Противостафилококковая активность (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов

Райкова, Светлана Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Противостафилококковая активность (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Противостафилококковая активность (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов"

Райкова Светлана Владимировна

ПРОТИВОСТАФИЛОКОККОВАЯ АКТИВНОСТЬ (НИТРО)ФУРФУРИЛИДЕНСОДЕРЖАЩИХ ГЕКСАГИДРОИНДАЗОЛОВ

03.00.07-микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов-2005 год

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Шуб Геннадий Маркович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник

доктор медицинских наук, профессор

Бойко Андрей Витальевич

Зайцева Ирина Александровна

Ведущая организация:

Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт

2005 г. в

-/3

на заседании

Защита диссертации состоится диссертационного совета Д 208.078.01 по присуждению ученой степени доктора (кандидата) наук при Российиском научно-исследовательском противочумном институте «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Университетская, 46

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского научно-исследовательского противочумного института «Микроб»

Автореферат разослан

« /-/»2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, старший научный сотрудник

Слудский А А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Проблема гнойно-воспалительных заболеваний (ГВЗ) продолжает привлекать внимание специалистов разного профиля. Высокая частота внугрибольничного инфицирования, удлинение сроков госпитализации с соответствующим удорожанием и ухудшением результатов лечения, высокий процент летальности определяют неослабевающий интерес к этой проблеме, имеющей не только медицинское, но и социально-экономическое значение.

Распространенность ГВЗ, вызванных грамположительными микроорганизмами, возрастает во всем мире (Яцык Г.В., Бомбардирова Е.П., 2000; Real T.M., 1999, Chang S С. et al., 2000; Shopsin В. et al., 2000). Среди последних, несомненно, ведущее место занимают стафилококки (Митрохин С.Д; 2003, Fluit A.C., 2001). Они являются патогенами, демонстрирующими выраженную способность к формированию устойчивости к антимикробным препаратам, используемым в клинической практике. К сожалению, тенденция роста резистентности бактерий имеет прогрессирующий характер (Яковлев СВ. с соавт., 2001; Rubin R.J. et al., 1999).

, Особую важность представляет собой распространение стафилококков, резистентных к' метициллину (или оксациллину). В настоящее время метициллинорезистентные стафилококки (MRS) рассматриваются в качестве одного из ведущих нозокомиальных патогенов (Зайцев А.А. с соавт., 2003). Весьма тревожным фактом является появление стафилококков со сниженной чувствительностью к ванкомицину (Hiramatsu К. et. al., 1997; Rasooly A., Weisz A., 2002; Bell J.M. et al., 2002 и др.). Эти перечисленные особенности стафилококков являются причиной существенного ограничения выбора антибактериальных препаратов для лечения инфекций, вызванных такими штаммами микроорганизмов и необходимости поиска путей и средств преодоления антибиотикорезистентности стафилококков.

Для борьбы с развитием лекарственной устойчивости стафилококков возможны разные пути: предупреждение формирования и ограничение распространения лекарственноустойчивых популяций, снижение уровня уже сформировавшейся резистентности, использование антимикробных препаратов, относящихся к разным классам химиотерапевтаческих средств (Яковлев В.П., Яковлев СВ., 2001; Страчунский Л С, 2002).

Кроме перечисленных, одним из перспективных путей преодоления лекарственной устойчивости бактерий, является поиск и внедрение в практику новых антибактериальных агентов, в том числе с отличным от широко применяемых антибиотиков строением и механизмом действия. К их числу относятся и производные 5-нитрофурана, на основе которых был создан ряд высокоактивных противомикробных средств (Алексеева Л.Н., 1963, ШеришоринаСИ., 1968).

По сравнению с другими антимикробными средствами, препараты нитрофуранового ряда имеют ряд преимуществ. Обладая широким спектром антимикробной активности, они существенно не влияют на общую иммунологическую реактивность макроорганизма (Шуб Г.М., 1965), усиливают поглотительную активность фагоцитирующих клеток (Проскуров В А., 1974) и клеток ретикуло-эндотелиальной системы (Шуб Г.М. с соавт., 1970). Кроме того, стоимость большинства этих препаратов невелика, что немаловажно при их массовом применении. Нитрофураны (кроме фуразолидона) имеют небольшую молекулярную массу (157-297 Дальтон), благодаря чему легко проникают через стенки кровеносных и лимфатических сосудов, а также гематоэнцефалический барьер, что выгодно отличает их от антибиотиков. Как вещества с низкой молекулярной массой, нитрофураны менее активны как возможные аллергены.

В медицинской практике препараты нитрофуранового ряда получили наибольшее распространение в 60-70-х гг. Однако, и в настоящее время, несмотря на создание новых

антибиотиков, данные соединения не утратили своего значения, т.к. нитрофураяы эффективны против антибиотико- и сульфаниламидоустойчивых штаммов возбудителей Об этом также свидетельствуют результаты исследований А В Чернышкова (2003), отметившего, что 90-98% S. flexneri и S. sonnei сохраняют чувствительность к нитрофурантоину.

Тем не менее, развитие устойчивости к препаратам нитрофуранового ряда является вполне реальным, о чем свидетельствуют результаты исследований Т.И. Турлуповой (1974), Олениной НА. (1982) и др.

Учитывая вышеизложенное, поиск веществ с антимикробной активностью в ряду серу-, азот- и кислородсодержащих гетероциклов и изучение их антимикробной активности, в том числе и в отношении стафилококков, является достаточно актуальной задачей, определившей необходимость проведения настоящего исследования и позволившей сформулировать его цель и задачи.

Цель исследования

Изучить антимикробное действие новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов и провести углубленное исследование выявленных среди них средств обладающих противостафилококковой активностью.

Задачи исследования

1) Изучить противомикробную активность в отношении основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний, в том числе, стафилококков новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов.

2) На клинических штаммах стафилококков - возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний изучить антимикробную активность отобранных по результатам первичного скрининга соединений.

3) Провести сравнительный анализ антистафилококковой активности отобранных соединений с коммерческим препаратом нитрофуранового ряда (фуразолидон) и с одним из цефалоспоринов III поколения (цефатоксим натриевая соль), часто используемыми для лечения стафилококковых инфекций.

4) Определить оптимальные условия проявления противостафилококковой активности этих соединений и изучить влияние на некоторые биологические свойства стафилококков.

5) С использованием микробиологических показателей изучить влияние отобранных соединений на функциональное состояние нормальной микрофлоры кишечника белых мышей.

6) На модели экспериментальной стафилококковой инфекции белых мышей дать оценку химиотерапевтической эффективности отобранных соединений.

Научная новизна

В работе впервые дана характеристика антимикробной активности новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов в отношении тест-штаммов S.aureusATCC29213, E.coliATCC25922, P. aerugmosa ATCC 27853, P. mirabilis 20 - представителей наиболее частых возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний. Отобраны 2 активных в отношении стафилококков соединения (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов: 2,3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,3а,4,5,6,7-гексагидроиндазол (лабораторный шифр 19) и 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексащдро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26), Показана их высокая, не уступающая фуразолидону и близкая цефатоксиму натриевой соли, антимикробная активность в отношении клинических штаммов стафилококков.

Установлено, что на проявление противостафилококковой активности соединений 19 и 26 оказывает влияние концентрация микробных тел, присутствие в среде биологических субстаратов (крови и сыворотки крови) в концентрациях 5 и 10%.

Показано, что популяции стафилококков гетерогенны по признаку чувствительности к соединению 26.

Представлены данные об отсутствии влияния соединения 26 на колонизационную резистентность кишечника белых мышей.

Впервые дана оценка химиотерапевтической эффективности соединения 26 при экспериментальной стафилококковой инфекции.

Практическая значимость

Результаты проведенного исследования позволили впервые охарактеризовать антимикробную активность оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов, выявить среди них и изучить вещества с выраженной противостафилококковой активностью, оценить их химиотерапевтическую эффективность при экспериментальной стафилококковой инфекции и рекомендовать их для углубленного изучения в качестве потенциальных средств химиотерапии стафилококковых инфекций.

Полученные результаты исследований охраноспособны. На соединение с лабораторным шифром 26 подана заявка на патент РФ. Регистрационный номер 2005100679 от 17.01.05.

Результаты проведенных исследований позволяют проводить направленный синтез в ряду серу-, азот- и кислородсодержащих гетероциклических соединений производных гексагидроиндазолов веществ с антимикробной активностью, а вещества с лабораторным шифром 19 и 26 рекомендовать для углубленного лабораторного и доклинического изучения в качестве возможных средств этиотропной химиотерапии стафилококковых инфекций.

По материалам диссертации подготовлены и изданы методические рекомендации «Изучение антимикробной активности новых химических соединений», предназначенных для студентов факультета медико-профилактическое дело и фармацевтического факультета (утверждено на ЦКМС СГМУ, выписка из протокола №5 от 20.01.05).

Результаты диссертационной работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий на факультетах Саратовского государственного медицинского университета, Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского, Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова.

Основные положения выносимые на защиту:

1. При изучении антимикробного действия (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов выявлена противостафилококковая активность 3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,3а,4,5)6,7-гексагидроиндазола и 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазола (соединения 19 и 26).

2. Показана высокая активность,3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За>4,5,6,7-гексагидроиндазола и 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазола в отношении штаммов стафилококков клинического происхождения, в том числе метициллинорезистентных.

3. Установлено, что противостафилококковая активность 2,3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3)3а,4,5,6,7-гексагидроиндазола и 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазола находится в обратной зависимости от величины микробной нагрузки и не зависит от изменений рН в диапазоне 6,0-8,0, а также наличия в среде биологических субстратов (крови или сыворотки) в концентрации не более 1%.

4. Обнаружено, что при энтеральном введении (3 и 6 дней по 50 и 100 мкг/кг) соединение 26 не оказывает влияния на антагонистическую функцию нормальной микрофлоры кишечника белых мышей.

5. Установлено, что соединение 26 при введении в течение 3-х дней в дозах 20 и 10 мкг/кг оказывает выраженный химиотерапевтический эффект при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции, вызванной внутрибрюшинным заражением белых мышей.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях Саратовского государственного медицинского университета «Молодые ученые - здравоохранению региона» (Саратов, 2003., 2004.); V Российской конференции «Современные проблемы антимикробной химиотерапии» (Москва, 2003.); VI Российской конференции «Современные проблемы антимикробной химиотерапии» и 11th Scientific Meeting European Society of Chemotherapy Infection Diseases (Москва,2004.); Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век» (Саратов, 2004.); X Всероссийской конференции «Карбонильные соединения в синтезе гетероциклов» (Саратов,2004.); Научно-практической конференции с международным участием «Роль клинической микробиологии в профилактике внутрибольничных инфекций» (Москва,2004.); 2nd Internetional Symposium " Resistant Gram-Positive Infections" (Берлин, Германия, 2004).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертации изложена на 179 листах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, заключения, практических рекомендаций, выводов, списка использованной литературы, включающего 254 источника, из них 136 отечественных и 118 иностранных авторов, и приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами, 19 рисунками и 6 фотографиями.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Штаммы микроорганизмов и питательные среды, использованные в работе. В

работе были использованы стандартные тест-штаммы Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus mirabilis 20 из коллекции живых культур кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией Саратовского государственного медицинского университета, клинические штаммы стафилококков, выделенные от больных с гнойно-воспалительными заболеваниями, находившихся на лечении в различных стационарах гг. Саратова, Энгельса в 2002 - 2004 годах. Выделение и идентификация клинических штаммов стафилококков проводили в соответствии с Приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 и рекомендациями А.К. Акатова и B.C. Зуевой (1983).

Определение метициллинорезистентности всех штаммов стафилококков проводили в соответствии с методическими рекомендациями Межрегиональной ассоциации по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии (МАКМАХ) (1999).

Для культивирования микроорганизмов использовались: желточно-солевой агар, мясо-пептонный бульон, (производства НИИ «Питательная среда» г. Махачкала, Дагестан),

среда Эндс (производства ФГУП Государственный научный центр прикладной микробиологии, г. Оболенск) мясо-пептонный агар (производства ННПЦ ГИП г. Оболенск).

Вещества и препараты, использованные в работе. Объектом исследования явились 27 оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и замещенных гексагидроиндазолов на их основе, синтезированных в лаборатории гетероциклических соединений кафедры органической и биоорганической химии СГУим. Н.Г. Чернышевского. Все исследованные вещества представляют собой негорючие порошки, не имеющие запаха, с цветовыми оттенками от светло-желтого до темно-коричневого. Они умеренно растворимы в воде, хорошо растворимы в органических растворителях - диметилформамиде (ДМФА), диметилсульфоксиде (ДМСО).

Для приготовления рабочих растворов навеску изучаемого вещества (10 мг) растворяли в 1 мл ДМФА (до концентрации 10000 мкг/мл), а затем из исходного раствора микропипеткой забирали 0,1 мл и вносили в 0,9 мл мясо-пептонного бульона. Таким образом получали растворы с концентрацией препарата 1000 мкг/мл и содержанием растворителя 10%. При дальнейшем приготовлении рабочих растворов содержание растворителя снижалось, и при концентрациях 160,0 - 0,08 мкг/мл (в этом диапазоне минимальных концентраций проявлялось антимикробное действие препаратов) концентрация растворителя составляла от 3,2 до 0,002% и не влияла на чистоту экспериментов, что было подтверждено специально проведенными контрольными исследованиями.

В работе использованы коммерческие препараты: фуразолидона производства "OlainFaim" Латвия и антибиотиков - цефотаксима натриевой соли производства ОАО «Красфарма» г. Красноярск, оксациллина натриевой соли производства ОАО «Биосинтез» г. Пенза, рифампицин фирмы ЗАО «Брынцалов-А».

Определение антимикробной активности препаратов. • Определение чувствительности бактерий ко всем исследуемым соединениям, антибиотикам и фуразолидону проводилось методом двукратных серийных разведений в мясо-пептонном бульоне рН 7,2-7,4, содержащих различные концентрации изучаемых соединений или препаратов сравнения. В ряд последовательных двукратных серийных разведений содержащих от 160,0 до 0,08 мкг/мл соответствующего препарата (дополнительно готовили среды, содержащие соединения в концентрации 100 мкг/мл), вносили взвесь суточных агаровых культур бактерий в количестве 2*105КОЕ/мл. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 24 часов. Количество вещества в последней пробирке с отчетливо выраженной задержкой роста расценивалось как минимальная ингибирующая концентрация (МИК) для испытываемого штамма и определяло уровень его чувствительности к данному соединению. Опыт сопровождался двумя контролями: посев культуры в мясо-пептонный бульон (МПБ) без препарата и посев культуры в бульон содержащий максимальное количество ДМФА (3,2%), использовавшееся в ряду разведений.

Изучение влияния микробной нагрузки на противостафилококковую активность исследуемых соединений 19 и 26 проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ). При этом, кроме стандартной микробной нагрузки 2-105КОЕ/мл использовались следующие дозы: 2-Ю',2-Ю3, 2» 10* 2-Ю6,2-Ю7,2-Ю8 КОЕ/мл. В экспериментах были использованы клинические штаммы S. aureus 13 ЗС, S. aureus 24 ЗС, S.aureus 6У, S.aureus 9733, S.epidermidis 20Э, S.epidermidis 1517 и стандартный штамм S.aureus ATCC29213.

Изучение влияния концентрации ионов водорода (рН) на противостафилококковую активность соединений 19 и 26 определяли стандартным методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде при микробной нагрузке 2*10 КОЕ/мл. В качестве питательной среды использовались серии МПБ с рН 6,0, 7,0, 7,5, 8,0. В этой серии экспериментов были использованы указанные выше штаммы.

Изучение влияния биологических субстратов (крови или сыворотки) на противостафилококковую активность соединений 19 и 26 проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ) рН 7,2-7,4, при

микробной нагрузке равной 2-Ю5 КОЕ/мл. Указанные биологические субстраты добавляли в питательные среды в концентрациях 1%, 5% и 10%. После суточного инкубирования в термостате (37°С) определяли минимальные ингибирующие концентрации. Контролем служило значение МИК для соединений 19 и 26 в МПБ без этих биологических субстратов. В этой серии экспериментов были использованы указанные выше штаммы стафилококков.

Изучение динамики развития популяций штаммов стафилококков в средах, содержащих разные концентрации соединения 26 проводили путем посева смывов суточных агаровых культур штаммов стафилококков (S.aureus 24 ЗС, S. aureus 6У, S.aureus 9733, S.epidermidis 1517 и стандартного штамма S.aureus ATCC 29213) го расчета 2*105 м.т./мл в МПБ рН 7,2-7,4, содержащего 0,5 МИК или 1 МИК соединения 26 для того или иного штамма или не содержащего его. Посевы инкубировали в термостате при 37°С в течении 24 часов. До начала инкубации и через 2, 4, 6, 8, 12 и 24 часа культивирования отбирали пробы для измерения оптической плотности среды на спектрофотометре при длине волны 560 нм. Данный метод является стандартным при измерении роста бактерий в жидкой питательной среде (Методы...., 1983). Одновременно с этим из каждой пробы после предварительного разведения физиологическим раствором до 10*3-10*9 делали высев на чашки с мясо-пептонным агаром. После суточного инкубирования в термостате при 37°С подсчитывали количество выросших на чашках колоний. Эта величина КОЕ, равно как и величина оптической плотности, характеризовали развитие популяций бактерий в тот или иной временной отрезок в среде с различными концентрациями соединения или без него.

Изучение влияния соединения 26 на покоящиеся клетки стафилококков

определяли стандартными методами (Методы .... , 1983). Для этого смывы суточных агаровых

культур штаммов стафилококков (S.aureus 24 ЗС, S.aureus 6У, S.aureus 9733, S.epidermidis 1517и стандартного штамма S.aureus ATCC29213) засевали в МПБ содержащий 1 МИК соединения 26 для того или иного штамма или не содержащего его. Посевы помещали в холодильник на 48 часов. В начале опыта и через 2, 4, 8, 12,24 и 48 часов культивирования из каждой колбы, отбирали пробы и проводили измерение их оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 560 нм. Одновременно с этим содержимое этих проб разводили физиологическим раствором в 1000 раз и делали мерный высев на чашки с мясо-пептонным агаром. После суточного инкубирования в термостате при 37° С подсчитывали количество выросших колоний. Эта величина КОЕ, так же как и оптическая плотность, характеризовала численность популяций бактерий в тот или иной временной отрезок в среде с 1 МИК соединения 26 и без него.

Изучение гетерогенности популяций стафилококков по признаку чувствительности к соединению 26. Изучение популяционной чувствительности стафилококков к исследуемым соединениям проводили с использованием метода отпечатков, предложенного Дж Ледерберг и Э. Ледерберг (1965). Изучаемые штаммы стафилококков предварительно подвергали десятикратному рассеву из одной колонии на чашках с желточно-солевым агаром. Из последней, 10-ой генерации по одной колонии отсевали на скошенный агар (МПА). После суточного инкубирования в термостате при 37°С го культуры со скошенного агара готовилась взвесь бактерий, содержащая 10 КОЕ/мл, которая разводилась до концентрации 500 КОЕ/мл. На чашку-матрицу с мясо-пептонным агаром (МПА) наносили по 0,2 мл такой взвеси и шпателем равномерно распределяли по всей поверхности чашки. После суточного инкубирования в термостате (37° С) на чашке-матрице вырастали колонии исследуемой культуры стафилококков. С этой чашки, с помощью стерильного штампа-репликатора делали отпечатки на чашки, меченные в определенной точке для последующей ориентации, содержащие 0,25, 0,5, 1, 2, и 4 МИК изучаемого соединения и без него. После инкубирования в течение 24 часов в термостате при 37°С проводился подсчет числа выросших колоний-реплик на всех засеянных чашках." Полученные численные значения выражались в процентах, при этом количество колоний на чашке без соединения 26 принималось за 100%.

Определение острой токсичности соединения 26 проводили путем однократного и повторного на протяжении 7 дней внугрибрюшинного введения белым мышам массой 20+2 г. различных доз препарата, согласно рекомендациям М.Д. Машковского, Н.Г. Першина (1971). В связи с низкой растворимостью соединения 26 в воде его предварительно растворяли в ДМФА, а затем добавляли дистиллированную воду до создания необходимой концентрации. Препарат вводили внутрибрюшшшо в виде мелкодисперсной взвеси. Животных наблюдали в течение 10 дней, учитывая количество погибших и выживших мышей. Величину LD5o рассчитывали по методике И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева (1962). Мышам контрольной группы вводили ДМФА без изучаемого соединения в объеме, использовавшемся для приготовления взвеси соединения 26.

Для изучения влияния соединения 26 на колонизационную резистентность толстого кишечника белых мышей определяли длительность выделения рифамшщинустойчивого штамма E.coli М-17 Rif (из коллекции живых культур кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией СГМУ) после 3-х или 6-ти дневного энтерального введения изучаемого вещества белым мышам в дозах 50 мг/кг или 100 мг/кг массы. Исследуемое соединение в виде мелкодисперсной взвеси в 0,1 мл физиологического раствора вводили перорально с помощью канюли. Продолжительность выделения из толстого кишечника мышей индикаторного штамма оценивали путем ежедневных мерных высевов испражнений животных опытных и контрольных групп на среду Эндо, содержащую рифампицин в концентрации 50 мкг/мл.

Изучение химиотерапевтической активности соединения 26 при экспериментальной стафилококковой инфекции проводили путем внутрибрюшинного заражения белых мышей сублетальной дозой штамма S.aweus 1-Ом, равной 800 млн КОЕ. Этот штамм был выделен из гнойного отделяемого ожоговой раны и был отнесен к MRSA, обладал гемолитической и лецитиназной активностью. МИК соединения 26 в отношении этого штамма была равна 2,5 мкг/мл, LDso этого штамма равнялась 1,123 млрд КОЕ. Взятые в опыт мыши были разбиты на 3 группы. Животные первой опытной группы получали соединение 26 в дозах 20, 10 или 5 мг/кг массы одновременно, второй опытной группы -через 24 часа после заражения 1 раз в сутки в течение 3 дней. Третью (контрольную) группу составили животные не получавшие препарата. В связи с низкой растворимостью соединения 26, его вводили в виде мелкодисперсной взвеси в объеме 0,2 мл физиологического раствора. На 2-ой, 4-ый, 6-ой, 8-ой, 10-ый день после заражения из опытной и контрольной групп эфиром умерщвляли по 5 мышей. Их трупы вскрывали и делали высевы на желточно-солевой агар (ЖСА) из содержимого брюшной полости, крови, а также посевы - отпечатки из селезенки, печени и легких. Одновременно оценивали макроскопические изменения в органах зараженных животных. По методике В.Л. Троицкого (1950) определяли бактерийный индекс селезенки (БИС). С этой целью извлеченную селезенку растирали в стерильной фарфоровой ступке с постепенным добавлением 10 мл бульона. Полученную взвесь помещали в пробирку и обозначали как 10'1. Из этого разведения готовили ряд десятикратных разведений в бульоне (до 10'10) в объеме 5,0 мл. Полученный ряд разведений помещали в термостат при 37°С на 24 часа, после чего отмечали наличие или отсутствие роста. Наибольшее разведение взвеси ткани селезенки давшее рост и определяло величину бактерийного индекса селезенки. Химиотерапевтическую эффективность оценивали по величине БИС и по результатам высевов из органов, по сравнению с результатами в контрольной группе.

Результаты исследований и их обсуждение

Скрининговое изучение антимикробной активности 27 новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов в отношении стандартных штаммов наиболее частых возбудителей гнойно-воспалительных инфекций показало, что данные соединения в различной степени

угнетают рост культур стафилококка, протея, кишечной и синегнойной палочек, а 2 соединения (нитро)фурфурюшденсодержащих гексагидроиндазолов. 2,3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,3а,4,5,6,7-гексагадроиндазол (лабораторный шифр 19) и 3-(5-нр1трофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4Д6,7-гексагидро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26), содержащие в своей химической структуре соответственно 1 и 2 нитрофурановых цикла, обнаружили высокую (1,25 мкг/кг) активность в отношении стандартного штамма стафилококков ^аигеш АТСС 29213), что представляет определенный интерес в связи со значимостью данных микроорганизмов в этиологии гаойно-восп&чительных заболеваний.

Основываясь на результатах первичного скрининга, было проведено подробное изучение противостафилококковой активности 2,3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,3а,4,5,6,7-гексагидроиндазола и 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазола и сравнение ее с таковой близкого по химическому строению, достаточно активного в отношении стафилококков препарата нитрофуранового ряда -фуразолидона и антибиотика - цефатоксима, широко применяемого в настоящее время при лечении стафилококковых инфекций.

Антимикробная активность указанных соединений была изучена на 105 клинических штаммах стафилококков, выделенных от больных, находившихся на лечении в различных стационарах гг. Саратова и Энгельса. Среди использованных штаммов 81 был идентифицирован как Saureus, а 24 - как S.epidermidis. При этом, 16 штаммов (15 - З.аигвт и 1 - S.epidermidis) были метициллинорезистентные.

Установлено, что МИК соединения 26 для 86,7% изученных штаммов стафилококков не превышала 10 мкг/мл. Чувствительность стафилококков к соединению 19 была несколько ниже: для 80% штаммов МИК не превышала 20 мкг/мл, а штаммов, для которых МИК не превышала 10 мкг/мл оказалось 54,3% Минимальное значение МИК соединения 26 составило 0,08 мкг/мл (для 1,9% штаммов), в то время как для соединения 19 минимальное значение МИК равнялось 0,31 мкг/мл (0,9% культур). Максимальное значение МИК соединения 26 и соединения 19 не превысило 80 мкг/мл

МИК фуразолидона для 88,6% штаммов стафилококков не превышала 10 мкг/мл. Максимальное значение МИК фуразолидона, так же как и максимальные значения МИК соединений 19 и 26 было равно 80 мкг/мл, однако минимальное значение МИК фуразолидона было выше такового соединений 19 и 26, и оказалось равным 1,25 мкг/мл.

МИК цефатоксима для 88,7% изученных штаммов была равна 20 мкг/мл, в то же время минимальное значите МИК этого антибиотика составило 1,25 мкг/мл, а максимальное значение оказалось равным 160 мкг/мл (для 4,7% штаммов) (рис 1).

5! М

0,1» 0,16 0,31 0,62 1,25 2,5 5 10 20 40 80 160 МИК мкг/мл

□ соединение 26 соединение 19 1 фуразолндон О цефатоксим -

Рис. 1. Количественное распределение клинических штаммов стафилококков по величине МИК испытанных препаратов

Антимикробная активность соединения 26 была выше, чем у соединения 19 и препаратов сравнения. Показательными в этом отношении являются значения МИК50 изученных антимикробных средств (табл. 1).

Таблица 1

Противостафилококковая активность (МИКэд) соединений 26,19, фуразолидона и цефатоксима натриевой соли

Название соединения Значения МИКя (мкг/мл)

Штаммы S. aureus Штаммы S.epidermidis Staphyloccus spp.

Соединение26 1,19 1,15 1,17

Соединение 19 10,09 3,97 6,71

фуразолидон 3,33 3,75 3,60

цефатоксим 1,79 1,72 1,75

Таким образом, по своей противостафилококковой активности соединение 26 превосходит, а соединение 19 приближается к активности фуразолидона и цефатоксима. S. epidermidis, являются более чувствительными к изученным соединениям, чем S. aureus.

При определении антимикробной активности в отношении метициллинорезистентных штаммов стафилококков было установлено, что все метициллинорезистентные клинические штаммы стафилококков были чувствительны к исследуемым соединениям 19 и 26 (МИК50 равнялись 12,42 и 3,86 мкг/мл).

При изучении влияния некоторых условий и факторов культивирования на противостафилококковую активность соединений 19 и 26 было установлено следующее.

1. Имеется прямая зависимость между концентрацией стафилококков в питательной среде и величиной МИК соединений 26 (табл. 2) и 19. При этом, высокочувствительные к изучаемым соединениям штаммы имели тенденцию к значительно большей зависимости от величины микробной нагрузки по сравнению с умеренно чувствительными штаммами, которые проявляли меньшую зависимость от величины этого показателя.

Таблица2

Минимальные ингибирующие концентрации (мкг/мл) соединения 26 при различных значениях величины микробной нагрузки

Штаммы Микробная нагрузка (КОЕ/мл)*

2'102 2»103 2«104 2-Ю5 2«106 2-Ю7 2'108

S. aureus 13 ЗС 0,08/8 0,16/4 0,62/1 0,62 0,62/1 OS/2 2,5/4

S. aureus 24 ЗС 10/2 20/1 20/1 20 20/1 40/2 40/2

S. aureus 6У 1,25/2 2,5/1 2,5/1 2,5 2,5/1 2,5/1 5/2

S. aureus 9733 40/1 40/1 40/1 40 40/1. 80/2 80/2

S. epidermidis 20Э 0,04/8 0,16/2 0,31/1 0,31 1,25/4 2,5/8 5/16

S. epidermidis 1517 0,62/4 1,25/2 2,5/1 2,5 2,5/1 2,5/1 5/2

S. aureus ATCC 29213 0,31/4 0,62/2 1,25/1 1,25 1,25/1 2,5/2 2,5/2

*в знаменателе указана кратность изменения МИК по сравнению со значением МИК при стандартной микробной нагрузке, в числителе величина МИК.

2. При изучении влияния концентрации ионов водорода (рН) на противостафилококковую активность соединений 19 и 26 обнаружено, что изменение рН среды в диапазоне 6,0 - 8,0 не влияет на противостафилококковую активность указанных соединений

3. При изучении влияния биологических субстратов (крови или сыворотки) на противостафилококковую активность соединений 19 и 26 выявлено, что наличие в среде 1%" сыворотки или крови не влияет на активность соединений 19 и 26 в отношении стафилококков Добавление 5% сыворотки или крови приводило к повышению значения МИК указанных соединений для ряда штаммов в 2 раза, а 10% сыворотки или крови - в 2 - 4 раза (в табл. 3 приведены результаты для соединения 26)

Таблица 3

Влияние добавления в питательную среду (МПБ) крови или сыворотки крови на противостафилококковую активность соединения 26

Биологический субстрат Коииент рация (%) Значения минимальной нигибирующеи концентрации соединения 26 для штаммов стафилококков (мкг/мл) *

Керакг- Заигеш &аигеиI Б.ерфг- Х.аигет

тиШ 13 ЗС А ТСС тЫЬ 24 ЗС 1бУ 9733

20Э 29213 1517

1 0,31/1 0,62/1 1,25/1 2,5/1 20/1 2,5/1 40/1

сыворотка 5 0,62/2 0,62/1 1,25/1 2,5/1 20/1 2,5/1 40/1

10 1,25/4 1,25/2 2,5/2 5/2 40/2 5/2 40/1

1 0,31/1 0,62/1 1,25/1 2,5/1 20/1 2,5/1 40/1

кровь 5 0,62/2 1,25/2 1,25/1 2,5/1 20/1 5/2 40/1

10 1,25; 5/4 2,5/2 5/2 40/2 10/4 80/2

МПБ - 0,31 0,62 1,25 2,5 20 2,5 40

*в числителе указана величина МИК (мкг/мл), в знаменателе - кратность изменения МИК по сравнению со значениями МИК в отсутствии биологических субстратов

4 При изучении динамики развития популяций штаммов стафилококков в средах, содержащих разные концентрации соединения 26 установлено, что при культивировании штаммов в питательной среде, содержащей соединение 26 в концентрации, равной 0,5 МИК, отмечается удлинение лаг-фазы развивающейся популяции стафилококков и при дальнейшем развитии популяции численность ее снижалась по сравнению с контролем на 1 - 4 порядка (табл 4).

Динамика развития популяций стафилококков в мясо-лептонном присутствии различных концентраций соединения 26

Таблица 4 бульоне в

Концент-

Число жизнеспособных клеток (КОЕ/мл)

Штамм рация Время (часы)

соед- 26 0 2 4 6 8 12 24

5 аигеш 24 ЗС Контроль 0,5 МИК 1 МИК 2,6-ю' 2,8 10' 2,3-Ю5 1,6-10' 2,4-10' 2,0-10' 4,2-10' 2,8-10' 2,6 10' 2,5-10' 4,7-Ю' 5,1-10' 1,2-10'" 2,5-10' 4,3-10' 4,0-10" 1,3-10' 3,2-Ю5 5,8-10" 2,6 10" 8,1-10*

Бмигеш 6У Контроль 0,5 МИК 1 МИК 2,6-10' 1,9-Ю5 2,6-10' 2.7-10' 1.8-10' 1,4-10® 2,8-Ю6 здо' 2,6 10' 2,3 10' 2,0-10' 2,6-10' 2,010" 1,4-10' 1,9-10' 2,5-10» 6,2 10" 1,8 10' 6,2 10" 7,в-Ю" 1,6-10'

Баигеих 9733 Контроль 0,5 МИК 1 МИК 2,1-10' 2,4 10' 2,6-10' зло' 2,410' 2,4 10' 9.5-10' 2.6-10' 2,9-10' 5,010" 3,0 10' 2,6-10' 7,2-10" 5,410' 1,4 104 6,3-Ю1" 2,5-Ю7 8,7-10' 73-10" 9,6-10' 6,5-10!

Хаигеи.« Контроль 2,3-10' 2,9 10' 1,7-10* 2,5-10' 1,3-10' 5,4-10'" 1,2-10"

АТСС 0,5 МИК 2,1-10' 2,8-10' 3,4 105 4,1-10' 2,5-10' 1,1 10' и-ю'

29213 1 МИК 2,6-10* 2,8 10' 3,2-10' 3,8-10' 2,5-10' 1,9-10* 5,2-104

3.ерШег Контроль 1,9-10' 1,6 10' 3,9-10' 9,7-10' 8,5-10" 1,1-10" 6,3-Ю11

т/А.г 0,5 МИК 2,6-10' 2,6 10' 1,8 10' 2,6-10' 2,5-Ю6 1,3-Ю7 1,4-10'

1517 1 МИК 2,9-10' 1,6-10' 1,1-10* 1,7-10* 1,1-10' 1,7-10' 1,9-Ю5

Концентрация соединения 26 равная 1 МИК оказывает не только бактериостатический, но и бактерицидный эффект на бактериальные клетки популяции штаммов З.аигеш 24 ЗС и З.аыгвшАТСС 29213, находящихся в логарифмической фазе роста (рис 2,3)

О ■■■■■ I-1 I-1-1-1 I

О 2 4 6 8 12 24 время,чась

- — 1 МИК—* ■О,5 МИК контроль Рис.2. Динамика развития популяции штамма З.аигеш 24ЗС

РисЗ. Динамика развития популяции штамма S.aureus ATCC29213

5 При изучении влияния соединения 26 на покоящиеся клетки стафилококков выявлено, что исследуемое соединение в концентрации 1 МИК не оказывает действия на покоящиеся клетки

6 При исследовании гетерогенности популяций стафилококков по признаку чувствительности к соединению 26, установлено, что все штаммы были гетерогенны по этому признаку (Рис 4) Концентрация соединения 26 равная 4 МИК задерживала рост 100% клеток всех взятых в опыт штаммов Концентрация препарата равная 2 МИК задерживала рост подавляющего большинства клонов всех штаммов (83-100%). Это создает предпосылки для формирования устойчивости к соединению 26 У всех штаммов взятых в эксперимент отмечалось наличие клонов чувствительных к Уг МИК соединения 26 (от 2 до 40%), а для 3-х штаммов концентрация препарата равная даже ХА МИК задерживала рост 1-4% клонов.

0,25 0,5 1 2 4

МИК

ЕЗS aureus 13 ЗС □ S aureus24ЗС OS aureua9733 ■ S aureus АТСС 29213 И S epidermidis 1517

Рис. 4. Гетерогенность популяций штаммов стафилококков по признаку чувствительности к соединению 26.

При изучении влияния соединения 26 на колонизационную резистентность толстого кишечника белых мышей, установлено, чю введение этого соединения в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг массы тела в течение 3-х и 6-ти дней не сопровождается изменением сроков высеваемости введенного перорально тест-штамма E.coli M-17 Rif, а следовательно, не оказывает влияния на колонизационную резистентность толстого кишечника экспериментальных животных.

При изучении химиотерапевтической активности соединения 26 при экспериментальной стафилококковой инфекции были получены следующие результаты. Предварительно нами была определена острая токсичность соединения 26 для белых мышей при его внутрибрюшинном введении. По величине LD50 (500 мг/кг), данное соединение может быть отнесено к малотоксичным (Саноцкий И.В., 1970).

Обсуждая результаты экспериментов по изучению химиотерапевтической эффективности соединения 26, считаем необходимым отметить, что экспериментальная инфекция вызванная метициллинорезистентным штаммом стафилококка, характеризовалась развитием значительного числа осумкованных гнойных очагов. Они располагались между петель кишечника, на поверхности печени, селезенки, в грудной полости.

У нелеченных животных, начиная со 2-го дня после заражения и до конца сроков наблюдения, стафилококки выделялись практически из всех исследованных органов. Отмечались множественные абсцессы печени, почек, однако гибели животных мы не наблюдали. У животных, лечение которых начиналось одновременно с заражением, результаты бактериологических исследований тканей и органов находились в прямой зависимости от дозы соединения.

От мышей, получавших соединение 26 в дозе 20 мг/кг, уже на второй день культура стафилококка была выделена лишь из печени и селезенки. В дальнейшем, на 4-ый, 6-ой, 8-ой день культура стафилококка выделялась из единичных органов (печень, легкие), или вообще не выделялась (4-ый день). Высевы из органов животных, умерщвленных на 10-ый день, роста стафилококков не дали.

От животных, получавших соединение 26 в дозе 10 мг/кг массы, культуры выделялись на 2-ой и 4-ый день исследования из печени, легких, селезенки, на 6-ой день - из печени и перитонеального экссудата, а на 8-ой день - только из печени или перитонеального экссудата.

У мышей, леченных соединением 26 в дозе 5 мг/кг массы, обсемененность органов практически не отличалась от таковой мышей контрольной группы. Даже на 10-ый день культуры высевались из печени, селезенки, перитонеального экссудата.

Формирование абсцессов у леченных мышей также находилось в прямой зависимости от дозы соединения. Так, у мышей, получавших препарат в течение 3-х дней в дозе 20 мг/кг массы, лишь на 2-ой день после заражения был обнаружен только абсцесс в печени. У мышей, умерщвленных на 4-ый, 6-ой, 8-ой, 10-ый день исследования абсцессы не обнаружены. Равно и у 2-х из 5-ти мышей, леченных дозой 10 мг/кг массы на 2-ой день исследования были обнаружены абсцессы передней брюшной стенки. У мышей умерщвленных на 4-ый, 6-ой, 10-ый день абсцессов не наблюдали. У одной из мышей забитых на 8-ой день сформировался абсцесс печени.

Таким образом, дозы соединения 26 равные 10 мг/кг и, особенно, 20 мг/кг массы по результатам микробиологических исследований внутренних органов можно считать эффективными при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции, начатом одновременно с заражением.

Лечение, начатое через 24 часа после заражения также было достаточно эффективным. От животных получавших соединение 26 в дозе 20 мг/кг на протяжении всех дней исследования - 2-ой, 4-ый, 6-ой, 8-ой, 10-ый - культуры выделялись только из печени и селезенки. Посевы перитонеального экссудата, крови, легких роста культуры стафилококков не дали.

Доза соединения 26 равная 10 мг/кг массы была менее эффективной. На протяжении всех сроков исследования, культуры высевались из трех, четырех органов и даже в конце срока наблюдения (10-ый день) из печени и селезенки

Результаты бактериологического исследования органов мышей получавших 5 мг/кг, мало отличались от таковых животных контрольной группы.

Формирование гнойных очагов у мышей, леченных соединением 26 в дозах 20 и 10 мг/кг, отмечено лишь в месте введения культуры. Что касается животных леченных соединением 26 в дозе 5 мг/кг, то гнойные очаги у них формировались с такой же частотой и множественностью, как и у контрольных нелеченных животных.

Таким образом, соединение 26 при лечении, начатом через сутки после заражения в условиях диссеминации возбудителя, оказывало выраженное лечебное действие, при этом доза в 20 мг/кг давала наиболее выраженный эффект.

Для углубленного анализа химиотерапевтической активности лекарственных препаратов, известным российским ученым академиком АМН В.Л. Троицким (1950), была разработана методика определения бактерийного индекса селезенки. Этот метод позволяет судить о сроках освобождения организма от бактерий под влиянием антимикробного средства, учитывая, что одним из основных мест фиксации патогенов при внутрибрюшинном заражении является селезенка. Следовательно, чем быстрее селезенка освобождается от бактерий, тем выше химиотерапевтическая эффективность антибактериального препарата.

При изучении динамики бактерийного индекса селезенки (БИС) установлено следующее (рис.5,6)

Рис. 5. Бактерийный индекс селезенки мышеи, инфицированных сублетальной дозой штамма 8.иигвш 1 Ом и леченных соединением 26 одновременно с заражением

Рис. 6. Бактерийный индекс селезенки мышей, инфицированных сублетальной дозой штамма 8.иигвш 1 Ом и леченных соединением 26 через 24 часа после заражением

Как видно на рис.5, у мышей контрольной группы этот показатель колебался от 10' до 103'5. При лечении соединением 26 начатом одновременно с заражением в дозе 20 мг/кг величина БИС уже на 2 день снижается до 102 - 103, в дозе 10 мг/кг - до I О3 -104, и даже V мышей, получавших соединение 26 в дозе 5 мг/кг массы, величина БИС составляла 10 Повторное введение препарата в дозе 20 мг/кг, ведет к дальнейшему снижению величины БИС и на 4 день она равняется 101 Лечение дозами препарата 10 и 5 мг/кг стабилизирует этот показатель и он остается на уровне 103 - 104 и 10 соответственно В дальнейшем БИС у мышей, леченных дозами 20 и 10 мг/кг, остается низким и держится на уровне 101 -102, а у мышей получавших препарат в дозе 5 мг/кг на уровне 105 - 10б.

Как видно на рис 6, при лечении, начатом через сутки после заражения у животных, леченных соединением 26 в дозе Юмг/кг величина БИС остается стабильной (104 - 105), а в дозе 20 мг/кг, прогрессивно снижается с 104 до 102.

У мышей получавших соединение 26 в дозе 5 мг/кг величина БИС колебалась в пределах 105 - 106 и хотя на 2-ой, 4-ый, 8-ой, 10-ый день наблюдения была ниже, чем в контроле, на 6-ой день исследования превышала величину этого показателя в контрольной группе.

Таким образом, по показателю величины БИС эффективной химиотерапевтической дозой соединения 26 при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции белых мышей внутрибрюшинным заражением следует считать дозу 20 мг/кг массы

Все вышесказанное дает основание рассматривать соединение 26 (3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазол) как потенциально эффективное средство химиотерапии стафилококковой инфекции. Данное химическое соединение можно рекомендовать для дальнейшего углубленного изучения с целью последующего внедрения в медицинскую практику.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты проведенных исследований позволяют проводить направленный синтез новых азотсодержащих гетероциклических соединений с антимикробной активностью

2. Соединение 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4Д6,7-гексагидро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26) обладающее низкой токсичностью, высокой противостафилококковой активностью и выраженной химиотерапевтической эффективностью при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции, подлежит дальнейшему углубленному изучению с целью создания на его основе препаратов для химиотерапии стафилококковых инфекций.

ВЫВОДЫ

1. В ряду новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов, обнаружены соединения с лабораторными шифрами 26 и 19, обладающие выраженной антимикробной активностью в отношении- стафилококков. Ш50 соединения 26 для белых мышей при внутрибрюшинном введении составляет 500 мг/кг, что позволяет отнести его к группе малотоксичных.

2. Соединение 26 обладает высокой антимикробной активностью в отношении клинических штаммов стафилококков, превышающей таковую соединения 19, фуразолидона и цефатоксима натриевой соли в 5,7, 3,0 и 1,5 раза соответственно.

3. Противостафилококковая активность соединений 19 и 26 находится в обратной зависимости от величины микробной нагрузки и не зависит от изменений рН в диапазоне 6,0-8,0, а также наличия в среде биологических субстратов (сыворотки или крови) в концентрации не более 1%.

4. Соединение 26 в концентрации равной 0,5 МИК вызывает удлинение лаг-фазы развития популяций стафилококков и к 24 часам снижает уровень их численности по сравнению с контролем на 1 - 4 порядка. В концентрации 1 МИК оказывает бактериостатический эффект. Соединение 26 не оказывает влияния на покоящиеся клетки культур стафилококков.

5. Популяции штаммов стафилококков гетерогеины по признаку чувствительности к соединению 26. В популяциях всех изученных штаммов имеется до 17% клонов устойчивых к 2 МИК, от 2 до 40% клонов чувствительных к 0.5МИК и 1 - 4% клонов чувствительных к 0,25 МИК.

6. Соединение 26 при энтеральном введении в течение 3-х и 6-ти дней в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг не оказывает влияния на колонизационную резистентность толстого кишечника белых мышей.

7. Соединение 26 при введении в течение 3-х дней в дозах 20 мг/кг и 10 мг/кг обладает выраженной химиотерапевтической активностью при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции, вызванной внутрибрюшинным заражением белых мышей, начатом как одновременно с заражением, так и через 24 часа. Эта активность подчиняется закону доза - эффект.

8. Соединение 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26), рекомендуется для углубленного изучения, как потенциальное средство химиотерапии стафилококковой инфекции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.РайковаС.В. " Изучение антимикробной активности беюилвденфурфурилиден1щклогексанов // Молодые ученые - здравоохранению региона: Сб. тез. науч.- практ. конф. СГМУ. - Саратов, 2003. - С.74-75.

2.Шуб Г.М., Кривенько А.П., Голиков А.Г., Райкова СВ. Изучение антимикробной активности производных нитрофурфурола и циклогексана // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Материалы V Рос. конф. - Москва, 2003. - С.62.

3.Райкова СВ., Шуб Г.М., Голиков А.Г., Кривенько А.П. Антимикробная активность новых оригинальных 2-арилиден-6-фурфурилиденциклогексанонов и гексагидроиндазолов на их основе // Антибиотики и химиотерапия. - 2004. - Т.49. - №4. - С.21-24.

4.Шуб Г.М., Райкова СВ.. Поиск потенциальных средств химиотерапии в ряду нитрофурансодержащих соединений // Фундаментальные исследования. - 2004. - №5. -С. 138.

5.Лазуткин Д.И., Райкова СВ. Противостафилококковая активность вновь синтезированных химических соединений // Молодые ученые - здравоохранению региона: Сб. тез. 65-ой юбилейной науч.- практ. конф. СГМУ. - Саратов, 2004. - С.83.

6.Райкова СВ., Шуб Г.М. Антимикробная и химиотерапевтическая активность (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Материалы. VI Рос. конф., Abstrs 11* Scientific Meeting European Society of Chemotherapy Infection Diseases.- Москва, 2004. - C.44.

7.Райкова СВ., Шуб Г.М. Новые оригинальные соединения из группы нитрофуранов как потенциальные средства химиотерапии стафилококковых инфекций // Медицинская микробиология - XXI век: Материалы Всерос. науч.- практ. конф. - Саратов, 2004- С. 191192.

8.Бугаев А.А., Райкова СВ., Голиков А.Г., Кривенько А.П., Шуб Г.М. Антибактериальная активность арилиден(гет)арилиденцикланонов и гексагидроиндазолов на их основе // Карбонильные соединения в синтезе гетероциклов: Сб. науч. тр. - Саратов, 2004. -С.62-64.

9.Корженевич В.И., Райкова СВ., Шуб Г.М. Новые препараты для лечения стафилококковой инфекции // Роль клинической микробиологии в профилактике внутрибольничных инфекций: Материалы науч.- практ. конф. с междунар. участием. -Москва, 2004.- С.40.

10.Korzhenevich V.I., Raikova S.V., Shoob G.M. Antimicrobial activity of new original nitrofuranes // Resistant Gram-Positive Infections: Abstrs. 2nd Interactional Symposium .- Berlin, Germany.-2004.-P.28.

11. Голиков А.Г., Райкова СВ., Бугаев А.А., Кривенько А.П., Шуб Г.М. Синтез и антимикробная активность некоторых (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов // Химико-фармацевтический журнал. - 2005. - Т.39. - №2. - С.22-24.

Подписано в печать 6.04.2005. Формат 60x84 1/16 ' Печать офсетная. Бумага офсетная Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100. Заказ 353

Отпечатано в типографии «Нвоый ветер», г. Саратов, ул. Б. Казачья, 113.

? 2 № 2005

2536

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Райкова, Светлана Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.в

ВВЕДЕНИЕ.б

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1 Роль стафилококков в патологии человека.

Глава 2 Лекарственная устойчивость стафилококков и пути ее преодоления.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Штаммы микроорганизмов и питательные среды, использованные в работе.

3.2. Вещества и препараты, использованные в работе.

3.3. Определение антимикробной активности препаратов.

3.4. Изучение влияния микробной нагрузки на противостафилококковую активность исследуемых соединений.

3.5. Изучение влияния концентрации ионов водорода (рН) на противостафилококковую активность исследуемых соединений.

3.6. Изучение влияния биологических субстратов на противостафилококковую активность исследуемых соединений.

3.7. Изучение динамики развития популяций штаммов стафилококков в средах, содержащих разные концентрации изучаемых соединений.

3.8. Изучение влияния исследуемого соединения на покоящиеся клетки стафилококков.

3.9. Изучение гетерогенности популяций стафилококков по признаку чувствительности к исследуемому соединению.

3.10. Определение острой токсичности исследуемого соединения.

3.11. Изучение влияния исследуемого соединения на колонизационную резистентность толстого кишечника белых мышей.

3.12. Изучение химиотерапевтической активности исследуемого соединения при экспериментальной стафилококковой инфекции.

Глава 4 АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕСИММЕТРИЧНЫХ ДИАРИЛИДЕНЦИКЛАНОНОВ И ЗАМЕЩЕННЫХ ГЕКСАГИДРОИНДАЗОЛОВ НА ИХ ОСНОВЕ.

4.1. Химическое строение и первичный скрининг антимикробной активности в ряду новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и замещенных гексагидроиндазолов на их основе.

4.2. Антимикробная активность соединений 26 и 19 в отношении клинических штаммов стафилококков.

Глава 5 ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ УСЛОВИЙ И ФАКТОРОВ НА ПРОТИВОСТАФИЛОКОККОВУЮ АКТИВНОСТЬ 3 (5-НИТРОФУРИЛ)-7-(5-НИТРОФУРФУРИЛИДЕН)-3,За,4,5,6,7-ГЕКСАГИДРО -2Н-ИНДАЗОЛА И 2,3-ДИФЕНИЛ-7-(5-НИТРОФУРФУРИЛИДЕН)-3,За,4,5,6,7-ГЕКСАГИДРОИНДАЗОЛА (СОЕДИНЕНИЙ 26 И 19).

5.1. Влияние микробной нагрузки на противостафилококковую активность соединений 26 и 19.

5.2. Влияние концентрации ионов водорода (рН) на противостафилококковую активность соединений 26 и 19.

5.3. Влияние некоторых биологических субстратов на противостафилококковую активность соединений 26 и 19.

5.4. Динамика развития популяций штаммов стафилококков в средах, содержащих разные концентрации соединения 26.ioi

5.5. Влияние соединения 26 на динамику развития стафилококков при различных условиях культивирования.

5.6. Гетерогенность популяций стафилококков по признаку чувствительности к соединению 26.

Глава 6 ВЛИЯНИЕ СОЕДИНЕНИЯ 26 НА КОЛОНИЗАЦИОННУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА БЕЛЫХ МЫШЕЙ

Глава 7 ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЯ 26 ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СТАФИЛОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ.lis

7.1. Высеваемость стафилококков из органов экспериментальных

ЖИВОТНЫХ.

7.2. Значение бактерийного индекса селезенки при экспериментальной стафилококковой инфекции, вызванной внутрибрюшинным заражением экспериментальных животных.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Противостафилококковая активность (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов"

На современном этапе развития медицины проблема гнойно-воспалительных заболеваний (ГВЗ) привлекает внимание специалистов разного профиля. Высокая частота внутрибольничного инфицирования, удлинение сроков госпитализации с соответствующим удорожанием и ухудшением результатов лечения, высокий процент летальности определяют неослабевающий интерес к этой проблеме, имеющей не только медицинское, но и социально-экономическое значение.

Распространенность ГВЗ, вызванных грамположительными микроорганизмами, возрастает во всем мире (Яцык Г.В., Бомбардирова Е.П., 2000; Real Т.М., 1999; Chang S.C. et al., 2000; Shopsin B. et al., 2000). Среди последних, несомненно, ведущее место занимают стафилококки.

Интерес к изучению стафилококковых инфекций, «чумы XX века», как их называли в 60-70-е гг., не ослабевает и в настоящее время. Это объясняется большим удельным весом стафилококков в этиологии самых разнообразных гнойно-воспалительных заболеваний. Гнойно-воспалительные заболевания, в том числе и стафилококковые инфекции, чаще развиваются при состояниях, сопровождающихся угнетением противоинфекционной резистентности организма, что в большей степени реализуется в условиях стационара. К тому же широкое применение антибиотиков при лечении инфекционных заболеваний резко изменило биологические свойства многих микроорганизмов, в том числе и стафилококков.

Стафилококк имеет существенное значение как патоген, демонстрирующий выраженную способность к формированию устойчивости практически ко всем противостафилококковым антимикробным препаратам, используемым в клинической практике. К сожалению, тенденция роста устойчивости бактерий имеет прогрессирующий характер и в ближайшей перспективе не видно реальных мер по сдерживанию этого процесса (Яковлев С.В. с соавт., 2001; Rubin RJ. et al., 1999).

Особую важность представляет собой распространение стафилококков, резистентных к метициллину (или оксациллину). В настоящее время метициллинорезистентные стафилококки (MRS) рассматриваются в качестве одного из ведущих нозокомиальных патогенов (Зайцев А.А. с соавт., 2003). Весьма тревожным фактом является появление стафилококков со сниженной чувствительностью к ванкомицину (Hiramatsu К et.al., 1997; Rasooly A., Weisz А., 2002; Bell J.M. et al., 2002 и др.). Эти особенности стафилококков являются причиной существенного ограничения выбора антибактериальных препаратов для лечения инфекций, вызванных такими штаммами микроорганизмов.

Необходимость поиска путей и средств борьбы со стафилококковой инфекцией и преодоления антибиотикорезистентности стафилококков подчеркивалась неоднократно. Для борьбы с развитием лекарственной устойчивости стафилококков возможны разные пути: предупреждение формирования и ограничение распространения лекарственноустойчивых популяций; снижение уровня уже сформировавшейся резистентности; использование антимикробных препаратов, относящихся к разным классам химиотерапевтических средств (Навашин С.М., Сазыкин Ю.О., 1985; Дьяков С.И. с соавт., 1988).

Кроме перечисленных, одним из перспективных путей преодоления лекарственной устойчивости является поиск и внедрение в практику новых антибактериальных агентов, в том числе с отличным от широко применяемых антибиотиков строением и механизмом действия. Значительным событием на этом пути явилось открытие в 1939 году Доддом, Стилменом и др. у производных 5-нитрофурана антимикробного действия и успешно произведенный их синтез. В дальнейшем на их основе был создан ряд высокоактивных противомикробных средств (Алексеева JI.H., 1963).

По сравнению с другими антимикробными средствами препараты нитрофуранового ряда имеют ряд преимуществ. Обладая широким спектром антимикробной активности, они существенно не влияют на общую иммунологическую реактивность макроорганизма (Шуб Г.М., 1965). Нитрофураны обладают способностью усиливать поглотительную активность фагоцитирующих клеток (Проскуров В.А., 1974) и клеток ретикуло-эндотелиальной системы (Шуб Г.М. с соавт., 1970). Кроме того, стоимость большинства препаратов невелика, что немаловажно при их массовом применении в терапевтических и профилактических целях. Нитрофураны (кроме фуразолидона) имеют небольшую молекулярную массу (157-297 Дальтон), благодаря чему легко проникают через стенки кровеносных и лимфатических сосудов, а также гематоэнцефалический барьер, что выгодно отличает их от антибиотиков. Как вещества с низкой молекулярной массой, нитрофураны менее активны как возможные аллергены.

В медицинской практике препараты нитрофуранового ряда получили наибольшее распространение в 60-70-х гг. Однако, и в настоящее время, несмотря на создание новых антибиотиков, данные соединения не утратили своего значения, т.к. нитрофураны эффективны против антибиотико- и сульфаниламидоустойчивых штаммов возбудителей. Об этом свидетельствуют результаты исследований А.В. Чернышкова (2003), отметившего, что 90-98% S. flexneri и S. sonnei сохраняют чувствительность к нитрофурантоину.

По данным А.Ю. Томникова (1989), максимальное и минимальное значение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) фурагина для 215 изученных им клинических штаммов стафилококков составили 50 и 1,56 мкг/мл, соответственно. Тем не менее, развитие устойчивости к препаратам нитрофуранового ряда является вполне реальным, о чем свидетельствуют результаты исследований Т.И. Турлуповой (1974), Олениной Н.А.(1982) и др.

Учитывая вышеизложенное, поиск веществ с антимикробной активностью в ряду производных нитрофуранового ряда и-их изучение в т.ч. и в отношении стафилококков является достаточно актуальной задачей.

На кафедре органической и биоорганической химии Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского и кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией Саратовского государственного медицинского университета на протяжении многих лет проводится совместная работа по синтезу и изучению антимикробной активности новых химических соединений. Одним из направлений этой работы является поиск новых антимикробных средств в ряду серу-, азот- и кислородсодержащих гетероциклов.

Целью настоящей работы явилось изучение антимикробного действия новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов и углубленное исследование выявленных среди них средств, обладающих противостафилококковой активностью.

Задачи исследования:

1) Изучить противомикробную активность в отношении основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний, в том числе стафилококков, новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов.

3) Провести сравнительный анализ антистафилококковой активности отобранных соединений с коммерческим препаратом нитрофуранового ряда (фуразолидон) и с одним из цефалоспоринов III поколения цефотаксим натриевая соль), часто используемыми для лечения стафилококковых инфекций.

Актуальность работы определяется широким распространением стафилококковых инфекций, трудностями их лечения, необходимостью изыскания новых химиотерапевтических средств, активных в отношении антибиотикорезистентных стафилококков.

Научная новизна. В работе впервые дана характеристика антимикробной активности новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и замещенных гексагидроиндазолов на их основе в отношении тест-штаммов S. aureus АТСС 29213,

E.coli АТСС 25922, P. aeruginosa АТСС 27853, P. mirabilis 20 -представителей наиболее частых возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний. Отобраны 2 активных в отношении стафилококков соединения (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов: 2,3-дифенил-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидроиндазол (лабораторный шифр 19) и 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26). Показана их высокая, не уступающая фуразолидону и близкая цефотаксиму натриевой соли, антимикробная активность в отношении клинических штаммов стафилококков.

Установлено, что на проявление противостафилококковой активности соединений 19 и 26 оказывает влияние концентрация микробных тел, присутствие в среде биологических субстратов (крови и сыворотки крови) в концентрациях 5 и 10%. Показано, что популяции стафилококков гетерогенны по признаку чувствительности к соединению 26.

Практическая значимость. Результаты проведенного исследования позволили впервые охарактеризовать антимикробную активность оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов, выявить среди них и изучить вещества с выраженной противостафилококковой активностью, оценить их химиотерапевтическую эффективность при экспериментальной стафилококковой инфекции и рекомендовать их для углубленного изучения в качестве потенциальных средств химиотерапии стафилококковых инфекций.

Результаты диссертационной работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий на факультетах Саратовского государственного медицинского университета, Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова, Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского, что подтверждено актами о внедрении в учебный процесс.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях Саратовского государственного медицинского университета «Молодые ученые - здравоохранению региона» (2003, 2004), V Российской конференции «Современные проблемы антимикробной химиотерапии» (2003), VI Российской конференции «Современные проблемы антимикробной химиотерапии» и 11th Scientific Meeting European Society of Chemotherapy Infection Diseases (2004), Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология-XXI век» (2004), X Всероссийской конференции «Карбонильные соединения в синтезе гетероциклов» (2004), Научно-практической конференции с международным участием «Роль клинической микробиологии в профилактике внутрибольничных инфекций» (2004), 2nd Interactional Symposium " Resistant Gram-Positive Infections" (2004).

Структура работы. Диссертации изложена на 179 листах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, заключения, практических рекомендаций, выводов, списка использованной литературы, включающего 254 источника, из них 136 отечественных и 118 иностранных авторов и приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами, 19 рисунками и 6 фотографиями.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Райкова, Светлана Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В ряду новых оригинальных несимметричных диарилиденцикланонов и синтезированных на их основе замещенных гексагидроиндазолов обнаружены соединения с лабораторными шифрами 26 и 19, обладающие выраженной антимикробной активностью в отношении стафилококков. LD50 соединения 26 для белых мышей при внутрибрюшинном введении составляет 500 мг/кг, что позволяет отнести его к группе малотоксичных.

2. Соединение 26 обладает высокой антимикробной активностью в отношении клинических штаммов стафилококков, превышает таковую соединения 19, фуразолидона и цефотаксима натриевой соли в 5,7, 3,0 и 1,5 раза соответственно

4. Соединение 26 в концентрации, равной 0,5 МИК, вызывает удлинение лаг-фазы развития популяций стафилококков и к 24 часам снижает уровень их численности по сравнению с контролем на 1 - 4 порядка. В концентрации 1 МИК оказывает бактериостатический и бактерицидный эффект. Соединение 26 не оказывает влияния на покоящиеся клетки культур стафилококков.

5. Популяции штаммов стафилококков гетерогенны по признаку чувствительности к соединению 26. В популяциях всех изученных штаммов имеется до 17% клонов устойчивых к 2 МИК, от 2 до 40% клонов чувствительных к 0,5МИК и 1 - 4% клонов чувствительных к 0,25 МИК.

6. Соединение 26 при энтеральном введении в течение 3-х и 6-ти дней в дозах 50мг/кг и 100 мг/кг не оказывает влияния на колонизационную резистентность толстого кишечника белых мышей.

7. Соединение 26 при введении в течение 3-х дней в дозах 20 и 10 мг/кг обладает выраженной химиотерапевтической активностью при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции, вызванной внутрибрюшинным заражением белых мышей, начатом как одновременно с заражением, так и через 24 часа. Эта активность подчиняется закону доза - эффект.

8. Соединение 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26), рекомендуется для углубленного изучения как потенциальное средство химиотерапии стафилококковой инфекции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты проведенных исследований позволяют проводить направленный синтез новых азотсодержащих гетероциклических соединений с антимикробной активностью.

2. Соединение 3-(5-нитрофурил)-7-(5-нитрофурфурилиден)-3,За,4,5,6,7-гексагидро-2Н-индазол (лабораторный шифр 26), обладающее низкой токсичностью, высокой противостафилококковой активностью и выраженной химиотерапевтической эффективностью при лечении экспериментальной стафилококковой инфекции, подлежит дальнейшему углубленному изучению с целью создания на его основе препаратов для химиотерапии стафилококковых инфекций.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Райкова, Светлана Владимировна, Саратов

1. Аверьянов М.Г. Внутрибольничные инфекции-проблемы эпидемиологии и диагностики, лечения и профилактики /М.Г. Аверьянов, В.Т. Соколовский. М.: Медицина, 1999. - С.6-7.

2. Азизов И.С. Антибиотикорезистентность метициллинорезистентных штаммов Staphylococcus spp., выделенных у пациентов с эмпиемой плевры / И.С. Азизов // КМАХ. 2001. - №3. -прилож.1. - С.5.

3. Акатов А.К. Стафилококки / А.К.Акатов, B.C. Зуева. М.: Медицина, 1983.-255с.

4. Акжигитов Г.Н. К вопросу метода лечения детей с острой деструктивной пневмонией / Г.Н. Акжигитов, В.И. Бессарабов, Д.А. Андреев // Грудная хирургия. 1984. - №4. - С.53-56.

5. Алексеев А.А. Инфекция у обожженных: вопросы патогенеза, профилактики и лечения / А.А.Алексеев // Хирургия. 1999. - №6. (http:// www.mediasphera.ru/ surgeru/99/б/6г-99).

6. Алексеева Л.Н. Изучение сравнительного действия некоторых нитрофуранов на дизентерийную инфекцию в эксперименте / Л.Н.Алексеева // Изв. АН Латв. ССР. 1956. - №6. - С.83.

7. Алексеева Л.Н. Антибактериальная активность препапратов нитрофуранового ряда в сочетании с антибиотиками / Л.Н.Алексеева // Материалы тезисов докладов по проблемам изыскания и изучения новых лекарственных препаратов Рига, 1959. - С. 11-13.

8. Алексеева Л.Н. Экспериментальное изучение антибактериальных свойств фуразолидона / Л.Н Алексеева // Фуразолидон: Сб. науч.тр — Рига, 1962. — С.29-50.

9. Алексеева Л.Н. Антибактериальные препарты-производные 5-нитрофурана / Л.Н. Алексеева // Рига: Изд-во Академии Латв. ССР, 1963. -219 с.

10. Амирасланов Ю.А. Основные принципы лечения больных с хроническим остеомиелитом длинных костей / Ю.А. Амирасланов, А.М.Светухин, В.А. Митиш и др. // Вестник хирургии. 2000. - Т. 159. -№2. - С.91-96.

11. Антибактериальная терапия острого цистита и пиелонефрита у взрослых / Н.А. Лопаткин, И.И. Деревянко, JI.C. Страчунский и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т.45. - №4. - С.30-34.

12. Антибактериальная терапия при синдроме диабетической стопы / A.M. Светухин, В.П. Яковлев, JI.A. Блатун и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48. - №11. - С.31-37.

13. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П.Ашмарин, А.А. Воробьев. Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

14. Барбер М. Появаление лекарственноустойчивых бактерий / М. Барбер //ЖМЭИ. 1955. - 9. - С.71.

15. Белобородов В.Б. Стафилококковые инфекции / В.Б. Белобородов, С.Д. Митрохин // Инфекции и антимикробная терапия. 2003. - Т.05 - №1. - С.12-18.

16. Белокрысенко С.С. Здоровье новорожденных как микробиологическая проблема / С.С. Белокрысенко // Педиатрия. 1990. -№1. — С.8-13.

17. Блатун Л.А. Современные возможности антимикробной терапии раневых инфекций мягких тканей и остеомиелита / Л.А. Блатун // Антибиотики и химиотерапия 2002.-Т.47. - №9. - С.31-36.

18. Блюгер А.Ф. Нитрофураны и их применение в медицине / А.Ф. Блюгер. Рига: Изд-во Академии Латв. ССР 1958. - С.3 - 15.

19. Блюгер А.Ф. Фурадонин-эффективное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний мочевыводящих путей / А.Ф. Блюгер // Мед. наука практике: Сб II. - Рига, 1960. - С. 139.

20. Бриан JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам / JI.E. Бриан. М.: Медицина, 1984. — 270 с.

21. Брискин Б.С. Внутрибольничные инфекции и их профилактика: взгляд хирурга/ Б.С. Брискин, Н.Н. Хачатрян // Consilium medicum.- 2002.-Т.04-№6. (http//www./ media/ consilium/02-06/309 htm/).

22. Буткевич O.M. Больничный инфекционный эндокардит и эндокардит наркоманов / О.М. Буткевич, T.JI. Виноградова // Терапевтический архив-1998. №8. - С.56 - 58.

23. Вельтер О.Ю. Инфекционный эндокардит у инъекционных наркоманов / О.Ю. Вельтер // Антибиотики и химиотерапия. 2001. -Т.46.-№11. - С.39-43.

24. Выгодчиков Г.В. Микробиология и иммунология стафилококковых заболеваний / Г.В. Выгодчиков. М.: Медгиз, 1950. - 167 с.

25. Габбасова JI.A. Чувствительность метициллинрезистентных штаммов S. aureus, выделенных от больных к левофлоксацину / JI.A. Габбасова, A.JI. Бурмистрова, Л.И. Бахарева и др. // КМАХ. 2002. -Т.4. - прилож.1. - С. 15.

26. Гасанова З.М. Влияние фуразолидона на стафилококковую инфекцию в эксперименте: Автореф. дис. . канд. мед. наук / З.М. Гасанова. Саратов, 1966. - 12с.

27. Гельфанд Е.Б. Антибактериальная терапия абдоминальных хирургических инфекций / Е.Б. Гельфанд, С.З. Бурневич, Т.Б. Бражник // РМЖ. 2002. - Т. 10. - №8 (http://www.rmi.ru/main.htm).

28. Гиллер С.А. Фурациллин и опыт его применения / С.А. Гиллер // Нитрофураны: Сб. Рига, 1953. - С.7.

29. Гиллер С.А. Новый химиотерапевтический препарат для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовых путей-фурадонин / С.А. Гиллер, Р.Ю. Калнберг // Мед. наука-практике: Сб.1. -Рига, 1957.-С.63.

30. Глухов Н.В. Влияние фуразолидона на дизентерийную инфекцию в эксперименте: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Н.В. Глухов Саратов, 1965.- 12 с.

31. Давыденко А.В. Использование деэслокационной терапии при хирургическом лечении глубоких флегмон бедра / А.В. Давыденко, В.К. Татьянченко, А.И. Лукаш // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Тезисы V Российской конференции. М., 2003. - С.54.

32. Демин А.А. Бактериальные эндокардиты / А.А Демин, Ал.А. Демин М.: Медицина, 1978. 166 с.

33. Демин А.А. Антимикробная терапия инфекционного эндокардита инъекционных наркоманов / А.А. Демин, В.П. Дробышева, О.Ю. Вельтер // КМАХ 2002. - Т.4. - прилож. 1. - С. 18.

34. Деревянко И.И. Анализ этиологической структуры мочевой инфекции и антибиотикорезистентности её возбудителей / И.И. Деревянко, Л.А.Ходырева // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т.42. - №9. -С.27-32.

35. Динамика уровня и структуры заболеваемости внутрибольничных инфекций в Астраханской области / В.Н. Филяев, О.В. Мартова, Л.М. Абросимова и др.// Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2004. -№3. С.17-18.

36. Дмитриева Н.В. Этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам основных возбудителей инфекционных осложнений в онкологической клинике / Н.В. Дмитриева, И.Н. Петухова, А.З. Смолянская. М.: 1999. - С.67.

37. Донцов Г.И., Попова Т.А., Башкова Н.М., Юровских А.И. в кн. Внутрибольничные инфекции-проблемы эпидемиологии и диагностики, лечения и профилактики. М.,1999. С.87-88.

38. Дьяков С.И. Современные антибиотики и противовирусные препараты в экспериментальной химиотерапии бактериальных и вирусных инфекций / С.И. Дьяков, Н.П. Чижов, С.В. Сидоренко. Минск: Беларусь, 1988.- 190с.

39. Егоров A.M. Инновационные пути создания новых антибактериальных препаратов / A.M. Егоров, Ю.О. Сазыкин // Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т.46. -№11.- С.3-6.

40. Егоров A.M. Развитие антимикробной химиотерапии и новые парадигмы / A.M. Егоров, Ю.О. Сазыкин, В.П. Иванов // КМАХ. 2001. -Т.З. - №2. - С.98-103.

41. Жарикова М.С. О частоте обнаружения Pseudomonas aeruginosa / М.С. Жарикова, А.Т. Козлова, Л.Н. Мазепова // ЖМЭИ. 1985. - № 3. -С.116.

42. Заева С.П. Испытание действия фурациллина на возбудителей раневых инфекций опытах in vitro и in vivo / С.П. Заева // Изв. АН Латв. ССР. 1949. - №12. - С.86.

43. Заева С.П. Бактериостатические и бактерицидные свойства фурациллина в опытах in vitro и in vivo / С.П. Заева // Фурациллин и опыт его применения: Сб.науч.тр. Рига, - 1953. - С.107.

44. Заева С.П. Экспериментальное изучение препарарта фуразолидона / С.П. Заева, Л.Н.Алексеева, Н.С. Ратенбург, М.Н. Коптелова, К.К. Медне, Н.П. Спуре //ЖМЭИ. 1958. - №7. - С. 15.

45. Заева С.П. Эффективность действия фуразолидона на стафилококковые культуры в опытах in vitro / С.П. Заева, Л.В. Крузметра // Фуразолидон: Сб.науч.тр. Рига, 1962. - С.51-54.

46. Зайцев А.А. Стафилококки и ванкомицин: тенденции противостояния / А. А. Зайцев, О.И. Карпов, С.В. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48. - №6. - С.20-26.

47. Змушко Л.С. Этиологическая структура гнойной инфекции у проктологических больных / Л.С. Змушко, А.А. Адарченко, И.Ф. Бородин, Н.Е. Николаев //Актуальные вопросы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. 1988. - ч.П. - С.23-25.

48. Зубков М.Н. Этиология иантимикробная терапия огнестрельных остеомиелитов костей нижних конечностей / М.Н. Зубков, М.М. Зубков, Г.Г. Окропидзе // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Тезисы V Российской конференции. М., 2003. - С.75.

49. Зубков М.Н. Антибиотикопрофилактика и антибиотикатерапия гнойных осложнений в травматологии и ортопедии / М.Н. Зубков, Н.Н. Приорова //КМАХ. 1999. - Т. 1. - №1. -С. 3-9.

50. Зуева B.C. Метициллинорезистентные стафилококки / B.C. Зуева, О.А. Дмитренко, А.К. Акатов и др. //ЖМЭИ. 1988. - №4. - С. 100-109.

51. Илюхин В.И. Псевдомонадные инфекции в патологии человека / В.И. Илюхин // ЖМЭИ.-1985. № 2:- С. 110-114.

52. Капранов Н.И. Современные проблемы достижения в области изучения муковисцедоза в России / Н.И. Капранов / Пульмонология. — 1994 №3. - С.6-16.

53. Ковальчук В.И. // Этиопатогенез острого гематогенного остеомиелита у детей раннего возраста / В.И. Ковальчук, Б.И. Мацкевич // Медицинские новости. 2004. (http://www.medlinks.ru/article.ph? sid 8827).

54. Кожные и венерические болезни / А.А. Каламкарян, Е.И. Архангельская, Б.Т. Глухенький, С. А. Масюкова./ Под редакцией Скрипкина Ю.К. Мордовцева В.Н. 2-е издание. М.: Медицина 1999. - Т1.- С.213-257.

55. Козлова И.А. Антибиотикочувствительность возбудителей пневмонии у новорожденных и проблемы антибактериальной терапии данной патологии / И.А. Козлова, М.И. Фролова, Л.К. Кузнецова // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т.43. - №11. - С.24-27.

56. Кочетков Г.А. Оценка антибиотикорезистентности устойчивых к метициллину штаммов золотистого стафилококка в отделениях термической травмы НИИИТО / Г.А. Кочетков, С.И. Пылаева, Т.М. Конышкина // КМАХ. 2000. - №2. - прилож.1 - С.25.

57. Краснова М.В. Профили резистентности метициллинорезистентных и метициллинчувствительных StaphylococcusJaureus в травматологическом стационаре в 1999 г / М.В. Краснова, Г.Е. Афиногенов, О.М. Яковлева и др. // КМАХ. 2000. - №2. - прилож.1. -С.25.

58. Красовская Т.В., Белобородова Н,В. Хирургическая инфекция у новорожденных / Т.В. Красовская, Н.В. Белобородова М. Медицина — 1993.

59. Крузметра JI.B. Сравнительная чувствительность стафилококковых культур к препаратам нитрофуранового ряда и антибиотикам / Л.В. Крузметра// Изв. АН Латв. ССР. 1960. - №11. - С. 133.

60. Крузметра Л.В. Нитрофурановые препараты в борьбе со стафилококковой инфекцией / Л.В. Крузметра. Рига: Изд-во Академии наук Лат. ССР, 1964. - 116 с.

61. Крюков А. И. Роль микрообной флоры в этиологии обострений хронического гнойного отита у детей простатита / А. И. Крюков, В.Н. Лазарев, А.Ю. Ивойлова // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Тезисы V Российской конференции. М., 2003. - С.46.

62. Куликова Л.К. Антибактериальное действие нового препарата нитрофуранового ряда-фуракрилина на антибиотикоустойчивые штаммы стафилококков / Куликова Л.К. // Нитрофураны. Экспериментальные и клиническе исследования: Сб. Саратов, 1968. - 226 с.

63. Куликова Л.К. Антибактериальная активность некотрых новых производных фурана и тиофена: Дисс . канд. мед. наук: 03.00.07. -Саратов, 1969.-226 с.

64. Лекарственная чувствительность возбудителей гнойно-септических процессов в стационаре скорой помощи / Д.Д. Меньшиков, В.А. Васильев, И.В. Груненкова и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т.47. — №.3.-С. 18-21.

65. Лошонци Г. Внутрибольничная инфекция / Г. Лошонци. М.: Медицина, 1978. - С.7-15.t

66. Майчук Ю.Ф. Левофлоксацин (таваник) в лечении язвенных поражений роговицы / Ю.Ф. Майчук // Антибиотики и химиотерапия. -2003.-Т.48. -№ 6. С. 16-19.

67. Марцинковский К.Е. Чувствительность свежевыделенных штаммовгноеродного стафилококка к препапратам нитрофуранового ряда и антибиотикам in vitro / К.Е. Марцинковский // Нитрофураны. Экспериментальные и клиническе исследования: Сб. Саратов, 1968. -С.77.

68. Машковский М.Д. Фармакологическое и токсилогическое изучение химиотерапевтических препартов / М.Д. Машковский. // Методы экспериментальной химиотерапии: Практическое руководство / Под ред.Г.Н.Першина М.: Медицина, 1971. - Гл.13. - С.524-537.

69. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. — М.: Новая волна, 2003. - Т.2 - С.302.

70. Мерина А.Е. Химиотерапевтическое действие солафура при острой стафилококковой инфекции белых мышей / Мерина А.Е. // Физиология и биохимия микроорганизмов: СМИ труды, том LXV(82). Саратов, 1970. -С.152-155.

71. Мерина А.Е. Влияние препаратов нитрофуранового ряда на фагоцотоз / А.Е. Мерина // Физиология и биохимия микроорганизмов: СМИ труды, том LXV(82). Саратов, 1970. - С.231-233.

72. Методы общей микробиологии // Под. ред. Ф. Герхарда-1983 -Т.1.-С.442-511.

73. Моисеев B.C. Инфекционный эндокардит у наркоманов / B.C. Моисеев, Т.Г. Троянов, А.С.Мильто // Клиническая медицина. 1998. -№11.- С.31-34.

74. Муромский Ю.А., Гукасян Э.А. Семиволков В.И. и др.// Хирургия.- 1988-№12-С.12-18.

75. Навашин С.М. Некоторые направления и перспективы развития науки об антибиотиках / С.М. Навашин, Ю.О. Сазыкин // Антибиотики. -1985. №1. - С.3-16.

76. Оленина Н.А. Некоторые механизмы нитрофуранорезистентности у грамотрицательных бактерий: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Н.А. Оленина Саратов, 1982. - 12 с.

77. Онищенко Г.Г. Эпидемиологическая обстановка и основные направления борьбы с инфекционными болезнями в Российской Федерации за период 1991-1996 гг./ Г.Г. Онищенко // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - №3. - С.4-13.

78. Островский А.Д. Этиология гнойно-воспалительных заболеваний в Алтайском крае / А.Д. Островский, М.А. Родионова, С.В. Шабанова // Актуальные вопросы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. 1988. - ч.П -С.3-4.

79. Першин Г.Н. Общие вопрсы экспериментальной химиотерапии / Г.Н. Першин, Е.Н. Падейская // Методы экспериментальной химиотерапии: Практическое руководство / Под ред. Г.Н. Першина. М.: Медицина, 1971. - Гл.2. - С. 12-24.

80. Применение ципрофлоксацина у больных муковисцидозом детей / Н.И. Капранов, Н.Ю. Каширская, С.Ю. Семыкин, Ю.Б. Белоусов //Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т.42. - №6. - С.39-41.

81. Проскуров В.А. Клиника и лечение стафилококковых заболеваний /В.А. Проскуров. М.: Медицина, 1974. - 158 с.

82. Пхакадзе Т.Я. Микробиологическая характеристика инфекционных осложнений в травматологии и ортопедии / Т.Я. Пхакадзе, Н.К. Вабищевич, Г.Г. Окропиридзе // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Тезисы V Российской конференции. М., 2003.-С.13.

83. Развитие проблемы метициллинорезистентносьти госпитальных стафилококков в травматологической клинике / С.И. Пылаева, Н.А. Гординская, Н.А. Кувакина, Е.В. Сабирова // КМАХ. 2001. - №3. -прилож.1. - С.32.

84. Результат многоцентрового исследования чувствительности стафилококков к антибиотикам в Москве и Санкт-Петербурге / С.В. Сидоренко, С.П. Резван, С.А.Грудинина и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т.43. - № 7. - С. 15-25.

85. Сазыкин Ю.О. П. Эрлих и начало современной антимикробной химиотерапии / Ю.О. Сазыкин // Антибиотики и химиотерапия. -1999. -Т.44. №12. - С.5-14.

86. Самсыгина Г.А. Этиологическая структура гнойно-воспалительных заболеваний доношенных новорожденных детей / Г.А.Самсыгина, Н.В. Герасимова, Г.Д. Першина // Современные проблемы антимикробной химиотерапии: Тезисы V Российской конференции. М., 2003.-С.47.

87. Саноцкий И.В. Методы определения токсичности и опасности химических веществ / И.В. Саноцкий. М.: Медицин, 1970. - 96 с.

88. Сёмина Н.А. Эпидемиология и профилактика внутрибольничных инфекций на современном этапе / Н.А Сёмина, Е.П. Ковалева,

89. JI.A. Генчиков 11 Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - №6. — С.4-8.

90. Сенцова Т.Б. Антибиотикограммы микроорганизмов, выделенных из очагов локальных инфекций у новорожденных детей / Т.Б. Сенцова, JI.K. Катосова, Э.Р. Хан // Антибиотики и химиотерапия. 1996. - Т.41. — №1. — С.22—26.

91. Синтез и антибактериальная активность комплексов палладия и кобальта с замещенными фуранами / JI.A. Сафронова, Г.К. Корниенко, Г.М. Шуб, А.Д. Шебалдова // Химико-фармацевтический журнал. 2001. — Т.34. - №9. - С.22-23.

92. Синтез, строение и противомикробная активность производных (3-метил-2-оксо-2,3-дигидроимидазо1,2-а.пиридин-3-ил)уксусной кислоты / Н.В. Колотова, В.О. Козьминых, А.В. Долженко и др. // КМАХ. 2002. -Т.4. - прилож.1. - С.27.

93. Слепова Н.А. Активность некоторых оригинвальных гетероциклических соединений в отношении синегнойных бактерий: Дисс . канд. мед. наук: 03.00.07. Саратов, Сар.гос.мед.ин-т,1984. - 130 с.

94. Соловьев В.Н. Стратегия современной химиотерапии бактериальных инфекций / В.Н. Соловьев.-М.: Медицина, 1973.-320 с.

95. ЮЗ.Страчунский JI.C. Состояние антибиотикорезистентности к антиинфекционным химиопрепаратам / JI.C. Страчунский, Т.М. Богданович: Практ рук по антиинфекционной химиотерапии // Под ред. JI.C. Страчунского, Ю.Б.Белоусова, С.Н.Козлова. М. 2002. - С.32-39.

96. Страчунский JI.C. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / Под ред: JI.C. Страчунского, Ю.Б.Белоусова, С.Н. Козлова.-М.: Боргес, 2002. 384 с.

97. Структура и чувствительность к антибиотикам возбудителей внебольничных инфекционных заболеваний бактериальной природы у детей / Г.А.Самсыгина, Т.А. Дудина, М.А. Корнюшин, Н.В. Овечкина // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т.45. - № 3. - С. 15-19.

98. Юб.Томников А.Ю. Противостафилококковая активность новых производных 5-алкил-Зн-фуран-2-онов: Дисс . канд. мед. наук: 03.00.07-Саратов, Сар.гос.мед.ин-т,1989. 130 с.

99. Троицкий В. JI. Вопросы химиотерапии бактериальных инфекций / B.JI. Троицкий // Труды Академии медицинских наук СССР. М.: Издательство Академии Медицинских Наук СССР, 1950. 268 с.

100. Турлупова Т.И. Изменение биологических свойств стафилококка под влиянием нитрофурановых препаратов в эксперименте и в организме больных // Автореф. дис. . канд. мед. наук / Т.И. Турлупова Саратов, 1974.- 15 с.

101. Тяжелая внебольничная пневмония: этиологическая структура / А.И. Синопальников, О.В. Фесенко, Ю.Г. Тихонов, В.К. Дуганов // Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т.46. - №6. - С.6-11.

102. Хэйс У. Генетика бактерий и бактериофагов / У. Хэйс. М.: Мир, 1965.-555 с.

103. Черномор дик А.Б. Новые противостафилококковые антибиотики и нитрофурановые препараты / А.Б.Черномордик. Киев.: Здоров'я, 1969. — 187с.

104. Н.Чернышков А.В. Некоторые особенности клиники и резистентности возбудителей к антибактериальным препаратам при шигеллезах и сальмонеллезах у детей: Дисс.канд. мед. наук: 03.00.07. — Саратов, Сар. гос.мед.ун-т, 2003. 115 с.

105. Чувствительность стафилококка к антибиотикам у больных атопическим дерматитом / Н.И. Пенкина, Р.Н. Ямолдинов,

106. A.M. Ожегов и др. // КМАХ.-2000. №2. - прилож. 1. - С.31 Пб.Чуданова Т.В. Особенности применения цефепима с амикацином врежиме эмпирической антибактериальной терапии у больных различными формами гемобластозов / Т.В. Чуданова, К.М. Абдулкадыров,

107. B.Н. Чеботкевич // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т.48. - № 7. -С. 29-32.

108. Шаимова В.А. Клинико-этнологические особенноссти различных типов течения гнойной язвы роговицы / В.А. Шаимова // Вестник Офтальмологии. 2002. - №1. - С.39-41.

109. Шеришорина С.И. К вопросу о роли антибиотикоустойчивых штаммов бактерий в хирургической практике / С.И. Шеришорина, И.К. Рыкалин, О.И. Пономарева // Материалы XXV научной сессии. -Саратов.-СГМИ- 1960.

110. Шеришорина С.И. Влияние фуразолидона на биологию гноеродного стафилококка. Сообщение II. Влияние фуразолидона на токсигенные свойства стафилококка / С.И. Шеришорина, З.М. Гасанова //

111. Сб.: Нитрофураны. Экспериментальные и клинические исследования: Саратов 1968-С.51.

112. Шеришорина С.И. Экспериментальное обоснование применения препаратов нитрофуранового ряда в инфекционной патологии / С.И. Шеришорина // Нитрофураны. Экспериментальные и клиническе исследования. Сб.: Саратов 1968. - С.15.

113. Шеришорина С.И. Антибактериальная активность препаратов нитрофуранового ряда / С.И. Шеришорина // Нитрофураны. Экспериментальные и клиническе исследования: Сб. Саратов - 1968. — С.22.

114. Шуб Г.М. Оценка некоторых иммунобиологических показателей нитрофурановых препаратов. Сообщение II. Влияние препаратов нитрофуранового ряда на общую иммунологическую реактивность / Г.М. Шуб // ЖМЭИ. 1965. - №1. -С.44-46.

115. Шуб Г.М. Влияние нитрофурановых препаратов на поглотительную функцию РЭС / Г.М. Шуб, JI. Объедкова, JI. Гнездухина // Физиология и биохимия микроорганизмов. Саратов: Изд-во. Сарат гос. инта, 1970. T.LXV(82). - С. 176-178.

116. Шуб Г.М. Нитрофурановые препараты в терапии стафилококковых инфекций / Г.М. Шуб // Стафилококки и стафилококковая инфекция: Сб. -Саратов, 1980. С.295-303.

117. Щеглова М.К. Действие пенициллина на гноеродный стафилококк. Автореф. дис. . канд. мед. наук / М.К.Щеглова. — Саратов, 1950. 7с.

118. Этиологическая структура гнойно-воспалительных заболеваний у больных г. Донецка / Ю.С. Варенко, А.Е. Клочков, Т.А. Ревенко и др. // Актуальные вопросы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. 1988. - ч.П. - С.6-7.

119. Этиологическая структура посттравматических и послеоперационных нагноений / А.И. Гладштейн, А.А.Арутчева, З.Т. Тузова, Г.Г. Окропидзе // Акт. вопросы клин, микробиологии в неинфекционной клинике. 1988. - Т.411. - С.28-29.

120. Эффективность ломефлоксацина и офлоксацина в комплексном лечении инфекций у обожженных / М.Г. Крутиков А.А.Алексеев, А.Э.Бобровников и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т.43. -№10. - С.27-31.

121. Яковлев С.В. Линезолид первый препарат нового класса антимикробных средств оксазолидинонов: перспективы леченияtграмположительных инфекций / С.В. Яковлев // Инфекции и антимикробная терапия. 2001. - Т.З. - № 6. - С. 169-174.

122. Яковлев В.П. Антибактериальные препараты: современное состояние и перспективы / В.П. Яковлев, С.В. Яковлев //Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т.46. -№11.- С. 19-22.

123. Яцык Г.В. Особенности антибактериальной терапии у недоношенных новорожденных / Г.В. Яцык, Е.П. Бомбардирова // РМЖ. -2000. -Т.8. -№18. (http://www/.rmi.ru/main.htm/ )

124. A modified population analysis profile (PAP) method to detect hetero-resistance to vancomycin in Staphylococcus aureus in a UK hospital / M. Wootton, R. A. Howe, R. Hillman et al. //J. Antimicrob. Chemother. 2001. - V.47. - №4. - P.399^403.

125. Aetiology and outcome of severe community-acquired pneumonia / M.A.Woodhead, J.T. McFarlane, F.G.Rodgers et al. //J.Infect. 1985. - V.10. -№3. - P.204—210.

126. Ahmed A. O. Nasal carriage of Staphylococcus aureus and epidemiology of surgical-site infections in a Sudanese university hospital / A. O. Ahmed, A.Van Belkum, A. H. Fahal et al. // J. Clin. Microb. 1998. - V.36. -№12. - P.3614 -3618.

127. Amorena B. Antibiotic susceptibility assay for Staphylococcus aureus in biofilms developed in vitro / B. Amorena, E. Gracia, M. Monzon et al. // J. Antimicrob. Chemother. 1999. - V.44. - №1. - P.43 - 55.

128. Antimicrobial activity and mechanisms of resistance to cephalosporin PI, an antibiotic related to fusidic acid / J. O'Neill, J. M. Bostock, A. M. Morais, I. Chopra // J. Antimicrob. Chemother. 2002. - V.50. - №6. - P.839-848.

129. Antimicrobial treatmentof chronic osteomyelitis / J.T. Mader, M.E. Shirtliff, S.C Bergquist, J. Calhoun. // Clin. Orthop. 1999. - V.360. -P.47-65.

130. Bakker A.J. In vitroactivity of gentamycin against common pathogenic bacteria / A.J. Bakker, M.P. Michel // Chemotherapy. 1970. - V.15. - №3. -P.129-138.

131. Barber M. Methicillin-resistant staphylococci / M. Barber // J.Clin.Pathol. 1961. - V.14. - P.385-393.

132. Barber M. Epidemiology of staphylococcal infection and problem of antibiotic resistance // Gion.di malat.infet.e.parassit. 1959. - P. 139.

133. Barber M. Infection by penicillin-resistant staphylocci / M. Barber, M. Rozwadowska-Dowzenko // Lancet. 1948. - V2. - (6530) - P.641.

134. Baughman R.P.The diagnosis and treatment challenges in nosocomial pneumonia / R.P. Baughman, V. Tapson, A. Mclvor // Diagn. Microbiol. Infect. Dis.- 1999.-V.33.-P.131-139.

135. Bayer A.S. Staphylococcal bacteremia and endocarditis: state of the art / A.S.Bayer // Arch. Intern. Med. 1982. - V.142. - №6. - P. 1169-1177.

136. Bent L. Clinical Features of Staphylococcus aureus endocarditis: a 10-year experience in Denmark / L. Bent B.L. Roder, D.A. Wandall, N. Frimodt-Moller et al.// Arch. Intern. Med. 1999. - V.159. - №5. - P.462-469.

137. Bergogne-Berezin E. Opportunistic nosocomial multiply resistant bacterial infections: their treatment and prevention / E. Bergogne-Berezin, D. Deere, M.L. Joly-Guillou //J. Antimicrob. Chemother. 1993. - V.32. -Suppl A. - P.39-47.

138. Blair J. Staphylococci in hospital acquired infections; types encountered in the United States // J. Blair, M. Carr // J. Am. Med. Assoc. -1958. - V.8. - №166. (10) - P. 1192-1196.

139. Blinkhorn R.J.Jr. Hospital-acquired pneumonia. Textbook of pulmonary diseases // Baum G.L, Crapo J.D., Celli B.R., Karlinsky J.B., eds. 6th ed. Philadelphia. 1998. - P.543-560.

140. Boyle-Vavraa S. Development of vancomycin and lysostaphin resistance in a methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolate / S. Boyle-Vavraa, R.B. Careyb, R.S. Dauma // J. Antimicrob. Chemother. -2001. V.48. -№5. - P.617-625.

141. Cell wall thikening is a common feature of vancomycin resistance in Staphylococcus aureus / L. Cui, X. Ma, K. Sato et al. //J.Clin. Microbiol. — 2003. V.41. -№1. -P.5-14.

142. Centers for Disease Control and Prevention. Staphylococcus aureus with reduce susceptibility to vancomycin Illinois 1999, MMWR, Morb.MortalWkly Rep. 2000. - V.48 - P. 1165-1167.

143. Chambers J. M. Endocarditis associated with intravenous drug abuse. / Chambers J. M. / Endocarditis 1984. P. 183-200.

144. Chang S.C. High prevalence of antibiotic resistance of common pathogenic bacteria in Taiwan. / S.C. Chang, W.C. Hsieh, C.Y. Liu // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2000. - V.36. -№2. - P. 107-112.

145. Characterization and impact of wound infection afterpancreas transplantation / J.E.Everett, D.C. Wahof, C.L.Statz et al // Arch. Surg. 1994. -V.129. -P.1310-1317.

146. Characterization of coagulase-negative staphylococci causing nosocomial infections in preterm infants / B. Neumeister, S. Kastner, S. Conrad et al. // Eur. J. Clin. Microbial. Infect. Dis. 1995. - V.14. - №10. - P.856-863.

147. Cosgrove S.E. Staphylococcus aureus with reduced susceptibility to vancomycin / S.E.Cosgrove, K.C.Carroll, T.M. Perl // Clin. Infect. Dis. 2004. - V.39. - №4. - P.539 -545.

148. Davison J. Genetic exchenge between bacteria in the environment // Plasmid. 1999. - V.42. - P.73-91.

149. Dinges M. M. Exotoxins of Staphylococcus aureus / M.M. Dinges, P.M.Orwin, P.M. Schlievert // Clin. Microbiol. Rev. 2000. - V.13. - №1. -P. 16-4.

150. Dipiro J. Staphylococcus epidermidis. Evolving concepts in prevention of infections due to Staphylococcus epidermidis / J. Dipiro, T.W. Williams //Hosp.Formul. 1988. - V.23. - №2. - P.151-161.

151. Duckword G. Revised guidelines for the control of epidemic methicillin resistant Staphylococcus aureus / G. Duckword // J.Hosp.Infect. - 1999. -V.16. -№4. — P.351-377.

152. Emergence of vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus in a Belgian hospital: microbiological and clinical features / O. Denis, C. Nonhoff, B. Byl et al. //J. Antimicrob. Chemother. 2002. - V.50. - №3. - P.383-391.

153. Emori T.G. An overview of nosocomial infections? Including the role of the microbiology laboratory / T.G. Emori, R.P.Gaynes // Clin. Microbiol. Rev. -1993. V.6. - №4. - P.428-442.

154. Espersen F. Staphylococcus aureus endocarditis: a review of 119 cases / F. Espersen, N. Frimodt-Moller // Arch. Intern Med. 1986. - V.146. - №6. -P.1118-1121.

155. Fein A. Nonresolving and slowly resolving pneumonia. Diagnosis and management in the elderly patient /А. Fein, S.H. Feinsilver, M.S. Neiderman // Clin. Chest. Med. 1993. - V.14.-№3.-P.555-569.

156. Fleischer E. //Zbl. Chir.-1982-Bd.l07.-P.655-663

157. Gardner P. Infections acquired in pediatric hospital / P.Gardner,

158. D.C.Carles // J. Pediatr. 1972. - V.81. - №6. - P. 1205-1210.

159. Garrod L.P. Effect of medium composition on the apparent sensitivity of Pseudomonas aeruginosa to gentamycini / L.P.Garrod, P.M.Waterworth // J.Clin.Patholog. 1969. - V22. - №5. - P.534-538.

160. George D.L. Epidemiology of nosocomial pneumonia in intensive care unit patients / D.L.George // Clin. Chest Med. 1995. - V.16. - №1. - P.29-44.

161. Gorak E.J. Community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus in hospitalized adults and children without known risk factors /

162. E.J. Gorak, S.M. Yamada, J.D.Brown // Clin. Infect. Dis-1999. -V.29. -№4. -P.797-800.

163. Graffunder E.M. Risk factors associated with nosocomial methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) infection including previous use of antimicrobials / E.M.Graffunder, A.R.Venezia // J. Antimicrob. Chemother. 2002. - V.49. - №6. - P.999-1005.

164. Graven D.E. Hospital-acquired pneumonia: perspectivs for the healthcare epidemiologist / D.E. Graven, K.A. Steger // Infect. Control Hosp. Epidemiol. 1997. -V. 18. -№11. -P.783-795.

165. Craven D.E. Preventing nosocomial pneumonia: state of the art and perspectives for the 1990s. / D.E. Craven, K.A.Steger, T.W. Barber // Am. J. Med. 1991. V.91.-Suppl: 3B.-P.44-53.

166. Green J. Postoperative wound infection: a controlled study of the increased duration of hjspital stay and direct cost of hospitalization / J.Green, R.P.Wenzel //Ann. Surg. 1977. - V.185. - №3. - P.264-268.

167. Hall B.B. Anaerobic osteomyelitis / B.B.Hall R.H. Fitzgerald, J.E. Rosenblatt // J. Bone Joint Surg. 1983. - V.64. - №1. - P.30-35.

168. Hiramatsu K. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus clinical strain with reduced vancomycin susceptibility / K.Hiramatsu, H.Hanaki, T.Ito et al.// J. Antimicrob. Chemother. 1997.-V.40.-№l.-P.135-136.

169. Hiramatsu K. Vancomycin-resistant Staphylococcus aureus: a new model of antibiotic resistance / K. Hiramatsu // Lancet Infect. Dis 2001. -V.I.- №3. - P.147-155.

170. Hodson M.E. Adults. Complication. In: Hodson M.E., Geddes D.M., eds. Cystic fibrosis. London: Chapman & Hall; 1995. P.246-257.

171. Holey R.W. The scientific basis for using surveillance and risk factor data to reduce nosocomial infection rates / R.W. Holey // J.Hosp Infect. 1995. - V.30. - Suppll. -P.3-14.

172. Huebner J. Coagulase-negative staphylococci: role as pathogens / J. Huebner, D.A.Goldman // Annu. Rev. Med. 1999. - V.50. - P.233-236.

173. Identification and characterization of teicoplanin-intermediate Staphylococcus aureus blood culture isolates in NE Scotland / F.M. MacKenzie, P. Greig, D. Morrison et al. // J. Antimicrob. Chemother. -2002. V.50. - №5. - P.689-697.

174. Improvement of water-soluble cephalosporins-derivatives having antibacterial activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus / H.

175. Hanaki, S. Nomura, H. Akagi, K. Hiramatsu // Chemotherapy. 2001. - V.47. -№3,-P. 170-176.

176. Increase in community-acquired methicillin resistant Staphylococcus aureus at a naval medical center / A.J. Kallen, T.J. Driscoll, S.Thornton et al. // Infect. Control Hosp. Epidemiol. - 2000. - V.21. - №3. - P.223-226.

177. Ito T. Cloning and nucleotide sequence determination of the entire mecDNA of pre-methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain N315 / T. Ito //Antimicrob. Agents Chemother. 1999. - V.43. - №6. - P. 1449-1458.

178. First clinical isolate of vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus in a French hospital / M.C. Ploy, C.Grelaud, C. Martin et al. // Lancet. 1998. -V.351. (9110)-P.1212.

179. Jarvis W. R. Epidemiology, appropriateness, and cost of vancomycin use / W.R. Jarvis //Clin. Infect. Dis. 1998 - V.26. - №5. - P.1200-1203.

180. Johnson A.P. Glycopeptide-resistant Staphylococcus aureus / A.P. Johnson, N.Woodford//J. Antimicrob. Chemother. 2002. - V.50. - №5. -P.621-623.

181. Kirst H.A. Historical yearly usage of vancomycin / H.A.Kirst,

182. D.G. Thompson, T.I. Nicas // Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - V.42. -№5. - P.1303-1304.

183. Lemaitre N. Characterization of gentamicin-susceptible strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus involved in nosocomial spread / N. Lemaitre, W. Sougakoff, A. Masmoudi // J. Clin. Microbiol.- 1998. V.36. -№1. - P.81-85.

184. Lesseva M.I. Staphylococcal infections in the Sofia burn center / M.I. Lesseva, O.G. Hadjiiski // Bulgaria Burns. 1996. - V.22. - №4. - P.279-282.

185. Levy S.B. Antibacterial household products: cause for concern / S.B.Levy // Emerg. Infect. Dis. 2001. - V.7. (3 Suppl). - P.512-515.

186. L6wdin E. In Vitro Studies of Pharmacodynamic Properties of Vancomycin against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis /

187. E. Lowdin, I. Odenholt, O. Cars // Antimicrob. Agents Chemother. 1998. -V.42. - №10. - P.2739-2744.

188. Marr K.A. Staphylococcus aureus bacteremia in patients undergoing hemodialysis /K.A. Marr // Semin. Dial. 2000. - V. 13. - №1. - P.23-29.

189. Mathew J. Clinical features, site of involvement, bacteriologic findings, and outcome of infective endocarditis in intravenous drug users / J. Mathew, T. Addai, A. Anand // Arch. Intern. Med. 1995. - V. 155. - №15. - P. 16411648.

190. Merlino J. New Chromogenic Identification and Detection of Staphylococcus aureus and Methicillin-Resistant S. aureus / J. Merlino, M. Leroi, R. Bradbury // J. Clin. Microbiol. 2000. - V.38. - №6. - P.2378-2380.

191. Mayer K.H. Bacterial pathogens of increasing significance in hospital-acquired infections / K.H. Mayer, S.H. Zinner // Rev.Infec.Diseases. 1985. -V.7. - Suppl.3. -P.371-379.

192. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the community / K. Pate, R.Nolan, T.Bannerman, S. Feldman // Lancet. 1995. - V.346. (8980) - P.978.

193. Microbiology of septicaemia in burn patients / S.C. Sanyal, E.M. Mokaddas, R.K. Gang, R.L. Bang // Ann. Of burns and fire dis. 1998. -V.ll. -№1. - P. 19-22.

194. Mini E. Methicillin-resistant Staphylococciin clean surgery: is there a role for prophylaxis? / E. Mini, S. Nobili, P. Periti // Drugs. 1997. - V.54. -Suppl 6. - P.39-52.

195. Mlot C. Antimicrobials in food production: resistance and alternatives / C.Mlot // ASM News. 2001. - V.67. - P. 196-200.

196. Moreira B.M., Daum R.S // Pediatr. Clin. North. Am. 1995. - V.42. -P.619-648.

197. Murugasu-Oei B. Bactericidal activity of nitrofurans against growing and dormant Mycobacterium bovis BCG / B. Murugasu-Oei, D. Thomas // J. Antimicrobial Chemother. 2000. - V.46. -№ 6. - P.917-919.

198. Nassar G.M. Infectious complications of the hemodialysis access / G.M. Nassar, J.C.Ayus // Kidney Int. 2001. - V.60. - №1. - P. 1-13.

199. Panlilio A.L. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in US hospitals, 1975-1991 / A.L. Panlilio, D.H. Culver, R.P. Gaynes et al. // Infect. Control Hosp. Epidemiol. 1992. - V.13. - P.582-586.

200. Perl T.M. New approaches to reduce Staphylococcus aureus nosocomial infection rates: treating S. aureus nasal carriage / T.M. Perl, J.E. Golub //Ann. Pharmacother. 1998. - V.32 (Suppl) - P.7-16.

201. Piddock L. J. V. Effect of hydrophobicity and molecular mass on the accumulation of fluoroquinolones by Staphylococcus aureus / Piddock L.J.V., Y.F. Jin, D.J. Griggs //J. Antimicrob. Chemother. 2001. - V.47. - №3. -P.261-270.

202. Rafii F. Isolation of nitrofiirantoin-resistant mutants of nitroreductase-producing Clostridium sp. strains from the human intestinal tract / F. Rafii, E. B. Hansen Jr. // Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - V.42. - № 5. - P.l 1211126.

203. Rapid identification of methicillin-resistant Staphylococcus aureus from positive blood cultures by real-time fluorescence PCR / T. Y. Tan, S. Corden, R. Barnes, B. Cookson // J. Clin.Microbiol. 2001. - V.39. - №.12. - P.4529-4531

204. Rasooly A. In vitro antibacterial activities of Phloxine В and other halogenated fluoresceins against methicillin-resistant Staphylococcus aureus / A. Rasooly, A.Weisz" // Antimicrob. Agents Chemother. 2002. - V.46. -№ 11. -P.3650-3653.

205. Real T.M. The thread of vancomicin-resistance / T.M. Real // Am J.Med. 1999. -V. 106. - Suppl.l. -№5. - P.26-37.

206. Rello J. Severe community-acquired pneumonia in the elderly. Epidemiology and prognosis / J. Rello, R.Rodrigues, P.Jubert et al. // Clin.Infect.Dis. 1996. -V.23. - №4. - P.723-728.

207. RNA III inhibiting peptide inhibits in vivo biofilm formation by drug-resistant Staphylococcus aureus / A.Giacometti, O. Cirioni, Y. Gov et al. //Antimicrob. Agents Chemother. 2003. - V.47. - №.6. - P. 1979-1983.

208. Selection of high-level oxacillin resistance in heteroresistant Staphylococcus aureus by fluoroquinolone exposure / R. A. Veneziaa, В. E. Domarackia, A. M. Evansa et al. // J. Antimicrob. Chemother. 2001. -V.48. -№3. -P.375-381.

209. Severe community-acquired pneumonia / J.Pachon, M.D. Prados, F. Capote et al.// Am.Rev.Respir Dis. 1990.-V.142.-№2.-P.369-373.

210. Severe community-acquired pneumonia in ICUs. Prospective validation of a prognostic score/ O. Leroy, H. Georges, C. Beuscart et al. // Intensive Care Med. 1996.- V.22.- P. 1307-1314.

211. Shopsin B. Prevalence of methicillin-resistant and methicillin-susceptible Staphylococcus aureus in the community / B. Shopsin, B. Mathema, J.Martines et al. //J. Infect Dis. 2000. - V. 182. - №1. - P.359-362.

212. Skov R. Staphylococcus aureus bacteria: A 14-year nationwide study in hemotological patients with malignant disease or agranulocytosis / R. Skov, A. Gottschau, P. Skinhoj et al. // Scand. J. Infect. Dis. 1995. - V. 27. - №6. -P.563-568.

213. Sprink W. Clinical and biological significance of penicillin-resistant staphylococci? Including observations with streptomycin, aureomycin, chloramphenicol and terramycin / W. Sprink // J. Laborat.a. Clin. Med. 1951. - Y.37. - №1. - P.278.

214. Srinivasan A. Vancomycin Resistance in Staphylococci. / A.Srinivasan, D. D.James, Т. M. Perl // Clin. Microbiol. Rev. 2002. - V. 15. - № 3. - P.430-438.

215. Stewart P.S. and Costerton J.W. Antibiotic resistance in biofilms // Lancet. 2001.-V.358.-P.13 5-138

216. Tambe S. M. In vitro evaluation of the risk of developing bacterial resistance to antiseptics and antibiotics used in medical devices / S. M.Tambe, L. Sampath, S. M. Modak // J. Antimicrob. Chemother. 2001. - V.47. - №5. -P.589-598.

217. Tice A. The use of outpatient antimicrobial therapy in the management of osteomyelitis: data from outpatient parenteral antimicrobial therapy outcomes registries / A. Tice // Chemotherapy. 2001. - V.47. -№1. - P.5-16.

218. Trilla A. Identifyng high risk patient for Staphylococcus aureus infections: skin and soft tissue infections / A. Trilla, J.M. Miro // J. Chemother. 1995. - V.7. -(Suppl 3) - P.37-43.

219. The economic impact of Staphylococcus aureus infection / R.J. Rubin, C.A. Harrington, A. Poon et al. // Emerg. Infect. Dis. 1999. - V.5. - №1. -P.9-17.

220. The emergence and evalution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus /К. Hiramatsu, L.Cui, M.Kuroda, T. Ito //Trends Microbiol. 2001. -V.9. - №10. - P.486-493.

221. The epidemiology of intravenous vancomycin usage in a university hospital. A 10-year study / J.Ena, R. W.Dick, R.N. Jones, R. P.Wenzel // J. Amer. Med. Assoc. 1993. - V.269. - №5. - P.598-602.

222. The evolutionary history of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) / C.M.Enright, D. A. Robinson, G. J Randle et al. // PNAS. 2002. -V.99. -№11.- P.7687-7692.

223. Van der Meer J.M.M. Nasal Carriage of Staphylococcus aureus. II In: Nasal Carriage of Staphylococcus aureus Ed.J.W.M.van der Meer: Excerpta Medica.- 1990.-P. 1-2.

224. Virk A. Clinical aspects of antimicrobial resistance / A.Virk, J.M. Steckelberg // Mayo Clin. Proc. 2000. - V.75. -№2. - P.200-214.

225. Whitcher J.P. Corneal blindness: a global perspective / J.P.Whitcher, M. Srinivasan, M.P.Upadhyay // Bull. World Health Organ. -2001. V.79. -№3.-P.214-221.

226. Willens F.T. Epidemiology of nasal carriage of Staphylococcus aureus II In: Nasal Carriage of Staphylococcus aureus Ed.J.W.M.van der Meer. Excerpta Medica.- 1990,-P.3-4.

227. Worlitzsch D. Effects of amoxicillin, gentamicin, and moxifloxacin on the hemolytic activity of Staphylococcus aureus in vitro and in vivo./ D. Worlitzsch, H. Kaygin, A. Steinhuber //Antimicrob. Agents Chemother. -2001.-V.45.-№.1.-P. 196-202.

228. Zhanel G.G. Nitrofurantoin Is Active against Vancomycin-Resistant Enterococci / G.G. Zhanel, D. J. Hoban, J. A. Karlowsky //Antimicrob. Agents Chemother. 2001. - V.45. -№.1. -P.324-326.

229. Zhao W. Mechanism of Synergy between Epigallocatechin Gallate and /З-Lactams against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus / W. Zhao,

230. Z. Hu, S. Okubo /Antimicrob.Agents Chemother. 2001. - V.45. - №.6. -P.1737-1742.

Информация о работе

Райкова, Светлана Владимировна
кандидата медицинских наук
Саратов, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Противостафилококковая активность (нитро)фурфурилиденсодержащих гексагидроиндазолов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы