Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка биотехнологического метода обработки меховой овчины

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка биотехнологического метода обработки меховой овчины"

На правах рукописи

ПЕРЕЛЫГИНА Лилия Сергеевна

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ОБРАБОТКИ

МЕХОВОЙ ОВЧИНЫ

Специальность 03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук

Улан-Удэ 2004

Работа выполнена на кафедрах «Биотехнология» и «Технология кожи, меха и товароведение непродовольственных товаров» ВосточноСибирского государственного университета

Научный руководитель: кандидат технических наук, профессор

Думнов Василий Семенович

Официальные оппоненты:

доктор технических наук,

профессор Чиркина Тамара Федоровна

кандидат технических

наук Санданова Туяна Владимировна

Ведущая организация: Бурятский институт природопользования Сибирского Отделения Российской Академии Наук.

Защита диссертации состоится «23» сентября 2004 года в «К)» часов на заседании Регионального диссертационного совета ДМ.212.039.02 при ВСГТУ по специальности 03.00.23 «Биотехнология».

Отзыв (в двух экземплярах) с заверенными подписями просим направлять ученому секретарю диссертационного совета по адресу: 670013, г. Улан-Удэ, ул. Ключевская 40 в. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Восточно-Сибирского государственного технологического университета.

Автореферат разослан « 1Л » августа 2004 г. Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор технических наук ^ Хамнаева Н.И.

2005-4 12065

$6'/5-62/

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В последнее время, можно отметить существенный прогресс в решении наиболее сложных вопросов технологии кожи и меха, позволяющих приблизить существующие процессы переработки к экологически чистым.

Предметом повышенного внимания технологов являются подготовительные процессы, при выполнении которых образуется основная масса загрязнений, поступающих на очистные сооружения. При этом необходимо учитывать длительность жидкостных обработок и их решающее влияние на качество готовой продукции. Однако, на многих предприятиях, занимающихся переработкой овчин и пушно-мехового сырья очистные сооружения либо отсутствуют, либо несовершенны, и не соответствуют установленным стандартам качества вод В настоящее время меховые предприятия должны выпускать не только конкурентоспособную продукцию, но обеспечивать экологическую безопасность окружающей среды от возможных отрицательных последствий.

В связи с этим все более актуальным является совершенствование технологических процессов переработки меховой овчины, с учетом получения необходимых потребительских свойств готовой, продукции и минимальных воздействий, оказываемых на окружающую среду, в частности на нативные водные объекты. Для решения поставленных целей при выполнении подготовительных процессов переработки меховой овчины было предложено вместо традиционных методов использовать биотехнологические, основанные на использовании культуры микроорганизмов и ферментных препаратов. Главная задача предлагаемой технологии - это замена или существенное снижение количества вредных химических материалов в рабочих ваннах:

синтетических поверхностно-активных веществ (СПАВ), формалина, карбоната натрия.

Ферментные препараты различного происхождения уже широко применяются в кожевенной промышленности. В процессах мехового производства широко применяются протеолитические ферменты, которые активно воздействуют на межволоконные белки шкуры, однако это приводит к ослаблению связи волоса с кожевой тканью.

Поэтому поиск путей по разработке ферментного препарата, обладающего липолитическими свойствами и не нарушающими связь волоса с дермой шкуры, актуальна для мехового производства. Вследствие чего, представляет интерес выделение, адаптация микробных продуцентов, способных деструктировать жировые вещества в присутствии СПАВ. Однако, СПАВ отрицательно воздействуют на сложившиеся биоценозы нативных водных объектов. В связи с этим необходимо снижение расхода СПАВ в подготовительных процессах мехового производства.

Цель работы. Разработка биотехнологического метода проведения подготовительных процессов переработки овчинно-шубного сырья и снижение уровня токсического загрязнения сточных вод, образующихся после проведения подготовительных процессов.

В задачи исследования входило:

1. Изучить возможность использования прокариотических организмов - деструкторов.

2. Выделить микроорганизмы, способные деградировать жировые вещества в присутствии СПАВ «Превоцелл W-0F-7».

3. Подбор оптимальных условий культивирования прокариотических организмов.

4. Разработать методики получения маточного раствора.

5. Изучить влияние биотехнологического метода обработки меховой овчины на физико-механические и химические свойства полуфабриката и свойства образующихся сточных вод.

Научная новизна. При выполнении диссертационной работы получены следующие результаты:

1. Выделены и проведена селективная адаптация микроорганизмов, способных деградировать жировые вещества в присутствии СПАВ «Превоцелл W-OF-7».

2. Изучена способность выделенных организмов использовать СПАВ в качестве источника углерода.

3. Подобраны и разработаны условия культивирования выделенного прокариотического организма, способного деградировать жировые вещества в присутствии СПАВ

4. Разработана схема получения культуральной жидкости, содержащей культуру рода AmpЫbatiИus sp и продуцирующей ею экзофермент.

5. Проведены подготовительные процессы переработки меховой овчины с использованием культуральной жидкости, позволяющей сохранить качество готовой продукции, при снижении уровня техногенного воздействия на окружающую среду.

Практическая ценность. На основе экспериментальных исследований выделен и отобран микробный продуцент, способный утилизировать как жировые вещества (шерстный жир, сульфатированный рыбий жир) в присутствии СПАВ, так и сам СПАВ. Разработан биотехнологический метод проведения подготовительных процессов (отмоки, обезжиривания) меховой овчины.

На основе полученных результатов исследовано влияние предлагаемого отмочного и обезжиривающего состава на уровень загрязнения сточных вод, степень обводнения кожевой ткани и

удаления жировых веществ с поверхности волосяного покрова меховой овчины.

Достигнуто снижение концентрации СПАВ с 8 г/дм3 до 1 г/дм3 и заменить высокотоксичные компоненты на менее токсичные.

Апробация технологии была проведена в условиях опытного производства УНПК «ЭКОМ » ВСГТУ.

По результатам эксперимента, данные работы вошли в грант «Молодые ученые ВСГТУ», 2004 год.

Автор защищает; Новый биотехнологический способ отмоки и обезжиривания меховой овчины, позволяющий улучшить качество волосяного покрова овчины и состав сточных вод за счет сокращения расхода СПАВ, исключения из рабочей ванны карбоната натрия и формалина.

Результаты теоретических и экспериментальных исследований получения культуры микроорганизмов для использования в процессе отмоки и обезжиривания меховой овчины, биотехнологический метод обработки меховой овчины.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на следующих конференциях: 7-ая Международная Пущинская школа-конференция «Биология наука - XXI века» (Пущино, 2003 г.); 8-ой Международная Пущинская школа - конференция «Биология наука -XXI века» (Пущино,2004г); 6-ая Международная научная конференция «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» (Абакан,2003 г); 7-ая Международная научная конференция «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» (Абакан,2004 г); 6-ая Межрегиональная научно-практическая конференция «Развитие меховой промышленности России» (Москва, 2004г); Научно -практическая конференция «Молодые ученые Сибири» (Улан-Удэ, 2003 г); Всероссийская internet - конференция «Проблемы экологии в современном мире» (Тамбов, 2003 г); Труды 4-ой Международной

конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2003г), Межрегиональная научно-техническая конференция «Молодежь Сибири - Наука России» (Красноярск, 2004г) и на конференции преподавателей, научных сотрудников и аспирантов Восточно-Сибирского государственного технологического университета (Улан-Удэ,2004г).

Теоретические экспериментальные результаты исследования обсуждались! на научных семинарах кафедр «Биотехнология» и «Технология кожи, мехи и товароведения непродовольственных товаров» ВСГТУ в 2003-2004 гг.

Апробация разработанной технологии была проведена в производственных условиях опытного производства УНПК «ЭКОМ» ВСГТУ.

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 12 печатных работ.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения и 4 глав, выводов, списка литературы из библиографических описаний

и приложения. Материал изложен на страницах, содержит_

таблиц,_рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первой главе диссертации рассматриваются литературные данные по созданию препаратов на основе прокариотических организмов. Рассмотрены основные принципы получения биологических препаратов и их свойства.

Объекты и методы исследования описаны во второй главе. В качестве основных объектов исследования использовали Бурятскую полутонкорунную меховую овчину и синтетическое поверхностно-активное вещество «Превоцелл — W-OF-7», шерстный жир, свиной жир, сульфатированный рыбий жир.

Определение влияния СПАВ и жировых компонентов на рост и развитие микроорганизмов, некоторые морфологические особенности, физиологические и культуральные свойства выделенных прокариотических микроорганизмов выполняли по принятым в микробиологии методам.

Культивирование проводили в термостате (ТС-80 М-2) при температуре (37±0,5)°С в течение 96 часов с переменным механическим воздействием, осуществляемом на встряхивателе «Shaker type 357» с частотой колебаний 200 об/мин, амплитудой 6 по одному часу в сутки.

Способность культур вовлекать жировые вещества в конструктивный и энергетический обмен определяли по изменениям величины КОЕ (колонии образующие единицы), рН, кислотности и оптической плотности, при этом проводили расчет индекса размножения и времени генерации культуры.

Для определения в средах белка применяли биуретовый микрометод по Ярош.

Липолитическую активность полученных ферментных препаратов определяли по модифицированной методике Ота, Ямада. За единицу ферментативной активности липазы принимали такое количество фермента, которое освобождало 1 мкмоль олеиновой кислоты из 40-% эмульсии оливкового масла при рН 7,0 и температуре (37±0,5)°С в течение часа.

Оценку деструктивной способности культуры различных жировых веществ, проводили методом газово-жидкостной хроматографии.

Для процесса отмоки образцы отбирали по методу

ассиметрической бахромы. Условия проведения отмоки: ЖК=10, температура 25-30°С, продолжительность 12-16 час, при периодическом механическом воздействии, через 4 часа после загрузки 30 мин и далее 10 мин каждый час обработки. Образцы для процесса обезжиривания были отобраны после процесса отмоки. Продолжительность процесса

составляла 45 мин, при температуре (40±2)°С, с механическим воздействием на встряхивателе «Shaker Type 357», со скоростью 100 об/мин, амплитудой 7. В качестве контрольных вариантов обработка образцов велась по типовой методике 1988 г.

Установление уровня токсического загрязнения (УТ3) проводили на тест - объектах: дафниях (Daphnia magna Straus). В качестве критерия токсичности использовали параметр выживаемости тест-объекта.

В третьей главе диссертационного исследования представлены результаты экспериментов и их обсуждение

Первым этапом работы было изучение морфолого-культуральных свойств выделенных микроорганизмов.

При выполнении экспериментов исследования, разработано 9 типов культуральных жидкостей на основе маточного раствора с заданными свойствами. Подобраны оптимальные условия культивирования. В качестве органического компонента среды использовали СПАВ «Превоцелл W-of-7» при концентрации 1г/дм3 и шерстный жир с расходом 1 г/дм3. Расход маточного раствора варьировался от 1 до 3 см3/дм3. По истечении 21 суток культивирования были выбраны среды, в которых оптическая плотность достигала максимального значения, что указывало на увеличение биомассы культуры, за счет достаточного обеспечения ее субстратом. По морфолого-культуральным и физиологическим признакам установлено, что организмы, выделенные из бактериальной суспензии, можно отнести к роду Amphibacillus sp.

В ходе эксперимента проводилась инокуляция культуры Amphibacillus sp на синтетические среды, где в качестве источника углерода использовались жиры различной химической природы: сульфатированный рыбий жир и свиной жир с концентрацией 1г/дм3. Так синтетические среды 1 и 2 в качестве источника углерода содержали сульфатированный рыбий жир, а среды 3 и 4 - свиной жир. В

2-ой и 4-ой среде присутствовал СПАВ «Превоцелл- W-0F-7». Через каждые 24 часа культивирования снимали следующие характеристики: подсчет величины КОЕ, оптическую плотность, рН жидкости, кислотность.

Увеличение величины КОЕ наблюдалось в первые 72 часа культивирования для культуры AmpЫbacШus, содержащей в качестве источника углерода сульфатированный рыбий жир и СПАВ и составляло 5,1х109 (рисунок!).

О 24 48 72 96

Продолжительность культивирования,час Синтетическая среда на основе сульфатированного рыбьего жира

~О"" Синтетическая среда на основе сульфатированного рыбьего жира и "Превоцелл \y-0F-7 й Среда на основе свиного жира

X Среда на основе свиного жира и "Превоцелл W-0F-7 Рис.1. Динамика концентрации культуры микроорганизмов

Источниками углерода в синтетических средах для культуры АтрМЪаеШш sp являлись жировые вещества различной химической природы. Использование данных ингредиентов в качестве питательного субстрата подтверждалось изменением рН. Уменьшение величины рН в первые 48 часов культивирования для среды содержащей свиной жир, от 7,01 до 6,25, вероятно связано с его деструкцией и образованием глицерина и карбоновых кислот, обуславливающих кислую реакцию среды.

Карбоновые кислоты являются комплексными соединениями. В карбоксиле между углеродным атомом и двумя атомами кислорода имеется равновесное сродство, Атом водорода одинаково связан с обоими атомами кислорода. Однако связь водорода непрочная и он способен легко отделяться в виде иона. Кислые свойства жирных кислот проявляются только в координационной форме и сила кислот зависит от того, какая часть молекул находится в этой форме.

Координационная форма

На кислотность карбоновых групп действует также радикалы, связанные с карбоксилами. Карбоновые кислоты расщепляются микроорганизмами до соответствующих альдегидов, которые окисляются до кислот или полимеризуется. В результате чего значение рН, через 96 часов, увеличивается до 6,96.

Динамика кислотности обусловлена теми же причинами, что и

изменение активной реакции среды. Таким образом, доказано, что

выделенная культура АтрЫЬаеШш весьма активно вступает в !

конструктивный и энергетический обмен.

11

В среде содержащей в качестве источника углерода сульфатированный рыбий жир и СПАВ деструкция произошла наиболее полно, чем в других составах, что связано с интенсивным вовлечением жировых веществ в клеточный метаболизм культурой ЛтрЫЪасШт зр.

(

Л 1 >Я

____^ /1 / .Л / '4 и

*г> к у» 37И Л 73 и /в з

— МЛ&М апйе .---

Рис. 2. Разрушения сульфатированного рыбьего жира + СПАВ культурой Amphibacillus sp (газожидкостной хроматографией)

Третьим этапом работы являлся, подбор оптимальных условий культивирования и их влияние на свойства фермента, продуцируемого

культурой AmpЫbacШus sp.

Установлено, что максимальная удельная скорость размножения

наблюдалась при величине рН = 7,12 и составила 0,29 час-1, а при рН=

9,0 - 0,34 час'1 при 24 часах культивирования. При увеличении

продолжительности культивирования наблюдалось снижение данного

показателя, Это указывало на то, что оптимальное время

культивирования составляет 24 часа. Максимальные значения КОЕ,

оптической плотности и концентрации белка характерны для щелочной

среды и, вероятно, обусловлены родовой принадлежностью культуры

ЛтрЫЪасШш зр, так как максимальный рост данных микроорганизмов

12

варьируется в пределах рН 8-10 Для нейтральной и щелочной сред наблюдалось понижение величины рН с 7,20 до 6,95 и с 9,10 до 8,80 соответственно. Это вероятно связано с тем, что в растворе происходила деструкция жировых веществ до глицерина и жирных кислот, которые и способствовали снижению активной реакции среды.

Максимальное значение ли политической активности продуцируемого белка наблюдалось в нейтральной среде и составляло 77,00 г/дм3 после 24 часов культивирования среды, рисунок 3.

§ ИЛиполитическая активность нейтральной среды; О Липолитическая активность щелочной среды, □ Протеолитическая активность нейтральной среды, В Протеолетическая активность щелочной среды

Рис.3. Зависимость липолитической и протеолитической активностей от продолжительности культивирования культуры ЛтрМЬаа11т 8р.

На основании проделанных экспериментов была разработана схема получения маточного раствора, содержащего культуру ЛтрМЬаа11т $р, которая представлена на рисунке 4.

Получение маточного раствора на основе культуры рода АтрЫЬасШив Бр

I

Приготовление синтетической среды: " ': Состав (г/дм3): КС1 - 0,5; КН2РО„- 1,0; N№,N03- 0,5; МяС1 -0,1; СПА'В «Превоцелл - >У-ОР-7» - 1; сульфатированный рыбий жир - 1 Приготовление бактериальной суспензии: рН=7,20; кислотность - 0,15 г/дм3; оптическая плотность 0540 - 1,9; ^ КОЕ = 5,65

Получение маточного раствора: Параметры культивирования:

t= (37±0,5)°С; продолжительность 24 часа; • - - рН = 7,10; механическое воздействие по одному часу в сутки, с частотой

колебания 250 об/мин, амплитудой 6. Качественные характеристики через 24 часа культивирования: рН= 7,10; кислотность -[0,20-0,25] г/дм3; оптическая плотность D540 - 2,0; lg КОЕ = 7,17;

концентрация белка - [0,70-0,80] г/дм3; липолитическая активность-[75,30-77,00] ед/г; протеолитическая активность - [9,00-11,70] ед/г.

Рис. 4. Схема получения маточного раствора В процессах производства кожи и меха, начальным этапом обработки является отмока и обезжиривание сырья. Для интенсификации и сокращения продолжительности этих процессов в жидкость вводится ПАВ. Более перспективным, на наш взгляд, является совершенствование указанных процессов на основе биотехнологических методов, позволяющих уменьшить содержание

жира на волосе и в кожевои ткани при малом расходе химических материалов, используемых в производстве. В связи с этим четвертым этапом диссертационной работы являлось проведение биотехнологических процессов отмоки и обезжиривания с использованием культуральных жидкостей, содержащих культуру ЛтрМЬаеШш sp и консорциум микроорганизмов, с концентрацией СПАВ 1г/дм3.

Рис. 5. Влияние рабочей ванны на степень обводнения кожевой ткани в зависимости от продолжительности обработки.

Для исследования была взята овчина пресно-сухого метода консервирования. Для культуральной жидкости содержащей культуру АтрЫЬаеШт были приготовлены 3 отмочных ванны: ванна 1 содержала культуральную жидкость разбавленную 1:1 водой, ванна 2 концентрированную культуральную суспензию, ванна 3 являлась контрольным вариантом, где обработка меховой овчины проводилась по

типовой методике 1988 г. Интенсивность процесса отмоки, оценивали по степени обводненности, толщине кожевой ткани и содержанию жировых веществ в волосяном покрове и кожевой ткани. Наибольшей степенью обводненности (а,%) была характерна для образцов, обработанных в рабочем растворе 2, где а= 260,80 %. По типовой методике степень обводненности составила 221,40 %, рисунок 5.

Максимальное удаление жировых веществ так же было характерно для образцов обработанных в ванне 2 и составляли в волосяном покрове 12,70 %, а кожевой ткани 10,20%, тогда как по типовой методике 'содержание жира составило 11,70 % и 14,20 % соответственно.

Для культуральной жидкости, содержащей консорциум микроорганизмов, оптимальное поглощение влаги характерно для образцов обработанных в ванне 2 и составляло а= 218,70%, тогда как по типовой методике 221,40%. Содержание жировых веществ в волосяном покрове и в кожевой ткани составляло 12,90% и 10,50% соответственно.

Образцы меховой-овчины (5x10см) для обезжиривания были взяты после процесса отмоки по типовой методике и после отмоки в растворе концентрированной бактериальной суспензии, которые обрабатывались по схеме, представленной на рисунке 6, в качестве контрольного состава был выбран опыт 1, где отмоку и обезжиривание проводили по типовой методике.

Опыт 1

Отмока по типовой

методике

Опыт 2

Отмока по типовой

методике

Опыт 3

Обезжиривание типовой методике по

Обезжиривание опытной методике по

Рис. 6. Схема обработки меховой овчины обезжиривающими составами

Ванна 3 состояла из образцов, обработанных концентрированным бактериальным препаратом. Для ванны 1 были отобраны образцы, после типового процесса отмоки, с доследующей обработкой исследуемых концентрированных биологических препаратов. Интенсивность процесса обезжиривания определяли по содержанию жировых веществ в волосяном покрове и кожевой ткани, а также после обезжиривания проводили оценку колористических характеристик волосяного покрова таких как, белизна и желтизна.

Для культуральной жидкрсти, содержащей культуру ЛтрЫЬааШш ¡р, максимальное, удаление жировых веществ в волосяном покрове и кожевой т ка н ихар акт ер н о д л я о бр а з цо в , обработанных в концентрированной бактериальной суспензии (ванна 2) и составляло: 2,0 % и 6,10%. Тогда как для бактериальной суспензии содержащей консорциум микроорганизмов данные величины составили: 2,00% и 6,50%.

Таблица1. Содержание жировых веществ после процесса обезжиривания

Содержание жировых веществ, после процесса обезжиривания

Процесс %

Обработка культуральной Обработка культуральной

суспензией содержащей суспензией содержащей

культуру ЛтрЫЬаеШш ¡р консорциум микроорганизмов

В волосяном В кожевой В волосяном В кожевой

покрове ткани покрове ткани

Обезжирива 2,05± 1 6,60±1 2,05±1 6,60+0,9

ние по

опыту 1

Обезжирива 2,30+1 6,90±1 2,00±1 6,60±1

ние по

опыту 2

Обезжирива ние по опьпуЗ 2,00±1 6,10±1 2,00±1 6,50±1

Оценку колористических характеристик волосяного покрова меховой овчины проводили на приборе «Пульсар». По полученным результатам можно отметить, что наилучшие показатели белизны и желтизны характерны для образцов, обработанных концентрированной культуральной жидкостью, содержащей культуру АтрЫЬасШш бр и составили 77,30% и 4,60% соответственно. Для образцов, обработанных по типовой методике, величины белизны и желтизны составили 73,00% и 5,70%. Таким образом, установлено, что применение раствора концентрированной бактериальной суспензии, содержащей культуру АтрМЬасШш 6р для биотехнологических процессов отмоки и обезжиривания, обеспечивало необходимое удаление жировых веществ с поверхности кожевой ткани и волосяного покрова. После проведения микробиологических процессов отмоки и обезжиривания провели анализ качественного состояния сточных вод. Характеристика сточных вод после отмоки-обезжиривания представлена в таблице 2.

Таблица 2. Характеристика сточных вод после процессов отмоки-обезжиривания меховой овчины

Показатели качества воды 1 ПДК, мг/ дм3 ( для Байкальского региона) Типовая методика Совмещенный метод Опытный метод

Отмока по типовой ^иртппшгр Обезжири вание по опытной МЯТППИК-р Отмока Обезжири вание

1 2 3 4 5 6 7

РН 6,5-7,5 8,5 6,8 7,2 6,6 7,1

ПАВ, г/дм3 - 5,4 1,05 0,56 н/д 0,32

ХПК, мгО/дм3 225 1975 н/д 806 980 406

Продолжение таблицы 2

1 2 3 4 5 6 7

пк5, О 'дм3 3,0 244 н/д 156 140 101

взвеш^нн ые вещества 150 3272 2350 1720 2180 1428

Растворен ный кислород, мг/дм3 Не менее 6 7,1 6,2 6,4 6,4 6,6

Жировые вещества, мг/дм3 2200 1120 486 118 95

Цветность -

Окраска - 1:20 1:20 1:18 1:25 1:14

Запах (20°С), балл Отсут. 4 4 2 ' 4 2

Прозрачно сть, мм - 10 10 13 5' ' 10

УТЗ (по Брагинско му п-т П-Т в- мезотокс О-Т О-Т

УТЗ (по Госкомгид ромету) грязна я грязная Умерен но грязная чистая чистая

н/д - нет данных.

Как видно из таблицы 2, сточные воды после процессов отмоки и обезжиривания выполненные по разработанной методике менее токсичны. Сточная вода после отмоки и обезжиривания по типовой методике может быть отнесена к классу политоксичности (П-Т). Сточная вода меховых фабрик относится к 1, классу - весьма остротоксичная. Значит такую воду нельзя сбрасывать в водные объекты. Сточную воду после микробиологической отмоки и обезжиривания можно отнести к классу олиготоксичности (О-Т), условно - нетоксичная.

Далее овчину обрабатывали по методике (1988г.) до готового полуфабриката, после чего определяли химические и физико-механические показатели таблица 3.

Таблица 3 Химические и физико - механические показатели

меховой овчины

Наименование ГОСТ Опытный Комбиниро Контрол

показателей 4661-76 вариант ванный вариант ьный вариант

Для кожевой ткани

Температура Не ниже 73;78;77 74;77;76 77;78;79

сваривания,°С 70

Содержание Не более 10,30 10,0 10,10

влаги, % 14

Содержание 0,8-1,80 1,50 1,7 1,60

окиси хрома, %

Содержание Не более 8 6,70 7,20 7,80

золы %

Содержание 10-20 18,0 16,50 15,0

несвязанных

жировых

веществ, %

рН водной 4,0-7,5 6,50 6,50 6,60

вытяжки

Для волосяного покрова

Содержание Не более 2 2,0 2,10 2,0 '

несвязанных

жировых

веществ, %

Из данных, представленных в таблице 3 видно, что образцы

меховой овчины соответствовали ГОСТ 4661-76.

Апробация технологии была проведена на базе опытного производства УНПК «ЭКОМ».

В четвертой главе диссертации проведены результаты теоретического расчета годового экономического эффекта для ф предприятия по производству овчины мощностью 10 000 000 дм2, который составил 424 999 руб.

Таким образом, производственные испытания показали, что разработанный вариант проведения биотехнологических процессов отмоки и обезжиривания позволяет снизить степень загрязнения сточных вод за счет значительного сокращения расхода СПАВ (с 8 до 1 г/дм ), а также исключить использование карбоната натрия и формальдегида, при сохранении требуемого качества готовой продукции.

ВЫВОДЫ

1. Изучены и описаны морфологические, физиологические и культуральные признаки выделенных микроорганизмов. На основании проведенной селективной адаптации, выделен микробный продуцент способный деструктировать жировые вещества в присутствии СПАВ. Определена его родовая принадлежность - ЛтрЫЪасШт зр.

2. Показанб, что культура ЛтрЫЪасШт зр способна вовлекать в конструктивный и энергетический обмен, жировые вещества различной химической природы: синтетический- сульфатированныи рыбий жир и природный -свиной жир, шерстный жир.

3. Показано, что культура ЛтрЫЪасШт зр относится к СПАВ толерантным культурам, способных продуцировать экзоферменты в присутствии данных ингредиентов.

4. Изучено влияние активной реакции среды на свойство культуры АтрЫЬасШш sp. Показано, что экзоферменты продуцируемые в нейтральной среде обладают максимальной липолитической активностью 77,00 ед/г и минимальной протеолитической активностью 9,00 ед/г, при продолжительности культивирования 24 часа, и температуре (37±0,5)°С с механическим воздействием 250 об/мин.

5. Разработана принципиальная технологическая схема получения культуральной жидкости, основанная на применении культуры Amphibacillus sp и синтетической среды, включающей сульфатированныи рыбий жир, СПАВ и минеральные соли

6 Разработана экологически чистая технология, основанная на использовании маточных растворов культуральной жидкости для процессов отмоки и обезжиривания меховой овчины. Данная технология исключает использование карбоната натрия и формальдегида, а также уменьшает расход СПАВ с 8 г/дм3 до 1 г/дм3, что позволяет снизить уровень токсического загрязнения сточных вод

7 Разработаны составы для проведения процессов отмоки и обезжиривания, подобраны условия проведения подготовительных процессов мехового производства.

8. Установлено, что экобиотехнологический метод проведения подготовительных процессов переработки меховой овчины позволяет снизить уровень токсического загрязнения сточных вод.

Основные положения диссертации содержится в работах:

1 .Перелыгина Л.С., Шалбуев Д.В., Думнов В.Ж., Цыренов В.Ж. Биотехнология в меховой промышленности / Сб. тезисов 7-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология- наука XXI века ». Прикладная биотехнология. — Пущино, 2003.-с. 122-123;

2. Перелыгина Л С, Шалбуев Д.В., Думнов В С. О возможности снижения техногенного воздействия на водные объекты / Сб. тезисов 6-ой Международной научной конференции «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий». Абакан, 2003.-30с;

3. Перелыгина Л С. О возможности снижения уровня токсического загрязнения сточных вод/ Материалы Всероссийской молодежной научно-практической конференция «Молодые ученые Сибири». Улан-Удэ, 2003.-87-91С.

4. Перелыгина Л С, Думнов B.C., Шалбуев Д.В. Возможность снижения уровня токсического загрязнения сточных вод мехового производства/ Труды 4-ой Международной многопрофильной

конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки». Самара,2003.-105-108с.

5. Перелыгина Л.С, Шалбуев Д.В., Думнов B.C., Цыренов В.Ж. Разработка ферментного препарата./ Сб. тезисов 8- ой Международной школы-конференции молодых ученых. «Биотехнология - наука XXI века»: Прикладная биотехнология. - Пущино, 2004.- с. 132;

6. Перелыгина Л. С., Шалбуев Д. В., Думнов B.C. Совершенствование подготовительных процессов меховой овчины./ 6-ая Межрегиональная научно-практическая конференция «Развитие меховой промышленности России». Москва, 2004.-8-11с;

7Лерелыгина Л.С., Шалбуев Д.В., Думнов B.C.. Биотехнологическая утилизация СПАВ в Меховой промышленности./ Сб. тезисов 7-ой Международной научной конференции «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий». Абакан, 2004.-41с.

8.Перелыгина Л.С., Шалбуев Д.В., Думнов B.C. Меховое производство, как один из факторов экологической проблемы Байкальского региона./ Материалы всероссийской internet-конференции «Проблемы экологии в современном мире». Тамбов, 2004. в печати.

9. Перелыгина Л. С. Экологические проблемы Байкальского региона/. Труды межрегиональной научно-технической конференции «Молодежь Сибири - Наука России».Красноярск, 2004,-в печати.

10. Перелыгина Л.С, Шалбуев Д.В., Цыренов В.Ж. Влияние условий культивирования на свойство фермента, продуцируемого культурой Amphibacillus sp. «Вестник Бурятского Государственного Университета», серия 2 «Биология», выпуск № 5, Улан-Удэ, 2004. 112-116с.

11. Перелыгина Л.С, Шалбуев Д.В., Цыренов В.Ж. Деструкция жировых веществ культурой Amphibacillus sp. «Вестник Бурятского

Государственного Университета», серия 2 «Биология», выпуск № 5, Улан-Удэ, 2004. И 6-120с

12. Перелыгина Л.С. Новые экологически чистые технологии в меховом производстве. Сб. 1 -го Всероссийского семинара «Актуальные проблемы зашиты окружающей среды региона России». Издательство ВСГТУ, Улан-Удэ, 2004. 152-155с.

Выражаю глубокую благодарность за оказанную помощь и поддержку при выполнении работы кандидату технических наук, доценту Шалбуеву Дмитрию Валерьевичу

' Подписано в печать 19.08.2004 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,4 печ. л. Тираж 100. Заказ № 14|.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН, 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

04 - 1510б

РНБ Русский фонд

2005-4 120б5

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Перелыгина, Лилия Сергеевна

Введение Стр.

Глава 1. Создание новых препаратов на основе прокариотических 9 организмов

1.1. Влияние органического вещества на абиотическую компоненту окружающей среды

1.2. Выделение и применение в промышленности 15 микроорганизмов деструкторов

1.3. Анализ биотехнологических процессов в кожевенно-меховом 29 производстве

Глава 2. Организация экспериментов и методы исследования

2.1. Объекты исследования и методика проведения эксперимента

2.2. Методы исследования

Глава 3. Экспериментальная часть

3.1 О возможности использования Бак-концентрата для 47 подготовительных процессов мехового производства

3.1.1.Изучение морфолого-физиологических свойств микроорганизмов, выделенных из сточных вод после процесса обезжиривания

3.2.Влияние и изучение свойств культуры Amphibacillus sp

3.2.1.Адаптация выделенной культуры Amphibacillus sp на 61 синтетических средах

3.2.2.Изучение деструкции жировых веществ выделенной 72 культурой Amphibacillus sp

3.3. Условия культивирования и их влияние на активность 80 ферментов продуцируемых культурой Amphibacillus sp

3.3.1. Изучение влияния внешних факторов на изменение 85 концентрации белка, продуцируемого культурой Amphibacillus sp

3.4.Разработка схем получения биомассы и проведения 91 биотехнологических методов подготовительных процессов при обработке меховой овчины

3.4.1.Изучение возможности проведения биотехнологического 97 процесса обезжиривания меховой овчины с использованием бактериальной суспензии

3.5 Оценка качества готового полуфабриката

3.6. Анализ качественного состояния сточных вод

Глава 4. Технико-экономическое обоснование разработанной биотехнологической методики

4.1. Разработка стоимости бактериальной суспензии

4.1.2. Подбор необходимого оборудования

4.2. Расчет расхода химических материалов 112 Выводы 116 Список использованных источников 118 Приложение 1 127 Приложение 2 128 Приложение 3 129 Приложение

Список сокращений

СПАВ - Синтетические поверхностно-активные вещества АПАВ - Анионные поверхностно-активные вещества НПАВ - Неионогенные поверхностно-активные вещества БиоПАВ- Биологические поверхностно-активные вещества БАК-концентрат - Бактериальный концентрат Бак-суспензия - Бактериальная суспензия

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка биотехнологического метода обработки меховой овчины"

Актуальность работы. В последнее время, можно отметить существенный прогресс в решении наиболее сложных вопросов технологии кожи и меха, позволяющих приблизить существующие процессы переработки к «экологически чистым».

Предметом повышенного внимания технологов являются подготовительные процессы, на которых образуется основная масса загрязнений, поступающих на очистные сооружения. При этом необходимо учитывать большую продолжительность жидкостных обработок и их решающее влияние на качество готовой продукции. Однако, на большинстве предприятий, занимающихся переработкой овчин и пушно-мехового сырья, очистные сооружения либо отсутствуют, либо несовершенны, и не могут соответствовать установленным стандартам качества вод без серьезного их обновления. Таким образом, меховые предприятия должны выпускать не только конкурентноспособную продукцию, но и обеспечить экологическую безопасность окружающей среды от возможных отрицательных последствий. Все это ведет к тому, что руководители предприятий стремятся внедрять технологии, которые позволяют получать полуфабрикат с высокими показателями качества и параметрами, соответствующими ГОСТу, выработанными с минимальными затратами труда, химматериалов, времени и воздействием на окружающую среду.

В связи с этим становится актуальным совершенствование технологических процессов переработки меховой овчины, учитывая при этом физико-механические, химические свойства предъявляемые к готовой продукции, но и предполагаемый уровень технического воздействия, оказываемый в последствии на окружающую среду, в частности на нативные водные объекты. При невозможности решения поставленных целей традиционными методами, было предложено использовать биотехнологический метод, основанный на использовании культур микроорганизмов. Общая тенденция предлагаемой технологии - это замена или существенное снижение количества вредных химических материалов в рабочих ваннах: синтетические поверхностно-активные вещества (СПАВ), формалина, карбоната натрия.

Поэтому поставленная задача по разработке бактериальной суспензии содержащей микроорганизмы, продуцирующие ферменты с липолитическими свойствами, актуальна для мехового производства. Вследствие чего целесообразно выделение и адаптация микробных продуцентов способных деструктировать жировые вещества в присутствии СПАВ. Однако СПАВ отрицательно воздействует на сложившийся биоценоз нативных водных объектов. В связи с этим необходимо снижение расхода СПАВ в подготовительных процессах мехового производства.

Целью настоящей работы являлось:

Разработка биотехнологического метода проведения подготовительных процессов переработки овчинно-шубного сырья и снижение уровня токсического загрязнения сточных вод, образующихся после проведения подготовительных процессов.

Задачи:

1. Выделить и изучить возможность использования прокариотических организмов со специфическими свойствами в процессе отмоки и обезжиривания меховой овчины.

2. Выделить микроорганизмы способные расщеплять жировые вещества в присутствии СПАВ «Превоцелл W-OF-7».

3. Подбор оптимальных условий культивирования прокариотических организмов со специфическими свойствами.

4. Разработать методику получения маточного раствора.

5. Изучить влияние биотехнологического метода обработки меховой овчины на физико-механические и химические свойства полуфабриката и проанализировать качественное состояние образующихся сточных вод.

Научная новизна.

При выполнении диссертационной работы получены следующие результаты:

1. Выделены и проведена селективная адаптация микроорганизмов, способных деградировать жировые вещества, в присутствии СПАВ «Превоцелл W-OF-7». i

2. Изучена способность выделенных организмов использовать СПАВ в качестве источника углерода.

3. Подобраны и разработаны условия культивирования выделенного прокариотического организма, способного деградировать жировые вещества, в присутствии СПАВ.

4. Разработана схема получения культуральной жидкости, содержащей культуру рода Amphibacillus sp и продуцирующей ею экзофермент.

5. Проведены подготовительные процессы переработки меховой овчины с использованием культуральной жидкости, позволяющей сохранить качество готовой продукции, при снижении уровня техногенного воздействия на окружающую среду.

Практическая ценность.

На основе экспериментальных исследований выделен и отобран микробный продуцент, способный утилизировать как жировые вещества (шерстный жир, сульфатированный рыбий жир) в присутствии СПАВ, так и сам

СПАВ.

Разработан микробиологический метод проведения подготовительных процессов (отмоки и обезжиривания) меховой овчины.

3 3

Достигнуто снижение концентрации СПАВ с 8 г/дм до 1 г/дм и позволяет заменить высокотоксичные компоненты на менее токсичные.

Апробация технологии была проведена на базе опытного производства УНПК «ЭКОМ ».

По результатам эксперимента, данные работы вошли в грант «Молодые ученые ВГТУ», 2004 год.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на следующих конференциях: 7-ая Международная Пущинская школа-конференция «Биология наука - XXI века» (Пущино, 2003г.); 8-ая Международная Пущинская школа - конференция «Биология наука - XXI века» (Пущино, 2004г); 6-ая Международная научная конференция «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» (Абакан, 2003 г); 7-ая Международная научная конференция «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» (Абакан, 2004 г); 6-ая Межрегиональная научно-практическая конференция «Развитие меховой промышленности России» (Москва, 2004г); Научно - практическая конференция «Молодые ученые Сибири» (Улан-Удэ, 2003 г); Всероссийская internet- конференция «Проблемы экологии в современном мире» (Тамбов, 2003 г); Труды 4-ой Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальнбые проблемы современной науки» (Самара, 2003г); Межрегиональная научно-техническая конференция «Молодежь Сибири - Наука России» (Красноярск, 2004г) и на конференциях преподавателей, научных сотрудников и аспирантов ВосточноСибирского государственного технологического университета (Улан-Удэ, 2004г).

Теоретические и экспериментальные результаты исследования обсуждались на научных семинарах кафедр «Биотехнология» и «Технология кожи, меха и товароведения непродовольственных товаров» ВСГТУ в 20032004 гг.

Апробация разработанной технологии была проведена в производственных условиях опытного производства УНГЖ «ЭКОМ» ВСГТУ.

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 12 печатных работ.

Выражаю глубокую благодарность за оказанную помощь и поддержку при выполнении работы кандидату технических наук, доценту Шалбуеву Дмитрию Валерьевичу и профессору, доктору биологических наук Цыренову Владимиру Жигжитовичу.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Перелыгина, Лилия Сергеевна

Выводы

1. Изучены и описаны морфологические особенности, физиологические и культуральные свойства выделенных микроорганизмов из сточных вод после процесса обезжиривания. На основании проведенной селективной адаптации, выделен микробный продуцент способный, деструктировать жировые вещества в присутствии СПАВ. Определена его родовая принадлежность - Amphibacillus sp.

2. Показано, что культура Amphibacillus sp способна вовлекать в конструктивный и энергетический обмен, жировые вещества различной химической природы: модифицированный - сульфатированный рыбий жир и природный - свиной жир, шерстный жир.

3. Показано, что культура Amphibacillus sp относится к СПАВ толерантным культурам, способных продуцировать экзоферменты в присутствии данных ингредиентов.

4. Изучено влияние активной реакции среды на свойство культуры Amphibacillus sp. Показано, что экзоферменты продуцируемые в нейтральной среде обладают максимальной липолитической активностью 77,00 ед/г и минимальной протеолитической активностью 9,00 ед/г, при продолжительности культивирования 24 часа, и температуре (37±0,5)°С с механическим воздействием 250 об/мин.

5. Разработана принципиальная технологическая схема получения культуральной жидкости, основанная на применении культуры Amphibacillus sp и синтетической среды, включающей сульфатированный рыбий жир, СПАВ и минеральные соли.

6. Разработана экологически чистая технология, основанная на использовании маточных растворов культуральной жидкости для процессов отмоки и обезжиривания меховой овчины. Данная технология исключает использование карбоната натрия и формальдегида, а также уменьшает расход

3 3

СПАВ с 8 г/дм до 1 г/дм , что позволяет снизить уровень токсического загрязнения сточных вод.

7. Разработаны составы для проведения процессов отмоки и обезжиривания, подобраны условия проведения подготовительных процессов мехового производства.

8. Установлено, что экобиотехнологический метод проведения подготовительных процессов переработки меховой овчины позволяет снизить уровень токсического загрязнения сточных вод.

Заключение

Рисунок 1 - Схема проведения эксперимента

Для проведения экспериментальных исследований на всех этапах работы использовали: бурятскую полутонкорунную меховую овчину, СПАВ неионогенный Превоцелл W-OF-7, жировые вещества различной химической природы, препарат Байкал ЭМ-1 (на начальном этапе исследования):

1. Меховая овчина полутонкорунная - шерстный покров полутонкорунных овчин на основной площади густой, однородный, i штапельного или штапельно-косичного строения, со средней или крупной извитостью. Площадь овчин должна быть не менее 24 дм .

2. Шерстный жир - представляет собой смесь эфиров высших жирных кислот с одноатомными спиртами: холестерином, изохолестерином, оксихолестерином и др. В виде эфирных соединений в нем содержится от 43 до 52% трудно омыляемых веществ и 10-15% стеаринов. В состав шерстного жира входят следующие жирные кислоты: ланопальмитиновая, стеариновая, пальмитиновая, олеиновая, а также небольшое количество уксусной, масляной и церитиновой кислот. По физическим свойствам шерстный жир представляет собой мягкую жироподобную массу, плавящуюся при температуре около Зо С.

3. Сульфатированный рыбий жир - продукт сульфатирования жидкой фракции рыбьего жира, густая жидкость от коричневого до темно-коричневого цвета (ТУ 6-01-868). Получают обработкой ворвани серной кислотой с последующей промывкой и нейтрализацией. Гарантийный срок хранения 6 месяцев со дня изготовления. Применяется в качестве осн эмульгирующих жиров при составлении смесей для жирования кож всех в эвных идов.

4. Свиной технический жир - мазеобразная масса от белого до темно-коричневого цвета. Содержание нутряного жира-сырца составляет в среднем 12-13% к живой массе животного. Чистого жира в свином сале содержимся от 90 до 98%, плотность при 15°С 915-938 кг/дм3,. Получают вытапливанием, центрифугированием или прессованием. Применяют в производстве мыла.

5. Превоцелл WOF- 7. Представляет собой продукт оксиэтилирования, технических жирных спиртов. По внешнему виду «Превоцелл W-OjF- 7» воскообразная масса белого цвета, растворяется при температуре 40-45°С. Продукт устойчив к воздействию жесткой воды, кислот и щелочей. Превоцелл WOF-7 обладает хорошей смачивающей способностью.

6. Препарат «Байкал ЭМ-1» - представляет собой желто-коричневую жидкость с кефирно-силосным запахом. Кислотность ЭМ-1 не ниже 3,5 г/дм". В ЭМ-препарат входит 80 штаммов полезных микробов и продуктов их жизнедеятельности. Собранные микроорганизмы включают как аэробные так и анаэробные разновидности. ЭМ-1 содержит молочно-кцслые, фотосинтетические, азотсодержащие бактерии, дрожжевые грибки, фер(менты, аминокислоты, нуклеиновые кислоты.

На начальном этапе для решения первой задачи в лабораторных условиях был выполнен ряд экспериментов.

Для приготовления маточного раствора из препарата Байкал ЭМ-1, в емкость объемом 3 дм3 вносили 3 см3 препарата (1:1 ООО) с добавлением ягодного сиропа на основе войлочной вишни в количестве 30 см для процесса брожения. Полученный раствор выдерживали в герметично закрытой емкости при температуре (25±0,5)°С, в течение 7 суток без механического воздействия.

Для дальнейших исследований были разработаны 9 типов бактериальных суспензий, где в качестве источника углерода присутствовал, шерстный жир с концентрацией от 1 до 3 г/дм3, СПАВ неионогенный и маточный раствор с

3 3 расходом от 1 до 3 см /дм . Также провели процессы отмоки и обезжиривания на основе маточного раствора.

Культивирование составов проводили в течение 24 часов, при температуре (37 ±0,5)°С, переменным механическим воздействием на «Shaker type 357", частота колебания 150 оборотов в минуту, амплитуда 7, по 2 Часа в сутки. Выходными параметрами являлись: рН бактериальной суспензии, кислотность, оптическая плотность среды. Измерение выходных параметров проводили через 0; 48; 96; 144; 192; 240; 264; 336; 384; 432; 504 часа. По истечении времени культивирования были отобраны 4 типа бактериальных суспензий с максимальным значением оптической плотности. Данные бак-суспензии использовались для проведения отмочно-обезжиривающих процессов обработки меховой овчины.

Для проведения подготовительных процессов были отобранные методом асимметрической бахромы образцы меховой овчины размером 10x10 см пресно-сухого метода консервирования. Процесс отмоки проводили при температуре 25-30°С, ЖК (жидкостный коэффициент) =10, продолжительность 12-16 часов при постоянном механическом воздействии, которое осуществлялось на встряхивателе «Shaker Туре 357» с частотой колебаний 200 об/мин, амплитудой 7.

Процесс обезжиривания проводили при температуре (40±2)°С при постоянном механическом воздействии на встряхивателе «Shaker Туре 357» с частотой колебаний 100 об/мин, амплитудой 7 в течение 45 мин.

В качестве контрольного варианта использовали образцы меховой овчины, обработанные по типовой методике (1988 г.) представленной в таблице 1.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Перелыгина, Лилия Сергеевна, Улан-Удэ

1. Слащин Ю.А, Микроорганизмы на службе у человечества // Дачный сезон, 2001, №7, с. 2-3.

2. Егоров Н.С. Метаболизм микроорганизмов. М.: МГУ,1986.

3. Асонов Н.Р. Микробиология. М.: Колос,1997.-352 с.

4. Родин В.Е., Слизкин А.Г., Мирошников В.В. // Биотехнологические ресурсы Тихого океана. М: ВНИРО, 1986. с. 86-94.

5. Безбородов A.M. Биотехнология продуктов микробного синтеза. М.: Агропромиздат, 1991. 240с.

6. Купина Н.М., Слуцкая Т.Н., Калиниченко Т.П.// Изв. ТИНРО. 1983. Т. 108. С. 90-97.

7. Каверзнева Е.Д.// Прикл. Биохимия и микробиология. 1971. Т.7. №2. С. 225-228.

8. Карасевич Ю.Н., Зайцев Г.М. Утилизация 4- хлорбензойной и 2,4-дихлорбензойной кислот смешанной культурой микроорганизмов // Микробиология.-1984.-Т.53.-Вып. 3- С. 374-380.

9. Bennet С. Control of microbial problrms and corrosion in closed system // Pap. Technol. and Ind. 1985.-V. 26. -N.7. - P. 331-335.

10. Tobin R.S., Scott C.C.// Water Res.- 1988. V.10.- P. 529-535.1.. Morgan P., Watkinson R.J.// Crit. Rev. Biotechnol. -1989. -V. 8- P. 305-333.

11. Ганиткевич Я.В. // Биотехнология. 1998. Т. 4. №5. С. 575-583.

12. Diamant R.M.E. (Pitman). The prevetion,1989.

13. Рапорт И.А. Химические мутагены в селекции и защите природы.-Вестн. АН СССР, 1983, №11, с.59-67.

14. Ребиндер П. А. Поверхностно-активные вещества. Минск.: Наука, 1990.-306с.

15. Судариков С.А. Промышленность и экология. Киев.:Наукова думка. 1981.-116с.

16. Cardim C.G.,Calelani D., Sortini C. Treccaniv. La degradazion mocrofica dei detergenti di sintesi // Ann. microfica end inzimal. 1966. -16. -№ 416.

17. Bird J.A., Cain R.B. Microbial degradation of the cytoplasmic membrane of bacillus subtilis by sodium dodecylsylphate // Eur. J. Biockem. 1967. -2. - №4. -P. 454-459.

18. Микробиологическая очистка вод от поверхностно-активных веществ./ Ставская С.С., Удод В.М., Таранова JI.A. и др. Киев.: Наук, думка,1988.- 181 с.

19. Патент RU 2115629 С 1 С 12 N1/20, С 02 F 3/34. Консорциум штаммов микроорганизмов деструкторов для очистки почв, почвогрунтов, от нефтепродуктов и остаточной замазученности./ Голодяева Г.П., Старовойт Т.А./ 96119717/13 Опубл. 20.07.098. Бюл. № 20.

20. Мицкевич Е.В. и др. Микробные деструкторы некоторых Хлорорганических соединений./ Мицкевич Е.В., Мицкевич И.П., Перелыгина В.В.// Прикладная Биохимия и Микробиология. 2000, Т.36,№6. С. 642-646.

21. Lovely D.R., Philips E.J. // Appl. Environ. Microbiol.- 1987. № 53. - P. 2623-2641.

22. Lovely D.R., Philips E.J. // Appl. Environ. Microbiol.- 1986- № 51. P. 683-689.

23. McCarthy A.J., Broda P.// J. Gen. Microb.- 1984.- V.130.- P. 277-285.

24. Moore S., Stein W. H. // J. Biol. Chem. 1981.- V. 192.- № 2. - P. 663671.

25. Hoyler R. // Biol. Technol. V.9(l 1). - P. 1034.

26. Perle M., Kimchie S., Sheif G. // Water Res.- 1995.- № 29. P. 15491554.

27. Hanaki K., Matsuo Т., Nagase M. // Biotech. Bioeng. 1988.- № 23.- P. 1591-1610.

28. Dolfrng J., Mulder J. // Appl. Environ. Microbiol.- 1989. № 49. - P. 1142-1145.

29. BarthaR.//Microb.Ecol.- 1986- V. l.-P. 155-172.31 .Fedorak P.M., Westlake D.W. // Can. J. Microbiol. 1988. - V. 27.- P. 432443.

30. Ставская C.C. Биологическое разрушение ПАВ. Киев.: Наукова Думка, 1991.-113 с.

31. Ставська С.С., Таранова JI.A. Бшопчный розклад анюнних детергентов. BicH. АН урср, 1985, № 9, с. 87-93.

32. Елисеев С.А., Кучер Р.В. ПАВ и биотехнология. Киев.: Наукова Думка, 1991.-113 с.

33. Методы общей микробиологии / Под редакцией Герхардта Ф.И. и др. -М.: Мир, 1984. т.З. 264с.

34. Удод В.М. и др. Микроорганизмы деструкторы ряда неионногенных ПАВ/ Удод В.М., Подорван Н.И., Венгжен Г.С.// Микробиология. 1983, Т.52, Вып.З, с. 370-377.

35. Патент 0270805 ЕПВ (ЕР), МКИ* С 12N 1/20, С 02 F 3/34, В 09В 5/00. Микробиологический способ и препараты разложения углеводородов / Р.А. Vadenberg Опубл. 06.05.88.

36. Патент RU 2174496 С 2 С 12 N1/26, С 02 F 3/34. Биопрепарат Родер для очистки почв, почвогрунтов от нефти и нефтепродуктов./ Мурыгина В.П., Войшвилло Н.Е., Калюжный С.В./ 99110890/13 Опубл. 31.05.2001. Бюл. № 28.

37. Градова и др. Биотехнологические способы очистки почв, загрязненных синтетическими моющими средствами./ Градова Н.Б., Кожевин П.А., Рабинович H.JL, Корчмару С .С.// Биотехнология. 1996. № 11. С. 46-50.

38. А.с. 1158258 А. МКИ СССР. Способ рекультивации нефтезагрязненных почв/ Исмайлов Н.М. (СССР). Опубл. 30.05.85.

39. Милерр Дж. Эксперименты в молекулярной генетике. М.: Мир, 1976.440 с.

40. Мурзанов Б.Г., Битеева М.Б. Биотехнология очистки нефтезагрязненных территорий. Обзорная информация. -М.: НИИСЭНТИ, 1992. Вып. 3, с.36.

41. Патент RU 2166542 С 2 С 12 N1/14, С 02 F 3/34. Штамм Actinomyces sp. 1-96 А, усваивающий нефть и продукты ее переработки/ Чекасина Е.В., Егоров И.В., Иванова Л.А., Тихомирова О.И./.- 99114353/13. Опубл. 10.05.2001.

42. А.с. 1184852. МКИ. Способ очистки сточных вод от СПАВ/ Думанский Л.В. (СССР). Опубл. 15.09.84.

43. Ротмистров М.Н., Ставская С.С. Разрушение алкилсульфатов бактериями // Микробиология, 1987, т. 47, № 2. с. 338-341.

44. Wachi Y., Yanagi М., Katsura Н. Decomposition of surface active agents by bacteria siolated from deonazed water. J. Soc. Cosmet. Chem.,- 1980- Vol 31,— №2, pp. 67-81.

45. A.c. № 1232649. Использование консорциума бактерий для очистки сточных вод./ Удод В.М. (СССР). Опубл. 14.05.84.

46. Патент SU 1592330 А 1 С 12 N 1/20 С 02 F 3/34. Консорциум штаммов микроорганизмов деструкторов для очистки сточных вод от провецелла и мочевины/ Рой А.А., Муравьев В.Р., Тимошенко М.Н./. 4427574/31-13. Опубл. 15.09.90. Бюл. № 34.

47. Семенов A.M. и др. Лабораторные тесты для оптимизации интродукции в почву микроорганизмов деструкторов нефти / Семенов A.M., Куличевская И.С., Халимов Э.М., Гузев B.C. // Прикладная биохимия и микробиология, 19998, т.34, № 5, С. 220-224.

48. Neu T.R., Poralla К.// Lett. Appl. Microbiol. 1997. - V.25- № 2.- P. 91-94.

49. Bergeys Manual of systimatic bacteriology. Baltimore; London: Williams; Wilkins- 1984-1986. 1599 p.

50. Cooper D.G. Goldenberg B. G. // Appl. Environ. Microbiol. 1987 - V. 53.- № 2.- P. 224-229.

51. Desai J.D.//J.Sci. Ind. Res.- 1987.- V.46.- №.10.- P. 440-449.

52. Gutnick D.L., Minas W. // Biochem. Soc. Trans. 1987.- V. 15.- № 6.- P. 22-35.

53. Hommel R., Kleber H.-P. // Chem. Geselschaft. DDR. 1989. Bd. 36.- №1. S. 2-7.

54. Pat. UK. 1986. № 2172898 A.

55. Zhang G.,Miller R.M. // Appl.Envirion.Microbiol. 1995.- V. 61.- №6.-P. 1420-1425.

56. Patel R.M., Desai A.J. // Appl.Envirion.Microbiol. 1990. - V. 32- №5. -P.521-525.

57. Yakimov M.M., Timmis K.N., Wray V., Fredrickson H.L. // Apl. Envir. Microbiol. 1995. -V. 61. -№ 5. - P. 1706-1713.

58. Arino S., Marchal R., Vandecasteel J.-P.// J.Appl. Microbiol.- 1998.- V. 84. № 5.- P. 769-776.

59. Турковская O.B., Дмитриева T.B., Муратова А.Ю.// Прикладная Биохимия и микробиология. 2001. Т. 37 №1. С. 80-85.

60. Ito.Y., Saito Т.// Bull. Jap. Soc. Sci. fish.- 1983.- V. 29.- № 10. P. 942947.

61. Echardt T.// Plasmid.- 1978. V. I. - №4. - P. 885-889.

62. Yoshihara K., Atamatsu I., Kamishima H. // Kami Pa Gikyoshi. 1985. V. 39. № 7 - P. 681-690.66. http:// www.bioplaneta.ru67. http:// www.kstu.ru

63. Карасевич Ю.И. Основы селекции микроорганизмов, утилизирующих синтетические органические соединения. М.: Наука, 1982. - 144с.

64. А.с. 1131901 МКИ С 02 F 3/34 Способ биологической очистки сточных вод от неионогенных ПАВ Анаэробными микроорганизмами/ Беляев В.А., Гвоздяк П.И., Удод В.М. (СССР). Опбл. 23.02.89.

65. А.с. 835970 МКИ С 02 F 3/34 Способ биохимической очистки сточных вод от соединений шестивалентного хрома / Серпокрылов Н.С., Жуков И.М. (СССР). Опубл. 15.12.85.

66. А.с. 854029 МКИ С 12 N 15/00 Штамм Pseudomonas ALCALIGENES № И, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ДЕГРАДАЦИИ ФОРМАЛЬДЕГИДА/ Грирорьева М.Н., Бородулина О.В., Борисова С.М. (СССР) Опубл. 15.01.88.

67. А.с. 1226841 МКИ С 02 3/34 Способ биохимической очистки сточных вод от этилендиамина./ Ильичев С.Н., Малицкая Я.Л., Салькова А.А. (СССР). Опубл. 07.12.86.

68. Савельева О.В.и др. Анаэробное сообщество, разлагающее 2-аминобейзойную кислоту/ Савельева О.В., Котова И.Б., Нетрусов А.И.// РЖ Биотехнология, 2000, №5. 93с.

69. So Chi Ming, Youhg L.Y. Isolation and characterization of a sulfate-reducing bacterium that anaerobically degrades alkanes./ Appl. And Envitron. Microbiol. -1999-65-№7-P. 2969-2976.

70. Рохвард О.Д. Ферменты в меховом производстве. М.: Легкая индустрий, 1977.-224с.

71. Чурмис Т.К., Ужкурская А.П. Химия протеолитических ферментов. -Вюлнюс, 1983.- 96 с.

72. Шестакова И.С. и др. Ферменты в кожевенном и меховом производстве / Шестакова И.С, Миронова Т.Ф., Моисеева Л.В. М.: Легпромиздат, 1990. -128 с.

73. Бабкина В.Г. и др. Биотехнология микробных ферментов. Бабкина В.Г., Петрова И.С. М.: Наука и техника ,1969. - 204с.

74. Ерохина Л.И. Материалы симпозиума по химии протеолитических ферментов. Вюлнюс, 1983. -133с.

75. Нецепляев С.В., Панкратов А.Я. Лабораторный практикум по микробиологии пищевых продуктов животного происхождения. М.: Агропромиздат, 1990. - 223 с.

76. Ласков Ю.М. и др. Очистки сточных вод предприятий кожевенной и меховой промышленности / Ласков Ю.М., Федоровская Т.Г., Жмаков Г.Н. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984.-166 с.

77. Жмаков Г.Н. Очистка сточных вод меховой промышленности предприятий Болгарии // Кожевенно-обувная промышленность, 1977, № 4, с. 51-54.

78. Левенко Т.И. ПАВ в кожевенной и меховой промышленности. М.: Химия, 1974. - 154с.

79. Симинов Е.А. идр. Очистка сточных вод и сокращение водопотребления в меховой промышленности / Симонов Е.А., Пурим Я.А., Королькова Е.А. // Кожевенно-обувная промышленность, 1982, № 2, с. 115-120.

80. Улусой Э. Современная технология обработки овчины // Кожевенно-обувная промышленность. -1991. № 4. - С. 7-9.

81. Brigman G., Kuhn R. Gesundheits.- Ing. 1989. Be. 80, H.4, s. 115-120.

82. Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений. Изд. 2-е, доп. П 38 и перераб. М., Колос, 1976.

83. Иоффе Б.В. и др. Физические методы определения строения органических соединений/ Иоффе Б.В., Костиков P.P., Разин В.В. М.: Высшая школа, 1984.-336с.

84. Лерина И.В., Паденко А.И. Лабораторные работы по микробиологии. -М.: Экономика, 1986.

85. Нецепляев С.В., Панкратов А.Я. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. М.: МГУ, 1986.

86. Методы обще бактериологии пер. с анг./ под ред. Герхордт Ф. и др. М.: Мир, 1983. Т.2- С.536.

87. Методика выполнения измерений рН в водных потенциометрическим методом: ПНД Ф 14. 1:2:3:4.121-97.- М.: ГУАК Госкомэкологии России,1997.-7с.

88. Головтеева А.А. и др. Лабораторный практикум по химии и технологии кожи и меха / Головтеева А.А., Куциди Д.А., Санкин Л.Б. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1987. - 312 с.

89. Грачева А.А. и др. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов/ Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - 240 с.

90. Шторосберг А.Д. Практическая химия белка/ Ред. А. Дарбре. М.: Мир, 1989. С. 180-196.

91. Лабораторный практикум по микробиологии/ Арутонян Н.С., Янова Л.И., Аришева Е.А. и др.- 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Агропромиздат, 1991. -160 с.

92. Плещков Б.П. Практикум по биохимии растений. Изд. 2-е, доп. П 38 и перераб. М., Колос, 1976.-246с.

93. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов/ Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С. и др.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982.- 240 с.

94. Шкурки меховые и овчина шубная выделанные. Методы определения содержания несвязанных жировых веществ: ГОСТ 26029-84.- Введ. 01.07.85.-М., 1985.-21с.

95. Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод.- М.: Химия, 1984.- 448 с.

96. Брагинский Л.П. Некоторые принципы классификации пресноводных экосистем по уровням токсической загрязненности// Гидробиологический журнал, 1985, т.21, №6, с. 65-74.

97. Шалбуев Д.В. Изучение возможности снижения уровня техногенного воздействия при выполнении процесса обезжиривания меховой овчины.:

98. Автореферат на соискание ученой степени кандидата технических наук.-Красноярск: 1999.

99. Определитель бактерий Берджи в 2-х томах. 9-е изд.- М.: Мир, 1997.

100. Буззубов Н.А. Химия жиров. Учебник для средних специальных учебных заведений. М., Пищепромиздат, 1962.-307с.

101. Голубев В.Н. Пищевая биотехнология: Учебное пособие для пищевой специальности вузов./ В.Н. Голубев, И.Н. Жиганов.- М.: ДеЛи принт, 2001.- 122 с.

102. Жилина Т.Н. и др. Новые алкалофильные и факультативно-анаэробные сахаролитические бациллы из озера Магади/ Жилина Т.Н., Гарноав Е.С., Заварзин Г.А.// Микробиология, 2001, т. 70, №6, с. 825-837.

103. Есина Г.Ф., Санкин Л.Б. Отделка меха: Учеб. Пособие для вузов.- М., Легпромбытиздат, 1994. -208 с.