Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Прямая биоконверсия целлюлозосодержащих материалов термофильными анаэробами

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Зябрева, Надежда Владимировна

Введение.

Глава 1. Целлюлозосодержащие материалы. Существующие методы их утилизации. Метаболизм целлюлозы в природе.

1.1. Структура целлюлозосодержащих отходов. Существующие методы их утилизации.

1.2. Существующие методы конверсии целлюлозосодержащих материалов в этанол.

1.3. Микроорганизмы, участвующие в процессе биоконверсии

1.3.1. Микроорганизмы-продуценты целлюлаз.

1.3.2. Микроорганизмы-продуценты этанола и органических кислот.

1.4. Биохимическое превращение целлюлозы микроорганизмами.

1.4.1. Схема биоконверсии углеводных полимеров растительной биомассы природным бактериальным биоценозом.

1.4.2. Метаболизм углеводов у термофильных анаэробных бактерий.

1.5. Пути повышения эффективности биоконверсии целлюлозных субстратов.

1.5.1. Поиск новых бактериальных штаммов и селекция штаммов с улучшенными технологическими характеристиками.

1.5.2. Использование смешанных культур.

1.5.3. Уменьшение выхода побочных продуктов.

1.5.4. Технологические методы увеличения продуктивности прямой биоконверсии.

1.5.5. Предобработка сырья.

1.6. Выводы и постановка задачи.

Глава 2. Объекты и методы исследований.

Глава 3. Выделение биоценозов термофильных анаэробных бактерий из различных природных источников.

3.1. Выделение биоценозов из навоза травоядных животных.

3.2. Выделение биоценозов из геотермальных источников.

3.3 Выделение биоценозов из разлагающейся растительной биомассы.

3.4. Сравнительная характеристика природных ассоциаций термофильных анаэробных бактерий, выделенных из различных источников.

Глава 4. Селекция смешанных культур для конверсии целлюлозосодержащих материалов.

4.1. Смешивание ассоциаций, выделенных из различных природных источников.

4.2. Удаление сопутствующей микрофлоры из ассоциаций целлюлолитических и сахаролитических этаноло- и ацидогенных бактреий.

4.3. Автоселекция ассоциации целлюлолитических бактерий.

4.4. Изоляция монокультур термофильных анаэробных штаммов из природных ассоциаций.

Глава 5. Изучение методов хранения полученных бактериальных ассоциаций.

5.1. Субкультивирование в жидкой культуре.

5.2. Хранение при комнатной температуре.

5.2.1. Хранение в агаризованной среде.

5.2.2. Хранение в жидкой культуре.

5.3. Хранение под слоем вазелинового масла.

5.4. Хранение при +4 °С.

5.5. Хранение в замороженном состоянии.

5.6. Хранение в лиофильно высушенном состоянии.

5.7. Хранение на высушенных полосках фильтровальной бумаги.

5.8. Рекомендации по выбору метода хранения термофильных анаэробных ассоциаций.

Глава 6. Влияние параметров культивирования на метаболизм бактерий.

6.1. рН питательной среды.

6.2. Температура культивирования.

6.3. Потребность в факторах роста.

6.4. Ингибирование метаболитами.

6.5. Твердофазное культивирование.

6.6. Перемешивание культуральной жидкости.

Глава 7. Разработка технологии процесса биоконверсии целлюлозосодержащего сырья.

7.1. Описание технологической схемы биоконверсии целлюлозосодержащего сырья.

7.2. Сравнение периодического и полупериодического способов культивирования. Дробная подача субстрата в ферментер.

7.3. Вакуумная отгонка этанола из культуральной жидкости.

Глава 8. Перспективы реализации технологии биоконверсии различных целлюлозосодержащих отходов. Возможные варианты технологических схем и технико-экономические показатели.

8.1. Сравнение процессов биоконверсии различных видов промышленных целлюлозосодержащих отходов.

8.2. Рекомендации по реализации технологии биоконверсии различных агропромышленных целлюлозосодержащих отходов.

8.3. Технико-экономические показатели технологии биоконверсии.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Прямая биоконверсия целлюлозосодержащих материалов термофильными анаэробами"

Возрастающий интерес в настоящее время к методам утилизации целлюлозосодержащих отходов агропромышленного комплекса объясняется с одной стороны отсутствием каких либо экологически чистых технологий, обеспечивающих и экономический эффект. С другой стороны внимание мировой науки привлекает поиск направлений рационального использования для промышленных целей возобновляемых природных ресурсов (растительной биомассы), к которым можноА отнести и промышленные целлюлозосодержащие отходы.

Наиболее широко применяемым методом утилизации целлюлозных материалов является двухстадийный процесс: гидролиз — кислотный или ферментативный — с последующим сбраживанием полученного гидролизата дрожжами в этиловый спирт и углекислоту. Двустадийный процесс имеет ряд недостатков. Кислотный гидролиз относится к одному из наиболее экологически неблагоприятных производств. Ферментативный гидролиз более дорогой, поскольку требует создания дополнительной стадии производства целлюлолитических ферментов. В результате гидролиза образуется целый ряд сахаридов как гексозных так и пентозных. Использование дрожжевых культур обуславливает неполное усваивание субстрата, поскольку дрожжи ассимилируют только гексозные фракции - около 50 % сырья.

Альтернативной, обладающей рядом преимуществ является технология прямой биоконверсии с использованием смешанной культуры термофильных анаэробных бактерий. Во-первых, процесс биоконверсии — одностадийный: ферментативный гидролиз сырья и сбраживание гидролизата до конечных продуктов осуществляются одними и теми же микроорганизмами. Во-вторых, использование термофильных анаэробов предполагает более низкие затраты на культивирование, поскольку не требуются высокая стерильность и аэрация среды. В-третьих, применение смешанных культур позволяет достигать более полной утилизации субстрата, так как в них присутствуют бактерии, ассимилирующие гексозы и пентозы (до 80-90%).

Путем биоконверсии можно утилизировать в одностадийном процессе отходы таких отраслей промышленности как целлюлозно-бумажная, пищевая, деревоперерабатывающая, текстильная, а также отходы сельского и коммунального хозяйства. Предлагаемые бактериальные ассоциации могут сбраживать закисленные стоки, поскольку являются толерантными к понижению рН. Технология биоконверсии может найти применение в различных отраслях промышленности в качестве дополнительной стадии утилизации целлюлозосодержащих отходов, использующей техническую базу основного производства, так как не нуждается в сложном оборудовании и специфических условиях. Рациональное использование производственных отходов позволит повышать как экономические, так и экологические показатели производства.

Поэтому исследования в области бактериальной конверсии возобновляемых природных ресурсов с использованием термофильных анаэробов являются на сегодняшний день весьма актуальными.

Настоящая работа посвящена разработке технологии утилизации целлюлозосодержащих материалов путем термофильной анаэробной биоконверсии, а также накоплению музея бактериальных культур для ее осуществления. Для достижения поставленной цели в ходе работы решались следующие задачи:

1.Выделение и первичная идентификация стабильных ассоциаций термофильных анаэробных бактерий, обладающих целлюлолитической активностью из различных природных источников, накопление музея термофильных анаэробных культур.

2. Селекция бактериальных ассоциаций различными методами для осуществления биоконверсии целлюлозосодержащего сырья.

3. Подбор методов хранения, гарантирующих стабильность видового состава бактериальных ассоциаций и технологических показателей культур.

4. Изучение влияния параметров культивирования на рост бактерий и выход продуктов брожения.

5. Анализ возможности утилизации различных видов целлюлозосодержащих отходов

Практическое значение работы. 1. Полученные ассоциации термофильных анаэробных бактерий обладают физиологическими свойствами, которые позволяют применять технологию биоконверсии для решения проблем:

• утилизации промышленных целлюлозосодержащих отходов;

• повышения усвояемости и пищевой ценности грубых кормов для сельскохозяйственных животных;

• использования малоценной сырьевой базы для получения ценных продуктов;

• обезвреживания отходов целлюлозно-бумажного производства;

• получения экологически чистого (незакисленного) лигнина — фармацевтического адсорбента, структуратора почв, а также субстрата для культивирования базидиомицетов.

2. Разработан технологческий процесс биоконверсии целлюлозосодержащих отходов с использованием селекционированных бактериальных культур.

Исследовано влияние параметров культивирования на метаболизм полученных культур: рН среды, температуры роста, перемешивания культуральной среды и потребность в факторах роста.

Предложен способ организации стадии ферментации с накоплением конденсата паров, позволяющий использовать тепло процесса ферментации и облегчающий выделение летучих продуктов биоконверсии.

Проведенные исследования позволяют дать рекомендации по организации промышленного процесса биоконверсии как дополнительной стадии к основному производству и подготовить материалы для проектирования

Работа выполнялась в МГУ инженерной экологии и ФГУП ГосНИИсинтезбелок. Часть работы, касающаяся выделение бактериальных культур и определения оптимальных параметров культивирования, выполнялась в 1999 году в соответствии с Межвузовской научно-технической программой «Биотехнология в Российских ВУЗах», возглавляемой РХТУ им. Д.И. Менделеева (Отчет по НИР «Разработка технологий биодеструкции нефтяных загрязнений, ультразвуковой обработки осадков сточных вод, биокаталитической обработки серосодержащих отходов и биоконверсии целлюлозосодержащих отходов», № государственной регистрации 01.99.0011012, инвентарный № 02.200002335).

В работе участвовали сотрудники аналитической лаборатории ФГУП ГосНИИсинтезбелок, проводившие анализы образцов культуральной жидкости на содержание этанола, органических кислот; сотрудник института экологии и эволюции им. А. Н. Северцова РАН и биологического факультета МГУ им. М. В. Ломоносова Ушакова Нина Александровна, любезно оказавшая содействие в изучении метода компьютерной морфометрии и оценке выделенных биоценозов на базе учебно-научного центра по компьютерному анализу изображений и автоматической морфометрии.

Основные публикации выполнены с соавторами Бирюковым В.В., Исаковой Е.П. и Поляковым А.Н. Исакова Е.П. осуществляла научное руководство биологической частью работы, в том числе экспериментами по выделению биоценозов, разделению их на монокультуры, а также экспериментами по селекции бактериальных ассоциаций. Поляков А.Н. участвовал в постановке задачи и оснащении экспериментальной установки, а также при разработке технологических приемов осуществления процесса биоконверсии. Бирюков В.В., как зав. кафедрой «Экологическая и промышленная биотехнология» МГУИЭ и зав. лабораторией ФГУП ГосНИИсинтезбелок принимал участие в обсуждении результатов и в формулировании задач исследования.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Зябрева, Надежда Владимировна

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ.

1. Выделены из различных природных источников и охарактеризованы смешанные и монокультуры термофильных бактерий, способные конвертировать целлюлозосодержащие материалы. Проведена первичная идентификация бактериальных штаммов.

2. На основе выделенных природных бактериальных культур селекционированы ассоциаций с улучшенными технологическими свойствами для конвертирования целлюлозосодержащих отходов, а также получения различных продуктов (этанола и органических кислот). Это позволило увеличить концентрацию этанола в культуральной жидкости до 11-20 г/л, а уксусной кислоты - до 6-7 г/л.

Для искусственного формирования ассоциации термофильных анаэробов из монокультур предложено соединять культуры родов Clostridium, Thermoanaerobium и Thermoanaerobacter для обеспечения стабильности новой ассоциации.

3. Предложены методы хранения как смешанных культур, так и монокультур, гарантирующие стабильность ассоциаций и сохранение физиологических свойств бактерий при хранении.

4. Изучено влияние условий культивирования - температуры, рН среды, факторов роста, перемешивания - на рост культур и их метаболическую активность. Показана возможность регулирования синтеза этанола и уксусной кислоты путем изменения величины рН питательной среды и температуры культивирования. Даны рекомендации по выбору питательной среды в зависимости от целевого назначения процесса культивирования.

Установлено, что этанол ингибирует выделенные бактериальные ассоциации. Уже при содержании более 5 % этилового спирта рост клеток снижается на 8-9 %. В то же время

188 уксусная кислота в изученном диапазоне концентраций не оказывает ингибирующего действия на бактерии.

Показано, что для процесса ферментации перемешивание не обязательно должно быть непрерывным, достаточно периодического включения мешалки, обеспечиваюш,его суспендирование твердой фазы.

5. Показано, что дробная подача нерастворимого субстрата в ферментационный объем повышает степень конверсии сырья на 50 %.

Предложен способ осуш,ествления ферментации с промежуточным накоплением конденсата паров этанола путем кратковременного вакуумирования среды, обеспечивающий повышение концентрации этанола в выходном продукте в 10-15 раз.

6. Изучены направления применения процесса биоконверсии для получения ряда продуктов: этанола, органических кислот, кормов повышенной усвояемости, препарата целлюлолитических ферментов. Предложены возможные схемы процессов утилизации различных промышленных, сельскохозяйственных и муниципальных целлюлозосодержащих отходов. Даны рекомендации по выбору рабочей смешанной культуры бактерий в зависимости от вида целлюлозосодержащего сырья, а также от типа целевого продукта.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Зябрева, Надежда Владимировна, Москва

1. Кислухина О.П., Кюдулас И.И., Биотехнологические основы переработки растительного сырья.- Каунас: Технология, 1997.-184с.

2. Шарков В. И. Гидролизное производство. Часть 1. М.: Гослесхозиздат. 1945. 288 с.

3. Чулков П.В. Моторные топлива: ресурсы, качество, заменители. Спрвочник.-М.: Политехника, 1998, 416 с.

4. Dunlap С. Е.//Biotech., Bioeng. Symp. № 5. 1975. P.218-223.

5. Синицын A.П., Гусаков А.В., Черноглазов В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов.- Издательство Московского Университета, 1995.-224 с.

6. Wilke С. R.//Biotech., Bioeng. 1976. V. 18. № 9. P. 1315-1323.

7. Cysewski G. R., Wilke C. R.// Biotechnol., Bioeng. 1977. V. 19. № 8. P. 1125-1143.

8. Shiotani Т., Yamane T.// Europ. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1982. V. 13. № 2. P. 96-101.

9. Calibo R. L., Matsumura M., Takahashi J., Kataoka H.// J. Perm. Technol. 1987. V. 65. № 6. P. 665-674.

10. M ller M., Pons M.-N.// J. Chem. Tech. Biotechnol. 1991. V. 52. P. 343-358.

11. Pham C. В., Motoki M. // J. Perm. Bioeng. 1989. V. 68. № 1. P.25.31.

12. Furnier R. L.// Biotech., Bioeng. 1986. V. 28. № 8. P. 12061212.

13. Keim Carroll R.//Enzyme Microbiol. Technol. 1983. V.5. № 2. P. 103 -104.

14. Enebo L. // Acta Chemica Scandinavica. 1949. V. 3. № 7. P. 975-981.

15. Wiegel J.// Experientia. 1980. V. 36. № 12. P. 1337-1458.

16. Методы общей бактериологии. В трех томах, т.1 /Под ред. Ф. Герхардта и др., М.:Мир, 1983.- 536 с, ил.

17. Логинова Л. Г. // Анаэробные термофильные бактерии. М.: Наука. 1982. 100 С.

18. Ng Т. К., Weimer Р. J., Zeikus J. G. // Arch. Microbiol. 1977. V. 114. № 1. p. 1 7 .

19. Zeikus J. G. // Ann. Rep. Fermentation Processes. 1982. V. 5. P. 263 -289.

20. Gates R.// Diss. Abstr. 1964. № 25. P. 2709-2714.

21. Первозванский В. В.// Микробиология. 1935. Т.4. № 2. С. 262-314.

22. МсВее R. H.//Bact. Rev. 1950. V. 14. Р. 51.

23. Enebo L. // Physiologia Plantarum. 1951. V. 4. P. 652 666.

24. Lee B. H., Blackburn J. H. // Appl. Microbiol. 1975. V. 30. № 2. P. 346 353.

25. Guiliano C. // Biotechnol. Lett. 1983. V. 5. № 6. P. 395 398.

26. Bender J. // Appl. Environ. 1985. V. 45. № 3. P. 475 477.

27. Zertuche L., Zall R. R. // Biotechnol., Bioeng. 1982. V. 24. № 1. P. 57-68.

28. Cooney С. L., Wang Б.1.С, Wang S.-D. et al. // Bioeng. Symp. № 8. Biotechnology in energy production and conservation. 1978. V. 20. P. 103 114.

29. Detroy R. W., Cunningham R. L., Bothast R. L. et al.// BiotechnoL, Bioeng. 1982. V. 24. № 5. P. 1105-1113.

30. Calleja G. В., Rick S. L., Nasim A. et al.// In: Abstr. 13th Intern. Congr. Microbiol. Boston (USA). 1982. P. 169.

31. Boyle M., Barron N., McHale A. P. // BiotechnoL Lett. 1997. V. 19. № 1. P. 49 51.

32. Gera R., Dhamija S. S., Gera T. et al. // BiotechnoL Lett. 1997. V. 19. № 2. P. 189 193.

33. Swings J., De Lay J. // Bacteriol. Rev. 1977. V. 4. № 1. P. 146.

34. Rogers P. L., Phil D., Lee K. J. et al. // Process Biochem. 1980. V. 15. № 6. P. 7-11.

35. Трансформация продуктов фотосинтеза. П / ред. М. Е. Бекера. Рига: Зинатне. 1984. С. 28-32, 39, 43-45, 94-95.

36. Arcuri Е. J. // BiotechnoL, Bioeng. 1982. V. 24. P. 595 -604.

37. Wiegel J. // J. Bacteriol. 1979. V. 139. P. 800 810.

38. Ng T. K., Ben-Bassat A., Zeikus J. G. // Appl. Environ. Microbiol. 1981. V. 41. № 6. P. 1337 1343.39. www.esd.ornl.gov/bf dp/doe ofd/9495 sum/ethan2.html.

39. Hsu E. J., Ordal Z. J. // J. Bacteriol. 1974. V. 102. № 2. P. 369 376.

40. Carreira L. H., Wiegel J., Ljungdahl L. G. // Bioeng. Symp. № 5. BiotechnoL for Fuels & Chemicals. 1984. P. 289-301.

41. Lee С. К., Ordal Z. J. // J. BacterioL 1967. V. 94. № 3. P. 530 535.

42. Lamed R., Zeikus J. G. // J. BacterioL 1980. V. 144. № 2. P. 569 -578.

43. Ben-Bassat A., Lamed R., Zeikus J. G. // J. BacterioL 1981. V. 146. № 1. P. 192 199.

44. Garcia-Martinez D. V., Shinmyo A., Madia A., Demain A. L. // Europ. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1980. V. 9. № 3. P. 189 197.

45. Aivasidis A., Wandrei C, Hilla E. // Bioprocess Engenieering. 1989. V. 4. P. 63 74.

46. Scopes R. K. // J. Australasyan Biotechnology. 1997. V. 7, № 5. P. 296 299.

47. Звягинцев Д. Г. Методы почвенной микробиологии и биохимии. М.: МГУ. 1991. 304 с.

48. Мусил Я., Новакова О., Кунц К, Современная биохимия в схемах. М.: Мир. 1984. 216 с.

49. Saraswathy V. Nochur, Roberts М. F., Demain A. L. // Biotechnol. Lett. 1993. V. 15. № 6. P. 641 646.

50. Лобанок A. Г., Бабицкая В. Г., Богдановская Ж. Н. Микробный синтез на основе целлюлозы. Белок и другие ценные продукты. Минск: Наука и техника, 1988. С. 180, 187-195, 199.

51. Romaniee М. Р. М., Fauth U., Kobayashi Т. et al. // Biochem. J. 1992. V. 283. P. 69 73

52. Wu J. H. D. // Synergism and interaction between C. thermocellum major cellulosome components, CelL and CelS. / http://www.er.doe.gov/production/bes/eb/al74.html

53. Morag е., Bayer E. А., Lamed R. // AppL Biochem. Biotech. 1992. V. 33. № 3. P. 205 217.

54. Swamy M. V., Ram M. S., Seenaya G. // Lett. Appl. Microbiol.1994. V. 18. № 6. P. 301 304.

55. Murzin A. G., Brenner S. E., Hubbard Т., Chothia С. // J. Molec. Biol. 1995. V. 247. P. 536 540.

56. Chauvaux S., Souchon H., Alzari P. M. et al. // J. Biol. Chem.1995. V. 270. № 17. P. 9757 9762.

57. Samain E., Lancelon-Pin €., Ferigo V. et al. // Carbohydr. Res.1995. V. 271. P. 217 226.

58. Ng T. K., Zeikus J. G. // J. Bacterio!. 1982. V. 150. № 3. P. 1391 1399.

59. Xianzhen Li, Ytmzhan Huang, Degui Xu et al. // BiotechnoL Lett. 1996. V. 18. № 2. P.205 210.

60. De Blois S., Wiegel J. // BiotechnoL Lett. 1995. V. 17. № 1. P. 89 94.

61. Sudha Rani K., Swami M. V., Seenayya G. // BiotechnoL Lett.1996. V. 18. № 8. P. 957 962.

62. Биоконверсия целлюлозы: микробиология и биохимия. П/ред. Манакова М. Н. ВИНИТИ. Серия: Биотехнология. Т. 11. 1988. С. 195 198.

63. Первозванский В. В. // Бродильная промышленность. 1933. №3. С. 7-12.

64. Ротмистров М. Н. // Микробиология. 1939. Т. 8. № 1. С. 5663.

65. Логинова Л. Г. и др. // Микробиология. 1962 .Т. 31. № 7. С. 1082 1086.

66. Avgerinos G. С, Fang H. Y., Biocic I., Wang D. I. C. // In: Proc. 6th Fermentation Symp. London (Canada), Pergamon Press, 1980. V. 2. P. 119 124.

67. Weimer P. G., Zeikus J. G. // Appl. Environ. Microbiol. 1977. V. 33. № 2. P. 289 297

68. Sudha Rani К., Swamy N. Y., Sunitha D., Seenaya G. // Biotechnol. Lett. 1994. V. 16. № 2. P. 201 204.

69. Matsui S., Konno Y., Matsumoto M. et al. // Nippon Kagaku Kaishi. 1992. Iss. 5. P. 517 526.

70. Daniels L., Zeikus J. G. // Appl. Environ. Microbiol. 1975. V.29. № 3. P. 710 711.

71. Егоров H. C. Практикум по микробиологии. M.: Изд-во МГУ, 1976. С. 195

72. Hungate R.E. // Bact. Rev. 1950. V. 14. P. 1.

73. Wandrey С, Aivasidis A. // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1985. Ill -413. P. 489 500.

74. Lovitt t.W., Longin R., Zeikus J.G. // Appl. Environ. Microbiol. 1984. V. 48, № 1, P. 171 177

75. Larsen L., Nielsen P., Ahring B.K. // Arch. Microbiol. 1997. V. 168. P. 114 119.

76. Мишустин E.H., Емцев В.Т. Микробиология. M.: Колос, 1978. C351 с ил.

77. Имшенецкий A.A. Микробиология целлюлозы. М.: Издательство академии наук СССР. 1953. 440 с.

78. Wiegel L, Ljungdahl L.G. // Arch. Microbiol. 1981. V.128. P. 343-348.

79. Klapatch T.R., Hogsett D.A.L., Sunita В., Sunita P.,Lynd L.R. // Appl. Biochem. Biotech. 1994. V. 45. № 46. P. 209 223.

80. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т./ Под ред. Дж. Хоулта, И. Крита и др.- М.: Мир, 1997.-432 с, ил.

81. Palo v., Ilkova H. // J. Chromatographic. 1970. V.53. № 2. P.363-367.

82. Емельянова И. 3. Химико-технологический контроль гидролизных производств. М.: Лесная пром., 1969. С.41.

83. Максименко O.A., Зюкова Л.А., Федорович P.M. // Прикл. биохимия и микробиология. 1975. Том 11. № 1. С. 6 11.

84. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии.-М.: Агропромиздат, 1987.-239 с.

85. Гнеденко Б.В. Курс теории вероятностей.-М.-.Наука.-1988.448с.

86. Яровенко В. Л. Основные закономерности непрерывного спиртового и ацетонобутилового брожения. М.: Пищевая пром., 1976. 101 с.

87. Mandeis M., Hontz L., Nystrom J. // Biotechnol.& Bioeng. 1974. V. 16. № 5. P. 1471 -1478.

88. Strobel H.J., Caldwell F.C., Dawson K.A. // Appl. Environ. Microbiol. 1995. V. 61, № 11, P.4012 4015

89. Ферментативное расщепление целлюлозы. П/ред Опарина А.И. М.:Наука, 1967. 112 с.

90. С. Дж.Перт Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978.-331с., ил.

91. Мельник М. С, Рабинович М. Л., Возный Л. В. // Биохимия. 1991. Т 56. № 10. С. 1787 1798

92. Kadam P.C., Boone D.R. // Appl. Environ. Microbiol. 1996. V. 62, № 12, P. 4486 4492.

93. Cook G.M., Kussel J.B., Reichert A., Wiegel J. // Appl. Environ. Microbiol. 1996. V. 62, № 12, P.4576 4579

94. Биоконверсия целлюлозосодержащего сырья. П/ред Володина B.B. Труды Коми научного центра УрО РАН, № 125. Сыктывкар, 1992. 72 с.

95. Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.:Наука, 1985.-290с.

96. Плановский А.Н., Николаев П.И. Процессы и аппараты химической и нефтнхимической технологии. М.: Химия, 1987. 496с.

97. Стренк Ф. Перемешивание и аппараты с мешалками. Л.: Химия, 1975. 384 с.

98. Кошкин Н.И., Ширкевич М.Г. Справочник по элементарной физике. М.: Наука, 1966. 248 с.

99. Справочник химика. П/ред. Никольского Б.П. М.: Химия, 1966.976 с.

100. Итоги науки и техники, П/ред. Нестерова П.В. ВИНИТИ Серия: Биотехнология. Том 12. 1988. С 154.

101. Климовский Д.П., Стабников В.П. Технология спиртового производства. М.: Пищепромиздат, 1950. 448с.

102. Шифр работы, присвоенный организацией12327 Ыаи> еноаанне работы

103. Сокращенное наименование министерства (ведомства)f'l-HOOD РФ 51 Ирлнрс наименование организации "*^v.v-i2754 Рород-Москва52403 код'ВНТИЦ01 (р'ьсг Mc. ai> 7.pM•.'ОСКОБСКИЙ государственный университет-.инженерной экологии

104. Сокращенное наименование организации 55 Адрес организации1. МГУИЭ107884, Москва, Старая Басманная, 21/41. Л3 Авторы отчета