Дирофиляриоз на юге России

Бескровная, Юлия Григорьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Дирофиляриоз на юге России
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Дирофиляриоз на юге России"

На правах рукописи

ои^^""—

Бескровная Юлия Григорьевна

ДИРОФИЛЯРИОЗ НА ЮГЕ РОССИИ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ И ДИАГНОСТИКА)

03.00.19 - паразитология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

О 2АПР2С:3

Москва 2009 г.

003466206

Работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении Науки «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации

Ведущая организация: Северо - Кавказский зональный научно-исследовательский

Защита состоится «29» апреля 2009 г. в 14 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.011.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И. Скрябина (ВИГИС). Адрес: 117218, г.Москва, ул. Б.Черемушкйнская, 28

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Нагорный Сергей Андреевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Горохов Владимир Васильевич кандидат биологических наук, доцент Давыдова Ольга Евгеньевна

ветеринарный институт

Автореферат разослан

2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Бережко В.К.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Дирофиляриоз - единственный в умеренном климате гельминтоз с трансмиссивным путем передачи (через комаров). За последние годы по данным разных авторов в различных регионах мира отмечен рост инфекций и инвазий, передающихся человеку через кровососущих комаров трансмиссивным путем, в том числе и дирофиляриоза. Наблюдения последних лет свидетельствуют о нарастании случаев заболевания человека этим гельминтозом в РФ (Авдюхина Т.И. и др., 2003; Бронштейн А.М. и др., 2003; Гуськов B.D. и др., 2001). Случаи дирофиляриоза выявляются не только у жителей эндемичных территорий юга страны (Волгоградская, Астраханская, Ростовская области,. Краснодарский край, Республика Калмыкия), но и на севере России. В настоящее время северная граница ареала распространения этого заболевания достигла 53-57° с.ш. (Московская, Тульская области, Алтайский край, г. Новосибирск) (Авдюхина Т.И. и др., 1997; Яковлева Е.Г. и др., 1999; Исаев В А. и др., 2004).

Юг России - благоприятная зона для распространения трансмиссивных инфекций и инвазий, в том числе и филяриатозов. Отсутствие мероприятий по их профилактике, рост численности бродячих животных обуславливает риск увеличения числа инвазированных людей и домашних животных. В связи с вышеизложенным, актуальным представляется дальнейшее изучение эколого-биологических особенностей паразита и вызываемого им заболевания. Это позволит усовершенствовать диагностику, обеспечить своевременность лечения и разработать действенные меры профилактики.

Цель работы. Основной целью наших исследований было сравнительное изучение лабораторной диагностики дирофиляриоза и распространения этого заболевания среди населения и животных на юге России.

Задачи исследования:

1. Определить сравнительную чувствительность различных лабораторных методов диагностики дирофиляриоза.

2. Получить соматический антиген дирофилярий и исследовать его чувствительность и специфичность для выявления дирофиляриоза у собак и людей.

3. Определить степень пораженное™ дирофиляриозом собак на разных территориях юга России.

4. Определить экстенсивность зараженности микрофиляриями кровососущих комаров на различных территориях.

5. Провести ретроспективный анализ случаев обнаружения взрослых паразитов дирофилярий у человека.

Научная новизна исследований

Впервые разработан способ получения соматического антигена из неполовозрелых особей дирофилярий, который использован при разработке отечественной тест-системы для серодиагностики дирофиляриоза у животных и человека.

Установлены преимущества предложенного иммунологического метода лабораторной диагностики (ИФА) с использованием соматического антигена при обследовании больных животных над традиционными методами лабораторной диагностики дирофиляриоза (прямая микроскопия, метод обогащенного мазка крови). Это подтверждается высокой специфичностью (с сыворотками крови собак - 79,8%, с сыворотками крови людей - 88,5%) и чувствительностью метода (с сыворотками крови собак -100%, с сыворотками крови людей - 80,5%), позволяющего выявить не только манифестные, но и атипичные, в том числе скрытые, формы инвазии у животных и человека.

Доказана эндемичность дирофиляриоза для юга России и дана оценка уровня заболеваемости дирофиляриозом животных и зараженности комаров

на селитебных территориях и проведен ретроспективный анализ случаев дирофиляриоза у человека.

Впервые установлена зависимость экстенсивности инвазии животных от погодно-климатических условий сезона передачи.

Впервые на территории Ростовской области выявлены особенности динамики видового состава паразитов, которые сводятся к постепенному увеличению удельною веса О. ¡ттШз и микст - инвазии у собак.

Практическая значимость

В результате проведенных исследований разработан и апробирован способ получения соматического очищенного антигена Б. герепэ, на который получено решение о выдаче Патента РФ №2008100647/15(000709) от 25.И.08. Запатентованный способ позволил обосновать целесообразность разработки тест - системы для иммунологической лабораторной диагностики дирофиляриоза у животных и людей. Это открывает перспективы своевременного проведения лечения дирофиляриоза как у животных, так и у человека, а также осуществления дифференциальной диагностики и предотвращения риска распространения инвазии на эндемичных по дирофиляриозу территориях.

Антиген используется для серодиагностики дирофиляриоза в ветеринарных клиниках: «Айболит» г. Майкопа республики Адыгея; ООО «Визар» г. Ростов н/Д; апробирован в клинике паразитарных болезней ФГУН Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора (ФГУН РНИИМП) (справки о внедрении имеются в диссертационном совете).

Апробация работы

Основные положения диссертации были доложены на: научно-практической конференции «Паразитарные заболевания в Республике Адыгея и меры по их профилактике» (г.Майкоп, 2007); научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2008); научно-практической конференции «Паразитарные

заболевания в Республике Адыгея и меры по их профилактике» (г.Майкоп, 2008); семинаре «Организация эпиданализа и профилактика паразитарных болезней» управления Роспотребнадзора (г.Ростов н/Д, 2008).

Личный вклад соискателя

Представленная диссертационная работа является результатом 7-летних научных исследований автора. Исследования по получению соматического антигена Dirofilaria repens, изучению специфичности и чувствительности ИФА с данным антигеном с сыворотками крови собак и людей, приготовлению и микроскопированию препаратов крови собак, биохимические и молекулярно-генетические исследования крови собак, отлов и изучение зараженности кровососущих комаров соискателем выполнены лично. По результатам этих исследований автором самостоятельно опубликована статья в материалах докладов IX Всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия в РФ», Москва (2007) и 4 статьи в соавторстве с научным руководителем в материалах Всероссийского общества гельминтологов «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» за 2006 и 2008 гг. и сборнике тезисов «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» С.-Пб (2006). По материалам исследований по изучению эпидемиологии и эпизоотологии дирофиляриоза среди населения, домашних собак и кровососущих комаров опубликованы 4 статьи в соавторстве с Ермаковой Л.А., Думбадзе О.С., Карташовым В. В., Артамоновой A.A., Кормиленко И.В. и Мороз Н.В., которые не возражают в использовании результатов совместных исследований диссертантом Бескровной Ю.Г. (справки имеются в диссертационном совете).

Работа выполнена под научным руководством к.б.н. С.А. Нагорного который оказывал научно-методическую помощь в проведении

исследований, анализе полученных результатов, обобщении данных исследований.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. Наиболее эффективными методами лабораторной диагностики дирофиляриоза являются: метод концентрации дирофилярий в 3% уксусной кислоте, ПЦР и ИФА (на основе разработанного нами способа получения очищенного соматического антигена из неполовозрелой самки Ц]гой1апа гсрспэ, чувствительность ИФА с данным антигеном с сыворотками крови собак составила 100%, а специфичность - 79,8%, с сыворотками крови людей - 80,5 и 88,5% соответственно).

2. Установлено, что территория юга России эндемична по дирофиляриозу, о чем свидетельствуют высокая степень пораженности собак этим паразитозом, значительная доля зараженных комаров и частые случаи инвазии у людей.

Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 9 печатных работ, 1 из них в рекомендованных ВАК изданиях.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 139 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов и библиографического указателя. Список использованной литературы включает 170 источников: 97 отечественных и 73 зарубежных. Текст иллюстрирован 15 таблицами и 27 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2. Материалы, методы и объем исследований

Исследовательская работа проводилась в течение 2000-2007 гг. на территориях Краснодарского края, Ростовской области и Республики Адыгея. Объектами исследования являлись личинки Игго/Напа герею и й1го/11аг1а /ттШз, взрослые паразиты, соматический антиген из неполовозрелой самки Б. герепБ, кровь собак больных дирофиляриозом Б. герепБ, Э. ¡ттШБ,

животных, свободных от данной инвазии, сыворотки крови людей с подтвержденным диагнозом дирофиляриоз и людей вне инвазии (банк сывороток крови Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии), кровососущие комары. Объем исследованного материала представлен в таблице 1.

Таблица 1

Объем проведенных исследований.

№ п/п Материал и методы исследования Число исследований

1. Индикация микрофилярий в организме комаров. 1368

2. Диагностические микроскопические исследования препаратов крови собак: ■ в капле нативной крови и в сыворотке крови; ■ методом концентрации в 3% уксусной кислоте. 63 1632

3. Общеклинические исследования крови собак (OAK). 137

4. Биохимические исследования сывороток крови собак: ■ биохимические исследования сывороток крови собак; ■ электрофоретические исследования сывороток крови собак. 137 88

5. Иммунологические исследование сывороток крови собак: • ИФА с целью выявления антител к D.repens в сыворотках крови собак; • ELISA (Canine Heartworm Antigen Test Kit) с целью выявления антигена к D. immitis в сыворотках крови собак. 170 170

6. ПЦР крови собак. 44

7. Анкеты лиц с диагнозом дирофиляриоз. 169

8. Иммунологические исследования сывороток крови людей методом ИФА: ■ всего; • больных дирофиляриозом; ■ людей вне инвазии. 150 41 109

Отлов комаров проводился методом учета «на себе» в вечернее время

суток и на «дневках» по общепринятой методике (Дербенева-Ухова В.П., 1974 г.).

С целью выявления антител к антигену БтоШапа герепБ серологические исследования проводили с сыворотками крови больных дирофиляриозом животных, интактных собак и больных другими паразитозами (токсокарозом), а также больных дирофиляриозом людей, и людей вне инвазии в иммуноферментном анализе (ИФА) с соматическим антигеном, полученным в соответствии с патентом. В качестве конъюгата использовали

глобулиновую фракцию кроличьей сыворотки к Ig G собаки или человека, меченную пероксидазой хрена (производства МЕДГАМАЛ, г. Москва), а в качестве твердой фазы - полистироловые планшеты (производства МЕДПОЛИМЕР, г. Санкт-Петербург). Кроме того, сыворотку крови собак больных дирофиляриозом и контрольных групп исследовали на наличие антигена D. immitis с помощью диагностической тест-системы ELISA (IDEXX laboratories, USA).

Биохимические показатели крови собак определяли с использованием тест-систем производства «Эколаб» (Россия) с установлением уровня аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (АЛТ), щелочной фосфатазы, креатинина, билирубина, мочевины, белкового спектра сыворотки крови. Белковые фракции сывороток крови собак определяли с помощью диск-электрофореза. Разделение компонентов сыворотки проводили в аппарате для вертикального электрофореза, в пластинах полиакриламидного геля (ПААГ). Применяли 7,5% гель, pH 8,9 (система геля №1 поМауреруГ., 1971).

При проведении ПЦР тотальную ДНК выделяли из образцов крови при помощи метода фенол-хлороформной экстракции (Maniatis Т. et al., 1982). Амплификацию проводили на РТС-220 (MJ Research) с использованием «горячего старта» согласно программе. ПЦР продукты визуализировали в 1%-ой агарозе с 2,5 мкг/мл этидиума бромида с помощью гель -документирующей системы на базе трансиллюминатора ЕСХ-26.М (Vilbcr Lourmat).

Результаты проведенных исследований обработаны статистически. В соответствии с характером исследуемых показателей применяли: однофакторный дисперсионный анализ, расчет критерия Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990). Полученные различия считали статистически значимыми при значениях р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3. Диагностика дирофиляриоза.

3.1 Клиническая лабораторная диагностика дирофиляриоза

Дирофиляриоз может быть отнесен к числу редких острых и хронических трансмиссивных паразитарных болезней животных и человека. Установление диагноза этого заболевания встречает определенные трудности, поэтому для его постановки приходится прибегать к использованию специфических и неспецифических методов лабораторного обследования.

В работе были использованы клинико-лабораторные исследования крови (общеклинические и биохимические показатели крови собак) и специфические (микроскопирование препаратов крови, полимеразная цепная реакция и иммуноферментный анализ).

Дирофиляриоз у собак влияет на различные функции организма. При анализе общеклинических и биохимических показателей крови у больных дирофиляриозом собак отмечено уменьшение содержания гемоглобина, эритроцитов, количества лимфоцитов, увеличение СОЭ, а также числа сегментоядерных нейтрофилов (у 42,7±4,6%, 89,0±3,7%, 70,3±4,1%, 67,5±4,4%, 68,4±4,4% инвазированных соответственно). Полученные результаты биохимических исследований крови животных показали, что у большинства инвазированных наблюдалось повышение уровня АЛТ и ACT (у 65,3±4,4% и 88,5±2,9% больных животных соответственно), увеличение уровня мочевины и креатинина (у 68,6±4,2% и 73,6±5,2% инвазированных), а также отсутствие зоны трансферрина. При сравнении изменений этих показателей у собак, инвазированных разными видами дирофилярий отмечено, что они более выражены при инвазии D. immitis и одновременном паразитировании двумя видами гельминта. В связи с вышесказанным, несмотря на низкое диагностическое значение, в ветеринарной практике для установления тяжести протекаемого патологического процесса,

целесообразно проводить общсклинические и биохимические исследования крови животных при подозрении на дирофиляриоз.

3.2 Специфические методы диагностики дирофиляриоза Учитывая хроническое течение болезни и стертые клинические признаки у большинства собак, пораженных данным гельминтозом, решающее диагностическое значение имеют специфические лабораторные методы исследования.

3.2.1 Микроскопические методы исследования Нами отмечено, что для определения интенсивности инвазии, а также для идентификации личинок наиболее быстрым и менее трудоемким является метод микроскопии с предварительной концентрацией в 3% уксусной кислоте. Он позволяет по морфологическим признакам, строению головного и хвостового концов тела отличить микрофилярии разных видов и установить диагноз. При низкой микрофиляриемии, или скрытой инвазии, этот метод оказывается недостаточно эффективен. В данном случае более применим метод ПЦР с видоспецифичсскими парами праймеров для Э. герепв и Б. ¡ттШз.

3.2.2 Диагностика дирофиляриоза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР)

С помощью ПЦР было обработано 40 образцов крови собак инвазированных дирофиляриями и 4 собаки свободные от данной инвазии. Данные ПЦР показали, что из 40 обследованных образцов крови собак в 16 (40,0%) обнаружены последовательности ДНК, характерные для Б. герепэ, в 11 (27,5%) - Б. ¡гшти^, а в 13 (32,5%) содержались последовательности ДНК обоих видов паразита (О. герепБ и Б. цптШз). Т.о., данный метод позволяет проводить дифференциальную диагностику дирофиляриоза у животных с микст - инвазией и с большей достоверностью установить диагноз.

Однако отсутствие микрофилярий в крови не исключает наличие инвазии. Скрытые инвазии могут быть связаны с препатентной стадией

паразита, с наличием "однополых" гельминтов, с применением микрофилярицидной терапии. В случае дирофиляриоза человека ПЦР диагностика применима только к материалу биопсии, поэтому она возможна лишь при подкожных локализациях паразита. Данные об атипичном нахождении дирофилярий у человека в легких и внутренних органах, делают затруднительным этот вид диагностики. Альтернативой молекулярным методам исследования может служить иммуноферментный анализ.

3.2.3 Иммунологический метод диагностики дирофиляриоза 3.2.3.1 Принципы получения соматического очищенного антигена дирофилярий

В связи с отсутствием отечественных тест-систем метод иммунологической диагностики дирофиляриоза в России практически не используется. Нами проведена серия экспериментальных исследований по получению очищенного соматического антигена из неполовозрелой самки Э. герепБ на способ приготовления которого получено решение о выдаче патента РФ №2008100647/15(000709) от 25.11.08. Оптимизация условий гомогенизации паразита (использование механической и ультразвуковой гомогенизации из замороженного состояния) позволяет добиться полного разрушения тканей и клеток паразита; экстракция белка в 0,25 М водном растворе сахарозы увеличивает его концентрацию в антигене; дополнительная очистка антигена дирофилярий от липидов с помощью ацетона повышает его специфичность.

3.2.3.2 Определение диагностической эффективности ИФА с очищенным соматическим антигеном О. герепв у животных

Диагностическая эффективность очищенного соматического антигена Б. герепв была исследована методом ИФА с сыворотками крови домашних собак и людей.

Все сыворотки домашних собак предварительно были исследованы на наличие микрофилярий методом концентрации в 3% уксусной кислоте.

Кроме того, для определения антигенемии и паразитемии, исключения у животных скрытой инвазии D. immitis, и перекрестных реакций между двумя видами паразитов, соответствующие сыворотки были обработаны в диагностической тест-системе ELISA (Canine Hcartworm Antigen Test Kit), которая позволяет выявить антигены D. immitis. Результаты иммунологического исследования показали, в группе животных без микрофиляриемии у 77,3±9,1% были обнаружены циркулирующие антигены D. immitis. Эти данные свидетельствуют о наличии скрытой инвазии у большого количества собак без признаков болезни (табл. 2).

Табл. 2

Результаты иммунологического исследования собак в ИФА и ELISA

№ п п Кол-во Результаты ЦФА (выявление антител к антигену D. repens) Результаты ELISA (выявление циркулирующих антигенов D.immitis)

Группы обследованных обследованных положительный отрицательный положительный отрицательный

абс %±ш абс %±т абс %±ш абс %±ш

1 Собаки больные дирофиляриозом (с микрофиляриемией): - П.герегв -О.гереши 91 23 68 91 23 68 100,0 100,0 100,0 - - 68 68 74,7±4,6 100,0 23 23 25,3±4,6 100,0

Штт№

2 Собаки свободные от микрофилярий О.гсрегв: - без клинических 79 16 20,3±4,6 63 79,8±4,6 40 50,6±5,б 39 49,4±5,6

признаков 22 16 72,7±9,7 6 27,3±9,7 17 77,3±9,1 5 22,7±9,1

дирофиляриоза. - с микрофиляриями О.патШз 23 - - 23 100,0 23 100,0 - -

- щенки в возрасте 27 - - 27 100,0 - - 27 100,0

до 5 мес. - больные 7 _ _ 7 100,0 _ _ 7 100,0

токсокарозом.

Результаты иммунологического исследования по выявлению антител к

Б. герепя у собак показали, что среди животных, в крови которых микрофилярии отсутствовали - 72,7±9,7% имели высокий уровень антител. Эти данные позволяют предположить, что животные могли перенести заболевание, по-видимому, в стертой форме. В то же время, наличие антител

к Б. герепэ у собак без признаков болезни дают возможность определить специфичность данной тест системы, которая составила 79,8±4,6%.

Антитела к Б. герепБ и антигены И. ¡ттШз одновременно были выявлены у 52,7±4,5% сывороток собак. Эти данные подтверждают факт инвазии большого количества животных дирофиляриями двух видов. В сыворотках крови 19,3±3,6% собак были обнаружены только циркулирующие антигены Б. ¡тткЬ, а 18,7±3,5% - только антитела к антигену Б. гсрспэ. Это исключает присутствие у последних скрытой инвазии дирофиляриями Б. ¡ттШз и доказывает высокую специфичность ИФА с антигеном Б. герепэ, а также отсутствие внутривидовых перекрестных реакций. Результаты проведенных исследований показали, что чувствительность ИФА с соматическим очищенным от липидов антигеном О. герепя с сыворотками крови больных собак составила 100%.

3.2.3.3 Определение диагностической эффективности ИФА с очищенным соматическим антигеном О. гереш у людей Результаты иммунологического исследования сывороток крови людей показали, что в группе больных дирофиляриозом у 80,5±6,3% были обнаружены антитела ^ О к антигену Э. герепБ, у людей вне инвазии 11,5±4,1%. (табл. 3).

Таблица 3.

Диагностическая эффективность ИФА с соматическим очищенным

антигеном ОноШапа герепэ.

№ п.п. Контингент обследованных Кол-во обследованных Результаты ИФА

положительный отрицательный

абс. %±ш абс. %±т

1. Люди с подтвержденным диагнозом дирофиляриоз 41 33 80,5±6,3 8 19,6±6,3

2. Люди вне инвазии 61 7 11,5±4,1 54 88,5±4,1

Отрицательный результат в группе с дирофиляриозом чаще был отмечен у больных, в клинической картине которых отсутствовала миграция

гельминта или с момента появления первых признаков заболевания прошло 1-3 дня, что, по-видимому, можно объяснить низким иммуногенным раздражением или ранним сроком болезни и недостаточным уровнем в в крови. Полученные данные показывают, что ИФА с соматическим очищенным антигеном с сыворотками крови людей достигает чувствительности 80,5±5,9%, а специфичности - 88,5±5,9%.

Дополнительные исследования специфичности полученного нами антигена О. герепэ проводили методом ИФА с помощью реакции ингибирования антител. Наблюдалась ярко выраженная зависимость эффекта ингибирования от внесенной дозы антигена (чем больше концентрация антигена, тем ниже оптическая плотность данной сыворотки).

Достаточно высокие показатели чувствительности и специфичности ИФА с соматическим очищенным антигеном Б. герепз дают основание считать предлагаемый метод эффективным для диагностики дирофиляриоза животных и человека.

Для изучения сероэпидемиологии дирофиляриоза на юге России было проведено иммунологическое обследование на наличие антител к Б. герепя домашних собак (случайная выборка) и здоровых жителей г. Майкопа (республика Адыгея). Данные сероэпидемиологического анализа здоровых лиц находились в зависимости с показателями заболеваемости дирофиляриозом животных на изучаемой территории. Так число серопозитивных лиц среди населения Республики Адыгея составило 12,5±4,7%. При иммунологическом обследовании собак 14,6±4,9% животных имели в крови высокий уровень антител. Полученные результаты свидетельствуют о достаточной эффективности иммунологических методов и их пригодности для диагностики дирофиляриоза. А ссроэпидемиологический метод можно рассматривать как пригодный для типизации очагов дирофиляриоза и установления их границ, а также оценки лечебно -профилактических и санитарно-ветеринарных мероприятий.

Таким образом, лабораторные методы специфической диагностики дирофиляриоза являются основными и взаимодополняющими при постановке диагноза. Однако каждый имеет свои ограничения. Классический метод дает неплохие результаты, но в случае низкой микрофиляриемии он недостаточно чувствителен. Молекулярные методы позволяют проводить дифференциальную диагностику дирофиляриоза у собак при микст -инвазиях, однако, при отсутствии микрофилярий в крови они так же неэффективны. В случае дирофиляриоза у человека требуется материал биопсии, которую при некоторых локализациях паразита выполнить невозможно. Серологические методы показывают высокую чувствительность и специфичность и могут быть основными при эпидемиологических исследованиях.

Использованные в работе методы специфической диагностики дирофиляриоза (микроскопические, ПЦР и ИФА), позволили нам изучить биологические особенности распространения дирофиляриоза на юге России и выявить различия в интенсивности циркуляции двух видов дирофилярий на изучаемых территориях. Результаты проведенных исследований показали, что территория юга России является эндемичной по дирофиляриозу.

4. Особенности распространения возбудителя дирофиляриоза на юге России 4.1 Пораженность собак Скрининговое исследование собак на некоторых территориях юга России показало высокую экстенсивность инвазии дирофиляриями. На территории Ростовской области дирофиляриоз был выявлен у 25,6±0,4% собак, на территории г. Майкопа (республика Адыгея) - у 23,9±6,4%, в г. Туапсе (Краснодарского края) - у 17,0±5,4%. Инвазированные собаки регистрировались нами каждый год с экстенсивностью инвазии по Ростовской области от 16,4% (2004 г.) до 31,5% (2006 г.). Приведенные данные свидетельствуют об относительно стабильном уровне экстенсивности

инвазии с тенденцией к увеличению (2005-2006 гг.) и о возможности формирования очага дирофиляриоза.

Многолетние наблюдения, проведенные на территории Ростовской области позволили установить циркуляцию у собак двух видов дирофилярий - О. герепБ и Б. ¡ттШз. Вид В. герепэ обнаружен у 45,4±2,9% собак, Б. ¡ттМв - у 29,8±2,3% животных и у 24,8±3,3% собак выявлена микст -инвазия. Было отмечено, что видовой состав дирофилярий у собак менялся в разные годы наблюдений. Так в 2000 г. на территории г. Ростова-на-Дону у инвазированных животных вид П. герепв преобладал над Б. ¡питие в соотношении 3:1, а начиная с 2001 г. эти показатели постепенно выравнивались. Кроме того, начиная с 2001 г., в 10,6 раз увеличилось число собак, пораженных одновременно двумя видами паразита. По нашему мнению, эти данные свидетельствует о видовой нестабильности очага и постепенном вытеснении из ареала обитания вида О.герепэ видом В. ¡ттШз. Это, может быть связано, прежде всего, с благоприятными для данного вида погодно-климатическими условиями.

Собаки в возрасте до года поражены в основном О.герепБ, а начиная с двух лет, в 3 раза возрастает число собак, инвазированных Б. ¡ттШз. Кроме того, начиная с 2-х лет, наблюдалось колебание экстенсивности инвазии собак, пораженных двумя видами паразита. Полученные данные позволяют предположить, что у собак в течение жизни происходит повторное заражение

и, возможно, из-за действия иммунного пресса хозяина на ГЗ.герепэ постепенно начинает преобладать вид О. ¡тгпШз. Об этом свидетельствует большое количество животных старше 2-х лет с микст - инвазией и увеличение экстенсивности инвазии дирофиляриями Б. ¡ттШэ у собак в возрасте старше 2-х лет от 20,0 до 60,0% соответственно.

Из всех собак, инвазированных дирофиляриями экстенсивность инвазии у самцов в ~2 раза выше, чем самок (69,9±1,4% и 37,0±1,9% соответственно).

Нами не установлено значительного влияния породы на восприимчивость собак к дирофиляриям, что подтверждает данные ИЛ. Архипова и Д.Р. Архиповой (2004). В большей степени были поражены дирофиляриозом собаки крупных и средних пород.

В результате анализа собственных исследований и литературных данных установлено, что наибольший процент инвазированных собак был зарегистрирован в Ростовской области (25,6±0,4%), животные поражены Б. ¡ттШз и Б. гереш; Республике Калмыкия (24,4%) - Б. герегкч, Республике Адыгея (23,9%) - поражены Б. ттШэ и Б. герепя, наименьший - в Астраханской области (2,9%).

4.1.1 Сезонность дирофиляриоза у собак Нами изучено влияние сезонных факторов на инвазированность собак дирофиляриями. Анализ данных показал, что экстенсивность инвазии увеличивалась в летний (27,5±2,4%) и зимний (21,2±2,8%) периоды, оставаясь достаточно высокой весной (19,5±1,8%) и осенью (18,6±1,3%). Отмечено колебание сезонности проявления дирофиляриоза у собак в зависимости от погодных условий. За период наблюдения в годы с сухим и жарким сезоном передачи (2004,2007 гг.) экстенсивность инвазии животных была ниже, чем во влажные и умеренно жаркие (2005, 2006 гг.). Высокие показатели экстенсивности инвазии животных наблюдались при температуре сезона передачи 29,4 - 30,5 °С. Увеличение количества микрофилярий в

крови инвазированных животных отмечалось в летний период, что, возможно, связано с периодом активности комаров (промежуточных хозяев).

4.2 Зараженность дирофиляриями кровососущих комаров

Передача и распространение этого гельминтоза осуществляется промежуточными хозяевами, которыми являются различные виды комаров. Зараженность кровососущих комаров микрофиляриями в г. Ростове-на-Дону и Ростовской области составила 9,7±0,9%. В г. Майкопе (республика Адыгея) зараженные комары обнаружены не были, возможно из-за того, что места отлова комаров не были связаны с очагами дирофиляриоза позвоночных хозяев. Среди особей, исследованных нами в очагах дирофиляриоза, наиболее часто личинки выявлялись у комаров р. Aedes (18,2±1,9%), несколько ниже зараженность комаров р. Culex (10,8±1,6%) и совсем низкая экстенсивность заражения у комаров p. Anopheles (1,3±0,6%). Различия в экстенсивности заражения комаров разных родов связаны с механизмами защиты в организме насекомых: глоточное устройство, время коагуляции крови поступившей с пищей (Simon F. et al., 2001).

Зараженность комаров в первую очередь связана с наличием очагов дирофиляриоза у позвоночных хозяев. Наибольшая зараженность комаров была установлена в зоне индивидуальной застройки (в среднем 14,3%). Низкая степень зараженности комаров выявлена в зоне многоэтажных жилых

домов и на участках, удаленных от жилых домов (в среднем 4,6% и 0% соответственно)

Принимая во внимание данные литературы и результаты собственных исследований установлено, что наибольший процент зараженных комаров был зарегистрирован в Ростовской области (9,7±0,9%) и Республике Калмыкия (9,4%), наименьший - в Астраханской области (5,9%).

4.3 Раодшстранение дпрофиляриоза среди людей

Нами был проведен ретроспективный анализ 169 случаев дирофиляриоза у пациентов ФГУН Ростов НИИМП за период с 2000 по 2007 гг. Возраст наблюдавшихся больных варьировал от 8 до 79 лет. Максимальное число инвазированных было представлено в возрастной группе 30-39 лет, женщин - 72,8±3,5%, мужчин - 27,4±6,7%. Среди обратившихся за лечением преобладали городские жители (91,1±2,3%). Активная миграция паразита отмечена у 35,0±3,8% больных. В 57,4±3,8% случаев локализация паразита была в области головы, в 11,2±2,4% случаев в области туловища, в 24,9±3,3% - в области конечностей и в 4,1±1,5% случаев гельминт был обнаружен в наружных половых органах. Кроме того, были выявлены редкие случаи локализации паразита: в легком, в стекловидном теле, в куполе слепой кишки. Среди удаленных хирургическим путем или вышедших спонтанно гельминтов 80,5±3,2% - неполовозрелые самки; половозрелые - 14,0±2,7%; неполовозрелые самцы - 5,3±1,5%. Все особи по морфологическим признакам были идентифицированы как Б. герепэ. Длина извлеченных гельминтов колебалась от 80 до 200 мм.

Нами отмечено повышение обращаемости людей инвазированных дирофиляриозом весной - 35,3±3,6%. Осенью количество инвазированных составило 24,3±3,3%, зимой и летом - по 20,2±3,1%. На основании выявленной сезонности обращений по поводу активизации паразита, предполагаемых сроков инвазии, связанных с жизненным циклом комаров можно сделать ориентировочные выводы об инкубационном периоде

дирофиляриоза у людей в Ростовской области, который составляет 6-8 месяцев. Риск заражения человека приходится на момент максимальной активности комаров - конец весны и начало осени, когда погодные условия сезона передачи наиболее благоприятны как для переносчика, так и для развития инвазионной личинки в его организме.

На основании анализа собственных и литературных данных разработаны медико-географические карты-схемы распространения дирофиляриоза на юге России. Сделан вывод о том, что территория юга России эндемична по дирофиляриозу. Установлено, что поражены дирофиляриозом животные и люди. Присутствуют условия для передачи инвазии: наличие зараженных комаров и погодные условия, способствующие осуществлению эпизоотологического процесса. С помощью различных методов дифференциальной диагностики установлена пораженность собак видами ВлттШз и Б.гереш на территориях юга России (Ростовская область, г.Туапсе и Республика Адыгея) (рис. 1).

24 I

АСТРАХАНСКАЯ ¿»ВЛАСТЬ '

¡4^4% Е:

СТАВРОПОЛЬСКИЙ КГАЙ

[Ставрополь

уапсе

сркесс]

Мага» Грозный

Нальчик Владикавказ

Кизляр

I |Р- «Р™

Щиикет ннвяия В.УвшШ« к О .гер«и

Рис.1 Схема территориального распространения дирофилярий разных видов на юге России

Кроме того, на изучаемых территориях достаточно высока экстенсивность инвазии животных в организме которых присутствуют дирофилярии двух видов (от 11,1% - г.Туапсе, до 24,8% - Ростовская область). Несоответствие полученных нами результатов литературным данным, свидетельствующим о преимущественной инвазии собак на

территориях юга России только одним видом возбудителя (Волгоградская область - 91,7%, в Республике Калмыкия - 100% животных поражены D.repens, в Краснодарском крае - вид D.immitis), объясняется тем, что дифферециальную диагностику исследователи проводили опираясь на морфологические признаки вида паразита. Исходя из выше сказанного, можно сделать вывод о том, что на различных территориях юга России циркулируют два вида дирофилярий - вид D.immitis и вид D.repens.

ВЫВОДЫ

1. Показана высокая диагностическая эффективность метода световой микроскопии личинок дирофилярий, сконцентрированных 3% уксусной кислотой, не уступающая по специфичности и чувствительности молекулярному методу (ПЦР).

2. Эффективным методом диагностики скрытой инвазии у собак является ELISA по выявлению циркулирующих растворимых антигенов D. immitis, позволивший выявить паразитемию у животных, в крови которых микрофилярии не были обнаружены. Установлено, что у собак с дирофиляриозом, вызванным D. repens, ELISA дал отрицательный результат, что служит подтверждением антигенной неоднородности D. immitis и D. repens.

3. Разработан способ получения очищенного соматического антигена Dirofilaria repens и показана его высокая диагностическая эффективность в ИФА при серологической диагностике дирофиляриоза у людей и животных и при проведении сероэпизоотологических и ссроэпидемиологических исследований в эндемичных очагах (чувствительность ИФА с сыворотками крови собак составила 100%, специфичность - 79,8%, с сыворотками крови людей - 80,5 и 88,5% соответственно).

биохимических показателей (уменьшение концентрации трансферрииа, увеличение показателей ACT, мочевины и креатишша).

5. Установлены сезонные различия дирофиляриозов видов D. immitis и D. repens, и показано, что средние температуры сезона передачи оказывают влияние не только на интенсивность инвазии у собак, связанной с численностью и активностью переносчиков, но и на различие сроков и возможности развития в их организме личинок дирофилярий этих видов.

6. За период наблюдения (2000-2007 гг.) изменилась этиологическая структура очага дирофиляриоза в Ростовской области - постепенное увеличение удельного веса D. immitis и микст — инвазии у собак, что связано, вероятно, с изменением погодно-климатических условий (температура и влажность сезонов заражения).

7. Дана комплексная характеристика эндемичных очагов дирофиляриоза на территории юга России. Возбудитель представлен двумя видами - D. immitis и D. repens, основными хозяевами являются собаки, переносчиками -комары 3-х родов - р. Aedes, Culex и Anopheles.

8. Разработаны медико-географические схемы территориального распространения дирофиляриоза на юге России, которые могут быть использованы при планировании профилактических мероприятий.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Бескровная Ю.Г. Дирофиляриоз у людей в Ростовской области / С.А. Нагорный, В.В. Карташов, A.A. Артамонова, Ю.Г. Бескровная //Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции - М.:ВИГИС, 2005 - С.244-246.

2.Бескровная Ю.Г. Зараженность комаров г.Ростова-на-Дону микрофиляриями Dirofilaria spp. / Ю.Г. Бескровная, С.А. Нагорный //Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции - М.:ВИГИС, 2006.- вып.7- С.66-68.

3.Бескровная Ю.Г. Биохимические аспекты дирофиляриоза / Ю.Г. Бескровная, С.А. Нагорный // Сб. тезисов «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» - С.-Пб, 2006 - С. 49.

4.Бескровная Ю.Г. Особенности эпизоотологии дирофиляриоза в г. Ростове-на-Дону / С.А. Нагорный, Ю.Г. Бескровная, J1.A. Ермакова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции - М.:ВИГИС, 2007.- вып.8. - С.239 - 241.

5.Нагорный С.А. Дирофиляриоз в Ростовской области / С.А. Нагорный, JI.A. Ермакова, О.С. Думбадзе, Ю.Г. Бескровная и др. // Мед.паразитол. - 2007. - №2. - С. 42-45

6.Бескровная Ю.Г. Собаки как источник заражения людей дирофиляриозом / Ю.Г. Бескровная // Матер, докл. IX Всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия в РФ» - М., 2007- Т. 3. -С. 251-252.

7.Нагорный С.А. Сезонность распространения дирофиляриоза на территории Ростовской области / С.А. Нагорный, Ю.Г. Бескровная, И.В. Кормиленко. Н.В. Мороз // Матер, докл. IV Всероссийского съезда Паразитологического общества при РАН «Паразитология в XXI веке - проблемы, методы, решения» - С.-Пб., 2008. - Т. 2. - С. 204-208.

8.Бескровная Ю.Г. Идентификация микрофилярий Dirofilaria spp. с помощью методов ПЦР / Ю.Г. Бескровная, С.А. Нагорный // Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» - М., 2008. - С. 73 - 75.

9.Нагорный С.А. К вопросу патогенеза при дирофиляриозе собак / С.А. Нагорный, Ю.Г. Бескровная // Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» - М., 2008. - С. 316-319.

Подписано в печать:

19.03.2009

Заказ № 1754 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 wvvw.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бескровная, Юлия Григорьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Диагностика, эпизоотология и эпидемиология дирофиляриоза (состояние проблемы).

1.1 Диагностика дирофиляриоза.

1.2 Эпизоотология и эпидемиология дирофиляриоза.

ГЛАВА II. Материалы, методы и объем исследований.

ГЛАВА III. Диагностика дирофиляриоза.

3.1 Клиническая лабораторная диагностика дирофиляриоза.

3.1.1 Общеклинические показатели крови собак, пораженных дирофиляриозом.

3.1.2 Биохимические показатели крови собак, пораженных дирофиляриозом.

3.2 Специфические методы диагностики.;

3.2.1 Микроскопические методы исследования.

3.2.2 Диагностика дирофиляриоза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3.2.3 Иммунологический метод диагностики дирофиляриоза.

3.2.3.1 Принципы получения соматического очищенного антигена дирофилярий.

3.2.3.2 Определение диагностической эффективности ИФА с очищенным соматическим антигеном Б. герепэ у животных.

3.2.3.3 Определение диагностической эффективности ИФА с очищенным соматическим антигеном D. герепэ у людей.

ГЛАВА IV. Особенности распространения возбудителя дирофиляриоза на юге России.

4.1 Пораженность собак.

4.1.1 Сезонность дирофиляриоза у собак.

4.2 Зараженность дирофиляриями кровососущих комаров.

4.3 Распространение дирофиляриоза среди людей.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Дирофиляриоз на юге России"

Актуальность проблемы. Дирофиляриоз относится к группе заболеваний, вызываемых нематодами сем. Filariidae, характеризующихся трансмиссивным путем передачи, медленным развитием и длительным течением. Около 200 видов филярий паразитируют у животных и человека, из них 7 паразитируют только у человека (Wuchereria bancrofti, Brugia malai, Onhocerca volvulus, Loa Loa, Mansonella streptocerca, M. perstans и M. ozzardi). Некоторые виды филярий рода Dirofilaria, паразитирующие у животных, могут инвазировать и человека (Бронштейн A.M. и др., 2003).

Дирофиляриоз - единственный в умеренном климате гельминтоз с трансмиссивным путем передачи (через комаров). На сегодняшний день считается, что дирофиляриоз человека редкая глистная инвазия. Однако в настоящее время наблюдается тенденция роста данной патологии. За последние годы по данным разных авторов, в различных регионах мира отмечен рост инфекций и инвазий, передающихся человеку через кровососущих комаров трансмиссивным путем, в том числе и дирофиляриоза. До середины прошлого века были диагностированы лишь несколько десятков случаев дирофиляриоза, а за последние 50 лет их число резко возросло (Raccurt С.Р., 1999). С 1995 по 2000 гг. выявлено 372 новых случая в 25 странах мира, а к 2003 году количество выявленных случаев инвазирования человека D. repens достигло 782 (Pampiglione S. et al., 2001). На сегодняшний день дирофиляриоз выявляется в Италии, Испании, Франции, всего на территории 37 государств (Simon F. et al., 2001; Pampiglione S. et al., 2001).

Наблюдения последних лет свидетельствуют о нарастании числа случаев дирофиляриоза человека в РФ (Авдюхина Т.И. и др., 2003; Бронштейн A.M. и др., 2003; Гуськов В.В. и др., 2001). На сегодняшний день случаи дирофиляриоза выявляются не только у жителей эндемичных территорий юга страны (Волгоградская, Астраханская, Ростовская области,

Краснодарский край, Республика Калмыкия), но и на севере России. В настоящее время северная граница ареала распространения этого заболевания достигла 53-57° с.ш. (Московская, Тульская области, Алтайский край, г. Новосибирск), а увеличение числа случаев заболеваний среди людей некоторые авторы склонны обосновывать снижением иммунного статуса населения (Авдюхина Т.И. и др., 1997; Яковлева Е.Г. и др., 1999; Исаев В.А. и др., 2004).

В 1999-2003 гг. на территории России выявлено 150 случаев инвазии у человека. Это не отражает истинной ситуации, так как дирофиляриоз не входит в число паразитозов, подлежащих официальной регистрации.

Тем не менее, в виду важности проблемы данный паразитоз как редко встречающийся, требующий повышенного внимания с 2003 г. впервые включен в официальные документы Минздрава РФ: СанПиН 3.2.1333-03 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации», МУ 3.2.1756-03 «Эпиднадзор за паразитарными болезнями» и МУ 3.2.1880-04 «Профилактика дирофиляриоза».

Юг России - благоприятная зона для распространения трансмиссивных инфекций и инвазий, в том числе и филяриатозов. Отсутствие мероприятий по их профилактике, рост численности бродячих животных обуславливает риск увеличения числа инвазированных людей и домашних животных. В связи с вышеизложенным, актуальным представляется изучение эколого-биологических особенностей паразита и распространенности вызываемого им заболевания. Это позволит усовершенствовать диагностику, обеспечить своевременность лечения и разработать действенные меры профилактики.

Цель работы: сравнительное изучение лабораторной диагностики дирофиляриоза и распространения этого заболевания среди населения и животных на юге России.

Задачи исследования:

Определить сравнительную чувствительность различных лабораторных методов диагностики дирофиляриоза.

1. Получить соматический антиген дирофилярий и исследовать его чувствительность и специфичность для выявления дирофиляриоза у собак и людей.

2. Определить степень пораженности дирофиляриозом собак на разных территориях юга России.

3. Определить экстенсивность зараженности микрофиляриями кровососущих комаров на различных территориях.

4. Провести ретроспективный анализ случаев обнаружения взрослых паразитов дирофилярий у человека.

Научная новизна исследований

Установлены преимущества предложенного иммунологического метода лабораторной диагностики (ИФА) с использованием соматического антигена при обследовании больных животных над традиционными методами лабораторной диагностики дирофиляриоза (прямая микроскопия, метод обогащенного мазка крови). Это подтверждается высокой специфичностью (с сыворотками крови собак — 79,8%, с сыворотками крови людей - 88,5%) и чувствительностью метода (с сыворотками крови собак — 100%, с сыворотками крови людей - 80,5%), позволяющего выявить не только манифестные, но и атипичные, в том числе скрытые, формы инвазии у животных и человека.

Доказана эндемичность дирофиляриоза для юга России и дана оценка уровня заболеваемости дирофиляриозом животных и зараженности комаров на селитебных территориях и проведен ретроспективный анализ случаев дирофиляриоза у человека.

Впервые на территории Ростовской области выявлены особенности динамики видового состава паразитов, которые сводятся к постепенному увеличению удельного веса D. immitis и микст — инвазии у собак.

Практическая значимость

В результате проведенных исследований разработан и апробирован способ получения соматического очищенного антигена D. repens, на который получено решение о выдаче Патента РФ №2008100647/15(000709) от 25.11.08. Запатентованный способ позволил обосновать целесообразность разработки тест - системы для иммунологической лабораторной диагностики дирофиляриоза у животных и людей. Это открывает перспективы своевременного проведения лечения дирофиляриоза как у животных, так и у человека, а также осуществления дифференциальной диагностики и предотвращения риска распространения инвазии на эндемичных по дирофиляриозу территориях.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. Наиболее эффективными методами лабораторной диагностики дирофиляриоза являются: метод концентрации дирофилярий в 3% уксусной кислоте, ПЦР и ИФА (на основе разработанного нами способа получения очищенного соматического антигена из неполовозрелой самки Б^оШапа герепБ, чувствительность ИФА с данным антигеном с сыворотками крови собак составила 100%, а специфичность — 79,8%, с сыворотками крови людей - 80,5 и 88,5% соответственно).

2. Установлено, что территория юга России эндемична по дирофиляриозу. Об этом свидетельствуют высокая степень пораженности собак этим паразитозом, значительная доля зараженных комаров и частые случаи инвазии у людей.

Апробация работы

Основные положения диссертации были доложены на:

- научно-практической конференции «Паразитарные заболевания в Республике Адыгея и меры по их профилактике» (г.Майкоп, 2007)

- научно-практической конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г.Москва, 2008)

- научно-практической конференции «Паразитарные заболевания в Республике Адыгея и меры по их профилактике» (г.Майкоп, 2008)

- семинаре «Организация эпиданализа и профилактика паразитарных болезней» (г.Ростов н/Д, 2008)

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Бескровная, Юлия Григорьевна

ВЫВОДЫ

3. Разработан способ получения очищенного соматического антигена Dirofilaria repens и показана его высокая диагностическая эффективность в ИФА при серологической диагностике дирофиляриоза у людей и животных и при проведении сероэпизоотологических и сероэпидемиологических исследований в эндемичных очагах (чувствительность ИФА с сыворотками крови собак составила 100%, специфичность - 79,8%, с сыворотками крови людей - 80,5 и 88,5% соответственно).

4. Дирофиляриоз у собак вызывает изменения общеклинических (понижение уровня гемоглобина и эритроцитов, повышение СОЭ и количества сегментоядерных нейтрофилов, уменьшение числа лимфоцитов) и биохимических показателей (уменьшение концентрации трансферрина, увеличение показателей ACT, мочевины и креатинина).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе были использованы клинико-лабораторные исследования крови собак (общеклинические и биохимические) и специфические (микроскопирование препаратов крови, полимеразная цепная реакция и иммуноферментный анализ).

В ветеринарной практике, несмотря на низкое диагностическое значение, для установления тяжести протекаемого патологического процесса, целесообразно проводить общеклинические и биохимические исследования крови животных при подозрении на дирофиляриоз.

Дирофиляриоз у собак влияет на различные функции организма. Микрофилярии, постоянно мигрируя, вызывают повреждения различных органов и тканей, а также могут привести к тромбозу или эмболии сосудов. Половозрелые гельминты Б. ттШв локализуются преимущественно в правой части сердца. Механическое повреждение внутренней оболочки сердца приводит к эндокардитам и нарушениям работы клапанного аппарата. Гельминты также являются препятствием на пути кровотока в легочные артерии, что приводит к недостаточному насыщению организма кислородом и выражается в виде периферического цианоза. При изучении общеклинических и биохимических показателей крови у больных дирофиляриозом собак отмечено уменьшение содержания гемоглобина, эритроцитов, количества лимфоцитов, увеличение СОЭ, а также сегментоядерных нейтрофилов (у 42,7±4,6%, 89,0±3,7%, 70,3±4,1%, 67,5±4,4%, 68,4±4,4% инвазированных соответственно). Полученные результаты биохимических исследований крови по влиянию дирофилярий на организм животных показали, что у большинства инвазированных наблюдалось повышение уровня AJIT и ACT (у 65,3±4,4% и 88,5±2,9% больных животных соответственно), увеличение уровня мочевины и креатинина (у 68,6±4,2% и 73,6±5,2% инвазированных), а также отсутствие зоны трансферрина. При сравнении изменений этих показателей у собак, инвазированных разными видами дирофилярий отмечено, что они более выражены при инвазии D. immitis и одновременном паразитировании двумя видами гельминта.

Учитывая хроническое течение болезни и стертые клинические признаки у большинства собак, пораженных данным гельминтозом, решающее диагностическое значение имеют специфические лабораторные методы исследования.

Нами отмечено, что для определения интенсивности инвазии, а также для идентификации личинок наиболее быстрым и менее трудоемким является метод микроскопии с предварительной концентрацией в 3% уксусной кислоте. Он позволяет по морфологическим признакам, строению головного и хвостового концов тела отличить микрофилярий разных видов и установить диагноз. При низкой микрофиляриемии, или скрытой инвазии, этот метод оказывается недостаточно эффективен. В данном случае более применим метод ПЦР с видоспецифическими парами праймеров для D. repens и D. immitis, позволяющий проводить дифференциальную диагностику дирофиляриоза у животных и с большей достоверностью установить диагноз.

Однако отсутствие микрофилярий в крови не исключает наличие инвазии. Скрытые инвазии могут быть связаны с препатентной стадией паразита, с наличием "однополых" гельминтов, с применением микрофилярицидной терапии. В случае дирофиляриоза человека ПЦР диагностика применима только к материалу биопсии, поэтому она возможна лишь при подкожных локализациях паразита. Данные об атипичном нахождении дирофилярий у человека в легких и внутренних органах, делают затруднительным этот вид диагностики. Альтернативой молекулярным методам исследования может служить иммуноферментный анализ.

В связи с отсутствием отечественных тест-систем метод иммунологической диагностики дирофиляриоза в России практически не используется. Нами проведена серия экспериментальных исследований по получению очищенного соматического антигена из неполовозрелой самки D. repens на способ приготовления которого получено решение о выдаче патента РФ №2008100647/15(000709) от 25.11.08. Оптимизация условий гомогенизации паразита (использование механической и ультразвуковой гомогенизации из замороженного состояния) позволяет добиться полного разрушения тканей и клеток паразита; экстракция белка в 0,25 М водном растворе сахарозы увеличивает его концентрацию в антигене; дополнительная очистка антигена дирофилярий от липидов с помощью ацетона повышает его специфичность.

Диагностическая эффективность очищенного соматического антигена D. repens была исследована в ИФА с сыворотками крови домашних собак и людей.

Все сыворотки домашних собак предварительно были исследованы на наличие микрофилярий методом концентрации в 3% уксусной кислоте. Кроме того, для определения антигенемии и паразитемии, исключения у животных скрытой инвазии D. immitis, и перекрестных реакций между двумя видами паразитов, соответствующие сыворотки были обработаны в диагностической тест-системе ELISA (Canine Heartworm Antigen Test Kit), которая позволяет выявить антиген D. immitis. Результаты иммунологического исследования показали, в группе животных без микрофиляриемии у 77,3±9,1% были обнаружены циркулирующие антигены

Р. ¡ттНлБ. Эти данные свидетельствуют о наличии скрытой инвазии у большого количества собак без признаков болезни.

Результаты иммунологического исследования по выявлению антител к Р. герепБ у собак показали, что среди животных, в крови которых микрофилярии отсутствовали - 72,7±9,7% имели высокий уровень антител.

Высокий титр антител к Б. герепБ среди животных без микрофиляриемии позволяет предположить, что они могли перенести заболевание, по-видимому, в стертой форме. В то же время, наличие антител к О. герепэ у собак без признаков болезни позволяют определить специфичность данной тест системы, которая составила 79,8±4,6%.

Антитела к Б. герепэ и антигены Б. ¡ттШБ одновременно были выявлены у 52,7±4,5% сывороток собак. Эти данные подтверждают факт инвазии большого количества животных дирофиляриями двух видов. В сыворотках крови 19,3±3,6% собак были обнаружены только циркулирующие антигены Р. ¡ттШэ, а 18,7±3,5% - только антитела к антигену О. герепэ. Это исключает присутствие у последних скрытой инвазии дирофиляриями О. ттШв и доказывает высокую специфичность ИФА с антигеном И. герепБ, а также отсутствие внутривидовых перекрестных реакций. Результаты проведенных исследований показали, что чувствительность ИФА с соматическим очищенным от липидов антигеном И. герепэ с сыворотками крови больных собак составила 100%.

Результаты иммунологического исследования сывороток крови людей показали, что в группе больных дирофиляриозом у 80,5±6,3% были обнаружены антитела б к антигену О. гереш, у больных другими паразитозами - 15,0±8,2%, «условно здоровых» - 9,8±4,7%. Отрицательный результат в группе больных дирофиляриозом чаще был отмечен у людей, в клинической картине которых отсутствовала миграция гельминта или с момента появления первых признаков заболевания прошло 1-3 дня, что, повидимому, можно объяснить низким иммуногенным раздражением и ранним сроком болезни с недостаточным уровнем ^вв крови.

Полученные данные показывают, что ИФА с соматическим очищенным антигеном с сыворотками крови людей достигает чувствительности 80,5±5,9%, а специфичности — 88,5±5,9%.

Дополнительные исследование специфичности полученного нами антигена Э. герепэ проводили в ИФА с помощью реакции ингибирования антител. Наблюдалась ярко выраженная зависимость эффекта ингибирования от внесенной дозы антигена (чем больше концентрация антигена, тем ниже оптическая плотность данной сыворотки).

Достаточно высокие показатели чувствительности и специфичности ИФА с соматическим очищенным антигеном Э. герепБ дают основание считать предлагаемый метод эффективным для диагностики дирофиляриоза животных и человека.

Для изучения сероэпидемиологии дирофиляриоза на юге России было проведено иммунологическое обследование на наличие антител к герепБ домашних собак (случайная выборка) и здоровых жителей г. Майкопа (республика Адыгея).

Данные сероэпидемиологического анализа здоровых лиц находились в зависимости с показателями заболеваемости дирофиляриозом животных на изучаемой территории. Так число серопозитивных лиц среди населения Республики Адыгея составило 12,5±4,7%. При иммунологическом обследовании собак 14,6±4,9% животных имели в крови высокий уровень антител. Полученные результаты свидетельствуют о достаточной эффективности иммунологических методов и их пригодности для диагностики дирофиляриоза. А сероэпидемиологический метод можно рассматривать как пригодный для типизации очагов дирофиляриоза и установления их границ, а также оценки лечебно - профилактических и санитарно-ветеринарных мероприятий.

Таким образом, лабораторные методы специфической диагностики дирофиляриоза являются основными и взаимодополняющими при постановке диагноза. Однако каждый имеет свои ограничения. Классический метод дает неплохие результаты, но в случае низкой микрофиляриемии он недостаточно чувствителен. Молекулярные методы позволяют внести вклад в объяснение некоторых диагностических аспектов этого заболевания, но, в случае дирофиляриоза у человека, ограниченность использования связана с выбором мест для биопсии, а в случае дирофиляриоза у собак - с отсутствием микрофилярий в крови.

Серологические методы показывают высокую чувствительность и специфичность и могут быть основными при эпидемиологических исследованиях.

Использованные в работе методы специфической диагностики дирофиляриоза (микроскопические, ПЦР и ИФА), позволили нам изучить распространение дирофиляриоза на юге России и выявить различия в интенсивности циркуляции двух видов дирофилярий на изучаемых территориях. Результаты проведенных исследований показали, что территория юга России является эндемичной по дирофиляриозу.

При анализе пораженности собак дирофиляриозом на некоторых территориях юга России установлена их высокая инвазированность данным возбудителем. На территории Ростовской области дирофиляриоз был выявлен у 25,6±0,4% собак, на территории г. Майкопа (республика Адыгея) -у 23,9±6,4%, г. Туапсе (Краснодарского края) - у 17,0±5,4%. Инвазированные собаки регистрировались нами каждый год с экстенсивностью инвазии по Ростовской области от 16,4% (2004 г.) до 31,5% (2006 г.). Полученные данные свидетельствуют о не снижающемся уровне экстенсивности инвазии с тенденцией к увеличению и о возможности формирования очага дирофиляриоза.

Многолетние наблюдения, проведенные на территории Ростовской области позволили установить циркуляцию у собак двух видов дирофилярий - D. repens и D. immitis. Вид D. repens обнаружен у 45,4±2,9% собак, D. immitis - у 29,8±2,3% животных и у 24,8±3,3% собак выявлена микст инвазия.

Дирофиляриоз регистрировался у собак всех возрастов, за исключением щенков до 5 месяцев, что связано с достаточно длительным периодом развития филярий в организме собак. В большей степени поражены собаки в возрасте старше 5 лет (от 43,1±6,6% до 46,7±7,5%). Это связано, возможно, с тем, что предполагаемая ежегодная реинвазия собак микрофиляриями приводит к увеличению интенсивности . инвазии половозрелыми дирофиляриями, и, соответственно, появлению в последующие годы в крови большего количества личинок. По данным F. Simon et al. (2001), тяжелое течение болезни, сопровождаемое острыми, фатальными синдромами, было диагностировано главным образом у молодых собак (от 2 до 5 лет), которые подверглись высокой степени инвазирования. Однако, на основе количества половозрелых гельминтов, найденных во взрослых собаках с хроническим течением болезни, можно заключить, что большинство личинок, приобретенных в течение сезона передачи, было разрушено под действием иммунного пресса хозяина. Если принять во внимание область паразитирования и продолжительность жизни взрослого паразита (5-7 лет), то норма накопления должна быть намного выше, чем показывают эмпирические данные. Исследования, проведенные G. Т. Otto (1970) подтвердили этот факт. Если животных не подвергать лечению, то взрослые и старые собаки, редко являются источником заражения.

Собаки в возрасте до года поражены в основном D.repens, а, начиная с двух лет, в 3 раза возрастает число собак, инвазированных D. immitis. Кроме того, начиная с 2-х лет, наблюдалось колебание экстенсивности инвазии собак, пораженных двумя видами паразита. Полученные данные позволяют предположить, что у собак в течение жизни происходит повторное заражение и, возможно, из-за действия иммунного пресса хозяина на В.герепэ постепенно начинает преобладать вид О. ¡ттШБ. Об этом свидетельствует большое количество животных старше 2-х лет с микст - инвазией и увеличение экстенсивности инвазии дирофиляриями Б. ¡ттШэ у собак в возрасте старше 2-х лет от 20,0 до 60,0% соответственно.

Из всех собак, инвазированных дирофиляриями, экстенсивность инвазии у самцов в ~2 раза выше, чем самок (63,9±1,4% и 37,0±1,9% соответственно).

Нами не установлено значительного влияния породы на восприимчивость собак к дирофиляриям, что подтверждает данные И.А. Архипова и Д.Р. Архиповой (2004). В большей степени были поражены дирофиляриозом собаки крупных и средних пород.

В результате анализа собственных исследований и литературных данных установлено: наибольший процент инвазированных собак был зарегистрирован в Ростовской области (25,6±0,4%), животные поражены О. ¡пипШб и Б. герепБ; Республике Калмыкия (24,4%) - Б. герепБ, Республике Адыгея (23,9%) - поражены V. ттШэ и Б. герепБ, наименьший — в Астраханской области (2,9%).

Нами изучено влияние сезонных факторов на инвазированность собак дирофиляриями. Анализ данных показал, что экстенсивность инвазии увеличивалась в летний (27,5±2,4%) и зимний (21,2±2,8%) периоды, оставаясь достаточно высокой весной (19,5±1,8%) и осенью (18,6±1,3%). Отмечено колебание сезонности проявления дирофиляриоза у собак в зависимости от погодных условий. За период наблюдения в годы с сухим и жарким сезоном передачи (2007 г.) экстенсивность инвазии животных была ниже, чем во влажные и умеренно жаркие (2005, 2006 гг.).

Было отмечено, что видовой состав дирофилярий у собак меняется в разные годы наблюдений. Так в 2000 г. на территории г. Ростова-на-Дону у инвазированных животных вид D. repens преобладал над D. immitis в соотношении 3:1, а начиная с 2001 г. эти показатели постепенно выравниваются. Кроме того, начиная с 2001 г., в 10,6 раз увеличилось число собак, пораженных одновременно двумя видами паразита. По нашему мнению, эти данные свидетельствует о видовой нестабильности очага и постепенном вытеснении из ареала обитания вида D.repens видом D. immitis. Это, может быть связано, прежде всего, с благоприятными для данного вида погодно-климатическими условиями.

Установлено, что увеличение количества микрофилярий в крови инвазированных животных отмечалось в летний период, что может быть связано с периодом активности комаров (промежуточных хозяев).

Установлена зависимость проявления инвазии у собак от температуры окружающей среды сезона передачи дирофиляриоза. Высокие показатели экстенсивности инвазии животных наблюдались при температуре сезона передачи 29,4 - 30,5 °С.

Температура окружающей среды является важным фактором, оказывающим влияние не только на численность и активность комаров (переносчиков дирофиляриоза), но и на развитие определенного вида личинок в их организме (D.immitis или D.repens). Нами отмечено колебание видового состава дирофилярий в организме окончательного хозяина при изменении погодных условий сезона передачи инвазии в различные годы исследований. По данным С. Johnstone (2000) для нормального развития личинок D. immitis в организме комара необходима температура выше 27 °С в течение 2 недель (Архипов И.А. и др., 2004). Низкая температура продлевает развитие личинок D. immitis в промежуточном хозяине (Kartman L., 1953; Kutz F. W. et al., 1974). В организме комаров, помещенных при температуре ниже 15 °С в течение 50 дней личинки D. immitis были найдены мало подвижными, но все еще живыми (Snow К. R., 1984).

Температура является ограничивающим фактором развития и для личинок D.repens. Исследования, проведенные G. Cancrini et al. (1988) показали, что личинки развиваются в инвазионную стадию при температуре 28-30 °С 8-10 дней. Более длительное время необходимо когда температура понижена: 12 дней при 24 °С и 16-20 дней при 22 °С. При температуре ниже 18 °С развитие останавливается и может продолжаться при наступлении благоприятных условий. По данным A.F. Webber и F. Hawking (1955) для D.repens оптимальный температурный режим для развития в организме комара составляет 24 - 27 °С (Архипов И.А. и др., 2004).

Полученные данные могут учитываться при проведении профилактических мероприятий при дирофиляриозе.

Передача и распространение этого гельминтоза осуществляется промежуточными хозяевами, которыми являются различные виды комаров. Зараженность кровососущих комаров микрофиляриями в г. Ростове-на-Дону и Ростовской области составила 9,7±0,9%. В г. Майкопе (республика Адыгея) зараженные комары обнаружены не были, возможно из-за того, что данная выборка была нерепрезентативной и места отлова комаров не были связаны с очагами дирофиляриоза позвоночных хозяев. Среди особей, исследованных нами в очагах дирофиляриоза, наиболее часто личинки выявлялись у комаров р. Aedes (18,2±1,9%), несколько ниже зараженность комаров р. Culex (10,8±1,6%) и совсем низкая экстенсивность заражения у комаров р. Anopheles (1,3±0,6%). Различия в экстенсивности заражения комаров разных родов могут быть связаны с механизмами защиты в организме насекомых: тоточное устройство, время коагуляции крови поступившей с пищей.

В результате анализа собственных исследований и литературных данных установлено: наибольший процент зараженных комаров был зарегистрирован в Ростовской области (9,7±0,9%), и Республике Калмыкия (9,4%), наименьший - в Астраханской области (5,9%).

Всего на территории Ростовской области за период с 2000 по 2007 гг. нами проанализировано 169 случаев дирофиляриоза у людей. Возраст выявленных больных варьировал от 8 до 79 лет. Максимальное число инвазированных было представлено в возрастной группе 30-39 лет. Из числа обратившихся - женщин в 2,7 раза больше, чем мужчин. Зараженность людей „ дирофиляриозом в городской черте (г. Ростов-на-Дону) в 10,2 раза выше, чем в сельской местности.

Из числа обследованных больных способность к активной миграции паразита отмечена у 35,0±3,8%. В 57,4±3,8% случаев локализация паразита была в области головы, в 11,2±2,4% случаев в области туловища, в 24,9±3,3% - в области конечностей и в 4,1±1,5% случаев гельминт был обнаружен в наружных половых органах. Кроме того, были выявлены редкие случаи локализации паразита: в легком, в стекловидном теле, в куполе слепой кишки.

Среди удаленных хирургическим путем или вышедших спонтанно гельминтов 80,5±3,2% - неполовозрелые самки; половозрелые - 14,0±2,7%; неполовозрелые самцы - 5,3±1,5%. Все особи по морфологическим признакам были идентифицированы как Б. герет. Длина извлеченных гельминтов колебалась от 80 до 200 мм.

Нами отмечено повышение обращаемости людей инвазированных дирофиляриозом весной - 35,3±3,6%. Осенью количество инвазированных составило 24,3±3,3%, зимой и летом — по 20,2±3,1%. На основании выявленной сезонности обращений по поводу активизации паразита, предполагаемых сроков инвазии, связанных с жизненным циклом комаров можно сделать ориентировочные выводы об инкубационном периоде дирофиляриоза у людей в Ростовской области, который составляет 6-8 месяцев. Риск заражения человека приурочен к моменту максимальной активности комаров — конец весны и начало осени, когда погодные условия сезона передачи наиболее благоприятны как для переносчика, так и для развития инвазионной личинки в его организме.

На основании анализа собственных и литературных данных разработаны медико-географические карты-схемы распространения дирофиляриоза на юге России. Сделан вывод о том, что территория юга России эндемична по дирофиляриозу. Установлено, что поражены дирофиляриозом животные и люди. Присутствуют условия для передачи инвазии: наличие зараженных комаров и погодные условия, способствующие осуществлению эпизоотологического процесса. С помощью различных методов дифференциальной диагностики установлена пораженность собак видами БлттШз и Б.герепБ на территориях юга России (Ростовская область, г.Туапсе и Республика Адыгея). Кроме того, на изучаемых территориях достаточно высока экстенсивность инвазии животных в организме которых присутствуют дирофилярии двух видов (от 11,1% - г.Туапсе, до 24,8% — Ростовская область).

Несоответствие данных литературы, свидетельствующих о преимущественной инвазии собак на территориях юга России только одним видом возбудителя (Волгоградская область - 91,7%, в Республике Калмыкия -100% животных поражены Б.герепБ, на территории Краснодарского края у собак был выявлен только вид БлттШз) с результатами собственных исследований, возможно, связана с недостатком использования большинством авторов только морфологической дифференциации дирофилярий в организме собак и нерепрезентативной выборкой. Исходя из выше сказанного, можно сделать вывод о том, что на различных территориях юга России циркулируют два вида дирофилярий — вид ОлшшШб и вид О.герет.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бескровная, Юлия Григорьевна, Ростов-на-Дону

1. Авдюхина Т.И. Дирофиляриоз (D.repens) в Российской федерации и некоторых странах СНГ: ситуация и тенденция ее изменения / Т.И. Авдюхина, В.Ф. Постнова, Л.М. Абрасимова и др. // Мед. паразитол. — 2003. -№1.-С. 44-48.

2. Авдюхина Т.И. Дирофиляриоз в Российской Федерации / Т.И. Авдюхина, В.Г. Супряга, В.Ф. Постнова и др. // Тезисы докл. Всероссийского симпозиума «Роль Российской гельминтологической школы в развитии паразитологии». 8-10 декабря - М., 1997. - С.1 - 2.

3. Авдюхина Т.И. Дирофиляриоз органа зрения: реестр и анализ 50 случаев в Российской Федерации и странах СНГ / Т.И. Авдюхина, А.Я. Лысенко и др. // Вестник офтальмологии. -М., 1996. Том 112, №3- С. 35 - 39.

4. Авдюхина Т.И. Проблема дирофиляриоза (Dirofilaria repens) в Российской Федерации / Т.И. Авдюхина // Матер, совещ. «Современные проблемы эпиднадзора за паразитозами». М., 2002. - С.61-65.

5. Агрометеорологический бюллетень // ГУ «Ростовский ЦГМС Р» - Ростов н/Д, 2004, 2005, 2006, 2007. - 6 С.

6. Азарова А.Н. Описание четырех случаев инвазии Dirofilaria repens у человека в г.Барнауле Алтайского края / А.Н. Азарова, Ю.Ю. Жгут, Р.П. Куимова и др. // Мед. паразитол.- 1995. №3. - С. 57.

7. Акбаев М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных / М.Ш. Акбаев. М.: Колос, 2000. - 336 с.

8. Алексеенко В.Н. География Ростовской области: учебник. / В.Н. Алексеенко, М.И. Мартынова. Ростов н/Д: ООО «Терра», 2005. - 120 с.

9. Аракельян P.C. Случай дирофиляриоза человека в Астраханской области / P.C. Аракельян // Мед. паразитол.- 2007. №3. - С. 55.

10. Аракельян P.C. Эпидемиолого-эпизоотологические особенности дирофиляриоза на территории Астраханской области: автореф. дис. . канд. мед. наук / P.C. Аракельян. М., 2007. - 25 с.

11. Артамонова A.A. Диагностика дирофиляриоза у людей и животных / A.A. Артамонова, С.А. Нагорный // Тезисы докл. международной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс». Саратов. - 1996. - С. 21.

12. Артамонова A.A. Клиника и профилактика дирофиляриозов / A.A. Артамонова // Тезисы докл. научн. конференции «Гельминтозы меры борьбы и профилактики» - М., 1994. - С. 5-6.

13. Артамонова A.A. Локализация дирофилярий у человека в Ростовской области / A.A. Артамонова, В.Г. Бережная // Тезисы докл. научн. конференции «Актуальные проблемы медицинской и ветеринарной паразитологии». -М.,1993. С. 48.

14. Артамонова A.A. Проблема дирофиляриоза на Северном Кавказе / A.A. Артамонова, С.А. Нагорный, H.A. Строкатова // Тез. докл. Веер. симп. «Роль Российской гельминтологической школы в развитии паразитологии», 8-10 дек. -М., 1997. С. 4-5.

15. Артамонова A.A. Случаи дирофиляриоза в Ростовской области / A.A. Артамонова // Гельминтозы человека. республ. сб. - Л. - 1989. - С. 92-95.

16. Артамонова A.A. Случай миграции дирофилярий у человека / A.A. Артамонова, С.А. Нагорный // Мед. паразитол. 1996. - №1. - С. 44.

17. Артамонова A.A., Нагорный С.А., Стрельникова Г.В., Левченко Л.В. Дирофиляриозы у людей и собак в Ростовской области //Тезисы докл. VII всесоюзного съезда общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов. М., 1997. - т.1 - С.326-327.

18. Архипов И.А. Дирофиляриоз / И.А. Архипов, Д.Р. Архипова. М., 2004. -194 с.

19. Архипова Д.Р. Зоогеография дирофиляриоза собак в России / Архипова Д.Р., И.А. Архипов // Теория и практика борьбы с паразитарнымиболезнями: Материалы докладов научной конференции/ ВИГИС.- М., 2004.- С.42 44.

20. Архипова Д.Р. Периодичность микрофилярий в крови собак при дирофиляриозе / Д.Р. Архипова, И.А. Архипов // Ветеринария М., 2004. -№1,-С. 38 -39.

21. Астафьев Б.А. Экспериментальные модели паразитозов в биологии и медицине / Б.А. Астафьев, JI.C. Яроцкий, М.Н. Лебедева М.: Наука, 1989.-379 с.

22. Афендулова И.С. Случай глазной формы дирофиляриоза / И.С. Афендулова // Вестник офтальмологии. -М., 2000. т. 116, №2. - С. 40.

23. Бароян О.В. Международные и национальные аспекты современной эпидемиологии и микробиологии / О.В. Бароян, Д.Р. Портер М.: Медицина, 1975.-520 с.

24. Бессонов A.C. Дирофиляриозы плотоядных и человека / A.C. Бессонов // Ветеринария. 2003. - №3. - С. 57 - 61.

25. Бессонов A.C. Симбиотическая система филярии и бактерия WOLBACHIA: эволюция системы, патогенез и лечение филяриатозов / A.C. Бессонов // Ветеринария. - 2004. - №1. - с. 34 - 37.

26. Бешко Н.И. Инвазия человека нематодой Dirofilaria repens / Н.И. Бешко, Т.Я. Погорельчук, H.H. Маньковская и др. // Мед. паразитол.- 1994. №1. -С. 58.

27. Болгаренко A.B. Дирофиляриоз человека в Николаевской области / A.B. Болгаренко // Мед. паразитол. 2001. - №4. - С. 57 - 58.

28. Борисова М.А. О проявлении инвазии Dirofilaria repens Railliet et Henri, 1911, у человека / М.А. Борисова, Н.П. Сиротюк, О.Д. Цыганкова и др. // Мед. паразитол.- 1986. №5. - С. 86.

29. Бронштейн A.M. Дирофиляриоз человека в Московском регионе / A.M. Бронштейн, В.Г. Супряга, Б.И. Ставровский и др. // Мед. паразитол. -2003.-№3.-С. 51 -55.

30. Бурлаков С.А. Комары и клещи переносчики вирусных и риккетсиозных заболеваний человека / С.А. Бурлаков, В.Н. Паутов- М.: Медицина. - 1975. - 346 с.

31. Веденеев С.А. Биохимические и гематологические показатели при дирофиляриозе собак и на фоне лечения / С.А. Веденеев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции М.: ВИГИС, 2004,- С. 101 - 102.

32. Веденеев С.А. Биохимические и гематологические показатели при дирофиляриозе собак и на фоне лечения / С.А. Веденеев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции М.: ВИГИС, 2004. - С. 101 - 102.

33. Веденеев С.А. Распространение паразитозов собак в Нижнем Поволжье / С.А. Веденеев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции М.: ВИГИС, 2004,- С. 102104.

34. Власов В.В. Эффективность диагностических исследований. / В.В. Власов // М.: Медицина, 1988. 254 с.

35. Гааль Э., Электрофорез в разделении биологических макромолекул / Э. Гааль, Г. Медьеши, JL Веррецкеи М.: Мир, 1982. - 448 с.

36. Гаркави Б.Л. Распространение дирофиляриоза собак и человека в Краснодарском крае / Б.Л. Гаркави, АЛО. Медведев // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции М.: ВИГИС. - 2004. - С. 111 - 112.

37. Гинеценская Т.А. Частная паразитология / Т.А. Гинеценская, A.A. Добровольская М.: Высшая школа, 1978. - С. 115 - 118.

38. Горохов В.В. Возвращающиеся паразитозы и паразитарные болезни / В.В. Горохов, A.B. Успенский и др. // Мед. паразитол. 2008. - №1. - С.54 - 56.

39. Горохов В.В. Забытые паразитозы / В.В. Горохов // Мед. паразитол.- 2003. №1. - С. 33 - 36.

40. Горохов В.В., Москвин A.C. Дирофиляриозы плотоядных / В.В. Горохов, A.C. Москвин // Ветеринария. 2001. - №8. - С.6 - 8.

41. Госанов И.Ю. Случай обнаружения Dirofilaria repens у жителя Туркмении / И.Ю. Госанов, А.Р. Искендеров // Мед. паразитол. 1988. -№4.-С. 82.

42. Гуськов В.В. Дирофиляриоз в Астраханской области / Гуськов В.В., Е.В. Горшкова, В.Ф. Постнова, А.В Агарунов // Лечащий врач. 2001. - №1. -С. 55 - 56.

43. Дербенева Ухова В.П. Руководство по медицинской энтомологии / В.П. Дербенева - Ухова -М.: Медицина, 1974. - 359 с.

44. Дорофеев Ю.А. О случаях дирофиляриоза у жителей Крыма / Ю.А. Дорофеев, В.В. Дашевский, М.Н. Колтанюк и др. // Мед. паразитол. -1997.-№4.-С.7-8.

45. Егоров A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.Г. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова. М.: Высш. шк., 1991.-288 с.

46. Исаев В.А. Комары (Díptera: Culicidae) и их потенциальное значение в трансмиссии дирофиляриозов в средних и малых населенных пунктах Ивановской области / В.А. Исаев, C.B. Егоров // Вестник Ивановского гос. университета. 2004. - вып.З - С. 3 - 8.

47. Казачков Е.Л. Случай дирофиляриоза в г. Магнитогорске Челябинской области / Е.Л. Казачков, В.М. Горшенева, И.Е. Файзуллина // Мед. паразитол. 2004. - №2. - С. 55 - 57.

48. Карпов С.Г. Случай дирофиляриоза в г.Казани / Карпов С.Г., Фазылова Э.И. и др. //Казан, мед. журн. 2000. - Том LXXXI, №6. - С. 515.

49. Киселев B.C. Дирофиляриоз у жителей Ульяновской области / B.C. Киселев //Мед. паразитол. 2003. - №1. - С. 27 - 28.

50. Ковалев Н.Е. О дирофиляриозе человека / Н.Е. Ковалев, В.К. Зуева, О.И. Маренг // Мед. паразитол. 1971. - №6. - С. 741 - 742.

51. Конома С.М. Дирофиляриатоз проблема хирургии и экологии / С.М. Конома, С.И. Штанько, С.М. Головатенко // Детская хирургия - 2002. -№2. - С. 47 - 48.

52. Королев В.А., Ромашова М.Ф. Дирофиляриоз в автономной Республике Крым / В.А. Королев, М.Ф. Ромашова // Мед. паразитол. 2005. - №1. - С. 50-51.

53. Кудинов A.B. Дирофиляриоз теперь и в Саратове / A.B. Кудинов, Л.В. Анникова // Вет. Поволжья. 2002. - № 3. - С. 19 - 21.

54. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учеб. пособие для биол. спец. вузов 4-е изд., пераб. и доп. / Г.Ф. Лакин М.: Высш. шк., 1990. - 352с.

55. Лансберг Г.Е. Климат города / Г.Е. Лансберг Л., 1983. - 248 с.

56. Локтева I.M. Проблема дирофиляриозов. Проблема дирофтярюз1в / I.М.Локтева, A.M. Зарицький, K.I. Бодня, Т.М. Павлшовська // Сучасш шфекцн. 2004. - № 4. - С. 60-65.

57. Лурье П.М. Климат г.Ростова-на-Дону и его особенности / П.М. Лурье,

58. B.Д. Панов, C.B. Панова // Экология городской среды: современное состояние и тенденции изменения Ростов н/Д., 2004. - С. 38 - 42.

59. Максилюван Т.Ю. Казуистические нематодозы у человека в Тульской области / Т.Ю. Максилюван, С.И. Богачкина, З.А. Ошевская // Мед. паразитол. 1991. - №4. - С. 55 - 56.

60. Малов В.А. Описание необычного течения дирофиляриоза / В.А. Малов, Л.Г. Черемных, А.Н. Горобченко, М.Я. Крючков, М.В. Колесникова и др. // Мед. паразитол. 2005. - №2. - С. 16 - 18.

61. Мейер Д. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпретация и диагностика: пер. с англ. / Д. Мейер, Д. Харви // М.: Софион. 2007. - 456 с.

62. Мельниченко А.П. Второй случай дирофиляриоза в Полтавской области / А.П. Мельниченко, Т.А. Просветова // Мед. паразитол. 1971. - №2.1. C.238.

63. Мирошников В.П. Редкий случай локализации дирофиляриоза у человека / В.П. Мирошников, Е.Д. Бакуров и др. // Хирургия. 1991. - №7. - С. 127.

64. МУК №3.2.1880-04 от 03.03.2004 Профилактика дирофиляриоза. М., 2004. - 82 с.

65. Муквоз Л.Г., Белозерская Н.И. Два случая инвазии человека в Запорожье / Л.Г. Муквоз, Н.И. Белозерская // Мед. паразитол. 1975. -т.44, №5. - С. 615.

66. Нагорный С.А. Дирофиляриоз в г. Ростове-на-Дону / С.А. Нагорный, A.A. Артамонова // Тез. 1-й per. конф. «Актуальные проблемы вет. мед. мелких дом. животных на Северном Кавказе». Ростов н/Д., 1997. - С. 35 - 36.

67. Нагорный С.А. Дирофиляриоз в г.Ростове-на-Дону / С.А. Нагорный, A.A. Артамонова // Тезисы научно-практической конференции, посвященной 90-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии Ростов н/Д, 1999. -С.67.

68. Назаренко М.Ю. Клинический случай дирофиляриоза у ребенка / М.Ю. Назаренко // Экология человека. 2000. - №2. - С. 31 - 32.

69. Найт Р. Паразитарные болезни / Р. Найт М., Медицина, 1985. - 416 с.

70. Нараленкова Е.Ю. О регистрации случаев дирофиляриоза в Гомельской области / Е.Ю. Нараленкова // Мед. паразитол. 2004. - №2. - С. 49 - 51.

71. Поляков В.Е. Дирофиляриоз у детей и подростков / В.Е. Поляков, А .Я. Лысенко, Т.Н. Константинова, Т.И. Авдюхина // Мед. помощь. 2003. -№2. - С.37 - 39.

72. Постнова В.Ф. Новые случаи дирофиляриоза человека / В.Ф. Постнова, А.И. Ковтунов, J1.M. Абросимова, Т.И. Авдюхина и др. // Мед. паразитол. 1997. - № 1. - С. 6 - 9.

73. Природа г.Ростова-на-Дону / Под. Ред. Г.П. Долженко. Ростов н/Д. -1999.-263 с.

74. Природа г.Ростова-на-Дону // Учебное пособие для учителей географии и биологии Ростов-н/Д: РГУ, 1999. - 261 с.

75. Пыков М.И. Диагностика и лечение дирофиляриоза яичек у детей / М.И. Пыков, М.В.Григорьева, Т.Р. Лаврова, В.Г. Супряга // Ультразвуковая и функциональная диагностика 2005. - №3. - С. 85 - 88.

76. Руководство по эпидемиологическому анализу / Под ред. Попова В.Ф. -М.: Медицина, 1973. 216 с.

77. СанПиН 3.2.1333-03. Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации. М., 2003.

78. Сафронов Е.Ю. Дирофиляриоз в Волгоградской области новое заболевание региона / Е.Ю Сафронов. A.A. Воробьев, Н.И. Латышевская и др. // Мед. паразитол. - 2004. - №2. - С. 51 - 54.

79. Скрябин И.К. Определитель паразитических нематод. Спифураты и филяриаты / И.К. Скрябин, Н.П. Шихобалова, A.A. Соболев М. - Л.: Академия наук СССР, 1949. - С. 298 - 305.

80. Скрябин И.К. Филярии животных и человека / И.К. Скрябин, Н.П. Шихобалова М., 1948. - С. 43 - 45.

81. Сонин М.Д. Основы нематодологии. Филяриаты животных и человека и вызываемые ими заболевания / Сонин М.Д. М.: Наука, 1975. С. 237 -273.

82. Стрюкова И.Л. Дирофиляриоз в практике глазного врача / И.Л. Стрюкова, О.В. Гончарова, В.А. Гульянц // Вестник офтальмологии. 2001. - т. 117, №3. - С. 43 -44.

83. Супряга В.Г. Дирофиляриозы / В.Г. Супряга //Качество жизни. Медицина. 2004. - №1. - С.23 - 27.

84. Супряга В.Г. Инвазия человека нематодой Dirofilaria repens Railliet et Henri / В.Г. Супряга, П.В. Усищев, М.В. Опрышко // Мед. паразитол. -1985.-№1.-С. 85 86.

85. Супряга В.Г. Клинический и паразитологический диагноз дирофиляриоза человека / В.Г. Супряга, Т.В. Старкова, Г.И. Короткова // Мед. паразитол. 2002. - №1. - С. 53 - 55.

86. Супряга В.Г. Первый случай диагностики дирофиляриоза по микрофиляриям, обнаруженным в пунктате подкожной опухоли у человека / В.Г. Супряга, Т.Н. Цыбина, Т.Н. Денисова, E.H. Морозов и др. // Мед. паразитол. 2004. - №4. - С. 6 - 8.

87. Сыскова Т.Г. Паразитарные заболевания в Российской Федерации в условиях миграции населения / Т.Г. Сыскова // Мед. паразитол. 2004. -№1.-С. 3-5.

88. Тасбергенова С.А. Случай филяриоза у ребенка / С.А. Тасбергенова, А.Ж. Аубаксирова // Мед. паразитол. 1985. - т. 104, №6. - С. 65 - 66.

89. Толкунова И.И. О регистрации случая дирофиляриоза у жительницы г.Новосибирска / И.И. Толкунова, P.A. Уласевич, Е.Г. Яковлева // Мед. паразитол. 2003. - №1. - С. 26.

90. Ушаков A.B. О заболеваемости дирофиляриозом в г.Тюмени / A.B. Ушаков, Т.Ф. Степанова, A.C. Стругова // Мед. паразитол. 2002. - №4. -С. 52 - 53.

91. Худавердиев Т.П. Борьба с дирофиляриозом собак / Т.П. Худавердиев // Ветеринария. 1979. - №2. - С. 46 - 47.

92. Шумков М.А. Видовой состав кровососущих комаров и их распределение в Ростовской области / М.А. Шумков // Тезис докладов научно-практической конференции по борьбе с паразитарными болезнями // Ростов н/Д 1972 г. - С. 96 - 99.

93. Энгельштейн А.С. Об инвазии человека D. repens / А.С. Энгельштейн, P.M. Кигель, Г.И. Запорожец // Мед. паразитол. 1973. - №3. - С. 358.

94. Яковлева Е.Г, Рубан И.М. О случае дирофиляриоза в г. Новосибирске / Е.Г. Яковлева, И.М. Рубан // Мед. паразитол. 1999. - №3. - С. 49 - 50.

95. Ястреб В.Б. Дирофиляриоз собак в Москве и Московской области и меры его профилактики / В.Б. Ястреб, A.M. Шестаков, Н.А. Лаврова // Ветеринар. 2005. - № 2. - С. 38-39.

96. Ястреб В.Б. Морфологические и биохимические показатели крови при дирофиляриозе собак / В.Б. Ястреб // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. М., 2006.-42.-С. 468-473.

97. Ястреб В.Б. Некоторые аспекты эпизоотологии дирофиляриоза собак в Московском регионе / Ястреб В.Б. // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции М.: ВИГИС, 2004. с. 440 - 442.

98. Araujo А. М. Canine and human Dirofllaria immitis infections in Portugal. A review / A. M. Araujo // Parassitologia. 1996. - N 38. - P. 366.

99. Arnold P. Fallbericht: Dirofllariose beim Hund / P. Arnold, P. Deplazes, H. Ruckstuhl, et al. / Schweiz. Arch. Tierheilk. 1994. -№ 136. - P. 265 - 269.

100. Bidgood A. The prevalence of Dirofllaria immitis in dogs in Sydney / A. Bidgood, G. H. Collins / Austr. Vet.J. 1996. -N 73. - P. 103 - 104.

101. Boros G. Dirofllaria immitis in dogs / G. Boros, M. Janisch, G. Sebestyen / Mag. Allatorv. Lapja. 1982. - N 37. - P. 313 - 316.

102. Bouza M. Estudio de la influencia de las condiciones higienicas en las filariasis caninas / M. Bouza, B. Dumenigo / Rev. Cub. Med. Trop. 1985. - N 37. - P. 19-21.

103. Brglez J. Dirofilaria immitis (Leidy, 1856) Railliet & Henry, 1911, in a dog / J. Brglez, L. Senk / Zbornik Biotehniske Fakultete Univerze Edvardo Kardelja v Ljubljani, Veterinarstvo. 1987. - N 24. - P. 69 - 72.

104. Bucklar H. Breitet sich in der Sudschweiz die Dirofilariose beim Hund aus? / H. Bucklar, U. Scheu, R. Mossi, P. Deplazes / Schw. Archiv. Tierheilk. 1998. -N 140.-P. 255 - 260.

105. Cancrini G. Different probabilities of transmission of Dirofilaria immitis and D. repens by Culex pipiens / G. Cancrini, A. Delia Torre, M. Colluzzi / Proc. Viemop.- 1998.-P. 90.

106. Cancrini G. Influenza della temperatura sullo sviluppo larvale di Dirofilaria repens in diverse specie di zanzare / G. Cancrini, S.Yanchang, A. Delia Torre, M. Coluzzi / Parassitologia. 1988. -N 30. - P. 38.

107. Christensson D. Occurence of the heartworm, Dirofilaria immitis in imported dogs / D. Christensson / Sven. Veterinär. 1997. - N 29. - P. 521 - 522.

108. Cifferi F. Human pulmonary dirofilariasis in the United States: a critical review/F. Cifferi /Am.J. Trop. Med. Hyg. 1982. -N 31. - P. 302-308.

109. Coluzzi M. Importanza dell' armatura bucco-faringea in Anopheles e Culex in relazione alle infezioni con Dirofilaria / M. Coluzzi, R. Trabucchi / Parassitologia. 1968.-N 10.-P. 47-59.

110. Deffke O. Ein Fall von Filaria Immitis / O. Deffke / Mb. Prakt. Tierheik. -1980.-N l.-P. 108-123.

111. Deplazes P. Endoparasitenbefall bei Findel-und Verzicht-Hunden in der Sudschweiz / P. Deplazes, F. Guscetti, E. Wunderlin, H. Bucklar, et al. / Schweiz. Arch Tierheilk.- 1995.-N 137.-P. 172-179.

112. Desowitz R. S. Antibodies to canine helminth parasites in asthmatic and non-asthmatic children / R. S. Desowitz, R. Rudoy, J. W. Barnwell / Int. Archs. Allergy Appl. Immun. 1981. -N 65. - P. 361-366.

113. Doby J. M. Filarioses canines par Dirofilaria immitis (Leidy, 1856) et D. repens Raillet & Henry, 1911, dans l'ouest de la France / J. M. Doby, A.

114. Couatarmanac' h, C. Aznar / Bull. Soc. Franc. Parasitol. 1986. - N 4. - P. 229 - 233.

115. Doganay A. The filarial nematodes in dogs / A. Doganay, G. Biyikoglu / Etlik. Vet. Mikrob. Derg. 1992. - N 1. - P. 127 - 139.

116. Espinoza E. Anti-Dirofilaria immitis IgE: Seroepidemiology and seasonal variation in an exposed human population / E. Espinoza, M. Cordero, A. Muro, F. Lorente, F. Simon / Tropical Medicine and Parasitology. 1993a. - Vol. 44, N3 - P. 172.

117. Espinoza S.E. Anti-Dirofilaria immtis IgE: seroepidemiology and seasonal evolution in an exposed human population / S.E. Espinoza, A.A. Muro, T.F. Lorente et al. / Trop. Med. Parasitol. 19936. -N 44. - P. 172-176.

118. Genchi C. Prevalence of Dirofilaria immitis infection in Italian cats / C. Genchi, J. Guerrero, B. Di Sacco, L. Formaggini / In: soil. M. D. (ed.). Proceedings of the Heartwom Symposium' 92. American Heartworm Society.1992.-P. 97-102.

119. Genchi C. Aggiornamento epidemiologico sulla filariosi del cane e del gatto / C. Genchi, L. Venco, S. Magnino, B. Di Sacco, et al. / Veterinaria, y Csuppl.1993.-№2.-P. 5-14.

120. Grieve R.B. Epidemiology of canine heartworm infection / R.B. Grieve, J. B. Lok, L. T. Glickman / Epidemiol. Rev. 1983. -N 5. - P. 220 - 246.

121. Hinaidy H. K., Bacowsky M., Hinterdorfer F. Introduction of Dirofilaria immitis and Dipetalonema reconditum in dogs into Austria / H. K. Hinaidy, M. Bacowsky, F. Hinterdorfer /Vet. Med., 1987. -N 34. - P. 326-332.

122. Hocking B. The intrinsic range and speed of fligth in insects / B. Hocking / Trans. R. Ent. Soc. Land. 1953. - N 104. - P. 223.

123. Jafari S. Prevalence of Dirofilaria immitis in dogs of Pars province of Iran / S. Jafari, S. N. S. Gaur, Z. Khaksar /Appl. Anim. Res. 1995. N 9. - P. 27-31.

124. Kartman L. Factors influencing infection of the mosquito with Dirofilaria immitis Leidy, 1856 /L. Kartman/Exp. Parasitol. 1953. -N 2. - P. 27-78

125. Kendall K. Dirofilaria immitis in cats from inner Sydney / K. Kendall, G. H. Collins, S. E. Pope / Austr. Vet.J. 1991. - N 68. - P. 356-357.

126. Kitagawa H. Clinical studies on canine dirofilarial hemoglobinuria: relationship between the tricuspid valve orifice and plasma hemoglobin concentración / H. Kitagawa, Y. Sasaki, K. Ishihara / Jap. J. Vet. Sci. 1986. — V. 48,N 1.-P. 99-103.

127. Konishi E. Yearly change in antobody level to Dirofilaria immitis (Spirurida: Filariae) among humans exposed naturally to infected mosquitoes / E. Konishi / Med. Entomol. 1989. - N 26. - P. 489-490.

128. Kuo T. F. Study on the incidence of pound dogs infested with heartworms and a comparison of different methods of detection during the summer season in Taipei / T. F. Kuo, C. Y. Yang, C. F. Yau / Chin. Soc.Vet. Sci. 1995. -N21. -P. 97- 104.

129. Labarthe N. Survey of Dirofilaria immitis (Leidy, 1856) in random source cats in metropolitan Rio de Janeiro, Brazil, with descriptions of lesions / N. Labarthe, A. M. Ferreira, J. Guerrero, et al. / Vet. Parasitol. 1997. -N 71. - P. 301-306.

130. Lee J. C. A survey of canine heartworm infections among German shepherds in South Korea / J. C. Lee, C. Y. Lee, S. S. Shin, C. G. Lee / Koreani. Parasitol. 1996.-N34.-P. 225-231.

131. Leuterer G. Herwurmkrankheit des Hundes: erregerbiologie und okologie, pathogenese, klinik, diagnose, therapie und prophylaxes / G. Leuterer, R. Cothe / Kleintierpraxis. 1993. - N 38. - P. 633-646.

132. Levi D. A. Dog heartworm infection potentiates IgE in human / D. A. Levi, L. A. Scott, R. E. Hamilton et al. /Allergy. Clin. Immunol., jr. 1983. - P. 115.

133. Lok J. B. Dirofilaria spp.: taxonomy and distribution / J. B. Lolc / In: Boreham, P. F. L; Atwell, R. B. (eds.). Dirofilariasis. CRC Press, Boca Raton, Florida. 1988.-P. 1-28.

134. Makia K., Tsukamoto M., Kagei N. Fifty-six cases of human dirofilariasis reported from Japan a compiled table //UOEH. 1987. - Vol. 9. P. 233-242.

135. Maniatis T. Molecular Cloning / T. Maniatis, E. Fritsh, J. Sanbrook /A laboratory Manual. Gold Spring Harbor Laboratory. 1982. - P. 393-411.

136. Matola Y. G. Periodicity of Dirofilaria immitis microfilariae in a dog from Muheza district, Tanzania/Y. G. Matola/Helminthol. 1991. -N 65. - P. 7678.

137. Mejia S.J. An analysis of the humoral immune response of dogs following vaccination with irradiated infective larvae of Dirofilaria immitis / S.J. Mejia, C.K.S. Carlow/P. Immunol. 1994.-N 16.-P. 157-164

138. Milanes de Campos J. R. Human pulmonary dirofilariasis: analysis of 24 cases from Sao Paulo, Brazil / J. R. Milanes de Campos, C. S. Barbas, L. T. Filomeno et al. / Chest. 1997. - Vol. 112,N3.-P. 729-733.

139. Nelson Y.S. Studies in filariasis in East Africa. Filarial infections in man, animals and mosquitoes / Y.S. Nelson, R.B. Heisch, M. Furlong / Trans. Roi. Soc.trop. Med. Hyd. -1962. -N 56. P. 203-217.

140. Olteanu G. Dirofilariosis in man and animals in Romania / G.Olteanu / Parassitologia. 1996.-N38.- P. 360.

141. Otto G. T. Insect-born nematodes / G. Otto / In immunity the parasitic animals. Jackson R.F., H, Herman R., Singer L., (eds), Appleton Century-Crofts. - 1970. - Vol. 2. - P. 963- 980.

142. Pampiglione S. Dirofilariasis due to Dirofilaria repens in Italy, an emergent zoonosis: report of 60 new cases / S. Pampiglione, F. Rivasi, G. Angeli et al. / Histopathology. 2001. - V.38, N 4. - P. 344-354

143. Papazahariadou M. G. Prevalence of microfilaemia in episodic weakness and clinically normal dogs belonging to hunting breeds / M. G. Papazahariadou, A. R. Koutinas, T. S. Rallis, S. T. Haralabidis / Helmintbol. 1994. - N 68. - P. 243-245.

144. Raccurt C.P. Dirofilariasis, an underestimated emerging zoonosis in France / C.P. Raccurt / Med. Trop. 1999. - V.59, N4. - P. 389 - 400.

145. Reuther F. Erkrankung eines Hundes an Filaria immitis / F. Reuther / Wschr. Thierheilk. 1998. -N 32.- P. 429-430.

146. Ryan G. R. Prevalence of feline heartworm disease. A Global Review / G. R. Ryan, K. M. Newcomb / In: Soli M. D., Knight D. H. (eds.). Proceedings of the Heartworm Symposium'95. American Heartworm Society. 1995. - P. 79-86.

147. Sauerman D. M. Jr. A survey for natural potential vectors of Dirofilaria immitis in Vero beach / D. M. Jr. Sauerman / Mosq. News. 1985.-N43.-P. 222-225.

148. Sharma M.C. Blood cellular and biochemical studies in canine dirofilariasis / M.C. Sharma, S.P. Pachauri / Vet. Res. Com.- 1982. Vol. 5, N 3. - P. 295300.

149. Simon F. A seroepidemiologic survey of human dirofilariosis in Western Spain / F. Simon, A. Muro, M. Cordero, J. Martin, / Trop. Med. Parasitol. -1991.-N42.-P. 106-108.

150. Simon F. Heartworm infection in humans and animals. / F. Simon, C. Genchi / Ediciones universidad de Salamanca 2001. -210 p.

151. Slocombe J. O. D. Reflections on heartworm Surveys in Canada over 15 years

152. J. O. D. Slocombe / In: soll, M. D. (ed.). Proceedings of the Heartworm Symposium'92. American Heartworm Society. 1992. - P. 21-30.

153. SnowK. R. The identification of larvas of British mosquitoes (Diptera, Culicidae) / K. R. Snow / Entomol. Month. Mag. 1984. -N 120. - P. 21-32.

154. Tarello W. La dirofilariose sous-cautanee a Dirofilaria (Nochtiella) repens chez le chien / W. Tarello / Revue bibliographique et cas clinique. Revue de Medicine Veterinaire. 1999. -N 150. - P. 691-702.

155. Taylor A.E.R. Studies on the microfilariae of Zoa loa, Wulcherelria bancrofti, Brugia malayi, Dirofilaria immitis, D. repens and D. aethiops / A.E.R. Taylor / Helminthol. 1960. -N 34. - P. 13-26.

156. Walter L.L. Risk factors for heartworm infection in Northern California / L.L. Walter / In: soll, M. D.; Knight D. H. (eds.). Proceedings of the Heartworm Symposium' 95. American Heartworm Society. 1995. - P. 5-26.

157. Wenzel S. Fallbericht: Dirofilaria immitis bei einem Hund / S. Wenzel, P. G. Domke / Kleintierpraxis. 1998. - N 34. - P. 27-28.

158. Wohlsein P. Leishmaiose und filariose bei einem Hund / P. Wohlsein, M. Vilafranca, B. Brandes / Kleintierpraxis. 1996. -N 41. - P. 367-374.

159. Yoshimura H. Current status of human dirofilariasis in Japan-. Internal / H. Yoshimura, N. Akao / J. Zool. 1985. - N 12. - P. 53-60.

160. Zahler M. Eingeschleppte parasiten bei Hunden: Dirofilaria repens un Dipetalonema reconditum / M. Zahler, B. Glaser, R. Gothe / Tierdrztl. Prax. -1997.-N25.-P. 388-392.

161. DesowitzR.S. Rapid decrease of precipitating and reaginic antibodies in Dirofilaria immitis infected dogs which develop severe adverse reactions following treatment with iethyicarbamazine / R.S. Desowitz, J. W. Barnwell, N.

162. E. Palumbo, S. R. Una et al. / Am J. Trop. Med. Hyg. 1978 - N 27 - P. 11481151.

163. Hoerauf A. Immunomodulation by filarial nematodes / A. Hoerauf, J. Satoguina, M. Saeftel, S. Specht / Parasite Immunol. 2005. - Vol. 27, N 1011. - P. 417-429.

164. Kuzmin Yu. Experimental infection of mosquitoes with Dirofilaria repens (Nematoda, Filarioidea) larvae / Yu. Kuzmin, E. Varodi, N. Vasylyk, G. Kononko / J. Zool. 2005. - Vol. 39, N 6. - P. 19 - 24.

165. Espinoza E. Anti-Dirofilaria immitis IgE: Seroepidemiology and seasonal variation in an exposed human population/ E. Espinoza, M. Cordero, A. Muro,

166. F. Lorente, F. Simon. / Tropical Medicine and Parasitology.- 1993.- Vol. 44, N 3. P. 172.

167. Simon F. A seroepidemiologic survey of human dirofilariosis in Western Spain / F. Simon, A.Muro, M. Corder, J. Marti. / Tropical Medicine and Parasitology.- 1991.-Vol. 42, N 2.-P. 106-108.

168. Oncel T. Seroprevalence of Dirofilaria immitis in Stray Dogs in Istambul and Izmir / Oncel T., Vural G. / Turk J. Vet. Anim Sci. 2005. - N 29. - P. 785 -789.1. Ь) (Р

Информация о работе

Бескровная, Юлия Григорьевна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2009
ВАК 03.00.19

Диссертация

Дирофиляриоз на юге России - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы