Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

РАСПРОСТРАНЕНИЕ ДИРОФИЛЯРИОЗА СОБАК В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ В РАЗРАБОТКА ЕГО ДИАГНОСТИКИ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ РЕАКЦИЕЙ

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "РАСПРОСТРАНЕНИЕ ДИРОФИЛЯРИОЗА СОБАК В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ В РАЗРАБОТКА ЕГО ДИАГНОСТИКИ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ РЕАКЦИЕЙ"



На правах рукописи

МЕДВЕДЕВ АацмАЮрыш

РАСПРОСТРАНЕНИЕ ДИРОФИЛЯРИОЗА СОБАК В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ И РАЗРАБОТКА ЕГО ДИАГНОСТИКИ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ РЕАКЦИЕЙ

Специальность 03.00.19 -парвлполопи

АВТОРЕФЕРАТ Диссертация на совсюмше учепой степени ЕУИЛИЛУ™ мтартаигди" -яку*

Москва-2007

Работа выполнена в ГНУ Всероссийском научно - исследовательском институте гельминтологии нм. К.И. Скрябина

Научный руководитель: доктор аетеринарных наук,

профессор Гаркави Борис Львович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Малахова Екатерина Ивановна ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина (ВИГИС)

Кандидат ветеринарных наук Шемяков Дмитрий Николаевич Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. КЛ. Скрябина (МГАВМиБ)

Ведущая организация: Кубанский государственный аграрный

университет

А?

Зашита состоится «.¿У» октября 2007 в часов на заседания диссертационного совета Д. 006.011.01 при Всероссийском научно - исследовательском институте гельминтологии имени К.И. Скрябина (ВИГИС)

Адрес: 117218, Москва, ул. Большая Черемушкинская, д.28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС Автореферат разослан оУ» сентября 2007 г.

Ученный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

БережкоВ.К.

Введение

Актуальность проблемы. Дирофиляриоз широко распространенное заболевание собак а кошек. Возбудителями дирофиляриоза домашних животных служат круглые паразитические черви DirofUaria immitis, локализующиеся в яршом желудочке и легочных артериях я DirofUaria repens, паразитирующие в подкожной клетчатке. Паразитируя в сердце собак и кошек, дярофилярин вызывают расстройства кровообращения в результате механической закупорки и эндокардита, клинически проявляющегося расстройством сердечной деятельности. D. repens у животных проявляется поражением кожи.

Дирофиляриоз является трансмиссивным заболеванием. Развитие возбудителей дирофиляриоза происходит с участием промежуточного хозяина комаров родов Aedes, Culex, Anophelus.

Дирофиляриоз является зоонозным заболеванием. Дврофилярин в организме человека не достигают половой зрелости. Неполовозрелые Дирофилярии обнаруживаются в глазу и других жизненно важных органах человека, для их удаления требуется хирургическое вмешательство.

Изучением дирофиляриоза собак в России занималось много исследователе, но тем не менее остаются недостаточно изученными вопросы эпизоотологии дирофиляриоза собак в южных районах России, в Нижнем Поволжье, Северном Кавказе, в том числе в Краснодарском крае, где он особенно широко распространен и иммунодиагностика этой инвазии, что явилось предметом наших исследований и определило цель работы.

Псль и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение распространения дирофиляриоза в различных климатических зонах Краснодарского края и разработка серологической д иагностики дирофиляриоза.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Изучить распространение дирофиляриоза собак в городской и сельской местности Краснодарского края

• Определить сезонную периодичность появления микрофилярий в крови собак

• Установить влияние возраста, пола, породы, типа содержания на зараженность собак О. ¡пити$

• Изучить влияние Р. на организм собак, гематологические и

биохимические показатели крови

нм* РГАУ-МСХА

имени К.А. Тимирязева ЦНБ имени Н.И. Желсзцова

й литературы

• Приготовить соматический экстракт из половозрелых дирофилярий, провести его фракционирование и выделить наиболее эффективную диагностическую фракцию

• Провести элеетрофоретический анализ соматического фракционированного экстракта дирофилярий в ПААГ

• Офаботать параметры постановки иммуноферментвой реакции (ИФР) и оценить диагностические качества фракционированного соматического антиген» в ИФР

• Провести производственные испытания ИФР при дирофиляриозе собак

Научная новизва. Впервые установлено распространение днрофиляриоза у собак городской и сельской местности в условиях Краснодарского края. Максимальная ннаазнрованность собак Б. шипШб установлена в возрасте 5-7 лет. Выяснено влияние пола, породы, условий содержания на зараженность собак дирофиляриямн. Установлена сезонная динамика днрофиляриоза, Проведено фракционирование экстракта О. шишш и определена наиболее активная и специфичная фракция. Определена молекулярная масса двух белковых компонентов диагностически эффективной фракции соматического антигена из половозрелых I). цшпШз, которая составила 19,3 и 20,5 кДа соответственно. Впервые в России разработан серологический метод прижизненной диагностики днрофиляриоза собак на основе иммуноферментной реакции с использованием фракционированного соматического экстракта половозрелых дирофилярий. Установлена чувствительность и специфичность ИФР при дирофиляриозе собак — 54,0 и 86,46% соответственно. Оценена эффективность микрофилярицндаого Действия нвермектина в дозе 0,2 мг/кг массы (100%). Проведена оценка профилактического действия моксидектина в дозе 3 мкг/кг при дирофиляриозе собак к условиях Краснодарского крах.

Практическая значимость. Результаты изучения эпизоотологии днрофиляриоза и усовершенствование методов диагностики этого заболевания в условиях Краснодарского края используются при разработке мер борьбы с этой болезнью.

По материалам диссертации разработан лабораторный регламент ва выявление антител к дирофиляриям (О. ¡пития) у собак, одобренный секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (сентябрь 2006т.)

Лггроблння работы. Основные положения диссертации доложены на К Заседаниях ученного совета ВИГИС (203-200ÓJT.)

2. Научной конференции ВОГ «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2004,2005)

3. Секции «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины

РАСХН (2006г.)

Осповное содержание диссертации опубликовано в 3 печатных работах.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 137 страницах основного текста я состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, их обсуждения, выводов н списка использованной литературы на 197 источников, в том числе 67 авторов СНГ и 130 иностранные

Диссертация иллюстрирована 16 таблицами, 7 рисунками и 3 фотографиями. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распространение, эпизоотология дирофнляриоза собак в разных лацдшафтво-кдиматнческих районах Краснодарского края;

2. Получение соматического фракционированного антигена из половозрелых D. immitis н его физико - химическая характеристика;

3. Разработка диагностической тест-системы на основе ИФР при дирофиляриоэе собак с использованием соматического фракционированного антигена;

4. Оценка лечебного и профилактического действия ивермекгина и моксидектяна при дирофиляриозе собак в условиях Краснодарского края.

2. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1 Обзор литературы

В литературном обзоре проанализированы различные аспекты рассматриваемой проблемы по систематике, морфологии и биологии дирофияяркй, эпизоотологии, распространению дирофнляриоза у человека, влиянию дирофилярий на организм собак; методов посмертной и прижизненной диагностики, терапии и профилактики дирофнляриоза.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1 Материалы и методы исследования

Распрруцррненну диррфияяриоза собак S городской н сельской местности в разных лавдшафтно-климатических условиях края изучали на основании исследований проб крови методом концентрации. Всего обследовали 1192 собаки г. Краснодара и 234 собаки их разных районов Краснодарского края.

Работу по распространению дирофиляриоза среди собак проводили в период 2003 — 2006 гг. в Краснодарском крае во все сезоны года.

Диагностические исследования по обнаружению микрофнлярий в крови собак проводили согласно модифицированному методу Knott (1939), а также по методу неполных гельминтологических вскрытий в разных районах Краснодарского края. В объект исследования вошли Приморско-Ахтарскн й, Павловский, Лабинский, Славянский, Красноармейский, Тнматсвскив районы, г. Краснодар м г. Москва.

Интенсивность инвазии D. immitis среди собак изучали на основании гельминтологических вскрытий сердца, легочной артерии и подкожной клетчатки 26 трупов собак г. Краснодара и других районов края. При гельминтологическом вскрытии у каждого животного подсчитывали количество дирофилярий, определяли экстенсивность (ЭИ, %) и интенсивность инвазии (ИИ, экзУголО- Полученные результаты обработали статически с расчетом средних величин, их ошибки и уровня достоверности с использованием компьютерной программы Microsoft Excel.

Возрастную и се?рнную дицдмику инвазрроааннруги собак дирофилярнями изучали в условиях Краснодарского края в 2003-2005 гг. по результатам исследований проб веисаной крови 31 щенка в возрасте до года, а также 44,47,28,24 собак в возрасте соответственно ]-3, 4-6, 7-9, 10 лет и старше. У собак различных возрастных групп брали кровь в разные сезоны гола н исследовали методом концентрации.

Влияние породы, пола и типа содержания hfl р "»^чированность дирофнляриями изучали на 770 собаках разного возраста. После изучения распространения и сезонно-возрастной динамики инваэнрованности собак дирофилярнями проводили анализ зараженности их с учетом пола, породы и назначения: домашнего содержания (мелкие и служебные породы), дворовые, бродячие.

Сезощрю периодичность п<""у|?рнт микроФилярнй D. immltis в крона изучали на 50S спонтанно ннвазированных собаках. У собак брали пробы кроен из подкожной вены предплечья в разное время года и устанавливали наличие микрофнлярий методом концентрации по Knott (1939).

Дифф^рфрцральное о^^УЧ^ВИТ f""""tQK и видовой состав макооФиляри^ собак

Краснодарского края изучали путем окрашивания личинок кислой фосфатазой (ChaJifaux L., Hunt RJD.. 1971). Всего исследовано SO проб крови с микрофнляриями. Сначала микрофидярии отмывали от эритроцитов. Затем личинки инкубировали в субстрате, состоящем из ыедииалового буфера, парарозалинилииового красителя и AS-TR нафтола, I час яри 37 "С. Далее промывали в дистиллированной воде и помещали в 1% метиленовый зеленый. Через 2-3 минуты отмывали снова дистиллированной водой. Дегадротнровали сначала в 95%, затем в 100%-ном этиловом спирте и промывали в ксилоле, Личинки после такой обработки можно увидеть как осадок красного цвета.

Влияние Р. immitis fffl клинические показатели изучали у 73 собак общепринятыми методами: клинический осмотр, термометрия, аускультация. Рентгенографию проводили на аппарате 12П5, электрокардиографию—на полиспектр нейрософт V 4.690

Влияние Р. immitis на гематологические и ^идуиуччесн^ П?1"п1ТУКли крови у собак изучали на базе ветеринарных клиник г. Краснодара «Доверие» и г. Москвы «Белый клык-М». В опыте использовали 10 собак, спонтанно ннвазированных D. immitis, и 10 собак, свободных от дирофилярий и другой инвазии. После постановки диагноза у собак брали пробы крови для гематологических и биохимических исследований. Пробы крови брали в специальные пробирки для данных исследований. Гематологические показатели определяли общепринятыми методами; эритроциты и лейкоциты подсчитывали при помощи счетной камеры Горяева, гемоглобин при помощи гемоглобинметра «МИНИГЕМ 540», гематокрит определяли, используя гематокрнтные капилляры и центрифугу при 2000 об ./мин. в течение 5-7 минут, СОЭ—микрометолом в капилляре Панченкова, Для подсчета лейкограммы мазки крови красили по Романовскому-Гимза и подсчитывали по 100 клеток, а затем выводили процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов.

Биохимические показатели крови собак исследовали на анализаторе «Clima MC 15» с определением уровня аспартзт-трансаминазы (ед7л), аланин-транеаминазы (едУл), щелочной фосфатазы (едУл), креатинина (едУл), билирубина (мкмоль/л), прямого билирубина (мкмоль/л), мочевины (моль/л), глюкозы (моль/л), общего белка (г/л) и альбумина (г/л), а-амилазы (едУл.), натрия (ммоль/л), калия (ммоль/л), кальция (ммоль/л).

Кроме того, у этих собак учитывали общие клинические показатели по общепринятым методам.

Микрофиляршшдное действие ивермектина изучали на 20 собаках, спонтанно ни Базированных D. immitis, распределенных иа 2 равноценные группы. Животным первой группы препарат давали в дозе ОД мг/кг, второй - 0,006 мг/кг.

Учет эффективности ивомека проводили путем исследования проб крови до и через 14, 30 и 120 дней после введения препарата. Кровь брали no 1- 2 мл из вены предплечья н

исследовали концентрирующим методом (Knott, 1939).

Испытание оптимальной схемы профилактики дирофиляриоза собак с применением моксидектнна проводили на 50 собаках разного возраста. Животные до опыта были свободны от микрофилярий по результатам предварительных исследований проб крови. Моксидектнн вводили в дозе 3 мкгУкг с интервалом 30 дней в период с марта по ноябрь. Контролем служилн 50 собак, которые не получали препарат. Эффективность применения этой схемы профилактики оценивали на основании исследований проб крови собак в начале опытам через 7,14и 30дней.

В последующем моксидектнн применяли в той же дозе в течение всего периода активности комаров с интервалом 30 дней н последний раз препарат вводили через месяц после окончания лета комаров - в ноябре 2004.

Контрольная труппа состояла из 50 собак и не получала моксидектнн. Пробы крови собак обеих групп исследовали на наличие микрофилярий спустя 7 месяцев после окончания лета комаров.

Приготовление соматического экстракта. Гельминты собирали нэ свежих трупов собак, ш)базированных дирофнляриями, и помещали в физиологический раствор 0,9% в соотношении 1:10 (вес и объем) и измельчали в ступке на холоде до получения однородной массы. Экстрагирование белков провешили в течение 24 часов в этом же растворе при 4вС на магнитной мешалке. По окончании экстрагирования гомогеиат центрифугировали при 15000 об/мил в течение 30 мни. на холоде, осадок удаляли, а супернатант использовали в качестве экстракта.

Получение соматического фракционированного антигена днрофилярий. Фракционирование цельного экстракта из дирофилярий проводили гель-хроматографией на колонке (Pharmacia) размером 16x70 см. Колонку заполняли Superóse 12 Piep Grade и уравновешивали 20 мМ растворами натрия-фосфата, натрия хлорида pH 7,0, 0,025% бромоннтродиоксала. Перед хроматографией экстракт имеет выраженную опалесцекцию, исчезающую после фильтрации через фильтр 0,45 мкм. Скорость протока 30 мл/час поддерживали перистальтическим насосом Micropexpex (Pharmacia). Фракции собирали по 3 мл в пробирку, а содержание белка в них контролировала на детекторе Uvicord Sil, ABSRange - 0,5 (Pharmacia). Скорость бумаги на самописце - ОД мм/мин. Хроматография проводилась при комнатной температуре. В процессе гель-фильтрации получили 35 белковых фракций. Содержание белка во фракциях определяли на спектрофотометре Ultrospcc II при 2S0 км в I см кювете. Антигенную активность полученных белковых фракций определяли в ИФР с использованием референс-положнтельных и отрицательных сывороток.

Физико-химическая характеристика соматического Фракционированного антигена дирофилярий.

Изучение белкового спектра соматического фракционированного антигена дирофилярий методам электрофореза в ЛААГ согласно Laemtnli (1970) с некоторыми модификациями. Разделение проводили в денатурирующих условиях с использованием 12^% геля в присутствии додецнлеульфата натрия при напряжении 300 вольт.

Постановка и учет результатов иммуноФерментной реакции при дирофиляриозе собак с соматическим <Ьрз*-цнпннро ванным антигенов,

Постановку амнуыоферментной реакции проводили в непрямом варианте с целью выявления антител в сыворотке крови животных. Параметры и режим постановки ИФР с соматическим фракционированным антигеном отрабатывали в предварительных экспериментах на сыворотках собак с гомологичной инвазией (слабый и умеренный иммунный ответ), гетерологичиой инвазией н отрицательного контроля (клинически здоровые). Твердой фазой служили планшеты из полистирола (Меддолимер, Санкт-Петербург).

Определение оптимально^ и^дрдпрапии антигена. При выборе оптимальной концентрации антигена для сенсибилизации полистироловых планшетов нами были испытаны следующие разведения: 15; 12; 10; 8; 7 мкг/мл. Антиген разводили в 0,01 М харбонатно-бшеарбонатном буфере pH 9,6.

Определение режима сеясиби ггяяаци ц плащпетов антигеном. Эта работа проводилась по образу модели. В качестве таковой взят дирофиляриозный соматический фракционированный антиген в концентрации 10 и 8 мкгАсп в карбонатно-бикарбонатном буферном растворе. Испытаны следующие режимы сенсибилизации: при 4 °С 18-20 часов; 1 час при 37°С с последующей выдержкой в течение 18-20 часов при 4° С.

Определение минимального диагностического титра сывороток крови собак. Определение минимального диагностического титра провели аа двух пулах сывороток от собак, спонтанно зараженных D. immitis, со слабым и умеренным иммунным ответом. В качестве отрицательного контроля использовали сыворотку крови клинически здорового животного, а также три гетерологн чные сыворотки (Toxocara canis, Babesia canis, Cystoisospomm canis). Испытали разведения сывороток 1:50 и 1:100.

Минимальным диагностическим тигром иммуноферментной реакции считали титр разведенной сыворотки, прн котором наблюдали окрашивание субстратной смеси до красновато-буроватого цвета и отсутствие изменения цвета субстрата с гетеролопгшыми и отрицательной сыворотками.

Оценку диагностической эффективности ИФР с соматическим фракционированным антигеном провеян в ходе комиссионно с использованием 128 проб сывороток крови собак, в том числе 25 - от спонтанно инвазаро ванных О. 1тт№з; 96 — от условно здоровых животных и 7 проб с гетерологичной инвазией. У условно здоровых животных не обнаружено других гельминтов.

Постановку и учет результатов провопили в соответствии с программой комиссионной проверки.

Статистическую обработку полученных данных проводили по стандартной методике Стьюдента

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Анализ данных по эпизоотологии днрофнлярноза собак в Краснодарском крае

В процессе длительного изучения эпизоотологии гельминтозов и организации протявогельминтозных мероприятий известный отечественный гельминтолог, д.в.н., проф. Е.Е. Шумакович (1963) пришел к заключению: «Эпизоотология одного и того же гельминтоза в разных зовах имеет существенное отличие к разработка мер борьбы с гельминтозами в настоящее время невозможна без предварительного изучения их эпизоотологии».

Знание закономерностей течения эпизоотического процесса, как известно, помогает разрабатывать систему противоэпизоогическнх мероприятий, позволяющую изменять естественный ход, предупреждать его активашпо н прерывать этот процесс на отдельных территориях.

Эти позиции были взяты нами за основу при изучении эпизоотологии дирофиляриоза собак в Краснодарском крае.

11о результатам исследований проб крови собак на дирофиляриоз мы установили, что он регистрируется во всех обследуемых районах края, прячем как в сельской местности, так и в городских условиях (г, Краснодар).

По нашим данным экстенсивность инвазии достигает у сельских собак 19,04-69,6% (в среднем 34,35%), у городских - 28,02% (табл. 1).

Впервые па основе анализа результатов наших исследований была установлена высокая зараженность собак О. ¡тт№ в плавневой зоне Краснодарского края (Западная дельтовая зона, г. Приморско-Ахтарск).

При гельминтологическом вскрыл ни сердец в крупных сосудов сердца у собак установлена 42,85%-ная экстенсивность дирофиляриозной инвазии в сельской местности Краснодарского края к 53,3%-яая - в городской.

Таким образом, заражение дирофилярнями домашних собак выявлено во всех районах края с различными природно-климатическими условиями.

В районах, расположенных в плавневой зоне; Приморско-Лхтарском, Красноармейском н Славянском (Анано-Таманская зона), исследовали 77 проб кровп собак, из ник микродирофилярии найдены в 32 пробах (41,5%). В районах, расположенных в степной зоне: Тимашевском (Центральная зона) и Павловском (Северная зона) и в г. Краснодаре, при исследовании 1304 проб крови мнкроднрофяаярии найдены в 367, что составляет 28,14%. В предгорной зоне в Лабинском районе (Южно-Предгорная зона) из 45 исследованных проб микрофилярин были обнаружены в 16 пробах (35,5%).

Наибольшую экстенсивность инвазии собак регистрировали в плавневой зоне края -41,5% - местности, отличающейся значительным количеством открытых водоемов (Западвая дельтовая и Анапо-Таманская зоны). Несколько ниже, во также достаточно высокий процент зараженных собак оказался в стопной и предгорной природно-климатических зонах края—28,14 и 35,5% соответственно.

4.2. Сезонная периодичность мнкрофнляряемин м видовой состав мнкрофнлярнй у собак Краснодарскою края Результаты исследований проб крови собак в разные сезоны года, проведенные в условиях Краснодарского края, свидетельствуют о существенной разнице в экстенсивности микрофнляриозной инвазии а разное время года. Максимальную экстенсивность инвазии отмечали у собак летом в июне-52,08% и осенью в окткбре-53,12%, в среднем за лето ЭИ достигала 42,02%, осенью-42,56%. В зимний период ЭИ снижалась в среднем до 17,52%.

Результаты гельминтологических вскрытий сердца собак значительно отличаются от результатов исследований крова в разные сезоны года. По результатам вскрытия трупов собак нами не отмечена значительная разница в экстенсивности н интенсивности дирофиляриозной инвазии. Экстенсивность инвазии составила зимой — 66,6%, весной — 38,46%, летом — 66,6% и осенью — 50% при интенсивности инвазии, равной соответственно 23,75; 31; 37; 36,6 экз/гол., а в среднем, ЭИ была равной 55,41% и ИИ- 32,08 экз./гол.

Зараженность собакмикрофиляршши врагних районах Краснодарского края

Населенный путгг Исследовано животных Из них зараженных ЭИ,%

Сельская местность

Приморско - Ахгарскн & 33 23 69,6

ТнмашевеквЙ 54 26 48,14

Лабинский 45 16 353

Павловский 58 7 12,06

Красноармейский 23 5 21,73

Славянский, 21 4 19,04

Городская местность

г. Краснодар 1192 334 28,02

Пик мнкрофиляриемии отмечается летом-осенью в период активности большей численности комаров - промежуточных хозяев, что позволяет в природе осуществить передачу и дальнейшее распространение инвазии. Таким образом, при дирофиляриозе пробы крови для плановых исследований целесообразно брать в летнее • осенний период дня обнаружения микрофилярнй в крови.

С помощью метода дифференциального окрашивания личниок микрофилярнй СЬаШоих аш) Ниш (1971) мы изучили видовую популяцию дирофнлярий. Для определения видового состава мы исследовали 51 пробу крови, взятые от собак г. Краснодара. Личинки окрашивали сразу после взятия. Таким образом, в 49 пробах крови обнаружили личинки, относящиеся к В. Ьшшш (96,07%), с характерными окрашенными зонами экскреторной и анальной пор, н 2 образца крови, относящиеся к О. герепз (3,93%), с характерной окрашенной анальной порой.

Этот вид исследования необходим практикующим ветеринарным врачам для прогнозирования течения заболевания и его лечения. Преимущество этого метода — очень специфичный вид анализа. Недостатки - его дороговизна, занимает много времени и требуются высоко квалифицированные лаборанты.

43. Возрастная динамика иивазироваваостк собак дирофнлярнями По результатам исследований проб крови 164 собак разных возрастных групп нз разных населенных пунктов, в том числе из г. Краснодара, на дирофиляриоз мы пришли к заключению, что все они бьиш ннвазироваиы независимо от возраста. Экстенсивность инвазия собак составила до года 3,2%; 1-3 года - 22,72%; 4-6 лет - 48,93%; 7-9 лет -42,85%; 10 лет и старше - 54,16% (табл.2).

В то же время до результатам гельминтологических вскрытий сердца 26 трупов собак разных возрастных групп установили, что 13 из них были ннвазированы О. щшиш. Причем экстенсивность днрофиляриозной инвазии у разновозрастных собак различалась и составила в возрасте до года 0%; 1-3 года - 20%; 4-6 лет - 51,14%; 7-9 лет-71,42%; старше 10 лег-100%.

Таким образом, результаты гельминтологических вскрытий подтверждают данные исследований крови о более высокой степени инвазированности собак в возрасте 10 лет и старше. Зараженность дирофиляриями собак всех возрастных групп, за исключением животных до года, свидетельствует об отсутствии у них возрастного иммунитета к заражению дирофнляриями.

Возрастная динамика им4взирошанности собан микрофиллрилми D. immitis

Возраст собак Исследовано собак Из них инаазнровано ЭИ,%

Дошла 31 1 за

1-3 лет 44 10 22,7

4-6 лет 47 23 48,93

7-9 лет 28 12 42,85

10 лет н старше 24 13 54,16

В среднем: 174 59 33,9

4.4. Влияние породы и пола собак на зараженность днрофнлярнамн

При анализе полученных результатов исследований проб крови 202 сук и 178 кобелей разного возраста не установлено существенной разницы в показателях их экстенсинвазированности D. immitis. Самки собак оказались инвазнрованы на 31,68%, а самцы па 29,77%.

Таким образом, по нашим данным пол собак не оказывает влияния на степень инвазнрованностн вхдирофнляриями.

Результаты анализа данных по исследованию проб крови собак разных пород свидетельствуют о незначительных колебаниях л инвазированносш Так, зараженность собак породы немецкая и восточно-европейская овчарка составила 32,35%; среднеазиатская и кавказская овчарка - 30%; мастино исаполетано, боксер - 25%; доберман - 28,12%; дог - 28,57%; ротвейлер - 29,03% Лабрадор - 18,18%, сенбернар - 20%; пудель - 16,66%; курцхаар - 22,2%, такса - 26,6%; американский стаффордширский терьер - 31,03%; той терьер - 12,5%. Судя по этим показателям, наиболее восприимчивы к заражению дирофнлярням немецкая и восточноевропейская овчарки, а устойчивость к этой инвазии проявляют собаки породы тон терьер, В меньшей степени были инвазированы мнкрофнлярнямн также беспйродные н собаки маленьких пород. Независимо от этого наши исследования показали, что в основной массе порода не оказывает существенного влияния на инвазированность собак днрофилярнямн. По-видимому, в большей степени на нх зараженность влияют такие факторы, как условия содержания и характер использования (дворовые, служебные, охотничьи, комнатные и т.д.).

4.5. Влканне твоя «одержат« я характера использования собак на зараженность

дярофнлирншии

При исследования проб крови 150 собак, в том числе 52 квартирных (содержащихся, в основном, в квартирах с выгулом на улице), 27 служебных (содержащихся на ограниченной территории), 16 охотничьих, 25 бродячих и 30 дворовых, установлена незначительная разница в ия вазированности кх D. immitis.

В максимальной степени были инвазированы микрофиляриями бродячие и дворовые собаки - 40%, в меньшей степени - квартирные (26,92%). Слабая зараженность зсвартирных собак, вероятно, обусловлена хорошими условиями содержания и, в первую очередь, меньшей возможностью контакта с промежуточным хозяином.

Высокая степень инваэирования охотничьих собак микрофиляриями, в пределах 37,5%, обусловлена характером их использования. Чаще всего охотятся в лиманах, заболоченных местах, лесах, где повышенная влажность, что способствует большей Плотности популяции промежуточных хозяев — комаров.

Таким образом, собаки, содержащиеся в разных условиях, оказались зараженными D. immitis в разной степени. Максимально инвазированы микрофиляриями дворовые, бродячие, охотничьи и служебные собаки, которые в большей степени подвергнуты контакту промежуточных хозяев—комаров.

В большей степени на зараженность собак карднодирофиляриями оказывают такие факторы, как условия содержания и характер их использования. В наименьшей степени, по нашим данным, были инвазированы квартирные собаки, что связано с тем, что они имеют меньшую возможность контакта с промежуточным хозяином. И.А. Архипов, Д.Р, Архилова (2004) и Т. Oda et al. (1996) также отмечали слабую зараженность комнатных собак дирофиляриямн.

Па основания результатов изучения отдельных вопросов эпизоотологии дирофиляриоза с учетом региональных особенностей, мы разработали картограмму сформировавшихся на территории региона очагов дирофиляриоза собак к людей, которая позволит, на ваш взгляд, осуществить попытку прогнозирования заболевания людей и собак дирофиляри озом, разработать в перспективе более правильную, гибкую тактику и стратегию борьбы с данным гельминтозом, целенаправленнее проводить комплекс противодирофнляриозных профилактических мероприятий.

4.6. Влняпке днрофнлярий на организм собак

Патологические изменения в организме хозяина обусловлены повреждениями, вызванными половозрелыми гельминтами, микрофиляриями и ювенильными формами паразита.

В зависимости от степени (оптических проявлений заболевания, вызванного О. ¡тпищ, исследованные вами 73 собаки были распределены на три труппы:

1. Бессимптомная форма—30 собак (41,1%)

2. Средняя степень тяжести (кардиопульмонарная болезнь)—28 собак (38,4%).

3. Тяжелая форма болезни (кардиопульыонарная болезнь с тромбоэыболическимн осложнениями, почечной и печеночной недостаточностью) — 15 собак (20,5%).

Чаше всего мы наблюдали бессимптомное течение заболевания, что в нашем случае составило 41%.

У животных со средней степенью тяжести болезни проводила клинический осмотр, аускульташио, рентгенографию, электрокардиограмму, У собак с такой формой болезни (28 животных) были выражены следующие симптомы: периодическая слабость, неустойчивость к физическим нагрузкам, спорадический кашель, одышка. 11а рентгеновском снимке сердца наблюдали гипертрофию правых отделов сердца (53,57%); при электрокардиографии—гипертрофию правого желудочка (14,28%).

У собак с тяжелой степенью заболевания были выражены следующие симптомы: острая слабость, анорексия, потеря веса, хронический резкий кашель, тахипноэ, диспноэ, цианоз. При аускультации легких слышны аномальные шумы на вдохе; при аускультации сердца - систолический сердечный шум и расщепленный второй той сердца. На рентгеновских снимках: видны изменения в сосудах сердца, очаги инфильтрации легких, кардиомегалия, гепатомегалня. На электрокардиограмме признаки расширения правого предсердия, нарушения проводимости.

В первую очередь при дирофиляриозе поражаются сердечно-сосудистая (нарушение кровообращения и проводимости сердца) и дыхательная (расстройства Лъргячия, аллергическая пневмония) системы, реже печень, почки и другие органы с нарушением их функции.

4.7, Анализ результатов гематологических и биохимических исследований крови

собак при днрофилврнозе

Клинические наблюдения . за инвазированиымн собаками показали, что дкрофидяриоз у большинства животных протекал без видимых симптомов болезни, но с тяжелыми осложнениями. В связи с этим нами проведены гематологические исследования. При этом оценивали количество эритроцитов, гемоглобина, гематокрит, лейкоцитов, СОЭ, лейкограмму. Полученные результаты свидетельствуют о некоторых изменениях в показателях крови. Нами отмечено существенное снижение содержания гемоглобина, гематокрита, эритроцитов. Количество эритроцитов снижалось до 3,0 х Ю'2'1, Содержание лейкоцитов повысилось до 13,4-18,7 х 10"\ Изменения произошли

также в лейкограмме. Повысилось содержание лимфоцитов и палочковдерных нейтрофююв, а количество сегменте ядерных вейтрофалов незначительно снизилось. Количество эоэнцофалов увеличилось в 1,5 и более раз.

Значительные изменения происходили в биохимических показателях крови инвазироваиных дирофияяршгмя собак. Мы обнаружили повышение содержания билирубина, снижение общего белка, альбумина, незначительное повышение активности печеночных ферментов (щелочная фосфатаза. АЛТ, ACT), почечных показателей (креатннин, мочевина). Содержание глюкозы, а-ам плазы, глобулинов, натрия, кальиия и калия отличалось от здоровых животных несущественно,

4.8. Оценки эффективности мвомека н моксцдгкгнва при днрвфнляриозе

Исследования проводили на базе ветеринарной клиники «Доверие» г. Краснодара. В опытных и контрольной группах использовали собак разного возраста и пород, зараженных микрофиляриями. Каждая группа собак состояла из 10 животных. Подбор животных в первой и второй группах проводили по наличию личинок дирофилярий в поле зрения микроскопа, число которых от 1 и более. В третью группа (контрольная) животных подбирали по положительным результатам анализов на микрофнлярии.

Ивомек испытывали в форме 1%-ного раствора подкожно в область коленной складки или область холки с соблюдением правил асептики и антисептики. Собакам первой и второй подопытных групп вводили ивомек однократно в дозе 0,2 и 0,006 мг/кг соответственно с интервалом 7 дней. Собаки третьей группы препарат не получали и служили инвазированным контролем.

Учет эффективности ивомека против микрофилярий проводили через 14 и 30 дней после первого применения по результатам исследований проб крови перед очередной инъекцией нвермектяяа. Пробы крови по! мл брали из подкожной вены предплечья и исследовали методом Knott (1939).

Полученные результаты свидетельствуют о lOQftt-ноЙ эффективности препарата уже после однократного применения в дозе 0,2 мг/кг. Ивомек в дозе 0,006 мг/кг оказался недостаточно эффективным (70%) против микрофилярий после первого и второго применения.

Ивомек обладает пролонгированным действием на микрофнлярии. Эффективность препарата в дозе 0,2 мг/кг проявлялась в течение опыта, продолжающегося б месяцев.

4,9, Эффективность моксндсктвна для профилактики днрофилжриол собак

Учитывая то, что источники инвазии особую опасность представляют летом в период активности промежуточного хозяина — комаров, нами поставлена цель разорвать цикл развития путем предотвращения микрофиляриемии в крови зараженных собак в

летний период и недопущения заражения комаров, а такте предотвращения возможности заражения собак и развития дирофнлярий в их организме путем применения ммкрофилярицидяого препарата в весенне-летие-осенннй период, т.е. в период лета кровососущих комаров.

С этой целью мы использовали моксидектнн и провели исследования по его действию на мнкрофвлярии на 50 собаках. Собак в эту группу подбирали из щенков, рожденных в ноябре-декабре месяце, дня того, чтобы полностью исключить заражение микрофиляриями. Перед опытом до начала лета комаров у этих животных исследовали кровь на наличие мякрофилярий и животным, свободным от этой инвазии, задавали моксидектнн в дозе 3 мкг/кг перорально. Кровь исследовали через 7,14 и 30 дней.

Собак контрольной группы также подбирали по этому принципу. Учитывая, что лерсистентаое действие моксидектина около месяца, вами для профилактики дирофиляриоза была испытана схема применения этого препарата в весе ни е-летне-осенний период с интервалом в 1 месяц.

Результаты опыта свидетельствуют о том, что собаки, которые получали моксндсктин с марта по ноябрь месяц перорально в дозе 3 мкг/кг с интервалом 30 дней, оказались свободными от инвазии. В то же время в контрольной группе из 50 собак 5 оказались зараженными, в их крови обнаружили микрофалярии, что свидетельствует о заражении в летний период.

Таким образом, моксидектин оказался эффективным средством для профилактики дирофиляриоза собак. Препарат целесообразно применять перед началом периода активности комаров, затем с интервалом 30 дней до окончания периода лета комаров и последний раз спустя 1 месяц.

4.10. Характеристика соматического фракционированного мп-нгена D. ¡mmitis В процессе фракционирования экстракта дирофилярий на Superase 12 мы получили 35 белковых фракций. Концентрация белка в них колебалась от 117 до 740 мкг/ыл. Согласно показателям оптической плотности полученных белковых фракций был построен график, на котором видны три пика. При постановке иммуноферментиой реакции установили, что наиболее активными были белки второго пика, в которых содержались диагностически активные антигенные компоненты.

Эффективность фракций второго пика (32 — 38 фракции), включающих диагностически активные компоненты, проверяли более детально, испытав их в иммуноферментиой реакции на одних и тех же сыворотках собак с подтвержденным диагнозом дирофшшриоза и клинически здоровых животных. Для предварительной оценки специфичности этих фракций использовали также гетерологичные сыворотки

(бабеэиоз, токсокароз). В результате установили, что антигенные компоненты фракции 32, 33, 34, 36 показали хорошую чувствительность, но низкую специфичность. В то же время белкн фракции 35 как по чувствительности, так и по специфичности превосходили все остальные.

Оценка специфичности диагностически активных белковых фракций, проведенная в ИФР с 96 сыворотками крови клинически здоровых собак без гельминтов и кровеиаразитов, подтвердила наибольшую специфичность белков 35й фракции при сохранении высокой чувствительности. Исходя из полученных данных, дальнейшие и ммунодиагностические исследования при дирофялирнозе проводили с использованием в качестве антигена белковой фракции 35 соматического экстракта О. ишш11з.

Для изучения физико-химических свойств соматического фракционированного антигена дирофнлярий использовали метод электрофореза в нолиакрилампдном геле (ЗОБ-РАЛО, который выполняли согласно 1леттЦ (1970) с некоторыми модификациями. Для разделения белков в денатурирующих условиях использовали 12,5%-ный гель в присутствии додсцилсульфата натрия.

На электрофореграмме соматического фракционированного антигена выявлено 2 компонента, причем наиболее интенсивно окрашен только один с молекулярной массой 19,3 кДа. Она же и является мажорной белковой полосой. Вторая полоса, судя по степени проявления, характеризуется незначительным количеством белка. Ее молекулярная масса составила 21,5 кДа.

4.11. Анализ результатов по постановке и учету иммуноферментной реакции при дн рофил а р и оде собак с использованием фракционированного соматического

антигена.

Определение оптимальной концентрации антигена. Из испытанных разведений антигена для сенсибилизации полистироловых планшетов при выборе оптимальной концентрации установили, что наибольшая чувствительность и специфичность в иммуноферментяой реакции при дирофилярнозе была достигнута при 8-12 мкг/мл.

Определение режима сенсибилизации планшетор риургеном. При выборе режима сенсибилизации планшетов испытали несколько вариантов: 4°С в течение 18-20 часов; 1 час при 37°С и затем 18-20 часов при 4°С; 1 час при 3741 Наиболее оптимальными по нашим результатам оказались два режима: 18-20 часов при 4°С и комбинированный — 1 час при 37°С плюс 18-20 часов при 4°С. Но поскольку при первом способе реакция проявлялась медленнее, мы остановили свой выбор на втором. При экстренной

необходимости можно использовать также режим 1 час при 37°С, но при этом несколько снижается чувствительность.

Определение диагностического титра сывороток крови собак.

Минимальный диагностический титр (минимальный специфический титр) важный показатель ИФР, который в значительной степени определяет чувствительность и специфичность теста. Этот показатель зависит от вида и качества антигена, качества коньюгата, режима постановки реакции.

Оптимальное разведение сыворотки для исследований в ИФР в скрининге определяли на основе выявления максимальной разницы цветового сигнала между сыворотками собак с гомологичной инвазией (слабый и умеренный иммунный ответ), отрицательным контролем и гетерологичными сыворотками. Работу проводила на тех же сыворотках собак, которые использовали при определении оптимальной концентрация и режима сенсибилизации полистироловых планшетов. Сыворотки исследовали в разведении 1:50, 1:100. Исследования показали, что в разведениях 1:50 сыворотки собак с тетерологкчными инвазиями (В. canis, 1. сашз, T. canis) давали сомнительную и положительную реакции. Кроме того, в титре 1:50 сомнительную реакцию регистрировали также с отрицательной контрольной сывороткой. Таким образом, в результате проведенных исследований установили минимальный диагностический титр, равный 1:100, который позволяет выявить низкий уровень антител у зараженных D. immitis собак при сохранении высокого уровня специфичности реакции.

Режим постановки реакции. При отработке режима постановки ИФР с соматическим фракционированным антигеном дирофилярий установили, что оптимальным является вариант инкубапии с сыворотками и с коцьюгатсм по 1 часу при ЗТС. Увеличение или уменьшение времена инкубации на каком-либо из этих двух этапов заметно снижает специфичность. Инкубацию при комнатной температуре 18-26°С не испытывали, так как в ходе отработки режима сенсибилизации планшетов антигеном мы установили, что небольшие экспозиции по времени без термостата снижают чувствительность метода.

Ход постановки pçapmm: 1. При сенсибилизации планшетов для разведения антигена использовала 0,01 M комплексирующпй карбонатный-бикарбоиатный буфер рН-9,6. Антиген и все остальные ингредиенты, используемые в реакции (исследуемую сыворотку, коныогат, субстрат), вносили в объеме 100 мкл на лунку. После сенсибилизации планшет отмывали дистиллированной водой с 0,05% содержанием твина-20 3 раза но 5 минут. Отмывку этим раствором проводили после каждого этапа реакции.

2. Исследуемые и контрольные сыворотки разводили 0,01 М фосфатно-солевым буфером рН 7,2-7,4 с 0,05% содержанием твнна-20 и 0,05% - бычьего сывороточного альбумина в диагностическом титре 1:100 . Инкубировали в течение 1 часа ори температуре 37°С. Отрицательным контролем служила сыворотка крови здоровой собаки, а положительным - сыворотка спонтанно зараженного животного И. ишпШз.

3. На следующем этапе постановки ПФР вносили конъюгат в рабочем разведении 1:3000. Рабочее разведение определяли в предварительных испытаниях для каждой новой серии. Для разведения конъюгата использовали раствор, состоящий из 0,01 М фосфатно-солевого буфера рН 7,2-7,4 с 0,05% содержанием твнна-20 и 0,5% бычьего сывороточного альбумина. Инкубировали 1 час при температуре 37°С.

4. Проявление реакции проводили субстратной смесью из 10 мл цитратпого буфера рН 4,7-5,0 с добавлением 8 мг ортофенилендиамина и 5 мкл 50% стабилизированной перекиси водорода (пергидроля). После проявления (5-15 минут), реакцию останавливали стоп-рсагснтом, который состоял из водного раствора концентрированной серной кислоты в соотношении 1:1, Стоп-реагеит вносили в объеме 30 мкл на лунку.

Визуальную опенку реакции проводили по интенсивности окрашивания субстрата в лунках. Положительная реакция характеризуется потемнением субстратной смеси до жЬпого с оттенком буроватого, а затем после остановки стоп-реагентом — до красновато-буроватого оттенка смеси в лунке, где инкубировалась сыворотка животного, инвазированного О, нпттз. При отсутствии изменения цвета реакцию оценивали как отрицательную, что свидетельствовало об отсутствии в исследуемой сыворотке антител к антигену О. шипШ5. Интенсивность окраски при положительной реакции должна заметно превосходить таковую с отрицательной контрольной сывороткой и быть сопоставимой с положительной. Сыворотки, незначительно превосходящие до интенсивности окраски в ИФР отрицательный контроль, считали сомнительными и относили в разряд положительных. Сомнительную сыворотку исследовали повторно. Дважды сомнительную реакцию относили в разряд положительной. При автоматическом учете на многоканальном ридере использовали волну длиной 492 им. Положительной считали сыворотку, превосходящую по оптической плотности отрицательный контроль в 1,5 раза.

4.12. Диагностическая эффективность ИФР при дирофиларнозс собак с соматическим фракционированным антигеном.

В опытах, выполненных комиссионно, по оценке диагностической эффективности ИФР с антигеном IX шипШз использовали 128 сывороток крови собак естественно зараженных О.

21

immitis (25); естественно ннвазнрованных Babesia canis (3); Toxocara canis (3); Isospora canis (3); 96 сывороток относительно здоровых собак из г. Москвы и г. Краснодара.

Чувствительность ИФР оценили по результатам реакции с 25 сыворотками крови собак, естественно зараженных D. immitis (щи подтверждения диагноза применяли метод концентрированна Knott (1939).

Таким образом, в результате исследование получили 4 ложноотрипательн ых ответа, что составило 16%. Все неспецифические ложноположительные я сомнительные результаты относили к ложноволожительным. Ложноположительные ответы регистрировали в 13 пробах сывороток из группы относительно здоровых животных, что составило 13,54%. Таким образом, специфичность соматического фракционированного антигена составила 86,46%, а чувствительность составила—84%,

Результаты наших опытов (табл.3) подтвердили данные других исследователей о том, что специфичность серологических тестов при днрофиляриозе собак повышается при использовании соматического фракционированного антигена.

Таблица3

Диагностическая зффгктияность ИФА с сом am и ческим фракционированным антигеном D. immitis

Группа обследованных Количество проб Результаты ИФА

Соматический фракционированный антиген

+ - Чувств ител ьность специфичн ость

Дирофиляриоз 25 21 4 84% 86,46%

Бабезиоз 3 - 3

Токсокароз 3 - 3

Цистоизоспороз 1 - 1

Неустановленный диагноз и клинически здоровые 96 13 83

Итого 128

выводы

Т. Изучено распространение дирофкляриоза собак, вызываемого О. ймшйз, в различных природно — климатических зонах Краснодарского края. Установлено, что в плавневых ( Нриморско-Ахтарский район) н предгорных (Лабинский район) зонах, где больше популяция промежуточных хозяев-комаров, экстенсивность инвазии достигает 70%, в более засушливых (степных) - 30%.

2. Дирофнляриоз в Краснодарском крае зарегистрирован как у сельских, так и у городских собак (г. Краснодар). Экстенсивность инвазии по результатам исследований крови у первых составила в среднем 34,34%, у вторых - 28,02%, при гельминтологическом вскрытии экстенсинвазировавность была соответственно 42,85 и 53,3%.

3. Установлена зависимость инвазировакиостя Дйрофилярнямн От возраста собак. По результатам гельминтологических вскрытий экстенсивность инвазии О, шшШз у собак в возрасте до 1 года, 1-3, 4-6, 7-9, 10 и старше лет составила соответственно 0; 20; 51,14; 71,4; 100%, а по результатам исследования крови на наличие микрофилярнй соответственно 3,2; 22,7; 48,93; 42,85; 54,16%.

4. Установлена экстенсивность и интенсивность инвазии дирофиляриямн в зависимости от сезона года: ЭИ составила зимой-66,6%; веской-38,46%; летом-66,6% и осеныо-50,0%, а ИИ в среднем 30,75; 16,0; 52,5 и 35,5 экзУсобаку соответственно.

5. Пол собак не оказывает существенного влияния на их ннвазярованность их & шцпМь. На зараженность собак днрофнлярнямн оказывают влияние —порода; условия содержания и характер их использования. В наибольшей степени были инвазированы собаки крупных пород; дворовые, бродячие и охотничьи собаки, экстенсивность инвазии у которых составила в среднем 26,72; 40,0; 40,02 и 37,5% соответственно. В меньшей степени были инвазированы квартирные собаки (ЭИ -26,92%).

6. Наиболее патогенными для организма собак являются дирофипярии О. ншшйз, вызывающие тяжелые осложнения, а именно общую слабость в 80% случаев, неустойчивость к физической нагрузке — 26%, кашель 46,6%, изменения цвета слизистых оболочек — 6%, аускул ьтативно: расщепление второго тона — 6,6%; на рентгенологическом снимке изменения правых отделов сердца, кардиомегалию -60%; при элеюрокардиографическом исследовании признаки расширения правого предсердия и желудочка - 33,3%. Установлено тахже влияние дирофилярий на гематологические и биохимические показатели, проявляющиеся

снижением количества эритроцитов до 3,0x1012/л, гемоглобина до 68x1 ОгУл, гемагокрита до 18%, повышением СОЭ до 76 мм/час, количества лейкоцитов и эозинофилов в 2 раза, билирубина, мочевины, креативна, АсАТ, АлАТ, щелочной фосфотазы.

7. Установлена 100%-ная эффективность ивермектина против микрофилярий в дозе 0,2 мг/кг по ДВ после однократного применения. Для профилактики дирофилярвоэа собак испытан моксидеятин за месяц до начала лета комаров, затем через каждые 30 дней в течение активности промежуточного хозяина, предотвращающий микрофиляриемшо и развитие дирофалярий в организме восприимчивых животных.

8. Разработана тест - система на основе ИФР и проведена отработка параметров и режимов ее постановки при дирофлляриозе собак с соматическим фрахцнопяро ванным антигеном. Определена диагностическая эффективность ПФР при дирофидяриозе собак. Чувствительность реакции с фракционированным антигеном составила 84,0%, специфичность 86,46%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Изучение особенностей эпизоотологии и точной своевременной диагностики дирофиляриоза собак с учетом местных природно-климатических условий является основой для организации н своевременного проведения мер борьбы с этим заболеванием.

Разработана и предложена оптимальная схема применения отечественного препарата ивермектнна при дирофиляриозе собак с учетом мнкрофиляригшдного действия и особенностей эпизоотологии заболевания, а также схема профилактики дирофиляриоза моксидектипом с учетом климатических особенностей Краснодарского края.

Разработана серологическая тест — система на основе вммуноферментной реакции па выявление антител к О. ¡тшйз у собак, рекомендованная для внедрения в ветеринарную лабораторную практику.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гаркави БЛ., Медведев А.Ю. Распространение дирофилярноза собак и человека в Краснодарском крае //Матер, докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», М., 2004. — Вып. 5. — С, 131112.

2. Медведев А.Ю., Гаркави БЛ. Распространение дирофилярноза в Краснодарском крае. //Матер, докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - М., 2005. - С. 230-232.

3. Медведев AJO. Распространение дирофиляриоза собак в Краснодарском крае и серологическая диагностика инвазии. //Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - 2006. -Т. 43. -С. 196-202.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник*» ПД № 1 -00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 20.09.07. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,56 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60