 102,0%; р<0,001) и количество моноцитов (на 38,3%; р<0,001). Что касается уровня лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов, то отмечается лишь тенденция к его увеличению (р>0,1).
Таким образом, подкожное введение глутоксима в дозе 3 мг/кг в течение 10
27
суток и проведение гемосорбции способствует снижению степени системного воспаления, так как способствует более эффективному восстановлению образующегося глутатиондисульфида. Уменьшает интенсивность липопероксидации мембранных структур, что улучшает эффективность комплексной терапии телят с хирургическим сепсисом и сокращает сроки лечения.
3. ВЫВОДЫ
1. Разработанный способ лечения животных с хирургическим сепсисом наряду с применением традиционной терапии предусматривает включение препарата цито-протекторного действия глутоксима в дозе 3 мг в течение 10 дней и 1-3 сеанса гемосорбции, позволяет снизить летальность животных с хирургическим сепсисом в 2,4 раза.
2. Эффективность лечения животных с хирургическим сепсисом зависит от выявления системного воспаления на ранних стадиях заболевания. Разработанная классификация хирургического сепсиса у животных включает три стадии: I - очаг инфекции + ССВР, II - очаг инфекции + ССВР +СПОН, III - очаг инфекции + ССВР + СПОН + СШ, отличающихся наличием облигатных диагностических критериев. Частота встречаемости животных с хирургическим сепсисом I стадии регистрируется в 32,68±4,35, II стадии - 6,67±3,69 и III стадии в 0,38% случаев от общей хирургической патологии. Смертность животных составляет в I стадии 9,27±3,03%, во II стадии - 50,0±4,8%, в III стадии доходит до 100%.
3. Обязательные диагностические критерии, определяющие стадии хирургического сепсиса у животных, включены в балльную оценочную шкалу кли-нико-неврологического статуса животных, позволяющую прогнозировать исход заболевания; для I стадии хирургического сепсиса общая сумма баллов находится в диапазоне от 51 до 130, прогноз благоприятный; для II стадии - от 131 до 180 баллов, прогноз осторожный; для III стадии - свыше 180 бал-лов, прогноз неблагоприятный.
4. Хирургический сепсис у животных характеризуется прогрессирующей эндогенной интоксикацией, нарушениями пуринового обмена и функции антиоксидантной системы (НЛ 1,85 ед.опт. пл/мл; ГПЛ 2,47ед.опт. пл/мл; ДК 1,39 ед.опт пл/мл; ОИ 1,34). Одновременно у таких животных регистрируется значительная активация провоспалительных цитокинов, содержание IL-ip в плазме крови повышается более, чем в 10 раз (р<0,001), концентрация IL-6 и TNF-a - более, чем в 3 раза (р<0,001), содержание противовоспалительного цитокина IL-4 имеет обратную тенденцию, происходит его снижение в 2 раза (р<0,05).
5. У животных с хирургическим сепсисом происходят значимые изменения в системе свертывания крови и тех ее компонентах, которые транслируют свою активность на другие системы организма и способствуют возникновению и развитию ДВС-синдрома (снижение тромбоцитов 144±10х109/л против 219±16х109/л у ин-тактных животных (р<0,05); снижение времени свертывания крови на 1-е сутки до 395±12 с, а на 3-е сутки - увеличение до 477±11 с против 366±14 с (р<0,05); повышение концентрации фибриногена 6,2±0,3 г/л против 2,9±0,1г/л (р<0,05); увеличение ХНа-зависимого фибринолиза более чем на 75% (39,6±6,8 мин).
6. Разработанный способ гемосорбции у животных, в совокупности с техническими средствами, включает очистку крови с применением углеродного гемосорбента ВНИИТУ-1. Для эффективной гемоперфузии, количество вводимого гепарина определяется с учетом индивидуальной чувствительности, допустимый предел сни-
жения времени свертывания крови по Ли-Уайту должен составлять 35-40 минут.
7. Применение гемосорбции и глутоксима в комплексном лечении телят с хирургическим сепсисом способствует снижению степени системного воспаления, более эффективному восстановлению образующегося глутатиондисульфида, уменьшает интенсивность липопероксидации мембранных структур (снижение концентрации мочевой кислоты на 30,9% (р<0,01); МД на 27,7%; р<0,02 снижение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы на 12,1%; снижение С-реактивного белка на 43,5% (р<0,001).
8. Применение гемосорбции в комплексном лечении животных с хирургическим сепсисом способствует устранению ДВС крови, которое характеризуется нормализацией сосудисто-тромбоцитарного гемостаза; достоверным снижением до нормальных значений (2-4 г/л) концентрации фибриногена; сохранением в кровотоке активного тромбина, но с достоверной тенденцией к снижению его содержания; активацией антикоагулянтного потенциала крови; торможением активности фиб-ринолитической системы в сочетании со сниженной активностью фибрин-стабилизирующего фактора системы гемо-стаза.
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. При проведении диагностических исследований животных хирургического профиля с имеющимися инфицированными очагами, помимо общего осмотра и сбора анамнестических данных, необходимо проводить клинико-неврологическое исследование для выявления системного воспаления на ранних стадиях развития, что способствует выбору адекватной тактики лечения и снижает летальность животных с хирургическим сепсисом.
2. Разработанный способ гемосорбции животных, с использованием углеродного гемосорбента ВНИИТУ-1, может применяться как у мелких домашних, так и у продуктивных животных. Диапазон использования экстракорпоральной очистки крови достаточно широк. Эта процедура может применяться при любых экзо-и/или эндотоксикозах, связанных с нарушением и/или недостаточностью функций антиоксидантной, выделительной и др. систем
3. При хирургическом сепсисе в комплекс традиционной терапии животных необходимо включать гемосорбцию, с использованием углеродного гемосорбента ВНИИТУ-1, как патогенетически обоснованный метод экстракорпоральной деток-сикации организма. Оптимальный срок начала применения гемосорбции - первые сутки после санации очага инфекции, количество сеансов гемосорбции составляет от 1 до 3, в зависимости от тяжести эндотоксикоза, с интервалом 24-48 часов.
4. Включение в комплексное лечение животных с хирургическим сепсисом глутоксима в дозе 3 мг/кг массы тела в количестве 10 инъекций подкожно 1 раз в 2 дня необходимо с первых суток, что патогенетически обосновано и направленно на коррекцию клеточного энергодефицита, инактивацию процессов перекисного окисления липидов, активацию антиоксидантной системы и снижение интоксикации.
5. Для практикующих ветеринарных врачей разработан алгоритм лечения животных с хирургическим сепсисом, позволяющий определять развитие полиорганной недостаточности и своевременно корректировать лечение.
Рисунок 6 — Алгоритм лечения животных с хирургическим сепсисом
5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Публикации в научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ
1. Чернигова C.B. Сравнительная оценка доступов к сосудам при операции ге-мосорбции у собак (экспериментально-клиническое исследование) / C.B. Чернигова//Ветеринарный врач. -2008. — № 1. —С. 39-41.
2. Чернигова C.B. Эффективность применения гемосорбции при лечении собак с токсемией экзогенного генеза / C.B. Чернигова // Ветеринарный врач. - 2009. - № 4.-С. 9-12.
3. Чернигова C.B. Стабилизация крови животных при гемосорбции/ C.B. Чернигова // Международный вестник ветеринарии. - 2009. - № 4. - С.67-69.
4. Чернигова C.B. Иммунологический статус собак с хирургическим сепсисом / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -2010. —№1. - С.51-53.
5. Чернигова C.B. Хирургический сепсис у собак: механизмы развития, пути коррекции / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вопросы нормативно-правового ре-
гулирования в ветеринарии. — 2010, -№ 4. — С.62-65.
6. Чернигова C.B. Экспериментально-клиническое обоснование применения оперативных и пункционных методов подключения животного к экстракорпоральному контуру / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии — 2010. —№ 4. — С.66-68.
7. Чернигова C.B. Изменения цитокиновой системы крови собак в динамике оперативного лечения пиометры/ C.B. Чернигова, Т.Ш. Кузнецова, Ю.В. Чернигов // Ветеринарная медицина - 2011.-№1. - С. 61-62.
8. Чернигова C.B. Роль обмена пуриновых мононуклеотидов в развитии вторичного сепсиса у животных / C.B. Чернигова // Ветеринарный врач — 2011. — № 4. — С. 8-10. ------------
9. Чернигова C.B. Толерантность свертывающей системы крови при гемосорб-ции у животных / C.B. Чернигова / Ветеринарная патология. -2011. — № 3. - С. 7375.
10. Чернигова C.B. Роль провоспалительных медиаторов в развитии септических осложнений у животных / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Ветеринарная патология.-2011.-№ 1-2.-С. 92-96.
11. Чернигова С.В, Клинические и патофизиологические изменения в организме собак с акушерско-гинекологическим сепсисом / C.B. Чернигова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. — 2012. —№ 1. — С.39-42.
12. Чернигова C.B. Медикаментозное сопровождение гемосорбции у животных / C.B. Чернигова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -2012.-№ 1.-С.51-52.
13. Чернигова C.B. Современные принципы классификации сепсиса животных C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вестник ветеринарии - 2013. -№1 (64). - С.47-49.
14. Стекольников A.A. Изменение гемостазиологического равновесия в динамике сеанса гемосорбции у животных / A.A. Стекольников, C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. — 2013. -№ 3.-С.116-118.
15. Стекольников A.A. К вопросу о современной терминологии и классификации сепсиса животных / A.A. Стекольников, C.B. Чернигова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. — 2013. -№ 3. - С. 118-119.
Изобретения и полезные модели
16. Способ гемосорбции у собак: пат. 2363420 Рос. Федерация: МПК А 61 D 99/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Герунова JI.K.; заявитель и патентообладатель Омский государственный аграрный университет. - № 2007139065/13; заявл. 22.10.2007, опубл. 10.08.2009, Бюл. № 22. - С.626.
П. Станок для фиксации животных: пат. 104450 Рос. Федерация: МПК А 61 D 3/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Байзыханов С.К.-Р., Довгань Н.Б.; заявители и патентообладатели Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Байзыханов С.К.-Р., Довгань Н.Б. - № 2010141279/15; заявл. 07.10.2010, опубл. 20.05.2011, Бюл. № 14. - 5 е.: ил.
18. Устройство для проведения гемосорбции у животных: пат. 106539 Рос. Федерация: МПК А 61 M 5/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В.; заявители и патентообладатели Чернигова C.B., Чернигов Ю.В. -№2011102655/21; заявл. 24.01.2011, опубл. 20.07.2011, Бюл. № 20. - 6 е.: ил.
19. Станок для фиксации мелкого рогатого скота: пат. 132986 Рос. Федерация: МПК А 61 D 3/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Байзыханов С.К.-Р. заявители и патентообладатели Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Байзыханов С.К.-Р. — № 2013126615/13; заявл. 10.06.2013, опубл. 10.10.2013, Бюл. № 28. - 5 е.: ил.
20. Положительное решение на выдачу патента на изобретение «Способ лечения животных с хирургическим сепсисом» / Чернигова C.B., Стекольников A.A., Чернигов Ю.В., заявка 2012156146 от 24.12.2012 г.
21. Заявка 2013104436 от 01.02.2013 г. на изобретение «Способ лечения животных с острым травматическим остеомиелитом» / Чернигов Ю.В., Чернигова C.B., Байзыханов С.К.
Учебно-методические работы
22. Лекарственные средства, регулирующие функции сердечнососудистой системы животных : учебное пособие, рекомендованное УМО высших учебных заведений РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений / Л.К. Герунова, C.B. Чернигова, Н.Б.Довгань, Ю.В. Редькин. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ. - 2008. - 60 с.
23. Чернигова C.B. Экспериментально-клиническое обоснование оперативных доступов к магистральным сосудам при гемосорбции у собак: методические рекомендации для ветеринарных врачей, студентов ветеринарных факультетов, слушателей ФПК; рассмотренные и рекомендованные к изданию на заседании секции животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области (при Министерстве сельского хозяйства и продовольствия Омской области) / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов. - Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ. - 2008. - 17 с.
24. Стекольников A.A. Экстракорпоральная гемокоррекция в клинической практике ветеринарной медицины: методические рекомендации одобрены Координационным Советом по животноводству и ветеринарии Северо-Западного регионального научного центра Россельхозакадемии в качестве методического пособия для ветеринарных специалистов, научных работников, преподавателей и студентов, обучающихся по ветеринарным и биологическим специальностям / A.A. Стекольников, C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов. - Омск : Изд-во «Вариант». — 2013. -40 с.
Публикации в материалах конференций, сборниках научных трудов и других периодических изданиях
25. Чернигова C.B. Управляемая гепаринизация при проведении гемосорбции у собак / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Материалы международной научно-практической конференции «Аграрная наука — сельскому хозяйству» : сб. статей — Барнаул, 2007. - С. 486-488.
26. Чернигова C.B. Оценка общего состояния собак в условиях острого опыта / C.B. Чернигова // «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» : материалы VII сибирской ветеринарной конференции. — Новосибирск, 2007. — С. 36.
27. Чернигова C.B. Основные сосудистые доступы при проведении гемосорбции у собак / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // «Биологические аспекты фундаментальной и прикладной медицины и ветеринарии» : материалы 6-ой межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию СибНИВИ — ВНИИБТЖ. — Омск, 2007. — С. 121-123.
28. Чернигова C.B. Оптимальные сосудистые доступы при проведении гемосорбции у собак и анализ возможных осложнений / C.B. Чернигова // Всероссийский
гулирования в ветеринарии. — 2010. -№ 4. — С.62-65.
6. Чернигова C.B. Экспериментально-клиническое обоснование применения оперативных и пункционных методов подключения животного к экстракорпоральному контуру / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии - 2010. -№ 4. - С.66-68.
7. Чернигова C.B. Изменения цитокиновой системы крови собак в динамике оперативного лечения пиометры/ C.B. Чернигова, Т.Ш. Кузнецова, Ю.В. Чернигов // Ветеринарная медицина-2011. — №1. - С. 61-62.
8. Чернигова C.B. Роль обмена пуриновых мононуклеотидов в развитии вторичного сепсиса у животных / C.B. Чернигова // Ветеринарный врач - 2011. - № 4. -С. 8-10.
9. Чернигова C.B. Толерантность свертывающей системы крови при гемосорб-ции у животных / C.B. Чернигова / Ветеринарная патология. - 2011. - № 3. - С. 7375.
10. Чернигова C.B. Роль провоспалительных медиаторов в развитии септических осложнений у животных / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Ветеринарная патология.-2011.-№ 1-2.-С. 92-96.
11. Чернигова C.B. Клинические и патофизиологические изменения в организме собак с акушерско-гинекологическим сепсисом / C.B. Чернигова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2012. -№ 1. - С.39-42.
12. Чернигова C.B. Медикаментозное сопровождение гемосорбции у животных / C.B. Чернигова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -2012. -№ 1.-С.51-52.
13. Чернигова C.B. Современные принципы классификации сепсиса животных C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вестник ветеринарии - 2013. -№1 (64). - С.47-49.
14. Стекольников A.A. Изменение гемостазиологического равновесия в динамике сеанса гемосорбции у животных / A.A. Стекольников, C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2013. -№ 3.-С.116-118.
15. Стекольников A.A. К вопросу о современной терминологии и классификации сепсиса животных / A.A. Стекольников, C.B. Чернигова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2013. -№ 3. - С.118-119.
Изобретения и полезные модели
16. Способ гемосорбции у собак: пат. 2363420 Рос. Федерация: МПК А 61 D 99/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Герунова Л.К.; заявитель и патентообладатель Омский государственный аграрный университет. - № 2007139065/13; заявл. 22.10.2007, опубл. 10.08.2009, Бюл. № 22. - С.626.
17. Станок для фиксации животных: пат. 104450 Рос. Федерация: МПК А 61 D 3/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Байзыханов С.К.-Р., Довгань Н.Б.; заявители и патентообладатели Чернигова C.B., Чернигов Ю.В., Байзыханов С.К.-Р., Довгань Н.Б. - № 2010141279/15; заявл. 07.10.2010, опубл. 20.05.2011, Бюл. № 14. - 5 е.: ил.
18. Устройство для проведения гемосорбции у животных: пат. 106539 Рос. Федерация: МПК А 61 M 5/00 / Чернигова C.B., Чернигов Ю.В.; заявители и патентообладатели Чернигова C.B., Чернигов Ю.В. - №2011102655/21; заявл. 24.01.2011, опубл. 20.07.2011, Бюл. № 20. - 6 е.: ил.
нигова, Ю.В. Чернигов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины. X сибирская ветеринарная конференция. — Новосибирск, 2011. — С. 118-120.
41. Чернигова C.B. Внедрение метода экстракорпоральной очистки крови в ветеринарную практику (обзор литературы) / C.B. Чернигова // Материалы международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной хирургии». — Ульяновск, 2011.-С. 135-137.
42. Чернигова C.B. Механизмы развития системного воспаления у животных (экспериментально-клиническое исследование) / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов, С.К. Байзыханов // Материалы международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной хирургии». — Ульяновск, 2011. - С. 128-134.
43. Чернигова C.B. Особенности метаболических нарушений в организме животных с хирургическим сепсисом / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Материалы международной научно-практической конференции «Евразийская интеграция: роль науки и образования в реализации инновационных программ». — Казахстан — Орал, Уральск, 2012. - С.324-327.
44. Чернигова C.B. Роль иммунной и атиоксидантной систем в развитии хирургического сепсиса у собак / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Материалы XI Сибирской ветеринарной конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины». - Новосибирск, 2012. - С. 40-43.
45. Чернигова C.B. Современный взгляд на механизмы развития системного воспаления у животных / C.B. Чернигова, Ю.В. Чернигов // Материалы международной научно-практической конференции «Аграрная наука: современные проблемы и перспективы развития», посвященная 80-летию со дня образования Дагестанского государственного аграрного университета им. М.М. Джамбулатова. — Махачкала, 2012.-С. 593-599.
46. Chernigova S. V. Pathophysiological and clinical reactions of septic complications of female dogs / S.V. Chernigova // European Applied Studies: modern approaches in scientific researches, 2nd International scientific conference. ORT Publishing. — Stuttgart,2013.-P. 185-187.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
A T-lll — антитромбина-III РКМФ - растворимый комплекс
ВСЬЛМ— вещества среднемолекулярной мономерфибрина массы CjW7—среднемолекулярные пептиды
ВНСММ— вещества средней и низкой СОД - супероксиддисмутаза молекулярной массы СОЭ — скорость оседания эритроцитов
ДВС - диссеминированное СПОН - синдром полиорганной
внутрисосудистое свертывание недостаточности
ДК - диенкеггоны ССВР - синдром системной воспалитель-
ККВ - каолин-кефалиновое время ной реакции
КНС - клинико-неврологический статус СШ— септический шок
НЛ — нейтральные липиды ТВ — тромбиновое время
О И — окислительный индекс TJI - традиционное лечение
ОП — олигопептиды ХЗФ — хагеманзависимый фактор
ПОЛ - перекисное окисление липидов ЧСС - частота сердечных сокращений
ПОН— полиорганная недостаточность ЭЗФ — эуглобулинзависимый фактор
ПТИ— протромбиновой индекс TNF— фактор некроза опухолей
Per. № 76. Сдано в набор 14.02.14. Подписано в печать 18.02.14. Печать оперативная. Бум. офсетная. Формат 60x84 '/,6. Гарнитура «Times New Roman» Усл.-печ. л. 2. Тираж 100 экз.
Отпечатано с оригинал-макета в типографии ООО «Вариант-Омск» 644043, г. Омск, ул. Дзержинского, I, корп. 1, офис 13
Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, доктора ветеринарных наук, Чернигова, Светлана Владимировна, Санкт-Петербург
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ»
05201451 274 На правах рукописи
ЧЕРНИГОВА Светлана Владимировна
РАЗРАБОТКА И ОБОСНОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖИВОТНЫХ С ХИРУРГИЧЕСКИМ СЕПСИСОМ
06.02.04 - ветеринарная хирургия
Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии, заслуженный деятель науки РФ СТЕКОЛЬНИКОВ Анатолий Александрович
Санкт-Петербург - 2014
СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ............... 5
ВВЕДЕНИЕ............................................................................. 7
Глава I. ХИРУРГИЧЕСКИЙ СЕПСИС У ЖИВОТНЫХ: МЕХАНИЗМЫ РАЗВИТИЯ, ОЦЕНКА ТЯЖЕСТИ, ЛЕЧЕНИЕ (обзор литературы) ...................................................................................................... 17
1.1. Актуальность и распространенность сепсиса......................... 17
1.2. Роль сосудистой системы в патогенезе генерализованного воспаления ............................................................................................................. 21
1.3. Эффекты провоспалительных цитокинов и гормонов стресса в формировании синдрома гиперметаболизма и развитии полиорганной дисфункции..................................................................................................... 24
1.4. Несостоятельность иммунной системы при сепсисе. Патогенетическая структура вторичной иммунной недостаточности при тяжелом сепсисе............................................................................................................... 33
1.5. Влияние перекисного окисления липидов на развитие полиорганной недостаточности.................................................................................. 38
1.6. Современные подходы к лечению сепсиса..................................... 54
Глава И. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ................... 66
2.1. Характеристика экспериментального и клинического материала ....................................................................................................................... 66
2.2. Биохимические, гематологические и бактериологические методы исследования.............................................................................................. 72
2.3. Иммунологические методы исследования и определение степени выраженности токсикоза у животных...................................................... 76
2.4. Методы интенсивной терапии животных с сепсисом, септическим шоком и экстракорпоральная гемокоррекция..................................... 77
2.5. Методы статистического анализа информации.............................. 78
Глава III. РАЗРАБОТКА КОНЦЕПЦИИ ХИРУРГИЧЕСКОГО СЕПСИСА У ЖИВОТНЫХ...................................................... 80
3.1. Разработка классификации хирургического сепсиса у животных........................................................................................ 80
3.2. Разработка балльной оценки клинико-неврологического статуса больных животных хирургического профиля.............................. 82
Глава IV. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ГЕМОСОРБЦИИ У ЖИВОТНЫХ................................................................................................................. 87
4.1. Устройства для проведения гемосорбции и предоперационная подготовка животных...................................................................................... 87
4.2. Разработка технических средств для обеспечения надежной фиксации продуктивных животных во время гемосорбции....................... 94
4.3. Поддержание реологических свойств крови при гемосорбции у животных................................................................................ 98
4.4. Обоснование хирургическиех доступов для проведения гемосорбции у собак............................................................................................... 103
Глава V. ПАТОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ, РАЗВИВАЮЩИЕСЯ В ОРГАНИЗМЕ ЖИВОТНЫХ С СИСТЕМНЫМ ВОСПАЛЕНИЕМ .............................................................................................................. 111
5.1. Патоморфологические изменения в организме собак с системным воспалением............................................................................................. 111
5.2. Роль обмена пуриновых мононуклеотидов в развитии вторичного сепсиса у животных на 14 сутки исследования................................... 118
5.3. Метаболические нарушения, развивающиеся в организме животных с системным воспалением на 21 сутки наблюдения...................... 125
5.4. Роль провоспалительных медиаторов в развитии септических осложнений у животных................................................................................. 129
5.5. Состояние системы гемостаза у животных с хирургическим сепсисом................................................................................. 136
Глава VI. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ЛЕЧЕНИЯ ЖИВОТНЫХ С ХИРУРГИЧЕСКИМ СЕПСИСОМ............................................................ 139
6.1. Способ лечения животных с хирургическим сепсисом............... 139
6.2. Изменения гемостазиологического равновесия в динамике
комплексной терапии животных с хирургическим сепсисом..................... 143
Глава VII. ЛЕЧЕНИЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ С СИСТЕМНЫМ ВОСПАЛЕНИЕМ.............................................. 150
7.1. Изменение клинического статуса у продуктивных животных с хирургическим сепсисом................................................................................ 150
7.2. Эффективность гемосорбции и глутоксима в комплексном лечении животных с хирургическим сепсисом................................................ 155
ЗАКЛЮЧЕНИЕ........................................................................ 164
ВЫВОДЫ............................................................................... 182
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ....................................... 185
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.......................................................... 187
ПРИЛОЖЕНИЕ....................................................................... 230
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АД- артериальное давление
АКМ- активные кислородные метаболиты
АМФ - аденозинмонофосфат
АМФ - аденозинмонофосфат
АОЗ- антиоксидантная защита
АОС - антиоксидантная система
Г-6-ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
ГМФ - гуанозинмонофосфат
ГПЛ - гидроперекись липидов
ГПО - глутатионпероксидаза
ГР - глутатионредуктаза
ГСИ - гнойно-септическая инфекция
ДВС - диссеминированное внутрисосудистое свертывание КС - кесарево сечение КсО - ксантиноксидаза
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидфосфат
НАДФ-Н2 - восстановленная форма НАДФ
HJI - нейтральные липиды
ОАО - общие антиоксиданты
ОИ - окислительный индекс
СМП- среднемолекулярные пептиды
COA - синтаза оксида азота
СОД- супероксиддисмутаза
СПОН- синдром полиорганной недостаточности
ССВО - синдром системного воспалительного ответа
СШ- септический шок
СОЭ - скорость оседания эритроцитов
С-5// - глутатион
(г-З'-тЯ-С? - глутатиондисульфид
1Ь - интерлейкин
N0 - нитрооксильный радикал
РАЕ - фактор агрегации тромбоцитов
TNF-a - фактора некроза опухолей-а
МОК — минутный объем крови
МБР - местная воспалительная реакция
ПОЛ - перекисное окисление липидов
ЦВД- центральное венозное давление
ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы
ФАД- флавинадениндинуклеотид
ВВБДБНИБ
Актуальность темы1
В настоящее время сепсис по-прежнему остаётся одной из актуальных проблем современной ветеринарной и гуманитарной медицины [100, 273]. В общей структуре заболеваемости животных сепсис и его осложнения (полиорганная недостаточность и септический шок) занимают особое место, так как они характеризуются трудностью диагностики и лечения, а также сопровождаются высокой летальностью [В.И. Ярема, 2009].
Смертность животных с генерализованной формой воспаления составляет в среднем от 26,6 до 50,0%, а с инфекционно-токсическим шоком может превышть 80-90% [238]. Затрудняет процесс лечения сепсиса отсутствие об-лигатных диагностических критериев, высокая вирулентность микроорганизмов, снижение иммунной защиты в организме, глубокие нарушения го-меостаза, метаболические, циркуляторные и функциональные расстройства жизненноважных систем организма [111].
Хирургический (послеоперационный) сепсис животных в последние годы рассматривается как самостоятельная проблема [74, 234]. Основной причиной неудовлетворительных результатов лечения, на наш взгляд, является отсутствие среди ветеринарных хирургов единого понимания патогенеза септического процесса и связанных с ним осложнений [33, 194, 195, 235, 367, 368]. Сам факт единичных исследований, посвященных этой проблеме, указывает на отсутствие единого понимания патогенеза хирургического сепсиса и отсутствие метода его прогноза и развития осложнений на ранних сроках [2, 180, 181, 273]. Существующие на сегодняшний день разночтения в мето-
1 При написании этого раздела частично использованы материалы диссертации доктора медицинских наук А.Б. Толкач «Патогенетическое обоснование использования плазмофереза и реамберина при лечении больных с хирургическим сепсисом» (клинико-экспериментальное исследование), Омск, 2006.
дах оценки объективного статуса животных хирургического профиля затрудняют выбор рациональной и эффективной тактики лечения. [86, 97]. Необходимо также отметить, что имеющиеся работы, посвященные изучению данной проблемы, не охватывают всего комплекса систем организма, не отслеживают динамику синдрома и его стадийность в течение септического процесса, не позволяют прогнозировать его развитие с ранних сроков системного воспаления.
На начальных этапах наших исследований в литературных источниках практически отсутствовали работы, посвященные лечению животных с системным воспалением, о вкладе каждого органа в развитие интоксикации и формирование сепсиса. Исследования, проведенные до настоящего времени, и имеющиеся разночтения в их трактовке о месте и роли в патогенезе септического процесса, метаболических нарушений, иммунологических параметров, исключают возможность профилактики и патогенетически обоснованного лечения [30, 340].
Непременным условием лечения животных с хирургическим сепсисом является своевременная и полноценная хирургическая санация первичного очага, эффективная антибактериальная терапия, адекватная коррекция и своевременное поддержание нарушенных функций систем и органов [37, 46, 93, 238]. На сегодняшний день нет единой точки зрения о роли применения эфферентных методов детоксикации в лечении хирургического сепсиса [15, 102, 104, 289]. Экстракорпоральные технологии позволяют извлекать из крови экзогенные и эндогенные токсины, создавать внутри и вне организма естественные процессы его очищения или значительно дополнять их в случае нарушения или полного выведения функций детоксицирующих систем организма [14, 29,311].
В настоящий момент доказана высокая эффективность гемосорбции как метода активного удаления из крови различных токсических продуктов путем контакта крови с сорбентом вне организма [173]. Доказано, что гемо-сорбционная процедура способна изменять окислительно-восстановительный
потенциал периферической крови, стимулировать клеточное и гуморальное звено иммунитета, оптимизировать микроциркуляцию и другие системы организма [http://oldvak.ed.gov.ru/common/img/uploaded/files/vak/2010/announce-теЩБ/Ыо^/12-07/BurkovaNV.doc].
Системные исследования позволили бы вплотную подойти к созданию концепции их развития, разработке патогенетически обоснованных методов прогноза и оптимизации лечения животных с хирургическим сепсисом.
Учитывая выше изложенное, изучение патогенеза системного воспаления, в частности послеоперационного сепсиса, представляет собой фундаментальную проблему, что подтверждает её несомненную актуальность. Данная научная тема напрямую связана с изучением пусковых механизмов патогенеза хирургического сепсиса и развития осложнений [238, 294, 367]. Перечисленные выше факты и теоретические предпосылки определили цель и задачи исследования.
Цель исследований. Разработать, обосновать и внедрить в клиническую ветеринарную практику алгоритм диагностики и коррекции функционально-метаболических и иммунных нарушений у животных с хирургическим сепсисом.
Исходя из поставленной цели, были определены следующие задачи.
1. Разработать и обосновать способ лечения животных с хирургическим сепсисом.
2. Определить стадии развития системного воспаления при хирургическом сепсисе у животных с выявлением облигатных диагностических критериев.
3. Установить особенности клинического течения, гемодинамических, метаболических и иммунологических нарушений у животных с хирургическим сепсисом.
4. Разработать способ экстракорпоральной детоксикации и технические средства для животных с системным воспалением с обоснованием клинических возможностей и побочных эффектов.
- 105. Доказать наличие метаболических, иммунологических и гемодина-мических взаимосвязей течения хирургического сепсиса при использовании гемосорбции и глутоксима.
6. На основании анализа клинико-патофизиологических нарушений со стороны основных органов и систем разработать систему прогнозирования и мониторинга системного воспаления при хирургической инфекции.
7. С учетом закономерностей развития системного воспаления разработать патогенетически обоснованный алгоритм интенсивной терапии животных с хирургическим сепсисом.
Научная новизна работы. С учетом клинико-патофизиологических нарушений разработан способ лечения животных с хирургическим сепсисом (положительное решение на выдачу патента «Способ лечения животных с хирургическим сепсисом», заявка 2012156146 от 24.12.2012 г.).
Проведено комплексное исследование гемостаза, показателей эндоток-сикоза, перекисного окисления липидов и иммунного статуса у животных с хирургическим сепсисом.
Изучена частота встречаемости и смертности системного воспаления у отдельных видов животных и разработана классификация хирургического сепсиса с учетом стадий развития патологического процесса.
Разработана балльная оценка клинико-неврологического статуса животных хирургического профиля, позволяющая выявлять сепсис на ранних стадиях развития, обеспечивать своевременное и адекватное начало лечения, возможность проводить статистический учет заболеваемости и летальности, а также позволила объективно оценивать эффективность проводимых лечебных мероприятий с целью их своевременной корректировки.
Разработаны способ экстракорпоральной очистки крови животных (патент № 2363420) и технические средства его обеспечения (патент № 106539, патент № 104450, патент № 132986) с обоснованием режимов, детоксикаци-онных возможностей и побочных эффектов.
Установлена роль нарушения функции антиоксидантной системы и метаболизма пуриновых мононуклеотидов в организме животных с хирургическим сепсисом и выявлены механизмы развития недостаточной обеспеченности тканей глутатионом.
Доказано, что нельзя предупредить развитие полиоргаппой недостаточности при хирургическом сепсисе у животных без адекватной детоксикации. Установлено, что на фоне использования гемосорбции и глу-токсима происходит адаптация клеток, тканей и органов животных в ответ на гиперметаболическую эндотоксемию и массивное цитокиновое воздействие.
На основании полученных данных о механизмах формирования полиорганной недостаточности при хирургическом сепсисе, предложена новая концепция интенсивного лечения животных с системным воспалением с дифференцированным включением экстракорпоральной и иммунокоррекции и доказана их высокая эффективность.
Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана принципиально новая концепция развития системного воспаления и практически обоснована классификация хирургического сепсиса животных, с учетом стадии развития патологического процесса.
Установлено, что внедрение многоуровневой шкалы оценки клинико-неврологического статуса животных хирургического профиля позволяет на ранних сроках септического процесса выделить группы повышенного риска развития данных осложнений и прогнозировать исход заболевания и его летальность. Разработанная балльная оценка позволяет адекватно оценивать состояние животного, сокращать время диагностического поиска, определять подходы к началу проведения интенсивной терапии и оптимизировать выбор тактики лечения животных с хирургическим сепсисом.
Разработанный способ экстракорпоральной очистки крови животных и технические средства, обеспечивающие его выполнение, позволяют корректировать функции антиоксидантной и иммунной систем, а также метаболизм
пуриновых мононуклеотидов в организме животных с хирургическим сепсисом, что существенно повышает эффективность проводимой терапии.
На основании экспериментальных исследований патогенетически обоснована целесообразность включения в комплексное лечение животных с хирургическим сепсисом метода экстракорпорального очищения крови - ге-мосорбции и препарата детоксикационного и антиоксидантного действия -глутоксима.
Разработанный алгоритм лечения животных с хирургическим сепсисом позволяет прогнозировать развитие заболевания, оценивать тяжесть состояния животного и проводить мониторинг степени истощения механизмов компенсации для своевременной коррекции проводимых терапевтических мероприятий, что в конечном итоге позволяет снизить летальность и выбраковку высокопродуктивных животных.
Проведенные клинико-экспериментальные исследования позволили улучшить результаты лечения животных с хирургическим сепсисом. На основании результатов научной работы и�
-
Чернигова, Светлана Владимировна
-
доктора ветеринарных наук
-
Санкт-Петербург, 2014
-
ВАК 06.02.04
- Совершенствование методов диагностики и терапии синдрома системной воспалительной реакции у собак
- Разработка и экспериментально-клиническое изучение двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры
- Хирургические болезни тканей пупочной области поросят постнатального периода, профилактика, лечение
- Система антиоксидантной защиты и иммунобиологический статус у животных при распространенном перитоните
- Разработка и обоснование методов диагностики и оперативного лечения животных с патологиями желудка и селезенки
